DE2236987A1

DE2236987A1 - Pyrazolo eckige klammer auf 1,5a eckige klammer zu -pyrimidine und verfahren zu ihrer herstellung

Info

Publication number: DE2236987A1
Application number: DE2236987A
Authority: DE
Inventors: Darrell Eugene O'brien; Lionel Norton Simon; Robert Henry Springer
Original assignee: International Chemical and Nuclear Corp
Current assignee: Valeant Pharmaceuticals International Inc USA
Priority date: 1971-08-16
Filing date: 1972-07-27
Publication date: 1973-03-01
Also published as: HU167466B; DD99581A5; SU522800A3; FR2150771B1; GB1359563A; US3920652A; ATA677372A; IE36629L; BE786611A; AR193536A1; BG19806A3; MC937A1; RO63871A; JPS4834899A; NL7211011A; LU65892A1; IE36629B1; ES405663A1; IL39988A0; AT330780B

Description

DIPL.-ING. HANS W. CrROENING ^

DIPL.-CHEM. DR. ALFRED SCHON

PATENTANWÄLTE

S/I 17-2

IITTERNATIOKAL CHEMICAL· & OTCLEAE CORPQBATIOI 171 South Lake Avenue, Pasadena^ Kalifornien

Pyrazolo[1,5a]-p3?rimidine TiBd Verfahren 31a itaer Herstellung

Die Erfindung betrifft Pyrazolo[1₉5a]»pyr±midim«¥8rMndraigen der Formel

worin R eiis aromatischer oder substituierter aromatischer Kern, wie beispielsweise Pheuiyl, ist, I₁ für H, ein Alkalimetall oder Ammonium steht und R₂ H oder OR^ bedeuten.

Diese Verbindungen sind wirksame Inhibitoren des Xanthinoxydase.

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Xanthjji»
Es steht fest, dass das Enzym iuTtToxydase bei der Erzeugung von Harnsäure durch den Körper auftritt, wobei Hypo3£»nthin in Xanthin,und Xanthin seinerseits in Harnsäure umgewandelt werden, Unter normalen Bedingungen findet man Harnsäure (2,6,8-Trioxypurin) im Körper nur in kleinen Mengen. Die Konzentration im Blut liegt in der GrössenOrdnung von ungefähr 1 bis ungefähr 3 mg pro 100 ml. Unter bestimmten pathologischen Bedingungen, beispielsweise im Falle von Gicht, steigt die Harnsäurekonzentration merklich an.

Natürlich 1st Gicht eine Stoffwechselstörung im Körper, die auf eine Überproduktion von Harnsäure, chronische Hyperurikämie (erhöhte Blutharnsäure) und zunehmende Anreicherung von Harnsäure in den Geweben zurückzuführen ist. Der Körper kann auch in .zunehmendem Maße seine Fähigkeit verlieren, Harnsäure auszuscheiden und befindet sich dann in einem konstanten Zustand eines fehlenden Harosäuregleichgewichtes, wodurch immer grössere Mengen angesammelt werden. Die Harnsäurekonzentratioa ist daher hoch. Wegen ihrer geringen Löslichkeit, neigt sie dazu, aa verschiedenen Stellen auszufallen und Ablagerungen zu bilden, und zwar an Stellen, an denen das Blut sehr schwach flieset, insbesondere an Gelenken sowie Knorpelgsweben.

Ein Versuch, Gicht zu bekämpfen, bestand bisher darin, Arzneimittel zu verschreiben, welche eine Anreicherung von Harnsäure in dem Körper verhindern, so dass auf diese Weise die Wahrscheinlichkeit von akuten Rückfällen reduziert wird. Derartige Arzneimittel werden als "Harneäuremittel" bezeichnet und begünstigen die Ausscheidung von Harnsäure im Urin. Beispiele für derartige Arzneimittel sind p-BipiOpylsulfamylbenzcesäure und SuIfInpyrazon. Biese Arzneimittel können jedoch nicht in Verbindung mit Aspirin oder einem anderen schmerzlindernden Salicylat verabreicht werden, da die Wirkstoffe und die Salicylate gegenseitig antagonistisch sind, d.h., dass sie gegenseitig ihre Wirkung aufheben.

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Ein zweiter Versuch, Gicht zu behandeln, besteht in der Verwendung des Arzneimittels Allopurinol der Formel

Diese Verbindung blockiert die Erzeugung von Harnsäure durch dea Körper infolge einer lahibierung des Enzyms Xanthinoxyäaae, das, wie vorstehend erwähnt wurde, für die Umwandlung von Hypoxanthin in Xanthin sowie von Xamthlsi in Harnsäure verantwortlich ist. Wenn auch Allopurinol das Enzym Xanthinoxydase zu inhibieren vermag, so ist diese Verbindung dennoch mit Nachteilen behaftet, welche seine Eignung einschränken.

Zunächst ist diese VerbiEdiang höher als erwünscht toxisch. Ihre letale Dosis (IdW), d.h. die Dosis, die dazu erforderlich ist, 50 ia einer Gruppe von Tieren in 2 Wochen abzutöten, wenn die Verbindung in die Scheitelbeinhöhle (intraparietal cavity) eingespritzt wird, beträgt ungefähr 150 mg pro kg Körpergewicht. Darüber hinaus wird Allopurinol allmählich in vivo zu 4,6-Dihydroxypyrazolo[3,4-d]-pyrimidin umgewandelt, wobei die letztere Verbindung nicht so wirksam als Inhibitor ist wie Allopurinol. Zusätzlich zu den vorstehend erwähnten Nachteilen muss Allopurinol infolge seiner chemischen Natur mit Xanthin konkurrieren, um eine Stelle an dem Enzym Xanthinoxydase einzunehmen, damit eine Inhibierung des Enzyms erfolgt und auf diese Weise die Bildung von Harnsäure durch den Körper vermieden wird. Auf diese Weise wird die Wirksamkeit von Allopurinol eingeschränkt. Es ist ferner bekannt, dass akute Anfälle von Gichtarthritis bei der frühen Behandlung mit AlIo-

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purlnol auftreten. Es 1st daher erforderlich, während der Anfangeperiode der Therapie Colchicin zu verabreichen, um derartige akute Anfälle zu verhindern. Es 1st darüber hinaus bekannt, dass sich bei einigen Patienten Hautjuckreize einstellen, wobei ferner gelegentlich Schläfrigkeit festzustellen 1st, wenn Allopurinol verabreicht wird. Daher besteht ein Bedarf an Xanthinoxydase-Inhibitoren, die eine annehmbare Toiizltät besitzen und gleichzeitig Im Vergleich zu Allopurinol eine gesteigerte Inhibierende Wirkung aufweisen.

Es wurde bereits die Verwendung von Imidazo[1,2,a]- und Pyrazolo[1,5,a]-pyrimidin-Verbindungen vorgeschlagen, welche eine merkliche Inhibierende Wirkung besitzen. Einige dieser Verbindungen besitzen eine grössere Inhibierende Wirkung gegenüber dem Enzym Xanthlnoxydase als Allopurinol. Wenn auch einige dieser Verbindungen wirksame Inhibitoren sind, so besteht dennoch Immer noch ein Bedarf an Inhibitoren, welche eine noch mehr gesteigerte Wirksamkeit besitzen.

Sie Erfindung betrifft Xanthinoxydase-Inhlbitoren, welche aus Pyrazolo[1,5a]-pyrlmldln-Verblndungen der folgenden allgemeinen Formel bestehen:

worin R ein aromatischer oder substituierter aromatischer Kern ist, beispielsweise Phenyl, Naphthyl, Tolyl, halogeniertes Phenyl, ein heterocyolisoher Kern etc., R₁ für H, ein Alkalimetall oder Ammonium steht, und R₂ H oder OR₁ bedeutet.

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Die erfindungsgemässen Xanthinoxydase-Isahibitoren fallen unter die vorstehend angegebene Formel. Wie aus d@n folgenden Beispielen hervorgeht, besitzen derartig® Verbindungen eine inhibierende Wirkung, die merklich grosser ist als diejenige von Allopurinol, wobei die Wirkung in einigen Fällen das 100-bis 200-fache beträgt.

Der Substituent R ist, wie vorstehend erwähat matischer oder substituierter aromatisohar Kern derartige Substltuentea sind Phenyl, 1-: Phenyle der Formel

, ein aro-Beispiei® für substituierte

SI

worin R* für CEU, ein Halogen oder -NH-C»GEL steht, heterocyclische Kerne, wie beispielsweise

(Piperonyl),

etc.

R₁ ist vorzugsweise H, sodaes es sich um 5,7-Dihydroxypyrasolo [1,5a]-pyrimidine handelt, wenn R₂ für OR₁ steht. Man kann auch physiologisch verträgliche Salze verwenden, beispielsweise Alkali- oder Ammoniumsalze.

Das Verfahren zur Herstellung der erfindungsgemäseen Verbindungen wird näher in den folgenden Beispielen beschrieben.

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- 6 -Im allgemeinen -verläuft der Syntheseweg wie folgt:

Naoh der Methode von E.I. Anderson, J.S. Casey, Jr., L.C. Greene, J.J. Lafforty und H.E. Reiff (J.Med.Chem., I, 259 (1964)) werden 3-Amino-4-arylpyrazole (III) aus Arylacetonitril-Derivaten (I) hergestellt„

II III

Sie Kondensation derartiger 3-Amino-4-arylpyrazole (III) mit Diäthylmalonat in Gegenwart einer Natriumäthylat-Lösung liefert die Dinatriumsalze von 3-Ary1-5_t7-dihydroxypyrazole[1,5a]-pyrimidin. Werden diese Natriumsalze in Wasser gelöst und mit verdünnter Chlorwasserstoffsäure behandelt, dann erhält man 3-Aryl-5,7-dihydroxypyrazolo[1,5a]-pyrimidine der Formel (IV). Es 1st darauf hinzuweisen, dass "Aryl" in dem obigen Reaktionsschema für die verschiedenen aromatischen und substituierten aromatischen Kerne der erfindungsgemäesen Verbindungen steht.

In ähnlicher Weise liefert die Kondensation derartiger 3-Amino-4-arylpyrazole (III) mit dem Natriumsalz von A'thylformylacetat (Malonaldehydester) in wasserfreiem Äthanol das Hatriumsalz von verschiedenen 3-Aryl-7-hydroxypyrazolo[1,5a]-pyrimldinen. Werden diese Natriuasalze In Wasser gelöst und durch die Zugabe von Chlorwasserstoffsäure ausgefällt, dann erhält man 3-Aryl-7-hydroxypyrazolof[1,5a]-pyrimidine der Formel (V).

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-τ

III + C-OC₉Hc t 2 5

CH
H-C-ONa

Eine andere Methode, die zur Hereteilmag dieser Derivate angewendet wird, besteht in der Kondensation der verschiedenen 3-Amino-4-ary!pyrazole (III) mit Diäthy läthoxy me thy lenmalonat in einer Essigsäurelösung, wobei verschiedene 3-Aryl-6-carbäthoxy-7-hydroxypyrazole[1,5a]-pyrimidine (Vl) erhalten werden. Ein Rückflusskochen einer Lösung dieser 2-Aryi-6-earbäthoxy~7-hydroxypyrazolo[ 1,5a]-pyrimidine (VI) in einer 40 #igen Schwefelsäure liefert die entsprechenden 3-Aryl-7-hydroxypyrazolo[1,5a]· pyrimidine (V),

C-OC₉H,-i 2 5

III + C=CH-OC₂H₅

C-OC₂H₅ 0

VI

Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung. Die UV-Spektren wurden unter Verwendung eines Cery-15-Spektrophotometers aufgenommen .

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Beispiel 1 Herstellung von 3-PhenylpyrazoloH«5a"l-p:yrimidin-5.7-diol

Eine Lösung von Natriumäthylat wird in der Weise hergestellt, dass 1,7 g Natrium (Molekulargewicht 0,0047) in 200 ml absolutem Äthanol aufgelöst werden. 6,8 g (42,5 mMol) Diäthylmanolat und 6,0 g (37t7 mMol) 3-Amino-4-phenylpyrazol werden der Natriumäthylat-Lösung zugesetzt. Die erhaltene Lösung wird unter Rückflusstemperatur während einer Zeitspanne von 16 Stunden gerührt und erhitzt. Die Mischung wird dann auf Zimmertemperatur abkühle» gelassen, worauf das Natriumsalz des Produktes durch Filtration gesammelt wird. Bas Natriumsalz wird gut mit Äthanol gewaschen, an der Luft getrocknet und dann in 150 ml Wasser aufgelöst. Ein Ansäuern dieser Lösung mit 6n-Chlorwasserstoffsäure bis zur Erreichung eines pH von 1 bis 2 liefert das Produkt. Das Produkt wird durch Filtration abgetrennt, mit Wasser gewaschen und bei 100⁰C getrocknet. Eine erneute Ausfällung dieses Produktes aus einer verdünnten Natriumhydroxyd-Lösung durch Zugabe von 6 n-Chlorwasserstoffsäure liefert 4,03 g (48 #) eines analytisch reinen Produktes. F.315 - 317°C (Zersetzung), ^ max (pH 1) 203 (£23 400) und 238 ((S 18 200), ^max (pH 11) 234 nm (6 19 500) und 297 nm (Ε 16 600).

Analyse: Berechnet für C₁₂HgN₅O₂: C 63,4 H 3_f94, N 18,5 Gefunden: C 63,2, H 4,01, N 18,6.

Beispiel 2 Herstellung von 3-(m-Tolyl)-pyrazolon .S.ai-pyrimidin-S^-diol

Eine Lösung von Natriumäthylat wird in der Weise hergestellt, dass 1,6g Natrium (Molekulargewicht 0,004498) in 200 ml eines absoluten Äthanols aufgelöst werden. 6,2 g Diäthylmalonat

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(38,7 mMol) und 6,0 g (34,7 mMol) 3~Amino-4-(m-tolyl)-pyrazol werden der Natriumäthylat-Lösung zugesetzt. Bie erhaltene Lösung wird gerührt und langsam auf Rückflusstemperatur erwärmt. Nachdem sich der Rückfluss eingestellt hat, beginnt sich das weisse Natriumsalz des Produktes auszufällen. Bas Rückflusskochen sowie das Rühren werden während einer Zeitspanne von 16 Stunden fortgesetzt, worauf die Mischung auf Zimmertemperatur abkühlen gelassen wird. Bas Natriumsalz wird durch Filtration abgetrennt, mit dreimal 200 ml eines absoluten Äthanols gewaschen und an der Luft getrocknet. Bas Natriumsalz wird dann in 300 ml Wasser gelöst. Bas Produkt, das aus der Lösung durch die Zugabe von 6 n-Chlorwasserstoffsäure bis zur Erreichung eines pH von 1 bis 2 anfällt, wird gesammelt. Bas Produkt wird gründlich mit Wasser gewaschen und bei 100°C getrocknet. Bie Reinigung erfolgt durch Auflösen des Produktes « in einer verdünnten Natriuahydroxyd-Lösung sowie durch erneutes Ausfällen mit einer 6n-0hlorwasserstoffsäure. Nach der Reinigung wiegt das Produkt 2,93 g (35 $>) und besitzt einen Schmelzpunkt von 284 - 285°C (Zersetzung), Amax (pH 1)207 nm ( £29 200) und 240 nm (£ 20 500), Xmax (pH 11) 230 nm (^26 400) und 286 nm (£ 18 800).

Analyse: Berechnet für: O₁₃H₁₁N₅O₂: ö 64,8, H 4,57, N 17,4. Gefunden: C 64,9, H 4,66, N 17,4.

Beispiel 3 Herstellung von 3-(p-Tolyl)-p.vrazolori.5.a1-p?rimldin-5«7-diol

Eine Lösung von Natriumäthylat wird in der Weise hergestellt, dass 2,13 g Natrium (Molekulargewicht 0,005962) in 200 ml eines absoluten Äthanols gelöst werden. 8,2 g (51 mMol) Biäthylmalonat und 8,0 g (46,2 mMol) 3-Amino-4-(p-tolyl)-pyrazol werden der Natriumäthylat-Lösung zugesetzt. Bie erhaltene Lösung wird gekührt und langsam auf Rückflusstemperatur erhitzt. Nach-

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dem sich die RUekflusstemperatur eingestellt hat, beginnt sich das weisse Salz des Produktes abzuscheiden. Während einer Zeitspanne von 6 Stunden wird weiter unter Rückflussbedingungen sowie unter Rühren gearbeitet, worauf die Mischung auf Zimmertemperatur abkühlen gelassen wird. Bas Natriumsalz wird durch Filtration abgetrennt, mit absolutem Äthanol gewaschen, an der Luft getrocknet uad dann in 300 ml Wasser aufgelöst. Ein Ansäuern dieser Lösung mit 6 n-Chlorwasserstoffsäure bis zum Erreichen eines pH von 1 bis 2 liefert das Produkt. Bas Produkt wird durch Filtration abgetrennt, mit Wasser gewaschen, bei 100⁰C getrocknet und durch erneutes Ausfällen aus einer Natriumhydroxyd-Lösung durch die Zugabe von 6 n-Chlorwasserstoffsäurθ gereinigt. Bas Produkt wiegt nach der Reinigung 4,55 g (41 $>) und besitzt einen Schmelzpunkt von 255 - 257⁰C (Zersetzung). >»max (pH 1) 203 nm (£30 600)und 243 nm (<f 20 500).

Analyse: Berechnet fur: G₁₅H₁₁N₅O₂: C 64*8, H 4,57, N 17,4. Gefunden: C 64,9, H 4,51, H 17,3.

Beispiel 4

Herstellung von 3-(p-Bromphenyl)-pyrazolo[1,5,a]-pyrimidin- 5.7-diol

Eine Lösung von Natriumäthylat wird in der Weise hergestellt, dass 0,97 g Natrium (Molekulargewicht 0,002722) in 100 ml eines absoluten Äthanols aufgelöst werden. 0,7 g (23 mMol) Biäthylaalonat und 5,0 g (21 mMol) 3-Amino-4-(p-bromphenyl)-pyrazol werden der Natriumäthylat-Lösung zugesetzt. Bie erhaltene Lösung wird gerührt und langsam auf Rückflusstemperatur erhitzt. Nachdem sich der Rückfluss eingestellt hat, beginnt sich das weieβθ Natriumsalz des Produktes aus der Lösung abzuscheiden. Während einer Zeitspanne von 6 Stunden wird der

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Rückfluss unter Rühren aufrechterhalten₈ worauf di© Mischung auf Zimmertemperatur abkühlen gelassen wird. Bas Hatriumsalz wird durch Filtration abgetrennt, mit absolutem Äthanol gewaschen, an der Luft getrocknet und in 100 ml Wasser aufgelöst, Das Produkt wird aus dieser Lösung durch Zugabe von 6 n-Ghlorwasserstoffsäure bis zur Einstellung eines pH von 1 bis 2 ausgefällt. Das Proäiikt wird durch Filtration abgetrennt_t mit Wasser gewaschen, bei 100⁰G getrocknet und durch emeutea Ausfällen aus einer Natriumh3?dro2qpd«»Lösung durch die Zugabe von 6 n-Ohlorwasserstoffsäure gereinigt. Das Produkt wiegt nach der Reinigung 2_S51 g (36 $) und weist ©inen Sehmalzpunkt von 330 - 323°ö (Zersetzung) auf »λ max (pH 1) 202 um (6 31 900) und 247 nm (if 27 500), ^max (pH 11) 234 rna (<5-41 400) irad 308 nm (£ 37 100),

Analyses Berechnet für: G₁₂H₈BrM₃O₂? 0 47*1 H 2,62, N 13,7» Gefunden? C 47,2 H 2_P58_g Έ 13₉8_e

Beispiel 5

Herstellung von 3-(p-CM©rphenvl)-pyrasolo[1_f5s>a]-py2?±®^^ 5.7~diol

Eine Lösung von Natriumäthylat wird in der Weis© hergaeteilt, dass 0,356 g Natrium (Molekulargewicht O₈001004) in 100 ml eines absoluten Äthanols aufgelöst werden. 1_g38 g (8,6 mMol) Diäthylmalonat werden der Natriumäthylat-Lösung zugesetzt. Die erhaltene Lösung wird gerührt und langsam auf Rückflusstemperatur erwärmt, lachdem sich der Rückfluss eingestellt hat, beginnt sich das weisse Natriumsalz des Produktes aus der Lösung abzuscheiden. Das Rückflussieden sowie das Rühren werden während einer Zeitspanne von 6 Stunden fortgesetzt, worauf die Mischung auf Zimmertemperatur abkühlen gelassen wird. Bas Natriumsalz wird durch Filtration abgetrennt,, mit absolutem

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Äthanol gewaschen, an der Luft getrocknet und in 100 ml Wasser aufgelöst. Das Produkt wird aus dieser Lösung durch die Zugabe von 6 η-Chlorwasserstoffsäure bis zur Einstellung eines pH von 1 bis 2 ausgefällt. Das Produkt wird durch Filtration abgetrennt, mit Wasser gewaschen, bei 100⁰C getrocknet und durch erneute Ausfällung aus einer Natriumhydroxyd-Lösung durch die Zugabe von 6 n-Chlorwasserstoffsäure gereinigt. Nach der Reinigung wiegt das Produkt 1,16 g (57 fi) und besitzt einen Schmelzpunkt von 330 - 331⁰C (Zersetzung). Amax (pH 1) 204 um (6 26 500) und 245 nm ( <f23 700), ^max (pH 11) 233 nm (£24 000) und 305 nm (£21 500).

Analyse: Berechnet für: C₁₂HgClN,O₂: C 55_f1, H 3,06, N 16,1. Gefunden: C 55,1, H 3,06, N 16,2.

Beispiel 6

Herstellung von 3-(p-Acetamidophenyl)-pyrazolo[1,5,a]-pyrimidin-5.7-dlol

Eine Lösung von Natriumäthylat wird in der Weise hergestellt, dass 1,06 g Natrium (Molekulargewicht 0,002981) in 200 ml eines absoluten Äthanols aufgelöst werden. 4,2 g (26 mMol) Diäthylmalonat werden der Natriumäthylat-Lösung zugesetzt. Die erhaltene Lösung wird gerührt und während einer Zeitspanne von 16 Stunden auf Rückflusstemperatur erhitzt. Dann wird die Mischung auf Zimmertemperatur abkühlen gelassen, worauf das Natriumsalz des Produktes durch Filtration gesammelt wird. Das Natriumsalz wird gut mit Äthanol gewaschen, an der Luft getrocknet und dann in 150 ml Wasser aufgelöst. Ein Ansäuern dieser Lösung mit 6 η-Chlorwasserstoffsäure bis zur Einstellung eines pH von 1 bis 2 liefert das gewünschte Produkt. Das Produkt wird durch Filtration abgetrennt, mit Wasser gewaschen und bei 100⁰C getrocknet. Eine erneute Ausfällung dieses Pro-

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duktes aus einer verdünnten Natriumhydroxyd-Lösung durch die Zugabe von 6 η-Chlorwasserstoff säure liefert 3,54 g (54 $>) des analytisch reinen Produktes. F. 272 - 274°C (Zersetzung). >\max (pH 1) 204 um ( £38 500) und 262 nm ( £31 100), (pH 11) 232 nm (£36 000) und 311 am (632 000).

Analyse: Berechnet für: C₁₄H₁₂N₄O^H₂O: C 52,4, H 5,03, I 17,5 Gefunden: C 52,5, H 5,10, N 17,8.

Beispiel 7 Herstellung von 3-Pi"peronv !pyrazole Γ1.5.a1-T>yrimidin-5.7-diol

Eine Lösung von Natriumäthylat wird in der Weise hergestellt, dass 1,78 g Natrium (Molekulargewicht 0,004989) in 200 ml eines absoluten Äthanols aufgelöst werden. 3,21 g (20 mMol) Diäthylmalonat und 3,65 g (17,9 mMol) 3-Amino-4-piperonylpyrazol werden der Natriumäthylat-Lösung zugesetzt. Die erhaltene Lösung wird gerührt und während einer Zeitspanne v©n 16 Stunden auf Rückflusstemperatur erhitzt. Die Mischung wird dann auf Zimmertemperatur abkühlen gelassen. Das Natriumsalz wird gut mit Äthanol gewaschen, an der Luft getrocknet und dann in 150 ml Wasser aufgelöst. Ein Ansäuern dieser Lösung mit 6 n-Ohlorwasserstoffsäure bis zur Einstellung eines pH von 1 bis 2 liefert das Produkt. Das Produkt wird durch Filtration abgetrennt, mit Wasser gewaschen und bei 100⁰C getrocknet. Eine erneute Ausfällung dieses Produktes aus einer verdünnten Natriumhydroxyd-Lösung dureh die Zugabe von 6 n-Chlorwassarstoffsäure liefert 3,25 g (59 $>) des analytisch reinen Produktes. 3?„ 245 - 246°C (Zersetzung. Amax (pH 1) 305 nm (6 29 950), 257 nm (Schulter) (cf 13 300) und 295 nm (C 10 450), />max (pH 11) 230 nm ( 617 300) und 275 nm (£14 100).

Analyse: Berechnet für: C₁₃H₉N₃O₄: C 57,6 N 3,34, N 15,5. Gefunden: C 57,3 H 3,62, N 15,5.

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-H-

Beispiel 8

Herstellung von 3-(3'-Pyridyl)-pyrazolo[1_f5,a]-pyrimidin-5,7-diol

Eine Lösung von Natriumäthylat wird in der Weise hergestellt, dass 2,76 g Natrium (Molekulargewicht 0,007776) in 200 ml eines absoluten Äthanols aufgelöst werden. Bann werden 10,55 g (66 mMol) Diäthylmalonat und 9,60 g (60 mMol) 3-Amino-4-(3'-pyridyl)-pyrazol der Natriumäthylat-Lösung zugesetzt. Sie erhaltene Lösung wird gerührt und langsam auf Rückflusstemperatur erwärmt. Nachdem sich der Rückfluss eingestellt hat, beginnt sich das Natriumsalz des Produktes abzuscheiden. Das Rückflussieden sowie das Rühren werden während einer Zeitspanne von 16 Stunden fortgesetzt, worauf die Mischung auf Zimmertemperatur abkühlen gelassen wird. Das Natriumsalz wird durch Filtration abgetrennt, dreimal mit 200 ml eines absoluten Äthanols gewaschen und an der Luft getrocknet. Das Natriumsalz wird dann in 300 ml Wasser aufgelöst, worauf das Produkt aus der Lösung durch die Zugabe von 6 η-Chlorwasserstoffsäure bis zur Erreichung eines pH von 1 bis 2 ausgefällt wird. Das Produkt wird durch Filtration abgetrennt, mit Wasser gewaschen und bei 100⁰C getrocknet. Die Reinigung erfolgt durch Auflösen des Produktes in einer verdünnten Natriumhydroxyd-Lösung und durch erneutes Ausfällen mit einer 6 η-Chlorwasserstoffsäure. Das Produkt wiegt nach der Reinigung 3,52 g (25 %) und besitzt einen Schmelzpunkt von 275 - 277°C (Zersetzung). >>max (pH 1) 205 nm (Schulter) (C27 450), 215 nm (6 28 500), 242 nm («f 20 500) und 280 nm (<f 19 500),^ max (pH 11) 232 nm (631 750 und 275 nm ( £ 25 000).

Analyse: Berechnet für: C₁₁H₈N₄O₂: C 57,9, H 3,53, N 24,6. Gefunden: C 57,5, H 3,42, N 24,9.

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Beispiel 9

Herstellung von 3-0 '-Naphthyl)-pyrazole[1,5,a]-pyrimidin-5,7-diol «______»™»-™___«_-_^^

Eine Lösung von Natriumäthylat wird in der Weise hergestellt, dass 1,38 g Hatrium (Molekulargewicht 0,003888) in 200 ml eines absoluten Äthanols aufgelöst werden. 5,27 g (33 Äol) Mäthylmalonat und 6,26 g (30 mMol) 3-Ainino-4-( 1 ⁹«-naphthyl)-pyrazol werden der Natriumäthylat-Lösung zugesetzt«, Die erlialtene Lösung wird während einer Zeitspanne von 16 Stunden gerührt und auf Rückflusstemperatur gehalten. Die Mischung wird dann auf Zimmertemperatur abkühlen gelassen, worauf das Natriumsalz des Produktes durch !Filtration gesammelt wird. Das Natriumsalis wird gut mit Äthanol gewaschen, an der Luft getrocknet und dann in 150 ml Wasser aufgelöst. Ein Ansäuern dieser Lösung mit 6 n-ChIorwasserstoffsäure bis zur Einstellung eines pH von 1 bis liefert das Proctakt. Das Produkt wird durch Filtration abgetrennt, mit Wasser gewaschen und bei 100⁰C getrocknet. Eine erneute Ausfällung des Produktes aus eiaer verdünnten Natriumhydroxyd-Lösung durch Zugabe von 6 n-Chlorwasserstoffsäure liefert 1,91 g (23 $>) des analytisch reinen Produktes, i¹« 219 bis 221⁰C (Zersetzung). >>max (pH 1) 205 nm (<f 32 50O)₉ 256 nm ( (515 700) und 290 nm ( £12 100), Λ max (pH 11) 230 nm (619 400) und 275 nm (£15 700).

Analyse: Berechnet für: C₁₆H^ AO₂: C 69»3, H 4,00, N 15,2. Gefunden: C 68,5, H 3,72, H 14,9.

Beispiel 10

Herstellung von 3-(m-!Eolyl)-pyragolori.5ja'|-pyrimidin-7-ol

Eine Suspension von 4,0 g Natriummetall (Molekulargewicht 0,011275) in 1 1 eines absoluten Äthers wird bei Zimmertemperatur gerührtjp wobei eine Mischung aus 14,8 g (0,2 Mol) Äthyl-

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formiat und 17 g (0,193 Mol) Äthylacetat tropfenweise zugesetzt wird. Die erhaltene Mischung wird bei Zimmertemperatur während einer Zeitspanne von 48 Stunden gerührt. Nach Beendigung dieser Zeitspanne hat das ganze metallische Natrium reagiert. Die Mischung wird zur Trockne unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand aus rohem Äthyl-a-formylacetat wird in 500 ml eines absoluten Äthanols aufgelöst. Diese Lösung wird bei Zimmertemperatur gerührt, wobei 10,0 g (0,0625 Mol) 3-Amino-4-(m-tolyl)-pyrazol zugesetzt werden. Diese Mischung wird dann während einer Zeitspanne von 4 Stunden auf Rückfluss erhitzt und zur Trockne eingedampft. Der feste Rückstand wird in 200 ml Wasser aufgelöst, mit Aktivkohle behandelt und filtriert. Eine Ansäuerung des Filtrate mit konzentrierter Chlorwasserstoffsäure liefert 8,3 g (59 #) 3-(m-Tolyl)-pyrazolo[1,5a]-pyrimidin-7-ol mit einem Schmelzpunkt von 308-310⁰C (Zersetzung).

Eine erneute Ausfällung dieses Produktes aus einer verdünnten Natriumhydroxyd-Lösung verändert nicht den Schmelzpunkt. >max (pH 1) bei 206 nm (I 24 600) und 272 nm ( t 13 080). λmax (pH 11) bei 226 nm (£9 700) und 327 nm ( ^12 870), Schulter bei einem pH von 11 bei 293 nm.

Analyse: Berechnet für: C₁₅H₁₁N₅O: C 69,5, H 4,90, N 18,7. Gefunden: C 69,5, H 5,09, N 18,5.

Beispiel 11 Herstellung von 3-(m-Tolyl)-pyrazolori .5a~l-p.yrimidin-7-ol

Eine Suspension von 4,0 g metallischem Natrium (Molekulargewicht 0,011275) in 1 1 eines absoluten Äthers wird bei Zimmertemperatur gerührt, wobei eine Mischung aus 14,8 g (0,2 Mol) Äthylformiat und 17 g (0,193 Mol) Äthylacetat

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tropfenweise zugesetzt wird. Die erhaltene Mischung wird bei Zimmertemperatür während einer Zeitspanne von 48 Stunden gerührt. Nach dieser Zeitspanne hat das ganze metallische Natrium reagiert. Die Mischung wird zur Trockne unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand aus rohem lthyl-ct-formy lace tat wird in 500 ml absolutem Äthanol aufgelöst. Diese lösung wird bei Zimmertemperatur gerührt, wobei 10,0 g (0,063 Mol) 3-Amino-4-phenylpyrazol zugesetzt worden. Diese Mischung wird dann während einer Zeitspanne von 4 Stunden auf Rückflusstemperatur erhitzt und dann zur Trockne eingedampft. Der feste Rückstand wird in 200 ml Wasser aufgelöst, mit Aktivkohle behandelt und filtriert. Ein Ansäuern des Filtrats mit konzentrierter Chlorwasserstoffsäure liefert 9,6 g (69 %) 3-Phenylpyrazolo[1,5a]-pyrimidin-7-ol mit einem Schmelzpunkt von 322 - 324°C (Zersetzung). >jmax (pH 1) bei 208 nm (£ 26 800) und 273 nm ( £12 150).^ max (pH 11) bei 225 um ( 611 000) und 329 nm (£ 7 400), Schulter bei einem pH von 11 bei 294 nm.

Analyse: Berechnet für: C₁₂H₉N₅O: C 68,3, H 4,26, N 19,9. Gefunden: C 68,1, H 4,25, N 20,2.

Beispiel 12

Herstellung von 6-Carbäthoxy-3-(m-tolyl)-pyrazolo[1,5ajp.vrlmidin-7-ol

Eine lösung von 18,3 g (0,1 Mol) 3-Amino-4-m-tolylpyrazol und 21,6 g (0,1 Mol) Diäthyläthoxymethylenmalonat in 200 ml Essigsäure wird gerührt und während einer Zeitspanne von 3 Stunden auf Rückfluss erhitzt. Eine vollständige Lösung wird sofort gebildet. Nach der Rückflussbehandlung während einer Zeitspanne von ungefähr 1 1/2 Stunden beginnt sich das Produkt aus der siedenden Losung abzuscheiden. Die Mischung wird auf Zimmertemperatur abkühlen gelassen. Das Produkt wird durch Filtration abgetrennt, mit Methanol gewaschen und ge-

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trocknet. Eine Umkristallisation aus einer Mischung aus Dimethylformamid und Wasser liefert 18,6 g (63 #) des analytisch reinen 6-Carbäthoxy-3-(m-tolyl)-pyrazolo[1,5a]-pyrimidin-7-ols mit einem F. von 278 - 28O⁰C (Zersetzung), hmax (pH 1) 211 nm (<f 32 700) und 292 nm ( £ 13 660). Amax (pH 11) 227 nm ( £17 800) und 319 nm (t 22 300).

Analyse: Berechnet fUr: C₁₆H₁₅N^O₅: C 64,6, H 5,05, N 14,12. Gefunden: C 64,53, H 5,09, N 14,11.

Beispiel 13 Herstellung von 3-(m-Tol.Yl)-p.vrazolori .5a!-pyrimldln-7-ol

Eine Suspension von 1 g 6-Carbäthoxy-3-(m-tolyl)-pyrazolo[1,5a]-pyrimidin-7-ol in 5 ml einer 40 #igen Schwefelsäure wird gerührt und während einer Zeitspanne von 2 1/2 Stunden auf Rückfluss erhitzt. Nach Beendigung dieser Zeitspanne wird die Lösung abgekühlt und 10 ml Wasser zugesetzt. Eine wässrige Natriumhydroxyd-Lösung wird dieser Suspension bis zur Einstellung eines pH von 4 zugesetzt. Das weiese Produkt wird durch Filtration abgetrennt, mit Wasser gewaschen und dann aus einer Mischung aus Dimethylformamid und Wasser zur Gewinnung des analytisch reinen 3-(m-Tolyl)-pyrazolo[1,5a]-pyrimidin-7-ols, das in allen Beziehungen dem gemäss Beispiel 11 erhaltenen Produkt ähnlich 1st, umkristallisiert.

Beispiel 14

In diesem Beispiel wird die inhibierende Wirkung der erfindungsgemässen Verbindungen in der Weise bestimmt, dass spektrale Veränderungen bei einer konstanten Wellenlänge von 290 nm aufgezeichnet werden, wobei ein Aufzeichnungsapektrophotometer (Cary Modell 15) verwendet wird, das mit einem Messdraht mit einem Aussendurchmesser von 0-0,1 (O - 0,1 O.D. slldewire)

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versehen ist. Zur Erleichterung der Auflösung in der Inkubationsmisclrang werden die erfindimgsgenillsseii Verbindungen in Dime thy lsulf oxy d (DMSO) ait spektraler Reinheit aufgelöst. MSO ist ein gutes lösungsmittel, das aiseserdeia nicht dae En&ym inhibiert. Nach dem Auflösen in UMSO werden die Verbindungen in die Inkubationsmischung eingeführt, die 150 Mikromol tris-HCl-Puffer (pH 7,5O)₉ O₉β Mikromol EDiPA (Ithylendiamintetraessigsäure), O₅013 Mikromol Xanthin wa& 20 bie 40 mg Xantinozydaee in einem Endvolumen von 3_}0 il enthält. Die Xanthin oxy das e ist gereinigte MilchzanthiBosydase der Worthington Biochemical Corporation und besitzt ein spezifisches Gewicht von O₉29 u/mg Protein. Der Test wird In der Weise durchgeführt, dass alle Komponenten in einer Küvette "bei 25°G vermischt werden. Die Reaktion wird durch die Zugabe fies Enzyme mit Hilfe einer unter Rühren arbeitenden Zugabevorriehtung gestartet. Veränderungen des Aussendurchmessers werden während einer Zeitspanne von einigen Minuten gemessen. Die Geschwindigkeit ^Aussendurohiieeser pro Minute) wird aus der spektralen Veränderung über die ersten 15 Sekunden hinweg berechnet»

Um die inhibierende Aktivität vollständig zu bestimmen und die relativen inhibierenden Wirkungen der erfindungsgemässen Verbindungen mit Allopurinol zu vergleichen, wurden Versuche durchgeführt, bei deren Ausführung die Inhibitorkonzentration über einen Bereich von ungefähr 1(j* bis ungefähr 10 Mol variiert wurde, wobei die Asfangsgeachwindigkeit der Xanthinoxydation gemessen wurde. Der Logarithmus der Inhibitorkonzentration wurde gegen den Prozentsatz der Inhibierung aufgetragen. Die Konzentration des Inhibitors, welche eine 50 #ige Inhibierung (Icq) ergibt, wird berechnet. Dieser Wert wird mittels einer linearen Regressionsanalyse der geraden Linien der erhaltenen graphischen Darstellung ermittelt.

Die Werte sind in der Tabelle I als 1,-Q-Werte zusammengefasst.

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Sie relative Aktivität (α) der jeweiligen Verbindungen gemäßs vorliegender Erfindung im Vergleich zu Allopurinol ist ebenfalls in der Tabelle enthalten.

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Verbindung R

- 21 Tabelle I

R₁ R₂ I₅₀

Allopurinol Verbindung

H OH 9,6 χ 10

-8

H OH 4,3 x 10

H OH 3,3 x 10

-8

H OH 8,9 x 10

-8

H OH 3,8 χ 10"

H OH 2,5 x 10

-8

H OH 2,9 x 10

-8

H OH 4,3 x 10

-8

H OH 2,5 x 10"

H H 1,0 χ 10

-7

H H 1,5 x 10'

,-7

5 x 10

-6

52 116

151 56 131 200

172

116 20

50 33

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Aus den vorstehenden Werten ist zu ersehen, dass alle erfindungsgemässen Verbindungen eine Aktivität besitzen, die um wenigstens das 20-fache grosser ist als diejenige des bekannten Allopurinols. Die Verbindungen 2, 3, 5, 6, 7 und 8 besitzen Aktivitäten, die um das 100- bis 200-fache grosser sind als diejenige von Allopurinol. Es ist ferner darauf hinzuweisen, dass die erfindungsgemässen Verbindungen auch akzeptable Toxizitäten (EDcq) aufweisen, die im allgemeinen in der Grössenordnung von ungefähr 200 mg pro kg Körpergewicht liegen.

Die Xanthinoxydase-Inhibitoren werden als orale Präparate in Kapsel- oder Tablettenform verabreicht. Die Tabletten oder Kapseln enthalten ungefähr 0,5 bis ungefähr 50 mg des Inhibitors pro Tablette oder Kapsel. Die erforderliche Inhibitordosis schwankt natürlich je nach dem Zustand des Patienten, sie liegt jedoch zwischen ungefähr 10 und 20 mg pro Tag. Um jedoch das Enzym Xanthinoxydase wirksam zu inhibieren, ist eine Konzentration im Blut von ungefähr 1 bis ungefähr 500Mikrogramm des Inhibitors pro ml erforderlich, wobei diese Konzentration vorzugsweise 1 bis ungefähr 50 Hikrogramm pro ml beträgt.

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Claims

- 25 Patentansprüche

CK. Verbindungen der Formel

worin R einen aromatischen oder substituierten aromatischen Kern bedeutet, R₁ für H oder ein Alkalimetall oder Ammoniumsteht, und R₂ H oder OR₁ darstellt.
2. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass R für Phenyl steht.
3. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass R für

steht, worin R, Methyl, ein Halogen oder-JiH-G-CH, bedeutet
4. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass R für

steht.
5. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass

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steht.
6. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass

steht.
7. Verbindung nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass R₅ für Cl steht.
8. Verbindung nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass R₅ für Br steht.
9. 3-Phenylpyrazolo[1,5a]-pyrimidin-5,7-diol.
10. 3-(m-Tolyl)-pyrazolo[1,5a]-pyrimidin-5,7-diol.
11. 3-(p-Bromphenyl)-pyrazolo[1,5a]-pyrimidin-5,7-diol.
12. 3-Piperonylpyrazolo[1,5a]-pyrimidin-5,7-diol.
13. 3-(m-Tolyl)-pyrazolo[1,5a]-pyrimidin-7-ol.
14. 3-Phenylpyrazolo]1,5a]-pyrimidin-7-ol.

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15. Oral zu verabreichende Zubereitung in Form von Kapseln oder Tabletten zur Inhibierung der Xanthinoxydase, dadurch gekennzeichnet, dass sie als Wirkstoff eine Verbindung gemäss einem der Ansprüche 1 bis 14 enthält.
16. Zubereitung nach Anspruch 15, dadurch gekennzeichnet, dass aie ungefähr 0,5 bis ungefähr 50 mg der Verbindung pro Tablette oder Kapsel enthält.

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