DE2711753C2

DE2711753C2 -

Info

Publication number: DE2711753C2
Application number: DE2711753A
Authority: DE
Inventors: Ivan E. Camarillo Calif. Us Modrovich
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1976-03-17
Filing date: 1977-03-17
Publication date: 1992-10-08
Also published as: SE7703077L; CA1092035A; DE2711753A1; US4153511A; JPS52134087A; JPS5635160B2; SE449622B; CH626401A5

Description

Die Erfindung betrifft die Stabilisierung von Coenzymen in flüssigen Medien gemäß dem Oberbegriff des Patentanspruchs 1.

Vor kurzem wurde festgestellt, daß ca. 25% aller in den USA durchgeführten diagnostischen in-vitro-Tests nicht zuverlässig sind. Unzuverlässige Tests können aber eine unnötige medizinische Behandlung, Unterlassung einer erforderlichen Behandlung und Verdienstausfall zur Folge haben. Wegen ihrer hohen Spezifität haben Bestimmungen von Enzymen in den letzten Jahren wesentlich an Bedeutung gewonnen, und dieser Trend scheint weiter zu bestehen. Damit genaue und konsistente Ergebnisse erzielt werden, sind aber an die Qualitätskontrolle strenge Maßstäbe anzulegen. Diese Notwendigkeit ergibt sich aus der Tatsache, daß Zusammensetzung und Wirkungsmechanismus von Enzymen weitgehend unbekannt sind. Gegenwärtig liegt die weitaus größte Schwierigkeit für den Hersteller von Enzympräparaten darin, daß seine Produkte instabil sind. Die derzeit in Anwendung befindlichen Verfahren erfordern die Verwendung zahlreicher labiler Ingredienzen, und es ist wahrscheinlicher, daß diese Zahl zu- als abnimmt.

Die derzeit angewandten Verfahren zum Stabilisieren des Reaktionsvermögens von Enzymen und Coenzymen bestehen darin, daß man sie entweder durch Gefriertrocknen oder durch Trockenmischen, wie es für die Tablettierung getrockneter Pulver hauptsächlich in der pharmazeutischen, diagnostischen oder verwandten Industrien angewandt wird, in eine feste Matrix einschließt, oder daß man die chemische Struktur des Enzyms durch Einschließen in eine feste Matrix immobilisiert. Trotz der Sophistik, die die Beschreibung dieser Verfahren beinhaltet, sind sie weder praktisch durchführbar noch erwünscht und sind zudem aufwendig. Der Hersteller muß das Wasser entfernen und ein Teilprodukt liefern, wobei er auf einen Teil des Qualitätskontrollzyklus bei der Verdünnung und Anwendung des Endproduktes verzichten muß. Die Laboratorien sind gezwungen, die hohen Kosten für Verpackung, Abfall an Reagenz, Gefriertrocknen und Trockenmischen zu tragen, und der Wert des Produktes wird weiter durch Art und Größe der Verpackung be schränkt.

Außerdem ist es schwierig, Produkte mit gleichmäßiger Beschaffenheit herzustellen. Beispielsweise wird für die meisten gefriergetrockneten Kontrollsera eine Variationsbreite des Enzymgehaltes von Flasche-zu-Flasche von ±10% vom Mittelwert ange geben.

Für die klinische Diagnostik werden diagnostische Reagenzien verwendet, um beispielsweise die folgenden Bestandteile, jedoch nicht ausschließlich diese, in biologischen Flüssigkeiten nachzuweisen und quantitativ zu bestimmen:

1. Glutamat-oxalacetat-transaminase (SGOT)
2. Glutamat-pyruvat-transaminase (SGPT)
3. Lactatdehydrogenase (LDH)
4. Kreatinphosphokinase (CPK)
5. α-Hydroxybutyratdehydrogenase (α-HBD)
6. Glucose (via Hexokinase-G-6-PDH)

Diese Reagenzien reagieren in ähnlicher Weise, enthalten einige gemeinsame labile Ingredienzien und gehen einige gleiche Reaktionen ein. Das folgende Reaktionsschema ist als Modell zu verstehen, das die Art der ablaufenden Umsetzungen veran schaulicht:

Reaktionsschema 1

Allgemeines Modell

Alle oben aufgeführten enzymatischen Umsetzungen folgen diesem allgemeinen Schema, wobei die Reaktion (2.) gewöhnlich als die Kupplungsreaktion bezeichnet wird, die Reaktionen (2.) oder (3.) die Meßreaktionen sind, und die Reaktion (1.) als die Primärreaktion bezeichnet werden kann. Für die Messung sind jedoch nicht alle drei Reaktionen erforderlich; vielmehr können sie auf zwei oder eine beschränkt werden. Im Falle der UV-Bestimmung von Lactatdehydrogenase (LDH)-Aktivität kommt nur die Reaktion (2.) in Betracht:

Reaktionsschema 2

LDH

Andererseits können auch mehr als die drei angegebenen Reaktionen ablaufen, wie im Falle der Kreatinphosphokinase (CPK):

Reaktionsschema 3

CPK

Symbole
CP
= Kreatinphosphat
ADP	= Adenosin-5′-diphosphat
ATP	= Adenosintriphosphat
HK	= Hexokinase
NAD	= Nicotinamid-adenin-dinucleotid
NADH₂	= Nicotinamid-adenin-dinucletoid, reduziert
G-6-PDH	= Glucose-6-phosphatdehydrogenase
INT	= Tetrazoliumsalz
PMS	= Phenazinmethosulfat

In diesem Fall können die Reaktionen (2.) und (3.) als die Kupplungsreaktionen, die Reaktionen (3.) oder (4.) als die Meßreaktionen, und die Reaktion (1.) als die Primärreaktion angesehen werden.

Bezüglich des Reaktionsschema 1. (Allgemeines Modell) ist offensichtlich und allgemein bekannt, daß die Anwendung der Reaktionsfolge die quantitiative analytische Bestimmung entweder der Reaktionssubstrate/ Produkte oder der katalysierenden Enzyme ermög licht.

Die quantitative Bestimmung dieser Bestandteile in biologischen Flüssigkeiten ist eine allgemein anerkannte und häufig angewandte Maßnahme bei der Diagnose und der Behandlung von Krankheiten von Menschen und Tieren.

Enzyme sind hochmolekulare komplexe Proteine, deren chemische Struktur gewöhnlich nicht bekannt ist. Sie werden derzeit durch ihre katalytische Aktivität und extreme Substratspezifität klassifiziert. Enzyme können als biologische Katalysatoren, die eine Umsetzung eines einzelnen Substrats oder eine Umsetzung einer Gruppe ähnlicher Substrate zu katalysieren vermögen, definiert werden.

Coenzyme sind anorganische Substanzen von niedrigerem Molekulargewicht und definierter Struktur, deren Reaktionen oder Interaktionen für spezifische Enzymnachweise oder -reaktionen notwendig sind. Sie werden katalysiert und unterliegen dabei einer irreversiblen Änderung ihrer Struktur und/oder atomaren Zusammensetzung. Coenzyme sind für die klinische Erprobung sehr wertvoll. Einige haben eine starke Absorption, ihre Reaktionen mit dem Substrat sind stöchiometrisch und Entstehen oder Verschwin den der absorbierenden Form kann daher photometrisch verfolgt werden. Nicotinamid-adenin-dinucleotid (NAD) und seine reduzierte Form (NADH₂) werden für viele wichtige klinische Versuche, wie die oben erwähnten SGOT-, SPGT- und LDH-Untersuchungen verwendet. NAD und NADH₂ haben ein Molekulargewicht von etwa 700 und sind sehr komplexe organische Moleküle. NADH₂ absorbiert stark bei 340 nm, während NAD bei dieser Wellenlänge nicht absorbiert.

NADH₂ ist in wäßriger Lösung oder in trockener Form in feuchter Umgebung außerordentlich instabil. Selbst im gefrorenen Zustand muß NADH₂ frei von Feuchtigkeit gehalten werden. Die Stabilität ist bei alkalischem pH-Wert besser, während bei saurem pH-Wert NADH₂ sich sehr rasch innerhalb von Minuten zersetzt. Weder der exakte Mechanismus noch die Endprodukte sind von besonderer Bedeutung, abgesehen davon, daß zersetztes NADH₂ nicht länger als Coenzym wirkt und auch den Extinktionskoeffizienten bei 340 nm nicht mehr aufweist. Die typische Handelsform ist ein mit einem Entwässerungsmittel getrocknetes oder gefriergetrocknetes und unter Stickstoff aufbewahrtes Produkt. NADH₂ ist bekanntlich unlöslich in organischen Lösungsmitteln.

Die US-A 37 76 900 beschreibt ein Verfahren zur Stabilisierung reduzierter Coenzyme, bei dem die Stabilisierung des reduzierten Coenzyms durch Lösen in einem Lösungsmittelgemisch aus einem wasserlöslichen Alkohol und einem wasserlöslichen Polyhydroxyalkohol in einem Volumenverhältnis von 10 : 90 bis 70 : 30, insbesondere in einem Verhältnis von 30 : 70 bis 50 : 50 erreicht wird.

Aufgabe der Erfindung ist die Behandlung labiler Coenzyme derart, daß sie für lange Zeit stabil werden, ohne daß ihre coenzymatische Reaktivität oder ihr photometrisches Absorptionsvermögen leidet.

Erfindungsgemäß wird diese Aufgabe durch die Merkmale des Patentanspruchs 1 gelöst. Bevorzugte Weiterbildungen sind den Unteransprüchen zu entnehmen.

Gemäß der Erfindung werden Reagenzien verwendet, deren Qualität während der Herstellung, Verpackung, Lagerung und Verwendung genau überwacht werden kann. Die sich aus der Notwendigkeit, starke und sperrige Verpackungen zu verwenden, ergebenden Schwierigkeiten werden ebenso beseitigt wie die hohen Kosten von Verpackung, Gefriertrocknung und Abfall an Reagenzien. Flüssige Enzym- und Coenzympräparate zeichnen sich durch Flexi bilität der Anwendung aus, und die Bestandteile können leicht und mit vernachlässigbaren Kosten abgetrennt werden, so daß auch die Flexibilität hinsichtlich des Auslösens der gewünschten Umsetzung, nachdem alle Nebenreaktionen unterbunden sind, gut ist.

Die stabilisierten Coenzyme gemäß der Erfindung wurden bewertet, indem sie mit frischen Reagenzien verglichen wurden. Die Untersuchungen ergeben eine Beziehung von 1 : 1 zwischen gealterten flüssigen und frischen Reagenzien von vergleichbarer Empfindlichkeit und Präzision. Die Bereitstellung von Coenzymreagenzien in stabiler flüssiger Form verbessert die colorimetrische Anwendbarkeit der derzeitigen NAD/NADH-Kupplungsmethoden, hauptsächlich weil die Abtrennung von Ingredienzien leicht durchführbar ist. Stabile flüssige Reagenzien sind insbesondere dann von Vorteil, wenn der Versuch von NADH die Grundlage der Messung bildet und das Farbreagenz von NADH und dem Reaktionsmedium abgetrennt werden muß. Bei der Ultraviolettmethode bietet das flüssige Präparat den Vorteil besserer Homogenität und Abfüllung sowie Flexibilität der Verwendung, verglichen mit gefriergetrockneten Präparaten oder Trockenmediumpräparaten.

In der Enzymdiagnostik bedeutet die Stabilisierung von Enzymreagenzien in einer gebrauchsfertigen Flüssigkeit einen außerordentlichen Fortschritt hinsichtlich der Befriedigung der Bedürfnisse von Kliniklabors und den Forderungen von Überwachungsgremien an die Zuverlässigkeit von Tests. Die Flexibilität von flüssigen Enzymsystemen gewährleistet ihre Anwendbarkeit bei automatisierter Instrumentation ebenso wie bei manuell durchgeführten Tests.

Die Stabilisierung der Coenzyme NADH₂ oder von hydratisiertem NADH₂ gemäß der Erfindung erfolgt dadurch, daß das Coenzym in einem Polyol mit 2 bis 4 Hydroxylgruppen und 2 bis 10 Kohlenstoffatomen unter Bildung einer Lösung gelöst, der Lösung mindestens 1% eines teilchenförmigen, inerten, hygroskopischen Feststoffs mit großer Oberfläche zugesetzt und die dabei erhaltene Suspension unter gelegentlichem Rühren, bis der Restwassergehalt auf unter 0,5% abgesunken ist, stehengelassen werden und die Lösung bzw. Suspension anschließend, gegebenenfalls nach Abfiltrieren des hygroskopischen Feststoffs, in Behälter abgefüllt und diese abgedichtet werden.

Die Suspension wird für wenigstens 1 h, gewöhnlich für 1 bis 2 d, unter gelegentlichem Mischen bei Raumtemperatur gehalten, um Wasser bis zu einem Gehalt von nicht mehr als 0,05% von dem Gemisch abzutrennen. Die Lösung kann dann in bernsteinfarbene Glasflaschen, die wenigstens 1% Vol/Vol an einem hygroskopischen Mittel enthalten, abgefüllt werden. Die Flaschen werden dann luftdicht verschlossen und unter Kühlen gelagert. Die Lagerungsstabilität kann unter diesen Bedingungen mit bis zu 4 a angenommen werden, ohne daß ein merklicher Abbau erfolgt.

Gemäß einer anderen Durchführungsform wird das in einer Menge von 1% Vol/Vol anwesende hygroskopische Mittel von der Suspension entfernt, zweckmäßig indem man die Flüssigkeit in einen anderen Behälter umfüllt und das hygroskopische Mittel abfiltriert, wonach der Behälter luftdicht verschlossen und unter Kühlen aufbewahrt wird. Die Lagerungsstabilität kann unter diesen Bedingungen wiederum mit bis zu 4 a angenommen werden, ohne daß ein merklicher Abbau erfolgt.

Überraschenderweise ist das Coenzym NADH₂ gut löslich und stabil in dem mit Wasser mischbaren erfindungsgemäß eingesetztem organischen Lösungsmittel, obwohl Lösungsmittel wie 1,2-Propandiol hygroskopisch sind. Offensichtlich solvatisieren die Lösungsmittelmoleküle das Coenzym wirksam und schützen es gegen Wasser, und das Lösungsmittel wirkt als Übertragungsmedium, das das adsorbierte Wasser an das feste hygroskopische Mittel überführt, wo es irreversibel gebunden wird. Auch nach Entfernung des hygroskopischen Mittels wurde gefunden, daß nach Öffnen des Behälters relativ wenig Wasser angezogen wird, so daß es keinen beträchtlichen Abbau bewirkt.

Das erfindungsgemäß eingesetzte organische Lösungsmittel soll die folgenden Eigenschaften haben:

1. niedriger Wassergehalt (Spuren <0,1%),
2. neutraler oder alkalischer pH-Wert,
3. flüssig bei Raum- oder Kühlschranktemperatur,
4. reagiert nicht anders mit NADH₂ als unter Ausbildung elektrostatischer (d. h. Wasserstoff-) Bindungen,
5. mischbar mit Wasser;
6. niedrige freie Solvolyseenergie (normale Resonanz).

Erfindungsgemäß eingesetzte nicht-reaktive organische Lösungsmittel mit neutralem oder alkalischem pH-Wert sind flüssige Polyole mit 2 bis 4 Hydroxylgruppen und 2 bis 10 Kohlenstoffatomen, wie Glycerin, Ethylenglykol, Propylenglykol oder Butandiol. Propylenglykol (1,2-Propandiol) hat alle diese Eigenschaften und ist das bevorzugt verwendete Lösungsmittel.

Der inerte hygroskopische Feststoff hält den Wassergehalt auf dem gewünschten niedrigen Wert, d. h. unter 0,5% und vorzugsweise unter 0,1%. Der hygroskopische Feststoff muß ein wirksames Wasseradsorbens, nicht-reaktiv mit dem Coenzym und von neutralem oder alkalischem pH-Wert sein. Er ist vorzugsweise ein hygroskopisches Mittel mit großer Oberfläche, wie ein natürliches oder synthetisches Molekularsieb mit einer Teilchengröße von 1 bis 9,4 mm und wird in einer Menge von wenigstens 1% Vol/Vol, insbesondere von 5 bis 20% Vol/Vol eingesetzt. Die Größe der Oberfläche ist wesentlich, weil das Material Wasser in den Poren adsorbiert.

Molekularsieb sind Zeolithe oder ähnliche Materialien, deren Atome in einem Kristallgitter derart angeordnet sind, daß eine große Anzahl kleiner Hohlräume untereinander durch enge Öffnungen oder Poren von genau einheitlicher Größe verbunden sind. Normalerweise enthalten diese Hohlräume Wassermoleküle; beim Erwärmen wird dieses Wasser jedoch abgetrieben, ohne daß es zu einer Änderung in dem verbleibenden Kristallgitter kommt. Das Netzwerk von Hohlräumen und Poren kann 50% des Gesamtvolumens des Kristalls einnehmen. Molekularsiebe haben eine starke Neigung, Wasser zu reabsorbieren.

Einige natürliche Zeolithe haben in begrenztem Ausmaß Molekularsiebeigenschaften. Synthetische Zeolithe sind in verschiedenen Größen (Durchmesser der Porenöffnungen 3, 4, 5 und 10×10^-10 m) mit hohem Absorptions- und Regenerationsvermögen auch bei ihrer Verwendung bei erhöhten Temperaturen erhältlich.

Es wurde im Zusammenhang mit der vorliegenden Erfindung gefunden, daß, nachdem die Masse in Gegenwart des organischen Lösungsmittels sowie des inerten hygroskopischen Feststoffs stabilisiert, worden ist, der hygroskopische Feststoff entfernt werden kann, ohne daß ansonsten die Stabilität der Masse beträchtlich beeinträchtigt wird. Allgemein wurde gefunden, daß die Masse wenigstens für etwa 24 h bei Raumtemperatur in Gegenwart des hygroskopischen Feststoffs gelagert werden sollte. Während dieser Zeit werden Spuren von Wasser durch den hygroskopischen Feststoff absorbiert, und nach dessen Entfernung ist in der Masse im wesentlichen kein Wasser mehr verfügbar. Der Behälter kann auch gelegentlich geöffnet werden und obwohl dann Wasser aus der Luft in das obere Ende des Behälters eintreten kann, ist eine Menge relativ gering, so daß es keine wesentliche Zersetzung der labilen Komponenten des Präparats bewirkt.

Allgemein soll der hygroskopische Feststoff für eine Zeit, die von der Menge an Wasser, die ursprünglich zur Zeit der Herstellung der Lösung in dieser anwesend war, abhängt, in Kontakt mit der stabilisierten Lösung gehalten werden. In vielen Fällen wurde gefunden, daß der hygroskopische Feststoff für etwa 3 bis 4 d mit der Lösung in Kontakt gehalten werden sollte. Diese Zeit kann verkürzt werden, indem man die Masse wenigstens bis zu dem Punkt, wo noch keine Zersetzung der labilen Komponenten erfolgt, erwärmt. D. h. es wurde gefunden, daß es möglich ist, die Massen auf eine Temperatur von etwa 60°C zu erwärmen, ohne daß dies sich nachteilig auf die labilen Komponenten auswirkt. Der wesentliche Faktor ist, daß der hygroskopische Feststoff so lange in der Lösung verbleibt, bis diese nicht mehr als etwa 0,5% Vol/Vol an Wasser enthält.

Das gemäß der Erfindung stabilisierte Präparat kann in Behälter geeigneter Größe eingebracht werden und dient zum Zweck der Bestimmung von Körperkomponenten. Durch Entfernung des hygroskopischen Mittels wird es nun möglich, präzise und genaue Mengen zu entnehmen, da das hygroskopische Mittel sonst etwas von dem Lösungsmittel selbst absorbieren würde oder wenigstens einen Teil des Lösungsmittels durch Oberflächenspannung an der Oberfläche des hygroskopischen Mittels verbleiben würde. Auf diese Weise ist es nun möglich, genaue Mengen in denjenigen Fällen, wo die Anwendung einer bestimmten Menge der Lösung ein kritischer und wesentlicher Faktor ist, zu entnehmen.

Es wurde nun gefunden, daß die oben beschriebenen Massen auch in Gegenwart anderer labiler Komponenten als der Enzyme stabilisiert werden können, wie oben beschrieben. So kann beispielsweise die stabilisierte Masse auch andere Coenzyme, wie beispielsweise NAD und NADH usw., enthalten, oder die verschiedenen Substrate, die mit den Massen verträglich sind. In jedem Fall wurde gefunden, daß die Substrate und die Coenzyme gemäß der Erfindung zusammen stabilisiert werden können.

Das Coenzym kann bis zu seiner Löslichkeitsgrenze anwesend sein und wird vorzugsweise wenn möglich konzentriert, da Propylenglykol ein starker Enzyminhibitor ist und die primäre oder enzymatische Kupplungsaktivität beeinträchtigen kann, wenn zuviel davon aus dem Coenzymreagenz in den Test getragen wird. Typische NADH₂-Massen gemäß der Erfindung enthalten etwa 2 bis 15 g/l, insbesondere etwa 7 g/l. Hydratisiertes NADH₂ kann für eine raschere Auflösung in dem als Lösungsmittel verwendeten Polyol verwendet werden.

Die Erfindung wird nachfolgend anhand der Beispiele näher erläutert.

Beispiel 1

6,65 g/l NADH₂ wurden in einem geschlossenen bernsteinfarbenen Glasbehälter in spektrographisch reinem 1,2-Propandiol gelöst. Nach vollständiger Auflösung wurden 10% Vol/Vol Molekularsieb (4,7 mm) zugesetzt, der Behälter geschlossen und unter gelegentlichem Mischen 24 h bei Raumtemperatur gehalten, um den Wassergehalt des Gemisches auf unter 0,01% zu senken. Die Lösung wurde für den Versand in weitere bernsteinfarbene Glasflaschen, die frische Molekularsiebe (4,7 mm, 10% Vol/Vol) enthielten, gefüllt. Diese Behälter wurden luftdicht verschlossen und unter Kühlen gelagert. Ein Arrheniusdiagramm, das das Temperaturstabilitätsprofil von NADH₂ in diesem Medium wiedergibt, zeigt eine Lagerungsstabilität von bis zu 4 a ohne merklichen Abbau. Die Werte wurden bei 3 Lagerungstemperaturen von 60°C, Raumtemperatur (etwa 25°C) und Kühltemperaturen von etwa -8°C erhalten. (Der Mittelwert von 4°C wurde angewandt.) Der maximal zulässige Verlust beträgt weniger als 10% nach 360 d Lagerung bei 27°C.

In diesem Beispiel 1 blieben die Molekularsiebe bei der Lagerung in der Masse, um das Absinken des NADH-Gehaltes bei wiederholtem Öffnen des Behälters zu verhindern. Im folgenden Beispiel 2 wurden die Molekularsiebe nach der Stabilisierung der Masse entfernt und gelangten nicht in die luftdicht verschlossenen Behälter. Trotzdem wurde die Stabilität der Masse nicht wesentlich be einträchtigt.

Beispiel 2

6,65 g/l NADH₂ wurden in einem geschlossenen bernsteinfarbenen Glasbehälter in spektrometrisch reinem 1,2-Propandiol gelöst. Nach vollständiger Auflösung wurden 10% Vol/Vol Molekularsiebe (4,7 mm) zugesetzt, der Behälter geschlossen und unter gelegentlichem Rühren 24 h bei Raumtemperatur gehalten, um den Wassergehalt des Gemisches auf unter 0,01% zu senken. Die überstehende Lösung wurde für den Versand in kleine klare Glasflaschen abgefüllt. Diese wurden luftdicht verschlossen und unter Kühlen gelagert. Eine Arrheniusdiagramm, das das Temperaturstabilitätsprofil von NADH₂ in diesem Medium wiedergibt, zeigt eine Lagerungsstabilität von bis zu 4 a ohne merklichen Abbau. Die Werte wurden 3 Lagerungstemperaturen von 50°C, Raumtemperatur (ungefähr 25°C) und Kühltemperaturen von 2 bis 8°C erhalten. (Der Mittelwert von 4°C wurde verwendet.) Der maximal zulässige Verlust beträgt weniger als 10% nach 360 d Lagerung im Dunkeln bei 27°C.

Beispiel 3

Die Masse von Beispiel 2 wird nach Entfernung von überschüssigem Wasser durch den hygroskopischen Feststoff zusammen mit einem Coenzym NADH in einer Menge von je 20 µl in einzelne kleine Testflaschen aus klarem Glas eingebracht. Eine dicht passende Schraubkappe wurde auf das offene obere Ende dieser Flaschen aufgebracht. Diese Testabfüllungen erwiesen sich als hoch wirksam bei ihrer Verwendung für einzelne Bestimmungen von SGOT, SGPT, LBDH und LDH-P, wenn man lediglich das entsprechende geeignete Substrat zusetzte.

Claims

1. Verfahren zum Stabilisieren von Coenzym NADH₂ oder von hydratisiertem NADH₂, dadurch gekennzeichnet, daß das Coenzym in einem Polyol mit 2 bis 4 Hydroxylgruppen und 2 bis 10 Kohlenstoffatomen unter Bildung einer Lösung gelöst, der Lösung mindestens 1% eines teilchenförmigen, inerten, hygroskopischen Feststoffs mit großer Oberfläche zugesetzt und die dabei erhaltene Suspension unter gelegentlichem Rühren, bis der Restwassergehalt auf unter 0,5% abgesunken ist, stehengelassen werden und die Lösung bzw. Suspension anschließend, gegebenenfalls nach Abfiltrieren des hygroskopischen Feststoffs, in Behälter abgefüllt und diese abgedichtet werden.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß eine Lösung mit einer Konzentration an NADH₂ von mehr als 2 g/l mit dem hygroskopischen Feststoff versetzt wird.

3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß als Lösungsmittel 1,2-Propandiol verwendet wird.

4. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß der Wassergehalt der Suspension auf nicht mehr als 0,1% vor dem Abfüllen und Abdichten der Lösung bzw. Suspension gesenkt wird.

5. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß als hygroskopischer Feststoff ein Molekularsieb eingesetzt wird.

6. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß als hygroskopischer Feststoff ein Molekularsieb mit einer Teilchengröße von 1 bis 9,4 mm in einer Menge von wenigstens 1% Vol/Vol eingesetzt wird.

7. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß das Molekularsieb in einer Menge von 2 bis 20% Vol/Vol eingesetzt wird.