DE265293T1 - T7-dns-polymerase. - Google Patents

T7-dns-polymerase.

Info

Publication number
DE265293T1
DE265293T1 DE198787311435T DE87311435T DE265293T1 DE 265293 T1 DE265293 T1 DE 265293T1 DE 198787311435 T DE198787311435 T DE 198787311435T DE 87311435 T DE87311435 T DE 87311435T DE 265293 T1 DE265293 T1 DE 265293T1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
polymerase
dna
exonuclease activity
primer
molecule
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
DE198787311435T
Other languages
English (en)
Inventor
Charles C. Chestnut Hill Massachusetts 02167 Richardson
Stanley Cambridge Massachusetts 02138 Tabor
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Harvard College
Original Assignee
Harvard College
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26671499&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=DE265293(T1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from US07/003,227 external-priority patent/US4795699A/en
Application filed by Harvard College filed Critical Harvard College
Publication of DE265293T1 publication Critical patent/DE265293T1/de
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6869—Methods for sequencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • C12N9/1241—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
    • C12N9/1252—DNA-directed DNA polymerase (2.7.7.7), i.e. DNA replicase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
    • C12P19/28—N-glycosides
    • C12P19/30—Nucleotides
    • C12P19/34—Polynucleotides, e.g. nucleic acids, oligoribonucleotides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/848—Escherichia
    • Y10S435/849—Escherichia coli

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Claims (58)

Ansprüche
1. Verfahren zur Bestimmung der Nucleotid-Basen-Sequenz eines DNA-Moleküls, das:
Anlagern eines zur Hybridisierung mit dem DNA-Molekül befähigten Primer-Moleküls an das DNA-Molekül,
Inkubieren getrennter Einzelmengen der zur Anlagerung behandelten Mischung in mindestens 4 Gefäßen, wobei jedes Gefäß mindestens vier unterschiedliche Desoxynucleosidtriphosphate, eine prozessive DNA-Polymerase, wobei diese Polymerase über mindestens 500 Basen am DNA-Molekül gebunden bleibt, bevor sie unter den normalerweise in der Ex- tensions-Reaktion einer DNA-Sequenzierungsreaktion einge- f setzten Umgebungsbedingungen dissoziiert, wobei die Polymerase weniger als 500 Einheiten Exonucleaseaktivität pro mg Polymerase besitzt und eines der vier DNA-Syntheseterminierenden Agentien, das die DNA-Synthese an einer bestimmten Nucleotid-Base terminiert, enthält, und jedes dieser Agentien die DNA-Synthese an einer anderen Nucleotid-Base terminiert, und
Auftrennen der DNA-Produkte jeder Inkubationsreaktion nach Größe, wodurch mindestens ein Teil der Nucleotid-Basen-Sequenz des DNA-Moleküls bestimmt werden kann, aufweist.
2. Verfahren nach Anspruch 1, wobei diePolymerase am DNA-Molekül über mindestens 1000 Basen vor Dissoziation gebunden bleibt.
3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, wobei die Polymerase die Polymerase aus mit einem Phagen vom T-7 Typ infi-
zierten Zellen ist.
4. Verfahren nach Anspruch 3, wobei der Phage vom T-7-Typ T7, T3, 01, Oil, H, W31, gh-1, Y, A1122 oder SP6 ist.
5. Verfahren nach Anspruch 4, wobei der Phage vom T7-Typ T-7 ist.
6. Verfahren nach irgendeinem der vorangehenden Ansprüche, wobei die Polymerase ihre Prozessivität in einer anderen Umgebung, die normalerweise in der Start-(PuIs)-Reaktion einer DNA-Sequenzierungsreaktion eingesetzt wird, nicht zeigen kann.
7. Verfahren nach irgendeinem der vorangehenden Ansprüche, wobei die Polymerase Didesoxy-Nucleotid-Analoga nicht unterscheidet.
8. Verfahren nach irgendeinem der vorangehenden Ansprüche, wobei die Polymerase eine modifizierte Polymerase mit weniger als 50 Einheiten Exonucleaseaktivität pro mg Polymerase ist.
9. Verfahren nach Anspruch 8, wobei die Polymerase eine modifizierte Polymerase mit weniger als 1 Einheit Exonucleaseaktivität pro mg Polymerase ist.
10. Verfahren nach Anspruch 8, wobei die Polymerase eine modifizierte Polymerase mit weniger als 0.1 Einheiten Exonucleaseaktivität pro mg Polymerase ist.
11. Verfahren nach irgendeinem der Ansprüche 1 bis 7, wobei die Polymerase keine nachweisbare Exonucleaseaktivität besitzt.
12. Verfahren nach irgendeinem der vorangehenden Ansprüche, wobei die Polymerase Primer mit 10 oder mehr Basenpaaren verarbeiten kann.
13. Verfahren nach irgendeinem der Ansprüche 1 bis 11, wobei die Polymerase Primer mit 4 oder mehr Basenpaaren verarbeiten kann.
14. Verfahren nach Anspruch 13, wobei der Primer 4 bis 20 Basenpaare besitzt und die Polymerase Primer mit 4 bis 20 Basenpaaren verarbeiten kann.
15. Verfahren nach Anspruch 13 oder 14, wobei die Mischung T7 Gen 2.4 oder Gen 4 aufweist.
16. Verfahren nach Anspruch 3, wobei die Polymerase Nucleotid-Analoga nicht unterscheidet und eine modifizierte Polymerase mit weniger als 500 Einheiten Exonucleaseaktivität pro mg Polymerase ist; der Primer eine einzelsträngige RNA oder DNA mit 4 bis 10 Basenpaaren ist, und die Polymerase Primer mit 4 bis 20 Basenpaaren verwenden kann,
und die Inkubation einen Start- und einen Endschritt aufweist.
17. Verfahren nach irgendeinem der Ansprüche 1 bis 15, wobei der Primer eine einzelsträngige DNA oder RNA ist.
18. Verfahren nach irgendeinem der vorangehenden Ansprüche, wobei der Anlagerungsschritt das Erhitzen des DNA-Moleküls und des Primers auf über 65 Grad Gelsius, und das Abkühlenlassen der erhitzten Mischung auf zwischen 0 und 30 Grad Celsius beinhaltet.
&igr; · I
■ · *
&Lgr; ? R C O Q O
U C U >J L· &iacgr;? U
-A-
19. Verfahren nach irgendeinem der vorangehenden Ansprüche, wobei die Inkubation einen Start(Puls-)Schritt und einen End-(Chase)-Schritt aufweist.
20. Verfahren nach Anspruch lS, wobei der Startschritt Mischen der Mischung nach der Anlagerung mit allen vier Desoxynucleosid-Triphosphaten und einer prozessiven DNA-Polymerase aufweist, wobei mindestens ein Desoxynucleosid-Triphosphat gelabelt ist und in einer limitierenden Konzentration vorhanden ist.
21. Verfahren nach Anspruch 20, wobei der Start-Inkubationsschritt in 30 Sekunden bis 20 Minuten durchgeführt wird.
22. Verfahren nach Anspruch 20, wobei der End-Schritt die Zugabe eines der Kettenterminierungsagentien zu den vier Einzelmengen der Mischung nach Durchführung des Start-Schrittes aufweist.
23. Verfahren nach Anspruch 22, wobei die End-Schritt-Inkubierung über 1 bis 60 Minuten durchgeführt wird.
24. Verfahren nach irgendeinem der vorangehenden Ansprüche, wobei das Terminierungsagens ein Didisoxynucleotid ist.
25. Verfahren nach irgendeinem der vorangehenden Ansprüche, wobei das Teminierungsagens eine limitierende Menge eines Desoxynucleosidtriphosphats ist.
26. Verfahren nach irgendeinem der vorangehenden Ansprüche, wobei das Desoxynucleosid-Triphosphat ausgewählt wird
&eegr; 1 -ft u f) Q O
U L. U v-'Z-Jo
-5-aus dITP oder Deazaguanosin.
27. Verfahren nach irgendeinem der Ansprüche 1 bis 18, wobei der Primer vor dem Anlagerungsschritt gelabelt wird.
28. Verfahren nach Anspruch 27, wobei die Inkubation einen End-(Chase-)Schritt aufweist.
29. Verfahren nach Anspruch 27, wobei der Primer fluoreszenzgelabelt ist.
30. Kombinationserzeugnis für die DNA-Sequenzierung, das eine prozessive DNA-Polymerase, wobei die Polymerase über mindestens 500 Basen am DNA-Molekül gebunden bleibt, die Polymerase weniger als 500 Einheiten Exonucleaseaktivität pro mg Polymerase besitzt, und die Polymerase dazu befähigt ist, ihre Prozessivität unter Umgebungsbedingungen, die üblicherweise in der Extensionsreaktion einer DNA-Sequenzierungsreaktion eingesetzt werden, zu zeigen, und
ein für die Sequenzierung notwendiges Reagens, ausgewählt aus:
(a) dITP und
(b) einem Kettenterminierungsagens
aufweist.
31. Kombinationserzeugnis nach Anspruch 30, wobei das Reagens dITP ist.
32. Kombinationserzeugnis nach Anspruch 30 oder 31, wobei die Polymerase ihre Prozessivität in einer weiteren Umgebung, die normalerweise in der Start-(Puls-)Reaktion einer DNA-Sequenzierungreaktion eingesetzt wird, nicht zeigen kann.
O 266293
-6-
33. Verfahren zur Herstellung aktiver DNA-Polymerase vom &Tgr;-7-&Tgr;&ggr;&rgr; aus klonierten Fragmenten, wobei die für die PoIymerase codierenden Gene unter die Steuerung von sicher arbeitenden (non-leaky) Promotoren in einer Einzelzlle gebracht werden, die Expression der Gene dann, wenn diese Zelle sich in der Phase logarithmischen Wachstums oder einer stationären Phase befindet, induziert wird, und die Polymerase aus der Zelle isoliert wird.
34. Verfahren nach Anspruch 33, wobei eines der Gene unter der Kontrolle eines zur Expression von T7 RNA-Polymerase benötigenden Promotors ist.
35. Verfahren nach Anspruch 33, wobei die Polymerase aus zwei klonierten Genen hergestellte aktive T7 DNA-Polymerase ist und eines der Gene unter der Kontrolle eines Promotors, der T7 RNA-Polymerase für die Expression benötigt, ist.
36. Verfahren zur Reinigung von T7-DNA-Polymerase aus Zellen, die einen Vektor, von dem die Polymerase exprimiert wird, aufweisen, mit folgenden Schritten:
Lysis der Zellen und Schicken der Polymerase über eine nach Molekülgrößen auftrennenden Säule, eine DE52 DEAE-Säule, eine Phosphocellulose-Säule und eine Hydroxylapatit-Säule.
37. Verfahren nach Anspruch 36, wobei vor dem Beschikkungsschritt das Verfahren das Ausfällen der Polymerase mit Ammoniumsulfat aufweist.
38. Verfahren nach Anspruch 36, das ferner die Schritte
02B52S3
des Schickens der Polymerase über eine Sephadex DEAE A-50-Säule aufweist.
39. Verfahren nach Anspruch 36, wobei die nach Größen auftrennende Säule eine Sephadex G 150 Säule ist.
40. Verfahren zur Inaktivierung der Exonucleaseaktivität in einer DNA-Polymerase Lösung, hergestellt durch Techniken mit rekombinanter DNA, das das Inkubieren der Lösung in einem Sauerstoff, ein Reduktionsmittel und ein Übergangsmetall aufweisenden Gefäß aufweist.
41. Für eine DNA-Polymerase vom T7-Typ codierendes Gen, das genetisch derart modifiziert ist, daß es die Aktivität natürlich auftretender Exonucleaseaktivität hemmt.
42. DNA-Polymerase vom T7-Typ, hergestellt vom Gen des Anspruchs 41.
43. Gen nach Anspruch 41, mit einem modifizierten His Rest.
44. Gen nach Anspruch 43, dessen His-Rest His-123 aus T-7 Polymerase ist.
45. Gen nach Anspruch 43 oder 44, wobei der His-Rest fehlt.
46. DNA-Polymerase vom T7-Typ, hergestellt vom Gen des Anspruchs 44 oder 45.
47. Gen nach Anspruch 41, wobei die Aminosäuren 118 und 123 aus dem für die DNA-Polymerase vom T7-Typ codierenden Gen fehlen.
02652S3
48. Verfahren zur Herstellung von glattendiger doppelsträngiger DNA aus einem linearen DNA-Molekül mit einer einzelsträngigen Region, wobei das 3'-Ende des Moleküls doppelsträngig ist und keine überstehenden 3'-Enden besitzt, das Inkubieren des DNA-Moleküls mit einer prozessiven DNA-Polymerase, die im wesentlichen frei von natürlich auftretender Exonucleaseaktivität ist, aufweist.
49. Verfahren zur Amplifikation einer DNA-Sequenz unter Anlagern eines ersten und zweiten Primers an gegenüberliegende Stränge einer doppelsträngigen DNa-Sequenz und Inkubieren der behandelten mischung mit einer prozessiven DNA-Polymerase mit weniger als 500 Einheiten Exonucleaseaktivität pro mg Polymerase, wobei die ersten und zweiten Primer sich an gegenüberliegende Stränge der DNA-Sequenz anlagern.
50. Verfahren nach Anspruch 49, wobei die 3'-Enden der ersten und zweiten Primer nach der Anlagerung gegeneinander gerichtet sind.
51. Verfahren nach Anspruch 49 oder 50, wobei das Verfahren ferner aufweist, daß nach dem Inkubationsschritt die resulutierende DNA denaturiert wird, die ersten und zweiten Primer an die resultierende DNA angelagert werden und die Mischung nach demAnlagerungsschritt mit der Polymerase inkubiert wird.
52. Verfahren nach Anspruch 51, wobei der Zyklus der Denaturierung, Anlagerung und Inkubation 10 bis 40 mal wiederholt wird.
53. Verfahren nach irgendeinem der Ansprüche 49 bis 52,
0265283
wobei die Exonucleaseaktivität weniger als 1 Einheit pro mg Polymerase beträgt.
54. Verfahren zum Labein des 3'-Endes eines DNA-Fragments unter Inkubation des DNA-Fragments mit einer prozessiven DNA-Polymerase mit weniger als 500 Einheiten Exonucleaseaktivität pro mg Polymerase und einem gelabelten Desoxynucleotid.
55. Verfahren zur in vitro Mutagenese eines klonierten DNA-Fragments unter Vorsehen eines Primers und eines Templates, wobei der Primer und das Template eine spezifische unpassende Base aufweisen, und Extendieren des Primers mit einer prozessiven modifizierten DNA-Polymerase.
56. Verfahren zur in vitro Mutagenese eines klonierten DNA-Fragments unter Vorsehen des klonierten Fragmentes und Synthetisierung eines DNA-Stranges unter Verwendung einer prozessiven DNA-Polymerase, die weniger als 1 Einheit Exonucleaseaktivität pro mg Polymerase aufweist, unter Bedingungen, die Fehleinbau einer Nucleotid-Base bewirken.
57. Kombinationserzeugnis mit einer Vielzahl von mindestens 25 für die DNA-Sequenzierung geeigneten Oligomeren, wobei jedes Oligomere in einem separaten Behälter vorliegt und eine unterschiedliche Basensequenz über weniger als 15 Basen Länge aufweist.
58. Kombinationserzeugnis nach Anspruch 57, wobei jedes Oligomere zwischen 6-9 Basen, einschließlich, aufweist.
DE198787311435T 1987-01-14 1987-12-24 T7-dns-polymerase. Pending DE265293T1 (de)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US07/003,227 US4795699A (en) 1987-01-14 1987-01-14 T7 DNA polymerase
US07/132,569 US4942130A (en) 1987-01-14 1987-12-14 T7 DNA polymerase

Publications (1)

Publication Number Publication Date
DE265293T1 true DE265293T1 (de) 1988-08-11

Family

ID=26671499

Family Applications (9)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE3751042T Expired - Lifetime DE3751042T2 (de) 1987-01-14 1987-12-24 T7-DNS-Polymerase.
DE9090201138T Expired - Fee Related DE3781809T2 (de) 1987-01-14 1987-12-24 T7-dns-polymerase.
DE199292202037T Pending DE516245T1 (de) 1987-01-14 1987-12-24 Dns-sequenzierung.
DE3789623T Expired - Lifetime DE3789623T4 (de) 1987-01-14 1987-12-24 T7-DNS-Polymerase.
DE198787311435T Pending DE265293T1 (de) 1987-01-14 1987-12-24 T7-dns-polymerase.
DE3750288T Expired - Lifetime DE3750288T2 (de) 1987-01-14 1987-12-24 T7-DNS-Polymerase.
DE3789623A Expired - Fee Related DE3789623D1 (de) 1987-01-14 1987-12-24 T7-DNS-Polymerase.
DE199090201140T Pending DE386859T1 (de) 1987-01-14 1987-12-24 T7-dns-polymerase.
DE199090201139T Pending DE386858T1 (de) 1987-01-14 1987-12-24 T7-dns-polymerase.

Family Applications Before (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE3751042T Expired - Lifetime DE3751042T2 (de) 1987-01-14 1987-12-24 T7-DNS-Polymerase.
DE9090201138T Expired - Fee Related DE3781809T2 (de) 1987-01-14 1987-12-24 T7-dns-polymerase.
DE199292202037T Pending DE516245T1 (de) 1987-01-14 1987-12-24 Dns-sequenzierung.
DE3789623T Expired - Lifetime DE3789623T4 (de) 1987-01-14 1987-12-24 T7-DNS-Polymerase.

Family Applications After (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE3750288T Expired - Lifetime DE3750288T2 (de) 1987-01-14 1987-12-24 T7-DNS-Polymerase.
DE3789623A Expired - Fee Related DE3789623D1 (de) 1987-01-14 1987-12-24 T7-DNS-Polymerase.
DE199090201140T Pending DE386859T1 (de) 1987-01-14 1987-12-24 T7-dns-polymerase.
DE199090201139T Pending DE386858T1 (de) 1987-01-14 1987-12-24 T7-dns-polymerase.

Country Status (19)

Country Link
US (1) US4942130A (de)
EP (5) EP0386859B1 (de)
JP (7) JP2584644B2 (de)
KR (1) KR930005660B1 (de)
CN (1) CN1031251A (de)
AT (2) ATE118039T1 (de)
AU (1) AU604824B2 (de)
CA (2) CA1340628C (de)
DD (1) DD301731A9 (de)
DE (9) DE3751042T2 (de)
DK (1) DK13288A (de)
ES (5) ES2056366T3 (de)
FI (1) FI880131A (de)
GR (2) GR880300103T1 (de)
HU (1) HUT46069A (de)
IL (1) IL85073A (de)
NO (1) NO880126L (de)
NZ (1) NZ223039A (de)
RO (1) RO107769B1 (de)

Families Citing this family (41)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6384264A (ja) * 1986-09-27 1988-04-14 Toshiba Corp 画像読取装置
US4962020A (en) * 1988-07-12 1990-10-09 President And Fellows Of Harvard College DNA sequencing
GB8827167D0 (en) * 1988-11-21 1988-12-29 Apothekernes Lab In vitro mutagenesis
US5001050A (en) * 1989-03-24 1991-03-19 Consejo Superior Investigaciones Cientificas PHφ29 DNA polymerase
US5047342A (en) * 1989-08-10 1991-09-10 Life Technologies, Inc. Cloning and expression of T5 DNA polymerase
US5541099A (en) * 1989-08-10 1996-07-30 Life Technologies, Inc. Cloning and expression of T5 DNA polymerase reduced in 3'-to-5' exonuclease activity
US5270179A (en) * 1989-08-10 1993-12-14 Life Technologies, Inc. Cloning and expression of T5 DNA polymerase reduced in 3'- to-5' exonuclease activity
GB8926269D0 (en) * 1989-11-21 1990-01-10 Dynal As Plasmid
DK0445097T3 (da) * 1990-02-26 1996-09-16 Univ Washington Fremgangsmåde til N-myristoylering af protein
US5322785A (en) 1990-04-26 1994-06-21 New England Biolabs, Inc. Purified thermostable DNA polymerase obtainable from thermococcus litoralis
DE69231178T2 (de) * 1991-08-30 2000-11-23 Syngenix Ltd., Cambridge Nukleinsäure-amplifikation durch polymerase-reaktion
US6410277B1 (en) 1993-02-19 2002-06-25 Takara Shuzo Co., Ltd. DNA polymersases with enhanced length of primer extension
US7465539B1 (en) 1993-02-19 2008-12-16 Takara Bio, Inc. DNA polymerases with enhanced length of primer extension
US5436149A (en) * 1993-02-19 1995-07-25 Barnes; Wayne M. Thermostable DNA polymerase with enhanced thermostability and enhanced length and efficiency of primer extension
US5547859A (en) * 1993-08-02 1996-08-20 Goodman; Myron F. Chain-terminating nucleotides for DNA sequencing methods
US7312052B1 (en) 1993-12-08 2007-12-25 Stratagene California Polymerase compositions and uses thereof
US6015668A (en) * 1994-09-30 2000-01-18 Life Technologies, Inc. Cloned DNA polymerases from thermotoga and mutants thereof
US5614365A (en) * 1994-10-17 1997-03-25 President & Fellow Of Harvard College DNA polymerase having modified nucleotide binding site for DNA sequencing
DE69400567T2 (de) * 1994-10-17 1997-02-06 President And Fellows Of Harvard College, Cambridge, Mass. DNS Polymerase mit veränderter Nukleotid-Bindungstelle
AU7236296A (en) * 1995-09-08 1997-03-27 Life Technologies, Inc. Cloned dna polymerases from thermotoga and mutants thereof
US5888736A (en) * 1995-12-22 1999-03-30 Visible Genetics, Inc. Method, compositions and kit for detection and identification of microorganisms
US5789168A (en) * 1996-05-01 1998-08-04 Visible Genetics Inc. Method for amplification and sequencing of nucleic acid polymers
US5830657A (en) * 1996-05-01 1998-11-03 Visible Genetics Inc. Method for single-tube sequencing of nucleic acid polymers
US6083699A (en) * 1996-05-01 2000-07-04 Visible Genetics Inc. Method for bi-directional sequencing of nucleic acid polymers
US6214555B1 (en) 1996-05-01 2001-04-10 Visible Genetics Inc. Method compositions and kit for detection
US6413718B1 (en) 1996-05-01 2002-07-02 Visible Genetics Inc. Method for sequencing of nucleic acid polymers
US5827716A (en) * 1996-07-30 1998-10-27 Amersham Life Science, Inc. Modified Pol-II type DNA polymerases
US6291164B1 (en) 1996-11-22 2001-09-18 Invitrogen Corporation Methods for preventing inhibition of nucleic acid synthesis by pyrophosphate
US5876934A (en) * 1996-12-18 1999-03-02 Pharmacia Biotech Inc. DNA sequencing method
US6306588B1 (en) 1997-02-07 2001-10-23 Invitrogen Corporation Polymerases for analyzing or typing polymorphic nucleic acid fragments and uses thereof
DE69838724T2 (de) 1997-03-21 2008-10-30 Stratagene California, La Jolla Polymerase-verbessernder faktor (pef)-enthaltende extrakte, pef proteinkomplexe, isoliertes pef protein und verfahren zur reinigung und identifizierung
WO2000041524A2 (en) * 1999-01-11 2000-07-20 President And Fellows Of Harvard College Isothermal amplification of dna
CN1313394A (zh) * 2000-03-10 2001-09-19 上海博德基因开发有限公司 一种新的多肽——dna聚合酶10和编码这种多肽的多核苷酸
US7198924B2 (en) 2000-12-11 2007-04-03 Invitrogen Corporation Methods and compositions for synthesis of nucleic acid molecules using multiple recognition sites
US7222059B2 (en) 2001-11-15 2007-05-22 Siemens Medical Solutions Diagnostics Electrophoretic trace simulator
EP1697534B1 (de) 2003-12-01 2010-06-02 Life Technologies Corporation Rekombinationsstellen enthaltende nukleinsäuremoleküle und verfahren zur verwendung davon
EP2297343A1 (de) * 2008-05-16 2011-03-23 New England Biolabs, Inc. Enzymreagentien zur amplifikation von polynukleotiden in gegenwart von inhibitoren
KR101417989B1 (ko) * 2013-02-08 2014-07-09 주식회사 엔지노믹스 이중가닥 dna 말단의 단일가닥 길이 조절 방법
RU2020103727A (ru) 2017-06-30 2021-07-30 Кодексис, Инк. Варианты рнк-полимеразы т7
EP3645711A4 (de) 2017-06-30 2021-04-21 Codexis, Inc. T7-rna-polymerasevarianten
CN114774453B (zh) * 2022-03-14 2023-04-21 湖北大学 一种运动发酵单胞菌基因表达严谨调控系统的构建方法和应用

Family Cites Families (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3444041A (en) * 1965-09-29 1969-05-13 Univ Illinois In vitro synthesis of ribonucleic acids and enzyme therefor
US3661893A (en) * 1968-11-25 1972-05-09 Univ Illinois Synthesis in vitro of nucleic acids and products used therein and products produced therefrom
US4072574A (en) * 1976-07-30 1978-02-07 The Institute For Cancer Research System for in vitro assay for mutagenicity and/or carcinogenicity of chemicals or other exogenous agents
US4363877B1 (en) * 1977-09-23 1998-05-26 Univ California Recombinant dna transfer vectors
US4224408A (en) * 1978-11-22 1980-09-23 Abbott Laboratories Deoxyribonucleic acid synthesis using binding protein
US4331589A (en) * 1978-11-22 1982-05-25 Abbott Laboratories Deoxyribonucleic acid synthesis using binding protein extracted from chick embryo fibroblasts
DK145779A (da) * 1979-04-09 1980-10-10 Novo Industri As Fremgangsmaade til termisk destabilisering af mikrobiel osteloebe
US4663283A (en) * 1980-03-24 1987-05-05 Genentech, Inc. Method of altering double-stranded DNA
US4555486A (en) * 1980-12-08 1985-11-26 Cetus Corporation Method for using an amino-terminus DNA sequence to synthesize a specific double-stranded DNA
US4394443A (en) * 1980-12-18 1983-07-19 Yale University Method for cloning genes
US4395486A (en) * 1981-08-19 1983-07-26 Medical College Of Ga. Research Inst., Inc. Method for the direct analysis of sickle cell anemia
FI63596C (fi) * 1981-10-16 1983-07-11 Orion Yhtymae Oy Mikrobdiagnostiskt foerfarande som grundar sig pao skiktshybridisering av nukleinsyror och vid foerfarandet anvaenda kombinationer av reagenser
US4663290A (en) * 1982-01-21 1987-05-05 Molecular Genetics, Inc. Production of reverse transcriptase
US4483922A (en) * 1982-05-14 1984-11-20 Amf Inc. Inactivation of enzymes
US4483920A (en) * 1982-05-17 1984-11-20 Hahnemann University Immobilization of message RNA directly from cells onto filter material
US4556643A (en) * 1982-07-26 1985-12-03 Agracetus Assay method and probe for polynucleotide sequences
US4521509A (en) * 1982-11-24 1985-06-04 Research Corporation Method for degrading DNA
GB8311018D0 (en) * 1983-04-22 1983-05-25 Amersham Int Plc Detecting mutations in dna
US4729947A (en) * 1984-03-29 1988-03-08 The Board Of Regents Of The University Of Nebraska DNA sequencing
US4786600A (en) * 1984-05-25 1988-11-22 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Autocatalytic replication of recombinant RNA
US4675283A (en) * 1984-07-19 1987-06-23 Massachusetts Institute Of Technology Detection and isolation of homologous, repeated and amplified nucleic acid sequences
US4767708A (en) * 1984-08-07 1988-08-30 Carnegie Mellon University Enzyme amplification and purification
JPS61137158A (ja) * 1984-12-07 1986-06-24 Toshiba Corp 電子写真感光体
US4670379A (en) * 1984-12-19 1987-06-02 E. I. Du Pont De Nemours And Company Polynucleotide hydridization assays employing catalyzed luminescence
US4795700A (en) * 1985-01-25 1989-01-03 California Institute Of Technology Nucleic acid probes and methods of using same
JPS61219399A (ja) * 1985-03-27 1986-09-29 Hitachi Ltd 核酸塩基配列決定法
US4683195A (en) * 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US4683202A (en) * 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4707235A (en) * 1985-10-16 1987-11-17 Pharmacia, Inc. Electrophoresis method and apparatus having continuous detection means
JPH0732719B2 (ja) * 1986-02-07 1995-04-12 株式会社日立製作所 核酸断片調製法
US4800159A (en) * 1986-02-07 1989-01-24 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences
CA1338457C (en) * 1986-08-22 1996-07-16 Henry A. Erlich Purified thermostable enzyme
US4795699A (en) * 1987-01-14 1989-01-03 President And Fellows Of Harvard College T7 DNA polymerase

Also Published As

Publication number Publication date
EP0265293A2 (de) 1988-04-27
DE3750288T2 (de) 1994-11-10
FI880131A0 (fi) 1988-01-13
DE3781809T2 (de) 1993-03-18
ATE109207T1 (de) 1994-08-15
EP0516245A1 (de) 1992-12-02
ES2001837A4 (es) 1988-07-01
DE386859T1 (de) 1991-07-04
NO880126D0 (no) 1988-01-13
EP0265293A3 (en) 1989-12-13
FI880131A (fi) 1988-07-15
GR3006442T3 (de) 1993-06-21
DE3789623T2 (de) 1994-07-21
JPH0746990A (ja) 1995-02-21
KR930005660B1 (ko) 1993-06-24
EP0386858A3 (de) 1991-07-03
IL85073A (en) 1994-10-07
JPS63237798A (ja) 1988-10-04
CN1031251A (zh) 1989-02-22
DE3789623T4 (de) 1994-12-01
EP0386857A2 (de) 1990-09-12
DE3751042D1 (de) 1995-03-16
EP0265293B1 (de) 1994-07-27
AU1022488A (en) 1988-07-21
DE386858T1 (de) 1991-07-04
JPH05308998A (ja) 1993-11-22
JP2584644B2 (ja) 1997-02-26
DE3789623D1 (de) 1994-05-19
CA1341512C (en) 2006-09-12
EP0386857A3 (de) 1991-07-10
JPH0670772A (ja) 1994-03-15
KR880009126A (ko) 1988-09-14
CA1340628C (en) 1999-07-06
DK13288A (da) 1988-07-15
IL85073A0 (en) 1988-06-30
ES2063243T3 (es) 1995-01-01
EP0386859A3 (de) 1991-07-03
JPH0670773A (ja) 1994-03-15
ATE118039T1 (de) 1995-02-15
JPH06237765A (ja) 1994-08-30
NO880126L (no) 1988-07-15
DE3750288D1 (de) 1994-09-01
ES2001837T3 (es) 1994-10-16
GR880300103T1 (en) 1988-10-21
DK13288D0 (da) 1988-01-13
US4942130A (en) 1990-07-17
ES2068323T3 (es) 1995-04-16
EP0386858B1 (de) 1994-04-13
DE516245T1 (de) 1993-04-29
HUT46069A (en) 1988-09-28
EP0386858A2 (de) 1990-09-12
DE3781809D1 (en) 1992-10-22
DD301731A9 (de) 1993-08-26
JP2606777B2 (ja) 1997-05-07
EP0386857B1 (de) 1992-09-16
EP0386859A2 (de) 1990-09-12
ES2056366T3 (es) 1994-10-01
EP0386859B1 (de) 1995-02-01
ES2060569T1 (es) 1994-12-01
DE3751042T2 (de) 1995-05-24
RO107769B1 (ro) 1993-12-30
JPH06141898A (ja) 1994-05-24
NZ223039A (en) 1990-07-26
AU604824B2 (en) 1991-01-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE265293T1 (de) T7-dns-polymerase.
DE60034878T2 (de) Verfahren zur Amplifizierung einer Nukleinsäuresequenz unter Verwendung eines chimären Primers
DE655506T1 (de) DNS Polymerase mit Veränderten Nukleotiden Bindungstelle.
DE258017T1 (de) Gereinigtes thermostabiles enzym und verfahren zur verstaerkung, zum nachweis und/oder zur klonierung von nukleinsaeuresequenzen durch verwendung dieses enzyms.
DE69527171T2 (de) Strangverdrängungsamplifikation unter Verwendung von thermophilen Enzymen
DE3850093T2 (de) Verfahren zur Amplifizierung von Nukleinsäuren.
DE69016826T2 (de) Verfahren zur Synthese von Ribonukleinsäure (RNS).
DE3650679T2 (de) Oligonukleotide zur Amplifizierung von Nukleinsäuresequenzen und zur Anknüpfung einer Promotersequenz
DE68928413T2 (de) Verfahren zur dns-sequenzbestimmung mit dns-polymerase von thermus aquaticus
DE69534728T2 (de) Amplifizierung von langen Nukleinsäuresequenzen mit PCR
DE69620006T2 (de) Sequenzierverfahren
DE401037T1 (de) Verfahren zur beherrschung von kontamination der nukleinsaeure-amplifikation.
DE200362T1 (de) Verfahren zur vergroesserung, zum nachweis und/oder zur klonierung von nukleinsaeuresequenzen.
DE07025195T1 (de) Nukleotidsequenzen des Genoms von Retroviren des Typs HIV-1, HIV-2 und SIV und deren Anwendungen, insbesondere zur Amplifikation von Genomen dieser Retroviren und für die In-Vitro-Diagnostik von durch diese Viren ausgelösten Infektionen
DD284692A5 (de) Verfahren zur herstellung prozessiver dna-polymerase
ATE73502T1 (de) Verfahren und ausstattung zur bestimmung von spezifischen nukleotid-variationen und genetischen polymorphismen in nukleinsaeuren.
DE69131101T2 (de) Verfahren zur amplifikation von hla klasse i nukleinsäuren
ATE161585T1 (de) Verfahren zur analyse von längenpolymorphismen in dna-bereichen
DE69532717T2 (de) Zusammensetzung der reversen transkriptase mit erhöhter lagerungsstabilität
DE60029225T2 (de) Zusammensetzungen und verfahren zu höhere empfindlichkeit und spezifität von nukleinsäuresynthese
DE69730558T2 (de) Methode zur Bildung makromolekularer Mikrogenpolymeren
EP1004676B1 (de) Methoden zur dns vervielfältigung und material dafür
DE10314745A1 (de) Zyklische Nukleinsäure-Amplifikation mittels einer Helicase
DE69232726T2 (de) Genetische analyse
Pekhletski et al. Expression profiling of mRNA obtained from single identified crustacean motor neurons: determination of specificity of hybridization