DE2139163C3 - Verfahren zur Bestimmung der Triglyzeride in Körperflüssigkeiten - Google Patents
Verfahren zur Bestimmung der Triglyzeride in KörperflüssigkeitenInfo
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Description
Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Bestimmung der Triglyzeride, bei dem in an sich
bekannter V/eise das Glyzerin der Triglyzeride durch Verseifung freigesetzt und zu Formaldehyd oxydiert
und der entstandene Formaldehyd mit Ammoniak und Acetylaceton zu 3,5-Diacetyl-l,4-dihydrolutidin
umgesetzt wird.
Die Bestimmung der Triglyzeride ist zur Erkennung und Klassifizierung von Fettstoffwechselstörungen von
großer diagnostischer und therapeutischer Bedeutung.
Es gibt verschiedene Verfahren zur Bestimmung der Triglyzeride, die sämtlich zwei Arbeitsschritte
beinhalten:
1. Eliminierung der Phosphatide und
2. Verseifung der restlichen Esterbindungen.
Bei einem Verfahren nach DT-OS 17 73 512 wird die Verseifung der restlichen Esterbindungen mit
Hydroxylamin vorgenommen und aus dem Anteil der entstehenden Fettsäurehydroxamsäuren, vermindert
um die von Cholesterinestern freigesetzten Feitsäurehydroxamsäuren,
die Triglyzeride errechnet. Nachteilig wirkt sich bei diesem Verfahren die Notwendigkeit
der Durchführung von zwei Bestimmungen (restliche Esterbindungen und Cholesterinester) aus.
Die übrigen Verfahren bestimmen das nach alkalischer Verseifung freigesetzte Glyzerin. Dabei besteht
die Möglichkeit einer allerdings sehr störanfälligen fermentativen Glyzerinbestimmung oder der Oxydation
des Glyzerins zu Formaldehyd und der photometrischen Bestimmung dieses Formaldehyds mit Chromotropsäure.
Bei diesem Verfahren stört die Unbeständigkeit der Chromotropsäurelösung.
Der bei der Oxydation des Glyzerins entstehende Formaldehyd kann auch mit Ammonsalzen und
Acetylaceton zu 3,5-Diacetyl-l,4-dihydrolutidin umgesetzt werden. Letzteres kann kolorimetrisch oder
fiuorimetrisch bestimmt werden. Durch Mitführen eines Standards von Triolein oder Tripalmitin erhält
man eine Vergleichszahl zur Berechnung der Triglyzeride.
Bei diesem Verfahren wird als Farbreagens eine Mischung von Acetylaceton mit Ammonacetatlösung
verwendet. Diese Mischung ist aber nur kurze Zeit
ίο haltbar, so daß das Farbreagens in kurzen Abständen
frisch angesetzt werden muß oder eine getrennte Zugabe von Ammonacetat und 1 Tropfen Acetylaceton
erfolgen muß, wobei das Acetylaceton wegen seiner Viskosität nur ungenau dosiert werden kann.
Außerdem ist Acetylaceton selbst nicht unbeschränkt haltbar. Das nahezu farblose frische Destillat verfärbt
sich mit der Zeit stark gelb, und die Verwendung eines solchen Produkts führt zu hohen Leerwertextinktionen,
die das Meßergebnis ungünstig beeinflussen.
Es stellte sich somit die Aufgabe, ein stabiles und lagerfähiges Reagens für die eingangs genannte
Triglyzerid-Bestimmungsmethode zu schaffen. Diese Aufgabe wird dadurch gelöst, daß man Acetylaceton
in Form eines stabilen wasser- und alkohollöslichen, farblosen Metallkomplexes verwendet. Bevorzugt wird
ein Alkali- oder Erdalkalimetallkomplex verwendet. Die Komplexbildung trägt zur Stabilisierung des
Acetylacetons bei, sie ist jedoch entgegen der Erwartung nicht so stark, daß eine Teilnahme des Acetylacetons
an der Dihydrolutidinbildung nicht möglich wäre.
Als Beispiel der Triglyzerid-Bestimmung unter Verwendung eines Farbreagens nach dem erfindungsgemäßen
Verfahren sei folgende Methode angegeben, die sich im ersten Teil an das Verfahren nach
Lartillot und Vogel anlehnt (Feuillets de Biologie, 11 [1970] 39).
Reagenzien:
1. 0,08 N-Schwefelsäure,
2. Extraktionslösung: Isopropanol zu Heptan, 35:20,
3. 0,1 M Natriummethylat in Isopropanol,
4. 250 mg Natriumperjodat in 2,5°/oiger Essigsäure,
5. Farbreagens: 4,0 g Natriumacetylacetonat in 15°/oiger Ammonacetatlösung.
Methode:
0,2 ml Serum werden mit 0,4 ml 0,08 N-Schwefelsäure versetzt und mit 2,2 ml Extraktionslösung versetzt
und ausgeschüttelt. Nach dem Stehenlassen setzt eine obere organische Phase ein, welche die Triglyzeride
und nicht die Phosphatide enthält.
0,5 ml der organischen Phase werden mit 2,0 ml Na-Methylatlösung versetzt und bei Zimmertemperatür
5 Minuten lang verseift. Dann wird zur Oxydation 1,0 ml Natriumperjodatlösung zugegeben und anschließend
0,5 ml des Farbreagens zugefügt. Der Ansatz wird 20 Minuten auf 37°C erhitzt und dann
gegen einen Leerwert, der an Stelle des Serums destilliertes Wasser enthält, gemessen.
Claims (3)
1. Verfahren zur Bestimmung der Triglyzeride, bei dem in an sich bekannter Weise das Glyzerin
der Triglyzeride durch Verseifung freigesetzt und zu Formaldehyd oxydiert und der entstandene
Formaldehyd mit Ammoniak und Acetylaceton zu 3,5-Diacetyl-l,4-dihydrolutidin umgesetzt wird,
dadurch gekennzeichnet, daß Acetylaceton in Form eines stabilen wasser- und alkohollöslichen,
farblosen Metallkomplexes verwendet wird.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß ein Alkali- oder Erdalkalimetallkomplex des Acetylacetons verwendet wird.
3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß als Farbreagens eine 1- bis
10%ige Lösung eines Metallkomplexes des Acetylacetons in einer 5- bis 30°/0igen wäßrigen Lösung
eines Ammoniumsalzes verwendet wird.
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1971
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|---|---|---|---|
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| E77 | Valid patent as to the heymanns-index 1977 | ||
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