DE2307543B2 - Verfahren zur Entfernung von Kupfer aus kupferhaltigem Antibiotika der Phleomycin-Bleomycin-Gruppe - Google Patents

Description

' gruppe enthaltenden Lösung zur Adsorption der

._t Antibiotika in Berührung bringt, sodann das Harz

au mit einer wäßrigen, ein Chelatisierungsagens enthaltenden Lösung zur Freisetzung des Kupfers aus den Antibiotika in Berührung bringt und hiernach das Harz mit einem Wasser enthaltenden organischen

Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Lösungsmittel zur Elution der Antibiotika behandelt.

Entfernung von Kupfer aus einer kupferhaltigen »5 Hierbei läßt man zweckmäßig die kupferhaltige

Form von Antibiotika der Phleomycin-Bleomycin- Antibiotikaform enthaltende wäßrige Lösung durch

gruppe. eine mit einem nichtionenaustauschenden macro-

Diese Antibiotika können das Kupfer, das durch netzförmigen Harz gefüllte Säule zur Adsorption der

das erfindungsgemäße Verfahren entfernt wird, in' Antibiotika hierauf laufen und sodann eine ein Chelati-

Chelatform enthalten (vgl. beispielsweise Maeda, 30 sierungsagens enthaltende wäßrige Lösung durch die

Kosak a, Yagishita und Umezawa, Säule abwärts fließen.

J. of Antibiotics, A 9, S. 82, 1956; Umezawa, Nach einer bevorzugten Ausführungsform der Maeda, Takeuchi und Oka mi, J of Anti- Erfindung wird das Verfahren derart geführt, daß man, ^ biotics, A 19, S. 200, 1966). bevor man ein nichtionenaustauschendes, macro-Die erwähnten Antibiotika weisen eine ausge- 35 netzförmiges Harz mit einer wäßrigen, eine kupferprägte Antitumorwirkung zusammen mit einer anti- haltige Antibiotikaform nthaltenden Lösung in Bemikrobiellen Wirkung auf, wobei insbesondere Bieo- rührung bringt, diese wäßrige Lösung mit 1 bis 3% mycin bei der Behandlung effloreszenter Zelltumore, eines Chelatisierungsagens vermischt, auf pH 2 oder maligner Lymphoma und zerebraler Tumore verwen- weniger mit einer Säure einstellt und sodann auf den det werden. Es ist weithin bekannt, daß ein kupfer- 4° Ausgangs-pH erneut einstellt.

freies Bleomycin, das durch Entfernung von Kupfer Bei dem Verfahren der Erfindung können als kupferaus einem Bleomycin erhalten wurde, eine verringerte haltige Antibiotikaformen insbesondere Phleomycin Toxizität und einen erheblich verbesserten chemo- und Bleomycin eingesetzt werden,
therapeutischen Index bei Mäusen aufweist, die von Eine wäßrige Lösung der Kupfer enthaltenden Form Carcinomen des Ehrlich Ascites Typus befallen sind, 45 der Antibiotika der Phleomycin-BIeomycingruppe Bei klinischen Versuchen wurde auch gefunden, daß wird als Ausgangsmaterial in dem Verfahren gemäß ,kupferfreies Bleomycin gegenüber kupferhaltigem der Erfindung auf einen pH-Wert von 4 bis 9 mit Bleomycin weniger Nebenreaktionen bewirkt. Deshalb Natriumhydroxid oder Chlorwasserstoffsäure eingewird bei der klinischen Verwendung derzeit nahezu stellt und durch eine Säule in Berührung mit einem ausschließlich die kupferfreie Form eines Bleomycins 5° nichtionenaustaaschenden raacronetzförmigen Harz verwendet. zur Absorption herauf geführt. Vertreter derartiger Die bekannten Verfahren der Kupfereatfernung Harze sind beispielsweise aus Styrol-divinylbenzolschließen ein Verfahren, in welchem das Kupferion copolymeren, Acrylesterpolymeren oder aus Phenolaus einer angesäuerten, wäßrigen, die vorstehend harz zusammengesetzte Adsorbentien. Bei der Durcherwähnten Antibiotika enthaltenden Lösung mit 55 führung des Verfahrens wurde gefunden, daß die An-Chloroform, das ein wasserunlösliches Chelatisierungs- Wesenheit verschiedener Salze, wie beispielsweise agens, wie Dithizon (Umezawa, Siihara, Natriumchlorid, Natriumsulfat, Ammoniumchlorid, Takita und Maeda, J. of Antibiotics, A 19, Ammoniumacetat und Ammoniumformiat nicht stört S. 210, 1966) enthält, extrahiert wird, und ein Ver- und eher zu einer Begünstigung der Adsorption führt, fahren, in dem das Kupfer als Kupfersulfid durch So Diese Salze treten durch die Säule hindurch und werden Reaktion mit Schwefelwasserstoff ausgefällt wird von dem System abgetrennt, so daß sie den nachfol- oder das Kupferion mit einem Reduktionsmittel redu- genden Verlauf der Behandlung nicht stören können, ziert und als Kupfer(I)-Verbindung ausgefällt wird Bei der üblichen Herstellung werden Antibiotika (beispielsweise USA.-Patentschrift 3 646 197), ein. Je^ der Phleomycin-BIeomycingruppe als Rohsubstanzen doch werden die Bleomycine durch dieses Verfahren «5 aus Kulturlösung mittels eines Kationenaustauscherlediglich in geringen Ausbeuten mit einem hohen harzes wie beispielsweise einem Carbonsäuregruppen verbleibenden Kupfergelhalt eirhalten, weshalb diese aufweisenden sauren Kationenaustauscherharz in H⁺- Verfahren in der Praxis nicht befriedigend sind. oder Na⁺-Form isoliert und sodann zur Reinigung

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und Isolierung der gereinigten Substanz einer Säulen- eigneterraaßen 20 bis SO Volumprozent, Die Zugab« Chromatographie mit einem sauren Ionenaustauscher, von Chlomasserstoffsäure, Schwefelsäure oder Phaser aus oarboxylmethylhaltJgem, vernetzten! Poly- phorsfture zu dem Lösungsmittel zurEinjtelimfg. der sacohariil (aus Dextran) zusammengesetzt ist, als Slurekonwntratlon des Lösungsmittels auf 0,01, bin unabdingbarem Schritt unterworfen. Bei dem erftn- 5 0,001 η ist erwünscht, da hierdurch die. Eluierungsoungsgemäßen Verfahren kann das aus dieser Säulen- fähigkeit des Lösungsmittels vergrößert wird und Chromatographie erhaltene Eluat direkt einer Kupfer- gleichzeitig die Antibiotika als Salz mit dem Anion entferaungsbehandlung ohne Entfernung des als dieser Säure isoliert werden können. . ■ .. ■ X-J |- Eluierungsmittel verwendeten Salzes unterworfen wer- Die vorstehenden Ausführungen stellen eine Beden. Dies stellt sin hervorragendes Merkmal des erfin- io scnreibuag der prinzipiellen Grundlagen des Verfahren« f dungsgemäßen Verfahrens im Vergleich zu den be- dar, das natürlich bis zu einem gewissen Ausmaß, Γ kannten Verfahren dar. sofern erforderlich, modifizierbar ist. Beispielsweisii

': Bei der nächsten Stufe wird auf die Säule eine kann vor der Adsorption den Antibiotika eine wäßngw

wäßrige Lösung eines wasserlöslichen Chelatisierungs- Lösung mit 1 bis 3 % eines Cheiatisierungsagfcns, z.B. agens, wie Dinatriumäthylendianuntetraacetat (nach- ii EDTA · 2Na, das auf einem pH von 2 oderAtfönigöir stehend als EpTA · 2Na bezeichnet) angewandt, mit einer Säure, z. B. Chlorwasserstoffsäure, eingewelcbes in Berührung mit der Kupfer enthaltenden stellt worden ist, zugemischt werden, während mehreren Form, der Antibiotika, die auf dem vorstehend er- Miauten stehen gelassen und sodann auf djsn Auswähnten Harz adsorbiert sind, nach unten fließt, gangs-pH, d. h. 4 bis 9 erneut eingestellt werden. Mit wodurch das in dem Antibiotika enthaltene Kupfer(II)- ao einer derartigen Vorbehandlung wird eine vollkommene ion allmählich durch Bildung einer Chelatbindung mit Kupferentfernung sichergestellt. Jedoch kann eine dem Chelatisierungsagens in Freiheit gesetzt wird und solche Vorbehandlung unterbleiben, sofern ein Enddurch die Säule unter Ausführung aus dem System produkt mit außergewöhnlich niedrigem Kupfergehalt hindurchtritt, während die Antibiotika in der Säule nicht erforderlich ist. In einem weiteren Beispiel, auf dem Harz adsorbiert zurückgehalten werden, as das Phleomycin, welches unter sauren Bedingungen Die für dieses Verfahren geeigneten Chelatisierungs- . instabil und:inaktiviert ist, betrifft, wird eine wäßrige agenrien umfassen zusätzlich zu EDT A· 2Na, wasser- EDTA · 1 Na Lösung (pH 4,5) bei der Kupferentlösliche Chelatisierungsagenzien, wie Äthylendiamin- fernungsstufe, nachdem sie auf einen pH von 6 bis 9 diessigsäure (nachstehend als EDDA bezeichnet) mit wäßriger Natriumhydroxidlösung eingestellt wor- und Triäthylentetraminhexaessigsäure (nachstehend 3° den ist, zur Verhinderung dieser. Inaktivierung von als TTHA bezeichnet). Diese Chelatisierungsagenzien Phleomycin verwendet. Die vorstehenden Äusführünkönnen auf einen pH von 4 bis 9, wobei ein pH-Be- : gen sind auch für solche Fälle gültig, in denen ein reich von 6 bis 9 bevorzugt ist. mit einer wäßrigen anderes Chelatisierungsagens, außer EDTA, wie bei-Natriumhydroxidlösung od<?r mit Chlorwasserstoff- · spielsweise EDDA oder TTHA, verwendet wird, säure eingestellt werden. Geeignet Konzentrationen 35 Obwohl Phleomycine und Bleomycine aus den der Chelatisierungsagenzien in wäßrigen Lösungen üblichen Nährlösungen in einer Form erhalten werden, sind 3 bis 10 % wobei jedoch eine Konzentration von die Kupfer als Kiipfer(II) enthält, werden durch die 5 % aus wirtschaftlichen Gründen ausreichend ist. ^; Erfindung auch solche Fälle mit umfaßt, bei denen Es wird darauf hingewiesen, daß bei dem vorstehen- andere Metalle als Kupfer, beispielsweise Eisen ia den Verfahren ein Entsalzungsschritt außer Betracht 40 Form von FE(IIl), Nickel und Mangan enthalten bleibt, der bisher bei den herkömmlichen, industriellen sind.

Verfahren unerläßlich war. Hierdurch ergibt sich die Darüber hinaus ist es natürlich möglich, das VerEinsparung des unvermeidbaren Verlustes an Anti- fahren gemäß der Erfindung auf solche Antitumorbiotika bei dem Entsalzungsschritt von 20 bis 30% antibiotika anzuwenden, von denen man annimmt, und weiter auch eine Zeitersparnis dadurch, daß gleich- 45 daß sie zu der Phleomycin-Bleomycingruppe der zeitig die Entsalzung und die Kupferentfernung in Antibiotika gehören, beispielsweise YA-56 (110, einer Stufe durchgeführt werden. Hierdurch kann-das Ohashi, Egawa, Yamaguchi, Fuiumai, erfindungsgemäße Verfahren besonders wirtschaftlich E no mot ο und Okuda, J. of Antibiotics, 24, durchgeführt werden. S. 727, 1971) und Zorbamycin, Zorbamycin B, Zorba-

Die Säule wird sodann mit einer Salzlösung, wie 50 mycin C (Argoudelis, Bergy und Py ke, einer wäßrigen Natriumchlorid- oder Natriumsulfat- J. of Antibiotics, 24, S. 543, 1971). lösung zur gründlichen Entfernung des Chelatisie- Die durch Anwendung des Verfahrens gemäß der

rungsagens, und hiernach mit Wasser gewaschen. Das Erfindung auf Kupfer enthaltene Phleomycine und Anion dieser Salze stellt vorzugsweise das gleiche Kupfer enthaltende Bleomycine erhaltenen Ergebnisse Anion dar, das in den zu isolierenden Antibiotika 55 sind in Tabelle 1 zusammengefaßt, enthalten sein soll. Wie aus den in Tabelle 1 zusammengefaßten

Schließlich wird ein wasserhaltiges, organisches Ergebnissen hervorgeht, wurde gezeigt, daß das VerLösungsmittel, wie beispielsweise wäßriges Methanol, fahren gemäß der Erfindung bezüglich der Ausbeute wäßriges Äthanol, wäßriges Isopcopanol, wäßriges und des Rückstandskupfergehaltes dem Dithizon« Aceton od. dgl. durch die Säule abwärts in Berührung 60 Verfahren und dem Schwefelwasserstoff-Verfahren, mit dem Harz zur Eluierung der Antibiotika von dem die beide Vertreter der herkömmlichen Verfahren Harz geführt. Das Eluat wird einer bekannten Be- darstellen, wek überlegen ist. Die Tatsache, daß bi:i handlung, wie Vakuumkonzentration zur Trockene. Verwendung eines Adsorbens vom Styrol-Divinyl-Ausfällung mit Aceton, oder Gefriertrocknung unter benzol-copolymertyp und EDTA, die beide bezüglich Erhalt der gewünschten kupferfreien Antibiotika in 65 des Preises und der Verfügbarkeit am wirtschaftlichsten Form eines farblosen oder schwachgelblichen Pulvers sind, ausgezeichnete Ergebnisse erhalten wurden, unterzogen. beweist die überaus wirtschaftliche Durchführbarkeit

Der Wassergehalt des Lösungsmittels beträgt ge- des erfindungsgemäßen Verfahrens.

2 307 S43

	■	Bleomycin B2	Kupfer-	S	Herkömmliches Verfahren	Verfahren	Ausbeute an kupfer	W	Chctetisfe·	röeketöndigeti ΚψΟΓ	(%)
				rückständiges Kupfer %		freier Form		fnfffllwlffnw	(.Al	933
' der kupfer»		4,28		Pitbftojje Verehrer*		84,6	Verfahren gernSB der Erfiriöwng	EDTA	0,0083
■ haJtigen Fotm>	Phleomycin D1
Bleomycin A»				0,046
		4,28		0,052	83,2	Adsorbens wm Styrol-Divinyi-			96.S
	Phleomycin E	3,80			80,5	benzolKiopoly-	EDTA»)	0,0013
Bfeomycin A9						mertyp
Bleomycin
Komplex1)	Phleomycin G			0,031		Adsorbens vom			95,4
		3,72			80,9	Styrol-Divinyl-	EDTA	0,0089
						benzol-copoly-
Bleomycin B2						mertyp
						Adsorbens vom			88,4
		3,72				Styrol-Divinyl-	EDTA	0,0132
				benzol-copoly-
		0,036		mertyp			92,0
5,22			82,7	Adsorbens vom	EDTA	0,0095
				Phenolharz-
				Typ			89,0
4,81				Adisorbens vom ätyrol-Divinyl- benzol-copoly-	EDDA	0,0073
				mertyp
				Adsorbens vom Styrol-Divinyl- benzol-copoly-			88,0
7,31				mertyp	TTHA	0,0086
				Adsorbens vom
				Styrol-Divinyl-
			benzol-copoly-
		mertyp

Anmerkung: ^J) Material A, 68,6%, B, 29,7%, A, 1,8%.

*) Die Vorbehandlung mit EDTA wurde vor der Adsorptionsbehandlung durchgeführt.

Beispiel I

Nachdem der pJI-Wert auf 7,0 mit einer wäßrigen Natriumhydroxidlösung eingestellt worden war, wurde eine Lösung von 3,0 g kupferhaltigem Eloomycin-A2-Hydrochlorid (930 meg Wirkung/mg; 4,28% Kupfergehalt) in 100 ml destilliertem Wasser durch eine Säule geführt, die mit 11 eines Adsorbens vom Styrol-Divinylbenzol-copolymertyp in destilliertem Wasser gefüllt war, um Bleomycin A₄ einmal auf der Harzsäule adsorbieren zu lassen. Sodann wurden 3 1 einer 5%igen wäßrigen EDTA · 2Na-Lösung auf die Säule aufgebracht, um den EDTA-Kupferkomplex sorgfältig ablaufen zu lassen. Die Säule wurde mit 11 einer 5°/oigen Natriumchloridlösung zur Entfernung des verbleibenden Komplexes und des EDTA · 2 Na-Uberschusses und sodann mit 21 destilliertem Wasser gewaschen. Schließlich wurden 1,5 1 eines Gemisches (1:1) von 0,0025 N-Chlorwasserstoff säure und Aceton durch die Säule zur Elution von Bleomycin A₁ fließen gelassen. Die letzte Hälfte des Eluates — 700 ml in Volumen — wurde gesammelt, durch Destillation unter verringertem Druck von dem Lösungsmittel befreit und zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde einer erneutot Fällungsbehandlung mit Wasser-Aceton unterworfen und unter Erhalt von 2,8 g kupferfreiem Bleomycin A₂ Hydrochlorid (945 meg

Wirkung/mg; 0,0083% Kupfergehalt) in Form eines

schwachgelben Pulvers getrocknet. Ausbeute 93,3%.

Absorption (wäßrige Lösung) bei 292 ηιμ, Ε}*. = 103.

Beispiel II

Zu 400 ml einer 0,2 m wäßrigen Ammoniumchloridlösung, die 1,52 g kupferhaltigen Bleomycinkomplex (1580 meg Wirkunj/mg; 3,80% Kupfergehalt; Zusammensetzung 68,6% Bleomycin A₂, 29,7% Bleomycin Bj, 1,8% Bleomycin A₅) enthielt, wurden 8,0 g EDTA · 2Na zu dessen Auflösung hierin zugefügt.

Sodann wurden der Lösung 20 ml konzentrierter Chlorwasserstoffsäure hinzugegeben und während 3 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Nach Einstellung auf einen pH-Wert von 5,6 mit 4 η Natriumhydroxidlösung wird das Gemisch durch eine mit 500 ml Adsorbens vom Styrol-Dtvinylbenzol-copolymertyp gefüllte Säule zur Adsorption des Bleomycinkomplexes geführt. Die Säule wurde sodann mit 1,5 1 einer 5% EDTA · 2Na-LÖsung, 500ml einer 5 %igen Natriumsulfatlösung und 11 destilliertem Wasser in der angegebenen Reihenfolge gewaschen. Schließlich wurden 800 ml eines 0,0025 n-Schwefelsäure-Methanol-Gemisches (1:1) durch die Säule unter Elution des Bleomycinkomplexes fließen ge-

lassen. Die letzte Hälfte des Ausflusses — ein Volumen Hydrochlorid (2670 meg Wirkung/mg: 5,22% Kup-

von 400 ml — wurde gesammelt und in gleicher Weise fergehalt) aufgelöst. Die Lösung wird durch eine mit

wie Beispiel I unter Erhalt von 1,47 g kupferfreien 50 ml Adsorbens vorn Styrol-Divinylbenzol-copoly-

Bleomycinkomplexsulfates (1620 meg Wirkung/mg; mertyp gefüllte Säule geführt, um die Adsorption von

0,0013% Kupfergehalt) in Form eines farblosen Pu'- 5 Phleomycin D₁ auf dem Harz zu erlauben. Die Säule

vers behandelt. Ausbeute 96,8 %. Absorption (wäßrige wurde mit 50 ml destilliertem Wasser, 150 ml einer

Lösung bei 292 πιμ, El?« = 98. 5%tgen wäßrigen EDTA - 2 Na-Lösung (mit Na-

. · ι tu triumhydroxid auf pH 6,5 eingestellt), 100 ml einer

bei s pie I ill 5%igen wäßrigen Na.ttiumchloridlösung und 100 ml

tn 10 ml einer 10°/₀tgen Natriumchlorid-Lösung te destilliertem Wasser in der angegebenen Reihenfolge

wurden 250 mg kupferhaltigen Bleomycin-Bj-Hydro- gewaschen. Sodann wurde die Säule mit 150 ml wäß-

chlofids (2830meg Wirkung/mg; 3,72% Kupferge- rigem Aceton eines Wassergehaltes von 50% eluiert

halt) aufgelöst. Die Lösung wurde durch eine mit Das Eluat wurde auf pH 6,8 mit Chlorwasserstoff*

50 ml Adsorbens vom Styrol-Divinylbenzol-copoly- säure eingestellt und durch Anwendung des Verfah-

mertyp gefüllte Säule unter Adsorption von Bleomy- i$ rens des Beispiels I unter Erhalt von 184 mg kupfer-

cinB, hierauf geführt. In ähnlicher Weise wie im freiem PhleomyGin-Dt-Hydrochlorid (2710 meg Wir-

Beispielt wurde die Säule mit 120ml destilliertem kung/mg; 0,0095% Kupfergehalt) in Form eines

Wasser, 120 ml einer 5°/_eigen wäßrigen EDTA · 2Na- schwachgelblichweißen Pulvers behandelt. Ausbeute

Lösung, 120 ml einer Natriumchloridlösung und 120ml 92,0%. Absorption (wäßrige Lösung) bei 280 ιημ,

destilliertem Wasser in der angegebenen Reihenfolge *> E}?. = 34.
gewaschen. Die Säule wurde sodann mit einem

0,0025 n-Chlorwasserstoffsäure-Isopropanol-Gemisch Beispiel VII
(1:1) eluiert und das Eluat zur Trockene unter Erhalt

von 215 mg kupferfreiem Bleomycin-Bj-Hydrochlorid In 10 ml einer 1 %igen wäßrigen Natriumbicarbonat (2850 meg Wirkung/mg; 0,012% Kupfergehalt) in as lösung wurden 200 mg kupferhaltiges Phleomydn-E-Form eines schwachgelblichweißen Pulvers einge- Hydrochlorid (6240 meg Wirkung/mg; 4,81% Kupferdampft. Ausbeute 86,0%. Absorption (wäßrige Lösung) gehalt) aufgelöst. Die Lösung wurde durch eine mit bei 292 πιμ, El?. = 108. 50 ml Adsorbens vom Styrol-Divinylbenzol-copoly* . · ι iv mertyp gefüllte Säule geführt, um die Adsorption von B e ι s ρ ι e 1 IV ₃₀ PhIe_0nJy₀J_n g _auf ₍i_em Harz zu erlauben. Die Säule

In 10 ml einer 10°/₀igen Natriumchloridlösung wer- wurde mit 50 ml destilliertem Wasser, 200 ml einer

den 250 ml kupf erhaltigen Bleomycin-Bj-Hydrochlo- 5%igen wäßrigen EDDA-Lösung (mit Natriutn-

rids (2830 meg Wirkung/mg; 3,72% Kupfergehalt) hydroxid auf pH 8,0 eingestellt), 100 ml einer 5%igen

aufgelöst. Die Lösung wird sodann durch eine mit wäßrigen Natriumchloridlösung und 100 ml destil-

50 ml Adsorbens vom Styrol-Divinylbenzol-copoly- 35 Heilem Wasser in der angegebenen Reihenfolge ge-

mertyp gefüllte Säule geführt, um die Adsorption von witschen. Die Säule wurde sodann mit 150 ml wäßri-

Bleomycin B₁ hierauf zu erlauben. Nachfolgende Be- gem Isopropanol eines 50%igen Wassergehaltse elu-

handlung wurde in einer Weise, ähnlich zu Beispiel III, iert Das Eluat wurde mit Chlorwasserstoff säure auf

unter Erhalt von 212 mg eines schwachgelblichweißen pH 6,8 eingestellt und in zu Beispiel I ähnlicher Weise

Pulvers von kupferfreiem Bleomycin B₁ Hydrochlorid 4<> unter Erhalt von 178 mg eines schwachgelblich-

(2790 meg Wirkung/mg; 0,0152 % Kupfergehalt) durch- weißen, kupferfreiiin Phleomycin-E-Hydrochlorid-pul-

geführt. Ausbeute 84,7 %. Absorption (wäßrige Lösung) vers (6310 meg Wirkung/mg: 0,0073 % Kupfergehalt)

bei 292 ma, El?« = 102. behandelt Ausbeute 89,0%. Absorption (wäßrige

_ . . . ., Lösung) bei 280 ιημ. El* = 32.

QClSpK I V ..

In 10 ml einer 10%igen wäßrigen Natriumchloridlösung wurden 250 mg eines kupf erhaltigen Bleo- Beispiel VIII
mycm-Bj-Hydrochlorids (2830 meg Wirkung/mg

3,72% Küßfergefiält) aufgelöst. Die Lösung wurde In zu Beispiel VII ähnlicher Weise wurden 200 mg

durch eine mit 50 ml Adsorbens vom Phenolhärztyp s* !cupfethältiges Phlteomyein-G-HydrOGhlorid (356Omcg gefüllte Säule geführt, um die Adsorption von Bleo- Wirkung/mg; 7,31% Küpfergehalt) auf einer mit mycin B₂ auf dem Harz zu erlauben. Nachfolgende 50 ml Adsorbens, vom Styrol-Divinylbenzol-copoly-Behandtungen wurden in einer zu Beispiel HI ahn- mertyp gepackten Säule adsorbiert 200 ml einet liehen Weise, unter Erhalt von 221 mg eines schwach- 5%igen wäßrigen TTHA-Lösung (mit Natriumgelblichweißen Pulvers von kupferfreiem Bleomycin- 55 hydroxid auf pH 8,0 eingestellt) wurden durch dis Bg-Hydrochlorid (2850 meg Wirkung/mg; 0,0132% Säule zur Entfernung des Kupfers geführt Nachfol Kupfergehalt) durchgeführt. Ausbeute 88,4%. Ab- gende Behandlungen wurden in zu Beispiel VII ahn sorption (wäßrige Lösung) bei 292 ιημ, EIS, = 105. licher Weise unter Erhalt von 176 mg kupferfreiei

Phleomycra-G-Hydrochlorid (3620 meg Wirkung/mg B e i s ρ ι e 1 VI *, 0,0086% Kupfergehalt) in Form eines schwachgelb

In 10 ml einer 1 %igen wäßrigen Natriumbicarbonat- lichweißen Pulvers durchgeführt Ausbeute 88,0% lösung werden 200 ml kupferhaltiges Phleomycin D₁ Absorption (wäßrige Lösung) bei 280 ιημ, E?*, = 3<

Claims (1)

1. 307 543

   f Die Eifindung hat sipb daher die Aufgabe gestellt,

   b- Patentanspruch; . ςίη verbessertes Verfahren «uc „Entfernung von

   if . ' Kupfer aus einer kMewaltigen Antlbiotilcaform der

   Ü Verfahren zur Entfernung von Kupfer aus einer PhJeomycin-BIeomyengruppe zu schaffen. Hierbei

   Ji kupferhaltigen Form ^dn* ^Antibiotika der Phleo- ξ soü eine nahezu kupferfreie Form der erwähnten

   P - mycin-Bleomycingroppe, dadurch gekenn- Antibiotika mit einem äußerst geringen, rückständigen

   zeichnet, daß man ein laichtionenaustauschen- Kupfergebalt in höheren Ausbeuten als bei ber-

   ^ des raacronetzförraiges Hairz mit einer wäßrigen, köraralichen Verfahren zur Verfügung gestellt wer-

   eioe kupferhaltige Antibiotikafonn der Phleo- den, deren Antitumorwirkung nicht beeinträchtigt

   ι mycin-Bleomycingrapije enithaltenden Lösung zur *o ist

   Adsorption der Antibiotika in Berührung bringt, Erfindungsgemäß wurde gefunden, daß das Kupfersodann das Harz nut einer wäßrigen, ein Cbelati- ton aus den Antibiotika der Phleomyctn-Bleomycin- sierungsageris enthaltenden Lösung zur Freisetzung gruppe exakt unter Bildung der kupferfreien Form : des Kupfers aus den Antibiotika in Berührung in hohen Ausbeuten dadurch in Freiheit gesetzt werden ; bringt und hiernach- das Harz mit einem Wasser is kann, daß man ein nichtionenaustausehendes, macroenthaltenden organischer* Lösungsmittel zur EIu- netzförmiges Harz mit einer wäßrigen, eine kupfer- \ tion der Antibiotika behandelt. haltige Antibiotikaform der Phleomycui-Bleomycin-