DE1767847A1 - Antibiotikum NK-1001 und Verfahren zu seiner Herstellung - Google Patents

Antibiotikum NK-1001 und Verfahren zu seiner Herstellung

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Description

DR. ELISABETH JUNG, DR. VOLKER VOSSIUS, DIPL.-ING. GERHARD COLDEWEY
PATENTANWÄLTE λ rj £ rj Q / ft
8M0NCHEN23 ■ S I E G E S STRASS E 26 . TELEFON 34B067 . TELEGR AM M-AD RESS E: I N VENT/MONCH EN
ttoZoS D 401 (Mü/i/c/kä) 24. Juni 1$S8
Oase 51281
MSIJI SEIKA. KAISHA, Tokyo t Japan
"Antibiotikum HK-IOOl und Verfahren zu seiner Herstellung11
Priorität: 24. Juni 1967, Japan,
Anmelde-Nr.: 40 145/67
Die Erfindung betrifft ein neuee Antibiotikum; genannt HK-IOOl, und ein Verfahren zu seiner Herstellung. Das Antibiotikum der Erfindung hemmt das Wachstum grampositiver, gramnegativer und säurefester Bakterien, sowie pathogener, ge^en die bekannten Antibiotika und synthetischen Chemotherapeutika resistenter Bakterien. Das Antibiotikum hat eine äusserst geringe Toxizität.
Es ist aus der USA-Patentschrift 2 931 798 bekannt, dass die Kanamycine A? B und C durch Züchtung eines Stammes von Streptorayces kanamyceticuB in einem geeigneten Nährmedium unter aeroben Bedingungen entstehen,, Dieee Kanamycine sind Verbindungen, die
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6-(3CTAmino«3-deso:cy-D-glu'JO3yl)- C< descxystreptamin als Bestandteil enthalten und an der C~4 Stellung des Desoxyetreptamins eine ö-Amino-ö-desoxy-D-glucose-, eine 2,6-Dideeoxy-2,6"diamino-D-glucose bzw. eine Glucosamin-Gruppe tragen.
Um strukturell veränderte Derivate von Kanamyoinen bu erhalten, wurden Kanamycin erzeugende Mikroorganismen in Gegenwart der verschiedensten Verbindungen gezüchtet-, Beim Zusatz von Streptidin aur Kultur und Reinigung der erhaltenen öärmaische nach bekannten Verfahren zur Reinigung der bekannten wasserlöslichen, basischen Antibiotika, wurde aus Fraktionen, die keine Kanamycine enthielten, eine kristalline Verbindung isoliert. Es wurde gefunden, dass diese Verbindung ein wasserlösliches, basisches Antibiotikum ist, das sich in seinen physikalischen und chemischen Eigenschaften eindeutig von den bekannten Kanamycinen unterscheidet, wie im folgenden erläutert wird. Diese Verbindung wird als Antibiotikum NK-IOOl bezeiohnet.
Die Untersuchung der biologischen Eigenschaften dieses Antibiotikums hat ergebenj, dass es eine hohe antibakterielle Aktivität, z.B. gegen Bacillus subtilis, lactobacillus ferment! und Shigella dysenteriae, aber nur geringe Toxizltät aufweist.
Nach weiterer Untersuchung wurde festgestellt, dass dieses Antibiotikum in Nährmedien auch angereichert wird, wenn bestimmte künstliche Varianten oder Mutanten oder natürliche Varianten oder Mutanten von Streptomyoes kanamyceticus ohne Zugabe von Streptidin gezüchtet werden.
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8AO ORIGINAL
Gegenstand der Erfindung ist aomit das Antibiotikum NK-IOOl, das das Wachstum granipoaitiver und graianegativer Bakterien hemmt, basisch ist, farblose, nadelähnliche Kristalle bildet, sich bei 238 « 2426G Beräetat, löslich in Wasser, wässrigem Methanol und wässrigem Äthanol, aber unlöslich in wasserfreiem Methanol, wasserfreiem Äthanol Äthylacetat, Butylacetat und Benzol ist. positiv auf Ninhydrin-, El son---Morgan" und Moliech-Reagens, aber negativ auf Sskaguchi = , Tollens , Pohling-, Millon- und Benedict-Reagens reagiert, die Elemente Kohlenstoff, Wasserstoff, Sauerstoff und Stickstoff, aber nicht Schwefel, Halogen und Asche enthält, die empirieche Porno 1 G18H55N5C12 .H2O hatf in Ijiiger wässriger Lösung eine 0peζi^iβehe Drehung faJ-Q " + 132 aufweist, im Ultraviolett zwischen 220 mu und 340 ΐομ keine Absorption aufweist (vgl. Abb, l)f und im Infrarot-Nu$olepektrum (vgl. Abb. 2} bei folgenden Wellenlängen charakteristische Absorptionebaruten aufweist: 3450, 1630. 1585, 1145 und 1040 cm"*1.
Wird das Antibiotikum NK-IOOl 40 Minuten lang bei 1000C mit 6 N Salzsäure behandelt, so geht seine antibakterielle Aktivität verloren. Lie cntntehende lösung wird als Fleck auf ein Blatt Tcyo~Pilter-Papier Nr. 50 (40 cm χ 2 cm) aufgstragen und mit Butanol-Pyridin -Essigsäure-Wasser (6:4:1:3) abwärts entwickelt. Das so erhaltene Papierchromatogramm zeigt die Bildung von drei Flecken, nirnlich einen Fleck mit positiver Reaktion auf Ninhydrin und amraoniakalische Silbernitratlösung, einen zweiten, der nur mit Hinhydrin und einen letzten, der mit ammoniakalischer SiIber.nitratlösung reagiert» Durch Vergleich mit bekannten Proben ergab sich, da^s die drei ]'lecken Deaoxystreptamin, 6"Amino-6-
'jzw. D-Glucose entsprechen.
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BAD ORIGINAL
Aufgrund dieser fataache und des für das Antibiotikum KK-1001 bestimmten Molekulargewichts v/ird angenomtaenf dass das Antibiotikum IiK 1001 eine neue Verbindung ist, die ein Molekül Desoxyetreptamin, ein Molekül 6"Amino-6-desocy-D-glucoae und ein Molekül D-Glucose enthält»
Das Antibiotikum KK-1001 hat eine DIc0 für Mäuse bei intravenöser Injektion von 3050 mg/kg*
In den beigefügten Zeichnungen bedeuten:
Abb« 1 das UV Absorptionsspektrum des Antibiotikums HK-IOOl 5jn wässriger Lösung bei einer Konzentration von 1 mg/ml;
Abbe 2 das IR-Absorptionsspektrum des Antibiotikums NK-IOOl in KujoXc
Die Erfindung betrifft ferner ein Verfahren zur Herstellung des Antibiotikums NK-IOOl auf mikrobiologischem Wege, das dadurch gekennzeichnet ist. dass man einen Stamm von Streptomyces kanamyceticus unter aeroben Bedingungen in einem Nährmedium mit Kohlenhydraten und Stickstoffquellen sowie in Gegenwart von Streptidin züchtet, und anschliessend d«s Antibiotikum NK-IOOl aus der Gärmaische abtrennt.
Eine Variation und Mutation von Streptomyces kanamyoeticue ist zu erwarten, da dies eine allgemeine Eigenschaft der Actinomyceten iovo Der im Verfehren uar Erfindung verwendbare Stamm von Streptomyces kanamycetieuf öohliecst typische Stämme (Laborbezeichnung 0-4 1 (A.!P.T,0« lir« 21 ?.l}2), sowie alle natürlichen und künet-
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BAD ORIGINAL
lichen Varianten und Mutanten davon ein. Somit eohlieest der verwendbare Stamm von Streptcmyces kanamyeeticus alle Stämme ein, die das Antibiotikum SK-IOOl bilden, wenn aie in Gegenwart von Streptidin gezüchtet werden.
Das Verfahren zur Herstellung des Antibiotikums SK-IOOl sowie die dazu verwendbaren Kohlenstoff- und Stickstoffquellen können ahnlich den bei der Herstellung von Kanamycinen verwendeten sein. Es ist möglich, die Methode der Schüttelkultur und der Tankkultur zu verwenden.
Die Züchtungstemperatur kann zwischen 25 und 300C liegen; vorzugsweise liegt sie in der Nähe von 280G. Die dem Nährmedium zugesetzte Streptidinmenge ist nicht entscheidend; sie kann zwischen O505 und 1,0 und vorzugsweise zwischen 0,1 und 0,5 Gewichtsprozent des Nährmediums betragen. Streptidin kann entweder zu Beginn oder während der Züchtung zugesetzt werden. Vorzugsweise wird das Streptidin in einem relativ späten Züchtungsabsohnitt zugesetzt« Es scheint besser zu sein, das Streptidin zuzusetzen, wenn 80 bis. 90 Stunden nach dem Züchtungsbeginn verstrichen sind. Ee hat sich herausgestellt, dass die Menge des sich in der Gärmaische anreichernden Antibiotikums NK-IOOl ihr Maximum am Ende von 4-8 Tagen naoh Züchtungsbeginn erreicht.
Eine künstliche Mutante von Streptomyces kanamyceticus wurde duroh Behandlung des typischen Stammes 0-4-1 von Streptomyces kanaayoeticus naoh einer bestimmten Mutationsmethode erhalten. Ihr wurde die Laborbezeiehnung 12-48 (Α.Ϊ,Τ,Ο. Hr. 21257) gegeben.
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Überraschenderweise wurde festgestellt, dass das Antibiotikum IkK-IOOl auch hergestellt werden kann, wenn diese Mutante Nr. 12-48 von Streptomycee kanamyoeticus unter aeroben Bedingungen auf ähnliche WeiBe, jedoch ohn· Zusatz von Streptidin gezüchtet wird·
Gemäee einer Abänderung betrifft die Erfindung daher ein Verfahren zur Herstellung des Antibiotikums NK-IOOl auf mikrobiologischem Wege, das dadurch gekennzeichnet ist, dass man die Hutante Nr. 12-48 von Streptomyoes kanamyceticus unter aeroben Bedingungen in einem Kohlenhydrate und Stiokstoffquellen enthaltenden Nährmedium züchtet und anschliessend das Antibiotikum aus der Gärmaische abtrennt.
Sementsprechend kann erwartet werden, dass Mutanten oder Varianten mit der Fähigkeit, das Antibiotikum NK-IOOl in der Kultur herzustellen, entstehen, wenn ein Stamm von Streptomycee kanamyceticus einer bekannten chemischen und/oder physikalischen mutagenen Behandlung, z.B. Behandlung mit Stickstofflost, AainosMure- oder Huolein»äureanelog«n, Behandlung mit anderen mutationserregenden Agentien, Ultraviolettstrahlen, Röntgenstrahlen und 8-Strahlen von Kobalt 60, unterworfen wird. Weiterhin ist zu erwarten, dass eine natürliche Mutante oder Variante von Streptomyces kanamyceticus auch die Fähigkeit hat, das Antibiotikum NK-IOOl zu erzeugen.
Oemäss einer weiteren Abänderung betrifft die Erfindung daher ein Verfahren zur Herstellung des Antibiotikums SK-IOOl auf mikrobiologischem Wege, das daduroh gekennzeichnet ist, dass nan eine
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das Antibiotikum HK -1001 erzeugende Mutante von Streptomyces kanarayceticus unter aeroben Bedingungen in einem Kohlenhydrate und Sticketoffquellen enthaltenden Hährmedium suchtet und anschlieesend das Antibiotikum aus der Gärmaische abtrennt.
Ben Verfahren der Erfindung ist gemeinsam, dass die Züchtung auf Übliche Weise durchgeführt werden kann, wie sie bei den gewöhnlichen Methoden zur Züchtung der bekannten Aotinomyeeten verwendet wird* Nährmedien mit bekannten Arten von Nährstoffquellen für Aotinomyceten sind auch bei der Herstellung des Antibiotikums MK-IOOl brauohbar. Alle zur Ztiohtung τοη Actinomyceten verwendeten Stoffe? z.B. die in der USA-Patenteohrift 2 931 793 beschriebenen, sind brauchbar. So kann das Hährmedium Kohlenstoffquellen, wie Stärke, Saccharose, Maltose, Glucose und Glycerin, und Stickstoffquellen, wie Sojabohnenmehl, lösliche pflanzliche Proteine, Maisquellwasser, Peptone, fleischextrakt, Kitrate und Ammoniumsalze enthalten. Der Nährboden kann, wenn notwendig, auch andere geeignete anorganische Salze, wie HaCl und MgSO^, und solche Stoffe enthalten, die das Wachstum τοη Streptomyces kanamycetious fördern·
Zur Herstellung des Antibiotikums HK-1001 ist Züchtung auf festen Nährböden möglich, doch werden zur Erzeugung in grossen Mengen flüssige Nährmedien bevorzugt. Das aerobe Submersverfahren in belüfteten Permentern ist bevorzugt. Man kann auch die Schüttelkultivierung oder die luftbewegte Kultivierung in einem flüssigen Medium anwenden.
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Nach seiner Anreicherung in der Gärmalsohe kann das Antibiotikum NK-IOOl nach bekannten Methoden daraus gewonnen werden, z.B. durch Verwendung von Ionenaustauscherharze», durch Extraktion mit organischen Lösungsmitteln und durch Ausfällung« Dies sind bei der Reinigung von bekannten, wasserlöslichen, baeisohen Antibiotika übliche Methoden. FUr die kommerzielle Herstellung des Antibiotikums NK-IOOl bevorzugt man die Gewinnung des Antibiotikums durch Adsorption und Elution an einem Ionenaustauscher, vorzugsweise einem Kationenaustauscherharz vom Carbonsäuretyp, oder die Extraktionsmethode mit einem organischen Lösungsmittel, das einen geeigneten Carrier, wie z.B. ρ-Toluolsulfonsäure oder Laurinsäure, enthält. Das Antibiotikum NK-IOOl kann β.B. gewonnen und gereinigt werden, indem man die Gärmaieohe filtriert, das FiItrat mit einem schwach sauren Kationenaustausoherharz behandelt, das am Harz adsorbierte Antibiotikum mit verdünntem Ammoniak oder Salzsäure elulert, die aktive Fraktion sammelt und konzentriert, eventuell mit Aktivkohle oder einem Anionenaustauscherharz entfärbt, dann die konzentrierte Fraktion'der Chromatographie mit einem Anionenaustauscherharz{ z.B. Amberlit CG-50, unterwirft, um die einzelne Fraktion mit dem Antibiotikum NK-IOOl von den Kanamyeinen und anderen baeisohen Stoffen zu trennen, konzentriert, gefriertrocknet und schliesslich aus wässrigem Methanol umkristallisiert.
Das antibakterielle Spektrum des Antibiotikums NK-IOOl ist in folgender Tabelle I aufgeführt.
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Tabelle I Untersuchter Mikroorganismus
Aerobacter aerogenes IiH 1102 Alealigeneθ faeoalis Bacillus agri
Bacillus BUbtilis AiCCG 6633 Candida albicans
Diplococcus pneumoniae Typ 311D Bscherichia coli IAM 1253
Klebeiella pneumoniae 607 Lactobacillus fermenti ATCC 9338 Staphylococcus albus PCI 1200A Staphylococcus aureus 209? Staphylococcus aureus Terashima Mycobacterium phlei MS Mycobacterium 607
Salmonella paratyphi A Sarcina lutea PCI 1001 Saccharomyces cerevisiae IAM 4626 Shigella flexneri EW 10 2a Streptococcus haemolyticus D-90 Mindestheßuakonnentration. /7ml ^
31,2
7,8
6,25 >500 500
125
31,2 3,9
15,6 62,5
6,25 15,6 62,5 62,5 500 >50O
6,25 500
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BAD ORIGINAL
Sine Kultur des typischen Stammes 0-4*1 von Streptomyoee kanamyceticus, der im Verfahren der Erfindung verwendet worden ist, wurde bei der A.T,C.C. unter der Nr· 21 252 hinterlegte
Ebenso wurde eine Kultur der Hutante Hr* 12-48 von Streptomyoee kanamyoeticus bei der A. T.C.C, unter der Hr. 21 257 hinterlegt.
BIe zur Herstellung des Antibiotikums NK-IOOl verwendete Mutante Nr* 12-48 von Streptomycee kanamyoetioua hat die folgenden Merkmale« Sie Luftmyzelien sind nicht fein verzweigt und bilden keine Spiralen und Wirbel. Die Sporen bilden sich an den Spitzen der Luftmycelien, haben normalerweise eine ovale oder zylindrische Form von 1,0 bis 1,5 Mikron Breite und eine glatte Sporenoberfläche,
Die Wachsturnsbedingungen, die physiologischen Wirkungen und die Verwertung von Kohlenetoffquellen dieser Mutante von Streptomyces kanamyceticus sind in den nachstehenden Tabellen II» III und IV zusammengefasst. Weiterhin sind die Unterschiede zwischen deu typischen Stamm 0-4-1 von Streptomyces kanamycetious und der sich davon ableitenden Mutante Nr. 12-48 unter Berücksichtigung der Verwertung von Kohlenstoffquellen und ihrer physiologischen Wirkung in Tabelle V aufgeführt.
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Tabelle II
Wachstumebedingungen der Mutante Hr. 12-48 von Streptomyoe· kanamyceticuB auf verschiedenen Nährböden (nach 14 Tagen In« lcubation beobachtet; Inkubationstemperatur 260O.)
Nährboden
Saccharose» Csapek-Agar
Beobachtungen S.kanajoroettous Hutante
Hutante Sr .12-48
Wachstum
glattes Waohetum, blaß grünlich-gelb gefärbt
Luftmyzel keines
lösliches Pgiment keines
Rückseite blaß gräulioh-gelb gefärbt
Glycerin-
Czapek-Agar		 Wachstun sehr geringes Vteohetuo,
farblos
Luftmyael keines
lösl.Pigment keines
Rückseite —
Glucoee-Aspara-
gin~Agar
(Krainsky)		 Wachstum
Luftmyzel		 gelblich-braun bis tief
gelb gefärbt
keines
lösl. Pigment keine8
Rückseite gelblich-grau gefärbt
Glucoee-Aspara-
gin-Agar
(Uschinsky)		 Wachstum
Luftayzel		 tief gelb bis gelb gefärbt
keines
lösl. Pigment keines
Rückseite gelb bis blaß gelb gefärbt
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BAD ORIGINAL
Nährboden. Beobachtungen S „kanapee tioua Mutante
Nr. 12-48
Caloiummalat-
Agar		 Wachstum weiss bis blaß gelb gefärbt
Luftmyzel keines
1ö81.Pigment keines
RUckseite weiß gefärbt
Glyoerin-Cal-
ciummalat-Agar		 Wachstum gutes Wachstum, gelb bis
gelblich-braun gefärbt
Luftmyzel keines
Ib* si. Pigment gelb gefärbt
Rückseite blaß gelb bis gelblich»
braun gefärbt
Nähragar Wachstum farblos bis gräulich
gelb gefärbt
Luftmyzel keines
lösl.Pigment keines
Glucose-Nähr-
agar		 Waohstum fein faltiges Wachstum,
weiß bid blaß gelb gefärbt
Luftmyzel keines
löel,Pigment keines
Stärke-Ammonium-
eulfat-Agar		 Wachstum blaß gelb bis gelb gefärbt
Luft my 25 el keines
löslοPigment keines
Rückseite blaß gelb gefärbt
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COPY
BAD
Hährboden
Be obachtun^en
Kartoffelschei« Wachstum bem
luftmyzel Xöel,Pigment
Sakanamyceticua Mutante
Nr.12-48
faltiges Wachstum, gekörnte Oberfläche, blaß gelblich-braun gefärbt
spärlich, weiß gefärbt keines
Karottenschei·- V/achstum ben
faltiges Wachstum{ geringer als auf Kartoffelseheibe» «gekörnte Oberfläche
- Magermilch luftmyzel schwach weiß gefärbt
löslοPigment keines
löfflers Blut
serum		 Wachstum grau bis cremefarben
Iiuftmyzel keines
löslοPigment keines
Waohstum bei 370C ähnlich dem V/achstum bei
280C
Ei Wachstum faltiges Wachstum, gelb
gefärbt
Luftmyzel keines
lösl,Pigment keines
Waohstum Ringwachsturn
luftmyzel keines
lösl.Pigment keines
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COPY
BAD ORIGINAL
Tabelle III
Physiologische Wirkung der Mutante Nr.12-48 von Streptomyces kanamycetieus (nach Inkubation von 14 Tagen bei 280C beobachtet)
Physiologische Wirkungen
Reduktion von Nitrat Hydrolyse von Stärke Bildung von Schwefelwasserstoff
Bildung von Tyro3inase (bei 280G)
Verflüssigung von Gelatin
Auflösen von LÖfflers Blutserum
Magermilchnährboden
Sokanamycetioue Mutante
^r.12-48
positiv positiv negativ negativ verflüssigt
beobachtet
keine Koagulation, langsame Peptonisation
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BAD ORIGINAL
Tabelle IY
Verwertung von Kohlenstoffquellen der Mutante Nr. 12-46 Ton Streptomyces kanamycetioue (nach einer Inkubation von 14 Tagen bei 280C beobachtet)
Verwertung von S.kanamycetioue Mutante Mr. 12-48 Kohlenstoffquellen
Verwertete Kohlenstoff- Arabinoae, Dextrin, Duloit, fructose, quellen Galaktose, Glucose, Glycerin, Maltose,
Mannit, Mannose, Raffinoee, Hhantnoee, Stärke, Natriumaoetat und Natriumoitrat
Wenig verwertete Inoeit, Inulin, Sorbit, Saccharose, Kohlenstoffquellen Xylose, Hatriumeuccinat und Salioin
Nicht verwertete Lactose Kohlenetoffquellen
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BAD ORIGINAL Tabelle Y
Unterschiede zwischen dem typischen Stamm 0-4-1 und der Mutante Nr. 12-48 von Streptoinycee kanamyceticus
Beobachtungen Sokanainycetioue S. kanamyoeticue
Stann 0-4-1 Mutante Nr.12-46
Physiologische Wirkung
Bildung von Tyrosinase
auflösen von Löfflers
Blutserum - +
Verwertung von Kohlenstoffquellen
lactose
Rhamnose
Dulcit
Saccharose ±
Xylose +4- +
Natriuracitrat ·♦·+ +
Salicin +> τ
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it ~
■ Die Beispiele erläutern die Erfindung,
Beispiel 1
Ein flüssiges Nätirmedium (15 Liter) mit 2# Stärke, 3,0 ?6 Maltose, 3,0 $> Sojabohnenraehl, 1,0 # Natriumnitrat und 0P5 # Natriumchlorid wurde mit dem typischen Stamm 0M--1 von Streptomyces kanamyoeticus geimpft und unter Luftzufuhr und Rühren bei 280C inkubiert» Nach 80 Stunden Inkubation wurden dem Medium 30 g Streptidin zugesetzt, und die Inkubation wurde weitere 80 Stunden fortgesetzt. Die Menge dee sich im Medium anreichernden Antibiotikums NK-IOOl erreichte am Ende dieser Inkubationszeit ihr Maximum,
Die Gärmaische wird filtriert. /
14 Liter Filtrat wurden mit A- Liter Auetauecherharz Amberlit IßC"50 (Ammonium-Typ) behandelt, um daß Antibiotikum daran zu absorbieren. Das Harz wurde mit 0,5 N wässrigem Ammoniak eluiert, und die aktiven Fraktionen des Eluats wurden vereinigt und konzentriert. Das Konzentrat wurde in 100 ml Wasser gelöst und 30 Minuten lang mit 1 g Aktivkohle gerührt« Nach dem filtrieren wurde eine farblose Lösung erhalten, die dann mit 2 Liter Amberlit CG--50 (Ammonium-Typ) behandelt wurde. Die am Harz adsorbierten Antibiotika wurden mit 0,3 N wässrigem Ammoniak eluiert. Eine Einzelfraktion des Antibiotikums NK-IOOl wurde zuerst vor der Abtrennung dee Kanamycin A isoliert·
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BAD ORIGINAL
Die Fraktion mit dem Antibiotikum NK-1001 wurde konzentriert und lyophiliaiert. Es wurden 28,9 g weieeee Pulver des Antibiotikums NK-1001 als Rohprodukt erhalten.
Das Pulver wurde in 12 ml Wasser gelöst und portionsweise mit 50 ml Methanol versetzt* bis sich Kristalle abscheiden. Nach dem Filtrieren und Trocknen wurden 17,4 g des Antibiotikums NK-1001 in Form weisser, nadelähnlicher Kristalle erhalten.
Eine Elementaranalyse des Produktes ergab 44,27# C, 7rO99i R und 8,95# N ohne Schwefel, Halogene und Asohe, Bei der Messung nach der Dampfdruekiaethode wies das Produkt eine Molekulargewicht von 492 auf. (theoretiacher Wert 498,6| cieH35N3Oi2*H2° )'
Beispiel 2 * .
Ein flüssiges Nährmedium (15 liter) mit 2,0 56 Stärke, 3,0 # Maltose. 3,0 56 Sojabohnenmehl: I7O # Natriumnitrat und 0,5 56 Natriumchlorid wurde sterilisiert, gekühlt und mit einer sterilisierten und gekühlten Lösung von 30 g Streptidin in Wasser vermischtο Die Mischung wurde dom mit dem typischen Stamm 0-4-1 von Streptomyces kanamycetious geimpft und 140 Stunden bei 280C unter Luftzufuhr und ßühiren inkubiert« Am Ende dieser Fermentierung erreichte die Men(j> des sioh in der Kultur anreichernden Antibiotikums NK-IOC. ihr Maximum.
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■- 19 ·■
Die Gärmaisehe wurde auf ähnliche Weise wie in Beispiel 1 weiter verarbeitet und das erhaltene rohe Pulver gereinigt* Eb wurden 3.2,5 g Antibiotikum NK-1001 in kristalliner Form erhalten.
Beispiel ?
Ein flüssiges Nährmedium (15 Liter) mit 2 # Stärke, 3 £ Maltose, 3 i* Sojabohnenmehl, 1 i> Natriumnitrat und 0,5 1» Natriumchlorid wurde mit der Mutante Nr.12-48 von Streptomyces kanamyceticus geimpft und 160 Stunden lang unter Luftzufuhr und Rühren bei 280C inkubiert.
Die GärmaiBche wurde in gleicher Weise wie in Beispiel 1 weiter verarbeitet und daa erhaltene rohe Pulver gereinigt. Es wurden 5,9g dea Antibiotikums NK-IOOl in kristalliner Form erhalten.
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BAD ORIGINAL

Claims (2)

Patentanspr ü'o h ο
1. Antibiotikum M-IOOl, daduroh gekennzeichnet, dass es basisch ist, farblose, nadelähnliohe Kristalle vom Zersetzungspunkt 238 ~ 2420C bildet, löslich in Wasser, wässrigem Methanol und wässrigem Äthanol, aber uxjg« unlöslich in wasserfreiem Methanol, wasserfreiem Äthanol, Äthylacetat, Butylacetat und Benzol ist, positiv auf Ninhydrin-, Elson-Morgan- und Molisch«Reagens, aDer negativ auf Sakaguchi-, 'i'ollens-j Fehling-, Millon- und Benedict-Reagens reagiert, die Elemente Kohlenstoff, Wasserstoff, Sauerstoff und Stickstoff, aber nicht Schwefel, Halogen und Asche enthält, die empirisohe Formel C18H*CNeO12,H2O hat, in 1 wässriger Lösung eine spezifische Drehung von C0^] + 132° aufweist, im Ultraviolett zwischen 220 mu und 34-0 mu keine Absorption zeigt (vgl. Abb. 1), und im Infrarot-Nujol~ spektrum (vggo Abbo 2) bei folgenden Wellenlängen charakteristische Absorptionsbanden aufweist: 3450, 1630, 1585, 1145 und 1040 cm"1.
2. Verfahren zur Herstellung des Antibiotikums NK-IOOl nach Anspruch 1 auf mikrobiologischem Wege, dadurch gekennzeichnet, dass man einen Stamm von Streptomyces kanamycetious oder eine das Antibiotikum NK-IOOl erzeugende Mutantβ von Streptomyces kanamyceticus unter aeroben Bedingungen in einem Nährmedium mit Kohlenhydraten und Stickstoffquellen sowie in Gegenwart von Streptidin züchtet und ansohliessend das Antibiotikum NK-IOOl aus der Gärmaische abtrennt.
109853/0535 BAD ORIGINAL
3β Abänderung dee Verfahrens zur Herstellung des Antibiotikums NK-IOOl nach Anspruch 2« dadurch gekennzeichnet, dass man eine Mutants Kr. 12-48 von Streptomyces kanamyceticus (Ae 1So1Sc0» Nr« 21257) unter aeroben Bedingungen in einem Mhrmediura mit Kohlenhydraten und Stick st off quellen züchtet.
109853/0535
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