DE2509337C3

DE2509337C3 - Verfahren zur Herstellung von 7-(5-Amino-5-carboxyvaleramido)-7methoxy-S-hydroxymethyl-S-cephem^-carbonsäure-Derivaten

Info

Publication number: DE2509337C3
Application number: DE2509337A
Authority: DE
Inventors: Hitoshi Kawasaki Goi; Shigeharu Inouye; Taro Yokohama Niida; Tomizo Yokohama Niwa; Yasuaki Ogawa; Kazuo Fujisawa Saito (Verstorben); Takashi Shomura
Original assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Current assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Priority date: 1974-03-11
Filing date: 1975-03-04
Publication date: 1979-07-12
Also published as: FR2263778B1; DE2509337B2; FR2263778A1; US3975235A; GB1457726A; JPS50121489A; CA1037888A; JPS5713280B2; DE2509337A1

Description

COOH

worin Ri ein Wasserstoffatom, eine niedrige Acylgruppe, eine Arylacylgruppe, eine niedrige Alkoxy- ι ί carbonylgruppe oder eine Arylalkoxycarbonylgrup pe bedeutet, und deren Salzen, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung des Cephamycintyps der folgenden allgemeinen Formel

OCHj

HOOC-CH — (CH,),- CONH I NHR₁

worin Ri die oben angegebene Bedeutung besitzt und R2 ein Wasserstoffatom, eine Sulfogruppe, eine niedrige Acylgruppe oder eine Arylalkoxycarbonylgruppe bedeutet, 4 bis 50 Stunden bei einer Temperatur von 30 bis 6O⁰C und einem pH-Wert von 6,5 bis 8,5 der Einwirkung einer Esterase aus

(1) Aspergillus fumigatus, Hinterlegungsnummer FERM-P 2469,

(2) Mucor lipolyticus, Aac-0102, Hinterlegungs-

N J— CH,OCOC=CH-COOH ^OCHj

(H)

JIl nummer FERM-P 566, oder (3) Penicillium chrysogenum IAM 7106 unterwirft und gegebenenfalls eine so erhaltene freie Säure in ein Salz oder ein erhaltenes Salz in eine freie Säure überführt

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Konzentration der Esterase ungefähr 0,1 bis 2% beträgt.

Die Erfindung betrifft die Herstellung von 7-(5-Ami- Formel (I) und pharmazeutisch annehmbare Salze no-5-carboxyvaleramido)-7-methoxy-3-hydroxymethyl- davon 3-cephem-4-carbonsäure-Derivaten der allgemeinen 40

MOOC-CH-(CH₂),-CONH -

NMR,

worin Ri Wasserstoff, eine niedrige Acylgruppe, eine Arylacylgruppe, eine niedrige Alkoxycarbonylgruppe oder eine Arylalkoxycarbonylgruppe bedeutet.

Dit direkte Deacetylierung einer Cephalosporin-Verbindung unter Verwendung von Citrus-Acytylesterase oder einer Esterase aus Schizomycetes, Rhizobium oder Actinomycetes und insbesondere aus Bacillus subtilis wird von E. H. Flynn in »Cephalosporins and Penicillins«, Academic Press New York and London 1972, Seiten 152 und 153, beschrieben. Die Verbindungen des Cephamicin-Typs, die gemäß der Erfindung deacetyliert werden, sind bisher jedoch noch niemals mit einer Esterase, wie sie in der vorgenannten Literaturstelle erwähnt wurde, noch mit einer anderen Esterase deacetyliert worden. Die im Patentanspruch 1 genannten Mikroorganismen gehören zum Genus Eumycetes, während die bisher verwendeten Esterasen aus Schizomycetes und Actinomycetes zum Genus Pseudomycetes gehören und Rhizobium- und Bacillus-

CH₂OH

CX)OH

>o Bakterien sind. Die erfindungsgemäß eingesetzten Estc-asen werden somit aus ganz anderen Quellen erhalten als die Esterasen, die aus dem Stand der Technik für die Deacetylierung von Cephalosporinen bekannt gewesen sind.

y, Das erfindungsgemäße Verfahren wird in der in den Patentansprüchen angegebenen Weise durchgeführt.

Unter niedrigen Acylgruppen werden Acylgruppen mit 1 bis 5 Kohlenstoffatomen verstanden, die substituiert sein können, beispielsweise Acetyl-, Propio-

Mi nyl-, Butyl-, Yaleryl-Gruppen, Arylacylgruppen bedeuten Acylgruppen mit Phenyl-, Naphthyl- oder 5- bis 6gliedrigen heterocyclischen Gruppen, die substituiert sein können, beispielsweise Benzoyl-, Toluyl-, p-Chlorbenzoyl-, Naphthoyl-, Nicotinoyl-, Furoyl- oder The-

hi noylgruppen. Niedrige Alkoxycarbonylgruppen bedeuten eine Alkoxycarbonylgruppe, die eine Alkyl- bzw. Alkoxygruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen enthält, beispielsweise Methoxycarbonyl-, Acetoxycarbonyl-,

Propoxycarbonyl- oder Butoxycarbonylgruppen, eine Arylalkoxycarbonylgruppe, Phenyl- oder Naphthylmethyloxycarbonyl-, 5- bis 6gliedrige heterocyclische Gruppen, beispielsweise Furylmethyloxycarbonyl-, Thienylmethoxycarbonyl- oder Pyridylmethoxycarbonylgruppen.

Die am meisten bevorzugten Beispiele FQr Ri und R₂ sind die folgenden: Wasserstoff, niedrige Acylgruppen wie Acetyl, Propionyl, Butyryl, Pivaloyl und Trichloracetyl; Arylacylgruppen wie Benzoyl, p-Chlorbenzoyl, IsonicotinyL, Phenylacetyl, Phenoxyacetyl; niedrige Alkoxycarbonylgruppen wie Methoxycarbonyl, Äthoxycarbonyl, n-Butoxycarbonyl, ChJorpropoxycarbonyl; Arylalkoxycarbonylgruppen wie Carbobenzyloxy.

Unter Salzen werden pharmazeutisch annehmbare Salze verstanden, beispielsweise Alkali- oder Erdalkalisalze, wie Natrium-, Kalium- oder Kalziumsalze, und Salze organischer Basen, beispielsweise Ammoniumoder Triäthy !aminsalze.

Die Verbindungen sind wichtige Zwischenprodukte für die Herstellung von Cephamycine^

Das erfindungsgemäße Verfahren kann durchgeführt werden, indem man das Ausgangsmaterial der allgemeinen Formel (I) mit einem Enzymextrakt, den man aus einer Kulturbrühe erhält, dem Filtrat oder dem Fermentationsprodukt eines Schimmelpilzes oder mit einem rohen Pulver aus einem Esteraseenzym oder mit einem gereinigten Pulver des Enzyms in einer wäßrigen Lösung umsetzt. Die Schimmelpilze, die bei der vorliegenden Erfindung verwendet werden, sind Aspergillus fumigatus (Hin.erlegungsnummer FERM-P 2469), Mucor lipolyticus Aac-010? (Hin;."rlegungsnumrner FERM-P 566) und der Stamm P^nicillium chrysogenum IAM 7106, der im Institute of Applied Microbiology of Tokyo University gehalten und von dort erhältlich ist

Für die Herstellung des Esteraseenzyms durch Kultivierung der obenerwähnten Mikroorganismen kann man verschiedene Kulturmedien verwenden, die man üblicherweise für die Kultivierung eines Mikroorganismus einsetzt, wie Glucose, Saccharose, Glycerin, Stärke oder öle, als Kohlenstoffquellen und Pepton, Bouillon, Mais- bzw. Getreideeinweichflüssigkeit, Fleischextrakt, Fischmehl, entfettete Sojabohnen, Weizenkeime oder Kleie als Stickstoffquellen. Gegebenenfalls kann man andere Zusatzstoffe wie anorganische Salze oder Vitamine zusammen mit den obigen Verbindungen einsetzen.

Als Kultivierungsverfahren kann man üblicherweise submerse Kulturen, wie Schüttelkulturen oder gerührte Kulturen, unter Belüftung verwenden, aber es können aerobe stationäre Kulturen oder feste Kulturen mit Weizenkleie verwendet werden als leistungsfähiges Kultivierungsverfahren. Bei der Kultivierung ist es bevorzugt, zuerst eine Vermehrung in kleinem Maßstab durchzuführen und dann ein Kulturmedium mit der so gebildeten Impfkultur zu inokulieren. Die Kultivierunßstemperatur kann nach Bedarf im Bereich von 20 bis 37°C ausgewählt werden, wobei im allgemeinen eine Temperatur von 25 bis 28°C bevorzugt wird. Die Kultivierungszeit beträgt 3 bis 10 Tage.

Die Esterase wird in einer Kulturbrühe im Falle einer flüssigen Kultur gebildet, und sie wird ebenfalls durch leichte Extraktion einer Kulturbrühe mit Wasser oder einer geeigneten Pufferlösung im Falle einer festen Kultur bei Weizenkleie erhalten.

Die Esterase, die in einer Kulturbrühe oder deren Extrakt als solche enthalten ist, kann bei dem erfindungsgemäUen Verfahren ohne weitere Reinigung verwendet werden. Die Esterase kann auch durch Zugabe eines Alkohols, wie Methanol, Äthanol oder Isopropanol oder Aceton, ausgefällt werden, mit Ammoniumsulfat ausgesalzen werden oder durch Dialyse oder andere Maßnahmen dialysiert werden, um sie teilweise zu reinigen oder zu konzentrieren, und die so entsalzte Enzymlösung kann durch solche Maßnahmen, wie Gefriertrocknung, behandelt werden, so daß das Enzym in Form einer Pulverpräparatioii verwendet

ίο werden kann.

Die Esteraseaktivität kann unter Verwendung von Cephamycin A, B oder Äthoxycarbonylcephamycin B als Substrat bestimmt werden. Alle drei obenerwähnten Substrate zeigen antibakterielle Aktivitäten gegenüber

π Bacillus stearothermophylus, und die Esteraseaktivität kann somit durch Umsetzung mit diesen Substraten und anschließender Messung der Verminderung ihrer antibakteriellen Aktivitäten bestimmt werden; und wenn Cephamycin B als Substrat verwendet wird, kann es mit Esterase umgesetzt werden, und wenn die Reaktionsmischung der sauren Extraktion mit Äthylacetat unterworfen wird, werden Fragmente der Esterase-Zersetzungsprodukte des Substrats gebildet, nämlich a-Methoxy-p-hydroxyzimtsäure, diese geht leicht in die

Äthylacetatschicht über, und die ultraviolette Absorption der Säure wird so gemessen, und dann kann die Esteraseaktivität leicht bestimmt werden.

Die Konzentration der Esterase kann variieren, abhängig von der Aktivität der verwendeten Esterase,

jo aber ein Bereich zwischen etwa 0,1 und 2% wird bevorzugt Der pH-Wert liegt zwischen 63 und 83 und besonders um 7. Die Reaktionstemperatur liegt im Bereich von 30 bis 60⁰C, wobei eine Temperatur zwischen 40 und 50⁰C bevorzugt ist, da eine höhere

)-, Temperatur die Esterase inaktiviert Während die Umsetzung abläuft wird die Reaktionsmischung geschüttelt oder gerührt Die Reaktionszeit ist so kurz wie möglich und dauert 4 bis 50 Stunden. Als Enzymlösung kann das Filtrat verwendet werden, das von der

4n flüssigen Kultur stammt oder ein Extrakt der von der festen Kultur stammt, in dem das Substrat in geeigneter Konzentration für die Umsetzung gelöst ist, und alternativ kann ein gereinigtes Enzym oder ein festes Fermentationsprodukt das das Enzym enthält, in der

Lösung des Substrats gelöst oder suspendiert werden. Es ist ebenfalls möglich, kontinuierlich Esterase in Form

eines Mediums zu verwenden, das das Enzym daran adsorbiert enthält oder in unlöslichem Zustand enthält.

Die Verbindungen der allgemeinen Formel (I) können

w aus der Reaktionsmischung isoliert und wie im folgenden angegeben gereinigt werden.

Voizugsweise wird ein Adsorptionsverfahren angewendet, wobei Anionenaustauschharze oder Aktivkohle geeignet sind, z. B. kernsulfonierte Styrolharze oder

,ι modifizierte Dextrane in der Cl-Form. Diese können mit einer geeigneten Salzlösung eluiert werden, worauf man dann über Aktivkohle chromatografiert. Auch ein Extraktionsverfahren mit einem organischen Lösungsmittel kann zusätzlich zu der obenerwähnten Verwen-

M) dung von lonenaustauschharzen oder Aktivkohle angewendet werden. Genauer gesagt, wird der pH-Wert der enzymatischen Reaktionsmischung mit einer Mineralsäure auf pH 2 bis 4 eingestellt, und dann wird mit Äthylacetat extrahiert, wobei (zuerst) a-Me-

h', thoxy-p-hydroxyzimtsäure und deren Derivate entfernt werden. Dann wird die wäßrige Schicht so wie sie ist bei dem pH-Wert von 2 bis 4 mit n-Butanol extrahiert, und dabei wird das erfindungsgemäß gewünschte Produkt in

Medium

Malzextrakt-Agarmedium 16 34 49

Kaitoffel-Glucose- 19 35 47
Agarmedium

Czapek's-Agarmedium 11 23 33

(a) pH (bei 28°	C)	3 Tage mm	4 Tage mm
pH	2 Tage mm	32 34 27	44 49 40
5,0 7,0 9,0	16 16 14

IO

die n-Buianolschicht extrahiert. Die n-Butanolschicht als solche wird bis zur Trockne konzentriert, und dabei erhält man die Verbindung I in Form der freien Säure, oder nachdem sie zu einer wäßrigen Lösung aus Natriumbicarbonat gegeben wurde, kann die wäßrige Schicht zur Trockne eingedampft werden, und man erhält die Verbindung I in Form ihres Natriumsalzes. Wird die n-Butanolschicht in eine wäßrige Lösung gegeben, die eine Base, wie Kaliumcarbonat, Ammoniak oder Triäthylamin, enthält, wird die erfindtingsgemäße Verbindung in Form des entsprechenden Salzes erhaltea

Die morphologischen Eigenschaften von Aspergillus fumigatus (Hinterlegungsnummer FERM-P 2469) sind die folgenden:

(1) Wachstum auf Agarmedium

Auf Malzextrakt-Agarmedium, Kartoffel-Glucose-Agarmedium und Czapeks-Agarniedium bei 28° C erhält man Kolonien mit den folgenden Durchmessern (mm):

(b) Temperaturen (bei pH 7,0)

Temp.
C

2 Tage 3 Tage 4 Tage

Auf dem Malzextrakt-Agarmedium sind die Kolonien flockig und die Oberflächen sind grün bis dunkelgrün. Die Rückseiten der Kolonien sind farblos bis schwachgelb, und es werden keine besonderen Färbungen beobachtet

Morphologische Eigenschaften

Beobachtet man die Kulturen unter einem Mikroskop, so stellt man fest, daß die Konidienköpfe zylindrisch geformt sind und dichte Konidien enthalten, -r, Die Konidiophoren sind kurz und glatt und enden mit kolbenartigen Bläschen. Die Sterigma sind einfach an der oberen Hälfte der Bläschen. Die Konidien sind sphärisch mit einem Durchmesser von 2,5 bis 4 μπι und stachelig aulf ihrer Oberfläche. in

(2) Physiologische Eigenschaften

Die Beziehung zwischen den Wachstumsdurchmessern (mm) der Kolonien auf Malzextrakt-Agarmedium >i und die Wachstumsbedingungen (pH, Temperatur) werden im folgenden angegeben.

2 Tage
mm

3 Tage
mm

4 Tage
mm

12 Tage
mm

0
16
38

0
34
65

49
78

16

(3) Verwendung von Kohlenstoffquellen

Die Verwendung von Kohlenstoffquellen
s auf Czapeks Medium

Positiv: Glucose, Stärke, Sacch irose, Mannose, Galactose, Arabinose, Xylose, Fructose, Dextrin
Negat'v: Cellulose

Aus den obigen morphologischen Eigenschaften ergibt sich, daß dieser Stamm zu Genus Aspergillus gehört und zu Aspergillus fumigatus, verglichen mit gut bekannten Stämmen nach »The genus Aspergillus« (1965): Raper & Fennel (Williams & Wilkins Comp, Baltimore). (Weiterhin wird dieser Stamm identifiziert durch synchrone Kultivierung mit Aspergillus fumigatus IFO 7079 als Typ Kultur.)

Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung.

JO

Beispiel 1

Je 100 ml Teile eines flüssigen Kulturmediums (pH 6,5), das 4% lösliche Stärke, 3% entfettetes Sojabohnenmehl, 03% primäres Kaliumphosphat und 03% Ammoniumsulfat enthielt, wurden in drei 500-ml-Kolben gegeben. Nach der Sterilisation in einem Autoklav bei 120° C während 15 Minuten wird jeweils eine Platinöse von Aspergillus fumigatus (Hinterlegungsnummer FERM-P 2469), Mucor lipolyticus Aac-0102 (Hinterlegungsnummer FERM-P 566) und Penicillium chrysogenum IAM 7106 zugegeben, die auf Kartoffel-Glucose-Agarschrägkulturen inokuliert waren, und dann wurde unter Schütteln bei 28° C 6 Tage in einem Schüttelgerät kultiviert, wobei man eine Külturbrühe der entsprechenden Mikroorganismen erhielt.

10 g Weizenkleie und 10 ml Wasser wurden in je drei 500-ml-Erlenmeyerkolben vermischt. Nach der Sterilisation in einem Autoklav bei 120° C während 15 Minuten wurd<; mit je einer Platinöse jeder der obenerwähnten drei Stämme inokuliert und stationär bei 28° C während Z Tagen kultiviert Die Kulturbrühe raide mit 60 ml Wasser pro Kolben extrahiert und filtriert, wobei man ein Extraktionsfiltrat erhielt

Die Kulturbf iihe und das Extraktionstilirat werden als Enzymlösung verwendet. Ein aliquoter Teil von i ml jeder Enzymlösung und ein aliquoter Teil von I ml jeder Substratlösung, die N- oder O-substituiertes Cephamycin A oder B mit einer Konzentration von 1000μg/rril enthielt, wurden zugegeben und dann wird der pH-Wert der entstehenden Mischung auf 7,0 eingestellt. Die Umsetzung wird bei 40°C während 2 Stunden durchgeführt, und anschließend wird die verminderte antibakterielle Aktivität bestimmt, wobei man eine Versuchsplatte aus Bacillus stearothermophylus verwendet, um die Hydrolysegeschwindigkeit der Esterase zu bestimmen. Die erhaltenen Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle aufgeführt.

Tabelle

llydroxylraten ("'.) bzw. llydrolysegeschwindigkeiten von Verbindungen der allgemeinen formel Il mil einigen l'il/esterasen

Enzym	Substrat	It	C	1)
	Λ
I Rissiges KiilUirnilrat		KM) 75 40	55 HO /	60 35 /
Aspergill's !"iimigalus Mucor lypol>ticu< Penicillium chrysogenuni	')() 60 /
Waliriger Extrakt eines durch fermentation in festem Zu stand erhaltenen Produktes		KM) KM) 60	SO / /	45 / /
/Vspergillus lumigntus Mucor lypolytictis l'enicillium chrvsogenurn	90 50 70

In der obigen Libelle h.ihen die Ahkiir/imgcn Λ his
die folgende Bedeutung:
Λ: N-\thoxyi:.irhon\keph;ini\un Λ
H: N.O-I !i;ilhoxyc.irhoiiylceph;ini)tin 1)
( ^v'.()-l'Jiprnpii)nvlteph,imycin U
I) N.()-I>ihenz>liix>c;iriiiiny!cepham\un It

U e i s ρ i e I 2

Je 100 g Weizenkleie und aliquote Teile von 100 ml Wasser werden in jeweils vier 2-l-Volumen-Erlenmeyerkolben gegeben und sterilisiert. Aspergillus fumigatus (Hinterlegungsnummer FERM-P 2469) wird zum Inokulieren verwendet, und das Kultivieren erfolgt bei 25'C während 8 Tagen. Ein aliquoter Teil von 600 ml Leitungswasser wird zu jedem der Kolben zugegeben, dann wird bei Zimmertemperatur extrahiert. Der entstehende Extrakt wird gesammelt und gegenüber Leitungswasser bei TC über Nacht unter Verwendung eines P.ohres aus Zellglas dialysiert, wobei man 2,1 1 dialysierte Flüssigkeit (pH 6.9) erhalt, die man als Enzymlösiing verwenden kanu. Eine Menge von 1,7 g N.O-Diäthoxycarbonyleephamyein I) mit einer Reinheit von ungefähr 20% wird in ungefähr 20 ml einer wäßrigen Lösung aus Natriumbicarbonat(pH 7,2) gelöst und die entstehende Lösung wird zu 850 ml der obenerwähnten Enzymlösung zugegeben. Die Umsetzung wird unter Rühren bei 4TC während 4 Stunden durchgeführt. Nach Beendigung 'der Umsetzung wird der pH-Wert der Reaktionsmischung auf J mit verdünnter Chlorwasserstoffsäure eingestellt, und dann wird mit 3IX) ml Äthylacetat gewaschen, um Verunreinigungen zu entfernen. Anschließend wird die wäßrige Schicht, während sie bei einem pH-Wert von J gehalten wird, dreimal mit J(X) ml η-Dutanol extrahiert. Die Extrakte werden vereinigt und zweimal mit einer geringen Wassermenge gewaschen.

Der so erhaltene n-ilutanolextrakt wird zweiina! mit 100 ml verdünnter wäßriger Lösung von Natriumbicarbonat wieder extrahiert. Der neutrale wäßrige Extrakt wird zur Trockne konzentriert, man erhält ungefähr 500 mg rohes Pulver, das N-Äthoxycarbonyl-7-(5-amino-S-carboxyvaleramidoJ^-melhoxy-S-hydroxymethyl-J-cephem-4-carbonsäure-natriumsalz enthält. Das so erhaltene Produkt wird in 20 ml Wasser gelöst, an einer Säule (1,6 χ 19 cm) eines lonenaustauschharzes aus mit Diäthylamiiioäthylgruppen modifiziertem Dextran adsorbiert, mit 350 ml einer 0,05 η wäßrigen Lösung von Natriumchlorid entwickelt und dann mit ungefähr 100 ml einer 0,1 η wäßrigen Lösung von Natriumchlorid entwickelt, wobei das gewünschte Produkt eluiert wird. Diese Fraktionen ^ungefähr 100 ml), die eine ultraviolette Absorption zeigen, werden gesammelt, der pH-Wert wird auf 3 mit 1 η Chlorwasserstoffsäure eingestellt und dann werden sie dreimal mit 50 ml η Butanol extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden zweimal mit einer

IW ι ι it Yt/ * * J

b"""6^v" i.ujjmin.i,gv gC'A'uSCiiwi, iß\.r p» ι »»Ci"i Ά'ίΓΰ mit 30 ml verdünnter wäßriger Lösung von Natriumbicarbonat auf 7,0 eingestellt und dann wird erneut extrahiert. Die entstehende wäßrige Lösung wird auf ungefähr 2 ml konzentriert, über einer Säule aus modifiziertem Dextran (I χ iOcm) mit fließendem Wasser entwickelt und die Fraktionen, die eine ultraviolette Absorption zeigen, werden gesammelt und zur Trockne konzenincrt, wobei man 72 mg N-Äthoxy-LdL-bonyl-7v>amino-5-carbo:<y-valeramido)-7-methoxy-3-hydroxymethyl-3-cephem-4 -carbonsäure- natriumsalz erhält; Fp. 130 bis 135°C.

Analyse: C₈H₂₄N jO.oSNa

Berechnet: C 43,5, H 4,9, N 8,4%; gefunden: C 42,8, H 4,8, N 7,9%.

Beispiel 3

Man arbeitet auf gleiche Weise wie in Beispiel 2. mit der Ausnahme, daß 1,6 g Ν,Ο-Dibenzyloxycarbonylcephamycin B (mit einer Reinheit von 40%) anstelle des N.O-Diäthoxycarbonyl-cephamycins B verwendet werden. Man erhält 160 mg N-BenzyIoxycarbony!-7-(5-amino-5-carboxyvaleramido)-7-methoxy-3-hydroxymethyl-J-cephem-4-carbonsäure-natriumsalz in Form eines Pulvers; Fp. 155 bis 160"C.

Analyse: C₂₂H₂₆N)Oi_nSNa

Berechnet: C 49,4, H 4.7, N 7,5%: gefunden: C 29.0, H 4,8, N 7,3%.

Beispiel 4

Man arbeitet auf gleiche Weise wie in Beispiel 2. mn der Ausnahme, daß 1,3 g Ν,Ο-Dipropionylcephamycin B (mit einer Reinheit von 20%) anstelle von Ν,Ο-Diathoxycarbonyl-cephamycin B verwendet werden. Man erhält 50 mg N-Propionyl-7-(5-amino-5-carboxyvalera-

mido)-7-metho;iy-J-hydroxymethyl- 3 cephem-4-carbonsäure-natriumsalz in Form eines Pulvers; Fp. 145 bis 150° C.

Analyse: C₈H₂₄N)OsSNa

Berechnet: C 445, H 5,0. N 8,7%: gefunden: C 44.2. Fl 4,7, N 8,2%.

Claims

Patentansprüche:

I. Verfahren zur Herstellung von 7-(5-Amino-5-carboxyvalerarnido)-7-rnethoxy-3-hydroxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-Derivaten der allgemeinen Formel

OCH,

HOOC—CH-(CH,)j—CONH

NHR₁

CH,OH