DE191752C

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Publication number: DE191752C
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KAISERLICHES

<\ PATENTAMT.

PATENTSCHRIFT

191752 KLASSE 30 Ä. GRUPPE

Verfahren zur Herstellung eines Antistreptokokkenserums.

Patentiert im Deutschen Reiche vom 11. Juli 1906 ab.

Es ist eine bekannte Tatsache, daß Streptokokkenkulturen, mögen sie auch von noch so schweren Infektionen des Menschen herstammen, beim Züchten auf den gebräuchlichen Nährböden ihre Virulenz für kleinere und größere Versuchstiere in kürzester Zeit einbüßen. Diese Tatsache hat zu der Annahme geführt, daß die vom Menschen stammenden Streptokokken überhaupt keine Tierpathogenität besitzen und

ίο daß es nicht gelingt, menschliche Streptokokkenerkrankungen auf Tiere zu übertragen. Spätere Versuche haben dann gelehrt, daß man eine Methode besitzt, einer a priori avirulenten Kultur eine hohe Pathogenität für Versuchstiere zu verleihen. Diese Methode besteht darin, daß man die avirulenten Kulturen dem Tierkörper allmählich anpaßt, indem man die Tiere anfänglich mit sehr großen Kulturmengen infiziert, die Tiere nach einiger Zeit

a.o tötet und aus ihrem Blute oder aus Peritönealexsudaten die Streptokokken wiederum auszüchtet und diese neuen Kulturen zur Infektion neuer Versuchstiere verwendet. Durch häufige Wiederholung dieses Versuchsgangs gelangt man bald zu Kulturen, denen eine hohe Tierpathogenität eigen ist, d. h. Kulturen, von denen ganz erstaunlich kleine Mengen genügen, um Versuchstiere, wie Mäuse, Meerschweinchen, oder Kaninchen, zu töten. Man nannte die auf diesem Wege erhaltenen Kulturen »Passagekulturen«, mußte aber sehr bald erfahren, daß die Kulturen, deren Pathogenität für kleine Versuchstiere auf diesem künstlichen Wege gesteigert waren, mit den ursprünglichen menschliehen Kulturen, den Originalkulturen, über-40

haupt nur noch äußerliche morphologische Eigenschaften gemein hatten.

Durch die Tierpassage werden die Originalkulturen in ihren biologischen Eigenschaften modifiziert.

Der strikte Beweis für diese Tatsache wurde auf serumtherapeutischem Wege erbracht: A ro. η s-o η stellte mit Hilfe von hochvirulenten Passagekulturen ein Streptokokkenimmunserum her, das bei septischen Erkrankungen des Menschen vielfach Verwendung fand, sich aber in allem als unwirksam erwies, wiewohl es im Tierexperiment gegenüber den zu seiner Herstellung benutzten Passagekulturen einen hohen Schutz und Heilwert besaß.

Anderseits immunisierten Moser.Tavel, D e η y s u. A. Pferde mit avirulenten Originalstämmen, die wiederum gegen die virulenten Passagestämme bei der Prüfung im Tierexperiment im Stiche ließen.

Der Hauptmangel der letzten Kategorie der Streptpkokkenimmunsera war der, daß es keine Möglichkeit gab, sie durch das Tierexperiment bewerten zu können, daß man wirksame von unwirksamen Seris nicht zu unterscheiden vermochte.

Das Bestreben der Bakteriologen war infolgedessen immer wieder darauf gerichtet, Methoden ausfindig zu machen, den von menschlichen Erkrankungen stammenden Streptokokken ihre Pathogenität zu erhalten, ohne ihre biologischen Eigenschaften zu modifizieren.

Die meisten Methoden, die zu diesem Zwecke vorgeschlagen wurden, erwiesen sich bei der kritischen Nachprüfung als erfolglos. So führt

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weder das Züchten auf reinem Blutserum noch auf Serumbouillon zu dem gewünschten Erfolge, indem auch hierbei die Virulenz der Kulturen vollkommen verloren geht.

Der einzige Weg, zu nicht modifizierten virulenten Streptokokkenkulturen, also zu virulenten Originalstämmen zu gelangen, ist die Züchtung der Kokken auf defibriniertem Menschenblut. Die Züchtung von Kulturen auf

ίο defibriniertem Blute wurde schon von Gilbert und Fournier (Compt. rend, de la soc. de biol. 1896, Serie X, Bd. 3, S. 2 ff.) empfohlen, und schon diese Autoren wiesen darauf hin, daß die Züchtung auf Blut für verschiedene Mikroorganismen eine. Methode sei, um a priori tierpathogenen Kulturen ihre Virulenz konstant zu erhalten.

Bei der Züchtung von Streptokokken, die von schweren septischen Erkrankungen des Menschen herrühren, auf defibriniertem Menschenblute erhält man ohne jede Tierpassage virulente Originalstämme.

Mit der. Auffindung dieser virulenten Originalstämme war für die Herstellung wirksamer Streptokokkenimmunsera bereits viel gewonnen. Zunächst war man imstande, die vorhandenen Streptokokkensera auf ihre Wirksamkeit gegenüber den neuen Kulturen zu prüfen.
.Sowohl das Serum Aronsons wie auch die von Moser, Tavel, Denys und anderen erwiesen sich aber im Tierexperimente den virulenten Blutkulturen gegenüber als vollkommen unwirksam.
Es war hiermit eine Erklärung dafür gefunden, warum bei Anwendung der betreffenden Sera zur Therapie von Streptokokkenerkrankungen des Menschen so ungünstige Erfolge erzielt worden waren.

Man konnte natürlich nicht daran denken, die auf Menschenblut gezüchteten Streptokokken zur Immunisierung von Pferden oder anderen Tieren zu verwenden; denn einmal wäre es unmöglich, die für diesen Zweck erforderlichen Kultürmengen auf Menschenblut zu beschaffen, dann aber würden durch die Behandlung mit Menschenblut im Blute der immunisierten Tiere Toxine (Hämolysine) erzeugt werden, welche die Anwendung eines so gewonnenen Serums beim erkrankten Menschen illusorisch machen würden.

Man konnte nun zunächst daran denken, die auf Menschenblut gezüchteten Streptokokken auf Tierblut zu übertragen. Es gelingt tatsächlich leicht, auf tierischem Blute, z. B. auf Pferdeblut, Massenkulturen solcher Streptokokkenoriginalstämme anzulegen. Diesen Blutkulturen haften ebenfalls die Eigenschaften der Originalstämme, nämlich eine hohe Tierpathogenität, an. Bei der Behandlung von Pferden aber zeigte es sich, daß diese Blutkulturen die Tiere nicht zu immunisieren vermochten. Es wurde bei den Versuchstieren keine Immunität, sondern im Gegenteile eine hohe Uberempfindlichkeit erzeugt, so daß die Pferde schon nach wenigen Einspritzungen der virulenten Pferdeblutkulturen an bösartigen septischen Prozessen zugrunde gingen. <

Aus diesen Fehlresultaten mußte der -Schluß gezogen werden, daß es notwendig ist, die Originalkulturen erst dem Tierkörper anzupassen, bevor sie zur Immunisierung von Tieren brauchbar sind.

Die Anpassung der Kulturen geschieht durch eine kurze Tierpassage. Durch eine solche werden die virulenten Originalkulturen nur insofern modifiziert, als sie nunmehr ihre Virulenz auch beim Weiterzüchten auf den gewöhnlichen Nährböden, wie Bouillon oder besser Serumbouillon, konstant beibehalten, dagegen büßen sie durch die kürzeren Passagen an ihren sonstigen biologischen und namentlich immunisatorischen Eigenschaften nicht das Mindeste ein.

Pferde, die mit diesen neuen Passagekulturen behandelt wurden, lieferten schon nach einigen Einspritzungen ein' Immunserum, .das nicht allein gegenüber den zur Behandlung benutzten Passagekulturen, sondern auch gegenüber den virulenten Blutkulturen einen hervorragenden Schutz- und Heilwert besaß.

In der Herstellung eines Streptokokkenserums, das gegenüber virulenten Originalstämmen wirksam ist, von dessen Wirksamkeit man sich überdies jederzeit durch das Tierexperiment überzeugen kann, liegt ein neuer und überraschender Effekt, der bisher auf keinem anderen Wege erreicht ist.

Das nachstehende Beispiel soll zur Erläuterung des Verfahrens dienen:

Beispiel : Bei einer schweren septischen Peritonitis fanden sich im Blute eines Patienten Streptokokken. Diese wurden zunächst auf normales defibriniertes. Menschenblut übertragen und auf diesem Medium längere Zeit weiter gezüchtet. Die Virulenz der auf diesem Wege erhaltenen Kultur war so groß, daß ¹AoOOo ^ccm davon genügte, um eine weiße Maus, ¹Z₁₀OO ecm, um ein schweres Kaninchen innerhalb 24 Stunden zu töten. In dem Herzblute der getöteten Tiere fanden sich reichlich Streptokokken, die wiederum auf defibriniertes Blut übertragen wurden. Es wurden nun von neuem Tiere infiziert, aus deren Herzblut wiederum Streptokokken erhalten wurden. Nach vier bis fünf derartigen Passagen wurde die zuletzt erhaltene Blutkultur auf Bouillon übertragen. Auch von der auf diesem Nährsubstrat erhaltenen Kultur genügte V₁₀ooo ecm, um eine Maus und ¹Z₁₀₀₀ ecm, um ein schweres Kaninchen in 24 Stunden zu töten.

Mit der zuletzt erhaltenen Bouillonkultur wurde ein Pferd immunisiert. Nach einiger

Zeit wurde Blut entnommen und auf die übliche Weise zur Gewinnung von Serum verarbeitet. ¹ZiOO ^ccm des auf diesem Wege erhaltenen Serums genügte, um eine Maus gegen die Infektion mit ¹Z₁₀₀ ecm der Originalblutkultur zu schützen, also gegen das Hundertfache der tötlichen Minimaldosis. Um den gleichen Zweck bei einem Kaninchen zu erreichen, mußte man ¹Z₅ ecm verwenden.

Um ein Kaninchen, das mit der hundertfachen tötlichen Dosis der virulenten Blutkultur infiziert war, vor dem sicheren Tode zu retten, genügte es, dem Tiere 12 Stunden nach erfolgter Infektion 2 ecm Serum subkutan einzuspritzen. iS

Claims

Patent-Anspruch:

Verfahren zur Herstellung eines Antistreptokokkenserums, dadurch gekennzeichnet, daß man auf defibriniertem Menschenblut gezüchtete Kulturen virulenter Streptokokken mehreremale durch Tiere sendet, auf Nährbouillon weiterzüchtet und dann mit diesen virulenten Kulturen größere Tiere zwecks Serumgewinnung behandelt.