DE2412890C3

DE2412890C3 - Purpuromycin-Verbindungen

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Publication number: DE2412890C3
Application number: DE19742412890
Authority: DE
Inventors: Hermes Sesto S. Giovanni Pagani
Original assignee: Gruppo Lepetit S.P.A., Mailand (Italien)
Priority date: 1973-03-19
Filing date: 1974-03-18
Publication date: 1977-11-10

Description

O OH

in der R ein Wasserstoffatom (Purpuromyci oder die Gruppe

CO — CH₂ — CH₂ — COOH CO — CH = CH — COOH

darstellt.

2. Tetraacetylpurpuromycin.

3. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß

■ s gramnegativen Bakterien und Pilzen. Die Verbindun-' gen sind besonders aktiv gegenüber Staphylococcus aureus Streptococcus hemolyticus und Diplococcus pneum'oniae in Dosen von 0,005 bis 0,1 j/ml In Tabelle I ist die antibiotische Aktivität des Pur-20 puromycins gegenüber verschiedenen pathogenen Mikroorganismen zusammengefaßt.

Tabelle

Mikroorganismus

MHK

a) Actinoplanes ianthinogenes nov. sp. A/1668

(ATCC Nr. 21 884) unter submers aeroben Staphylococcus aureus ATCC 6538 0,005

Bedingungen in einem üblichen Nährmedium, 30 Staphylococcus aureus Tour 0,01

das assimilierbare Kohlenstoff- und Stick- Streptococcus hemolyticus C 203 0,02

stoffquellen und anorganische Salze enthält, „· , ■ _{o !ΙΓζΜ ftm}

unter üblichen Temperatur- und pH-Bedin- D.plococcus pneumon.ae UC 41 0,02

gungen züchtet und das Purpuromycin aus Staphylococcus aureus Tour mit 2

der Kulturbrühe in üblicher Weise abtrennt 35 10% Rinderserum

und Clostridium perfringens ISS 30 543 0,05

b) gegebenenfalls das erhaltene Purpuromycin Proteus vulgaris X 19 H ATCC 881 1 mit Maleinsäure oder Bernsteinsäureanhydrid ^ , . ,· ,. _ct,r_mm η < in etwa äquimolaren Mengen bei Temperatu- Eschenchia coh SKF 12 140 0,5 ren von etwa 0 bis 3O=C umsetzt. 40 Candida albicans SKF 2270 0,5

Trichophyton mentagrophytes SKF 17 410 0,2

4. Verfahren zur Herstellung von Tetraacetyl- Mycobaclerium tub. H37Rv ATCC9360 50 purpuromycin, dadurch gekennzeichnet, daß man Mycoplasma gallisepticum H 21 C.Z.B. 5 das gemäß Anspruch 3 a) erhaltene Purpuromycin

in Pyridin mit überschüssigem Essigsäureanhydrid 45

etwa 1 Stunde auf 60 bis 8O⁰C erhitzt und das Die anderen erfindungsgemäßen Verbindungen zei-

entstandene Gemisch von Tctraacetylpurpuromy- gen etwa die gleiche antibiotische Aktivität. Die mini-

cin und Pentaacetylisopurpuromycin in an sich male Hemmkonzentration in Mäusen gegenüber Sta-

bekannter Weise durch Chromatographie in die phylococcus aureus ATCC 6538 ist folgende: Komponenten trennt. 50

5. Arzneimittel, gekennzeichnet durch einen Tetraacetylpurpuromycin

Gehalt an einer Verbindung j;emäß Anspruch 1 (Beispiel 2) 0,1 //ml

oder 2 neben üblichen inerten Trägerstoffen und/ Purpuromycin-hydrogenmaleat

oder Verdünnungsmitteln und/oder Hilfsstoffen. (Beispiel 4) 0,01 -/ml

55 Purpuromycin-hydrogensuccinat

(Beispiel 3) 0,1 y/ml

Die Verbindungen sind auch gegenüber pathogenen

Keimen wirksam, die gegenüber anderen in weitem

ho Umfang verwendeten Antibiotika resistent sind. In der Tabelle II ist die minimale Hemmkonzentration der erfindungsgemäßen Verbindungen gegenüber Staphylocoecus-aureus-Stämmen zusammengefaßt, die

Die Erfindung betrifft den in den Ansprüchen gegenüber verschiedenen Antibiotika resistent sind.

<ennzeichnelen Gegenstand. (><; Die minimale Hcmmkoii/.eiHraiion (MHK) wurde in

Die erfindungsgemäßen Verbindungen des An- üblicher Weise nach der Röhrchenverdünnungsme-

-uchs 1 und 2 sind wertvolle Arzneistoffe mit thode (Arzncim. Forsch.. Bd. 17 [1967], S. 523) be-

tibiotischer Aktivität gegenüber grampositiven und stimmt.

abeUe U

aureus ATCC 6538

ä£· ·*·„_C6538 Staphylococcus aureus ATCC 6538

r Stent gegen Streptomycin
Staphylococcus aureus ATCC 6538 resistent gegen Tetracycline
Staphylococcus aureus ATCC 653* resist/nt gegen Novobiocin
Staphylococcus aureus ATCC 653« listen, gegen Neomycin
Staphylococcus aureus ATCC 6538 resistent gegen Erythromycin
Staphylococcus aureus ATCC 6538 resistent gegen Chloramphenicol
Staphylococcus aureus ATCC 6538 resistent gegen Cephonn
Staphylococcus aureus ATCC 6538 distent gegen Streptothncin
Staphylococcus aureus ATCC 6538 Jlent gegen Bacitracin
Staphylococcus aureus ATCC 6538 resistent gegen Oleandomyan
Staphylococcus aureus ATCC 6538 resistent gegen Rifamyc.n SV

Penicillin Streptomycin Tetracyclin Novobiocin Ί00 Neomycin Erythromycin Chloramphenicol Cephaloridin Streptothricin Bacitracin Oleandomycin Rifamycin SV

MHK. ; ml

Purpurn- Tetramycin acelyl-

purpuromvcin

0,005 0,1

0,005 0,2

0,005 0,1

0.001 0.5

0,002 0,1

0.002 0.2

0,001 0,5

0.003 0,1

0,005 0,1

0,002 0.3

0,005 1

0.005 0,1

Purpuro- Purpuromycinmycinhydrogenhydrogenmaleat succinai

0,01

0,05

0,02

0,01

0,10

0,02

0,01

0,10

0,05

0,02

0,01

0,1

0,5

0,2

0,5

0,2

0,3

0.2

0,5

0,2

0,5

0,2

Purpuromycin zeigt auch erne interessante Akt vital in vivo gegenüber lymphoider Leukämie L-1210 in Mäusen bei Dosen von 400 mg/kg Bemerkenswert S auch die niedrige akute Toxizität der betreffenden i η g und Gottlieb (Intern. J. Syst. Bad., Bd. 16 [1966], S. 313 bis 340) sowie von Waksman (The Actinomyeetes, Bd. 11, The Williams and Wilkins Co.. 1961), empfohlen wurden. Die bei einigen Nährböden

folgungan Mäuse im a

Der bei dem erfindungsgemäßen Verfahren des 4nsoruchs 3 a) verwendete Mikroorganismus, der aus _Tabd,_e , (, ine? Bodenprobe bei Blumenau in Brasilien isoliert A5

wo denYst und unter der ATCC Nr. 21 884 uneinge-Sränkt hinterlegt worden ist, besitzt folgende Eigen-

Medium Nr.

Shirling und Gottlieb uuj^i-v.^

Die Wuchsformen wurden nach 6- bis 14tägiger Inkubation bei 30 C bestimmt.

0,5 bis 0,8 cm mit unregelmäßiger Kontur. Die Oberfiäche ist undurchsichtig und schwach rauh bis gerunzelt. Der Stamm wächst gut auf verschiedenen Nährboden; das Substratmycel ist v'olett gefärbt. Auf Hafermehl-Agar wird ein schwach diffundierbares violettes Pigment erzeugt. Luftmycel fehlt immer. Unter dem Mikroskop zeigt das vegetative My eel verzweigte Hyphen mit einem Durchmesser von etwa 1 μ. Sporangien bilden sich reichlich nur auf Hafermehl Agar und Czapek-Glucose-Agar. Die Sporangien sind kugelig mit unregelmäßiger Oberfläche. Ihr Durchmesser beträgt 4,0 bis 10,0 μ. Nach dem Aufbrechen der Wandung des. Sporangiums werden die Sporen entlassen. Die nahezu kugelförmigen Sporen sind beweglich (1,4 bis 1,8 μ Durchmesser).

In der nachstehenden Tabelle 111 sind die Wuchsformen des Mikroorganismus auf verschiedenen StanftnrH-Nährbödcn zusammengefaßt, die von Shir-Medium Nr. 3
(Hafermehl-Agar)

Medium Nr. 4
(anorgan. Salzc-Stärke-Agar

Medium Nr. 5
(Glycerin-Asparagin-

-■-.gar)

to Medium Ni. 6
(Pcpion-Hefeextrakt-

Fisen-Agar)
Medium Nr. 7
(Ty rosin-Agar)

Wuchsformen

reiches Wachstum, runzelig'.¹ Oberfläche, hell bernsteinfarben mit violetten Zonen mäßiges Wachstum; krustige Oberfläche, hellviolett reiches Wachstum; glattflächig, tief orangefarben mit uolclten Zonen
reiches Wachstum; grobgranuÜerte Oberfläche, bernsteinfarben mit violetten Zonen

spärliches Wachstum, glattflächig, undurchsichtig, tiefbraun

mäßiges Wachstum; grobgranulierte Oberfläche, undurchsichtig, bernsteinfarben bis hellbraun

Tabelle 111 — Fortsetzung

Nährboden

Hafermehl-Agar
(nach W a k s m a n)

Hickey und Tresners
Agar

Czapeck-Glucose-Agar

Glucose-Asparagin-Agar

Nähragar
Kartoffel-Agar
Bennetts Agar

Calciummalat-Agar
Magermilch-Agar

Czapcck-Agar
Eialbum-Agar

Pepton-Glucosc-Agar
Agar

Locfflcr-Serum-Nährbodcn

Kartoffelnährboden

Gclalincniihrbodcn
(dlulose-Agar

Wiichslumseigcnschafien

reiches Wachstum; runzelige Oberfläche, orange mit violetten Zonen: blaßviolettes Pigment

mäßiges Wachstum; krustige Oberfläche, hellbraun

spärliches Wachstum; dünnes Mycel undurchsichtig, hyalin

reiches Wachstum; krustige Oberfläche, hcllorange mit violetten Zonen

spärliches Wachstum, dünnes Mycel orange bis braun

mäßiges Wachstum; krustige Oberfläche, violett

reiches Wachstum; runzelige Oberfläche, hellbraun mit violetter Oberfläche

sehr spärliches Wachstum; dünnes Mycel. hellorange

reiches Wachstum; runzelige Oberfläche, violett mit orangefarbenen Rändern

mäßiges Wachstum; krustige Oberfläche, undurchsichtig, hyalin

mäßiges Wachstum, tief orangefarben

sehr spärliches Wachstum, dünnes Mycel, hyalin

mäßiges Wachstum, grobgranulierte Oberfläche, orange mit violetten Zonen

mäßiges Wachstum; runzelige Oberfläche, lief orangefarben

spärliches Wachstum; krustige Oberfläche, hellviolctt

sehr spärliches Wachstum; dünnes Mvcel. hvalin

Tabelle IV	Verwertung	positiv	positiv
K ohlen.stoffquelle	—	schwach positiv
⁵ Inosit	+	negativ	positiv
Fructose	+	positiv	negativ
Rhamnose	+	Solubilisation von Calciummalat schwach positiv
Mannit	+	Nitrat-Reduktion	negativ
ίο Xylose	-	Verflüssigung von	negativ-
Raffinose	+	Gelatine	positiv
Arabinose	—	Koagulation
Cellulose	+	Lackmusmilch
is Sucrose	+	⁴⁰ Peptonisierung
Glucose	+	Ccllulosezersctzung
Mannose	—
Lactose	+
_!0 Salicin




	Pigmentbildcndc Wirkung







In Tabelle V sind die physiologischen Eigenschaf
des Mikroorganismus zusammengefaßt.
Tabelle V
Versuch
Stärkehydrolysc
_λ0 H₂S-Bildung
Tyrosinase-Reaktion
Casein-Hydrolyse

Die günstigste Temperatur /111 Entwicklung der Kolonien liegt im Hereich von etwa 20 bis 4VC. Das Tempcraturoptimum licgl bei etwa 28 bis etwa 37" C.

In der folgenden Tabelle IV ist die Verwertung von KolilcnslolTquellcn durch den beireffenden Mikroorganismus angegeben, bestimmt nach der Methode von P r i d h a in und Gottlieb. J. Had.. IkI. 5d (I94SI. S. 107.

Die Herstellung des Purpuromycins wird im allgemeinen in der Weise durchgeführt, daß man den betreffenden Mikroorganismus in einem üblichen wäßrigen Nährmedium in einem Schüttclkolbcn vorkultivicrt. bis sich in der Kulturbrühe eine erhebliche

so Menge an Purpuromycin gebildet hat. Sodann wird diese Kultur zum Beimpfen von Fcrmcnlcrn verwendet, die ein übliches Nährmedium mit assimilierbaren Kohlenstoff- und Sticksloffqucllcn enthalten. Die Züchtung wird bei 2.S bis 35"C unter aeroben Bcdin-

_ss gungcn so lange fortgesetzt, bis sich eine ausreichende Menge an Purpuromycin in der Kullurbrühe angereichert hat. Während dieser Zeit werden nach dei Agar-Diffusionsmcthode mikrobiologische Untersuchungen durchgeführt, um die Purpuromycinkonzeiv iration zu bestimmen. Als Testorganismus wird Staphylococcus aureus benutzt.

Das gebildete Purpuromycin wird aus der Kultur brühe in an sich bekannter Weise, beispielsweist durch Extraktion mit organischen Lösungsmitteln die mit dem wäßrigen Medium nicht mischbar sind isoliert. Der organische Extrakt wird eingedampft um mit iVtroläther versetzt. Das ausgefällte rohe Pur puromycin wird durch Waschen mit Methanol um

durch Chromatographie an Kieselgcl mit Chloroform bzw. einem Gemisch aus Chloroform und Methanol als Laufmittel gereinigt. Das Eluat wird eingedampft und das Purpuromycin aus Chloroform, das eine geringe Menge Methanol enthält, umkristallisiert.

Die in der Formel 1 des Anspruchs 1 angegebene Struktur stellt nur eine der ν·'τ möglichen tautomcren Formen für das in dic^i Formel enthaltene 5,8 - Dihydroxy - 1.4 - naphlhochinonsystem (Naphthazarin) dar. R. Ii. Moore u. Mitarb., J. Org. Chem.. Bd. 31 (1966), S. 3272 wies darauf hin, daß dieses Ringsystem durch ein sich rasch einstellendes Kclo-Enol-Tautomcriegleichgewicht gekennzeichnet ist, das die gleichzeitige Existenz benzoider und chinoidcr Eigenschaften in den Ringen A und B zur Folge hat. Die vier möglichen tautomercn Formen können folgende Partialslruktur aufweisen:

O OH

HO O O OH

HO O

O OH

HO O HO O

Der unterschiedliche Beitrag der verschiedenen Tautomeren zur effektiven Struktur hängt von mehreren Faktoren ab, beispielsweise der speziellen Art der Substituenten am Naphthalinring, dem physikalischen Zustand, der Temperatur und dem bei der betreffenden Verbindung zur Lösung oder Umkristallisation verwendeten Lösungsmittel. Die verschiedenen Tautomeren können auch chemischen Veränderungen mit unterschiedlichen Reaktionsgeschwindigkeiten unterliegen, so daß das Reaktionsprodukt nicht der Verteilung der Tautomeren in der Ausgangsverbindung entsprechen kann.

O OH 2ο Die Formel I umfaßt sämtliche möglichen Keto-Enol-Tautomeren.

Bei dem Verfahren des Anspruchs 4 werden zwei Verbindungen erhalten, die durch Chromatographie an Kicselgel und mit Chloroform als Laufmittcl voneinander getrennt werden können. Die erste eluierte Verbindung kann durch Umkristallisation aus Aceton oder Dimethylsulfoxid in Gegenwart einer geringen Menge Wasser weiter gereinigt werden. Bei dieser Verbindung handelt es sich um das Pcntaacetyl-

}o derivat des Isopurpuromycins der Formel II

OOCH.,

bzw. einer ihrer tautomercn Formen, wobei die fünf Hydroxylgruppen acctylicrt sind.

Die zweite eluierte Verbindung wird aus Aceton umkristaliisicrt, und sie stellt das Tctraacctyldcrivat des Purpuromycins der angegebenen allgemeinen Formel 1 (R = H) oder einer ihrer tautomercn Formen dar, in der die vier Hydroxylgruppen acctylicrt sind. Bei dieser Acetylicrung erfolgt eine teilweise Isomerisierung des Purpuromycins zum Isopurpuromycin.

Das Verfahren gemäß Anspruch 3b) wird vorzugsweise in Gegenwart eines Säureacceplors, insbesondere Pyridin. durchgeführt. Bei dieser bei niedrigen Temperaturen durchgeführten Acylierung erfolg! überraschenderweise keine Isomerisierung, und es bilde! sich selektiv das betreffende Monoacylderival des Purpuromycins der Formel I.

Beispiel I

Zunächst wird von Actinoplanes i;in!hiiio)U'ius nov. sp. Λ/Ι66Κ du ATCC Nr. 21 KK4 in Frlcnmcyoi ■ Kolben unter aeroben Bedingungen eine Vorkullui hergestellt, bis sich in der Kiilturfliissigkdt ein erhebliches Ausmaß an anlibiolischer Akliviiiit nachweisen läßt. Das Niihrmediuni für die SiIiüIuTkuIIui halte <lii· ΙΌΙιηίηΚ¹ /usammnisel/im)!:

4.S

μ 1 IkT

Fleischextrakt 3,0

Hefeextrakt 10.0

Stärke 25.0

Calciumcarbonai 4.(1

Leitungswasser auf HHH) ml

Die Kolben werden etwa 24 Stunden bei etwa 2! bis 30"C geschüttelt. Anschließend werden jewcil I Liier der Vorkulturcn zum Beimpfen von Fennen lern verwendet, die jeweils IO Liter des folgende! Nährmediums enthalten:

μ III I IUi

1· leisehext rakt 40

l'cplon 4()

llcfecxtrakl H)

Natriumchlorid 25

Sojabohnenmehl 100

(ϊ Iticosc 500

(aleiumcarhonat 50

I i'itungswasscr auf IO Liter

Die Ansäl/i· werden dann aeioh bei 2 N bis 30 ( inkubicil und gerührt. In /cilabsländi-n wild di aniibiotischc Aktivität mikiohiiilogisdi n.ich der Aj'.ai-DiffusionsU'sl mit Staplnlouimis ,iiiiciis .il

Testorganismus bestimmt. Die maximale antibiotische Aktivität wird nach etwa 96- bis 120stündiger Fermentation erreicht.

Anschließend wird die Kulturbrühe mit 8%iger Salzsäure auf einen pH-Wert von 3,5 eingestellt und hierauf mit Äthylacetat extrahiert. Der Äthylacetatextrakt wird auf ein kleines Volumen eingedampft. Die gebildete Fällung wird abfiltriert und das Filtrat mit Petroläther versetzt. Hierbei wird eine weitere Fällung an Rohprodukt erhalten. Die erste Fällung wird mit Methanol gewaschen. Die zweite Fällung wird nach dem Waschen mit Methanol mit der ersten Fällung vereinigt. Anschließend wird das Rohprodukt durch Säulenchromatographie gereinigt.

Hierbei wird das amorphe Rohprodukt in einem Gemisch aus Chloroform und Methanol (95 : 5) gelöst. Die Lösung wird mit einer geringen Menge Kieselgel versetzt und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird auf eine Kieselgelsäule gegeben, die mit 0,5-n wäßriger KH₂PO₄ Lösung abgepuffert ist. Es wird zuerst mit 1 Liter Chloroform und dann mit bis 2% Methanol enthaltendem Chloroform (1 Liter) eluiert. Nach dem Eindampfen des 2% Chloroform enthaltenden Eluats erhält man ein Rohprodukt, das aus Chloroform mit einem Gehalt von 2% Methanol umkristallisiert wird. Man erhält das Purpuromycin in Form purpurroten Kristallen (Ausbeute 2 g aus 6 Fermentern mit jeweils 10 Litern Kulturbrühc) mit folgenden Eigenschaften:

1. Schmelzpunkt: Zersetzung bei 212°C; die Verbindung schmilzt nicht bis 32O°C.

2. Gewichtsanalyse in % für C₂₆HmO_n:

Berechnet
gefunden

(durch Differenz).

C 58.0. H 3,35. O 38,65; C 57,90. H 3,38, O 38,72

3. Absorption im ultravioletten und sichtbaren Spektralbercich

Purpuromycin in Chloroformlösung zeigt folgende Maxima:

/.„,„, invil

312
353
36«
4HO
505
545

44K

240

216

(Schulter)

220

(Schuller) ist in F i g. 2 wiedergegeben. Das Absorptionsspektrum wurde mit einem Perkin-Elmer-Mod. 421 Spektrograph aufgenommen.

5. Massenspektrum

Das Massenspektrum bei 70 cV zeigt in diesem Fall nicht den Molekülpeak M+. Die wichtigsten Peaks wurden bei folgenden m/e-Werten aufgenommen:

520, 504, 492, 474, 462, 288, 286, 274, 264. 256, 245, 236, 228.

In Fig. 3 ist das Massenspektrum von Purpuromycin wiedergegeben. Das Spektrum wurde mit einem Hitachi-Perkin-Elmer-RMU-oL-Massenspektrograph aufgenommen.

6. Polarographisches Verhalten

Purpuromycin in 50%iger Dimethylformamidlösung, abgepuffert auf einen pH-Wert von 9,8, zeigt ein Redox-Potential E 1/2 = -0,645 V.

7. NMR-Spektrum

Die wesentlichen charakteristischen Absorptionsmaxima in CDCl₃ und CF₃COOD treten bei folgenden Frequenzen (ausgedrückt in Λ-Einheiten) auf:

CDCl₃: 11,13(1H); 12,11 (IH); 13,03 (IH);

7,48 (IH₁S); 7,30 (lH,s); 6,16 (lH,s);

4,8 (lH,m); 4,3 (IH); 3,96 (3H,s);

3,93 (3H, s); 3,84 (lH,d,J = 18Hz);

3,46 (lH,d,J = 18Hz); 2,7 (2H,m). CF₃COOD: 7,75 (lH,s); 7,57 (IH,s); 6,48 (lH,s);

5,28 (lH,d,J = 4Hz); 4,07 (3H,s);

3,98 (3 H, s); 3,88 (1 H, d. J - 18Hz);

3,58 (1 H, d, J = 18 Hz); 3,06 (1 H. d,

J = 16Hz); 2.82 (IH, d, d, J = 16 11z.

4 Hz).

8. Löslichkeit

Die Verbindung ist gut löslich in wäßriger Natriumhydroxidlösung; mäßig löslich in wäßriger Natriumcarbonatlösung und Dimethylformamid; schwei löslich in wäßriger Natriumbicarbonatlösung, Äthyl· acetat, Dioxan, Essigsäure, Chloroform und Aceton i unlöslich in Wasser' Methanol und Bulanol.

9. Azidität

Das IJV-Ahsorptioiisspeklrum tier Verbindung is! in 1- i μ. I dargestellt. Das Spektrum wurde mil einem Perkin-Klmer-Speclracord 4000 A-Spektrograph aufgenommen.

4. IU-Absorptionsspektrum

Die wichtigsten Absorptionsinaxima in Paiallinol (Nujol) treten bei folgenden Wellen/ahlen (em ¹I auf:

3510, 3070. 1730. 16X5. 1610. 15^l)0, 1500. 1330. 1275, 1230. 1210. 1150, 1120. 1100, K)KO. 1060. 1040, 1010, Ψ)5. 970. ¹J50. ^l)30. ¹JOO, H¹X). K6S, K30. KOO. 790, 770, 750. 730.

Die Maxima des Nujols Meihen unbei'iicksichliul. Das vollständige Absuiplionsspiklnim der Substanz

η·, SpcktropholomtMrisch zeigt sich eine ionisierban Funktion bei einem pKa-Wert von 6,8 (in Wasser das 5% Dimethylformamid enthält).

Beispiel 2 Telraacelylpurpuromyein

300 mg kristallines, gemäß Beispiel I erhaltene Piirpuromyeiii wurden in 6 ml Pyridin suspendier und mit 6 ml Hssigsäureanhydrid versetzt. Die Suspen sioii wird I Stunde auf 75"I' erhit/l und anschließen* in I iswasser eingegossen. Der ausgefallene Niedei sehlag wird abl'iltriert und das Rohprodukt a Kieselgel, das mil 0,5-n wäßriger KII₂P(X₁-IOsUi) abgepiiffctt ist, ehromalogiaphiert. Als l.aumiillt wird Chloroform verwendet.

Das erste Final (350 ml) wird eingedampft und di Rik-kv.and aus Diinelhylsulfoxid. das geringe Menge Wasser enthüll, umkrislallisii/rt.

Anschließend wird tlas zweite 1 hial (100 mil al !'etieimt. eingedampft und der Rückstand aus Ao¹Wi

umkristallisiert. Man erhält hierbei 120 mg Tctraacetylpurpuromycin mit den folgenden Eisienschaften:

1. Schmelzpunkt: 254 bis 258°C.

2. Gewichtsanalyse in % für C₃₄H_2bO₁₇:

Berechnet ... C 57,8, H 3,69, O --;
gefunden ... C 57,12, H 3,67, 0 39,21

(durch Differenz).

3. Absorption im ultravioletten
und sichtbaren Spektralbercich

Die Verbindung besitzt in Chloroformlösung foliiende Maxima:

3. Absorption im ultravioletten und sichtbaren Spektralbercich

Die Verbindung besitzt in C'hloroformlösung foltiende Maxima:

„, (Π1μ)

ίο 265 285 297

I₅ 345

526

(Schulter)

297

292

(Schulter)

151

262
283
292
307
348
360

(Schuller)

(Schulter)

523

(Schulter)

176

(Schulter)

4. IR-Absorplionsspcktrum

Die wichtigsten Absorptionsmaxima in Paraffinöl (Nujol) treten bei folgenden Wellenzahlen (cm"¹) auf:

1770, 1755, 1740, 1680, 1650, 1625, 1340, 1325, ^ί0 1300, 1290, 1255, 1235, 1210, 1190, 1160, 1135, 1115, 1083, 1050, 1030, 1010, 995, 950. 920, 872, 845, 823, 798, 770, 750, 705.

5. Massenspektrum j5

Das Massenspektrum wird bei 70 eV erhalten. Die wichtigsten Peaks werden bei folgenden m/c-Werten aufgezeichnet:

M + 706, 664, 646, 622, 604, 580, 562, 520, 504, .,o 492, 474, 462, 288, 286, 274, 273. 264, 256, 250, 236, 228.

6. NMR-Spcktrum

Die wesentlichen charakteristischen Absorptions- ^ maxima in CDCl, treten bei folgenden Frequenzen (ausgedrückt in Λ-Einhcitcn) auf:

CDCI,: 7,65 (I H, s); 7,48 (IRs); 6,2 (IRm): 6,03 (! II,s); 3,99 (311,s); 3.89 (311,·;); 3,67 (I 11, so d, .1 = 1811); 3,45 (III, d, .1 - 1811);
(211, m); 2,46 (311. s); 2,35 (6Rs):
(31 l.s).

7. Löslichkeit

Die Verbindung ist in Allylacetat, Chloroform. Pyridin, Dimethylsulfoxid und Dioxan löslich, schwer löslich in Methanol und Aceton und unlöslich in Wasser.

Die aus dem ersten liluat erhaltene Verbindung stellt das Pentaaeetylisopurpuioinycin dar, das die folgenden Figenschaften besitzt;

1. Schmelzpunkt: 195"C.

2. Gewichtsanalyse in % für (,JL_nO,.,:

Berechnet ... C 57.K. 11 3.74, I > :
gefunden . . . C 57,32, Il 3.76, (MX.')."¹

(duicli DiITeIXMiZ).

2.75 2,15

4. lR-Ahsorptionsspcktrum

1790, 1775, 1740, 1710. 1670, 1590, 1550, 1340, 1305. 1275, 1260, 1220. 1200, 1180, 1105, 1090, 1080, 1060, 1030, 1015, 980, 960, 940, 915, 890, 870, 860, 824, 805, 793, 773. 763, 720.

5. Massenspektrum

Das Massenspektrum wird bei 70 eV erhalten. Die wichtigsten Peaks werden bei folgenden m/c-Wcrten aufgezeichnet:

M + 748, 706, 664. 646. 622. 604, 580, 562, 520. 504. 492. 474. 462, 288, 274, 264, 256. 245, 236, 228.

6. NMR-Spcktrum

Die wesentlichen charakteristischen Absorptionsmaxima in CDCl, treten bei folgenden Frequenzen (ausgedrückt in /»-Einheiten) auf:

CDCl.,: 7.06 (1 Rs); 7,50 (1 Rs); 6,91 (I Rs); 6,60 (I H, s); 6,31 (I H, t. J - 6,5 Hz); 3,99 (6R s); 3,36 (2H. d, J = 6,5 Hz); 2.48 (3Rs); 2,45 (6Rs): 2.42 (3H, s); 2.10(31 l.s).

7. Löslichkeit

Die Verbindung ist in Athylacelat, Chloroform. Pyridin. Dimelhylsulfoxid löslich, schwer löslich in ■Vcton und Methanol und unlöslich in Wasser.

B e i s ρ i c 1 3 Purpuromycin-hydrogensuecinat

I 50 mg gemäl.l Beispiel I erhaltenes Purpuromyein und ^?> mg Bernsteinsäureanhydrid werden in 3 ml Pyridin 15 bis 18 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird das Reaklionsgemisch in Fiswasser eingegossen und mittels verdünnter Salzsäure anleinen pll-Wert von 3,5 angesäuert. Die gebildeten Kristalle weiden abgeschleudert, und der Überstand wird dekantiert. Das kristalline Produkt wird dann an Kieselgel mit einem Gemisch aus Chloroform und Methanol (⁽'X:2| als l.aufmillel chromalogia plüsch gereinigt. Man erhält nach dem Abdampfen des Llulionsmillcls 37 mg Piirpuroimciii-hvdrogensuccinat. I >ic Verbinduni¹ schmilzt nicht bei einer IVni|vi.i tür bis ?ίιθ ('

/1

Gewichtsanalyse in "\, fm C₁₁₁H₂-O₁,,: Berechnet ... C 56,4, H 3,45: gerunden . .. C 55.K2. H 3.5«.

Beispiel 4

Purpuromyein-hyd rogen maleat 2(K) mg gemäß Beispiel 1 erhaltenes Purpiiromycin und 43 mg Maleinsäureanhydrid in 3 ml Pvridin werden 15 bis 18 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wird das Reaktionsgemisch in lüswasser eingegossen und mittels verdünnter SaIz-

saure

14

pH-Wert von 3

" vvcrdeii

.5 eingesiellt.
geschleudert
^ knstaihne

Die und Pro-

Man erhält nach dem

Smpfcndes hydrogenmaleat vom K Gcwichtsanahse in ^C

% fur

C 56.05. H 3,27.

,,zu 3 Blatt Zeichnungen

Claims

Patentansprüche:
Purpuromycin-Verbindungen der allgemeinen Forme! I

OH

HO O

CH₃O

COOCH₃