DE2219439B2

DE2219439B2 - Geradkettige Oligopeptide und Verfahren zu ihrer Herstellung

Info

Publication number: DE2219439B2
Application number: DE2219439A
Authority: DE
Inventors: Yoshikazu Tokio Isowa; Hideaki Kurita; Kaoru Mori; Muneki Ohmori; Kanagawa Sagamihara; Masanari Sato; Toshiyuki Ebina Takashima
Original assignee: Sagami Chemical Research Institute
Current assignee: Sagami Chemical Research Institute
Priority date: 1971-04-20
Filing date: 1972-04-20
Publication date: 1974-09-26
Also published as: DE2219439C3; DE2219439A1; GB1377824A; US3862110A

Description

HyOrn

die vorstehend angegebene Bedeutung hat und R eine Amincschutzgruppe bedeutet, umsetzt und gegebenenfalls die Aminoschutzgruppe vom erhaltenen Produkt entfernt.

Die Erfindung betrifft geradkettige Oligopeptideder alluemeinen Formel

TOS —N¹' OBZL R¹—(HyOrni -OH in der

TOS- N^(> OBZL HvOrn

die vorstehend angegebene Bedeutung hai und R¹ eine Aminoschutzgruppe bedeutet, umsetzt und gegebenenfalls die Schutzgruppe ν ίπ erhaltenen Produkt entfernt.

5. Verfahren zur Herstellung linearer Oligopeptide der allgemeinen Formel

TOS N'¹-OBZL R²-I HyOm)., (CiIy)., OR¹

in der R². R¹. GK und

TOS - N'⁵ OHZL HvOm

die im Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben, unu deren Additionssal/en mit Sauren, dadurch gekennzeichnet, daß man einen Diglycylglycinester der allgemeinen Formel

OR¹ TOS- N" -OBZL 20

R^;—(GIy)_x-IHyOm)₁.-(CiKi₁ · OR¹

in der R² ein Wassersioffatom oder eine Aminoschutzgruppe, R³ ein Wasserstoffatom oder eine Carboxylschutzgruppe, χ eine r.anze Zahl mit tinem Wen von O oder 1. y eine ganze Zahl mit einem Wert vor 1. 2 oder 3 und r O oder eine ganze Zahl mit einerr Wert von 2 oder 3 ist. wobei die Summe von x. 1 und ζ den Wert 3 his einschließlich 6 hat. und Gl; einen Glycylrest und

TOS N'' OBZL H\Orn

einen N'¹- Fosyl-N''-henzyloxyornitbylresl der folgen den Formel

NHCHCO-

ιίΉ,ι,

in der CiIy die vorstehend angegebene Bedeutung hat und R' eine Curboxylschut/gruppc bedeutet, mit einem Ornithinderivat der allgemeinen Formel

1OS-N" OBZL R (HyOrn), OH CH,-'^

SO,-N -O-CH,-

45

60 bedeutet und deren Additionssalze mit Säuren.

Beispiele für Verbindungen der Erlindung sind:

N'^s-Tosyl-N^<1-benzyloxy-i -ornithylglycylglycin. Di-N^-tosyl-W-benzyloxy-L-ornithyl-W-tosyl-

N''-benzyloxy-L-ornithin,

Di-N^Ä-tosyl-N -bcnzyloxy-L-ornithylglycylglycin, N''-Tosyl-N'^s-benzyloxy-L-ornithyldiglycylglycin, Tri-N^-losyl-N^-benzyloxy-L-ornithylglycylglycin. Di-N^-tosyl-N^-benzyloxy-t.-ornithyldiglycylglycii Tri-N^-tosyl-N^-bcnzyloxy-L-ornithyldiglycyl-

glycin.
Cilycyl-tri-N'^!-tosyl-N''-bcnzyloxy-t.-orni(hylglycylglycin.

Beispiele für n-Aminoschutzgruppen sind die Carb benzoxy-. tcrt.-Butoxycarbonyl- und p-Mcthoxybc zyloxycarbonylgruppe, und Beispiele für Carbox; schutzgruppen sind Alkylreste.

Die Erfindung betrifft auch ein Verfahren zur Hi stellung der Verbindungen der Erfindung. Das Vi fahren der Erlindung kann nach folgenden Reaktroi schemata durchgeführt werden:

TOS —N¹'—OBZL

H-(HyOm)-OH (II)

+ H-(GIy)₃-OR¹ · HX (III)

TOS—N¹*—OBZL R²—(HyOrn)—(GIy)₃- OR³

TOS —Ν^Λ—OBZL

R — (HyOm)-OH (II) TOS -N¹¹-OBZL

H-(HyOm) -(GIy)₃-OR'- HX |IV)

TOS — W-OBZL R²—(HyOrn»,—(GIy)₃- OR³

TOS—Ν¹⁵—OBZL

R-(HyOm)-OH (II) TOS —N''-OBZL 4- R--(HyOm)₂-(GI)V-OR-¹-HX (V)

TOS —N*-OBZL

i
R²—(HyOm)₃-(GIy)₃-OR-' (I)

TOS—N^s—OBZL

R-(HyOm)-OH (II)

f H-(GIy)₂-OR¹ · HX (VI)

TOS-N'' OBZL R^: (HyOrn) (GIv), OR-'

TOS N^A OBZL R --(HyOrn)- OH (II)

TOS N'' OBZL

-t H (HyOm) (GIy)., -OR¹ ■ HX (VII)

TOS—N'—OBZL

R²—(HyOm)₂-(GIy)₂-OR³

TOS -Ν^Λ—OBZL

R-(HyOm)-OH (II)

TOS —N*-OBZL + H-(HyOm)₂-(GIy)₂-OR' · HX (VIII)

TOS —Ν'—OBZL R²—(HyOrn).,—(GIy)₂-OR³

R-(GIy)-OH (IX)

TOS —N^a—OBZL

4- H-(HyOm)₃-(GIy)₂-OR¹ · HX (X)

TOS—N^Ä—OBZL

R²—(GIy)-(HyOm)₃-(GIy)₂-OR³ (I)

ruchstückskondensationsverfahren
TOS—N^Ä—OBZL

R-(HyOm)₃-OH PCI)

+ H-(GIy)₃-OR¹ · HX (XU)

TOS— Ν*—OBZL R²—(HyOm)₃-(GIy)₃-OR³

409

In diesen Reaktionsschemata haben GIy.

TOS —W-OBZL
HyOrn

R² und R¹ die vorstehend angegebene Bedeutung, und R bedeutet eine Aminoschutzgruppc und R' eine Carboxylschutzgruppe. Das Symbol ; bedeutet die Umsetzung, bei der die Schutzgruppe entfernt werden kann.
Bei der stufenweisen Verlängerung nach Verfahren

(A) kann die Ausgangsverbindung der allgemeinen Formel II N*-Tosy1-N^a-benzyloxy-L-ornithin, dessen u-Aminogruppe mit einer Schutzgruppe versehen ist, aus N'-Tosyl-N'-benzyloxy-ornithin hergestellt werden, welches seinerseits durch Hydrolyse eines n-Acy!amino-<')-(O,N-disubstituiert-hydroxylamino)-alkylmalonsäureesters (beschrieben in der japanischen Patentschrift 24 763/1970) hergestellt werden kann. Insbesondere kann aus dem nach dem vorstehend beschriebenen Verfahren hergestellten N''-Tosyl-Ν''-benzyloxy-OL-ornithin durch Trennung der optischen Antipoden die entsprechende L-Aminosäure gewonnen werden und anschließend ihre u-Aminogruppe mit einer geeigneten Schutzgruppe versehen werden. Als weitere Ausgangsverbindungen können Additionssalze ,on Diglycylglycinalkylestern mit Halogenwasserstoffen verwendet werden. Diese Verbindungen werden üblicherweise bei Peptidsynthesen verwendet und sind im Handel erhältlich.

Die Umsetzungen zwischen der Ornithinverbindung der allgemeinen Formel II und den Verbindungen der allgemeinen Formel III, IV oder V sind Kupplungsreaktionen, die jeweils bei Raumtemperatur in Gegenwart eines inerten Lösungsmittels, wie Tetrahydrofuran oder Dimethylformamid, durchgeführt werden können. Die Kupplungsreaktion ist üblicherweise nach etwa 10 bis 50 Stunden beendet. Es können Kondensationsmittel, die üblicherweise beim Carbodiimidverfahren, beim Verfahren mit einem gemischten Säureanhydrid und beim Woodward-Verfahren verwendet werden, eingesetzt werden, wie Dicyclohexylcarbodiimid oder Woodward-Reagenzien, insbesondere Woodward-Reagenz K (N-Äthyl-5-phenyIisoxazolium-3'-sulfonat).

Bei der stufenweisen Verlängerung nach Verfahren

(B) kann die Ausgangsverbindung der allgemeinen Formel VI, d. h. ein Alkyl- oder Arylester von Glycylglycin, nach einem bekannten Verfahren hergestellt werden. Beispielsweise kann der Ester der allgemeinen Formel VI nach dem Phosphoazo-Verfahren hergestellt werden, d. h. durch Umsetzung eines Glycinalkylester-hydrochlorids mit einem geschützten Glycin. Die Umsetzungen zwischen der Verbindung der allgemeinen Formel II und den Verbindungen der allgemeinen Formeln VI, VII oder VIII sowie die Umsetzung von mit einer Aminoschutzgruppe versehenem Glycin der allgemeinen Formel Di mit der Verbindung der allgemeinen Formel X können in einem inerten Lösungsmittel, wie Nitromethan oder Tetrahydrofuran, in Gegenwart eines Kondensationsmittels gemäß Verfahren (A) und einer neutralisierend wirkenden Verbindung, z. B. Triäthylamin oder N-Alkylmorpholir, durchgeführt werden. Diese Umsetzungen werden innerhalb von etwa 24 bis 48 Stunden bei Temperaturen von 0° C bis etwa Raumtemperatur durchgeführt. Die Rcaklantcn werden jeweils vorzugsweise in äquimolaren Mengen verwendet.

Beim Bruchstückskondensationsverfahren kann die Ausgangsverbindung der allgemeinen Formel Xl Di-N^-tosyl-W-benzyloxy-i.-ornithyl-N^-tosyl-W-bcnzyl- oxy-i.-ornithin, dessen a-Aminogruppe geschützt ist, leicht durch Umsetzung von W'-Tosyl-N'-benzyloxyi.-ornithyl-N^-losyl-N^-bcnzyloxy-L-ornilhin, dessen «-Aminogruppc geschützt ist, mit einem N*-Tosy·- N'-benzyloxy-L-ornithin-alkylcster erhalten werden. Die so erhaltene Verbindung der allgemeinen Formel XI kann anschließend mit einem Diglycylglycin-alkylester der allgemeinen Formel XII in einem geeigneten Lösungsmittel, wie Nitromethan, Tetrahydrofuran, Dioxan oder Dimethylformamid, in Gegenwart eines Kondcnsationsmittels, wie Trimethylamin, zu den gewünschten Hexapeptidcn der allgemeinen Formel I umgesetzt werden. Die Umsetzung kann bei Temperaturen von 0⁰C bis Raumtemperatur unter Vcrwendung von äquimolaren Mengen der Verbindungen der allgemeinen Formeln XI und XlI durchgeführt werden.

Die Entfernung der Schutzgruppen von den Tripeptiden, Tetrapeptidcn, Pentapeptiden oder Hexapeptiden kann nach üblichen Verfahren durchgeführt werden. Zum Beispiel kann die Schutzgruppe bei jedem Reaktionsschritt unter Verwendung von Chlorwasserstoff und Dioxan oder Essigsäureäthylester oder durch katalytische Reduktion entfernt werden.

Unter dem Ausdruck »Alkylcster« sind in der Peptidsynthese übliche Esterschutzgruppen zu verstehen, wie Methyl-, Äthyl- Benzyl- und Nitrobenzylester.

Die Oligopeptide der Erfindung sind wertvolle Zwischenprodukte zur Herstellung von Deferrichrom und Ferrichrom.

Die Erfindung betrifft daher auch die Verwendung der Verbindungen der Erfindung als Zwischenprodukte zur Herstellung von Deferriferrichrom und Fernchrom.

Deferriferrichrom kann durch Cyclisierung eines linearen Hexapeptids der Erfindung in Gegenwart eines Kondensationsmittels, Entfernung der Hydroxylaminoschutzgruppe und Acetylierung des Cyclisie-

rungsproduktes hergestellt werden. Ferrichrom kann durch Umsetzung des erhaltenen Deferriferrichroms mit einem dreiwertigen Eisensalz hergestellt werden.

Ferrichrom ist ein wichtiger Wachstumsfaktor für

Mikroorganismen und eignet sich deshalb als Zusatz bei der Züchtung von Mikroorganismen (vgl. britische Patentschrift 1 029 737). Außerdem ist Ferrichrom als wertvolles Arzneimittel mit antianämischer Wirkung oder zur Behandlung von hämatischen Störungen bekannt; vgl. deutsche Patentschrift 439 586 und britische Patentschrift 1 011 558.

Aus den Oligopeptiden der Erfindung läßt sich Ferrichrom leichter als nach den bisher vorgeschlagenen Verfahren (vgl. W. Keller-Schierlein et al, Helvetica Chimica Acta, Bd. 52 (1969), S. 603) herstellen, wie im folgenden näher ausgeführt wird:

Das Hexapeptid von Beispiel 20 läßt sich nach

Überführung in die freie Base in Gegenwart von Dicyclohexylcarbodiimid als Kondensationsmittel in großen Mengen Dimethylformamid in einer Ausbeute von etwa 75% zum entsprechenden cyclischen Peptid umsetzen. Dies entspricht etwa der Cyclisierungsausbeute von Helvetica Chimica Acta a. a. O. von 77% (vgl. S. 609, !.Absatz).

Aus dem anmeldungsgemäßen cyclischen Peptid ,

läßt sich nach folgendem Schema Ferrichrom her- ^{s eu e}

stellen:

TOS -N--O-- BZL

,—-HyOm₃—

HBr H-N*-OBZL HBr-AcOH ,— HyOm.,
Phenol ' GIv,-

Keller-Schierlein-Verfahren

Ac₂O

Pyridin

5% Pd-C

Methanol

FeCl₃

pH 4,6

Ac—W-OBZL — - HyOrn.,—ι GIy., ^J

Ac-N*-OH HyOm₃ ■

I GIy₃-

Deferri-ferrichrom

Ac-Ν*—ΟΙ
- HyOm₃ —

Fe^{3 +}
-GIy₃

.+ EtOC-COEt

' i! Il ο ο

COCOOEt

48%

7,2%

Ferrichrom

35

40

Die Ausbeute dabei beträgt insgesamt i2,3%. Demgegenüber erhält man aus dem Trinitro-cyclohexapeptid 17 der genannten Druckschrift (vgl. S. 609. 2. Absatz) nach Reduktion mit Zinkstaub, Acetylierung, teilweiser Deacetylierung und Komplexierung mit Fe(lll)-chlorid Ferrichrom in einer Ausbeute von lediglich 10,5%.

Es errechnet sich für das Keller-Schierlein-Verfahren, ausgehend vom linearen Hexapeptid, eine Gesarntausbeute von etwa 7,7%, während die entsprechende Ausbeute, ausgehend von den anmeldungsgemäßen Hexapeptiden, etwa 9,2% beträgt. Die absolute Ausbeutesteigerung beträgt also 20%.

Ein weiterer Vorteil des anmeldungsgemäßen Verfahrens besteht darin, daß das als Ausgangsprodukt eingesetzte N*-Tosyl-N*-benzyloxy-L-ornithin, dessen a-Aminogruppe geschützt ist, sich in relativ hoher Ausbeute herstellen läßt. Das entsprechende Nitronorvalinderivat des Keller-Schierlein-Verfahrens wird demgegenüber nur in wesentlich geringeren Ausbeuten erhalten. Im folgenden Schema sind die entsprechenden Reaktionsfolgen mit Ausbeuten angegeben. E?. wird dabei jeweils von den am einfachsten zugänglichen Materialien, nämlich O-Benzylhydroxylamin bzw. y-Butyrolactam ausgegangen.

HOCH₂CH₂CH₂COCOOEt

HOCH₂Ch₂CH₂CHCOOH

NH,

NHCOCH3

73%

BrCH₂CH₂CH₂CHCOOH NHCOCH₃

BrCH₂CH₂CH₂CHCOOCH₃ NHCOCH,

30%

NO₂CH₂CH₂CH₂CHCOOCh₃ NHCOCH,

98%

DL-NO₂CH₂CH₂CH₂CHCOOh NHCOCH₃

Literatur: Chem. Ben, Bd. 83 (1950), S. 271; HeI Chim. Acta, Bd. 52 (1969), S, 388.

Anmcldungsgemäi3es Ausgangsproclukt

Ausbeute BZLONH₂ -p-

82"

BZLO

TOS

NH

88%

BZLO

TOS

BZLO

TOS

BZLO

TOS

NCH₂CH₂CH₂Br

20

70% 34%

COOEl

NCH₂CH₂CH₂CNHAc

COOEt

90%

NCH₂CH₂CH₂CHCOOh

NH,

■7 cn/ Ij /o

BZLO

Di-- NCH₂CH₂CH₂CHCOOh

TOS NHAc

35

45

slant nach Versetzen mit Wasser und Kratzen mi einem Glasstab. Das Produkt wird filtriert und nach einander mil IO%iger wäßriger Zitronensäure, 3% ige ι Natriumhydrogcncarbonatlösung und Wasser gc waschen. Nach dem Umkristallisieren aus einci Mischung von Hssigsäurciithyiesler und Ligroin er hält man 20.0 g N^-tert.-IUityloxycarbonyl-N^-losyl Ν^Λ-benzyloxy-1 -ornilhyldiglyeylglycinäthylcsler mi einem I'. von 9H bis 102 C in einer Ausbeute vor 83.0% der Theorie.

C₁₂H₄₅O₁₀N₅S:

Berechnet ... C 55,55.
gefunden .... C 55,94,

H 6,56. N 10,12%; H 6,43. N 10,19%.

Beispiel 2

18 g NMcrt.-Butyloxycarbonyl-NMosyl-N^-bcnzyloxy-i.-ornithyldiglycylglyeinäthylestcr werden ir einem Gemisch aus 100 ml l-ssigsäureäthylcstcr, dci 6,3n an Salzsäure ist, und 50 ml Rssigsäureälhylcslei suspendiert, und die Suspension wird 2 Stunden bc Raumtemperatur stehengelassen. Die entstandene Lösung wird unter vermindertem Druck eingedampfl und das erhaltene öl mit 200 ml Diäthyläthcr versetzt. Nach dem Abfiltricren und Waschen mit Diäthyläthcr erhält man 15,8 g N^-Tosyl-N'-bcnzyloxyi.-ornithyldiglycylglyeinäthylcslcr-hydrochlorid vorr F. 115 bis 128 C in einer Ausbeute von 96,8% dci Theorie. [«] Γ = + 21.7 [c = I: in Methanol).

Beispiel 3

Gemäß Beispiel 1 werden 16.8 g N''-Tosyl-N^Ä-bcnzyloxy -1. - ornithyldigylcylglycinmelhylestcr - hydrochlorid (hergestellt gemäß Beispiel 2) und 13,1 £ N' - tert. - Butyloxycarbonyl - N*¹- tosyl - N^Ä- benzyloxy· L-ornithin zu 20.8 g N'-tert.-Butyloxycarbonyl-di-N*- losyl - N¹* - benzyloxy - L - ornilhyldiglycylglycinäthyl· ester umgesetzt. Nach dem Umkristallisieren au; heißem Methanol weist das Produkt einen F. vor 155 bis 157° C auf.

C₅₁H₆₇N₇O₁₄S₂:
Berechnet . ..
gefunden ....

C 57.45. H 6.33. N 9.20%; C 57.50. H 6.05. N 9,08%.

Literatur: Bull. Chem. Soc. Japan, Bd. 45 (1972). S. 1461.

Aus den vorstehenden Ausführungen ergibt sich, daß sich unter Einsatz der anmeldungsgemäßen Hexapeptide Ferrichrom in einfacherer Weise, d. h. mit weniger Zwischenstufen, und in höheren Ausbeuten herstellen läßt. Die Beispiele erläutern die Erfindung.

Beispiel 1

Eine Lösung von 7.43 g Dicyclohexylcarbodiimid in 80 ml Dimethylformamid wird bei einer Temperatur von -10° C zu einer Lösung von 17.15 g N^d-tert.-Butyloxycarbonyl-N^-tosyl-N^-benzyloxy-L-ornithin. 10.40 g Diglycylglycinäthylester-hydrobromid, 8,05 g N-Hydroxysuccinimid und 3.98 ml N-Methylmorpholin in 370 ml Dimethylformamid gegeben. Das Gemisch wird 48 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, und das Lösungsmittel wird unter vermindertem Druck entfernt. Der erhaltene ölige Rückstand er-

Beispiel 4

Gemäß Beispiel 3 hergestellter NMert.-Butyloxycarbonyl - di - N^d - tosyl - Ν^Λ - benzyloxy - l - ornithyldiglycylglycinäthylester wird gemäß Beispiel 2 zur En' fernung der N'-Schutzgruppe behandelt. Man erhält Di - N"- tosyl - Ν^Λ- benzyloxy- L- ornithyldiglycylglycinäthylesterhydrochlorid vom F. 196 bis 201°C in einei Ausbeute von 98.2% der Theorie. [„]'_r ⁵ =4-17.9 (c = 1; in Methanol).

Beispiel 5

Gemäß Beispiel 2 werden 18,6g Di-N*-tosyl-N*- benzyloxy - L - ornithyldiglycylglycinäthylester- hydrochlorid (hergestellt gemäß Beispiel 4) und 9,09 f NMert.-Butyloxycarbonyl-N^-tosyl-N'-benzyloxy-L-ornithin zu 24,6 g N^I-tert.-Butyloxycarbonyl-tri-N'⁵ tosyl-N^-benzyloxy-L-ornithyldiglycylglycinäthylestei umgesetzt. Nach dem Umkristallisieren aus heißen" Methanol schmilzt das Produkt bei 192 bis 195° C [„] j- = - 5,2= {c= I; Methanol).

-OH₈₉N₉O₁₈S₃:

Berechnet ... C 58.35. H 6,23. N 8,75%; gefunden .... C 58.49. H 6,09. N 8,67%.

434 8

Beispiel 6

Eine Suspension von 18,5 g NMert.-Butyloxycarbonyl - tri -N**- tosyi - N⁴- berzyloxy - L -ornithyldiglycylglycmäthylester in 250 ml Aceton wird mit 40 ml

1 η-Natronlauge versetzt. Man läßt das Gemisch

2 Tage stellen, wobei es verseift wird, säuert es anschließend UMt Zitronensäure an und verdampft das Lösungsmittel unter vermindertem Druck. Das erhaltene ölige Produkt erstarrt nach dem Kratzen bei Temperaturen von 0 bis 5 C. Nach dem Filtrieren und Waschen mit Wasser erhält man 17,4 g N'-tert.-Butyloxycarbonyl - tri - N^a - tosyl - N* - benzyloxy -L-ornithyldiglycylglycin vom F. 122 bis 129° C in einer Ausbeute von 96,3% der Theorie. [«]"=- 2,0 (c = 1; in Methanol).

Berechnet ... C 57.Sl. 116.07. N 8,92%;
gefunden C 57.94. 116.09. N 8,87%.

B e i s ρ i L¹ 1 7

Gemäß Beispiel 2 wird N'-tert.-Butyloxycarbonyltri - N'' - tosyl - N'' - ben/.yloxy -L- ornithyldiglyey!glycin (hergestellt gemäß Beispiel 6) zur Entfernung der ^-Schutzgruppe behandelt. Das erhaltene Hydrochloiid wird anschließend mil Ammoniak in Dimethylformamid behandelt und das Produkt wird aus einer Mischung von Essigsaure und Wasser umkristallisiert. Man erhält Tri-N'^tosyl-N'-benzyloxy-I-ornithyldiglyeylglycin vom F-". 257 bis 260 C (Zersetzung) in einer Ausbeute von 55.2% der Theorie. (.(]: = r 3.6 (c = 1: in Methanol).

C	,,,H-N₉O,,,	S₁:	C	57.65.	H	5.91.	N	9.61%
	Berechnet		C	57.78.	H	5.82.	N	9.52%.
	gefunden .			B c i s	Pi	el 8

Fine Suspension von 9.86 g N'-tert.-Butyloxycarhonyl-N''-tosyl-N'ⁱ-benz.yloxy-i.-ornithin und 5.07g Woodward-Reagenz K (N-Athyi - 5-phcnylisoxazo- !ium-3-sulfonall in 80 ml Nitromethan wird bei 5 C mit 2.93 ml I riäthylainin versetzt. Das Gemisch wird 4 Stunden oder bis zum Entstehen einer klaren Losung in einem Eis-Wasserbad gerührt. Anschließend wird die Lösung bei 5'C mit 4.54g Glyeylglycinmelhyiester-hydrobromiil und 2.93 ml Triäthylamin versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 36 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, und anschließend wird die Lösung bei einer Temperatur von 50¹C unter vermindertem Druck eingedampft. Der erhaltene ölige Rückstand wird mit Chloroform extrahiert. Die organische Phase wird einmal mit Wasser, dreimal mil l-m-Natriumhydrogcncarbonatlösung, dreimal mit 1 η-Salzsäure und schließlich einmal mit Wasser gewaschen. Anschließend trockne! man über Magnesiumsulfat und dampft zur 1 rock nc ein. Der Rückstand wird aus einem geringen Volumen Essigsäurcälhylester unter Zusatz von I'etroläthcr umkristallisiert. Man erhält 10 ^ g NMcrt.-Butyloxycarbonyl-WMosyl-N'' - benzyloxv - 1 - ornithylglycylglycinmethylcster in einer Ausbeute von 84.7" u der Theorie. [ u | ,· --- 1 7.0 Ic =- 1; Methanol|.

Beispiel 9

Eine Suspension von 22,0 g NMert.-Butyloxycarbonyl - N* - tosyl - N^Ä - benzyloxy - L - ornilhylglycylglycin- methylester in 90 ml Essigsäureäthylester wird mit 236 ml einer 3,0 η-Lösung von Chlorwasserstoff in Essigsäureäthylester versetzt. Die I ösung wird 2 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen und anschließend unier vermindertem Druck eingedampft. Das erhaltene öl wird aus einem geringen Volumen Essigsäureäthylester unter Zusatz von wasserfreiem Diäthyläther umkristallisiert. Man erhält 18,0 g N'-Tosyl - N^ä - benzyloxy - L - ornithylglycylglycinmethylesterhydrochlorid vom F. 138 bis 142" C in einer Ausbeute von 91,4% der Theorie. [«]"=+23,6 ³ (c=l; in Äthanol)

C₂₄Hj₁N₄O-SCL

Berechnet ... C 51.74. 115.97. N 10.06",,:
siefunden C 51.67. 116.16. N 9.94",,.

Beispiel 10

Eine Suspension von 5.01 g N'-Carbobenzoxy-N'' - tosyl - N'¹ - benzyloxy - 1. - ornithin und 1.33 ml Triäthylamin .11 47.5 ml Telrahjdrofuran wird auf eine Temperatur von - 10 bis - 15 C abgekühlt und anschließend mit 1.28 ml Chlorameisensäureisobutylester versetzt. Das Gemisch wird 12 Minuten gerührt und anschließend mit einer Suspension von 2.16 g Glycylglycinmethylester-hydrobromid und 1.33 ml Triäthylamin in 20 ml Dimethylformamid versetzt. Das Gemisch wird 1 Stunde in einem Eis-Wasserbad und anschließend 15 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Sodann wird unter vermindertem Druck eingedampft und das Konzentrat mit Wasser versetzt. Das erhaltene öl wird mit Essigsäureälhylester extrahier!, nacheinander mit Wasser. 1 η-Salzsäure. Wasser 0.5-ni Natriumhydrogencarbonatlösiing und schließlich mit Wasser gewaschen. Man trocknet über wasserfreiem Natriumsulfat und dampf! zur Trockne ein. Man erhalt kristallinen N'-Carbobenzoxy-N¹'-tosyl-N"'-benzyioxy-i.-ornithylülyc\lglyeinmethylester in einer Ausheule von 88",. der Theorie.

'Beispiel Il

Eine Suspension von 13.8 g N'-teit.-Butyloxycarbonyl-N''-tosyi-N''-ben/yloxy-ι.-ornithin und 7.2 g Woodward -Reagenz K (N -Äthyl -5- phenylisoxazolium-3 -sulfonal) in 100 ml Nitromethan wird mit 4,18 ml Triäthylamin versetzt. Das Gemisch wird 4 Stunden oder bis zum Entstehen einer klaren Lösung in einem Eis-Wasserbad gerührt. Anschließend versetzt man mit 15.6g N''-Tosyl-N^A-nenzyloxy-L-ornithylglycylgiycinmclhylcstcr-hydrochlorid und 4.18 ml Triälhylamin. Das Gemisch wird 36 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und anschließend bei 50 C unter vermindertem Druck eingedampft. Nach Zusatz von Wasser wird das öl aus einem geringen Volumen Dimethylformamid umkrislallisiert. Man erhält 27.2 g N'-terl.-Billy loxycarbony l-di-N'-losy I-N''-benzyl oxyi.-ornithylglycylglycinmelhylestcr in einer Ausbeute von 97.6% der Theorie. [-(],' --· I 2.5 ν ■-- I; in Methanol).

( ,„I IκιN₄O,,	,S:	C	56.11.	11 6.50.	N	9.03"
Berechne!		(	56.35.	11 6.6X.	N	8.91"
i'efunden

ΛΛ?:

Berechnet
gefunden .

C 57.93.
(' 57.84.

Il 6.2X. N 8.45"
Il 6.31. N 8.25"

(O

Beispiel 12

Eine Suspension von 28 g NMert.-Butyloxycarbo- nyl - di - N* - tosyl - N'^s - benzyloxy - l - ornithylglycyl- glycinmethylester in 100 ml Essigsaureäthylester wird mit 80 ml einer 5,7 η-Lösung von Chlorwasserstoff in Essigsäureälhylester versetzt. Man läßt das Ge misch 2 Stunden bei Raumtemperatur stehen und dampft anschließend unter vermindertem Druck zu einem öl ein. Unter Zusatz, von wasserfreiem Di- äthyläther kristallisiert man das öl aus einem kleinen Volumen Essigsäureäthylester. Man erhält Di-N*-tosyl-N^benzyloxy-L-ornithylglycylglycinmethylester- hydrochlorid vom F. 112 bis 120¹³C in einer Ausbeute von 98% der Theorie. [«]?=+16,0° (c = 1; in Methanol).

C H Π Men-

Berechnet ... C 55.44. 115.95. N 9.02"»:

gefunden C 55.22. 11 6.17. N X.92%.

Beispiel 13

Line Suspension von 4.40 g N³-Carbobenzoxy-N*-tosyl-N^Ä-bcnzyloxy-i -ornithin und i.l 7 ml Triäthylamin in 42 ml Tetrahydrofuran wird auf etwa - 10 C gekühlt und mit 1.13 ml Chlorameisensäureisobutylester versetzt. Das Gemisch wird 20 Minuten gerührt. Die erhaltene Lösung wird mit einer Suspension von 5.04 g NMOsyl-N'-benzyloxy-L-ornithylglycylglycinmethylestcr-hydrochlorid und 1.17 ml Triäthylamin in 15 ml Dimethylformamid versetzt. Das Gemisch wird 1 Stunde in einem Eis-Wasserbad und 15 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Dann wird das Reaktionsgemisch unter vermindertem Druck eingedampft, und das Konzentrat wird mit Wasser versetzt, wobei ein öl erhalten wird. Dieses öl wird mit Essigsaureäthylester extrahiert, und der Extrakt wird nacheinander mit Wasser. 1 η-Salzsäure. Wasser. 0.5-m Natriumhydrogcncarbonatlösung und Wasser gewaschen und anschließend zur Trockne ein gedampft. Man erhält N^I-Carbobenzoxy-di-N'^!-tosyl-fJ'ⁱ-benzyloxy-L-ornithylglycylglycmmcthylester als Feststoff in einer Ausbeute von 89"» der Theorie.

Beispiel 14

Line Suspension von 10,2 g N'-tert.-Butyloxycarbonyl - Ν^Λ- tosyl- N'* -benzyloxy-1.-ornithin und 5.2 g N - Äthyl - 5 - phenylisoxazoliiim - 3' - sulfonat (Woodward-Rcagcnz K) in 80 ml Nitromcthan wird mit 3.3 ml Triäthylamin versetzt. Das Gemisch wird 4 Stunden oder bis zum Entstehen einer klaren Lösung in einem Eis-Wasserbad gerührt. Die Lösung wird mit 19,2 g Di-N^A-tosyl-N^rt-bcnzyloxy-i-ornithylglycylglycinmcthylestcr-hydrochlorid und 3,3 ml Triäthylamin versetzt. Das Gemisch wird 36 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und anschließend bei einer Temperatur von 50 C unter vermindertem Druck eingedampft. Das erhaltene öl wird aus einem geringen Volumen Dimethylformamid unter Zusatz von Wasser kristallisiert. Man erhält 27.8 g N'-tcrt.-Butyloxycarbonyl - tri - Ν^Λ - tosyl - N* - benzyloxy -1. ornithylglycylglycinmethylcstcr vom F. 138 bis 154"C in einer Ausbeute von 98% der Theorie, [u]" = +1,8 (c = I; in Methanol).

Berechnet ... C 58.75, H 6,18, N 8.18%:
gefunden .... C 58,81. H 5,97, N 7.93%.

Beispiel 15

Eine Suspension von 28,4 g N"-tert.-Butyloxycarbonyl - tri - NMosyl - N* - benzyloxy - L - ornithylglycylglycinmethylcster in 100 ml Essigsäureäthylester wird mit 100 ml einer 5,7 η-Lösung von Chlorwasserstoff in Essigsäureäthylester versetzt. Man läßt die Lösung 3 Stunden bei Raumtemperatur stehen und dampft sie dann unter vermindertem Druck ein. Das erhaltene öl wird mit wasserfreiem Diäthyläther versetzt und aus einem kleinen Volumen Essigsäureäthylester kristallisiert. Man erhält 26,4 g Tri-N⁴-tosyl-N^a-bcnzy!- oxy - L - ornithylglycylglycinmethylester - hydrochlorid vorn F. 116 bis 119°C in einer Ausbeute von 98,1% der Theorie. [«] ? = + 9,2 (c = 1; in Methanol).

C₆₂H₇₇O₁₅S₃Ci:
Berechnet . . .
gefunden ....

C 57.02. H 5,94, N 8.53%: C 56.52. H 6.05. N 8.23%.

Beispiel 16

Eine Suspension von 4.40 g N³-Carboben/ov Nⁱ-losyl-N*-hcnzyloxy-i--orni;hin und 1.17 ml Ir: äthylamin in 40 ml Tetrahydrofuran wird auf etw : - 10"C gekühlt und anschließend mit 1.13 ml CΊιΙογ-ameisensäureisobutylcster versetzt. Das Gemisch wi;.^; 15 Minuten gerührt und dann mit einer Suspensi· von 8,15 g Di-N'⁵-tosyl-N^li-benzyloxy-[.-ornilhylglye\ '-glycinmethylester-hydroehlorid und 1.17 ml Triätrui amin in 15 ml Dimethylformamid versetzt. Das C misch wird 1 Stunde in einem Eis-Wasserbad ui, ^: 15 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das R aktionsgemisch wird sodann unter vermindertem Dru. ■■ eingedampft, und das Konzentrat wird mit Wassv ■ versetzt, wodurch ein öl erhalten wird. Dieses f) wird mit Essigsaureüthylester extrahiert, und de: Extrakt wird nacheinander mit Wasser, 1 n-Salzsäuiv Wasser. 0.5-m Natriumhydrogencarbonallösung unc Wasser gewaschen und schließlich zur Trockne eingedampft. Man erhält kristallinen N²-Carboben/ox> tri - Ν^Λ- tosyl - N"'-benzyloxy- L-ornithylglycylglvcintncthylcster in einer Ausbeute von 80% der Theorie

C₇OiI₈₂N₁₄O₁-S.,:

Berechnet ... C 59.90. H 5.X<). N 7.98"-»: gefunden .... C 59.X4. 11 6.17. N X.03%.

Beispiel 17

3,24 g N^a-Carhobcnzoxy-lri-N''-tosyl-N''-bcn/yloxy-i.-ornithylglycylglycinmethylcstcr werden 2 Stunden bei Raumtemperatur mit 4.7 ml einer 20%igcn Lösung von Bromwasserstoff in Essigsäure behandelt, und das entstandene öl wird aus einer Mischung von Methanol und Äthanol kristallisiert. Man erhält Tri - N'' - tosyl - N'¹ - benzyloxy -1. - ornit hy Iglycy Iglyeinmelhylester-hydrobromid vom F. 131 bis 134'C in einer Ausbeute von 92% der Theorie.

Berechnet ... C 55.14. U 5.75, N 8,38%; gefunden .... C 55.07. H 5,69, N 8,28%.

Beispiel 18

Eine Suspension von 3,52 g terl.-Butoxycarbonylglycin und 5,1 g N-Älhyl-5-phcnylisoxazolium-3'-sulfonal (Woodward-Rcagcnz K) in 160 ml Nilromcthan wird mil 3,0 ml Triäthylamin versetzt, und das Gemisch wird 3 Stunden oder bis zum Entstehen einer

Λ,

klaren Lösung in einem Eis-Wasserbad gerührt. Diese Lösung wird mit 26,3 g Tri-N^-tosyl-N^-benzyloxyu-ornithylglycylglycinmeihylester-hydrochlorid und 3,0 ml Triüthylamin versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 36 Stunden bei Raumtemperatui gerühmt und anschließend unter vermindertem Druck (20 Torr) bei einer Temperatur von 50⁰C eingedampft. Schließlich wird der Rückstand mit Wasser versetzt, und man erhält 26,7 g NMert.-Butoxycarbonylglycyl-tri-N^Ä-tosyl - N^Ä - benzyloxy - L-ornithylglycylglycinmethylester in einer Ausbeute von 94% der Theorie, [</]" = + 2.3 (t· = 1; in CHCl₃).

C₆₉H₈₇N₉O₁₈S₃:

Berechnet ... C 58,08, H 6.15. N 8,84%;
gefunden .... C 57,94, H 6,11, N 8,74%.

Beispiel 19

22.02 g NMert.-Butyloxycarbonylglyeyl-iri-N'-in- $yl-N'^s-benzylox\ -L-ornilhylglyeylglycinmethylesler werden in 150 ml Aceton suspendiert und anschließend mit 20 ml 1 η-Natronlauge versetzt. Das Gemisch wird 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und anschließend mit l-m Zitronensäurelösung auf den pH-Wert 4 gebracht. Das Gemisch wird anschließend unter vermindertem Druck eingedampft. Das erhaltene kristalline Produkt wird aus einer Mischung von Methanol und Diäthyläther umkristallisierl. Man erhält 16.2 g NMert.-Butyloxycarbonylglvcyl-tri-N^-tosyl-N^Ä-benzyloxy-, -ornithylgiycylglycin vom F. 146 bis 158 C in einer Ausbeute von 74.5",, der Theorie. [„];·= +19.3 U=I: in Chlor.·^rorm).

I'huH , .,

C 57.81. H 6.07. N 8.92",,:
C 57.56. Il 5.88. N 8.66"».

Beispiel 20

10.0 g NMcrl.-Butyloxycarbonylglycyl-tri-NMosyl - Ν^Λ-benzyloxy-ι.-ornithylglycylglycin werden in 60 ml F.ssigsäureäthylester suspendiert und anschließend mit 60 ml einer 5.7 η-Lösung von Chlorsvasscrstoff in Essigsäureäthylester versetzt. Das Gemisch wird 4 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen. Die erhaltene Lösung wird sodann unter vermindertem Druck eingedampft und der Rückstand mit 20 ml Diäthyläther versetzt. Man erhält 9,4 g kristallines Glycyl-tri- N^ä-tosyl- N'-ben/yloxy-i.-ornithylglycylglycinhydrochlorid vom F. 122 bis I4K C in einer Ausbeute von 98,2% der Theorie, l«] =-3.2 U = I; in Methanol).

C_f,.,H₇.,N„O₁₍,S,a·.

Berechnet ... C 56.09. H 5,83. N 9.35",,,;
gefunden C 55.94. H 6.06. N 9.10",,.

B c i s ρ i c I 21

9,58 g Glycyl-tri-N^-tosylcN^-benzyloxy-L-ornithylglycyiglycinhydrochlorid werden in 60 ml Dimethylformamid gelöst und mit 20 ml einer 10%igen wäßrigen Ammoniaklösung versetzt. Das Gemisch wird 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und anschließend unter vermindertem Druck (20 Torr) "ingedampft. Nach Versetzen mit Wasser und Abfiltriercn erhält man 8.6 g freies Glycyl-tri-N^-tosyl-N^-bcnzyloxy-i.-ornithylglycylglycin vom F. 212 bis

_H7N„O_1KS₃:
Berechnet ...
»efundcn

218³C in einer Ausbeute von 92,2% der Theorie, [„]« = - 5,6 (c = 0,5; in Essigsäure).

C₆₃H₇₇N₉O₁₆S₃:

Berechnet ... C 57,65, H 5,91, N 9,61%;
gefunden .... C 57,34, H 5,80, N 9,30%.

Beispiel 22

Eine Suspension von 0,494 g p-Methoxybenzyloxycarbonylglycin und 0,289 ml Triäthylamin h-10 ml Tetrahydrofuran wird auf eine Temperatur von etwa -10" C gekühlt und mit 0,279 ml Chlorameisensaureisobutylcster versetzt. Das Gemisch wird 20 Minuten gerührt. Anschließend wird eine Suspension

vi.η 2,78 g Tri-N^-tosyl-N^benzyloxy-L-ornithylglycylglycinmethylester-hydrobromid und 0,289 ml Triäthylamin in 10 ml Dimethylformamid zugesetzt, und das erhaltene Gemisch wird I Stunde in einem Eis-Wasserbad und 15 Stunden bei Ranir;temperatur gerührt. Anschließend dampft man unter vermindertem Druck ein und versetzt das erhaltene Konzentrat mit Wasser, wobei sich ein öl bildet. Dieses öl wird mit Essigsäureäthylesler extrahiert, und der Extrakt wird nacheinander mit Wasser. 1 n-Salzsäurc, Wasser.

0.5-m Natriumhydrogencarbonatlösung und Wasser gewaschen. Der gewaschene Extrakt wird über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und dann z.urTrocknc eingedampft. Man erhält N'-p-Methoxybenzyloxycarbonylglycyl-tri-N^-tosyl-N^-benzyloxy-t.-ornithyl- glycylglycinmelhylester vom F. 168 bis 17Γ C in einer Ausbeute von 70% der Theorie.

C-.,Η.^Ν,,Ο,Ά,:

Berechnet ... C 58.81. H 5.88. N 8.46. S 6.45%:
gefunden .... C 58.89. H 5.71. N 8.32. S 6.55"/,,.

Beispiel 23

Eine Suspension von 2.03 g N'-Carbobenzoxy-N'¹-losyl-N^-benzyloNy-L-ornkhyl-!*·'' -!osyl-N'^!-benzyloxy-i -ornithin wird mit 0.34 ml Triäthylamin und einer Lösung von 0.57 g N-Athyl-5-phcnylisoxazolium-3'-sulfonat iWoodward-Reagcnz. K) in 7 ml Dimethylformamid, die vorher auf 5 C gekühlt wurde, versetzt. Das Gemisch wird 2 Stunden bei 5' C gerührt und anschließend mit 1.01 g N^Ä-Tosyl-N'-hcn/.yloxy -1 - ornithylmethylester - hydrochloric! und einem Gemisch aus 0.34 ml Triäthylamin und ! ml Dimethylformamid versetzt. Das Gemisch wird sodann 20 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und unter vermindertem Druck eingedampft. Der erhaltene Rückstand wird mit Wasser versetzt, und der dabei entstehende Niederschlag wird abliltricrt. nacheinander mit 1 n-Sal/säurc. Wasser. 0.5-m Natriumhydrogencarbonatlösung und Wasser gewaschen und schließlieh getrocknet. Nach dem Umkristallisieren aus Methanol erhält man 1.6 g Ν'-Carbobcnzoxy-di-N''-losyl-N''-benzyloxy -1. -orn it hy I- N'¹- tosy I -N''- benzyloxy -1.-ornithinmethylester vom F. 121 bis 133"C. [,<]',' = -0.9 (i' = 2: in lissigsiiurciithylcslcr).

C_w,H_7i,N₍,O,₅S.,:

Berechnet ... C 61.47. 115.94. N 6.52%;
gefunden .... C 60.68. Il 5.81. Il 6.43%.

B e i s ρ i e 1 24

14.5 g N³-Car.bobenzoxy-di-N'ⁱ-tosyl-N'ⁱ-bcnzyloxy - L - ornithyl - N'' - tosyl - N'' - benzyloxy -1. - ornrthin werden aus 1.48 g gemäß Beispiel 23 erhaltenem

IL

N" - Carbobenzoxy - di - Ν^Λ - tosyl - N'¹ - benzylaxy - lornithyl - N''- tasy I - Ν^Λ- henzyloxy - l - ornitliinmethyleslcr durch Verseifen mit 2 η-Natronlauge hergestellt. Nach dem Umkristallisieren aus Methanol erhält man 1,28 g reines kristallines Produkt vom F. 139 bis I46"C in einer Ausbeute von 87"/« der Theorie.

C₆₅H₇₄N₆O₁₅S₃:

Berechnet ... C 61.20. H 5,85, N 6.59. S 7,54%; gefunden .... C 61.24, H 5.98. N 6.78, S 7,55%. _|0

Beispiel 25

1,765 g N* - tert. - Butyloxycarbony! - N* - tosyl - Ν^Λ-benzyloxy-L-ornithin und 0,908 g N-Äthyl-5-phenylisoxazolium-3'-suIfonat (Woodward-Reagenz K) werden in 20 ml Nitromcthan suspendiert. Die Suspension wird in einem Fis-Wasserbad abgekühlt und tropfenweise mit 0.55 ml Triäthylamin \ersetzt. Nach 30 Minuten wird das Gemisch wieder auf Raumtemperatur erwärmt und so lange gerührt, bis ein homogenes System entsteht. Die Lösung wird wieder im Eis-Wasserbad gekühlt und mit 2.95 g N"- losyl· N^J - bcnzyloxy - L - ornithin - N'¹ - losyl - N'¹ - benzy loxy-L-ornithinmethylcsler und anschließend mit 0.55 mi Triäthylamin versetzt. Das erhaltene Gemisch wird 36 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und anschließend bei einer Temperatur unier 50 C eingedampft. Sodann wird ein geringes Volumen Dimethylformamid zugesetzt und wieder eingedampft. Das erhaltene Konzentrat wird mit Wasser verrieben. bis Kristallcentstehen. Die Kristalle werden abfiltriert und gründlich nacheinander mit Wasser. I n-Salzsäure und 1-m Natriumhydrogencarbonatlösung gewaschen. Nach dem Umkristallisieren aus einer Mischung von Essigsäureäthylester und Petroläther erhält man 4.26 g N'-tert.-Butyloxycarbonyl-di-N¹'-tosy I- f*"⁵- bcnzyloxy-1. -ornithyl -N'⁵- tosyl -N''- benzy I-oxy-L-ornithinmethylestcr vom F. 110 bis IIS C* in einer Ausbeute von 94.87% der Theorie. [<<] = —1.3 (c = I; in Essigsäurcäthyleslcr): [u\ " = - 0 (c = 1 ; in Methanol).

C₀₈H₇₈O₁₅H₁S,:

Berechnet ... C 60.26. 116.26. N 6.69%:
gefunden C 59.92. Il 6.54. N 6.42".,.

Beispiel 26

2,33 g N'-lcrl.-ButyloxycarbonyI-di-N^-losyI-N¹'-benzyloxy -L- ornithyl - N'^s - tosy! (■ N'¹ - benzyloxy - L-ornithinmcthylesleiwerden in 13 ml Essigsäureäthylcstcr gelöst und anschließend mit 13 ml einer 5.Sn-Lösung von Chlorwasserstoff in Essigsäureäthylester versetzt. Man läßt das Gemisch unter gelegentlichem Schütteln 2 Stunden bei Kaumtemperatur stehen. Anschließend wird das Reiiklionsgemisch eingedampft und das Konzentrat in einem kleinen Volumen wasserfreiem Methanol gelöst und mit wasserfreiem Diäthyläther versetzt. Der ölige Niederschlag wird zerrieben, und die dabei entstandenen Kristalle weiden abfiltriert, mit wasserfreiem Diälhyliiiher gewaschen und getrocknet. N.-.eh dem Umkristallisieren aus einer Mischung von Methanol und Diäthyläther erhält man 1,96 g Di -N'⁵-losyl- Ν^Λ- benzyloxy -1.-ornithyl - Ν^Λ-tosyl - Ν''-bcnzylo· \ -1,- ornithinmethylcster-hydrochlorid vom F. 97 bis 102 C in einer Ausbeute von 88,47% der Theorie. [«]?? =+8,1" (c=l; in Methanol),

Q₁₁H₇₁O₁₃N₆S₃Cl:

Berechnet ... C 58,44, H 6,00, N 7,05%;
gefunden .... C 58,90, H 5,99, N 6,76%.

Beispiel 27

Eine Suspension von 4,47 g N'-Carbobenzoxy-tri-N⁰ - tosyl - N¹* - benzyloxy - L - ornithyl - N^a - tosyl - N*- benzyloxy-L-ornithin und 0,89 g N-Äthyl-5-phenylisoxyazolium-3'-sulfonat (Woodward-Reagenz K) in 14 ml Dimethylformamid wird auf 0 bis 5°C gekühlt und mit 0,536 ml Trimethylamin versetzt. Das Gemisch wird so lange gerührt, bis eine homogene Lösung entsteht. Diese Lösung wird mit einer Lösung von 0,84 g Diglycylglycinniethylester-hydroch'orid und 0.536 ml Triäthylamin in 3.5 ml Dimethylformamid versetzt, und das erhaltene Gemisch wird 1 Stunde bei einer Temperatur von 01: 5 C und 20 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. A η se! üeßend dampft man unter vermindertem Druck ein. verset/t den Rückstand mit Wasser und \erreibt ihn so lange, bis ein i-'eststoff entsteht. Der Feststoff wird abliltricrt, nacheinander mit Wasser. 1 n-Salzsäurc. Wasser. 0.5-m Natriumcarbonatlösung und Wasser gewaschen und schließlich über Phosphorpentoxid getrocknet. Nach dem Umkristallisieren aus Methanol erhält man 3.35 g N"-t'arbobenzoxy-tri-N''-ii)syl-Nⁱ-bcnzylox>i.-ornith\ldiglyeylg!ycinmelhs!ester als farblose amorphe Kristalle vom F. 181 bis 184' C in einer Ausbeute von 65.5'\. der Theorie. [.-J = -2.9 {c = 2; in Essigsäure |.

Berechnet ... C 59.20. 115.87. N 8.65. S 6.57%: gefunden .... C 59.27. Il 5.HS. N S.74. S 6.66%.

Zu Vergleichs/wecken wird auf die gleiche Weise das D.D.D-Isomere hergestellt. Dieses isomere hat die folgenden Eigenschaften: F. ISi bis 189 C: [,,] = .3.1 (C--2: Essigsäure).

Berechnet . . . C 59.20. Il 5.S7. N 8.63. S 6.57%: gefunden C 58.68. Il 5.76. N 8.64. S 6.75%.

Beispiel 2S

line Suspension \on 1.46g NMarbobenzoxy-tri-N¹* - tosyl - N'' - bcnzyloxy - 1 - oriiithyldiglycylglycinmelhyleslcr in 4.2 ml Dioxan wird auf 0 bis 5 C gekühlt und anschließend mit 0.6 ml 2 n-Nafonlauge verset/t. Das Gemisch wird sodann 3' ₂ Stunden bei Raumtemperatur gerührt, wiederum gekühlt, mit I η-Salzsäure auf den pH-Wert 2 eingestellt und inner vermindcrtom Druck eingeda npfl. Dei erhaltene Rückstand wird verrieben, bis ein Feststoff entsteht. Dieser wird iibliltricrl. mil Wasser «.'waschen und über Phosphorpentoxid getrocknet. Nach dem Umkristallisieren aus Äthanol erhält man 1.22 g N'-C'aibobenzoxy-tri-N^Ä-losyl-N''-benzyloxy-i.-orni I hy UIiglycylglycin als farblose amorphe Krislalle vom F. 159 bis 162 C ir. einer Ausbeute von 84.2% der Theorie. \n\ ' = —3.2 (1 - 2: in Essigsäure).

(■„I1._S,N„()_IHS.,:

Berechnet . . .
trefunden . . .

f 38.94. Il 5.78. N 8.71. S 6.65%;
C59.0I. 115.74. N 8.X2. S 6.5?%

Zu Vci'gleichszweeken wird auf tue »leiche Weise das D,D,D-Isomere hergestellt. Dieses Isomere lial folgende Eigenschaften :1\ I 5') bis 164 C:|...| =■■ ti¹) (c ~ I.')X; in Essigsaure).

H e i s ρ i e I ?'■)

1,45 Ii N*-('arbohen/oxy-tri-N''-los>l- N'^s-hen/yloxy -1. - ornithylcliglyeylglycin weiden 3 Stunden bei Raumtemperatur mit (> ml einer Lösung von Bromwasserstoff in Essigsäure (20 g KK) ml) behandelt. Dieses Rcaklionsgemisch wird bei einer Temperatur von 40'C unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wird schließlich mit einer 0.25-m Natriumhydrogencarbonatlösung verrieben. Der erhaltene Feststoffwird ablillriert. mit Wasser gewaschen und über Phosphorpentoxid getrocknet. Das erhaltene Produkt wird sodann in einem kleinen Volumen Dimethylformamid gelöst und mit einem grollen Volumen Äthanol versetzt, wobei sich farblose längliche Krislalle abscheiden. Die Kristalle werden abfillricrt. mit Äthanol und Diälhylälher gewaschen und über Phosphorpentoxid getrocknet. Man erhall 0.93 g Tn-N'Mosyl-W'-ben/yloxy-i.-ornithyldiglycyl glycin wim Γ. 224 bis 233 C (Zersetzung) in einer Ausbeule von 71 "n der Theorie. [·ΐ] = 4-5.3 (c = in Essigsäure).

Berechnet ... C 57.65. 115.91. N 9,61, S 7.33%; gefunden .... C 57.55. H 5.92. N 9.60, S 7.34%.

Zu Vergleichszwecken wird das entsprechende D.D.D-Isomere auf die gleiche Weise hergestellt Dieses Isomere hat die folgenden Eigenschaften F. 225 bis 235 C (Zersetzung); [V]'/ = - 5,6° (c = 0,66 in Essigsäure).

409 539/:

Claims

Patentansprüche:

I. Geradkettige Oligopeptide der allgemeinen Formel

TOS—W—OBZL R²—(GIy)₁-(HyOm)₁₁-(GIy).. · OR³

in der R² ein Wasserstoffatom oder eine Aminoschutzgruppe, R³ ein Wasserstoffatom oder eine Carboxylschutzgruppe, χ eine ganze Zahl mit einem Wert von O oder 1, y eine ganze Zahl mit einem Wert von 1,2 oder 3 und ζ O oder eine ganze Zahl mit einem Wert von 2 oder 3 ist, wobei die Stimme von x, y und ? den Wert 3 bis einschließlich 6 hat, und GIy einen Glycylrest und

TOS—W—OBZL HyOrn

einen N-Tosyl-N-benzyloxy-ornithylrcst der folgenden Formel

—NHCHCO—

(CH₂),

■5

-SO₁-N-O-CH,-

35

40

45

bedeutet und deren Additionssalze mit Säuren.
2. Verfahren zur Herstellung von linearen Oligopeptiden der allgemeinen Formel

TOS —W—OBZL

i
R²—(GIy)-(HyOrn),—(CiIy), -OR)¹

in der R². R³. GIy und

TOS-W-OBZL

HyOrn

die gleiche Bedeutung wie im Anspruch 1 haben. und deren Additionssalzen mit Säuren, dadurch gekennzeichnet, daß man Glycin, dessen Aminogruppe geschützt ist, mit einem Ornithinderival der allgemeinen Formel

55 TOS—W OBZL

R²-(HyOm)., -(GIy)₂-OR'

in der R², R³. GIy und

TOS -W-OBZL HyOm

die gleiche Bedeutung wie im Anspruch I haben, umsetzt und gegebenenfalls die Schutzgruppe vom erhaltenen Produkt entferru.
3. Verfahren zur Herstellung linearer Oligopeptide der allgemeinen Formel

TOS—N^Ä—OBZL R²—(HyOm)_n+1-(GIy)₃-OR³ in der R², R³, GIy und

TOS—N^a—OBZL HyOrn

die gleiche Bedeutung wie im Anspruch 1 haben undneineganze Zahl miteinem Wert vonO, 1 oder2 ist, und deren Additionssalzen mit Säuren, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Ornii'.tyldiglycylülycin-Verbindung der allgemeinen Formel

TOS — W-OBZL

I
I

H—(HyOm)_n-(GIy).,-OR

in der TOS-W-OBZL

HyOrn

GIy und ;i die vorstehend angegebene Bedeutung haben, und R eine Carboxylschutzgruppe bedeutet, mit einem Ornithinderival der allgemeinen Formel

TOS —W-OBZL R¹ —(HyOm)-OH

in der TOS—W-OBZL

Hv Orn

die vorstehend angegebene Bedeutung hat und R' eine Aminoschutzgruppe bedeutet, umsct/t unt gegebenenfalls die Schutzgruppe vom erhaltener Produkt entfernt.
4. Verfahren zur Herstellung linearer Oligo peptide der allgemeinen Formel

TOS-- W-OBZL

R²-(HyOm)_{11 + 1} -(CiIy)₂- OR' in der R², R\ GIy und

TOS -W-OBZL

HyOrn

die gleiche Bedeutung wie im Anspruch I habt und η cine ganze Zahl mit dem Wert O, I oder 2 i und deren Additionssalzen mil Säuren, dadurt

gekennzeichnet, daß man ein Glyeylglyeinderivat der allgemeinen Formel

TOS—N^Ä—OBZL H-(HyOm)-(GIy)₂-OR

in der

TOS — N¹*— OBZL HyOrn

und GIy die vorstehend angegebene Bedeutung haben und R eine Carboxylschutzgruppe bedeutet, mit einem Ornithinderivat der allgemeinen Formel in der