DE2513057A1

DE2513057A1 - Neue polypeptide und verfahren zu ihrer herstellung

Info

Publication number: DE2513057A1
Application number: DE19752513057
Authority: DE
Inventors: Masahiko Fujino; Eiichiro Ishikawa; Shigehisa Taketomi; Mitsuhiro Wakumasu
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1974-03-26
Filing date: 1975-03-25
Publication date: 1975-10-09
Also published as: AT348153B; FR2274604A1; AU7904675A; CA1059993A; CH618959A5; DK126275A; IE40877B1; ES435990A1; US4001199A; GB1499764A; FI750925A; HU175306B; SU577975A3; FR2274604B1; ATA223975A; SE7503471L; NL7503519A; IE40877L; CS189694B2; NO751044L

Description

Die Erfindung betrifft neue Polypeptide der allgemeinen Formel
_—λχ. 3*"X\p —xrxxtr—jrxxc:-"Xv,- , V /

worin R₁ Wasserstoff oder einen basischen oder neutralen Aminosäurerest und R_ einen neutralen Aminosäurerest bedeuten und R_ NH₂, Tyr-NHp oder ein Rest von aus 1 bis 5 Aminosäureresten bestehenden Tyrosylpeptiden oder ein Rest von Amiden der Tyrosylpeptide ist, vorausgesetzt, daß, wenn R₁ Wasserstoff ist, R„ Pro bedeutet.

Die Polypeptide der allgemeinen Formel (i) werden wirksam für die Behandlung von Insuffizienzen im

509841/0973

Kohlehydrat- und Lipids to i'f wechsel, insbesondere für die Behandlung von Diabetes mellitus verwendet.

In der vorliegenden Beschreibung und den Patentansprüchen werden Abkürzungen für die Bezeichnung der Aminosäuren, Peptide und deren aktivierenden oder Schutz-Gruppen und die aktivierenden oder Schutzmittel für die Aminosäuren oder Peptide verwendet, vie sie den Bestimmungen der IUPAC-IUB Commission on Biological Nomenclature entsprechen oder nach dem Stand der Technik allgemein üblich sind. Nachstehend werden die Beispiele für Abkürzungen angeführt:

α-Abu: a-Aminobuttersäure

γ-Abu: γ-Aminobuttersäure

fc-Acap: 6-Aminocapronsäure

AIa: Alanin

ß-Ala: ß-Alanin

Arg: Arginin

S-Aval: S-Aminovaleriansäure

α,γ-Dab: α,γ-Diaminobuttersäure

GIy: Glycin

His: Histidin

Leu: Leucin

Lys: Lys in

Nie: Norleucin

Phe: Phenylalanin

Pro: Prolin

Sar: Sarcosin

Ser: Serin

Thr: Thr e onin

VaI: Valin

Aoc: tert.-Amy1oxyc arbonyl

BzI: Benzyläther

DCC: NfNA-Dicyclohexylcarbodiimid

HONB: N-Hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximid

Tyr: Tyrosin

50984 1/0973

OBzli Benzylester

ODNP: 2,4-Dinitrophenylester

OEt: Äthylester

ONB: HONBester

Opcp: Pentachlor^phenylester

Osu: N-Hydroxysuccinimidester

OtBu: tert.-Butylester

Tos: Tosyl

Z: Benzyloxycarbonyl

In der vorliegenden Beschreibung und in den Patentansprüchen bedeuten in jenen Fällen, wo optische Isomere der Aminosäuren vorkommen, die Aminosäuren jedes einzelne der optischen Isomere oder jede razemische Verbindung, wenn nicht ausdrücklich anderes ausgeführt ist. Wenn R₁

Wasserstoff ist, bedeutet die Gruppe R.-Arg folgende Arginylgruppe:

HN

NH

C-NH- (CH₉ ) -CH-CO-

NH,

Unter dem Ausdruck " Ammo säur er es tⁿ ist eine Gruppe zu verstehen, welche Peptidbindungen bilden kann, d.h. · eine Aminosäuregruppe, welcher entweder eines oder beide Wasserstoffatome ihre Amino- oder Iminogruppe und das Hydroxyatom ihrer Carboxylgruppe entzogen wurden.

Die basischen oder neutralen Aminosäuren, welche mit R₁ bezeichnet sind, weisen vorzugsweise 2-10 C-Atome auf. Beispiele für basische Aminosäure sind α-Aminosäuren wie z.B. α,β-Diaminopropionsäure, α,γ-Diaminobuttersäure, Arginin, Lysin oder Histidin. Beispiele für die mit R₁ bezeichneten, neutralen Aminosäuren sind α-Aminosäure wie Glycin, Alanin, Serin, Threonin, a-Aminobuttersäure, Prolin, Leucin, Isoleucin, Norleucin, Phenylalanin und

509841/0973

-k-

Tyrosin, und andere Aminosäuren wie z.B. ß-Alanin, γ-Aminobuttersäure, ί-Aminovaleriansäure und £-Aminocapronsäure. Venn optische Isomere für die mit R₁ bezeichneten Aminosäuren vorliegen, so können die Aminosäuren jedes einzelne der optischen Isomere oder jegliche razemische Verbindung bedeuten. Unter den mit R₁ bezeichneten Aminosäuren wird ß-Alanin für den beabsichtigten Zweck bevorzugt.

Die mit Rp bezeichneten, neutralen Aminosäuren weisen vorzugsweise 2 bis 10 C-Atome auf, Beispiele dafür sind Glycin, Alanin, ß-Alanin, Sarcosin, Serin, Prolin, Valin, Leucin, Isoleucin, Phenylalanin und Tyrosin.

Unter den mit R₂ bezeichneten Aminosäuren werden Glycin und Prolin für die erfindungsgemäße Verwendung bevorzugt. Bedeutet Rp einen Prolinrest, so wird der beabsichtigte Zweck erreicht, wenn R₁ Wasserstoff ist.

Die Aminosäuren, welche die Tyrosylpeptide oder deren Amide bedeuten können, weisen vorzugsweise 2 bis 10 C-Atome auf, Beispiele hiefür sind Glycin, Alanin, Serin, Treonin, \^ralin, Prolin, Leucin, Isoleucin, Lysin, Phenylalanin und Tyrosin. Diese Aminosäuren sind in jeder beliebigen Reihenfolge aneinandergefügt, um die aus 1 bis Aminosäureresten bestehenden Tyrosylpeptide oder deren Amide zu bilden. Nachstehend werden Beispiele für derartige Tyrosylpeptide angeführt, deren entsprechende Amide als Tyrosylpeptidamide bezeichnet werden können.

1) Tyr-Gly-OH

2) Tyr-Ala-Gly-OH

3) Tyr,Leu-Ala-Gly-OH

h) Tyr-Leu-Gly-Val-Ala-OH

5) Tyr-Thr-Pro-Ser-Phe-OH

6) Tyr-Thr-Pro-Lys-AIa-OH

7) Tyr-Thr-Pro-Lys-Thr-OH

8) Tyr-Ser-Pro-Arg-Gly-OH

509841/0973

9) T)T-Pro-Ile-OH

10) Tyr-Leu-Leu-Leu-OH

11) Tyr-Gly-Gly-Gly-Gly-OH

12) Tyr-Ala-Ala-Ala-Ala-OH

13) Tyr-Thr-Pro-Lys-OH

Unter den angeführten Aminosäuren und Tyrosylpeptiden und deren Amiden wird Tyr-NH_p für den Einsatz gemäß der Erfindung und für die industrielle Herstellung bevorzugt.

Bei den mit R„ bezeichneten oder die Gruppe R darstellenden Aminosäuren können in jenen Fällen, wo optische Isomere vorhanden sind, die Aminosäuren jedes einzelne der optischen Isomere und jedes mögliche razemische Gemisch bedeuten. Von den Aminosäureresten, welche die Polypeptide der Formel (i) darstellen, sind mit Ausnahme der mit R₁ bezeichneten in jenen Fällen, wo optische Isomere vorliegen, die L-Aminosäurereste -wegen ihrer geringeren Toxizität zu bevorzugen.

Nach dem erfindungsgemäßen Verfahren werden die Polypeptide der Formel (i) hergestellt, indem eine dem Rest R₁ entsprechende Aminosäure, ein Arginin, in welchem Π Wasserstoff bedeutet, ein Peptidfragment des Polypeptide der allgemeinen Formel (l), welches den mit R₁ bezeichneten Aminosäurerest aufweist, oder eine Arginylgruppe, wenn R₁ Wasserstoff an ihrer N-endständigen Aminosäure bedeutet, mit dem verbleibenden Fragment des Polypeptide der Formel (i) kondensiert wird, wobei die nicht für die Teilnahme an der beabsichtigten Kondensation bestimmten Amino- oder Carboxylgruppen der Ausgangsmaterialien geschützt und die für die Teilnahme an der beabsichtigten Kondensation bestimmten Amino- oder Carboxylgruppen aktiviert werden können und die gegebenenfalls vorhandenen Schutzgruppen aus dem entstandenen Produkt entfernt werden.

509841/0973

Die erfindungsgemäße Kondensation wird nach an sich bekannten und herkömmlichen Kondensationsverfahren zur Bildung von Peptidbindungen durchgeführt.

Die erfindungsgemäße Kondensation wird an jeder beliebigen Stelle der Bindungen in den Polypeptiden der Formel (i) durchgeführt, um die beabsichtigten Peptid- oder Amidbindungen zu erhalten. Für die industrielle Herstellung der Polypeptide der Formel (l) ist eine Kondensation zwischen der R₂ entsprechenden, dritten Aminosäurekomponente und der Phenylalanin entsprechenden, vierten Aminosäurekomponente vorzuziehen.

Die erfindungsgemäßen Polypeptide können wie die bekannten Polypeptidverbindungen aus Aminosäurematerialien, welche Bestandteile d?r als Endprodukt zu erzielenden Polypeptide sind, durch wiederholte Kondensationsreaktionen hergestellt werden. Im allgemeinen besteht der letzte Verfahrensschritt in der Kondensation zwischen zwei Komponenten, d.h. entweder einem Peptid und einer endständigen Aminosäure oder zwei Peptiden. Diese beiden Komponenten sind die Ausgangsstoffe des letzten Kondensationsverfahrensschrittes zur Herstellung des Produktes. Diese Ausgangsstoffe oder letzten Zwischenprodukte können nach jedem beliebigen, an sich bekannten Peptidherstellungsverfahren gewonnen werden.

Beispiele für Ausgangsstoffe in dem erfindungsgemäßen Verfahren sind Aminosäuren als solche, von N-endständigen Aminosäuren der Polypeptide der Formel (i) und Peptidfragmente, welche aus den N-endständigen Aminosäuren bestehen, an welche jede der Aminosäuren der Reihe nach entsprechend der Aminosäuresequenz der Polypeptide der Formel (i) gebunden sind. Zusammengehörige Ausgangsstoffe sind Rest-Fragmente des übrigen Polypeptides der Formel (i) mit Ausnahme der genannten Ausgangsmaterialien.

Kombinationen der Ausgangsstoffe und die dazu-

509841/0973

gehörigen Ausgangsmaterialien sind in der nachstehenden .Tabelle angeführt.

Tabelle 1:

Ausgangsmaterialien	R₁-OH	H-Arg-R₂-Phe-Phe-R₅
R₁-ArS-OH	H-R₂-Phe-Phe-R₃
R₁-ATg-R₂-OH	H-Phe-Phe-R₃
R₁-Arg-R₂-Phe-0H	H-Phe-R,
R₁-Arg-R₂-Phe-P.he-OH	H-R,
R₁-APg-R₂-PhB-PiIe-OH	H-TsTT-NH₂
R₁-APg-R₂-PiIe-PiIe-TYr-OH	NHv

Die erfindungsgemäße Kondensationsreaktion kann nach für die Herstellung von Peptidbindungen bekannten Verfahren durchgeführt werden. Zu diesen Verfahren gehört das DCC/HONE-Verfahren (EE-PS 796 399), das Azidverfahren, das Chloridverfahren, das Säureanhydridverfahren, das gemischte Säureanhydridverfahren, das DCC-Verfahren, das Aktivesterverfahren, das Verfahren unter Einsatz des Woodwar t-Reagens K, das Carbodximidazolverfahren, das Oxidationsreduktionsverfahren od.dgl. (The Peptides, Band l(l966), Schröder und Lubke, Academic Press, New York, U.S.A.).

Vor Durchführung der Kondensationsreaktion können die nicht für die Teilnahme an der Kondensationsreaktion bestimmten Carboxyl- und Aminogruppen nach an sich bekannten Verfahren geschützt und die für die Teilnahme an der Kondensation bestimmten Carboxyl- und/oder Aminogruppen nach an sich bekannten Verfahren aktiviert werden. Die nicht

509841/0973

für die Teilnahme an der beabsichtigten Reaktion bestimmten Carboxylgruppen in den Ausgangsmaterialien können in Form von Metallsalzen (z.B. Natrium- und Kaliumsalzen) oder Estern (z.B. Methyl-, Äthyl-, Benzyl-, p-Nitrobenz^fil-, tert.-Butyl- oder tert.-Amylestern) geschützt werden.

Als Schutzgruppen für die Aminogruppen der Ausgangsmaterialien sind alle bei der Peptidherstellung üblichen Schutzgruppen £ir Aminogruppen geeignet, wie z.B. Benzyloxycarbonyl, tert.-Butoxycarbonyl, tert.-AmyIoxycarbonyl, Isobornyloxycarbonyl, u.dgl. Diese Schutzgruppen können zum Schutz der Iminogruppen des Prolins eingesetzt werden. Die Imidazolgruppe des Histidine kann durch jede herkömmliche Gruppe, wie Benzyl, Tosyl, 2,4-Dinitrophenol, tert.-Butoxycarbonyl oder Carbobenzoxy geschützt werden. Die Hydroxylgruppe des Serins, Tyrosine oder Threonine kann durch jede herkömmliche Gruppe wie Benzyl, tert.-Butyl und andere ätherbildende Gruppen geschützt werden. Die Guanidinogruppe des Arginins kann durch Nitro, Tosyl, Carbobenzoxy, Isobornyloxycarbonyl oder Adamantyloxycarbonyl geschützt werden. Beispiele für aktivierte Carboxylgruppen in den Ausgangsstoffen sind die entsprechenden Säureanhydride, Azide, aktiven Ester mit Alkoholen, wie z.B. Pentachlorphenyl, 2,4,5-Trichlorphenol, 2,4-Dinitrophenol, Cyanomethyl, Alkohol, p-Nitrophenol, N-Hydroxy-5-norbomen-2,3-dicarboximid, N-Hydroxysuccinimid, N-Hydroxyphthalimid oder N-Hydroxybenztriazol od.dgl. Als Beispiele für die aktivierten Aminogruppen in den Ausgangsstoffen seien z.B. die entsprechenden Phosphorsäureamide genannt.

Aus der nachstehenden Tabelle sind Beispiele

für Kombinationen derartiger Formen von Carboxyl- und Aminogruppen in den Materialien (a) und (b) ersichtlich.

509841/0973

Tabelle

	COOH	Ausgangsstof f e	NH₂	(B)	COOH	NH₂
Kombinations-	frei aktiviert frei	(A)	geschützt geschützt geschützt	geschützt frei geschützt	frei frei aktiviert
beispiele

1* 2 3

Anmerkung: In dem mit Sternchen * bezeichneten Fall liegt im Reaktionssystem vorzugsweise ein Dehydratisierungsmittel wie z.B. ein Carbodiimidreagens wie Dicyclohexylcarbodiimid vor.

Die erfindungsgemäße Kondensation kann in Gegenwart eines Lösungsmittels durchgeführt werden. Das Lösungsmittel kann jedes beliebige, für die Verwendung in Peptidkondensationsreaktionen geeignete sein. Als Beispiele seien wasserfreies oder wässeriges Dimethylformamid, Dimethylsulfoxid, Pyridin, Chloroform, Dioxan, Dichlormethan, Tetrahydrofuran genannt, auch Mischungen dieser Stoffe können eingesetzt werden.

Die Reaktionstemperatur liegt innerhalb eines Bereiches, welcher für Reaktionen zur Bildung von Peptidbindungen geeignet ist, gewöhnlich zwischen etwa -20°C und etwa 30 C. Auch können die Vormaterialien (geschützten Peptide) der erfindungsgemäß herzustellenden Verbindungen leicht nach Festphaseverfahren hergestellt werden.

Nach Beendigung der Kondensationsreaktion werden die gegebenenfalls vorhandenen Schutzgruppen nach an sich bekannten Verfahren entfernt. Beispiele für derartige Verfahren sind katalytische Reduktion in Gegenwart eines Ka ta-

509841/0973

lysators vie Palladiumschwarz, Palladium auf Kohle, Platin od.dgl., Solvolyse mittels Fluorwasserstoff, Trifluoressigsäure od.dgl., und Reduktion mit metallischem Natrium in flüssigem Ammoniak.

Die so hergestellten Peptide der allgemeinen Formel (i) können aus dem Reaktionsproduktengemisch nach an sich für diesen Zweck bekannten Verfahren wie z.B. Extraktion, Verteilung, Säulenchromatographie od.dgl. gewonnen werden.

Die erfindungsgemäße Reaktion kann nach jedem an sich bekannten, herkömmlichen Festphaseverfahren durchgeführt we rden.

Die Polypeptide der allgemeinen Formel (i) können auch in Form von Salzen oder metallischen Komplexverbindungen gewonnen werden.

Als Beispiele für Säuren, welche für die Bildung von Salzen mit den Polypeptiden der allgemeinen Formel (l) geeignet sind, seien anorganische Säuren wie Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Perchlorsäure, Salpetersäure, Rhodanwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, od.dgl., und organische Säuren wie Ameisensäure, Essigsäure, Propionsäure, Glykolsäure, Milchsäure, Brenztraubensäure, Oxalsäure, Malonsäure, Zitronensäure, Bernsteinsäure, Maleinsäure, Fumarsäure, Anthranilsäure, Zimtsäure, Naphthalinsulfonsäure oder Sulfanylsäure genannt.

Metalle, welche mit den Polypeptiden der allgemeinen Formel (i) metallische Komplexverbindungen bilden können, sind z.B. Zink, Nickel, Kobalt, Kupfer und Eisen. Die metallischen Komplexverbindungen können nach herkömmlichen Verfahren wie z.B. durch Umsetzung der Polypeptide der allgemeinen Formel (i) mit dem Hydroxid oder Oxid eines der vorstehend angeführten Metalle bei einem pH-Wert von etwa 6-8 hergestellt werden.

509841/0973

Die erfindungsgemäßen Polypeptide der allgemeinen Formel (i) besitzen die Wirkung, bei parenteraler oder peroraler Verabreichung einen hohen Glukosegehalt in Blut und Harn auf einen normalen Grad herabzusetzen. Ihre besondere Eigenschaft besteht darin, daß sie einen normalen Gehalt an Glukose in Blut und Harn nicht herabsetzen, wodurch sie dem Insulin, das Hypoglykämie verursacht, weit überlegen sind· Die Polypeptide der allgemeinen Formel (i) sind von geringer Toxizität und können gefahrlos verabreicht werden, sie sind wirksam bei der Förderung des Lipidstoffwechseis. Aufgrund dieser spezifischen Eigenschaften sind die Polypeptide der allgemeinen Formel (i) besonders gut für die Behandlung von Menschen und Tieren, wie Ratten und Mäusen, gegen Insuffizienz des Kohlehydrat- und LipidstoffWechsels, insbesondere für die Behandlung von Diabetes oder Hypercholestiämie ohne unerwünschte Nebenwirkungen geeignet. Die Polypeptide der allgemeinen Formel (l) können so, wie sie sind, oder in jeder beliebigen pharmazeutischen Form wie Tabletten, Pellets, Granulaten, Pulvern, Flüssigkeiten oder Injektionen, die nach an sich bekannten Verfahren hergestellt wurden, verabreicht werden.

Nachstehend werden Beispiele für Rezepturen pharmazeutischer Kompositionen gegeben:

In .i ek t ionen: Polypeptid der Formel (i)

ß-Ala-L-Arg-L-Pro-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-NH₂-Diacetat 50 mg physiologische Salzlösung 2,0 ml

Pulvert

Polypeptid der Formel (i)

ß-Ala-L-Arg-Gly-L-Phe~L-Phe-L-Tyr-NH₂~Dieitrat 30 mg Stärke 200 mg

Obgleich die tägliche Dosierungsmenge des Polypeptide der allgemeinen Formel (i) von Art und Grad der

509841/0973

Krankheit, dem Alter des Wirtes, u.dgl. abhängt, liegt sie gewöhnlich innerhalb eines Bereiches von etwa 50 ng bis etwa 100 mg/pro Kilogramm Körpergewicht.

Pharmakologischer Versuch auf Behandlung von Diabetes mit Polypeptiden der allgemeinen Formel (l);

8 Wochen alte, genetisch von Diabetes befallene, weibliche Mäuse (stamm KKA oder gelber KK) wurden einzeln in Metallkäfigen gehalten, um ihren Harn zu sammeln. Drei Gruppen dieser Mäuse wurden Polypeptide der allgemeinen Formel (i) ß-Ala-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-N^ (Verbindung a) in drei verschiedenen Dosierungsmengen peroral verabreicht (l, 10, 100 mg/kg/Tag). Die Behandlungsmethode ist aus Tabelle 3 ersichtlich. Den Kontrollgruppen wurde Salzlösung verabreicht. Alle 4 Tage wurde die Plasma- und Harnglukose nach dem Glukoseoxidaseverfahren (Huggett, A.St. G und Nixon, D.A., "Lamcet" Band II, Seiten 368-370(1957)) bestimmt.

Die Ergebnisse sind aus Tabelle 3 ersichtlich. In der Kontrollgruppe waren der Plasmaglukosespiegel und jener der innerhalb von 2.h Stunden abgeschiedenen Harnglukose während der gesamten Dauer des Versuches sehr hoch. Im Gegensatz dazu nahmen der Plasmaglukose- und Harnglukosespiegel der mit den Polypeptiden behandelten Gruppen während der Behandlung allmählich ab. Bei der antidiabetischen Wirkung konnte eine Abhängigkeit von der Dosierungsmenge beobachtet werden. Während der Nachbehandlungsphase stiegen beide Glukosespiegel in den drei behandelten Gruppen an. Eine Abhängigkeit von der Dosierungsmenge konnte jedoch im Andauern der antidiabetischen Wirkung nach Entzug beobachtet werden.

Aus diesen Erkenntnissen kann geschlossen werden, daß der Zustand der von Diabetes befallenen Mäuse durch

509841/0973

die Behandlung mit Polypeptiden verbessert wurde. Behandlungs s chema:

O k 8 12 16 20 Tage

I ϊ S ϊ i i

iZeitraum der Behandlung) ^-—^_ Zeitraum nach Behandlung^

PG: Plasmaglukose (mg/100 ml) UG: Harnglukose (g/Tag) * bedeutend gegenüber der mit Salzlösung behandelten

Gruppe (p ■< 0,05)

** bedeutend gegenüber der mit Salzlösung behandelten Gruppe (p < 0,0l)

509841/0973

Tabelle 3t

tn O CO 00

Medi
kament

Anzahl
der
Mäuse

Vo rb ehandlung

UG

«
medikamentöse
Behandlung (Tag)

PG

UG

PG

UG

Nachbehandlung (Tag)

PG

UG

PG

UG

PG

UG

Salzlö
sung

5

PG

O.56O±
0.072

h. 8.

483±
35

0.484±
0.051

528±
45

O.635±
0.072

12. 16. 20.

497+
76

0.557+
0.152

447+
22

O.462±
0.070

513+
53

0.486+
0.U52

Verb. A
mg/kg/Tag

5

445±39

O.595±
0.081

352+
36

0.299±
0.092

343±
17**

O.213±
0.079**

37O±
40

0.190+
0.010

469+
22

0.4Sl±
0.091

523+
58

0.450+
0.056

Verb.* A
10 mg/kg/
Tag

3

457±43

0.5711
0.075

433+
73

0.16ü±
0.061**

338±
35*

0.0786±
Ο.Ο346*·^;

354+
25

0.0358+
0.0472*

-3-96±
7

0.233+
0.099

513+
101

0.478+
0.022

Verb. A
100 mg/kg/
Tag

5

458+43

0.582±
0.068

344±
27*

0.0743±
0.0279**

254±
41**

O.O446±
0.0200**

2321
19* x-

0.0466+
0.0220*

339+
44

0.0750+
0.0188**

4571
51

0.250+
ü.ovj**

455+14

CO O cn

In allen folgenden Ausführungsbeispielen weisen in allen Fällen, in welchen in bezug auf die Aminosäuren optische Isomere vorhanden sind, die Aminosäuren, wenn nicht ausdrücklich anders angeführt, die L-Konfiguration auf,

Beispiel 1

Herstellung von Arg-Pro-Phe-Phe-TVr-NH₂

a) Herstellung von Z-Arg(N0₂)-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂

In 50 ml DMP (Dimethylformamid) wurden 10,0 g Z-Phe-Phe-Tyr-NH₂ gelöst, dann wurde unter Verwendung von Palladiumschwarz als Katalysator innerhalb von 10 Stunden die katalytische Reduktion durchgeführt. Der Katalysator wurde abfiltriert, während des Kühlens des Filtrates mit Eis wurden 7,37 g Z-Arg(N0₂)-Pro-0H und 3,53 g HONB zugegeben.

Dann wurden 4,06 g DCC zugegeben und das Gemisch wurde 16 Stunden lang gerührt. Der entstandene DC(Dicyclohexyl-) harnstoff wurde abfiltriert und da,s DtIF bei vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde mit 200 ml Äthylacetat versetzt und das entstandene Pulver abfiltriert und durch nochmaliges Ausfällen aus DKF-Methanol-Wasser gereinigt. Die Ausbeute betrug 14,5 g (95,6 <fo) FP: lOO-^^j^pöJ^⁴- 29,7° (c=O,55 %, DMF).

Elem_wentaranalyse:	für	6,	^G46^H	54°1	1	Ί	0*
berechnet C 59,73 ;	H	6,	10;	N	1	5	,11
gefunden C 59,51 ;	H	06 ;	N	4	,90

b) Herstellung von Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂

In 30 ml Essigsäure wurden 500 mg Z-Arg(N0₂)-Pro-Phe-Phe Tyr-NH₂ gelöst, dann wurde innerhalb von 20 Stunden unter Verwendung von Palladiumschwarz als Katalysator katalytisch

509841/0973

reduziert. Der Katalysator wurde abfiltriert und das Filtrat bei vermindertem Druck zur Trockene eingeengt. Der Rückstand wurde in 50 ml Wasser gelöst und das Filtrat nach Abfiltrieren der geringen Menge unlöslicher Substanzen lyophilisert. Das
Produkt wurde in 5 ml Wasser gelöst und die Lösung über eine mit Carbomethyl-Sephadex gefüllte Kolonne (1,8 χ 9 cm)
geleitet. Die Elution nach dem Gradientenverfahren wurde mit 0,1M wässerigem Ammoniumacetat (400 ml) und 1M wässerigem
Anuoniumaeetat (400 ml) vorgenommen. Die Fraktionen 250 bis
370 ml wurden gesammelt und lyophilisiert, man erhielt ein
weißes, flaumiges Produkt mit einer Ausbeute von 250 mg
(52,3 1o) .
£*j\ -41,9° (c=0,47 i» Wasser)

Aminosäureanalyse (Hydrolyse mit HCl): Arg 1,00; Pro 1,05; Tyr 0,91; Phe 1,96; (Peptidgehalt 86,5 ^)

Elementaranalyse für ^C38^H49^O6^N9 * 2C₂H^O₂ * 2H₂O

berechnet C 57,06; H 6,96; N 14,26 gefunden C 56,76; H 6,98; S 14,28

Beispiel 2

Herstellung von Gly-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-HHg

a) Herstellung von Z-Gly-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-NHr,

In 30 ml Essigsäure wurden 800 mg Z-Arg(NO₂)-Pro-Phe-Phe-Tyr-FH₂ gelöst, dann wurde innerhalb von 8 Stunden unter Einsatz von Palladiumschwarz als Katalysator katalytisch
reduziert. Der Katalysator wurde abfiltriert und das filtrat bei vermindertem Druck zur Trockene eingeengt, der Rückstand in 20 ml Wasser gelöst und lyophilisiert.

Das entstandene Pulver wurde in 10 ml DMF gelöst und
mit 147 g p-Toluolsulfonsäuremonohydrat versetzt. Dem Ge-

509841 /0973

misch wurden 349 mg Z-GIy-ONB zugegeben und es wurde 10 Stunden lang gerührt. Das DMP wurde darauf bei vermindertem Druck abdestilliert und 50 ml Äthylacetat wurden zugegeben. Das entstandene Pulver wurde abfiltriert, Ausbeute: 858 mg (89,5 %) . Pp: 119-121⁰C; /Pl/^- 26,7° (c=0,96 <fo_t DMP) .

Elementaranalyse für ^C48^H58°9^N10 · ^C7^H8°3^S · ^H2° berechnet C 59,55» H 6,18; N 12,63; S 2,89 gefunden C 59,45; H 6,08; N 12,37; S 2,76

b) Herstellung von Gly-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂

In 30 ml Essigsäure wurden 500 mg Z-Gly-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-lH^-p-toluolsulfonat gelöst, die katalytische Reduktion wurde innerhalb von 5 Stunden unter Verwendung von Palladiumschwarz als Katalysator durchgeführt. Der Katalysator wurde abfiltriert und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde in 20 ml Wasser gelöst und die Lösung einer Ionenaustauscherchromatographie an einer Kolonne Amberlite IRA 410 (Acetatform) von Rohm & Haas Co.Ltd«, USA, stark basisches Austauscherharz, unterworfen. Das Eluat wurde lyophilisiert und das entstandene Pulver in 5 ml Wasser gelöst. Die Lösung wurde über eine mit Carboxymethylzellulose gefüllte Kolonne (2,6'x 23 cm) geleitet und die Elution wurde nach dem Gradientenverfahren unter Verwendung von 0,005M bis 0,2M wässerigem Ammoniumacetat (je 700 ml) durchgeführt. Die Fraktionen von 840 ml bis 970 ml wurden gesammelt und lyophilisiert. Ausbeute: 270 mg (63,6 %) ; /jtj^- 62,0° (c=0,46 io Wasser) .

Elementaranalyse für ^CAO^H52°7^iT1O * ^2C2^H4°2 · ^2H2° berechnet C 56,15; H 6,86; N H 89 gefunden C 55,99; H 6,92; N 14,77

509841/0973

Aminosäureanalyse:

Arg 0,94; Pro 1,06; GIy 1,00; Tyr 0,94; Phe 2,03 (Peptidgehalt: 83,2 <fo) .

Beispiel 3

ifc-Abu-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-MI?

Das in Beispiel 2 beschriebene Verfahren wurde wiederholt, jedoch wurde an-statt Z-GIy-OIiB Z-f-Abu-ONB eingesetzt, und es wurden 324 g der oben angeführten Verbindung erhalten, ²- 58.7° (c=0,45 i Wasser) .

Elementaranalyse für ^ca2^H56°7^N10* ^2C2^H4°2

berechnet	C	55,	97;	H	7	,15;	N	14,	19
gefunden	C	56,	H;	H	7	,36;	N	13,	92

Aminosäureanalyse:

Arg 1,00; Pro 1,08; Tyr 0,97; Phe 2,13 (Peptidgehalt: 80,8 #) .

Beispiel 4

e-Acap-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-lTHg

a) Herstellung von Z-6-Acap-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-M₂

In 10 ml DMF wurden 250 mg Ζ-ε-Acap-OH gelöst, und dann unter Eiskühlung 186 mg HONB und 214 mg DCC zugegeben. Das Gemisch wurde 16 Stunden lang gerührt und der entstandene DC-Harnstoff abfiltriert. Das Filtrat wurde zu einer DMF-Lösung von H-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-M^-p-toluolsulfonat zugegeben, welche wie in Beispiel 2-a) angeführt hergestellt worden war. Das Gemisch wurde 12 Stunden lang gerührt und das DMF bei vermindertem Druck abdestilliert. Dem Rückstand wurden 30 ml Äthylacetat zugegeben und das entstandene Pulver wurde abfiltriert. Ausbeute: 810 mg (79,1 #) . Pp: 90-92⁰C; ²^- 50,3° (c=1,07 fo DlTF) .

509841 /0373

Elementaranalyse für ^C52^H66°9^W10' ^C7^H8°3^S · ^2H2°
berechnet C 59,88; H 6,65; N 11,84; S 2,80 gefunden C 59,81; H 6,75; N 11,80; S 3,00

b) Herstellung des S-Acap-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-NE^

500 mg des gemäß a) hergestellten Z-Derivats wurden wie in Beispiel 2-b) beschrieben behandelt, und 316 mg der oben angeführten Verbindung erhalten» £°<l7t) 58,9° (c=O,55 $ Wasser)

Aminosäureanalysfc:

Arg 1,02; Pro 1,03; Tyr 0,92; Phe 2,13; € -Acap (nicht bestimmt). Peptidgehalt 81,5 #,
Beispiel 5

Lys-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-KH₂

a) Herstellung von di-Z-Lys-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-:NH₂

Das in Beispiel 4-a) beschriebene Verfahren wurde wiederholt, jedoch wurden anstelle des Ζ-ε-Acap-OH 390 mg di-Z-Lys-OH verwendet, und 932 mg der oben angeführten Verbindung erhalten. Pp: 1O3-1O5°C; /AJ^'- 28,5° (c=1,04 $> DMP).

Elementaranalyse für Cg₀H₇^O₁₁N₁₁ . C^HgO^S , ²H₂O

berechnet . C 60,39; H 6,43; N 11,56; S 2,41 gefunden C 60,64; H 6,21; N 11,79; S 2,82

b) Herstellung von Lys-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂

500 mg des gemäß a) hergestellten Di-Z-Derivates wurden wie in Beispiel 2-b) beschrieben behandelt, und 336 mg der oben angeführten Verbindung erhalten. /^7^³- 52,6° (c=0,57 % Wasser) .

Aminosäureanalyse:

Lys 1,02; Arg 0,98; Pro 1,00; Tyr 0,94; Phe 2,04 (Peptidgehalt: 91 $) .

509841/0973

Beispiel 6 οί, jf-Dab-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-NHp

Die in den Beispielen 4 und 5 "beschriebenen Verfahren wurden genau wiederholt, und aus 535 mg Di-Z-ct, |f-Dab-dicyclohexylaminsalz die oben angeführte Verbindung mit einer Ausbeute von 325 mg erhalten.
ßtJ²^ - 58,2° (c=0,50 io Wasser) .

Aminosäureanalyse:

ri,f-Dab 1,00; Arg 0,98; Pro 1,00; Tyr 0,87; Phe 1,96 (Peptidgehalt: 84,2 <f₀)

Beispiel 7

ß-Ala-Arg-pro-Phe-Phe-Tyr-KH₂

a) Herstellung von Z-ß-Ala-Arg(N0₂)-Pro-0Me

3,50 g Z-Arg(NOp)-Pro-OMe wurden mit 35 ml 25-$iger HBr-Essigsäure versetzt, die Mischung wurde 35 min lang bei Raumtemperatur geschüttelt. Diesem Gemisch wurden 300 ml Äthyläther zugegeben, der entstandene Niederschlag wurde abfiltrierii, mit Äther gewaschen und getrocknet.

Das erhaltene Pulver wurde in 20 ml DMF gelöst und die Lösung unter Eiskühlung mit Triäthylamin neutralisiert. Nach Zugabe von 2,9 g Z-ß-Ala-ONB wurde das Gemisch 16 Stunden lang gerührt.

Das DMP wurde bei vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand in 300 ml Äthylacetat gelöst. Die lösung wurde dreimal mit je 100 ml 4 $igem, wässrigem Natriumbicarbonat, dann mit Wasser gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde bei vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand mit Äthylä-ther versetzt. Das entstandene Pulver wurde abfiltriert; Ausbeute: 3,05 g (74,3$); Pp: 62-65⁰C; JpJ^- 34,1° (c=1,04# DMF)

509841/0973

Elementaranalyse für ^c23^H33°8^li7 · 2 ^H2°

"berechnet	G	50	,73;	H	6	,29;	N	18	,01
gefunden	C	50	,98;	H	6	,36;	N	17	,72

b) Herstellung von Z-ß-Ala-Arg(NO₂)-Pro-OH

In 30 ml Aceton wurden 2,32 g Z-ß-Ala-Arg(NO₂)-Pro-OMe gelöst und unter Eiskühlung mit 10,7 ml 1N wässrigem Natriumhydroxid versetzt. Das Gemisch wurde bei Raumtemperatur 2 Stunden lang gerührt und nach Neutralisieren mit 11 ml 1N Salzsäure bei vermindertem Druck das Aceton abdestilliert. Dem öligen Rückstand wurden 30 ml kaltes Wasser zugegeben und das V/asser wurde dekantiert. Der Rückstand wurde einmal mit kaltem Wasser gewaschen und getrocknet, dann der Chromatographie an einer mit Silikagel (90 g) gefüllten Kolonne unterworfen, als Entwicklerlösung wurde Äthylacetat-Pyridin-Essigsäure-Wasser (60 : 20 : 6 : 11) eingesetzt. Die Fraktionen mit einem hohen Gehalt an der gewünschten Verbindung wurden gesammelt und bei vermindertem Druck zur Trockene eingeengt, der Rückstand wurde mit Äther gewaschen und abfiltriert,

°C; ßtJ^275°

Ausbeute: 2,62 g ; Pp: 65-67°C; ßtJ^- 27,5° (0=1,07 $ DMF).

Elementaranalyse für ^C22^H31°8^7 berechnet C 50,66; H 5,99; N 18,80 gefunden C 50,41; H 6,19; N 18,58

c) Herstellung von Z-ß-Ala-Arg(NO₂)-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂

In 15 ml DMF wurden 1,50 g Z-Phe-Phe-Tyr-NH₂ gelöst, dann wurde innerhalb von 4 Stunden die katalytische Reduktion unter Einsatz von Palladiumschwarz als Katalysator vorgenommen, Der Katalysator wurde abfiltriert und während der Eiskühlung des Filtrats wurden 1,21 g Z-ß-Ala-Arg(NO₂)-Pro-OH , 0,53 g von HONB und 0,61 g von DCC zugegeben. Das Gemisch wurde 18 Stunden lang gerührt. Der entstandene DC-Harnstoff wurde

509841 /0973

abfiltriert und das DMP "bei vermindertem Druck abgedampft, der Rückstand mit 50 ml Wasser versetzt und das entstandene Pulver abfiltriert und getrocknet. Nach erneutem Ausfällen des Pulvers aus DMP-Äthylacetat erhielt man 1,99 g Produkt

⁰C; /AJ^ 331°

(Ausbeute: 80,9 %)', Fp: 135-138⁰C; /AJ^- 33,1° (c=0,9 f DMP) Elementaranalyse für C.qHcqO^-1K₁ ^ . H₂O

berechnet C 59,08; H 6,17; N 15,47 gefunden C 58,93; H 6,18; N 15,02

d) Herstellung von ß-Ala-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-NHp

In 40 ml Eisessig wurden 1,50 g Z-ß-Ala-Arg(NO₂)-Pro-Phe-Phe-Tyr-M₂ gelöst und darauf wurde innerhalb von 8 Stunden die katalytisch^ Reduktion unter Verwendung von Palladiumschwarz als Katalysator durchgeführt. Der Katalysator wurde abfiltriert und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert.

Der Rückstand wurde in 50 ml Wasser gelöst und die kleine Menge an unlöslichen Substanzen abfiltriert, das Piltrat lyophilisiert. Das Produkt wurde in 20 ml Wasser gelöst und über eine mit Carboxymethylzellulose gefüllte Kolonne (3,0 χ 28cm) geleitet, die Elution wurde nach dem G-radientenverfahren mit je 1,5 ml 0,005Mbis 0,2M wässrigem Ammoniumacetat vorgenommen, darnach die Fraktionen von 1490 ml bis 1840 ml gesammelt und lyophilisiert, Ausbeute: 980 mg (65,7 $) , Z^7^²- 59,1° (c=0,52 /₀ Wasser).

Elementaranalyse für C,.,Hc/O^N-j₀ , 2C₂H,0₂ . 4H₂O

berechnet C 54,53; H 7,12; N 14,13 gefunden C 54,34; H 6,98; N 13,98

Aminosäureanalyse:

Arg 1,00; Pro 1,11; Tyr 1,00; Phe 2,11; ß-Ala 0,94 (Peptidgehalt: 75,7$).

509841/0973

ITach der in c) und d) "beschriebenen Vorgangsweise kann die erwünschte Verbindung gemäß dem nachstehenden Reaktionsschema hergestellt werden

Z-ß-Ala-Arg(NO₂)-Pro-Phe-0H+H-Phe-Tyr-NH₂

ΗΟΪΙΒ/DGC Z-ß-Ala-ArgCNO^-Pro-Phe-Phe-Tyr-M^

H₂/Pd or HF ß-Ala-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-Mi₂ 2) Z-ß-Ala-Arg(NO₂ )-Pro-Phe-Phe-OH+H-Tyr-M^

{ ΗΟίίΒ/DCC

Z-ß-Ala-Arg( NO₂ )-Pro-Phe-Phe-Tyr-?TFIp

H₂/Pd oder H?

ß-Ala-Arg-Pro-Phe-Phe-TyP-IiH₂

3) Z-ß-Ala-Arg-0H+H-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂

Z-ß-Ala-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-iiH₂

H₂/Pd ß-Ala-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-!TH₂

509841/0973

Beispiel 8

ß-Ala-Arg-Pro-Phe-Phe-HHp

Das in Beispiel 7-c) beschriebene Verfahren wurde wiederholt, jedoch wurde Z-Phe-Phe-Tyr-NHp durch Z-Phe-Phe-EI^ ersetzt, Nach den in den Beispielen 7-c) und 7-d) beschriebenen Verfahren wurden 1,24 g der oben angeführten Verbindung in Form eines weißen, flaumigen Produktes erhalten. /A7^ - 48,6° (c=0,42 j6 V/asser) .

Aminosäureanalyse:

Arg 1,08; Pro 1,00; Phe 1,98; ß-Ala 0,97 (Peptidgehalt 82,6 %) .

Beispiel 9

ß-Ala-Arg-ß-Ala-Phe-Phe-TyT-HH₂

a) Herstellung von Z-ß-Ala-Phe-Phe-Tyr-KH₂

In 40 ml DMP wurden 2,00 g Z-Phe-Phe-Tyr-KHo gelöst und die katalytisch^ Reduktion wurde innerhalb von 5 Stunden unter Einsatz von Palladiumschwarz als Katalysator durchgeführt, dann der Katalysator abfiltriert und das Filtrat mit 1,39 g Z-ß-Ala-OKB versetzt. Das Gemisch wurde 9 Stunden lang gerührt und das DMF bei vermindertem Druck abdestilliert, der Rückstand mit 50 ml Wasser versetzt und das entstandene Pulver abfiltriert und getrocknet. Nach erneutem Ausfällen des Produktes aus DMF-Ä thy lace tat, Ausbeute: 2,02 g (88,0 fo); Fp: 232⁰C; /PJ²^- 23,4° (c=0,94 ?S DMF) .

Elementaranalyse: für ^c-5r^H41 °7^N5 · ^H2^

berechnet C 65,41; H 6,21; N 10,04 gefunden C 65,18; H 6,20; N 10,32

509841/0973

b) Herstellung von Z-Arg(N0)₂-ß-Ala-Phe-Phe-Tyr-NH₂

In 30 ml DMF wurden 1,0 g Z-ß-Ala-Phe-Phe-Tyr-NH₂ gelöst, dann wurde innerhalb von 6 Stunden die katalytische Reduktion unter Einsatz von Palladiumschwarz als Katalysator vorgenommen und darauf der Katalysator abfiltriert. Dem Piltrat wurde eine Lösung von Z-Arg(KOg)-ODNP in Tetrahydrofuran ( dem Dinitrophenylester, der aus 0,52 g Z-Arg(NO₂)-OH und 0,30 g 2,4-Dinitrophenol hergestellt worden war), in 10 ml Tetrahydrofuran nach dem DGC-Verfahren zugegeben. Das Gemisch wurde 13 Stunden lang gerührt und das Lösungsmittel abdestilliert, der Rückstand mit 50 ml V/asser versetzt und das entstandene Pulver abfiltriert und getrocknet. Ausbeute: 1,01 g (74,9 #); ?p: 192-194⁰C; ßj²^- 11,1° (c=1,02 96 DMP).

Elementaranalyse für

berechnet C 57,63; H 6,16; N 15,28 gefunden C 57,63; H 5,93; N 15,61

c) Herstellung von Z-ß-Ala-Arg(N0₂)-ß-Ala-Phe-Phe-Tyr-NH₂

700 mg Z-Arg(NO₂)-ß-Ala-Phe-Phe-Tyr-NH₂ wurden zuerst mit 0,2 ml Anisol und darauf mit 7 ml 25 $iger HBr-Essigsäure versetzt. Das Gemisch wurde 40 min lang bei Raumtemperatur geschüttelt und mit 100 ml Äthyläther versetzt, der entstandene Niederschlag abfiltriert und mit Äthyläther gewaschen. Nach gründlichem Trocknen wurde der Niederschlag in 10 ml DMP gelöst und die Lösung unter Eiskühlung mit Triäthylamin neutralisiert und dann nach Zugabe von 336 mg Z-ß-Ala-ONB 18 Stunden lang gerührt. Das DMP wurde bei vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand mit 50 ml Wasser versetzt, der entstandene Niederschlag abfiltriert, getrocknet und aus DMP und Äthylacetat nochmals ausgefällt, Ausbeute: 560 mg (73 #) ; Pp: 200 - 202⁰C (Zersetzung) ; ^" 7,3° (c=0,91 1° DMP).

50984 1/0 97 3

Elementaranalyse für C₄₇H₅₇O₁₁N₁-I . H₂O

berechnet G 58,19; H 6,13; N 15,89 gefunden C 58,06; H 6,41; N 15,57

d) Herstellung von ß-Ala-Arg-ß-Ala-Phe-Phe-Tyr-NHp

In 30 ml Eisessig wurden 400 mg Z-ß-Ala-Arg(NO₂)-ß-Ala-Phe-Phe-Tyr-NH₂ gelöst, dann wurde innerhalb von 8 Stunden die katalytische Reduktion unter Einsatz von Palladiumschwarz als Katalysator durchgeführt, der Katalysator abfiltriert und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert, der Rückstand in 5 ml Wasser gelöst und die Lösung über eine mit Carboxymethylzellulose gefüllte Kolonne (2,6 χ 22 cm) geleitet. Die Elution wurde nach dem G-radientenverfahren unter Verwendung von je 700 ml 0,005M und 0,2M wässerigen Ammoniumacetatlösungen vorgenommen, die Fraktionen von 720 bis 870 ml wurden gesammelt und lyophilisiert, Ausbeute: 270 mg (69,1 ?°) i weißes, flaumiges Produkt. ßÜ^- ¹7,2° (c=O,53 % Wasser) .

Elementaranalyse für C^gH₅₂O₇N₁₀. 2C₂H^O₂. 3H₂O

berechnet C 54,53;	H	7	,03;	N	14	,79
gefunden C 54,52;	H	6	,96;	N	15	,00
Aminosäureanalyse:

Arg 1,00; Tyr 1,00; Phe 2,03; ß-Ala 2,14 (Peptidgehalt 79,0 %) .

Beispiel 10
Ala-Arg-ß-Ala-Phe-Phe-Tyr-NH₂

In dem in Beispiel 9-e) beschriebenen Verfahren wurde das Z-ß-Ala-ONB durch 340 mg Z-AIa-ONB ersetzt und die in den Beispielen 9-c) bzw. 9-d) beschriebenen Verfahren wurden wiederholt. Es wurden 297 mg der oben angeführten Verbindung in Form eines weißen, flaumigen Produktes erhalten.

609841 /0973

j^⁴- 18,9° (c=0,62 <fo V/asser)
Aminosäureanalyse:

Arg 1,02; Ala 1,04; Tyr 0,97; Phe 2,00; ß-Ala 0,97 (Peptidgehalt 81,0 ^).

Beispiel 11

ß-Ala-Arg-Sar-Phe-Phe-Tyr-NH₂

a) Herstellung des Z-Sar-Phe-Phe-Tyr-NH₂

In 30 ml DMP wurden 2,02 g Z-Phe-Phe-Tyr-NH₂ gelöst, dann wurde innerhalb von 5 Stunden die katalytische Reduktion unter Einsatz von Palladiumschwarz als Katalysator vorgenommen, der Katalysator abfiltriert und das Piltrat gekühlt. Anderseits wurden 810 mg Z-Sar-OH in 10 ml Tetrahydrofuran gelöst und darauf mit 0,71 g HONB versetzt. Das Gemisch wurde auf O⁰C gekühlt, mit 0,82 g DCC versetzt und 3 Stunden lang gerührt, der entstandene Harnstoff abfiltriert und das Piltrat der oben angeführten DMP-Lösung zugegeben, darauf 20 Stunden lang gerührt. Dann wurde das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand mit 50 ml Wasser versetzt. Schließlich erfolgte erneutes Ausfällen des abfiltrierten entstandenen Pulvers aus Di-IP-Äthylacetat, Ausbeute: 1,90 g (83,8 $) ; Pp: 246-248⁰C (Zersetz-ung) ;' /PJ²Q- 9,7° (c=1,07 i° DMP) .

Elementaranalyse für C₅₈H₄₁ OyNc , TjH₂O

berechnet C 66,26; H 6,15; N 10,17 gefunden C 66,32; H 6,39; N 10,52

b) Herstellung des Z-Arg(N0₂)-Sar-Phe-Phe-Tyr-NH₂

In 10 ml DMP wurden 1,0g Z-Sar-Phe-Phe-Tyr-KH₂ gelöst und die katalytische Reduktion wurde innerhalb von 7 Stunden unter Verwendung von Palladiumschwarz als

S09841/0973

Katalysator vorgenommen, der Katalysator abfiltriert und das FiItrat gekühlt. Anderseits wurden 0,52 g Z-Arg(NOp)-OH in 10 ml Tetrahydrofuran gelöst und unter Eiskühlung mit 0,3 g 2,4-Dinitrophenol und 0,33 g DCC versetzt, das Gemisch wurde dann 3 Stunden lang gerührt, der entstandene DC-Harnstoff a"bfiltriert und das Filtrat der oben angeführten DMF-Lösung zugegeben, das Gemisch 20 Stunden lang gerührt und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde mit 50 ml Wasser versetzt und das entstandene Pulver abfiltriert, getrocknet und aus DMF-Äthylacetat-Äthyläther erneut ausgefällt, Ausbeute: 1,04 g (77,2 </o) ; Fp-. 96-98⁰C; Z^7^³-7,3° (c=1,06# DMF).

Elementaranalyse für ^<"A/fi^2®'\Q®'\0 ' ^2® berechnet C 57,63; H 6,16; N 15,28 gefunden C 57,60; H 6,10; N 15,01

c) Herstellung von Z-ß-Ala-Arg(N0₂)~Sar-Phe-Phe-Tyr-NH₂

In 7 ml 25 ^iger HBr-Essigsäure wurden 700 mg Z-Arg(N0₂)-Sar-Phe-?he-Tyr-NH₂ und 0,2 ml Anisol gelöst und die Lösung wurde 40 min lang bei Raumtemperatur geschüttelt. Dieses Reaktionsgemisch wurde mit 100 ml Äthyläther versetzt und der entstandene Niederschlag abfiltriert, - mit Äther gewaschen und über Natriumhydroxidpellets 2 Stunden lang getrocknet.

Der getrocknete Niederschlag wurde in 10 ml DMF gelöst und die Lösung unter Eiskühlung mit Triäthylamin neutralisiert, mit 336 mg Z-ß-Ala-ONB versetzt und 20 Stunden lang gerührt. Diesem Vorgang folgte Abdestillieren des DMF bei vermindertem Druck und Zugabe von 50 ml Wasser, Abfiltrieren des ent- * standenen Pulvers, Trocknen und erneutes Ausfällen desselben aus DMF-Äthylacetat. Ausbeute: 590 mg (76,5 #) ; Fp: 135-138⁰C; ^7^³- 15,5° (c=0,99 1° DMF) .

509841/0973

Elementaranalyse für G .jE^rjQ^ ^Ή^ ^ . H₂O

berechnet C 58,19; H 6,15; Έ 15,89 gefunden C 58,18; H 6,40; N 15,60

d) Herstellung von ß-Ala-Arg-Sar-Phe-Phe-Tyr-NHo

In 30 ml Essigsäure wurden 450 mg Z-ß-Ala-Arg(NO₂)-Sar-Phe-Phe-Tyr-HH₂ gelöst und dann wurde innerhalb von 8 Stunden die katalytische Reduktion mit Palladiumschwarz als Katalysator durchgeführt, der Katalysator abfiltriert und das Mltrat bei vermindertem Druck zur Trockene eingeengt. Der Rückstand wurde in 5 ml Wasser gelöst und der Chromatographie an einer mit Carboxymethylzellulose gefüllten Kolonne (2,6 χ 22 cm) unterworfen. Die Elution wurde unter Verwendung von 0,005M und 0,2M wässrigen Ammoniumacetatlösungen (je 700 ml) nach dem Gradientenverfahren vorgenommen, die gewünschte Verbindung lag in den Fraktionen von 770 ml bis 880 ml vor, welche zusammengegeben und lyophilisiert wurden. Ausbeute: 309 mg (70,4 fo) weißes, flaumiges Produkt.
[p(/fi£- 21,5° (c=0,46 fo Wasser) .

Elementaranalyse für ^C3g^H52°7^li10 * ^2G2^H4°2 · ^H₂O berechnet C 54,53; K 7,03; Ii 14,79 gefunden C 54,99; H 6,76; N 14,58

Aminosäureanalyse:

Arg 1,00; Tyr 0,88; Phe 2,02; ß-Ala 0,98; Sar nicht bestimmt (Peptidgehalt 78,7 $) .

509841/0973

Beispiel 12

Leu-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-BH₂

a) Herstellung von Z-Leu-Arg(NO₂)-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂

In 20 ml DMP wurden 700 mg Z-Phe-Phe-Tyr-HH₂ gelöst
und dann wurde innerhalb von 6 Stunden unter Verwendung von Palladiumschwarz als Katalysator die katalytische Reduktion vorgenommen. Der Katalysator wurde abfiltriert, das PiItrat gekühlt und zuerst mit 648 mg Z-Leu-Arg(NO₂)-Pro-OH , dann mit 247 mg HONB und 285 mg. DCC versetzt und 20 Stunden lang gerührt. Darauf wurde der entstandene DC-Harnstoff abfiltriert und das DMP bei vermindertem Druck abdestilliert, der Rückstand mit 50 ml Wasser versetzt, das entstandene Pulver abfiltriert, getrocknet und aus DMP-Äthylacetat-Äther erneut
ausgefällt. Ausbeute: 1,05 g (86,5 %) ; Pp: 110-111⁰G;
ßÜ^ - 38,1° (c=1,0 io DMF) .

Elementaranalyse für °52^H65°11^N11 * ^2H2^ berechnet C 59,13; H 6,59; N 14,59 gefunden C 59,24; H 6,50; N 14,62

b) Herstellung von Leu-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂

In 20 ml Essigsäure wurden 500 mg Z-Leu-Arg(NO₂)-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂ gelöst und die katalytische Reduktion wurde innerhalb von 10 Stunden unter Verwendung von Palladiumschwarz als Katalysator durchgeführt.

Dann wurde der Katalysator abfiltriert und das Piltrat bei vermindertem Druck zur Trockene eingeengt, der Rückstand in 5 ml Wasser gelöst und der Chromatographie an einer mit
Carboxymethylzellulose gefüllten Kolonne (2,6 χ 20 cm) unterzogen. Die Elution erfolgte nach dem Gradientenverfahren
unter Einsatz von 0,005Mund 0,2M wässrigen Ammoniumacetatlösungen (je 700 ml) und die gewünschte Verbindung .lag in den

509841/0973

Fraktionen von 700 ml "bis 790 ml vor, welche zusammengegeben und lyophilisiert wurden, Ausbeute: 300 mg (63»6 fo) , weißes, flaumiges Produkt.

^- 58,3° (c=O,59 1° Wasser) . Elementaranalyse für C..Hg₀O₇N₁₀ , 2C"₂H,0₂ . 2H₂O

berechnet C 57,81; H 7,28; N H,05 gefunden C 57,72; H 7,24; N H,25

Aminosäureanalyse:

Arg 1,07; GIy 1,03; Tyr 0,87; Phe 2,07; Phe 1,00 (Peptidgehalt 83,9 #) .

Beispiel 13

ß-Ala-Arg-Phe-Phe-Phe-Tyr-M₂

a) Herstellung von Z-ß-Ala-Arg(N0₂)-Phe-Phe-Phe-Tyr(Bzl)-Harz

In ein Reaktionsgefäß zur Festphasepeptidsynthese (Simadzu APS-800, Simadzu Seisakusho, Japan) wurden 4,33 g BOC-Tyr(BzI)-Harz (Tyr-Gehalt 2,18 mti) eingebracht. Each Anquellen mit Diehlormethan wurden BOC-Phe-OH , BOC-Phe-OH , BOC-Phe-OH , B0C-Arg(N0₂) und Z-ß-Ala-OH nach dem DCC-Verfahren (Merrifield-Verrahren) zugegeben (siehe J.A.C₁S. 86, 304 (1964) Nach beendigter Reaktion wurde das Harz mit Di chlorine than, DMP, Äthanol, Eisessig und Methanol gewaschen und dann getrocknet, Ausbeute: 6,55g Peptidharz.

b) Herstellung von Z-ß-Ala-Arg(N0₂)-Phe-Phe-Phe-Tyr-(Bzl)-NH₂

In 50 ml 17 $igem Ammoniak-Methanol wurden 6,04 g des gemäß a) hergestellten Harzes suspendiert und die Suspension wurde bei Raumtemperatur 48 Stunden lang gerührt, das Harz abfiltriert und das Piltrat bei vermindertem Druck zur Trockene eingeengt, der Rückstand mit Äther versetzt und das entstandene Pulver abfiltriert und getrocknet. Ausbeute: 2,43 g

509841/0973

c) Herstellung von ß-Ala-Arg-Phe-Phe-Phe-Tyr-M,,

In 30 ml Eisessig wurden 500 mg des nach b) hergestellten rohen, geschützten Peptidamides gelöst und dann wurde innerhalb von 10 Stunden unter Verwendung von Palladiumschwarz als Katalysator die katalytische Reduktion vorgenommen, der .Katalysator abfiltriert und das Mitrat bei vermindertem Druck zur Trockene eingeengt, der Rückstand in 5 ml Wasser gelöst und die Lösung über eine mit Carboxymethylzellulose gefüllte Kolonne (2,6 χ 24,5 cm) geleitet. Die Elution wurde nach dem Gradientenverfahren unter Verwendung von 0,005M und 0,2M wässrigen Ammoniumacetatlösungen (je 800ml) durchgeführt. Nach Sammeln und Lyophilisieren der Fraktionen von 1180 bis 1545 ml betrug die Ausbeute 237 mg (64 fo); ²^- 33,19° (c=0,46 io V/asser) .

Elementaranalyse für C45H₅/ΟγΝη · 2C₂H,0₂ . 3H₂O

berechnet C 58,44; H 6,81 ;- N 12,52 gefunden C 58,44;' H 6,24; N 12,86

• Aminosäureanalyse:

Arg 1,00; Tyr 0,81 ; Phe 3,20; ß-Ala 0,9 (Peptidgehalt 84,8 fo) .

Beispiel 14

ß-Ala-Arg-Leu-Phe-Phe-Tyr-Gly-HH₂

a) Herstellung des Z-ß-Ala-Arg(Tos)-Ieu-Phe-Phe-Tyr(Bzl)-

Gly-Harzes

In ein Reaktionsgefäß ■ Festphasepeptid-Synthetisators (Simadzu APS-800) wurden 4,0 g BOC-Gly-Harz (mit einem Gehalt von 1,7 mM Äquivalent GIy) eingebracht und mit Dichlormethan 20 Stunden lang angequollen. Dann wurden in das Reaktionsgefäß BOC-Phe-OH , BOO-Phe-OH , BOC-Leu-OH , Aoc-Arg(Tos)-OH , und Z-ß-Ala-OH, mit DCC als Kondensationsmittel und Tri-

509841/0973

fluoressigsäure-Dichlormethan (1:1) als Mittel zur Entfernung des BOC , eingebracht. Nach Beendigung aller Reaktionen wurde das Harz mit Dichlormethan, DMF, Methanol, Eisessig und Methanol gewaschen und dann getrocknet, Ausbeute: 5,09 g.

b) Herstellung von Z-ß-Ala-Arg(Tos)-Leu-Phe-Phe-Tyr(Bzl)-GIy-NH₂

In 50 ml 17 folgern Ammoniak-Methanol wurden 4,4 g des nach a) hergestellten Harzes suspendiert und nach Versiegeln des Gefäßes wurde die Suspension "bei Raumtemperatur 48 Stunden lang gerührt.

Dann wurde das Harz abfiltriert und mit DMF gewaschen. Die Filtrate wurden kombiniert und bei vermindertem Druck zur Trockene eingeengt. Der ölige Rückstand wurde mit Äther versetzt und das entstandene Pulver abfiltriert. Ausbeute: 950 mg

c) Herstellung von ß-Ala-Arg-Leu-Phe-Phe-Tyr-Gly-NH2

500 mg des nach b) hergestellten rohen, geschützten Peptidamides wurden mit 0,5 ml Anisol versetzt und das Gemisch dann zu 10 ml Fluorwasserstoff zugegeben, bei 0 C 60 min lang gerührt und der Fluorwasserstoff bei vermindertem Druck abdestilliert, der Rückstand in 50 ml Wasser gelöst und die Lösung zweimal mit je 20 ml Äther gewaschen und über eine mit Amberlite IRA-410 (Acetatform) gefüllte Kolonne (1 χ 10 cm) geleitet und lyophilisiert. Das Produkt wurde in 20 ml Wasser gelöst und die Lösung über eine mit Carboxymethylzellulose gefüllte Kolonne (2,6 χ 25 cm) geleitet. Dann wurde die Elution nach dem Gradientenverfahren unter Verwendung von 0,005Mund 0,2M wässrigen Ammoniumacetatlösungen (je 800 ml) vorgenommen. Die Fraktionen von 1200 ml bis 1530 ml wurden vereinigt und lyophilisiert. Ausbeute: 167 mg eines weißen, flaumigen Produktes;

509841/0973

^- 28.93° (c=O,6 $> Wasser) Elementaranalyse für 044Hg₁O₈N₁₁. 2C₂H₄O₂. 3.

"berechnet C 54,64 ; H 7,26; N 14,60 gefunden C 54,64; H 7,58; N 14,37

Aminosäureanalyse:

Arg 1,06; GIy 1,00; Leu 1,11; Tyr 0,87; Phe 2,09; ß-Ala 1,14 (Peptidgehalt 82,0 $) .

Beispiel 15

ß-Ala-Arg-Ser-Phe-Phe-Tyr-Gly-HE^

a) Herstellung von Z-ß-Ala-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Phe-Phe-Tyr(Bzl)-Gly-harz

In ein für die Pestphasepeptiasynthese bestimmtes Reaktionsgefäß (Modell APS-800 Simadzu Seisakusho, Japan) wurden 4,02 g BOC-Gly-Harz (mit einem Gehalt von 2,17 mMol GIy) und BOC-Tyr(BzI)-OH , BOC-Phe-OH , BOC-Phe-OH , BOC-Ser(Bzl)-OH , Aoc-Arg(Tos)-OH und Z-ß-Ala-OH nach dem MerrifieId-Verfahren eingebracht, Uach Beendigung sämtlicher Reaktionen wurde das Harz mit Di chi or me than, Methanol, DMP, Eisessig und Methanol gewaschen und dann getrocknet. Ausbeute: 6,4 g.

b) Herstellung von Z-ß-Ala-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Phe-Phe-Tyr(Bzl)-GIy-HH₂

In 50 ml 17 $igem Ammoniak/Methanol wurden 5,9g des nach a) hergestellten Harzes suspendiert und die Suspension wurde bei Raumtemperatur 48 Stunden lang gerührt, das Harz abfiltriert und mit DMP gewaschen, das Waschwasser mit dem FiI-trat kombiniert und die kombinierte lösung bei vermindertem Druck zur Trockene eingeengt, der Rückstand mit Äther versetzt und das entstandene Pulver abfiltriert« Ausbeute: 2,02 g

509841/0 973

c) Herstellung von ß-Ala-Arg-Ser-Phe-Phe-Tyr-Gly-NH₂

In 10 al wasserfreiem Fluorwasserstoff wurden 1,0 g des nach Id) hergestellten rohen, geschützten Peptidamides und 1 ml Anisol gelöst und die Lösung wurde 60 min lang bei O⁰C gerührt. Der Fluorwasserstoff wurde darauf bei vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand in 20 ml Wasser gelöst. Die Lösung wurde zweimal mit je 10 ml Äther gewaschen und über eine mit Amberlite IRA-410 gefüllte Kolonne (1,0 χ 15 cm) geleitet und lyophilisiert, das Produkt in 10 ml Wasser gelöst und die Lösung über eine mit Garboxymethylzellulose gefüllte Kolonne (2,5 x 25 cm) geleitet. Die Elution wurde nach dem Gradientenverfahren unter Einsatz von je 800 ml 0,005M und 0,2M wässrigen Ammoniumacetatlösungen vorgenommen. Die Fraktionen von 800ml bis 950 ml wurden vereinigt und lyophilisiert und das Produkt über eine mit Amberlite XAD-2 (von Rohm & Haas Co. Ltd. USA,Polystyrolharz) gefüllte Kolonne (2 χ 10 cm) (Wasser) geleitet und lyophilisiert. Ausbeute: 55 mg der oben angeführten Verbindung in Form eines weißen, flaumigen Produktes.
/ZJ²^- 30,11° (c=0,47 1° Wasser) .

Aminosäureanalyse:

Arg 1,04 j Ser 0,96; GIy 1,00; Tyr 0,88; Phe 2,10; " ß-Ala 0,98 (Peptidgehalt 83,0 #) .

Beispiel 16 ß-Ala-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-Thr-Prq-Lys-Ala-OH

In 30 ml Methanol wurden 1,16 g Z-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-Lys(BOC)-AIa-O Bu gelöst und die katalytische Reduktion wurde innerhalb von 4 Stunden unter Einsatz von Palladiumschwarz als Kata-lysator durchgeführt, der Katalysator wurde abfiltirert und das Filtrat bei vermindertem Druck zur Trockene eingeengt, der Rückstand in 15 ml DMF gelöst und

509841/0973

die lösung mit 492 mg Z-ß-Ala-arg(NO₂)-Pro-OH und 200 mg

- HONB, dann unter Eiskühlung mit 250 mg DCC versetzt und die Mischung 18 Stunden lang gerührt.

Darauf wurden die unlöslichen Substanzen abfiltriert und das DMP wurde bei vermindertem Druck abdestilliert, der Rückstand mit Ä'thylacetat versetzt und das entstandene Pulver getrocknet und in 10 ml Trifluoressigsäure gelöst, die Lösung 40 min lang stehen gelassen, die Trifluoressigsäure bei vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand in 30 ml Eisessig gelöst, dann innerhalb von 16 Stunden die katalytische Reduktion unter Einsatz von Palladiumschwarz als Katalysator vorgenommen.

Der Katalysator wurde abfiltriert und das Piltrat bei vermindertem Druck zur Trockene eingeengt und in 10 ml Wasser gelöst. Nach einem lonenaustauschvorgang auf Amberlite IRA-HO wurden die kleinen Mengen an unlöslichen Substanzen abfiltriert und das Piltrat wurde über eine mit Carboxymethylzellulose gefüllte Kolonne (2,2 χ 30 cm) geleitet. Die Elution wurde nach.dem G-radientenverfahren unter Einsatz von je 800 ml 0,005M und 0j2M wässriger Ammoniumacetatlösimgen vorgenommen. Macli Vereinigung und Lyophilisieren der Fraktionen von 820 ml bis 1180 ml betrug die Ausbeute 670 mg eines weißen, flaumigen Produktes.

Iminosäureanalyse ι

iya 1,02 ι -Arg 0,98 ι Thr 0₉9βj Pro 2,04; AIa 1,00; Tyr 0,87; Phe 2,02 j ß-Ala 1₉Ο5 (Peptidgehalt 74 #) .

509841 /0973

Beispiel 17

ß-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Leu-OH

a) Herstellung von Z-Phe-Phe-Tyr-OEt

In 30 ml Äthanol wurden 3,43 g Z-Phe-Tyr-OEt gelöst, dann folgte die katalytische Reduktion unter Verwendung von Palladiumschwarz als Katalysator innerhalb von 2 Stunden, Der Katalysator wurde abfiltriert und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert, der Rückstand in 15 ml DMF gelöst und mit 2,77 g Z-Phe-OSu versetzt, das entstandene Gemisch wurde 10 Stunden lang gerührt. Diesem Reaktionsgemisch wurden 80 ml V/asser zugegeben und die entstandenen Kristalle abfiltriert und aus Äthanol-Äthylacetat-Äthyläther umkristallisiert. Ausbeute: 3,72 g (83,4 #); Nadeln; Pp: 185-186⁰C. /^7^⁴-18,1^O (0=1,09 # DMF).

Elementaranalyse für CU₇EUqO₇!^

berechnet C 69,68; H 6,16; N 6,59 gefunden C 69,64; H 6,14; N 6,54

b) Herstellung von Z-ß-Ala-Arg(N0₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-0Et

In 50 ml Äthanol wurden 2,0 g Z-Phe-Phe-Tyr-OEt suspendiert, die katalytische Reduktion wurde unter Verwendung von Palladiumschwarz als Katalysator innerhalb von 1,5 Stunden durchgeführt, der Katalysator abfiltriert und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abaestilliert. Der Rückstand wurde in 20 ml DMF gelöst und unter Eiskühlung mit 1,56 g Z-ß-Ala-Arg(NO₂)-GIy-CH , 0,7 g HONB und 0,8 g DCC versetzt und das Gemisch wurde schließlich 12 Stunden lang gerührt.

Dann wurde das entstandene Harnstoffderivat abfiltriert und das DMF bei vermindertem Druck abdestilliert, der Rückstand mit 60 ml Wasser versetzt und das entstandene Pulver abfiltriert, getrocknet und aus DMF-Äthylacetat erneut

509841/0973

ausgefällt; Ausbeute: 2,58 g (82 <?<>) ; Fp: 83-85⁰Cj ²^- 10,0° (c=1,1 io DMF).

Elementaranalyse für ⁰AS¹^e⁰12^\η · ^2H2^

berechnet G 57,43; H 6,23; N 13,97 gefunden C 57,41 ; H 6,05; IT 14,49

c) Herstellung von Z-ß-Ala-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-OH

In 30 ml Aceton wurden 2,00 g Z-ß-Ala-Arg(NO₂)-GIy-Phe-Phe-Iyr-OEt suspendiert und unter Eiskühlung mit 6,3 ml 1N wässrigem Natriumhydroxid versetzt. Dann wurde die Mischung 1 Stunde lang bei Raumtemperatur gerührt, mit 3 ml 1N Salzsäure versetzt und das Aceton bei vermindertem Druck abdestilliert, die kleine Menge an unlöslichen Substanzen wurde abfiltriert und das Gemisch mit 3»8 ml 1 N Salzsäure versetzt. Der entstandene Niederschlag wurde abfiltriert, gut mit Wasser gewaschen und getrocknet. Ausbeute: 1,96 g (98 °C; fdij²^ ⁵ 87°

	H	pO	64
		tL	51
N	1	4,
N	1	4,

Fp: 70-73°C; fdij²^ ⁵- 8,7° (c=O,97 % DMF) . Elementaranalyse für C .gHc-aO.^

berechnet C 57,77; H 5,90; gefunden C 58,13; H 5,89;

d) Herstellung von Z-ß-Ala-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-Leu-OBzl

In 5 ml DMF wurden 275 mg H-Leu-OBzl-p-Toluolsulfonat gelöst, die lösung wurde mitO,9 ml 10 $ N-Äthylmorpholin-DMF neutralisiert und unter Eiskühlung mit 670 mg Z-ß-Ala-Arg (NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-0H, 251 mg HONB und 289 mg BOC versetzt, das Gemisch 12h lang gerührt und der entstandene DC-Harnstoff abfiltriert, das DMF bei vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand mit 30 ml Wasser versetzt. Der entstandene Niederschlag wurde abfiltriert, mit heißem Methanol gewaschen und getrocknet; Ausbeute: 703 mg

(87,9 io) ;	Fp: 178-181	C 61,98;	⁰C;	L	H	59^H	'°_ ■	15,0°	(c=1,
Elementaranalyse	C 61,88;	für	C	H	6,	12⁰Y:	5N₁₁
berechnet			6,	35;	N	13,49
gefunden		78;	N	13,15

509841/0973

e) Herstellung von ß-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Leu-OH

In 30 ml Essigsäure wurden 500 mg Z-ß-Ala-Arg(NO₂)-GIy-Phe-Phe-Tyr-Leu-OBzl gelöst, darauf folgte die katalytische Reduktion"mit Palladiumschwarz als Katalysator innerhalb von 8 Stunden. Der Katalysator wurde abfiltriert und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert, der Rückstand in 5 ml Wasser gelöst und die Lösung über eine mit Carboxymethylzellulose gefüllte Kolonne (2,6 χ 18 cm) geleitet, die Elution nach dem linearen Gradientenverfahren unter Einsatz von ;je 700 ml 0,005Mund 0,2M wässrigem Amnioniumacetat durchgeführt. Die oben angeführte Verbindung lag in den Fraktionen von 370 ml bis 720 ml vor, diese wurden vereinigt und lyophilisiert. Ausbeute: 277 mg. (64,2 #) ; /pCj^-32,5° (c=0,51 # Wasser) .

Elementaranalyse für C₄₄H₆₀O_nN₁₀. C₂H₄O₂. 3H₂O

berechnet C 55,97; H 7,15; N 14,19 gefunden C 55,80; H 7,20; N 14,17

Aminosäureanalyse:

Arg 1,00; GIy 1,04; Leu 1,08; Phe 2,16; Tyr 0,88; ß-Ala 1,04; (Peptidgehalt 85,9 ^)

Beispiel 18
ß-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Ala-NH₂

Die in den Beispielen 17-d) und -e) beschriebenen Verfahren wurden wiederholt, jedoch wurde H-AIa-NH₂ . hydrochlorid statt H-Leu-OBzl-p-Toluolsulfonat verwendet, Ausbeute: 216 mg - ß-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Ala-NH₂.di-Acetat

Aminosäureanalyse:

Arg 1,01; GIy 1,00; AIa"1,02; Phe 2,00; Tyr 0,89; ß-Ala 1,12 (Peptidgehalt 82,4 $) .

509841/0973

Beispiel 19

ß-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-OH

a) Herstellung von Z-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-O Bu

In 30 ml Methanol wurden 1,80 g Z-Thr-Pro-O^Bu gelöst, dann wurde innerhalb von 5 Stunden die katalytische Reduktion unter Verwendung von Palladiumschwarz als Katalysator durchgeführt, der Katalysator abfiltriert und das Lösungsmittel "bei vermindertem Druck abdestilliert, der Rückstand in 20 ml DMP gelöst und nach Kühlen der lösung auf -10⁰C mit 2,70 g Z-Phe-Phe-Tyr-OH , 1,59 g HOiJB und 1₅37 g DCC versetzt. Das Gemisch wurde 18 Stunden lang gerührt, das entstandene Harnstoffderivat abfiltriert und mit 100 ml Wasser versetzt, der entstandene Niederschlag wurde abfiltriert, getrocknet und in 100 ml Äthylacetat gelöste Die Lösung zweimal mit je 50 ml Wasser gewaschen und über wasserfreiem !natriumsulfat getrocknet, das Lösungsmittel abdestilliert und der Rückstand mit Äthylacetat versetzt, das entstandene Pulver abfiltriert und getrocknet, Ausbeute: 2,51 g (89,8 $); Pp: 137-139⁰C; £*Τζ - 44,1° (c=1,08 f> DMF) .

Elementaranalyse für Ο^Η^Ο^Ν^ . H₂O

berechnet C 65,36; H 6,74- ; H 7,94 gefunden 0 65*49; H 6_f82 ; I 7,91

ö) Herstellung von Z-B-AIa-A^g(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-0 "Bu

In 20 ml Methanol wurden 1,50 g Z-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-0 Bu gelöst, die katalytische Reduktion wurde innerhalb von 4 Stunden im Wasserstoffstrom unter Verwendung von Palladiumschwarz als Katalysator durchgeführt, der Katalysator wurde abfiltriert und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert.

509841/0973

Der Rückstand wurde in 10 ml DMP gelöst und die Lösung unter Eiskühlung mit 0,87 g Z-ß-Ala-Arg-(NO₂)-GIy-OH , 0,47 g HONB und 0,54 g DGC versetzt, das Gemisch 16 Stunden lang gerührt, der entstandene DC-Harnstoff abfiltriert und das Filtrat mit 50 ml Wasser versetzt, worauf sich ein Niederschlag in Form eines Gels bildete. Dieser Niederschlag wurde abfiltriert, getrocknet und aus DMF-Äthylacetat erneut ausgefällt. Der so gebildete Niederschlag wurde abfiltriert und nochmals aus Äthanol umgefällt. Ausbeute: 1,40 g (67,4 $) ; Fp: 153-156°°; /jp^J^³ - 32,3° (c=0,97 % DMF) .

Elementaranalyse für

berechnet	C	58,	50;	H	6	,57;	N'	13	,88
gefunden	G	58,	24;	H	6	,54;	N	13	,87

c) Herstellung von ß-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-OH

900 mg Z-ß-Ala-Arg(NO₂)-GIy-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-O^Bu wurden mit 0,9 ml Anisol und darauf mit 10 ml wasserfreiem Fluorwasserstoff versetzt. Das Gemisch wurde bei -4 C 30 Minuten lang gerührt, der Fluorwasserstoff bei vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand mit 30 ml Wasser versetzt.

Die Lösung wurde mit 30 ml Äthyläther extrahiert und die wässrige Schicht über eine Kolonne (1,0 χ 10,0 cm), Amberlite IRA-410 (Acetatform) geleitet, darauf wurde die Kolonne mit Wasser gewaschen, das Waschwasser mit den Abwässern vereinigt und die kombinierte Lösung lyophilisiert. Das Produkt wurde in 10 ml Wasser gelöst und die Lösung über eine mit Carboxymethylzellulose gefüllte Kolonne (2,2 χ 21 cm) geleitet. Darauf wurde die Elution nach dem Gradientenverfahren unter Verwendung von je 700 ml 0,005M und 0,3M wässrigem Ammoniumacetat vorgenommen, die gewünschte Verbindung lag in den Fraktionen von 235 bis 385 ml vor.

509841/0 9 73

2513OS7

Nach Vereinigen und Lyophilisieren derselben betrug die Ausbeute 476 mg (57,0 %) . {W/²^ - 38,8° (c=0,25 fo Wasser) .

Elementaranalyse für C,„Hg^O^N^ . C₂HjO₂. 5H₂O

berechnet C 53,10; H 7,00; N 13,91 gefunden C 53,27; H 7,04; N 13,82

Aminosäureanalyse:

Arg 1,05; Thr 1,00; Pro 1,02; GIy 0,95; Tyr 0,95; Phe 2,02; ß-Ala 0,93 (Peptidgehalt 85,5 #) .

Beispiel 20

S-Acap-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-CH

a) Herstellung von Z-2-Acap-Arg(UO₂)-GrIy-OBt

2,41 g Z-Arg(NO₂)-SIy-OEt wurden mit 12 ml 25 ^iger HEr-Essigsäure versetzt und die Mischung wurde bei Raumtemperatur 40 min lang geschüttelt, darauf die Lösung mit Äthyläther versetzt und der entstandene Niederschlag abfiltriert und über Natriumhydroxid getrocknet.

Anderseits wurden 1,33 g Ζ-ε-Acap-OH und 0,99 g HONB in 5 ml Tetrahydrofuran gelöst und unter Eiskühlung mit 1,14 g BCG versetzt. Das Gemisch wurde 4 Stunden lang gerührt und der entstandene Dicyclohexylharnstoff abfiltriert. Die oben angeführte Aminokomponente wurde in 10 ml DMI¹ gelöst und nach Neutralisieren der Lösung mit Triäthylamin mit der oben angegebenen aktiven Esterlösung versetzt, das Gemisch über Nacht gerührt, das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand in 50 ml Äthylacetat gelöst. Die Lösung wurde mit Wasser und dann mit einer gesättigten, wässerigen Natriumbicarbonatlösung (50 ml x 2) , dann wieder mit Wasser gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestil liert und der Rückstand mit Petroleumbenzin versetzt. Nach

509841/0973

Umkristallisieren der erhaltenen Kristalle aus Vfasser-Äthanol-Ä.thylacetat betrug die Ausbeute 2,1 g (76 fo) ; Fp: 85-87°C; 2^7^-11,9° (C=I,O υ DMP).

Elementaranalyse für C^H-z^OgNy

berechnet C 52,26; H 6,76; N 17,78 gefunden C 52,43; H 6,64; N 17,76

b) Herstellung von Ζ-ε-Acap-Arg(NO₂)-GIy-OH

In 10 ml Aceton wurden 1,8 g Z-£-Acap-Arg(N0₂)-Gly-0Et gelöst und nach Eiskühlung mit 2,9 ml 2N Natriumhydroxid versetzt. Das Gemisch wurde 2 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt, mit 2,5 ml 1N Salzsäure versetzt und äas Aceton abdestilliert, der Rückstand mit 10 ml Wasser versetzt und die lösung nach

Abfiltrieren der unlöslichen Substanzen mit 1N Salzsäure angesäuert. Die entstandenen Kristalle wurden abfiltriert.

Ausbeute: 1,	,59g	(93 H)	C	48,79	I . Pp:	97	,5-99°	G;	C<€	^⁴-	I0,7⁰(c= 1,0
DMF) .			C	48,50
Elementaranalyse	für	C₂₂	H₃₃O₈N	7 *	H₂O
berechnet	; H	6,	52;	N	18,	10
gefunden	J H	6,	28;	N	18,	23

c) Herstellung von t-Acap-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-OH

Das in Beispiel 19-*>) beschriebene Verfahren wurde wiederholt, jedoch unter Ersetzen des Z-ß-Ala-Arg(NO₂J-GIy-OH durch Z-6-Acap-Arg(NO₂)-GIy-OH, Bei Wiederholung der in den Beispielen 19-"b) und -c) beschriebenen Verfahren betrug die Ausbeute 428 mg der oben angeführten Verbindung, ²^- 37,9° (c=0,25 % Wasser) .

Aminosäureanalyse:

Arg 1,02; Ihr 1,02; Pro 1,00; GIy 1,01; Phe 2,04; Tyr 0,92; g-Acap (nicht bestimmt) - Peptidgehalt 84,9 1°) .

509841/0973

Beispiel 21

lys-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-OH

a) Herstellung von di-Z-Lys-Arg(KO₂)-GIy-OEt

Das in Beispiel 20-a) beschriebene Verfahren wurde unter Einsatz Ton 2.07 g di-Z-Lys-OH wiederholt, man erhielt die oben angeführte Verbindung in Gelform, das Gel wurde aus Wasser-Äthanol-Äthylacetat erneut umgefällt, Ausbeute: 2,57 g" (73 $>) ; Fp: 161-162⁰G; ßj^^[- 11,9° (c=1,0 £ DMF) .

Elementaranalyse für ^G32^H44°io%

berechnet C 54,85; H 6,33; Έ 15,99 gefunden G 54,45; H 6,05; N 15,99

b) Herstellung von di-2-Lys-Arg(NO₂)-GIy-OH

In 10 ml Aceton wurden 2,0g' di-Z-Lys-Arg(NO₂)-GIy-OEt gelöst und unter Eiskühlung mit 2,1 ml 2N Natriumhydroxid versetzt. Darauf wurde das Gemisch 2 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt, mit 1,4 ml 1N Salzsäure versetzt, das Aceton bei vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand mit 10 ml Wasser versetzt.

Die unlöslichen Substanzen wurden abfiltriert und das Filtrat wurde mit 1N Salzsäure angesäuert, die entstandenen SeIe abfiltriert. Ausbeute: 1,78 g (93$); Fp: 131-132,5⁰C; ßj%- 10,5° (C= 1,0 * DMF).

Elementaranalyse für G₃₀ ¹^O⁰IO¹S* V²H₂O berechnet G 51,49; H 6,20; N 16,02 gefunden G 51,43; H 5,92; N 16,23

c) Herstellung von Lys-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-OH

Das in Beispiel 19-b) beschriebene Verfahren wurde wiederholt, jedoch unter E_rsetzen des Z-ß-Ala-Arg(NO₂)-GIy-OH durch di-Z-Iys-Arg(NO₂)-GIy-OH. Ausbeute: 452 g der oben

509841/0973

angeführten Verbindung. {jÄJ²^- 34,8° (e=O,4 56 Wasser) . Aminosäureanalyse:

Lys 1,08; Arg 1,01 j Thr 0,92; Pro 1,00; GIy 1,00; Phe 2,08; Tyr 0,89 (Peptidgehalt 85,2 76) .

Beispiel 22

ß-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-Lys-Ala-OH a) Herstellung von Z-Lys(BOC)-AIa-O Bu

In 300 ml Methanol wurden Hg Z-AIa-O Bu gelöst und die katalytische Reduktion wurde innerhalb von 2 Stunden unter Einsatz von Palladiumschwarz als Katalysator durchgeführt, der Katalysator abfiltriert und das Methanol abdestilliert.

Der Rückstand wurde in 50 ml Tetrahydrofuran gelöst. Gleichzeitig wurden 28,1 g Z-Lys(BOC)-OH-dicyclohexylaminsalz in 300 ml Äthylacetat suspendiert und dreimal mit je 200 ml 0,5N Schwefelsäure, darauf mit V/asser gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet.

Darauf wurde das Äthylacetat bis auf ein Volumen von etwa 150 ml abdestilliert, der Rückstand der oben angeführten Tetrahydrofuran^sung zugegeben und mit 10g HONB versetzt. Dann wurden unter Eiskühlung 11,3 g DCC zugegeben und das Gemisch wurde 16 Stunden lang gerührt. Der entstandene DC-Harnstoff wurde abfiltriert und das Filtrat zur Trockene eingeengt, der Rückstand in 500 ml Äthylacetat gelöst und mit 0,5N Schwefelsäure und 4 tigern, wässrigem Natriumbicarbonat, darauf gut mit Wasser gewaschen und die Äthylacetatschicht über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Das lösungsmittel wurde bei vermindertem Druck zur Trockene eingeengt und mit Petroläther versetzt, worauf Kristalle entstanden, welche abfiltriert und aus Äthylacetat-Petroläther umkristallisiert wurden. Ausbeute: 21,9 g (87 #) ; Pp: 55-57⁰C;

³~⁵⁰⁾¹⁷° (°=1 »16 ^ Methanol).

509841/0973

Elementaranalyse für ^σ26^Η41°7^ΙΪ3
berechnet G 61,52; H 8,14; F 8,28 gefunden C 61,61; H 8,10; U 8,18

b) Herstellung des Z-Pro-Lys(BOC)-AIa-O Bu

In 40 ml Methanol wurden 2,5 g Z-LyS(BOC)-AIa-O¹¹Bu gelöst, dann wurde innerhalb von 2 Stunden die katalytische Reduktion unter Verwendung von Palladiumschwarz als Katalysator durchgeführt. Der Katalysator wurde abfiltriert, das Filtrat bei vermindertem Druck zur Trockene eingeengt und der Rückstand in 20 ml Äthylacetat gelöst. Diese Lösung wurde mit 2,45 g Z-Pro-ONB versetzt und das Gemisch 18 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt. Es wurde dann mit 200 ml Äthylacetat versetzt und darnach mit 0,5N Schwefeisäure und 4 "folgern wässrigem Natriumbicarbonat, darauf dreimal mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und bei vermindertem Druck zur Trockene eingeengt. Der Rückstand wurde mit Petroläther versetzt, die entstandenen Kristalle wurden abfiltriert und aus Äthylacetat-Petroläther umkristallisiert. Die Ausbeute betrug 2,53 g (85 $) ; Pp: 127-129⁰C; £pQ^ - 64,52° (c=1 ,04 # Methanol) .

Elementar analyse für

berechnet	C	61	,57;	H	8	,00;	N	9	,27
gefunden	C	61	,81 ;	H	8	,31 ;	N	9	,37

c) Herstellung von Z-Thr-Pro-Lys(BOC)-AIa-O Bu

In 40 ml Methanol wurden 2,12 g Z-PrO-LyS(BOC)-AIa-O¹¹Bu gelöst, dann wurde die katalytische Reduktion innerhalb von 3 Stunden unter Einsatz von Palladiumschwarz als Katalysator vorgenommen, der Katalysator abfiltriert und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert.

5098Λ1/0973

Der Rückstand wurde in 20 ml Dioxan gelöst, gleichzeitig wurden 977 mg Z-Thr-OH und 806 mg HONB in 10 ml Äthyl-acetat-Dioxan (1 : 1) gelöst und unter Eiskühlung mit 800 mg DCC versetzt. Das Gemisch wurde 6 Stunden lang gerührt und der entstandene DC-Harnstoff abfiltriert, das Piltrat der oben angeführten Dioxanlösung zugegeben, das Gemisch 16 Stunden lang gerührt, das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand in 150 ml Athylacetat gelöst, Die Lösung wurde mit 0,5N Schwefelsäure und 4 $igem-wässrigem Natriumbicarbonat, darauf mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde mit Petroläther versetzt und das entstandene Pulver gesammelt. Ausbeute: 2,3 g (93 $) J Fp: 64-67⁰Cj fitj^-15,58° (c=O,995 Methanol).

H	7	,85;	N	9,	92
H	7	,99;	N	9,	65

Elementaranalyse für

berechnet C 59,55; gefunden C 59,25;

d) Herstellung von Z-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-Lys(BOC)-AIa-O Bu

In 70 ml Methanol wurden 1,41 g Z-Thr-Pro-Lys(BOC)-AIa-0 Bu gelöst und dann wurde innerhalb von 2 Stunden unter Verwendung von Palladiumschwarz als Katalysator die katalytische Reduktion durchgeführt, der Katalysator abfiltriert und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert, der Rückstand in 10 ml DMF gelöst und mit 1,Tg Z-Phe-Phe-Tyr-OH und 720 mg HONB, darauf unter Eiskühlung mit 618 g DCC versetzt und das Gemisch 20 Stunden lang gerührt, das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand mit Äthylaeetat-lther (1 : 1) behandelt. Das entstandene Pulver wurde abfiltriert und aus Äthanol kristallisiert. Ausbeute: 2,1 g (100 $>) \ Fp: 160-163,5⁰Cj ^' 63,73° (c=1,05 $> Methanol)

509841/0973

Elementaranalyse für Cg₂HgQO₁gNg

berechnet C 62,09; H 7,23; N 9,34 gefunden C 62,02; H 7, H; N 9,64

e) Herstellung von Z-Arg(NO₂)-G-ly-Phe-Phe~Tyr-Thr-Pro-LyS(BOC)-AIa-O¹¹Bu

In 30 ml Methanol wurden 2,32 g Z-Phe-Phe-Tyr-Ihr-Pro-Lys(BOC)-AIa-O Bu gelöst, dann wurde innerhalb von 3 Stunden die katalytische Reduktion unter Einsatz von Palladiumschwarz als Katalysator vorgenommen, der Katalysator abfiltriert und das Methanol abdestilliert, der Rückstand in 5 ml DMi¹ gelöst. Dieser Lösung wurden 1,26 g Z-Arg(NO₂)-GIy-OMB zugegeben und die Mischung wurde 20 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt, das DMF bei vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand mit 50 ml Wasser versetzt, das entstandene Pulver abfiltriert und zweimal aus DMF-Wasser erneut ausgefällt. Ausbeute: 2,5 g (88 #) ; Fp: 138-141⁰C (Zersetzung)

⁴ °

⁷D⁴- 32,4° (c=0,99 1o DMF) .
Slementaranalyse für

berechnet C 59,H; H 6,81; N 13,80 gefunden C 58,82; H 6,80; N 13,66

f) Herstellung von ß-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-Lys-AIa-OH

In einem Gemisch aus Methanol und Bisessig (2 % 1) wurden 710 mg Z-Arg(N0₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-Lys(BOG)-Ala-O^Bu gelöst und dann wurde innerhalb von 8 Stunden unter Verwendung von Palladiumschwarz als Katalysator die katalytische Reduktion vorgenommen, der Katalysator abfiltriert und das Filtrat bei vermindertem Druck zur Trockene eingeengt. Der Rückstand wurde in 10 ml Wasser gelöst und die Lösung über eine mit Carboxymethylzellulose gefüllte Kolonne (130ml) geleitet. Die Elution

509841/0973

wurde nach dem Gradientenverfahren unter Einsatz von je

800 ml O,005Mund 0,2M wässrigem Ammoniumaeetat vorgenommen.

Die Fraktionen von 913 ml "bis 1190 ml wurden vereinigt und lyophilisiert. Ausbeute: 350 mg eines weißen, flaumigen

Produktes.

Dieses Pulver wurde in 8 ml DMP gelöst und mit 41 mg p-Toluolsulfonsäuremonohydrat versetzt. Darauf folgte die Zugabe von 82 mg BOC-S-AIa-ONB und die Mischung wurde 16 Stunden lang gerührt, das DMP unter vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand mit 3 ml Trifluoressigsäure versetzt, das Gemisch 30 min lang geschüttelt und die Trifluoressigsäure abdestilliert, der Rückstand in 10 ml Wasser gelöst und über eine mit Amberlite IRA-410 (Acetatform) gefüllte Kolonne (1,0 χ 10 cm) geleitet, wodurch die Verbindung zum Acetat umgewandelt wurde. Das Eluat wurde lyophilisiert und über eine mit Carboxymethylzellulose gefüllte Kolonne (2,2 χ 17 cm) geleitet, dann die Elution nach dem Gradientenverfahren unter Einsatz von je 500 ml 0,005Mund 0,2M wässrigem Ammoniumacetat vorgenommen. Die Fraktionen von 430 ml bis 500 ml wurden zusammengegeben und lyophilisiert. Ausbeute: 250 Eg eines weißen flaumigen Produktes. /Ä7^⁴- 58,8° .(c=0,5 % Wasser) .

Aminosäureanalyse:

Lys 1,00; Arg 1,04; Thr 1,00; Pro 1,04; GIy 1,04; AIa 1,04; Tyr 0,89; Phe 2,00; ß-Ala 0,93 (Peptidgehalt 72 #) ,

509841/0973

Beispiel 23 Gly-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-Iys-Ala-OH

Das in Beispiel 22-f) "beschriebene Verfahren wurde wiederholt, jedoch das BOC-ß-Ala-ONB durch BOC-Gly-ONB ersetzt. Es wurden 214 mg der oben angeführten Verbindung in Form eines weißen, flaumigen Produktes erhalten , /dj^~ 59,2° (c=0,4 io Wasser) .

Aminosäureanalyse:

Lys 1,02; Arg 1,00; Thr 1,00; Pro 1,01; GIy 2,00; AIa 1,03; Tyr 0,87; Phe 2,04 (Peptidgehalt 78 fo) .

Beispiel 24 Leu-rArg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Gly NH₂

a) Herstellung von Z-Leu-Arg(Tos)-Gly-Phe-Phe-Tyr(BzI)-GIy-Harζ

In ein für die Peptidherstellung nach dem Pestphaseverfahren bestimmtes Reaktionsgefäß (Simadzu APS-800) wurden 4,04 g BOG-Gly-Harz mit einem Gehalt an GIy von 1,75 mMol eingebracht und mit Dichlormethan 20 Stunden lang angequollen. Darauf wurden nach dem Merrifieldverfahren BOC-Tyr(BzI)-OH , BOG-Phe-OH , BOG-Phe-OH , BOC-GIy-OH, Aoc~Arg(Ios)-OH und Z-Leu-OH eingebracht. DCC wurde als Kondensationsmittel verwendet und jede Aminosäure in vier Äquivalenten eingesetzt, und die Entfernung der BOC-Gruppen mit Trifluoressigsäure/Dichlormethan (1 : 1) vorgenommen. Dann wurde das Harz aus dem Reaktionsgefäß genommen, mit Dichlormethan, DMP , Methanol und Essigsäure gewaschen und getrocknet. Ausbeute: 5,07 g des oben angeführten Harzes.

b) Herstellung von Z-Leu-Arg(Tos)-Gly-Phe-Phe-Tyr(Bzl)-GIy-Mi₂

In 50 ml 17 folgen Ammoniak/Methanol wurden 4,41 g des nach a) hergestellten Harzes suspendiert, die Suspension

S09841/0973

wurde unter Sulfatschluß 48 Stunden "bei Raumtemperatur gerührt, das Harz abfiltriert und gut mit DMP gewaschen» Piltrat und Waschlösung wurden vereinigt und das Lösungsmittel wurde bei vermindertem Druck abdestilliert. Der ölige Rückstand wurde mit Äthyläther versetzt, das entstandene Pulver abfiltriert und gut mit Äther gewaschen, Ausbeute: 950 mg,

c) Herstellung von Leu-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Gly-N^

In 10 ml wasserfreiem Fluorwasserstoff wurden 500 mg des nach b) hergestellten, roh-en, geschützten Peptidamides und 0,5 ml Anisol gelöst und die Lösung wurde bei O⁰C 60 min lang gerührt, der Fluorwasserstoff abdestilliert und der Rückstand in 50 ml Wasser gelöst. Die Lösung wurde zweimal mit 20 ml Äthyläther extrahiert und die wässrige Schicht über eine mit Amberlite IRA-410 (Acetatform) gefüllte Kolonne (2 χ 10 cm) geleitet und lyophilisiert. Das erhaltene Produkt wurde über eine mit CarboxymethylZellulose gefüllte Kolonne (2,3 x 17 cm) geleitet und die Elution nach dem Gradientenverfahren unter Verwendung von je 400 ml 0,005 M und 0,2M wässrigem Ammoniumacetat vorgenommen« Fach Lyophilisieren der Fraktionen von 490 ml bis 550 ml wurden 167 mg der oben angeführten Verbindung in Porm eines weißen, flaumigen Produktes erhalten.

Aminosäureanalyse:

Arg 1,02; GIy 2,00; Leu 1,03; Tyr 0,89; Phe 2,08 (Peptidgehalt 84 #) .

509841/0973

Beispiel 25
ß-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Ala-Gly-NH₂

a) Herstellung von Z-ß-Ala-Arg(Tos)-Gly-Phe-Phe-Tyr(Bzl)-Ala-Gly-Hsrz

In ein Reaktionsgefäß vom Typ Simadzu APS-800 wurden 3,03 g BOC-Gly-Harz mit einem Gly-Gehalt von 1,32 mM eingebracht und darauf mit Dichlormethan angequollen. Dann wurden BOC-AIa-OH, BOC-Tyr(BzI)-OH, BOC-Phe-OH, BOC-Phe-OH, BOC-GIy-OH, Aoc-Arg-(Tos)-OH und Z-ß-Ala-OH gemäß der im symmetrischen Anhydridverfahren (siehe Hoppe-Seyler' s, Z.Physiol.Chem. 353, 1973(1972)) beschriebenen Reihenfolge zugegeben. In jedem Verfahrensschritt wurden die BOC-Gruppen mittels 50%igem Trifluoressigsäure-Dichlormethan entfernt.

Außerdem wurden in jedem Verfahrensschritt die nicht umgesetzten Aminogruppen mit Essigsäureanhydrid acetyliert. Nach Einbringen aller Aminosäuren wurde das Harz mit Äthanol, DMF, Dichlormethan, Essigsäure und Methanol gewaschen und bei vermindertem Druck getrocknet. Ausbeute: 3,70 g Peptidharz.

b) Herstellung von Z-ß-Ala-Arg(Tos)-Gly-Phe-Phe-Tyr(Bzl)-Ala-GIy-NH₂

In 50 ml 17°oigen Ammoniak/Methanol wurden 3,28 g des nach •a) hergestellten Peptidharzes suspendiert, die Suspension wurde bei Raumtemperatur 40 Stunden lang gerührt, das Harz abfiltriert und mit 50 ml DMF gewaschen, das Filtrat und Waschwasser vereinigt und bei vermindertem Druck zur Trockene eingeengt. Der Rückstand wurde mit Äther versetzt, das entstandene Pulver abfiltriert und getrocknet. Ausbeute: 433 mg rohes,geschütztes Peptidamid.

c) Herstellung von ß-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Ala-Gly-NH₂

In einem Gemisch aus 8 ml wasserfreiem Fluorwasserstoff und 0,3 ml Anisol wurden 310 mg des nach b) hergestellten, rohen, geschützten Peptidamids gelöst, die Lösung .wurde bei 0 C 60 min lang gerührt.

509841/0973

Der Fluorwasserstoff wurde bei vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand in £0 ml Wasser gelöst, die Lösung zweimal mit 10 ml Äther extrahiert, die wässerige Schicht über eine mit Amberlite IRA-410 (Acetatform) gefüllte Kolonne (l χ 10 cm), welche mit Wasser gewaschen wurde, geleitet. Der Effluent und das Waschwasser wurden vereinigt und die kombinierte Lösung wurde lyOphilisiert, das Produkt in 10 ml V/asser gelöst und die Lösung über eine mit Carboxymethylzellulose gefüllte Kolonne (2,3 χ 17 cm) geleitet. Die Elution wurde nach dem Gradientenverfahren unter Einsatz von je 400 ml 0,005M und 0,2M wässerigen Ammoniumacetatlösungen vorgenommen, die Fraktionen von 495 ml bis 540 ml wurden vereinigt und lyophilisiert. Ausbeute: 134 mg des oben angeführten Produkts. /ä_7p³-l9,62° (c= 0,53 % Wasser).

Aminosäureanalyse: Arg 1,05; GIy 1,95; AIa 1,00; Tyr 0,86; Phe 1,98; ß-Ala 1,02 (Peptidgehalt 84%).

Elementaranalyse für C₄₃H^₈O₉N₁₃.^2C2^H4°2*^4H2°

berechnet: . C 52,31; H 6,91; N 15,57 gefunden: C 52,40; H 6,55; N 15,65

Beispiel 26

cc, r-Dab-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Ala-Gly-Nh^

Es wurde nach dem in Beispiel 25 beschriebenen Verfahren vorgegangen, jedoch als zuletzt zugegebene Aminosäure Di-Z-a,^- Abu-OH anstelle von Z-ß-Ala-OH eingesetzt. Man erhielt die oben angeführte Verbindung in Form eines weißen, flaumigen Produkts. /α"_7²¹-20,3^ο (c = 0,2 % Wasser)

Aminosäureanalyse: Arg 1,00; GIy 1,89; AIa 1,02; Tyr 0,88; Phe 2,00; α,Γ-Abu 1,04 (Peptidgehalt 81,5%).

509841/0973

Beispiel 27

^l2

Gly-Arg-Gly-Phe-Phe-NH,

a) Herstellung von Z-Gly-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂

0,80 g Z-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂ wurden mit 8 ml 25%iger HBr-Essigsäure versetzt und das Gemisch wurde bei Raumtemperatur 45 min lang gut geschüttelt, mit 100 ml Äther versetzt und das entstandene Pulver abfiltriert und über Natriumhydroxidpellets in einem Exsikkator bei vermindertem Druck 2 Tage lang getrocknet, das getrocknete Produkt in 10 ml DMF gelöst und die Lösung mit Triethylamin neutralisiert, mit 0,43 g Z-GIy-ONB versetzt und die Mischung 10 Stunden lang gerührt.

Dann wurden der Lösung 7 ml Wasser zugegeben, wonach sich ein Öl absetzte. Nach Dekantieren der überstehenden Schicht wurden 50 ml Wasser zugegeben. Das entstandene Pulver wurde abfiltriert und getrocknet, darauf durch erneutes Ausfällen aus DMF-Äthylacetat gereinigt. Ausbeute: 0,66 g (77%); Fp: 119-122⁰C; /"Ö_7q¹-24,6° (c = 1,01%, DMF).

Elementaranalyse für Co^H₄₄OqN_1n.H₀O:

berechnet: C 55,51; H 5,95; N 17,99 gefunden: C 55,95; H 5,90; N 17,73

b) Herstellung von Gly-Arg-Gly-Phe-Phe-NH^

In 30 ml Essigsäure wurden 500 mg Z-Gly-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂ gelöst und dann wurde innerhalb von 7 Sturiden die katalytische Reduktion unter Durchleiten eines Wasserstoffstroms und Einsatz von Palladiumschwarz als Katalysator vorgenommen, der Katalysator abfiltriert und die Essigsäure bei vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde in 10 ml Wasser gelöst und die Lösung über eine mit Carboxymethylcellulose gefüllte Kolonne (l,8 χ 10 cm) geleitet.

Die Elution wurde nach dem linearen Gradientenverfahren unter Verwendung von je 700 ml O,1M und IM wässerigem Ammoniumacetat durchgeführt. Dann wurden die Fraktionen von 410 ml bis

509841/0973

515 ml vereinigt und lyophilisiert. Ausbeute: 307 mg (65%) eines weißen, flaumigen Produkts. L⁰J^ -17,7 (c=0,48% Wasser).

Aminosäureanalyse (Hydrolyse mit Salzsäure): Arg 1,15; GIy 2,00; Phe 2,00 (Peptidgehalt 84,6%)

Elementaranalyse für C₂₈H₃₉O₅N₉^C₂H₄O₂. 2H_?O:

berechnet: C 52,09; H 6,97; N 17,09 gefunden: C 52,05; H 6,85; N 17,22

Beispiel 28

D-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂

a) Herstellung von Z-D-Ala-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂

In 8 ml 25%iger HBr-Essigsäure wurden 0,80 g Z-Arg(N0₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂ gelöst und die Lösung wurde 40 min lang bei Raumtemperatur geschüttelt, darauf die Mischung mit 100 ml Äthyläther versetzt, worauf sich ein Niederschlag bildete. Dieser wurde abfiltriert, mit Äther gewaschen und getrocknet, das getrocknete Produkt in 10 ml DMF gelöst und die Lösung mit Triethylamin neutralisiert und mit 0,51 g Z-D-AIa-ONB versetzt. Das Gemisch wurde 8 Stunden lang gerührt, das DMF bei vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand mit 50 ml Wasser versetzt.

Das entstandene Pulver wurde abfiltriert, getrocknet, mit heißem Äthylacetat gewaschen und aus DMF-Äthylacetat erneut umgefällt. Ausbeute: 0,799 g (92%); Fp: 223-225°C; /q_7J~^L-22,3° (c = 0,98% DMF).

Elementar analyse für ^Ο2>Ί

berechnet: C 56,69; H 6,04; N 17,87 gefunden: C 56,38; H 6,07; N 17,98

b) Herstellung von D-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂

In 30 ml Essigsäure wurden 600 mg Z-D-Ala-Arg(NO₂)-GIy-Phe-Phe-NH₂ und dann wurde die katalytische Reduktion unter

509841/0973

Verwendung von Palladiumschwarz als Katalysator innerhalb von 7 Stunden durchgeführt, der Katalysator abfiltriert und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde in 10 ml Wasser gelöst und die Lösung über eine mit Carboxymethyl-Sephadex gefüllte Kolonne (l,8 χ 11 cm) geleitet.

Die Elution wurde nach dem linearen Gradientenverfahren unter Einsatz von je 700 ml 0,1M und IM wässerigem Ammoniumacetat vorgenommen, die oben angeführte Verbindung lag in den Fraktionen von 350 ml bis 450 ml vor, welche vereinigt und lyophilisiert wurden. Ausbeute: 400 mg (73%) eines weißen, flaumigen Produkts. /"α_7^²-22, 2° (c = 0,51% Wasser).

Aminosäureanalyse: Arg 1,01; GIy 1,03; AIa 1,00; Phe 1,99 (Peptidgehalt 82,3%)

Elementaranalyse für C₂₉H₄₁Op-N₉.2C₂H₄O₂.2H₃Os

berechnet: C 52,72; H 7,11; N 16,77 gefunden: C 52,66; H,6,92; .N 16,82

Beispiel 29

Phe-Arg-Gly-Phe-Phe-N^

a) Herstellung von Z-Phe-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂

In 10 ml 25%iger HBr-Essigsäure wurden 800 mg Z-Arg(NO₂)-GIy-Phe-Phe-NH₂ gelöst und die Lösung wurde 50 min lang geschüttelt, darauf mit 80 ml Äther versetzt und der entstandene Niederschlag abfiltriert, getrocknet und in 10 ml DMF gelöst. Dann wurde die Lösung mit Triäthylariiin neutralisiert und mit 700 mg Z-Phe-OPCP (Pentachlorphenylester) versetzt. Das Gemisch wurde 10 Stunden lang gerührt und mit 50 ml IN wässerigem Ammoniak versetzt. Dann wurde die ölige Schicht dekantiert und die ölige Substanz mit Wasser versetzt. Das entstandene Pulver wurde abfiltriert und getrocknet. Dem Pulver wurden 50 ml Äthylacetat zugegeben, das Gemisch wurde erhitzt und das Pulver

509841/0973

heiß abfiltriert. Reinigen des Pulvers durch erneutes Ausfällen aus DMF-Äthylacetat ergab 805 mg (92,#) Ausbeute. OxJq¹- 29,0° (c = 1, 0% DMF).

Elementaranalyse für

berechnet: C 60,06; H 5,98; N 16,29 gefunden: C 60,32; H 6,02; N 16,10

b) Herstellung von Phe-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂

In 6 ml wasserfreiem Fluorwasserstoff wurden 500 mg Z-Phe-Arg(NO₂)-GIy-Phe-Phe-NH₂ gelöst und die Lösung wurde 40 min lang bei -10⁰C gerührt. Dann wurde der Fluorwasserstoff abdestilliert und der Rückstand in 10 ml Wasser gelöst. Die Lösung wurde über eine mit Amberlite IRA-410 (Acetatform) gefüllte Kolonne (0,9 χ 15 cm) geleitet, die Kolonne wurde mit Wasser gewaschen. Der Effluent wurde mit den Waschwässern kombiniert und die kombinierte Lösung wurde lyophilisiert. Man erhielt 402 mg der oben angeführten Verbindung.

Aminosäureanalyse: Arg 1,01; GIy 0,98; Phe 2,94 (Peptidgehalt 86,2%).

Beispiel 30

Leu-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂

a) Herstellung von Z-Arg(NO₂)-GIy-Phe-Phe-Tyr-NH₂

In 100 ml DMF wurden 12,2 g Z-Phe-Phe-Tyr-NH₂ gelöst, dann wurde die katalytische Reduktion unter Verwendung von Palladiumschwarz als Katalysator innerhalb von 5 Stunden durchgeführt, der Katalysator abfiltriert und es wurden 8,6 g Z-Arg-(NO₂)-GIy-OH und 4,3 g HONB zugegeben.

Dann wurden unter Eiskühlung 4,95 g DCC zugegeben und das Gemisch wurde 12 Stunden lang gerührt. Der entstandene DC-Harnstoff wurde abfiltriert und das Filtrat mit 1 1 Wasser versetzt. Das entstandene Gel wurde abfiltriert und aus Methanol und Wasser erneut ausgefällt. Ausbeute: 16,25 g (91,8%); Fp: 181-184⁰C; /"Ö7o⁴-l6,0⁰ (c = l,01& DMF).

509841/0973

Elementaranalyse für £43^0^10^ 10 *^H 2° ^: berechnet: C 58,35; H 5,92; N 15,83 gefunden: C 58,02; H 5,98; N 15,66

b) Herstellung des Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂

In 30 ml Essigsäure wurden 600 mg Z-Arg (NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂ gelöst, dann wurde innerhalb von 9 Stunden die katalytische Reduktion unter Einsatz von Palladiumschwarz als Katalysator durchgeführt, der Katalysator abfiltriert und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde in 15 ml V/asser gelöst und an einer Kolonne (1,3 χ 11 cm) mit Carboxymethyl-Sephadex gereinigt. Die Elution wurde nach dem linearen Gradientenverfahren mit je 500 ml O,1M und IM wässerigem Ammoniumacetat durchgeführt. Die Fraktionen von 250 ml bis 420 ml wurden vereinigt und lyophilisiert. Ausbeute: 416mg (72,5%), /o7q⁵-7,6° (c= 0,49% Wasser).

Elementaranalyse für C₃₅H₄₇O₆N₉.2C₃H₄O₂.2H₅O:

berechnet: C 55,37; H 7,03; N 14,90 gefunden: C 55,81; H 6,83; N 14,78

Aminosäureanalyse: Arg 1,02; GIy 1,00; Tyr 0,91; Phe 2,02 (Peptidgehalt 82,5%).

c) Herstellung von Z-Leu-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂

700 mg Z-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂ wurden mit 0,2 ml Anisol, darauf mit 7 ml 25%iger HBr-Essigsäure versetzt. Das Gemisch wurde bei Raumtemperatur 40 min lang geschüttelt, darauf mit 100 ml Äthyläther versetzt, der entstandene Niederschlag wurde abfiltriert, getrocknet und in 10 ml DMF gelöst. Die Lösung wurde mit Triäthylamin neutralisiert und dann mit 344 mg Z-Leu-Osu(N-hydroxysuccinimidester) versetzt. Das Gemisch wurde 12 Stunden lang gerührt, das DMF bei vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand mit 50 ml Wasser versetzt. Das entstandene Pulver wurde abfiltriert und durch erneutes Ausfällen aus Methanol und Wasser gereinigt. Ausbeute: 560 mg (70,9%); Fp: 193-195°C, /"α7π²-18,9° (c= 1,13% DMF).

509841/0973

Elementaranalyse für ^C49^H6i°2.j.^Nj.].·^^'' berechnet: C 58,96; H 6,36; N 15,44 gefunden: C 58,72; H 6,22; N 15,36

d) Herstellung von Leu-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂

In 30 ml Essigsäure wurden 400 mg Z-Leu-Arg(NCU)-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH« gelöst und dann wurde innerhalb von 10 Stunden die katalytische Reduktion unter Einsatz von Palladiumschwarz als Katalysator durchgeführt, der Katalysator abfiltriert und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde in 5 ml Wasser gelöst und die Lösung über eine mit Carboxymethylcellulose gefüllte Kolonne (2,6 χ 22 cm) geleitet.

Die Elution wurde nach dem Gradientenverfahren unter Verwendung von je 700 ml O,CX)SM und 0,2M wässerigem Ammoniumacetat vorgenommen. Dann wurden die Fraktionen von 830 ml bis 910 ml vereinigt und lyophilisiert. Ausbeute: 217 mg (55,5%) /"Ö7q²-14,9^O (c = 0,41% Wasser).

Elementaranalyse für C₄₁H₅₆O₇N₁₀.2C₂H₄O₃.3H₂O:

berechnet: C 55,43; H 7,24; N 14,37 gefunden: C 55,71; H 7,12; N 14,81

Aminosäureanalyse: Arg 1,03; GIy 1,00; Leu 1,00; Phe 2,00; Tyr 0,85 (Peptidgehalt 78,0515).

Beispiel 31
a-Abu-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂

Das in Beispiel 30 beschriebene Verfahren wurde wiederholt, jedoch wurde Z-a-Abu anstelle von Z-Leu eingesetzt, um die oben angeführte Verbindung zu erhalten. ²°

Wasser).

Aminosäureanalyse: Arg 1,02; GIy 0,98; α-Abu 1,04; Phe 2,00; Tyr 0,92 (Peptidgehalt

S09841/0973

Beispiel 32 Nle-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂

Das in Beispiel 30 beschriebene Verfahren wurde wiederholt, jedoch wurde Z-NIe anstelle von Z-Leu eingesetzt, um die oben angeführte Verbindung zu erhalten, /jxj ^?_ -14,3 (c = 0,4 % Wasser).

Aminosäureanalyse: Arg 1,00; GIy 0,97; Nie 1,04; Phe 2,03; Tyr 0,91 (Peptidgehalt 84%).

Beispiel 33 Val-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂

In 10 ml DMF wurden 400 mg Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH^diacetat,. das nach Beispiel 30 b) hergestellt worden war, gelöst und darauf mit 300 mg Z-VaI-ONB versetzt. Die Lösung wurde mit Triäthylamin neutralisiert und 10 Stunden lang gerührt. Dann wurden der Lösung 50 ml Äther zugegeben und der entstandene Niederschlag wurde abfiltriert, mit· Äthylacetat gewaschen und getrocknet. Dieses Produkt wurde in 30 ml Essigsäure-Wasser (1:1) gelöst und 4 Stunden lang der katalytischen Reduktion unter Einsatz von Palladiumschwarz als Katalysator unterworfen. Dann wurde der Katalysator abfiltriert und das Filtrat zur Trockene eingeengt. Der Rückstand wurde in 10 ml Wasser gelöst und nach dem in Beispiel 30 c) beschriebenen Verfahren chromatographiert. Ausbeute: 360 mg. /Tö_7q²-13,7^o (c = 0,5% Wasser).

Aminosäureanalyse: Arg 1,02; GIy 1,00; VaI 0,97; Phe 2,04; Tyr 0,97 (Peptidgehalt 86,2%).

Beispiel 34

ß-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂ a) Herstellung von Z-Arg(N0₂)-GIy-OEt

In 200 ml Tetrahydrofuran wurden 70,7 g Z-Arg(NO₂)-OH gelöst und unter Eiskühlung mit 40,5 g 2,4-Dinitrophenol und 45,4 g DCC versetzt. Das Gemisch wurde 4 Stunden lang gerührt.

509841/0973

Gleichzeitig wurden 30,7 g GIy-OEt.HCl in 200 ml Tetrahydrofuran suspendiert, die Suspension wurde unter Eiskühlung mit 30,8 ml Triäthylamin neutralisiert. Der entstandene DC-Harnstoff wurde abfiltriert und das Filtrat mit der oben angeführten aktiven Esterlösung versetzt und über Nacht gerührt. Die Lösung wurde konzentriert und der Rückstand in 500 ml Äthylacetat gelöst. Die Lösung wurde mit einer gesättigten wässerigen Natriumbicarbonatlösung (200 ml χ 3), mit IN Salzsäure (200 ml χ 3), darauf mit einer gesättigten wässerigen Natriumchloridlösung (200 ml χ 3) gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Dann wurde die Lösung konzentriert und aus Athylacetat/Petroläther umkristallisiert. Die Kristalle wurden abfiltriert und aus Athylacetat/Petroläther umkristallisiert. Ausbeute: 70,0 g (79,8JIi), Fp: 109-110⁰C /ä_7p⁶'⁵-3,4° (c=l%DMF).

Elementaranalyse für ^ciq^H26°7^N6^: berechnet: C 49,31; H 5,98; N 19,17 gefunden: C 49,26; H 5,79; N 18,55

b) Herstellung von Z-Arg(NO₂)-GIy-OH

In 100 ml Aceton wurden 20,0 g Z-Arg(NO₂)-GIy-OEt suspendiert und darauf unter Eiskühlung mit 64 ml IN wässeriger Natriumhydroxidlösung versetzt. Das Gemisch wurde 2 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt.

Nach Neutralisieren des Alkaliüberschusses mit Salzsäure wurde die Lösung bei vermintertem Druck zur Trockene eingeengt und der Rückstand mit 100 ml Wasser versetzt. Die unlöslichen Substanzen wurden abfiltriert, das Filtrat mit Salzsäure angesäuert und die entstandenen Kristalle wurden abfiltriert. Ausbeute: 18,3 g (93,7%), Fp: 103-105⁰C, /o7q²-25,9° (c = 0,9# DMF).

Elementaranalyse für C.,H₂₂O₇N₆.H₂O:

berechnet: C 44,86; H 5,65; N 19,62 gefunden: C 44,48; H 5,35; N 19,53

509841/0 97 3

c) Herstellung von Z-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂

In einem Gemisch aus 60 ml DMF und 40 ml Methanol wurden 8,91 g Z-Phe-Phe-NH₂ gelöst und dann wurde innerhalb von 14 Stunden in Gegenwart von Palladiumschwarz als Katalysator die katalytische Hydrierung vorgenommen. Der Katalysator wurde abfiltriert und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert, der Rückstand in 30 ml DMF gelöst. Gleichzeitig wurden 50 ml Tetrahydrofuran zuerst mit 6,80 g Z-Arg(NO₂)-GIy-OH und dann mit 3,23 g HONB und 3,71 g DCC versetzt, darauf wurde 4 Stunden lang gerührt. Der entstandene DC-Harnstoff wurde abfiltriert und die oben angeführte Aminokomponente (H-Phe-Phe-NH₂) zugegeben, das Gemisch über Nacht gerührt. Nach Abdestillieren des Lösungsmittels bei vermindertem Druck wurde der Rückstand mit 100 ml Wasser versetzt und das entstandene Pulver abfiltriert.

Nach dem Trocknen wurde das Produkt mit Äthylacetat gewaschen und aus Äthanol/Äthylacetat umkristallisiert. Ausbeute: 8,34 g (72,7&), Fp: 112-113⁰C, /JtJ^-21,6° (c=l£ DMF).

Elementar analyse für C₃₄H₄₁OgN^H₂O:

berechnet: C 56,58; H 6,01; N 17,47 gefunden: C 56,75; H 5,72; N 17,40

d) Herstellung von Z-ß-Ala-ONB

In 40 ml Tetrahydrofuran wurden 3,35 g Z-ß-Ala-OH und 3,23 g HONB gelöst und nach Eiskühlung mit 3,71 g DCC versetzt. Das Gemisch wurde über Nacht gerührt und der entstandene Dicyclohexylharnstoff abfiltriert, das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert und Petroläther zugegeben. Die entstandenen Kristalle wurden abfiltriert und aus Acetonitril umkristallisiert. Ausbeute: 3,83 g (66,4%); Fp: 125-126°C.

Elementaranalyse für ^C20^H20°6^N2^: berechnet: C 62,49; H 5,24; N 7,29 gefunden: C 62,52; H 5,18; N 7,29

509841/0973

e) Herstellung von Z-ß-Ala-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂

1,06 g Z-Arg(NO₂)~Gly-Phe-Phe-NH₂ wurden mit 10 ml 25&iger Hßr-Essigsäure und nach 40 min langem Schütteln bei Raumtemperatur mit Äthyläther versetzt. Der entstandene Niederschlag wurde abfiltriert, bei vermindertem Druck in einem Exsikkator über Natriumhydroxid getrocknet und in 10 ml DMF gelöst. Nach dem Abkühlen wurde die Lösung mit 0,84 ml Triäthylamin neutralisiert und mit 0,69 g Z-ß-Ala-ONB versetzt. Das Gemisch wurde über Nacht gerührt und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert, dann wurden 50 ml Wasser zugegeben. Das entstandene Pulver wurde getrocknet, mit Äthylacetat gewaschen und aus Wasser-Dioxan-Äthylacetat erneut ausgefällt. Ausbeute: 0,98 g (83,335), Fp: 161-163°C, /a_7^ⁱ'⁵-20,9° DMF).

Elementaranalyse für C^₇

berechnet: C 56,69; H 6,04; N 17,89 gefunden: C 56,84; H 5,88; N 17,50

f) Herstellung von ß-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂

In 40 ml Essigsäure wurden 800 mg Z-ß-Ala-Arg(NO₂)-GIy-Phe-Phe-NH₂ gelöst und dann wurde innerhalb von 14 Stunden die katalytische Reduktion in Gegenwart von Palladiumschwarz, als Katalysator durcngeführt. Der Katalysator wurde abfiltriert und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde über eine mit Carboxymethyl-Sephadex gefüllte Kolonne (2,5 χ 9 cm) geleitet und die Elution wurde nach dem linearen Gradientenverfahren unter Verwendung von je 700 ml Ο,ΟΙΝ und IN wässerigem Ammoniumacetat vorgenommen.

Die Fraktionen von 780 ml bis 990 ml wurden vereinigt und lyophilisiert. Ausbeute: 500 mg (66%), /jxj£?'^-l3,9° (c = 0,5% Wasser).

Elementar analyse für C₂₉H₄₁O₅N₃.2C₂H₄O^H₃O:

509841/0973

berechnet: C 54,00; H 7,01; N 17,18 gefunden: C 53,75; H 7,07; N 17,15

Aminosäureanalyse: Arg 1,00(1); GIy 1,00(1); Phe 2,00(2) (die Zahlen in Klammern bedeuten theoretische Werte; dies gilt auch von jetzt an) Peptidgehalt 16%,

Beispiel 35
^-Abu-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂

a) Herstellung von Z-f-Abu-ONB

In 40 ml Tetrahydrofuran wurden 4,75 g Z-J^-Abu-OH und 3,94 g HONB gelöst und nach Eiskühlung 4,54 g DCC zugegeben. Das Gemisch wurde 6 Stunden lang gerührt und der entstandene Dicyclohexylharnstoff abfiltriert. Das Lösungsmittel wurde bei vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand mit 30 ml Äthyläther, dann mit einer kleinen Menge Wasser versetzt. Die entstandenen Kristalle wurden abfiltriert. Ausbeute: 6,0 g (75,3#), Fp: 66-69⁰C.

Elementaranalyse für C₂JH₂₂O^N₂:

berechnet: C 63,31; H 5,57; N 7,03 gefunden: C 63,39; H 5,42; N 7,06

b) Herstellung von Z-^-Abu-Arg{NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂

Nach dem in Beispiel 34 e) beschriebenen Verfahren wurden 0,53 g Z-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂ mit HBr-Essigsäure behandelt und in 15 ml DMF gelöst. Nach Neutralisieren mit Triethylamin wurden der Lösung 0,44 g Z-2T-Abu-0NB zugegeben. Das Gemisch wurde über Nacht gerührt, das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert und dem Gemisch Wasser zugegeben. Das entstandene Pulver wurde abfiltriert und gut getrocknet.

Es wurde mit Äthylacetat gewaschen und aus Äthanol/Wasser erneut ausgefällt. Ausbeute: 0,38 g (65&), Fp: 167-170⁰C, ⁶⁵

509841/0973

1/

- 65 -

Elementar analyse für ^C38^H48°9^NlO* berechnet: C 57,20; H 6,19; N 17,56 gefunden: C 57,14; H 6,10; N 17,56

c) Herstellung von fr-Abu-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂

In 30 ml Essigsäure wurden 300 mg Z-f-Abu-Arg(NO₂)-GIy-Phe-Phe-NH₂ gelöst und dann wurde innerhalb von 6 Stunden die katalytisch^ Reduktion in Gegenwart von Palladium als Katalysator vorgenommen.

Nach Abfiltrieren des Katalysators wurde das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand über eine mit Carboxymethyl-Sephadex gefüllte Kolonne (1,8 χ 10 cm) geleitet. Dann wurde die Elution nach dem linearen Gradientenverfahren unter Einsatz von 0.005N (350 ml) bis IN (350 ml) wässerigem Ammoniumacetat durchgeführt und die Fraktionen von 290 ml bis 340 ml wurden vereinigt und lyophilisiert. Ausbeute: 180 mg (63#), Z~q7q⁶-15,0° (c = 0,5& Wasser).

Elementaranalyse für C₃₀H₄₃O₅N₉.2

berechnet: C 53,95; H 7,19; N 16,66 gefunden: C 53,93; H 7,29; N 16,34

Aminosäureanalyse: Arg 1,00(l); GIy l,00(l); Phe 1,94(2); Peptidgehalt 16%.

Beispiel 36

S-Aval-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂
a) Herstellung von Z-&-Aval-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂

Nach dem in Beispiel 34 e) beschriebenen Verfahren wurden 0,80 g Z-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂ mit HBr.-Essigsäure behandelt und in 10 ml DMF gelöst. Die Lösung wurde mit Triäthylamin neutralisiert. Gleichzeitig wurden 0,30 g Z-b-Aval-OH und 0,24 g HONB in 5 ml Tetrahydrofuran gelöst.

Darauf wurde die Mischung unter Eiskühlung mit 0,27 g DCC

509841/0973

versetzt und 3 Stunden lang gerührt. Der entstandene Dicyclohexylharnstoff wurde abfiltriert und das Filtrat der oben angeführten Aminokomponente /H-&-Äval-Arg(N0₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂_7 zugegeben, dann wurde über Nacht gerührt. Das Lösungsmittel wurde bei vermindertem Druck abdestilliert und Wasser zugegeben. Das entstandene Pulver wurde abfiltriert und gut getrocknet, mit Äthylacetat gewaschen und aus DMF-Äthylacetat erneut ausgefällt. Ausbeute: 0,62 g (70%), Fp: 154-157°C, /"ö7p³-13,O° DMF).

Elementaranalyse für G₃qH₅q0qN.q. /2 H₂O:

berechnet: C 57,69; H 6,33; N 17,25 gefunden: C 57,84; H 6,42; N 16,86

b) Herstellung von b-Aval-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂

In 30 ml Essigsäure wurden 500 mg Z-Aval-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂ gelöst und dann wurde 5 Stunden lang in Gegenwart von Palladium als Katalysator.katalytisch reduziert. Nach Abfiltrieren des Katalysators wurde das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde über eine mit Carboxymethyl-Sephadex gefüllte Kolonne (l,8 χ 9 cm) geleitet und die Elution wurde nach dem linearen Gradientenverfahren unter Verwendung von O,1N (500 ml) und IN (500 ml) wässerigem Ammoniumacetat durchgeführt. Die Fraktionen von 290 ml bis 370 ml wurden vereinigt und lyophilisiert. Ausbeute: 290 mg (6196), /fä_7Q³-12,6^o(c = 0,556 Wasser).

Elementar analyse für C₃₁H₄₅O₅N₉.2C₂H₄O₂.³/2H₂O:

berechnet: C 54,53; H 7,32; N 16,36 gefunden: C 54,34; H 7,35; N 16,20

Aminosäureanalyse: Arg l,ll(l); GIy 1,00(1); Phe 2,04(2); Peptidgehalt 81,-

509841/0973

Beispiel 37
e-Acap-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂

a) Herstellung von Z-£-Acap-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂

Nach dem in Beispiel 34 e) beschriebenen Verfahren wurden 0,80 g Z-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂ mit HBr-Essigsäure behandelt und in 10 ml DMF gelöst. Die Lösung wurde mit Triethylamin neutralisiert. Gleichzeitig wurden 0,32 g Z-6-Acap-OH und 0,24 g HONB in 5 ml Tetrahydrofuran gelöst und unter Eiskühlung 0,27 g DCC zugegeben. Das Gemisch wurde 3 Stunden lang gerührt und der entstandene Dicyclohexylharnstoff abfiltriert, das Filtrat wurde der oben angeführten Aminokomponente /H-Arg-(NO₂)-GIy-Phe-Phe-NH₂_7 zugegeben und das Gemisch über Nacht gerührt. Dann wurde das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert und Wasser zugegeben. Das entstandene Pulver wurde abfiltriert und gut getrocknet, mit Äthylacetat gewaschen und aus DMF/Äthylacetat erneut ausgefällt. Ausbeute: 0,49 g (5530, Fp: 102-104⁰C, CoJ^¹-20,0° (c = l,0% DMF).

Elementaranalyse für ^C39^H*o°9^NlO* ^^2H2^Oi berechnet: C 57,69; H 6,33; N 17,25 gefunden: C 57,86; H 6,40; N 16,76

b) Herstellung von £-Acap-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂

In 30 ml Essigsäure wurden 400 mg Ζ-ε-Acap-Arg(NO₂)-GIy-Phe-Phe-NH₂ gelöst, dann wurde 7 Stunden lang die katalytische Reduktion in Gegenwart von Palladium als Katalysator durchgeführt. Der Katalysator wurde abfiltriert und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wuide über eine mit Carboxymethyl-Sephadex gefüllte Kolonne (1,8 χ 10 cm) geleitet und die Elution wurde nach dem linearen Gradientenverfahren unter Einsatz von O₅IN (500 ml) und IN wässerigem Ammoniumacetat durchgeführt. Die Fraktionen von 250 ml bis 330 ml wurden vereinigt und lyophilisiert. Ausbeute: 200 mg d²-9,9° (c = 0,6# Wasser).

509841 /0973

Elementaranalyse für C₃₂H₄₇O₅N₉.2C₂H₄O₂.2H₂O'.

berechnet: C 54,46; H 7,49; N 15,88 gefunden: C 54,24; H 7,26; N 15,76

Aminosäureanalyse: Arg l,00(l); GIy 0,98(l); Phe 2,00(2) ε-Acap nicht bestimmt. Peptidgehalt 79%.

Beispiel 38

Lys-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂
a) Herstellung von Di-Z-Lys-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂

Nach dem in Beispiel 34 e) beschriebenen Verfahren wurden 0,80 g Z-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂ mit HBr-Essigsäure behandelt und dann in 10 ml DMF gelöst. Die Lösung wurde mit Triethylamin neutralisiert.

Gleichzeitig wurden 0,54 g Di-Z-Lys-OH und 0,26 g HONB in 5 ml Tetrahydrofuran gelöst und dann unter Eiskühlung 0,30 g DCC zugegeben. Das Gemisch wurde 4 Stunden lang gerührt und der entstandene Dicyclohexylharnstoff abfiltriert. Das Filtrat wurde der oben angeführten Aminokomponente /Η-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂_7 zugegeben und dann wurde über Nacht gerührt, das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand mit Wasser versetzt. Das entstandene Pulver wurde abfiltriert und gut getrocknet. Es wurde darauf mit Äthylacetat gewaschen und aus DMF/Äthylacetat erneut ausgefällt. Ausbeute: 0,82 g (77%), Fp: 200-204⁰C (Zersetzung), /"Ö7g³-20,5⁰ (c = l_fl%DMF). Elementaranalyse für ^CHONv

berechnet: C 59,06; H 6,20; N 15,79 gefunden: C 59,04; H 6,13; N 15,78

b) Herstellung von Lys-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂

In 30 ml Essigsäure wurden 600 mg Di-Z-Lys-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂ gelöst, dann wurde in Gegenwart von Palladium als

50 9 841/0973

Katalysator 6 Stunden lang die katalytische Reduktion vorgenommen. Der Katalysator wurde abfiltriert und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde über eine mit Carboxymethyl-Sephadex gefüllte Kolonne (1,5 χ 11 cm) geleitet und die Elution nach dem linearen Gradientenverfahren unter Verwendung von O,1N bis IN (je 700 ml) wässerigem Ammoniumacetat durchgeführt. Die Fraktionen von 650 ml bis 760 ml wurden vereinigt und lyophilisiert. Ausbeute: 280 mg (52#), /λ7^³-^^° (c= 0,5# Wasser).

Elementaranalyse für ^C32^H48°5^N10 " ^3C2^H4°2*^2H2^0: berechnet: C 52,52; H 7,42; N 16,12 gefunden: C 52,64; H 7,38; N 16,42

Aminosäureanalyse: Arg l,06(l); Lys l,09(l); GIy 1,00(1); Phe 1,97(2) Peptidgehalt

Beispiel 39
α, *-Dab-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂

a) Herstellung von Di-Z-Dab-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH

Nach dem in Beispiel 34 e) beschriebenen Verfahren wurden 0,80 g Z-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂ mit HBr-Essigsäure behandelt und in 10 ml DMF gelöst. Die Lösung wurde mit Triäthylamin neutralisiert. Gleichzeitig wurden 0,50 g Di-Z-a,f-Dab-OH und 0,26 g HONB in 5 ml Tetrahydrofuran gelöst und unter Eiskühlung mit 0,30 g DCC versetzt. Das Gemisch wurde 4 Stunden lang gerührt und der entstandene Dicyclohexylharnstoff abfiltriert.

Das Filtrat wurde der oben agenführten Aminokomponente ^H-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂_7 zugegeben und das Gemisch über Nacht gerührt. Das Lösungsmittel wurde bei vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand mit Wasser versetzt. Das entstandene Pulver wurde abfiltriert und gut getrocknet, mit Äthylacetat gewaschen und aus DMF-Äthylacetat erneut ausgefällt. Ausbeute: 0,82 g (78#). Fp: 184-188°C, /Ä7S³-19,5° (c= 1,156 DMF),

509841/0973

Elementar analyse für ^C46^H55^Ojliⁿxi«^H2^O: berechnet: C 57,79; H 6,01; N 16,21 gefunden: C 57,95; H 5,91; N 16,19

b) Herstellung von a,)^v-Dab-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂

In 30 ml Essigsäure wurden 600 mg Di-Z-(a,f-Dab-Arg(N0₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂ gelöst und dann wurde 6 Stunden lang die katalytische Reduktion in Gegenwart von Palladium als Katalysator vorgenommen. Der Katalysator wurde abfiltriert und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde über eine mit Carboxymethyl-Sephadex gefüllte Kolonne (1,5 χ 13 cm) geleitet und die Elution wurde nach dem linearen Gradientenverfahren unter Einsatz von 0,1N (700 ml) bis IN (700 ml) wässerigem Ammoniumacetat durchgeführt. Die Fraktionen von 610 ml bis 680 ml wurden vereinigt und lyophilisiert. Ausbeute: 255 mg (46%), /α_7§³-12,5° (c=0,8# Wasser),

Elementaranalyse für C₃₀H₄₄O₅N₁₀.3C₃H₄O₂.3H₂O:

berechnet: C 50,34; H 7,28; N 16,31 gefunden: C 50,59; H 7,61; N 16,93

Aminosäureanalyse: Arg l,00(l); GIy 1,00(1); Phe 1,98(2); α,Γ-Dab l,02(l) Peptidgehalt

Beispiel 40

Arg-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂
a) Herstellung von Z-Arg(NO₂)-Arg (NO₂)-GIy-Phe-Phe-NH₂

Nach dem in Beispiel 34 e) beschriebenen Verfahren wurden 0,80 g Z-Arg(NO₂)-GIy-Phe-Phe-NH₂ mit HBr-Essigsäure behandelt und in 10 ml DMF gelöst. Die Lösung wurde mit Triäthylamin neutralisiert. Gleichzeitig wurden 0,39 g Z-Arg(N0₂)-0H und 0,22 g 2,4-Dinitrophenol in 5 ml Tetrahydrofuran gelöst und unter Eiskühlung 0,25 g DCC zugegeben. Das Gemisch wurde 2 Stunden lang gerührt und der entstandene Dicyclohexylharnstoff abfiltriert. Das Filtrat wurde der oben angeführten

509841/0973

Amlnokomponente /Η-Α^(Ν0₂)-01γ-Ρίΐθ-Ρ1ΐ6-ΝΗ₂_7 zugegeben und dann wurde über Nacht gerührt. Das Lösungsmittel wurde bei vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand mit Wasser versetzt. Das ölige Produkt wurde gut mit Wasser gewaschen und aus DMF/Äthylacetat erneut ausgefällt. Ausbeute: 0,90 g (89#), Fp: 89-92°C, /."qj^³-17,6° (c = l_t0#DMF).

Elementaranalyse für ^C4o^H59^11^14*^H2^^: berechnet: C 52,05; H 5,90; N 21,25 gefunden: C 52,20; H 6,16; N 20,91

b) Herstellung von Arg-Arg-Gly-Phe-Phe-NH«

In 40 ml Essigsäure wurden 700 mg Z-Arg(NO₂)-Arg (NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂ gelöst und dann wurde 9 Stunden lang die katalytische Reduktion in Gegenwart von Palladium als Katalysator vorgenommen. Der Katalysator wurde abfiltriert und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde über eine mit Carboxymethylcellulose gefüllte Kolonne (3 χ 18 cm) geleitet und die Elution wurde unter Verwendung von 0,005N(I 1) bis 0,3N (l 1) wässerigem Ammoniumacetat vorgenommen. Die Fraktionen von 890 ml bis 1410 ml wurden vereinigt und lyophilisiert. Ausbeute: 380 mg (45/6), /"Ö7q²+2,4° (c = 0,5#, 5% Essigsäure).

Elementaranalyse für C₃₃H₄₈O^N₂.3C₂H₄O₃. ^2H₂O:

berechnet: C 51,40; H 7,15; N 18,93; gefunden: C 51,25; H 7,29; N 19.08

Aminosäureanalyse: Arg 2,02(2); GIy l,00(l); Phe 2,02(2) Peptidgehalt

Beispiel 41

ß-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂ a) Herstellung von Z-ß-Ala-Arg(N0₂)-GIy-OEt

26,3 g Z-Arg(NO₂)-GIy-OEt wurden mit 130 ml HBr-Essigsäure

509841/0973

und nach 60 min langem Schütteln bei Raumtemperatur mit Äthyläther versetzt. Der entstandene Niederschlag wurde abfiltriert und über Natriumhydroxid getrocknet.

Der getrocknete Niederschlag wurde in 150 ml DMF gelöst und die Lösung nach Eiskühlung mit Triäthylamin neutralisiert. Dann wurden 23,1 g Z-ß-Ala-ONB zugegeben und die Mischung wurde über Nacht gerührt. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand in 300 ml Äthylacetat, welches einen geringen Gehalt an n-Butanol aufwies, gelöst. Die Lösung wurde mit Wasser, einer gesättigten, wässerigen Natriumbicarbonatlösung (lOO ml χ 3) und einer gesättigten, wässerigen Natriumchloridlösung (100 ml χ 3) gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde bei vermindertem Druck abdestilliert und Äthyläther zugegeben. Das entstandene Pulver wurde abfiltriert und aus Äthanol-Äthylacetat umkristallisiert. Ausbeute« 22,9 g (75%), Fp: 97-99⁰C, /α_7^⁶'⁵-11,2° (c = 0,9% DMF).

Elementaranalyse für C₀₁H₀₁O₀N-:

d.i. OJL ö ι

berechnet: C 49,50; H 6,13; N 19,25 gefunden: C 49,51; H 6,06; N 18,93

b) Herstellung von Z-ß-Ala-Arg(NO₂)-GIy-OH

In einem Gemisch von 50 ml Aceton und 25 ml Wasser wurden 12,1 g Z-ß-Ala-Arg(NO₂)-GIy-OEt gelöst, dann wurden unter Kühlung mit Eis und Natriumchlorid innerhalb von 30 min 27,8 ml IN wässerige Natriumhydroxidlösung zugetropft. Die Mischung wurde unter gleichen Bedingungen eine Stunde und dann weitere 2 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt; nach Zugabe von 3,8 ml IN Salzsäure wurde das Aceton bei vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde mit 50 ml Wasser versetzt und das Gemisch mit 6N Salzsäure angesäuert. Man erhielt eine ölige Substanz, die bald erstarrte. Das so erhaltene feste Produkt wurde abfiltriert. Ausbeute: 10,3 g (86,0%), Fp: 101-103⁰C, /"o/^⁶'⁵-10,2° (c = l,0% DMF).

509841/0973

Elementaranalyse für ^ci9^H27°8^N7* ^/2H2^0:

berechnet: C 46,53; H 5,75; N 19,99 gefunden: C 46,28; H 5,41; N 20,01

c) Herstellung von Z-Phe-Tyr-OMe

In 100 ml Tetrahydrofuran wurden 5,10 g Tyr-OMe.HCl
suspendiert, nach Eiskühlung wurde die Suspension mit 3,08 ml Triäthylamin neutralisiert. Dazu wurden 5,99 g Z-Phe-OH,
3,94 g HONB und 4,54 g DCC gegeben und das Gemisch über Nacht gerührt. Der entstandene Dicyclohexylharnstoff wurde abfiltriert und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abgedampft. Der Rückstand wurde in 200 ml Äthylacetat gelöst. Die Lösung
wurde mit einer gesättigten, wässerigen Natriumbicarbonatlösung (100 ml χ 3), IN Salzsäure (lOO ml χ 3) und Wasser gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Nach Abdestillieren des Äthylacetats bei vermindertem Druck wurde Petroläther zugegeben. Man erhielt einen gelförmigen Rückstand, welcher abfiltriert und aus Athylacetat/Petroläther erneut
ausgefällt wurde. Die erzielte Ausbeute betrug 6,00 g (63%), Fp: 132-133°C, /"ä7p⁶'⁵-9,9^O (c = 1,0% DMF),

Elementaranalyse für Co7^28^6^2^! berechnet: C 68,05; H 5,92; N 5,88 gefunden: C 68,07; H 5,92; N 5,95

d) Herstellung von Z-Phe-Tyr-NH2

- In 40 ml mit Ammoniak gesättigtem Methanol wurden 3,0 g Z-Phe-Tyr-OMe gelöst und die Lösung wurde eine Woche lang in einem verschlossenen Behälter gelagert, worauf sich Nadeln
absetzten. Nach Abdampfen des Lösungsmittels bei vermindertem Druck wurde Äthyläther zugegeben, die entstandenen Kristalle wurden abfiltriert und aus Äthanol-Wasser umkristallisiert.
Die Ausbeute betrug 2,61 g (90%), Fp: 217-218⁰C, /~o7q⁶'⁵-28,6° (c = 1,0% DMF).

509841/0973

Elementaranalyse für ^C26^H27^5^N3^: berechnet: C 67,66; H 5,90; N 9,11 gefunden: C 67,45; H 5,88; N 9,05

e) Herstellung von Z-Phe-Phe-Tyr-NH₂

1,15 g Z-Phe-Tyr-NH₂ wurden mit einer kleinen Menge Anisol und darauf mit 11 ml 25%igerHBr-Essigsäure versetzt. Nach 40 min langem Schütteln bei Raumtemperatur wurde Äthyläther zugegeben. Der entstandene Niederschlag wurde abfiltriert und über Natriumhydroxid getrocknet. Gleichzeitig wurden 0,67 g Z-Phe-OH und 0,45 g HONB in 5 ml Tetrahydrofuran gelöst und unter Eiskühlung 0,52 g DCC zugegeben. Das Gemisch wurde 4 Stunden lang gerührt und der entstandene Dicyclohexylharnstoff abfiltriert. Die oben angeführte Aminokomponente /R-Phe-Tyr-NHp^ wurde in 10 ml DMF gelöst und die Lösung mit Triäthylamin neutralisiert. Dieser Lösung wurde die oben angeführte aktive Esterlösung zugegeben und die Mischung wurde über Nacht gerührt. Das Lösungsmittel wurde bei vermindertem Druck abdestilliert und Wasser zugegeben. Die entstandenen Kristalle wurden abfiltriert, mit Äthylacetat gewaschen und aus DMF/Äthylacetat umkristallisiert. Die Ausbeute betrug 1,01 g (74#), Fp: 218-221⁰C (Zersetzung), /fa_7p⁶'⁵-27,7⁰ (c = l,0&DMF).

Elementaranalyse für ^C35^H36^6^N4^:

berechnet: C 69,06; H 5,96; N 9,21 gefunden: C 69,01; H 6,02; N 9,23

f) Herstellung von Z-ß-Ala-Arg(NO₃)-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂

In einer Mischung von 30 ml Methanol und 20 ml DMF wurden 0,91 g Z-Phe-Phe-Tyr-NH₂ suspendiert und die katalytische Reduktion wurde 7 Stunden lang vorgenommen. Das Methanol wurde bei vermindertem Druck abdestilliert. Gleichzeitig wurden 0,72 g Z-ß-Ala-Arg(N0₂)-GIy-OH und 0,32 g HONB in 5 ml DMF gelöst und unter Eiskühlung 0,37 g DCC zugegeben. Das Gemisch wurde 6 Stunden lang gerührt und der entstandene Dicyclohexyl-

509841/0973

harnstoff abfiltriert. Das Filtrat wurde der oben angeführten Arainkomponente /H-Phe-Phe-Tyr-NH₂_7zugegeben, dann wurde über Nacht gerührt. Das Lösungsmittel wurde bei vermindertem Druck abdestilliert, um einen Feststoff zu erhalten, der mit Wasser trituriert wurde. Das entstandene Pulver wurde abfiltriert und aus DMF/Äthylacetat erneut ausgefällt. Die Ausbeute betrug 0,88 g (62#), Fp: 174-177⁰C, /q_7p⁶⁾⁵-15,0° (c= l,0£ DMF)

Elementaranalyse für C₄₄H₅₅O..N...H₂O:

berechnet: C 57,79; H 6,01; N 16,12 gefunden: C 57,54; H 6,18; N 16,21

g) Herstellung von ß-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH,^

In 30 ml Essigsäure wurden 740 g Z-ß-Ala-Arg(NO₂)-GIy-Phe-Phe-Tyr-NH₂ gelöst und die katalytische Reduktion wurde innerhalb von 7 Stunden in Gegenwart von Palladium als Katalysator vorgenommen. Der Katalysator wurde abfiltriert und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde über eine mit Carboxymethyl-Sephadex gefüllte Kolonne (1,6 cm χ 15 cm) geleitet und die Elution wurde nach dem linearen Gradientenverfahren unter Verwendung von 0,005N (700 ml) bis IN (700 ml) wässerigem Ammoniumacetat durchgeführt. Die Fraktionen von 580 ml bis 790 ml wurden vereinigt und lyophilisiert. Die Ausbeute betrug 540 mg (75$), £o7§⁶-20,0⁰ (_c = 0,5# Wasser).

Elementaranalyse für ^C38^H50°7^Nl0*^2C2^H4°2*^3H2^Oi berechnet: C 54,06; H 6,91; N 15,01 gefunden: C 54,20; H 6,50; N 14,99

Aminosäureanalyse: Arg 0,95(1)1 GIy 1,05(1); Tyr l,00(l); Phe 2,00(2) Peptidgehalt 74#.

h) Herstellung von ß-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NHg-Di-citrat

Das Acetat ß-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NHg-Diacetat-txihydrat (9,33 g) wurde in 20 ml Wasser gelöst und es wurden

509841/0973

2,2 g Zitronensäure-Monohydrat unter Rühren zugegeben. Das gebildete kristalline Präcipitat wurde abfiltriert und gewaschen, und zwar mit wenig kaltem Wasser. Ausbeute: 10,4 g des entsprechenden Dicitrats. /q_7p -19,6° (c = l,0% Wasser).

ElementaranaIyse für ^C38^H*o°7^NlO*^2C6^H8°7^: berechnet: C 52,54; H 5,82; N 12,25 gefunden: C 52,28; H 5,87; N 12,46

Beispiel 42
^-Abu-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂

a) Herstellung von Z-^-Abu-Arg(NO₂)-GIy-OEt

4,38 g Z-Arg(NO₂)-GIy-OEt wurden mit 40 ml 25#iger HBr-Essigsäure und nach 30 min langem Schütteln bei Raumtemperatur mit Äthyläther versetzt. Der entstandene Niederschlag wurde abfiltriert und über Natriumhydroxid getrocknet. Dann wurde der Niederschlag in 30 ml DMF gelöst und nach Eiskühlung wurde die Lösung mit Triäthylamin neutralisiert. Dieser Lösung wurden 4,16 g Z-^-Abu-ONB zugegeben und das Gemisch wurde über Nacht gerührt. Das Lösungsmittel wurde bei vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand mit Wasser versetzt. Dann wurde das Wasser dekantiert, der Rückstand wurde mit Äther versetzt und erstarrte. Er wurde dann abfiltriert und aus Acetonitril erneut ausgefällt. Die Ausbeute betrug 2,5 g (48%), Fp* 60-62⁰C, faJ^--llA° (c = l,0# DMF).

Elementaranalyse für C₂₂HoQOgN₇:

berechnet: C 50,47; H 6,35; N 18,73 gefunden: C 50,12; H 6,51; N 18,73

b) Herstellung von Z-Jf-Abu-Arg (NO₂)-GIy-OH

In 20 ml Aceton wurden 2,0 g Z-tf--Abu-Arg(NO₂)-GIy-OEt gelöst und dann wurden unter Eiskühlung 5,7 ml IN wässerige Natriumhydroxidlösung zugegeben. Die Misdi ung wurde 2 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt. Nach Zugabe von 6 ml IN

509841/0973

Salzsäure wurde das Aceton bei vermindertem Druck abdestilliert. Die entstandenen Kristalle wurden abfiltriert und aus Äthanol/Wasser umkristallisiert. Die Ausbeute betrug 1,86 g (98#), Fp: 113-115⁰C, /"07^-20,0° (c = l,l# DMF).

Elementaranalyse für C₂qH₂q0₈N₇.H₂0:

berechnet: C 56,78; H 6,09; N 19,10 gefunden: C 57,12; H 5,90; N 19,23

c) Herstellung von Ζ-Γ-Abu-Arg(NO₃)-Gly-Phe-Phe-Tyr-NHg

1,34 g Z-Phe-Phe-Tyr-NH₂ wurden mit einer kleinen Menge Anisol versetzt, dann wurden 13 ml 25%ige HBr-Essigsäure zugegeben.

Nach 45 min langem Schütteln bei Raumtemperatur wurde Äthyläther zugegeben und der entstandene Niederschlag wurde abfiltriert und über Natriumhydroxid getrocknet. Gleichzeitig wurden 0,99 g Ζ-,Γ-Abu-Arg (NO₃)-GIy-OH und 0,43 g HONB in 5 ml DMF unter Eiskühlung gelöst und 0,50 g DCC zugegeben, das Gemisch wurde 6 Stunden lang gerührt, der Dicyclohexylharnstoff abfiltriert. Die Aminkomponente H-Phe-Phe-Tyr-NH₂ wurde in 10 ml DMF gelöst und die Lösung wurde mit Triethylamin neutralisiert. Dieser Lösung wurde die oben angeführte aktive Esterlösung zugegeben und das Gemisch wurde über Nacht gerührt. Darauf wurde das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert una Wasser zugegeben. Das entstandene Pulver wurde abfiltriert, mit Äthylacetat gewaschen und erneut aus DMF/ Äthylacetat ausgefällt. Die Ausbeute betrug 1,12 g (58%), Fp: 139,5-141⁰C, CvJ^-13,2° (c = l,4# DMF).

Elementaranalyse für C₄₇H₅₇O,.N,..H₂O:

berechnet: C 58,19; H 6,13; N 15,89 gefunden: C 57,76; H 6,43; N 15,91

d) Herstellung von ^-Abu-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂

In 30 ml Essigsäure wurden 800 mg Z-^-Abu-Arg(NO₃)-GIy-Phe-Phe-Tyr-NH₂ gelöst, dann wurde 14 Stunden lang die katalytische Reduktion in Gegenwart von Palladium als Katalysator

509841/0973

durchgeführt. Der Katalysator wurde abfiltriert und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde über eine mit Carboxymethyl-Sephadex gefüllte Kolonne (1,5 χ 10 cm) geleitet und die Elution wurde nach dem. Gradientenverfahren unter Verwendung von O,1N bis IN (je 700 ml) wässerigem Ammoniumacetat durchgeführt. Die Fraktionen von 410 ml bis 600 ml wurden gesammelt und lyophilisiert. Die Ausbeute betrug 412 mg (5230), CaJ^-IU,!⁰ (c = 0,5^ Wasser).

Elementaranalyse für ^C39^H52°7^Nio*^2Ο2^Η4^Ο2'^4Η2^0ί berechnet: C 54,02; H 7,10; N 14,52 gefunden: C 54,08; H 7,07; N 14,60

Aminosäureanalyse: Arg 0,96(l); GIy l,00(l); Tyr 0,97(1); Phe 2,10(2) Peptidgehalt 84%.

Beispiel 43

£-Acap-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂ ' a) Herstellung von Z-£-Acap-Arg(N0₂)-GIy-OEt

2,41 g Z-Arg(NO₂)-GIy-OEt wurden mit 12 ml 25%iger HBr-Essigsäure versetzt und nach 40 min langem Schütteln bei Raumtemperatur wurde Äthyläther zugegeben. Der entstandene Niederschlag wurde abfiltriert und über Natriumhydroxid getrocknet.

Gleichzeitig wurden 1,33 g Z-£-Acap-OH und 0,99 g HONB in 5 ml Tetrahydrofuran gelöst und unter Eiskühlung 1,14 g DCC zugegeben. Dieses Gemisch wurde 4 Stunden lang gerührt und der entstandene Dicyclohexylharnstoff abfiltriert. Die oben angeführte Aminokomponente wurde in 10 ml DMF gelöst und nach Neutralisieren der Lösung mit Triethylamin wurde die oben angeführte aktive Esterlösung zugegeben.

Das Gemisch wurde über Nacht gerührt und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde in 50 ml Äthylacetat gelöst und die Lösung mit Wasser, einer ge-

509841/0973

sättigten, wässerigen Natriumbicarbonatlosung (50 ml χ 2) und Wasser gewaschen und über wasserfreiem Natriumcarbonat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde bei vermindertem Druck abdestilliert und Petroläther zugegeben. Die entstandenen Kristalle wurden aus Wasser/Äthanol/Äthylacetat umkristallisiert. Die Ausbeute betrug 2,1 g (7656), Fp: 85-87⁰C, /α_7ρ⁴-11,9° (c = l,0# DMF).

Elementaranalyse für Cp₄H₃₇OgN₇:

berechnet: C 52,26; H 6,76; N 17,78 gefunden: C 52,43; H 6,64; N 17,76

b) Herstellung von Z-8-Acap-Arg(NO₂)-GIy-OH

In 10 ml Aceton wurden 1,8 g Z-ε-Acap-Arg(NO₂)-GIy-OEt gelöst und unter Eiskühlung 2,9 ml 2N wässerige Natriumhydroxidlösung zugegeben. Das Gemisch wurde 2 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt. Nach Zugabe von 2,5 ml IN Salzsäure wurde das Aceton bei vermindertem Druck abdestilliert. Dem Rückstand wurden 10 ml Wasser zugegeben und die unlöslichen Stoffe wurden abfiltriert. Das Filtrat wurde mit IN Salzsäure angesäuert, worauf sich Kristalle bildeten. Die ausgefällten Kristalle wurden abfiltriert. Die Ausbeute betrug 1,59 g (93%), Fp: 97,5-99°C, ΖΓ«7ο⁴-^1Ο'⁷° (c-1,056 DMF).

Elementaranalyse für C₂₂H₃₃OgN₇^₂O:

berechnet: C 48,79; H 6,52; N 18,10 gefunden: C 48,50; H 6,28; N 18,23

c) Herstellung von Z-£-Acap-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-N^

1,22 g Z-Phe-Phe-Tyr-NH₂ wurden mit einer kleinen Menge Anisol und darauf mit 10 ml 25#iger HBr-Essigsäure versetzt. Die Mischung wurde 40 min lang bei Raumtemperatur gerührt und dann wurde Äthyläther zugegeben. Der Niederschlag wurde abfiltriert und über Natriumhydroxid getrocknet. Gleichzeitig wurden 1,05 g Z-E-Acap-Arg(NO₂)-GIy-OH und 0,36 g HONB in 10 ml DMF gelöst und unter Eiskühlung 0,42 g DCC zugegeben.

509841/0973

Das Gemisch wurde 6 Stunden lang gerührt und der als Nebenprodukt anfallende Dicyclohexylharnstoff abfiltriert. Die oben angeführte Aminokomponente wurde in 10 ml DMF gelöst und die Lösung mit Triethylamin neutralisiert.

Dieser Lösung wurde die oben angeführte aktive Esterlösung zugegeben und die Mischung wurde über Nacht gerührt. Das Lösungsmittel wurde bei vermindertem Druck abdestilliert und Wasser zugegeben. Das entstandene Pulver wurde abfiltriert, mit Äthylacetat gewaschen und aus DMF/Äthylacetat erneut ausgefällt. Die Ausbeute betrug 1,01 g (57%), Fp: 149-151⁰C,

⁶-l2,9° (c«l,l# DMF).

Elementaranalyse für j^i^n ₂

berechnet: C 59,50; H 6,32; N 15,58 gefunden: C 59,63; H 6,43; N 15,03

d) Herstellung von E-Acap-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH«

In 40 ml Essigsäure wurden 700 mg Z-£-Acap-Arg(NO₂)-GIy-Phe-Phe-Tyr-NH2 gelöst, dann wurde 14 Stunden lang in Gegenwart von Palladium als Katalysator die katalytische Reduktion durchgeführt. Der Katalysator wurde abfiltriert und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde über eine mit Carboxymethyl-Sephadex gefüllte Kolonne (1,8 χ 12 cm) geleitet und die Elution wurde nach dem linearen Gradientenverfahren unter Einsatz von 0,1N (700 ml) bis IN (700 ml) wässerigem Ammoniumacetat durchgeführt. Die Fraktionen von 430 bis 550 ml wurden gesammelt und lyophilisiert. Die Ausbeute betrug 430 mg (62#), fOJ^-lZ^⁰ (c = 0,5# Wasser).

Elementaranalyse für C₄₁H₅₆O₇N₁₀.2C₂H₄O₃.3H₂Oi'

berechnet: C 55,43; H 7,24; N 14,37 gefunden: C 55,48; H 7,39; N 14,47

Aminosäureanalyse: Arg 1,00(1); GIy 1,00(1); Tyr 1,00(1); Phe 2,07(2) Peptidgehalt

509841/0973

Beispiel 44
Lys-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂

a) Herstellung von Di-Z-Lys-Arg(NO₂)-GIy-OEt

Unter Verwendung von 2,07 g Di-Z-Lys-OH wurde das in Beispiel 43 a) beschriebene Verfahren eingesetzt, um die gewünschte Verbindung in Form eines Gels zu erhalten. Erneutes Ausfällen aus Wasser/Äthanol/Äthylacetat ergab 2,57 g (73%), Fp: 161-162°C, Γα7^-11,9° (c = 1,0% DMF).

Elementaranalyse für Cg₂H^OjONg: berechnet: C 54,85; H 6,33; N 15,99 gefunden: C 54,45; H 6,05; N 15,99

b) Herstellung von Di-Z-Lys-Arg(NO₂)-GIy-OH

In 10 ml Aceton wurden 2,0 g Di-Z-Lys-Arg(NO₂)-GIy-OEt gelöst und während der Eiskühlung wurden 2,1 ml 2N wässerige Natriumhydroxidlösung zugegeben. Die Mischung wurde 2 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt. Nach Zugabe von 1,4 ml IN Salzsäure wurde das Aceton bei vermindertem Druck abdestilliert, Der Rückstand wurde mit 10 ml Wasser verdünnt und die unlöslichen Substanzen wurden abfiltriert. Die Lösung wurde dann mit IN Salzsäure angesäuert und der entstandene gelförmige Niederschlag abfiltriert. Die Ausbeute betrug 1,78 g (93%), Fp: 131-132,5⁰C, Ζα7^⁴-10,5° (c = l,0 DMF).

Elementaranalyse für ^C30^H40°10^N8* '^H₂O: berechnet: C 51,49; H 6,20; N 16,02 gefunden: C 51,43; H 5,92; N 16,23

c) Herstellung von Di-Z-Lys-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂

Unter Verwendung von 1,21 g Di-Z-Lys-Arg(NO₂)-GIy-OH wurde das in Beispiel 43 c) beschriebene Verfahren wiederholt, um die gewünschte Verbindung in Form eines Gels zu erhalten. Die Ausbeute betrug 1,21 g (58%), Fp: 199-203⁰C, Z~°l7d⁴-13,3° (c = l,0% DMF).

509841/0973

Elementaranalyse für ^C57^H68^13^N12*^^H2^0: berechnet; C 58,75; H 6,23; N 14,42 gefunden: C 58,70; H 6,26; N 14,72

d) Herstellung von Lys-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂

In 30 ml Essigsäure wurden 1,00 g Di-Z-Lys-Arg(NO₂)-GIy-Phe-Phe-Tyr-NHp gelöst und dann wurde 20 Stunden lang die katalytische Reduktion in Gegenwart von Palladium als Katalysator durchgeführt. Der Katalysator wurde abfiltriert und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde über eine mit Carboxymethyl-Sephadex gefüllte Kolonne (1,8 χ 10 cm) geleitet. Die Elution wurde nach dem linearen Gradientenverfahren unter Verwendung von 0,1N (500 ml) bis IN (500 ml) wässerigem Ammoniumacetat durchgeführt und die Fraktionen von 650 ml bis 890 ml wurden gesammelt und lyophilisiert. Die Ausbeute betrug 468 mg (50%), /"ά_7§⁶-10,6° (c = 0,5% Wasser).

Elementaranalyse für C₄₁H₅₇O₇N₁₁.3C₂H₄O₂.4H₂O:

berechnet: C 52,84; H 7,27; N 14,43 gefunden: C 52,70; H 7,31; N 14,72

Aminosäureanalyse: Arg 1,00(1); Lys 0,94(l); GIy l,00(l); Tyr 1,00(1); Phe 2,06(2), Peptidgehalt 82%.

Beispiel 45

a,jr-Dab-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂
a) Herstellung von Di-Z-a-f-Dab-Arg(NO₂) -GIy-OEt

In 40 ml Äthyläther wurden 2,84 g Di-Z-ct-jr-Dab-OH-DCHA suspendiert (DCHA ist eine Abkürzung für Dicyclohexylamin) und die Suspension wurde mit 0,5N Schwefelsäure geschüttelt. Die Ätherschicht wurde mit Wasser gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde abdestilliert und das in Beispiel 43 a) beschriebene Verfahren

509841/0973

wurde wiederholt, um die gewünschte Verbindung in Form eines Gels zu erhalten. Dieses wurde aus Wasser/Äthanol/Äthylacetat erneut ausgefällt. Die Ausbeute betrug 2,36 g (70%), Fp: 153-156⁰C, /V7^⁴-9,4° (c = L,0% DMF).

Elementara/ialyse für ^C30

berechnet: C 53,56; H 5,99; N 16,66 gefunden: C 53,26; H 5,84; N 16,24

b) Herstellung von Di-Z-a-Jf-Dab-Arg (NO₂)-GIy-OH

In 10 ml Aceton wurden 2,0 g Di-Z-oc,^-Dab-Arg(NO₂)-GIy-OEt gelöst und unter Eiskühlung 2,97 ml 2N wässeriges Natriumhydroxid zugetropft. Das Gemisch wurde unter den gleichen Bedingungen eine Stunde lang gerührt, dann wurden 3 ml IN Salzsäure zugegeben. Das Aceton wurde bei vermindertem Druck abdestilliert und 10 ml Wasser zugegeben. Die unlöslichen Substanzen wurden abfiltriert und das Filtrat wurde mit IN Salzsäure angesäuert. Der entstandene gelförmige Niederschlag wurde abfiltriert. Die Ausbeute betrug 1,67 g (90%), Fp: 112-113⁰C, ÖÜ^-%*3° (c = l,l# DMF).

Elementaranalyse für C₂₈H₃^O._QNg.H₂O:

berechnet: C 50,55; H 5,76; N 16,89 gefunden: C 50,53; H 5,59; N 17,19

c) Herstellung von Di-Z-a,f-Dab-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂

Unter Verwendung von 1,12 g Di-Z-a,f-Dab-Arg(NO₂)-GIy-OH wurde genau das in Beispiel 43 c) beschriebene Verfahren verfolgt, um die gewünschte Verbindung in Form eines Gels zu erhalten. Die Ausbeute betrug 1,02 g (51&), Fp: 191-195°C, £6.-_14i0o (c=0,9#DMF).

Elementaranalyse für ^C55^H64⁰

berechnet: C 59,02; H 5,95; N 15,02 gefunden: C 59,13; H 6,14; N 15,46

S0984.1/0973

d) Herstellung von a_fjr-Dab-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂

In 30 ml Essigsäure wurden 600 mg Di-Z-oc,f-Dab-Arg (NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH2 gelöst und dann wurde 12 Stunden lang
die katalytische Reduktion in Gegenwart von Palladium als
Katalysator durchgeführt. Der Katalysator wurde abfiltriert
und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abgedampft. Der Rückstand wurde über eine mit Carboxymethyl-Sephadex gefüllte Kolonne (l,8 χ 10 cm) geleitet und die Elution wurde nach dem linearen Gradientenverfahren unter Verwendung von O,1N (500 ml) bis IN (500 ml) wässerigem Ammoniumacetat durchgeführt. Die
Fraktionen von 490 ml bis 620 ml wurden vereinigt und lyophilisiert. Die Ausbeute betrug 241 mg (43%), faV^-ll,9°
{c =0,6% Wasser).

Elementaranalyse für ^C39^H53°₇ ^N ₁₁»^3C2^H4^O2*^4H2^O: berechnet: C 51,96; H 7,08; N 14,82 gefunden: C 52,12; H 6,99; N 15,31

Aminosäureanalyse: Arg l,00(l); Dab 1,04(1); GIy 1,09(1); Tyr 1,02(1); Phe 2,13(2), Peptidgehalt-79#.

509841/0973

Liste der Beispiele

3-Phe-R,

■ Ex.	I	C-Zahl	R ' ^R2,	C-Zahl	*3
1	H '	-	Pro ι	5	Tyr-M₂
2	GIy I	2	Pro ' j	5	Tyr-MH₂
3	Y-At)U ι	4	Pro j	5	TyT-MH₂
4	ε-Acap	6	Pro j	5	Tyr-MH₂
5	Lys t	*6	Pro I	5	Tyr-MH₂
6	α,γ-Datf	*4	I Pro ,	5	Tyr-MH₂
7	ß-Ala i	3	Pro j	5	TyT-MH₂
8	ß-Ala '	3	Pro I	5	M₂
9	ß-Ala I	3	ß-Ala	3	Tyr-MH₂
10	Ala ^!	3	ß-Ala¹ .	3	TyT-MH₂
11	ß-Ala ]	3	Sar j	3	Tyr-ÜH₂
12	Leu I	6	Pro '	5	Tyr-m₂
13	ß-Ala I	3	Phe ι	9	TyT-ITH₂
14	ß-Ala I	3	Leu I	6	Tyr-Gly-MH₂
15	ß-Ala '	3	Ser ι	3 ~~^	Tyr-Gly-MH₂
16	ß-Ala Γ	3	Pro t	5	Tyr-Thr-Pro-Lys-Ala
17	ß-Ala ι I	3	GIy I	2	Tyr-Leu
18	ß-Ala ι	3	GIy '	2	TyT-AIa-KH₂
19	ß-Ala \	3	GIy !	2	Tyr-Thr-Pro
20	ε-Acap ^l	6	GIy ι	2	Tyr-Thr-Pro
21	Lys I	*6	GIy J	2	Tyr-Thr-Pro
22	ß-Ala l	3	GIy !	2	Tyr-Thr-Pro-Lys-Ala
23	GIy J	2	GIy : I	2	Tyr-Thr-Pro-Lys-Ala

S09841/0973

Ex.	R₁ j C-Zahl	6	R₂	C-Zahl	^R3
24	Leu	3	GIy	ί 2	Tyr-Gly-KH₂
25	ß-Ala	•4	GIy	2	Tyr-Ala-Gly-KH₂
26	α,γ-Dab	2	GIy	ro	Tyr-Ala-Gly-KH₂
27	GIy	-*	GIy	2	ro
28	D-AIa	9	GIy	2	KH₂
29	Phe	6	GIy	2	KH₂
30	Leu	4	GIy	2	Tyr-KH₂
31	α-Abu	6	GIy	2	ΠΊ γ ·ν-> ^,.TijTT
32	KIe	5	GIy	2	'Fv τ* ™"Ti!TT
33	VaI	i 3	GIy	2	Tyr-KH₂
34	ß-Ala	4	GIy	2	KH₂
35	1 γ-Abu	5	GIy	2	KH₂
36	5-Aval	6	GIy	2	MH₂
37	ε-Acap	.6	GIy	2	KH₂
38	Lys	*4	GIy	2	KH₂
39	α,γ-Dab	*6	GIy	2	KH₂
40	Arg	3	GIy	2	KH₂
41	ß-Ala	4	GIy	2	Tyr-KH₂
42	γ-Abu	6	GIy	2	Tyr-KH₂
43	ε-Acap	*6	GIy	2	Tyr-KH₂
44	Lys	*4	GIy	2	Tyr-KH₂
45	α,γ-Dab	GIy	2	Tyr-KH₂

* BasJ9die Aminosäure

509841/0973

— 2 —

α-Abu (a-Amino"buttersäure )

γ-Abu (γ-Aminobuttersäure) ε-Acap (ε-Aminocapronsäure) Ala._ (Alanin )

ß-Ala (ß-Alanin ) Arg (Arginin )

5-Aval (5-Aminovaleria ηsaure) α,y-Dab(α,γ-Diaminobuttersäure)

α,ß-Diaminopropion sä ure

GIy (GIyοin ) His (Histidin )

Leu (Leucin ) Lys (Lysin )

Nie (Morleucin ) Phe (Phenylalanin )

Pro (Prolin ) CH₅CH₂CK-COOH

₅CH₂CK

IiH₂CH₂CH₂CH₂COOH

CH_xCH-COOH

NH₂CH₂CH₂COOH

HN=C~mi-( CH₂ ) ,CH-COOH NH K

M₂ (CH₂) ^COOH

NH₂CH₂CH₂CH-COOh NH

CH₂-CH-COOH NH₂ M₂

IiH₂-CH₂-COOH N V

CHCH₉CH-COOH NH₂

MH₂(CH₂)₄CH-C00H

NH

₃(CH₂)^CH-COOH 2

ν VcH₂CH-COOH ^X-^ N

■-COOH

5098Λ1/0973

Sar (Sarcosiri .). CH₃HHCH₂COOH

Ser (Serin ) HOCHgCHCOOH

Thr (Threonin ) CH₅CH-CH-COOH

OH KH₂

Tyr (Tyrosin) HO-/ V

VaI (Valin) CH

In allen Patentansprüchen bedeuten - wenn nicht ausdrücklich anders angeführt - in allen Fällen, in welchen optische Isomere der Aminosäuren vorliegen, die Aminosäuren jeweils einzelne optische Isomere und jedes racemische Gemisch.

509841/0973

Claims

Patentansprüche :

worin R₁ Wasserstoff oder einen "basischen oder neutralen Aminosäurerest und R₂ einen neutralen Aminosäurerest bedeuten und R, M₂ , Tyr-NH₂ oder ein Rest von aus 1 bis Aminosäureresten bestehenden Tyrosylpeptides oder ein Rest eines Amides eines Tyrosylpeptides ist, vorausgesetzt, daß, wenn R₁ Wasserstoff ist, R₂ Pro bedeutet, dadurch gekennzeichnet, daß eine dem Rest R₁ entsprechende Aminosäure, ein Arginin, in welchem R₁ Wasserstoff bedeutet, ein Peptidfragment des Polypeptids der allgemeinen Formel (I), welches den mit R₁ bezeichneten Aminosäurerest aufweist, oder eine Arginylgruppe, wenn R₁ Wasserstoff an ihrer N-endständigen Aminosäure bedeutet, mit dem verbleibenden Fragment des Polypeptids der Formel (I) kondensiert wird, wobei die nicht für die Teilnahme an der beabsichtigen Kondensation bestimmten Amino- oder Carboxylgruppen der Ausgangsinaterialien geschützt und die für die Teilnahme an der beabsichtigten Kondensation bestimmten Amino- oder Carboxylgruppen aktiviert werden können und die gegebenenfalls vorhandenen Schutzgruppen aus dem entstandenen Produkt entfernt werden.

2, Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) hergestellt wird, worin R₁ den Rest einer basischen oder neutralen Aminosäure, die eine andere ist als eine neutrale «/-Aminosäure, R₂ GIy und R₅ M₂ oder Tyr-NH₂ bedeuten.

509841/0973

— go —

3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) hergestellt wird, worin R₂ einen neutralen Aminosäurerest mit mindestens 3 C-Atomen bedeutet.

4. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) hergestellt wird, worin R-, einen basischen oder neutralen Aminosäurerest mit bis zu 10 C-Atomen und R₂ einen neutralen Aminosäurerest mit bis zu 10 C-Atomen bedeuten.

5. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der allgemeinen Formel

R₁-L-Arg—R₂-L—Phe—L—Phe—R₅ , (I ·)

hergestellt wird, worin R- Wasserstoff oder einen basischen oder neutralen Aminosäurerest, R₂ einen neutralen L-Aminosäurerest und R₅ HH₂ , L-TyT-NH₂ , den Rest eines
L-Tyrosyl-peptides mit 1 bis 5 L-Aminosäureresten oder den Rest eines Amides des L-Tyrosylpeptides bedeutet, mit der Maßgabe, daß, wenn R-j Wasserstoff bedeutet, R₂ für
L-Pro steht.

6. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der allgemeinen Formel (i) hergestellt wird, worin alle Aminosäurereste, die die Polypeptide (I)
aufbauen, in der Form der L-Konfiguration vorliegen.

7. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der allgemeinen Formel (I¹) hergestellt wird, worin die Aminosäurereste R^ in der Form der
D-Konfiguration vorliegen.

509841/0973

8, Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) hergestellt wird, worin R.. ß-Ala "bedeutet.

9. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) hergestellt wird, worin R₂ GIy bedeutet.

10, Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) hergestellt wird, worin R₂ Pro bedeutet,

11, Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der allgemeinen Formel (I¹) hergestellt wird, worin R₂ L-Prο bedeutet,

12, Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) hergestellt wird, worin R^ MH₂ bedeutet.

13, Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) hergestellt wird, worin R, Tyr-NH₂ bedeutet.

H. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der allgemeinen Formel (I') hergestellt wird, worin R, L-Tyr-HH₂ bedeutet.

15, Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) hergestellt wird, worin R₂ GIy und R, Tyr-iIH₂ bedeuten,

16, Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der allgemeinen Formel (I') hergestellt v/ird, worin R₂ GIy und R, L-Tyr-NH₂ bedeuten.

509841/0973

17. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) hergestellt wird, worin R₂ Pro und R- Tyr-HH₂ "bedeuten.

18, Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der allgemeinen Formel (I') hergestellt wird, worin R L-Pro und R^ L-Tyr-M₂ "bedeuten.

19» Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) hergestellt wird, worin R₁ ß-Ala und R₂ G-Iy "bedeuten.

• 20. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) hergestellt wird, worin R₁ ß-Ala und R Pro bedeuten.

21. Verfahren nach Anspruch 5» dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der allgemeinen Formel (I^f) hergestellt wird, worin R ß-Ala und R₂ L-Pro bedeuten.

22. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) hergestellt wird, worin R₁ ß-Ala und R^ M₂ bedeuten.

23. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) hergestellt wird, worin R₁ ß-Ala und R^ Tyr-M₂ bedeuten.

24. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der allgemeinen Formel (I¹) hergestellt wird, worin R₁ ß-Ala und R^ L-Tyr-HH₂ bedeuten.

25. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß L-Arg-L-Pro-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-KH₂ hergestellt wird.

26. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß Gly-L-Arg-L-Pro-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-M₂ hergestellt
wird.

509841/0973

27« Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß f-Abu-I-Arg-L-Pro-L-Phe-I-Phe-I-Tyr-NH₂ hergestellt wird.

28« Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß e-Acap-L-Arg-L-Pro-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-Mg hergestellt wird.

29, Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß L-Lys-L-Arg-L-Pro-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-UH₂ hergestellt wird,

30, Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß l-ct,£^v-Dao-L-Arg-L-Pro-L-?he-L-Phe-L-Tyr-Mi₂ hergestellt wird.

31. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß ß-Ala-L-Arg-i-Pro-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-NH₂ hergestellt wird.

32, Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß ß-Ala-L-Arg-L-Pro-L-Phe-I-Phe-NH₂ hergestellt wird.

33. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß ß-Ala-I-Arg-ß-Ala-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-EH₂ hergestellt wird.

34. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß L-Ala-I-Arg-ß-Ala-L-Phe-I-Phe-L-Tyr-11H₂ hergestellt wird,

35« Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß ß-Ala-L-Arg-Sar-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-NH₂ hergestellt wird.

36. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß L-Leu-L-Arg-L-Pro-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-M₂ hergestellt wird.

509841/0973

37. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,

daß ß-Ala-L-Arg-L-Phe-L-Phe-L-Phe-I-Tyr-l·^ hergestellt wird.

38. "Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß ß-Ala-L-Arg-I-Leu-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-Gly-HH₂ hergestellt wird.

39« Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß ß-Ala-L-Arg-L-Ser-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-Gly-HH₂ hergestellt wird.

40. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß ß-Ala-L-Arg-L-Pro-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-L-Thr-L-Pro-L-Lys-L-AIa hergestellt wird.

41. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß ß-Ala-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-L-Leu hergestellt wird.

42. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß ß-Ala-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-I-Tyr-L-Ala-BH₂ hergestellt wird,

43. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß ß-Ala-I-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-I-Thr-L-Pro hergestellt wird,

44. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß ε-Acap-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-L-Thr-I-Pro hergestellt wird.

45. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß L-Lys-L-Arg-Gly-L-Phe-L-?he-L-Tyr-L-Thr-L-Pro hergestellt wird.

S09841/0973

46, Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß ß-Ala-l-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe~L-Tyr-L-Thr-L-Pro-L-Lys-L-AIa hergestellt wird,

47« Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß Gly-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-L-Thr-L-Pro-L-Iys-L-Ala hergestellt wird,

48. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß L-Leu-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-Gly-Mg hergestellt wird,

49. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,

daß ß-Ala-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-L-Ala-Gly-Mg hergestellt wird.

50. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß L-öt,f-Dab-I-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L·-Tyr-L-Ala-Gly-m₂ hergestellt wird,

51. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß Gly-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-NH₂ hergestellt wird.

52. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß D-Ala-L-Arg-Gly-L-Phe-I-Phe-3H₂ hergestellt wird,

53. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß I-Phe-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-MIp hergestellt wird.

54. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß L-Leu-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-HH₂ hergestellt
wird.

55. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß I-cC~Abu-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L~Tyr-MI₂ hergestellt wird,

56. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß L-Nle-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-NH₂ hergestellt wird.

509841/0973

57, Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß L-Val-L-Arg-Gly-L-Phe~L-Phe-L-Tyr-m₂ hergestellt
wird.

58, Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß ß-Ala-I-Arg-G-ly-L-Phe-L-Phe-NHp hergestellt wird.

59, Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß if-Abu-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-ira^ hergestellt wird.

60, Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß 6-Aval-I-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe~NH₂ hergestellt wird,

61, Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß a-Acap-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-M₂ hergestellt wird.

62, Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß I-Lys-L-Arg-Gly~L-Phe~L-Phe-m₂ hergestellt wird.

63, Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß Ii-iC, t-Da"b-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-HH₂ hergestellt wird,

64« Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß L-Arg-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-KH₂ hergestellt wird.

65. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß ß-Ala-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-Mg hergestellt
wird,

66. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß Jf-A"bu-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-13H₂ hergestellt
wird.

67. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß e-Acap-I-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-I-Tyr-NHg hergestellt wird.

509841/0973

68, Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß L-Lys-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-MH₂ hergestellt wird.

69. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß L-ctjV'-Dab-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-liHg hergestellt wird,

(70. Polypeptide der Formel

^-^ R - Arg - Rp - Phe - Phe - R , (i)

worin R. Wasserstoff oder einen basischen oder neutralen Aminosäurerest und R₂ einen neutralen Aminosäurerest bedeuten und R_ NHp, Tyr-NH oder ein Rest von aus 1 bis 5 Aminosäureresten bestehenden Tyrosylpeptides oder ein Rest eines Amides eines Tyro»ylpeptides ist, vorausgesetzt, daß, wenn R- Wasserstoff ist, R„ Pro bedeuten.

71. Polypeptide nach Anspruch ?ö, worin R- den Rest einer basischen oder neutralen Aminosäure, die eine andere ist als eine neutral· O^-Aminosäure, R GIy und R NH₂ oder Tyr-NH₂ bedeuten.

72. Polypeptide nach Anspruch T-O, worin R„ einen neutralen Aminosäurerest mit mindestens 3 C-Atomen bedeutet.

73. Polypeptide nach Anspruch?0, worin R einen basischen oder neutralen Aminosäurerest mit bis zu 10 C-Atomen und R_ einen neutralen Aminosäurerest mit bis zu 10 C-Atomen bedeuten.

. Peptide der Formel
R₁-L- Arg - R₂ - L - Phe - L - Phe - R , (i»)

509841/0973

worin R Wasserstoff oder einen basischen oder neutralen Aminosäurerest, R_? einen neutralen L-Aminosäurerest und R NH₂ , L-Tyr-NHp , den Rest eines L-Tyrosyl-peptides mit 1 bis 5 L-Aminosäureresten oder den Rest eines Amides des L-Tyrosylpeptides bedeutet, mit der Maßgabe, daß, wenn R₁ Wasserstoff bedeutet, R für L-Pro steht.

75«Peptide nach Anspruch 7^> worin alle Aminosäuren, die die Polypeptide (i) aufbauen, in der Form der L-Konfiguration vorliegen.

76.Peptide nach Anspruch 74, worin die Aminosäurerest· R in der Form der D-Konfiguration vorliegen.

77· Peptid nach Anspruch 70* worin R₁ ß-Ala bedeutet .

78. Peptid nach Anspruch 70,worin R₉ GIy bedeutet.

79. Peptid nach Anspruch 70, worin R_ Pro bedeutet.

80. Peptid nach Anspruch 74, worin R₃ L-Pro bedeutet.

81. Peptid nach Anspruch 70, worin R„ NH_ bedeutet.

82. Peptid nach Anspruch 70» worin R- Tyr-NEL· bedeutet.

83. Peptid nach Anspruch 74, worin R L-Tyr-NEL· bedeutet.

84. Peptid nach Anspruch 70, worin R„ GIy und R„ Tyr-NEU bedeuten.

85. Peptid nach Anspruch 74, worin R₂ GIy und R„ L-Tyr-NH, bedeuten.

509841/0973

86. Peptid nach. Anspruch 70, worin R„ Pro und R„ Tyr-NH₂ bedeuten.

87. Peptid nach Anspruch 74, worin R„ L-Pro und R_ L-Tyr-NH₂ bedeuten.

88. Peptid nach Anspruch 70» worin R. ß-Ala und R_p GIy bedeuten.

89· Peptid nach Anspruch 70, worin R- ß-Ala und R₂ Pro bedeuten.

90. Peptid nach Anspruch Jh₁ worin R- ß-Ala und R„ L-Pro bedeuten.

91. Peptid nach Anspruch 70, worin R- ß-Ala und R_ NH_ bedeuten.

92. Peptid nach Anspruch 70, worin R ß-Ala und R

bedeuten.

93· Peptid nach Anspruch ¹Jh, worin R- ß-Ala und „ L-Tyr-NH- bedeuten.

9k. L-Arg-L-Pro-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-NH

95. Gly-L-Arg-L-Pro-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-NHg.

96. y-Abu-L-Arg-L-Pro-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-NHg. 97· e-Acap-L-Arg-L-Pro-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-NHg. 98. L-Lys-L-Arg-L-Pro-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-NHg.

99· L-oC,^-Dab-L-Arg-L-Pro-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-NH₂. 100. ß-Ala-L-Arg-L-Pro-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-NHg.

509841/0973

-1QO-

101. ß-Ala-L-Arg-L-Pro-L-Phe-L-Phe-NHg.

102. ß-Ala-L-Arg-ß-Ala-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-NHg.

103. L-AIa-L-Arg-ß-Ala-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-NHg.

104. ß-Ala-L-Arg-Sar-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-NHg.

105. L-Leu-L-Arg-L-Pro-L-Phe-L-Phe-L~Tyr-NH₂.

106. ß-Ala-L-Arg-L-Phe-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-NH₂.

107. ß-Ala-L-Arg-L-Leu-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-Gly-NHg.

108. ß-Ala-L-Arg-L-Ser-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-Gly-NH₂.

109. ß-Ala-L-Arg-L-Pro-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-L-Thr-L-Pro-L-Lys-L-Ala.

110. ß-Ala-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-L-Leu.

111. ß-Ala-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-L-AIa-NH₂.

112. ß-Ala-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-L-Thr-L-Pro.

113. e-Acap-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-L-Thr-L-Pro. 11 k. L-Lys-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-L-Thr-L-Pro.

115. ß-Ala-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-L-Thr-L-Pro-L-Lys-L-Ala.

116. Gly-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-L-Thr-fL-Pro-L-Lys-L-AIa.

117. L-Leu-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-Gly-NHg.

118. ß-Ala-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-L-Ala-Gly-NHg.

119. L-oCjiT-Dab-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-L-Ala-Gly-NHgi

503841/0973

120. GIy-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-NH₂.

121 . D-AIa-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-NH₂.

122. L-Phe-L~Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-NH₂.

123. L-Leu-L-Arg-GIy-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-NH₂. 12**. L-oi-Abu-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-NH₂.

125. L-NIe-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-NH₂.

126. L-VaI-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-N^.

127. ß-Ala-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-NHg.

128. ^-Abu-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-NH₂.

129. i>-Aval-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-NH₂.

130. fc-Acap-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-NHg.

131. L-Lys-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-NH₂.

132. L-ot,iT-Dab-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-NH₂.

133. L-Arg-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-NH₂.

134. ß-Ala-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-NH_£.

135. ^-Abu-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-NH₂.

136. £-Acap-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-NI^

137. L-Lys-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-NH₂.

138. L-oi.f-Dab-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-NHg

5G9841/0973