DE202004020671U1

DE202004020671U1 - Pravastatin

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Publication number: DE202004020671U1
Application number: DE202004020671U
Authority: DE
Original assignee: Teva Pharmaceutical Works PLC
Current assignee: Teva Pharmaceutical Works PLC
Priority date: 2003-11-24
Filing date: 2004-11-23
Publication date: 2005-12-08
Anticipated expiration: 2014-11-24
Also published as: HRP20080686T3; PL1641447T3; DE04811862T1; CA2546377A1; ATE412409T1; WO2005051372A2; TWI319707B; EP1641447A2; ES2251894T3; TW200518745A; JP2007512366A; JP2009161542A; ES2251894T1; US20050113446A1; WO2005051372A3; PT1641447E; DE602004017461D1; EP1641447B1; US7425644B2; US20080300305A1

Abstract

Zusammensetzung, die Pravastatin und weniger als etwa 0,1 Gew.-% Pravastatin C enthält.

Description

QUERVERWEIS AUF VERWANDTE ANMELDUNGEN
Diese Anmeldung beansprucht die Prioritäten der vorläufigen US-Patentanmeldungen Nr. 60/525,494, eingereicht am 24. November 2003, 60/532,314, eingereicht am 22. Dezember 2003, und 60/554,165, eingereicht am 18. März 2004, deren Inhalt durch Bezugnahme hierin aufgenommen ist.
GEBIET DER ERFINDUNG
Die Erfindung umfaßt Pravastatin, hergestellt durch Verfahren zum Isolieren und Reinigen von Pravastatin aus Reaktionen, die in wäßrigen Fermentationsbrühen durchgeführt werden. Insbesondere umfaßt die Erfindung Pravastatin, hergestellt durch Synthese, Isolierung und Reinigung von Pravastatin, wie z.B. Pravastatin, das durch die Fermentation von Compactin hergestellt wird.
HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Komplikationen bei kardiovaskulären Erkrankungen, wie Myokardinfarkt, Schlaganfall und peripheren Gefäßkrankheiten, sind die Ursache für die Hälfte der Todesfälle in den Vereinigten Staaten. Eine große Menge von Low-Density-Lipoprotein (LDL) im Blutstrom wurde mit der Bildung von Koronarläsionen in Verbindung gebracht, die den Blutfluß behindern und unterbrechen und Thrombose begünstigen können. Goodman und Gilman, THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS, S. 879 (9. Aufl., 1996). Es wurde gezeigt, daß eine Reduzierung der LDL-Mengen im Plasma das Risiko klinischer Ereignisse in Patienten mit kardiovaskulären Erkrankungen und in Patienten, die frei von kardiovaskulären Erkrankungen sind, jedoch an Hypercholesterolämie leiden, verringert. Scandinavian Simvastatin Survival Study Group, 1994; Lipid Research Clinics Program, 1984a, 1984b.
Statine sind derzeit die therapeutisch wirksamsten Arzneimittel, die für die Reduzierung der Menge von LDL im Blutstrom eines Patienten, bei dem das Risiko kardiovaskulärer Erkrankungen besteht, verfügbar sind. Diese Klasse von Arzneimitteln beinhaltet unter anderem Compactin, Lovastatin, Simvastatin, Pravastatin und Fluvastatin. Der Wirkmechanismus von Statinen wurde in einigem Detail aufgeklärt. Die Statine stören die Synthese von Cholesterol und anderen Sterolen in der Leber durch kompetitive Inhibition des 3-Hydroxy-3-methylglutaryl-Coenzym A-Reduktaseenzyms ("HMG-CoA-Reduktase"). HMG-CoA-Reduktase katalysiert die Umwandlung von HMG-CoA in Mevalonat, was bei der Biosynthese von Cholesterol der geschwindigkeitsbestimmende Schritt ist. Folglich führt die Inhibition von HMG-CoA-Reduktase zu einer Reduzierung der Geschwindigkeit, mit der Cholesterol in der Leber gebildet wird.
Pravastatin ist die übliche medizinische Bezeichnung für die chemische Zusammensetzung [1S-[1α(β*,δ*)2α,6α,8β(R*),8aα]]-1,2,6,7,8,8a-Hexahydro-β,δ,6-trihydroxy-2-methyl-8-(2-methyl-1- oxobutoxy)-1-naphthalen-heptansäure. (CAS Eintragung Nr. 81093-370). Die molekulare Struktur von Pravastatin in freier Säureform wird durch die Formel (I) wiedergegeben:
Formel (I)
Pravastatin besitzt eine Alkylkette, die von einer Carbonsäuregruppe terminiert wird, welche in einem Lacton eingeschlossen ist, und die zwei Hydroxylgruppen trägt, eine an der β-Position und eine zweite an der δ-Position, bezogen auf die Carbonsäuregruppe. Die Alkylkette ist der Abschnitt des Moleküls, der an HMG-CoA-Reduktase bindet. Die Carbonsäuregruppe und die Hydroxylgruppe an der δ-Position neigen dazu, ein Lacton zu bilden. Verbindungen, die ein Lacton bilden, wie die Statine, können entweder in der freien Säureform oder der Lactonform oder in einem Gleichgewichtsgemisch beider Formen existieren. Verbindungen, die Lactone bilden, rufen während der Herstellung von Statinen Verarbeitungsschwierigkeiten hervor, weil die freie Säureform und die Lactonform der Verbindungen verschiedene Polaritäten besitzen. Ein Verfahren zum Reinigen der einen Form wird Verunreinigungen, jedoch wahrscheinlich auch die andere Form entfernen, was zu einer geringeren Gesamtausbeute führt. Folglich bedarf es bei der Handhabung lactonisierbarer Verbindungen großer Sorgfalt, um sie unter Erhalt einer großen Ausbeute zu isolieren.
Pravastatin weist gegenüber anderen Statinen einen wichtigen therapeutischen Vorteil auf. Pravastatin hemmt selektiv die Cholesterolsynthese in der Leber und im Dünndarm, beeinflußt jedoch die Cholesterolsynthese in den peripheren Zellen im wesentlichen nicht. Koga, T. et al., Biochim. Biophys. Acta, 1045, 115–120 (1990). Die Selektivität scheint zum Teil auf das Vorhandensein einer Hydroxylgruppe an der C-6-Position des Hexahydronaphthalenkerns zurückzuführen zu sein. Die C-6-Position wird in Compactin von einem Wasserstoffatom und in Lovastatin von einer Methylgruppe besetzt. Pravastatin ist weniger in der Lage, die lipophilen Membrane peripherer Zellen zu durchdringen als die anderen, lipophileren Artverwandten. Serajuddin et al., J. Pharm. Sci., 80, 830–34 (1991). Es wird auch angenommen, daß die eingeschränkte Beweglichkeit von Pravastatin für seine lokalisiertere Aktivität in der Leber und im Darm verantwortlich ist.
Gemäß dem Patent Nr. 4,346,227 kann Pravastatin durch Fermentation von Compactin erhalten werden unter Verwendung einer Vielzahl von Mikroorganismen: Absidia coerulea IFO 4423-Sporen, Cunninghamella echinulata IFO 4445, Strepfomyces rosochromogenus NRRL 1233, Syncephalastrum racemosum IFO 4814 und Syncephalastrum racemosum IFO 4828. In Beispiel 1 des Patents '227 wurde Pravastatin nach der Fermentation aus der Fermentationsbrühe abgesondert durch Ansäuern der Brühe auf einen pH-Wert von 3 und Extrahieren von Pravastatin und anderen nicht-hydrophilen organischen Stoffen mit Ethylacetat, gefolgt von Waschen mit Lauge. Die freie Säure von Pravastatin wurde durch Zugabe einer katalytischen Menge von Trifluoressigsäure lactonisiert, dann mit verdünntem Natriumbicarbonat neutralisiert, über Natriumsulfat getrocknet und zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde durch präparative Umkehrphasen-Hochleistungs-Flüssigchromatographie ("HPLC") gereinigt.
Das US-Patent Nr. 5,942,423 offenbart die mikrobielle Hydroxylierung von Compactin zu Pravastatin unter Verwendung eines Stammes von Actinomadura. In den bevorzugten Ausführungsformen wird das Pravastatin unter Anwendung allgemein bekannter Techniken wie Präzipitation, Extraktion und Chromatographie isoliert, angereichert, abgesondert oder gereinigt. HPLC wird als das bevorzugte Verfahren zum Isolieren von Pravastatin aus der Fermentationsbrühe offenbart.
Das US-Patent Nr. 5,202,029 beschreibt ein Verfahren zum Reinigen von HMG-CoA-Reduktaseinhibitoren unter Verwendung von HPLC. Ein Fachmann auf dem Gebiet wird erkennen, daß die HPLC für die Herstellung chemischer Verbindungen in großem Maßstab kein wirtschaftliches Reinigungsverfahren ist, und Schwierigkeiten im Zusammenhang mit dem Reinigen in großem Volumen können von der Anwendung der HPLC abschrecken. Nach der Absonderung von Verunreinigungen auf der HPLC-Säule wird der HMG-CoA-Reduktaseinhibitor von der HPLC-Säule als ein in dem Elutionsmittel gelöster Stoff eluiert. Das Elutionsmittel wird teilweise verdampft und Wasser wird dann hinzugefügt, um die Kristallisation des HMG-CoA-Reduktaseinhibitors zu induzieren.
Das US-Patent Nr. 5,616,595 offenbart einen kontinuierlichen Prozeß der Wiedergewinnung von wasserunlöslichen Verbindungen aus einer Fermentationsbrühe durch Tangentialfiltration. Die Fermentationsbrühe wird in einem Kreislauf an einem Filter vorbeigeleitet und wird aufgrund von Wasserverlust durch den Filter mit jedem Umlauf konzentrierter. Sobald eine gewünschte Konzentration erreicht wurde, wird die konzentrierte Brühe mit einem Lösungsmittel, in dem die gewünschte Verbindung löslich ist, aufgeschlämmt. Die Aufschlämmung wird dann in einem Kreislauf an dem Filter vorbeigeführt. Die gewünschte Verbindung wird als Filtrat gesammelt und anschließend von dem Filtrat isoliert. Optional kann die Verbindung weiter gereinigt werden. In dem Patent ist angegeben, daß das Verfahren auf eine große Vielzahl von Verbindungen einschließlich Lovastatin, Pravastatin und Simvastatin anwendbar ist.
Derzeit besteht das auf wirtschaftlichste Weise durchführbare Verfahren zur Herstellung von Pravastatin in der enzymatischen Hydroxylierung von Compactin an der C-6-Position. Die bekannten Verfahren zum Isolieren eines Statins aus einer Fermentationsbrühe jedoch sind für das Isolieren von reinem Pravastatin, insbesondere aus dem Pravastatin-Natriumsalz, ungeeignet. Darüber hinaus erreichen die derzeit eingesetzten Verfahren keine pharmazeutisch verträglichen Reinheitsniveaus oder erfordern alternativ eine aus wirtschaftlicher Sicht unpraktische chromatographische Trennung, um eine hohe Reinheit zu erreichen.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Die Erfindung umfaßt Pravastatin, welches weniger als etwa 0,1 Gew.-% Pravastatin C enthält, hergestellt durch Verfahren, welche folgendes umfassen:

a) Reinigen von Compactin C enthaltendem Compactin, bis die Menge von Compactin C weniger als etwa 0,16 Gew.-% beträgt, und
b) Synthetisieren von Pravastatin unter Verwendung des Compactins aus a).

Der Reinigungsschritt in a) kann durch einen Kristallisationsprozeß durchgeführt werden, welcher das Lösen oder Suspendieren von Compactin in wenigstens einem mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel, das Hinzufügen von Wasser zu dem Reaktionsgemisch in einem Volumenverhältnis von etwa 0,16 bis etwa 0,4 zu dem mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel, das Kühlen des Reaktionsgemischs auf eine Temperatur, bei der Compactin kristallisiert, und das Sammeln der reinen Compactin-Kristalle umfaßt.
In einer weiteren Ausführungsform umfaßt die Erfindung Compactin, welches durch den oben beschriebenen Kristallisationsprozeß hergestellt wurde, und pharmazeutische Formulierungen davon.
In einer Ausführungsform umfaßt die Erfindung Pravastatin, welches weniger als etwa 0,1 Gew.-% Pravastatin C enthält, hergestellt durch Verfahren, welche folgendes umfassen:

a) Lösen oder Suspendieren einer Zusammensetzung, die Compactin und Compactin C enthält, in wenigstens einem mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel,
b) Hinzufügen von Wasser in einem Volumenverhältnis von etwa 0,16 bis etwa 0,4 zu dem mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel,
c) Kühlen des Reaktionsgemischs,
d) Isolieren einer Probe der aus c) erhaltenen Compactin und Compactin C enthaltenden Zusammensetzung,
e) Messen der Menge von Compactin C in der isolierten Probe von d),
f) Bestimmen, ob die Menge von Compactin C in e) weniger als etwa 0,16 Gew.-% beträgt oder nicht, und
g) Reinigen der aus d) erhaltenen Zusammensetzung mittels Kristallisation, wenn die in e) gemessene Menge von Compactin C etwa 0,16 Gew.-% oder mehr beträgt, bis die Menge von Compactin C weniger als etwa 0,16 Gew.-% beträgt, und,
h) wenn die in e) gemessene Menge von Compactin C weniger als etwa 0,16 Gew.-% beträgt, Synthetisieren einer Pravastatin-Zusammensetzung aus der Zusammensetzung aus Stufe d).

In einer weiteren Ausführungsform umfaßt die Erfindung Pravastatin, welches weniger als etwa 0,1 Gew.-% Pravastatin C enthält und aus einer Fermentation von Compactin, welches weniger als 0,16 Gew.-% Compactin C enthält, hergestellt wurde, und pharmazeutische Formulierungen hiervon.
In noch einer weiteren Ausführungsform umfaßt die Erfindung Pravastatin, hergestellt durch Hydroxylierung von Compactin, wobei das Compactin weniger als etwa 0,16 Gew.-% Compactin C enthält.
In einer Ausführungsform liefert die Erfindung eine Zusammensetzung, die Pravastatin-Natrium mit weniger als etwa 0,1 Gew.-% Pravastatin C enthält, wobei die Zusammensetzung nach einem Verfahren hergestellt ist, welches das Beginnen mit einer Compactin-Probe, die eine ausreichend geringe Menge von Compactin C enthält, beinhaltet. Vorzugsweise beträgt die Menge von Compactin C in der Compactin-Probe weniger als etwa 0,16 Gew.-%. Das Verfahren umfaßt:

a) Erhalten wenigstens einer Probe von wenigstens einem Compactin-Ansatz,
b) Messen der Menge von Compactin C in der Probe von a),
c) Auswählen des Compactin-Ansatzes, der weniger als etwa 0,16 Gew.-% Compactin C enthält, auf Basis der in b) durchgeführten Messung oder Messungen, und
d) Verwenden des in c) ausgewählten Ansatzes, um Pravastatin-Natrium zu synthetisieren.

In einer weiteren Ausführungsform liefert die Erfindung eine Zusammensetzung, die Pravastatin-Natrium mit weniger als etwa 0,1 Gew.-% Pravastatin C enthält, und pharmazeutische Formulierungen hiervon.
In noch einer weiteren Ausführungsform liefert die Erfindung Compactin-Zusammensetzungen, die weniger als etwa 0,16 Gew.-% Compactin C enthalten, und pharmazeutische Formulierungen hiervon.
In einer Ausführungsform liefert die Erfindung gereinigtes Pravastatin, hergestellt durch ein Verfahren, welches das Lösen von Pravastatin-Salz in Wasser, um eine wäßrige Lösung von Pravastatin zu bilden, das Einstellen des pH-Wertes der wäßrigen Lösung von Pravastatin auf einen pH-Wert von etwa 6,7 bis etwa 10, das Inkontaktbringen der wäßrigen Pravastatin-Lösung mit einem Adsorptionssäulenbett, das Eluieren von Pravastatin mit einer Elutionslösung und das Sammeln von reines Pravastatin enthaltenden Fraktionen umfaßt. Das Pravastatin-Salz in der wäßrigen Lösung kann durch Hydroxylieren von Compactin erhalten werden.
In einer weiteren Ausführungsform liefert die vorliegende Erfindung pharmazeutische Formulierungen von Pravastatin, welches durch diesen Reinigungsprozeß hergestellt wurde.
AUSFÜHRLICHE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung liefert hochreines Pravastatin, hergestellt nach Verfahren, die folgendes umfassen: i) Verwenden relativ reiner Ausgangsmaterialien für die Synthese von Pravastatin oder ii) Anwenden von Adsorptionschromatographie. Daher wird gemäß einem Aspekt der vorliegenden Erfindung hochreines Pravastatin unter Verwendung von reinem Compactin synthetisiert, welches durch wenigstens einen Schritt der Reinigung des Compactins vor der Synthese von Pravastatin oder durch Auswählen eines Ansatzes von reinem Compactin erhalten wurde.
Das hochreine und eine große Ausbeute liefernde Pravastatin wird ohne die Notwendigkeit mehrfacher Extraktionen oder Reinigung mittels HPLC erhalten. Daher ist das erfindungsgemäß hergestellte Pravastatin kostengünstiger und praktischer als nach früheren Verfahren hergestelltes Pravastatin und erfüllt das im Stand der Technik bestehende Bedürfnis nach einem wirtschaftlichen und praktischen Verfahren zur Herstellung von Pravastatin in präparativem Maßstab.
Wie er hierin verwendet wird, bezieht sich der Begriff "Pravastatin C" (wie er auch im Europäischen Arzneibuch verwendet wird) auf die Pravastatin-Verunreinigung mit der chemischen Bezeichnung 3S,5S-3,5-Dihydroxy-7-[(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-[[(2S)-2-methylpentanoyl]-oxy]-1,2,6,7,8,8a-hexahydronaphthalen-1-yl]-heptansäure.
Wie er hierin verwendet wird, bezieht sich der Begriff "Compactin C" auf die Compactin-Verunreinigung mit der chemischen Bezeichnung Pentansäure-2-Methyl-1,2,3,7,8,8a-hexahydro-7-methyl-8-[2-tetrahydro-4-hydroxy-6-oxo-2H-pyran-2yl)-ethyl]-1-naphthalenylester, [1S-[1α(R*),7β,8β (2S*,4S*),8aβ]]. Die Registernummer lautet 159225-32-8.
Wie er hierin verwendet wird, bezieht sich der Begriff "Compactin-Ansatz" auf eine im wesentlichen aus Compactin bestehende Zusammensetzung, die geringe Mengen an Verunreinigungen enthalten kann, von denen eine Compactin C sein kann. Wie er hierin in Bezug auf einen Compactin-Ansatz verwendet wird, bezieht sich der Begriff "Probe" auf einen Teil des "Compactin-Ansatzes", der für den Zweck der Messung der Menge von Compactin C entnommen wird.
Die vorliegende Erfindung liefert eine Pravastatin-Zusammensetzung, die weniger als etwa 0,1 Gew.-% Pravastatin C enthält, hergestellt nach einem Verfahren, welches folgendes umfaßt:

a) Reinigen einer Compactin und Compactin C enthaltenden Zusammensetzung, bis eine Zusammensetzung erhalten wird, die weniger als etwa 0,16 Gew.-% Compactin C enthält, und
b) Verwenden der aus a) erhaltenen Zusammensetzung, um eine Pravastatin-Zusammensetzung zu synthetisieren.

Die Zusammensetzung in a) kann mittels Kristallisation gereinigt werden. Vorzugsweise wird die Zusammensetzung in a) kristallisiert, bis sie weniger als etwa 0,15 Gew.-% Compactin C enthält. Vorzugsweise enthält die in b) synthetisierte Pravastatin-Zusammensetzung weniger als etwa 0,04 Gew.-% Pravastatin C, noch bevorzugter weniger als 0,03 Gew.-% Pravastatin C und ganz besonders bevorzugt enthält die Zusammensetzung weniger als etwa 0,02 Gew.-% Pravastatin C.
Der Kristallisationsprozeß umfaßt das Lösen oder Suspendieren von Compactin in wenigstens einem mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel, um ein Reaktionsgemisch zu bilden, das Hinzufügen von Wasser zu dem Reaktionsgemisch in einem Volumenverhältnis von etwa 0,16 bis etwa 0,4 zu dem mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel, das Kühlen des Reaktionsgemischs bis auf eine Temperatur, bei der Compactin kristallisiert, und das Sammeln der reinen Compactin-Kristalle. Optional kann der Kristallisationsprozeß wiederholt werden, soweit notwendig ist, um die gewünschte Reinheit von Compactin zu erreichen.
Vorzugsweise enthalten die mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel wenigstens eines von C_3- ₅-Ketonen, Nitrilen und C_1-4 Alkoholen. Noch bevorzugter ist das mit Wasser mischbare organische Lösungsmittel wenigstens eines von Aceton, Methanol, Ethanol, n-Propanol, Isopropanol, Acetonitril, Methyl-Ethyl-Keton oder Tetrahydrofuran. Ganz besonders bevorzugt ist das mit Wasser mischbare organische Lösungsmittel wenigstens eines von Aceton, Methanol, Ethanol, Isopropanol oder Acetonitril.
Das Volumen des mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittels, welches notwendig ist, um das Compactin zu lösen oder zu suspendieren, kann von einem gewöhnlichen Fachmann auf dem Gebiet mittels nur weniger oder ganz ohne Experimente leicht bestimmt werden. Das Volumen wird abhängig von der Menge an Compactin und dem Siedepunkt des mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittels variieren. Typischerweise ist das Volumen des mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittels ausreichend, um das Compactin bei der Rückflußtemperatur des mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittels zu lösen oder zu suspendieren. Vorzugsweise beträgt das Volumen des mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittels etwa das Siebenfache der Masse von Compactin und noch bevorzugter etwa das Fünffache der Masse von Compactin.
Vorzugsweise beträgt die Menge des hinzugefügten Wassers etwa das 0,17- bis 0,4-fache des Volumens des mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittels. Vor der Hinzufügung von Wasser wird das Reaktionsgemisch auf eine Temperatur von etwa 30°C bis etwa Rückflußtemperatur und vorzugsweise auf eine Temperatur von etwa 20°C bis etwa 25°C erwärmt.
Das Reaktionsgemisch sollte auf eine Temperatur abgekühlt werden, bei der Compactin kristallisiert. Die geeignete Temperatur kann von einem Fachmann auf dem Gebiet leicht als die Temperatur, bei der Kristalle sichtbar werden, bestimmt werden. Typischerweise wird das Reaktionsgemisch von Compactin auf eine Temperatur von etwa 0°C bis etwa 30°C abgekühlt und vorzugsweise auf eine Temperatur von etwa 20°C bis etwa 25°C. Das Reaktionsgemisch wird typischerweise mit einer Geschwindigkeit von etwa 1°C bis etwa 6°C pro Stunde und vorzugsweise mit einer Geschwindigkeit von etwa 2°C bis etwa 4°C pro Stunde abgekühlt. Nach dem Kühlen kann das Reaktionsgemisch optional für 16 Stunden auf etwa 30°C erwärmt werden, ehe ein zweites Kühlen erfolgt.
Die Compactin-Kristalle werden dann unter Anwendung irgendeines herkömmlichen, dem Fachmann auf dem Gebiet bekannten Verfahrens gesammelt. Solche Verfahren umfassen Zentrifugation, Filtrationstrichter, Bandfiltration oder Preßfiltration, sind jedoch nicht hierauf beschränkt. Anschließend werden die Compactin-Kristalle mit einer Lösung aus Wasser und mit Wasser mischbarem organischem Lösungsmittel gewaschen, vorzugsweise in einem Volumenverhältnis von 1:1. Danach werden die gesammelten Compactin-Kristalle unter Anwendung herkömmlicher Techniken, wie sie dem Fachmann auf dem Gebiet bekannt sind, getrocknet. Das reine Compactin wird dann verwendet, um eine hochreine Pravastatin-Zusammensetzung zu synthetisieren.
Die vorliegende Erfindung liefert auch Compactin, welches weniger als etwa 0,16 Gew.-% Compactin C enthält, und pharmazeutische Formulierungen davon. Vorzugsweise ist Compactin C in einer Menge von weniger als etwa 0,15 Gew.-% vorhanden.
Die vorliegende Erfindung liefert weiterhin Compactin, welches nach dem obigen Verfahren hergestellt wurde, und pharmazeutische Formulierungen davon.
Die Erfindung umfaßt weiterhin eine Pravastatin-Zusammensetzung, welche weniger als etwa 0,1 Gew.-% Pravastatin C enthält, hergestellt nach einem Verfahren, welches das Messen des Compactin C in Proben von hergestellten Compactin-Ansätzen beinhaltet. Das Verfahren umfaßt das Auswählen jener Compactin-Ansätze, die weniger als etwa 0,16 Gew.-% Compactin C enthalten, und das Synthetisieren der Pravastatin-Zusammensetzung aus den ausgewählten Ansätzen. Wenn der Compactin-Ansatz etwa 0,16 Gew.-% Compactin C oder mehr enthält, kann der Compactin-Ansatz mittels Kristallisation gemäß einem Verfahren, wie es beispielsweise oben beschrieben wurde, gereinigt werden. Einer der Vorteile der vorliegenden Erfindung besteht darin, daß das hochreine Pravastatin ohne die Notwendigkeit einer Reinigung mittels HPLC erhalten wird.
Die Messung von Compactin C in den Proben der Compactin-Ansätze kann mittels Standardtechniken der analytischen Chemie, beispielsweise mittels Umkehrphasen-HPLC oder anderer geeigneter chromatographischer Verfahren, durchgeführt werden. Die Synthese von Pravastatin-Natrium durch enzymatische Hydroxylierung von Compactin sowie die Isolierung des reinen Pravastatins sind beschrieben in den US-Patenten Nr. 5,942,423 und 4,346,227, die durch Bezugnahme hierin aufgenommen sind. Die Fermentations- oder Hydroxylierungsbrühe, aus der Pravastatin dann isoliert wird, kann irgendeine der wäßrigen Brühen sein, die für die Fermentation von Compactin in industriellem Umfang bekannt sind.
Die vorliegende Erfindung liefert eine Zusammensetzung, die Pravastatin-Natrium und weniger als etwa 0,1 Gew.-% Pravastatin C, vorzugsweise weniger als etwa 0,04 Gew.-% Pravastatin C, noch bevorzugter weniger als 0,03 Gew.-% Pravastatin C und ganz besonders bevorzugt weniger als etwa 0,02 Gew.-% Pravastatin C enthält.
Die vorliegende Erfindung liefert gereinigtes Pravastatin oder gereinigte Pravastatin-Salze, hergestellt nach einem Verfahren, welches die Verwendung der Adsorptionschromatographie umfaßt. Dieses Verfahren umfaßt das Lösen von Pravastatin oder seines Salzes in Wasser, um eine wäßrige Lösung zu bilden, das Einstellen des pH-Wertes der wäßrigen Lösung auf einen pH-Wert von etwa 6,7 bis etwa 10, das Hinzufügen der wäßrigen Lösung zu einem Adsorptionssäulenbett, das Eluieren von Pravastatin mit einer Elutionslösung und das Sammeln von Fraktionen mit hochreinem Pravastatin. Das Reinigungsverfahren kann wiederholt werden, soweit notwendig ist, um die gewünschte Reinheit von Pravastatin zu erreichen.
Die Menge des verwendeten Wassers sollte ausreichend sein, um das Pravastatin oder Pravastatin-Salz zu lösen, und kann von einem gewöhnlichen Fachmann auf dem Gebiet leicht bestimmt werden, da die Menge in Abhängigkeit von der Menge von Pravastatin oder Salz variieren kann. Typischerweise beträgt die Menge des verwendeten Wassers etwa 8 ml Wasser pro Gramm Pravastatin-Salz und vorzugsweise etwa 6 ml Wasser pro Gramm.
Der pH-Wert der wäßrigen Lösung kann unter Verwendung irgendeines in der Technik bekannten Verfahrens eingestellt werden. Typischerweise kann der pH-Wert der wäßrigen Lösung unter Verwendung einer basischen Lösung, wie z.B. 25% NaOH, in einer Menge, die ausreichend ist, um einen pH-Wert von etwa 6,7 bis etwa 10 zu erhalten, eingestellt werden.
Im allgemeinen umfaßt das Adsorptionssäulenbett Harze wie polymere Adsorptionsmittel mit sehr porösen Strukturen, deren innere Oberflächen eine große Vielzahl verschiedener Spezies adsorbieren und desorbieren können, in Abhängigkeit von der Umgebung, in der sie eingesetzt werden. In diesem Fall, mit polaren Lösungsmitteln wie Wasser, zeigen die polymeren Adsorptionsmittel ein nicht-polares oder hydrophobes Verhalten und können organische Arten adsorbieren, die schwer löslich sind. In einer Ausführungsform kann das Adsorptionssäulenbett eine Umkehrphasen-Silicagel-Säule sein. Kommerziell erhältliche Harze schließen jene ein, die von Rohm und Haas, Philadelphia, Pennsylvania, hergestellt werden, wie beispielsweise AMBERLITE^TM XAD^TM 4, XAD^TM 7, XAD^TM 16, XAD^TM 16HP, XAD^TM 761 und XAD^TM 1180. Andere für das Verfahren der Erfindung geeignete Harze schließen jene ein, die von Mitsubishi Kasei Corporation, Japan, hergestellt und vertrieben werden, wie beispielsweise DAION^TM HP 10, DAION^TM HP 20, DAION^TM HP 21, DAION^TM HP 30, DAION^TM HP 40, DAION^TM HP 50, DAION^TM SP 800, DAION^TM SP 825, DAION^TM SP 850, DAION^TM SP 875, DAION^TM SP 205, DAION^TM SP 207, DAION^TM HP1MG und DAION^TM HP2MG. Umkehrphasen-Silicagele schließen jene ein, die von Merck & Co., Whitehouse Station, NJ, hergestellt und vertrieben werden, wie z.B. C-18, RP-2, RP-8 und RP-18.
Das Eluieren von Pravastatin oder Pravastatin-Salz mittels einer Elutionslösung wird unter Anwendung von Techniken, wie sie dem Fachmann auf dem Gebiet bekannt sind, durchgeführt. Die Elutionslösung enthält typischerweise Wasser und wenigstens eines von Aceton, Acetonitril, Methanol, Ethanol oder Isopropanol. Vorzugsweise beträgt das Volumenverhältnis von Wasser zu Aceton, Acetonitril, Methanol, Ethanol oder Isopropanol etwa 7:3 bis etwa 9:1, und noch bevorzugter beträgt das Verhältnis 8:2. Danach werden die Fraktionen mit hochreinem Pravastatin gesammelt, ihr Volumen wird reduziert und sie werden getrocknet. Siehe Europäisches Arzneibuch 4.5 (2003).
Das nach diesem Verfahren hergestellte Pravastatin enthält weniger als etwa 0,1 Gew.-% Pravastatin C. Vorzugsweise enthält Pravastatin weniger als etwa 0,1 Gew.-% Pravastatin C, noch bevorzugter weniger als etwa 0,03 Gew.-% und ganz besonders bevorzugt weniger als etwa 0,02 Gew.-%.
Die vorliegende Erfindung liefert nach den Verfahren der Erfindung hergestelltes gereinigtes Pravastatin und Pravastatin-Natrium und pharmazeutische Formulierungen davon.
Phannazeutische Formulierungen der vorliegenden Erfindung enthalten gereinigtes Pravastatin oder Compactin, wie hierin offenbart. Zusätzlich zu dem (den) aktiven Bestandteilen) können die pharmazeutischen Formulierungen der vorliegenden Erfindung einen oder mehrere Arzneistoffträger enthalten. Arzneistoffträger werden für eine Vielzahl von Zwecken zu der Formulierung hinzugefügt. Verdünnungsmittel vergrößern die Masse einer festen pharmazeutischen
Zusammensetzung und können eine die Zusammensetzung enthaltende pharmazeutische Dosierungsform für den Patienten und den Pflegenden leichter handhabbar machen. Verdünnungsmittel für feste Zusammensetzungen umfassen beispielsweise mikrokristalline Zellulose (z.B. Avicel^®), mikrofeine Zellulose, Lactose, Stärke, vorgelatinierte Stärke, Calciumcarbonat, Calciumsulfat, Zucker, Dextrate, Dextrin, Dextrose, zweibasisches Calciumphosphatdihydrat, dreibasisches Calciumphosphat, Kaolin, Magnesiumcarbonat, Magnesiumoxid, Maltodextrin, Mannitol, Polymethacrylate (z.B. Eudragit^®), Kaliumchlorid, pulverige Zellulose, Natriumchlorid, Sorbitol und Talkum.
Feste pharmazeutische Zusammensetzungen, die in eine Dosierungsform wie z.B. eine Tablette kompaktiert sind, können Arzneistoffträger enthalten, deren Funktionen unter anderem darin bestehen, daß sie die Bindung des aktiven Bestandteils und anderer Arzneistoffträger aneinander nach dem Pressen unterstützen. Bindemittel für feste phannazeutische Zusammensetzungen beinhalten Akaziengummi, Alginsäure, Carbomer (z.B. Carbopol), Carboxymethylzellulosenatrium, Dextrin, Ethylzellulose, Gelatine, Guargummi, hydriertes Gemüseöl, Hydroxyethylzellulose, Hydroxypropylzellulose (z.B. Klucel^®), Hydroxypropylmethylzellulose (z.B. Methocel^®), flüssige Glucose, Magnesiumaluminiumsilikat, Maltodextrin, Methylzellulose, Polymethacrylate, Povidon (z.B. Kollidon^®, Plasdone^®), vorgelatinierte Stärke, Natriumalginat und Stärke.
Die Auflösungsrate einer kompaktierten festen pharmazeutischen Zusammensetzung im Magen des Patienten kann durch die Hinzufügung eines Sprengmittels zu der Zusammensetzung gesteigert werden. Sprengmittel umfassen Alginsäure, Carboxymethylzellulosecalcium, Carboxymethylzellulosenatrium (z.B. Ac-Di-Sol^®, Primellose^®), kolloidales Siliciumdioxid, Croscarmellosenatrium, Crospovidon (z.B. Kollidon^®, Polyplasdone^®), Guargummi, Magnesiumaluminiumsilikat, Methylzellulose, mikrokristalline Zellulose, Polacrilin-Kalium, pulverförmige Zellulose, vorgelatinierte Stärke, Natriumalginat, Natriumstärkeglycolat (z.B. Explotab^®) und Stärke.
Gleitmittel können hinzugefügt werden, um die Fließfähigkeit einer nicht-kompaktierten festen Zusammensetzung zu verbessern und um die Dosiergenauigkeit zu verbessern. Arzneistoffträger, die als Gleitmittel fungieren können, umfassen kolloidales Siliciumdioxid, Magnesiumtrisilikat, pulverförmige Zellulose, Stärke, Talkum und dreibasisches Calciumphosphat, sind aber nicht hierauf beschränkt.
Wenn eine Dosierungsform wie beispielsweise eine Tablette durch Kompaktieren einer pulverförmigen Zusammensetzung hergestellt wird, wird die Zusammensetzung dem Druck eines Stempels und einer Form ausgesetzt. Einige Arzneistoffträger und aktive Bestandteile neigen dazu, an den Oberflächen des Stempels und der Form anzuhaften, was dazu führen kann, daß das Produkt Beschädigungen und andere Oberflächenunregelmäßigkeiten aufweist. Ein Schmiermittel kann zu der Zusammensetzung hinzugefügt werden, um die Anhaftung zu reduzieren und das Ablösen des Produkts von der Form zu erleichtern. Schmiermittel können Magnesiumstearat, Calciumstearat, Glycerylmonostearat, Glycerylpalmitostearat, hydriertes Castoröl, hydriertes Gemüseöl, Mineralöl, Polyethylenglycol, Natriumbenzoat, Natriumlaurylsulfat, Natriumstearylfumarat, Stearinsäure, Talkum und Zinkstearat sein.
Geschmacksstoffe und Geschmacksverstärker können die Dosierungsform für den Patienten schmackhafter machen. Gewöhnliche Geschmacksstoffe und Geschmacksverstärker für pharmazeutische Produkte, die der Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung zugesetzt werden können, beinhalten Maltol, Vanillin, Ethylvanillin, Menthol, Zitronensäure, Fumarsäure, Ethylmaltol und Weinsäure, sind jedoch nicht hierauf beschränkt.
Feste und flüssige Zusammensetzungen können auch unter Verwendung irgendeines pharmazeutisch verträglichen Farbstoffs eingefärbt werden, um ihr Erscheinungsbild zu verbessern und/oder es dem Patienten zu erleichtern, das Produkt und die Menge der Dosiseinheit zu erkennen.
In flüssigen pharmazeutischen Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung sind Pravastatin oder Compactin in Kombination mit irgendeinem anderen festen Arzneistoffträger in einem flüssigen Trägerstoff wie Wasser, Gemüseöl, Alkohol, Polyethylenglycol, Polypropylenglycol oder Glycerin gelöst oder suspendiert.
Flüssige pharmazeutische Zusammensetzungen können Emulgiermitel enthalten, um einen aktiven Bestandteil oder einen anderen Arzneistoffträger, der in dem flüssigen Trägerstoff nicht löslich ist, gleichmäßig in der Zusammensetzung zu dispergieren. Emulgiermittel, die in flüssigen Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung nützlich sein können, umfassen beispielsweise Gelatine, Eigelb, Kasein, Cholesterol, Akaziengummi, Tragantgummi, Chondrus, Pektin, Methylzellulose, Carbomer, Cetostearylalkohol und Cetylalkohol.
Flüssige pharmazeutische Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung können auch ein die Viskosität erhöhendes Mittel enthalten, um das Mundgefühl des Produkts zu verbessern und/oder die Innenwände des Gastrointestinaltrakts zu überziehen. Solche Mittel umfassen Akaziengummi, Alginsäurebentonit, Carbomer, Carboxymethylzellulosecalcium oder -natrium, Cetostearylalkohol, Methylzellulose, Ethylzellulose, Gelatine, Guargummi, Hydroxyethylzellulose, Hydroxypropylzellulose, Hydroxypropylmethylzellulose, Maltodextrin, Polyvinylalkohol, Povidon, Propylencarbonat, Propylenglycolalginat, Natriumalginat, Natriumstärkeglycolat, Stärke, Tragantgummi und Xanthangummi, sind aber nicht hierauf beschränkt.
Süßungsmittel wie Sorbitol, Saccharin, Natriumsaccharin, Sucrose, Aspartam, Fructose, Mannitol und Invertzucker können hinzugefügt werden, um den Geschmack zu verbessern.
Konservierungs- und Cheliermittel, wie Alkohol, Natriumbenzoat, butyliertes Hydroxytoluol, butyliertes Hydroxyanisol und Ethylendiamintetraessigsäure, können in für die Nahrungsaufnahme sicheren Mengen hinzugefügt werden, um die Speicherstabilität zu verbessern.
Gemäß der vorliegenden Erfindung kann eine flüssige Zusammensetzung auch einen Puffer wie z.B. Gluconsäure, Milchsäure, Zitronensäure oder Essigsäure, Natriumgluconat, Natriumlactat, Natriumcitrat oder Natriumacetat enthalten. Die Auswahl von Arzneistoffträgern und der verwendeten Mengen kann von einem Pharmazeuten auf der Grundlage seiner Erfahrung und unter Berücksichtigung von Standardverfahren und Nachschlagewerken auf dem Gebiet leicht bestimmt werden.
Die festen Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung umfassen Pulver, Granulate, Aggregate und kompaktierte Zusammensetzungen. Die Dosierungsformen schließen Dosierungen ein, die für orale, bukkale, rektale, parenterale (einschließlich subkutane, intramuskuläre und intravenöse), inhalative und ophthalmische Verabreichung geeignet sind. Obwohl die am besten geeignete Verabreichungsform in jedem Einzelfall von der Art und der Schwere des zu behandelnden Zustands abhängig ist, ist der am meisten bevorzugte Verabreichungsweg der vorliegenden Erfindung die orale Verabreichung. Die Dosierungen können in geeigneter Weise in Form von Einheitsdosen erfolgen und gemäß irgendeinem der auf dem Gebiet der Pharmakologie gut bekannten Verfahren hergestellt werden.
Die Dosierungsformen umfassen feste Dosierungsformen, wie beispielsweise Tabletten, Pulver, Kapseln, Suppositorien, Duftkissen, Pastillen und Lutschpastillen, sowie flüssige Sirupe, Suspensionen und Elixiere.
Die Dosierungsform der vorliegenden Erfindung kann eine Kapsel sein, die die Zusammensetzung enthält, vorzugsweise eine pulverförmige oder granulierte feste Zusammensetzung der Erfindung in entweder einer harten oder einer weichen Umhüllung. Die Umhüllung kann aus Gelatine bestehen und optional einen Weichmacher, wie z.B. Glycerin und Sorbitol, und ein Trübungsmittel oder einen Farbstoff enthalten.
Der aktive Bestandteil und die Arzneistoffträger können mittels in der Technik bekannter Verfahren in Zusammensetzungen und Dosierungsformen formuliert werden.
Eine Zusammensetzung für das Tablettieren oder Befüllen oder Kapsel kann durch Naßgranulierung hergestellt werden. Bei der Naßgranulierung werden einige oder alle der aktiven Bestandteile und Arzneistoffträger in Pulverform vermischt und dann in der Gegenwart einer Flüssigkeit, typischerweise Wasser, weiter vermischt, was dazu führt, daß das Pulver zu Körnchen verklumpt. Das Granulat wird gesiebt und/oder gemahlen, getrocknet und dann zur gewünschten Teilchengröße gesiebt und/oder gemahlen. Das Granulat kann dann tablettiert werden oder es können weitere Arzneistoffträger, wie z.B. ein Gleitmittel und/oder ein Schmiermittel, vor dem Tablettieren hinzugefügt werden.
Eine Tablettierungszusammensetzung kann auf konventionelle Weise durch Trockenmischen hergestellt werden. Beispielsweise kann die vermischte Zusammensetzung aus aktiven Bestandteilen und Arzneistoffträgern zu einer Stange oder einer Bahn verdichtet werden und dann zu kompaktierten Körnchen verkleinert werden. Die kompaktierten Körnchen können anschließend zu einer Tablette gepreßt werden.
Alternativ zur Trockengranulierung kann eine vermischte Zusammensetzung unter Verwendung von Direktkomprimierungstechniken direkt in eine kompaktierte Dosierungsform gepreßt werden. Die Direktkomprimierung erzeugt eine einheitlicher geformte Tablette ohne Körnchen. Arzneistoffträger, die besonders gut für die Tablettierung mittels Direktkomprimierung geeignet sind, umfassen mikrokristalline Zellulose, sprühgetrocknete Lactose, Dicalciumphosphatdihydrat und kolloidales Silica. Die richtige Verwendung dieser und anderer Arzneistoffträger bei der Tablettierung mittels Direktkomprimierung ist Fachleuten auf dem Gebiet mit Erfahrung und Geschick bei bestimmten Formulierungsproblemen bei der Tablettierung mittels Direktkomprimierung bekannt.
Eine Kapselfüllung der vorliegenden Erfindung kann irgendeine/s der vorgenannten Mischungen und Granulate enthalten, die in Bezug auf die Tablettierung beschrieben wurden, doch werden sie keinem abschließenden Tablettierungsschritt unterworfen.
Die Dosierung von PLAVIX kann als Anleitung verwendet werden. PLAVIX wird oral verabreicht. Die empfohlene orale Dosis von PLAVIX beträgt einmal täglich 75 mg.
Nachdem die Erfindung unter Bezugnahme auf bestimmte bevorzugte Ausführungsformen beschrieben wurde, ergeben sich für den Fachmann auf dem Gebiet beim Lesen der Beschreibung weitere Ausführungsformen. Die Erfindung wird unter Bezugnahme auf die folgenden Beispiele, die die Herstellung der Zusammensetzung und die Anwendungsverfahren der Erfindung im Detail beschreiben, weiter definiert. Fachleute auf dem Gebiet werden erkennen, daß viele Modifikationen hinsichtlich sowohl der Materialien als auch der Verfahren vorgenommen werden können, ohne vom Schutzumfang der Erfindung abzuweichen.
BEISPIELE
Die Fermentation und Gewinnung von Pravastatin wurde durchgeführt unter Verwendung von Verfahren, wie sie Fachleuten auf dem Gebiet für gewöhnlich bekannt sind und wie sie beispielsweise in dem US-Patent Nr. 6,444,452 beschrieben sind, welches durch Bezugnahme hierin aufgenommen ist.
Beispiel 1: Synthese von Pravastatin
Analyse des Ausgangs-Compactins mittels HPLC unter Verwendung einer Waters-Säule RP-18 (5 m, 2,1 × 150 mm) mit einer mobilen Phase von (a) 0,1% Phosphorsäure und einem mit 25% NaOH eingestellten pH-Wert und (b) einem Gemisch aus destilliertem Wasser und Acetonitril (1:9). Die Säule wurde für 50 min bei 40°C unter Verwendung einer Detektionswellenlänge von 240 nm laufen gelassen. Die Menge von Compactin wurde unter Verwendung einer standardisierten Lösung von 10 mg Compactin und 10 mg Compactin-Ammoniumsalz bestimmt.
Die Proben wurden in Konzentrationen von 0,4 mg/ml hergestellt und das Verunreinigungsprofil wurde im Vergleich zu der standardisierten Probe als der Scheitelbereich bestimmt. Für diese Probe betrug die Menge der Verunreinigung Compactin C 0,25 Gew.-%.
Das reine Compactin wurde dann zu Pravastatin fermentiert und gemäß den in dem US-Patent Nr. 6,444,452 beschriebenen Verfahren isoliert. Die Analyse des Pravastatin-Salzes mittels HPLC ergab, daß die Verunreinigung Pravastatin C in einer Menge von 0,12 Gew.-% vorhanden war.
Beispiel 2: Reinigung von Pravastatin
Das Pravastatin-Salz aus Beispiel 1 (90 g) wurde in Wasser (540 ml) gelöst, danach wurde der pH-Wert unter Verwendung von 25% NaOH auf 6,7 bis 10 eingestellt. Die Pravastatin-Salzlösung wurde durch ein Sorptionsharzbett (550 ml Sorptionsharz XAD^TM 1180) geführt. Der Säulendurchmesser betrug 3,2 cm und die verwendete Durchflußrate betrug 90 ml/Stunde. Nach Adsorption des Pravastatin-Salzes wurde die Säule mit 4 l Wasser:Aceton (8:2) eluiert und die Pravastatin enthaltenden Fraktionen wurden vereinigt (1760 ml), ihr Volumen wurde reduziert und Pravastatin-Salz (64,8 g) wurde isoliert. Die Verunreinigungsanalyse mittels HPLC, wie im Europäischen Arzneibuch beschrieben, ergab, daß Pravastatin C in einer Menge von 0,04 Gew.-% vorhanden war.
Beispiel 3: Reinigung von Compactin
Eine Compactin-Probe, in der Compactin C in einer Menge von 0,2 Gew.-% enthalten war, wurde mittels Kristallisation gereinigt. Die Compactin-Probe (30 g) wurde in Aceton (5-faches Volumen) suspendiert und auf Rückflußtemperatur erhitzt. Wasser (1,25-faches Volumen) wurde zu der erhitzten Suspension hinzugefügt, und die Lösung wurde mit einer Kühlrate von 2°C/Stunde auf 20°C abkühlen gelassen. Beim Kühlen bildeten sich Kristalle, die für 2 Stunden bei 20°C gerührt wurden und anschließend mittels Filtration gesammelt, mit einer Lösung aus Wasser:Aceton (1:1) gewaschen und getrocknet wurden. Nach dem Trocknen wurde das kristalline Compactin (28,2 g) gesammelt und mittels HPLC analysiert, wie es im Europäischen Arzneibuch beschrieben ist. Das kristalline Compactin enthielt 0,15 Gew.-% an Compactin C.
Beispiel 4: Synthese von hochreinem Pravastatin
Eine Compactin-Probe, die Compactin C in einer Menge von 0,2 Gew.-% enthielt, wurde mittels Kristallisation gereinigt. Die Compactin-Probe (30 g) wurde in Methanol (5-faches Volumen) suspendiert und auf Rückflußtemperatur erhitzt. Wasser (1,5-faches Volumen) wurde zu der erhitzten Suspension hinzugefügt, und die Lösung wurde mit einer Kühlrate von 2°C/Stunde auf 20°C abkühlen gelassen. Danach wurde die Lösung auf 30°C erwärmt und für 16 Stunden gerührt. Beim Kühlen bildeten sich Kristalle, die mittels Filtration gesammelt, mit einer Lösung aus Wasser:Methanol (1:1) gewaschen und getrocknet wurden. Nach dem Trocknen wurde das kristalline Compactin (27,2 g) gesammelt und mittels HPLC analysiert. Das kristalline Compactin enthielt 0,15 Gew.-% an Compactin C.
Das reine Compactin C wird dann zu Pravastatin fermentiert, und Pravastatin wird gemäß den in dem US-Patent Nr. 6,444,452 beschriebenen Verfahren isoliert. Die erzielbare Menge von Pravastatin C beträgt 0,02 Gew.-%.
Beispiel 5: Synthese von hochreinem Pravastatin
Eine Compactin-Probe, die Compactin C in einer Menge von 0,2 Gew.-% enthielt, wurde mittels Kristallisation gereinigt. Die Compactin-Probe (30 g) wurde in Isopropanol (5-faches Volumen) suspendiert und auf Rückflußtemperatur erhitzt. Wasser (1,5-faches Volumen) wurde zu der erhitzten Suspension hinzugefügt, und die Lösung wurde mit einer Kühlrate von 2°C/Stunde auf 25°C abkühlen gelassen. Beim Kühlen bildeten sich Kristalle, die mittels Filtration gesammelt, mit einer Lösung aus Wasserasopropanol (1:1) gewaschen und getrocknet wurden. Nach dem Trocknen wurde das kristalline Compactin (22,9 g) gesammelt und mittels HPLC analysiert. Das kristalline Compactin enthielt 0,16 Gew.-% Compactin C.
Das reine Compactin wird dann zu Pravastatin fermentiert und gemäß den in dem US-Patent Nr. 6,444,452 beschriebenen Verfahren isoliert. Die erzielbare Menge von Pravastatin C beträgt 0,03 Gew.-%.
Beispiel 6: Synthese von hochreinem Pravastatin
Eine Compactin-Probe, die Compactin C in einer Menge von 0,2 Gew.-% enthielt, wurde mittels Kristallisation gereinigt. Die Compactin-Probe (30 g) wurde in Acetonitril (5-faches Volumen) suspendiert und auf Rückflußtemperatur erhitzt. Wasser (1,5-faches Volumen) wurde zu der erhitzten Suspension hinzugefügt, und die Lösung wurde mit einer Kühlrate von 2°C/Stunde auf 25°C abkühlen gelassen. Beim Kühlen bildeten sich Kristalle, die mittels Filtration gesammelt, mit einer Lösung aus Wasser:Acetonitril (1:1) gewaschen und getrocknet wurden. Nach dem Trocknen wurde das kristalline Compactin (24,2 g) gesammelt und mittels HPLC analysiert. Das kristalline Compactin enthielt 0,15 Gew.-% Compactin C.
Das reine Compactin wird dann zu Pravastatin fermentiert und gemäß den in dem US-Patent Nr. 6,444,452 beschriebenen Verfahren isoliert. Die erzielbare Menge von Pravastatin C beträgt 0,02 Gew.-%.

Claims

Zusammensetzung, die Pravastatin und weniger als etwa 0,1 Gew.-% Pravastatin C enthält.
Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei die Zusammensetzung weniger als etwa 0,04 Gew.-% Pravastatin C enthält.
Zusammensetzung nach Anspruch 2, wobei die Zusammensetzung weniger als etwa 0,03 Gew.-% Pravastatin C enthält.
Zusammensetzung nach Anspruch 3, wobei die Zusammensetzung weniger als etwa 0,02 Gew.-% Pravastatin C enthält.
Zusammensetzung, die Compactin und weniger als etwa 0,16 Gew.-% Compactin C enthält.
Zusammensetzung nach Anspruch 5, wobei die Zusammensetzung weniger als etwa 0,15 Gew.-% Compactin C enthält.
Pravastatin, das weniger als 0,1 Gew.-% Pravastatin C enthält, hergestellt nach einem Verfahren, welches folgendes umfaßt: a) Erhalten wenigstens einer Probe von wenigstens einem Ansatz, der Compactin und Compactin C enthält, b) Messen der Menge von Compactin C in jeder der Proben aus a), c) Auswählen eines Compactin-Ansatzes, der weniger als etwa 0,16% Compactin C enthält, und d) Verwenden des in c) ausgewählten Ansatzes für das Synthetisieren der Pravastatin-Zusammensetzung.
Pravastatin nach Anspruch 7, wobei der Compactin-Ansatz aus Stufe c) weniger als etwa 0,15 Gew.-% Compactin C enthält.
Pravastatin-Zusammensetzung, die weniger als etwa 0,1 Gew.-% Pravastatin C enthält, hergestellt nach einem Verfahren, welches folgendes umfaßt: a) Reinigen einer Zusammensetzung, die Compactin und Compactin C enthält, bis eine Zusammensetzung erhalten wird, die weniger als etwa 0,16 Gew.-% Compactin C enthält, und b) Verwenden der aus a) resultierenden Zusammensetzung für das Synthetisieren einer Pravastatin-Zusammensetzung.
Pravastatin-Zusammensetzung nach Anspruch 9, wobei die Reinigung in Stufe a) umfaßt: a) Lösen oder Suspendieren einer Zusammensetzung, die Compactin und Compactin C enthält, in wenigstens einem mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel, b) Hinzufügen von Wasser in einem Verhältnis von etwa 0,16 bis etwa 0,4 des mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittels, c) Kühlen und d) Gewinnen der Zusammensetzung von Compactin und weniger als etwa 0,16 Gew.-% Compactin C.
Pravastatin-Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 9 oder 10, wobei die gereinigte Zusammensetzung weniger als etwa 0,15 Gew.-% Compactin C enthält.
Pravastatin-Zusammensetzung, die weniger als etwa 0,1 Gew.-% Pravastatin C enthält, hergestellt nach einem Verfahren, welches folgendes umfaßt: a) Lösen oder Suspendieren einer Zusammensetzung, die Compactin C enthält, in wenigstens einem mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel, b) Hinzufügen von Wasser in einem Verhältnis von etwa 0,16 bis etwa 0,4 des mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittels, c) Kühlen, d) Isolieren einer Probe der aus c) resultierenden Compactin und Compactin C enthaltenden Zusammensetzung, e) Messen der Menge von Compactin C in der isolierten Probe aus d), f) Bestimmen, ob die Menge von Compactin C in e) weniger als etwa 0,16 Gew.-% beträgt oder nicht, und g) Reinigen der aus d) resultierenden Zusammensetzung durch Kristallisation, wenn die in e) gemessene Menge von Compactin C etwa 0,16 Gew.-% oder mehr beträgt, bis die Menge von Compactin C weniger als etwa 0,16 Gew.-% beträgt, und Synthetisieren einer Pravastatin-Zusammensetzung aus der so gereinigten Zusammensetzung, oder, h) wenn die in e) gemessene Menge von Compactin C weniger als etwa 0,16 Gew.-% beträgt, Synthetisieren einer Pravastatin-Zusammensetzung aus der Zusammensetzung von Stufe d).
Pravastatin-Zusammensetzung nach Anspruch 12, wobei die Menge von Compactin C in f) und h) weniger als etwa 0,15 Gew.-% beträgt.
Pravastatin-Zusammensetzung nach Anspruch 12, wobei die Menge von Compactin C in g) etwa 0,15 Gew.-% oder mehr beträgt.
Pravastatin-Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 7, 9 oder 12, wobei die Pravastatin-Zusammensetzung durch Hydroxylierung oder Fermentation von Compactin synthetisiert wird.
Pravastatin-Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 10 oder 12, wobei das mit Wasser mischbare Lösungsmittel C_3- ₅-Ketone, Nitrile und C_1-4-Alkohole umfaßt.
Pravastatin-Zusammensetzung nach Anspruch 16, wobei das mit Wasser mischbare organische Lösungsmittel wenigstens eines von Aceton, Methanol, Ethanol, n-Propanol, Isopropanol, Acetonitril, Methyl-Ethyl-Keton oder Tetrahydrofuran ist.
Pravastatin-Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 10 oder 12, wobei das Wasser in Stufe b) in einem Verhältnis von etwa 0,17 bis etwa 0,4 des mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittels hinzugefügt wird.
Pravastatin-Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 10 oder 12, wobei Stufe a) bei einer Temperatur von etwa 30°C bis etwa der Rückflußtemperatur des mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittels durchgeführt wird.
Pravastatin-Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 10 oder 12, wobei die Menge des mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittels in Stufe a) etwa das 5-Fache der Masse von Compactin beträgt.
Pravastatin-Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 10 oder 12, wobei das Kühlen in Stufe c) bis zu einer Temperatur von etwa 0°C bis etwa 30°C stattfindet.
Pravastatin-Zusammensetzung nach Anspruch 21, wobei das Kühlen in Stufe c) bis zu einer Temperatur von etwa 15°C bis etwa 30°C stattfindet.
Pravastatin-Zusammensetzung nach Anspruch 22, wobei das Kühlen in Stufe c) bis zu einer Temperatur von etwa 20°C bis etwa 25°C stattfindet.
Pravastatin-Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 10 oder 12, wobei das Kühlen in Stufe c) mit einer Geschwindigkeit von etwa 1°C pro Stunde bis etwa 6°C pro Stunde durchgeführt wird.
Pravastatin-Zusammensetzung nach Anspruch 24, wobei das Kühlen in Stufe c) mit einer Geschwindigkeit von etwa 2°C pro Stunde bis etwa 4°C pro Stunde durchgeführt wird.
Pravastatin-Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 10 oder 12, wobei das Verfahren vor Stufe d) weiterhin das Erwärmen für 16 Stunden auf eine Temperatur von etwa 30°C, gefolgt von einem zweiten Kühlen umfaßt.
Pravastatin-Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 10 oder 12, welches weiterhin das Trocknen der in d) erhaltenen Zusammensetzung umfaßt.
Gereinigtes Pravastatin, hergestellt nach einem Verfahren, welches folgendes umfaßt: a) Lösen von Pravastatin oder Pravastatin-Natrium in Wasser unter Herstellung einer wäßrigen Lösung, b) Einstellen des pH Wertes der wäßrigen Lösung auf etwa 6,7 bis etwa 10, c) Hinzufügen der wäßrigen Lösung zu einem Adsorptionssäulenbett, d) Eluieren des Pravastatins mit einer Elutionslösung und e) Sammeln von Fraktionen mit reinem Pravastatin.
Gereinigtes Pravastatin nach Anspruch 28, wobei das gereinigte Pravastatin weniger als etwa 0,1% Pravastatin C enthält.
Gereinigtes Pravastatin nach Anspruch 28, wobei die Menge an Wasser, die verwendet wird, um das Pravastatin-Natrium zu lösen, zwischen etwa 6 ml Wasser pro Gramm Salz und 8 ml Wasser pro Gramm Salz beträgt.
Gereinigtes Pravastatin nach Anspruch 30, wobei die Menge an Wasser, die verwendet wird, um das Pravastatin-Natrium zu lösen, etwa 6 ml Wasser pro Gramm Salz beträgt.
Gereinigtes Pravastatin nach Anspruch 28, wobei der pH-Wert der wäßrigen Lösung unter Verwendung einer basischen Lösung in einer Menge, die ausreicht, um einen pH-Wert von etwa 6,7 bis etwa 10 zu erhalten, eingestellt werden kann.
Gereinigtes Pravastatin nach Anspruch 28, wobei die basische Lösung, die für die Einstellung des pH-Wertes verwendet wird, NaOH ist.
Gereinigtes Pravastatin nach Anspruch 28, wobei das Adsorptionssäulenbett Harze oder ein Umkehrphasen-Silicagel umfaßt.
Gereinigtes Pravastatin nach Anspruch 28, wobei die Elutionslösung Wasser und wenigstens eines von Aceton, Acetonitril, Methanol, Ethanol oder Isopropanol enthält.
Gereinigtes Pravastatin nach Anspruch 35, wobei das Volumenverhältnis von Wasser zu Aceton, Acetonitril, Methanol, Ethanol oder Isopropanol etwa 7:3 bis etwa 9:1 beträgt.
Gereinigtes Pravastatin nach Anspruch 36, wobei das Volumenverhältnis von Wasser zu Aceton, Acetonitril, Methanol, Ethanol oder Isopropanol etwa 82 beträgt.
Pravastatin-Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 7, 9, 12 oder 29, wobei die Pravastatin-Zusammensetzung weniger als etwa 0,04 Gew.-% Pravastatin C enthält.
Pravastatin-Zusammensetzung nach Anspruch 38, wobei die Pravastatin-Zusammensetzung weniger als etwa 0,03 Gew.-% Pravastatin C enthält.
Pravastatin-Zusammensetzung nach Anspruch 38, wobei die Pravastatin-Zusammensetzung weniger als etwa 0,02 Gew.-% Pravastatin C enthält.
Pravastatin-Zusammensetzung, hergestellt nach den Verfahren gemäß einem der Ansprüche 7, 9, 12 oder 28.
Compactin-Zusammensetzung, hergestellt nach dem Verfahren gemäß Anspruch 10.
Pharmazeutische Zusammensetzung, die die Pravastatin-Zusammensetzung gemäß einem der Ansprüche 1, 2, 3, 4 oder 41 und einen pharmazeutisch verträglichen Träger enthält.
Pharmazeutische Zusammensetzung, die die Compactin-Zusammensetzung gemäß einem der Ansprüche 5, 6 oder 42 und einen pharmazeutisch verträglichen Träger enthält.
Pravastatin-Zusammensetzung, die weniger als etwa 0,1% Pravastatin C enthält., hergestellt unter Verwendung der Compactin-Zusammensetzungen, die weniger als etwa 0,16% Compactin C enthalten.
Pravastatin-Zusammensetzung nach Anspruch 45, wobei die hergestellte Pravastatin-Zusammensetzung weniger als etwa 0,04% Pravastatin C enthält.
Pravastatin-Zusammensetzung nach Anspruch 46, wobei die hergestellte Pravastatin-Zusammensetzung weniger als etwa 0,03% Pravastatin C enthält.
Pravastatin-Zusammensetzung nach Anspruch 47, wobei die hergestellte Pravastatin-Zusammensetzung weniger als etwa 0,02% Pravastatin C enthält.