DE1945663A1 - Diagnostikum zur Bestimmung von Pankreas-Enzymen in Koerperfluessigkeiten - Google Patents

Diagnostikum zur Bestimmung von Pankreas-Enzymen in Koerperfluessigkeiten

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    • G01N2333/918—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)

Description

Diagnostikum zur Bestimmung von Pankreas-Enzymen in Körperflüssigkeiten
Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur quantitativen Bestimmung von Pankreas-Enzymen, insbesondere der Lipase und des Chymotrypsins in Körperflüssigkeiten, wie Duodenalsaft und Blut.
Da die Pankreas-Enzyme einen entscheidenden Einfluß auf den Stoffwechsel haben, ist es wichtig, daß man in der Diagnostik von Pankreas-Erkrankungen zuverlässige, rasch und einfach durchführbare Bestimmungen der Pankreas-Enzym-Konzentrationen im Duodenalsaft bzw. Blut in mög lichst einfacher Weise durchführen kann. Zweckmäßig ist es, wenn man sich dabei Farbstoffen bedienen kann, die entsprechende Farbreaktionen zu geben vermögen.
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Der Anmelder hat bereits ein Diägnostikum einer solchen Art zur Bestimmung von Pankreas-Enzymen in Körperflüssigkeiten vorgeschlagen, welches dadurch gekennzeichnet ist, daß es einen Pluoreszeindiester einer Fettsäure, vorzugsweise einen Diester der Laurin- oder Myristinsäure ent- hält.
Es wurde nun überraschend gefunden, daß auch Fluoreszein-Mono-Ester mit Fettsäure als Diägnostikum zu Bestimmung von Pankreas-Enzymen in Körperflüssigkeiten gut geeignet sind.
Die erfindungsgemäß in dem Diägnostikum vorhandenen Fluoreszein-Mono-Ester mit Fettsäuren sind farblos und wasserlöslich und eignen sich, wie gefunden wurde, als Testsubstanzen für die Pankreas-Lipase. Solche Fluoreszein-Mono-Fettsäureester, insbesondere die farblosen 3- oder 6-Mono-Fettsäureester des Fluoreszeins, haben die Eigenschaft, bei der Hydrolyse chinoide Gruppierungen anzunehmen und infolgedessen Farbreaktionen zu geben und eignen sich als Substrate für Enzyme, denn sie werden insbesondere von Enzymen des Pankreas-Sekrets (Lipase und Chymotrypsin)verseift, und dabei wird das Fluoreszein als resorbierbarer Farbstoff freigesetzt. Die Umsetzung läßt sich wie folgt formulieren!
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farbloser 3- oder 6- Pankreas Mono-Fettsäureester Enzyme . Fluoreszein des Fluoreszeins IHO + baUre
Das resorbierbare Fluoreszein ist im Serum oder, nach Ausscheidung durch die Niere, im Urin quantitativ beispielsweise mittels Fluoreszenz- oder Absorptionsmessung erfaßbar. Ferner ist eine Inkubation von Serum, das auf seinen Gehalt an Esterasen geprüft werden soll, mit den farblosen Estern möglich, aus denen durch enzymatische Verseifung das Fluoreszein freigesetzt wird und als Maß für die Enzym-Konzentration quantitativ erfaßt werden kann.
Es kann zweckmäßig sein, für die Diagnostik von Pankreas-Erkrankungen die Fluoreszein-Mono-Fettsäureester vermischt mit einem Zusatzstoff, z.B. einer Puffersubstanz und/oder Geschmacksstoffen, einzusetzen, und/oder sie in dünndarmlöslichem Kapselmaterial eingekapselt zu verwenden.
Zweckmäßig verwendet man Ester solcher Fettsäuren, die 8 bis 16 Kohlenstoffatome aufweisen, vorzugsweise die Mono-Ester der Laurin- oder Myristinsäure.
Man kann das erfindungsgemäße Diagnostikum in im wesentlichen zwei grundsätzlich verschiedenen Arten anwenden.
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a) Das für Routineuntersuchungen am besten geeignete Verfahren besteht in der peroralen Applikation des erfindungsgemäßen Diagnostikums, das zu diesem Zweck vorteilhaft portionsweise in magen- oder dünndarmlöslichem Kapselmaterial eingekapselt eingesetzt wird. Da der Fluoreszein-Mono-Ester wasserunlöslich und nicht resorbierbar ist, hat er in soweit die Eigenschaften der natürlichen Nahrungsfette und kann wie diese erst nach der Hydrolyse der Esterbindungen durch die Pankreas-Enzyme in Form der Alkohol- und Säurekomponenten resorbiert werden. Die alkoholische Komponente, die dabei aus Fluoreszein besteht, wird nach ihrer Resorption in Blut und/oder Urin analytisch nachgewiesen«
Wie gefunden wurde, wird bei der Hydrolyse eine der Enzym-Konzentration proportionale Menge an Fluoreszein freigesetzt, und dabei wird die maximale Fluoreszeinbildung in in etwa von der Natur des Säurebestandteils mitbestimmten Zeitspannen erreicht, und zwar ist diese Zeitspanne unter sonst gleichen Untersuchungsbedingungen um so geringer, je weniger C-Atome der Fettsäurebestandteil aufweist. Andererseits steht auch die Höhe des Absorptionsmaximums in Relation zu der Kettenlänge des Säurebestandteils, wobei jedoch bei relativ kurzkettigen Fettsäuren ebenso wie bei relativ langkettigen Fettsäuren das Maximum vergleichsweise niedriger liegt als bei
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Verwendung von Fluoreszein-Mono-Fettsäuren, die eine mittlere Anzahl an C-Atomen im Fettsäure-Bestandteil enthalten. Je nachdem, welche Empfindlichkeit für einen speziellen Einzelfall für die Diagnostik gewünscht wird, kann das in diesem Einzelfall eingesetzte Diagnostikum mit dem spezifisch dafür geeigneten Fettsäure-Bestandteil hergestellt werden.
Man kann das erfindungsgemäße Diagnostikum auch mit üblichen Füllstoffen tablettiert oder als Dragee einsetzen, und es ist ferner ohne weiteres möglich, übliche Farbstoffe beizugeben.
b) Im Blut können die Pankreasenzyme durch Inkubation von Plasma oder Serum mit einer zugesetzten Lösung des erfindungsgemäßen Diagnostikums an der spektrophotometrisch und/oder fluorometrisch erfaßbaren Menge des freigesetzten Fluoreszeins erkannt und quantitativ bestimmt werden, da ein kleiner Anteil der Pankreasenzyme direkt von den Pankreaszellen in das Blut übertritt, was insbesondere bei einer pathologischen Erhöhung der Permeabilität der Zellmembranen, z.B. bei Pankreatitiden, der Fall ist.
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Claims (6)

Patentansprüche
1. Diagnostikum zur Bestimmung von Pankreas-Enzymen, insbesondere der Lipase und des Chymotrypsins, in Körperflüssigkeiten, dadurch gekennzeichnet, daß. es aus einem Fluoreszein-Mono-Ester einer Fettsäure, vorzugsweise dem "3- bzw. 6-Mono-Ester der Laurin- oder Myristinsäure, besteht.
2. Diagnostikum nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es gemischt mit einer Puffersubstanz vorliegt,
3. Diagnostikum nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß es gemischt mit üblichen Färb- und/ oder Geschmacksstoffen vorliegt.
4. Diagnostikum nach Anspruch 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß es in magen - und/oder dünndarmlöslichem Kapselmaterial eingekapselt vorliegt.
5. Diagnostikum nach Anspruch 1 bis 3* dadurch gekennzeichnet, daß es mit üblichen Füllstoffen tablettiert und/oder als Dragee vorliegt.
6. Diagnostikum nach Anspruch 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß es aufgeschlämmt und/oder gelöst in Wasser vorliegt.
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