DE2655691A1 - Temperaturempfindliche, vermehrungsfaehige, nicht pathogene varicellen-zoster- viren, verfahren zu ihrer herstellung und diese viren enthaltende lebendvaccine - Google Patents

Temperaturempfindliche, vermehrungsfaehige, nicht pathogene varicellen-zoster- viren, verfahren zu ihrer herstellung und diese viren enthaltende lebendvaccine

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DE2655691A1 DE19762655691 DE2655691A DE2655691A1 DE 2655691 A1 DE2655691 A1 DE 2655691A1 DE 19762655691 DE19762655691 DE 19762655691 DE 2655691 A DE2655691 A DE 2655691A DE 2655691 A1 DE2655691 A1 DE 2655691A1
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Description

RECHERCHE ET INDUSTRIE THERAPEUTICQUES R. I; T. Genval, Belgien
"Temperaturempfindliche, vermehrungsfähige, nicht pathogene Varicellen-Zoster-Viren, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese Viren enthaltende Lebendvaccine"
Priorität: 29- 12. 1975, V.St.A. Nr. 644 787
Varicellen (Windpocken) sind eine im allgemeinen mild verlaufende, hochinfektiöse Erkrankung, die hauptsächlich bei Kindern auftritt. Komplikationen sind selten, obwohl man gelegentlich etwa 5 bis 10 Tage nach Auftreten des Exanthems eine Encephalitis beobachten kann. Treten Varicellen"bei Neugeborenen auf, so kann die Letalität bis zu 20 % betragen. Bei der Encephalitis nach Varicellen beträgt die Sterblichkeit etwa 10 % und bei weiteren 10 % find.et man bleibende Dauerschäden des Zentralnervensystems. Bei Erwachsenen verläuft die Erkrankung schwerer.
Zoster (Gürtelrose) ist eine rezidiv bei Erwachsenen auftretende Erkrankung, die vorher mit dem Varicellen-Zoster-Virus infiziert worden sind, und die durch entzündliche Re-
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-Jt- '
Ή'
aktion der dorsalen Nervenwurzeln und Ganglien charakterisiert ist. Bei dieser Erkrankung treten, ähnlich wie bei Varicellen, bläschenförmige Hautveränderungen in den Hautgebiete^ auf, die durch die befallenen sensorischen Nerven versorgt werden. Die entzündliche Reaktion breitet sich gelegentlich auch auf die Vorderhornzellen des Rückenmarks aus und führt dann zu einer - meist jedoch nur temporären - Lähmung.
Die erhöhte Gefahr der Infektion durch Varicellen-Zoster-Viren bei Menschen mit mangelndem Immunreaktionsvermögen oder während immunsuppressiver Behandlung ist bekannt; vgl. A. Gerskon u. Mitarb., J. Pediat. ,Bd. 81 (1972), S. 1034 und G. Schaison u. Mitarb., Actual. Hematol.,Bd. 6 (1971), S. biß 122. · · . ·
Die Verhinderung oder Modifizierung der Erkrankung durch passive Immunisierung mit y-Globulinen (H.A. Ross, New Engl. J..Med., Bd. 267 (1962), S. 369 bis 376), Zoster-Immunglobulin ( Z.I.G.) (P.A. Brunnel u. Mitarb., New Engl, J. Med., Bd. (1969)} S, II9I bis II94) oder durch Verabreiohung von Cytosinarabiiiosid (D.A. Stevens u. Mitarb., Ntw Engl. J. Med., Bd. 2Θ9 (1973), S. 673 bis 878) ist bekannt. In der klinischen Praxis ist jedoch die aktive Immunisierung die beste Methode zur Verhütung der Infektion. Attenuierte Varicellen-Lebendvaccine wurden bereits beschrieben; vgl. BE-PS 766 333» V. I. Iovlev, Vopr. Viruaol., Bd. 5 (1969), S, 561 und M. Takahashi u. Mitarb., Lancet II (7892), 1974, S. 1288 bis 1290. Diese bekannten Lebendvaccin en enthalten durch Reihen-
709828/08A8 ordinal inspected j
-r-
passagen in spezieller Gewebekultur oder Gewebekulturen attenuiertes Varicellenvirus.
Die Anwendung einer Varicellen-Virus-Lebendvaccine beseitigt jedoch nicht das Risiko, daß die Erkrankung möglicherweise .wiederauftritt,und ein Problem bei der derzeitigen Entwicklung von Varicellen-Virus-Vaccinen ist es, dieses Risiko auf ein Mindestmaß zu beschränken.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, temperaturempfindliche, vermehrungsfähige, aber apathogene Varicellen-Zoster- . Viren zu schaffen, die sich durch eine hohe immunogene Wirkung auszeichnen und somit auch fähig sind, eine Reaktivierung von Varicellen-Zoster-Virus im Organismus zu hemmen. Diese Aufgabe wird durch die Erfindung gelöst.
Die Erfindung betrifft somit den in den Ansprüchen gekennzeichneten Gegenstand.
Unter dem Ausdruck "temperaturempfindliche Mutante" ist ein modifizierter Virusstamm zu verstehen, dessen Vermehrungsfähigkeit bei Temperaturen oberhalb seiner sogenannten cut-off Temperatur praktisch gehemmt ist, während die Replikation des zu seiner Herstellung verwendeten Wildstammes bei dieser Temperatur praktisch nicht beeinträchtigt ist. Unter optimalen Bedingungen soll eine temperaturempfindliche Mutante mit einer solchen cut-off Temperatur charakteristisch sein, daß sie sich im Bereich der normalen Körpertempera-
709828/0848 _J
tür zwar in einer kühleren Schleimhaut oder in der Haut vermehren kann, die Replikation im Körperinneren aber gehemmt ist. Die cut-öff Temperatur ist dann als der Temperatur-Grenzwert zu definieren, bei dem die Vermehrungsrate des temperaturempfindlichen Stammes um mindestens 2 logl0 gegenüber der normalen' Rate reduziert ist.
Dieses Phänomen wurde zur Entwicklung einiger Lebendvirusvaccine bereits angewendet (vgl. B.R. Murphy u. Mitarb., J. Infect. Dis., Bd. 162 (1972), S. 170, BE-PSen 808 708, 812 816 und 814 632), doch ist eine derartige temperaturempfindliche Varicella-Zoster-Virusvaccine bisher nicht beschrieben.
Die temperaturempfindlichen, vermehrungsfähigen, nicht pathogenen Varicellen-Zoster-Viren der Erfindung können sich · nach dem Verimpfen in die Haut praktisch nur an der Impfstelle vermehren, wo die Temperatur um mehrere Grade niedriger liegt als im Körperinneren. Experimentell wurde festgestellt, daß eine Lebendvaccine mit einem Gehalt an den temperaturempfindlichen, vermehrungsfähigen, nicht pathogenen Varicellen-Zoster-Viren der Erfindung die Bildung von Varicellen-Antikörpern durch Stimulierung des immunologischen Systems des Patienten induziert.
Von Bedeutung ist ferner, daß die Lebendvaccine der Erfindung nach Applikation in der Lage ist, eine Varicellen-Zoster-Virusreaktivierung in einem latent infizierten Organismus zu unter-
709828/0848 J
drücken. Im Jugendlichen Alter durch Infektion bzw. Erkrankung aufgenommenes Varicellen-Virus kann nach der Genesung persistieren und, im Verlaufe der allmählichen Abnahme der Immunität (Antikörperspiegel) mit dem Alter, später reaktiviert werden. Aus einer erneuten Varicellen-Virusvermehrung und Ausbreitung entsteht die Zoster-Erkrankung. Die Impfung mit der Lebendvaccine der Erfindung vermag diesen Prozess zu unterbinden.
Die temperaturempfindlichen, vermehrungsfähigen, nicht pathogenen Varicellen-Zoster-Viren der Erfindung, nachstehend kurz als Virusmutanten bezeichnet, haben eine cut-off Temperatur von etwa 370C. Sie vermehren sich im Hautgewebe des Menschen, doch ist ihre Replikation in den inneren Organen gehemmt. Die Virusmutanten der Erfindung eignen sich zur Herstellung einer Lebendvaccine, die vorzugsweise in gefriergetrocknetem Zustand in den Handel kommt. Die Lebendvaccine der Erfindung wird interdermal gegeben. Ein typischer Vertreter der Virusmutante der Erfindung ist der Stamm P/75/2.
Das Verfahren zur Herstellung der Virusmutanten der Erfindung ist dadurch gekennzeichnet, daß man zellfreie pathogene Varicellen-Zoster-Viren (Feldstamm) bei Temperaturen von 18 bis 250C mit einer wäßrigen Lösung von N-Methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidin (NTG) bis zu einer Mortalität von etwa 90 % behandelt, die noch vermehrungsfähige Viruspopulation auf eine Übliche Zellkultur überimpft und bei 30 bis 35°C inkubiert, das erhaltene Virusraaterial vorzugsweise nach Zerstö-
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rung der Zellen erntet, die geernteten Virusmutanten isoliert und die- temperaturempfindlichen Virusmutanten durch Parallelkultur bei einer permissiven und einer nicht-permissiven Temperatur isoliert bzw. selektiert.
Die zur mutagenen Behandlung verwendete wäßrige Lösung von NTG kann beispielsweise 100 μβ NTG/diI enthalten. Die Behandlung kann beispielsweise 2 Stunden bei Raumtemperatur, d.h. bei 18 bis 25°C ,durchgeführt werden. Es ist ersichtlich, daß die NTG-Konzentration und die Behandlungsdauer voneinander abhängen. Die mutagene Behandlung wird jedoch unter solchen Bedingungen durchgeführt, daß eine Mortalität von etwa 90 c/o der Viruspopulation erreicht wird. Die überlebende, noch vermehrungsfähige Viruspopulation wird-sodann auf eine übliche Zellkultur überimpft, die zur Vermehrung von Varicella-Zoster Virus geeignet und als Substrat zur Vaccineproduktion annehmbar ist. Die beimpfte Kultur wird bei Temperaturen von 30 bis 350C inkubiert. Sodann wird das Virusniaterial geerntet, vorzugsweise nach dem Zerstören der Zellen, beispielsweise durch Ultraschallbehandlung. Die geernteten Virusmutanten werden isoliert, beispielsweise durch Clonen über die Endpunkt-Ver dünnung bei Temperaturen von 28 bis 35°C, insbesondere 300C. Die temperaturempfindlichen Virusrautanten v/erden durch Parallelkultur bei einer Temperatur von 300C bzw. 37,5°C identifiziert.
709828/nptfl
Beispiele für Zellkulturen, die die Replikation von Varicella-Zoster-Virus ermöglichen und als Substrat zur Vaccineproduktion annehmbar sind, sind Lungenzellen von menschlichen Embryonen (HEL-Zellen), insbesondere die menschliche Zelllinie Wi-38.
Zur Verwendung als Vaccine oder zur Vaccineproduktion werden die Virusmutanten der Erfindung in üblichen Zellkulturen, die die Replikation von Varicella-Zoster-Virus ermöglichen und die als Substrat zur Vaccineproduktion annehmbar sind, weiteren Passagen unterworfen. Diese Verfahren zur Herstellung der Lebendvaccine lehnen sich an übliche Methoden an. Die Vaccine wird wie üblich stabilisiert. Die Lebendvaccine der Erfindung wird empfänglichen Individuen auf "kaltem Wege" über die kühleren Körperoberflächen und vorzugsweise intradermal verabreicht.
Die Beispiele erläutern die Erfindung. Ausgangsmaterial für die Virusmutanten der Erfindung ist ein pathogener Varicellen Zoster-Virus-Stamm, der beim Institut für Medizinische Mikrobiologie, Infektions- und Seuchenmedizin der Ludwig-Maxiinilians-Universität München, Fachbereich Tiermedizin, unter der Nummer P/75/1 hinterlegt worden ist.
Eine Virusmutante der Erfindung, die aus dem P/75/1-Stamm nach dem erfindungsgemäßen Verfahren hergestellt worden ist, wurde bei der gleichen Hinterlegungsstelle unter der Hinterlegungsnummer P/75/2 deponiert. Dieser Stamm ist temperaturempfindlich und nicht pathogen und eignet sich als Varicella-
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Zoster-Virusvaccine oder zur Herstellung dieser Vaccine.
Beispiel 1
Varicellen-Zoster-Virus P/75/1 wurde aus der Bläschenflüssigkeit eines an Windpocken erkrankten Kindes isoliert und 6 Passagen in Wi-38 Zellkulturen unterworfen. Die Zellen werden mit einer eisgekühlten wäßrigen Lösung des Natriumsalzes der ^ethylendiamintetraessigsäure geerntet und 30 Sekunden mit maximaler Stärke durch einen Branson-Europa Sonicator, Modell J 22, in einer wäßrigen SPGE-Pufferlösung ultraschallbehandelt. Die Lösung enthält Sucrose (0,218 molar), einbasisches Kaliumphosphat (0,0038 molar), zweibasisches Natriumphosphat (0,0072 molar), Monokaliumglutamat (0,0049 molar) und 0,2 Natriumsalz der Äthylendiamintetraessigsäure in Wasser. Diese Pufferlösung enthält ferner 1 Gewichtsprozent/Volumen Polyvinylpyrrolidon' vom K-Wert 15 (Molekulargewicht 10 000). Der Überstand wird durch ein Filter der Porengröße 3 um filtriert. Ein Aliquot der zellfreien Virussuspension wird 2 Stunden mit einer wäßrigen NTG-Lösung kontaktiert, die in Eagle's Basalmedium (Endkonzentration 100 jig/ml) gelöst ist und dann 30 Minuten an Wi-38 Zellen adsorbiert. Sodann wird die infizierte Kultur dreimal mit Eagle's Basalmedium gewaschen und 3 Tage bei 300C inkubiert. Hierauf wird das Virusmaterial auf die vorstehend beschriebene Weise geerntet und das zellfreie Virusmaterial bei -700C bis zum nächsten Schritt gelagert.
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Die geernteten Virusmutanten werden über die Endpunkt-Verdünnung in'Wi-38 Zellen (2 χ 1Cr Zellen/Röhrchen) und Inkubation bei 300C klonisiert. zytopathische Effekte (CPE) treten 4 bis 10 Tage später in weniger als einem von 5 Röhrchen auf und mit höchstens einem Plaque pro infiziertem Röhrchen. Die aus den Plaques isolierten Viren werden geerntet und auf Parallelkulturen überimpft und bei 30°C bzw. 37,50C inkubiert. Diejenigen Virusclone, die keinen CPE bei 37,50C erzeugen, jedoch einen CPE bei 30°C hervorrufen, werden erfindungsgemäß als temperatürempfindliche Virusmutanten angesehen.
Beispiel2
Ein gemäß Beispiel 1 hergestellter temperaturempfindlicher Varicellen-Zoster-Virenstamni mit der Hinterlegungsbezeichnung P/75/2 wird in Wi-38 Zellen 3 Tage bei 3O0C kultiviert und sodann gemäß Beispiel 1 geerntet, in 2 ml fassende Ampullen als Einzeldosen die Vaccine abgefüllt, wobei pro Dosis mindestens 10 000 plaquebildende Einheiten enthalten sind,und gefriergetrocknet.
Beispiel 3
Die Virusproduktion des Varicellen-Zoster-Stammes P/75/2 bei verschiedenen Temperaturen auf der Wi-38 Zellinie wurde bestimmt. Die Ergebnisse sind nachstehend in Tabelle I und II zusammengefaßt.
709828/üfU8
Tabelle I
Ausbeute an Zell-assoziiertem Virus pro beimpfte KuItur- flasche ' bei verschiedenen Temperaturen
Tage nach
Inkubation		 1 3O0C 35 0C 36°C 370C 380C
2 4 750 730 350 10 1
3 5 600 3 300 250 0 0
4 6 500 5 400 690 0 0
5 800 1 500 700 0 0
■6 300 1 200 500 0 0
(*) Inoculum =100 plaquebildende Einheiten des ZeIl-
assoziierten Virus pro Kulturflasche (**) in plaquebildenden Einheiten pro 0,1 ml
Tabelle II
Ausbeute an zellfreiem Virusmaterial bei verschiedenen Temperaturen
Tage nach
Inkubation		 35°C 370C
Inoculum 3
4
5
6
3
4
5
6		 500<*>
2 050
5 600
3 SOO
17 100
16 000
5 000
800 		. 0
0
0
0
11
5
0
0
80 Plaquebildende
EinheitenAO6 Zellen
.2000 Plaquebildende
EinheitenAo6 Zellen
(*) In plaquebildenden Einheiten pro 0,1 ml.
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Die Ergebnisse zeigen eine cut-off Temperatur von 37°C für das Zel-1-assoziierte Virus (Tabelle I) sowie für das zellfreie Virus (Tabelle II).
Zur Untersuchung der Thermostabilität des temperaturempfindlichen Stammes P/75/2 wurden Proben des zellfreien Virus 0, 10, 30 oder 60 Minuten auf eine nicht-permissive Temperatur (370C) erwärmt, bevor sie auf Wi-38 Zellen überimpft werden, die sodann 4 Tage bei der permissiven Temperatur von 350C inkubiert werden.
In Tabelle III sind die Ergebnisse mit dem pathogenen Ausgangsstamm P/75/1 und mit der temperaturempfindlichen Virusrautante P/75/2 zusammengefaßt.
Tabelle III
Thermische Inaktivierung der Stamme P/75/f und P/75/2 bei 370C
Dauer der Behandlung" Infektionstiter einer 0,1 ml
bei 37°C, Min. Virensusfiension
P/75/1 P/75/2
0 1 500 (*} 1 160
10 1 250 920
30 600 400
60 400 255
(*) plaquebildende Einheiten pro 0,1 ml
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Aus Tabelle III geht hervor, daß sich der pathogene Wildstamm P/75/1 und der modifizierte temperaturempfindliche Stamm P/75/2 bezüglich ThermoStabilität kaum unterscheiden.
Beispiel 4 Klinische und serologische Ergebnisse Bekanntlich sind Schimpansen (Pan Troglodytes) empfindlich gegen Varicellen-Zoster-Infektionen; vgl. W.P.Henschele, JAVMA, Bd. 136 (I960), S. 256 bis 257- Deshalb werden drei dieser Tiere zur klinischen und serologischen Untersuchung der Virusmutante P/75/2 verwendet. Die Tiere werden intradermal in den rechten Vorderarm mit 30 000 plaquebildenden Einheiten (0,5 ml) der Vaccine von Beispiel 2 geimpft; Jedem Tier werden daneben 0,5 ml eines Placebos (SPGE/PVp K 15) in das linke Bein injiziert. Die Rektaltemperatür und die klinischen Symptome werden am 3* » 14., 21. und 28. Tag nach der Impfung (p.i.) registriert. Das Fehlen von klinischen Symptomen sowie einer anormalen Körpertemperatur zeigt die Unschädlichkeit der Vaccine.
Die Immunogenität der Virusmutante P/75/2 wurde durch Serumneutralisation und Komplementbindung an Versuchstierserum bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle IV und V zusammengefaßt.
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Tabelle IV
- · Serumneutralisationstest: Titer der virusneutralisierenden Serumantikörper (1:x)
Tier Ta1K der Blutentnahme nach !dem Impf tag 14 21 28
3 A
Manno
Jules		 0 64-128
128-256
nb		 64-128
128
2048		 128
64-128
2048
16
16
512
nb = nicht bestimmt.
Tabelle V
Komplementbindungs tes t: Titer der komplementbindenden Serumantikörper (1 ix)
Tier Tag der Blutentnahme -p.i. 14 21 28
3A
Manno
Jules		 0 32
16
4-8		 8
16
4-8		 16
16
8
<4
<4
Aus Tabelle IV ist ersichtlich, daß die Seren sämtlicher Tiere vor 'der Impfung positiv reagieren. Nach der Impfung jedoch stiegen die virusneutralisierenden Antikörper um das vierfache
Tabelle V zeigt, daß die Seren sämtlicher Tiere vor der Impfung im Komplementbindungstest negativ waren, 14 Tage nach der Impfung jedoch Serokonversion zeigten.
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Claims (5)

  1. (1) Temperatürempfindliche, vermehrungsfähige, nichtpathogene Varicellen-Zoster-Viren, erhältlich durch Behandlung von zellfreien pathogenen Varicellen-Zoster-Viren bei Temperaturen von 18 bis 250C mit einer wäßrigen Lösung von N-Methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidin bis zu einer Mortalität von etwa 90 %, "Überiinpfen der noch vermehrungsfähigen Viruspopulation auf eine übliche Zellkultur, Inkubieren bei 30 bis 35°C, Ernten des Virusmaterials vorzugsweise nech Zerstörung der Zellen, Isolieren der geernteten Virusmutanten und Isolieren der temperaturempfindlichen Virusmutanten durch Parallelkultur bei einer permissiven und nicht-permissiven Temperatur.
  2. 2. Verfahren zur Herstellung der Varicellen-Zoster-Viren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man zellfreie pathogene Varicellen-Zoster-Viren bei Temperaturen von 18 bis 25°C mit einer-wäßrigen Lösung von N-Methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidin bis zu einer Mortalität von etwa 90 % behandelt, die noch vermehrungsfähige Viruspopulation auf eine übliche Zellkultur Uberimpft und bei 30 bis 350C inkubiert,·. · das erhaltene Virusmaterial vorzugsweise nach Zerstörung der Zellen erntet, die geernteten Virusmutanten isoliert und die temperaturempfindlichen Virusmutanten durch Parallelkultur bei einer permissiven und einer nicht-permissiven Temperatur isoliert bzw. selektiert.
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  3. 3- Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß man die geernteten Virusmutanten durch Endpunkt-Verdünnung bei Temperaturen von 28 bis 350C clonisiert und isoliert.
  4. 4. Verfahren nach Anspruch 2 oder 3, dadurch gekennzeichnet, daß man die temperaturempfindlichen Virusmutanten durch Parallelkultur bei einer Temperatur von 3O0C im Vergleich zu 37,50C selektiert und isoliert.
  5. 5. Varicellen-Zoster-Viren-Lebendvaccine, gekennzeichnet durch einen Gehalt an temperaturempfindlichen, vermehrungsfähigen/ nicht pathogenen Varicellen-Zoster-Viren nach Anspruch 1.
    9828/0848
DE2655691A 1975-12-29 1976-12-08 Temperaturempfindliche, vermehrungsfähige, nicht pathogene Varicella-Zoster-Viren, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese Viren enthaltende Lebendvaccine Expired DE2655691C2 (de)

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2077590A (en) * 1980-01-25 1981-12-23 Wistar Inst Highly attenuated varicella virus vaccine and production thereof
US4315914A (en) * 1980-04-04 1982-02-16 Seiji Arakawa Pharmaceutical compositions useful as cellular immunopotentiator and antitumor agent and process for production thereof
US4714678A (en) * 1982-10-13 1987-12-22 Smithkline-Rit Temperature sensitive strain of bovine viral diarrhoea virus
IT1213254B (it) * 1984-12-06 1989-12-14 Boehringer Biochemia Srl Metodo diagnostico per la valutazione di parametri clinici mediante prelievo diretto dimateriali biologici e dispositivoper la sua attuazione.
KR920703614A (ko) 1990-10-04 1992-12-18 티모시 제이. 렉카르트 바리셀라-조스터 바이러스 항원
US5824319A (en) * 1990-10-04 1998-10-20 Research Corporation Technologies, Inc. Varicella-zoster virus antigen
ATE210722T1 (de) 1992-07-17 2001-12-15 Merck & Co Inc Methode zur verhinderung von zoster und linderung der mit varicellea verbundenen postherpetischen neuralgie
US5879675A (en) * 1994-03-15 1999-03-09 Medical College Of Pennsylvania And Hahnemann University Compositions and methods for vaccines comprising α-galactosyl epitopes
US7666082B2 (en) * 2004-05-07 2010-02-23 Gamelogic Inc. Method and apparatus for conducting a game of chance
EP3041505A4 (de) 2013-09-05 2017-04-19 Merck Sharp & Dohme Corp. Immunisierungsverfahren mit einem varicella-zoster-virus-antigen

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
NICHTS-ERMITTELT *

Also Published As

Publication number Publication date
DE2655691C2 (de) 1985-08-14
FR2336944B1 (de) 1980-07-18
JPS624370B2 (de) 1987-01-30
US4008317A (en) 1977-02-15
BE849897A (fr) 1977-06-28
JPS5282721A (en) 1977-07-11
FR2336944A1 (fr) 1977-07-29
GB1565830A (en) 1980-04-23

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