DE2717980B2

DE2717980B2 - Medium für den Nachweis von Candida-Hefen und anderen Pilzen

Info

Publication number: DE2717980B2
Application number: DE2717980A
Authority: DE
Inventors: Sandra Faye Chesterfield Mo. Gibson; Michael C. O'fallon Ill. Meyer
Original assignee: McDonnell Douglas Corp
Current assignee: McDonnell Douglas Corp
Priority date: 1976-05-03
Filing date: 1977-04-21
Publication date: 1979-11-15
Also published as: BE853720A; FR2350397A1; US4140580A; DD130489A5; FR2350397B1; IL51804A0; JPS52134015A; SE7705042L; DE2717980A1

Description

Die Erfindung betrifft ein Medium zum Nachweis von Candida-Hefen und anderen Pilzen, das Pepton und Dextrose enthält

Candida-Hefe ist ein im Urin vorkommender Pilz. Das Vorkommen dieses Mikroorganismus ist ein zuverlässiger Indikator von Infektionen im Urintrakt, im Hals und der Haut Enthält eine gegebene Urinprobe Candida-Hefe, sind auch andere bakterielle Infektionen möglich.

Das Medium der Erfindung soll in einem optischen Nachweissystem eingesetzt werden. Derartige Systeme weisen zweckmäßig eine Mechanik und eine Vorrichtung auf, die zur Analyse von Proben auf bestimmte Mikroorganismen unter Verwendung einer Kunststoffkarte geeignet sind, die eine Reihe von getrockneten Kulturmedien in getrennten, aber untereinander verbundenen Zellen enthält, wobei jedes der Medien für einen einzigen Organismus spezifisch ist. Wenn die Probe in die Karte eingebracht, mit dem Medium in den Zellen gemischt und in der Vorrichtung inkubiert wird, tritt der Organismus in der Probe in Wechselwirkung mit dem für diesen Organismus spezifischen Kulturmedium und erzeugt in diesem eine Änderung, die von der Vorrichtung ausgewertet wird, um das Vorliegen dieses Organismus anzuzeigen. Die Änderung des Mediums bewirkt eine Änderung der Lichtdurchlässigkeitseigenschaften des Mediums, d. h. eine Farbänderung oder eine Änderung der Trübung. Die Änderung kann durch die metabolische Aktivität des Organismus bewirkt werden, die beispielsweise die Erzeugung einer Säure und eine Änderung des pH-Werts verursacht, die ihrerseits zu einer Farbänderung in einem pH-empfindlichen Indikator im Medium führt. Die Änderung der Lichtdurchlässigkeitseigenschaften des Mediums kann auch durch einen Niederschlag, der sich im Medium infolge des Stoffwechsels des Organismus bildet, oder durch Jas Wachstum des Organismus selbst verursacht werden.

Aufgabe der Erfindung ist es, ein Medium anzugeben, das selektiv Candida-Hefen und andere Pilzorganismen in Urinproben bei Einsatz in einem optischen Gerät der oben beschriebenen Art identifiziert.

Diese Aufgabe wird mit dem im Anspruch angegebenen Medium gelöst.

Das Kulturmedium zum Nachweis von Candida-Hefen und anderen Pilzen der Gruppe C. B. weist eine Pepton-Stickstoffquelle, eine Dextrose-Kohlenstoffquelle auf und enthält also erfindungsgemäß mit den angegebenen Konzentrationen die chemischen Hemmstoffe Chloramphenicol und Kaliumtellurit, die das Wachstum gram-positiver und gram-negativer Organismen unterdrücken, sowie reduziertes Anilinblau als biologisches pH-Indikator, der sich ändert, wenn das Medium infolge des Stoffwechsels des Organismus saurer wird; außerdem beträgt der Anfangs-pH-Wert 6,9.

Positive Ergebnisse werden durch die Farbänderung einer pH-Indikatorlösung im Medium angezeigt, die eine Änderung der Lichtdurchlässigkeitseigenschaften

ίο des Mediums bewirkt und von der Vorrichtung erfaßt wird. Der gesamte Test ist bereits innerhalb von 12 bis 18 Std. abgeschlossen, während die bisherigen Verfahren etwa 36 bis 48 Std. erfordern.
Das Medium kann gefriergetrocknet werden und arbeitet auch in einer sauerstoffarmen Umgebung wie in den Vertiefungen der Karten, die in dem oben erläuterten optischen Erfassungssystem angewandt werden.

Das Medium enthält neben den Inhibitoren iweckmä-

Big 18 bis 22 g/I Nährstoffe und 19 bis 21 ml/1 des Indikators, der das positive Wachstum von Candida-Hefe und anderen Pilzen anzeigt Der Nährstoffteil des Mediums kann 9 bis 11 g/I Dextrose und 9 bis etwa 11 g/l eines Peptons enthalten, das ein Papain-Aufschluß aus Sojamehl ist und einen hoh;n Vitamingehalt, insbesondere Thiamin, aufweist Andere geeignete Peptone des Handels können eingesetzt werden. Die Dextrose soll dabei ais Substrat für die Hefegärung dienen. Eine positive Reaktion der Hefeeinwirkung auf den Zucker verursacht eine Erzeugung von Säure.

Der biologische pH-Indikator ist redoziertes Anilinblau. Dieser Indikator wird benutzt, da er bei einem pH-Wert von 6,8 oder niedriger von farblos in blau umschlägt, wenn das Medium sauer wird, und dadurch die Lichtdurchlässigkeitseigenschaften des Mediums ändert.

Natriumhydroxid wird verwendet, um den AnfangspH-Wert des Mediums auf 6,9 einzustellen. Das Medium muß auf etwa einem neutralen pH-Wert gehalten werden, da Säure die Empfindlichkeit des reduzierten Anilinblaus beeinträchtigt.

Während die Hefe den Zucker umsetzt, entsteht Säure, die den pH-Wert des Mediums senkt und die Farbänderung im Anilinblau-Indikator einleitet.

v> Ein wesentlicher Aspekt der Erfindung liegt in der Wirkung der chemischen Hemmstoffe Chloramphenicol und Kaliumtellurit. Diese Hemmstoffe unterdrücken das Wachstum von anderen Organismen als Hefe und Pilzen. Das Wachstum von Spezies gram-positiver und gram-negativer Organismen, die in herkömmlichen Nachweisverfahren starke Positiv-Reaktionen ergeben, wird von diesen chemischen Hemmstoffen unterdrückt. Die Konzentration des Chloramphenicol liegt am besten bei 1,0 g/i. Die Konzentration des Kaliumtellurits (l°/oige Stammlösung) liegt am günstigsten bei 3,0 ml/l. Wenn die Konzentration eines der Hemmstoffe zu gering ist, tritt eine höhere Ausbeute unerwünschter Positivanzeigen ein. Wenn die Konzentration zu hoch ist, ist diese Ausbeute niedriger.

Eine zweckmäßige Zusammensetzung des Mediums weist pro Liter 9 bis 11 g des obenerwähnten Papain-Aufschlusses aus Sojamehl, 9 bis 11 g Dextrose, 1,8 bis 2,2 g Natriumthioglycollat, die beiden Hemmstoffe in den angegebenen Konzentrationen und 19 bis 21 ml reduziertes Anilinblau auf.

Durch die Anwesenheit von Natriumthioglykollat wird die Empfindlichkeit des Mediums auf Grund einer Glucose-Fermentation noch erhöht. Das Medium ist

dann stärker fermentiert und steigert die Empfindlichkeit des Indikators.

Beispiel 1

Um eine Hefe-Brühe mit zweifacher Stärke in einer Menge von 100 ml herzustellen, wurden die folgenden Bestandteile in den angegebenen Mengen gründlich vermischt:

IO

Destilliertes Wasser	96 ml
Pepton (Papain-Aufschluß
aus Sojamehl)	2,0 g
Dextrose	2,0 g
Chloramphenicol	0,16 g
Kaliumtellurit
(1 %ige Stammlösung)	0,6 ml

Der pH-Wert der Mischung wurde auf 6,2 eingestellt und 4,0 ml Anilinblau-Indikatorlösung hinzugegeben. Der pH-Wert der Mischung sollte auf 6,9 eingestellt und keine Säure zugegeben werden. Bas«; kann zugegeben werden, falls erforderlich. 0,4 Natriumthioglycollat wird zugegeben und die Mischung dann filtersterilisiert

Das Medium hat die doppelte (2 X) übliche Konzentration für den Einsatz in den Vertiefungen der Karte, wie sie oben beschrieben isL

Der Indikator reduziertes Anilinbliau wird nach dem in der DE-OS 27 05 366 angegelbenen Verfahren hergestellt

Die Hefen, die mit dem Medium der Erfindung nachgewiesen worden sind, sind u. a. Candida albicans, Candida stellatoides, Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Candida krusel, Candida pseudotrc picalis, Candida quillermondii, Saccharamyces cerebisiae und Tomlopsis glabrate. Zusätzlich ist auch der PuIz Aspergillus niger nachgewiesen worden.

Claims

Patentanspruch:

Medium für den Nachweis von Candida-Hefen und anderen Pilzen mit Pepton und Dextrose, dadurch gekennzeichnet, daß es 037 bis 1,03 g/l Chloramphenicol und 23 bis 3,1 ml/l Kaliumtellurit einer l%igen Stammlösung, die das Wachstum gram-positiver und gram-negativer Organismen unterdrücken, und reduziertes Anilinblau als pH-Indikator enthält, der seine Farbe ändert, wenn das Medium infolge des Stoffwechsels des Organismus saurer wird, und einen Anfangs-pH-Wert von 6$ aufweist