DE2518862B2 - Enzymatisches analyseverfahren und reagens zur durchfuehrung desselben - Google Patents

Enzymatisches analyseverfahren und reagens zur durchfuehrung desselben

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DE2518862B2 DE19752518862 DE2518862A DE2518862B2 DE 2518862 B2 DE2518862 B2 DE 2518862B2 DE 19752518862 DE19752518862 DE 19752518862 DE 2518862 A DE2518862 A DE 2518862A DE 2518862 B2 DE2518862 B2 DE 2518862B2
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Description

G-6-P -t NAD'
G-6-PD11 6-Phosphoglueonat I- NADIl I H
Die Reduktion von NAD zu NADH (reduzierte Form von NAD) bei 340 nm erlaubt eine quantitative Messung der vorhandenen Glucosemenge.
Bei der Kreatinphosphokinase (CPK)-Analysemethode von S.B. Rosalki (Journal of Laboratory and
ADP + Kreatin-phosphat Clinical Medicine, 69 [1967], S. 69b) katalysiert CPK die reversible Bildung von Adenosintriphosphat (ATP) und Kreatin aus Adenosindiphosphat (ADP) und Kreatinphosphat (CPO4) gemäß der folgenden Gleichung:
CPK
ATP + Kreatin
Das bei der von CPK katalysierten Reaktion gebildete ATP wird zur Phosphorylierung von Glucose in Gegenwart von Hexokinase (HK) verwendet. Dabei
Glucose + ATP
Her.okinase ίο entsteht Glucose-6-phosphat. In dem Maße, wie Glucose-6-phosphat gebildet wird, entsteht ADP, dessen Konzentration konstant gehalten wird.
Glucose-6-phosphat + ADP
Das durch die Hexokinasereaktion gebildete Glucose-6-phosphat wird dann in Gegenwart von Glucose-6-phosphat-dehydrogenase (G-6-PDH) unter gleichzeitiger Reduktion von NAD oxidiert.
G-6-P +
G-6-PDH 6-Phosphogluconat + NADH + H +
Die Reduktion von NAD zu NADH läßt sich spektrophotometrisch verfolgen, indem man die sich ergebende Erhöhung der Absorption bei 340 nrn beobachtet. Pro 1 Mol Phosphat, das durch die CPK übertragen wird, bildet sich 1 Mol NADH. Somit ist die Geschwindigkeit der Absorptionsänderung direkt proportional der in der Probe vorhandenen CPK-Aktivität. Müchsäuredehydrogenase (LDH) (L-Lactat: NAD-Oxidoreduktase) katalysiert die folgende Reaktion:
L-(+)-Lactat + NAD + «==» Pyruvat + NADH + H +
Bei der Analyse von anderen Serumbestandteilen als LDH kann jede vorhandene LDH infolge der Anwesenheit von entweder Lactat oder Pyruvat in der Probe Störungen hervorrufen und infolgedessen Fehler bei der Analyse von Glucose oder CPK oder in irgendeinem Analysensystem, in dem NAD zu NADH reduziert wird, verursachen. Gebildetes NADH unterliegt der Reaktion mit Pyruvat in Gegenwart von LDH, wodurch beispielsweise Fehler bei der Analyse von Glucose oder CPK verursacht werden.
H+ + NADH + Pyruvat LDH
> Lactat + NAD +
Diese Störung kann mittels NADP wie folgt überwunden oder vermieden werden:
1. Kreatinphosphat (CPO4) + ADP
CPK Kreatin + ATP
2. ATP + Glucose — Qiucose.6.phosphat (G-6-P) + ADP
3. G-6-P + NAD-Phosphat (NADP)+ 6-Phosphogluconat + NADPH + H +
NADP und NADPH reagieren nicht mit in gewöhnlichen biologischen Proben vorliegender LDH. Die Verwendung von NADP bei der enzymatischen Bestimmung von entweder CPK oder Glucose erhöht jedoch die Kosten des Reagens und setzt den dynamischen Bereich der Methode herab. Bei Verwendung von NAD anstelle von NADP ergeben sich geringere Reagenskosten und eine Erhöhung des dynamischen Bereichs. Die genannten unerwünschten Nebenreaktionen können jedoch zu Analysenfehlern führen.
Aufgabe der Erfindung ist es, bei den enzymatischen Analyseverfahren unter Verwendung von NAD der eingangs genannten Art, die durch LDH hervorgerufenen Störungen zu vermeiden.
Der Gegenstand der Erfindung ist in den Patentansprüchen definiert.
Unter Oxaminsäure ist das Monoamid der Oxalsäure
zu verstehen. Im allgemeinen ist eine Konzentration von Oxalsäure, Oxaminsäure oder deren Salzen von 2 bis 9 Mikromol je Liter ausreichend. Bis zu 50 Mikromol können für hohe Niveaus an Pyruvat oder Lactat in Gegenwart von LDH verwendet werden. Die Methode ist zusammen mit jeden beliebigen Analysesystem anwendbar, bei dem NAD zu NADH reduziert wird und die Anwesenheit von Pyruvat und/oder LDH unerwünscht wäre.
Das erfindungsgemäße Verfahren kann auch in solchen Analysesystemen Verwendung finden, in denen NADH zu NAD oxidiert wird, um eine Störung durch Pynjvat oder Lactat in einer LDH enthaltenden Probe zu verhüten. Bei solchen Reaktionen ist das Verschwinden von NADH ein quantitatives Maß für den Bestandteil, der gemessen wird. Ein Beispiel ist die Messung von Plasmaammoniak unter Verwendung von Glutaminsäuredehydrogenase.
In einer Veröffentlichung von F. Da Fonseca — W ο! I h e i m, die unter dem TiUl »Direkte Plasmaammoniakbestimmung ohne Enteiweißung« erschien (Z. Klin. Chem. Klin. Biochem., 11 [1973], S.426-431), ist ein Analysensystem für Plasmaammoniak bi schrieben. Dabei wird darauf hingewiesen, daß unspezifische Änderungen der Extinktion bei Einleitung der Reaktion durch Verwendung von reduziertem NAD-Phosphat (NADPH) anstelle von NADH als Coenzym vermieden werden können. Bei dieser Arbeitsweise werden 0,5 ml Plasma zusammen mit 1,5 ml Reagens verwendet. Da die Probe nicht deproteinisiert wird, können Pyruvat und LDH in der Probe mit NADH reagieren und daher als scheinbares Ammoniak gemessen werden. Da normale Ammoniakkonzentrationen sehr niedrig liegen (weniger als 60 Mikromol je Liter, was 0,1 mg% äquivalent ist), würde sogar eine geringe Störung durch Pyruvat oder andere iCetosäuren der Analysegenauigkeit sehr abträglich sein. Durch das hier beschrieber e Verfahren werden also, wie auf der Hand liegt, Störungen, die bei Analysen, die von NADH verbrauchenden Reaktionen Gebrauch machen, auftreten können, ausgeschaltet.
Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform wird freie Oxalsäure oder deren Kaliumsalz sowohl bei der CPK- als auch der Glucoseanalyse, wie zuvor beschrieben wurde, verwendet. Oxalat ist wirksam bei der Verhütung der Störung durch hohe Konzentrationen von Pyruvat oder Lactat in Gegenwart von LDH und macht es somit möglich, NAD anstelle von NADP zu verwenden. Das verwendete Oxalat kann Teil des Puffersystems sein oder als besonderer Bestandteil zugesetzt werden. Die Vorteile der Verwendung von NAD anstelle von NADP sind die geringeren Kosten und der erhöhte dynamische Bereich.
Die Wirkung von Pyruvat bei einer Konzentration von 100 mg% in der untersuchten Probe wird in der Tabelle 1 gezeigt. Bei Verwendung von NADP tritt keine Wirkung auf, weil LDH kein NADP verbraucht. Zusammen mit NAD bewirkt die Anwesenheit von Pyruvat eine Abnahme der scheinbaren CPK-Aktivität infolge der Umwandlung von Pyruvat in Lactat und der nachfolgenden Oxidation des NADH. Wenn die Reaktion von Proben, die 100 mg% Pyruvat enthalten, in Gegenwart von 2,63 mMol je Liter an Oxalat ausgeführt wird (vgl. Tabelle H), wird die Störung durch LDH umgangen.
Tabelle I
CPK (Internationale Einneiten/Liter)-Wirkung von Pyruvat auf CPK-Aktivität
3d
40
45
NADP 100 mg"/,.
Pyruvat		 NAD 100 mg"/,,
Pyruvat
(kein
Oxalat)
Kontrolle
(kein
Pyruvat		 10 Kontrolle
(kein
Pyruvat,
kein
Oxalat)		 14
9 80 11 80
78 9 83 9
9 461 13 469
455 65 490 64
65 104 70 99
102 726 106 833
717 31 845 28
31 20 32 22
19 17 25 17
16 20
Tabelle Il
CPK (Internationale Einheiten/Liter)-Wirkung von Oxalat auf CPK-Aktivität von Proben, die 100 mg"/, Pyruvat enthalten
Kontrolle (kein Pyruvat)
Prüfung
(100 mg% Pyruvat
in 2,63 mMol/Liter Oxalat)
10 74 11
422 57 92
726 29 22 18
10 73 11
428 58 93
740 27 21 18
Beispiel 1
Nachfolgend wird ein Beispiel für ein Reagens gegeben, wobei NAD in Gegenwart von Magnesium und eines Aktivators verwendet wird. Das Reagens eignet sich für die enzymatische Bestimmung von Kreatinphosphokinase.
Bestandteil
Menge je 3 ml der
zu analysierenden Mischung
Menge je ml Reagens
Adenosindiphosphat (ADP)
Kreatinphosphat (CPO4)
Glucose
Nicotinamidadenindinucleotid (NAD)
Hexokinase (HK)
Glucose-o-phosphatdehydrogenase (G-6-PDH)
Magnesiumaspartat
0,5 bis 5 mg bis 30 mg bis 20 mg bis 6 mg bis 10 internationale Einheiten 5,0 bis 15,0 internationale Einheiten bis 20 mg
0,16 bis 1,6 mg 3 bis 10 mg 1,6 bis 6,6 mg 0,6 bis 2 mg
0,6 bis 3,3 internationale Einheiten
1,6 bis 5,1 internationale Einheiten
0,6 bis 6,6 mg
S-
2 bis 9 inMol Oxalat je Liter Reagens werden in der Form von Kaliumoxalat zur Verhütung der beobachteten Nebenreaktion zusammen mit einem geeigneten Puffer zur Aufrechterhaltung des pH-Wertes in dem Bereich von 6,1 bis 7,0 zugegeben. Dithioerythrit ist in einer Menge von 2 bis 25 mMol je Liter Lösung als Aktivator zufriedenstellend.
Die Wirkung von Pyruvat auf Glucosebcstimmungcn wird in der Tabelle 111 gezeigt. Es ergeben sich niedrigere Werte infolge der Anwesenheit von Pyruvat und von LDH, die eine Oxidation des gebildeten NADH bewirkt. Wenn dem Ansatz Oxalat zugesetzt wird, zeigt Pyruvat keine störende Wirkung in Gegenwart von LDH (Tabellen IV und V).
Tabelle Hl
Glucose (mg%)
Wirkung von Pyruvut auf Glucosebestimmungcn (native Sera)
Kontrolle (kein l'yruvat)
Prüfung (100 mg% l'yruvat)
64
86
95
78
96
75
80
93
152
76
57
77
83
62
80
61
67
81
139
65
Tabelle IV
Glucose (mg%)
Wirkung von Oxalat auf Proben, die Pyruvat enthalten
(200 mg%)
Kontrolle
(kein l'yruvat)
(3l),d mMol/Litcr Oxalat)
Prüfung
(200 mg% l'yruval in
3').6 mMol/Litcr Oxalal)
105
Kontrolle
(kein l'yruvat)
(3l).(i mMol/Litcr Oxalal)		 Prüfung
(200 nig7;. l'yruvat in
39.(i mMol/Litcr Oxalat)
24 24
227 228
81 80
80 81
286 283
76 76
73 74
86 86
Tabelle V
Glucose (mg%)
Auswirkung von Oxalat auf die Bestimmung von Glucose in Gegenwart und Abwesenheit von Pyruvat
Kontrolle
(kein Oxalal.
kein Pyruvat)		 100 mg'/»
Pyruvat,
kein Oxalal		 100 mg%
Pyruvat,
9 mMol/Litcr
Oxalal
123 71 124
67 24 67
52 12 52
81 34 82
50 9 49
26 0 27
76 30 75
68 23 69
82 31 82
65 22 66
Beispiel 2
Nachfolgend wird ein Beispiel für ein Reagens gebracht, bei dem NAD in Anwesenheit von Magnesium verwendet wird und das sich für die enzymatisch^: Bestimmung von Glucose eignet.
Bestandteil
Ailcnosintriphosphat (ATP)
Nieotinamidadenindinuclcotid (NAD) llcxokinase (HK)
CJlucosc-6-phosphatdehydrogcnase (G-6-PDI1) Magncsiumasparlat
Menge je 3 ml der
/u analysierenden Mischung
0,5 bis 5,0 mg
0.5 bis 5,0 mg
0,5 bis 5,0
internationale Uinheitm
0.5 bis 5,0
internationale Einheiten
bis 10 mg
Menge je ml Reagens
0,16 bis 1,6 mg 0,16 bis 1,6 mg
0.16 bis 1,6
internationale Einheiten 0,16 bis 1,6
internationale Hinhcilcn 0.6 his 3.3 mg
2 bis 9 mMol Oxalal je Liter Reagens in Form von Kaliumoxalat werden hinzugegeben, um die beobachtete Nebenreaktion zu verhindern. Ein geeigneter Puffer wird zugesetzt, um den pl I-Wert auf etwa 7,5 zu haltei Die Bestandteile der Rcagenticn von Beispiel I um
können zu einem Produkt vermischt werden. Demi
709
maß wird ein trockenes, stabiles Einzelreagens für die enzymatische Analyse von Glucose oder Kreatinphosphokinase bereitgestellt.
Die in den Tabellen 1 bis V wiedergegebenen Untersuchungen wurden bei einer Temperatur von 37° C unter Verwendung eines Gesamtvolumens von Reagens und Probe von 3,02 ml, das 0,02 ml Probe einschließt, durchgeführt. Für die Durchführung der Bestimmung kann ein handelsübliches Spektrophotometer mit Schreiber verwendet werden.
Die Reagentien der Beispiele 1 und 2 können durch Zugabe von destilliertem Wasser und vorsichtiges Mischen zur Auflösung der Bestandteile angesetzt werden. Die Reagentien sind bei Raumtemperatur 6 Monate lang und in Lösung mindestens 8 Stunden lang
bei Raumremperatur oder 24 Stunden bei4°C stabil.
Im Gebrauch wird das angesetzte Reagens beispielsweise in Aliquotmengen von je 3,0 ml aufgeteilt, die mit jeweils 0,02 ml Probe versetzt werden. Das Gemisch ι wird bei 37°C mindestens 10 Minuten lang inkubiert. Die Absorption wird gegen eine Reagensblindprobe aufgezeichnet, um die Konzentration des gemessenen Bestandteils zu bestimmen.
Die in den Beispielen 1 und 2 angegebenen ίο Konzentrationen beziehen sich auf das Reagens in Form einer Lösung oder auf eine trockene Pulvermischung, die beim Ansetzen in der gewünschten Menge Wasser oder eines anderen Lösungsmittels die angegebenen Konzentrationen ergeben.

Claims (9)

Patentansprüche:
1. Erizymatisches Analyseverfahren, bei dem Nicotinamidadeninciinucleotid reduziert oder die reduzierte Form des Nicotinamidadenindinucleotids zu Nicotinamidadeninnucleotid oxidiert und bei dem die reduzierte Form oder das Verschwinden der genannten reduzierten Form des Nicotinamidadenindinucleotids ein quantitatives Maß des Bestandteils in der Probe darstellt, welche gemessen und der Umsetzung mit Pyruvat in Gegenwart von Milchsäuredehydrogenase unterzogen wird, dadurch gekennzeichnet, daß zum Ausschalter, von durch Milchsäuredehydrogenase hervorgerufenen Störungen ein Zusatz von Oxalsäure, Oxaminsäure und/oder Salzen davon verwendet wird, und zwar in solcher Konzentration, daß der zu messende Bestandteil nicht beeinflußt wird.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß der Zusatz in einer Konzentration von 2 bis 50 Mikromol je Liter Reagenslösung vorliegt.
3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß der Zusatz in einer Konzentration von 2 bis 9 Mikromol je Liter Reagenslösung vorliegt.
4. Verwendung des enzymatischen Analyseverfahrens nach den Ansprüchen 1 bis 3 zur Bestimmung von Glucose in einer Probe, bei der die Glucose in der genannten Probe durch Adenosintriphosphat in Gegenwart von Hexokinase unter Bildung von Glucose-6-phosphat phosphoryliert, das Glucose-6-phosphat in Gegenwart von Nicotinamidadenindinucleotid durch Glucose-6-phospat-dehydrogenase unter Bildung der reduzierten Form des Nicotinamidadenindinucleotids oxidiert, und die. Menge der reduzierten Form des Nicotinamidadenindinucleotids zur Bestimmung der in der Probe vorhandenen Glucose gemessen wird.
5. Verwendung des enzymatischen Analyseverfahrens nach den Ansprüchen 1 bis 3 zur Bestimmung von Kreatinphosphokinase in einer Probe, bei der Adenosindiphosphat und Kreatinphosphat in Gegenwart von Kreatinphosphokinase unter Bildung von Adenosintriphosphat und Kreatin umgesetzt, Glucose mit dem in Gegenwart von Hexokinase gebildeten Adenosintriphosphat unter Bildung von Glucose-6-phosphat phosphoryliert, das G!ucose-6-phos;phat mit Glucose-6-phosphat-dehydrogenase in Gegenwart von Nicotinamidadenindinucleotid unter Bildung der reduzierten Form des Nicotinamidadenindinucleotids oxidiert und die Menge an reduziertem Nicotinamidadenindinucleotid gemessen wird als Maß für die in der Probe vorhandene Kreatinphosphokinaseaktivität.
6. Einzelreagens zur Durchführung des enzymatischen Analyseverfahrens gemäß Anspruch 1 zur
ίο Bestimmung des Glucosegehaltes einer Probe, enthaltend eine wasserlösliche, feste, praktisch wasserfreie, lagerungsstabile Mischung bestehend aus Adenosintriphosphat in einer Konzentration von 0,16 bis !,6 mg je ml Reagens, Nicotinamidadenindi-
1-5 nucleotid in einer Konzentration von 0,16 bis 1,6 mg je ml Reagens, Hexokinase in einer Konzentration von 0,16 bis 1,6 internationalen Einheiten je ml Reagens, Glucose-ö-phosphat-dehydrogenase in einer Konzentration von 0,16 bis 1,6 internationalen Einheiten je ml Reagens und ein Magnesiumsah in einer Konzentration von 0,6 bis 3,3 mg je ml Reagens, gekennzeichnet durch einen Zusatz von 2 bis 50 Mikromol je Liter Reagenslösung an Oxalsäure, Oxaminsäure und/oder deren Salzen.
i-,
7. Reagens nach Anspruch 6, dadurch gekenn
zeichnet, daß die Konzentration des Zusatzes 2 bis 9 Mikromol je Liter Reagenslösung beträgt.
8. Einzelreagenslösung zur Durchführung des Analyseverfahrens gemäß Anspruch 1 zur Bestim-
n) mung der Kreatinphosphokinaseaktivität einer Probe, die eine wasserlösliche, feste, praktisch wasserfreie, lagerungsstabile Mischung enthält, bestehend aus Adenosintriphosphat in einer Konzentration von 0,16 bis 1,6 mg je ml Reagens, Kreatinphosphat in 5 einer Konzentration von 3 bis 10 mg je ml Reagens, Glucose in einer Konzentration von 1,6 bis 6,6 mg je ml Reagens, Nicotinamidadenindinucleotid in einer Konzentration von 0,6 bis 2 mg je ml Reagens, Hexokinase in einer Konzentration von 0,6 bis 3,3 internationalen Einheiten je ml Reagens, Glucose-6-phosphat-dehydrogenase in einer Konzentration von 1,6 bis 5,0 internationalen Einheiten je ml Reagens und ein Magnesiumsalz in einer Konzentration von 0,6 bis 6,6 mg je ml Reagens, gekennzeich·
.)■-, net durch einen Zusatz von 2 bis 50 Mikromol je Liter Reagenslösung an Oxalsäure, Oxaminsäure und/oder deren Salzen.
9. Reagens nach Anspruch 8, dadurch gekenn zeichnet, daß die Konzentration des Zusatzes 2 bis ?
•-,ο Mikromol je Liter Reagenslösung beträgt.
Bei der optischen Methode zur Bestimmung von Glucose katalysiert Hexokinasc (HK) die Phosphorylierung von Glucose durch Adenosintriphosphat (ATP) wie folgt:
Glucose + ATP -> Glucose-6-phosphat + Adenosindiphosphat (ADP)
Glucose-6-phosphat (G-6-P) wird durch Nicotinamidadenin-dinucleotid (NAD) in Gegenwart von Glucose 6-phosphat-dehydrogenase (G-6-PDH) oxidiert:
DE19752518862 1974-04-29 1975-04-28 Enzymatisches analyseverfahren und reagens zur durchfuehrung desselben Withdrawn DE2518862B2 (de)

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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0140589A1 (de) * 1983-10-27 1985-05-08 Sanwa Kagaku Kenkyusho Co., Ltd. Enzymatische Bestimmung von D-3-Hydroxybuttersäure oder Azetessigsäure und Reagentien hierfür

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2700952C2 (de) * 1977-01-12 1979-03-15 Gesellschaft Fuer Kernenergieverwertung In Schiffbau Und Schiffahrt Mbh, 2054 Geesthacht-Tesperhude Verfahren zur Identifikation undichter Komponenten aus einem Vielkomponentensystem
DE2718588C3 (de) * 1977-04-26 1979-11-08 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren und Reagens zur Bestimmung von Harnsäure
US4189536A (en) * 1977-11-09 1980-02-19 Hycel, Inc. Reagent systems, enzymatic assays and compositions therefor
US4242446A (en) * 1978-07-26 1980-12-30 Coulter Electronics, Inc. Method for determining a substance in a biological fluid and reagent combination for use in the method
DE2834705B1 (de) * 1978-08-08 1980-01-24 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren und Reagenz zur Durchfuehrung enzymatischer Bestimmungen
DE2834704A1 (de) * 1978-08-08 1980-02-21 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur quantitativen enzymatischen bestimmung von adp
US4241179A (en) * 1978-08-14 1980-12-23 Coulter Electronics, Inc. Method for determining a transaminase in a biological fluid and reagent combination for use in the method
US4322496A (en) * 1980-04-17 1982-03-30 Eastman Kodak Company Inhibition of lactate oxidase
DE3025170A1 (de) * 1980-07-03 1982-01-28 C.H. Boehringer Sohn, 6507 Ingelheim Verfahren und reagenz zur bestimmung von harnsaeure
IT1199088B (it) * 1984-03-09 1988-12-30 Miles Italiana Saggio di legame specifico mediante impiego di anti-g6pdh come marcante
US4668630A (en) * 1984-10-01 1987-05-26 Beckman Instruments, Inc. Stabilized enzymatic composition
US4937047A (en) * 1986-04-01 1990-06-26 Konishiroku Photo Industry Co., Ltd. Analytical element
JPS6394994A (ja) * 1986-10-09 1988-04-26 Fuji Photo Film Co Ltd 酸化型補酵素含有乾式分析要素
US5232947A (en) * 1988-07-04 1993-08-03 Meiji Seika Kaisha, Ltd. Oxamic acid compounds and pharmaceutical composition for use in improvement of damaged cerebral functions of brain
AUPN200695A0 (en) * 1995-03-28 1995-04-27 Trace Scientific Pty Ltd Transaminase reagent
US5998158A (en) * 1997-05-14 1999-12-07 Fuji Photo Film Co., Ltd. Glucose free, stable dry analytical element for quantitative analysis of creatine kinase MB isozyme
EP0989190B1 (de) * 1998-09-22 2002-11-27 Fuji Photo Film Co., Ltd. Trockenes analytisches Element zur quantitativen Analyse von Creatinkinase-MB-Isoenzym
TWI275795B (en) * 2001-02-14 2007-03-11 Sysmex Corp Novel assay method
US9670525B2 (en) * 2012-08-31 2017-06-06 Kyowa Medex Co., Ltd. Method for measuring cholesterol in high-density lipoprotein
CN108315367B (zh) * 2018-03-19 2021-05-11 郑州四维健康管理有限公司 一种两步酶解法生产磷酸肌酸的方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3388044A (en) * 1965-12-07 1968-06-11 Warner Lambert Pharmaceutical Process for differentiating the isoenzymes of lactic dehydrogenase
US3540984A (en) * 1966-06-30 1970-11-17 Calbiochem Reagent material and method for creative kinase assay
DE1930059C3 (de) * 1969-06-13 1975-11-13 Boehringer Mannheim Gmbh Stabilisiertes Nicotinamid-adenindinucleotid oder bzw. und Nicotinamld-adenin-dinucleotidphosphat
DE1940816C3 (de) * 1969-08-11 1974-01-17 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren und diagnostisches Mittel zur enzymatischen Bestimmung von Glucose

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0140589A1 (de) * 1983-10-27 1985-05-08 Sanwa Kagaku Kenkyusho Co., Ltd. Enzymatische Bestimmung von D-3-Hydroxybuttersäure oder Azetessigsäure und Reagentien hierfür

Also Published As

Publication number Publication date
SE7504845L (sv) 1975-10-30
SE420420B (sv) 1981-10-05
FR2269080B1 (de) 1978-06-30
GB1491313A (en) 1977-11-09
SE405046B (sv) 1978-11-13
DE2518862A1 (de) 1975-11-13
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FR2269080A1 (de) 1975-11-21
SE7803067L (sv) 1978-03-16
CA1051326A (en) 1979-03-27

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