DE2106696A1 - Diketocoriolin B und Verfahren zu seiner Herstellung - Google Patents

Description

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DR. BERG DIPL.-ING. STAPF £ IUOOOQ

PATENTANWÄLTE
8 MÜNCHEN 2, H ILBLESTRASS E 2O

Dr. Berg Dipl.-Ing. Stapf, 8 München 2, Hllblestraße 20

Unser Zeichen Datum

Amvaltaakte 20 628
13 e/A

MHh, W\

Z^idun .Io j in Biaeioutsu Kagaku Kenkyu ICai I¹Oi^iO (Japan)

"Siketocorioliii U und Verfahren zu seiner Herstellung"

Diese Erfindung betrifft ge^en Tumore \;irlcunde, als Dilcetooüriolin ±3 bezeiclinete Substanzen und das Verführen zu ihrer HerStellung. Diketocoriolin 3 und Goriolin 3, von dem das erijtore abctanont, -ind neuai^tiga üubstunzen, dio durch aie 7orli:j{5orulG Erfindung zur Verfä^un;'; gestellt werdon. Im besonderen betrifft die Erfindung ein Verfüiiren zur Her-

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Stellung von Diketocoriolin B, wozu man Basidiomycetes zur Bildung von Ooriolin B unter Kultur hält, das Coriolin B gewinnt und dieses dann nach einem bekannten Verfahren zur Umwandlung der Hydroxylgruppen in Ketongruppen oxydiert,

Ss ist ein G-egenstand der vorliegenden Erfindung, ein Verfahren zur Herstellung von Diketocoriolin B zu schaffen.

Weitere Gegenstände der Erfindung sind:

- ein Verfahren zur Herstellung von Coriolin B, das zur Herstellung von Diketocoriolin B geeignet ist;

- ein Diketocoriolin B, das inhibierende Wirkung auf grampositive Bakterien, Mäuse-Leukämie L-1210 und auf den Ehrlich-Asciten-Tumor aufweist und weiterhin die Inhibierung des V/uchses von Yoshida-Sarkomazellen bewirkt. Die Wirkungsweise dieser Anti-Tumorsubstanz ist einzigartig, wobei sie den Transport von Adenosintriphosphatase von Zellmembranen inhibiert?

- Diketocoriolin B zur Verfügung zu stellen.

Die Erfindung wird weiter erläutert durch die begleitende Zeichnung, worin Fig. 1 das Infrarot-Absorptionsspektrum von Coriolin B in Kaliumbromidtabletten und ^ig. 2 das Infrarot-Absorptionsspektrum von Diketocoriolin B in Kaliumbromidtabletten zeigt.

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Dl... nach der vorliegenden Erfindung hergestellte Goriolin jj zei.jt keine physiologische V/irksarnkeit, über das durch o.ic Oxidation des Goriolin B erhaltene Dikotocoriolin B ist eine Subctanz, die ,το gar bei Verwendung in geringer Lenge inhibierende V/irlcung auf gra:.i-positive Bakterien, i.J".u.ce-Leukiiuie 1—1210 und' Ehrlicli-Aociten-iumor hat und den ./uch.; der Yo shida-Jarkom«.; seilen inhibierte

Las iiL.ch den vorliegenden Verfuhren erhaltene Goriolin B hut eee die nachfolgend erwähnten Eigenschaften.

Coriolin 3 wird in Schuppenform erhalten und schmilzt bei 215 bis 21u°G. Es ist in !.!ethanol, Äther, iithylacetat, Chloroform, Benzol und Aceton löslich, jedoch schwer löslich oder unlöslich in tetrachlorkohlenstoff, η-Hexan und Vac2er. Goriolin B zeigt keine Ultr^violett-Absorption, uuior der Sndubaorptioiio Das von Goriolin Ϊ3 erhaltene Infrarot-Äbsorptionss"pektrur: in lialiui.ibrouidtabletten \.ird in i'i,·«, 1 gezeigt, und die Hauptabsorptionsv/ellenlängen (cm~ ) liegen bei 3450, 3530, 2920, 1720, H70, H05, 1390, 1375, 1350, 1320, 1290, 1270, 1250, 1225, 1175, 1HO, 1105, 1090,-1070, 1050, 1005, 990, 970, 950, 940, 895, 870, 845, 815, 775, 755, 730 und 680 cm~1. Goriolin B hat ein Llolekularge-•,vicht von. 408, gemessen mittels Ilassenspektrometrie und zeigt bei der Elementar analyse Werte für Gs 67,36 ^c/o und H: 8,88 >ά und enthält keinen Stickstoff. Aus den oben erwähnten Elerüentaranalysenv/erten und den durch Llassenspektrone-

trie gemessenen Molekulargewicht erhält man die Liolekularforinel Gp-H^gOc (Llolekulargewicht: 4Ou)₀

Als Ergebnis chemischer Untersuchungen und der Anal/13e der spektroskopischen Spektren wurde festgestellt, dali Goriolin B die nachfolgende Formelstruktur aufweist

OGO(CH₂) ₆ OH,,

und daher ein Caprylsäureester eines Sesquiteroens ist.

Coriolin B wird zusammen mit Ooriolin (Japanische Patentanmeldung 27 611/69)j das durch systematische Untersuchungen der Anmelderin an durGh Basidiomyceten gebildeten Antibiotika gefunden wurde, unter Verwendung der gleichen Liikroorganismen wie im Falle von Goriolin gebildet.

Die zur Herstellung von Coriolin B geeigneten Llikroorganismen sind Coriolus consors (Berke) Imazeki (irpex consors Berk.), die in der Agricultural School von Hokkaido University unter der Bezugsnummer AHU 4901 und beim Institute for Fermentation, Osaka unter der Bezugsnummer IFO 5309 gehalten wurden. Der Stamm wurde bei der ATCC (American Type Culture Collection) unter der Bezugsnummer ATCC 20305 niedergelegt» Der Llikr ο Organismus Coriolus Consors (Berk.)

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BADORfGINAL

Imazeki ist im Bulletin of Tokyo Science Museum 6:80, 1943, unter Bezugnahme c,uf die Originalbeschreibung von Berk, in Journal of Linnen Society 16:51» 1878, beschrieben»

Mycel eines Coriolin B bildenden Mikroorganismus werden in ein geeignetes Medium geimpft und aerob kultiviert, wodurch man eine ITährbouillon, die Coriolin B enthält, erhält. In diesem Falle kann ein festes Kulturverfahren verwendet v/erden, wobei jedoch zur technischen Herstellung ein flüssiges Kulturverfahren mehr bevorzugt v/ird. Die Kulturtemperatur kann eine Temperatur sein, bei der die Coriolin B bildenden Mikroorganismen gezüchtet werden können, und sie liegt gewöhnlich im Bereich von 15 bis 30 C, vorzugsweise bei 25 bis 27 C i)as iledium zur Herstellung von Coriolin B enthält Quellen für Kohlenstoff und Stickstoff, anorganische Salze, V/uchs fördernde Materialien usw.. Bekannte Kohlenstoff und Stickstoff liefernde Produkte, die gewöhnlich zur Kultur von Mikroorganismen verwendet werden, können für die Kultur der Coriolin B bildenden Mikroorganismen verwendet werden. Als Kohlenstoff liefernde Produkte können im Handel erhältliche Kohlehydrate, Öle und Fette, wie beispielsweise Glukose, Glycerin, Stärke, Dextrin, Maltose, Lactose, Saccharose, Öle, Fette und Melassearten verwendet werden. Diese können im reinen Zustand oder in der rohen . Form verwendet werden. Als Stickstoff liefernde Produkte können Sojabohnenpulver, Fleischextrakt, Pepton, Biertrockenhefe, liefeextrakt, Maismaischenliquor, Kasein, Baumwoll-

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samenpulver, Fischmehl, Kitrat, Amnoniumsalz und Harnstoff verwendet v/erden. Als anorganische Balze iioruian natriumchlorid, Kaliumchlorid, Lagnesiumsulfat, Culciuncarboiiut und -phosphat und geringe Lengen Salze, -..Ie solchen von. Schwermetallen wie Kupfer, Langan, Eisen und Zink verwendet werden.

Aus seiner Struktur ist zu erkennen, daß Goriolin B aus w Mevalonsäure und diese aus Essigsäure biologisch synthetisiert wird» Bs ist aus Untersuchungen der Biosynthese der Materialien, die durch ein Zwischenprodukt der LIevalonsäure erhalten werden, bekannt, daß im allgemeinen die Zugabe von Essig- oder Mevalonsäure, besonders, nenn, sie getrennt erfolgt, die Bildung von Coriolin B erhöht. Die Zugabe einer höheren Fettsäure oder eines Fettes erhöht ebenso die ausbeute an Goriolin B.

Ein Medium, das beispielsweise 5 i° Glukose, 0,2 <fo Pepton, 0,5 °/o Biertrockenhefe, 0,2 °/o Kaliumdihydrogenphosphat, 0,1 y Magnesiumsulfat und 1,6 °/o Calciumcarbonat enthält und das auf einen pH-Wert von 6,2 eingestellt ist, ist ein LIedium, das zur Herstellung von Coriolin B besonders geeignet ist.

In einem Kulturliquor ist Coriolin hauptsächlich in dem flüssigen Teil, während Coriolin B hauptsächlich in dem Mycelteil vorhanden ist. Der Mycelteil der Xulturbrühe, der Coriolin B enthält, wird nach einem bekannten Verfahren,

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wie durch Filtrieren oder Zentrifugieren, abgetrennt, und das erhaltene üycel wird axt einem organischen Lösungsmittel, v.'ie !,ethanol, Butanol, Butylacetat oder Aceton, extrahiert, wobei due Goriolin B in dea organischen Lösungsmittel extrahiert /.ird« Die organische Lötsuiigsinittelschicht, die üas extrahierte Goriolin 3 ^irthält, wird von dem Llycelteil abgetrennt, und darm \;ird das Lösungsmittel unter Bildung von - Roli-Üoriolin B entfernt. Sofern erforderlich, wird ein .jegenstrom-/erteilungsverfahren oder ein chromatographis-ches-Verfahren zur Entfernung von Verunreinigungen verwendet. Das erhaltene Pulver, das dae gereinigte Coriolin B enthält, wird in einer geringen !!enge eines organischen Lösungsmittels, das zur Lösung von Goriolin 3 geeignet ist, •.vie !!ethanol, Äther oder Äthylacetat, gelöst, und dann wird ein Lösungsmittel, das nur geringen Lösung von Goriolin J geeignet ist, wie n-Itexan, \7asser oder xetrachlorkohlen-Gtoff, der erhaltenen Lösung zugegeben, wodurch das Goriolin 3 -Is !Tadeln oder Schuppen auskristallisiert werden kann. Coriolin ß zeigt keine anti-bakterielle Aktivität, noch Wirksamkeit gegen Tumor.

Dilcetoeorioliii 3 wird dadurch erhalten, daß man Goriolin B nach an eich bekannten Verfahren zur Oxydierung von sekundären Hydroxylgruppen zu Ketonen oxydiert. Zu in diesem Pail geeigneten Oxydierungsmitteln gehören Chromsäureanhydrid in Essigsäure und Dimethylsulfoxid-Dicyelohexyl-Carbodiimid. Diketocoriolin B wird beispielsweise in der folgenden Weise erhalten:

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BADORIGfNAL

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Kristalle von Goriolin B werden in Essigsäure gelöst, und der erhaltenen Lösung v.'ii'd Chronisäureanhydrid angegeben und das Gemisch bei 20 bis 30 C 16 bis 30 stunden erhitzte. Der: Eeaktionssystei/i wird ,/asser zubegeben, und das erhaltene Diketocoriolin 13 wird nit A'tlr/lucetat extrahiert. Mo A'thylacetatschicht v/ird mit 1IT-KatriumhydiO::idlösung und dann nit ',/asser gewaschene Die gewaschene Athylacetatschicht v.-ird nit wasserfreiem natriumsulfat dehydratisiert und dann unter re- - duziertem Druck unter Bildung eines Pulvers von rohem Lilcetocoriolin B konzentriert» Das rohe Diketocoriolin B wird in einer geringen üthermenge gelöst und dann aus n-Hezan umkristallisiert, wodurch man Diketocoriolin 3 in Forn von farblosen Iladeln, Schmelzpunkt 147 bis 148⁰O, erhält.

Diketocoriolin B ist in lie t ha no 1, Äther, iitlrylacetat, Aceton, Chloroform und Benzol löslich, jedoch schwer löslich oder unlöslich in Tetrachlorkohlenstoff, n-liexan und V/asser. Diketocoriolin B zeigt keine ultraviolette Absorption, außer W einer Endabsorption. Das Infrarot-Absorptionsspektrum von Diketocoriolin B, das in KaliuxiDroLiidtabletten aufgenommen ist, wird in Pig. 2 aufgezeigt, und die Ilauptabcorptioiiswellenlängen (cn"¹) sind 2940, 2915, 2840, 1760, 1720, 1465, 1390, 1370, 1355, 1300, 1230, 1220, 1190, 1165, 1140, 1100, . 1010, 930, 905, 870, 830, 770, 740 und 720. Diketocoriolin B hat ein llolekulargewicht von 404, gemessen mittels Lassenspektrometrie und Elementaranalysenwerte von C: 69,02 ^c/o und H: 8,08 fa und enthält keinen Stickstoff» Aus den oben er-

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v/Qinten Bleiiientarönalysenwerten und den mittels IJassenopülctrometrie gemessenen Liolekulargev/iclit ergibt sich die Lolekulurformel G_o7.H_v„ü- (Llolekulargev/icht ί 404)»

AIa Ergebnis cliemisclier Untersuchungen und bei der Analyse der cpektroslto pi sehen Spektren wurde festgestellt, dai3 Diketocoriolin B der folgenden Strukturformel entspricht:

OCO(0H₂)gCH,

Die Wirksamkeit gegen Liikroben von Diketocoriolin B, nach den Ägar-'Verdünnungsverfahren gemessen, v/urde wie folgt festgestellt:

Anti-LikiOben-Spektrum:

Test-ilikroorganisEius

üta^liyococcus aureas 209-P

" l'erajima

¹¹ Smith

öarcina lutea 1001 Lxicrococcus flavus Bacillus anthracis Jaciilus Liubtilis iiHlLL 55ü J^oiiorichia coli IiXIIJ Sulraoiiella tyi

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Minimale inhibierende Konzentration (mcg/ml)

12,5 25,0 12,5 12,5 12,5 12,5 25,0 50,0 >100,0

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BADOFiKSMAL

Fortsetzung Anti-L-ikroben-Spektruiu:

i..ininale iniiioicro^d 'Je^t-Likroorganismus Konzentration (■'.ιΟ.'/η

Shigella flexneri 1 a (Lv/ 8) ρ» 100,0

Proteus vulgaris ÜX 19 ^100,0

Pseudomonas aeruginosa A-? 100,0

ICLebsiella pneumoniae PCI 602 >100,0

Die Wirksamkeit des Diketoooriolin 3 gegen Lläuse-Ehrlich Asciten-Tumor und Läuse-Leukämie L-1210 wird nachfolgend beschrieben.

Therapeutische Untersuchungen hinsichtlich Läuse-Ehrlich-As ei ten-[Tumor v/urden 10 Tage durchgeführt, v;obei nan Lik&tocoriolin B in Dosen von 6,25 bis 50 mcg/Liauo/Tag verv/endete. Im Ergebnis verendeten alle Kontrollmäuse in de::, Zeitraum von 26 Tagen nach Einimpfen der Tumorzellen, v/ährend 50, 25, 25 und 25 fo der Läuse, denen intraperitonal Diketocoriolin B in Dosen von 50 meg bzw. 25 meg, 12,5 meg und 6,25 meg verabfolgt v/urde, mehr als 50 Tage ihrer Lebensdauer verlängert wurde, wobei bei keinem der Tiere irgendeine Akkumulation von Asciten festgestellt v/erden konnte.

Weiterhin zeigten bei therapeutischen Untersuchungen von Lläuse-Leukämie L-1210 Mäuse, denen Diketocoriolin B in Dosen von 200 bis 125 meg unter den gleichen Bedingungen v/ie oben verabfolgt wurde, einen Überlebensindex (Anzahl der uberlebens-Tage) von 178 bis 157 pro 100 Kontrollmäuse, und sie

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BADORiGWAt

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•wurden in ihrer Lebensdauer im wesentlicnen im gleichen Ausliiuß verlängert, wie Läuse, denen man 500 ncg Gyclophosphal-id -«.inter den gleichen oben angegebenen Bedingungen verabfol_t Iiutte „ Es zeigte daher Diketocorioliii B Anti-Tumor-■■irkaumkuit bei Läusetumoren„ "Jeiterhin konnte bei Gewebekultur en von Yo .ohi da-Sarkoma ζ eil en 41 »!3 /β der Vermehrung unter Verwendung von Diketocorioliii B in Dosen von 0,63 mc^/nl iniiibiert werden«

Diketocoriolin B hat eine so geringe Toxizität, daß im Falle de ι· intraperitonaleii Verabfolgung bei Läusen die LDr₀ 37)5 mg/kg betrug, und wenn es kontinuierlich Läusen 10 Tage lang verabfolgt wurde, konnten 50 $ der Läuse die Verabfolgung um mehr als einen Llonat überleben, selbst v/enn die- Gesamtdosis 75 mg/kg betrug.

Zu oesquiterpenen i.:it phyLiologischen -Eigenschaften, wie sie durch die Basidiomyceten gebildet werden, gehören Coriolin und Illudin S und LI und als eine hinsichtlich der Struktur ähnliche Substanz Hirtusinsäure C. Diece sind jedoch hinsichtlich ihrer physikalisch-chenicciien Eigenschaften, ihrer Lolekularformel und Strukturformel von Diketocoriolin B verschieden und sind daher andere Produkte.

Die vorliegende Erfindung wird weiter durch die nachfolgenden BeifcT^itle erläutert, wobei es jedoch klar ist, daß weitere Lodifikationen, die nicht in den Beispielen aufgezeigt

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sind, im Rahmen der vorliegenden Erfindung unter Verwendung der vorausgehenden Informationen über Coriolis 3 und Lilcctocoriolin B durcn uen IPuciinann vorgonoML'ion w-erdei; ironnon. JOa sei düker darauf hingewiesen, da ^ axe vorliegende Lrxinuung die zur Herstellung von Coriolin ~ß unu jjiketoocriolin _^;3 insgesamt erforderlichen Fermentations- und c/i&nri'jclicjn Verfahren umfaßt, die durch die vorliegende Jirfindung offenbart wurden und da 13 die Heretellungaverffahren Extraktion:;-, Ileinigungs- und O;:ydatioiiüverirren iu.ifa^sen.

Beispiel 1

Sägemehl (Schrotaligenehl) von i.agnolia i-yiioleuo='. 'irde in Vasser eingetaucht, gekocht, dünn von .r.xazer bofr.-it and zur Irockns erhitst. Li einen 100 nl Schüttelkol >en "/urden 3 g des vorL,u3 erv/Vl]int3n οίΐ^ο.ιο-ιΐο ·χα_. 15 .al £.ilöurli-'/uor eingefüllt, v;obei diener 2 ^r/o G-lulcoce und 0,5 fo ϊι·οο1:&ηοίerliefe ("Ebios", hergestellt von der Ebios Pharmaceutical Co.) enthielt. Der Kolben wurde nit Watte verstopft und daG ZuIturmedium 20 LIinuten bei 120⁰O cteriliciert, In dieses Kulturmedium wurde ein Goriolin 3 bildender iiikroorganiainuo, den man in Schräglage kultiviert hatte, eingeimpft und dieser wurde dann 10 iⁿage bei 27°0 einer stationären Kultur unterworfen. Lern Schüttelkolben wurden 50 ml des oben erwähnten Kulturliouors zugegeben, v.obei dann ausreichend geschüttelt wurde, um ein Einimpfprodukt herzustellen. Danach wurde das Eininpfprodukt in ein Gorioliri-Herstellungsuiediun eingeimpft, das 5 ^cß> Glukose, 0,2 >j Pepton, 0,2 ^cß> Kaliun-

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dilL/drogenphosphat, 0,1 )Ό Liagnesiurasulfat, 1,6 ^σ/Ό Oalcium-GL.rboiiut mid 0,5 /j ϋΐ)ί ο ö antliiolt, ν/ο "box das Lediui.i vorausgehend 10 Liin. bei 120⁰O sterilisiert wurde β Die Lenge des zu.li 'i3ini"Lipf on voices -dienen Produkts betrug 10 ml pro 125 Hl iierstellungsmedium_o Die Kultivierung wurde in der V/eise bewirkt, daß Huü 125 ml des oben angegebenen Herstellungsmediums getrennt in jeden 50ü ml Schüttelkolben einbrachte, und da ο üinimpfprodukt wurde in das Ilediuin geimpft, und dann" \/urde die Kultur 7 'fage bei 27°0 geschüttelt_o Danach wurden 3 1 des in dieser Weise kultivierten Kulturliquors filtriert, .ν ο durch man 100 g feste Substanz, die den Lye el enthielt, erhielt. Diese Substanz wurde mit 300 ml Aceton beschickt und der Extraktion unter Rühren unterworfen, wodurch öoriolin 3 aus der;: k'ycel extrahiert wurde. Das Llycel .:urde filtriert und das FiItrat unter reduaiertem Druck zur Entfernung des Acetons konzentriert. Danach wurde der Rückjband zwei mal mit 100 ml Äthylacetat extrahiert und dann unter reduziertem Druck zur Bildung von 4 g einer braunen 'Juoj'tanz getrocknet. Diese Rollsubstanz wurde in einer geringen Lenge Aceton gelöst, und in die erhaltene Lösung wurde ii-.i/jxari zugegeben, bis die Lösung leicht trüb wurde. Dann wir de .;ie abkühlen lassen, v/o durch sich Kristalle von Coriolin J3 ablagerten., Die Kristalle wurden durch Filtrieren ontfernt und dann unter Bildung von 1,5 g Kristallen aus roincm Coriolin JJ getrocknete

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Beispiel 2

1,5 g der nacii Beispiel 1 erhaltenen iCristalle von Coriolin B wurden in 65 ml üssigsäure gelost, Zu dor ej-hul tenon Lösung wurden 650 mg Chromsäureaniiydrid zugegeben, und man ließ das Gemisch 24 otd. bei 25 G reagieren. ITacli der Heu Iction wurden 600 ml 'Wasser de:;. Re^ictiorii;ger.:iücla 2u;ej ebon, das dann drei mal r.it 300 ml Äthylacetat extrahiert .vurdo. Die ilthylacetat schicht v.urde mit 300 ml 0,1 H-L'atriumhy-P droxidlösung und dann mit 300 ml Wasser gewaschen, nit natriumsulfat dehydratiüiert und von dem iithylacetat mittels Destillation unter reduziertem Druck befreit, v.odurch ein weißes Pulver erhalten wurde. Dieses Pulver .vurde in einer geringen αthermenge gelöst, und. die erhaltene Lösung wurde mit η-Hexan beschickt, bis die Lösung leicht trüb wurde, und dann ließ man sie abkühlen, v/odurch man 700 mg Dikotocoriolin B in ?orm von weißen nadelähnlichen Kristallen erhielt.

Beispiel 3

3 1 des in der gleichen Weise wie in Beispiel 1 hergestellten Impfprodukts wurden in 40 1 Medium geimpft, das 5 °p Grlukose, 0,2 ?ü Pepton, 0,2 >& Kaliumdihydrogenphosphat, 0,1 fo Magnesiumsulfat, 1 fo Calciumcarbonat und 0,01 fo Silikonöl, das bei 120⁰G 10 Minuten in einem 70 1 ICulturtank aus rostfreiem Stahl sterilisiert wurde, enthielt und dann bei 27°G 10 Tage unter Einführung von 20 1 Luft pro Minute und unter Rühren mit 200 U/ßJin. kultiviert. Danach wurde der Kultur-

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bad ORIGINAL

liquor filtriert, wodurch man 1,2 Itg feste Laterialien arlii--lt, die das Lye el enthielten«. Diese llyceliaasse wurde
der -loiciieii Extractions- und Reini^unjübehandlung für
Ooriolin B wie in Beiapiel 1 unterworfen, v/odurch. man 51 g Eolit.uo^tan:; erhielt, auo der dann 1ό g krictallines Goriolin 3 ^ewoiinen wurden. Das ao erhaltene Ooriolin B v.'urde
der laichen O^ydationcsTouhandlung wie in Beispiel 2 unterworfen, wodurch man 7»9 g kristallines Diketocoriolin B
erhielte

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BAD OFUGiNM.

Claims (1)

1. Z10R696

   Patentansprüche :

   1, Verfahren zur herGtellung von Goriolln H dad .'.re I: coken zeichnei;, dai man aerob in einem xil'liri.iedium eiiijn Goi'iolin B bildenden Lxikroor-'aiiirjiiiui;, der den Cienus iiasidior.rycetoo angehört, unter Bildung von Coriolin "Λ kultiviert und dann daa Coriolin B aus dem ^.edium abtrennt.

   ψ 2 ο Verfahren geuäij Ansprucn 1 dadurch jeicennzeichiiot, da.,

   die Kultur bei 1 ii bio 30 G bev/irlct \/ird.

   3 ο Verfahren gemäß Ancpruch 1 dadurch ^eliennubichnot, da.ü die Abtrennung von Coriolin J unter Vc-rv/enöun^· eines organischen Iiösun^bi.;ittels bev/irkt ",;ird, in de..i dac Goi'iolin B gelöst v-iräo

   L ο Verfahren ^emüß Anspruch 1 da durch ^olzcrmji-jicl-jirit, da.'., man als Gorioiin B ";ilr"on'J.ei; liil:roor^nir,r:us Gorioluu ψ concors verwendet.

   5o Verfahren -emäii «ncpruc-i 1 dad-irch c^e--°^nz jiolmet, daL man als Goriclin. 3 oili 3ηάοη LJilcroor janio...ua Gorioluc censors A'2C3 20305 verv.'ondet_o

   δ. Verfahren zur ^sratellunj von Bihetoooriolin _·3 dadurch gekennzeichnet, daii man aerob in einer.. ...caiuu ci::on Joriolin 3 bildenden Likroorganicmuc, d^r dom Genuü liasidiomy-

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   BADORiGiNAt

   CGtOS angehört, unter Bildung von Goriolin 3 kultiviert, dao Ooriolin B auü der Kulturbouillon abtrennt und dann das abgetrennte Ooriolin 3 Mitteln cinoa ü::ydierun£smittel, das zur Oxydiürun^ der sekundären Hydroxylgruppen zu Ketoi'i an g e ο i ^jne t i c t, ο zzy di er t..

   To Verfoliren ^euäß Anspruch 6 dadurcli geliennseiclmet, daß das Oxydiürun^sraittel Cihromsäureanliydrid ist.

   /6. iDikotoGoriolin 3 der formel

   00O(CH₂)gOH,

   9. Goriolin 3 der Formel

   000(CH₂)₆CH,.

   10. Arzneimittel, insbesondere Gytostatikum und mit Wirkung gegen gram-positive Bakterien, dadurch gekennzeichnet, daß es Diketocoriolin B bzw. eine Verbindung der allgemei-

   109838/18 0 4 _
   Äv-::?: -ο ν γ: β/© OR*Q»NAL

   nen Formel

   OCO(CH

   enthält·

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