DE1121846B - Diagnostiziermittel zum Nachweis von Glukose in Fluessigkeiten - Google Patents

Description

Die Hauptpatentanmeldung M 30739 IX/421 betrifft ein Diagnostiziermittel zum Nachweis von Glukose in Flüssigkeiten, insbesondere im Urin. Es setzt sich zusammen aus einem saugfähigen Träger, der ein Enzym, das Oxydaseaktivität für Glukose aufweist, und einen Indikator enthält, der in Gegenwart eines Reaktionsproduktes, das sich bei der Berührung des Enzyms mit der Glukose bildet, eine Farbreaktion gibt.

Das Diagnostiziermittel eignet sich zum Nachweis und zur Bestimmung des Gehalts vieler reduzierender Zucker, insbesondere jedoch zum Nachweis von Glukose in Körperflüssigkeiten. Die Bestimmung von Glukose in Körperflüssigkeiten, z. B. im Urin, ist nicht nur für Diabetiker von großer Wichtigkeit, die den Zuckergehalt kontrollieren müssen, sondern sie ist auch dann wichtig, wenn der Nachweis einer Krankheit im öffentlichen Interesse liegt und zahlreiche Menschen rasch und zuverlässig untersucht werden sollen.

Es hat sich nun gezeigt, daß das in der Hauptpatentanmeldung beschriebene Diagnostiziermittel in sehr vorteilhafter Weise dadurch abgewandelt werden kann, daß man als Peroxydase liefernde Substanz Blut, Trockenblut, rote Blutkörperchen, Trockenblutkörperchen, Mischungen von Trockenblut oder Trockenplasma verwendet. Ferner kann es zweckmäßig sein, noch ein Stabilisierungsmittel, wie Gelatine, beizumischen. Die Eigenschaft des Blutfarbstoffs, Peroxydasewirkung zu besitzen, ist zwar bekannt, jedoch wurde diese Substanz noch nicht für Diagnostiziermttel verwendet, wie sie in der Hauptpatentanmeldung beschrieben sind.

Die Bestandteile der Zubereitung nach der Erfindung können in breiten Grenzen variieren, so daß sie z. B. von 10 mg Indikator, wie o-Toluidindihydrochlorid, bis zu 200 mg eines Indikators pro 100 Versuche enthalten.

Der Glukoseoxydasebestandteil kann von etwa 10 mg bis zu etwa 200 mg pro 100 Versuche variiert werden.

Auch die Blutkomponente der Zusammenstellung kann man z. B. von 0,02 ml bis zu einem ml pro 100 Versuche verändern, und ihr Verhältnis — rote Blutkörperchen zu Plasma — kann vom normalen Verhältnis (in dem das Volumen der Blutkörperchen 45 °/o beträgt) durch Zugabe von Plasma so verändert werden, daß das Volumen der Blutkörperchen beispielsweise 0,3, 1,5, 2,8, 3,8, 4,1 oder 10,4% beträgt. In ähnlicher Weise kann man normales Blut, rote Blutkörperchen allein, lyophilisiertes vollständiges Trockenblut, lyophilisierte Trockenblutkörperchen, Diagnostiziermittel

zum Nachweis von Glukose

in Flüssigkeiten

Zusatz zur Patentanmeldung M 30739 IX b / 421
(Auslegeschrift 1 075 869)

Anmelder:

Miles Laboratories, Inc.,
Elkhart, Ind. (V. St. A.)

Vertreter: Dr.-Ing. F. Wuesthoff, Dipl.-Ing. G. Puls und Dipl.-Chem. Dr. rer. nat. E. Frhr. v. Pechmann, Patentanwälte, München 9, Schweigerstr. 2

Beanspruchte Priorität:
V. St. v. Amerika vom 3. Februar 1956

Ernest Clarence Adams jun., Elkhart, Ind. (V. St. A.), ist als Erfinder genannt worden

lyophilisiertes Trockenblut und wasserlösliches Trockenplasma in verschiedenen Verhältnissen als Blutkomponente verwenden.

Die Glukoseoxydasekomponente nach der Erfindung kann ein übliches Handelsprodukt sein, das z. B. eine Aktivität von etwa 2600 Einheiten pro Gramm hat, wobei eine Einheit diejenige Menge eines Enzyms ist, die eine Sauerstoffaufnahme von 10 mm³ bei 30° C durch eine in einer Warburgflasche enthaltene Glukoselösung verursacht.

Die folgenden Beispiele erläutern eine Reihe von Ausführungsformen der Erfindung und ihre Anpassungsfähigkeit, insbesondere hinsichtlich der Mengen der Bestandteile.

Beispiel 1

Es wurde eine Mischung der folgenden Bestandteile hergestellt:

200 mg Glukoseoxydase,

1 ml Blut,
10 ml Plasma,
200 mg o-Toluidindihydrochlorid.

Mit dieser Mischung wurden Filterpapierstreifen imprägniert. Die Streifen gaben nach dem Trocknen

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eine blaue Farbe, wenn sie mit glukosehaltigem Urin in Berührung gebracht wurden.

Ähnliche Filterpapierstreifen wurden bei den folgenden Beispielen verwendet.

Beispiel 2

200 mg Glukoseoxydase, 138 mg wasserlösliche, rote Trockenblutkörperchen, 200 mg o-Toluidindihydrochlorid.

Beispiel 3

50 mg Glukoseoxydase, 0,1 ml Blut,

3 ml Plasma, 50 mg o-Toluidindihydrochlorid.

Beispiel 4

200 mg Glukoseoxydase, 150 mg wasserlösliches Trockenblut, 200 mg o-Toluidindihydrochlorid.

Beispiel 5

50 mg Glukoseoxydase, 0,1 ml Blut,

50 mg o-Toluidindihydrochlorid, 100 mg Natriumacetat.

Beispiel 6

200 mg Glukoseoxydase, 0,2 ml Blut,

3 ml Plasma, 200 mg o-Toluidindihydrochlorid.

Beispiel 7

100 mg Glukoseoxydase,

0,2 ml Blut,
500 mg Gelatine, 100 mg 2,7-Diaminofluorendihydrochlorid, 5 ml 4 n-Zitratpuffer, ph 5,4, 10 mg FDA-Rot-Nr. 22-Farbstoff.

Bei der Herstellung der obigen Zubereitung wird die Gelatine vorzugsweise in 9 ml heißem Wasser und das Diamino-Fluorendihydrochlorid in 2,5 ml Wasser gelöst. Die frisch hergestellte Indikatorlösung wird zugegeben und mit der Gelatinelösung vermischt. Die entstandene Lösung wird dann in ein 50° C heißes Wasserbad gestellt und die Pufferlösung unter Rühren langsam zugegeben. Die Glukoseoxydase wird in 2,5 ml Wasser gelöst und dann das Blut zu der Glukoseoxydaselösung gegeben. Die andere Mischung wird vom Wasserbad entfernt, die Glukoseoxydaseblutlösung zugegeben und vermischt. Dann wird der Farbstoff, der als kontrastreicher Hintergrund bei der Durchführung der Versuche dient und an dessen Stelle selbstverständlich auch andere äquivalente Farbstoffe verwendet werden können, gelöst in 1 ml Wasser, zugegeben und auch vermischt. Die entstandene Zubereitung wird zum Imprägnieren von Papierstreifen verwendet, die dann luftgetrocknet werden.

Das Diagnostiziermittel kann auch in Form von

ao Pastillen, Pulver oder von mit einer Lösung oder einer Suspension imprägniertem Filterpapier oder in vielen anderen Formen hergestellt werden. Ferner können auch Schutzstoffe, wie Gelatine und Puffersysteme, zum Aufrechterhalten des p_H-Wertes zwisehen etwa 4 und 6 dem Diagnostiziermittel zugefügt werden.

Claims (2)

PATENTANSPRÜCHE:

1. Diagnostiziermittel zum Nachweis von Glukose in Flüssigkeiten nach Patentanmeldung M 30739 IX/421, dadurch gekennzeichnet, daß es als Peroxydase liefernde Substanz Blut, rote Blutkörperchen, Trockenblut, Trockenblutkörperchen, Mischungen von Trockenblut oder Trockenplasma und gegebenenfals ein Stabilisierungsmittel enthält.

2. Diagnostiziermittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es als Stabilisierungsmittel Gelatine enthält.

In Betracht gezogene Druckschriften:
H. Stetter, »Enzymatische Analyse«, Weinheim 1951, S. 155.