DE156287T1 - Verfahren zur markierung von nukleinsaeure mit psoralenderivaten. - Google Patents

Verfahren zur markierung von nukleinsaeure mit psoralenderivaten.

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DE156287T1
DE156287T1 DE198585103165T DE85103165T DE156287T1 DE 156287 T1 DE156287 T1 DE 156287T1 DE 198585103165 T DE198585103165 T DE 198585103165T DE 85103165 T DE85103165 T DE 85103165T DE 156287 T1 DE156287 T1 DE 156287T1
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reagent
hybridization
residue
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Kary Banks Kensington California 94602 Mullis
Henry Berkeley California 94705 Rapoport
Edward Lewis Iii Oakland California 94602 Sheldon
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Cetus Corp
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    • C07D493/02—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D493/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C07D513/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D513/04—Ortho-condensed systems
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    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
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Claims (10)

  1. CETUS CORPORATION 0156 2 8/
    EP-60 033 " '
    Patentansprüche 1 . Markierverbindung, gekennzeichnet durch die Formel
    worin A einen alkylierenden Einschubrest, B einen zweiwertigen 5 organischen Rest mit einer zumindest zwei Kohlenstoffatome aufweisenden geraden Kette und L einen zum Erzeugen eines feststellbaren Signals befähigten einwertigen Markierrest bedeutet.
  2. 2. Verbindung nach Anspruch 1, gekennzeichnet durch die Formel
    CH OHS
    CH3 CH2-N-CH2CH2-(OCH2CH2)2-O-CH2CH2-N-C-(CH2)4C
    / H
    CH, H
  3. 3. Zum Herstellen eines Markierreagens geeignete Verbindung der Formel
    [b] L
    worin B einen zweiwertigen organischen Rest mit einer zwei oder mehr -(CH-) O-Reste mit der Bedeutung einer ganzen Zahl von 1 bis einschließlich 4 für χ aufweisenden geraden Kette und L einen zum Erzeugen eines feststellbaren Signals befähigten einwertigen Markierrest bedeutet.
  4. 4. Verfahren zum Markieren von zumindest teilweise doppelstrangigen Nucleinsäuren, dadurch gekennzeichnet, daß
    (a) die Nucleinsäure mit zumindest einer Markierverbindung gemäß Anspruch 1 oder 2 in Berührung gebracht wird, um deren alkylierenden Einschubrest in die Nucleinsäure zwecks Ausbildung eines Komplexes einzuschieben, und daß
    (b) der Komplex aktiviert wird, um zu bewirken, daß der alkylierende Einschubrest covalent an einen oder an beide der Nucleinsäurestränge gebunden wird.
  5. 5. Verfahren zum Herstellen eines markierten Nucleinsäurehybridisierungsreagens zum Feststellen von Nucleinsäuresequenzen, dadurch gekennzeichnet, daß
    (a) eine Nucleinsäure, welche benachbart eines zur
    Hybridisierung mit der festzustellenden Nucleinsäuresequenz befähigten einstrangigen Bereiches einen doppelstrangigen Nucleinsäurebereich aufweist, mit zumindest einer Markierverbindung gemäß Anspruch 1 oder 2 in Berührung gebracht wird und hiedurch der alkylierende Einschubrest der Markierverbindung in die Nucleinsäure unter Ausbildung eines Komplexes eingeschoben wird und daß
    (b) der Komplex aktiviert wird, um zu bewirken, daß der alkylierende Einschubrest über einen oder über beide der Nucleinsäurestränge covalent an den doppelstrangigen Nucleinsäurebereich gebunden wird.
  6. 6. Markiertes Nucleinsäurehybridisierungsreagens zum Feststellen von Nucleinsäuresequenzen, gekennzeichnet durch eine Nucleinsäure, welche benachbart eines zur Hybridisierung mit der festzustellenden Nucleinsäuresequenz geeigneten einstrangigen Bereiches einen zweistrangigen Nucleinsäurebereich aufweist, der über einem oder über beide der Nucleinsäurestränge an zumindest einen alkylierenden Einschubrest gebunden ist, der an einen zweiwertigen organischen Rest mit einer zumindest zwei Kohlenstoffatome aufweisenden geraden Kette gebunden ist, die ihrerseits an einen zum Erzeugen eines feststellbaren Signals befähigten einwertigen Markierrest gebunden ist,
  7. 7. Verfahren zum Feststellen eines Reagens nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß das Reagens einer Einrichtung unterworfen wird, mit welcher der Markierrest des Reagens identifiziert werden kann, und daß der Markierrest unter Ver<wendung einer geeigneten Identifiziertechnik identifiziert wird.
  8. 8. Verfahren zum Feststellen eines Reagens nach Anspruch für den Fall, daß die festzustellende Nucleinsäuresequenz für eine pathogene Mikrobe charakteristisch ist, dadurch gekenn-
    zeichnet, daß das Reagens unter geeigneten Bedingungen mit einem zur Bildung eines Komplexes mit dem Reagens befähigten PolypeptidjLectin oder Antikörper unter Bildung des erwähnten Komplexes in Berührung gebracht wird, wobei das Polypeptid, das Lectin oder der Antikörper feststellbar ist oder einen bei Bildung des Komplexes feststellbaren Rest beinhaltet, und daß dieser Komplex unter Verwendung einer geeigneten Nachweistechnik festgestellt wird.
  9. 9. Verfahren zum Feststellen der Anwesenheit einer
    Nucleinsäuresequenz oder mehrerer Nucleinsäuresenuenzen in einer mutmaßlich diese Sequenz oder diese Sequenzen enthaltenden Probe, dadurch gekennzeichnet, daß
    (a) die Probe mit einer wirksamen Menge eines zum Öffnen der Zellen, der Körperflüssigkeit,von Virencapsiden oder Gewebe der Probe und zum Trennen der Stränge der Nucleinsäure oder der Nucleinsäuren hinreichenden Reagens in Berührung gebracht wird, daß
    (b) die Probe vor, während oder nach der Stufe (a) auf einen inerten Träger abgeschieden wird, daß
    (c) die abgeschiedene Probe mit einer wirksamen Menge eines zum Fixieren einer im wesentlichen einstrangigen Form der Nucleinsäure oder Nucleinsäuren auf dem Träger hinreichenden Reagens in Berührung gebracht wird, daß
    (d) die fixierte einstrangige Form der Nucleinsäure mit einer wirksamen Menge eines Hybridisierungsreagens gemäß Anspruch 6 unter Hybridisierungsbedingungen in Berührung gebracht wird und daß
    (e) Hybridisierung der einstrangigen Nucleinsäuresequenzen mittels des Markierrestes am Hybridisierungsreagens festgestellt wird.
  10. 10. Verfahren zum Feststellen des Vorliegens eines Krankheitserregers in einer mutmaßlich diesen Krankheitserreger enthaltenden klinischen Probe, dadurch gekennzeichnet daß
    (a) die Probe auf ein Filter aufgebracht wird, daß (b) die Probe mit einer wirksamen Menge einer zum Öffnen
    der Zellen,der Körperflüssigkeit,von Virencapsiden oder Gewebe der Probe und zum Trennen der Stränge der Nucleinsäure oder der Nucleinsäuren in der Probe hinreichenden Base in Berührung gebracht wird, daß
    (c) die Probe neutralisiert wird, daß
    (d) diese Probe der Einwirkung von UV-Licht oder Wärme ausgesetzt wird, um eine im wesentlichen einstrangige Form der Nucleinsäure oder der Nucleinsäuren in der Probe am Filter etwa am gleichen Ort des Filters zu fixieren, wo die Probe aufgebracht wurde, daß
    (e) die fixierte Probe mit einer wirksamen Menge eines Reagens in Berührung gebracht wird, welches eine nicht-spezifische Reaktion des Filters mit dem zu verwendenden Hybridisierungsreagens verhindert, daß
    (f) die fixierte Probe mit einer wirksamen Menge eines Hybridisierungsreagens gemäß Anspruch 6 unter Hybridisierungsbedingungen in Berührung gebracht wird, daß
    (g) aus der Probe nicht hybridisiertes Hybridisierungsreagens herausgewaschen wird und daß
    (h) Hybridisierung der einstrangigen Nucleinsäuresequenz oder -Sequenzen in der Probe mittels des Markierrestes des Hybridisierungsreagens festgestellt wird.
DE198585103165T 1984-03-21 1985-03-19 Verfahren zur markierung von nukleinsaeure mit psoralenderivaten. Pending DE156287T1 (de)

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