DE2036799A1 - 27 Desmethoxy 27 hydroxyrifamycinden vate und Verfahren zu ihrer Herstellung - Google Patents

Description

Gruppo lepetit 8_βρ, Mailand / Italien

27-Desmethoxy-27~hydroxyrifamyoinderiv"ate und Verfahren zu

ihrer Herstellung

Die vorliegende Erfindung betrifft neue Antibiotika der Hifamycingattung, nämlioh 27-£esmethoxy-27-hydroxyrifaniyeinderivate der Formel

Me Me

⁰ VyAM

OH OH -^^ ^Λ1

in der R und H¹ Wasserstoffatome bedeuten oder R die Gruppe OH₅CO darstellt und R' ein Wasserstoffatom oder die Carboxymethylgruppe GH₂-COOH ist, sowie ein Verfahren zur Herstellung dieser Antibiotika durch Fermentieren einiger Mutanten von Streptomyces mediterranei, die die Eigenschaft haben, diese Antibiotika direkt in der ITährbrühe au erzeugen.

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Der die neuen 2 7^MDesmethoxy^27~hydro3cy rifamycine- erzeugende Stamm -wurde aus einer Kultur von Streptomyeas me;&it@r?a&ei ■ erhalten, die Rifamycin B erzeugt$ und gsvar nach mutagener Behandlung mit !-»Methyl-I-nitro^l-nitsosoguantdin© Die Kolonien, Vielehe die mutagene Behandlung üb.e-rXebtö-n, itfurden isoliert_s in Fermentationskolben getestet and auf die Fähigkeit der Kulturen hin untersucht^ das ffachstum von Pseudomonas reptilivora KHEL--B-6" zu hsmraen₈ die auf einem Penassay-Saat«Agar bei einem pH-Wert von" 7ρ2 lmltlYiert ii?urden₀ Unter diesen Bedingungen ist Rifamycin B milsrebiologisch inaktiv^ und es konnten 27-^>D@smetho3Ey«27^rahydroxyrifeuy©in S?. erzeugende Stämme isoliert «erden» Eine dieser neuen Mutanten_ff die 3ich als "besonders wirksam "bei der Erzeugung von hohen Ausbeuten an 27"-DesBietho3Ey-27^<tohyöroxyrifaiiycin SIf erwies _ΰ erhielt die interne Kodenummer S-955 und wurde bei- der AfGG deponiert und erhielt dort die Kennzahl 21411ο

Bei Anwendung der üblichen klassischen Medien₉ die für das Wachstum des Genus Streptomyees eingesetzt werden₉ lägst sich der Stamm ATOG 21411 weiter als Streptomyees mediterranei einordnen. Ss werden lediglich einige Unterschiede"festgestellt, deren bedeutendste 1) die Abwesenheit von luftmyzelfäden und Konidien und 2) eine unterschiedliehe lösliche Pigmentfarbe sind· Die Kulturcharakteristika auf verschiedenen Medien im Vergleich zu denen des Stammes Streptomyees mediterranei ATCC 13685 s der das Rifamycin B- erzeugt $ werden in Tabelle I angegeben»

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Tabelle X

Vergleichende Kulturcharakteristilca von Streptomyces mediterranei XTCC 13685

und dem Stamm ATCC 21411

ATCC 13685

Stärke—Agar

Ca-malat-Glukose—Agar

Ca-malat-GIyzerin-Agar

Bennet-Agar

Vegetatives

Myzel

glasklar bishellbraun

glasklar bis
hellbraun

glasklar bis
hellbraun

glasklar bis
orange-gelb

Luftmyzel

rosa—

weiss

rosa— weiss

v/eisshell orange

rosaweiss

Lösliches Pigment

grüngelb bis hellbraun

hellgelb

selten, - blassorange

sehr hellgelb-braun

ATCC 21411

Vegetatives Luft-Myzel, myzel

gelbbraun

bis braun

fehlt
fehlt
orange-braun fehlt

organge bis
orange—braun

gelbbraun bis fehlt
rotbraun

Lösliches Pigment

dunkelbraun orangebraun

hellorangebraun

blassrot

ro ο to cn »α co

Die in der vorstehenden tabelle aufgeführten Medien hatten die nachstehende Zusammensetzung?

Stärke-Agar -.10 g lösliche Stärke, 1 g KHgPO^, 1 g 1 g NaCl, 2 g (MH^)₂SO₄₁ jeweils 0,001 g PeSO₄₀ ?H₂0_p MnOl₂.4H₂O und ZnSO..7HgO, 20 g Difco-Agar„ destilliertes Wasser: aufgefüllt auf 1000 ml» Uaeh der Sterilisation bei 120⁰C während 20 Minuten betrug der.pH-Wert 6,7 bis 6_s8_e

Ca-malat-Glukose-Agar - 20 g Glukose, 10 g Ca~malat₉ 0,5 g HH.Cl, 0,5 g K₂HPO₄, 15 g Difco-Agarj, destilliertes Wassers aufgefüllt auf 1000 ml. Lach der Sterilisation bei 115°C während 15 Minuten betrug der pH-Wert 6 ,-5 β '

Ca-malat-Glyzerin-Agar .- 10 g Glyzerin, 10 g Ga-malat, 0,5 g Im₄Cl, 0,5 g KH₂PO₄, 15 g D-ifco-Agar, destilliertes Wassers aufgefüllt auf 1000 ml· Nach der Sterilisation bei 115⁰C während 15 Minuten betrug der pH-Wert 6₉5 bis 6,6·_β

Bennett-Agar - 10 g Glukose, 1 g Hefeextrakt ₉ 1 g Rindfleisch extrakt, 2 g H-Z-Arain A, 15 g Agarj, destilliertes V/asser ι aufgefüllt auf 1000 ml. JSaoh der Sterilisation bei 120⁰C während 20 Minuten betrug der pH-Wert 6,7 bis 6,8. .

I)?.s erfindungsgemässe Verfahren besteht darin₉ dass man Strep tomyces mediterrane! ATCG 21411 in einem assimilierbare Kohlenstoff- und Stickstoffquellen sowie lebenswichtige Mineralsalze enthaltenden liährmedium züchtet, bis das Medium eine wesentliche antibictieche Wirksamkeit aufweist^ und 27-Desnethoxy-27-hydroxyrifamycin SY av.s aem ivedium isolierte Insnaere wird die Mutante unter Rühren und Belüftung bei

submersen Bedingungen und Temperaturen von 24 bis 32⁰Cj, vorzugsweise 28⁰C₉ gezüchtet« Als Kohlenstoffquelle können die folgenden Kohlehydrate und Kchlenstoffderivate verwendet werden: Glukose, GaIaKwOSe₁, Laktose,, Saccharose, Maltose,, Glyzerin,

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Mannit usw. Brauchbare Stickstoffquellen sind beispielsweise Aminosäuren und ihre Gemische, Peptide, Proteine und ihre Hydrolysate, wie beispielsweise Pepton, Hefeextrakt, Erdnussmehl, Sojabohnenmehl, Maisquellwasser, lösliche Fischabbauprodukte (fish solubles), Fleischextrakt, wässrige Fraktionen von Getreidekeimen, Die Fermentation kann 12 bis 180 Stunden lang durchgeführt werden. Der anfängliche pH-Wert, der im allgemeinen bei etwa 6,4 liegt, _%sinkt während der Fermentation auf 5,5 bis 5,8· Im allgemeinen werden die besten Ergebnisse nach 150- bis 160-stündiger Fermentation erzielt. Nach Ablauf dieses Zeitraums erhält man eine ausgezeichnete Ausbeute an 27-Desmethoxy_27~hvdroxy^ri^^amy^c*ⁿ ^V, Nach Beendigung der Fermentation kann das 27-Desmethoxy-27~hydroxyrifamycin SY nach folgendem Verfahren isoliert Werdens Das Fermentationsmedium wird bei einem pH-Wert von 6,2-8,4 filtriert. Das Filtrat wird auf einen pH-Wert zwischen 1 und 5 angesäuert und mit einem mit Wasser nichtmischbaren Lösungsmittel, wie beispielsweise Äthylacetat, Butylacetat, Butanol oder Chloroform, extrahiert. Das Lösungsmittel wird nach und nach auf ein geringes Volumen eingedampft, und die Produkte werden durch Zugabe von Hexan, Heptan oder anderen aliphatischen Kohlenwasserstoffen, wie beispielsweise ^etroläther oder Ligroin, ausgefällt» Das auf diese Weise erhaltene Produktgemisch kann nach üblichen Verfahren fraktioniert werden, und hierbei werden nachstehende Verfahren am meisten bevorzugt: Chromatographie über einer Silicagelsäule und Elution mit einem Aceton-Chloroform-Gemisch, Chromatographie über Sephadex (dreidimensional vernetztes Polysaccharid) und Elution mit einer wässrigen Lösung, die auf einen pH-Wert von 4 bis 7 gepuffert ist, oder Gegenstromverteilung. Für die letzte Fraktionierungsmethode besteht ein geeignetes Lösungsmittelsystem aus einem Phosphatpuffer (pH-Wert = 5,5 bis 7,0) als stationärer Phase und Äthylacetat als mobiler Phase, Nach der Fraktionierung und Reinigung können die nachstehenden Produkte identifiziert werden:

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27-Desaethoxy-27~hydroxyrifafflyein SY 27-Desmethoxy-27~hydroxyrifamycin B
27-Desmethoxy--27-hydroxy-25"»'d@saoetylrifamyoin S¥

Die Charakteristika äer Produkte werden in Beispiel .3 aufgeführt, in dem ein ^erfahren zur Isolierung dieser Produkte beschrieben wird»

Die in der vorliegenden Anmeldung beschriebenen !erbindungen haben eine gute antibakteriell© Wirksamkeit«. Besonders bemerkenswert ist ihre Wirksamkeit gegenüber einigen gramnegativen Bakterien, wie beispielsweise Eusibacteriuin fusiforme I.S,S. Beispielsweise beträgt di© minimal© hemmende Konzentration von 27-Desmethoxy=»27-hydro3:yrifamycin SV 0„Q5 IT/ml ₀

Zur besseren Erläuterung der vorliegenden Erfindung werden die nachstehenden Beispiele gegeben: - .

Beispiel 1

Der Stamm ATCC 21411 wird δ bis 8 Tage lang auf Bennett *s-. Agar gezüchtet und bei 28⁰G mit der aus dem Agarschrägnährboden erhaltenen Kultur inkubiert 5 zwei 500 ml Erlenmeyer-Kolben werden unter sterilen Bedingungen beimpft» Die Kolben enthalten 100 ml des vegetativen Mediums der nachstehenden Zusammensetzung:

Rindfleischextrat Hefeextrakt Pepton

Kaseinhydrolysat Glukose NaCl

HgO (Leitungswasser) auf

Der pH-Wert wird mit HaOH auf einen Wert von I₉J eingestellt.

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5-	g
5	g
5	g
3	g
20	g
If	»5 g
1	Liter

Nach der Sterilisation (20 Minuten bei 120°C) beträgt der pH-Wert 6_f6 bis 6,8, Die auf diese Weise beimpften Kolben werden 72 Stunden bei 28⁰C auf eine Schüttelvorrichtung gegeben. Der Inhalt der beiden Erlenmeyer-Kolben wird als Inokulum verwendet und in einen 10 Liter fassendenVorfermenter gegossen, der 4 Liter des vorstehend angegebenen vegetativen Mediums enthält· Die Inkubation wird bei 28⁰C unter Rühren bei 750 Ü/Min. und 1 V/V/Min. Belüftung durchgeführt, Nach 30 Stunden Wachstum wurde ein Volumen von 7-10$ gepackter Zellen (packed cells) erreicht.

Bei der nächsten Stufe wird ein 10 1 Glasfermenter verwendet, der 4 1 des nachstehend angegebenen Mediums enthielt:

Erdiiussmehl Sojabohnenmehl

i'feöt .. Ι "ρ

Glukose
Glyzerin

Propylenglycol OaOO-

lia«-diäthylbarbiturat CuSO₄. 5H₂O PeSO.. 7H_o0 ZnSO₄, 7H₂O HnSO₄, 4H₂O CoCl₉. 6H₂O

25	g	g	Liter
5	g	g	ert von 7,8 einge-
9,5	Z	g
0,85 g	g
95	g
40	g
1	mg
5	mg
8,5	mg
1»7	mg
2,8	mg
8,5	0,85 mg
42,5	1
3,4
1,7

₄₆₇₂₄₂
HgO (Leitungswasser) auf

Bas medium wird mit NaOH auf einen pH-Wert von stellt und 60 Minuten bei 12O⁰C sterilisiert. !lach der Sterilisation beträgt der pH-Wert 6,3 bis 6,4. Eine 5 i> des Yor-

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fermenterinhalts entsprechende Menge wird als Inokulum verwendet.

Die Fermentation wird bei 28⁰C unter Rühren bei 750 U/Min, und Belüftung in einer Geschwindigkeit von 1 V/V/Min, durchgeführt. Silicon A wird als Antischaummittel verwendet* Die Kulturbrühe nimmt während der Fermentation eine charakteristische braunrote dunkle Farbe an» Nach etwa 160-stündigem Wachstum ist ein Volumen von 20-25!$ gepackter Zellen erreicht, der pH-Wert der Brühenkultur beträgt 6,2, und die höchste antiotische Wirksamkeit ist erreicht'(1500-18001 /ml 27-Deajnethoxy«27-hydroxy^rifaBiy^c:I·^{21 sv})· ^Zu diesem Zeitpunkt wird die Brühe aufgearbeitet,

Beispiel 2

Eine Kultur von Streptomyces mediterranei ATCC 21411» die nach der Arbeitsweise des Beispiels 1 erhalten wurde, wird unter Rühren, wie in Beispiel 1 beschrieben, in einem Kolben hergestellt. Für die Vorkultur wird sie in einen 10 1 Glasfermenter gegossen, der 4 1 des nachstehenden Mediums enthält:

Glukose 5g

Maisquellwasser 15g CaCO_? 1,65 g . ·

MgSO₄.7H₂O 0,33 g

KH₂K)₄ 0,33 g

FeSO_4#H₂O 3,3g

ZnS0₄,7H₂0 16_a5 g MnS0₄.4H₂0 1„3 g

H₂O (Leitungswasser) auf 1 üter

Das auf einen pH-Wert von 7_t5 eingestellte BieäiuM wird 50 Minuten bei 12O⁰C sterilisierte Hach der Sterilisation teträgt der pH-Wert 6,4« Die Kultur wird bei 28⁰O unter Btihren 750 U/Min, und einer Belüftungsgeschwindigkeit tob -.1 inkubiert,» Silicon A wird als Antischauiimittel

■- 9 ■ -

Nach 38-stündigem Wachstum liegt das Volumen der gepackten Zellen bei 6-8$ des Gesamtvolumens. 10$ eines Inokulums wird für einen IO 1 Glasfermenter verwendet, der 4 1 des nachstehenden Fermentationsmediums enthält:

Maisquellwasser 35 g

(IH₄)₂SO₄ 9,5 g

MgSO₄.7H₂O 0,85 g ■ ^f

Glukose 100 g

Na-diäthylbarbiturat 1,5 g

GaCO₃ ' 9,5 g

FeSO₄.7H₂O 8,5mg

ZnSO₄.7H₂O 42,5mg

MnSO₄.4H₂O 3,4 mg

OuSO₄.5H₂O ■ 2,8 mg

OoCl₂.6H₂0 1,7 mg

HgO (Leitungswasser) auf 11

Der pH-Wert wird mit HaOH auf 7,8 eingestellt, und das Medium wird 50 Minuten bei 120⁰O sterilisiert. Nach der Sterilisation liegt der pH-Wert bei 6,3 bis 6,4. Die Fermentation wird bei 28⁰O unter den in Beispiel 1 angegebenen Bedingungen während 160 Stunden durchgeführt. Bei der Ernte liegt der pH-Wert der Fermentationsbrühe bei 6,4,und die Menge an 27-Desmethoxy-27-hydroxyrifainycin SV beträgt 1000 J /ml. Die nach der Arbeitsweise des Beispiels 2 erhaltene Fermentationsbrühe (Volumen = etwa 4 1) wird mit 8 g Natriumascorbat versetzt, um die Antibiotika in ihrer reduzierten Form zu halten, und ferner wird soviel Natriumhydroxid zugesetzt, dass der pH-Wert auf 7»5 gebracht wird. Die Brühe wird nun unter Zusatz von Filterhilfen im Vakuum filtriert. Das Myzel wird mit Wasser gewaschen. Filtrat und Waschwasser werden nach Ansäuern auf einen pH-Wert von 2,5 zweimal mit 4 1 Äthylacetat gewaschen. Die vereinigten Extrakte werden im Vakuum auf ein Endvolumen von etwa 300 ml konzentriert. Durch Kühlen der Lösung setzen eich gefärbte Verunreinigungen ab, die abfiltriert werden.

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Die klare Lösung wird weiter im Vakuum auf etwa 100 ml konzentriert und in 1 1 Petroläther gegossen. Wach dem Filtrieren und Trocknen erhält man 7 g eines gelben Niederschlags. Das Produkt wird in den ersten Röhren einer Craig-Vorrichtung gelöst und durch Verteilung ia Gegenstromverfahren fraktioniert, wobei als stationäre Phase eine 1/15 molare Phosphatpuffer-Lösung (pH-Wert 6,5) di® 1$ Natrlumascorbatenthält, und als mobile Phase Ithylaeetat verwendet werden· Nach 290 Übertragungen zeigen die spektrophotometrische und chromato™ graphische Analyse die Gegenwart von 27-Desmethoxy-27-hydroxy~ 25-desacetylrifamycin SV und 27-»Desmethoxy-27-hydroxyrifamycin B in den Röhren.· 20 bis 50 an· Der Inhalt der Röhren 70-100 wird vereinigt, die wässrige Phase isfird auf einen pH-Wert von 2,5 angesäuert, und das Produkt wird in Ithyiacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen und Extrakte werden mit Wasser gewaschen, im Vakuum auf 30 ml konzentriert und in Petroläther gegossen. Man erhält einen ITiederschlag von 2,5 g 27"-Desmethoxy-27-hydroxyrifamycin SV. Der Inhalt der Röhren 20-50 wird vereinigt, und die Produkte werden wie vorstehend beschrieben extrahiert und niedergeschlagen. Etwa 1 g des Gemische wird auf eine» Säule von 100 g Sephadex G.25 gebracht und mit m/15 Phosphatpuffer (pH-Wert 6,5) eluiert. Die aus der Säule erhaltenen Fraktionen werden durch Dünnschichtchromatographie analysiert. Die ersten 100 ml des Eluats werden verworfen. Die nächsten 120 ml werden aufgefangen; sie enthalten 27-Desmethoxy-27-hydroxyrifamycin B, das nach Ansäuern des Puffers in Ithylacetat extrahiert und durch Einengen des Lösungsmittels und anschliessende Kristallisation erhalten wird. Die Produktausbeute beträgt 300 mg. Aus denanschiiessenden Fraktionen wird 27-Desmethoxy-27-hydroxy-25~desaeetyl— rifamycin SV durch Extraktion in Ithylacetat bei saurem pH-Wert, Einengen des Lösungsmittels und Ausfällung in Petroläther erhalten· Der getrocknete Niederschlag wiegt 200 mg. Die drei Verbindung haben die folgenden Eigenschaften:

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.Aiii: Iy sen ι :

berechnet für C₅₈H₄₇HO^₄: G 61,5 xi 6₅38, H 1,88 gefunden : C 61,06 H 6,0b, Έ 2,06

Sch'elzpunkt: das Produkt wird bei 240⁰C braun und schmilzt nicüt unter 300⁰C,

IR-Spektren (in Hujol)| Hauptbanden, cm" s 3400, 2900(n.), 2830(n.), 1725, 1650, 1580, 1550, 1530, ' I462(n.), 1375(n.), 1315, 1260, 1205, WO, 1095, 1070, 1045, 975, 947, 913, 860, 795, 860, 795, 720.

UV-Spektren (in Puffer, pH-Wert * 7,38) Λ max, = 423 WU El^_n, «

. ξ I will

« 302 mu Είί_Μ «

27-De3Kethoxy-27-hydroxyrifamycin SY Analysen t

berechnet für C₃₆H₄₅NO₁₂^H₂O: C 61,6 H 6,7 N 2,0 gefunden * 1 C ^i_ti H 6,7 H 2,2

HgO (Vidal Pisher)} berechnet 2,596

gefunden 2,09

Schmelzpunkt 1 Das Produkt zersetzt sich bei 160⁰O IR-Spektren (in Nujol) - Hauptbanden (cm"* )i

3450, 29ΟθΓη.), 2830(n.), 1720, 1660, 1600, 1550, 1462(n·), 1375(n·), 1325, 1290, 1260, 1220, 1155, 1095, 1050, 1020, 970, 947, 920, 897, 845, 802, 738.

UV-Spektren (in Puffer, pH-Wert « 7,38) Λ max. 445 ipu E]j_m =200 Xmax. 313 Jiu e1;L = 325

pKa (spektrophotometrisah in H₂O-HeOE-Lpsung im Verhältnis 95s5 bestimmt) « 1,5.

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BAD ORIGINAL

25"Desacetyl-27"demethQXy27^hyctroxyrifamycin SV Analysen:

berechnet für O₃₄O₁₁Ns O 63,6, H 6,75, N 2,18 gefunden sO 63,1, H 6,5, N 2,23

Schmelzpunkt - Zersetzung bei 17O⁰C IR-Spektren - (in Nujöl) - Hauptbanden (cm )ϊ

3400, 2900(η·), 283ö(n.), 1730, 1645, 1605, 1550, 1500, 1462(n.), 1410, 1375(η,)* 1320, 1265, 1220, 1200, 1167, t110, 1080, 1060, 1010, 977, 947, 920, 895, 825_# 800»

UV-Spektrent

λ max. 440 ψύ E]^_m '"- 210 max. 311 ψη B^_m «335

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Claims (10)

1. PATENTANSPRÜCHE :

   in der R und R¹ Wasserstoffatome "bedeuten oder R die Gruppe GEUCO darstellt und R¹ ein Wasserstoffatom oder die Carboxy— methylgruppe CH₂-COOH ist.
2. 2. 27-Desmethoxy-27-iiydroxyrifamycin SV, das bei 160⁰C unter Zersetzung schmilzt, UV-Spektren mit folgenden Maxima:

   445 mu (E^cjjj = 200) 313 rau (%\%_m = 325) in einer Pufferlösung mit pH s= 7,38, eine Säuregruppe mit pKa = 1,5 und IR-Spektren in Hu^öl mit Maxima bei folgenden Wellenlängen, ausgedrückt in cm""¹: 3450, 2900, 2830, 1720, 1660, 1600, 1550, 1462, 1375, 1325, 1290, 1260, 1220, 1155, 1095, 1050, 1020, 970, 947, 920, 897, 845, 802, 788 aufweist und die Elemente Kohlenstoff, Wasserstoff und Stickstoff in im wesentlichen folgenden ^ewichtsverhältnissen enthält» Kohlenstoff 61,1$, Wasser-, stoff 6,7 i> und Stickstoff 2,2$„
3. 3. 27-Desmethoxy-27-hydroxyrifamycin B, das bei 240⁰C braun wird, jedoch bis 300⁰C fest bleibt, W-Spektren mit folgenden

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   Maxima: 423 mu (B^ = 215), 302 yu- (b{^ = 269) in einer Pufferlösung mit pH β 7,38 und IR-Spektren in Htijol mit Maxima bei folgenden Wellenlängen, ausgedrückt in cm*" s 3400, 2900, .2830, 1725, 1650, 1580, 1550, 1530, 1462, 1375, 1315, 1260, 1205, 1170, 1095, 1070, 1045, 975, 947, 913, 860, 795, 720 aufweist und die Elemente Kohlenstoff, "Wasserstoff und Stickstoff in im wesentlichen den folgenden Gewichtsverhältnissen enthält: Kohlenstoff 61$, Wasserstoff 6$ und Stickstoff 2$.
4. 4. 25-Desacetyl-27-deömethoxy-27"lijä.roxyrifamycin SV, das bei 170⁰C unter Zersetzung schmilzt ₉ W-Spektren mit folgenden

   Maxima: 440 mu. (E^m * ²¹⁰K 511 ψα. (E^m ^{= 555}^ ^{in einer} Pufferlösung mit pH = 7®38 und IR-Spsktren in Hujol mit Maxima bei folgenden Wellenlängen, ausgedrückt in cm" :> 3400, 2900, 2830, 1730, 1645, 1605, 1550, 1500, 1462, 1410, 1375, 1320, 1265, 1220, 1200, 1167, 1110, 1080, 1060, 1010, 977, 947, 920, 895, 825, 800 aufweist und die Elemente Kohlenstoff, Wasserstoff und Stickstoff in im wesentlichen den folgenden ^ewichtsyerhältnissen enthält: Kohlenstoff 63$, Wasserstoff 6,5$ und Stickstoff 2,2$.
5. 5. Verfahren zur Herstellung der 27-Desmethoxy-27-hydroxyrifamycinderivate nach Anspruch 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass man eine Mutante von Streptomyces mediterranei mit der ATCC-Kennzahl 21411 in einem wässrigen Hährmedium, das. eine assimilierbare Kohlenstoffquelle, eine assimilierbare Stickstoff quelle und lebenswichtige Mineralsalze enthält, unter Rühren und aeroben submersen Bedingungen so lange züchtet, bis das Medium eine wesentliche antibiotische Wirksamkeit aufv/eist, und 27-I!esmethoxy-27-hydroxyrifamycin aus dem Medium gewinnt.
6. 6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass man die Züchtung unter Rühren und aeroben submersen Bedingungen bei einer Temperatur von 24-32⁰C und einem Anfangs-pH-Wert von 6,4 maximal 180 Stunden durchführt»

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7. 7. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet» dass man 27-Desmethoxy-27-hydroxyrifamycin SY, 27-Desmethoxy-27-hydroxyrifamycin B und 25-Desacetyl-Z7-desmethoxy-27'-hydroxyrifamycin SV selektiv aus dem Medium isoliert,
8. 8. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet,, dass man das 27-Destnethoxy-27-hydroxyrifamycin enthaltende Medium bei einem pH-Wert von etwa 6,2 bis 8,4 filtriert, den pH*« Wert des abgetrennten Mediums auf einen sauren Wert von etwa 1 bis 5 einstellt und anschliessend das Medium mit einer organischen Flüssigkeit extrahiert, wobei man einen Extrakt von 27-Deamethoxy-27-hydroxyrifamycin erhält·
9. 9· Verfahren nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, dass man als organische Flüssigkeit Äthylacetat, Butylaee-tat» Butanol oder Chloroform verwendet,
10. 10. Verfahren nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, dass man das aus der organischen Flüssigkeit gewonnene 27-Desmethoxy-27-hydroxyrifamycin fraktioniert und reinigt, wobei man 27-Desmethoxy-27-hydroxyrifamyoin SV«, 27-Desmethoxy-27-hydroxyrifamycin B und 25-Desacβtyl-27"·desmetJlOxy-27-nydroxyrifamycin SV gewinnt.

    Für Gruppo Lepetit S,p,A,

    Mailand / Italien

    Rechtsanwalt

    009B86/2260