DE2166467A1 - Neue penicillansaeurederivate, deren herstellungsverfahren und diese enthaltende pharmazeutische zusammensetzungen - Google Patents

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Dr. F. Zumsteln sen. - Dr. E, Assmann' Dr. R. Koenigsberger ■: Dlpl.-Fhys* R. Hoizbauer - Dr. F. Zumstein jun,

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DUI 1166/8

BEDERiDANDSÖHB (JISI- EIT SPIROTSPABRIEK H,V,, /

Hfeue PenicillanBäurederivate, deren Herstellungsverfahren und diese enthaltende pharmazeutische Zusammensetzungen ( Ausscheidung aus Patent........ (Patentanmeldung P 21 55 081.2)

Die vorliegende Erfindung betrifft neue therapeutisch nützliche Penicillansäure- und Oephalosporansäure-Derivate, Verfahren zu deren Herstellung und diese Verbindungen enthaltende pharmazeutische Zusammensetzungen,

Die neuen erfindungsgeraäßen Penicillansäure» und Cephalosporansäure-Derivate sind Verbindungen der folgenden allgemeinen Formel 1

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-σ

II

H N-Q

(D

worin Q eine Gruppe der Formeln

H -C

-GE

σ: I ■ c

^SCOOH

(II)

_G _

GOOH

(IH)

darstellt, worin X ein-Wasserstoffatom, eine Hydroxygruppe oder eine Niedrigalkanoyloxygruppe bedeutet oder die G-ruppe -CHpX und die Carboxylgruppe der Formel III unter Bildung einer Lactongruppe, d.h.. einer G-ruppe der Formel

-C-O-GH₀-

U ^

oder unter Bildung einer lactaragruppe, d.h., einer Gruppe der !Formel

-C-NH-CHo-

It

4 09807/1068

verbunden sind, R eine Medrigalkylgruppe oder eine Aryl- ·.. gruppe, z.B. eine Phenylgruppe oder eine Naphthylgruppe, die gegebenenfalls ein oder mehrere Substituenten, wie Chloratome, Pluoratome, Nitrogruppen, Aminogruppen oder Uiedrigalkylgruppen trägt (vorzugsweise die 2,6-Dichlorphenylgruppe da-rstellt) oder eine tertiäre Alkylgruppe, wie die

Adamantylgruppe, bedeutet. R ein V/asserstoffatorn oder eine Alkylgruppe oder eine gegebenenfalls mit einer niedrigen Alkylgruppe veresterte Carboxylgruppe oder eine in ein Alkalimetallsalz, ein Erdalkalimetallsalz oder ein Aminsalz umgewandelte Carboxylgruppe, eine Carbaraylgruppe, eine Cyano-

2 gruppe, eine Amino gruppe oder ein Chloratom, R ein Wasserstoffatom, ein Chlor- oder Bromatom, eine Cyanogruppe, eine Aminogruppe, eine

Uiedrigaralkoxycarbonylaminogruppe, eine Niedrigalkylgruppe oder eine mit einer Niedrigalkylgruppe, einer Arylgruppe (vorzugsweise einer Phenylgruppe) oder einer Aralkylgruppe

(vorzugsweise einer Benzylgruppe) substituierte CarboxyΙο

gruppe bedeuten, oder worin R eine Carbamoylgruppe darstellt, die gegebenenfalls am Stickstoffatom eine Niedrigalkylgruppe oder einen Phenylsubstituenten trägt und die Alkalimetallsalze, die Erdalkalimetallsalze und die Aminsalze, die Ester (z.B. die Tri-(niedrig)-alkylsilylester, die M~(niedrig)-alkyl-monohalogensilylester, die Benzylester oder die Phenacylester) und die Amide (z.B. die Saccharylderivate) der genannten Penicillansäuren und Cephalosporansäuren. Der Ausdruck "niedrig", wie er in der vorliegenden Beschreibung in bezug auf die Alkyl- oder Alkanoylgruppen angewandt wird, bedeutet, daß die Gruppe höchstens 4 Kohlenstoffatome enthält.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können nach mehreren verschiedenen Verfahren hergestellt werden, die jeweils eine Anwendung eines bekannten Verfahrens zur Herstellung von Penicillinen und Cephalosporinen darstellen.

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BAD ORIGINAL

Erfindungsgemäß werden die Verbindungen der allgemeinen Formel hergestellt, indem man ein Salz, einen Ester oder ein Amid einer 6-Aminopenicillansäure- oder 7-Aminocephalosporansäure-Verbindung der Formeln:

H
- C C

C N-

(IV)

H - C-

oder

COOH

■N

(V)

GEr

C - CH₂X

COOH

worin X die oben angegebene Bedeutung besitzt, wobei der Substituent X, wenn er eine Hydroxygruppe darstellt, vorzugsweise geschützt ist mit einem aktiven Ester (z.B. einem 2,4-Dinitrophenylester, einem p-Nitrophenylester oder einem U-Hydroxysuccinimidester) einer Säure der allgemeinen JPormel YI

H - C

- COOH

(VI)

1 2
worin R, R und R die oben angegebenen Bedeutungen besitzen, oder mit einem aktiven funktioneilen Derivat, das als Acylierungsmittel für eine primäre Aminogruppe geeignet ist, umsetzt. Derartige Derivate schließen die entsprechenden Carbonsäure-

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chlordde, Carbonsäurebromide, Säureanhydride einschließlich der aus stärkeren Säuren, wie niedrigen aliphatischen Kohlensäuremonoestern, Alkyl- oder Arylsulfcnsäurai und sterjsch gehinderten Säuren, wie Diphenylessigsäure hergestellten gemischten Anhydride ein.

Weiterhin kann ein Säureazid oder ein aktiver Thioester (z.B. mit Thiophenol oder Thioessigsäure) der Säure verwendet werden.

Alternativ kann die freie Säure selbst unter Verwendung eines Carbodiimid-Reaktionsteilnehmers mit der 6-Aminopenicillansäure- oder 7-Arainoeephalosporansäure-Verbinöung gekuppelt werden,. Anstelle der 2,4-Dinitrophenyl- und p-Hitrophenyl-Ester kann ein entsprechendes Azolid, d.h. ein Amid der entsprechenden Säure, dessen Amid stickstoff Teil eines quasi-aromatischen 5-gliedrigen Ringes ist, der wenigstens zwei Stickstoffatome trägt, d,h. Imidazole, Pyrazole, Triazole, Benzimidazole Benztriazol und die substituierten ,Derivate dieser Verbindungen verwendet werden.

Die Verfahren zur Durchführung dieser Reaktionen unter Bildung eines Penicillins oder eines Cephalosporins und die Verfahren zur Isolierung der so hergestellten Verbindungen sind z.B. aus den britischen Patentschriften 932 644, 957 570, 959 054, 952 519, 932 530, 967 108 und 967 890 bekannt.

Das nach dem oben genannten Verfahren in Form' des Esters, des Salzes oder des Amides erhaltene Produkt kann nach an sich bekannten Verfahrensweisen in die entsprechende Penicillansäure oder in die entsprechende Cephalosporansäure überführt werden, und so kann z.B. wenn ein Silylester (z.B.

ein Trialkylsilylester) des "Ausgangs- "

materials der Formel IV oder V als Reaktionsteilnehmer verwendet wird, die veresternde Gruppe leicht unter Bildung der

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entsprechenden Säure der allgemeinen Formel I hydroylisiert werden·

Ein anderes erfindungsgemäßes Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der allgemeinen Formel I besteht darin, daß man eine Säure der allgemeinen Formel A-COOH (worin A "eine Gruppe der folgenden Formel:

H C -

R² (VII)

1 2

bedeutet, worin R, R und R die oben angegebenen Bedeutungen besitzen und die im Rest A geeignet geschützte reaktive Gruppen aufweist, mit einer 6-Isocyanatopenicillansäure- oder einer T-Isocyanato-idesacetoxyJ-cephalosporansäure-Verbindung der Formel O=C=M^--Q (worin Q die oben angegebene Bedeutung besitzt), die Atome oder Gruppen aufweisen, die die Carboxylgruppe und gegebenenfalls die Hydroxygruppe, ν&ηη sie vorhanden ist, d.h. wenn die Gruppe X in der Formel III eine Hydroxylgruppe bedeutet, schützen, umsetzt. Vorzugsweise ist die Gruppe, die die Carboxylgruppe oder die gegebenenfalls vorhandene Hydroxygruppe des 6-Iso-¹ cyanatopenicillansäure- oder 7-Isocyanatocephalosporansäure-Reaktionsteilnehmers schützt, eine Di- oder Trialkylsilylgrappe, die leicht durch Hydrolyse von dem entstehenden Produkt abgetrennt werden kann.

Die Reaktion der Carbonsäure der Formel A-COOH mit dem Isocyanat der Formel OCIi-Q wird vorzugsweise in einem inerten

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ORIGINAL INSPECTED

organischen Lösungsmittelmedium, wie Toluol, Dieehlormethan oder Benzonitril durchgeführt. Eine geringe Menge einer organischen Base, z.B. ein substituiertes Imidazol, kann dabei als Katalysator dienen. Die Reaktion verläuft gemäß dem im folgenden für Penicillansäurederivate angegebenen Reaktionsschema

A-COOH + O=G=H-CH - CH V ^J ^ A-CO-NH-CH - CH C ⁵

^|NCH,+C0₂

π -N CH · ^.C N CH - COOE

worin E eine die Carboxylgruppe während der Reaktion schützende Gruppe darstellt, die nach der Reaktion beispielsweise durch Hydrolyse abgetrennt wird.

Ein weiteres Verfahren zur Herstellung der Penicillansäure- und Cephalosporansäurederivate der allgemeinen Formel I besteht darin, daß man eine ö-Isocyanatopenicillansäure- oder T-Isoeyanatocephalosporansäure-Verbindung der Formel O=C=U-Q (worin Q die oben angegebene Bedeutung besitzt), deren Carboxylgruppen oder gegebenenfalls vorhandenen Hydroxygruppen in geeigneter Weise geschützt sind, mit einer metallorganischen Verbindung der Formel A-Me , A-Me-HaI oder A-Me -A'(worin A die oben angegebene Bedeutung besitzt), Me ein Metallatom, z.B. ein Lithium-, Natrium- oder Magnesium-Atom bedeutet, die Zahl I oder II die Wertigkeit des Metalles angibt und Hai ein Halogenatom (vorzugsweise ein Chlor- oder Brom-Atom) bedeutet, umsetzt, und man zur Abtrennung des Metallions und der die Carboxylgruppe schützende hydrolysierbare Gruppe das erhaltene Zwischenprodukt hydrö-

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lysiert. Die Reaktion wird in einem wasserfreien organischen Lösungsmittelmedium unter Bedingungen, die eine Reaktion der Grignard-Art, der Reformatsky-Art oder eine Reaktion ähnlicher Art begünstigen, durchgeführt·

Die Isocyanatausgangsmaterialien der allgemeinen Formel O=C=N-Q (worin Q die oben angegebene Bedeutung besitzt) können erhalten werden, indem man Phosgen mit einem Penicillansäure- oder Cephalosporansäure-Derivat der allgemeinen Formel W-K-Q umsetzt, wobei W ein Wasserstoffatom oder eine derartige Gruppe bedeutet, daß die Gruppe W-EH- leicht durch Reaktion mit Phosgen in eine Isocyanaotgruppe überführt werden kann, wobei die Gruppe Q die oben angegebene Bedeutung besitzt und wobei die Carboxylgruppen und die gegebenenfalls vorhandenen Hydroxygruppen in geeigneter Weise geschützt sind. Die Gruppe W des Ausgangsmaterials kann gleichzeitig bei der Einführung der Schutzgruppe für die Carboxylgruppe und die Hydroxylgruppe in die 6-Aminopenicillansäure- oder 7-Aminocephilosporansäure-Derivate eingeführt werden. Vorzugsweise ist die Gruppe W eine Tri-(niedrig)-alkylsilylgruppe₀ Wenn die Gruppe W eine leicht abtrennbare Gruppe ist, verläuft die Reaktion derartiger Verbindungen mit Phosgen unter den gleichen Bedingungen glatter als es der Fall ist, wenn die Gruppe W ein Wasserstoffatom darstellt. Die Reaktion mit Phosgen muß in einem mit Hinsicht auf die Reaktivität der entstehenden Isocyanatgruppe inerten organischen Lösungsmittelmedium durchgeführt werden.

Toluol und Methylenchlorid oder Mischungen dieser Lösungsmittel sind besonders geeignet. Weiterhin kann zur Erleichterung der Reaktion eine organische Base zur Bindung des gebildeten Chlorwasserstoffs zugesetzt werden,, Vorzugsweise ist diese Base ein tertiäres Amin, wie Sriäthylamin, das mit der Isocyanatgruppe nicht reagiert. Da hohe Temperaturen

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zu einer Zersetzung des Penicillansäure- oder Cephalosporansäure-Gerüstes führen würde, wird die Reaktion vorzugsweise bei sehr niedrigen Temperaturen, vorzugsweise bei —40°C,_s durchgeführt.

Die substituierten Isoxazol-üJ-yl-essigsäure-Ausgangsmaterialien der allgemeinen !Formel VI, die im wesentlichen neu sind und somit einen weiteren Gegenstand der vorliegenden Erfindung darstellen, wurden gemäß den im folgenden angegebenen Verfahrensweisen hergestellt:

409807/1068 ORIGINAL INSPECTED

O R-C=N

R³^-C=C-CH,

Weg

VJe g

Weg

-CH-

1) Butyllithium/TMEDA

2) CO₂;

' Oxydation

1-CH₂CH₂OH

R^J

I-CH^COOH

(VIA)

CD

cn

CD

. Die Ausgangsnitriloxyde können gemäß bekannten von Grundmann, Quilico et al., Synthesis 1970, 344 und Experienta 26_, 1169 •(1970) beschriebenen Verfahren und den darin zitierten Verfahren hergestellt werden, .

Die.Reaktion mit n-Butyllithium in Gegenwart von Tetra- ' methylendiamin (TMEDA) kann in aprotischen Lösungsmitteln, wie Toluol oder Tetrahydrofuran erfolgen» Der Weg 1 gestattet die größtmögliche Variation der angestrebten Verbin-

1 düngen. In gewissen Fällen wurde die Gruppe R nach der 1,3-dipolaren Additionsreaktion, jedoch vor der Behandlung mit Butyllithium in eine andere Gruppe, Z₀B. -COOH in die Gruppe -COIiH₂ oder -CH in die Gruppe -EH₂ überführt ,um die Synthese der Ausgangsacetylene, die in gewissen Fällen schwierig herzustellen sind, zu vermeiden.

Die Einführung einer Gruppe R^H der Formel VIA kann direkt über den Weg 1 erfolgen,.indem man anstelle von Propin 1-Butin <R =CH ) verwendet.

Die anderen Verfahrensweisen sind die folgenden:

1) oc-Halogenierung von Verbindungen der Formel VIA, gegebenenfalls gefolgt von einer Umsetzung mit einem nukleophilen Mittel. Zum Beispiel wurde die cc-Aminosäure (Formel VI: R=2,6-Dichlorphenyl, R¹=H, R²=NH₂) über die cc-Bromierung des entsprechenden Methylisoxazol~5-ylacetats mit 1,3-Dibrom-5,5~dimethylhydantoin, gefolgt von einer Hydrolyse und Reaktion der cx-Bromsäure mit konzentriertem Ammoniak hergestellt. Dieses Verfahren ist eine verbesserte Synthese, die analog zu der von Ibotensäure ist, die in Chem.Pharm.Bull. JJ., 89 (1966) beschrieben ist.

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ORIGINAL INSPECTED

2) Durch Behandlung mit Lithium einführenden Mittel in der α-Stellung der Carbonsäuren der Formel VIA und Reaktion mit einem geeigneten Mittel·

Beispiele der neuen Verbindungen der allgemeinen Formel VI, die gemäß dem oben angegebenen Schema, hergestellt werden können, sind die Verbindungen dieser Formel, worin die Substituenten R, R und R die im folgenden angegebenen Bedeutungen besitzen.

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'R	R1	0	R2	H H H
Adamantyl 2J-Ni tr ophenyl 4-Aminophenyl	H H ;H	-C = N H	-NH-C-O- CH0 -<\ A-NO0 j. 2Vj/ 2
2,6-Dichlorphenyl	H	CH3	Br
2,6-Dichlorphenyl	E	H H	■ H
2,6-Dichlorphenyl	CH3	H NH2
2,6-Dichlorphenyl 2,6-Dichlorphenyl	Cl NH2 ■	H
2,6-Dichlorphenyl	Cl CH3
2,4,6-Trimethylphenyl 2,4,6-Trimethylphenyl	H
2,4,6-Trimethylphenyl	H H
2,6-Dichlorphenyl 2,6-Dichlorphenyl

-H-

Die neuen Penicillansäure- und Cephalosporansäure-Derivate der allgemeinen Formel I besitzen antibiotische Eigenschaften, die sie allein oder gemischt mit anderen Antibiotika potentiell nützlich für Menschen und Tiere machen. Einige der neuen Verbindungen der allgemeinen Formel I besitzen Wirkungen, die mit denen von Penicillin G- vergleichbar sind. Sie besitzen besondere Wirkungen gegen gram-positive Organismen und zeigen weiterhin eine gute Wirkung gegen Penicillin-resistente Staphylokokken, insbesondere diejenigen Verbindungen, worin R die 2,6-Dichlorphenylgruppe,

1 2

R ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe, R ein Wasserstoffatom und Q eine Gruppe der Formel II oder III bedeuten und worin X eine Acetoxygruppe darstellt, sowie die Salze dieser Verbindungen.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen werden vorzugsweise in Form eines nicht-toxischen Salzes, wie in Form der Natrium-, Kalium- oder -Kalzium-Salze für therapeutische Zwecke eingesetzt. Andere Salze, die verwendet werden können, schließen die nicht-toxischen geeignet kristallisierenden Salze mit organischen Basen, wie Aminen, z.B. Trialkylarainen, Prokain und Dibenzylamin, ein.

Bei der Behandlung von Bakterieninfektionen, können die erfindungsgemäßen antibakteriellen Verbindungen sowohl topisch, oral und parenteral gemäß für die Verabreichung von Antibiotika üblichen Verfahren verabreicht v/erden. Sie werden in Dosiseinheiten verabreicht, die eine wirksame Menge des aktiven Bestandteils in Kombination mit geeigneten physiologisch verträglichen Trägermaterialien oder Bindemitteln enthalten. Die Dosiseinheiten können in Form von flüssigen Präparaten, wie Lösungen, Suspensionen, Dispersionen oder Emulsionen oder in fester Form als Pulver, Tabletten, Kapseln und dergl. vorliegen.

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Demzufolge umfaßt die vorliegende Erfindung auch therapeutische Zusammensetzungen, die eine v/irksame Menge einer der erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem.geeigneten inerten Trägermaterial oder Bindemittel enthalten. Derartige therapeutische Zusammensetzungen können zusätzlich zu einer dieser Verbindungen auch ein oder mehrere zusätzliche therapeutische Bestandteile enthalten.

Der Ausdruck "wirksame Menge", wie er in bezug auf die beschriebenen Verbindungen verwendet wird, besehreibt eine Menge, die - wenn sie in üblicher Weise verabreicht wird das Wachstum des betreffenden Mikroorganismus zerstört oder inhibiert bzw. mit anderen Worten eine Menge, die das Wachstum der Bakterien unter Kontrolle hält. Die Größe einer wirksamen Menge kann leicht durch den Fachmann gemäß Standardverfahren zur Bestimmung der relativen Aktivität von antibakteriellen Mitteln festgestellt werden, wenn sie gegen bestimmte Organismen über die verschiedenen Verabrei- ' chungswege verwendet werden.

Geeignete Trägermaterialien und Bindemittel können irgendwelche geeignete physiologisch verträgliche Bestandteile sein, die dazu dienen, die Verabreichung der therapeutisch wirksamen Verbindung zu erleichtern. Die Trägermaterialien können eine zusätzliche Wirkung aufweisen und können als -Verdünnungsmittel, als Geschmacksmaskierungsmittel, als Bindemittel, als Mittel zur Verzögerung der Wirkung, als Stabilisatoren und dergleichen dienen_o

Beispiele für Trägermaterialien sind Wasser, das Gelatine, Gummiarabikum, Algenate, Dextran, Polyvinylpyrrolidin, Natriumcarboxymethylcellulose oder dergl. enthalten kann, wäßriges Äthanol, Sirup, isotonische Salzlösung, isotonische Glukose, Stärke, Laktose oder andere geeignete Materialien,

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die üblicherweise in der pharmazeutischen Industrie und in der "Veterinärindustrie verwendet werden.

Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung umfaßt ein Verfahren zur Inhibierung des Wachstums von Bakterien durch Auftragen einer wirksamen Menge der erfindungsgemäßen antibakteriellen Verbindungen auf den Ort des Bakterienbefalls.

Zum Beispiel kann das Verfahren zur Behandlung von bakteriellen Infektionen von Tieren verwendet v/erden, indem man einem Wirtstier eine wirksame Menge einer antibakteriellen Verbindung verabreicht.

Die vorliegende Erfindung soll durch die folgenden Beispiele weiter erläutert werden.

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B e is ρ i e 1

Herstellung von 6-{-[3-(2,6-Dichlorphenyl)-isoxazol-5-yl]-acetamido^ -penicillansäure (ITatriuinsalz)

Cl

/ri

Cl

ΟΙ!

H t

-C

Il C-CH_n-

ti

H H ι t

II - C-

O*

H ι ■c'

-C Έ

-S^ ι

c:

■CH,

COONa

In einem Dreihalskolben, der mit einem Gaseinlaßrohr, einem Thermometer und einem Tropftrichter versehen war, suspendiert man 755 mg (3,5 mMol) 6-Aminopenicillansäure in 10 ml Ithylacetat unter einer Stickstoffatmosphäre. Der Kolben wird dann in einem Eisbad gekühlt· und 0,51 ml (3_}8 mMol) Triäthylamin werden zugesetzt, worauf man nach 10 Minuten 0,48 ml (3|8 mMol) Trimethylchlorsilan zusetzt. Man rührt während etwa 35 Minuten und gibt dann weitere 0,51 ml (3,8 mMol) Triäthylamin hinzu. Dann gibt man tropfenweise 3-(2,6-Dichlorphenyl)-isoxazol-5-yl-acetylchlorid (erhalten durch die Umsetzung von 3-(2,6-Dichlorphenyl)-isoxazol-5~yl-essigsäure mit Thionylchlorid in Diäthyläther mit einer Spur Dimethylformamid) in 5 ml Äthylacetat zu der Eeaktionsmischung in einer derartigen Geschwindigkeit zu, daß die Temperatur nicht über 5°C ansteigt, Nach der Zugabe wird das Eisbad entfernt und man rührt weitere 90 Minuten bei Raumtemperatur,

Die Eeaktionsmischung wird dann unter Eiskühlung in eine Mischung von 20 ml Wasser und 20 ml Diäthyläther gegeben, wobei man den pH-Wert bei 6,8 hält. Die wäßrige Schicht wird

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noch einmal mit 30 ml Diäthyläther gewaschen. Die wäßrige Schicht wird nach der Zugabe von 40 ml Diäthyläther auf einen pH-Wert von 1,5 angesäuert. Nach der Abtrennung wird die wäßrige Schicht mit 30 ml Diäthyläther erneut gewaschen, Die organischen Schichten werden vereinigt und einmal mit 20 ml auf einen pH-Wert von 1,5 angesäuertem Eiswasser und dann mit 20 ml Eiswasser gewaschen. Nach dem Trocknen und der Behandlung mit Norit wird die organische Schicht auf etwa die Hälfte ihres Yolumens eingeengt und dann wird Natrim-cx-äthylcapronat zugesetzt. Das ausgefällte Natriumsalz wird abfiltriert, mit Diäthyläther gewaschen und getrocknet. Die Ausbeute an der gemäß der Dünnschichtchromatographie reinen Verbindung beträgt 550 mg (32 ^cß>).

Beispiel 2

Herstellung von 6~f-[3-(2,6-Dichlorphenyl)~isoxazol~5-yl]-acetamidoj-penicillansäure (Natriumsalz)

Ein 250 ml Dreihalskolben wird mit einem Thermometer, einem guten Kühler und einem Tropftrichter versehen. Die Reaktion wird unter Stickstoff durchgeführt und es werden 220 ml Dichlormethan und 2,72 g (10 mMol) 3-(2,6-Dichlorphenyl)-isoxazol-5-yl-essigsäure in das Gefäß gegeben. Nach der Zugabe von 0,13 ml N-Vinylimidazol als Katalysator wird eine Lösung von 3,14 g (10 mMol) Trimethylsilyl-6-isocyanatopenicillanat in Dichlorraethan tropfenweise, zu der bei 20⁰C gehaltenen gerührten Lösung gegeben. Nach 23 Stunden ist die Reaktion vollständig abgelaufen und das Isocyanat ist zu einem Ausmaß von etwa 70 $ in das gewünschte Produkt überführt worden. Die Reaktionsmischung wird in auf einen pH-Wert von 7 gepuffertes Eiswasser gegossen und zweimal mit Diäthyläther extrahiert. Die wäßrige Schicht wird auf einen

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_ 19 -

. pH-V/ert von 4,0 angesäuert- und dreimal mit Diäthyläther extrahiert. Das gewünschte Produkt v/ird vollständig von der wäßrigen Schicht abgetrennt. Die gesammelten organischen Schichten v/erden mit .einer geringen Menge Eiswasser gewaschen und dann über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und bei O⁰C in gewissem Ausmaß in Vakuum eingeengt.

Eine Lösung von Uatrium-cc-äthylcapronat in Äthylacetat wird tropfenweise zu der konzentrierten Lösung gegeben. Der sich bildende farblose niederschlag wird auf einem Euter- gesammelt, mit Diäthyläther gewaschen und im Vakuum getrocknet. Ausbeute 2,81 g (57 #)· Die Analyse des EMR-Spektrums des in Hexadeuterodimethylsulfoxyd gelösten Produktes 60 Mc, cf-V/erte in ppm, Tetramethylsilan als interner Standard) ergab das Folgende:

MH · Dublett , bei 8,95 (0,7 Protonen)'

C₆H₅ , etwa 7,5 (3 Protonen)

Isoxazolyl-II 6,50 (Proton)

-CH₂ und C₂-II 3,99 (3 Protonen)

C₅-H und Cg-H Multiplett zwischen 5,50 und 5,30 (2-Protonen)

C₅-(CH₅)₂ 1,62 und 1,52 (Dublett 6 Protonen) Teilanalyse des IR-Spektrums (ICBr-Scheibe, Werte in cm ):

3355 IiH

1755 C=O Lactam

1700 C=O Amid

1610 C=O Carboxylation

1505 NH Deformationsschwingung

1600 C = C aromatisch .

1430 Isoxazolyl-Ring

755) C-Cl Streckschwingung (stretching)

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BAD ORIGINAL

Beispiel

Herstellung des Natriumsalzes von 7-£~[3~(2,6-Dichlorphenyl)· isoxazol-S-ylj-acetamidos-cephalosporansäure

5 H H C - CH₀ - C - N - C - C 'CH₀

'Ii²

C-CH₀-O-C-CH,

COONa

In einem Dreihalskolben, der mit einem Gaseinlaßrohr, einem Thermometer und einem Tropftrichter versehen ist, suspendiert man 500 mg (1,8 mMol) 7-Aminocephalosporansäure in 10 ml Äthylacetat'unter einer Stickstoffatmosphäre. Die Suspension wird in einem Eisbad gekühlt und dann werden 0,3 ml (2,2 mMol) Triäthylamin zugesetzt» Nach 5 Minuten werden 0,3 ml (2,2 mMol) Trimethy!chlorsilan zu der Mischung gegeben und dann rührt man 1 Stunde bei Raumtemperatur.

Die Mischung wird erneut abgekühlt und nach dem Zusatz eines weiteren Triäthylaminäquivalents wird 3-(2,6-Dichlorphenyl)-isoxazol-5-yl-aeetylchlorid (in der Weise wie in Beispiel 1 besehrieben hergestellt) in 5 ml Äthylacetat tropfenweise zu der Reaktionsmischung gegeben, wobei man die Temperatur unterhalb 5⁰C hält.

Nach der Zugabe wird das Eisbad.entfernt und die Reaktionsmischung während weiterer 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionsmischung wird dann in eine Mischung von

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BAD ORIGINAL

30 ml Wasser und 30 ml Diäthyläther unter. Eiskühlung gegossen, währenddem man den pH-Wert auf 7»0 hält. Die wäßrige Schicht wird mit weiteren 30 ml Diäthyläther und 30 ml Äthylacetat gewaschen. Itfach der Zugabe von 50 ml Äthylacetat wird die wäßrige Schicht auf einen pH-Wert von 1,7 angesäuert. Die Schichten werden getrennt und die wäßrige Schicht wird erneut mit 50 ml Äthylacetat extrahiert.

Die vereinigten Äthylacetatschichten werden einmal mit auf einen pH-Wert von 1,5 angesäuertem Biswasser und zweimal mit Eiswasser gewaschen. Nach der Abtrennung, dem Trocknen über Magnesiumsulfat und der Behandlung mit Norit wird die Athylacetatschicht auf etwa 1/3 ihres Volumens eingeengt und dann wird Watrium-a-äthylcapronat zugesetzt. Das ausgefällte IJatriumsalz wird einmal mit Äthylacetat und zweimal mit η-Hexan gewaschen und nach der Filtration im Vakuum getrocknet. Die Ausbeute beträgt 438 mg (0,8 mMol = 44 $). Gemäß der Dünnschichtchromatographie ist die Verbindimg rein.

Eine Teilanalyse der IR-Analyse des Endproduktes (KBr-Scheibe,

— 1
Werte in cm ) ergab die folgenden V/erte:

- 3430 \

± 3280 ) ^Μί

1760 C =0ß-Lactam und C = O Ester

1690 - 1670 C=O Amid

1600 C=O Carboxylation

1558 C=C oder C=H

]o25 ) C-O-C Ester

782 C-Cl

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Die Analyse des NMR-Spektrums des Endproduktes, gelöst in Hexadeuterodimethylsulfoxyd (60 Kc, cf-Werte in ppm, Tetramethylsilan als interner Standard) ergab das Folgende:

CO - CH

S -CH

0 CH₂-C 0-CH₂

C₇-H Isoxazol-C.-H

C/-H, ⁰ °

2,3 3,07

3,71 (AB-Quartett 2 Protonen)

17,5 cps,

3,98 (2 Protonen)

4,73 - 5,20 Quartett (Jf=^ 12 cps, 2 Protonen)

4,98 und 5,05 Dublett (Jä;4,5 cps, 1 Proton)

5,47 -> 5,66 Quartett (J«*4,5 cps, J*äj8 cps,

1 Proton)

6,51 (1 Proton)

7,55 scharfes enges Aufspaltungsmuster (3 Protonen)

9,22 und 9,35 Dublett (j·«* 8 cps, 1 Proton)

Elementaranalyse C, ρ	•	H16N3O7SCl2Na ·	- H0O: 2 2
gef	44,97 -	Mittel	ber. (m wa
C	3,31 -	45,03 io	45,26 io
H	7,70 -	3,34 io	3,08 io
N	5,70 -	7,71 io	7,54 io
S		5,68> io	5,75 io
- 45,10 io
- 3,38 io
- 7,72 io
- 5,67 io

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Beispiel

Herstellung des Natriumsalzes der 7~£~[3~(2,6~])ichlorphenyl)-isoxazol-5-yl]-acetamido5-desacetoxycephalosporansäure

OHHH ,S^

H . t f t X^ \

C - CH₀ -C-N-C-C

V ² ii \ ^c

■ /C — N C-CH-

COONa

Zu einer Suspension von 620 mg (2,9 mMol) 7~Arainodesa,cetoxycephalosporansäure in 10 ml Äthylacetat, die in einem 50 ml Dreihalskolben, der mit einem Gaseinlaßrohr, einem Thermometer und einem Tropftrichter versehen ist, unter Stickstoff atmosphäre vorliegt und mechanisch gerührt v/ird, gibt man nach dem Kühlen der Suspension mit einem Eisbad 0,46 ml (3t 3 mMol) Triäthylamin. Nach 5 Minuten v/.erden 0,42 ml (3»3 mMol) Trimethylchlorsilan zugesetzt und das Rühren wird während einer Stunde ohne äußeres Kühlen fortgesetzt. Dann wird die Reaktionsmischung erneut mit einem Eisbad gekühlt und es werden v/eitere 0,41 ml (2,9 mMol) Triäthylamin zugesetzt. Dann wird tropfenweise 3-(2,6-Dichlorphenyl)~isoxazol-5-yl-acetylchlorid (erhalten gemäß der in Beispiel 1 beschriebenen Weise) in 5 ml Äthylacetat mit einer derartigen Geschwindigkeit zu der Reaktionsmischung gegeben, daß die Temperatur nicht über 5⁰C ansteigt. Das Kühlbad wird dann entfernt und das Rühren während weiterer 2 Stunden fortgesetzt.

409807/1068

Die Reaktionsmischung wird da.nn unter Eiskühlen und mechanischem Rühren zu einer Mischung von 20 ml Wasser und 20 ml Diäthyläther gegeben, währenddem man den pH-Wert auf 7,0 hält. Die wäßrige Schicht wird einmal mit 20 ml Äthylacetat und einmal mit 20 ml Diäthyläther gewaschen, !fach der Zugabe von 40 ml Äthylacetat zu der wäßrigen Schicht wird der ρH-Viert auf 1,7 gebracht. Die wäßrige Schicht wird erneut mit 30 ml Äthylaeetat extrahiert. Dann werden diese Schichten vereinigt, einmal mit 20 ml angesäuertem Eisv/asser (pH 1,7) und einmal mit 20 ml normalem Eiswasser gewaschen, Fach dem Trocknen über Magnesiumsulfat und der Behandlung mit Norit wird die organische Schicht auf etwa 1/3 ihres ursprünglichen Volumens eingeengt. Dann wird Natrium-ct-äthylcapronat zugesetzt, das ausgefallene Natriumsalz auf einem Filter gesammelt, mit Äthylaeetat und mit Diäthyläther gewaschen und im Vakuum getrocknet. Die Ausbeute beträgt ' 603 mg (1,23 mMol = 43 °/°). G-emäß der Dünnschichtchromatographie ist diese Verbindung rein.

Eine Teilanalyse des IR-Spektrums des Endproduktes

— 1
(KBr-Scheibe, Werte in cm"" ) ergab-die folgenden Vierte:

ί 3400 NH (breite Absorption)

1750 C = Oß-Lactam

1670 C=O Amid

1590 C=O Carboxylation

1555 C=C

± 1540 NH def. (Schulter)

781 C-Cl

Die Analyse des NMR-Spektrums des Endprodukts, gelöst in Hexadeuterodimethylsulfoxyd (60 Mc, cT-Werte in ppm, Tetramethylsilan als interner Standard) ergab das Folgende:

C₃-CH₅ 1,98 (3 Protonen)

S-CH₂ 2,95 -» 3,65 AB-Quartett (j« 17,5 cps;

2 Protonen) 409807/1068

CH₂C '

C₆-H und C₇-H

Isoxazol~C,-H

3,98 (2 Protonen)

4,88, 4,97 5,43 - 5,52

6,50 (1 Proton)

4,5 cps; 2 Protonen) und

7,55 (scharfes enges Aufspaltungsmuster; 3 Protonen)

Beispiel 5

Herstellung von 6-£-[3-(2,6-Dichlorphenyl)~4-carboxyisoxazol-5-yl!-acetamidoj-penicillansäure

COOH

- CHp -

H H H/ Ή - C C

CH

COOH

In einem Dreihalskolben, der mit einem G-aseinlaßrolir, einem Thermometer und einem Tropftrichter versehen ist, löst man 314 mg (1,0 mMol) Trimethylsilyl-ö-isocyanato-penicillanat· und 316 mg (1,0 mMol) 3-(2,6-Dichlorphenyl)-4-carboxyisoxazol-5-yl-essigsäure (erhalten durch die Reaktion von 3-(2,6 Dichlorphenyl)-4-carboxy-.5-methylisoxazol, das durch die 1,3-dipolare Addition von 2,6-Dichlorphenylbenzonitriloxyd und Trimethylsilyl-2-butynoat gebildet wurde, mit, 2 Äquivalenten n-Butyllithium und 1 Äquivalent Tetramethyläthylendiamin in Toluol, gefolgt durch eine Carboxylierung mit COp)

409807/106 8

in 25 ml Benzonitril· Zu dieser Mischung gibt man tropfenweise eine Lösung von 145 mg (1,1 mMol) N-Methylbenzimidazol in 5 ml Benzonitril. Es ergibt sich, eine direkte Bildung von Kohlendioxyd. Nach 2 Stunden hört die Kohlendioxydentwicklung auf und die Reaktionsmischung wird unter Eiskühlung in eine Mischung von 50 ml Wasser und 50 ml Diäthyläther gegossen, währenddem man den pH-Wert bei 7 hält. Die wäßrige Schicht wird zweimal mit 50 ml Diäthyläther extrahiert.

Nach der Zugabe von 50 ml Diäthyläther und 10 ml Äthylacetat wird der pH-Wert auf 4 gebracht. Die Schichten werden getrennt und die wäßrige Schicht wird zweimal mit 50 ml Diäthyläther extrahiert.

Die vereinigten organischen Schichten werden mit Eiswasser gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Nach der Entfernung des Lösungsmittels erhält man I36 mg eines schwachgelben Peststoffs, der gemäß Dünnschichtchromatographie rein war. * ■

Eine Teilanalyse des IR-Spektrums des Endproduktes (KBr-Schei-

— 1
be, Werte in cm" ) ergab die folgenden Werte:

1775	C=O ß-Lactam
1700	C=O Carboxyl
1600	C=C aromatisch
1560	C=N
1430	Isoxazolring
780	C = Cl

409807/ 1 068

Die Analyse des NMR-Spektrums des Endproduktes, gelöst in Hexadeuterodimethylsulfoxyd (60 Mc, cf-Werte in ppm, Tetramethylsilan als interner Standard) ergab das Polgende:

1,52 und 1,65 (6 Protonen)

4.32 (3 Protonen)

5.33 -» 5,70 Multiplett (2 Protonen) 7,55 scharfes enges Aufspaltungsmuster 9,10 Düblett

0 CH₂C und C₂-H C₅-H und C₆-H ^C6^H3 NH

Beispiel

Herstellung des Natriumsalzes der 6~£-[3-(2,4,6-Irimethyl)-ph.enylisoxazol-5-yl!-acetamido}-penicillansäure

it

H ^ N - CH CH

O=C N-

•\

-H

• COONa

Im wesentlichen gemäß dem in Beispiel 2 beschriebenen Verfahren wurden 1,23 g (5 mMol) 3-(2,4,6-Trimethyl)-phenylisoxazol-5-yl-essigsäure mit 1,57 g (5 mMol) Trimethylsilyl-6-isocyanato-penicillanat in 25 ml trockenem Dichlormethan in Gegenwart von etwa 0,05 ml N-Vinylimidazol als Katalysator umgesetzt. Die Reaktion war nach etwa 6,5 Stunden beendigt.

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Gemäß der Dünnschichtchromatographie war das Isocyanat zu etwa 60 # in das gewünschte Produkt überführt worden. Das Reaktionsprodukt wurde in üblicher Weise behandelt. Bei _N einem pH-Wert von 4,5 wurde das Penicillin mit Diäthyläther aus dem Wasser extrahiert. Die Ätherlösung wurde mit einem geringen Volumen Eiswasser gewaschen, mit Aktivkohle behandelt, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und

geringfügig im Vakuum bei O⁰G eingeengt.

Eine Lösung von Natrium-ec-äthylcapronat in Diäthylather wurde tropfenweise zu der konzentrierten Lösung gegeben. Der gebildete farblose Niederschlag wurde durch Filtration gesammelt und wiederholt mit kaltem Diäthyläther gewaschen. Nach dem Trocknen im Vakuum erhielt man 0,8 g des Produktes. Eine gute Reinheit des Produktes wurde durch Dünnschichtchromatographie, durch IR- und durch NMR-Spektren angezeigt.

Die Analyse des NIiR-Spektrums des Endproduktes, gelöst in einer etwa 2:1-Mischung von Hexadeuterodimethylsulfoxyd und DpO (60 Mc, cf-Werte in ppm, interner Standard 2,2-Dimethylsilapentan-5-sulfonat) ergab die folgenden Werte:

C6H2	6,95	(Singulett, 2 Protonen)
Isoxazolyl C.-H	6,3	(1 Proton)
Cr--H und C/--H ρ ο	etwa	5,45 (AB-Quartett, ^AB<0,1 ppm,
		JßB^ 4 cps, 2 Protonen)
C2-H	4,2	(1 Proton)
CH2-CO-	3,95	(2 Protonen)
P-CH3	2,25	(3 Protonen)
(0-CBL)9	2,05	(6 Protonen)

1,5 und 1,6 (6 Protonen).

09807/1068

Beispiel

Herstellung des ITatriumsalzes der 7-i-[3-(2,4,6-Irimethyl)· phenylisoxazol-5-yl]-acetamido3 -ceplialosporansäure

H	C	O "Il	H	/	CH0 1	* -	.0
C - CH2 -	- C -	H-CH —	CH I	I	Il
		I	I	.C-CH	-0-C-CH
		O=C	■S
				COOHa

2,8 ml (20 mMol) Triäthylamin wurden tropfenweise zu einer gerührten Suspension von 2,7 g (10 mMol) 7-Aminocephalosporansäure in 40 ml trockenem Dichlormethan bei O⁰C gegeben. Anschließend wurden 2,55 ml (20 mMol) Trimethylchlorsilan tropfenweise zugesetzt. Nach der Beendigung der Zugabe wurde die Reaktionsmischung wenige Minuten bei O⁰C gehalten, worauf das Eisbad entfernt wurde. Dann wurde während 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurden 1,2 ml (10 mMol) Chinolin zugesetzt, worauf tropfenweise eine Lösung von etwa 10 mMol 3-(2,4,6-Trimethyl)-phenylisoxazol-5-yl-acetylchlorid in 20 ml trockenem Dichlormethan bei 5⁰C zugesetzt wurde. Hach wenigen Minuten Rühren bei Raumtemperatur wurde die Reaktionsmischung in eisgekühltes Wasser gegossen, worauf verdünnte Hatriumhydroxydlösung zugesetzt wurde. Bei einem pH-Wert von 7 wurden die Schichten getrennt und die ¥asserschicht zweimal mit Diäthyläther extrahiert. Die organischen Schichten wurden verworfen und die V/asserschicht bei einem pH-Wert von 5 bis 1 wiederholt mit Diäthyläther extrahiert. Die organischen Schichten wurden

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getrennt dünnschichtchromatographisch untersucht. Die reinsten Extrakte wurden vereinigt, mit V/asser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert, im Vakuum eingeengt und schließlich mit einer Lösung von ITatrium-aäthylcapronat in Äther behandelt. Der feste Niederschlag wurde durch Filtration gesammelt, mit Diäthyläther gewaschen und im Vakuum auf Gewichtskonstante getrocknet. Ausbeute 2,5 g. Zur Herstellung des kristallinen Monohydrats wurde das rohe Produkt, das gemäß der Dünnschichtchromatographie keine anderen schwefelhaltigen Substanzen enthielt, aus Aceton umkristallisiert. Das Endprodukt (1g) war mit Ausnahme der Anwesenheit einer geringen Spur von Aceton rein. Es enthielt 1 Mol Wasser pro Mol Cephalosporin.

Die Analyse des JJMR-Spektrums des Endproduktes, gelöst in Hexadeuterodimethylsulfoxyd (60 Mc, cf-Vierte in ppm, interner Standard 2,2-Dimethylsilapentan-5-sulfonat) ergab die folgenden Werte:

N-H ^ 9,26 und 9,12 (Dublett. J^8,5 cps, etwa 0,8

Protonen)

CgH₂ 6,93 (geringfügig verbreitertes Singulett,

2 Protonen)

Isoxazolyl-C.-H 6,33 (Singulett, 1 Proton) C₇-H 5,66, 5,58, 5,52 und 5,44

(schwach verbreiterte Signale, J^8,5 cps und ^4,7 cps, 1 Proton)

C_fi-H 5,04 und 4,96 (J_AT, =4,7 cps) )

^b ^ V 3 Proto-

5,20, 4,99, 4,92 und 4,71 (J^ 12,5 cps)) nen

CH₂-CO 3,92 (verbreitertes Singulett, 2 Protonen)

S-CH₂ ~3,72, ~3,43, -3,33 und ^3,04 "

(verbreiterte Signale, AB-Quartett, J._r,fH'\'J_f^ ops, 2 Protonen) ^

P-CH₅ 2,27 (3 Protonen)

(o-CH₃)₂ 2,07 (Singulett) ? _{g Protonen}

0-CO-CH₃ 2,01 (Singulett) J

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Beispiel 8

Herstellung von 7-i-[3-(2,6-Dichlor)~phenyl-4-methylisoxäzol-5-yl]-acetamido}-desacetoxyceplialosporansäure

Ii 2

N ,0 - CH, - C - H - CH-OH OH,

■^⁰ ■ Ii

COOH

Eine Lösung von etwa 1 mMol Trimethylsilyl-7-isocyanat- ■ desacetoxycephalosporanat in 2 ml Toluol wurde zu 286 mg (1 mMol) 3-{2,6-Mchlor)-ph.enyl-4-methylisoxazol-5-ylessigsäure, die teilweise in 10"ml trockenem Toluol gelöst war, gegeben. Die Zugabe von etwa 0,1 mMol 1-Isopropylbenzimidazol als Katalysator brachte die langsame Reaktion (die bei Raumtemperatur etwa 24 Stunden benötigte) in Ga,ng. Als keine Kohlendioxydentwicklung mehr feststellbar war,, wurde ein Strom von trockenem Stickstoff über die Oberfläche der gerührten Reaktionsmischung geleitet und der Inhalt des Reaktionsgefäßes wurde in eine gut gerührte Mischung von Eiswasser und Diäthyläther gegeben. Der pH-Wert wurde auf einen Wert von 6,8 gebracht, die Schichten wurden getrennt und die Wasserschicht wurde zweimal mit Diäthyläther extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden zweimal mit Eiswasser gewaschen. Die organische Schicht wurde verv/orfen und die vereinigten Wasserschichten (70 ml) bei einem pH-Wert von 2,3 mit 80 ml einer 2:1-Mischung von

409 8 0 7/1068

Diäthyläther und Äthylacetat extrahiert. Dieser Extrakt wurde zweimal mit 5 ml Eiswasser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum vollständig eingedampft. Der Rückstand, ein schwach-gelbes Öl, verfestigte sich beim Rühren mit trockenem Diätliyläther. Der Äther wurde dekantiert und der Feststoff erneut zweimal mit Äther verrührt« Der fast farblose Feststoff wurde im Vakuum bis zur Gewichtskonstante getrocknet. Ausbeute 290 mg. Das Endprodukt wurde durch Dünnschiehtchromatographie .untersucht, was die Anwesenheit von lediglich einer schwefelhaltigen Verbindung ergab. Die angegebene Struktur wurde durch IR- und NMR-Spektren bestätigt. Das UMR-Spektrum zeigte, daß das Endprodukt zu etwa 82 fo rein war, da es aus 1 Mol der Ausgangsessigsäure und 2,5 Mol Diäthyläther (wahrscheinlich kristallgebunden) pro 5 Mol des gewünschten Produktes bestand. Die Teilanalyse des IR-Spektrums des

— 1

Endproduktes (in Chloroform, Werte in cm" ) ergab das Folgende:

- 3500	OH	Carboxyl
ί 3300	EH
1772	C=O	ß-Lactam
± 1730	C=O	Carboxyl
1690	C=O	Amid

1380 - 1430 Isoxazolring Absorptionen.

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Beispiel 9

Herstellung des Cyclohexylaminsalz,es der 6 (6)]

-penici.llan-

O-CH-C-Ii-CH--CH

Cl

O=C-U-

C(CH₁),

•COOHo

-( Η

In 25 Minuten wurde eine Lösung von 700 mg Trimethylsilyl-6-isocyanato-penicillanat in 10 ml trockenem Dichlormethan tropfenweise zu einer Lösung von 700 mg 1-Chlor-1-[3~(2,4»6-trimethyl)-phenylisoxazol-5-yl]-essigsäure und etwa 0,03 ml N-Vinylimidazol als Katalysator in 25 ml trockenem Dichlormethan zugesetzt. Me Reaktionsmischung wurde zusätzlich während weiterer 4 Stunden gerührt. Die in situ Hydrolyse des Silylesters erfolgte durch Zugabe von etwa 0,2 ml Äthanol bei O⁰C. Die Reaktionsmischung wurde in eine gut gerührte Mischung aus Diäthyläther und auf einen pH-Wert von 7 gepuffertem Eiswasser gegossen, Nach der" Trennung der Schichten vairde die Wasserschicht einmal mit Diäthyläther extrahiert und anschließend auf einen pH-Wert von 3,5 angesäuert. Die angestrebte Verbindung wurde durch zweimaliges Extrahieren mit Diäthyläther unvollständig aus der Wasserschicht abgetrennt. Diese Extrakte wurden vereinigt, mit einer geringen Menge Eiswasser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum eingedampft. Das zurückbleibende Öl wurde in 5 ml Aceton gelöst. Eine verdünnte Lö-

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sung von Cyclohexylamin in Diäthyläther wurde langsain zugegeben, bis keine weitere NiederSchlagsbildung mehr erfolgte, Der farblose Niederschlag wurde durch Filtration gesammelt, mit kaltem Diäthyläther gewaschen und im Vakuum getrocknet. Ausbeute 250 ago Die Identität des Endproduktes mit der oben angegebenen Formel wurde durch NMR- und IR-Spektren bestätigt (KBr-Scheibe, 1775 cm : 0=0 ß-Lactam, 1680 cm: C=O Amid, 1390 und 1450 cm"¹: Isoxazolring). Die Reinheit des Endproduktes wurde auf etwa 85 °/° geschätzt.

Beispiel

10

Herstellung des Natriumsalzes der 6-{-[3-(2,6-Dichlor)-phenyl-4-methylisoxazol-5-yl !-acetamid o]~penicillansäure

H -^ N - CH CH

O=C N-

C(CH₃)

COONa

Im wesentlichen gemäß dem in Beispiel 2 beschriebenen Ver- . fahren wurden 286 mg (1 mMol) 3-(2,6-Dichlor)-phenyl-4-' ' methylisoxaaol-5-yl-essigsäure mit 314 rag (r mMol) Trimethylsilyl-6-isocyanatopenicillanat in 10 ml trockenem !Toluol in Gegenwart von etwa 0,01 ml N-Isopropylbenzimidazol als Katalysator umgesetzt» Die Reaktionsmischung wurde über Nacht bei etwa 15⁰C gerührt. Gemäß dem Dünnschichtchromatogramm war das Isocyanat zum mindestens 75 $ in das gewünschte

409807/1068

Produkt überführt worden». Das Reaktionsprodukt wurde in üblicher Weise behandelt* Bei einem pH-Wert von 5»8 wurde

drei
das Penicillin durch/40 ml Extraktionen mit Diäthyläther aus der, Wasserschicht entfernt. Die vereinigten Extrakte wurden mit Eiswasser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum auf ein Volumen von etwa 5 ml eingeengt. Die Zugabe einer lösung von ITatrium-cr-äthylcapronat in Diäthyläther führte zu einem farblosen Niederschlag, der durch !Filtration gesammelt, mit kaltem Diäthyläther gewaschen und im Vakuum bis zur Gewichtskonstanz getrocknet wurde. Schließlich wurde das Produkt in einem geringen Volumen kaltem trockenem . Aceton verrieben« Ausbeute 300 mg. Die Untersuchung des Endproduktes durch die DünnschichtChromatographie, durch IR-Spektrum und MR-Spektrum bestätigte die angegebene Struktur. Das Produkt war lediglich mit sehr geringen Mengen Aceton und llatrium-cc-äthylcapronat verunreinigt.

Me Analyse des NMR-Spektrums des Endproduktes, gelöst in Hexadeuterodimethylsulfoxyd (60 Hc, cT-Werte in ppm, interner Standard 2,2-Dimethylsilapentan-5-sulfonat) ergab die folgenden Vierte:

C₅-(CH₃)₂ 1,54 und 1,64 (6 Protonen)

Isoxasolyl C₄-CH₅ 1,82 (3 Protonen)

CH₂-CO- bei 3p95 (verbreitertes") "

" Singulett) I

Y 5 Protonen

C₂-H 4,03 ' ■ J

C₅-H und C₆-H bei 5,5 (Multiplett, 2 Protonen)

Cg-H₅ bei 7,6 (scharfes enges Aufspaltungs-

' muster, 3 Protonen)

N-H bei 9,3 (Dublett, 0,9 Protonen).

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Beispiel 11

Herstellung des Cyclohexylaininsalzes der 6-£t~Hethy1~[3-(2,4,6■ trimetliyl)-phenylisoxazol-5-yl]~acetamido^l _rpenicillansä-ure

CH ₀

2 H

- CH-C-Ii-CH—CH C(CH^)₂ O=C H C^^H

Im wesentlichen gemäß dem in Beispiel 9 beschriebenen Verfahren wurden äquimolare Mengen Trimethylsilyl-o-isocjranatopenicillanat und 1-Methyl-1-[3-(2,4,6-trimethyl)-phenylisoxazol-5-yl!-essigsäure in Gegenwart einer geringen Menge N-Vinylimid'azol umgesetzt. Als Lösungsmittel wurde trockenes Dichlormethan verwendet. Die Umwandlung war nach 6~stundigem Rühren bei Raumtemperatur beendigte Die Reaktionsmischung wurde in üblicher Weise behandelt. Zur Isolierung wurde das Penicillin bei einem pH-Wert von 4 mit Diäthyläther extrahiert und schließlich als Cyclohexylaminsalz erhalten. Die Dünnschichtchromatogramme, das IR-Spektrum (intensive

— 1

ß-Lactamcarbonyl-Absorption bei 1778 cm*" (KBr-Scheibe)) und das HMR-Spektrum bestätigten die angegebene Struktur des Endproduktes und die gute Reinheit des Produktes.

Die Teilanalyse des komplizierten NMR---Spektrums des Endproduktes (eine Mischung des D- und des L-Isomeren), gelöst in Hexadeuterodimethylsulfoxyd (60 Mc, <f-Werte in ppm,in-

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terner Standard 2,2-Dimethylsilapentan-5-sulfonat) ergab die folgenden Werte:

^C6^H2

Isoxazolyl-C^-H C_n-H und Ö£-H

C_a-H

C₂-H

-C₁-H

(0-CH₃)₂
Cyclohexyl C₅H C₃-(CH₃)₂ und C₀₁-CH₃

8,9 (etwa 1 Proton) N... ;

6,95 (etwas verbreitertes Singulett, 2 Protonen) ■

6,35 (2 enge Singuletts, 1 Proton) bei 5,4 (2 Protonen)

bei 4,2 (diffuses Quartett) 7 . _{2 Protonen} bei 4,0 (2 enge Singuletts) J

bei 2,9 (breiter Absorptionsbereich, etwa 1 Proton)

2,3 (Singulett, etwa 3 Protonen) 2,1 (Singulett, etwa 6 Protonen) bei 0,9 —τ- bei 2,3

ca,

26 Pro tonen

bei 1,4

bei 1,65

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Beispiel 12

Herstellung des Natriumsalzes der 7-£-[3-(2,4,6-TriBiethyl)-phenyl-4-methylisoxazol~5-yl]-acetamido} -cephalosporansäure

OH, ⁰ O

C - CH₀ -G-Ii- OH—CH ~CH_{O Λ}

Il Ih O=C N C-CH₉-O-C-CH

1,38 ml (10 mMol) !Driäthylamin wurden tropfenweise zu einer ge rührten Suspension von 1,3 g (5 mMol) 7—Aminocephalosporansäure in 20 ml trockenem Dichlormethan bei O⁰C zugegeben. Anschließend wurden 1,26 ml (10 mMol) Trimethylchlorsilan tropfenweise bei O⁰C zugesetzt. Nach, Beendigung der Trimethylchlorsilanzugabe wurde die Reaktionsmischung während weniger Minuten bei O⁰C gerührt, worauf das Eisbad entfernt wurde. Dann wurde während 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurden 0,6 ml (5 mMol) Chinolin zugesetzt, worauf tropfenweise eine Lösung von etwa 4,5 mMol 3-(2,4,6-Trimethyl)-phenyl-4-methyl-isoxazol-5-yl~acetylchlorid (in etwa 90 ?£iger Reinheit aus 1,3 g (5 mMol) der entsprechenden Carbonsäure hergestellt) in 10 ml trockenem Dichlormethan bei 5⁰C zugesetzt wurde. ITach wenigen Minuten bei Rühren bei Raumtemperatur wurde die Reaktionsmischung in Eiswasser gegossen. Der pH-Wert wurde auf 7 erhöht und die Schichten wurden getrennt· Die Wasserschicht, die gemäß der dünnschichtchromatographischen Untersuchung ein Hauptreaktionsprodukt, eine geringe Menge 7-Amino-

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cephalosporansäure und eine geringe Menge eines Nebenproduktes (möglicherweise das -Δρ-Isomere des gewünschten Produktes) enthielt, wurde zweimal mit Diäthyläther gewaschen. Die organischen Schichten wurden verworfen. Die Wasserschicht wurde .anschließend bei pH-Werten von 5,0, 4,5 und 4jO mit Diäthyläther extrahiert. Der Extrakt bei pH 4,0 enthielt lediglich das gewünschte Hauptprodukt. Die Zugabe einer Lösung von Natrium--cr~äthylcapronat zu diesem' Extrakt ergab einen farblosen festen Niederschlag. Ausbeute 1,2 g. Gemäß der Dünnschichtchromatographie, der IR- und NMR-Spektren war das Endprodukt lediglich mit geringen Mengen Diäthyläther (etwa 1 Gew.-$) verunreinigt.

Die Analyse des NMR-Spektrums des Endproduktes, gelöst in einer etwa 2i1-Mischung von Hexadeuterodimethylsulfoxyd und DpO (60 Mc, cf-Werte in ppm, interner Standard 2,2-Di- · methylsilapentan-5-sulf.onat) ergab das Folgende:

6,95 (Singulett, 2 Protonen) C₇-H * 5,72 und 5,64 (Dublett, J^4,6 cps,' 1 Proton)

C₆-H 5,10 und 5,02 (Dublett, J=='4,6

0-CHp bei 5,15, 4,92, 4,81 und 4,59

• (AB-Quartett, J^13,2 cps)

S-CH₂ bei 3,55 (Zentrum eines AB-Quartetts)? .

CHp-CO 3,87 (etwas verbreitertes Singulett) ) tonen

P-CH₅ 2,28 (3 Protonen)

0-CO-CH₅ - 2,05 (Singulett) (0-CH₅)₂ 1,98 (Singulett)

1,71 (3 Protonen).

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Beispiel 1g

Herstellung des Natriumsalzes der 7-£~[3-(2,4,6-Trimethyl).

phenyl-4-meth.ylisoxazol-5-yl]-acetamido]-desacetoxy-

cephalosporansaure

/^0H3

c Oh

11 ti

C - CH₉ - C - Έ - CH CH

O=C N C-CH₃

COOHa

Im wesentlichen gemäß dem in Beispiel 9 beschriebenen Verfahren wurden 1,3 g (5 mMol) 3-(2,4,6-Trimethyl)-phenyl-4-methylisoxazol-5-yl-essigsäure, gelöst in 25 ml trockenem Dichlormethan und 5,04 mMol Trimethylsilyl-7-isocyanatodesacetoxycephalosporanat, gelöst in 9 ml Toluol in Gegenwart von etwa 0,05 ml H-Vinylimidazol als Katalysator umgesetzt. Die Zugabe des Isocyanate in Toluol erfolgte in etwa 20 Minuten. Die Kohlendioxydentwicklung war bereits nach 5 Minuten festzustellen. Nach etwa 7,5 Stunden weiteren Rührens wurde die Reaktion unterbrochen, da ein Dünnschichtchromatogramm der Reaktionsmischung eine etwa 80 $ige Umwandlung des Isocyanats in das gewünschte Produkt anzeigte und die Entwicklung von Kohlendioxyd fast aufgehört hatte. Die Reaktionsmischung wurde dann in üblicher Weise behandelt. Das Cephalosporin wurde bei einem pH-Wert von 4_f5 mit Hilfe einer 9:1-Mischung von Diäthyläther und Äthylacetat extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden mit Eiswasser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrock-

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net, filtriert und im Vakuum vollständig eingedampft. Das verbleibende Öl wurde in Diäthylather gelöst« Die Zugabe eines Teiles der geschätzten erforderlichen Menge an Na-·- ■;" trium-a-äthyleapronat, gelöst in Diäthyläther, führte zu einem Niederschlag, der durch Filtration gesammelt, mit einer geringen Menge kaltem Diäthyläther gewaschen und im Vakuum getrocknet wurde. Die vereinigten Filtrate wurden erneut mit Natrium-ct-äthylcapronat versetzt. Die. erhaltene zweite Charge des festen Materials wurde wie die erste Charge behandelt. Die dritte und letzte Charge erhielt man durch Zusetzen von gelöstem Natrium-a-äthylcapronat, bis sich keine weitere Zunahme des Niederschlages ergab. Die dritte Charge, die dünnschichtchromatographisch praktisch rein war, wurde aus Aceton umkristallisiert. Schließlich wurden die drei Chargen gemeinsam in Aceton gelöst. Die Acetonlösung wurde im Vakuum etwas eingeengt und anschliessend angeimpft. Nach der Kristallisation wurde der Kolben in den Eisschrank überführt. Am nächsten Tag wurden die Kristalle durch Filtration gesammelt, mit kaltem Aceton und Diäthyläther gewaschen und im Vakuum bis zur G-ewichtskonstanz getrocknet. Ausbeute 1,7 g. Die angegebene Struktur wurde durch IR- und NMR-Spektren bestätigt.,, Gemäß dem NMR-Spektrum und den Dünnschichtchromatogrammen war das Endprodukt lediglich durch eine sehr geringe Menge Aceton und eine geringe Menge NjN'-Didesaeetoxycephalosporansäureharnstoff verunreinigt.

Die Analyse des NMR-Spektrums des Endproduktes, gelöst in einer etwa 2:1-Mischung von Hexadeuterodimethylsulfoxyd und D₂O (60 Mc, cT-Werte in ppm, interner Standard 2,2-Dimethylsilapentan-5-sulfonat) ergab das Folgende:

CgH₂ 6,97 (geringfügig verbreitertes Singulett,

2 Protonen)

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-und

CH₂-CO

(o-CH₃)2
C₃-CH₃

Isoxazol-C.-CH,

5,63, 5,46, 4,97 und 4,90 ι (AB-Quartett, J⁵« 4,5 cps, 2 Protonen)

3,86 (verbreitertes Singulett, 2 Protonen)

etwa 3,7 —> 2,9 .

(AB-Quartett, Jäj17»5-1 cps, 2 Protonen)

2,29 (3 Protonen) ;

1,98 (Singulett) 7 _g 1,94 (Singulett) J

1,71 (3 Protonen).

Beispiel 14

Herstellung der 6-C-[3-(2,6-Dichlor)-phenyl-4-carbamylisoxazol-5-yl]-acetamido}-penicillansäure

-N- CH-CH

O=C — Ή

0(CH,)

-COOH

600 mg (2inMol) 3-(2,6-Dichlor)~phenyl-4-carbaraylisoxazol-5-yl-essigsäure und 630 mg (2 mMol) Trimethylsilyl-6~isocyanatopenicillanat wurden in einer Mischung von 15 ml trockenem Benzonitril und 15 ml trockenem Tetrahydrofuran gelöst, worauf man direkt etwa 0,02 ml H-Methylimidazol zugab. Die Entwicklung von Kohlendioxyd nahm nach 3-stündigem Rühren bei Raumtemperatur stark ab. Ein Dünnschichtchromatogramin der Reaktionsmischung zeigte eine gute Umwandlung des Isocyanats ·

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an ο Die Reaktionsmischung wurde in eine gut gerührte eisgekühlte Mischung von 30 ml V/asser, 20 ml Diäthyläther und 20 ml Äthylacetat gegossen. Dann wurde verdünnte IJaOH-Lösung bis zu einem pH-Wert von 8,5 zugesetzt. Die Schichten wurden getrennt und die Wasserschicht wurde durch Extraktion mit Diäthyläther gereinigt. Die organischen Schichten wurden verworfen und die Wasserschicht wurde bei einem pH-Wert von 3,0 mit einer 1:1-Mischung von Diäthyläther und Äthyl- . acetat gewaschen. Die vereinigten Extrakte wurden mit Eiswasser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und vollständig im Vakuum eingedampft. Der sich ergebende schwach-gelbe Feststoff (1,1 g) wurde durch IR- und KMR-Spektren untersucht. Das Produkt enthielt das gewünschte Penicillin jedoch auch geringe Mengen UjU'-Dipenicillansäureharnstoff und der Ausgangscarbonsäure* Zur Herstellung einer reineren Probe wurde das rohe Produkt wiederholt mit kaltem trockenem Diäthyläther, in dem der Harnstoff kaum löslich ist, extrahiert. Der Ätherextrakt wurde mit Eiswasser, das auf einen pH-Wert von 7 gepuffert war, vermischt. Der größere ÜDeil "der Ausgangscarbonsäure wurde bei einem pH-Wert von 4,5 aus der Wasserschicht entfernt. Schließlich wurde die Wasserschicht wiederholt bei einem pH-Wert von 4,5 und 3,5 mit Mischungen aus viel Diäthyläther und geringen, jedoch nach und nach gesteigerten Mengen Äthylacetat extrahiert. Die Extrakte, die frei von der Ausgangscarbonsäure, dem Harnstoff .und den Abbauprodukten waren, wurden vereinigt und nach den üblichen Handhabungen vollständig im Vakuum eingedampft. Der sich ergebende farblose !Feststoff wurde bis zur Gewichtskonstanz getrocknet (350 mg). Gemäß den Dünnschichtchromatogrammen, den IR- und den NMR-Spektren war das Endprodukt, mit Ausnahme der Anwesenheit geringer Mengen von Äthylacetat und Diäthyläther rein. Das IR-Spektrum (KBr-Scheibe) kompliziert durch An-' Wesenheit der Monomeren und die Dimeren, zeigte einen breiten intensiven Bereich zwischen 3000 und 3600 cm mit Ban-

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den bei 3450, 3350 -und 3200 cm , die den Nli-Absorptionen beider Amidgruppen zuzuschreiben sind, eine Carboxy~0H~ Absorption bei etwa 2550 cm , einer breiten sehr intensiven Carbonylabsorption mit Banden bei + 1790, ± 1725,

+ —1 ~"

+ 1695 und - 1655 cm , die dem ß-Iactarn, der Carboxylgruppe, der CO'ltfH-Gruppe bzw. der CO»l<THp-Gruppe zuzusprechen sind.

Beispiel 15

Herstellung des Iiatriumsalzes der 6-C-[3-(2,6-I)ichlor)~ phenyl-4~cyanoisoxazol-5-yl]-acetamido] -penicillansäure

C - CH₂ - C - IT-CH-CH

O=C Ή

^NCOOHa

297 mg (1 mMol) 3-(2,6-Dichlor)-phenyl-4-cyano-isoxazol-5-yl-essigsäure, 314 mg (1 mMol) Irimethylsilyl-6-isocyanatopenicillanat und eine Spur N-Isopropylbenzimidazol wurden in 5 ml trockenem Dichlormethan gelöst. Gemäß dem Dünnschichtchromatogramm war eine gute Isocyanatumwandlung nach 3-stündiger Reaktion bei Raumtemperatur erreicht. Das Reaktionsprodukt wurde in üblicher Weise behandelt. Zum Isolieren wurde die Lösung des Penicillins in V/asser durch Extraktionen mit Diäthyläther bei einem pH-Wert von 7,0 und 4,5 gereinigt. Das Penicillin wurde durch Extraktion mit Diäthyl-

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ätlier bei einem pH-Wert von 3>3 aiis dem Wasser entfernt. Der Ätherextrakt wurde mit Eiswasser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingedampft. Das verbleibende Öl wurde in etwa 3 ml trockenem Äthylacetat gelöst, worauf etwa 0,6 mMol Natrium-ci-äthylcapronat, gelöst in einer geringen Menge Äthylacetat, zugesetzt wurden. Die Zugabe von trockenem Diäthyläther führte zu einem schwach gefärbten Niederschlag, der durch Piltra-. tion gesammelt, mit kaltem Äthyläther gewaschen und im Vakuum bis zur Gewichtskonstanz getrocknet wurde. Ausbeute 180 mg. Das Endprodukt wurde in üblicher V/eise untersucht. Es enthielt das Uatriumsalz des gewünschten Penicillins und geringe Mengen eines Abbauproduktes und Natriumü-äthylcapronato Das IR-Spektrum des Endproduktes (KBr-Scheibe) zeigte u.a. Absorptionen bei 2280 (C=IT) | 1778 (Carbonyl-ß-lactam), 1690 (Carbonylamid), 1610 (Carbonylcarboxylation) und - 1400 cm" -(isoxazolring-Absorptionen).

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Beispiel 16

Herstellung des Natriumsalzes der 6-{-[3-(1)-adamantylisoxazol-5-yl]-acetaraid$ -pcnicillansäure

H /-

k ζ¹ I '/ 1Ϊ O -.CH, -C-H- OH— OH

ir

O=C Ή G'

^COOMa

Im wesentlichen gemäß dem in Beispiel 9 beschriebenen Verfahren vrurde eine Lösung von 780 mg (2,5 mMol) Srimethylsilyl-6-isocyanato-penicillanat in 10 ml trockenem Diohlormethan tropfenweise zu einer Lösung von 650 ing (2,5 mMol) 3-(i)-Adamantyl-isoxazol-5-yl-essigsäure und etwa 0,02 ml If-Vinylimidazol in 20 ml trockenem Dichlormethan gegeben. Die Umwandlung war nach insgesamt 2,5-stündigem Rühren bei Raumtemperatur beendet, was durch eine drastische Verminderung der Kohlendioxydentwicklung angezeigt wurde. Ein Dünnschichtchromatogramm zeigte eine gute Umwandlung des Isocyanate in das gewünschte Penicillin an. Das Reaktionsprodukt wurde in üblicher Weise behandelt. Zur Isolierung wurde das Penicillin durch zweimalige Extraktionen mit Diäthyläther, die bei pH 5,5 bzw. pH 4,0 diirchgeführt wurden, aus V/asser extrahiert. Die Extrakte wurden getrennt, mit eisgekühltem Wasser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und vollständig im Vakuum eingedampft. Ausbeuten 700 bzw. 300 mg. Beide Produkte ergaben zufriedenstellende IR-Spektren und enthielten gemäß der Dünnsciiichtchromatographie lediglich ein Penicillin. Da

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die Probe, die durch Extraktion bei einem pH-Wert von 5,5 erhalten wurde, durch das Ausgangsessigsäurederivat verunreinigt war, wurde sie in Äther gelöst, worauf Hatrium-ocäthylcapronat zugesetzt wurde. Das erhaltene Natriumsalz (350 mg) war mit Ausnahme einer geringen Menge an ITatrium-a-äthyleapronat rein. Gemäß dem EM-Spektrum war das zweite Produkt mit Ausnahme einer geringen Menge Diäthylätlxer (etwa 4,0 Gew.-^) rein.

Die Teilanalyse des IR-Spektrums des Natriumsalzes des Endproduktes (KBr-ScHeibe, Werte in cm" ) ergab das Folgende:

- 3400 NH 1605 C=O Carboxylation

2910 p„ p-rvnvvn -n ~ ¹^²O HII-Deformationsschwingung 2853 un₂-uruppen _± ^₀₅ jgoxazoXring^Absorption

1775 C=O ß-Lactam ί 1675 . C=O Amid.

Die Analyse- des NMR-Spektrums des'Endproduktes (die Säure), gelöst in Hexadeuterodimethylsulfoxyd (60 Mc, cT-Werte in ppm, interner Standard 2,2-Dimethylsilapenta.n-5;-sulfonat) ergab das Folgende:

N-H bei 8,9 (etwa 0,8 Protonen)

Isoxazolyl-C.-H 6,26 (1 Proton)

C₅-H und C₆-H 5,35 —> 5,60 (MuItiplett, 2 Protonen) C₂-H . 4,26 (1 Proton)

3,79 (verbreitertes Singulett, 2 Protonen)

Adamantylgruppe . 1,90 und 1,73

Zentren etwas verbreiterter Absorptionen) V ca.

)₂ . 1,64 und 1,51 J ^{22 Protonen}

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Beispiel 17

Herstellung von 6-£4-(p-Nitro)-benzyloxycarbonylamiaio-[3-(2,6-dich.lor)-phenylisoxazol-5-yl]-acetamido] -penicillansäure

O .S.

Έ C-CH-C- EH - CH-CH C(CHj₀

\₀/ · III*

O=C COOH

0 t

2,33 g (5 mMol) 1-(p-Nitro)-benzyloxycarbonylamino-1-[3- ·■ . (2,6-dichlor)-phenylisoxazol-5-yl]-essigsäure, 1,57 g (5 mMol) Trimethylsilyl-ö-isocyanato-penicillanat und 0,1 ml IT-Vinylimidazol als Katalysator wurden in 50 ml trockenem Dichlormethan gelöst. Nach 3-stündigem Rühren unter Stickstoff bei Raumtemperatur war die Umwandlung vollständig abgelaufen. Gemäß der Dünnschichtchromatograpie hatte sich das Isocyanat zu etwa 70 $ in das gewünschte Produkt umgewandelt. Das Reaktionsprodukt wurde auf O⁰C abgekühlt, worauf einige wenige Milliliter kaltes Aceton, das genügend V7asser enthielt, um den Silylester zu hydrolysieren, zugesetzt. Anschließend wurde die Mischung vollständig in der Kälte im Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde in 75 ml einer kalten 1:1-Mischung von Diäthyläther und Äthylacetat gelöst. Da dieses Penicillin zur Herstellung des Penicillins von Beispiel 18 verwendet werden sollte, wurde das Isolie-

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rungsverfahren nicht zur Isolierung des Produktes in einem wesentlichen reinen Zustand sondern zur Isolierung einer so großen Menge des gewünschten Produktes wie möglich durchge-; führt. Dazu wurde die Lösung mit 70 ml Eiswasser, das auf einem pH-Wert von 7 gepuffert war, vermischt. Die gut gerührte Mischung wurde auf einen pH-Wert von 5,8 angesäuert und in einen Scheidetrichter überführt« Die Wasserschicht wurde abgelassen und verworfen, da sie das Nebenprodukt !!,N'-Dipenicillansaureharnstoff und lediglich Spuren des gewünschten Produktes enthielt. Die organische Schicht wurde anschließend zweimal mit schwach-säurem Bisgekühltem Wasser und einmal mit einer geringen Menge neutralen Wassers gewaschen. Die organische Schicht, die in dieser V/eise vollständig von dem Harnstoff und dem Katalysator befreit worden war, wurde über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und in der Kälte vollständig eingedampft. Der Rückstand wurde in Vakuum bis zur Gewichtskonstanζ getrocknet. Ausbeute 3»4 'g eines schwach-gelben, im wesentlichen kristallinen Feststoffes. Die Dünnschichtchromatogramme des rohen Endproduktes zeigte die Anwesenheit- lediglich des gewünschten Penicillins und der geschützten Ausgangsaminosäure in einem Verhältnis von etwa 2:1 an. Dies wurde durch das ITMR-Spektrum bestätigt, das ebenfalls die Anwesenheit von Äthylacetat und einer geringen Menge Wasser anzeigte. Der berechnete Gehalt des gewünschten Penicillins in dem rohen Produkt betrug etwa 2,2 bis 2,4 g.

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Beispiel 18

Herstellung von 6-£a-Amino-[3-(2,6-diehlor)-phenylisoxazol-5-yl]-acetamidoi-penicillansäure '"*--'

CH ₀

Il H ^

.C - CH - C - H - CH CH

UH

.H

O=C N C

"^COOH

3,0g des rohen Produktes von Beispiel 17, das etwa 2 g 6- {cc- (p-Hi tr ο ) -benzyloxycarbonylamino- [ 3- (2, 6-dichlor)-phenylisoxazol-5-yl!-acetamido] -penicillansäure enthielt, wurden in 100 ml Äthylacetat gelöst, mit 25 ml Wasser vermischt. Durch Zusatz einer verdünnten IJatriumhydroxydlösung wurde der pH-V/ert der Mischung auf einen Wert von 7,0 gebracht. Kaeh der Zugabe von 1,5 g Pd/C 10 ^cß> wurde Wasserstoff kontinuierlich unter die Oberfläche eingeleitet. Durch dünnschichtchromatographische Untersuchung wurde festgestellt, daß die Reaktion nach 135-minütigem Rühren bei Raumtemperatur beendet war. Während 10 Minuten wurde Stickstoff durch die Reaktionsmischung geleitet, dann wurde Eiswasser zugesetzt und der pH-Wert auf einen Wert von 4,7 gebracht. Der Inhalt des Trichters wurde in einen Scheidetrichter überführt. Die Mischung trennte sich in eine klare Äthylacetatschicht und eine Wasserschicht, die durch eine Emulsionsschicht getrennt waren. Die Wasserschicht wurde abgelassen und aufbewahrt. Anschließend wurde die Emulsionsschicht zentrifugiert. Die entstehenden Schichten wurden ge-

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trennt. Die Äthylacetatschicht wurde mit der ersten Äthylacetatschicht vereinigt. Die Wasserschichten wurden ebenfalls vereinigt und erneut mit Äthylacetat extrahiert. Die Wasserschicht wurde dann verworfen. Der verbleibende Katalysator wurde aus den vereinigten Äthylacetatextrakten durch Filtration entfernt. Das gefärbte IiItrat wurde bei O⁰C im Vakuum auf ein Volumen von etwa.25 ml eingeengt. Dann wurden 100 ml Eiswasser zugesetzt und die Mischung auf einen pH-Wert von 7,0 gebracht. Die Schichten wurden getrennt und die gefärbte organische Schicht wurde verworfen. Die lösung der gewünschten Verbindung in Wasser wurde durch zweimaliges Extrahieren mit einer 1:1-Mischung von Äthylacetat und Diäthyläther gereinigt. Die entstehende praktisch farblose Lösung in Wasser wurde auf einen pH-Wert von 4,7 angesäuert und zweimal mit einem überschüssigen Volumen Äthylacetat extrahiert. Die Wasserschicht wurde verworfen und die vereinigten Äthylacetatschichten wurden zweimal mit einer geringen Menge Eiswasser gewaschen. Die Dünnschichtchromatogramme des Endextraktes zeigten einen ausgedehnten (die Mischung ist eine D,L-Mischung) Schwefel- und ITinhydrin-positiven Flecken. Wach dem vollständigen Eindampfen des Extraktes erhielt man einen geringfügig gefärbten Feststoff. Ausbeute 650 mg an trockenem Material. Das Endprodukt wurde mit Hilfe der IR- und MR-Spektren untersucht und lag vor in Form einer 1:1~molaren Mischung des gewünschten. Penicillins und Äthylacetat, die möglicherweise mit geringen Mengen eines 3-(2,6-Dichlor)-phenylisoxazol-Derivates verunreinigt ist.

Die Teilanalyse des IR-Spektrums des Endproduktes (KBr-Scheibe, Werte in cm~ ) ergab die folgenden Werte:

bei 3300 ITH bei 2600 . OH Carboxyl

1780 C=O -ß-Lactam

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- 1730	C=O Äthylacetat
± 1705	C=O Carboxyl
1690	C=O Amid
1390 und 1440	Isoxazolring-Absorptionen
785	C-Cl.

Beispiel 19

Herstellung des Natriumsalzes der 6-£-[3-(4-Nitro)-phenyliso:;-:.azol-5~yl]-acetamidol~penicillansäure

O H -^^S\

C - CH₀ - C - N - CH—CH C(CHj,.

₀/ 2 3 d

O=C N G

^COONa

In üblicher Weise wurden 166 mg (0,67 rnMol) 3-(4-Nitro)-phenylisoxazol-5-yl-essigsäure, 210 mg (0,67 hMoI) Trimethylsilyl-6-isocyanato-penicillanat und eine Spur N-Isopropylbenzimi'dazol umgesetzt. Als Lösungsmittel wurden 5 ml Benzonitril verwendet. Die Reaktion war nach 5-stündigem Rühren bei Raumtemperatur beendet. Der Inhalt des Kolbens wurde in eine eisgekühlte gut gerührte Mischung von 25 ml V/asser, 20 ml Diäthyläther und 25 ml Äthylacetat gegossen. Durch Zugabe einer verdünnten llaOH-Lösung wurde die saure Mischung (pH 3) auf einen pH-Wert von 7 neutralisiert und die Schichten getrennt. Die organische Schicht wurde verworfen und die Wasserschicht wurde zur Reinigung einmal mit

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40 ml einer 1:1-Mischung von Äther und Äthylacetat extrahiert. Dann wurden 30 ml einer T:1-Mischung von Äther und Äthylacetat mit der Wasserschicht vermischt und der pH-Wert auf einen Wert von 3»5 abgesenkt. Die Schichten wurden ge- ■ trennt und die Wasserschicht wurde erneut mit 50 ml der gleichen Lösungsmittelmischung extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden zweimal mit einem geringen Volumen Eiswasser gewaschen, anschließend über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und vollständig im Vakuum eingedampft. Das sich ergebende gelbliche Öl wurde mit trockenem Diäthyläther verrieben. Der gebildete teilweise kristalline Feststoff wurde durch Filtration gesammelt und anschließend wiederholt in Äther, aufgerührt. Nach dem Trocknen im Vakuum wog das letztendlich erhaltene farblose Produkt 73 mg. Die Untersuchung des Produktes durch DünnschichtChromatographie und durch NMR-Spektrum zeigte, daß die gewünschte Penicillansäure 5 bis 6 Mol Wasser pro Mol der Verbindung und eine geringe Menge Diäthyläther enthielt, jedoch sonst rein war. Das erhaltene Ätherfiltrat und die Waschlösungen wurden vollständig eingedampft. Der Rückstand wurde in 3 ml einer trockenen 1:1-Mischung von Äther und Äthylacetat gelöst und anschließend in der Kälte mit einer verdünnten Lösung von ITatrium-a-äthylcapronat in ■ Äther behandelt. Das ausgefallene Natriumsalz des gewünschten Penicillins wurde durch Filtration gesammelt und wiederholt mit trockenem Äther gewaschen. Nach dem Trocknen wog dieses Produkt 134 mg. Das Produkt wurde in üblicher V/eise untersucht«, Abgesehen von anhaftendem Wasser (weit weniger als es bei der freien Penicillansäure der Fall ist) wurde die Reinheit des Natriumsalzes auf etwa 80 bis 85 $ geschätzt, da es etwa 5 Gew_a-$ eines Abbauproduktes und 10 bis 15 Gew.-⁰Jo Natrium-cc-äthylcapronat enthielt.

Die Analyse des NMR-Spektrums der in einer Mischung von etwa 6 Teilen Hexadeuterodimethylsulfoxyd und 1 Teil DpO gelösten

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6-f-[3-(4-lTitro)-phenylißoxazol-5-yl]-acetai2ido^-penicillansäure (60 Mc, cf-Werte in.ppm, interner Standard 2,2-Dimethylsilapentan-5-sulfonat) ergab die folgenden Werte:

C₆H. 7,95 —» 8,4 (M^!BB^r Auf spaltungsniuster,

4 Protonen)

Isoxazolyl C.-H 6,94 (1 Proton)

C_R-H und C_fi-H 5,5 (geringfügig verbreitertes Singu- ⁰ lett, 2 Protonen)

C₂-H 4,15 (1 Proton) '

4,0 (etvra-s verbreitertes Singulett, 2 Protonen)

C₃-(CH₃)2 1,63 und 1,52 (6 Protonen).

Die Teilanalyse des IR-Spektrums des Natriumsalzes der 6-l-[3-(4-Nitro)-phenylisoxazol-5-yl]-acetamido}-penicillansäure (KBr-Scheibe, V/erte in cm~ ) ergab die folgenden Werte:

bei 3380 NH

1770 C=O ß-Lactam (intensiv)

1675 C=O Amid (intensiv)

1600 C=O Carboxylation + wahrscheinlich aromati

sches C=C (sehr intensiv).

1525 UO₂ + mögl. HH Def. (sehr intensiv)

1400 - 1460 Isoxazolring-Absorptionen 1355 NO₂ (intensiv)

- 858 C-ITO₂ und aromatisches Substitutionsmuster

(mittlere Intensität).

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Beispiel 20

Herstellung der 6-{<i-Carbamyl-[3-(2,6-dichlor)-phenyl- ~ isoxazol-5-yl]-acetamidoI-penicillansäure

CH O _H ^^S\

C - CH - C - Ή - CH CH C(CH₃),

•Η

. O=C Ή — C"

^NC00H

Zu einer Lösung von 1₂0 g (3,7 mMol) 3-(2,6-Dichlor)-pheny-lisoxazol-5-yl-acetamid in 15 ml trockenem Tetrahydrofuran, die auf -70⁰C abgekühlt worden war, gab man tropfenweise eine Lösung von 3,7 mMol n-Butyl-lithium in Hexan. Die Zugabe "wurde derart eingestellt, daß die Reaktionsmischung unterhalb -60°C gehalten wurde. Bach wenigen Minuten weiterem Rühren bei -70⁰C wurden tropfenweise 0,4-7 ml (etwa . 3,7 mMol) frisch destilliertes Triraethylehlor'silan züge-, geben. Anschließend wurde das Kühlbad entfernt und die (Temperatur auf -30⁰C ansteigen gelassen. Dieses Verfahren die aufeinanderfolgende Zugabe von 1 Äquivalent n-Butyllithium und 1 Äquivalent Trimethylchlorsilan - wurde in gleicher Weise wiederholt. Zu der so in situ hergestellten Lösung des Ιί,Η-Bis-trimethylsilyl-Derivates des Ausgangsproduktes in einer Mischung von 15 ml Tetrahydrofuran und etwa 3,5 ml Hexan gab man 0,56 ml (3,7 mMol) Ν,ΙΤ,ίί¹ ,N¹-Tetramethyläthylendiamin. Zu der erneut auf -75°C abgekühlten Mischung gab man tropfenweise eine Lösung von etwa 3j7 mMol n-Buty!lithium in 1,76 ml Hexan. Die Zugabege- ■

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schwindigkeit wurde derart eingestellt, daß die Reaktionstemperatur maximal -70⁰G betrug. Die Reaktionsmischung wurde schließlich, während 1 Stunde bei -70 bis -6Q⁰C gerührt. Die Reaktionsfolge wurde durch die tropfenweise Zugabe einer Lösung von 1,16 g (3,7 mMol) Irimethylsilyl-6-isocyanatopenicillanat in 10 ml trockenem Toluol, wobei die Reaktionstemperatur unterhalb -55⁰O gehalten wurde, beendet. Die Reaktionsmischung wurde zusätzlich während 30 Minuten bei -60 C gerührt. Die Reaktionsmischung und verdünnte Chlorwasserstoffsäure wurden langsam und gleichzeitig in eine gut gerührte eisgekühlte,Mischung van 50 ml Diäthyläther und 50 ml Wasser mit einem pH-Wert von 4 gegossen« Anschließend wurde der pll-¥ert der Mischung auf 7 erhöht und die Schichten getrennt. Die Wasserschiclrfc wurde ein weiteres Mal mit 50 ml Äther bei einem pH-Wert von 7 extrahiert_o Die organischen Schichten wurden verworfen. Die Wasserschicht wurde dreimal mit Äther bei pH-Werten von 5,0, 4,5 bzw. 4,3 und einmal mit einer 1:1-Mischung von Äthylacetat und Diäthy läther bei einem pH-Wert von 4,3 extrahiert. Durch dünnschichtchromatographische Untersuchung wurde festgestellt, daß die Wasserschicht das gewünschte Penicillin zusammen mit geringen Mengen schwefelhaltiger Verunx-eini-gungen nicht mehr enthielt und daß die ersten drei Ätherextrakte das Penicillin in im wesentlichen reinem Zustand enthielten. Die Ätherextrakte wurden vereinigt, mit Eiswasser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vaicuum vollständig eingedampft. Der erhaltene Feststoff wog nach längerem Trocknen im Vakuum 500 mg. Die IR- und NMR-Spektren bestätigten die angegebene Struktur des Penicillins. Die geschützte Reinheit betrug 80 bis 85 $.

Die Teilaiialyse des IR-Spektrums des Endproduktes (KBr-Scheibe, Werte in cm" ) ergab die folgenden Werte:

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± 3440 HH (wahrscheinlich CO-HH₂)

ί 3330 HH (wahrscheinlich CO-HH)

+, 3210 HH (wahrscheinlich gebundenes HH)

2500 - 2650 OH (Carboxyl) \

1780 C=O ß-lactam j

ί 1720 C=O (Carboxyl)

1690 und 1660 C=O von CO-HH und CC

1598 aromatisches C=C und HH₂ Deformation

ί 1525 wahrscheinlich HH Deformation

1395, 1430 Isoxazolring-Absorptionen

790 C-Cl und aromatisches Substitutionsmuster.

Beispiel 21

Herstellung von 6-i-[3-Hethylisoxazol-5-yl!-acetamido} penicillansäure

C CH _o . _„

Il I! H H V-S /5

H C - CH₉ - C - H - C — C C

\ _Λ/ ^ Il

0 CH.

C H C

^NCOOH

Im wesentlichen gemäß dem in Beispiel 2 beschriebenen Verfahren wurden 282 mg (2 mMol) 3-Methylisoxazol-5-yl-essigsäure mit 628 mg (2 mMol) Trimethylsilyl-6-isocyanatopennicillanat in 10 ml trockenem Dichlormethan in Gegenwart

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ORIGINAL JNSPECTED

von drei Tropfen H-Isopropylbenzimidazol als Katalysator umgesetzt, lach dem üblichen Aufarbeiten der Reaktionsmischung erhielt man ein schwachgefärbtes Produkt, das gemäß der Dünnschichtchromatographie und der IR- und IWiR-Spektren eine gute Reinheit aufwies.

Die Analyse des NMR-Spektrums des in etwas D₂O versetzten Hexadeuterodimethylsulfoxyd gelösten Produktes (60 Mc, * cA-Werte in ppm, Tetramethylsilan als interner Standard) ergab die folgenden Werte:

Isoxazolyl C,-H 6,22

C₅-H und Cg-H 5,50 (2 Protonen)

C₂-H 4,32

CH₂-CO- 3,82 (2 Protonen)

Isoxazolyl-CH, 2,23

C₅-(CH₃)₂ 1,65 und 1,52

Die Teilanalyse des IR-Spektrums des Endproduktes (in KBr, Werte in cm~ ) ergab die folgenden Werte:

± 3500	OH Carboxyl
3350	IiH
1780	C=O ß-Lactam
1740	C=O Carboxyl
1670	C=O Amid
1380 - 1430	Isoxazolring-Absorptionen,

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2166487

B e i spi el

Herstellung von 7-£-r3~Methylisoxazol-5-yl]-acetamidol· c eplxalo oporan säur e

J TT

c c

.-Il Il HH

IT .C - CH₉ - C - H - C C 'CH₉

^u oil I

_n<s=C H C-CH₀-O-C-CH,

0 \ s^ 2 „ 3

'· 0

COOH

Gemäß dem in Beispiel 3 "beschriebenen Verfahren wurde 3-Hethylisoxazol-5-yl-acetylchlorid (hergestellt aus 4»5 mMol 3-Methylisoxazol-5-yl-essigsäure und Thionylchlorid) mit H,0-Bis_Ttrimethylsilyl-7-ainino-cephalosporanat (hergestellt aus 1,224 mg (4,5 mMol) 7-Am.inocephalosporansäure) umgesetzt.

Nach der Reaktion und dem Aufarbeiten der Reaktionsmischung erhielt man 790 mg (44 $). eines schwach-gelb gefärbten Produktes mit einer Reinheit gemäß der DünnschichtChromatographie der IR- und M-IR-Spektren von etwa 70 ^.

Die Analyse des MIR-Spektrums des Endproduktes, gelöst in einer Mischung von Deuterοchloroform und Hexadeuterodimethylsulfoxyd, der etwas D₂O zugesetzt war, (60 Mc, cf-Werte in ppm, Tetramethylsilan als interner Standard) g_ab die · folgenden Werte:

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Isoxazolyl C.-H 6,12

C₇-H 5,75 und 5,66 (J^ 4,5 cps, 1 Proton)

C₆-H 5,05 und 4,97 (J^4,5 cps, 1 Proton)

CH₂-CO- 3,78 (2 Protonen)

Q-CH₂- 5,22 —> 4,68 (J^ 13 cps, 2 Protonen)

S-CH₂ 3,80 —> 3,15 (J^ 18 cps, 2 Protonen)

CO-CH₅ 2,07

Isaxazolyl-CH* 2_f25

Die Seilanalyse des IE-Spektrums des Endproduktes (EBr,

—1
Werte in cm ) ergab das Folgende:

£3280	OH
1780	C=O ß-Laetam
1750	C=O Ester
1670	C=O Amid
1230	C-O-C Ester
1380 und 1420	Isoxazolring-AbSorptionen.

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2166A67

Beispiel 23

Herstellung des Eatriumsalzes der 6-icu(i\T--Phenyl)-carbamyl~

[3r(2,6-dichlor)-phenylisoxazol-5-ylJ-acetamidol-penicillan-ⁱ-

säure

.C - CH - C - Ή - CH—CH C(CHj₀

I ti i -> *-

■Η

c—ν c

^NC001Ta

Eine Lösung von 1,0 g (2,9 mMol) H-Phenyl-3-(2,6~dichlor)-phenylisoxazol-5-yl-acetamid in 15 ml trockenem Tetrahydrofuran wurde auf -70⁰C abgekühlt. Bei -70⁰C wurden nacheinander tropfenweise eine vorgekühlte Lösung von etwa 2,9 mMol n-Butyllithium in 5 ml einer Mischung von n-Hexan und trockenem Tetrahydrofuran, und anschließend 0,44 ml (etwa 2,9 mMol) U,IT,N¹ ,IP-Tetramethyläthylen-diamin zugesetzt und schließlich wurde eine vorgekühlte Lösung von 2,9 mMol n-Buty!lithium in 5 ml einer Mischung von n-Hexan und trockenem Tetrahydrofuran zugegeben«, Die Reaktionsmischung wurde während 1 v/eiteren Stunde bei -70⁰C gerührt. Zu dem in dieser V/eise hergestellten Reagens gab man anschließend tropfenweise bei -7O⁰C eine Lösung von 0^91 g (2,9 mMol) Trimethylsilyl-ö-isocyanato-penicillanat in 5 ml trockenem Toluole Nach Beendigung der Zugabe ließ man die Temperatur der Reaktionsmischung auf -50⁰C ansteigen und rührte die Reaktionsmischung bei dieser Temperatur während

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etwa 30 Minuten. Dann wurden die Reaktionsmisehung und verdünnte Chlorwasserstoffsäure gleichzeitig zu einer auf O⁰C abgekühlten gutgerührten Mischung von 30 ml Wasser und 30 ml Diäthyläther gegeben. Die Zugaben wurden so ausgeglichen, daß sich während der gesamten Neutralisation ein pH-Wert von etwa 7,5 einstellte. Die entstehenden Schichten wurden getrennt und die Wasserschicht wurde zur Reinigung einmal mit 30 ml Diäthyläther und einmal mit 30 ml Äthylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten und die Wasserschicht wurden dünnschichtchromatographisch (zur Peststellung der schwefelhaltigen Verbindung) untersucht, wobei als Elutionsmittel e.ine 98:2-Mischung von Diäthyläther und Ameisensäure verwendet wurde. Die vereinigten organischen Schichten, die keine derartigen Verbindungen enthielten, wurden verworfen. Das Chromatogramm der Wasserschicht zeigte vier gut entwickelte Flecken, drei kleine Flecken und einen Hauptflecken.

Die kleineren Flecken wurden den Abbauprodukten, WjlT'-Dipenicillanyl-harnstoff und n-Butylcarbonamidopenicillansäure, zugesprochen. Die Ef-Werte der beiden letzteren Flecken waren gleich des Flecken der wirklichen Penicilline. Um die Verbindung, die für den vierten und den Hauptflecken des Ohr oma to gramas verantwortlich war, abzutrennen, wurde die Wasserschicht bei pH 4,9 "und pH 3»6 mit 30 ml Diäthyläther extrahiert, was zu einer vollständigen Abtrennung der gewünschten Verbindung aus der Wasserschicht führte. Das verbleibende Material und ein Teil der dritten Verbindung (voraussichtlich n-Butylpenicillin) wurden durch Extraktion bei pH 3»3 mit einer 2:1-Mischung von Diäthyläther und Äthylacetat abgetrennt. Um das liebenprodukt zu entfernen wurde diese Schicht wiederholt mit Eiswasser mit einem pH-Wert von 4,6 gewaschen, was 3i< einem dritten, fast reinen Extrakt und einer Anzahl von

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Waschwässer, die noch erhebliche Mengen des gewünschten Produktes enthielten, führte. Der vierte Extrakt wurde durch Extraktion der vereinigten Waschwässer mit Äthylaceta.t bei einem pH-Wert von 6,0 erhalten. Die vier Extrakte wurden vereinigt, mit Eiswasser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Die eingeengte Lösung der gewünschten Verbindung in Äthylacetat wurde mit einer konzentrierten Lösung von Hatrium-ß-äthylcapronat in Äthylacetat behandelt. Das llatriumsalz des Penicillins wurde aus dieser Lösung durch Zugabe von trockenem Diäthyläther ausgefällt. Der Ifiederschlag wurde dxirch filtration gesammelt, mit Diäthyläther gewaschen und bis zu einer Gewichtskonstanz getrocknet» Ausbeute 580 mg. Das Endprodukt wurde dünnschichtchromatographisch und hinsichtlich der IR- und HMR-Spektren untersucht, wodurch die angegebene Struktur bestätigt wurde und festgestellt wurde, daß die Verunreinigungen des Endproduktes eine geringe Menge Natriua-a-äthylcapronat und eine geringe Menge von Abbauprodukten waren.

Die Teilanalyse des IR-Spektrumc des Endproduktes und des Ausgangsproduktes (gelöst in Chloroform, Konsentration etwa 10 mg/ml, Werte in cm~ ) ergab die folgenden Vierte:·

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Endprodukt N-Phenyl~3-(2,6~dichlor)-

phenylisorazol-5-ylacetamid

± 3420 NH , ■ 3430 NH (wahrscheinlich
C₆H₅-NH-CO-)

± 3300 NH (breit)

1775 C=O ß-Lactam (intensiv) - 1705 C=O Amid

(sehr intensiv) 1695 C=O Amid (intensiv)

.1600 C=O Carboxylation und 1598 C=C arom.

C=O arom. (intensiv)

(sehr intensiv)

1558 C=C und/oder C=N 1557 C=C und/oder C=N

(scharf, mittlere (scharf, mittlere Inten-Intensität) sität)

1500 - 1550 wahrscheinlich BH + _{152Q wahrscheinlicll m}

1495 C=C arom. (mittlere 1496 C=C arom.

Intensität; (mittlere Intensität)

£ 1440 mittlere 1 Isoxaaol- 1435 inte'nsiv") Isoxazol-Intensität L ring- ( ring-

1380 mittlere \ ^ΤΓ 1380 mittlere ( Intensität J ^tlonen Intensität J

783 785 ")

(KBr-Scheibe) C-Cl (intensiv) (lO3r-Scheibe) ( C-Cl

rjrjn [ mittlere

(KBr-Scheibe)J Intensitäten

(KBr-Scheibe) wahrscheinlich aro- 755 (ICBr-Scheibe) wahr-

matisches Substi- scheinlich aromatisches tutionsmuster Substitutionsmuster (mittlere Intensität) (mittlere Intensität)

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Beispiel 24

Herstellung von 7-£~[3~(4~lYitro)~phenylisoxazol-5-yl]-acetamido' -cephalospor-ansäure

II y

C-UH- CH-CH

Il IS

— I ^C-CH₂-O-C-

COOH

G-eiaäß dem in Beispiel 3 beschriebenen Verfahren wurden 5-.(4-Hitro)-phenylisoxazol-5-yl~acetylchlorid (hergestellt aus 1,64 g (6j6 laliol) der entsprechenden Essigsäure und Thionylchlorid) mit H,0-Bis~trimethylsilyl~7-aminocephalosporanat (in situ aus 1,8 g (6,6 mMol) 7-Aminocephalosporansäure hergestellt) umgesetzt. Das Reaktionsprodukt wurde in üblicher Weise aufgearbeitet. Man isolierte 1350 mg (40 °/o) eines schwachgelb gefärbten Peststoffes. Gemäß der Dünnschiclitchromatographie, der IR- und ITMR-Spektren betrug die Reinheit des Endproduktes etwa 85 fo_t

Die Analyse des IJMi-Sρektrums des Endproduktes, gelöst in Hexadeuterodimethylsulfoxyd (60 Me, cf-Werte in ppm, interner Standard 2,2~Dimethylsilapentan-5-sulfonat) ergab die folgenden Werte:

N-H 9,36 und 9,22 (J = 8,0 ±0,5 cps, etv/a'0,8 Protonen)

C₆H₁ 7,9 —> 8,5 (AA'BB' Aufspaltungsmuster,

4 Protonen)

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-66- .2186467

Isoxazolyl C.-H 7,05 (1 Proton)

C₇-H 5,87, 5,79, 5,73 und 5,65

(schwach verbreiterte Signale,

Jc* 8,0 cps und Jjtd^^jÖ cps, 1 Proton)

C.-H 5,19 und 5,11 (j._p = 4,6 ± 0,2 cps)?

0-CH₂ (5,19), 4,97, 4,82 und 4,60 \ tcmeS

CJiB = ¹5,0 ± 0,2 cps) J ^toneri

CHp-CO bei 4,0 (schwach verbreitertes Singulett,

2 Protonen) :

S-CHp bei 3,6 (Zentrum eines AB-Quartetts mit

sehr schwachen äußeren Linien, 2 Protonen)

CO-CH₅ 2,06 (3 Protonen.

Beispiel 25

Eine Menge von 100 bis 2000 mg des JJatriumsalzes der 7-{-[3-(2,6-Dichlorphenyl)-isoxazol-5-yl]-acetamido}-cephaloöporansäure viird aseptisch in eine für injizierbare Zusammensetzungen geeignete Ampulle eingeführt. Vor der Verwendung wird das Pulver in einer geeigneten Menge sterilen« und pyrogenfreien Wassers gelöst.

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Beispiel 26

Aus den Verbindungen der Beispiele 1 bis 24 wurden Sirupe durch. Vermischen der folgenden Bestandteile hergestellt:

alz. der verwendeten Verbindung 1,5 - 6 g

lösliche Stärke 1 -3g

liatriurasacharin 0,1 - 1 g

,_T. _Jr 1 (Methylester der p- _ __r

2fxpa l-i j Hydroxybehzoesäure) °'⁰⁶ S

Erdbeer-Aroma · 0,1 - 5 g

Amaranth · 0,010 g

Sa.ccharose 30 g

"Wasser auf ein Volumen von - 60 ml

Diese Sirupe sind zur oralen Verabreichung geeignet

Beispiel 27

Kapseln wurden üblicherweise hergestellt; die als aktiven Wirkstoff eine Verbindung gemäß den Beispielen 1 bis 24 enthielten. Die Bestandteile der Kapseln sind die folgenden:

Uatriumsalz der verwendeten Verbindung 150-500 mg Kaliumbicarbonat 100-300 mg

Magn e siu.m s t earat 2-10 mg

Lactose (in ausreichender Menge für 1 Kapsel)

Diese Kapseln können oral verabreicht werden.

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Beispiel 28

In üblicher Weise wurden Tabletten hergestellt, die als aktiven Bestandteil eine Verbindung gemäß den Beispielen 1"~ bis 20 enthielten, I

Die Bestandteile der Tabletten sind die im folgenden angegebenen:

Hatriumsalz der verwendeten Verbindung 125-500 mg

. Polyvinylpyrrolidon 5-50 mg

- AmyTum-Mais 100-500 mg

Magnesiumstearat 1—20 mg

Lactose (in ausreichender Menge für 1 Tablette)

Diese Tabletten können oral verabreicht werden.

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Claims (1)

1. Patentansprüche

   B eine Uiedrigalkyl- oder eine Aryl-, wie eine Phenyl- oder eine Naphthylgruppe, die gegebenenfalls 1 oder mehrere Substituenten, wie Chloratome, ITuoratome, nitrogruppen-, Aminogruppen oder Kiedrigalkylgruppen tragen, vorzugsweise die '2,6-Mchlorphenylgruppe bedeutet oder E eine tertiäre Alkylgruppe, wie eine Adamantylgruppe, darstellt,

   Ί
   E ein Viasserstoffatom oder eine ITiedrigalkylgruppe oder eine gegebenenfalls mit einer Niedrigalkylgruppe veresterte. oder in ein Alkalimetallsalz, ein Eräalkalimetallsalz oder . ein Aminsalz überführte Carboxylgruppe, eine Carbaniy!gruppe, eine Cyanogruppe, eine Aminogruppe oder ein Chloratom, H² ein V/asserstoffatom, ein Chlor- oder Bromatom, eine Cyanogruppe, eine Aminogruppe, eine Niedrigaralkoxycarbonylaminogruppe, eine Niedrigalkylgruppe, eine Carboxylgruppe, die mit einer Niedrigalkylgruppe, Arylgruppe, wie einer Phenylgruppe oder einer Aralkylgruppe, wie einer Benzylgruppe verestert ist, oder eine Carbamoylgruppe, die gegebenenfalls am Stickstoffatom einen iiiedrigalkyl- oder Phenylsubstituenten trägt, bedeutet, und die Alkalimetallsalze, die Erdalkalimetallsalze und die Aminsalze, die Ester, wie die Tri-(niedrig)-alkylsilylester, die Di-(niedrig)-alkyl-monohalogensilylester, die Benzylester, die Phenacylester oder die Amide, wie die Saccharylderivate der genannten Penicillänsäuren und Cephalosporansäuren.

   2, Verbindungen gemäß Anspruch 1_$ dadurch gekennzeichnet, daß die Gruppe R in der Formel Ί eine Methyl-, Äthyl-,

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   Prqpyl-, Butyl-Gruppe, eine gegebenenfalls durch eine oder mehrere Substituenten, wie Chloratoine, Fluoratome, Nitrogruppen, Aminogruppen, Methylgruppen oder Äthylgruppen substituierte Phenylgruppe oder eine tertiäre Alkylgruppe, wie eine Adamantylgruppe, R ein Viasserstoff atom, eine Methyl-, Äthyl-, Propyl-, Butylgruppe oder eine Carboxylgruppe, die gegebenenfalls mit einer Methyl-, Äthyl-, Propyl- oder Butylgruppe verestert oder in ein Natrium-, Kalium-, Kalzium- oder Aminsalz überführt ist, oder R eine Carbamyl-, Cyano- oder Aminogruppe oder ein Chlor- .

   atom und R ein Wasserstoffatom, ein Chlor- oder Bromatom, eine Cyano-, Amino-, Benzyloxycarbonyl-

   "amino-, Methyl-, Äthyl-, Propyl- oder Butylgruppe, eine ■ mit einer Methyl-,.Äthyl-, Propyl-, Butyl-, Phenyl- oder Benzylgruppe veresterte Carboxylgruppe oder eine Carbaraoylgruppe, die gegebenenfalls am Stickstoffatom einen Kethy1-, Äthyl-, Propyl-, Butyl- oder Phenyl-Substituenten trägt, bedeuten, sowie die Ifatrium-, Kalium-, Kalzium- und Aminsalze, die Triiaethylsilyl-, Diraethylmonohalogensilyl-, · ffriäthylsilyl-, Diäthylmonohalogensilyl-, Benzyl- und Phenacylester und die Saccharinyl-, Succinimido- oder Phthaliraido - Derivate dieser Penicillan- und Cephalosporan-Säuren*

   3. · Verbindungen gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß R die 2,6-Dichlorphenyl- oder die 2,6-Chlorf Iu or phenylgruppe, R ein V/asser stoff atom oder eine Methyl-

   2
   gruppe, R ein Vasserstoffatom oder eine Hethylgruppe und * Q einen Cephalosporansäurerest bedeuten, sowie die Salze dieser Verbindungen,

   4· 6~C-[3-(2,6-Dichlorphenyl)~isoxazol~5-yl]~acetamidoj-penicillansäure und deren Salze·

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   5. 6-{-[3-(2,4,6-Trimeth.yl)-plienyl-isoxazol-5-yl]-

   acetamido}-penicillansäure und deren Salze.

   6. ö-{cc-Chlor-[3-{2,4,6--triraethyl)-phenylisoxazol-5-yl]-acetainiao}-penicillansäure und deren Salze.

   7. 6-{-{J3-(2,6-Oidiior)-plienyl-4-methylisoxazol-5-yl]--acetamido]-penicillansäure und deren Salze.

   8. 6- £a~Methyl~[ 3- ( 2,4,6-Trimethyl)-plienyl-isoxazol-5-yl]-acetamido}-penicillansäure und deren Salze.

   g _# 6~i ~ [ 3- ( 2,6-Dichlor ) -phenyl-4-carbaiaylisoxazol-5~yl ]-

   acetamidoj-penicillansäure und deren Salze.

   10. 6-{-[3-(2,6~Mchlor)-phenyl-4-cyano~isoxazol~5

   yl]-acetamido}~penleillansäure und deren Salze.

   ΛΛ . 6„£..[3_( 1 )~Adaraan-fcyl-isoxasol-5-yl!-acetamido}

   penicillansäure und deren Salze. ·

   12. 6-{<C~(p-lIitro)~benzyloxycarbonylaraino-[3-(2,6-' dichlor)-phenylisoxazol-5-yl!-acetamido}-penicillansäure und deren Salze. . .

   13. - 6-£^-Amino-[3-(2,6-diclilor)-phenyl-isoxazol-5-ylj-acetamido]-penicillansäure und deren Salze.

   6-i-[3-(4-liitro)~plienylisoxazol-5-yl]-acetainido} penicillansäure und deren SaJLze.

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   15. o-icty^^jJpy 5-yl]-acetamidoj-penicillansäure und deren Salze.

   16. 6-f-(3-Methyl-isoxazol-5-yl)-acetamido] -penicillan säure und deren Salze.

   17. 6~{tt~(M-Plienyl)-carbamyl~[3~(2,6-dichlor)~phenylisoxazol-5~yl]-acetamidoj~penicillansäure und deren Salze,

   18. 6-{-[«3-(2,6-Dichlor)-phenyl-4-carboxy-isoxazol-5-yl]-acetamiao^-penicillansäure und deren Salze.

   19. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen geaäß Anpruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man

   a) ein Salz, einen Ester oder ein Amid einer 6-Aminopenicillansäureverbindung der allgemeinen Formel

   H₂N-C-O c: ^ —«—ο;

   umsetzt mit entweder

   1) einem aktiven Ester, wie einem 2,^-Dinitrophenylester, p-Nitrophenylester oder N-Hydroxysuccinimidester einer Säure der allgemeinen formel

   R R¹

   R² (VI)

   /■- C - COOH

   1 P

   in der R, R und R~ die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung besitzen, v.'obei jedoch die Substituenten R, R und

   ρ
   R, die unter den Reaktionsbedingungen reagieren oder beeinflußt werden können, geschützt sind

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   oder mit

   2) einem aktiven funktionellen Derivat, das als Acylierungsmittel für eine primäre Aminogruppe geeignet ist, wie .Carbonsäurechloriden-bromiden, Säureanhydriden einschließlich gemischten Anhydriden aus stärkeren Säuren, wie niedrigen aliphatischen Monoestern von Carbonsäuren, Alkyl- und Arylsulfonsäuren und sterisch gehinderteren Säuren, wie Dipheny'lessigsäure

   oder mit

   j5) einem Säureazid oder aktiven Thioester, wie mit .

   Thiophenol oder Thioessigsäure^ der Saure der Formel VI

   oder mit

   4) der freien Säure der Formel VI selbst unter Verwendung eines Carbodiimidreagens

   oder mit ■ .

   5) einem Azolidj närnlich einem Amid der entsprechenden Säure, dessen Amidstickstoff Teil eines quasi-aromatischen 5-gliedrigen Ringes ist, der zumindest 2 Stickstoffatome enthält wie Imidazol, Pyrazol, Triazole, Benzimidazol, Benzotriazol und substituierte Derivate hiervon unter nachfolgender .Umwandlung des Esters, des Salzes oder des Amids

   des Produktes, das nach den vorgenannten Verfahren erhalten wird, in die entsprechenden substituierten Penicillansäuren nach an und für sich "bekannten Methoden oder gegebenenfalls Umwandlung dieser erhaltenen Säuren in die entsprechenden

   Salze oder Ester
   oder, daß man
   b) einen Ester oder ein Amid der ö-Isocyanatopenicillansäure

   umsetzt mit entweder

   1) einer Säure der allgemeinen Formel VI, in der R, R und

   R die vorstehend angegebene Bedeutung besitzen, wobei

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   1 ?

   die Substituenten R, R und R , die unter den Reaktionsbedingungen reagieren oder beeinflußt v/erden können, geschützt sind, in einem inerten organischen Lösungsmittelmedium, wie Toluol, Dichlorine than oder Benzonitril und vorzugsweise in Gegenwart einer organischen 3ase, wie eines substituierten Imidazols,

   oder mit

   2) einer Organometallverbindung der Formel A-Me , A-Me-HaI oder A-Me-A, worin A die Gruppe

   ί I

   R² (YII)

   H -C-

   bedeutet, Me ein Metallatom, wie Lithium, Natrium oder Magnesium, die· Zahl I oder II deren Wertigkeit und Hai ein Halogenatom, vorzugsweise ein Chlor- oder Bromatom, bedeuten._f in einem wasserfreien organischen Lösungsmittelmedium unter Bedingungen, die Reaktionen des Grignard-Reformatsky- oder eines analogen Typs begünstigen, mit anschließender Entfernung des Metallions und/oder der Schutzgruppen aus den so erhaltenen Produkten, wie : durch Hydrolyse, unter Bildung der entsprechenden Penicillansäuren und gegebenenfalls überführung der er- ' haltenen Säuren in deren Salze oder Ester.

   20. Pharmazeutische Zusammensetzungen, dadurch gekennzeichnet, daß sie eine oder mehrere Verbindungen gemäß den Ansprüchen bis 18 sowie ein geeignetes pharmazeutisch verträgliches Trägermaterial enthalten. .

   409807/1068 ORfGiNAL INSPECTED