DE2717980A1

DE2717980A1 - Bruehe zur anzeige des vorliegens von candida-hefe und anderen pilzen

Info

Publication number: DE2717980A1
Application number: DE19772717980
Authority: DE
Inventors: Sandra Faye Gibson; Michael C Meyer
Original assignee: McDonnell Douglas Corp
Current assignee: McDonnell Douglas Corp
Priority date: 1976-05-03
Filing date: 1977-04-21
Publication date: 1977-11-10
Also published as: US4140580A; BE853720A; SE7705042L; JPS52134015A; IL51804A0; DE2717980B2; FR2350397B1; FR2350397A1; DD130489A5

Description

IBERLlN 13 «MÖNCHEN·· Dr. RUSCHKE ic PARTNER Patentanwälte

T.Mon:on/ JgJJ!? BERLIN - MÖNCHEN

Quadrate Betfei TELEX: 1*37M

TELEX:

hcDonnell i;ou;:;las Corporation, Long Beach, California, V.St.A«

Brühe zur Anzeige des Voriiegens von Candida-Hefe

und anderen Pilzen

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Zusammenfassung der ofi'enbgrung

Ein Brühenrnedium zum Nachweis von Uadida-hoie und anderen iilzen in Urin. Das liedium verwendet bevorzugt Chloramphenicol und Kaliumtellurit, um das Wachstum grammpositiver und grammnegativer Organismen zu hemmen. Las liedium verwendet weiterhin als biologischen pH-Indikator vorzugsweise reduziertes Anilinblau.

Die vorliegende Erfindung betrifft eine Zusammensetzung für die mikrobiologische Analyse und insbesondere ein hedium zum r.achweis von Candida-Hefen und anderen Pilzen in Urinproben.

Gandida-Hefe ist ein im Urin vorkommender l-ilz. Das Vorkommen dieses Mikroorganismus ist ein zuverlässiger Indikator von Infektionen im Urintrakt, im Hals, der haut usw. Enthält eine gegebene brinprobe Gandida-iiefe, sind auch andere bkaterielle Infektionen möglich.

Das Medium nach der vorliegenden Erfindung ist ein verbessertes ^; Medium, das mit einem optischen Nachweissystein gemeinsam eingesetzt werden soll. Derartige Systeme weisen vorzugsweise eine ■ j Mechanik und eine Vorrichtung auf, die zur Analyse von Proben ^!

, auf bestimmte Mikroorganismen unter Verwendung einer Kunststoffkarte geeignet sind, die eine Reihe von getrockneten Kulturmedien in getrennten, aber untereinander verbundenen Zellen entj hält, wobei jedes der Medien für einen einzigen Organismus spezifisch ist. Wenn die Probe in die Karte eingebracht, mit dem Medium in den Zellen gemischt und in der Maschine inkubiert

wird, tritt der Organismus (bzw. treten die Organismen) in der i-'robe in Wechselwirkung mit dem für diesen Organismus spezifischen ivulturmedium una erzeugen in diesem eine Änderung, die von der koschine ausgewertet wird, um das Vorliegen dieses Organismus anzuzeigen. Die änderung des Mediums bewirkt eine änderung der Lichtübertragungseif-enschaften des Mediums, d.h eine !''arbanderung oder eine Minderung der i'rübung. Uie Änderung kann durcn die metabolisclie Aktivität des Organismus bewirkt werden, aie beispielsweise die Erzeugung einer ßäure und eine Änderung des pii-werts verursacht, i.iie ihrerseits zu einer tfarbiinderung in eineui ph-e^pfindlichen Indikator im Medium führt. Die i-.nderung der Lichtübertrajungseigenschaften des Mediums kann auch durch einen .niederschlag, der sich im hedium infolge des Stoffwechseis des Organismus bildet, oder auch durch das Wachstum des Organismus selbst verursacht werden.

Es int das 2..iel der vorliegenden Erfindung, ein Medium anzugeben, das selektiv Gandida-Hefen und andere Pilzorganismen in urinproben bei Einsatz in einem optischen Erfassunesgerät der oben beschriebenen Art identifiziert.

■.Entsprechend schafft die vorliegende Erfindung ein Brühenmedium zum nachweis von Uandida-Hefen und anderen Pilzen der Gruppe CB. ulic einer ,'Stickstoff quelle, einer Kohlenstoff quelle, chemischen neumstoffen, die das V.achstum grampositiver und gramnegativer Organismen unterdrücken, und einem biologischen pli-lndikator, der sich ändert, wenn das Iiedium infolge des Stoffwechsels des ;

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Organismus sauerer wird.

Positive Ergebnisse werden durch die J/arbänderumT einer pH-Indikatoriosung im hedium angezeigt, die eine Änderung der Lichtübertragungseigenschaften des hediums bewirkt, die von der Vorrichtung erfaßt wird. Der gesamte Test kann innerhalb von 12 bis 1ö otd. abgeschlossen sein, während derzeitige Verfahren etwa 36 bis 4ö Std. erfordern.

Das Medium enthält vorzugsweise Fhytone-^epton, Dextrose, Chloramphenicol, Kaliumtellurit und einen biologischen pn-Indikator. Die Verwendung von Chloramphenicol bowiiit eine Wachstumshemmung grampositiver und -negativer Organismen. .Das Vorliegen von Candida-Jiefe und anderen Pilzen wird mittels der i''arbdnderung im Medium bestimmt. L»as Medium kann gefriergetrocknet werden und arbeitet auch in einer sauerstoffarmen Umgebung wie in den Schächten der Karten, die in ο em oben erläuterten optischen Jirfassungssysterr, angewandt werden.

Die bevorzugten /jusanmensetzun ?en der vorliegenden Erfindung sollen nun ausführlich beschrieben werden.

Die Brühe enthalt vorzugsweise 16 bis 2L· g/l r:o.hrstoi"fe, etwa 19 bis etwa c!1 ml/1 eines Indikators, der das positive ..acnstum von Candida-uefe und anderer lilze anzeigt, etwa U,97 biß etwa 1»^3 S/l Chloramphenicol sowie etwa 2,9 bis etwa 3,1 ml/1 Kaliumtellurit (1;eige Lagerlosune;), die als biologische liemm-

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stoffe arbeiten, um das .,achstur;: granpositiver und gramnegativer Urganisi:ien zu hemmen, die normalerweise in den Tests auf hefen oder Pilze positive Ergebnisse zeigen.

Der iMührstoffteil des Mediums entuält etwa 9 bis etwa 11 g/l Dextrose und etwa 9 bis etwa 11 g/l Phytone-Pepton der Fa. BBL.

x-nytone-Pepton ist ein i-apain-Auiscnluß aus Sojamehl und hat einen hohen Vitamingehalt, insbesondere Thiamin. Jedes geeignete lepton wie 'fhiotone der ¥a. IiBL und Proteose Peptone Nr. 3 djr iⁱ'a. Eifco kann anstelle des Phytone-Peptons eingesetzt werdeil.

Die Dextrose soll dabei als üubstrat für die Hefegärung dienen. Eine positive Reaktion der üefeeinwirkung auf den Zucker verursacht eine Erzeugnng von Säure.

Ein geeigneter biologischer pH-Indikator ist reduziertes Anilinblau. Dieser Indikator wird benutzt, da er bei einem pH-Wert von 6,b oder weniger von farblos auf blau übergeht, wahrend das iiedium sauer wird, und dadurch die Lichtübertragungseigenschaften des ttediums ändert. Diese Änderung wird von der optischen Einrichtung beobachtet und aufgezeichnet.

Katriurahyaroxid wird verwendet, um den Anfangs-pH-Wert des Mediums auf 6,9 einzustellen. Das hedium muß auf etwa einem neutralen pH-uert gehalten werden, da Säure die Empfindlichkeit des Indikators, d.h. reduzierten Anilinblaus, beeinträchtigt.

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V; uhr end die liefe den ,^ucker umsetzt, entsteht ouure, die den
pH-jert des iiediums absenkt und die i.'arbunderung im Anilinblau—
Indikator einleitet, der von farblos auf blau übergeht, während
mehr Säure in das System eintritt.

Lin wesentlicher Aspekt der Erfindung liegt in der Wirkung· der
chemischen Hemmstoffe, des Chloraiiiphenicols und des kaliumtellurits. uiese Hemmstoffe unterdrücken das Jachstum von anderen Organismen als Hefe und tilzen.

Das ,jachstum von Spezies grai/ipositiver und gramnegativer Organismen, die injherkömmlichen I'Jachweisverfahren starke Positiv-Reaktionen ergeben, wird von diesen chemischen Hemmstoffen im
Verfahren unterdrückt. i

'. Die Konzentration des Chloramphenicol liegt vorzugsweise
zwischen etwa 0,97 und etwa 1,03 g/l und ist am wirkungsvollsten! bei 1,0 g/l. ;

ι j

Die Konzentration des Kaliumtellurits (1$bige Lagerlösung) liegt ! ; vorzugsweise zwischen etwa 2,9 und etwa 3»1 ml/1 und ist am
j wirkungsvollsten bei 3,0 ml/1. Wenn die Konzentration eines der ' Hemmstoffe zu gering ist, tritt eine höhere Häufigkeit-von unerwünschten Positivanzeigen auf. Wenn die Konzentration zu hoch ; ist, ist diese Häufigkeit niedriger.

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Beispiel 1

Um eine iiefe-Brühe mit zweifacher Starke in einer Henge von 1<JO TuI herzustellen, wurden die folgenden Bestandteile in den angegebenen i-.engen gründlich vermischt:

liestiliiertes '.asser 96 ml

l'hytone-lepton e!,0 g

üextrose ^₁O g

Chloramphenicol 0,16 g

Kali unit ellurit

Lagerlösung) 0,6 ml

j.;er pil-'.iert der mischung wurde auf 6,^ eingestellt und 4,0 ml Anilinblau-Indxkatorlcsung hinzugegeben. Der pii-Wert der iischung sollte auf 6,9 eingestellt und keine Säure zugegeben werden, üase kann zugegeben werden, falls erforderlich. 0,4 gm r.atriuiüthioglycollat der i'a. nutritional Biochemical Company wird zugegeben und aie iiischung dann filtersterilisiert.

Das i-iediura hat die doppelte (2X) übliche Konzentration für den : Einsatz in den Schichten der Karte, wie sie oben beschrieben ist»

lter reduzierte Anilinbiauindikator wird nach dem von Aldrich und¹ keyer in cer US-J^auentarrtneldung angegebenen Verfahren hergestellt.

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Die hefen, die mit dem urühenmedium nach der vorliegenden Erfindung nachgewiesen worden sind, sind u.a. Candida albicans, Candida steilatoides, Candida tropicalis, Candida parapsiiosis, Candida krusil, Candida pseudotropicalis, Candida quillerraondii, üaccnar&myces cerevisiae und i'oruiopsis glabrate. Zusätzlich
ist mit dem isrühenmedium nach der vorliegenden Erfindung aucn das 1-ilz Asyergillus niger nachgewiesen worden.

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Claims

Patentansprüche

(T) ürdhenmedium für den Machweis von Gandida-Hefen und anderen Pilzen, gekennzeichnet durch eine ivbiokstoffquelle, eine kohlenstoffquelle, chemische hoßiiiistoffe, die das ,vachstum gratnmpositiver und ararninnegativer Organismen unterdrücken und einen biologischen ph-Indikator, der seine Farbe ändert, wenn das wedium infolge des Stoffwechsels des Organismus sauerer wird.

k. i-iediuiii nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die chemischen neiumstoffe Chloramphenicol und Kaliumtellurit sind.

3. hediurn nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß etwa 0,97 bis etwa 1,03 g/l Chloramphenicol und etwa 2,9 bis etwa 3,1 ml/i Kaliumteliurit (1j»ige Lagerlösung) eingesetzt werden.

^Lv. iiediuE nach Anspruch 1, d oder 3» dadurch gekennzeichnet, daß üer Indikator reduziertes Anilinblau ist.

m nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß jeder liter medium (a) etwa '~j ois etwa 11 g Phytone-Pepton, (b) etv.'a 9 bis etwa 11 g Kexurose, (c) etwa 1,8 bis etwa 2,2 g liatriuviitnioglycollat, (d) etwa 0,97 bis etwa 1,03 g Ohlor-

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ORIGINAL INSPECTED

- r-

amphenicol, (e) etwa d,^cj uis etwa ; ,1 ml n

Lageriosung) und (f) etwa Iy bis etwa k1 ml reduziertes AnilinDlau enthalt, wobei (g) cas ;■ cdiuiü einen p:-.-'./ert von etwa b,y aui'vjeist.

6. i;ediuin nach Anc^rucn 1, dcourca gekennzeichnet, ö.au Jeder Liter hediura (a) 1C f I hytone-I epton, (b) 10 g Liextrooe, (c) 2 £ i'.atriuiithiofrlycollat, (d) 1 er Ohlorarnjjhenicol, (e) 3 ml ein r 1;.igen J arerlüsunr von KaliutntelJ.urit und (f) idO ml reduziertes ünÄiilinbiau enthalt;, wobei ([;) das iiediura einen pn-V;ert von 6,¹^ hat.

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