DE2314478C3 - 3-Substituierte Rifamycin-SV-derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und therapeutische Zubereitung, die diese Verbindungen enthält - Google Patents

3-Substituierte Rifamycin-SV-derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und therapeutische Zubereitung, die diese Verbindungen enthält

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DE2314478C3
DE2314478C3 DE2314478A DE2314478A DE2314478C3 DE 2314478 C3 DE2314478 C3 DE 2314478C3 DE 2314478 A DE2314478 A DE 2314478A DE 2314478 A DE2314478 A DE 2314478A DE 2314478 C3 DE2314478 C3 DE 2314478C3
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viruses
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Description

CH3COO CH3 CH3O / CH3
CH3
(D
CH = N — NH-X-R
OH
worin X die Gruppe -CO- und R einen Biphenyl-, Nonyl- oder Undecylrest bedeuten oder X die Gruppe -CS- und R den Phenylhydrazinorest darstellen.
2. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen
H2N-NH
in der R und X die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben, in einem organischen Lösungsmittel umsetzt und das Gemisch, falls erforderlich, anschließend auf Rückflußtemperatur erhitzt.
der allgemeinen Formel gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man 3-Formylrifamycin-SV 2 bis 3 Stunden bei Raumtemperatur mit einer Verbindung der allgemeinen Formel II
-X-R (II)
3. Therapeutische Zubereitung, bestehend aus einer oder mehreren Verbindungen der allgemeinen Formel I gemäß Anspruch 1 und üblichen Substanzen.
Gegenstand der Erfindung sind 3*substituierle Rifamycin-SV-derivate der allgemeinen Formel I
CH3 CH3
I I
HO CH3 CH3COO
CH, I OH OH
CH,O / CH3
' Y Y CH = N-NH-X-R
(D
OH
CH3
worin X die Gruppe —CO— und R einen Biphenyl', Nonyl- oder Undecylrest bedeuten oder X die Gruppe -CS- und R den Phenylhydrazinorest darstellen, ein Verfahren zur Herstellung dieser Verbindungen, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man 3--Förmylrifamy* cin^SV 2 bis 3 Stunden bei Raumtemperatur mit einer
Verbindung der allgemeinen Formel II
H2N-NH-X-R
(Π)
in der R und X die vorstehend angegebene Bedeutung haben, in einem organischen Lösungsmittel umsetzt und das Gemisch, falls erforderlich, anschließend auf Rückfluß temperatur erhitzt sowie eine therapeutische Zubereitung, die eine oder mehrere der erfindungsgemäßen Verbindungen enthält.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen stellen gefärbte Feststoffe dar, die aus üblichen organischen Lösungsmitteln, wie niederen Alkanolen, Äthylacetat, Dioxan, Tetrahydrofuran, Benzol und chlorierten Kohlenwasserstoffen kristallisiert werden können. Ihre Löslichkeit in organischen Lösungsmitteln hängt offensichtlich von der Beschaffenheit und Größe der Substituenten R und X ab. Wenn Säurefunktionen vorhanden sind, sind die Verbindungen auch in Wasser als Salze mit gaeigneten Basen löslich, z. B. als Alkalimetallsalze. Die erfindungsgemäßen Verbindungen besitzen bemerkenswerte antibakterielle Wirksamkeit gegenüber grampositiven und gramnegativen Bakterien, insbesondere gegenüber Staphylococcus aureus Stämmen. In diesem Fall beträgt die Mindesthemmkonzentration etwa 0,001 bis <L.twa 0,05 μg/I. Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind auch wirksam
Tabelle I
gegenüber Mikroorganismen, die gegenüber anderen bekannten und verbreitet angewandten antibiotischen Substanzen resistentsird.
In verschiedenen repräsentativen Untersuchungen an Mäusen erwiesen sich Dosierungen von etwa I mg/kg bis etwa 5 mg/kg, p.o„ als hochwirksam für die Hemmung der experimentellen Infektion mit Staphylococcus aureus. In anderen Versuchen stellte man fest, daß repräsentative Verbindungen gemäß der Erfindung in Dosen von etwa 5 bis 10 μg/rnl auch gegen Staphylococcus aureus Tour Stämme wirksam sind, die sich gegenüber anderen Rifamycine!! als resistent erweisen, die gewöhnlich in der therapeutischen Praxis angewandt werden. Die Toxizität der neuen Verbindungen ist sehr gering und beträgt etwa 2000 bis etwa 2500 mg/kg oral.
In der nachstehenden Tabelle I ist die in vitro Wirksamkeit der erfindungsgemäben Verbindungen gegenüber einem Stamm von Staphylococcus aureus Tour, der gegenüber Rifampicin resistent ist, zusammengestellt. In diese Tabelle wurden zum Vergleich auch die in vitro Wirksamkeiten von Rifampicin, Rifamycin-L und einigen aus der DE-OS 17 95 567 bekannten Rifamycinderivaten aufgenommen. Die Tabelle enthält auch die LD50-Werte, die nach Lichtfield und Wilcoxon, J. Pharm. Expt. Ther„ Bd. 96 (1949), S. 99 ermittelt wurden.
In vim -Wirksamkeit gegenüber rifampicinresistentem Stamm von Staphylococcus aureus Tour*)
Verbindung
gemäß Beispiel
Sutwtiturt.ten
X
der Formel I
R
MHK
((jig/ml)
LD 50 oral
Mäuse
(mg/kg)
1
2
3
4
Fortsetzung von
CO
CS
CO
CO
Tabelle I
Biphenyl
Phenylhydrazino
Nonyl
Undecyl
10
5
10
5
2000
2500
2300
> 2000
Verbindung MHK
^g/ml) i
LDj1) oral
Mäuse
Img/kg)
Rifampicin[3-(4-methyl-l-piperazinyI-iminonmethyI)-rifamycin-SV]
Verbindung von Beispiel 16 der DE-OS 17 95 567 Verbindung von Beispiel 25 der DE-OS 17 95 567 Verbindung von Beispiel 28 der DE-OS 17 95 567 Rifamycin-L *) Hinterlegt in der Sammlung Lepetit unter Nr. 165/150.
148Oi
> 4000
1030
1500
1040
Aus der vorstehenden Tabelle I ist ersichtlich, daß die Verbindungen der vorliegenden Erfindung eine bemer^ kenswerte in vitro Wirksamkeit gegenüber einem rifampicinresistenlen Stamm von Staphylococcus aureus Tour aufweise^ während verschiedene andere Rifamycinderivate diesem Stamm gegenüber ebenfalls resistent sind. Die Tabelle zeigt darüber hinaus, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen eine ausreichende Verträglichkeit aufweisen.
Eine weitere sehr wichtige Eigenschaft der erfindungsgemäßen Verbindungen ist ihre Hemmwirkung
auf DNS-Polymerasen, die für Lymphoblasten aus menschlichem leukämischen Blut charakteristisch sind, Und gegen typische Nucleolidyl-Transferasen (Polyme-
rasen) von Viren, die von der normalen Zelle nicht verwendet werden können. Aus Untersuchungen an repräsentativen Gliedern von Virusgruppen ist bekannt, daß sie als wesentlichen Teil ihrer Reproduktion Polymerasen in die Wirtszellen tragen oder in ihnen erzeugen. So gibt es Viren, wie z. B. Picornaviren oder Polioviren, die RNS-abhängige RNS-Polymerase erzeugen, während andere Gruppen, wie z. B. Leukämie-Sarkom-Viren eine RNS-abhängige DNS-Polymerase tragen. Die Gegenwart und die außerordentlich wichtige Rolle der RNS-abhängigen DNS-Polymerase (reverse Transcriptase) bei Tumor bildenden RNS-Viren wurde von D. Baltimore, Nature, Bd. 226 (1970), S. 1209 und von H. M. Temin u. Mitarb. Nature, Bd. 226 (1970), S. 1211 entdeckt.
Die kürzliche Entdeckung von RNS-abhängigem DNo-Polymerase-Enzym in RNS-Tumorviren in Tierarten wurde auch von anderen Autoren bestätigt, wie z. B. aus den nachstehend aufgeführten Literaturstellen hervorgeht:
Green u. Mitarb. »Mechanism of carrinogenesis by RNA tumor viruses, I. An RNA-dependent DNA-PoIymerase in murine sarcoma viruses« (Proc. Nat. Acad. Sei. USA. Bd. 67 [ 1970], S. 385 - 393),
Spiegelman u. Mitarb. »Characterization of the products of RNA directed DNA-polymerase in oncogenic RNA viruses« (Nature, London, Bd. 227 [1970], S. 563).
Hatanaka u. Mitarb. »DNA polymerase activity •ssociated with RNA tumor viruses« (Proc. Nat. Acad. jo Sei. USA, Bd. 67 [ 1970], S. 143).
Scolnick u. Mitarb. »DNA synthesis by RNA containing tumor viruses« (Proc. Nat. Acad. Sei. USA. Bd. 67 [1970], S. 1034).
Das Vorliegen von RNS-Viren in einigen Tumoren wird auch durch andere Fakten bestätigt: reverse Transcriptase wurde in Teilchen der Milch von Frauen mit bekannter Brustkrebsanamnese und von solchen Frauen, in deren Familie Brustkrebs aufgetreten war. gefunden (Scholn u. Mitarb. Nature. Bd. 231 [1971], S. 97), während Priori u. Mitarb. (Nature, New Biology, Bd. 232 [1971], S. 16) ein als ESP-I bezeichnetes, reverse Transcriptase enthaltendes Virus aus Zellen der Pleuralflüssigkeit eines Kindes mit Lymphom isolierten und es erfolgreich auf Gewebeknlturen züchteten. «
Das Vorliegen von RNS-Hotnologen bei menschlicnem Brustkrebs zu Tumorvirus-RNS bei der Mamma der Maus wurde von R. Axel u. Mitarb. (Natuie, Bad, 235 [1971], S. 32) durch Molekularhybridisationsversuche demonstriert. Die Möglichkeit eines Virus beim μ menschlichen Brustkrebs wurde auch durch Elektronenmikroskopie menschlicher Milch gestützt (N. H. Sarkar u. Mitarb., Nature, Bd. 236 [1972], S. 103). Auf RNS gerichtete DNS-Polymerasewirksamkeit und Virus-Shnliche Teilchen wurden auch aus menschlichen Rhabdomyosarkomzellen isoliert (McAllister u. Mitarb., Nature, New Biol. Bd. 235 [1972], S. 3). Zur Zeit existieren keine sehr wirksamen Arzneimittel zur Behandlung von Viruserkrankungen, da die Stoffwechselerfordernisse für Viren und Zellen gleich sind. Der (,0 meistversprechende Weg zur Chemotherapie von Viruserkrankungen ist die Entwicklung geeigneter Chemikalien, die sich in spezifischer Weise mit Viruspolymerasen oder mit von Viren transformierten Zellpolymerasen, aber nicht mit den Polymerasen der (,5 Wirtszellen, die die genetische Information der Viren kontrollieren, vereinigen. Spezifische Inhibitoren für Virus- oder durch Viren transformierte Zellenzyme und insbesondere Inhibitoren für Polymerasen von RNS-Tumorviren können eine bedeutende Rolle bei der Bereitstellung von Arzneimitteln zur Behandlung der Leukämie und anderer Krebserkrankungen spielen. Die Hemmwirkung der erfindungsgemäRen Verbindungen wurde an RNS-abhängiger DNS-Polymerase des endogenen Muridae-Sarkom-Virus und an der DNS-abhängigen DNS-Polymerase-Wirksamkeit gereinigter Enzyme untersucht (poly dA-Tas Matrize). Die Hemmwirkung wurde gemäß den von C. Gurgo u. (viitarb. in Natu.s, New Biology, Bd. 229 (1971), S. 111, beschriebenen Methoden getestet.
Die Wirkung der verschiedenen Arzneimittelkonzentrationen auf die Polymerasewirksamkeit wurde anschließend an die 'H-dTTP (tritiertes Thymindesoxyribosidtriphosphat)-Einverleibung in die unlösliche Fraktion bestimmt. Ein typisches Beispiel r"«ir das experimentelle Verfahren ist nachstehend beschrieben.
Isolierung des Virus 1 ,i Reinigung
del Viiuipl
Der Virus wurde wie zuvor beschrieben (Green ii. Mitarb. Proc. Nat. Acad. Sei. USA. Bd. 67 [1970], S. 385-393; Rokutanda u. Mitarb. Nature. Bd. 227 [1970], S. :026- 1028) aus durch Miiridae-Sarkom- Virus (MoIoney-Isolat) veränderten Rattenzellen1 und aus durch Muridae-Sarkom-Virus (Harvey-Isolat) veränderten Mäusezellen2 isoliert und gerein'gt. Die Viruspolymerase wurde durch Inkubation des gereinigten Virus mit 0.5% NP-40 (nonidet P-40) in 0.1 molarem NaCI. 0.01 molarem Tris-Puffer (pH 7,6),0.001 molarer Äthylendiamintetraessigsäure während 5 Minuten bei Raumtemperatur und durch Zonenzentrifugation in von 15 auf 30% ansteigender Saccharose in 1OmM Natriumphosphatpuffer (pH 7,4), 2.5 mM MgCI:. 10 mM Dithiothreit und 5% Glyzerin während 24 Stunden bei 38 000 UpM in einem Spinco SV/41 Rotor 20- bis 40fach gereinigt. Die Spitzenfraktionen der Enzymwirksamkeit (13- 17). der 22 gesammelten Fraktionen wurden vereinigt und bei - 700C in 30% Glyzerin aufbewahrt.
DNS-Polymerase-3estimmung
Die Enzyminkubation wurde wie von Green u. Mitarb, in Proc. Nat. Acad. Sei. USA, Bd. 67. S. 385 - 393. 1970, beschrieben, eine Stunde bei 37°C in 100 μΙ eines Reaktionsgemisches, das 40 mM Tris-Puffer (pH 8,0). 5 mM Dithiothreit. 30 mM NaCI, 2.5 mM MgCI2.0,1 mM dATP, dGTP, dCTP und 10 μο »H-dTTP (12-18 Ci/Millimol) enthielt, durchgeführt. Die Reaktion wurde durch Zugabe von 150 μΐ 1 η Perchlorsäure beendet. Als Träger wurde Kalbthymus-DNS (100 μg) zugesetzt. Das radioaktive DNS-Produkt wurde wie in den beiden oben •Mg-egebenen Literaturstellen beschrieben aufgearbeitet. Die endogene RNS-abhängige DNS-Polymerasewirksamkeit vurde nach der Zugabe von 0,01% NP-40 zu dem gereinigten Virus zum Zeitpunkt des Versuchs gemessen. Die DNS-Polymerasewirksamkeit der gereinigten Viruspolymerase wurde mit 2 μg von Poly d(A-T) als Matrize u;id ohne N P-40 gemessen.
Test zur Ermittlung der Hemmwirkung
von Rifamycinderivatan
Rifamycinderivate wurden in Dimethylsülfoxid (DMSO) in einer Konzentration von 5 mg/ml gelöst und bei 4°C aufbewahrt. Die Hemmung der endogenen RNS^abhängigen DNS-Polymerasewirksamkeit wurde
'78AlZeIIeIi
2 M EH Zellen
dadurch untersucht, daß man das Probegemisch mit 2 μΙ des in DMSO entsprechend verdünnten Derivats oder 2 μΐ DMSO (Kontrolle) versetzte, bevor man es dem aufgebrochenen Virus zusetzte, das 15 bis 30 μg Virusprotein enthielt. Die Enzyminkubation wurde 60 Minuten lang bei 37°C durchgeführt. Die Hemmung des gereinigten Enzyms wurde durch Vorinkubation von 2 μΐ des Derivats oder von DMSO mit 30 μΙ Enzym (I bis 2 μg Protein) während 10 Minuten bei 37°C untersucht: dann wurden 70 μΙ Substratgemisch zugesetzt, und das Gemisch wurde, wie oben beschrieben, weiterinkubiert und aufgearbeitet.
In repräsentativen Versuchen verringerten die erfindungsgemäßen Verbindungen in einer Konzentration von 2 — 100μg/mI oder weniger die Einverleibung von H'-dTTP auf weniger als 10%, als sie in den Kontrollversuchen festgestellt wurde, wodurch die Hemmwirkung auf den Mechanismus der Carcinogenese durch RNS-Türnorvireri nach den ncücsicn iiiuL-ncmischen Erkenntnissen klar gezeigt wurde.
Die Hemmwirkung der reversen Transkriptasen wurde auch durch Versuche an Polymerase aus Muridae-Leukämie-Viren bestätigt. Muridae-Leukämie-Virus-RNS-abhängige DNS-Polymerase wurde wie von GaIIo u. Mitarb, in Nature. New Biology. Bd. 232 (1971), S. 141 beschrieben, aus mit Triton X 100 aufgebrochenen Viren hergestellt. Viren der beiden Arten Rauscher und Moloney wurden zuvor durch Bandenbildung im 1.16-g/ml- Bereich eines Saccharosedichtegradienten nach anfänglicher Zentrifugation bei geringer Geschwindigkeit zur Entfernung von Zellbruchstücken und Schichtenbildung auf Saccharosekonzentrationsgradienten von 60% bis 20% gereinigt. Die Endkonzentration des Viruspräparats betrug 10" Teilchen/ml. Als Matrize wurde endogene 70S RNS verwendet. Es wurde festgestellt, daß Konzentrationen von 50 μg/mI oder weniger das Enzym wirksam hemmten.
Ähnliche Ergebnisse wurden bei Verwendung von Tumorzellpolymerasen menschlichen Ursprungs erzielt. In diesem Fall wurde die Hemmwirkung auch an Polymerasen normaler Zellen untersucht, um einen selektiven Effekt zu charakterisieren. Repräsentative kitamycindenvate der Formel I wurden auf ihre Wirkung auf zwei gereinigte DNS-Polymerasen untersucht, die (I) aus menschlichen normalen (PHA-stimulierten) Blutlymphocyten, (II) aus Lymphoblastzellen (von einem normalen Spender) und (III) aus menschlichen leukämischen Blutlymphoblasten isoliert worden waren. Es wurden synthetische und/oder native Matrizen verwendet
Ein typisches Beispiel für das experimentelle Verfahren ist nachstehend beschrieben:
Menschliche Blutlymphoblasten
Leukämische Lymphobiasten wurden aus dem peripheren Blut von Patienten mit akuter Iymphocytischer Leukämie (ALL) durch Leukophorese isoliert Die Zellen wurden gewaschen und die Erythrocyten durch hypotonische Auflösung entfernt Normale Lymphocyten wurden aus dem peripheren Blut von gesunden Spendern nach der Entfernung der Granulocyten durch Nylon-Säulenchromatographie erhalten. Sie wurden wie vorstehend beschrieben (GaIIo u. Mitarb, Nature, Bd. 228 [1970], S. 927; GaIIo u. Mitarb, Science, Bd. 165 [1968], S. 400) 72 Stunden lang mit Phytohämagglutinin (PHA) behandelt, um ihre DNS-Polyir.erasewirksamkeit zu verstärken.
Wegen des Problems, ausreichende Mengen dieser Zellen zu erhallen, wurde zur Gewinnung weniger gereinigter DNS-Polymerasen für einige der anfänglichen Untersuchungen zur Gewinnung eines Überblicks eine menschliche »normale« Gewebezellkultur (1788) ■s Verwendet. Die interessierenden Verbindungen wurden dann an den stärker gereinigten Enzymen aus den normalen und leukämischen Blutlymphocyten genauer untersucht. Die Gewebezellkulturen wurden von der Associated Biomedic Systems, Inc., erhalten.
DNS-PoIy merasepräpara te
DNS-Zellpolymerasen wurden aus normalen Blut-(PHA-stimuliertenJ-Iymphocyten. leukämischen Blutlymphocyten und (1788) Lomphoidzellen durch Homogenisierung in hypotonischer Pufferlösung und nach folgende Behandlung mit Triton X 100 und/oder starke Salzextraktion des extralysosomalen Pellets extrahiert und gereinigt. Nach der Differentialzentrifugation Vvuiucii die Zeürxirakie uurcii 5äu!etii.nromaiograpnie über Diethylaminoethylcellulose. Phosphocellulose und Sephadex G 200 weiter gereinigt.
Untersuchung der DNS-Polymerase
Die Untersuchung der DNS-Polymerase wurde in einem Endvolumen von 100 μΙ durchgeführt. Das untersuchte Gemisch enthielt 5OmM Tris-HCI-Puffer mit einem pH-Wert von 8.3, 6.0 mM MgAc. 8.0 mM Dithiothrei' und 60 mM MaCI. Die Einstellung des pH-Wertes wurde nach der Zugabe der zuvor in
jo Dimethylsulfoxid (DMSO) gelösten Inhibitoren durchgeführt. Die Endkonzentration an DMSO betrug 0,5%, und alle Kontrollproben enthielten diese Menge an DMSO. Im Versuch wurde eine Enzymkonzentration verwendet, die die Einverleibung von etwa l.OpMol/
j5 Std. katalysiert. Das Enzym war in den meisten Fällen 5 Minuten lang mit dem Inhibitor vorinkubiert worden. Die Umsetzung wurde dann durch Zugabe von entweder synthetischer DNS (Poly d [AT] Miles Lab.) und DNS-RNS-Hybrid (Oligo dT.poly rA), 5 μg/ml. oder nativer Matrize : aktivierte Salm-Sperma-DNS. 50μg/ml. und endogene 70S Virus-RNS; 10 μθ (3H-Methyl)-TTP (New England Nuclear, 18,6 mCi/ μΜοΙ. lyophilisiert und erneut gelöst in 0,01 m HCl unmittelbar vor der Anwendung) und dATP (8 χ 10 5 M, mit synthetischer Matrize) oder allen drei Desoxynucleosid-triphosphaten (8xl0"5M mit RNS oder DNS als Matrize) eingeleitet Bei einigen Versuchen wurde das Enzym nicht mit dem Inhibitor vorinkubiert
In diesen Fällen wurden die Reaktionen durch Zugabe des Enzyms zu dem vollständigen, den Inhibitc enthaltenden Reaktionsgemisch eingeleitet Zu Beginn der Inkubation und nach 30 Minuten wurden Proben entnommen, die Vorgänge in ihnen durch Zugabe von 2 ml 0,08 m Natriumpyrophosphat unterbrochen, und anschließend wurden diese Proben in 12^%iger kalter Trichloressigsäure (TCE) mit Hefe-RNS (400 μ^) als Träger ausgefällt Die Produkte wurden auf einem Milliporenfilter gesammelt gründlich mit 5%iger
Trichloressigsäure und 1 ml DMSO-ÄthanoI-0,1 mNaCl (0,5 :70 :29,5) gewaschen, getrocknet und in 2 ml BBS3 (Beckman) und 10 ml Liquifluor (New England Nuclear) in einem Packard-FIüssigkeits-Szintillationszähler gezählt Es wurde gefunden, daß Konzentrationen von 5
es bis 20 μg/m] bei einer synthetischen DNS-Matrize eine 50%ige Hemmung der Leakärnie-Poivinerase bewirken. Bei einer synthetischen RNS-Matrize (Poly rA. rU) war die Reaktion sogar noch empfindlicher. Repräsentative
Untersuchungen, die mil einer nativen Matrize an Pölymerase von normalen und Tumorzellen durchgeh führt wurden, ergaben eine höhere Empfindlichkeit der Tumorenzyme gegenüber den untersuchten Verbindungen.
In der nachstehenden Tabelle Il wird die Hemmwirki'ig der Verbindungen der vorliegenden Erfindung auf die RNS-abhängige DNS-Polymefase des Muridae-Leukämie-Virus (Rauscher Isolat), die nach den vorstehend erläuterten Verfahren bestimmt wurde, mit den entsprechenden Wirkungen von drei bekannten Rifamycindefivaten, die in der DE-OS 17 95 567 beschrieben sind, verglichen. Alle Verbindungen wurden bei einer Konzentration von 50^g/rril untersucht. Die Tabelle enthält auch die LD™*Werte.
Tabelle Π
Prozentuale Hemmung der viralen Leukämie-Polymerase
Verbindung des X 28 R Prozentuale LD50 oral
Beispiels 19 Hemmung Mäuse
34 (mg/kg)
1 CO Biphenyl 86 2000
2 CS Phenylhydrazino 93 2500
3 CO Nonyl 97 2300
4 CO Undecyl 97 > 2000
Verbindung des Beispiels der DE-OS 17 95 567 O 1500
Verbindung des Beispiels der DE-OS 17 95 567 O >4000
Verbindung des Beispiels der DE-OS 17 95 567 O > 1000
Der vorstehenden Tabelle 11 ist zu entnehmen, daß die Verbindungen gemäß vorliegender Erfindung die RNS-abhängige DNS-Polymerase des Muridae-Leukävnie-Virus hemmen, und zwar im Rille der Verbindungen der Beispiele 2, 3 und 4 zu rund 100%, während die aus der DE-OS 17 95 567 bekannten Rifamycinderivate unwirksam sind.
Andere biologische Eigenschaften der neuen Rifamycinderivate sind die Hemmung der Fokusbildung bei Zellen der Maus, der Ratte und des Menschen durch den Moloney- und Kirsten-Stamm des Muridae-Sarkom-Virus, die selektive Hemmung der Viruserzeugung durch bereits veränderte Maus- und menschliche Zellen, die Auffindung sich zurückbildender Zellen unter Verwen-
nichtproduzierenden Maus- und Rattenzeilsysteme. Die erfindungsgemäßen Rifamycinverbindungen haben sich außerdem als selektiv toxisch für durch Viren veränderte Zellen von Mäusen, Ratten und Menschen erwiesen, wenn sie auf ihre Kolonie-bildende Fähigkeit untersucht wurden.
In Versuchen zur Ermittlung der Wirkung der erfindungsgemäßen Verbindungen, die Fokusbildung durch Moloney-Sarkom-Viren bei BALB/3T3-Gewebekulturen zu hemmen, wird das folgende Verfahren angewandt:
BALB/3T3-Zellkulturen werden in 250-mI-Kunststoffflaschen in einem Wachstumsmedium gezüchtet, das aus Eagle's minimalem essentiellen Medium mit 10% fötalem Rinderserum besteht Mit einem Coulter-Zähler werden nach der Suspendierung der Zellen mit Trypsin-Äthylendiamintetraessigsäure und dem Verdünnen mit Wachstumsmedium Zellzählungen durchgeführt Als Tumorhomogenat wird Moloney-Muridae-Sarkom-Virus verwendet Man unterwirft es viermal einer Zellpassage in MausembryGzellen der Schweizer Rasse mit hoher Passagezahl und untersucht es auf Fokus bildende Einheiten in den BALB/3T3-Zellen. Bei der Durchführung der Untersuchungen wird eine Modifizierung der von Hartley und Rowe, Proa Nat Acad. Sei, Bd. 55 (1966), S. 780 beschriebenen Methode angewandt. Im vorliegenden Fall werden Flaschen mit 1—2xl05 Zellen in 25 ml des Wachstumsmediums geimpft und 24 Stunden lang bei 37°C inkubiert. Nach Entfernung der Flüssigkeiten wird das Virus mit einer vorbestimmten Anzahl von Fokus bildenden Einheiten in 0,5 m! des Wachstumsmediums eingeführt Dann läßt man es 90 Minuten lang bei 37°C an der Monoschicht der Zellen adsorbieren. Nach dieser Adsorptionsperiode wird eine vorbestimmte Menge, gewöhnlich etwa 5 bis 10μg/ml einer Rifamycinverbindung (die zuvor in Dimethylsulfoxid in einer Konzentration von 1 mg/ml gelöst worden war) in 25 ml des Wachstumsmediums gebracht, und die Kulturen werden in den Inkubator zurückgebracht Als Kontrolle wird Dimethylsulfoxid äncin liVi Tt äCiiS»üin5fi*icuiüfrt Zu cii'ici' geil ύΙΊΓιΐέΙ'ΐ r\.uiLuf zugesetzt. Nach 3tägiger Inkubation sind die Kulturen flüssig-verändert, und die Foki der veränderten Zellen werden am 7. Tage gezählt
Auf die gleiche Weise wird das Bläschenstomatitis-Virus, New Jersey Serotyp, untersucht Methoden zur Vermehrung und Untersuchung dieses Virus wurden von Hackett u. Mitarb, in Virology, Bd. 31 (1967), S. 114 beschrieben.
Diese Eigenschaften zeigen, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen eine Hemmwirkung auf durch Viren hervorgerufene Tumore bei Tieren besitzen.
B e i s ρ i e I e 1 bis 4
Herstellung der Verbindungen der
allgemeinen Formel I
Zu einer Tetrahydrofuranlösung von 0,01 Mol 3-FormyIrifamycin-SV wurden bei Raumtemperatur 0,01 Mol einer Verbindung der allgemeinen Formel II gegeben. Gewöhnlich war die Umsetzung nach 2 bis 3 Stunden beendet Falls nach dieser Zeit die chromatographische Untersuchung auf einer Kieselsäuregelplatte anzeigte, daß die Umsetzung noch nicht beendet war, wurde das Gemisch 15 bis 45 Minuten unter Rückfluß erhitzt Das Reaktionsgemisch wurde zur Trockne eingedampft und der rohe Feststoff durch Kristallisation
11 12
aus organischen Lösungsmitteln, wie Methanol, Äthyl- Formel I aufgefUhit, die aus 3-Formylrifarriycin-SV und
acetat oder Chloroform oder durch Säulenchromato- einem HydrazinderivE.t der allgemeinen Formel Il
graphie gereinigt. hergestellt wurden. Ebenfalls aufgeführt sind die
In der folgenden Tabelle II! sind die physikalisch-che- Bedeutungen von R und X,
mischen Daten der Verbindungen der allgemeinen 5
Tabelle III
Bei- Ausgangshydrazin Subslituenlen der Formel I Lösungs- Schmelz- Aus- Wesentliche Banden
spiel mittel Pur punkl beute im UV- und sichtbaren
die Kristal- oder Bereich
, !isation Zerset-
' ' oder Chro- zung
D i. matographie ,. n/ , „,„„ Ris
1 H2N- NH- CO—\\—χ/ \/~^^y C0 Benzo1 l88 92 4^O; 343 139;
2 11,N-NH-CS-NH-NIl-/' "S —NH-NH-<f % CS 3TeUaChIOr- 210 75 482; 344 178,4;
N=/ N=_/ kohlenstolT 344,1
3 H,N — NH-CO— (CHj)1CIIj — C,H„ CO Athylacetal- 148-51 78 480; 335 161,5;
Ligroin 270,7
4 11,N-NH-CO-(CHj)I0CH, C11H3J CO Älhylacelat I30-33 85 488; 339 126,3;

Claims (1)

  1. Patentansprüche: 1. 3-Substituierte Rifamycin-SV-derivate der allgemeinen Formel I:
    CHj CH3
    I I
    HO CH3
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Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1053787B (it) * 1974-10-29 1981-10-10 Pastori A Macrolidi azotati e loro preparazione
GB1478563A (en) * 1975-03-05 1977-07-06 Lepetit Spa Rifamycin derivatives
DE2728869A1 (de) * 1976-06-25 1977-12-29 Antibiotice Iasi Intreprindere Rifamycinen und verfahren zu deren herstellung
US4179439A (en) * 1977-07-01 1979-12-18 Intreprinderea De Antibiotice Iasi Rifamycins and method for their preparation
JPS5419997A (en) * 1977-07-15 1979-02-15 Intorepurinderea De Anteibiote 33formylrifamycin sv derivative
JPS6025436B2 (ja) * 1977-07-15 1985-06-18 イントレプリンデレア・デ・アンテイビオテイスイアシ 水溶性リフアマイシン
DE2918140C2 (de) * 1979-05-05 1985-02-07 Fresenius AG, 6380 Bad Homburg Dialysator
AU536524B2 (en) * 1979-06-28 1984-05-10 Gruppo Lepetit S.P.A. Water soluble hydrozones of 3-formylifamyan
US4447432A (en) * 1981-11-17 1984-05-08 Farmitalia Carlo Erba S.P.A. Azino rifamycins

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH489521A (fr) * 1964-07-31 1970-04-30 Lepetit Spa Procédé de préparation d'un dérivé de la rifamycine SV
FR208F (de) * 1964-07-31

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