DE1792356A1

DE1792356A1 - Staupe-Kombinationsvaccinen und Verfahren zu ihrer Herstellung

Info

Publication number: DE1792356A1
Application number: DE19681792356
Authority: DE
Inventors: Othmar Dr Ackermann
Original assignee: Behringwerke AG
Current assignee: Siemens Healthcare Diagnostics GmbH Germany
Priority date: 1968-08-23
Filing date: 1968-08-23
Publication date: 1971-11-18
Also published as: DE1792356C2; AT297219B; NL6912389A; BE737945A; FR2016289A1

Description

Staupe-Kombinationsvaccinen und Verfahren zu ihrer Herstellung

Gegenstand der Erfindung sind Impfstoffe zur Frühprophylaxe sejen Staupe und t^e^sn Hepatitis.contajiosa canls sowie gegebenenfalls gejeη Leptospirose und Verfahren zur Herstellung solcher Impfstoffe,

Es sind bereits Impfstoffe gegen Staupe bekannt, die teils inaktivierte, (| teils modifizierte Staupeviren enthalten. Diese Staupe-Impfstoffe sind aber unwirksam·,, wenn die -Inipflinse noch maternale Antikörper gegen Staupe besitzen, da diese die Staupeviren des Impfstoffes neutralisieren und die aktive Ausbildung von Staupeantikörpern verhindern. Es ist zwar nö?lich, den voraussichtlichen Zeitpunkt zu bestiinnen, an den die Welpen die naternalen Antikörper ausgeschieden haben und sor.it für die aktive In^unisieruivj qe-ei^net sind. Diese Te.jie waren je Joch sehr rutfwvndi;:, vl: .^i.; iiv.r in Spo^ialur.tersuc'.var.jöl"'.·'" r·:

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1132356

außerdem wird es den Tierarzt nicht inner möglich sein., von Müttertier oder von wenige Wochen alten '.Velpen Blut zu entnehmen.

LH diesen Mangel abzuhelfen, hat nan versucht,, die Tiere mit Masernviren zu inpfen (vgl, österr. Patent 248 791), da Masernviren mit Staupeviren antigenverwandt sind und den Tieren auch in Gegenwart mütterlicher Staupeantikörper einen gewissen Schutz gegen Staupe verleihen. Der hierdurch erreichbare Schutz ist jedoch nicht verläßlich. Bei starker Belastung mit infektiösen Staupevirus können die Tiere dennoch erkranken, Wegen des Fehlens eines zur Frühprophylaxe gegen Staupe geeigneten Impfstoffs war es bisher außerdem nicht möglich, Konbinationsinpfstoffe zur Frühprophylaxe von jungen Hundewelpen gegen Staupe, Hepatitis contagiosa canis (H₁C₁C.) und Leptospirose herzustellen,, wie sie für ältere Tiere bereits seit längeren im Handel sind..

Es wurde nun gefunden, daß man einen Staupe-Inpfstoff, der die ©feigen Nachtelle nicht besitzt, unter Verwendung v&vi äwrch Passierung in .Prinatengewebekulturen attesraierten 13as©rnvi3:en gewinnen kann, wenn man diese Masernviren a^sdiließeiaül an die

Attenuierung in wenigstens Io Kulturpassagieisi iu Or

-u-nd 'w-eiterz'ieivtiet.» von Caniden bzw, Mtisteliden adaptiert ©er Stawe-l^fstoff ist

weiterhin dadurch gekennzeichnet, daß er zus-liLzlich §n©cii iefe attenuierte Staupe viren und/ oder inaktiviertae a=,c„-c*-Virein inaktivierte LeütosD-iren enthalten kann..

Ü 9 S ^ 7 / 1 7 6 5

BAD ORIGINAL

Die Masernviren bewirken keine aktive Immunisierung-gegen Staupe, ihre Wirkung beruht vielmehr wahrscheinlich auf einer konpetitiven Zellblockade, durch die die Zellen vor den Angriff der infektiösen Staupeviren geschützt werden. Die Schutzwirkung der Masernviren ninnt daher nach einigen Monaten" wieder ab. Zu diesen Zeitpunkt ist jedoch der Gehalt des Blutes an naternalen Antikörpern so gering geworden, daß eine aktive Immunisierung der Vfdpen mit einer, Staupevaccine vorgenonnen werden kann.

In vielen Fällen ist es vorteilhaft, eine Kombination von er- . ™ findungsgenäß erhaltenen Masernviren mit einer in üblicher Weise erhaltenen lebenden, attenuierten Staupeviruskonponente zu verwenden. Auf diese V.'eise kann man Tiere, die keine oder keine ausreichenden naternalen Antikörper besitzen, bereits zu einen sehr frühen Zeitpunkt aktiv und dauerhaft gegen Staupe innunisieren.

Eine weitere bevorzugte Ausführungshorn besteht in der Kombination der erfindungssenäß hergestellten Masernvaccine, gegebenenfalls zusannen nit einer Staupevaccine nit inaktivierten Hepatitis contagiosa can is. (--Uc.C.) - Viren. Daneben kann die Masernvaccine auch nit inaktivierten Leptospiren, z.B. Leptospira canicola und Leptospira icterchaer.orrhagiae, kombiniert werden. Die letztgenannten Erreger rufen die sogenannte Stuttgarter Hundeseuche und die '.»'eil'sche Krankheit hervor. Solche . Vaccinen wurden bisher noch nicht für eine Frühprophylaxe angewandt.

/4

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Es ergeben sich sorait die folgenden Kombinationsnöglichkeiten:'

Masern-Vaccine: Masernvirus lebend, attenuiert

Masern/Staupe-Vaccine: Masernvirus lebend, attenuiert

Staupevirus lebend, attenuiert

•Masern/Staupe/H,c,c.-Vaccine: Masernvirus lebend, attenuiert

Staupevirus lebend, attenuiert H,c.c,-Virus, inaktiviert

Masern/H,c.c.-Vaccine: Masernvirus lebend, attenuiert

H.cc,-Virus inaktiviert

Masern/Staupe/ü.c.c./Leptospirose-Vaccine:

Masernvirus lebend, attenuiert Staupevirus lebend, attenuiert H,c,c.-Virus inaktiviert Leptospira canicola inaktiviert Leptospira icterohaeriorrhagiae inaktiviert

Masern/H.cc./Leptospirose-Vaccine:

Masernvirus lebend, attenuiert

H,c,c-Vltus inaktiviert

Leptospira canicola inaktiviert

Leptospira icterohaer.orrhagiae inaktiviert ■

Für die erfindungsjemäß erhaltenen, gegen Staupe wirksamen Masern-Vaccinen und ihre Kombinationen, kor.;?.en insbesondere folgende Titer und Menjenbereiche in Betracht:

Masern-Konponente: 10"⁵'⁰ - 10^6l°, vorzugsweise 1O^4)D-1O⁵'⁰TCIJ-_?/r.l

.--.,.. 109847/1765 _/5

BAD ORIGINAL

"■-■■■■■■ ■' .-Λ - 5 -

Staupe-Konponente: 10"⁵' -10 ' ,vorzugsweise 10 ' -10 »^DTCID-₀/nl

H.c.c-Komponente: K3R-Titer 1:40 +bis 1:160 +,vorzugsweise

1:80 + (K3R = Konplement-Sindungs-Reaktion)

Leptospiren-Konponente (sowohl Leptospira icterohaenorrhagiae als

Leptospira canicola): Zählung in Dunkelfeld 10 - 10 /nl

ζ 9

vorzugsweise 10 - 10 /nl

Die erfindungsgemäßen Masernvaccinen sowie ihre Kombinationen nit H.cc.-Viren bzw. Leptospiren sind vorzugsweise für die Frühprophylaxe geeignet, jedoch können auch ältere Hunde vorübergehend mit den Masern-Viren enthaltenden Vaccinen geschützt werden. Die Kombinationsvaccinen haben den Vorteil, daß die Tiere schon in sehr frühem Lebensalter einen gleichzeitigen Schutz gegen Staupe, H.c.c, und Leptospirose erhalten.

Für die Herstellung der Masern-Vaccine wird zweckmäßigerweise ein Masern-Virus verwendet, das attenuiert und damit für den Menschen ungefährlich ist, Diese Eigenschaften besitzt z.B. insbesondere der Ednonston-Stann (vgl. DBP 1 130 558 und Haagen, Viruskrankheiten des Menschen 2, 12.(1965) Seiten 1126 - 1128), der durch Passierung über Prinatengewebekultüren erhalten wurde,

Für die Adaptation der Masern-Viren können Gewebekulturen von Caniden und Musteliden, z.3. Nieren, Testikel, Uterus von Hunden, Füchsen, Frettchen, Merzen, Hermelin, Wiesel, Skunk, vorzugsweise Nieren von ,Hunden, in 3etracht. Attenuierte Staupeviren werden

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zweckuäßigerweise durch mehrfache Passagierung in Hundenierengewebekulturen nach dem in D3P 1 158 883 bescforiebemeTa Verfahren • gewonnen. Außer den solcherart erhaltenen Staupeviren können beispielsweise noch in Betracht der Cabasso-Stanra und der Onderstepoort-Stann von Uaig. Zu ihrer Gewinnung wurden Staupeviren in bekannter '.»'eise von infizierten Frettchen isoliert, auf embryoniertes Hühnerei übertragen und bis zur Adaptierung an das Ei Wechselpassagen zwisehen Frettchen und Hühnerei aus ge- tk führt,. Für die Züchtung der H,cc, -Vifen kommen Organgewebe oder Kulturgewebe von Hunden, Füchsen oder Schweinen in Betracht, vorzugsweise Leber und Milz von Hunden als Organgewebe und N'ieren von Hunden als Kulturgewebe (vgl, D3P 1 076 892 und 1 149 495) . Die Leptospirenantigene werden vorteilhaft durch Tieffrieren einer Suspension von Leptospira canicola und Leptospira ieterohaenorrhagiae gemäß belgischer Patentschrift 634 903 hergestellt, Die Inaktivierung kann in bekannter '.'eise mit Foraaldehyd vorgenommen werden; H,c,c,-Viren können außerden auch mit UV-Strahlen, iärce

oder ß-Propiolactcn inaktiviert werden,

Die Herstellung der Gewebekulturen erfolgt im bekannter Vieise, Als Kulturflüssigkeiten kommen handelsüblichie Gewebekulturlösungen wie beispielsweise Earle'sche Lösung oder Hanks* Lösung mit Lactalbuminhydrolysat-Lösung, Eagle's Lösmag oder TCM 199 (Tissue Culture Medium 199) mit oder ohne Seimiaztisatz in Frage.

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BAD ORlGiNAi.

Zur Herstellung der erfindungsgenäßeii attenuierten .Masernviren werden die Gewebekulturen in an sich bekannter weise "riit bekannten attenuierten Masern-Viren, beispielsweise nit Masern-Viren des Ednonston-3tanp.es, infiziert. Für die Züchtung gelten die aus der Literatur allgemein bekannten Vorschriften für die Vermehrung von Viren auf Gewebekulturen (beispielsweise Üulbecco und Vogt, J. Exp. Med, 95, 167-182 (1954) sowie Youngner, Proc. Soc. Exp. 3iol, Med. JJS₁., 202-205 (1954). Die Masern-Viren werden in mindestens 10 aufeinanderfolgenden Passagen auf Organgeweben von Λ

Musteliden oder Caniden weiter vermehrt. Es kann beispielsweise eine Passage so durchgeführt werden, daß nan Gewebekulturen, beispielsweise Hundenierenepithelkultüren, die als Nährnedium Earle'sche Lösung mit 0,5 % Lactalbuminhrdrolysat enthalten, nit einer Masern-Virus-Suspension, die den attenuierten Ednonston-Stair.n enthält, im Volunenverhältnis 1:50 beimpft, 4 Tage später werden die Kulturen durch Erneuerung des Nährmediums gefüttert. Nach Auftreten der ersten zytopathogenen Veränderungen wird das in den Kultur2ellen produzierte Masern-Virus durch Abziehen der virushaltigen Kulturflüssigkeit geerntet. Durch Einbringen frischer Kulturflüssigkeit kann die Aberntung in 24-stündiger Folge bis zur Erschöpfung der virusproduÄierenden Zellen wiederholt werden (etwa 5 τ 8 mal>· Die Virusernten werden bei 30 - 80⁰C tiefgefroren, nachdem ihnen Proben zur Durchführung von Sterilitätsprüfungen und zur Bestimmung des Virustiters entnoKinen wurden. Nach einer Passagenzahl von mindestens 10 wird aus der Aberntung die Vaccine herge-' stellt, " ·

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-S-

j Durch die Gewebekalturpassagen wird die Antigenität de-s ! attenuierten Masernvirus für Hunde erheblich verbessert, Die Gewebekulturvirussuspension kann anschließend beispielsweise durch Filtration oder Zentrifugation geklärt und in an sich bekannter Weise zu einer Masern-Vaccine verarbeitet werden, beispielsweise durch Zugabe einer Stabilisatorlösung, z,3.

Gelatinelösung (2 %ig) und Glukoselösung ( 50 %ig) im Verhältnis

(R) CR)

4:1, Saccharose-Glutamatlösung, Molico oder Haemaccel , und gegebenenfalls eines Adjuvans, wie Aluminiumhydroxid, Aluminiunphosphat oder einer öl-5mulsion, Es ist zweckmäßig, die Masernkor.binationsvaccinen auch lyophil zu trocknen, un sie lagerfähig zu machen,

Durch die erfindungsgenäß durchgeführte Züchtung in Gev.'ebekulturen von Caniden oder Musteliden wird die Schutzwirkung des Masernvirus gegen Staupe erheblich erhöht. Aus der erhaltenen Masernvirussuspension können ohne weitere Maßnahmen eine Vaccine zur Immunisierung junger Hunde gegen Staupe bzw, Kombinationsvaccinen "'- zur gleichzeitigen Frühprophylaxe gegen Staupe, H,cc. und LeotosDirose hergestellt werden.

109847/1765 _ßAD ORIGINAL

Bei-spiel Ϊ (Herstellung und Prüfung der Masernkomponente)

Eine nach Dulbecco und Vogt in einen Vierkantfläschchennit 2o ntl. Inhalt angelegte Hundenierengewebekultur wurde nit 2 ml des·Edtionston-Stannes von Titer 1o * TCID- /ml beinpft und 12 Tage bei 37⁰C bebrütet, Are 4. *nd an 3» Tag wurde die Xährlösung' durch frische Nährlösung ersetzt. Am 12. Tag wurde die Masern-Virus enthaltende Nährlösung auf die nächste Hundenierensewebekultur überinpft. Nach 3 Passagen wurden in der Kultur etwa vom 1o. Tage nach der Infektion ab cvtopathische Effekte in Forn einer Zellzerstörurig und Ausbildung von Riesenzellen beobachtet. Das Auftreten cytppathischer Effekte verkürzte sich durch weitere Passagen, so daß sich bereits eine "oche nach der Infektion cytopathische Effekte zeigten^

Nach Io Passagen dieser Art.wurden je 2 ml Aberntung an 3 Hunde subcutan vcrimpft. 3 'vochen später wurden die Hunds nit je 1 nl des Snyder-nill-Stanraes (Io ooo dln/nl) infiziert. Alle behandelten Hunde widerstanden der Belastungsinfektion, zwei unbehandelte Kontrollhunde starben»

Außer i-ΐπ Test nit Hunden wurde die Aberntung in Kultur-Röhrchen, die Hundenierenzellkulturen enthalten, auf ihren Virus gehalt titriert. Der Virustiter wurde dabei unter Anwendung des Haenadsorptionstestes bestimnt. Er betrug To ¹^ TCID- /ml.

Seispiel 2 (Masernversuchsvaccine)

Sechs 3■■ Wochen alte V.'elpen, die frei von naternalen Antikörpern waren, wurden in drei Gruppen zu je zwei Welpen unterteilt.

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Zwei 'ielpen wurden mit der erfindungsgemäS hergestelltem.. Masernvaccine und zwei i/elpen mit einer für Hitrade aas gebotenen Masern-Vaceine des Handels geimpft» Zwei Welpen ve rt>;i leben als unbehandelte Kerntrollen;.. Drei lochen nach der V&cciftatiaii wurden dia 6 !ielpen nit dent pathogenen Staupevirus Stamm Snyder-BiII infiziert., Die Kontrol!tiere erkrankten an Staupe und verendeten (siehe Tabelle t)» Die tfelpen, die mit der Masern-Vaccine des iiandels geirapft v^orden waren, erkrankten mit typischen Symptomen an Staupe und zeigten einen erheblichen Gewichtsverlust. Die mit der Verfahrensvaccine geimpften lie lpe η blieben gesund und entwickelten sich normal.

Sei spiel. 3 ('■iasernverstichsvaccine)

In diesen Seispiel 'wird die '.virksamkeit der erf in dungs gemäß hergestellten Masern-Vaccine vergleichend bei '.'.'elpen mit „und ohne materna-Ie Antikörper geprüft.,

5 Welpen- im Alter von 8 lochen, die keine maternalen Staupeantikörper besaßen, wurden für den Versuch verwendet* 4 Welpen wurden mit der Masern-Vaccine geimpft, zwei davon erhielten 24 Stunden vor der Impfung je T ml Staupeserum/kg Körperge?v;icht, das danach serologisch bei den Vielpen nachweisbar war» Das S. Tier blieb als Kantrolltier unbehandelt.

»iach 2 Wochen war der passiv erworbene Staupeantikörper ausgeschieden. Nach 4 Kochen wurden alle Tiere mit pathogen&Ei Staupevirus (T ml - Too dim subcutan) infiziert. Alle imaunisierten Tiere blieben gesund,, das Kontrolltier erkrankte- an Sltaäipe»

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Vergleichende Immunisierung mit Hundestaupe-Masern-Vaccine des Handels und Mäsernversuchsvaccine gemäß

.'.■■; der Erfindung (lo* Huridenlerenzellpassage)

Welpen 6 Wo.alt Nr.,!;	vacciniert mit	Klinischer Böfund bis 3 VJo. p.v.	Serolog.Unters.auf Staupe-VNA vor u. nach der Impfung	TestInfektion mit je 1 ml (loo d.l.m.) Snyder-Hill- Stamm 3 Wo. p.v. subcutan	Gewicht 17 d.p.l.	an Staupe erkrankt, Fieber, Katarrh, Inappe tenz, am 12.d-.p.i. verendet an Staupe erkrankt, Fieber, Katarrh, Inappetenz, am 15. d.p.i. verendet
4953 4954	1 Dos. β 2 ml Macern-Vaccine des Handels	o.B. > o.B,	negativ negativ	an Staupe erkrankt, Fieber, Katarrh, Inappetenz	5,7 kg 2,9 kg
4955 4956	1 Dos. => 1 ml Masernvorsuchs·· vaccine gemäß der Erfindung	o.B. o.B.	negativ negativ	o.B. o.B.	7>o kg 6,8 kg
'4957 4958	Kontrolle Kontrolle	o.B. o.B.	negativ negativ

= ohne Besonderheit =» poet vaccinationem = virusneutralisiorende Antikörper w dosis letalls minima = subeutah

= dies post Infectlonem

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co ro Ca) cn CD

Beispiel 4 (Masern-Hepatitis-Vaccine). . - .

In einem Inminisierungsversuch an 8 l.'elpen wurde folgendermaßen verfahren: . ·

4 Welpen, von denen 2 maternäle Antikörper gegen Staupe und H,cc. besaßen und 2 frei von naternalen Antikörpern waren, erhielten -. die Masern-Hepatitis-Vaccine gemäß der Erfindung im Alter von 3' liochen s.c verabreicht, 4 Jvelpen gleichen Alters, von denen jeweils zwei naternale Antikörper besaßen, die anderen beiden dagegen nicht, verblieben als Staupe- und H.cc.-Kontrollen. 4 Wochen nach der Irapfung wurden die vaccinierten und--zwei: Staupe-Kontrollhunde einer Belastungsinfektion gegen Staupe unterworfen. '.Vie aus der Tabelle 2 ersichtlich ist, blieben die vaccinierten Hunde gesund, die beiden Kontrollhunde erkrankten und einer davon verendete an Staupe. Nach abermals 2 Wochen wurden die vaccinierten Hunde und die beiden H, cc -Kontrollen mit pathogene-i H.cc,-Virus infiziert. Die vaccinierten Hunde blieben wie vorher gesund, die beiden Kontrollen erkrankten dagegen und und verendeten an H. cc. Sei-den an Staupe bzw. an H,cc verendeten Tieren wurde das Virus durch die Komplement'—'bindungsreaktion -nachgewiesen. Die"erfindungsgemäß hergestellte Vaccine erwies sich als gut verträglich.

Beispiel 5 (Masern-Hepatitis-, Masern^Staupe- und - Masern-Staupe-Hepatitis-Vaccine)

15 Welpen, von denen 7 acht i'ochen und 8 neun V/ochen alt waren, '. wurden in drei Gruppen zu je 4 V.'elpen (Gruppe I, II und III)

■ und eine Kontrollgruppe ir.it 3 Welpen (Gruppe IV) aufgeteilt. Je 2 Welpen der Versuchsgruppen erhielten Staupe- und H.c.c-Antikörper.-enthaltendes Hunde se run, so daß Verhältnisse wie sie bei der."Übertragung durch die Kolostralmilch auftreten, vorlagen „

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,■■-:■..-;., ,: ■ BAD ORIGINAL

Tabolie 2

Immunisierung von Hunden mit Masorn-Hepatitig-Vaceine gemäß der Erfindung

Hund ο Nr. '	matοrnaIo Staupe— und 11. c. c.-Anti körper vor handen	vacciniort mit	klin.Bild bis h Wo,, p, v.	Staupe VND/ml h Wo.p.v. •	II. c, c. VND/ml '», Wo. p.v.	Testinfoktion je 1 ml = I00 d.l.m. Snyclor-Hill- S t aniin	mit Jo 1 ml pathoßonem II. c . c . -Viruf
*>oj6	nein	Masern- Ilcpatitis- Vaoeino gemäß der Ei^JTindung (3 Wp.alt)	• o.B.	O ^:	1OO.OOO	0·. B.	o.B.
5o37	.1a	Staupe- Kontrollen	o.B.	O	7¹So .ooo	o.B.	o.B.
*>oMi	nein	I!. c. C- Kontrollen	o.B.	O	loö.oöo	o.B.	o.D. W
5o'r5	.in	o.B.	O	100.000	o.B.	o;B.
5ο'ι2	no in	o.B.	.. O	O	crkrnnkt u. vorondot X
So *>a	/In ·	o.B.	O	O	krank	. <*- '
5on8	nein	o.B,	_	O		erkrankt x\. ■vorondfit χχ
5o39	.la	o.B.		O		erkrankt u. vorondot xx

VND/ml se Virusnoutralisiorondo Dosen pro ml .

o.B« s ohne Besonderheit

χ ss Staupevirus durch Komplomontbindungsroaktion (K.B.R.) nachgewiesen

xx » H,c.«.-Virus durch K,B«R. nachgewiesen ; '

CD

cn CJ)

Die Gruppe I wurde nit Masern-H.cc,-Vaccine,..die-

• ■

lebendes Masern-Virus und inaktiviertes H.cc »-Virus enthielt, (Vaccine Nr, 4),

die Gruppe II mit Masern-Staupe-Vaccine, die lebendes Masernvirus und lebendes Staupevirus enthielt (Väccine Nr, 5) und

die Gruppe III mit Masern-Staupe-H.cc.-Vaccine, die lebendes Masern-Virus, lebendes Staupevirus und inaktiviertes H,cc,-Virus enthielt (Vaccine Nr, 6), vacciniert.

Die Vaccinen wurden gut vertragen, 4 Wochen nach der Vaccinierung wurden alle Tiere mit Staupevirus Snyder-llill-Stanm (1 ml = Too dim s,c) und nach weiteren drei Wochen mit pathogenem H.cc.-Virus infiziert. Nach der Testinfektion mit Staupevirus blieben alle Versuchstiere gesund. Die beiden Tiere der Kontroll gruppe, die keine Antikörper erhalten hatten, verendeten an Staupe, Das dritte Tier, das eine Serumgabe erhalten hatte, abe„r zum Zeitpunkt der ι Belastungsinfektion keine nachweisbaren Staup§a,ntik|?rper besaß, . \ wurde krank, verendete jedoch nicht» Durch die Testinfektion mit dem pathogenen H, cc-Virus erkrankten die, Kflltrq 11 tiere und die Hunde, die mit einer Vaccine immunisiert ^o/yclen \i&T%ri_t die keine ; H,e,c.-Komponente enthielt. Zwei von 4 Tieren *Verend§ten &n ^»«-. Die mit H,cc,-Virus-haitiger Vaeeine geiiipitfn bilden
gruppen blieben demgegenüber nach der T§§|inl§kti§Tl Pil

ι H.cc-Virus gesund (siehe Tabei^ 3) ,■ 3§| #f g§?§i@

■ Untersuchung von-Serumproben entwlekelten Riif j#n§ «Iwndf Staupei-

antikörper, die mit Vaccinen geimpft wurden, die eine lebende
Staupekomponente enthielten, Ebenso entwickelten il,c,Q,-Antikörpe,r

Tabollo 3

Immunisierung von Hunden mit Masern-Vaccinen

Vaccine Nr. k = Masernvirus ,lebend + H-. cc «.—.Virus _r inaktiviert

Vaccine Nr. 5 - Masornvirus, lebend + Staupevirus, lebend

Vaccine Nr. 6 = Masernvirus, lebend +· Staupevirus, lebend + H.c«c.-Virus, inaktiviert

Hunde- Gruppe Nr.	maternale Antikörper	vaceiniort mit	Staupe- Antikörper h Wo·' p.v. VND/ml	II. cc — Antikörper h Wo. p.v. VND/ml	Testinfoktion mit jo I ml =» loo dim Snydor-Hill- Stamm se.	TestInfektion mit 11. c. c.- Virus	179235
2 Hunde X . 2 Hunde	nein	Vaccine Nr. k «se.	keine keine	550.000 425,000	o.B, *	o.B.
2 Hunde II 2 Hundο	nein	Vaccine Nr.5 SC.	318.000 3·. 787.000	keino keine	o.B,	krank,' \J\| davon 2 verendet
2 Hundo Hi 2 Hunde	ja nein ■ ■ ■(	Vaccine Nr. 6 SC.	281.000 19· "Ό**,000	412.OOO 269.000	o.B.	o.B.
1 Hund IV 2 Hundo	Ja nein	Kontrollen	keine keine	keine keine	1 Hund krank 2 Hunde ver endet

VND/jni O.B.

Virusneutralisierende Dosen pro ml

ohne Besonderheit

Masernvirus ßomüß der Erfindunfj

se. = Subcutan .. p.v.= post vaccinatioaem

nur jene Hunde, die r.it einer Vaccine, die eine inaktivierte H.e.Cg-Konponente enthielt, geimpft wurden.

3eispiel 6 (Masern-Hepatitis-Leptospirose-Yaccine)

Vier Welpen in Alter von drei Wochen wurden mit Masern-Hepatitis-Leptospirose-Vaccine und in Alter von 12 Wochen mit Staupe-Hepatitis-Leptospirose-Yaccine geimpft. Von der Mutterhündin und von den Welpen wurden Seren mit der Agglutinations-Lysis-Reaktion (Literaturstelle: GSELL, "Leptospirose" Medizinischer Verlaj Hans Huber,.Bern 1952, S, 271) untersucht und folgende Durchschnittswerte, erhalten:

Mutterhündin, ante parten 1 : 16o

Welpen, 3 '..'ochen alt -

V.'elpen, 14 Viochen alt ■ 1 : 2oo 1 : 2oo

Aus den Untersuchungen jeht hervor, daß die 'erf hergestellt· Vaccine die Tiere auch 2²3^en Leptospirose zu ii30unisieren vermochte.

Beispiel 7 (Masern-Hepatitis-Leptospirose-Vaccine)

4 »en ♦ Welpen in Alter von 6 Viochen wurden mit der erfindunjs- gefflA hergefteilten Mesern-Hepatitis-Leptospirose-Vtccine geinpf Die Zweitinpfung rur Konplettierunj des Schutzes je^en Staupe,

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BAD ORIGlNAu

Tabelle H . . .

minunisiorung von Hunden mit einer Masern-IIopatitis-Loptospirose-Vaccine gemäß dor Erfindung

\\ ?'i, ρ ο η

. ■ t
'_/ »~ '^ -T

matornalc
im Altor
II .CC₁

> Antikörper
von 6 Wochen
fen
Leptospirose

vacciniert
mit

Antikörper
von 12 ¥o<
II. c . c.
VND/ml

r im Al
:hon ge
Loptos
L. c .

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piroso
L.i,

ke ine

vacciniert
mit

Antikörper
15 Wochen f
H. cc
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L. c.

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keine

Masern-
Hopatitis-

37°.opo

1 : 1o

1 iho

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Staupe-
Hopatitis-

750.000

1 :1 60

T : 160

■

koino

keine

Leptospi-
rose-
Vaccine
gemäß der
Erfindung

750.000

0

1:2o

Loi>tospi-,
roso-
Vaccine
nach dom
Stand der
Technik

1.600.000

1 :16ö

1 : 1 60

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j

■
koino

keine

75°·000

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160,000

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1 ,000 »000

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keine

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•

keine

koine

koino

keine

koino

keine

koino

L.C e Loptospira canicola

L.i. = Loptoepira ictorohaomorrhagiao

CD

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CP

4f

Hepatitis und Leptospirose wurde nit einer Staupe-Hepatitis* Leptospirose-Vaccine, hergestellt nach den Stand der Technik, in Alter von 12 'Jochen vorgenormen. Wie aus Tabelle 4 zu ersehen ist, waren alle Tiere vor der Inpfung frei vor maternalen Antikörpern gegen H.cc« und Leptospirose, Nach der Impfung mit der erfindungsgeniäß hergestellten Vaccine entwickelte sich bereits eine belastbare Inraunität gegen H,cc. und eine Sensibilisierung der Äntikörperentwicklung gegen Leptospirose. Durch die Zweitimpfung wurde, wie aus der Tabelle 4 ersichtlich, der Antikörper^ spiegel gegen H,cc. verstärkt und gegen Leptospirose komplettiert.

10984771765 bad ORIGINAL

Claims

Patentansprüche "*

1) Verfahren zur Herstellung eines Staupe-Inpfstoffs, unter Verwendung von in Prinatengewebekulturen attenuierten Masernviren, dadurch -tekennzeichnet, daß nan die Masernviren anschließend an die Attenuierung durch wenigstens 1o Kultur-

und vreiterzüchtet passagen in Qrsangewebe von Caniden bzw, Musteliden adaptiert, das Virus erntet und in bekannter '/eise zu einer Vaccine verarbeitet.

2) Verfahren nach Anspruch !,dadurch gekennzeichnet, daß der

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Impfstoff einen Masernvirustiter von etwa 10° -10° TCID₁. /nl,

vorzu-sveise von ID^'^ - 13^D TCID_5o/nl besitzt.

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3) Verfahren nach Anspruch T und 2, dadurch gekennzeichnet, dal man den Masernviren attenuierte Staupeviren zusetzt.

4) Verfahren steh Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß der

^: — 5 I

Impfstoff einen Staupevirustiter von etwa 10° - 10 TCID. /nl, *

vorzusr.veit« 10³*³* 1O⁴·⁵ TCIU₅₀ZnI besitzt.

5) Verfahren nach Ansprüchen 1 —I. dadurch gekennzeichnet, daß nan den Inpfstoff inaktiviert· Hepatitis contajiosa canis-Viren susetst.

6) Verfahren ttftch Anspruch 5, dadurch qekennzeichjiet, daß der Impfstoff einen Kor.ple-entbincungstiter an Hepatitis contajiosa canis-Viren von 1 :_4o+.b'Is 1 : löo+,vorza_'S'..*eise 1 : So+, bfsitzt.

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7) Verfahren nach Ansprüchen 1-6, dadurch gekennzeichnet,

daß nan den Inpfstoff inaktivierte Leptospiren (Leptospira canicola und Leptospira icterohaenorrhagiae) zusetzt.

8) Verfahren nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß der Gehalt des Impfstoffs an Leptospira canicola und Leptospira icterohaenorrhagiae jeweils 10 - 10 , vorzugsweise 10⁸ - 10⁹ Organismen pro Milliliter ist.

109847/1765 ^ßAt) ORIGINAL