DE1620630A1 - Verfahren zur Herstellung von neuen Dinucleosidphosphaten - Google Patents

Description

Dr. Waiter Be« AJfred B

162063a

23. Mal 196S

. Hüns Chr. Beil

Unsere Iiuauaer» 12 687

The Upjohn Company ali,Laasoo_r llich.,

Verfahren zur Eeratellung von neuen Mnuoleosidihoaphaten

Dia vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von neuen 2'»5'- und 3^r _f5^r-Dinucleo*idpho«phaten 3O.*ie deren phanaazeutiech brauchbaren Salzen»

Bas erfindung»gemäs3e Verfahren führt auf den nachfolgend beschriebenen Wegen 1, B und C über ebenfalls neue Zwischenprodukte zu den vorstehend genannten neuen Endprodukten»

JL* Herstellung der als Zwischenprodukte dienenden 5»-Phosphate und Verbindungen der formel XIt

eosmmts

SAD

HOCH_{2 Λ} Υ Is 0

7\

HO

Jh *

(D

CH₂

Ac

(IV)

TO

CH₂

/ηη\

(ID

TOCH

/h hN

(Ml)

>— 0

HO-P-O-CH₂ Y

OH

OH X

(V)

— 3 ~*

Β09ββ7/17β5

-■3 -

In den vorstvil.· „den Formell* iedeuteut

Ac und /ivi¹ Acjlreaie ...it l'bia 12 Ko-Ienatof fator-en oder „

T Trijheiiyaethyl» (/-I-Iot-.u „, Lunyl)-dipheii„·IiUtL₁,1 cfier _uia--".(p-

Llethoxy^ kenyl)-^heujl&iethylf
X *wa;3cor.:toff 1 4-01* oier j|-G"I| .

X' Waaserstoff, A-O-Acyl oder 3-G-Ac^ 1 (wobei die iiCjl_bruc;e ier oten Definition entspricht|

yl_f ürt.cil-1-yl,ThyKin-1-yl (bezw, S-Mfetlijlüräci 1-1-^ l), l (bezTi. 6-iminoi-urin-9-/l)i Suanin-9-yl (bezw· 2-Amino-6-hydruxypurin-9-^"l)»^-Me"rcaptopurin-^-iig Urucil-5-yl» 5-Fluoruraciil- < l~yl_f S^Cftloruracil-I-yl, 5-BroQuracil-r-yl, S-JoduTixcil-l-jl, 5"*Trifluörmethyluracil-l-yl_t Eviöxanthin^-yl (bezw._ 6-Hydroxypurin- 9-Jl)₉ Iantliin-9-yl (bezW. 2»6->Dihydroxypurin-9-yl), 5 llethyloytoEin-1-yl oder 3-lCethylcytoein-l-ylf :

X * dieselben Reste wie bei Y angegeben, in denen aoylxerbare Gruppen, ζ.Βφ Aninogruppen, auch acyliert und dadurch vor einer Reaktion mit den Phosphateetern in anderen als den erwünachten Stellungen ^eachützt sind. Y¹ kann demnach «eint
li^-Acylcytosin-l-yl,-iJracil-1-yl, -thymin-1-yl, H -Acyladenin-9-yl| II —Acylguanin-9-yl, -o-mercaptopurin-^^yli -Uracil-^-yl» -5~ 1-yl, -S-chlorurecil-l-yl, -5-troiauraoil-l-yl» -J-lodxtraoil- -5-trif luormethyltiracil-1—yl-, -ii/poxanthin^-yl, -xanthin-9-yl» I» Acyl-5-niethylcytusin-l-yl oder U -Acyl—J-methylcytoein-l—yl (wobei die j&cylgruppe der oben gegebenen Definition entspricht).

* A bedeutet im Rahmen der vorliegenden Erfindung den griechischen Buchstaben alpha·

-4-

909087/1715

. BAD ORIGINAL

B.· Herstellung der Zwischenprodukte für die Phosphorylierung in der ' 2'-O- oder S'-O-Stellung*

(IM)

AcO-C H₂ Υ«

TO-CH₂

(VIII)

HOCH

/χ

HO X

(D

(Vila)

C. Herstellung der Endprodukte:

Eine Verbindung der-Formel VIII (unter dennaclptehend geschilderten Umständen auch II) wird dann mit einer Verbindung der Formel VI zu den folgenden Verbindungen kondensiert:

90-9*87/1715

~ ^4a "

TCH

/N

HO Ρ— d X₂

H₂ Yi'

CH₂ Y₂"

O H H

(IX) -

Selektive Hydrolyse

'3'

HOCH₂ Y,

HO-

909887/1706

In den Formeln haben Ac, Xf Y, Υ¹» Z und X'die angegebene Bedeutung. Handelt es sieh bei dem Zuokeranteil im Molekül der Verbindung III um Deoxyribose, d.h. ist X¹ - H, und ist Y· nicht aoyliert, d.h· ist Y¹ ■ Y, so stimmt die Verbindung der Formel VIII mit der Verbindung der Formel II übereinj die letztere wird dann für die Kondensation verwendet·

Herstellung der Endprodukte .*/·><! eine Verbindung der Formel VIII (bezw. II) id mit einer Verbindung der Formel VI kondensiert· In der Verbindung der Formel VI bedeutenι

Wasserstoff, A-Hydroxy oder ß-Hydroxy, mit der Maßgabe, daß nur einer der Furaneseringe in der Verbindung ein Hibofuranosering sein kannι X₂ und X, H, A-OHi H, ß-OHf A-OH, ß-OHf ß-OH, A-OHf B-OH, ß-OHf

X ' Wasserstoff, A-¹O-ACyI oder ß-O-Acyl (wobei die Acylgruppe die bereits angegebene Bedeutung hat), jedoch mit der Maßgabe, daß nur einer der Furanoseringe Arabinofuranose sein kannf

X₂ und X-* Wasserstoff, A-0-Acylf H, fl-0-Acylf A-OH, ß-O-Acylf ß-OH| A-OACf und B-OH, ß-O-Aof (Acyl wie bereits angegeben)f

Y. und Y₂ das gleiche wie vorstehend für Y angegeben» Y₁' und Υ»* das gleiche wie vorstehend für Y' angegeben·

Sie Auf trennung Y,, Y₂, Y* und Yo" ^iat vorgenommen worden, um anzuzeigen, daß diese Substituenten, obwohl von denselben Gruppen X und Y* abgeleitet, in den Verbindungen VII, VIII, IX und X nicht notwendigerweise identisch sein müssen, d.h· Y. und X₂ in der Verbindung XX können gleich sein (X₁ « Yg) , müssen es aber nicht sein·

Die Vertikale WellenlinieJ mit Substituenten an beiden tnden zeigt an, daß die Substituenten sowohl in Α-Stellung (d.h· unter der Ringebene) oder in Bestellung (d.h. über der Eingeben·) angeordnet «ein können»

-6-

909 88 7/17S5 ^BA^ original

Sie Verbindungen gemäse vorliegeaißr EsfIn&vmg können beispielsweise folgende Aoylgruppen enthalten» Acetyl» Froploziylg Sutyryl_f Valerjtl, Isovaleryl, Hexanoxyl, Heptanoyl, Octanoyl» Nonanoyl, Eeoanojlg, Undeoanoyl, Lauroy 1, Benzoyl, Phenylaoetyl, Phenylpropionyl, p->Toluoyl» ß-Cyclopentylpropionyl u_tä.

Die heterocyclischen Reste Y entstehen, wenn in der Stammverbindung an der Stelle, die durch die Zahl vor der Endung "-yl" bezeichnet ist» ein Wasserstoffatom entfernt wird· Die Reste Y~entsprechen daher den folgenden Formeln«

-7-

809887/1716

SAD

H₂

Cytosin-l-y1 (a)

H- fr^s—CH_;

Üracil-1-yl
(b)

Thymin-1-y (c)

NH₅

Aden in-Q-yl

(dl· SH

6-Mercaptopurfn-9-yJ

■· to

H₂N "N -M'

Guan in-9-yl (e)

aci

S-Piuorouracil-l-yl

5-°hlorodracil-l-y1 5«©romouraci1-

909887/1715

ORIGINAL

- ar-

OH

5-Jodourafcil-l-yl 5-Triflupromethyi-(k) uracH-1-yl

(U

Hypoxartthin-9"yl

(m)

OH

Xanthin-9-yl (n)

5-^iethylcytosin-l-yl 5-Methylcytos in-Co) l-yl

(P)

— 9 —

909887/17S5

Die vorstehenden üracil-(b) und substituierten Uracilreate (c), (g), (h), (i)» (j)i 00 und (l) sind in der Ketoform dargestellt und nicht in der tautomeren Bnolform· Andere als die vorstehenden Beste können auch in der tautomeren Form dargestellt werden» Beispielsweise können die Cytosin— und substituierten Cytosinreste (a) und (o), die vorstehend in der Aminoform dargestellt sind, auoh in der tautomeren Iminoform dargestellt werden« Viele der Verbindungen gemäss vorliegender Sriindung stellen ein Gemisch dar, in dem die beiden möglichen Formen im Gleichgewicht vorliegen·

Durch das Verfahren gemäss vorliegender Erfindung soll erreicht werden, daß die Stellen im heterocyclischen Seil und im Zuckerteil des Moleküles, die mit Phosphorsäure oder einem Phosphorylierungsmittel reagieren können, geschützt werden, während gleichzeitig die 2^l- oder 3'- und 5'-Stellungen für die Umsetzung mit dem Phosphorylierungsmittel zur Verfügung stehen» Von geringsfügigen Abweichungen abgesehen, die aioh aus der Art des jeweils im Einzelfall verwendeten Kucleosids ergeben, kann der -ablauf des erfindungs· gemässen Verfahrens wie folgt beschrieben werden»

Bine Verbindung der Formel I wird in Fora der freien Bi-se oder in Form des Salzes mit einer Mineralsäure wie Chlorwasserstoffsäure in der 5'-Stellung veräthert, z.B» mit Triphenylchlormethan oder einem methoxysubtituierten TriDhenylchlormethan, wobei man die entsprechende !-(fj'-O-Triphenylmethyl-

trk&lf
ß-D--oranosyl)-Verbindung (ll)/f die Verbindung II wird anschliessind mit einem Acylierungsmittel wie isatosäureanhydrid, Propionaüureanhydrid oder Bensoylchlorid an den Hydroxygruppen in 2·- und 3'-Stellung und, falls vorhanden, an der Aminogruppe des heterocyclischen !!-Hinges (Cytosin, Adenin) acyliert» so daß man die entsprechende l-(2*,3'-Di-O-aeyl-5^l-O-triphenylmethyl-ß-D-furanosyl)Verbindung (Hl) erhält» Die Verbindung III wird ohne weitere Reinigung einer säurekatalysierten Ätherspaltung unterworfen· wobei man .die entsprechende l—(2 · ,3¹^-Di-O-Bcyl-3-D-Furanosyl)-Verbindung (IV) · erhält* Die Verbindung IV wird dann mit einem spezifischen Phosghorylierungsmittel, z.B. 2-Cyanoäthylphosphat, in Gegenwart eines geeigneten Konden— sationsmittel wie Dicyclohexylcarbodiimid und anschliessend mit einer Alkalibase wie Lithiumhydroxid behandelt* so daß das 1-ß—D-Furanosyl—5*-

909887/1705

3« -

Phosphat ζγ) anfällt» Wiffd &i© Ter&i&fcag T aus erneut acy Wert £> so erhält man das ent sprechende l-(2»₉5^a<-3Ji=0-acyI°I=-3=-f urBac^l)5^iQ^hosphat der Fovmsl VI«. Die Verbinduag VI wia'd schlieselioh mit ©in©a Suolsosii dex Formel VIII (foezw« II unter den gesskilderten Bedingungen) kondensiert), so iaß dio Verbindungen der Formeln IX und X entstehen^ lurch selectiv© Hydrolyse dieser Verbindungen zunächst axt einer Base (z₀Bo Ammoniumhydroxid ia Methanol) und dann mit einer Säure erhält man die Binucleosifi© d©r Formeln SX mnd

Bis DinucleoBidphosi,..ate der Formeln XI und SII₂ die erfiixduagsgemäss hergestellt werden können, v/eisen eine stark© oytotoxiaoh© Aktivität in vitro auf, und zwar insbesondere gegen KB-TumoTzollen und gegen. Yireiip land awer insebesondere der Artea Herpes, Goe und Tacoiniao Infolgedessen kaaa aai die Verbindungen sum Beinigen der Glasgeräte und Xnärumente Trerwenden_s die suä Züchten von Gewebekulturen für die Virus-= und Tumorforschung dienen. Han kann sie auch zum Waschen von ausgeschnittenem Tumorgewebe verwenden, das in liere verpflanzt werden soll, um das Wachstum von KB-Iumorzellen zu ver-

hindern, die sonst/das umgebende Gewebe oder in andere Teile des Körpers gelangen kennten. Die antibakterielle Aktivität der erfindungsgemäss hergestellten Verbindungen kann auch dazu benutzt werden, um phagozytenfreie Fungi- und Bakterienkulturen, insbesondere phagozytenfreie Streptomyces— Kulturen herzustellen. Die Verbindungen der Formel XII können insbesondere auch dazu verwendet werden, Herpes K&ratitis bei Yirus-infizierten Haustieren, z.B. Kaninchen, zu heilen«,

Die als Ausgangsmaterial verwendete Verbindung der Formel I ist ein bekanntes Material (vergl· z.B. lüchaelson_fc "The Chemistry of Nucleosides and Nucleotides", Academic Press, London und New York, 1963f Kataloge der Zellstoffabrik Waldhof, Deutschland I964 u«a.). Weitere mögliche Ausgangsverbindungen werden bei den nachfolgenden Beispielen erwähnt.

Zur Durchführung des Verfahrens gemäss vorliegender Erfindung wird eine Verbindung der Formel ί in Form des Hydrochlorides, des Hydrobromides oder eines anderen Salzes oder als freie Base in einem organischen basischen lösungsmittel mit einem Verätherungsmittel behandelt» Als Verätherungsmittel

909887/1785 * -n-

können beispielsweise verwendet werdenι Triphenylchloromethan, Triphenylbrommethan, methoxysubstituiertes Triphenylmethylbrom- oder -chlormethan, z.B. (p-Methoxyphenyl)-diphenylchlormethan, bis(p-Methoxyphenyl)phenylchlor- oder bromäthan. Als organische Basen können Pyridin, Picoline, Lutidine, Athylpyridine u.a. eingesetzt werdenf vorzugsweise arbeitet man mit Pyridin. Die Umsetzung kann bei Temperaturen zwischen O und 6O C durchgeführt werden; vorzugsweise arbeitet man bei Raumtemperatur, d.h. zwischen etwa 20 und 30 C. Bei Raumtemperatur sind für die Umsetzung zwischen 6 Stunden und 10 Tagen erforderlich, öemäss einer bevorzugten Ausführungsform des erfindungsgemässen Verfahrens wird die Verbindung der Formel I zusammen mit der etwas äquivalenten Menge an Triphenylohlormethan, Triphenyl-bromäthan oder deren p-Methoxy-Analoga in Pyridin-Lösung gerührt.

Die Acylierung der auf diese Weise gewonnenen l-(5^f-O-triphenylmethyl»ß-D-furanosyl)-Verbindung II wird mit Aoylchloriden, Acylbromiden und Anhydriden von Carbonsäuren mit 2 bis 12 Kohlenstoffatomen oder Anisoylchlorid vorgenommen· Zu den Acylchloriden und Aoylhalogeniden, die mit besonderem Vorteil verwendet werden können, gehören« Benzoylchlorid, Anisoylchlorid» p-Xthylbenzoylchlorid, p-Methylbenzoylbromid, ß-Cyalopentylpropionylchlorid, LaUroylchlorid, Deoanoylchlorid» Ootanoylbromid u»ä· In vorteilhafter Weise verwendbare Säureanhydride sind beispielsweiset Essigsäure—, Propionsäure»» Buttersäure-, Valeriansäure-, Phenylessigsäure-, Phenylpropionsäure- und Hexancarbonsäureanhydrid u.a. Gemäss einer bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung wird die Umsetzung in trockenem Pyridin bei Baumtemperatur zwischen 20 und 30°C unter kontinuierlichem Rühren vorgenommen; die Umsetzungsdauer beträgt etwa 4 bis 48 Stunden« Naoh dieser Zeit wird das Reaktionsgemische in üblicher Weise aufgearbeitet, indem man beispielsweise die Pyridinlösung in Wasser gießt» das Wasser abdekantiert und das verbleibende Material durch Chromatographieren, Sxtrahieren, Umkristallisieren oder eine Kombination dieser Methoden reinigt · Die auf diese Weise erhaltene l-(2' ,3'-Di-O-Äoyl-5•<-O-triphenylmethyl-ß-D-fⁱuranosyl)-Verbindung wird der Itherspaltung unterworfen, indem man sie beispielsweise mit essigsäure oder mit einer Essigsäure, die einen Halogenwasserstoff, z.B. Chlorwasserstoff, Bromwasserstoff oder Jodwasserstoff enthält» behandelt! «an erhält auf die*·

909887/1705

-12-

SADQRfGfNAL

Weise die l*(2^r,5^l-Bi-O-flayl-ß-D-furanosyl)-Verbindung.

Die Phosphorylierung des geschützten 1-(2¹^i'-Di-O furanosyl)cytosins wird naoh der Methode von G.HVEener, <J«Am»Ghem».Soc· 83* 159 (1339) durchgeführt· Als Lösungsmittel dienen für did Umsetzung wasserfreie hydroxylgruppenfreie !lösungsmittel» in denen das Phosphorylierungamittel_r z.B. der Phosphatester, lösIioh. ist· Zu diesen Lösungsmitteln gehören beispielsweise Pyridin, Pioolin, Lutidin u.£. Neutrale Lösungsmittel wie Dimethylsulfoxid» letrahydrofurani U,N-Dimethylac.etamid oder Dioaan. können ebenfalls verwendet werden, vorausgesetzt« daß pro IiOl Pho sphory lie rungsmittel ein Moläquivalent des basischen Lösungsmittels, z.B. Pyridin, zugesetzt wird· Zu den für diesen Zweck verwendbaren Basen gehören auch die Trialkylamine*

Man verwendet Phosphatester, die leicht durch die Einwirkung starker Basen, z.B. Alkalihydroxide, gespalten werden. Besonders geeignet für die Umsetzung sind die 2-substituierten ithy1dihydrogenphoephate der Formel

In dieser Formel bedeuten! ⁿ

R Wasserstoff oder eins niedere Alkylgruppef £ einen stark elektronegativen Substituenten wie -Q===-ff| -SO₂I -C-R"*

I I)

,I -CF_xI -CCl_xI -(JBr,!' —CIf — Brj -COOR «■· *> -HO₂ u.ä.f R¹' eine nieder! Alkyl- oder Arylgruppef R¹¹* Wasserstoff oder eine niedere Alkyl- oder Arylgruppe·

Vorzugsweise verwendet man 2-Gyanoäthyl-dihydrogenphoaphat als Phosphatester·

Anstell· d«s vorstehend genannten 2»eubstituierten ithyldihydrogenphoaphate können beispielsweise auoh 1 ο-und p-aubetituierte Phenyldihydrogenphosphate

909887/17·$ -¹³"

wie ο- und p-Carboxyphenyl-dihydrogenphosphat, ο- und p-Carbamoylphenyldihydrogenphosphat, sowie o- und p-Cyanophenyl-dihydro&enphosphat verwendet werden·

In der Lösung, die das ß-substituierte Äthyl-dihydrogenphosphat oder o- oder p-substituierte Phenyl-dihydrogenphosphat enthält, wird das bereits erwähnte durch Aoylgruppen geschützte Arabinofuranosylcytosin gelöst, und zwar - falls notwendig - unter Erwärmen auf etwa 30 bis 5O⁰C. Sobald sich die l-(2», 3»- Di-O-ftoyl-i-D-furanosyl)-Verbindung IT gelöst hat, wird ein Kondensationsmittel zugefügt, z.B. ein alkyl- oder arylsubstituiertes Carbodiimid, vorzugsweise Dicyclohexacarbodiimid. Ausser Carbodiimiden können auoh andere Kondensationsmittel verwendet werden, beispielsweise p-Toluolsulfonylchlorid, Uethoxyacetylen, Ketenimir^ Triohloracetonitril, substituierte Cyanamide» A-subatituierte Acetonitrile, Alkyl- und Arylisocyanate, Carbonsäure/lchloride, Aralkylchlorcarbonate u.a.

Sie Umsetzung wird, wie bereite angedeutet» vorzugsweise bei Temperaturen durchgeführt, die etwas über der Raumtemperatur liegen, d.h. bei Temperaturen zwischen 20 und 40 0· Gegebenenfalls ist es auch möglich, bei tieferen Temperaturen, z»B· bei etwa 5 G» zu arbeiten» ebenso ist es in besonders gelagerten Fällen möglich, die Umsetzungstemperatur bis auf etwa 75 C zu erhöhen, ohne daß unerwünschte Nebenreaktionen eintreten· Bei Temperaturen zwischen 2o und 40°C und sinnvollen Konzentrationen sind für die Umsetzung etwa 4 bis 4Ö Stunden erforderlich· Manche Umsetzungen sind schon nach einer Stunde abgeschlossen^ in manchen Fällen kann eine Umsetzungsdauer von bis zu θ Tagen erforderlioh werden· Je grosser die Verdünnung des Reaktiοnsgemisches ist, umso längere Reaktionszeiten sind erforderlich·

Die Konzentration der Reaktionsteilnehmer ist nicht kritisch· Bei Verwendung äquimolekularer Mengen an l-(2»_>3 '-Di-O-ficyl-ß-D».*uranosyl)-Verbindung IV, 2-substituiertem ithylphosphat und basischem Katalysator erhält man eine annähernd quantitative Umwandlung, wenn die zur Vervollständigung der Umsetzung zur Verfügung stehende Zeit ausreicht· Um die üaeetzungsdauer abzukürzen, verwendet man das 2-substituierte ithyldihydrogenphosphat in einem

909887/1705

" ORIGINAL ⁴~

is

etwa 3- bis 4-molaren Überschuß üfess¹ äio 1<=(2*»3 ^Di-O-aoyl-ß-D-furanosyl)-Verbindung· Sobald die Umsetzung besndst isi₉ setzt Eau eine kleine Menge Wasser zu, um den Überschuß desPhosphorylierungsaittsls und dee Konaensationsmittels zu inaktivieren· ®ie Lösung wird dann, filtriert_£ um unlösliches Material su entfernen^ bei dem unlöslichen Hatθrial kann es sich beispielsweise um disubstituierte Harnstoffe handeln, die dusöh umsetzung der Carbodiimide mit Wasser entstehen· Das Filtrat wird für die nächste Verfahrensstufej nämlioh die Spaltungsreaktion, verwendet·

Die Spaltung wird mit wässriger Alkalihydroxidlösung durchgeführt· Bei der bevorzugten lusfuhrungsform des erfindungsgemässen Verfahrens wird die in der ersten Stufe gewonnene Lösung, die das l-(2^l,3.^l~Ei™0..^aoyl-ß"°3)-furanosyl)-5^l-yl-2-cyanoäthyl-phosphat enthält, zunächst auf ein kleines Volumen eingeengt, und zwar vorzugsweise unter Vakuum.Man engt soweit ein, dass der Rückstand nach dem Abkühlen in Form einer viskosen Hasse vorliegt; dann setzt man eine Base, z.B. wässriges Lithium-, Natrium- oder Kaliumhydroxid mit einer Normalität von 0,4 his 2 zu, so daß der pH-Wert der Lösung auf 12 bis 13 steigt ι dabei arbeitet man bei Temperaturen zwischen -10 und 4-20 C« Wird die Reaktion unter kräftigeren Bedingungen, doh. höheren Temperaturen oder längeren Zeitspannen« durchgeführt» so erhält man eine Verbindung der Formel V, in welcher der aee Suhstituent Y-, anstelle von X¹ ist· Nach Abschluss der Umsetzung wird die Mischung abgekühlt und filtriert· Aus dem Filtrat wird das Produkt V in üblicher Weis·, z.B. durch Extrahieren, Evaporieren, Ausfällen in Form von unlöslichen Phosphatsalzen, Absorption — Desorption an Harzen, Timkristallisation usw* gewonnen·

Je nach den Reaktionsbedingungen, unter denen die basische Hydrolyse durchgeführt wird, können die Aoylgruppen am Aminostiokatoff, d.h. an dem IP des Gytosins oder substituierten Cytosins, N des Adenine und Ir des Guanine zurückgehalten oder entfernt werden· Bei niedrigeren Temperaturen von O bis 2O⁰G und beikurzer Reaktionsdauer, z. B. 10 bis 40 Minuten, bleibt die Acylgruppe am N-Atom des Cytosins erhalten· Wird die das 2-Cyanoäthylphosphat enthaltende Alkalilösung auf Temperaturen zwischen 75 und 100 C erwärmt oder die Behandlung bei niedrigeren Temperaturen längere Zeiten

909-887/1715 * ^ml3~

BAO

t w ». w w *r ν

fortgesetzt, so werden die Aoylgruppen entfernt·

Das so erhaltene 1-ß-D-Furanosyl 5'-<iihydrogenphosphat (V) wird dann in derselben Weise wie die Verbindung II reacyliert, wobei man gewöhnlich in wasserfreiem Pyridin und mit Anhydriden oder Halogeniden von Carbonsäuren mit 2-12 Kohlenstoffatomen als Acylierungsmittel arbeitet! man erhält so das entsprechende 5'-Phosphat der l-(2^t,3^l-Di-0-acyl-ß-D-furanosyl)-Verbindung

Die Verbindung VIII wird hergestellt, indem man entweder eine Verbindung der Formel I zur Verbindung VII aoyliert, die Verbindung VII zur Verbindung VIIa verseift und die Verbindung VIIa verethert oder indem man die Verbindung III verseift* Sie Veretherung und Acylierung werden in derselben Weise duroh» geführtι wie dies vorstehend für die Umwandlung von I ini II und von II in III beschrieben worden ist· Liegt eine acylierte Aminogruppe vor* so wird die Verseifung bei niedriger Temperatur durchgeführt· Gtomäss einer bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung wird die Verseifung in einer Wasser-Alkanol-Mischung - vorzugsweise Methyl- oder Äthylalkohol durchgeführt, die so viel Base enthält, daß der pH-Wert über 11 liegt· Als Base wird normalerweise Hatrium-, Kalium» oder Lithiumhydroxid oder Ammoniumhydroxid verwendet· Sie Niederschläge werden rasch abgetrennt und von überschüssiger Base durch Waschen mit Wasser befreit· Durch erneute Behandlung mit Base, Waschen, Extrahieren und Umkristallisieren kann das Produkt weiter gereinigt werden·

Das in der weiter oben beschriebenen Welse erhaltene Produkt YI wird dann mit einem Furanosid der Formel VIII (öder der Formel II, wenn T. * und Ϊ, gleich sind] kondensiert* Vorzugsweise führt man die Kondensation mit äquimolekularen Mengen der beiden Verbindungen YI und VIII in wasserfreiem Pyridin und in Gegenwart von Dicyclohexylcarbodiimid bei Baumtemperatur» d.h. etwa 3O⁰C durch· Anstelle von Pyridin können alkylsubstituiert« Pyridine, wie 4-, ß~ oder jf-Methylpyridin, disubstituierte und trisubstituierte Alkylpyridine, Dimethylformamid, Diäthylformamid u.a. verwendet werden· Die Reaktion kann ganz allgemein bei Temperaturen zwischen O und 60°C durchgeführt werden; vorzugsweise arbeitet man aber bei Baumtemperatur,

909887/1705 ._l6-

BAD ORIGiNAL

d.h. zwischen etwa 20 und 30°C. Sie Beaktionsdauer kann 4 Stunden bis IO Sage betragen. JLIs Bndprodukt fällt ein 3¹,5'-Dinuoleosidphosphat der Formel X an_t wenn. X₂(-X)^I ist oder eine Mischung Von 2*,5*- und 3*,5»-liucleosid-'phosphaten der Formeln IX und X, wenn X in Formel II oder Till OH ist. Das letztgenannte Gemisch kann in üblicher Weise aufgearbeitet werden, indem man Verunreinigungen mit einem mit Wasser nicht mischbaren Lösungsmittelf z.B. Petrolather, Benzol, "Skellysolve" (technische Hexane), Tetrachlorkohlenstoff, Methylenchlorid oder Äther, extrahiert und die verbleibende wässrige Reaktionsmisohung lyophilisiert. Die Extraktion und die Lyophilisation werden so oft wiederholt, daß das wässrige Eeaktionsgemisch von flüchtigen Bebenprodukten befreit wird· Sie Produkte DC und X können beispielsweise duroh Chromatographieren an Ionenaustauscherharze^ Lösungs-■ittelextraktion in einer Craig-Apparatur, Elektrophorese usw. getrennt und gegebenenfalls durch Umkristallisieren, Papierchromatographieren und Hochspannungs-Elektrophorese weiter gereinigt werden·

Sie so gewonnenen Seter werden ansohliessend mit wasserfreiem ammonikalischea. Methand oder einer wässrigen Base behandelt, um die Acjlgruppen zu hydrolysieren, und dann mit wässrigen Säuren behandelt, um die Etherbindung zu spalten; auf diese leise erhält.man die Binuoleosidphosphate XI und XII· Während der- Hydrolyse kann ein Seil des Cytosine die Acylaminogruppe verlieren, so daß ein Uraoilyl-nuoleosidphosphat entsteht·

Sie Produkte XI und XII werden in derselben leise isoliert und gereinigt wie dies für die Verbindungen IX und X beschrieben worden ist»

ALe nachfolgenden Präparate und Beispiele dienen der weiteren Erläuterung der Vorliegenden Irfindung.

-17-

90 9887/1715

PräOarat 1 9-ß-D-Arabinofuranosy!guanin

NHCOCH₃

HaCOCH

NH₂

H₃COC

C₇HtOCH₂

C₇H₇O H

OH

HNO₈

-CH₃CO

HOCH₂

909887/1765 " ^I8

BAD ORlQiNAL

Die Gruppe C₇H₇O in den vorstehenden Formeln bezeichnet die BenzyIoxygruppe

Unter mechanischem Rühren wird eine Suspension aus 5» 15 B (H>0 Millimol) des Chlorquecksilberderivates des 2,6-Diacetamido-purins (j.Davoll und B.A. Lowry, J.Am.Chem. Soc.73» I65O (l95l)) und 4»0 g gereinigter Diatomeeierde (Celite) in 325 ml Xylol durch azeotrope Destillation (50 ml) getrocknet· Eine Lösung aus 4t 39 B (l0»0 Millimol) rohem» sirupartigen 2,3»5-Tri-O~ benzyl-D-arabinofuranosyl-chloMd (CP.J.Glaudemans und H.G.Fletoher, Jr.ι J.Org.Chem» 28,3004 (1963)) ⁱⁿ 50 ^l gereinigtem Xylol wurde unter Rühren zu der heissen erstgenannten Suspension zugesetzt; anschliessend wurde unter weiterem Rühren und unter Ausschluss von Feuchtigkeit 3 Stunden zum Rückfluss erhitzt· Sie heisse Mischung wurde durch ein Celite-Bett (Diatomeenerde) filtriertf das Filterbett wurde mit heissem Xylol ausgewaschen» Die vereinigten Filtrate wurden im Takuum auf ein Tolumen von etwa 100 ml eingeengt* das Konzentrat wurde unter Rühren in einen Überschuss von Skellysolve B gegeben· Der entstandene Niederschlag wurde abgetrennt, mit"Skellysolve B C^für dieses Lösungsmittel wird nachfolgend die Abkürzung SSB verwendet) gewaschen und an der Luft getrocknet« 3)as Rohprodukt wurde in Chloroform eingerührt, die Mischung- wurde filtriert und der Filter sorgfältig mit Chloroform gewaschen· Die vereinigten Chloroform-Filtrate wurden dreimal mi"t 30j&Lger wässriger Kalitunjodid-Lcsung und zweimal mit Wasser gewaschen* die organische Schicht wurde abgetrennt und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Ansohliessend wurde das Lösungsmittel im Vakuum entfernt· Der Rückstand wurde mit Methanol aufgerührt| die so erhaltene Mischung· wurde im Vakuum zur Trookne eingedampft« Man erhielt auf diese Weise 62$ einer schaumigen festen Substanz, die ein anomeres Gemisch darstellte, in welchem 9(2^l,3*»5^l-Iii-0-benzyl"*ß-D-araliinofuranosyl)-2,6-diacetamido-purin die Hauptkompönente darstellte·

.-Eine Lösung aus 2,54 S (4»0 Hillimol) dieses Rohmateriales in 100 ml Methanol, welches bei 0 C mit trockenem Ammoniak gesättigt worden war,

909.887/1765

BAD ORlGiNAL

wurde bei O C etwa 16 Stunden abgestellt. Danach wurde die Lösung im Vakuum zur Trockne eingedampftf das Acetamid wurde durch Sublimation unter verrinjertea Druck abgetrennt. Man erhielt auf diese Weise 1,93 S (81$) einer amorphen festen Substanz, die im wesentlichen aus dem Ü-Anomer de3 £-(2'f 3'15^l-Tri-0-benzyl-D-&rabinofuranosyl)-2-acetamido-6-aminopurin bestcnd.

Durch Hydrogenolyee von 2,97 S (5»O Millimol) des rohen lionoacetaiuidoderivates (wie vor) in der von Glaudemans und Fletcher (j.Org.Chem.28, 3004 (1963)) für Tri-O-benzyl-ß-D-arabinofuranosyladenin beschriebenen Weise und anschliessende Kristallisation aus Wasser erhielt man 1,44 g (ö!^i) 9-3-D-Aruuinofuranosyl-2-acetamido-6~ciminopurin·

Eine Lösung aus 1,30 g (4»O Millimol) des vorstehenden Monoacetates und 3,2 g Natriumnitrit in 10 ml heissem Wasser wurde auf Umgebungstemperatur abgekühlt und unter mechanischem Rühren mit 3,2 ml Sisessig versetzt» bis vollständige Läsung eingetreten war. Man setzte das Rühren noch etwa eine Stunde fort, setzte dann etwa die gleiche Menge Wasser zu und rührte weiter 16 Stunden bei Baumtemperatur· Der pH-Wert der Lösung wurde auf 4 eingestellt ( mit pH-Papier )f danach wurde die Lösung im Vakuum zur Trockne eingeengt. Der trockene Rückstand -.vurde mit heissem Methanol aufgerührt, die Suspension heiss filtriert und das Filter mit heissem !(ethanol gewaschen· Die vereinigten methanolischen Filtrate^v(oa. 40 ml) wurden mit 46O mg (2,0 Milligrammatome) IJatrium versetzt; danach wurde die Lösung eine Stunde lang zum Rückfluss erhitzt. !lach, dem neutralisieren mit Essigsäure wurde die L3sung auf ein Volumen von 3O»4C ml eingeengtj die so entstandene Aufschlämmung wurde mehrere Stunden auf 5 C gekühlt. Das Rohprodukt wurde gesammelt, sorgfältig mit Wasser gewaschen und schliesslich In Gegenwart von Aktivkohle zweimal aus Wasser umkristallisiert. Auf diese Weise erhielt man 6,77 mg (6036) 9"*ß-D-Arabinöfuranosyl~2-guanin in Form von glänzenden liadeln. '

Durch Behandlung von 9-ß-B-lrabinofuranosylguanin mit Hatriumnitrit und Essigsäure erhält man 9-ß-D-ü:rabinofuranosyl*anthin. In derselben Weise erhält man durch Behandlung von 9-ß-D-JErabinofuranosyladenin mit Natriumnitrit und Essigsäure 9-ß-D-arabinofüranosylhypoxanthin*

90 98 8 7/1785 -20-

BAD ORIGINAL

In den folgenden Beispielen werden verschiedene Ionenaustauscherharze

der Firma Sow Co. verwendet. Bei diesen Ionenaustauscherharzen handelt es

sioh um die folgendem Dowex 50 X 8

Dowex 50 X θ ist ein stark saures Kation-Austauscherharz, welches ringförmige Sulfonsäure-Austausohergruppeij&nthält, die an ein Styrol-Polymergitter geknüpft sind, welches mit etwa 8$ Divinylbenzol vernetzt ist·

Dowex 50ff X 8

Dowex 5OW X 8 ist ein besonders gereinigtes Dowex 50 X 8$ das Harz besitzt eine weisse farbe im Gegensatz zur gelb-braunen Farbe des Dowex 50 X

Dowex 1X8

Dowex 1X8 ist ein stark basisches Anion-Auatauscherharz, in welchem quaternäre Ammonium-Austausohergruppen an ein Styrol-Polyinergitter geknüpft sind»

Dowex AS 1X8

Dowex 19 1 I 8 ist eine besonders gereinigte Torrn des Dowex 1X8, die von den Bio-Hod Laboratories, Richmond, Californien geliefert wird«

Beispiel.1 l-(51-o-TrijJhenylmethyl-ß-D-arabinofuranoayl)cytosin (l)

Zu einer Lösung von 10 g l-ß-D-Arabinofuranosyloytosin-Hydrochlorid in 200 al Pyridin gibt man 12 g Triphenylchlormethan. Die Reaktionsmischung wird ansohli«8send eine Woche bei Raumtemperatur (25 bis 26 C) gerührt· An finde dieser Zeit wird die Heaktionsmisohung unter Rühren in J Liter Siewasser gegossen, worauf sich die Verbindung 1 als Öl abscheidet-· Lässt man das Semisch über Nacht stehen, so verfestigt sich das Öl# das feste Produkt kann abfiltriert werden· Nach dem Zerbrechen wird es sorgfältig mit Wasser gewaschen, und an der Luft getrocknet. Die so erhaltene feste

-21-

909 8 8 7/1765

ORIGINAL

Substanz wird mit 200 ml siedendem Heptan verriebenj das Gemisoh wird filtriert, das unlösliche Material wird auf einem Sinterglastrichter gesammelt· Die feste Substanz wird dann noch mehraals mit je 250 ml-Portionen siedendem Heptaij&ewaschen, anschliessend getrocknet und in einen Liter siedendes Aceton eingetragen, welches 1 g Aktivkohle (Darco G 6o) enthält· Die heisse Suspension wird dann filtriert, um die Aktivkohle wieder zu entfernen. Das Piltrat wird auf einem Dampfbad auf ein Volumen von etwa 73 nl eingeengt, welches man auf Raumtemperatur abkühlen lässt· Dabei fällt ein kristallines Produkt aus· Die Kristalle werden auf einem Sinterglastriohter gesammelt und einmal mit 25 ml Aceton gewaschen, welches zuvor in Eis gekühlt worden ist* Nach dieser Behandlung liefen 13 g der Verbindung 1 mit Ft 227,5 - 228⁰G (unter Zersetzung) vor.

Analyse» Berechnet für C₂₈H₂₇N₃O₅I C» 69f26#^H$,6lj lit 8,86

gefunden* Ct 69,O9jHt 5,67* Ut 6,^3

In derselben Weise kann man l^l-^^l-0-(p-Methoxyphenyl)diphenyl-methyl- oder l-Qp-O-biaip-MethoxypkenylJphenylmethyl-D-arabinofurenosyQ-cytosin erhalten» wenn man Cytosinarabinosid oder dessen Hydrochlorid in Pyridinlösung mit (p-ltethoxy-phenyl)diphenylchlormethan oder bis(p-Methoxyphenyl)phenyl-chlormethan bei einer Temperatur zwischen 0 und 60 C unter kontinuierlichem Rühren umsetzt·

Die Verbindung 1 kann man auch mit Triphenylbrommethan anstelle von Triphenylchlormethan herstellen·

Baispiel 2
1-(5'-0-Triphenylmethyl-ß-D-arabinofurano»yl)uracil (2)

Diese Verbindung stellt man durch Umsetzung gemäss Beispiel 1 von
l-(ß-D-Arabinofuranosyl)-uracil mit Triphenylchlormethan (nachfolgend mit der Abkürzung TPCU bezeichnet) in Pyriün her»

909887/178 5

8AO ORIGINAL

Beispiel 5 l-(5 '-iO-l'rirhenylmethyl-ß-D-arabinofuranosyl)thymin (})

Diese Verbindung stellt man durch Umsetzung ge~iäss Beispiel 1 von l-(3-*D-ürabinofurenoßyl)-thymin mit £PClä in Pyridin her·

Beispiel 4 9-(5'-O-Triphenylmethyl-ß-D-arabinofuranosyl)adenin (4)

Diese Verbindung stellt man durch Umsetzung gemäss Beispiel 1 aus 9-(ß-B-.ÄrabinofurGnosyl)adenin und Triphenylbrommethan in Pyridin her·

Beispiel 5

9-(5'-O-(p-liethoxyphenyl) diphenvlmethyl-ß-3>-arabino-f uranosyl) adenin (5)

Die Verbindung 5 stellt man durch Umsetzung gemäss Beispiel 1 aus

9-(ß-JKärabinofuranosyl)-adenin und (p-Hethöxyphenyl)diphenylchlormethan

in Pyridin her·

Beispiel 6
9-(5*-0-Iriphenylmethyl-ß-D-arabinofuranosyl)-6-mercaptopurin (6)

Die Verbindung 6 stellt man durch Umsetzung gemäss Beispiel 1 aus 9-(ß-D-Arabinofuranosyl)«6-meroaptoptirin und TTGiS. in Pyridin her*

Beispiel T
!-(S'-O-Sriphenylmethyl-ß-B-arabinofuranosylJS-chloruraoil (7) -

Sie Verbindung 7 stellt man durch Umsetzung'gemäss Beispiel 1 aus 1—(ß»B-^rabinofuranosyi)5-ohLloruraoil und IPGlC in Pyridin her«

Beispiel 8
• l«(5*-O--Iriphenylmethyl-ß-i)-arabinofuranosyl)5~fluor-uraoil (8)

Die Verbindung 8 stellt man durch Umsetzung gemäss Beispiel 1 aus l(ß—B-Ara-binofuranQsylJS^fluoruracil und IPCü in Pyridin her»

9 0 9 8 8 7/1765

BAD ORIGINAL .23-

<*τ

- U-

Beisplel 9

l-(5'-0-Triphenylmeth^l-ß-D-arabinofurano8yl)5-trifluormethirluracil (9)

Biese Verbindung stellt man duroh Umsetzung gemäss Beispiel 1 aus l-(ß-D-ArabinofuranOSji)5-trifluormethyieraoil und TPÖJf in Pyridin her·

Beispiel 10
l-(5«-0-Triphenylmethyl-ß-D-arabinofuranosyl)5-^:i>roitturacil (lO)

Sie Verbindung IO stellt man duroh. Umsetzung gemäse Beispiel 1 aus l-(ß-D-AraMnöfüranosyl)-5-broinuraail und TPGM in Pyridin her.

Beispiel 11 l-(5•-O-Triphenylmethyl-ß-D-itrabinofuranosylJS—joduraoil (ll)

Sie Verbindung Il stellt man duroh Umsetzung gemäss Beispiel 1 aus l-(ß-D-Arabinofuranosyl)5-joduracil und XPCM in Pyridin her·

Beiepiel 12 9-(5•-O-Triphenylmethyl-ß-D-arabinofuranosyl)guanin (12)

Diese Verbindung stellt man duroh Umsetzung gemäss Beiepiel 1 aus 9-(ß-D-ArabinofuranoByl)-guanin und.IPQt in Pyridin her·

Beispiel 15 9-(5 ^t-0-Triphenylmethyl-ß-D-arabinofuranosyl)hypoxanthin (13)

Sie Verbindung 15 stellt man durch Umsetzung gemäse Beispiel 1 aus 9-(ß~D-!Lrabinofuranosyl)-hypoxanthin mit IPClC in Pyridin her·

Beispiel 14 9-(5*-O-Triphenylmethyl-ß-D-arabinofuranosyl)xanthin (I4}

Biese Verbindung stellt man durch Umsetzung gemäss Beiepiel 1 aus 9-(ß~D-Arabinofuranosyl)-xanthin mit Triphenylbrommethan in Pyridin her·

-24- '■

90 9887/1785

SAD

Die-in den folgenden Beispielen 15 bis 30 beschriebenen Umsetzungen werden ebenfalls jeweils in der in Beispiel 1 beschriebenen Weise und unter Verwendung von Pyridin als Lösungsmittel durchgeführt·

Beispiel 15

l-(5'-O-(p-Methoxyphenyl)diphenylmethyl-ß-D-arabinofuranosyl)5-methylcytosin (15)

Die Verbindung 15 erhält man aus l-(ß-D-Arabinofuranosyl)5Hmethylcytosin und p-^fethoxyphenyl)diphenylchlormethan·

Beispiel 16
l-(5·-O-Triphenylmethyl-ßi-D-arabinofuranosyl)3-methylcytosin (l6)

Sie Verbindung 16 erhält man aus !-(ß-D-ArabinofuranosylJj-niethylcytoBin und SPGM.

Beispiel 1? 9-(5*-Q-Triphenylmethyl-ß-D-ribofuranosyl)adenin (17)

Biese Verbindung erhält man aus 9-(ß-S-Ribofuranosyl)-adenin und Iriphenylbromäthan.

Beispiel 18

1(5^l-O-(p-Hethoxyphenyl)diphenylmethyl-fi-B-ribofurano8yl) 5-methyloytosin (18)

Sie Verbindung 18 erhält man durch Umsetzung von l-(ß-D-Arabinofuranoeyl)· 5-methyloytösin mit (p-lCethoxyphenylJdiphenylchlormethan.

Beispiel 19

l-(5·-O-Triphenylmethyl-ß-B-ribofuranosyl)5-trifluormethyluraoil (19)

Si« Verbindung 19 erhält man durch Umsetzung von l-(ß-D-Ribofuranosyl) 5-trifluormethyluraoil nit TPClI.

-25-

909887/17$5

O ORlGiNAL

Beispiel 20 l-(5.»-0-Triphenylmethyl-ß-D-ribofuranoayl)cytosin (20)

Die Verbindung 20 erhält man aus'!-(ß-JMlibofuranosylJ-cytosin mit TPCH.

Beispiel 21 l-(5»-0-Triphenylmethyl-ß-D-ribofuranosyl)3-methylcytosin (21)

Sie Verbindung 21 erhält man durch Umsetzung von l-(ß-D-Hibofuranosyl) 3-methylcytoain mit TiCIi.

Beispiel 22 l-(5^l-0-Triphenylmethyl-ß-D-deoxyribofuranosyl)uracil (22)

Die Verbindung 22 gewinnt man durch Umsetzung von l-(ß-D-Deoxyribofuranosyl)-uraoil mit ZPCK.

Beispiel 23 l-(5*-Q-Triphenylmethyl-ö-D-deoxyribofuranosyl)-cytosin (23)

Diaae Verbindung gewinnt man aus l-(ii-D-Deoäyribofuranosyl)-cytosin und TPCIC.

BeiBpial 24 9-(5 '-O-Triphenylmethyl-ß-D-deoxyribofuranoByl)-adenin (24)

Die Verbindung 24 lässt sich durch Umsetzung von 9-(ß-D-Deoxyribofuranosyl)· adenin mit Triphenylbromäthan gewinnen·

Beispiel 25

, " l-(5^l-0-(p-ltethoxyphenyl)diphenylmethyl-i3-D-deoxyribofurano8yl) 5-ioduraoil (25)

Sie Verbindung 25 lässt sich durch Umsetzung von l-(ß-D-Deoxyribofuranöeyl)5—Joduraoil mit (p-Hethoxyphenyl)diphenylchlormethan gewinnen·

-26-

909887/1765

BAD ORIGINAL

freispiel 2,6

l-(5 *-Q-£riphenylniethyl-ß-D-äeoxyriböfuranOs_l/l)5*· fluoruracil (26)

Diese Verbindung gewinnt man aus 1— (i-#*Dⁱeöly^ibofurattoeyi)5~ fluoruracil und !PCM.

Beispiel 2,1
!-(S'-O-ifriphenylraethyl-ß-D-deoxyi'iböfuranosylJ-thymin (.27)

Diese Verbindung gewinnt man aus !-(B-Ii-Deoxyribofaianosyli-thymin und TPCM. . ·

Beispiel 2β
9~(5 «-o-IriphenyInethyl-ß-D-deOxyribofuranosy1)-guanin (28)

Diese Verbindung gewinnt man aus 9-(a-D-])öoxyribofurano3yl)-»guanin Triphenylbrommethan»

Beispiel 29

9_r(51-0-(p-Methoxyphenyl) diphenylmethyl-ß-D-deoxyribof uranosyl)xanthin (29)

Die Verbindung 29 lässt si oh. durch Umsetzung von 9-(^ß~3 osyl)^xanthin mit (p-Methoxyphenyl)diphenylchlormethan erhalten.

Beispiel 30

9«.(5 '^-(p-Methoxyphenyl) diphenylnethyl-ß—D-deoxyribofuranosyl)hypoxanthin (30)

Die Verbindung 30 stellt man duroh Umsetzung von 9-(ß-^B3)-Beoxyribofaranösyl)-hypoxanthin mit (p-liethoxyphenyl)diphenylchloromethan her«

In derselben Weise wie in Beispiel 1 und den übrigen vorstehenden Beispielen beschrieben, können andere heterocyclische !(S^eTiityi-, 1-^5 *—(p-Kethoxyphenyl)diplieflyliaethyl-, und l-(5'-bis(p-Methoxyphenyl) phenylmethyl-ß-D-ribofuranose und-deoxyribo^ujanose)-Verbindungen hergestellt werden, indem man Triphenylchlormethan₍ "Triphenylbroianiethan,

909807/1705 "^⁷"

SAD ORIGINAL

(p-Lethox,yphenyl)diphenylchlor(oier broin)methan oder bis(p-Methoxyphenyl) phenylchlor(oder broci)i>iethan mit einer !,'-heterocyclischen l-(ß-D-Ribofuranoßyl(deo::yribofurancsyl)-Verbindung umsetzt, bo daß man Verbindungen der Formel II erhält» Verbindungen der Formel II, die auf diese *ίβΪ3β hergestellt werden können, urfccr-on die folgendem *) 9-(TPM-RF)guanin, l-(TPM-RF)5-bromuracil, l-CTPM-EF)5-joduraoil, 9-(TPM-RF)hypoxanthin, 9-(TPlI-RF)xanthin, 9-(TPM-DRF)hypoxanthin, 1-(THI-DHT)thymin, 1-(TPM-DRF)3-methylcytosin, 1-(TPM-DRF)5-methyloytosin, l-(TPM-DRF)5-trifluoriaethyluraoil, l-(lPK-DRF)5-bromuracil, l-(5«-0-(p-l£ethoxyphenyl)diphenyliuethyl-ß-D-deoxyribofuranosyl)5-chloruraoil, 9-(TPlI-DRF)6-mercaptopurin, 1»(5'-O-bis(p-Methoxyphenyl) phenylmethyl-ß-D-deoxyribofuranosyl)3-methyloytosin, l-(5'-0-bis(p-MethoKyphenyl)phenylmethyl-ß-D-deoxyribofuranosyl)5-methyluracil u.a.

Beispiel 31
Ii -Benzoyl-l-(2 ', 3 '-di-O-benzoyl-ß-D-arabinofuranoeyl)-cytosin

Eine Mischung aus .6,2 g l-(5'-O-Triphenylmethyl-ß-D-arabinofuranosyl) cytosin, 40 ml trockenem Pyridin und 6 ml Benzoylchlorid wird bei Eaumtemperatur (24 - 26⁰C) etwa 20 Stunden gerührt. Sie so erhaltene Reaktionsmischung wird in 500 ml kaltes Wasser gegossen und bei Raumtemperatur 3 Stunden gerührt. Der wässrige Teil des Gemisches wird dann abdekantiertf ' das zurückbleibende gummiartige Material wird zweimal mit Wasser gewaschen» welohes jeweils abdekantiert wird. Das gummiartige Material und die festen Substanzen werden in 150 ml Methylenchlorid gelöst; diese Lösung wird nacheinander zweimal mit je $0 ml Wasser und einmal mit 50 ml gesättigter wässriger Natriumchicridlösung extrahiert. Die Methylenchloridlösung wird dann getrocknet, indem man sie über Io g wasserfreies Natriumsulfat leitet, welches sich in einem Sinterglastrichter befindet· Das Trockenmittel wurde anschliessend mit 20 ml Methylenchlorid nachgewaschen. Sie nitrate wurden vereinigt. Sie Methylenchloridlösung wurde ansohlieeseni bei 40⁰Q ift Yakuum eingedampft« Der auf diese Weise erhaltene Rücketand wurde ia. 50 Hl

*) In der folgenden luf zählung werden für den Ausdruck (5 ^t#*O-Triphenyl*· > methyl-ß-D-ribofuranosyl) die Abküraung (XI¹H-Bf) und-für den Aügdruok (5«-O-Iriphenylmethyl-ß-D-deoxiribofurano8yl) die Abküreung (XPlt-SSl¹} ι. verwendet· , . . ^ "

90 9887/1 70S bad orjginal

Chloroform gelöst und unter Bühren mit 6,7 ml Bromwasserstoff in Essigsäure (30 i» Bromwasserstoff) behandelt« Nach 3 Hinuten wurde die Reaktionsmischung auf ein Volumen von 10 ml eingeengt, und zwar im Vakuum bei ' 40°C· Das Konzentrat wurde mit 10 ml gewöhnlichem Chloroform verdünnt und über eine Chromatographiersäule gegeben, die mit 100 g Silikagel (18Ö ml) besohiokt war. Das verwendete Silikagel war eine Brinkman-Kieselsäure für ohromatographische Zwecke} das verwendete Chloroform war mit Kohlenwasserstoff stabilisiert. Die Kolonne wurde mit der dreifachen Menge des Kolonnenvolumens (540 ml ) Chloroform, welches mit Äthanol stabilisiert worden war, eluiert, wobei man eine Fließgesohwindigkeit von etwa 3»5 ml pro Minute anwandte· Die bei dieser Operation abfliessenden Lösungsmittel wurden verworfen» Ansohliessend wurde die Kolonne mit 1,2 ml Chloroform, welches mit Xthanol stabilisiert und mit 3 Volumenprozent Methanol versetzt worden war, mit einer riießgeschwindigkeit von 3,5 ml pro Hinute eluiert· Die bei dieser Operation abfliessenden Lösungsmittel wurden in 20 ml-?raktionen aufgefangen* Jede Fraktion wurde auf die Anwesenheit von Triphenylcarbinol oder Triphenyläther untersucht, indem man jeweils einen Tropfen auf ein Blatt Chromatographierpapier (Whatman Hr. 40) aufbrachte und den Fleck hinsichtlich der Ultraviolett-Absorption prüfte, nachdem man das Papier mit 5Qj6iger wässriger Schwefelsäure besprüht hatte. Auf Grund der Brgebnisse dieser ohromatographischeη Bestimmung wurden die Fraktionen 25 I)Is 43 vereinigt, mit 200 ml Wasser, welches lit 0,5 ml Pyridin enthielt, gewaschen, mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingedampft. Der auf diese Weise erhaltene Rüokstand wurde umkristallisiert, indem man zunächst in ithylacetat löste und dann so viel SSB zusetztet Die die Kristallisation begann; zur Beendigung und Vervollständigung der Kristallisation wurde auf 4⁰C abgekühlt· Ss konnten 3 Kristallernten gewonnen, werden, die alle homogen waren» Wie durch Dünnschicht-Chromatographie unter Verwendung von Silikagel und einem LÖsungsmittelgemisoh aus lOff Methanol und 90ji Benzol festgestellt werden konnte· Sie Menge der drei Ernten betrug jeweils 1,45 g, Q»94Og und 0,740 g, insgesamt also 3*13 S (44?0* die so gewonnene Verbindung 31 wies einen Schmelzpunkt von 177,5 bis 178*0 auf·

909887/1765

-29-8AD ORl&NAL

so 162063Q

Analyse t Berechnet für ^C3_O ^S ₂5°_Q* ^{Cl 6}4>9f H« 4,5! Nt 7,57

gefunden ι Cj 63,95* Hi 4^7* Ni

Beispiel 32

N⁴-Acetyl-l-(2»,3«-di-O-acetyl-5»-O-triphenylmethylß-D-arabinofuranosyl)cytosin (32)

Eine Suspension aus 750 mg 1-(TPM-Ai¹)cytosin *) in 9 ml Pyridin wurde
unter Rühren mit 3 ml Essigsäureanhydrid behandelt, bis eine einheitliche Lösung erhalten worden war. Das Hühren wurde weitere 2 Stunden fortgesetzt, wobei sich die Lösung in eine kristalline Masse umwandelte· Sie Kristallmasse wurde in 90 ml !fässer eingetragen!, das weisse kristalline Material wurde abfiltriert, sorgfältig mit Wasser gewaschen und getrocknet! auf
diese Weise erhielt man 950 mg Kristalle mit Ft 249 -259,fc. Hach dem Umkristallisieren aus Äthanol lagen 8DO mg farblose Rosetten der Verbindung 32 mit F» 251 - 252⁰C vor.

Analyse« Berechnet für °3λ^Η33^Ο7^ΙΓ3^{ι Ci 66}»7⁶> ^Ht 5»44l Ni 6,87

gefunden» Gt 67,O4i Ht 5»47» Nt 7|00

Beispiel 33

N -(ß-Cyolopentylpropionyl)-l-(2^l _>3^l-ii-o-(ß-cyclopentylpropionylJ-ß-D-arabinofuranoeyl)cytosin (33)

Ia der in Beispiel 31 beschriebenen Weise wurde 1-(TPM-AF)cytosin mit
ß-Cyolopentylpropionylchlorid in Pyridin und anschliessend mit Bromwasserstoff, welcher in Essigsäure gelöst war, behandelt· Auf diese Weise
erhielt man die Verbindung 33*

Beispiel 34-Hr-Lauroyl-l-(2*₁ 3'-di-0-lauroyl-ß-D-arabinofuranosyl)-cytosin (34)

Sie Verbindung 34 erhält man, wenn man in der in Beispiel 31 beschriebenen Weise 1-(TPM-Al)cytosin mit Lauroylohlorid in Pyridin und danach mit

*;In diesem und in den nachfolgenden Beispielen wird für den ^J

Ausdruck (5'-0-Triphenylmethyl-ß-D-arabinofuranosyl) die Abkürzung TPM-AF verwendet.

909887/1715 ßAD orig-'mal

- je· -

1520630

Bromwasserstoff in Essigsäure umsetzt·

Beispiel 35

N —Propionyl-l-(2', 3'-di-O-propionyl-5 ^t-triphenylmethyl-I-D-arabinofuranosyl)oytosin (35)

Die Verbindung 35 erhält man, wenß^a?n der in Beiepiel 32 beschriebenen Weise 1-(TPM-AF)cytosin mit Propionsäureanhydrid in Pyridin umsetzt·

Beispiel 36

N⁴-Butyryl-9-(2«,3 »-di-O-butyryl-5 •-Q-triphenylmethyl-ß-D-•arabinofuranosyl)adenin (36)

Die Verbindung 36 erhält man, wenn man in der in Beispiel 32 beschriebenen Weise 9-(!PPM-AF)-adenin mit Buttersäureanhydrid in Pyridin umsetzt·

Beispiel 37

l-(2·,3'-Di-O-phenylaaetyl-S•O-triphenylmethyl-ß-D-arabinofuranosyl)thymin (,37)

Die Verbindung 37 kann man gewinnen, wenn man in der in Beispiel 32 beschriebenen Weisö4-(TPH-AF)thymin mit Phenylessigsäureanhydrid in Pyridin umsetzt· '

Beispiel 38

1- (2', 3 · -BiWwhexanoyl-5' -O-triphenylme thyl-ß-D-arabinofuranoeyl)uraoil (j

Setzt man in der in Beispiel 32 beschriebenen Weise i-(TPM-lP)uraoil mit Hexancarbonsäureanhydrid in Pyridin um, so gewinnt man die Verbindung

Beispiel 39

9-(2^fc, 3' -^DiO-phenylpropionyl-S · -O-triphenylmethyl-ß-liarabinofiiranosyl) xanthin (39) .

Setzt man in der in Beispiel 32 beschriebenen leise 9-(IPH-AE¹)xanthin· mit Phenylpropionsäureanhydrid in Pyridin um, so erhält man die Verbindung 59·

909887/

■·'■'■ BAD

Beispiel 40 1-(2·,3'-Di-O-benzoyl-ii-D-arabinofuranosyl)5-ohlorouraoil (40)

In der in Beispiel 31 beschriebenen Weise wurde 1-(TPM-AF)5-chloruracil mit Benzoylchlorid umgesetzt* das so entstandene Produkt wurde mit einer Lösung von Bromwasserstoff in Essigsäure behandelt. Auf diese Weise erhielt man die Verbindung 40.

Beispiel 41
N _Benzoyl-9-(2 *,3'-di-O-benzoyl-ß-D-arabinofuranosyl)-guanin (41)

In der in Beispiel 3I "beschriebenen Weise wurde 9-(TPM-AF)guanin mit Benzoylchlorid umgesetzt! das so erhaltene Reaktionsprodukt wurde mit einer Lösung von Bromwasserstoff in Essigsäure behandelt· Auf diese Weise erhielt man die Verbindung 4L

Beispiel 42 9—(2¹,3*-Di-0-benzoyl-ß-D-arabinofuranosyl)ömercaptopurin (42)

Durch Umsetzung von 9-(TPM-AF)6-mercaptopurin mit Benzoylohlorid in der in Beispiel 31 beschriebenen Weise und weitere Behandlung des so entstandenen Produkts mit einer Lösung von Bromwasserstoff in Essigsäure erhielt man die Verbindung 42·

Beispiel 45

9-(2 * j13'-Di-Ö-acetyl-5 Ό-triphenylmethyl-ß-D-arabinofuranosyl) xanthin (43)

Diese Verbindung lässt sich gewinnen, wenn man in der in Beispiel beschriebenen Weise 9-(TFli-^F)uracil mit Essigsäureanhydrid umsetzt.

Beispiel 44

l-(2·,3'-Di-O-phenylacetyl-5*-O-triphenylmethyl-ß-D-arabinofuranosyl)S-fluoruracil (44)

Die Verbindung 44 lässt sich gewinnen, wenn man in der in Beispiel 32 beschriebenen leise l-(TPH-AF)5-fluoruracil mit Phenylessigsäureanhydrid umsetzt·

909887/1785 ~?²*

Beispiel 45

N⁴-Valeryl-9-(2»,3'-di-O-valeryl-5·-O-triphenylmethyl-l-D-arabinofuranosyl)5methylcytosin (45)

Setat man in der in Beispiel 32 beschriebenen Weise 9-(TEM-^Ai^l)5-iaethylcytosin mit Valeriansäure/um, so gewinnt man die Verbindung 45·

Beispiel 4-6 ¹-(2^ri3^l-Di-0'-benzoyl-ß-3)-ribofurano8yl)uracil (46)

Setzt man in der in Beispiel 3I beschriebenen Weise 1-(IPM-As¹) uracil mit Benzoylchlorid und das so entstandene Produkt mit einer Lösung von Bromwasserstoff in Essigsäure um, so gewinnt man die Verbindung 46·

Beispiel 47 lr-Benzoyl-l-(2 *,3 »-di-O-benzoyl-ß-B-ribofuranosyl)-cytosin (47)

Setzt man in der in Beispiel 31 beschriebenen Weise Ι-

mit Benzoylohlorid und dae so entstandene Produkt mit Bromwasserstoff

in Essigsäure um, so gewinnt man die Verbindung 47·

Beispiel 48 l-(2^l,3 »-Bi-O-benzoyl-fi-B-ribofuranosyl)thymin (48)

Setzt man in der in Beispiel Jl beschriebenen Weise l~(XPH-JLP)thymin mit Benzoylohlorid und das so entstandene Produkt mit einer Lasting von Bromwasserstoff in Essigsäure um, so gewinnt man die Verbindung 4Ö·

Beispiel 49 1«(2 ·, 3 ·-Bi-0-lauroyl-ß-B-ribofurano sy 1) 5-£luararaeil (49)

Zur Gewinnung der Verbindung 49 setzt man in der in Beispiel 31 beschriebenen Weise zunächst 1-(TPlC-AI¹)5-fiuoruraoil mit LauroylChlorid um und behandelt das so entstandene Produkt mit einer Losung von Bromwasserstoff in Essigsäure·

-33- * -antoydrld

809887/1715 ^ßAD A

Beispiel 50
N -Decanoyl-9-(2'_>3'-di-0-decanoyl-ß-D-ribofuranosyl)-adenin (50)

Man setzt in der in Beispiel 3I beschriebenen Weise 9-(TPU-AF)adenin mit Deoanoylchlorid um und behandelt das so entstandene Produkt mit einer Lösung von Bromwasserstoff in Essigsäuref auf diese Weise erhält man die Verbindung 50.

Beispiel 51 9-(2 · _f3•-Di-O-octanoyl-ß-D-ribofuranosylJö-aercaptopurin (5I)

Man behandelt in der in Beispiel 31 beschriebenen Weise 9-(TPM-AF)6-mercaptopurin zunächst mit Octanoylchlorid und dann mit Bromwasserstoff in Essigsäure, Auf diese Weise erhält man die Verbindung 51.

Beispiel 52 l-(3'-0-Benzoyl-u-D-deoxyribofuranosyl)uraoil (52)

Kan setzt in der in Beispiel 31 beschriebenen Weise l-(TPli-DRF)uracil *} mit Benzoylchlorid und das so entstandene Produkt mit einer Lösung von Bromwasserstoff in Essigsäure um. Als Endprodukt fällt die Verbindung 52 an»

Beispiel 53 IP-Bensoyl-1»(3*-0-benssoyl-ß-D-deoxyribofuranosyl)cytosin (53)

Man setzt in der in Beispiel 3I beschriebenen Weise zunächst 1-(TPM-DHF)-cytosin mit Benzoylohlorid und das so erhaltene Produkt mit Bromwasserstoff in essigsäure ua_e Auf diese Weise erhält man die Verbindung 53*

Beispiel 54 1-(3 ^l-O-Benzoyl-ß-J>-deoxyribofuranosyl)5-flurouracil (54)

Durch Umsetzung von 1-(TPM-DHF)5-fluxuraoil zunächst mit Benzoylchlorid und dann mit einer Lösung von'Bromwasserstoff in Essigsäure in der in Beispiel 31 beschriebenen Weise, erhält man die Verbindung 54·

*)Bezüglich der Abkürzung (TPM-DBF) vergl. die Fußnote Ό4-

auf Seite 27· ...

909607/1710

Beispiel 55
Ii Ancetj'l-l-(3 '-O-acetyl-S-D-deoxyribofuranosylJS-methylcytosin (55)

Durch Umsetzung von 1-(TKi-DBF)5~methylcytosin zunächst mit Benzoylchlorid und dann mit Bromwasserstoff in Sssigsäure in der in Beispiel -31 beschriebenen Weise, erhält man die Verbindung 55·

Beispiel 56
9-(3^l-0-Benzoyl-ß-D-deoxyribofuranosyl)6-niercaptopuxin (56)

Durch Umsetzung von 9-(ΤΡϊί-DEF)6-mercaptopurin mit Benzoylchlorid und des so entstandenen Produktes mit Bromwasserstoff in Essigsäure in der in Beispiel Jl beschriebenen Weise, erhält man die Verbindung 56·

Beispiel 57
l-(2 *»5'-Di-O-acetyl-5»-triphenylmethyl-ß-D-ribofuranosylJuracil (57)

Setzt man wie in Beispiel J2 beschrieben, l-(TEM-HP)uracil *) mit Essigsäure anhydrid um, so erhält man die Verbindung 57·

Beispiel 58

1- (2' ■» 3' -Di-O-aoetyl-5 ♦ -triphenylmethyl-ß-D-ribof uranosyl) 5-fluoruracil ()

Setzt man in der in Beispiel 32 beschriebenen Weise 1-

fluoruracil mit Essigsäureanhydrid um,so erhält man die Verbindung 58·

Beispiel 59

9- (2 *, 3 *-Di-0-propionyl->5 »-triphenjplmethyl-ß-D-ribofuano syl) -6* mercaptopurin (59) ·

Durch Uasetaung von 9-(EHiX-RF)6-mercaptopurin mit Bssigsäureanhydrid in der in Beispiel 32 beschriebenen Weise, erhält man die Verbindung 59*

In der in Beispiel 31 beschriebenen Weise können auch andere Acylverbindungen der Formel IV hergestellt werden, indem man Verbindungen der Formel II mit

*) Bezüglich der .Abkürzung (tKS-BF) vergl. die Fußnote auf Seite 27.

9096a?/ ms *

OW

- If -

Siiureanh-driden, Aoylchloriden oder -bromiden (mit 2-12 Kohlenstoffatomen) oder Anissäure umsetzt und die 5'-Äthergruppe mit Halogenwasserstoff, insbesondere Bromwasserstoff oder Jodwasserstoff spaltet· Folgende Yerr bindungen lassen sich beispielsweise erhalten» IP-La uroyl-9-(2 ·, 2^dI-O-IaUrOyI-B-D-BrBbInOfUrSnOSyI) adenin, 9-(2·, 3'-Di-0-valeryl-ß-:D-ribofurenosyl)hypoxanthin_l 9-(2·,3'-Di-O-hexanoyl-.3-D-ribofuranosyl)xanthin, 3-(2 · ,3 »-Di-O-octanoyl-ß-D-ribofuranosyl)3-uracil, 9-(2^r,3'-Di-O-isobutyryl-ß-D-ribofuranosyl^-fluoruracil, l-(2·,3'-Di-0-anisoyl-ß-D-ribofuranosyl)-thymin, IF-Phenylacetyll-(2 ^f,3^l-di-0-phenylaeetyl-ß-D-ribofuranosyl)3-methylcytosin| l-(3'-O-Butyryl-ß-D-deoxyribofuranosylJS-joduracil, l-(3'-O-Undecanoyl-ß-D-deoxyribofuranosyl)5-trifluormethyluracil, l-(3*"*0-Decanoyl-ß-D-deoxyribofuranosyl)5-bromuracil, 9-(3^l""O-Heptanoyl-ß-D-deoxyribofuranosyl)guanin, 9-(3'-O-Nonanoyl-ß-D-deoxyribofuranosylJö-mercaptopurin, 9-(3'-O-Ootanoyl-ß-D-deoayribofuranosyl)xanthin u.a.

Beispiel 60

l-(3'-O-Propiänyl-5^t-triphenylmethyl-ß-D-deoxyriboiuranosyl) uracil (6o)

Die Verbindung 60 kann man gewinnen) wenn man l-(t£PU-DBf)uraoil in der in Beispiel 32 beschriebenen Weise mit Propionsäureanhydrid umsetzt·

Beispiel. 61

1-(31-O-Butyryl-5'-triphenylmethyl-ß-D-dioxyribofurano syl)5-fluoruracil (6l)

Zur öewinnung der Verbindung 61 setzt man in der in Beispiel 32 beschriebenen lieise 1-(TPM-DIi¹)^-fluoruracil mit Buttersäureanhydrid um·

Beispiel 62

ΪΓ·ΆθβΪ7ΐ·>Ί-(2* ,3 '-di-O-acetyl-B-D-arabinofuranosyl)-cytosin (62) und l-(2^lt3'»I>i-O-acetyl-ß-'D-arabinofuranosyl)oytosin (62a)

Sine Suspension aus Io ml 80j£iger wässriger Bseigsäure und 1,3 g des S'-priphenylmethylderivates der Verbindung 62 erhitzt man 10 Minuten sua Rückfluss» Danach wird die Suspension abgekühlt, durch nitrieren ron

909887/1715 -36-

ausgefallenem !Eriphenylcarbinol befreit und im Vakuum bei einer Temperatur zwischen JO und 40 C eingedampft. Der Rückstand Bird mit 20 ml Methanol aufgenommen und über eine Kolonne mit 200 ml Silikagel gegossen. Sie Kolonne wird anschliessend mit dreissig 20-ml-Fraktionen (Methanol 25$, Benzol 75$) eluiert. Die Fraktionen 5 bis 11 werden vereinigt und aus Aoeton-SSB umkristallisiertf auf diese Weise erhält man 240 ml von einer Substanz mit F* I7I - 172|5 C. Nach nochmaligem Umkristallisieren liegt die reine Verbindung 62 mit F« 174,5 bis 175»5°C vor.

Analyse» Bereohnet für C₁₅H₁₉O₈Ii₅I Qt 46,76* H* 5|19l tfi 11138

gefunden t Ct 48,79> Et 4,81| Nt 11,66

Sie Fraktionen 26 - 29 enthielten eine kleine Menge der Verbindung 62a.

Beispiel 63
N -AnXSOyI-I-(2',3^l-di-0-benzoyl-ß-D-arabinofuranosyl)-oytosin (63)

A» N -Anisoyl-l-ß-B-arabinofuranosylcirtosin (6}a)

5 g 1-ß-B-Arabinofuranosyloytoein und 25 ml Anisoylchlorid wurden in 100 ml Pyridin gelöst| die Lösung wurde bei etwa 25 C 6 Stunden gerührt* Diese Mischung wurde dann mit 4OO ml 1»5 η Chlorwasserstoffwäure versetzt und über Nacht bei Baumtemperatur, d.h. zwischen 22 und 24 C, abgestellt· Nach dieser Zeit wurde die ausgefallene feste Substanz abfiltriert, gewaschen, sorgfältig mit Wasser verrieben und an der Luft getrocknet· Sie trockene Substanz wurde in einer Mischung aus 275 al Wasser und 251 ml Äthanol suspendiert und auf einem Dampfbad auf 70 C erwärmt. Danach kühlte man auf 4°G ab und stellte den pH-Wert jlua durch Zugabe von 1 η Natriumhydroxid-Lösung auf 8 ein· Sie feste Substanz wurde sofort abfiltriert, alt Wasser gewasohen, an der Luft getrocknet, erneut mit 300 ml Äther gewaschen, filtiiäert und an der" üttft getrocknetf Ausbeute an roher Verbindung 63at 16,6 g. Das Bohprodukt wurde in 195 ml Pyridin und 65 ml Wasser aufgenommen und ait Sis abgekühlt« Unter lebhaftem Rühren versetzte man dann die auf die Temperatur des Sisb&des abgekühlte Lösung im Verlauf von einer halben Stunde mit 350 ml 1,5 η Natriumhydroxid. Sie Reaktion wurde beendet» indem man 350 ml Sowex 50 X 8 (Feinheitt 450 - I6OO Maschen/cm ) Pyridiniumhare auaetate und"20 Minuten (pH 7»0) rührte» Anschliessend wurde das

β09887/17·8 _eAD0RlaiNAL .„.

unlösliche Material von der Lösung abfiltriert| der Rückstand wurde mit Wasser gewaschen· Die vereinigten Filtrate wurden im Vakuum bei 5O°C zur Trockne eingedampft· Der Rückstand wurde dreimal mit je 200 ml Äther verrieben und filtriert· Die feste Substanz wurde danach in 300 ml siedendem Wasser suspendiert und dreimal filtriert. Sie vereinigten Filtrate wurden unter vermindertem Druck auf ein kleines Volumen eingeengt} auf diese Weise erhielt man 2,0 g eines Produktes mit Fi 197 - 2OO°C (unter Zersetzung). Dieses Rohmaterial wurde viermal aus Wasser und einmal aus Äthanol umkristallisiertf danach lag die reine Verbindung 6ja mit Ft200,5 his 201,5 C (unter Zersetzung)vor.

Analyse» Berechnet für C₁₇H₁₉O₇N « G« 54»11# Ht 5»O8f Hs 11,14

gefunden 1 Ct 54,38» Ht 4,82j Ii: 11,31

B. II -Aniaoyl-l-(5'-O-ip-methoxyphenyl)diphenylmethyl-ß-D-arabinofuranosyl)cytosin (63b)

Sine Lösung von 4»8 8 der Verbindung 63a in 50 ml Pyridin wurde mit (p-Iiethoxyphenyl)-di-phenylchlormethan behandelt· Nach 9 Stunden setzte man 10 ml Methanol zu und goß Pyridinlüsung unter Rühren in 6OO ml Wasser· Sobald die gebildete guumiartige Substanz koaguliert war, wurde die L'Jsung abgegossen, der Gummi mehrere Male mit Wasser (unter jeweiligem dekantieren) gewaschen und dann, in Methylenchlorid aufgenommen· Die Methylenchloridlösung wurde zweimal mit Wasser und einmal mit gesättigter Uatriumohloridlösung gewaschen· Nach dem Eindampfen der gewaschenen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrockneten Lösung im Vakuum bei 30°C verblieb ein Rückstand» der in Benzol gelöst und über eine Kolonne mit Silikagel (5»8 x 4^a cm) gegeben'wurde» Sie Kolonne wurde wie folgt eluiertx zwanzig 100 ml-lraktionen mit 2$ Methanol 12nd 9836 Benzol, sowie 40 100 ml-Tralctionen mit 5ji Methanol und 95)6 Benzol. Die Fraktionen 49 - 60 ergaben naoh dem Verreiben mit ither eine feste kristalline Substanz, die aebgetrennt und mit ither gewaschen wurde· Auf diese Weise erhielt man 4,21 g der rohen Verbindung 63 b·

C» Verbindung 65

4 Β der Verbindung 65 b in 20 ml trockenem Eyridin wurden mit 3 ml Benzoylohlorid behandelt· Der geschlossene» die Reaktionsmischung enthaltende

909887/1715

BAD

-38·

Kolben wurde 18 Stunden bei Raumtemperatur abgestellt. Anschliessend wurde das Reaktionsgeinisoh in Eiswasser gegossen und 3 Stunden bei etwa 25 C gerührt, wobei sioh eine gummiartige Substanz absetzte. Dieses Rohprodukt wurde zweimal mit 50 ml Methylenohlorid extrahiert§ die Sxtraktie wurden vereinigt, fünfmal mit Wasser und einmal mit gesättigter wässriger Natriumsulfatlösung gewaschen und im Vakuum zur Trockne eingedampft· Die Rückstände wurden bei vermindertem Druck mit Toluol codestilliert, um zurückgebliebenes Pyridin zu entfernen· Der so gereinigte Rückstand wurde in 50 ml Dioxan aufgenommen und mit 80?biger Essigsäure behandelt· Dana oh versetzte man die Lösung mit so viel Chlorwasserstoffsäure, daß sich eine 0,03 η Lösung ergab. Sohliesslich liess man das Reaktionsgemisch 5 Stunden stehen· Danach wurden die Losungsmittel im Vakuum bei 40 C abdestilliert und der Rückstand mit 100 ml einer Chloroform-Äthanol-Mischung (l t l), die dann wieder verdampft wurde, behandelt· Der Rückstand wurde erneut in Chloroform aufgenommen und über eine Silikagel-Kolonne (2_fc8 cm Durchmesser, 40 cm Hohe und 250 ml-KoIonnenvolumen) gegeben» Die Kolonne wurde viermal mit 250 ml-Fraktionen Chloroform, w elches 0,75 0» Ethanol enthielt, und dann mit sechs 250 ml-Fraktionen Chloroform, welches zusätzlich 32& Methanol enthielt, eluiert*. Die Fraktionen 5 bis 8 wurden vereinigt und an einer Silikagel-Kolonne (2,3 Qm x 5° cm) absorbiert. Diese Kolonne wurde dann mit dem vierfachen Kolonnenvolumen gewöhnlichem Chloroform und ansohliessend mit 2 1 einer yfcLgsn. liethanol-Lösung in Ghlorofosm eluiert, wobei man 20 ml-Fraktionen bei einer Tropfgeschwindigkeit von 5 ml pro Minute auffing· Die Fraktionen 46 - 54 (220 ml) enthielten das gewünschte Material, welches aus Äthylaoetat-SSB umkristallisiert wurde# F« 172 - 173°C| dieses material stellte die reine Yerbindung 63 dar·' ~

Analyse t Berechnet für C₃₁H₂₇Ir₅Og* Ki 7,18

gefunden ι M 7»23

In der in Beispiel 32. beschriebenen Weise können andere acylierte und in 5*-Stellung verätherte Verbindungen der Formel III hergestellt werden, indem man eine Verbindung der Formel II Mit'einem Acy !halogenid, einem Säureahhydrid oder Änissäure als Äcylierungsmittel behandelt, -auf diese Weise kann man folgende Verbindungen erhaltent

90 9887/1785

BÄD ÖRIG5NAU

*) l-(2«,3»-Bi-0-heptanoyl~TPM-RF)5-joduracil| N⁴-Phenylacetyl-l-(2·, 3t-di-Ö-phenylaoetyl-,N -Hexanoyl-l-(2',3'-di-O-hexanoyl-, Ir-Phenylpropionyl-1-(2·,3·-di-O-phenylpropionyl-, lF-Butyryl-l-(2·,3'-di-O-butyryl-, N⁴-Valeryl-1-( 2«, 3'-di-O-valeryl-, N⁴-Hexanoyl-1-(2·,3'-di-O-hexanoyl-, N -Heptanoyl-l-(2»,3'-di-O-Heptanoyl- und N -Ootanoyl-1-(2·,3 '-di-O-octanoyl-TPii-iFjoytosini Wⁱ*-lcetyl-l-(2^l,3'-di-O-acetyl-5"-O-, N⁴-Acetyl-l-(2',3'-di-O-acetyl-5 «O-bis- und K⁴-Phenylpropionyl-1-(2',3^l-di-0-plienylpropionyl-5^l-0-(p-methoxyphenyl)diphenylmethyl-ß«»D-arabinofurenosyl)cytosinf N -Valeryl-l-(2'_f3'-di-0-valeryl-TPM-BF-cytosin| l-(2',3^l-Di-0-hexanoyl-THi-AF)uracil| 9-<2',3»-BiiO-heptanoyl-TPM-DRP) xanthin^ l-(2 ^l,3'-Di»0-octanoyl-IPM-AP)guanin> Ii -Acetyl-l-(2 '^'-di-O*· acetyl-S^O-Cp-methoxyphenylJdiphenylmethyl-ß-D-deoxyritiofuranosylJadenini N -Acetyl-l-(2',5'-di-O^acetyl-J»-O-bia-Cp-lnethoxyphenylJphenyliaethyl-i-D-deoxyribofuranosyl)3-methylcytoein> l-(2 ',3 '-Divd-phenylpropionyl-S¹^- (p-methoxyphenylJ-diphenylmethyl-ß-D-ribofuranosylJS-chloruraoili N-ValβΓyl-l-(2'i3···di-0-valeryl-Tl·M-AF)3-mβthyloytoBin| ΙΓ-ltxanoyl-l-(2',3^l-di-0-hexanoyl-TPM-Ri')5-nie'fchylcytosin| 9-(2S3^t-Bi-O'-heptanoyl·» TPM-DIUP)hypoxanthin# l-(2' ,3^l-Di-0-o«tanoyl-TPM-AI^l)5^l-trifluormethyluraoil| K -Aoetyl-9-(2*«3'-di-O-diaoetyl-5 ^f-0-(p-fflethoxyphenyl)diphenylmethyl-fl·- D-ribofuranosyl)guaninj N -Aoetyl-(2·,3·-di-O-acetyl-5 tO-toieip-methoxyphenyl) phenylmethyl-ß-D-arabinofuranoeyl)adenin| li^-Aniaoyl-l-(2^li3^l-di-O-aniBoyl-5·-O-(p-methoxyphenyl)diphenylmethyl-ß-D-deoxyribofuranoByl)5-inethylcytosin u.a«

Beispiel 64

lP-Butyryl-l-(2·,3(-di-O-butyryl-ß-D-arÄbinofuranosyl)-cytoein (64)

Sie Verbindung 64 erhält man, wenn man in der in Beispiel 62 beschriebenen weise N -Butyryl-l-(2^l,3^l-di-0-butyryl-!I?PlI-iP)cytoein in wässriger Essigsäure erwärmt·

Beispiel 65

N -Phenylacetyl-l-ί2».3 *-di-O-phenylacetyl-ß-Ä-arftbinofuranosyl)cytosin (65)

Die Verbindung 65 erhält man, wenn man in der in Beispiel 62 beschriebenen '

♦)Bezüglich der verwendeten Abkürzungen verlg· die Fußnoten auf den Seiten 27 und 29 und 33.

Weise N^-Phenylaoetyl-l-(2^l,3*-di-0-phenylacetyl«.TP)I-A]?)oytoein in wässriger Essigsäure erwärmt·

Beispiel 66
N -Hexanoyi-l-(2·,3'-di-O-hexanoyl-ß-D-arabinofuranasylJoytosin (66)

Sie Verbindung 66 erhält man, wenn man in der in Seispiel 62 beschriebenen Weise N -Hexanoyl-l-(2', 3'-di-O-hexenoyl-TPM-AI¹) cytosin in wässriger Essigsäure erwärmt*

Beispiel 67

N -Phenylpropionyl-l-(2',5^l-di-0-phenylpropionyl-ß*»D-arabinofuranosyl)cytosin (67)

Die Verbindung 67 erhält man, wenn man in der in Beispiel 62 beschriebenen Weise K -Phenylpropionyl-l-(2',3'-di-O-phenylpropionyl-IPK-AF)cytosin in wässriger Essigsäure erwärmt·

In derselben Weise wie in Beispiel 62 beschrieben! können andere N-Aoyl-l-(2·,3••di-O-aoyl-ß-D-arabinofuranosyl)cytosine hergestellt werden_f indem man die entsprechenden lr.-Aoyl-l-(2^t,3^l-di-O-acyl-5^I-O-triphenylmethyl-S-D-arabinofuranosylJoytosine mit wässriger Essigsäure erwärmt. Folgende Verbindungen lassen sich beispielsweise herstellen»

Λ Q

If -Valeryl-l-(2',3'-di-O-valeryl-B-B-arabinofuranosyl)cytosin! N Hexanoyl-l-(2',3'-di-O-hexanoyl-ß-D-arabinofuranosyl)guanin, II -Heptanoyll-(2',3^l-di-0'heptanoyl-ß-D-arabinofuranosyl)adenin, IT-Octanoyl-l-(2 ·, 3 *-di'-0-octanoyl-ß-D-arabinofuranosyl)3-methylcytosin, II^~Benzoyl-l-(2 ', 3 '-di-O-benzo/l-S-D-arabinofuranosyl)-cytosin, "S -Anisoyl~9-(2 ·, 3 *-di-Ö-anisoyl-ß-D-arabinofuranosy_vl)-adenin, 9-(² '^'-Di-O-furanosyl)xanthin, Ii -Octanoyl-l-(2',3'-di-O-octanöyl-ß-D-arabinofuranosyl) 3-methylcytosin, H -Decanoyl-9-(2^! _f3^l-di-0-decanoyl-ß-D-ärabinofuranosyl)-guanin, H -Butyryl-1- (2', 3' -di-0-butyryl-ß-D-arabinof uranosyl) 5-niethyl·» oytosin, ?-(2·,3'-Di-O-phenylpropionyl—ß-D-ribofuranosyl)~6mercaptopurin| N -Propionyl-l-(2',3^l-di-0-.-ropionyl-ß-B-arabinofuranosyl)5-methylcytosin, l-(2»,3'-Di-O-Cß-cyclopentylpropionylJ-ß-D-ribofuranosyl)5-Joduraoil,

909087/176 6

BAD öftl6>NÄt

B-D-deoxyribofuranosyl)-urscil, ltrifluorinethyluraoil, !-(

J, l-(j5 '-O-Valeryl-, 3 ^l-Di-0-ber.zoyl-3-D-ribofuraii03j 1)5

Beispiel 66
l-ß-D-Arabinofuranosylcytosin-5¹-phosphat (68)

Zu einer Lösung- von 40 ml Pyridin und 0,325 m 2-Cyanoäthylphosphat gab man 2,5 g N --ucetyl-l-(2·,3'-di-Q-acetyl-S-D-arcbinofuranosyl)cytosin, welches eine kleine Men_ee 4.-(2',3 '-Di-O-acetyl-^-D-i-rE-tinofuranosyl)-cytosin enthielt. Anschließend gab man weitere 20 ir.l Pyridin zu, die 5,6 g Dicyclohexyloarbodiimid enthielten» Die Roiiktionsmischung wurde in. Dunklen 2 Tage geschütteltj danach wurden 10 ml Wasser zugesetzt und die Lösung auf 4O⁰C erwärmt. Das Reaktionsgemisch wurde wiederum eine Stunde geschüttelt» danach wurden weitere 75 ml, Wz.3ser zugesetzt und die Lösung durch Filtrieren von gebildetem unlöslichen DicycloLexylharnstoff befreit. D-i3 Piltrat wurde eingedampft, mit 50 ml Sasser verdünnt und wieder eingedampft, um das restliche Pyridin au entfernen· Der so erhaltene SückBt&r.d wurde zwischen Wasser und iLther, I50 al (lil), verteilt, der wässrige .Anteil wurde nach der zweiten Extraktion im Vakuum von Äther befreit. Die zurückbleibende v/äsarige Lösung (90 ml) wurde mit 2,16 g (9OmIIoI) Lithiumhydroxid behandelt. Die Lösung wurde eine Stunde auf 100 C erwärmt· Danach wurde die Suspension abgekühlt und durch Filtrieren von Lithiumphosphat befreit. Die feste Substanz wurde mit 0,01 η Lithiumhydroxid-Lösung gewaschenf das aaschw-sser wurde mit der- Filtrat vereinigt. Das Piltrat wurde auf einen pH-Wert von 7 eingestellt, und zwar durch Zugabe eines sauren Austauscherhazes (Howex 50 (H )). Das Gemisch wurde dann wieder filtriert, um das Harz zu entfernen. Die Lösung wurde auf ein Volumen von 25 ml eingedampft, wobei man unter vermindertem Druck bei 40 0 arbeitete. Anschlieseend wurde die Lösung über 75 ml frisches Dowex 50-Harz gegeben. Das Harz wurde mit Wasser eluiert, bis der pH-Wert des Eluates im Bereich von 4-5 lag· Der pE-Wert der gewonnenen Lösung wurde durch Zugabe von konzentriertem Ammoniumhydroxid auf 7i5 eingestellt. Die daa Produkt enthaltende Lösung, etwa 2oo ml, wurde an einer mit Dowex AG-I (Formiat)(l25Bl-) beschickten Kolonne absorbiert; die Kolonne wurde mit 125 ml Wasser eluiert.

909887/1785

BAD OR/GiNAL

-42-

Anechliessend wurde die Kolonne ein zweites Mal mit 0,02 m Imeisensäure-Lösung eluiertj dieses Eluat wurde in 20 ml-Fraktionen "bei einer Fließ-, geschwindigkeit von 2 ml pro Minute aufgefangen· 200 ml Vorlauf wurden verworfenf die Fraktionen 13 - 35 wurden vereinigt und lyophilisiert. Man erhielt auf diese Weise einen weißen kristallinen Niederschlag in einer Menge von 25O mg. Dieses Material wurde zweimal aus Wasser bei 4 C umkristallisiertf am Schluß der Behandlung lag die Verbindung 68 in Form feiner Nadeln vor.

Analyse» Berechnet füri C₉H₁ OgII₃Pt Cg 33,441 Hj 4,37* H« 13,00*

P* 9,58

gefunden t Gt 33,37f fit 4,βθ; Nt 12,6lj

Pt 9,75

Beispiel 69
lK-Benzoyl-l-ß-D-arabinofuranoeylcytosin-5'-phosphat (69)

Man stellte eine Lösung von 50 mMol Pyridinium-2-oyanathylphosphat in 10 ml trockenem Pyridin her. Eu dieser Lösung gab man 2,77 β N -Benzoy1-1-(2^t,3^l-di-0-benzoyl-ß-D-arabinofuranosyl)oytosin und dampfte die Lösung zur Trockne ein. Das Gemisch wurde in 25 ml Pyridin gelöst, mit 3,09(150 mliol) Dicyclohexylcarbodiimid versetzt und 5 l/2 Tage bei Eaumtemperatur geschüttelt· Danach setzte man 15 ml Wasser zu und extrahierte die Mischung zweimal mit SSB. Die gebildete unlösliche Harnstoffverbindung wurde abfiltriert· Die Lösung wurde mit 40 ml mit Eis auf etwa O⁰S abgekühltem Pyridin verdünnt und auf einen Natriumhydroxidgehalt von etwa 1 η eingestellt, indem man etwa 40 ml eiskaltes 2 η Natriumhydroxid-Lösung zusetzte· Die Reaktion wurde nach 20 Minuten durch Zugabe eines Überschusses an Pyridinium-Dowex 50 X θ beendet. Das Harz wurde abfiltriert und mit Wasser gewaschenf dl· Waschwässer und das Filtrat wurden vereinigt und nach Zugabe von 200 mg Ammoniumbicarbonat unter"vermindertem Druck auf etwa 25 ml eingedampft. Der in der 25 ml-Lösung gebildete Niederschlag wurde abfiltriert. Das Filtrat wurde unter vermindertem Druck eingedampft^ der Rückstand wurde in einem Lösungsmittelgemisch aufgenommen, das aus 1 m*Ammoniumacetat (pH 6) und Isopropylalkohol im Verhältnis 2t 5 bestand· Die Lösung wurde an einer Cellulosekolonne mit einem Kolonnenvolumen von I850 ml absorbiert·

909.887/1765 . -45-

BAD ORIGINAL'

-¥S- to

Sie Kolonne wurde mit demselben Lösungsmittelgemisoh wie vorstehend erwähnt gepackt. Zum Eluieren der Kolonne wurde ein LÖsungamitttlgemiech verwendet, weloheβ aus einer 1 molaren wässrigen Ammöniumaoetatlösung und Isopropylalkohol is Verhältnis 2 t 5 bestand· Sie ersten 600 si des Sluates wurden verworfen· Ansehliessend wurden 20 si-Traktionen aufgefangen, und zwar insgesamt 525 Traktionen· Sie Traktionen 55 - HO wurden vereinigt und enthielten etwa 9Q& der theoretisch möglichen Kenge der Verbindung 69« Diese Traktionen wurden in Gegenwart von 10 ml Pyridin auf ein kleines Volumen eingeengt· Der Bückstand wurde sit Wasser auf ein Volumen von 50 ml verdünnt| diese Lösung wurde an einer Kolonne, die sit Pyridinium-Sowex 50 X 8 beschickt war, absorbiert· Zum Sluieren der Kolonne wurden 3 1 entionisiertes Wasser verwendet· Sie gesamte abflieseende Lösung wurde unter vermindertes Druck eingeengt, viermal sit ljiiger wässriger Pyridinlüsung wieder verdünnt und jeweils wieder eingeengt· Sohliesslich wurde der Rückstand in verdünntem wässrigem Pyridin aufgenommen und sweisal aus diesem Lösungsmittel lyophilisiert· Auf diese Weiee erhielt man die Verbindung 69 als weiße feste Sub stan» in einer Auebeute von 1,81 g (70 f>}·

Analyset Berechnet für» C^H^S.OgP.SgÜ.Pyridin· Pf-5»95

gefunden i Pi 6,06

Srwärmt man dieses Solvat 72 Stunden in Vakuum ( 15 mm Hg) auf 100⁰C, so erhält man die reine Verbindung 69·. In der in Beispiel 68 beschriebenen Weise können auch andere N-Acyl-l-(2^l,3^l-di-O-acyl-ß-S-arabinofuranosyl)-oytosine phosphoriliert werden, wobei sie die Aoylgruppen in 2*- und 3'~ Stellung und die an die Aminogruppe des Cytosins gebundene Aoylgruppe verlieren·

Beispiel 70 l-ß-B-Arabinofuranosylcytoein-5— phosphat (70)

Behandelt man in der in Beispiel 68 beschriebenen Weise lP-(ß«Cyclopentylpropionyl)«l-(2·,J•-di-O-Cß-eyclopentylpropionyl)«- oder ΪΓ-Lauroyl-l-(2^f,3'-di-O-lauroyl-ß-D-arabinofuranosyl)cytosin zunächst mit 2-Cyanoäthylphosphat, dann mit Dicyclohexylcarbodiimid und schliesslich

90968 7/1765 "⁴⁴"

ORlGiNAL

mit lithiumhydroxid bei Rüokfluestemperatur, so erhält man it» in beiden fällen di· Verbindung 70·

Beiapiel 71 Andere l-ö-B-Arabinofuranoeyloytoain-5'-phosphate

Tür die Arbeitsweise genäes Beiapiel 68 kann man auoh folgende Verbindungen

ale Auegangsaaterial verwenden»

*) H⁴-ieoanoyl-l-(2*,3»-diO-deoanoyl- und H^-Propionyl-l-CZS-J'-di-O- propionyl-AF)cytosin; l-(2',3^l-Di-0-butyryl-AF)uraoil| Ir-Phenyl-moetyl-

l-(2^l,3^l-di-O-phenylaoetyl·, H^-Hexanoyl-l-(2»,3^l-di-O-hexanoyl- und N -Phenyl-propionyl-l-(2',3^l-di-0"phenylpropionyl-4l)-oyto8in| N -Anisoyl-

l-(2' ,3 »-dx-0-anisoyl-AP)-adeninjr N^-Ootanoyl-.l-C2»_l3^f-.di-0-octanoyl-AF)-» 3-methylcytosinf N -Butyryl-l-(2',3^l"di-0-butyryi-Ay)5methylcytoBinf Ν Anisoyl-l-(2·_f3»-di-0-enisoyl-AF)guaninf 9-(2^l _f3*-Bi-0-lauroyl-HF)-3canthin| N -Octano^l-l-(2« ,3 '-di-O-ootaiioyl-AFj-J-methylcytosin, 1-(2*,3»-<ϊΐ-Ο-

decanoyl-HP)thyminf

9-(2·,3'-Bi-O-phenylacetyl-AF)6-meroaptopurinj lP-Propionyl-l-(2'₁3^r-di-0-pro« pionyl-Al)5-methylcytosinf l-(2·»3'-Di-O-(ß-cyclopentylpropionyl)-R]?}5-joduracili 1-^2»,3'-Bi-O-anisoyl-BPjS-fluoruracilf !-(j'-O-Yaleryl-DBi¹)-uracilf l-(2·,3»-Bi-0-benzoyl-HF)5-trifluormethyluraQil oder l-(3*-O-Hexanoyl-DRP)-thymin. Kan erhält duroh diese Umsetzung beispielsweise die 5'-Phosphate von 1-AP-adenin, -3-methyloytosin, -S-niethjäcytosin und -uraoili von 9-AP-xanthin, -hypoxanthin, -thymin und -6-fflercaptopurinf von l-AF-5-flu.oruracil, -5-ohloxuraoil, —5-bromuracil, -5-joduraoil und

-5-trifluormethyluraoili von l-BP-5^1^uo^ruraoil und ■►5-"

von 9-HP-xanthin und -guanin^ von 1-RF-uraoil, -»cytosin und -thymini von 9-BP-a<ieⁿiA_f -xanthin und -6-mercaptopurini von 1-HF-5**3oduracil$ l-DRP-uraGil und -thyminj von 9-BBF-hypoxanthin, -thymin und -adenin^ 1-BHF-cytosinf 9-DRF-guanin^ l-BRF-5-fluoruracili 9-BHP-xanthin u.a·

-45-

*) In den folgenden Aufzählungen werden folgende Abkürzungen verwendetr

AP « ß-B-arabinofuranosyl

EP * ß-D-ribofuranosyl _Λαλλο>ι/πΙΙ;

BHF * ß-B-deoxyribofuranosyl 9 0 9 8 8 ' / I / O Ö

Beispiel 72

ir-Benaoyl-l-(2->3'-Äi^|-0-aoetyl-ß-])-arabinofuranosyl)- oytosin-5»-phosphat (72)

Sine Lösung aus IT-Benzoyl-l-ß-D-arabinofuranosylcytosin-S¹-phosphat (das ist die gemäss Beispiel 69 hergestellte Torbindung 69) wurde in einer Mischung aus 15 ml Pyridin und 15 ml Essigsäureanhydrid suspendiert· Diese Jlisohung wurde 18 Stunden bei Bauatemperatur gerührt. AnschliesBend wurde die Lösung mit 15 ml Yasser verdünnt und nochmals 3 Stunden bei Raumtemperatur gerührt· lnschliessend wurde das Lösungsmittel bei JO⁰G im HoohTakuum entfernt# der Rückstand wurde mit Äther verrieben· Mar erhielt ein gummiartiges Material, welches in Vakuum vom Xther befreit mirde« Der Rückstand wurde in trockenem Pyridin aufgenommen; die Lösung wurde bei 4°C abgestellt· Das sich tei dieser Behandlung bildende feste Produkt wurde abfiltriert; es handelte sich um die reine Verbindung 72·

Beispiel 73

N -Benzoyl-1~(2',3'-di-O-propionyl-ß-B-arabinofuranoeylcytoain-5»-phosphat (73)'

Zur Herstellung der Verbindung 73 wurde die Verbindung 69 in der in Beispiel 72 beschriebenen Weise mit Propionsäureanhydrid in Pyridin umgesetzt·

Beispiel 74

ΪΪ -Benzoyl-l-(2 ·, 3 ^l-di-0-butyryl-3-D-arabinofuranosyl)-cytO3in-5«-phosphat (74)

Zur Herstellung der Verbindung 74 wurde die Verbindung £9 in der in Beispiel 72 beschriebenen Weise mit 3uttersä.ureanh.yirid in Pyridin unbesetzt.

909887/178 5 bad o_R,_G,_NAL

Beispiel 75

If -Benzoyl-1 -(2 *, 3 ^f-di-O-benzoyl-ß-B-arabinofuranosyl)-■cytosin·^¹ -pliosphat (75)

Diese Verbindung erhalt man durch Umsetzung der Verbindung 69 mit Benzoesäureanhydriä in Pyridin in der im Beispiel 72 beschriebenen Weise.

Beispiel 76

ii^-Benzoyl-1-(2·,^'-di-O-phenylacetyl-APjcytosin-S'-phosphat (76) !Diese Verbindung erhält man durch Umsetzung der Verbindung 69 mit Phenylessigsäureanhydrid in Pyridin in der im Beispiel 72 beschriebenen Weise.

In den folgenden Beispielen 77 - 105 arbeitet man jeweils in der in Beispiel 72 beschriebenen Weise und verwendet Pyridin als Lösungsmittel. Sie Beispiele 77 - 105 sind tabellarisch zusammengestellt. Ist in der Tabelle hinter dem Acylierungsmittel ein * angegeben, so bedeutet dies» daß das Acylierungsmittel im Überschuß über die andere Reaktionskomponente verwendet wird.

In der folgenden !Tabelle ist _£_ ■■ 2*,3*-di-0

909887/1785

BAD ORIGINAL

Beispiel

5'-Phosphat von

Acylierungsmittel wie

5' -Phosphat
von

77 78

79 80

81 82 83

O CP OO

«85 ^ 86

84

87 88 89 90 91 92

U -Anisoy 1-1 -AP-cytosin 1-AP-cytosin

1-AP-cytosin 1-AP-adenin

1 -AP-Tiracil

1 -AP-xanthin

1 -AP-6-mercaptopurin

9~AP-guanin

IT-Benaoyi-t -Ef-cy t osia Ir-B«QBoyX-1-HP-cytosin -Beazoyl-1 -BP-cytosin

1-BP-uracil

ValeriansäureanJaydrid

ftTihydrid Essigsäure/und letra-

«•hhyl q-rnmo-n-f T»naftfi±a.-h *

Propionsäureanhydrid *

Ehenylpropionsattreanhydrid *

Benzoesäureanhydrid ^ Hexancarbonsäureanhydrid*

ß-Cyclopentylpropionylchlorid *

Laiiroylchlorid * .Decanoylchlorid ¥ Propionsäureanhydrid Buttersäureanhydrid Benzoesäureanhydrid Propionsäureanhydrid Buttersäureanhydrid Benzoesäureanhydrid

Phenylpropionsäureanhydrid

Ii -Anisoyl-1 -(0-valeryl-AP)-cytosin IT⁴-Acetyl-1-(0-acetyl-AP)-cytosin

lr^l-Propionyl-1-(0-propionyl-AP)-cytosin Ή -Phenylpropionyl-9-{0-phenylpropionyl-AP)-adenin

1 - ( 0-fcenz oy 1-AP) -uracil
9- ( 0-hexanoyl-AP) -xanthin 9-ZZ0 (ß-cyclopentylpropionyl )-APij7-6-mercaptopurin

IT -Iauroy 1-9- (0-lauroyl-AP)-guanin 1 -(0-Decanoyl-AP)-thymin H -Benzoyl-1-(0-propionyl-HP-)-cytosin

N^-Benzoyl-1-(0-Dutyryl-RP-)-cytos in H -Benz oy1-1-(0-oenz oy1-HP-)-cytosin ⁽ H -Benzoyl-9-(0-propionyl-HP-)-adinin 1-(0-Butyryl-HP)-urac il

9-(0-Benzoy1-HP)-6-mercaptopurin 1-(0-Phenylpropionyl-EP)-5-fluoruracil

Beiepi·!

5' -Phosphat von

Acylierungsmittel wie 5'-Phosphat
von

JJ 1OE

IT -Acetyl- 1-BP-guanin

-i -DBi-cy t os in ^KP-cytoein * 1 -IfflP-cy t oe in

Oetancarbonsäureanhydrid

Benzoesäureanhydrid Propionsäureanhydrid Buttersäureanhydrid Benzoesäureanhydrid Propionsäureanhydrid U²-Phenylac*tyl-1-DBP-guanin Buttersäureanhydrid i-DEf-uracil Benzoesäureanhydrid

9—DBJF—hypoxanthin Valeriansäureanhydrid

Buttersäureanhydrid

methyloytoBin ' -3)ΕΡ-5^f -trifluormethyluracil Lauroylchlorid

-BEP-thymin

Hexancarb ons äureanhydrid Anisoylchlorid N -Acetyl-1-(0-octanoyl-BP)-guanin

1-(0-Benz oyl-EP)-thymin
IT-Benzoyl-1 - (3^f -0-propionyl-3)BP)-cytosin H^-Benzoyl-1 - (3 * -O-t»utyryl-DBS^l)-cyt osin -Benz oy 1-1 -^ (3' -O-Toenzoyl-DEP)-cytosin

H -BenBcfyl-9- (3' -O-propicaayl-DBJ¹)-adenin N²-Phenylacetyl-1 -(3 ^l-O-butyryl-DEF)-guani: 1-(3'-0-Benzoyl-DEP)-uracil 9-(3·-O-Yaleryl-DRP)-hypoxanthin N⁴-Propionyl-1 - ( 3 · -0-butyryl-DBJ^l)-3-methyIcytosin

1 _ (31 -o-liaur oyl-DEP) -5' -trif luorme thy I- «

uracil *

. ti

1-(3^I-0-Hexanoyl-DEJ^l)-thymin , ·

9- (3' -0-Anisoyl-DEJ')-6-niercaptöpurin

Beispiel 1O6 N⁴-Benzoyl-l(TPM-äF)cytosin *) (lO6)

A. H -Benzoyl-1-AF-cytosin (lo6a)

Zu einer Lösung aus O»5 S lT-Benzoyl-l-(2·,3'-di-O-benzoyl-AF)cytosin in 17 ml Xthanol, die auf 5 C gekühlt worden war, gibt man O_t4 g Natriumhydroxid in J ml Wasser. Diese Mischung lässt man 30 LIi nut en bei 5 C stehen und giej3t dann in 80 ml Eiswasser. Die wässrige Losung wird mit 1 η Chlorwasserstoffaäuro neutralisiert und filtriert. Der abgetrennte Niederschlag wird auf dem Filter mit Wasser gewaschen und dann zweimal aus Äthanol-SSE umkristallisiert. Man erhält auf diese Weise die Verbindung 106a.

B. Die Verbindung IO6 gewinnt man» indem man in der in Beispiel 1 beschriebenen Weise die Verbindung 106a mit Triphenylchlormethan (iPCIl) aoht Tage bei 22 - 25°C behandelt,

Beispiel 107 6
H -Butyry1-1(TFH-Ay)adenin (107)

1. Ii -Butyryl-1-^F-adenin (lO7a)

In der in Beispiel I06 beschriebenen Weise behandelt man N -Butyrjl>l-C2^l _r?'*^ak di-O-butyryl-ir)cytosin bei 5°C »it Hatriuehydroxid. Auf diese Weise gewinnt man die Verbindung 107a.

107a in der in Beispiel 1 beschriebenen Weise acht Tage bei 25⁰C mit TpQE be~

B. Die Verbindung 107 lässt sich gewinnen, indem nun die Verbindung i<
handelt·

108

-Beηaoy 1-9-(TPIt-IT)guanin (IO6) 9'WUP-guftniii (lO8a)

Man behandelt in der in Beispiel I06 beschriebenen Weise 1Γ-Ββηζο7ΐ-9-(2·,3'· di-O-bemoyl-AF)guanin (daa let die Verbindung von Beispiel 42) bei 5⁰G mit

*) bezüglich dieser Abkürzung rergl. die Fußnote auf S. 27 "^

909887/1785 bad or_IQ1NAL

Hatriumhydro-idlosung. Auf diese Weise erhält man die Verbindung 108a.

Β» Die Verbindung 108 erhält uun, wenn man in der in Beispiel 1 beschriebenen Weiae die Verbindung 108a acht Tage bei 22 - 25°C mit IPCH behandelt.

Beispiel 109

A. N^-Valer/l-l-^F-5-methyloytosin (lO9a)

Die Verbindung 109s erhält man, wenn man in der in Beispiel 106 beschriebenen Weise N^-Valeryl-l-(2»,3^l-di-0-valeryl-ÄF)5-methyloytosin bei 5° C mit Natriumhydroxid behandelt.

B# Die Verbindung 109 lässt sich aus der Verbindung 109a gewinnen, wenn man letztere in der in Beispiel 1 beschriebenen V7eise acht Tage bei 22 25°G mit TECM behandelt.

Beispiel 110 Ii-LaUrOyI-I-(TPH-A!¹) 3-methylcytosin (llO)

j£. N -Lauroyl-l-AF-3-methylcytosin (llOa)

Han behandelt in der in Beispiel IO6 beschriebenen Weise lP-Lauroyl-l-(Z',3'— di-0-lauroyl-AF)3-methylcytosin bei 5 C mit Natriumhydroxid.

B. Die Verbindung HO lässt sich aus der Verbindung UOa gewinnen, indem man letztere in der in Beispiel 1 beschriebenen Weise acht Tage bei 22 25°G mit TPGM behandelt.

. Beispiel 111 N -Benzoyl-1-(TPM-BF *■))cytosin (ill)

A. N -Benzoyl-l-BF-cytosin (lila)

Han behandelt in der in Beispiel IO6 beschriebenen Welse H -Benzoyl-1-(2', di-O-benzoyl-BF-cytosin 1
man die Verbindung lila.

di-O-benzoyl-BF-cytosin bei 5⁰C mit Natriumhydroxid. Auf diese Weise gewinnt

-51- *) bezüglich dieser Abkürzung vergl. die Fußnote auf S. 27

909887/1785 _e1MNM

BAD ORlG¹NAL

B. Sie Verbindung 111 lässt Siah aus der Verbindung lila gewinnen* indem man die letztere in der in Seispiel 1 beschriebenen Weiße acht Tage hei 22 - 25⁰C mit IPOli behandelt·

Beiapial 112

1. H⁶-Acetyl-9-KF-adenin

Man behandelt in der in Beispiel 106 beschriebenen Weise Ii -lcetyl-9-(2^t _l3^lrdi~ O-acetyl-EF)adenin bei 5 C mit Natriumhydroxid· Auf diese Weise gewinnt man die Verbindung 112a·

Β« Sie Verbindung 112 lässt sich aus der Verbindung 112a gewinnen,

letztere in der acht lage mit TPCM behandelt.

indem man die letztere in der in Beispiel 1 beschriebenen Weise bei 22 - 25°C

In der in Beispiel 106 beschriebenen Weise lassen sich auch andere Verbindungen der Formel VIII gewinnen, wenn man ein Produkt der Formel VlI mit einer Base zu einer Verbindung VIIa umsetzt und dieses Produkt veräthert. folgende Verbindungen der Formel VIII können gewonnen werden» IPWAcetyl-, -Propionyl-» -Butyryl-, -Valeryl-i, -Hexafcoyl-, -Octanoyl-, -Lauroyl«- und -Phenylacetyl-l»(TPM-AF)cytosinf IP-Lauroyl-l-(TPlI-BF)oytoainj IT -Phenyl-aoetyl-9-(TPM-BF}5-methyldytosin| N -Heptanoyl-l-CTPlC-HFjS-methylcytosinf N «Butyryl-9-(TPM-RT)guanin* N²-Anisoyl· 9-(TPM-BJ')guenin| H -Deoanoyl-9-(5^l-0-(p-methoxyphenyl)diphenyl-methyl-BJ¹}-adeninf IP-Propionyl-l-(5^l-0-(p-methoxyphenyl)diphenylmethyl-BJ^l)5¹^aethyloytosin| N -Phenylaoetyl-l-iS'-O-Cp-methoxyphenylJdiphenylmethyl-DEFj^-Bethylcytosin u.a»

113

H^-Anisoyl-l-(5 *-(p-methoxy phenyl) diphenylmethyl-AF) -oytosin-3^l-yl-l-(3*-O-Äoetyl-DaF)uracil-5»-yl-phosphat (XIIl)l N -Ani soyl<«»l· (5 ^l-(p-^e thoxyphenyl) diphenylme thy 1· lF)oytosin-»2«-yl-l-(3«-e-äoetyl-IlRr)uraoil-5»-yl-phoephat (XIV)» l^F-cytosin-2»-yl-l-DEF-urat>il-5*-yl-.phosphat (XV)| I«AF-6ytoEin-3«-yl-l-2>BF-uraoil-5«-yl-phoBphat (XTI)*

* adenin; N⁴-Benzoyl-1-(TPM-BP)

9 0 9 887/1765 -Bad ori_G!_Nal

(CeHeJe

JC₀H₄-OCH* C^—0 -CH*

QCH₉

—*#—0—CH»

. 1

»XIII und XIV

»Ac

9Ο0887/ηβ5

L IK¹SPECTED

90 9 887/1765 ORlGfNAL INSPECTED

1620650

Bine Mischung aus 900 mg ( 1»J6 mliol) N -Anisoyl-l-^'-Cp-methoxyphenyl)-diphenylicethyl-AF) cytosin und 1,38 mliol l-(3^t-Aoetyl-DRy)-uraoil-5'-ylphosphat in 2 ml Pyridin wird duroh mehrfaches Eindampfen mit wasserfreiem Pyridin unter vermindertem Druck wasserfrei gemacht. Der trookene Rückstand wird in 16 ml trockenem Pyridin aufgenommen und mit J g Dioyolohexylcarbodiinid versetzt· Die Mischung wird in einem geschlossenen Behälter in der Dunkelheit und bei Raumtemperatur ( 22 - 26⁰C) fünf Tage gesohüttelt» Danach setzt man 6 ml wässriges Pyridin - 1 Teil Wasser zu 2 Teilen Pyridin - zu und schüttelt erneut. Der unlösliche Harnstoff wird abfiltriertf dieser Niederschlag wird mit 20 ml Pyridin gewaschen» Sas Filtrat und die Waschwässer werden zweimal mit einer Mischung aus Cyolohexan und Äther im Verhältnis IfI extrahiert· Die Cyolohexan-ither-Mischung wird verworfen; die Pyridinlösung wird im Vakuum bei 30 C auf ein kleines Volumen eingeengt· Der Rückstand wird wieder mit 20 ml Pyridin verdünnt und nochmals auf etwa 5 ml eingeengt· Danach ohromatographiert man über DEAB-Celluloβe (Diäthylaminoäthyloellulose) mit 50$ Äthanol-5C# Puffer und einer wässrigen Triäthylaminacetatlösung (pH 7*5)t deren Konzentration von 0,02 auf 1 m anstieg. Auf diese Weise erhielt man ein Gemisch der Verbindung XIII und der Verbindung ZIV* Die Verbindungen XIII und XIV können duroh |egenstromverteilung naOh Craig getrennt werden«

Um die nicht aoylierte Verbindung zu erhalten, wurde eine entsprechende Lösung ( 5 ml» wie vor) mit Pyridin auf 25 ml aufgefüllt und mit 60 ml alkoholischem Araactiak (3 Teile konzentriertes Ammoniumhydroxid auf 1 Teil ithanol) behandelt· Die so erhaltene homogene Lösung lässt man 2 Tage bei Raumtemperatur stehen* danach engt man bei 30⁰C im Vakuum zur Trockne ein· Der Rückstand wird mit 25 ml ÖOjSiger Sssigsäure aufgenommen· Man lässt 35 Stunden bei Raumtemperatur stehen und entfernt dann die Säure mit einer Hochvakuumpumpe· Der verbleibende Rückstand wird in 20 ml Wasser suspendiertf Die Suspension wird mit 3 ⁿ Ammoniumhydröxid auf eitlen pH-Wert von θ eingestellt. Das wasserunlösliche Material wird zweimal mit Äther extrahiert· Die Xtherextrakte werden verworfen. Die wässrige Lösung ( 27 ml) wird an eine DEAE-Cellulose (Carbonat) Kolonne mit einem Kolonnenvolumen von 770 ml absorbiert· Sie Kolonne wird mit 60 ml Wasser, welches verworfen wird, gewaschen* Zum Eluieren verwendet man eine Triäthylaminoarbonat-Lösung (pH 7»5)> deren Konzentration von 0 auf 0,25 m ansteigt· Bei einer Iließgeschwindigkeit

9 0 9 8 8'7 / 1 7 β 5

Oi5 bis If5 ml pro Minute fängt man 20 ml-Fraktionen auf. Sie Fraktionen 110 bis 140 werden vereinigtf.sie enthalten das gewünscht« Material sowie nicht umgeeetzteei-ß-B-Deoxyribofuranosyluraoil· Aus diesen Fraktionen lässt sich, naoh dem Eindampfen die gewünschte Verbindung in.28^iger Ausbeute gewinnen. Um das l-fl-D-Dedxyribofuranosyluraoil aus der Mischung abzutrennen, wurde das gesamte Produkt an Faserpapier (Whatman 3MU) ohromatographiert. Das Papier wurde mit einem Lösungsmittelgemisoh aus 7 Teilen Iaopropylalkohol, 1 Teil konzentriertem Ammoniumhydroxid und 2 Seilen Wasser vorgewasohen. Sasselbe Lösungamittelgemisoh wurde für die Chromatographie verwendetf angefahrt 5OO optische Bichtelinheiten (oa. 25 mg) des Kateriales wurden auf jedes 6*-Blatt aufgebracht· Sie Binuoleosidphosphat-Bereiohe (R_f 0,36}» die mit Hilfe von UV-Licht bestimmt wurden, wurden ausgeschnitten und mit Wasser eluiart. Auf diese Weise konnten 4 620 optisch· Diohte-Einheiteü von gemischtem l-AF-cytosin-3-yl, l-DRF-uraoil-5-yl-hhosphat und l-AF-oytoein-2-yl, l-DBF-uräoil-S'-yl-phosphat in wässriger lösung isoliert werden» Diese wurde bei einem pH-Wert von 4»5 ingefrorenes Zustand gelagert» Sine Sowex 1X2 (Foraiat)-Kolonne mit einem Kolonnenvolumen von 50 ml J In der in J.0xg»0hem· 29, 1 078 (1964) beschriebenen Weise hergestellt worden war, wurde mit einem Teil der vorstehend beschriebenen wässrigen Lösung, die 2 100 optische Biohte-Einheiten bei 265wJiy enthielt, bei einem pH-Wert von 8,5 (eingestellt mit n-Ammoniumhydroxid) beschickt. Sie Kolonne wurde mit einer Hatriumformiat-Lösung(pS 5>0) eluiert, deren Konaentration von 0,04 auf 0,055 m Hatriumfonniat-Lösung anstieg, wobei man 1 1 jeder Salzlösung verwendete· Sie Kölonnenfraktionen wurden bei 265i>gny analysiert, wobei man einen Vanguard 1 056 CD.» Ultraviolett-Mbnitor verwendete· Bs wurden 20 ml-Fraktionen aufgefangen, und zwar bei einer Iropfgeschwindigkeit von 1,50 ml pro Hinute· Die Abtrennung der Sinuoleosidphosphate war quantitativ* Sie Traktionen 41 bis 49 (330 optisch· Diohte-Iinheiten bei 265mny) enthielten !«•Ar-oytosin-2'-yl«l-3)BF-\iraail-5'-yl-paosphat XV in etwa 25fiiger Auebeut· in der liisohung« Die Verbindung XV (270 optische Dichte-Einheiten bei 269Dhy und pH 3s5) war raäiatent gegta Sohlangengift">Siesterase_r Miladiesterase, Deeoxyribonuoleaee und Bibonucleae·« Si· Fraktionen 61 bia |5 bestanden aus

-l-Xi^-uyaQil-.^'-yi-phoepkatCXVl) (§65 optiaoat Sicht·- bei. pl i_s0)f KOh die lindwspfen vexblieb ein leichtes weisies Pulver _s welofets' "b·! dir A»ftXye· folgend· Werte ergab ι '- -

-909887/1715'

Analyset Berechnet für« ^ciq^H24^N5O12^P"^2°*

Ci 35»?Of Hi 5i49f Hi Ili57 gefunden» Ci 35,7Of Hi 5,33* Nt 10,62

Siesee Material (X^l) war res*istentCgegen Ribonuclease und Desoxyribonuclease, wurde jedoch zu l-lF-cytosin-3-phosphat und zu 1-DRF-uraoil durch Milz-Liesterase und zu 1-AF-cytosin durch Schlangengift-Diesterase abgebaut.

Beispiel 114

1-(TPIi-DBF)-thymln-3»-yl-H^-benzoyl-l-(2»,J'-di-O-acetyllF)cytosin-5'-yl-phosphat (II4) und Trläthylaminsalz das l-DRFthymin-3 «-yl-l-AF-cytOBin-S'-yl-phosphates (114a)

Das llucleotid H -Benzoyl-l-(2*,3^lrdi-0-acetyl-iF)cytosin-5'-yl-phosphat (3,2 mllol) wurde mehrmals bei 40 C mit trockenem pyridin zur Trockne eingedampft. Das Produkt wurde dann mit l-(TFlJ-DBF)thymin (1,6 g|3,3 mllol) und 1 s trockenem Pyridinium-Dowex 5uLB (lg) versetzt· Die Mischung wurde zweimal mit trockenem Pyridin zur Trockne eingedampft· Der auf diese Weise erhaltene organische Rückstand wurde in 35 ^ffll trockenem Pyridin gelöst und mit 6,8 g Dicyclohexylcarbodiimid versetzt· Die Suspension wurde im Dunklen bei Baumtemperatur, d.h· bei etwa 24 ° C, 4 Tage geschüttelt» Dann wurden 1,5 g (3,1 mllol) 1-(TPIi-DBF)thymin zugesetzt und das Schütteln weitere 2 Tage fortgesetzt· Danach wurde die Reaktion durch Zugabe von 5 ml Wasser beendet· Der gebildete unlösliche Dicyolohexylharnstoff wurde abfiltriert% der Niederschlag wurde auf dem Filter mit 20 ml Pyridin gewaschen· Die Pyridinlösung und die Waschwässer wurden vereinigt und im Vacuum bei 4O⁰C eingedampft» Kan erhielt auf diese Weise einen Rückstand, der zwischen 200 ml Wasser und 100 ml jüthplacetat verteilt wurde· lus dar so erhaltenen Suspension wurde erneut der Harnstoff abfiltriert; die Xthylacetatlösung wurde mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft Die auf diese Weise erhaltene sirupartige Mischung wurde mit 40 ml Methanol aufgenommen* Beim Eindampfen der methanoliachen to sung in Vakuum blieb die Verbindung II4 als feste Substanz zurück·

909 887/178 5 bad orig«nal

Um das nicht veresterte und nicht verätherte Material zu erholten, wurde das vorstehend genannte phosphat in 40 ml Methanol aufgenommen* Diese Lösung wurde bis zur eintretenden Trübung mit konzentriertem Ammoniumhydroxid ver-Bttzt (10 ml). Man liess 22 Stunden bei Raumtemperatur stehen« Danaoh wurden die Lösungsmittel bei 55°C in einem Vakuum von 15 mfia Hg entfernt· Der auf diese Weise erhaltene Bäckstand wurde in 100 ml 8O$iger Essigsäure suspendiert. Nach 4 lagen wurde die Essigsäure im Vakuum bei 35 C (l5 mm Hg) entferntf der Rückstand vmrde wiederum in 40 ml Wasser suspendiert« Der pH-Wert dieser Lösung wurde mit 3 η Animo niumhydroxid auf 8 eingestellt. Durch die Zugabe des Ammoniumhydroxids bildete sich eine Suspension, die mit Äther extrahiert unddudi filtrieren von unlöslichem Material befreit wurde* Aus der verbleibenden wässrigen Lösung wurde der Äther unter vermindertem Druck entfernt. Sie ätherfreie Lösung wurde an einer Diithyl^minoäthylcellulose-Kolonne, die mit 1,5 η Ammoniumcarbonat aktiviert worden war, absorbiert. Die Kolonne hatte ein Fassungsvermögen von 1 5 OO ml. Die Kolonne wurde mit einer Lösung eluiert, die von 0 auf 0,12 m ansteigende Mengen an Triäthylaminbicarbonat (pH?) enthieltf es wurden 10 1 Lösungsmittel in 20 ml-Fraktionen aufgefangen (anfängliche Kolonnengeschwindigkeitt 1,2 ml pro Minute)· Ein Vorlauf von 560 ml wurde verworfen. Die Fraktionen I30 bis 330 wurden vereinigt und der Gefriertrocknung unterworfen; man erhielt auf diese Weise einen schwach gefärbten Rückstand. Dieser Rückstand wurde in wässrigem Äthanol, welches Aktivkohle (.Carco G60) enthielt, erneut gelöst· Die Lösung wurde dann filtriert % aus dem Filtrat konnte duroh Gefriertrocknung die gewünschte Verbindung 114a gewonnen werden· Dieses Material wurde erneut gelöst und durch ein Säureaustiuscherharz (Dowθχ 5OWX8) filtriert. Beim Einengen des Filtrates erhielt man 1—DRF-thymin-3^r-yl-l-AF-oytosin-5^t-yl-phosphat. Sie so gewonnene Substanz wurde duroh Ribonucleinsäure-Diesterase und Deoxyribonucleinsäure-Diesteras· nicht abgebaut} durch Schlangengift-Diesterase dagegen vollständig zu 1-AF- * 5*-phosphat und Thymidin und durch Milz-Diesterase zu l-DRFthymin-3'·» phosphat und 1-AFcytosin abgebaut.

In derselben Weise wie vorstehend beschrieben kann das rohe l-DRF-thymin-3·- yl-l-AF-cytosin-^'yl-phosphat aus der Kolonne mit Pyridinbicarbonat in Form des Pyridinsalzes eluiert werden·

* cytosin -59-

909887/1765

BAD ORlGiNAL

In den nachfolgenden Beispielen II5 bis 128 wurde jeweils die in Beispiel erläuterte Arbeitsweise angewendet. Die Bildung der Dinuoleosidphosphat-ester erfolgte bei Raumtemperatur in Pyridin und in Gegenwart von Dioyolohexylcarbodiimid. Die ansohliesBende selektive Hydrolyse der so gewonnenen Dinucleosidphosphat-ester vmrde zunächst mit aminoniakalischem Äthanol und dann mit 80$i{jer wässriger Essigsäure durchgeführt»

Beispiel 115

Man setzt zunächst Ii -anisoyl-l-(TRI-AF)oytosin-5 '-yl-phosphat zu einem öemiech von Dinucleosidphosphat-eßtern, nämlich N -AnIBOyI-I-(TPM-AF)cytosin-3'-yli; -Anisoyl-(2^l,3^l-di-0-benzoyl-AF)cytosin-5^l-yl-phosphat und H -Anisoyl-1-(^-TPLI-AF) cytosin-2'-yl-ir-Anisoyl-(2·, 3 '-di-0-benzoyl-AF)cytosin-5'-yl- ; phosphat um. Bei der selektiven Hydrolyse dieses Dinucleosidphosphat-ester-Gemischee erhält man l-AF-cytosin-3'-yl-l-AF-cytosin-S'-yl-phosphat und j l-AF-2^t-yl-l-AF-cytosin-5'-y!-phosphat. :

Beispiel 116

Aus H -Benzoy 1-1-(TPlJ-AF) cytosin 'gewinnt man zunächst die beiden Dinucleosidphosphatester N⁴-Benzoyl-1-(TPM-AF)cytosin-2'-yl-ir-Decanoyl-9-(2·,3'-di-0-decanoyl-RFjadenin-S'-yl-phosphat und N -Benzoyl-l-(TPJ,I-AF)cytosin-3^l-yl-N decanoyl- >-(2^l,3^l~di-0-decanoyl-RF)adenin-5^l-yl-Ehosphat, die durch Chromatographieren getrennt werden können. Bei der Hydrolyse der Dlnlioleosidphosphat-ester erhält man die freien Dinucleosidphosphate, nämlioh 1-lF- _; cytosin-2^f-yl-9-RF-adenin-5^l-yl-phosphat und l-AF-cytosin-3^t-yi-9-RF-adenin-5'-yl-phoephat·

Beispiel 117

Aus N -Benzoyl~l-(THI-AF)cytosin und 9-(2^f ^»-Di-O-ootanoyl-HFjö-mercapto- , purin-5¹-phosphat erhält man die beiden Dinuoleosidphosphat-ester IP-Benzoyl-

phosphat und lP-Benzoyl-l-(TPLI-AF)cytoEin-3'-yl-9-(2 ' ,3'-di-0-octanoyl-RF)6-inercaptopurin-phosphat. Das Estergeiaisch kann durch Chromatographieren ih die Komponenten getrennt werden. Bei der Hydrolyse der Dinucleosidphosphat-ester erhlLlt man l-AF-cytosin-2'-yl-9-EF-6-mercaptopurin-5'-yl-phosphat und 1-AF-cytosin~3^l-yl-9-EF-6-mercaptopuriri-5-yl-phosphat als freie DtnucleosidphospHätr=

und N⁶-Deoanoyl-9-(2.f._f3^l-di-0-deoanoyl-Bi')aaenln-5^l-phoBphat.6e-

909887/1785 _οΔη . .

BAD ORIGINAL G_öpy

* Rff)thymin-5^r-yl-phosphat und N^-Benzoyl-t- .1620638

Beispiel 118

Aus lr-Benzoyl-l-(TPH-lS)>ytoein und l-(2',3ⁱ~di-0-phenylaoetyl-Ri¹)thymin-5'-phosphat erhält man eine Mischung der beiden Dinuoleosidpho3j,hat-ester N⁴-Benzoyl-l-(TPM-JU?)oytoBin-2'-yl-l-(2^l _l3'-di-0-phenylao9tyl-/(a?PH-AF)-oytoaln-3'-yl-l-(2^l,3'-di-0-phenylaöetyl-Hi^l)th7min-5'-yl-pho3phat. Diese beiden Ester können duroh Chromatographieren getrennt werden. Bei der Hydrolyse der beiden Dinuoleosidphosphat-ester erhält aan die freien Dinuoleosidphosphate l-AF-oytosin-^-yl- und l-AF-oytosin-3-yl-l-ß-D-ribofuranosylthymin-5'-yl-pßosphat. Auch die freien Dinucleosidphosphate können, falls sie im Oeraisoh vorliegen, in diesem wie in allen anderen Fällen duroh Chromatographieren getrennt «erden·

Beispiel 119 Aus l-(TPM-By)-5"»£luoruraail und N^/*-Benaoyl-l«(2',3?«di-0-benzoyl-AF)5-

methyloytoaiiWS¹"Phosphat stellt man aunäohat eine Mischung der beiden

DinuoleoBidphoephat-estaa? l-(üepU-Ef)5-fluoruraoil-2«-.yl- und 1-(

fluoruraoil-3»-yl·!! -btnaoyl-l»(2^'J'-di-O-benzoyl-AffJS

yl-phoaphat her· Duroh Hydrolyse der Sinuoleosidphosphat-estcr erhält man die freien Dinuoleosidphosphate, nämlioh l-HF-S-fluoruracjil^'-yl- und

l-Bi*-5-f luoruraoil-3 »-yl-l-AF-S-fflethyloytoain-S »-yl«phosphat.

Beispiel 120

!Can setzt 9-(!Bt--*f)xauthin mit N^ guanin-5'»phosphat um, man gewinnt so ein Oemisoh der beiden Dinuoleosidphosphat-ester 9-(TB£"-Ay)xanthin-2»~yl.- und 9-(TfSi"Ar)xanthin-3^l-yl-»²·· deoanoyl-9-(2',3^l-'di-0"d*oanoyli'Hi)guanin™^Ayl=-phosphat. Dieses Gemisch kann gegebenenfalls duroli Ohromatographieron in die Komponenten getrennt werden« Bei der Hydrolyse der Binuqleosidphosphat»ester gewinnt man die freien Dinuoleosidphoaphate, aäsalioh phoephat»

uraqil»5'""Pfco8phat sitellt ma.^ auaäoheii die beiden Bisiuolffiosidphoßphat-ester

K -1χΟ-8όν?«9«(α?Βί-^?}stdSiiin-2U und «3»-yl-l-(

5*-yl-pfrßöpßä$'bei'r, Bai dar Eydarolyö© dieser baidsa. ISinuöleoaidphosphatester

9-0 988^/1795 -61-

BAD ORIGiNAl.

erhält man ein Gemisch von 9~lF-adenin-2· bezw. ^'-uraoil-5'-yl-phoaphat.

Beispiel 122

lus H^-Jbiisoyl-l-CTftl-DRF)cytosin und H⁴-Anisoyl-l-(2«,3^l-<ii-0-beiizo₁yl-RF) cytosin -5*-yl-pßosphat gewinnt man den Dinucleoaidphosphat-egter H -Anisoyl-l-(IPIi-DHF) oytosin-3 »-yl-li⁴-aniaoyl-l-(2 ·, 3'-di-0-benzoyl-BF)oytosin-5-ylphoaphat» Bei der selektiven Hydrolyse erhält man als Dinucleosidphosphat l-DBF-oytosin^-yl-l-RF-cytosin-Jj-yl-phosphat·

Beispiel 123

Aueli -Anieoyl-9-(5^t-0-(p-methoxyphenyl)diphenylmethyl-DHF)adenin und IT-Benzoyl-l-(2',3^l-di-0-benzoyl-EI')3-methyl-cytosin-5'-phosphat gewinnt man als Dinucleosidphosphat-Sater K -lnisoyl-9-(5'-O-(p-methoxyphenyl)dipheiiylmethyl-DRF) adenin-3»-yl-N^-benzoyi-(2», 3 * -dl-O-benzoyl-RF) 3-methylcy to ain-5-yl-phoaphat. Aus diesen gewinnt man durch selektive Hydrolyse 9-DRF-adenin-3'-yl-l-HF-3-methylcytosin-5'-yl-phosphat·

Beispiel 124

Aus N⁴-Lauroyl-l-(fPH-»RJ)5-metbyloytosin und l-(2',3»-Di-0-hexanoyl-AF) uracil-5~yl-phoaphat gewinnt man ale Oinucleosidphosphat-ester in-lauroyl-l-(IPH-BBf) -5-me thyloytosin-3»-yl-l-(2 ·, 3 »-di-0-hexanoyl-AF)uracil-5«-ylphosphat. Dieser ergibt bei der selektiven Hydrolyse l-DRF-5-methylcytosin-3'-yl-l-Afuraöil-pS'-yl-phosphat.

Beispiel 125

Aue l-(5'^-bie(p-l|ethoxyphenyl)phenylmethyl~DBJP)thymin und 9-(2·*3·-Β1-Ο-benaoy1-AF)6-mercaptopurin-5^f-yl-phoaphat gewinnt man zunächst den Dinucleosidphosphat-eeter l-(5^l-O-bis(p-lietho»yphenyl)phenyliaethyl-DBJ^l)thyBin-3^l-yl-9-(2^l»3'-di-0-benzoyl-AF)6-aercaptopurin-5>^lyl-phosphat· Dieser ergibt bei der selektiven Hydrolyse l-DRF-thymin-3 '-yl^-AF-o-mercaptopurin-S'-yl-phoephat·

-62-

909887/1785 _{SAn n}__f

Beispiel 126

Aus 1-(Tl⁵M-DRF)S-JOdUrBCiI und Ii -Propionyl-^-^¹,3«-di-Q-propionyl-RF)

2 guanin-5'-yl-phosphat gewinnt nan zunächst 1-(TPlI-DHF)S-joduracil-S'-yl-H propionyl-9-(2¹,3^l-di-0-propionyr-RF)-guanin-5^l-yl-phosphat als Dinucleosidphosphat-ester. Dieser ergibt bei der selektiven Hydrolyse l-DBF-5-joduracil-3·-yl-9-RF-guanin-5'-yl-phosphat·

Beispiel 127

Durch Umsetzung von 1-(TPM-AF) cytosin mit K -Benaoyl-9-(3 '-O-benzoyl-DRF)-adenin-5¹-phosphat erhält man zunächst eine Mischung der beiden Dinucleosidphosphat-ester l-(TPM-AF)cytosin-2'-yl- und l-(TPM-AF)cytosin-3'-yl-N benzoyl-?-(3'-0-benzoyl-DRF)adenin-5^!-yl-phosphat, die gegebenenfalls durah Chromatographieren in die Komponenten getrennt werden kann· Bei der Hydrolyse der Dinucleosidphosphat-ester erhält man als freie Dinucleosidphosphate l-AF-cytosin-2'-yl- und l-AF-cytosin-3'-yl-9-DHF-adenin-5^l-yl-phosphat.

Beispiel 128

Durch Umsetzung von 1-(TPM-AF)cytosin mit N -Benzoyl-9-(2^l,3^l-<ii-0-benzoyl-EF)guanin-5»-phosphat gewinnt man zunächst eine Mischung der beiden Dinucleosidphosphat-ester 1-(TPM-IF)cytosin-2'-yl- und l-(TPM-AF)cytosin-3*-yl-Ii benzoyl-9-(2',3'-di-0-benaoyl-BF)guanin-5'-Jj-PhOSPhAt. Diese ergeben be^&er Hydrolyse l-AF-cytosin-2'-«yl- und l-AF-oytosin-3'-yl-9"ß-D-ribofuranosylguanin-S'-yl-phosphat als freie Phosphate.

In der in Beispiel 113 beschriebenen Weise können auoh andere Dinucleosidphosphate der Formeln XI und XII hergestellt werden» indem man'Nucleoside der Formeln II oder VIII mit Nucleotiden der Formel VI umsetzt und die entstandenen ikther-Ester der Formeln IX und X zunächst mit einer Base und dann mit einer Säure hydrolysiert· Beispielsweise kann man folgende Verbindungen der Formeln XI und XII erhalten«

l-ii^-c/tosin-3'- bezw. 2^f-yl—l-AF-thymin-S'-yl-pliosphati 9-M^l-ädenin-3'- · bezwo -2^l-yl-9-lF-xanthin-5'-yl-phosphatf 9-AF-hypoxanthin-3^l- "bezw. -2'-yl-5^1F-6-raercaptopurin-5'-yl-phoephat> l-AF-5-flüOaruracil-3·- bezr. -2'-yl—1-ÄE-5-fluoruracil-5'~yl-phosphatf l-lF-thymin-3¹- bezw. -2»-yl-9-EF-guänin-

QnoQOi/niK ^SAD ORIGWAL ~⁶⁵"

3U3OO // 1/00

5'-yl-phosphatf l-AF-J-methylcytosin-J'- bezw. -2f-yl-l-RF-S-yl-phoBphatf l-AF-S-joduracil^'- bezw. -2'-yl-l-RF-3-uracil-5 '-yl-phosphat f l-AF-5-broiLuracil-3^f bezw. -2^l-yl-l-RP-3-methylcytosin-5'-yl-phoephat|i 1-RFc^tosin-2·- bezw. -3'-yl-,-AF-xc.nthin-5'-yl-phoephati l-RF-uracil-2¹- bezw. -J'-yl-9-AF-hypoxanthin-5'-jl-phosphet| 9-RI'-6-mercaptopurin-2'- bezw. -J'-yl cil-5'-j.-l-_::honi,hatf 9-RF-adenin-2·- bezw. -3'-yl-l-AF-5-

yl-l-AF-uracil-5 •-yl-i.hcGi.hL.ti J-DHF-trifluormethyluracil-J '-yl-9-AF-xanthin-5'-yl-i:hosph£;t| l-ERF-J-netlvlcytosin-J'-/l-l-AF-thyiain5'-yl-phoaphat| l-RF-5-methylcytosin-3'-/l-9-AF-adenin-5'-yl-phosphatf l-DRF-5-fluoruracil-I J·-yl-l-AF-5-chloruracil-^'-yl-phosphct f l-AF-5-fluoruracil-2·-yl-l-DEF-5-chloruraci 1-5'-yl-phosph&t$ l-AF-5-fluoruracil-3'-yl-l-DEF-S-chloruracil-S·~ yl-phosphat| 9-AFadenin-2'-yl-9-DRΓ-hypoxenthin-5·-yl-phosphatf 9-AFadenin-3'-yl-9-DRFhypoJlianthin-5 '-yl-phosphati l-AF-3-methylcytosin-2 '-yl-l-DRF-5-fluoruraci 1-5»-yl-phosphi'tf l-AF-3-methyl-cytoain-3 ·-yl-l-DRy-5-fluoruracil-5 ·-^J-phosphati 9-AF-xanthin-2^t-yl-l-DRF-3-uracil-5 «-yl-phosphat# 9-AF-xanthin-3'-yll-DRF-3-uracil-5»-yl-phosph&tj l-RF-3-methylcyto8in-2'-yl-tJ-DBF-adenin-S'-ylphosphat| l-RF-3-methylcytoein-3^l-yl-9-DEFadenin-5^l-yl-phosphat| 1-BF-guanirl-2·-yl-S-DRF-hypoxanthin-S'-yl-phosphat> 9-KP-guanin-3'-yl-9-DKF-hypoxanthin-5 '-yl-phosphat; l-RF-5-bromuracil-2T^l-l-DRF-S-methylcytoein-S'-yl-phosphatf 9-HF-6-mercaptopurin-2 '-yl-l-iDRF-S-hroinuracil-S'-yl-phosphati 9-ßi^!-6-mercapto-ρΗΓίη-3·-3'1-1-3)ΗΓ-5^ΓοΐηαΓαοί1-5 '-yl-phoephati 9-I3RF-6-mercaptopurin-3 '-yl~ l-DRF-5-joduraoil-5 '-yl-phosphat f 9-DRF-hypoxanthin-3 »-yl^-BRThypoxanthin-S ·- yl-phosphatf 3-DRF-3-uracil-3'-yl-l-DRFthymin-5'-yl-phosphati 1-DBF-thymin-3 i-yl_9-DRFxanthin-5 «-yl-phosphati 9-DRF-adenin-3 «-yl-l-DRF-S-joduraoil- 5·-yl-phosphat% 9-DRF-hypoxanthin-3'-yl-9-lflF-hypoxanthin-5^l-yl-phoBphat u*a.

ORIGINAL 909887/1765

Claims (2)

Patentansprüche

1. Yerfahren zur Herstellung von Dinuoleosidphosphaten der Formeln

HOCH

H . · H

O H

OH

.0

0—

Ho—1

oder

HOCH₁ V₁

H H

CH₂

XII HO

ο.

in welohen

X, Wasserstoff, A-Bydroxy oder ß-Hydroxy bedeutet (alt der

Maßgabe jedoch, daß nur einer der Vtiranoaeringe im UolekSl

Blbofuranose sein kann), Z₂ und JL jeweils in den Soabinationen S, A-OEf H, ß-OH# A-OH,

B-OHf A-OHf oder B-OH₉ fl-OH> vorliegen und T. und X₂ Cytosin-1-yl, Uraoil-l-yl_s !Hiyain-1-yl, Adenin-9-yl,

Guynin-9-yl, 6-Meroqpfcopurin-^-yl, Draoil-3-yl» 5-?luoruracil-

5-Trifluormethyluraoil-l-yl, Hypoxanthin-9-yl» lanthin-9-yl»

909887/1785

BAD ORIGINAL,

5-Methylcytosin-l-yl oder 3-Methylcytoain-l-yl darstellen.

sowie der pharmazeutisch verwendbaren Salze derselben, dadurch gekennzeichnet, daß man ein tfucleosid der Tornein

TGCH

oder

η 7

CH VIII

-fu

in welchen

I Triphenylmethyl, (p-Methoxyphenyl)dipheny!methyl oder

bis(p-JIethoxyphenyl)phenylmethyl bedeutet, X Wasserstoff, A^OH oder fl-OH darstellt, X die vorstehend für T. angegebene Bedeutung hat und X* einen der für T genannten Rest· entspricht« in de· Imino- oder Isinogruppen aoyliert sind,

■it einem luoleosidphosphat der Formel

Ho-

ÖAc⁵ X'

TI

in welcher

Z* Wasserstoff, *-O-Aoyl oder Ö-O-Acyl (wobei die Icy!gruppen 2 bis 12 Kbhlenstoffatome enthalten) bedeutet und

909887/1765

BAD ORIGINAL

Y¹ die bereite angegebene Bedeutung hatj in Segenwart eines Bialkyl-oarbodiimide umsetzt, jedoch mit der Maßgabe, daß da* llucleoaid und da· liucleoeidphoephat, die miteinander umgesetzt werden sollen, in den Kombinationen irabinofuranoaid-iirtibinofuranoeid, BibofuranoBid-ürabinofuranosid, Deoxyribofuranosid-Arabiriofuranoaid oder Ribofuranosid-Deoxyribofuranoaid verwendet werden, so daß man

ein Sinucleosid der Formel

τ:

¹I

TCCH

~f

-t

oder

-XH

erhält, in welchen . .

T und X₂ die vorstehend angegebene Bedeutung haben, Xj und Xi dieselbe Bedeutung wie X¹ haben, XJ und Y'„ dieselbe Bedeutung wie T¹ haben und Ac¹ dieselbe Bedeutung wie Aa hat,

und daß man anschliessend die so gewonnenen Zwischenprodukte zunächst mit einer schwachen Base und dann mit einer wässrigen Säure unter milden Bedingungen hydrolysiert, wodurch man die Verbindungen der Formeln XI und XII erhält.

909887/1785

BAD

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß daa Dialkylcarbodiimid lioyolohexylcarbodiimid iat·

3· Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß daa Dialkyloarbodiimid Dicydohexylcarbodiimid iat und daß man ala Hydrolyaiermittel Ammoniumhydroxid in einem niederen Alkohol verwendet»

4· Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man die

Verbindungen der Formeln XI und XII durch Chromatographieren voneinander trennt·

Tür The Upjohn Company_f Kalamazoo, Mich·, USi .

BAD ORIGINAL

909887/1785