DE2717981B2 - Kulturbrühe zum selektiven Nachweis von Enterococci der Gruppe D - Google Patents

Description

Enterococci der Gruppe D, wie Streptococcus faecalis, sind Mikroorganismen, die im Urin und in menschlichen und tierischen Fäkalien auftreten. Ihre Gegenwart in Wasservorräten ist ein verläßlicher Indikator für die Verschmutzung durch Fäkalien oder Abwässer. Sind Enterococci der Gruppe D in einer Wasser- oder Urinprobe vorhanden, können auch E.coli, Proteus und andere ähnliche Organismen zugegen sein.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, eine Kulturbrühe zur Verfügung zu stellen, mit welcher ein selektiver Nachweis von Enterococci-Organismen der Gruppe D in einer beachtlich kurzen Zeit möglich wird. Diese Zeit sollte wesentlich kürzer sein als die Nachweiszeiten, die bei den bisherigen und nicht selektiv arbeitenden Nachweismedien erforderlich sind.

Die gestellte Aufgabe wird mit der durch den Patentanspruch angegebenen Kulturbrühe gelöst.

Die Kulturbrühe der Erfindung ist zur Anwendung in optischen Nachweissystemen geeignet. Derartige Systeme verwenden Mechanismen zur Analyse von Proben auf bestimmte Mikroorganismen unter Verwendung einer Plastikschale- oder -karte, die eine Reihe von getrockneten Kulturbrühen in gesonderten, jedoch untereinander verbundenen Zellen enthält, wobei jedes Medium für einen Organismus spezifisch ist. Wenn die zu analysierende Probe in die Karte gesetzt, mit den Medien in den Zellen vermischt und die Vorrichtung inkubiert wird, tritt der ggf. in der Probe vorliegende Organismus mit dem Kulturmedium, das auf ihn spezifisch reagiert, in Wechselwirkung und ruft eine Änderung im Medium hervor, die von der Vorrichtung abgelesen wird. Diese Änderung kann eine Änderung der Lichtdurchlässigkeit des Mediums sein, d. h. eine Färb- oder Trübungsänderung. Die Änderung kann durch Stoffwechselprozesse des Organismus verursacht werden, beispielsweise durch Säureerzeugung und eine dadurch bedingte pH-Wert-Änderung, die eine Farbänderung eines pH-empfindlichen Indikators im Medium auslöst. Die Änderung der Lichtdurchlässigkeit kann auch durch Niederschlagsbildung im Medium bei Stoffwechselvorgängen des Organismus verursacht werden oder sie könnte durch das Wachstum des Organismus beuingi Scii'i.

Mit eier erfindungsgemäßen Kulturbrühe werden in relativ kurzer Zeit positive Ergebnisse durch Niederschlagsbildung angezeigt, wodurch eine Änderung der Lichtdurchlässigkeit des Mediums hervorgerufen wird, die die Vorrichtung dann ablesen kann. Der gesamte Test ist bereits innerhalb von 12 bis 18 Stunden abgeschlossen, demgegenüber erfordern die bisherigen Nachweismethoden Zeiten von etwa 36 bis 48 Stunden. Der Nachweis mit dem erfindungsgemäßen Kulturmedium auf Enterococci der Gruppe D ist außerdem selektiv.

Die Kulturbrühe der Erfindung enthält ώίη aus Eisen-IH-ammoniumcitrat und Äsculinhydrolysat bestehendes Indikatorsystem, dessen einzelne Komponenten in den im Anspruch angegebenen Mengen vorliegen. Eisen-III-ammoniumcitrat wird verwendet, da es den Nachweis von Enterococci der Gruppe D durch Niederschlagsbildung ermöglicht und hierdurch die Lichtdurchlässigkeit der Kulturbrühe ändert. Wenn z. B. Streptococcus faecalis und andere Enterococci der Gruppe D auf Äsculinhydrolysat einwirken, wird Äsculetin freigesetzt. Dieses reagiert mit dem Eisen-III-Ion des Indikators und bildet den Niederschlag, der die Gegenwart von Enterococci der Gruppe D anzeigt.

Die Kulturbrühe ist der Gefriertrocknung zugänglich und kann in der sauerstoffarmen Umgebung der in den vorstehend beschriebenen optischen Nachweissystemen verwendeten Kartenvertiefungen funktionieren.

Zweckmäßige Nährstoffe für die Kulturbrühe sind Peptone, die üblicherweise in Nährbrühen verwendet werden. Aufgabe der Peptone ist es, das Wachstum der Enterococci-Organismen der Gruppe D zu fördern. Ein geeignetes Pepton ist ein im Handel erhältliches Pepton, das durch Aufschluß mit Hilfe von Papain gebildet wird und reichhaltig an Vitaminen, insbesondere an Thiamin, ist; ein weiteres Pepton des Handels wird aus Casein durch pankreatische Verdauung enthalten (Handelspeptone I bzw. II). Der Nährstoffanteil der Kulturbrühe enthält zweckmäßigerweise 13,5 bis 16,5 g/l des erstgenannten Peptons (I) und 4,5 bis etwa 5,5 g/l des letztgenannten Peptons, da es günstig ist, wenn die Kulturbrühe zwei Peptone enthält. Die in der Kulturbrühe enthaltenen chemischen Inhibitoren sind Neomycinsulfat und KaIiumtellurit. Diese Inhibitoren unterdrücken das Wachstum von Organismen mit Ausnahme der nachzuweisenden Enterococci der Gruppe D. Das Wachstum von Staphylococcus aureus, gramnegativer Organismen und Organismen, die zu überhöhten Positivergebnissen bei herkömmlichen Nachweismethoden führen, wird durch diese chemischen Inhibitoren bei Verwendung der erfindungsgemäßen Kulturbrühe unterdrückt. Die Konzentration des Neomycinsulfats liegt im Bereich von 9800 bis 10200 mg/1, am besten bei 10000 mg/1. Neomycinsulfat dient als biologischer Inhibitor zur Wachstumseinschränkung von Staphylococcus aureus, der üblicherweise positive Resultate in Tests auf Enterococci der Gruppe D, insbesondere Streptococcus faecalis, liefert. Die Konzentration des Kaliumtellurits(als 1 %ige Stammlösung) liegt zweckmäßigerweise im Bereich von 0,98 ml/1 bis 1,02 ml/1, am besten bei 1,0 ml/1. Kaliumtellurit hemmt das Wachstum gramnegativer Organismen. Ist die Konzentration eines Inhibitors zu gering, so tritt bekanntlich eine überhöhte Ausbeute an unerwünschten falschen Positiv-P.psultaten auf !st sie 7" hoch, ereibt

sich eine zu geringe Ausbeute an Positiv-Resultaten. Eine zum Nachweis von Streptococcus faecalis besonders geeignete Kulturbrühe enthält pro Liter Medium 13,5 bis 16,5 g des Peptons I, 4,5 bis 5,5 g des Peptons H, 0,9 bis 1,1 g Äsculinhydrolysat, 1,8 bis 2,2 g Natriumthioglycollat, 9800 bis 10200 mg Neomycinsulfat, 0,98 bis 1,02 ml Kaliumtellurit (l%ige Lösung), 0,48 bis 0,52 g Eisen-III-ammoniumcitrat und destilliertes Wasser; sie weist einen pH-Wert von 6,6 auf. Das Natriumthioglycollat wird verwendet, um die Menge des zugänglichen Sauerstoffs in der Kulturbrühe zu erniedrigen. Diese Erniedrigung des Sauerstoffgehalts fördert das Wachstum der Enterococci der Gruppe D und verkürzt somit die Nachweiszeit. Natriumhydroxid dient zur Einstellung des pH-Wertes des Mediums auf 6,6.

Beispiel

Zur Herstellungeines 2 Α-Mediums in einer Menge von 100 ml wird eine Nachweisbrühe für Streptococcus faecalis durch sorgfältiges Mischen der folgenden Bestandteile in den angegebenen Mengen hergestellt: Pepton I 3,0 g

Peptonll 1,0 g

Äsculinhydrolysat 0,2 g

Natriumthioglycollat 0,4 g

Neomycinsulfat 2000 mg

Kaliumtellurit (1 %ige Stammlösung) 0,2 ml

Eisen-III-ammoniumcitrat 0,1 g

Destilliertes Wasser bis auf 10 ml

Der pH-Wert der Kulturbrühe wird mit Hilfe von Chlorwasserstoffsäure auf 6,6 eingestellt.

Claims (1)

1. Patentanspruch:

   Kulturbrühe ziui. st-lektiven Nachweis von Enterococci der Gruppe D, wie beispielsweise Streptococcus faecalis, in polymikroben Proben, enthaltend eine Stickstoffquelle, eine Kohlenstoffquelle, Neomycinsulfat zur Wachstumsunterdrückung von Staphylococcus aureus und Kaliumtellurit zur Wachstunisunterdrückung von gramnegativen Organismen, dadurch gekennzeichnet, daß die Kulturbrühe zusätzlich ein Indikatorsystem aus 0,48 bis 0,52 g/l Eisen-III-ammoniumcitrat und 0,9 bis 1,1 g/I Äsculinhydrolysat zum Nachweis von Stoffwechselvorgängen der Enterococci der Gruppe D durch Bildung eines Niederschlags im Medium enthält.