DE2167034C3 - Creatinin-amidohydrolase - Google Patents

Creatinin-amidohydrolase

Info

Publication number
DE2167034C3
DE2167034C3 DE2167034A DE2167034A DE2167034C3 DE 2167034 C3 DE2167034 C3 DE 2167034C3 DE 2167034 A DE2167034 A DE 2167034A DE 2167034 A DE2167034 A DE 2167034A DE 2167034 C3 DE2167034 C3 DE 2167034C3
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
creatinine
creatine
enzyme
amidohydrolase
creatinine amidohydrolase
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired
Application number
DE2167034A
Other languages
English (en)
Other versions
DE2167034A1 (de
DE2167034B2 (de
Inventor
Klaus Dr.Rer.Nat. Beaucamp
Hans Ulrich Dr.Rer. Nat. Bergmeyer
Hans Moellering
Michael Dr.Phil. Nelboeck-Hochstetter
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Roche Diagnostics GmbH
Original Assignee
Boehringer Mannheim GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Boehringer Mannheim GmbH filed Critical Boehringer Mannheim GmbH
Priority to DE2122298A priority Critical patent/DE2122298C3/de
Priority to DE2167034A priority patent/DE2167034C3/de
Priority claimed from DE2122255A external-priority patent/DE2122255B2/de
Publication of DE2167034A1 publication Critical patent/DE2167034A1/de
Publication of DE2167034B2 publication Critical patent/DE2167034B2/de
Application granted granted Critical
Publication of DE2167034C3 publication Critical patent/DE2167034C3/de
Expired legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/78—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/78—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
    • C12N9/86—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5) acting on amide bonds in cyclic amides, e.g. penicillinase (3.5.2)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/48—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase
    • C12Q1/50—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase involving creatine phosphokinase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/91—Transferases (2.)
    • G01N2333/912—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • G01N2333/91205—Phosphotransferases in general
    • G01N2333/9123—Phosphotransferases in general with a nitrogenous group as acceptor (2.7.3), e.g. histidine kinases
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/978—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/978—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
    • G01N2333/986—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5) acting on amide bonds in cyclic amides (3.5.2), e.g. beta-lactamase (penicillinase, 3.5.2.6), creatinine amidohydrolase (creatininase, EC 3.5.2.10), N-methylhydantoinase (3.5.2.6)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Description

bei pH 8,0 und 37° C katalysiert und für Creatinin als Substrat bei diesen Bedingungen die Ku 3,3 χ 10-2 M aufweist.
2. Creatinin-amidohydrolase nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß sie aus Mikroorganismen stammt
3. Creatinin-amidohydrolase nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß sie aus Alcaligenes spec. WS 51 400 oder Penicillum WS 90 001 stammt.
Die Erfindung betrifft das
Enzym Creatinin-amidohydrolase
Weiter wurde bereits eine spezifische mikrobiologische Bestimmungsmethode mit isolierten Bakterien beschrieben, wobei gewaschene Zellsuspensionen zur Creatinin-M essung verwendet wurden und die Bildung von Harnstoff und Ammoniak als Maß der Enzymwirkung herangezogen wurde. Lösliche, zum Creatininabbau befähigte Enzymextrakte konnten dabei jedoch nicht erhalten werden. Voraussetzung für die Schaffung einer spezifischen Creatinin-Bestimmung mit Hilfe von
ίο Enzymen war jedoch die Auffindung eines geeigneten, löslichen Enzyms, welches spezifische und meßbare Umsetzungen des Creatinins katalysieren kann.
Roche. Lacombe und Girard (BBA 6, 210, 1950) charakterisierten in zwei Pseudomonas-Arten Creatinase, Creatininase und eine Glycocyaminase als spezifische Enzyme, die aus ihren Substraten aus der Guanidinogruppe Harnstoff in Freiheit setzten. Weiter wurde von Akamatsu und Mitarbeiter (Enzymologia, 15, Seiten 122, 158, 173, 1951) in Erdbakterien ein als Creatinmutase bezeichnetes Enzym postuliert, welches die Gleichgewichtseinstellung zwischen Creatinin und Creatin bewirken soll. Hierbei wird folgender Abbauweg des Creatinins vermutet:
25 Creatinin
und
In der klinischen Chemie, besonders für die Funktionsdiagnostik der Niere, spielt die Bestimmung der Zwischen- und Endprodukte des Eiweißstoffwechsels eine wichtige Rolle. Hierzu zählen auch Creatinin und Creatin. Die Bestimmung von Creatinin wurde daher schon wiederholt beschrieben. Die meisten der bekannten Methoden basieren auf der nichtenzymatischen Jaffe-Reaktion, die jedoch den Nachteil hat, unspezifisch zu sein.
Creatin > Harnstoff
30
Sarcosin > Glycin ► NH3
Nunmehr ist es gelungen, den hier vermuteten Weg des Creatinin-Abbaus zu bestätigen und erstmals zwei lösliche Enzyme in Mikroorganismen aufzufinden und in hoher Reinheit zu isolieren, welche an diesem Abbauweg entscheidend beteiligt sind.
Gegenstand der Erfindung ist eines dieser Enzyme, nämlich Creatinin-amidohydrolase mit den in den Patentansprüchen definierten Eigenschaften.
Durch das erfindungsgemäße Enzym wird folgende Reaktion katalysiert:
Creatinin + H7O
Creatinin-amidohydrolase
Creatin
Da es sich um eine Gleichgewichtsreaktion unter Wasseraufnahme oder -abgabe handelt, wird das Enzym als Creatinin-amidohydrolase bezeichnet.
Als Ausgangsmaterial für die Gewinnung des neuen Enzyms eignen sich Mikroorganismen allgemein, in denen das gewünschte Enzym adaptativ angereichert ist, was gewöhnlich dadurch geschieht, daß in Gegenwart oder unter Zusatz von Creatinin gezüchtet wird.
Aus den so gewonnenen Mikroorganismen wird durch Aufschluß die wasserlösliche Fraktion gewonnen. Aus der so erhaltenen wasserlöslichen Fraktion läßt sich die Creatinin-amidohydrolase anreichern, indem man ihre Eigenschaft, Creatinin in Creatin zu überführen, bo ausnützt.
Die Reinigung und Gewinnung des Enzyms ist eingehend in der Stammanmeldung P 21 22 298.0-41 beschrieben.
Zwei für die Gewinnung des Enzyms der Erfindung besonders geeignete Mikroorganismen sind Alcaligenes spec. WS 51 400 aus der Familie Achromo bactericeae und Penicillum WS 90 001.
Creatinin-amidohydrolase verliert bei pH-Werten von 6 und darunter schnell an Aktivität und weist bei pH-Werten um 8,0 die größte Stabilität auf.
Die Salzfällung, beispielsweise unter Verwendung von Ammoniumsulfat, eignet sich zur Gewinnung des Enzyms aus seinen Lösungen. Bei der Verwendung von Ammoniumsulfat fällt Creatinin-amidohydrolase bei einer Konzentration von 2,2-M. Durch Dialyse bei 4° C, zweckmäßig gegen verdünnten Puffer, beispielsweise 0,02-M Diäthanolamin-Puffer, pH 8,0, kann das Enzym von Salzen und anderen niedrigmolekularen Begleitstoffen befreit werden.
Die so erhaltenen Präparate können in eingefrorenem Zustand monatelang ohne Aktivitätsverlust gelagert werden.
Das neue Enzym kann für wissenschaftliche Zwecke sowie zur spezifischen Bestimmung des Creatinins verwendet werden.
Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung weiter.
Beispiel 1 Isolierung hochgereinigter Creatinin-amidohydrolase
Aus einem in Gegenwart von Creatinin gezüchteten Kulturansatz Alcaligenes spec. WS 51 400 werden die Zellen (1 kg Trockengewicht) abgetrennt, mit 0,1-M Kaliumphosphatpuffer, pH 8,0, auf 201 aufgenommen und ohne Kühlung in der Hochdruckdispersion bei ca. 800 atü aufgeschlossen. Der Extrakt wird mit 5 Vo!.-% einer 10%igen Polyäthylenimin-Lösung (Mol-Gewicht ca. 1800) von pH 8,0 (ca. 11) versetzt Nach Zugabe von KCl (0,01-M Endmolarität) und NH4Cl (0,1-M Endmolarität) werden pro Liter Extrakt innerhalb von 10 Minuten 0,8 Volumen 9O°/oiges wäßriges Isopropanol zugesetzt und 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt
Der reichliche Niederschlag wird abzentrifugiert. Dem Überstand werden pro Liter weitere 0,45 Volumen 90%iges IsopropanoJ zugegeben.
Der so gebildete Niederschlag, welcher Creatininamidohydrolase und Creatin-amidinohydrolase enthält, wird abgetrennt und in 400 ml 0,02-M Kaliumphosphatpuffer, pH 8,0, aufgenommen. Ein ungelöster Rückstand wird abgetrennt und der Überstand auf eine mit dem gleichen Puffer äquilibrierte DEAE-Sephadex-Säule (3,5 cm χ 1 m) gegeben. Nach dem Aufziehen wird die Säule mit 1 Volumen 0,1-M Kaliumphosphatpuffer, pH 8,0, gewaschen und dann mit 0,2-M Kaliumphosphatpuffer, pH 8,0, eluiert Die Creatinin-amidohydrolase-haltigen Fraktionen werden vereinigt, bei pH 8,0 mit Ammoniumsulfat auf 2,2-M eingestellt, das ausgefallene Enzym abzentrifugiert und in 0,02-M Diäthanolaminpuffer, pH 8,0, auf 100 ml gelöst und 4 Stunden bei +40C gegen gleichen Puffer dialysiert Man erhält so in einer Gesamtausbeute von 64% ein Präparat mit einer spezifischen Aktivität von 303 U/mg. Die nachstehende Tabelle zeigt zusammenfassend die in den einzelnen Stufen dieses Verfahrens erhaltenen Aktivitäten und Ausbeuten.
Schritt
U Protein in g U/mg Ausbeute
(25 C) (%)
2,8 X 10s 98,6 2,8 100
2,6 X10s 66,2 3,9 93
2,16X10' 32,6 6,6 77
],97X105 6,9 28,5 71
1,8 XlO5 0,59 303 64
Beispiel 2
Dispersionsaurschluß
Polyäthylenimin-Überstand
1. Isopropanolzusatz (Überstand)
2. Isopropanolzusatz (Niederschlag) DEAE-Sephadex-Chrom. (Eluate)
Bei Aufschluß mit Hilfe von Ultraschall anstelle der Hochdruckdispersion konnte der Gehalt an Creatininamidohydrolase bei etwa gleicher spezifischer Aktivität auf das 2,5fache, bezogen auf eingesetzte Mikroorganismen, Trockengewicht erhöht werden.
Die wie oben beschrieben erhaltene Creatinin-amidohydrolase weist eine Gleichgewichtskonstante
[Creatin]
[Creatinin]
: K = 1,27
(37°C; pH 8,0) auf.
Die Michaelis-Konstante für Creatinin als Substrat KM = 3,3 χ 10-2M(37°C;pH8,0).
7 g (Trockengewicht) eines in Gegenwart von Creatinin gewachsenen Alcaligenes spec. WS 51 400 wurden geerntet und bei pH 8,0 mit Ultraschall aufgeschlossen. Die erhaltene Suspension wurde wie in Beispiel 1 beschrieben mit 0,8 Volumen Isopropanol versetzt, 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt und zentrifugiert. Der Überstand wird mit weiteren 0,45 Volumen Isopropanol versetzt und erneut zentrifugiert Der Niederschlag wird wie in Beispiel 1 beschrieben aufgenommen und über eine DEAE-Sephadex-Säule chromatographiert, wobei lediglich die Creatinin-amidohydrolase eluiert wird. Die nachstehende Tabelle zeigt die Einzelheiten dieses Verfahrens. Das erhaltene Präparat war zur Creatinin-Bestimmung geeignet
Schritt
U (25 C) Protein in g
U/mg
Ausbeute
Ultraschallaufschluß
2. Isopropanolzusatz (Niederschlag) DEAE-Sephadex-Eluat
l,5X103 1,2XlO3 0,7XlO3 1,780
0,119
0,028
0,85
10,1
100
80
47
Bei den in den vorstehenden Beispielen beschriebenen Versuchen wurde aus Creatinin in Gegenwart von Creatinin-amidohydrolase gebildetes Creatin bestimmt durch Zusatz von Adenosintriphosphat (ATP), welches in Gegenwart von Creatinphosphokinase (CPK) in Creatinphosphat und Adenosindiphosphat (ADP) über-
führt wird. Gebildetes ATP wird mit Pyruvat-Kinase überführt und der Verbrauch an NADH optisch (PK) unter Lactatdehydrogenase (LDH) sowie Phos- gemessen. Diese bekannten Schritte lassen sich wie folgt phoenolpyruvat (PEP) unter NADH-Verbrauch in ATP darstellen:
CPK
Creatin +ATP * Creatinphosphat +ADP (1)
PK
ADP + PEP > P>ruval + ATP (2)
LDH
Pyruvat + NADH + H+ ► Lactat + NAD+ (3)

Claims (1)

Patentansprüche:
1. Lösliche Creatinin-amidohydrolase, dadurch gekennzeichnet, caß sie die Reaktion
Creatinin + H2O =5=^ Creatin
mit der Gleichgewichtskonstante
[Creatin]
[Creatinin]
: K = 1,27
DE2167034A 1971-05-05 1971-05-05 Creatinin-amidohydrolase Expired DE2167034C3 (de)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE2122298A DE2122298C3 (de) 1971-05-05 1971-05-05 Verfahren zur Gewinnung von Creatininamidohydrolase
DE2167034A DE2167034C3 (de) 1971-05-05 1971-05-05 Creatinin-amidohydrolase

Applications Claiming Priority (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE2122298A DE2122298C3 (de) 1971-05-05 1971-05-05 Verfahren zur Gewinnung von Creatininamidohydrolase
DE2122255A DE2122255B2 (de) 1971-05-05 1971-05-05 Verfahren zur spezifischen Bestimmung von Creatinin
DE2122294A DE2122294C3 (de) 1971-05-05 1971-05-05 Verfahren zur Gewinnung von Creatininamidohydrolase
DE2167034A DE2167034C3 (de) 1971-05-05 1971-05-05 Creatinin-amidohydrolase
US24718472A 1972-04-24 1972-04-24
US00249589A US3806416A (en) 1971-05-05 1972-05-02 Creatine amidohydrolase and process for its preparation
US411526A US3912588A (en) 1971-05-05 1973-10-31 Creatine amidohydrolase in the conversion of creatinine to creatine
US415463A US3907644A (en) 1971-05-05 1973-11-13 Creatinine amidohydrolase composition and process for the determination of creatinine

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DE2167034A1 DE2167034A1 (de) 1977-09-22
DE2167034B2 DE2167034B2 (de) 1980-03-20
DE2167034C3 true DE2167034C3 (de) 1980-12-04

Family

ID=27570501

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE2167034A Expired DE2167034C3 (de) 1971-05-05 1971-05-05 Creatinin-amidohydrolase
DE2122298A Expired DE2122298C3 (de) 1971-05-05 1971-05-05 Verfahren zur Gewinnung von Creatininamidohydrolase

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE2122298A Expired DE2122298C3 (de) 1971-05-05 1971-05-05 Verfahren zur Gewinnung von Creatininamidohydrolase

Country Status (1)

Country Link
DE (2) DE2167034C3 (de)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS51118884A (en) * 1975-04-05 1976-10-19 Noda Sangyo Kagaku Kenkyusho Process for preparing creatine amidinohydrolase
US4039384A (en) 1975-04-05 1977-08-02 Noda Institute For Scientific Research Creatinine amidohydrolase and creatine amidinohydrolase and process for producing them
JP2527035B2 (ja) * 1989-06-16 1996-08-21 東洋紡績株式会社 クレアチニン・アミドヒドロラ―ゼをコ―ドする遺伝子を含有するｄｎａ断片、該ｄｎａ断片を有する組換えベクタ―及び該組換えベクタ―を有する形質転換体、並びにクレアチニン・アミドヒドロラ―ゼの製造方法

Also Published As

Publication number Publication date
DE2167034A1 (de) 1977-09-22
DE2122298C3 (de) 1979-02-22
DE2122298B2 (de) 1978-06-29
DE2167034B2 (de) 1980-03-20
DE2122298A1 (de) 1972-11-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0008031A1 (de) Verfahren zur Herstellung von 6-Amino-6-desoxy-L-sorbose
EP0054897B1 (de) Verfahren zur enzymatischen Herstellung von L-2-Amino-4-methylphosphinobuttersäure
DE2167034C3 (de) Creatinin-amidohydrolase
DE2757980C2 (de)
DE2637671C3 (de) Verfahren zur Herstellung von Kreatinin-Desimidase auf mikrobiologischem Wege
DE3132121C2 (de)
DE2003652C3 (de) Biotechnisches Verfahren zur Herstellung von CelluJase
EP0154269A2 (de) Nucleosidtriphosphat-abhängige 1-Methylhydantoinase und ihre Verwendung
EP0195230A2 (de) Verfahren zur Coenzymregenerierung
EP0112571B1 (de) Verfahren und Reagenz zur Bestimmung von N-Carbamoylsarcosin und hierfür geeignetes neues Enzym
DE1642625C3 (de) Verfahren zur Herstellung von Isoamylase durch Fernmentation
DE3626915A1 (de) Verfahren zur enzymatischen synthese eines n-acetylneuraminsaeure-haltigen trisaccharids
DE3741198C2 (de)
EP0410430A2 (de) Verfahren zur diskontinuierlichen Herstellung von L-Carnitin auf mikrobiologischem Weg
DE2659878C3 (de) Verfahren zur Herstellung von Kreatinamidinohydrolase
DE2167035C3 (de) Verfahren zur Gewinnung von Creatin-amidinohydrolase
DE3025424C2 (de) Verfahren zur Herstellung von Galactoseoxidase
EP0418584B1 (de) D-Malat-Bestimmung
DE3642804A1 (de) Verfahren zur bestimmung von ammoniak oder atp in einer probeloesung
DE2748036C2 (de) Verfahren zur Gewinnung von Maltose-phosphorylase oder/und β-Phosphoglucose-mutase und Verwendung derselben
DE2510327C2 (de) Verfahren zur Herstellung von Purinnukleosid-5'-phosphat-(mono-, di- oder tri-)-3'-(2')-diphosphaten
DE2462314B2 (de) Verfahren zur Herstellung von NucleosidO'.S'-cyclophosphaten
DE2050982C3 (de)
DE3432570A1 (de) Verfahren zur mikrobiologischen herstellung von aldose-1-epimerase
DE1928051C3 (de) Verfahren zur Reinigung von L-Asparaginase

Legal Events

Date Code Title Description
C3 Grant after two publication steps (3rd publication)