DE2166468A1 - Neue isoxazolylderivate und verfahren zu deren herstellung - Google Patents

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Dr. F, Zumstein sen, - Dr. E, Ass mann Pr, R, Koenlgsberger « Dlpl.-Fhys. R, Holzhauer - Dr. F. Zumsiefn jun,

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KOHINKLIJKE IiEDERLANDSCHE GISI- EN SPIRIIUSMBRIIK N.V,,

Delft / NIEDERLANDE

Neue IsoxazoIy!derivate und Verfahren zu deren Herstellung (Ausscheidung aus Patent ..-..., .(Patentanmeldung P 21 55 081.2)

Die vätliegende Erfindung betrifft neue therapeutisch nützliche Penicillansäure- und Cephalosporansäure-Derivate, Verfahren zu deren Herstellung und diese Verbindungen enthaltende pharmazeutische Zusammensetzungen.

Die neuen erfindungsgemäßen Penicillansäure- und Cephalosporansäure-Derivate sind Verbindungen der folgenden allgemeinen Formel I

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ORIGfNAL iNSPECTED

H -C - C

R* O

H If-Q

worin Q eine Gruppe der Formeln

-C

N-

oder

'COOH

(II)

-ΟΙ 0-

Sj.

(D

CH₂ ^₀-CH₂X

OOOH

(III)

darstellt,

worin X ein- Wasserstoffatom, eine Hydroxygruppe oder eine Niedrigalkanoyloxygruppe bedeutet oder die Gruppe -CH₂X und die Carboxylgruppe der lOrmel III unter Bildung einer Lactongruppej d.h. einer Gruppe der IOrmel

-C-O-CH₀-

Il ^

oder unter Bildung einer Lactamgruppe, d.h₀ einer Gruppe der !formel

-C-NH-CH₉

If <~

0
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ORfG(NAL INSPECTED

21664&8

verbunden sind, R eine Niedrigalkylgruppe oder eine Arylgruppe, z.B. eine Phenylgruppe oder eine Naphthylgruppe, die gegebenenfalls ein oder mehrere Substituenten, wie Chloratoine, HLuoratome, Nitrogruppen, Aminogruppen oder Niedrigalkylgruppen trägt (vorzugsweise die 2,6-Dichlorphenylgruppe darstellt) oder eine tertiäre Alkylgruppe, wie die" Adamantylgruppe, bedeutet. R ein Wasserstoffatom oder eine Alkylgruppe oder eine gegebenenfalls mit einer niedrigen Alkylgruppe veresterte Carboxylgruppe oder eine in ein Alkalimetallsalz, ein Erdalkalimetallsalz oder ein Aminsalz umgewandelte Carboxylgruppe, eine Carbaraylgruppe, äne Cyano-

2 gruppe, eine Aminogruppe oder ein Chloratom, R ein Wasserstoffatom, ein Chlor- oder Bromatom, eine Cyanogruppe, eine Aminogruppe, eine

Uiedrigaralkoxyearbonylaminogruppe, eine ITiedrigalkylgruppe oder eine mit einer Niedrigalkylgruppe, einer Arylgruppe (vorzugsweise einer Phenylgruppe) oder einer Aralkylgruppe' (vorzugsweise einer Benzylgruppe) substituierte Carboxylgruppe bedeuten, oder worin R eine Carbamoylgruppe darstellt, die gegebenenfalls am Stickstoffatom eine Hiedrigalkylgruppe oder einen Phenylsubstituenten trägt und die Alkalimetallsalze, die Erdalkalimetallsalze und die Aminsalze, die Ester (z.B. die Tri-(niedrig)-alkylsilylester, die Di~(niedrig)-alkyl-monohalogensilylester, die Benzyl-' ester oder die Phenacylester) und die Amide (z.B. die Saccharylderivate) der genannten Penicillansäuren und Cephalosporansäuren. Der Ausdruck "niedrig", wie er in der vorliegenden Beschreibung in bezug auf die Alkyl- oder Alkanoylgruppen angewandt wird, bedeutet, daß die Gruppe höchstens 4 Kohlenstoffatome enthält.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können nach mehreren verschiedenen Verfahren hergestellt werden, die jeweils eine Anwendung eines bekannten Verfahrens zur Herstellung von Penicillinen und Cephalosporinen darstellen.

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Erfindungsgemäß werden die Verbindungen der allgemeinen Formel hergestellt, indem man ein Salz, einen Ester oder ein Amid einer 6-Aminopenicillansäure- oder 7-Aminocephalosporansäure-Verbindung der Formeln:

H - C C

H - C-

oder

•Ν-

COOH

O'

■S""

(V)

r .c- CH₉X

COOH

■worin X die oben angegebene Bedeutung besitzt, wobei der Substituent X, wenn er eine Hydroxygruppe darstellt, vorzugsweise geschützt ist mit einem aktiven Ester (z.B. einem 2,4— Dinitrophenylester, einem p-Nitrophenylester oder einem Ή-Hydroxysuccinimidester) einer Säure der allgemeinen Formel VI

H - C

COOH

1 2
worin R, R und R die oben angegebenen Bedeutungen besitzen, oder mit einem aktiven funktionellen Derivat, das als Acylierungsmittel für eine primäre Aminogruppe geeignet ist, umsetzt. Derartige Derivate schließen die entsprechenden Carbonsäure-

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-, 5 —

chloride, Carbonsäurebromide, Säureanhydride einschließlich der a,us stärkeren "Säuren, wie niedrigen aliphatischen Kohlensaurem onoest er η, Alkyl- oder Arylsulfaisäurai und sterdsch gehinderten Säuren, wie Diphenylessigsäure hergestellten gemischten Anhydride ein.

V/eiterhin kann ein Säureazid oder ein aktiver Thioester (z.B. mit Thiophenol oder Thioessigsäure) der Säure verwendet Werden.

Alternativ kann die freie Säure selbst unter Verwendung eines Carbodiimid-Reaktionsteilnehmers mit der 6-Aminopenicillansäure- oder 7--Arainocephalosporansäure-Verbinäung gekuppelt werden,, Anstelle der 2,4-Dinitrophenyl- und p-ITitrophenyl-Ester kann ein entsprechendes Azolid, d.h. ein Amid der entsprechenden Säure, dessen Amid stickstoff , ' Teil eines quasi-aromatischen 5-gliedrigen Ringes ist, der wenigstens zwei Stickstoffatome trägt, d.h. Imidazole, Pyrazole, Triazole, Benzimidazol, Benztriazol und die substituierten .Derivate dieser Verbindungen verwendet werden. ·

Die Verfahren zur Durchführung dieser Reaktionen unter Bildung eines Penicillins oder eines Cephalosporins und die Verfahren zur Isolierung der so hergestellten Verbindungen sind z.B. aus den britischen Patentschriften 932 644, 957 570, 959 054, 952 519, 932 530, 967 108 und 967 890 bekannt.

Das nach dem oben genannten Verfahren in Form des Esters, des Salzes oder des Amides erhaltene Produkt kann nach an sich bekannten Verfahrensweisen in die entsprechende Penieillansäure oder in die entsprechende Cephalosporansäure überführt werden, und so kann z.B. wenn ein Silylester (z.B. ein Trialkylsilylester) "de's 'Ausgangsmaterials der Formel IV oder V als Reaktionsteilnehmer verwendet wird, die veresternde Gruppe leicht unter Bildung der

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entsprechenden Säure der allgemeinen Formel I hydroylisiert werden.

Bin anderes erfindungsgemäßes Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der allgemeinen Formel I besteht darin, daß man eine Säure der allgemeinen Formel A-COOH (worin A eine Gruppe der folgenden Formel:

H - C

(VII)

12

bedeutet, worin R, R und R die oben angegebenen Bedeutungen besitzen und die im Rest A geeignet geschützte reaktive Gruppen aufweist, mit einer 6-Isocyanatopenicillansäure- oder einer 7-Isocyanato-(desacetoxy)-cephalosporansäure-Verbindung der Formel O=C=IT-Q (worin Q die oben angegebene Bedeutung besitzt), die Atome oder Gruppen aufweisen, die die Carboxylgruppe und gegebenenfalls die Hydroxygruppe, wenn sie vorhanden ist, d.h. wenn die Gruppe X in der Formel III eine Hydroxylgruppe bedeutet, schützen, umsetzt. Vorzugsweise ist die Gruppe, die die Carboxylgruppe oder die gegebenenfalls vorhandene Hydroxygruppe des 6-Isocyanatopenicillansäure- oder 7-Isocyanatocephalosporansäure-Reaktionsteilnehmers schützt, eine Di- oder Irialkylsilylgruppe, die leicht durch Hydrolyse von dem entstehenden Produkt abgetrennt werden kann.

Die Reaktion der Carbonsäure der Formel A-COOH mit dem Isocyanat der Formel OCIi-Q wird vorzugsweise in einem inerten

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organischen Lösungsmittelmedium, wie Toluol, Diechlormethan oder Benzonitril durchgeführt. Eine geringe Menge einer, organischen Base, z,B. ein substituiertes Imidazo!, kann dabei als Katalysator dienen. Die Reaktion verläuft gemäß dem im folgenden für Penicillansäurederivate angegebenen Reaktionsschema 6

A-COOH + O=C=N-CH - CH C ^J ^ A-CO-NH-CH - CH C ^

¹ CH₃ I I |^NCH₅+C0₂

_C N CH ^C-—-N CH - COOE

COOE °

worin E eine die Carboxylgruppe während der Reaktion schützende Gruppe darstellt, die nach der Reaktion beispielsweise durch Hydrolyse abgetrennt wird.

Ein weiteres Verfahren zur Herstellung der Penicillansäure- und Cephalosporansäurederivate der allgemeinen Formel I besteht darin, daß man eine ö-Isocyanatopenicillansäure- oder T-Isocyanatocephalosporansäure-Verbindung' der Formel O=C=N-Q (worin Q die oben angegebene Bedeutung besitzt), deren Carboxylgruppen oder gegebenenfalls vorhandenen Hydroxygruppen in geeigneter Weise geschützt sind, mit einer metallorganischen Verbindung der Formel A-Me , A-Me-HaI oder A-Me -A (worin A die oben angegebene Bedeutung besitzt), Me ein Metallatom, z.B. ein Lithium-, Natrium- oder Magnesium-Atom bedeutet, die Zahl I oder II die Wertigkeit des Metalles angibt und Hai ein Halogenatom (vorzugsweise ein Chlor- oder Brom-Atom) bedeutet, umsetzt, und man zur Abtrennung des Metallions und der die Carboxylgruppe schützende hydrolysierbare Gruppe das erhaltene Zwischenprodukt hydro-

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lysiert. Die Reaktion wird in einem wasserfreien organischen Lösungsmittelmedium unter Bedingungen, die eine Reaktion der Grignard-Art, der Reformatsky-Art oder eine Reaktion ähnlicher Art begünstigen, durchgeführt.

Die Isocyanatausgangsmaterialien der allgemeinen Formel O=C=N-Q (worin Q die oben angegebene Bedeutung besitzt) können erhalten werden, indem man Phosgen mit einem Penicillansäure- oder Cephalosporansäure-Derivat der allgemeinen Formel W-IT-Q umsetzt, wobei W ein Wasserstoffatom oder eine derartige Gruppe bedeutet, daß die Gruppe W-EH- leicht durch Reaktion mit Phosgen in eine Isocyanaotgruppe überführt v/erden kann, wobei die Gruppe Q die oben angegebene Bedeutung besitzt und wobei die Carboxylgruppen und die gegebenenfalls vorhandenen Hydroxygruppen in geeigneter Weise geschützt sind. Die Gruppe W des Ausgangsmaterials kann gleichzeitig bei der Einführung der Schutzgruppe für die Carboxylgruppe und die Hydroxylgruppe in die 6-Aminopenicillansäure- oder 7-Aminocephalosporansäure-Derivate eingeführt werden. Vorzugsweise ist die Gruppe V/ eine Tri-(niedrig)-alkylsilylgruppe_o Wenn die Gruppe W eine leicht abtrennbare Gruppe ist, verläuft die Reaktion derartiger Verbindungen mit Phosgen unter den gleichen Bedingungen glatter als es der Fall ist, wenn die Gruppe W ein Wasserstoffatom darstellt. Die Reaktion mit Phosgen muß in einem mit Hinsicht auf die Reaktivität der entstehenden Isocyanatgruppe inerten organischen Lösungsmittelmedium durchgeführt werden.

Toluol und Methylenchiorid oder Mischungen dieser Lösungsmittel sind besonders geeignet. Weiterhin kann zur Erleichterung der Reaktion eine organische Base zur Bindung des gebildeten Chlorwasserstoffs zugesetzt werden,, Vorzugsweise ist diese Base ein tertiäres Amin, wie Triäthylamin, das mit der Isocyanatgruppe nicht reagiert. Da hohe Temperaturen

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zu einer Zersetzung des Penicillansäure- oder Cephalosporansäure-Gerüstes führen würde, wird die Reaktion vorzugsweise bei sehr niedrigen Temperaturen, vorzugsweise bei -40⁰C, durchgeführt.

Die substituierten Isoxazol-5-yl-essigsäure-Ausgangsmaterialien der allgemeinen Formel VI, die im wesentlichen neu sind und somit einen weiteren Gegenstand der vorliegenden Erfindung darstellen, wurden gemäß den im folgenden angegebenen Verfahrensweisen hergestellt:

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OR-C=N

ο σ» co

R^J

R¹^C=C-CH-

Weg

R^C=C-CH₂COOH

*3

Weg

Weg

R
V

1) Butyllithium/TMEDA

2) CO₂; hS^O

Oxydation

1-CH₂CH₂OH

R^J

-CH₂COOH

(VIA)

N)

CD

CD ' OO

Die Ausgangsnitriloxyde können gemäß bekannten von Grundmann, Quilico et al., Synthesis 1970, 344 und Experienta 26_, 1169 (1970) beschriebenen Verfahren -und den darin zitierten Verfahren hergestellt werden.

Die,Reaktion mit n-Butyllithium in Gegenwart von Tetra-* methylendiamin (TMEDA) kann in aprotischen Lösungsmitteln, wie Toluol oder Tetrahydrofuran erfolgen. Der Weg 1 gestattet die größtmögliche Variation- der angestrebten Verbin-

■jdüngen. In gewissen Fällen wurde die Gruppe E nach der 1,3-dipolaren Additionsreaktion, jedoch vor der Behandlung mit Butyllithium -in eine andere Gruppe, z_oB. -COOH in die Gruppe -COIiH₂ oder -CH in die Gruppe -KH₂ überführt ,um die Synthese der Ausgangsacetylene, die in gewissen Fällen schwierig herzustellen sind, zu vermeiden, .

Die Einführung einer Gruppe E /£ H der Formel VIA kann direkt über den Weg 1 erfolgen, indem man anstelle von Propin 1-Butin.(E =CH„) verwendet.

Die anderen Verfahrensweisen sind die folgenden:

1) cc-Halogenierung von Verbindungen der Formel VIA, gegebenenfalls gefolgt von einer Umsetzung mit einem nukleophilen Mittel. Zum Beispiel wurde die oc-Aminosäure (Formel VI: E=2,6-Dichlorphenyl, E¹=H, R²=UH₂) über die cc-Bromierung des entsprechenden Methylisoxazol-5-ylacetats mit 1,3-Dibrom-5,5-dimethy!hydantoin, gefolgt von einer Hydrolyse und Reaktion der a-Bromsäure mit konzentriertem Ammoniak hergestellt. Dieses Verfahren ist eine verbesserte Synthese, die analog zu der von Ibotensäure ist, die in Chem.Pharm.Bull. J_4, 89 (1966) beschrieben ist. ■■._■■

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ORIGINAL (NSPECTED

2) Durch. Behandlung mit Lithium einführenden Mittel in der α-Stellung der Carbonsäuren der Formel VIA und Reaktion mit einem geeigneten Mittel·

Beispiele der neuen Verbindungen der allgemeinen Formel VI, die gemäß dem oben angegebenen Scitema hergestellt werden können, sind die Verbindungen dieser Formel, worin die Sub-

1 2

stituenten E, R und R die im folgenden angegebenen Bedeutungen besitzen.

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ζ:

co TJ

cn co

'R	Adamantyl	R1	H	R2	H	Br
4-Nitrophenyl	H	CH3	H ■	H
4-Aminophenyl	H	H	H	H
2,6-Dichlorphenyl	,H	H	- NH - C - O - CH0 ~<\ /V-NO0 Il d Vk // 2	NH2
	H	CH3	0 . ^ *	H
2,6-Dichlorphenyl		Cl	' C1 ;
2,6-Dichlorphenyl	H	NH2	CH3
2,6-Dichlorphenyl	- g - HH2	H
2,6-Dichlorphenyl	- C s N	H
2,6-Dichlorphenyl
2,4,6-Trimethylphenyl
2,4,6-Trimethylphenyl
2,4,6-Trimethylphenyl
2,6-Dichlorphenyl
2,6-Dichlorphenyl

— Ni

CD CX)

i Die neuen Penicillansäure- und Cephalosporansäure-Derivate der allgemeinen Formel I besitzen antibiotische Eigenschaften, die sie allein oder gemischt mit anderen Antibiotika potentiell nützlich für Menschen und Tiere machen· Einige der neuen Verbindungen der allgemeinen Formel I besitzen Wirkungen, die mit denen von Penicillin G vergleichbar sind. Sie besitzen besondere Wirkungen gegen gram-positive Organismen und zeigen weiterhin eine gute Wirkung gegen Penicillin-resistente Staphylokokken, insbesondere diejenigen Verbindungen, worin R die 2,6-Dichlorphehylgruppe,

1 2

R ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe, R ein Wasserstoffatom und Q eine Gruppe der Formel II oder III bedeuten und worin X eineAcetoxygruppe darstellt, sowie die Salze dieser Verbindungen., ·

Die erfindungsgemäßen Verbindungen werden vorzugsweise in Form eines nicht-toxischen Salzes, wie in Form der . Natrium-,, Kalium- oder Kalzium-Salze für therapeutische .... Zwecke eingesetzt. Andere Salze, die verwendet werden können, schließen die nicht-toxischen geeignet kristallisierenden Salze mit organischen Basen, wie Aminen, z.B. Trialkylaminen, Prokain und Dibenzylamin, ein. . .

Bei der Behandlung von Bakterieninfektionen, können die erfindungsgemäßen antibakteriellen Verbindungen sowohl topisch, oral und parenteral gemäß für die Verabreichung von Antibiotika üblichen Verfahren verabreicht werden." Sie werden in Dosiseinheiten verabreicht, die eine wirksame Menge des" aktiven Bestandteils in Kombination mit geeigneten physiologisch verträglichen Trägermaterialien oder Bindemitteln enthalten. Die Dosiseinheiten können in Form von flüssigen Präparaten, wie Lösungen, Suspensionen, Dispersionen oder Emulsionen oder in fester Form als Pulver, Tabletten, Kapseln und dergl. vorliegen.

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Demzufolge umfaßt die vorliegende Erfindung auch therapeutische Zusammensetzungen, die eine wirksame Menge, einer der erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem geeigneten inerten Trägermaterial oder Bindemittel enthalten. Derar.tj.ge therapeutische Zusammensetzungen können zusätzlich zu einer dieser Verbindungen auch ein oder mehrere zusätzliche therapeutische Bestandteile enthalten.

Der Ausdruck "wirksame Menge", wie er in bezug auf die beschriebenen Verbindungen verwendet wird, beschreibt eine Menge, die - wenn sie in üblicher Weise verabreicht wird das Wachstum des· betreffenden Mikroorganismus zerstört oder inhibiert bzw. mit anderen Worten eine Menge, die das Wachstum der Bakterien unter Kontrolle hält. Die Größe einer wirksamen Menge kann leicht durch den Fachmann gemäß Standardverfahren zur Bestimmung der relativen Aktivität von antibakteriellen Mitteln festgestellt werden, wenn sie gegen bestimmte Organismen über die verschiedenen Verabreichungswege verwendet werden.

Geeignete Trägermaterialien und Bindemittel können irgendwelche geeignete physiologisch verträgliche Bestandteile sein, die dazu dienen, die Verabreichung -der therapeutisch wirksamen Verbindung zu erleichtern. Die Trägermaterialien können eine zusätzliche Wirkung aufweisen und können als Verdünnungsmittel, als Geschmacksmaskierungsmittel, als Bindemittel, als Mittel zur Verzögerung der Wirkung, als Stabilisatoren und dergleichen dienen„

Beispiele für Trägermaterialien sind Wasser, das Gelatine, Gummiarabikum, Algenate, Dextran, Polyvinylpyrrolidin, Natriumcarboxymethylcellulose oder dergl. enthalten kann, wäßriges Äthanol, Sirup, isotonische Salzlösung, isotonische Glukose, Stärke, Laktose oder andere geeignete Materialien,

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die üblicherweise in der pharmazeutischen Industrie und in der Veterinärindustrie verwendet werden.

Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung umfaßt ein Verfahren zur Inhibierung des Wachstums von Bakterien durch Auftragen einer wirksamen Menge der erfindungsgemäßen antibakteriellen Verbindungen auf den Ort des Bakterienbefalls.

Zum Beispiel kann das Verfahren zur Behandlung von bakteriellen Infektionen von Tieren verwendet v/erden, indem.man einem Wirtstier eine wirksame Menge einer antibakteriellen Verbindung verabreicht.

Die vorliegende Erfindung soll durch die folgenden Beispiele weiter erläutert werden.

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Beispiel 1

Herstellung von 6-{-[3-(2,6-Dichlorphenyl)-isoxazol-5-yl]~ acetamidoj-penicillansäure (Natriumsalz)

OHHH η r t ι ,

C - CH₂ - C - N - C C

■N·

^COOlTa

In einem Dreihalskolben, der mit einem Gaseinlaßrohr, einem Thermometer und einem Tropftrichter versehen war, suspendiert man 755 mg (3,5 mMol) 6--Aminopenicillansäure in 10 ml Äthylacetat unter einer Stickstoffatmosphäre. Der Kolben wird dann in einem lisbad gekühlt und 0,51 ml (3,8 mMol) Triäthylamin werden zugesetzt, worauf man nach 10 Minuten 0,48 ml (3,8 mMol) Trimethylchiorsilan zusetzt. Man rührt während etwa 35 Minuten und gibt dann weitere 0,51 ml (3,8 mMol) Triäthylamin hinzu. Dann gibt man tropfenweise 3-(2,6-Dichlorphenyl)-isoxazol-5-yl-acetylchlorid (erhalten durch die Umsetzung von 3-(2,6-Dichlorphenyl)-isoxazol-5-yl-essigsäure mit Thionylchlorid in Mäthyläther mit einer Spur Dimethylformamid) in 5 ml Äthylacetat zu der Reaktionsmischung in einer derartigen Geschwindigkeit zu, daß die Temperatur nicht über 5°C ansteigt. Fach der Zugabe wird das Eisbad entfernt und man rührt weitere 90 Minuten bei Raumtemperatur.

Die Re.aktionsmischung wird dann unter Eiskühlung in eine Mischung von 20 ml Wasser und 20 ml Diäthyläther gegeben, wobei man den pH-Wert bei 6,8 hält. Die wäßrige Schicht wird

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noch einmal mit 30 ml Diäthyläther gewaschen. Die wäßrige Schicht wird nach der Zugabe von 40 ml Diäthyläther auf einen pH-Wert von 1,5 angesäuert. Nach der Abtrennung wird die wäßrige Schicht mit 30 ml Diäthyläther erneut gewaschen. Die organischen Schichten werden vereinigt und einmal mit 20 ml auf einen pH-Wert von 1,5 angesäuertem Eiswasser und dann mit 20 ml Eiswasser gewaschen. Nach dem Trocknen und der Behandlung mit Norit wird die organische Schicht auf etwa die Hälfte ihres Volumens eingeengt und dann wird Natrim-cu-äthylcapronat zugesetzt. Das ausgefällte Natriumsalz wird abfiltriert, mit Diäthyläther gewaschen und getrocknet» Die Ausbeute an der gemäß der DünnschichtChromatographie reinen Verbindung beträgt 550 mg (32 °/o).

Beispiel 2

Herstellung von 6-f-[3-(2,6~Dichlorphenyl)-isoxazol-5-yl]·- acetamido]-penicillansäure (Natriumsalz)

Ein 250 ml Dreihalskolben wird mit einem Thermometer, einem guten Kühler und einem Tropftrichter versehen. Die Reaktion wird unter Stickstoff durchgeführt und es werden 220 ml Dichlormethan und 2,72 g (10 mMol) 3-(2,6-Dichlorphenyl)-isoxazol-5-yl-essigsäure in das Gefäß gegeben. Nach der Zugäbe von 0,13 ml N-Vinylimidazol als Katalysator wird eine Lösung von 3,14 g (10 mMol) Trimethylsilyl-6-isocyanatopenicillanat in Dichlormethan tropfenweise zu der bei 20⁰C gehaltenen gerührten Lösung gegeben. Nach 23 Stunden ist die Reaktion vollständig abgelaufen und das Isocyanat ist zu einem Ausmaß von etwa 70 $ in das gewünschte Produkt überführt worden. Die Reaktionsmischung wird in auf einen pH-Wert von 7 gepuffertes Eiswasser gegossen und zweimal mit Diäthyläther extrahiert. Die wäßrige Schicht wird auf einen

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·· 19 —

pH-Wert von A_tO angesäuert und dreimal mit Diäthyläther extrahiert. Das gewünschte Produkt wird vollständig von der wäßrigen Schicht abgetrennt. Die gesammelten organischeh-Schichten v/erden mit einer geringen Menge Eiswasser gewaschen und dann über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und bei OC in gewissem Ausmaß in Vakuum eingeengt. "·

Eine Lösung von Uatrium-cc-äthylcapronat in Äthylacetat wird tropfenweise zu der konzentrierten Lösung gegeben. Der sich bildende farblose Niederschlag wird auf einem 3?ilter gesammelt, mit Diäthyläther gewaschen und im Vakuum getrocknet. Ausbeute 2,81 g (57 %). Die Analyse des UMR-Spektrums des in Hexadeuterodimethylsulfoxyd gelösten Produktes 60 Mc, cT-Werte in ppm, Tetramethylsilan als interner Standard) ergab das Folgende:

UH Dublett -, bei 8,95 (0,7 Protonen)

CgH₃ · ..' etwa 7,5 (3 Protonen)

Isoxazolyl-H 6,50 (Proton)

-CH₂ und C₂-H 3,99 (3 Protonen)

C₅-H und Cg-H Multiplett zwischen 5',50 und 5,30 (2 Protonen)

C₅-(CH₅)₂ 1,62 und 1,52 (Dublett 6 Protonen) Teilanalyse des IR-Spektrums (KBr-Scheibe, Vierte in cm ):

3355 UH

1755 C=O Lactam

1700 C=O Amid

1610 C=O Carbonylation

1505 UH Deformationsschwingung

1600 C=C aromatisch '

14 30 Isoxazolyl-Ring

npo\

755) ^C-C1 Streckschwingung (stretching)

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Beispiel

Herstellung des Hatriurasalzes von 7-[~[3-(2,6-Dichlorphenyl)· isoxazol-5-yl]-acetamido5-cephalosporansätire

O _w π i „ H H /_χ

C- CH₀ -C-H-C-C CH

C-CH₀-O-C-CH₇

COOHa

In einem Dreihalskolben, der mit einem Gaseinlaßrohr, einem Thermometer und einem Tropftrichter versehen ist, suspendiert man 500 mg (1,8 mMol) 7-Aminocephalosporansäure in 10 ml Äthylacetat-unter einer Stickstoffatmosphäre. Die Suspension wird in einem Eisbad gekühlt und dann werden 0,3 ml (2,2 mMol) Triäthylamin zugesetzt. IJach 5 Minuten werden 0,3 ml {2,2 mMol) Trimethylchlorsilan zu der Mischung gegeben und dann rührt man 1 Stunde bei Raumtemperatur.

Die Mischung wird erneut abgekühlt und nach dem Zusatz eines weiteren Triäthylaminäquivalents wird 3-(2,6-Dichlorphenyl)-isoxazol-5-yl-acetylchlorid (in der Weise wie in Beispiel 1 beschrieben hergestellt) in 5 ml Äthylacetat tropfenweise zu der Reaktionsmischung gegeben, wobei man die Temperatur unterhalb 5⁰C hält.

Hach der Zugabe wird das Eisbad entfernt und die Reaktionsmischung während weiterer 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionsmischung wird dann in eine Mischung von

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30 ml Wasser und 30 ml Diäthyläther unter Eiskühlung gegossen, währenddem man den pH-Wert auf 7,0 hält. Die wäßrige Schicht wird mit weiteren 30 ml Diäthyläther und 30 ml Äthylacetat gewaschen. Nach der Zugabe von 50 ml Äthylacetat wird die wäßrige Schicht auf einen pH-Wert von 1,7 angesäuert. Die Schichten werden getrennt und die wäßrige Schicht wird erneut mit 50 ml Äthylacetat extrahiert. '.

Die vereinigten Äthylacetatschichten werden einmal mit auf einen pH-Wert von 1,5 angesäuertem Eiswasser und zweimal mit Eiswasser gewaschen. Nach der Abtrennung, dem Trocknen über Magnesiumsulfat und der Behandlung mit Norit wird die Äthylacetatschicht auf etwa 1/3 ihres Volumens eingeengt und dann wird Natrium-a-äthylcapronat zugesetzt. Das ausgefällte Naibriumsalz wird einmal mit Äthylacetat und zweimal mit η-Hexan gewaschen und nach der Filtration im Vakuum ge- . trocknet. Die Ausbeute beträgt 438 mg (0,8 mMol = 44 $). Gemäß der DünnschichtChromatographie ist die Verbindung rein.

Eine Teilanalyse der IR-Analyse des Endproduktes (KBr-Scheibe, Werte in cm"" ) ergab die folgenden Werte:

± 3280 ) ^m

1760 C =0ß-Lactam und C = O Ester

1690 - 1670 C=O Amid

1600 C=O Carboxy!ation

1558 C=C oder C=N

1230 )

•jog j C-O-C Ester

782 C-Cl

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Die Analyse des NMR-Spektrums des Endproduktes, gelöst in Hexadeuterodimethylsulfoxyd (60 Hc, cf-Werte in ppm, Ietramethylsilan als interner Standard) ergab das Folgende:

CO - GH₅ 2,3

S -.CHp 3,07 -> 3,71 (AB-Quartett (J»*17,5 cps,

2 Protonen)

0
CH₂-C 3,98 (2 Protonen)

4,73 - 5,20 Quartett (Ja* 12 cps, 2 Protonen) 4,98 und 5,05 Dublett (J<=a-4,5 cps, 1 Proton)

C₇-H 5,47 -> 5,66 Quartett (J^4,5 cps, J^r<«8 cps,

' 1 Proton)

Isoxazol-C.-H 6,51 (1 Proton)

7,55 scharfes enges Auf spaltung smu st er (3 Protonen)

NH - 9,22 und 9,35 Dublett (J¹« 8 cps, 1 Proton)

Elementaranalyse C12H	45,10 io	^6H3O7SOi2*	1 2	H2O =
gef.	3,38 io	Mittel		ber. (m wa
C 44,97 -	7,72 io	45,03 io		45,26 io
H 3,31.-	5,67 io	3,34 io		3,08 i>
N 7,70 -	7,71 i>		7,54 i>
S 5,70 -	5,68 io		5,75 i*

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Beispiel 4

Herstellung des Natriumsalzes der 7-[-[3-(2,6-Diphlorphenyl)· isoxazol-5-yl]-acetamido$-desacetoxyceplialosporansäure

OHHH H . I t 1

C- CH₀ -C-N-C-C

N C-CH,

COONa

Zu einer Suspension von 620 mg (2,9 mMol) 7-Aminodesacetoxycephalosporansäure in 10 ml Äthylacetat, die in einem 50 ml Dreihalskolben, der mit einem Gaseinlaßrohr, einem Thermometer und einem Tropftrichter versehen ist, unter Stickstoff atmosphäre vorliegt und mechanisch gerührt wird, gibt man nach dem Kühlen der Suspension mit einem Eisbad 0,46 ml (3»3 mMol) Triäthylamin. Nach 5 Minuten werden 0,42 ml (3f3 mMol) Trimethylchlorsilan zugesetzt und das Rühren wird während einer Stunde ohne äußeres Kühlen fortgesetzt. Dann wird die Reaktionsmischung erneut mit einem Eisbad gekühlt und es werden weitere 0,41 ml (2,9 mMol) Triäthylamin zugesetzt. Dann wird tropfenweise 3-(2,6-Dichlorphenyl)~isoxazol-5-yl-acetylchlorid (erhalten gemäß der in Beispiel Λ beschriebenen Weise) in 5 ml Äthylacetat mit einer derartigen Geschwindigkeit zu der Reaktionsmischung gegeben, daß die Temperatur nicht über 5⁰C ansteigt. Das Kühlbad wird dann entfernt und das Rühren während weiterer 2 Stunden fortgesetzt.

409807/1069

.- 24 -

Die Reaktionsmischung wird dann unter Eiskühlen und mechanischem Rühren zu einer Mischung von 20 ml Wasser und 20 ml Diäthyläther gegeben, währenddem man den pH-Wert auf 7,0 hält. Die wäßrige Schicht wird einmal mit 20 ml Äthylacetat und einmal mit 20 ml Diäthyläther gewaschen. Nach der Zugabe von 40 ml Äthylacetat zu der wäßrigen Schicht wird der pH-Wert auf 1,7 gebracht. Die wäßrige Schicht wird erneut mit 30 ml Äthylacetat extrahiert. Dann werden diese Schichten vereinigt, einmal mit 20 ml angesäuertem Eiswasser (pH 1,7) und einmal mit 20 ml normalem Eiswasser gewaschen. Nach dem Trocknen über Magnesiumsulfat und-der Behandlung mit Norit wird die organische Schicht auf etwa 1/3 ihres ursprünglichen Volumens eingeengt. Dann wird Natrium-ct-äthylcapronat zugesetzt, das ausgefallene Natriumsalz auf einem Filter gesammelt, mit Äthylacetat und mit Diäthyläther gewaschen und im Vakuum getrocknet. Die Ausbeute beträgt * 603 mg (1,23 mMol = 43 $). Gemäß der Dünnschichtchromatographie ist diese Verbindung rein.

Eine Teilanalyse des IR-Spektrums des Endproduktes ' (KBr-Scheibe, Werte in cm"* ) ergab die folgenden Werte:

•± 3400 NH (breite Absorption)

1750 C = Oß-Lactam

1670 C=O Amid

1590 C=O Carboxylation

1555 C=C

± 1540 NH def. (Schulter)

781 C-Cl

Die Analyse des NMR-Spektrums des Endprodukts, gelöst in Hexadeuterodimethylsulfoxyd (60 Mc, cf-Werte in ppm, Tetramethylsilan als interner Standard) ergab das Folgende:

C₅-CH₅ 1,98 (3 Protonen)

S-CH₂ 2,95 -*■ 3,65 AB-Quartett («T« 17,5 cps;

4 0 9 8 0 7/1069 ² Fotonen)

O CH2S,	3,98	(2	Protonen)
Cr-H und C7-H	4,88, 5,43 -	4, - 5,	97 (J*J 4 52
Isoxazol-Ο,-Η	6,50	(1	Proton)

cpts; 2 Protonen) und

7,55 (scharfes enges AufSpaltungsmusterj 3 Protonen)

Beispiel

Herstellung von 6-C-[3-(2,6-Dichlorphenyl)-4-carboxyisoxazol-5-yl!-acetamido!-penicillansäure

H H H/^S\ IT - C C <

₀ u.

0' ^K COOH

In einem Dreihalskolben, der mit einem Gaseinlaßrohr, einem Thermometer und einem Tropftrichter versehen ist, löst man 314 mg (1,0 mMol) Trimethylsilyl-6-isocyanato-penicillanat und 316 mg (1,0 mMol) 3-(2,6-Dichlorphenyl)-4-carboxyisoxazol-5-yl-essigsäure (erhalten durch die Reaktion von 3-(2,6-Dichlorphenyl)-4-carboxy-5-methylisoxazol, das durch die 1,3-dipolare Addition von 2,6-Dichlorphenyibenzonitriloxyd und üriaethylsilyl-2-butynoat gebildet wurde, mit 2 Äquivalenten n-Butyllithium und 1 Äquivalent aüetramethyläthylendiamin in Toluol, gefolgt durch eine Carbonylierung mit CO₂)

409807/10 6 9

in 25 ml Benzonitril· Zu dieser Mischung gibt man tropfenweise eine Lösung von 145 mg (1,1 mMol) N-Methylbenzimidazol in 5 ml Benzonitril. Es ergibt sich eine direkte Bildung von Kohlendioxyd. Nach 2 Stunden hört die Kohlendioxyd entwicklung auf und die Reaktionsmischung wird unter Eiskühlung in eine Mischung von 30 ml Wasser und 50 ml Diäthyläther gegossen, währenddem man den pH-Wert bei 7 hält. Die wäßrige Schicht wird zweimal mit 50 ml Diäthy1-äther extrahiert» j

Nach der Zugabe von 50 ml Diäthyläther und 10 ml Äthylacetat wird der pH-Wert auf 4 gebracht. Die Schichten werden getrennt und die wäßrige Schicht wird zweimal mit 50 ml Diäthyläther extrahiert.

Die vereinigten organischen Schichten werden mit Eiswasser gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Nach der Entfernung des Lösungsmittels erhält man I36 mg eines schwachgelben Feststoffs, der gemäß DünnschichtChromatographie rein war ·

Eine Teilanalyse des IR-Spektrums des Endproduktes (KBr-Schei-

— 1 -·■
be, Werte in cm"* ) ergab die folgenden Werte:·

1775	C=O ß-Lactam
1700	C=O Carboxyl
1600	C=C aromatisch
1560	C = N
1430	Isoxazolring
780	C = Cl

409807/10

Die Analyse des UMR-Spektrums des Endproduktes,'gelöst in Hexadeuterodimethylsulfoxyd (60 Mc, cf-Werte in ppm, Tetramethylsilan als interner Standard) ergab das Folgende: \^

C₅ - CH₅ 1,52 und 1,65 (6 Protonen)-

ο j

CH₂C urfS C₂-H 4,32 (3 Protonen) t

C₅-H und C₆-H 5,33 -» 5,70 Multiplett (2 Protonen) CgH₅ 7,55 scharfes enges Aufspaltungsmuster

IiH ^: 9,10 Dublett

Beispiel 6

Herstellung des natrium sal ζ es der 6-£-[3-(2,4,6-Irimeth.yl)-phenylisoxazol-5-yl!-acetamido}-penicillansäure

- CH₉ - C - Έ - CH

^COOUa

Im wesentlichen gemäß dem in Beispiel 2 beschriebenen Verfahren wurden 1,23 g (5 mMol) 3-(2,4,6-Trimethyl)-phenylisoxazol-5-yl-essigsäure mit 1,57 g (5 mMol) Trimethylsilyl-6-isocyanato-penicillanat in 25 ml trockenem Dichlormethan in Gegenwart von etwa 0,05 ml N-Vinylimidazol als Katalysator umgesetzt. Die Reaktion war nach etwa 6,5 Stunden beendigt.

-409807/10 6-9

Gemäß der IHinnschichtchromatographie war das Isocyanat zu. etwa 60 i<> in das gewünschte Produkt überführt worden. Das Reaktionsprodukt wurde in üblicher Weise behandelt. Bei einem pH-Wert von 4,5 wurde das Penicillin mit Diäthyläther aus dem ,Wasser extrahiert. Die Ätherlösung wurde mit einem geringen Volumen Eiswasser gewaschen, mit Aktivkohle behandelt, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und geringfügig im Vakuum bei O⁰C eingeengt.

Eine Lösung von Natrium-ot-äthylcapronat in Diäthyläther wurde tropfenweise zu der konzentrierten Lösung gegeben. Der gebildete farblose Niederschlag wurde durch Filtration gesammelt und wiederholt mit kaltem Diäthyläther gewaschen, !fach dem Trocknen im Vakuum erhielt man 0,8 g des Produktes, Eine gute Reinheit des Produktes wurde durch Dünnschichtchromatographie, durch IR- und durch HMR-Spektren angezeigt.

Die Analyse des NMR-Spektrums des Endproduktes, gelöst in einer etwa 2:1-Mischung von Hexadeuterodimethylsulfoxyd und DpO (60 Mc, cP-Werte in ppm, interner Standard 2,2-Dimethylsilapentan-5-sulfonat) ergab die folgenden Werte:

CgH₂ 6,95 (Singulett, 2 Protonen)

Isoxazolyl C₄-H 6,3 (1 Proton) C₅-H und C₆-H etwa 5,45 (AB-Quartett, S^ <0,1 ppm,

4 cps, 2 Protonen)

C₂-H 4,2 (1 Proton)

CH₂-CO- 3,95 (2 Protonen)

P-CH₅ 2,25 (3 Protonen)

(o-CH₅)₂ 2,05 (6 Protonen)

)₂ 1,5 und 1,6 (6,Protonen).

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-.29 —

Beispiel

Herstellung des latriumsalzes der 7-i-[3-(2,4,6-Trimethyl")· phenylisoxazol-S-ylj-aeetamidoJ-cephalosporansäure

It

H
U-CH

- CH

O=C

C-CH₀-O-C-CH., 2.3

COONa

2,8 ml (20 mMol) Triäthylamin wurden tropfenweise zu einer gerührten Suspension von 2,7 g (10 mMol) 7-Aminocephalosporansäure in 40 ml trockenem Dichlormethan bei O⁰C gegeben. Anschließend wurden 2,55 ml (20 mMol) Trimethylehlorsilan tropfenweise zugesetzt, Uaeh der Beendigung der Zugabe wurde. die Reaktionsmischung wenige Minuten bei O⁰C gehalten, worauf das Eisbad entfernt wurde. Dann wurde während 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurden 1,2 ml (10 mMol) Chinolin zugesetzt, worauf tropfenweise eine Lösung von etwa.; 10 mMol 3-(2,4»6-Trimethyl)-phenylisoxazol-5-yl-acetyichlorid in 20 ml trockenem Dichlormethan bei 5⁰C zugesetzt wurde. Nach wenigen Minuten Rühren bei Raumtemperatur wurde die Reaktibnsmischung in eisgekühltes Wasser gegossen, worauf verdünnte Hatriumhydroxydlösung züge- ■ setzt wurde. Bei einem pH-Wert,von 7 wurden die Schichten getrennt und die Wasserschicht zweimal mit Diäthyläther extrahiert. Die organischen Schichten wurden verworfen und die Wasserschicht bei einem pH-Wert von 5 bis 1 wiederholt mit Diäthyläther extrahiert. Die organischen Schichten wurden

409807/1069 ^X

getrennt.dünnschichtchromatographisch untersucht. Die reinsten Extrakte wurden vereinigt, mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert, im Vakuum eingeengt und schließlich, mit einer Lösung von Natrium-aäthylcapronät in Äther behandelt. Der feste Niederschlag wurde durch Filtration gesammelt, mit Diäthylather gewaschen und im Vakuum auf Gewichtskonstante getrocknet. Ausbeute 2,5 g. Zur Herstellung des kristallinen Monohydrats wurde das rohe Produkt, das gemäß der Dünnschichtchromatographie keine anderen schwefelhaltigen Substanzen enthielt, aus Aceton umkristallisiert. Das Endprodukt (1 g) war mit Ausnahme der Anwesenheit einer geringen Spur von Aceton rein. Es enthielt 1 Mol Yfasser pro Mol Cephalosporin.

Die Analyse des UMR-Spektrums des Endproduktes, gelöst in Hexadeuterodimethylsulfoxyd (60 Mc, cf-Werte in ppm, interner Standard 2,2-Dimethylsilapentan-5-sulfonat) ergab die folgenden Werte:

N-H ; 9,26 und 9,12 (Dublett. J^ 8,5 cps, etwa 0,8

Protonen)

GgHp 6,93 (geringfügig verbreitertes Singulett,

2 Protonen)

Isoxazolyl-C^-H 6,33 (Singulett, 1 Proton) C₇-H 5,66, 5,58, 5,52 und 5,44

(schwach verbreiterte Signale, J^8,5 cps und 4,7 cps, 1 Proton)

5,04 und 4,96 (J.^ =4,7 cps) )

^ V 3 Proto-

0-CH₂ 5,20, 4,99, 4,92 und 4,71 (J^₃ 12,5 cps))nen

CH₂-CO 3,92 (verbreitertes Singulett,' 2 Protonen) ' ^::/

S-CH₂ · ~3,72, ^3,43, —3,33 und /-3,04 \_

(verbreiterte Signale, AB-Quartett, Jk-d^^I₉5 cps, 2 Protonen) ^Ai5

P-CH₅ 2,27 (3 Protonen)

(o-CH₅)₂ 2,07 (Singulett) ? _{Q Protonen}

0-CO-CH₃ 2,01 (Singulett) J

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Beispiel 8

Herstellung von 7-i-[3-(2,6-Dichlor)-phenyl-4-methylisoxazol-S-ylJ-acetamidoj-desaoetoxycephalosporansäure

Cl

Eine Lösung von etwa 1 'mMol Trimethylsilyl~7-isocyanatdesacetoxycephalosporana.t in 2 ml Toluol wurde zu 286" mg (1 mMol) 3-{2,6-Dichlor)-phenyl-4-methylisoxazol-5-ylessigsäure, die teilweise in 10 ml trockenem Toluol gelöst war, gegeben. Die Zugabe von etwa 0,1 mMol 1-Isopropylbenzimidazol als Katalysator brachte die langsame Reaktion (die bei Raumtemperatur etwa 24 Stunden benötigte) in Gang. Als keine Kohlendioxydentwicklung mehr feststellbar war, wurde ein Strom von trockenem Stickstoff über die Oberfläche der gerührten Reaktionsmischung geleitet und der Inhalt des Reaktionsgefäßes wurde in eine gut gerührte Mischung von Eiswasser und Diäthyläther gegeben. Der pH-Wert wurde auf einen Wert von 6,8 gebracht, die Schichten wurden getrennt und die V/asserschicht wurde zweimal mit Diäthyläther extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden zweimal mit Eiswasser gewaschen. Die organische Schicht wurde verworfen und die vereinigten Wasserschichten (70 ml) bei einem pH-Wert von 2,3 mit 80 ml einer 2:1-Mischung von

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Diäthyläther und Äthylacetat extrahiert· Dieser Extrakt wurde zweimal mit 5 ml Eiswasser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum vollständig eingedampft. Der Rückstand, ein schwach-gelbes öl, verfestigte sich beim Rühren mit trockenem Diäthyläther. Der Äther wurde dekantiert und der Feststoff erneut zweimal mit Äther verrührt. Der fast farblose !Feststoff wurde im Vakuum bis zur Gewichtskonstante getrocknet. Ausbeute 290 mg. Das Endprodukt wurde durch Dünnschichtchromatographie untersucht, was die Anwesenheit von lediglich einer schwefelhaltigen Verbindung ergab. Die angegebene Struktur wurde durch IR- und HMR-Spektren bestätigt. Das NMR-Spektrum zeigte, daß das Endprodukt zu etwa 82 $ rein war, da es aus 1 Mol der Ausgangsessigsäure und 2,5 Mol Diäthyläther (wahrscheinlich kristallgebunden) pro 5 Mol des gewünschten Produktes bestand. Die Teilanalyse des IR-Spektrums des Endproduktes (in Chloroform, Werte in cm"* ) ergab das Folgende:

- 3500 ,	. OH	Carboxyl
ί 3300	NH
1772	C=O	ß-Lactam
± 1730	C=O	Carboxyl
1690	C=O	Amid

1380 - 1430 Isoxazolring Absorptionen,

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Beispiel .9

Herstellung des Cyclohexylaminsalzes der 6- {£Χ.-ο3ι1ογ-[5-._ (2,4,6-trimethyl)-phenylisoxazol-5^yl!-acetamido]-penicillansäure

C-CH-C-lf-CH—CH

\\ // If Il ^H ^ "^

^C(CH,)₂

In 25 Minuten wurde eine Lösung von 700 mg Trimethylsilyl-6-isocyanato-penicillanat in 10 ml trockenem Dichlormethan tropfenweise zu einer Lösung von 700 mg 1-Chlor-1-[3-(2,4,6-trimethyl)-phenylisoxazol~5-yl]-essigsäure und etwa 0,03 ml U-Yinylimidazol als Katalysator in 25 ml trockenem Dichlormethan zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde zusätzlich während weiterer 4 Stunden gerührt. Die in situ Hydrolyse des Silylesters erfolgte durch Zugabe von etwa 0,2 ml Äthanol bei O⁰C. Die Reaktionsmischung wurde in eine gut gerührte Mischung aus Diäthyläther und auf einen pH-Wert von 7 gepuffertem Eiswasser gegossen. Nach der Trennung der Schichten wurde die Wasserschicht einmal mit Diäthyläther extrahiert und anschließend auf einen pH-Wert von 3,5 angesäuert· Die angestrebte Verbindung wurde durch zweimaliges Extrahieren mit Diäthyläther unvollständig aus der Wasserschicht abgetrennt. Diese Extrakte wurden vereinigt, mit einer geringen Menge Eiswasser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum eingedampft» Das zurückbleibende Öl wurde in 5 ml Aceton gelöst. Eine verdünnte Lö-

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sung von Cyclohexylamin in Diäthyläther wurde langsam zugegeben, bis keine weitere Niederschlagsbildung mehr erfolgte, Der farblose Niederschlag wurde durch Filtration gesammelt, mit kaltem Diäthyläther gewaschen und im Vakuum getrocknet. Ausbeute 250 mg_o Die Identität des Endproduktes mit der oben angegebenen Formel wurde durch ITMR- und IR-Spektren bestätigt (KBr-Scheibe, 1775 cm"¹: C=O ß-Lactam, 1680 cm"*¹: C=O Amid, 1390 und 1450 cm" : Isoxazolring). Die Reinheit des Endproduktes wurde auf etwa 85 i° geschätzt.

Beispiel 10

Herstellung des Natriumsalzes der 6-{-[3-(2,6-Dichlor)-. phenyl-4-methylisoxazol-5-yl]-acetamido'i--penicillansäure

	CH,	-C Ii	O 11	H
		^C - CH2	- C	- N - (
C- Il

O=C N C

Im wesentlichen gemäß dem in Beispiel 2 beschriebenen Verfahren wurden 286 mg (1 mMol) 3-(2,6-Dichlor)-phenyl-4-methylisoxazol-5-yl-essigsäure mit 314 mg (1 mMol) Trimethylsilyl-6-isoeyanatopenicillanat in 10 ml trockenem Toluol in Gegenwart von etwa 0,01 ml N-Isopropylbenzimidazol als Katalysator umgesetzt. Die Reaktionsmischung wurde über Nacht bei etwa 15⁰C gerührt. Gemäß dem Dünnschichtchromatogramm war das Isocyanat zum mindestens 75 $ in das gewünschte

40980 7/1069

Produkt überführt worden. Das Reaktionsprodukt wurde in üblicher V/eise behandelt. Bei einem pH-Wert von 3,8 wurde

drei
das Penicillin durch/40 ml Extraktionen mit Diäthyläther aus der Wasserschicht entfernt. Die vereinigten Extrakte wurden mit Eiswasser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum auf ein Volumen von etwa 5 ml eingeengt. Die Zugabe einer Lösung von Natrium-a-äthyleapronat in Diäthyläther führte zu einem farblosen Niederschlag, der durch -Filtration gesammelt, mit kaltem Diäthyläther gewaschen und im Vakuum bis zur Gewichtskonstanz getrocknet wurde. Schließlich wurde das Produkt in einem geringen Volumen kaltem trockenem Aceton verrieben. Ausbeute 300 mg. Die Untersuchung des Endproduktes durch die DünnschichtChromatographie, durch IR-Spektrum und NMR-Spektrum bestätigte die angegebene Struktur. Das Produkt war lediglich mit sehr geringen Mengen Aceton und Natrium-ct-äthylcapronat verunreinigt.

Die Analyse des NMR-Spektrums des Endproduktes, gelöst in Hexadeuterodimethylsulfoxyd (60 Mc, cf-Werte in ppm,-interner Standard 2,2-Dimethylsilapentan-5-sulfonat) ergab die folgenden Werte:

C₅-(CH₃)₂ 1,54 und 1,64 (6 Protonen)

Isoxazolyl C.-CH₅ 1,82 (3 Protonen)

CH₂-CO- bei 3p95 (verbreitertes' "

- Slngulett)

Y 3 Protonen

C₂-H 4,03 * -

C₅-H und C₆-H bei 5,5 (Multiplett, 2 Protonen)

Cg-H₅ bei 7,6 (scharfes enges Aufspaltungs

muster, 3 Protonen)

H-H bei 9,3 (Dublett, 0,9 Protonen).

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Beispiel 11

Herstellung des Cyclohexylaminsalzes der 6-&L-Metliyl-[3-t2,4,6-trimethyl)-phenylisoxazol~5-yl]~acetainidöi-penicillansä"ure

C CH _Λ r,

HiI ^υ tr ^^-0 ^

H it H s^ \

U ^C- CH-C-F-CH CH

^O^ »II 1

O=C 35Γ C^

^NCOOH.H_p¥-( η

Im wesentlichen gemäß dem in Beispiel 9 beschriebenen Verfahren wurden äquimolare Mengen Trimethylsilyl-6-isocyanatopenicillanat und 1-Methyl-1-[3-(2,4,6-trimethyl)-phenylisoxazol-5-yl]~essigsäure in Gegenwart einer geringen Menge N-Vinylimidazol umgesetzt. Als Lösungsmittel wurde trockenes Dichlorinethan verwendet. Die Umwandlung war nach 6-stündigem Rühren bei Raumtemperatur beendigte» Die Reaktionsinischung wurde in üblicher Weise behandelt. Zur Isolierung wurde das Penicillin bei einem pH-Wert von 4 mit Diäthyläther extrahiert und schließlich als Cyclohexylaiainsalz erhalten. Die Dünnschichtchromatogramme, das IR-Spektrum (intensive ß-Lactamearbonyl-Absorption bei 1778 cm (KBr-Scheibe)) und das NMR-Spektrum bestätigten die angegebene Struktur des Endproduktes und die gute Reinheit des Produktes.

Die Teilanalyse des komplizierten NMR-Spektrums des Endproduktes (eine Mischung des D- und des L-Isomeren), gelöst in Hexadeuterodimethylsulfoxyd (60 Mc, cf-Werte in ppm,in-

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terner Standard 2,2-Dimethylsilapentan-5-sulfonat) ergab die folgenden Werte:

IT-H

^C6^H2

Isoxazolyl~C,-H

C_K-H und C_c-H 5 ο

C₂-H Cycloliexyl-C^H

P-CH₃ (0-CH₅)₂ Cyclohexyl C₅H

0,,-(CEL)₀ und 3 3'2

C₀₁-CH₃

8,9 (etwa 1 Proton)

6»95 (etwas verbreitertes Singulett, 2 Protonen)

6,35 (2 enge Singuletts, 1 Proton) bei 5,4 (2 Protonen)

bei 4,2 (diffuses Quartett) ~ bei 4,0 (2 enge Singuletts)

2 Protonen

bei 2,9 (breiter Absorptionsbereich, etv/a 1 Proton)

2,3 (Singulett, etwa J, Protonen) 2,1 (Singulett, etwa 6 Protonen) bei 0,9 —7" bei 2,3

ca.

26 Pro tonen

bei.1,4

bei 1,65

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Beispiel 12

. Herstellung des Natriumsalzes der 7-£-[3-(2,4,6--Trimethyl)~ phenyl-4-inethylisoxazol-5~yl]~acetaiaido] -cephalosporansaure

H ^.

N - CH- CH ^CH_{0 n}

Il \ ^ά. S

O=C N C-CHo-O-C-CH,

COQITa

1,58 ml (10 mMol) Triäthylamin wurden tropfenweise zu einer gerührten Suspension von 1,3 g (5 mMol) 7-Aminocephalosporan~ säure in 20 ml trockenem Diclilormethan bei O⁰C zugegeben. Anschließend wurden 1,26 ml (10 mMol) Trimethylchlorsilan tropfenweise bei O⁰C zugesetzt, lach Beendigung der Trimethylchlorsilanzugabe wurde die Reaktionsmischung während weniger Minuten bei O⁰C gerührt, worauf das Eisbad entfernt wurde. Dann wurde während 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurden 0,6 ml (5 mMol) Chinolin zugesetzt, worauf tropfenweise eine Lösung von etwa 4,5 mMol 3-(2,4,6-Trimethyl)-phenyl-4-methyl-isoxazol-5-yl-acetylchlorid (in etwa 90 ^iger Reinheit aus 1,3 g (5 mMol) der entsprechenden Carbonsäure hergestellt) in 10 ml trockenem Dichlormethan bei 5⁰C zugesetzt wurde. Nach wenigen Minuten bei Rühren bei Raumtemperatur wurde die Reaktionsrniechung in Eiswasser gegossen. Der pH-Wert wurde auf 7 erhöht und die Schichten wurden getrennt. Die Wasserschicht, die gemäß der dünnschichtchromatographischen Untersuchung ein Hauptreaktionsprodukt, eine geringe Menge 7-Amino-

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cephalosporansäure und eine geringe Menge eines Nebenproduktes (möglicherweise das Ziw-Isomere des gewünschten Produktes) enthielt, wurde zweimal mit Diäthyläther gewaschen. Die organischen Schichten wurden verworfen. Die Wasserschicht- wur de .anschließend bei pH-Vier ten von 5,0, 4,5 und 4,0 mit Diäthyläther extrahiert. Der Extrakt bei pH 4,0 enthielt lediglich das gewünschte Hauptprodukt. Die Zugabe einer Lösung von Natrium-cr-äthylcapronat zu diesem Extrakt ergab einen farblosen festen Niederschlag, Ausbeute 1,2 g. Gemäß der Dünnschichtchromatographie, der IR- und NMR-Spektren war das Endprodukt lediglich mit geringen Mengen Diäthyläther (etwa 1 Gew.-^) verunreinigt.

Die Ana,lyse des NMR-Spektrums des Endproduktes, gelöst in einer etwa 2:1-Mischung von Hexadeuterodimethylsulfoxyd und D₂O (60 Mc, .cf-Werte in ppm, interner Standard 2,2-Dimethylsilapentan-5-sulfonat) ergab das Folgende:

CgHg _ 6,95 (Singulett, 2 Protonen)

C₇-H * 5,72 und 5,64 (Dublett, J^ 4,6 cps, 1 Proton)

C₆-H 5,10 und 5,02 (Dublett, J^ 4,6 cps))

0-CHp . bei 5,15, 4,92, 4,81 und 4,59

• (AB-Quartett, J-13,2 cps)

S-CH₂ bei 3,55 (Zentrum eines AB-Quartetts)/- ~

CHp-CO 3,87 (etwas verbreitertes Singulett) ) tonen

P-CH₅ 2,28 (3 Protonen)

0-CO-CH₃ 2,05 (Singulett) (o-CH₅)₂ . 1,98 (Singulett)

Isoxazolyl-C.-CHv 1,71 (3 Protonen).

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Beispiel 13

Herstellung des Natriumsalzes der 7-i-[3-(2,4,6-Trimethyl)-phenyl-4-inethylisoxazol-5-yl]-acetamido] -desacetoxyeephalosporansäure :

C - CH₂ - C - Ii - CH

Im wesentlichen gemäß dem in Beispiel 9 beschriebenen Verfahren wurden 1,3 g (5 mMol) 3-(2,4,6-Trimethyl)-phenyl-4-methylisoxazol-5-yl-essigsäure, gelöst in 25 ml trockenem Dichlormethan und 5,04 mMol Trimethylsilyl-7-isocyanatodesacetoxycephalosporanat, gelöst in 9 ml Toluol in Gegenwart von etwa 0,05 ml E-Vinylimidazol als Katalysator umgesetzt. Die Zugabe des Isocyanate in Toluol erfolgte in etwa 20 Minuten. Die Kohlendioxydentwicklung war bereits nach 5 Minuten festzustellen. Nach etwa 7»5 Stunden weiteren Rührens wurde die Reaktion unterbrochen, da ein Dünnschichtchromatogramm der Reaktionsmischung eine etwa 80 $ige Umwandlung des Isocyanats in das gewünschte Produkt anzeigte und.die Entwicklung von Kohlendioxyd fast aufgehört hatte. Die Reaktionsmischung wurde dann in üblicher Weise behandelt. Das Cephalosporin wurde be.i einem pH-Wert von 4,5 mit Hilfe einer 9:1-Mischung von Diäthyläther und Äthylacetat extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden mit Eiswasser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrock-

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net, _t filtriert und im Vakuum vollständig eingedampft. Das verbleibende Öl wurde in Diäthylather gelöste Die Zugabe eines Teiles der geschätzten erforderlichen Menge an Natrium-a-äthylcapronat, gelöst in D'iäthyläther, führte zu einem niederschlag, der durch Filtration gesammelt, mit einer geringen Menge kaltem Diäthyläther gewaschen und im Vakuum getrocknet wurde. Die vereinigten Filtrate wurden erneut mit Natrium-cc-äthylcapronat versetzt. Die erhaltene zweite Charge des festen Materials wurde wie die erste Charge behandelt. Die dritte und letzte Charge erhielt man durch Zusetzen von gelöstem Natrium-a-äthylcapronat, bis sich keine weitere Zunahme des Niederschlages ergab. Die dritte Charge, die dünnschichtchromatographisch praktisch rein war, wurde aus Aceton umkristallisiert. Schließlich wurden die drei Chargen gemeinsam in Aceton gelöst. Die Acetonlösung wurde im Vakuum etwas eingeengt und anschliessend angeimpft. Nach der Kristallisation wurde der Kolben in den Eisschrank überführt. Am nächsten Sag wurden die Kristalle durch Filtration gesammelt, mit kaltem Aceton und Diäthyläther gewaschen und im Vakuum bis zur Gew'ichtskonstanz getrocknet. Ausbeute 1,7 g· Die angegebene Struktur wurde durch IR- und NMR-Spektren bestätigt,, Gemäß dem NMR-Spektrum und den Dünnschichtchromatogrammen war das Endprodukt lediglich durch eine sehr geringe Menge Aceton und eine geringe Menge NjN'-Didesaeetoxycephalosporansäureharnstoff verunreinigt.

Die Analyse des NMR-Spektrums des Endproduktes, gelöst in einer etwa 2:1-Mischung von Hexadeuterodimethylsulfoxyd und D₂O (60 Mc, ef-Werte in ppm, interner Standard 2,2-Dimethylsilapentan-5-sulfonat) ergab das Folgende:

CgH₂ 6*97 (geringfügig verbreitertes Singulett,

2 Protonen)

409807/1069

CHp-CO

S-CH

C₆-H

P-CH₅

(o-CH₃)₂
C₃-CH₃

Isoxazol-C.-CIL,

- 42 -

5,63, 5,46, 4,97 und 4,90 (AB~Quartett, J*« 4,5 Qps, 2 Protonen)

3,86 (verbreitertes Singulett, 2 Protonen)

«5ii cps, 2 Protonen)

etwa 3,7 —> 2,9 (£B-Quartett, J

2,29 (3 Protonen)

1,98 (Singulett) 1,94 (Singulett)

1,71 (3 Protonen).

_Protonen

Beispiel

Herstellung der 6-{~[3-(2,6~Mchlor)-plienyl~4-carbamylisoxazol-5-yl3-acetamido3 -penicillansäure

O « C

H s

- Έ - CH-CH

C(CHJ₂

600 mg (2mMol) 3~(2,6-Dichlor)~ph.enyl-4-carbamylisoxaaol~5-yl-e.ssigsäure und 63Ü Eg (2 niMol) IriraetliylGilyl-e-isocyanatopenicillanat wurden in einer Mischung von 15 ml trockenem Benzonitril und 15 ml trookensm ^tetrahydrofuran gelöst, worauf man direkt etwa 0,02 ml il-Methylimidazol zugab. Die Entwicklung von Kohlendioxyd nahm nach 3-stiindigem Rohren bei Raumtemperatur stark ab_e KiP BünnsckichxeliroinatograiBia der ReaktionsiaisGhung zeigte eine gvt-3 Uinwan-äXuag des Isocyanatg

4Q3807/1Q6S

an_o Die Reaktionsmischung wurde in eine gut gerührte eisgekühlte Mischung von 30 ml V/asser, 20 ml Diäthyläther und 20 ml Äthylacetat gegossen. Dann wurde verdünnt.e HaOH-Lösung bis zu einem pH-Wert von 8,5 zugesetzt. Die Schichten wurden getrennt und die V/asserschicht wurde durch Extraktion mit Diäthyläther gereinigt. Die organischen Schichten wurden verworfen und die Wasserschicht wurde bei einem pH-Wert von 3»0 mit einer 1:1-Mischung von Diäthyläther und Äthyl- . acetat gewaschen. Die vereinigten Extrakte wurden mit Eiswasser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und vollständig im Vakuum eingedampft. Der sich ergebende schwach-gelbe Feststoff (1,1 g) wurde durch IR- und HMR-Spektren untersucht. Das Produkt enthielt das gewünschte Penicillin jedoch auch geringe Mengen U, IT¹-Dipenicillansäureharnstoff und der Ausgangscarbonsäure. Zur Herstellung einer reineren Probe wurde das rohe Produkt wiederholt mit kaltem trockenem Diäthyläther, in dem der Harnstoff kaum löslich ist, extrahiert. Der Ätherextrakt wurde mit Eiswasser, das auf einen pH-Wert von 7 gepuffert war, vermischt. Der größere Teil der Ausgangscarbonsäure wurde bei einem pH-Wert von 4>5 aus der Wasserschicht entfernt. Schließlich wurde die Wasserschicht wiederholt bei einem pH-Wert-von 4,5 und 3»5 mit Mischungen aus viel Diäthyläther und geringen, jedoch nach und nach -gesteigerten Mengen Äthylacetat extrahiert. Die Extrakte, die frei von der Ausgangscarbonsäure, dem Harnstoff und den Abbauprodukten waren, wurden vereinigt und nach den üblichen Handhabungen vollständig im Vakuum eingedampft. Der sich ergebende farblose Peststoff wurde bis zur G-ewichtskonstanz getrocknet (350 mg). Gemäß den Dünnschichtchromatogrammen, den IR- und den NMR-Spektren war das Endprodukt, mit. Ausnahme der Anwe-.senheit geringer Mengen von Äthylacetat und Diäthyläther rein. Das IR-Spektrum (KBr-Scheibe) kompliziert durch Anwesenheit der Monomeren und die Dimeren, zeigte einen breiten intensiven Bereich zwischen 3000 und 36OO cm mit Ban-

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den bei 3450, 3350 und 3200 cm""¹, die den ΕΉ-Absorptionen beider Amidgruppen zuzuschreiben sind, eine Carboxy—OH-

— 1

Absorption bei etwa 2550 cm , einer breiten selir intensiven Carbonylabsorption mit Banden bei + 1790, ± 1725,

+ —1 "~

+ 1695 und - 1655 cm , die dem ß-Lactarn, der Carboxylgruppe, der CO'HH-Gruppe bzw. der CO-lfflL-Gruppe zuzusprechen sind.

Beispiel 15

Herstellung des natriumsalzes der 6-{-[3-(2,6-Dichlor)-phenyl-4-eyanoisoxazol-5-yl!-acetamido]-penicillansäure

C- CH₀ - C - N-CH-CH

(CH₃)₂

COOlTa

297 mg (1 mMol) 3-(2,6-Dichlor)-phenyl-4-cyano-isoxazol-5-yl-essigsäure, 3H mg (1 mMol) Trimethylsilyl-6-isocyanatopenicillanat und eine Spur 1—Isopropylbenzimidazol \^urden in 5 ml trockenem Dichlormethan gelöst. Gemäß dem Dünnschichtchromatogramm war eine gute Isocyanatumv/andlung nach 3-stündiger Reaktion bei Raumtemperatur erreicht. Das Reaktionsprodukt wurde in üblicher V/eise behandelt. Zum Isolieren wurde die Lösung des Penicillins in Wasser durch Extraktionen mit Diäthyläther bei einem pH-Wert von 7,0 und 4,5 gereinigt. Das Penicillin wurde durch Extraktion mit Diäthyl-

409807/1069

ätlier bei einem pH-Wert von 3» 3 aus dem Wasser entfernt·; Der Ätherextrakt wurde mit Eiswasser gewaschen, über vrasserfreiern Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingedampft. Das verbleibende Öl wurde in etwa 3 ml trockenem Äthylacetat gelöst, worauf etwa 0,6 mMol Hatrium-cc-äthylcapronat, gelöst in einer geringen Menge Ätliylacetat, zugesetzt wurden. Me Zugabe von trockenem Diätliyläther führte zu einem schwach, gefärbten Niederschlag, der durch Filtra- . tion gesammelt, mit kaltem Äthyläther gewaschen und im Vakuum bis zur Gewichtskonstans getrocknet wurde· Ausbeute 180 mg. Das Endprodukt wurde in üblicher Weise untersucht. Es enthielt das Natriumsalz des gewünschten Penicillins und geringe Mengen eines Abbauproduktes und Natriumö-äthylcapronato Das IR-Spektrum des Endproduktes (KBr-Scheibe) zeigte u.a. Absorptionen bei 2280 (C=N), 1778 (Carbonyl-ß-lactam), 1690 (Carbonylamid), 1610 (Carbonylcarboxylation) und i 1400 cm" (Isoxazolring-Absorptionen).

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Beispiel 16

Herstellung des Katriurasalzes der 6-{-[3-(1)-adamantylisoxazol-5-yl]-acetamid5 -penicillansäure

⁰ W ^^sv

C-IT- CH-CH ^C(CILj _o

Il I

O=C IT Cⁿ

^NCOOHa

Im wesentlichen gemäß dem in Beispiel 9 beschriebenen Verfahren vrurde eine Lösung von 780 mg (2,5 mliol) Srimethylsilyl-6-isocyanato-periicillanat in 10 ml trockenem Dichlormethan tropfenweise zu einer Lösung von 650 mg (2,5 mMol) 3-(i)-Adamantyl-isoxa2ol-5-yl-essigsäure und etwa 0,02 ml B-Vinylimidazol in 20 ml trockenem Dichlormethan gegeben. Die Umwandlung war nach insgesamt 2,5-stündigem Rühren bei Raumtemperatur beendet, was durch eine drastische Verminderung der Kohlendioxydentwicklung angezeigt wurde. Ein Dünnschichtehromatοgramm zeigte eine gute Umwandlung des Isocyanats in das gewünschte Penicillin an. Das Reaktionsprodukt wurde in üblicher V/eise behandelt. Zur Isolierung wurde das Penicillin durch zweimalige Extraktionen mit Diäthyläther, die bei pH 5,5 bzw. pH 4,0 durchgeführt v/urden, aus Wasser extrahiert» Die Extrakte wurden getrennt, mit eisgekühltem \7asser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und vollständig im Vakuum eingedampft. Ausbeuten 700 bzw, 300 mg« Beide Produkte ergaben zufriedenstellende IR-Spektrer, tmd enthielten gemäß der Dünnschichtchromatograpuie ledxgxieli ein Penicillin. Da

40380^/1063

die Probe, die durch. Extraktion bei einem pH-Wert von 5,5 erhalten wurde, durch das Ausgangsessigsäurederiyat, verunreinigt war, wurde sie in Äther gelöst, worauf iTatrium-ääthylcapronat zugesetzt wurde» Das erhaltene Natriumsalz (350 EIg)_- war mit Ausnahme einer geringen Menge an IJatrium-tt-äthylcapronat rein. Gemäß dem UMR-Spektrum war das zweite Produkt mit Ausnahme einer geringen Menge Diäthylather (etwa 4,0 Gew.-%) rein. ■ ,

Die Teilanalyse des IR-Spektrums des Hatriumsalzes des Endproduktes (KBr-Scheibe, Werte in cm" ) ergab das Folgende:

- 3400	HH
2910 2853	CHp-Gruppen
1775	C=O ß-Lactam
± 1675	C=O Amid.

1605 C=O Carboxylation

- 1520 Mi-Deformationsschwingm ± 1405 Isoxazolring-Absorption

Die Analyse des BMR-Spektrums des Endproduktes (die Säure), gelöst in Hexadeuterodimethylsulfoxyd (60 Mc, cf-Werte in ppm, interner Standard 2,2-Dimethylsilapentan-5-sulfonat) ergab das Folgende:

U-H bei 8,9 (etwa 0,8 Protonen)

Isoxazolyl-C.-H 6,26 (1 Proton)

C₅-H und C₆-H 5,35 —> 5,60 (Multiplett, 2 Protonen)

C₂-H 4,26 (1 Proton)

- 3,79 (verbreitertes Singulett, 2 Protonen)

Adamantylgruppe 1,90 und 1,73

Zentren etwas verbreiterter Absorptionen) V ca.

C₃-(CH₃)₂ 1,64 und 1,51 J ²²

A09807/ 1 069

21S6488

Beispiel 17

Herstellung von 6-$4-(p-Mtro)-benzyloxycarbonylain:Lno-[3--(2,6-diclilor)-phenylisoxazol-5-yl]-acetamidoJ-penicillan-

saure

C - CH - C - IiH - CH-CH

2,33 g (5 mMol) 1-(p-Uitro)-benzyloxycarbonylamino-1-[3-(2,6-dichlor)-phenylisoxazol-5-yl]-essigsäure, 1,57 g (5 mMol) Trimethylsilyl-ö-isocyanato-penicillanat und 0,1 ml IT-Yinylimidazol als Katalysator vrarden in 50 ml trockenem Dichlormethan gelöst. Nacli 3-stündigem Rühren unter Stickstoff bei Raumtemperatur war die Umwandlung vollständig abgelaufen. Gemäß der Dünnschichtchromatograpie hatte sich das Isocyanat zu etwa 70 fo in das gewünschte Produkt umgewandelt. Das Reaktionsprodukt wurde auf O⁰C abgekühlt, worauf einige wenige Milliliter kaltes Aceton, das genügend Wasser enthielt, um den Silylester zu hydrolysieren, zugesetzt. Anschließend wurde die Mischung vollständig in der Kälte im Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde in 75 ml einer kalten 1:1-Mischung von Diäthyläther und Äthylacetat gelöst. Da dieses Penicillin zur Herstellung des Penicillins von Beispiel 18 verwendet werden sollte, wurde das Isolie-

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■- 49 -

rungsverfahren nicht zur Isolierung des Produktes in einem wesentlichen reinen Zustand sondern zur Isolierung einer so großen Menge des gewünschten Produktes wie möglich durchgeführt. Dazu wurde die Lösung mit 70 ml Eiswasser, das auf einem pH-Viert von 7 gepuffert war, vermischt· Die gut gerührte Mischung wurde auf einen pH-Wert-von 5,8 angesäuert und in einen Scheidetrichter überführt. Die Wasserschicht wurde abgelassen und verworfen, da sie das Nebenprodukt !!,JP-Dipenicillansäureharnstoff und lediglich Spuren des gewünschten Produktes enthielt. Die organische Schicht wurde anschließend zweimal mit schwach-saurein eisgekühltem Wasser und einmal mit einer geringen Menge neutralen Wassers gewaschen. Die organische Schicht, die in dieser Weise vollständig von dem Harnstoff und dem Katalysator befreit worden war, wurde über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und in der Kälte vollständig eingedampft. Der Rückstand wurde in Vakuum bis zur Gewichtskonstans getrocknet· Ausbeute 3»4 g eines schwach-gelben, im wesentlichen kristallinen Feststoffes. Die Dünnschichtchroinatogramme des rohen Endproduktes zeigte die Anwesenheit lediglich des gewünschten Penicillins und der geschützten Ausgangsaminosäure in einem Verhältnis von etwa 2:1 an. Dies wurde durch das HMR-Spektrum bestätigt, das ebenfalls die Anwesenheit von Äthylacetat und einer geringen Menge Wasser anzeigte. Der berechnete Gehalt des gewünschten Penicillins in dem rohen Produkt betrug etwa 2,2 bis 2,4- g.

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Beispiel

Herstellung von 6-£<i-Amino-[3-(2,6-dichlor)-phenylisoxazol-5-yl]-acetamido$-penicillansaure

.C - CK - C - N - CH CH

C(CH₃)₂

^H

O=C H

3,0 g des rohen Produktes von Beispiel 17* das etwa 2 g 6_ {gc-{ p-Ni tro) -b enzyloxycarbonylamino- [ 3- ( 2,6-diclilor) phenylisoxazol-5-yl!-acetamido] -penicillansäure enthielt, wurden in 100 ml Äthylacetat gelöst, mit 25 ml Wasser vermischt, Durch Zusatz einer verdünnten Hatriiiinhydroxydlösung wurde der pH-V/ert der Mischung auf einen Wert von 7»0 gebracht. Nach der Zugabe von 1,5 g Pd/C 10 $> wurde Wasserstoff kontinuierlich unter die Oberfläche eingeleitet. Durch dünnschichtchromatographische Untersuchung wurde festgestellt, daß die Reaktion nach 135-minütigem Rühren bei Raumtemperatur beendet war. Während 10 Minuten wurde Stickstoff durch die R^aktionsmischung geleitet, dann wurde Eiswasser zugesetzt uuo. der pH-Wert aiii einen Wert von 4»7 gebracht. Der Inhalt des !Trichters wurde in einen Scheidetrichter überführt, Dir. Mischung trennte sieh in eine klare Äthylacetatschicht "and eine Wasserseliieirt, die durch eine Eiauls ion s schicht getrennt waren. Die Wasser schicht wurde abgelassen und aufbewahrt. Anschließesa ;;irrde die Emulsionsschicht zentrifugiert. Die entstehanden Schichten wurden ge-

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trennt. Die Äthylacetatschicht wurde mit der ersten Äthylacetatschicht vereinigt. Die Wasserschichten wurden ebenfalls vereinigt und erneut mit Äthylacetat extrahiert. Die Wasserschicht wurde dann verworfen. Der verbleibende Katalysator wurde aus den vereinigten Äthylacetatextrakten durch .Filtration entfernt. Das gefärbte Filtrat wurde bei O⁰C im Vakuum auf ein Volumen von etwa 25 ml eingeengt. Dann wurden 100 ml Eiswasser zugesetzt und die Mischung auf einen pH-Wert von 7»0 gebracht. Die Schichten wurden getrennt und die gefärbte organische Schicht wurde verworfen. Die Lösung der gewünschten Verbindung in Wasser wurde durch zweimaliges Extrahieren mit einer 1:1-Mischung von Äthylacetat und Diäthyläther gereinigt. Die entstehende praktisch farblose lösung in Wasser wurde auf einen pH-Wert von 4>7 angesäuert und zweimal mit einem überschüssigen Volumen Äthylacetat extrahiert. Die Wasserschicht wurde verworfen und die vereinigten Äthylacetatschichten wurden zweimal mit einer geringen Menge Eiswasser gewaschen. Die Dünnschichtchromatogramme des Endextraktes zeigten einen ausgedehnten (die Mischung ist eine D,L-Mischung) Schwefel- und ITinhydrin-positiven Flecken. lach dem vollständigen Eindampfen des Extraktes erhielt man einen geringfügig gefärbten Peststoff. Ausbeute 650 mg an trockenem Material. Das Endprodukt wurde mit Hilfe-der IR- und NMR-Spektren untersucht und lag vor in Form einer 1:1-molaren Mischung des gewünschten Penicillins und Äthylacetat, die möglicherweise mit geringen Mengen eines 3-(2,6-Dichlor)-phenylisöxazol-Derivates -verunreinigt ist.

Die Teilanalyse des IR-Spektrums des Endproduktes (KBr-Scheibe, Vierte in cm~ ) ergab die folgenden Werte:

bei 3300 HH bei 2600 OH Carboxyl

1780 C=O ß-lactam

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i 1730 C=O Äthylacetat

- 1705	1440	C=O Carboxyl
1690		C=O Amid
1390 und	Isoxazolring-Absorptionen
785	C-Cl.

Beispiel 19

Herstellung des Natriumsalzes der 6-£-[3-(4-Nitro)-phenylisoxazol-5-yl]-acetamido£-penicillansäure

C - CIL. - C - Ή - CH— CH

In üblicher V/eise wurden 166 mg (0,67 mMol) 3-(4-Nitro)-phenylisoxazol-5-yl-essigsäure, 210 mg (0,67 mMol) Trimethylsilyl-6-isocyanato-penicillanat und eine Spur IT-Isopropylbenzimidazol umgesetzt. Als Lösungsmittel wurden 5 ml Benzonitril verwendet. Die Reaktion war nach 5-stündigem Rühren bei Raumtemperatur beendet. Der Inhalt des Kolbens wurde in eine eisgekühlte gut gerührte Mischung von 25 ml Wasser, 20 ml Diäthyläther und 25 ml Äthylacetat gegossen. Durch Zugabe einer verdünnten IJaOH-Lösung wurde die saure Mischung (pH 3) auf einen pH-Wert von 7 neutralisiert und die Schichten getrennt. Die organische Schicht wurde verworfen und die V/asserschicht wurde zur Reinigung einmal mit

409807/1069

~ 53 —

40 ml. einer 1:1-Mischung von Äther und Äthylacetat extrahiert. Dann wurden 30 ml einer 1:1-Mischung von Äther und Äthylacetat, mit der Wasserschicht vermischt und der pH-Wert auf einen Viert von 3,5 abgesenkt. Die Schichten wurden getrennt und die Wasserschicht wurde erneut mit 50 ml der gleichen Lösungsmittelmischung extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden zweimal mit einem geringen Volumen Eiswasser gewaschen, anschließend über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und vollständig im Vakuum eingedampft. Das sich ergebende gelbliche Öl wurde mit trockenem Diäthyläther verrieben. Der gebildete teilweise kristalline Feststoff wurde durch filtration gesammelt und anschließend wiederholt in Äther aufgerührt. ITach dem Trocknen im Vakuum wog das letztendlich erhaltene farblose Produkt 73 mg» Die Untersuchung des Produktes durch Dünnschichtchromatographie und durch IiMR-Spektrum zeigte, daß die gewünschte Penicillansäure 5 bis 6 Mol Wasser pro Mol der Verbindung und eine geringe Menge Diäthyläther enthielt, jedoch sonst rein war. Das erhaltene Ätherfiltrat und die Waschlösungen wurden vollständig eingedampft. Der Rückstand wurde in 3 nil einer trockenen 1:1-Mischung von Äther und Äthylacetat gelöst und anschließend in der Kälte mit einer verdünnten Lösung von Natrium-cc-äthyleapronat in Äther behandelt. Das ausgefallene Uatriumsalz¹des gewünschten Penicillins wurde durch Filtration gesammelt und wiederholt mit trockenem Äther gewaschen, Nach dem Trocknen wog dieses Produkt 134 mg. Das Produkt wurde in üblicher V/eise untersucht« Abgesehen von anhaftendem Wasser (weit weniger als es bei der freien Penicillansäure der Fall ist) wurde die Reinheit des Ilatrlumsalzes auf etwa 80 bis 85 $ geschätzt, da es etwa 5 &ew„-$ eines Abbauproduktes und 10 bis 15 Gew.-# Hatrlum-oc-äthyleapronat enthielt.

Die Analyse des NMR-Sρektrums der in einer Mischung von etwa 6 Teilen Hexadeuterodimethylsulfoxyd und 1 Teil D₂O gelösten

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6-i-[3-(4-Nitro)-phenylisoxazol-5-yl]-acetamido}-penicillansäure (60 Mc, cf-Werte.in ppm, interner Standard 2,2-Dimethylsilapentan-5-sulfonat) ergab die folgenden Werte:

C₆H. 7,95 —> 8,4 (AA¹BB^f Auf spaltung smu st er,

4 Protonen)

Isoxazolyl C.-H 6,94 (1 Proton)

Ο,--!! und Or-E 5,5 (geringfügig verbreitertes Singu- ⁰ ° lett, 2 Protonen)

C₂-H 4,15 (1 Proton)

ct-CHp 4,0 (etvra-s verbreitertes Singulett,

2 Protonen)

C₅-(CH₃)₂ 1,63 und 1,52 (6 Protonen).

Die Teilanalyse des IB-Spektrums des Natriumsalzes der 6-{-[3-(4-Nitro)-phenylisoxazol-5-yl]-acetamido}-penicillansäure (KBr-Scheibe, Vierte in cm" ) ergab die folgenden ¥erte:

bei 3380 NH

1770 C=O ß-Lactam (intensiv)

1675 C=O Amid (intensiv)

1600 C=O Carboxylätion + wahrscheinlich aromati

sches C=C (sehr intensiv)

1525 NO₂ + mögl. NH Def. (sehr intensiv)

HOO - 1460 Isoxazolring-Absorptionen 1355 NOp (intensiv)

- 858 C-NO₂ und aromatisches Substitutionsmuster

(mittlere Intensität)«

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Beispiel 20

Herstellung der 6-fc-Carbamyl-[3-(2,6-dichlor)-phenylisoxazol-5-yl!-acetamido$~penicillansäure

CH 0 _H ^

0- CH -8-N- CH—CH C(CH„)

U³

O=C N -C

Zu einer Lösung von 1,0 g (3,7 mHol) 3-(2,6-Dichlor)-phenylisoxazol-5-yl-acetamid in 15 ml trockenem Tetrahydrofuran, die auf -70⁰C abgekühlt worden war, gab man tropfenweise eine Lösung von 3,7 mMol n-Butyllithium in Hexan. Die Zugabe wurde derart eingestellt, daß die Reaktionsmischung unterhalb -60°C gehalten wurde, lach wenigen Minuten weiterem Rühren bei -70⁰C wurden tropfenweise 0,47 ml (etwa 3,7 mMol) frisch destilliertes Trimethylchlorsilan zugegeben. Anschließend wurde das Kühlbad entfernt und die Temperatur auf -30⁰C ansteigen gelassen. Dieses Verfahren'-die aufeinanderfolgende Zugabe von 1 Äquivalent n-Butyllithium und 1 Äquivalent Trimethylchlorsilan - wurde in gleicher Weise wiederholt. Zu der so in situ hergestellten Lösung des lT,li-Bis-trimethylsilyl-Derivates des Ausgangsproduktes in einer Mischung von 15 ml Tetrahydrofuran und etwa 3,5 ml Hexan gab man 0,56 ml (3,7 mMol) Ν,ϊί,Ν¹,U¹-Tetramethyläthylendiamin. Zu der erneut auf -75⁰C abgekühlten Mischung gab man tropfenweise eine Lösung von etwa 3,7 mMol n-Butyllithium in 1,76 ml Hexan. Die Zugabege-

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• schwindigkeit wurde derart eingestellt, daß die Reaktionstemperatur maximal -70⁰C betrug. Die Reaktionsmischung wurde schließlich während 1 Stunde bei -70 bis -60°C gerührt. Die Reaktionsfolge wurde durch die tropfenweise Zugabe einer Lösung von 1,16 g (3,7 mMol) Trimethylsilyl-6~isocyanato~ penicillanat in 10 ml trockenem !Toluol, wobei die Reaktionstemperatur unterhalb -55⁰C gehalten wurde, beendet. Die Reaktionsmischung wurde zusätzlich während JO Minuten bei -60⁰C gerührt. Die Reaktionsmischung und verdünnte Chlorwasserstoffsäure wurden langsam und gleichzeitig in eine gut gerührte eisgekühlte Mischung von 50 ml Diäthyläther und 50 ml Wasser mit einem pH-Wert von 4 gegossen. Anschließend wurde der pH-Wert der Mischung auf 7 erhöht und die Schichten getrennt. Die Wasserschicht wurde ein weiteres Mal mit 50 ml Äther bei einem pH-Wert von 7 extrahierte Die organischen Schichten wurden verworfen. Die Wasserschicht wurde dreimal mit Äther bei pH-Werten von 5,0, 4,5 bzw. 4,3 und einmal mit einer 1:1-Mischung von Äthylacetat und Diäthyläther bei einem pH-Wert von 4,3 extrahiert. Durch dünnschichtphromatographische Untersuchung wurde festgestellt, daß die Wasserschicht das gewünschte Penicillin zusammen mit geringen Mengen schwefelhaltiger Verunreinigungen nicht mehr enthielt und daß die ersten drei Ätherextrakte das Penicillin in im wesentlichen reinem Zustand enthielten. Die Ätherextrakte wurden vereinigt, mit Eiswasser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum vollständig eingedampft. Der erhaltene Peststoff wog nach längerem Trocknen im Vakuum 500 mg. Die IR- und UMR-Spektren bestätigten die angegebene Struktur des Penicillins. Die geschützte Reinheit betrug 80 bis 85 %.

Die Teilanalyse des IR-Spektrums des Endproduktes (KBr-Scheibe, Werte in cm~ ) ergab die folgenden Werte:

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± 3440 NH (wahrscheinlich CO-IiH₂)

- 3330 NH (wahrscheinlich CO-NH)

+ 3210 NH (wahrscheinlich gebundenes NH)

2500 - 2650 OH (Carboxyl)

1780 C=O ß-lactam

ί 1720 C=O (Carboxyl)

1690 und 1660 C=O- von CO-NH und CO-NH₂

1598 aromatisches C=C und NH₂ Deformation

ί 1525 wahrscheinlich NH Deformation

1395, 1430 Isoxazolring-Absorptionen

790 C-Cl und aromatisches Substitutionsmuster.

Beispiel 21

Herstellung von 6-{-[3-Methylisoxazol-5-yl]-acetamidoJ· penicillansäure

G-	-CH	CH2	- C Il O	TT	CH
K	Il ^ -			χι - N - (	yS 3 1 CH^ 3
				NC00H
	ί 1 τι ιη f
	T Tl
) (
T f
\i ———— ν

Im wesentlichen gemäß dem in Beispiel 2 beschriebenen "Verfahren wurden 282 mg (2 mMol) 3-Kethylisoxazol-5-yl~essigsäure mit 628 .mg (2 mMol) Trimethylsilyl-6-isocyanatopennicillanat in 10 ml trockenem Dichlormethan in Gegenwart

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von drei Tropfen N-Isopropylbenzimidazol als Katalysator umgesetzt. Nach dem üblichen Aufarbeiten der Reaktionsini— schung erhielt man ein schwachgefärbtes Produkt, das gemäßder DünnschichtChromatographie und der IR- und IJMR-Spektren eine gute Reinheit aufwies.

Die Analyse des NMR-Spektrums des in etwas DpO versetzten Hexadeuterodimethylsulfoxyd gelösten Produktes (60 Mc, cA-Werte in ppm, Tetramethylsilan als interner Standard) ergab die folgenden Werte:

Isoxazolyl C--H 6,22

C₅-H und C₆-H 5,50 (2 Protonen)

C₂-H 4,32

CH₂-CO- 3,82 (2 Protonen)

Isoxazolyl-CIL 2,23

)p 1,65 und 1,52

Die Teilanalyse des IR-Spektrums des Endproduktes (in KBr,

Werte in cm" ) ergab die folgenden Werte:

i 3500 OH Carboxyl

3350 NH

1780 C=O ß-Lactam

1740 C=O Carboxyl

1670 C=O Amid

1380 - 1430 Isoxazolring-Absorptionen.

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2166488

Beispiel 22

Herstellung von 7-i-[3~Methylisoxazol-5-yl]-acetamido}-cephalosporansäure

C „

H HH- H/^b\ C - CH₀ -C-N-C C CH,

■Ή . C-CH₀-O-C-CH,

COOH

Gemäß dem in Beispiel 3 beschriebenen Verfahren vrarde 3-I'fe"fchylisoxazol-5-y"l-&cetylchlorid (hergestellt aus 4>5 mHol 3-Methylisoxazol-5-?yl-essigsäure und Thionylchlorid) mit EijO-Bis-trimethylsilyl-T-amino-cephalosporanat (hergestellt aus 1,224 mg (4,5 mMol) 7-Aminocephalosporansäure) umgesetzt.

Uach der Reaktion und dem Aufarbeiten der Reaktionsmischung erhielt man 790 mg (44 $) eines schwach-gelb gefärbten Produktes mit einer Reinheit gemäß der DünnschichtChromatographie der IR- und IJMR-Spektren von etwa 70 ^. ■

Die Analyse des NMR-Spektrums des Endproduktes, gelöst in einer Mischung von Deuterochloroform und Hexadeuterodimethylsulfoxyd, der etwas DpO zugesetzt war, (60 Mc, cf-Werte in ppm, TetramethyIsilan als interner Standard) g_ab die · folgenden Werte:

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Isoxazolyl C₄-H 6,12

C₇-H 5,75 und 5,66 (Jäj4,5 cps, 1 Proton)

Cg-H 5,05 und 4,97 (J«*4,5 cps, 1 Proton)"

CII₂-CO- 3,78 (2 Protonen)

0-CH₂- 5,22 —> 4,68 (J^ 13 cps, 2 Protonen)

S-CH₂ 3,80 —> 3,15 (J^ 18 cps, 2 Protonen)

CO-CH₃ 2,07 i

Isoxazolyl-CH^ 2,25

Die !Deilanalyse des ΙΕ-Spektrums des Endproduktes (KBr,
Werte in cm~ ) ergab das folgende:

±3280	OH
1780	C=O ß-Lactam
1750	C=O Ester
1670	C=O Amid
1230	C-O-C Ester
1380 und. 1420	Isoxazolring-Absorptionen.

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Beispiel 23

Herstellung des IJatriumsalses der 6-£GU(N_piienyl)-earbamyl~ [3-(2,6—diehlor)-phenylisoxazol-5-ylJ-acetamidol-periicillan-

saure

Ii - CH-

S.

CH

I I

ο-

C(CHj,

Al

.C

COOHa

Eine Lösung von 1,0 g (2,9 raMol) H-Phenyl-3~(2,6-dichlor)-phenylisoxazol-5-yl-acetaiaid in 15 ml trockenem Tetrahydrofuran wurde auf -70⁰C abgekühlt. Bei -70⁰C wurden nacheinander tropfenweise eine vorgekühlte Lösung von etwa 2,9 EiKoI n-Butyllithium in 5 ml einer Mischung'von n-Hexan

und trockenem Tetrahydrofuran, und anschließend 0,44 ml (etwa 2,9 mHol) Η,Η,Η¹ ,H'-Tetramethyläthylen-diajnin zugesetzt xmä schließlich wurde eine vorgekühlte Lösung von 2,9 mliol n-Bu ty !lithium in 5 ml einer Mischung von n-Hexan und trockenem Tetrahydrofuran zugegeben. Die Reaktionsmischung wurde während 1 weiteren Stunde bei -70⁰C gerührt. Zu dem in dieser Weise hergestellten Reagens gab man anschließend tropfenweise bei -70⁰C eine Lösung von 0,91 g (2,9 mMol) Trimethylsilyl-ö-isocyanato-penicillanat in 5 ml trockenem Toluol« Hach Beendigung der Zugabe ließ man die Temperatur der Reaktionsmischung auf -50⁰C ansteigen und rührte die Reaktionsmisehung bei dieser Temperatur während

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etwa 30 Minuten. Dann wurden die Reaktionsmischung und verdünnte Chlorwasserstoffsäure gleichseitig zu einer auf O⁰C abgekühlten gutgerührten Mischung von 30 ml Wasser und 30 ml Diäthyläther gegeben. Die Zugaben wurden so ausgeglichen, daß sich während der gesamten Neutralisation ein pH-V/ert von etwa 7_f5 einstellte. Die entstehenden Schichten wurden getrennt und die Wasserschicht wurde zur Reinigung einmal mit 30 ml Diäthyläther und einmal mit 30 ml Äthylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten und die Wasserschicht wurden dünnschichtchromatograpliisch (zur Feststellung der schwefelhaltigen Verbindung) untersucht, wobei als Elutionsmittel eine 98;2-Mischung von Diäthyläther und Ameisensäure verwendet wurde. Die vereinigten organischen Schichten, die keine derartigen Verbindungen enthielten, wurden verworfen. Das Chromatogramm der Wasserschicht zeigte vier gut entwickelte Flecken, drei kleine Flecken und einen Hauptflecken,

Die kleineren Flecken wurden den Abbauprodukten, Ιί,Ιί'-Dipenicillanyl-harnstoff und n-Butylcarbonamidopenicillansäure, zugesprochen. Die Rf-Werte der beiden letzteren Flecken waren gleich dem Flecken der wirklichen Penicilline, Um die Verbindung, die für den vierten und den Hauptflecken des Chromatogramias verantwortlich war, abzutrennen, wurde die Wasserschicht bei pH 4»9 und pH 3»6 mit 30 ml Diäthyläther extrahiert, was zu einer vollständigen Abtrennung der gewünschten Verbindung aus der Wasserschicht führte. Das verbleibende Material und ein Teil der dritten Verbindung (voraussichtlich n-Butylpenicillin) wurden durch Extraktion bei pH 5_f 3 lait einer 2:1-Mischung von Diäthyläther und Äthylacetat abgetrennt. TJm das liebenprodukt zu entfernen wurde diese Schicht wiederholt mit Eiswasser mit einem pH-Wert von 4?6 gewaschen, was zu einem dritten, fast reineü Extrakt und einer Anzahl von

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ORlGiNAL

Waschwässer, die noch erhebliche Mengen des gewünschten Produktes enthielten, führte. Der vierte Extrakt wurde durch Extraktion der vereinigten Waschwässer mit Äthylacetat bei einem pH-Wert von 6,0 erhalten. Die vier Extrakte wurden vereinigt, mit Eiswasser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Die eingeengte lösung der gewünschten Verbindung in Äthylaeetat wurde mit einer konzentrierten Lösung von Natrium-ff-äthylcapronat in Äthylacetat behandelt. Das iJatriumsalz des Penicillins wurde aus dieser Lösung durch Zugabe von trockenem Diäthyläther ausgefällt. Der Niederschlag wurde durch Eiltration gesammelt, mit Diäthyläther gewaschen und bis zu einer Gewichtskonstanz getrocknet. Ausbeute 580 mg. Das Endprodukt würde dünnschichtchromatographisch und hinsichtlich der IR- und ITMR-Spektren untersucht, wodurch die angegebene Struktur bestätigt wurde und festgestellt wurde,"daß die Verunreinigungen des Endproduktes eine geringe Menge Uatriuia-oc-äthylcapronat und , eine geringe Menge, von-'Abbauprodukten waren.

Die Teilanalyse des IE-Spektrums des Endproduktes und des Ausgangsproduktes (gelöst in Chloroform, Konsentration etwa 10 mg/ml, Werte in cm" ) ergab die folgenden Vierte:

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-- 64 -

	Endprodukt	U-Phenyl-3-(2,6-dichlor) phenylisoxasol-5-yl- acetamid	Amid (intensiv
± 3420	BH . (wahrscheinlich 6 5" ~ ~>	3430 NH	arom. (intensiv)
± 3300	MH (breit)
1775	C=O ß-Lactam (intensiv)
ί 1705	C=O Amid (sehr intensiv)	1695 C=O
1600	C=O Carboxylation und C=O arom. (sehr intensiv)	1598 C=C

1558

- 1550

C=C und/oder C=Ii (scharf, mittlere Intensität)

wahrscheinlich WH Deformation (mittlere Intensität)

C=C arom. (mittlere Intensität)

1557 C=C und/oder C=IT (scharf, mittlere Intensität)

- 1520 wahrscheinlich UH Deformation

Intensität)

1495

ί 1440
1380

(KBr-Scheibe) C-Cl (intensiv)

mittlere 1 Isoxazol-Intensität C ringmittlere \ Abeorp-Intensität J

1496 C=C arom. (mittlere Intensität)

1435 intensiv! Isoxazol-( ring_kΓ Absorp-

' 1 a_j_AV,„^.

785 Ι (KBr-Scheibe)( C-Cl

ί mittlere

772

(KBr-Scheibe)J

Intensitäten

(KBr-Scheibe) wahrscheinlich aro- 755 (KBr-Scheibe) wahr-

matisches Substi- scheinlich aromatisches tutionsmuster Substitutionsmuster
(mittlere Intensität) (mittlere Intensität)

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Beispiel 24

Herstellung von 7~£~[3-(4-Bxtro)-phenylisoxa2;ol~5-yl]-acetamido' -cephalosporansäure

⁰ ^"^s\ ' ■

IL .C-CB₀-C-BH- CH-CH CH₉

⁰ Il IS

^C—IT

COOH

Gemäß dem in Beispiel 3 beschriebenen Verfahren wurden 3-(4-Mtro)~phenylisoxazol~5~yl-acetylchlorid (hergestellt aus 1,64 g (6,6 mMol) der entsprechenden Essigsäure und Thionylchlorid) mit !,O-Bis-trimethylsilyl-T-amino-. cephalosporanat (in situ aus 1,8 g (6,6 mMol) 7-Aminocephalosporansäure hergestellt) umgesetzt. Das Reaktionsprodukt v;urde in üblicher Yfeise aufgearbeitet. Man isolierte 1350 mg (40 °/o) eines schwachgelb gefärbten Peststoffes. Gemäß der Dünnschich'tchromatographie, der IE- und ITMR-Spektren betrug die Reinheit des Endproduktes etwa 85 f".

Die Analyse des HIiR-Spektrums des Endproduktes, gelöst in Hexadeuterodimethylsulfoxyd (60 Mc, cf-Verte in ppm, interner Standard 2,2-Dimethylsilapentan-5-sulfonat) ergab die folgenden Werte:

N-H 9,36 und 9,22 (J =8,0 ± 0,5 cps, etwaO,8 Protonen)

C₆IL 7,9 —> 8,5 (AA'BB¹ Aufspaltungsmuster,

4 Protonen)

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Isaxazolyl C.-H 7,05 (1 Proton)

C₇-H 5,87, 5,79, 5,73 und 5,65

(schwach, verbreiterte Signale,

J«=/ 8,0 cps und J^g«4,6 cps, 1 Proton)

G₆-H ' 5,19 und 5,11 (J^ = 4,6 ±0,2 cps) 0-CH

(5,19), 4,97, 4,82 und 4,60 (^JAB = 13,0 + 0,2 cps)

CHp-GO bei 4,0 (schwach verbreitertes Singulett,

2 Protonen)

S-CHp bei 3,6 (Zentrum eines AB-Quartetts mit

sehr schwachen äußeren Linien, )

k 2 Protonen)

CO-CH₃ 2,06 (3 Protonen.

Beispiel 25

Eine Menge von 100 bis 2000 mg des ITatriuiasalzes der 7-£-[3~ (2,6-Dichlorphenyl)-isoxazol-5-yl!-acetamido}-cephalosporan— säure wird aseptisch in eine für injizierbare Zusammensetzungen geeignete Ampulle eingeführt« Vor der Verwendung wird das Pulver in einer geeigneten Menge sterilen und pyrogenfreien Wassers gelöst.

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Beispiel 26

Aus den Verbindungen der Beispiele 1 bis 24· wurden Sirupe durch Vermischen der folgenden Bestandteile hergestellt:

"Natriumsalζ der verwendeten Ver- :

bindung 1,5 - 6 g

lösliche Stärke 1 -3g

Hatriurasacharin ■ 0,1 - 1 g

Wim M λ (^Methy^lester ^der Ρ" 0 06¹C

j?iipd. η j Hydroxybenzoesäure) υ,υο · . g

Erdbeer-Aroma · 0,1 - 5 g

Amaranth 0,010 g

Saccharose 30 g

"V/asser auf ein Volumen von 60 ml

Diese Sirupe sind zur oralen Verabreichung geeignet.

Bei-spiel 27

Kapseln wurden üblicherweise hergestellt, die als aktiven Wirkstoff eine Verbindung gemäß den Beispielen 1 bis enthielten. Die Bestandteile der Kapseln sinü die folgenden:

liatriumsalz der verwendeten Verbindung 150-500 mg Kaliumbicarbonat 100-300 mg

Magnesiurastearat - 2-10 mg

Lactose (in ausreichender Menge für 1 Kapsel)

Diese Kapseln können oral verabreicht werden.

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ORIGINAL iNSPECTCD

Beispiel 28

In üblicher Weise wurden Tabletten hergestellt, die als ak tiven Bestandteil eine Verbindung gemäß den Beispielen bis 20 enthielten.

Die Bestandteile der Tabletten sind die im folgenden angegebenen:

Natriurasalz der verwendeten Verbindung 125-500 mg . PolyTinylpyrrolidon 5-30 mg

Amylum-Mais 100-300 mg

Magnesiumstearat 1-20 mg

Lactose (in ausreichender Menge für 1 Tablette)

Diese Tabletten können oral verabreicht werden.

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Claims (1)

1. Patentansprüche

   oder deren Derivate j worin R eine ITiedrigalkylgruppe, eine Arylgruppe, wie eine Phenylgruppe oder eine Raphthy!gruppe, die gegebenenfalls einen oder mehrere Substituenten, wie Chloratome, ITuoratoine, Nitrogruppen, Aminogruppen, Medrigalkylgruppen tragen, wie die 2,6-Dichlorphenylgriippe oder eine tertiäre Alkylgruppe, wie die Adaraantylgruppe, R eine' Niedrigalkyl-, Carbarayl-, Cyano-, Aminogruppe oder ein Chloratom,

   R ein Chlor- oder Bromatom, eine Cyano-, Amino-, Aralkaxycarbonylaniino-, Niedrigalkyl- oder Carbamojagruppe, die gegebenenfalls aia Stickstoffatom einen ITiedrigalkyl- oder Phenylsubfitituenten tragen }cann, und Y eine Carboxylgruppe, die gegebenenfalls in ein Alkalimetallsalz, ein Erdalkalimetallsalζ oder ein Aminsala oder, einen Ester überführt ist, oder eine Gruppe

   I TT
   Me oder Me^x -Hai darstellt, worin Me ein Hetallatom, die Nummer I oder II die "Wertigkeit dieses Metallatoms und EaI ein Kalogenatom, wie ein Chloratom oder ein Bromatom darstellen, bedeuten«,

   ²· [3-(i)-Adamantylisoxazol-5-yl]-essigsäure und deren Salae und Ester.

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   3 . [3-(4-Hitro)-ph.enylisoxazol-5-yl]-essigsäure und deren Salze und Ester.

   4 . [3-(4-Amino)-pnenylisoxazc-l~5~yl]-essigsäure und deren Salze und Ester.

   5 · ct-Brom-[3-(2_i6-diclxlor)-phenylisoxazol~5--yl]-essigsäure und deren Salze und Ester,

   6 . cx-Amino-[3-(2_Iö-diclilor)-phenylisoxazol-5-yr]-essigsäure und deren Salze und Ester. ■ - . * · '

   7.· [3--(2,6-Dichlor)-plienyl~4-inetIiylisoxazol-5--yl]~

   essigsäure und deren Salze und Ester.

   8 . a-(p-liiitro)-benzyloxycarbonylainino-[3-(2,6-dichlor)-ph.enylisoxazol-5~yl]-essigsäure und deren Salz.er. und Ester. ^v . '

   9 . [3~(2,6-Dichlor)-phenyl-4-cyano-isoxazol-5-yl3~ essigsäure und deren Salze un,d Ester.

   10 . [3-(2,6~l)ichlor)~pIienyl-4-carbainylisoxazol-5-yl3-

   essigsäure und deren Salze und Ester. ,

   11.. [3~(2,4|6~Trimethyl)-phenyl~4-methylisoxazol-5-yl3-

   essigsäure und deren Salze und Ester.

   12 ", tt-Methyl-[3-(2,4,6-trimethyl)~phenylisoxazol~5-yl3-

   essigsäure und deren Salze und Ester.

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   a-Chlor-[3-(2_i4,6-trirnethyl)-phenylisoxazol-5-yl]-essigsäure und deren Salze und Ester.

   14-, _λ . [3-(2,6-Dichlor)-phenyl-4~chlor-isoxazol-5-yl3-essigsäure und deren Salze und Ester.

   15. [3-(2,6-Dichlor)-phen3^rl-4-amino—isoxazol-5-yl]-essigsäure und deren Salze und Ester.

   Ί6β Verfahren zur Herstellung von.substituierten Iso3cazol-5~yl-essigsäuren und deren Derivaten der allgemeinen Formel

   E R¹

   - CH- COOH R² -

   worin R eine liiedrigalkylgruppe, eine Arylgruppe, wie eine PhenyXgruppe oder eine Faplithylgruppe, die gegebenenfalls durch einen oder mehrere-Substitu ent en, wie Chloratoine, ÜTuoiatorae, Nitrogruppen, Aminogruppen, Hiedrigalkylgruppen substituiert sein können, wie die 2,6-Dichlorphenylgruppe oder eine tertiäre Alkylgruppe, wie eine Adarcantylgrüppe, R eine liiedrigalkylgruppe, eine Carbamylgruppe, eine Cyano-

   gruppe, eine Aininogruppe oder ein Chloratora und R einChlor- oder Bromatom, eine Cyanogruppe, eine Aminogruppe,. eine Aralkoxycarbonylamino-

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   BAD ORIGINAL

   gruppe, eine Niedrigalkylgruppe oder eine Carbamoylgruppe, die gegebenenfalls am Stickstoffatom einen Niedrigalkyl- oder Phenylsubstituenten tragen kann, bedeuten, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung der Formel E-C=Ii ^o mit einer

   i 1 ■ ■

   Verbindung der allgemeinen Formel R -C=C-CH₂-Z, worin R und R die oben angegebenen Bedeutungen besitzen und Z ein Wasserstoffatom, eine Carboxylgruppe, eine Methyigruppe oder eine Hydroxylgruppe, bzw. eine Hydroxymethylgruppe, bedeutet, einer Cycloadditionsreaktion unterzieht, man anschließend gegebenenfalls eine. Reaktion zur Veränderung der Gruppe R durchführt, man, wenn Z ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe bedeutet, zur Einführung einer Carboxylgruppe in die so erhaltene Verbindung, diese Verbindung mit einer Lithiumalkylverbindung und CO₂ und πίο umsetzt, oder man die erhaltene Verbindung, wenn Z eine Hydroxylgruppe, bzw. eine Hydroxymethylgruppe bedeutet, oxydiert, und die so erhaltene Verbindung weiter unter Erzielung einer a-Halogenierung umsetzt, worauf man die so erhaltene Verbindung mit nukleophilen Mitteln behandelt, oder mit einer Lithiumalkylverbindung und einem geeigneten Mittel umsetzt und gegebenenfalls die erhaltenen Säuren in ihre Salze oder Ester überführt.

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