DE1543766A1

DE1543766A1 - Verfahren zur Herstellung von Amiden von N-Acylcysteinen

Info

Publication number: DE1543766A1
Application number: DE19661543766
Authority: DE
Inventors: Martin Tellis Alexander; Sheffner Aaron Leonard
Original assignee: Mead Johnson and Co LLC
Current assignee: Mead Johnson and Co LLC
Priority date: 1965-06-28
Filing date: 1966-06-24
Publication date: 1970-01-02
Also published as: DK115145B; AT278735B; GB1114369A; GB1144308A; US3252866A; DK121762B; SE363095B; NO119638B; NL6608252A; NL6608251A; BE683281A; FI48344C; BE683280A; US3340147A; FI48344B; FR5630M; BR6680766D0; CH472890A; CH503698A; SE344409B

Description

Π R. I. M. MAAS LT. W. G. PFEIFFER

TAlINTANWAiTi MDN CH E N 21 UNOCIMSTRASSf 2S

Mead Johnson & Company, Evansv-ille, Indiana,* YoSt«A*.

Verfahren zur Herstellung von Amiden von l-

Die Brfindung betrifft fsy&ssaaste ameol^tissls© WMIqI und mucolytieche.. ferfSiI^aQ₉ 'b-si &®nen ü±m® läitWl 'ψβτ™ wendet werden» Di®* Sriinfiuag betrifft iaeb®a£®'?.®r3 eiB@ neue Klaes® cii»iaiisefes^a *?er'biaä'Si»ⁱ?.g®a_J aSffliigh IaM^ ψ©®. 1-ftoyliei'ten CyeteiaTfSTMaetwagta-». B1@s»j Stsff© iao.'&eE felgaa-äe Formel %

I¹ , ' ' '." E⁴

i^S

8AD 909181/1149

In dieser- .formel bedeuten R unü ET Waeeeratoffatome oder niedere Alky!gruppen mit bis zu etwa 4 Kohlenotoffatomen*

1 2

Wenn R' \mä E beide Wasserstoffatome bedeuten, ο teilen die

ι P

Produkt® Berivste der Aminosäure C3^reiein dar» ^T.7enn R ur.d H" Methj3,griipj^iß sind» aind die Produkte derivate der Aminosäur^ f-iisiisillamin«

R 1>ϋά.β*ϊ1-,β> i/i». Wagserstoff atom oder den organischen Ryj-t der „F-Aoylgruppe* der dann aus einer Allcyl -. Aryl·· oder Aralkyl- ίύίτ ßla iiu 9 Kohlenatoffatoaen besteht.

R lilifl Ü" >.*dt.y.tea. im Pail der ainfachen Amide, die bevor AusfüIa^Mgaform" der Erfindung darstellen,. Wasser

la «.ndaren AulafUhrungeformen bedeuten eie die Reste von N-eubetituierten Amiden. R bedeute u ' genauer genagt entweder ein Waeaeratoffatom oder eine Alkyl-AJ.kesyi»»' Cyclöaifcyl- oder Cycloalkenylgruppe mit bis zu 5 CoßienstoffßtoMfao Einige Beispiele dafür sind die folgenden Rette? Methyl, Xthyl, Propyl, Allyl, Pentyl, Butyl, t-Butyl, (tyolop«ntyl_t Cyclopentenylo R^ bedeutet entweder ein fas a «ret off at d». od#r eine niedere Allcylgruppe mit bie zu 4 Kohlenstoffatomen. R* und R^J können durch 1 bis 2 Hydroxyl-

Λ JE

gruppen substituiert sein· R und R können aber auch zusammen Bdt dem Stickstoffatom, an das sie gebunden aind» eine hetero-

909881 / 1849 .8AD.original

cyclische Gruppe, κ·B. eine Piperidino-, Pyrrolidino-, JP-R--Piperaaino (wobei R* die oben angegebene Bedeutung hat). Morpholine -, Thiattorpholino, oder Hexamthylenimino-Qruppe be-■ deuten·

Diese Stoffe werden aus der Aminosäure Cystein, einem Beter daTon oder einem substituierten Analogen, worin R und R die oben angegebene Bedeutung haWn, hergestellt· Bis Mereaptc-Gruppe wird vorzugsweise durch einen Substittonton, der eich in den 8päteren Verfahrensstufen leicht entfernen läßt, z.B. Beniyl-, Benzhydryl.oder Triphenylmethyl, ge schilt at. Die Schritte zur Einführung der N~Acylgmppe (R'CO) und der Amidogruppe

(-N^^ c können in verschiedener Folge und Weise durchgeführt werden. Beispielsweise kann man den Kethyleetsr von S-Bensyloystein oder einen anderen Bater mit Ammoniak oder einem primären oder sekundären Amin behandeln und so in das entsprechende Amid Überführen, dieses dann acylieren und die S-Bejnsy? «schutzgruppe entfernen oder man kann dis beiden letsten Stufen miteinander TertausehsB. Bis p-Hitrophenyleter haben sich fttr dieaon Zweck als besoa&sra geeignet srwlessn.

Man kann aber auoh da« enttfreohende

■ ·

nach einosi der ttbliohen Terfabron, s.B. alt Xlmk/Sftlfsäure, oder nach anderen ferfanren cheadech, katalytisch oder mit einen

•ftf nt/im

Meiallhydrid zu den gewünschten N-Acylcyateinanid reduzieren. Schließlich kann man eine direkte Unaetsung der N-Acylraercaptoaninoeärre nit dem amidbildenden Amin in Gegen wart von Dicycloherylcarbodiimld durcMüiiren»

Diese Verfahren sind in den folgenden Reaktionaechemata dargeetelltc

SAD ORIGINAL

309881/1SA9

U)

C_ßHcCH_oSCCHG0.,GH ο ρ ά j d

ά j

■ (²

IK,

Araidbildung (R⁴R⁵JiH)

C- CiI CO if

R,

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K^:

liOO(3HO-3-SC--OHCOir

R⁵GO-

Da b s as j 1 i s rtsssg-

HH-

HSO-CH(X)H

,2

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Acylierung

(Rico)

E¹

5di.iaii-

BAD

Bis erfindungsgemäß erhältlichen Produkte sind als mucolytiache Mittel verwendbar und weisen als solche die Fähigkeit auf, Muccpro'tein, tierischen Schleim und dergleichen bei Be rührung damit zu verflüssigen. Sie sind den entsprechenden K-Aöylcyeteinen und ihren Salzen überlegen, deren Bignung als HucolyticB in der USA Patentschrift 3 091 569 beschrieben wirdr Biβ erfindungegemäß erhäibliehen Amide der F-Acylcysteine biete.» den Vorteil größerer mucolytischer Wirksamkeit, »rhöhter Oxydßtionsetabilität ^?n verdünnter Lösung, grüöerar ^aeserlÖBlichkeit bei neutralen und saueren. pH-Werten und verbesserter Verträglichkeit iflit verechiedenen anderen pliarma

wirkeEme^ Stoffen in pharnazeutisehen Darreicb.un.ga-SIt elnd potentielle Strahlenschutzmittel.

Der in folgenden beschriebene Versuch _f bei dem die Fähig fctit won I-Aßöijlc„L-cyetein, das in der genannten Patenteohrlft beschrieben wird» die Viskosität einer Mucoproteinlorning zu vermindern» !Bit der von I-2-Aeetamido-^-Hiercapto-N-methylpropiontu&idf L*-2"Aeetamid0-3"-mercaptopropionajnid und !^^«rropioßamldö-^-mejfcaptopropiOEamid verglichen wird-_f zeigt {Jits «rfiöiite Aktivität tier erfindungsgemäfi verwendeten N-AoylouDidfrx'Zur Heretelluiig dee ttuooprotoine für diese Versuche wurde ia Handel «rnältiichee Sohweineinucin in 500 ml G^QS η Haeuep®ttdiert; und mit 1250 ml 10 $

6AD ORIGINAL

iOSiii/1149 ^SAD

1 ο On Perchlorsäure unter Mischen versetzt» daa eine Stunde lang fortgesetzt wurde. Dadurch wurden andere Proteine als Muooprotein und die Nucleinsäuren ausgefällt« Die ausgefallenen Stoffe wurden durch Zentrifugieren bei 3300 g ent -fernt und verworfen. Die übers-öisnde Flüssigkeit wurde mit 1On Kaliumhydroxyd auf pH 7 eingestellt und ausgefallenes Kaliumperchlorat wurde durch Zentrifugieren entfernt. Dann wurde Huooprotein durch Behandlung der überstehenden Flüssigkeit mit 60 g Aomaniumsulfat je 100 ml gefällt, das gefällte Produkt wurde abgetrennt» gegen destilliertes Wasser dealysiert und durch Lyophillsierung getrocknet.

Bei Jeder Prüfung beetand dit Reaktionsmisohung aus 1,5 $ dee Muooprotein·, 0,9 J* lfatriumohlorid und 0,05 m Prüfrerbindung in einem GeeaatToluoen von 1 ml. Sie Lösungen wurden auf pH 8,0 eingestellt und fur die. angegebene Zeitdauer bei 37⁰O gehalten.

Di· Ergebnisse sind In Tabelle I aufgeführt. Di« I-Aoylejiide gemäß der Erfindung weisen bei jeder Seitangab· eine beträchtlich höhtr· Aktivität auf.

• Ofl.il/1S49-

Tabelle I

der Geschwindigkeit und de», grads des Yislcosittite« abfalle einer Mucoprotainlösung

Visfcositatsabfall in % Verbindung 3 Min₀ 30 Min. 60 Min. H-Aoetyl-L-oystein 9 16 21 L~2~AcetasiidO"3-Beroapto-

propionamid 27 33 ' 54

Ir-2-AoetaMido-3~meroepto-

iHSethylpropionanid 20 27 28

1~2~Propionaeido-3-Mercapto-

iropionaaid 20 26 29

Oxydationsstabilit&t ron L-2-Aoetamido-3-■eroaptoproplonaaid wurde fölgendornsJen nftohgewiesent Ss wurden Lösungen τοη Cystein, N-Aoetyl-L-oystein, und L-2*Aoetsjd.do-9HMroaptopropionaBid sdt Konsentrationen τοη 0,4 Ά Mol pro ■!, die 10 Mol/al Kupfereulfat als Orjdatlonskatalysator enthielten, in pH β 0,1 * fris»puffer hergestellt» Sauerstoff wurde durch gleiche Teile devon für die nachstehend angegebenen Zeiten geleitet· Di· naoh der Saueretoffbehandluag Tcrblcibends Thiölfconieatration wurde dans, naoh d@^ p-(3hlonsermirlben*oat-ifttho(5<i bestitsit* Bs wurden die in fafc«!Ie 2 aufgeführten Ergebnisse erhalten.

BAD ORIGINAL

Baraus geht hervor, daß die Oxydationtnrerluste an L-2-Aoetamido ^-meroaptopropionamld im Vergleich bu dem hohen Verlust an N-Aoetyl-Ir-oyatoin und dem Seaamtvarluet an Cystein in den Verglelohaluaungen gering Bind.

Tabelle II Vergleich der OxydationenfraMlitlit

Abnahme der Th iolkonz antrat lon In j> Verbindung 15 Min/

Oystein 65

H-Acetyl-L-oyetein 18 L-2-Aoetamido~3~Mroaptp-

proplonamid 6 ⁷ 12

Von den erflndungegemäß verwendeten Verblnduiifen sind ferner

12 "5 Stoffe bevorsugt, bei denen R » R und R Faaserstoffatone und

R und R ebenfalle Wasserstoffatone elnd odor hdohatene 2 Kohleaatoffatoae enthalten _ύ Diese Stoffe werden wegen ihrer hohen faeeerlöeliohkeit bei neutralen und eohwach aauron , bhb Beispiel von etwa pH 4,0 bis 7,0

30 Min.	1 Stde
100	100
52	93

oben beschriebenen Eigeneohaflea maohen äi% der Srflndung für veraahled©ne pharmaeautisehs \mä

909081/1349

- ίο «

verbliche Zweoke besonders geeignet, z.B. zum Deoongestieren der Nase, für die muoolytische Anwendung hai Stö rungen des Respirationstrakts durch Inhalation einer ver nebelten Löaung, für andere nucolytische Anwanducgegftb durch direkte Berührung der Lösungen mit Schleim, z.B άι'Λ' Laboratoriumsuntersuohung von Sputum, "bei der Behandlung ro»i Schwermetallvergiftungen und als Strahlungftachutsatofxe«

Die verbesserte pharmaseutlsche Verträglichkeit von 12-Aoetamido~3~sieroaptopropionamid' im Vergleich ssu N-Ac β ty 1-Ircystein geht ειιβ dem folgenden Versuch hervor, bei dem •in« Ponnilienang lierge«*ellt wurde, wie sie bei Untersuchungen Kit strahlungsuü^areMi&ssigen Bariunkontrastflillungtn rerwtndet wird. Die runtgenoskopisch« Unter-· •uohung 1st di· einzige befriedigende Methode für die objektive Untersuchung des gesamten Colons. Zu diesen Zweck wird tine etrafedungsundurchlttseig· Lösung, gewöhnlich eine 7 ?C-lgt Suspension von Bariuaaulfat, in das Colon eingeführt. Bs ist üblich» verschiedene andere Bestandteile in solche strahlung^ irchliesigen Kontrmstlöaungen einzuführen, z.B. Aoasia oder Trmganth, ub die Hoaogenlaierung der Barlussulfatsuspension «u unters tut sen, und (xerbsäure, das als Adstringens dient und die Sohlelmsektretion verhindern soll, degen den letztgenannten Stoff hat man in neuerer Z&it von verschiedenen Seiten Einwanda erhoben und ihn als gefährlich

§09881/164 9 BAD original

beieiohnet. K* wird deshalb Yorgeaehlagen, die erfindunga gemäßen mueolytieehen Mittel in aolohen formullerungen aun

• ■ ■ . ' -

TerflUaaigen von Schlei—naaiwinngen su verwenden.

Der Vergleich ron L~2-Aoetamido_3~«ereaptopropionmmid mit H-Aoetyl-L-ojettln tür dieaen Zweok ward· folgendermaesen durchgeführt ι Luaungen mit 3 t gereinigtem Sohweinemagenmuein wurden wie oben beeohrleben hergestellt und auf pH 8,2 eingestellt. Aliquote feile der KuooproteinlCsung wurden dann mit der Bariumeulfateuapenaion ohne ZuBata und mit einem Zueata an H-Aeetyl-Ii-oyatein oder oaptopropionamid Termiaeht. laoh Incubation bei 37⁰G für die angegebenen Zeiten wurde die Viskosität mit einem Mikro-Oatwald-Tiakoaimeter gemeaeen« Die Ergebnisa« sind in Tabelle 3 angegeben«

Tabelle ill MuoolTtiaohe AktiTltftt in Gegenwart von Barlumaulfat Yietoaitateanderun^ in * Prüflöaungen 5 Min. 20 Min. Eontrolle (BaSO₄₉TI mg/ml_t

pH 8.2) 4? »3

K-Aoetyl-L-oyetein 0,018 m

plua BaSO^, 71 mg/ml, pH 7»7 H »4

onamid« 0^018 m, plua BaSO.,

»g/ml, pH 7_f7 -13 -20

: 101101/1S4S

BAD

Se let offensichtlich, daß das ΪΓ Acetyl-Ir oyetein in Mischung mit der 3ariumeulfateuap9nsion unwirksam lot. Ptrner wurde feetgeetellt, daß dae N-Aoetyl-L-oyetein die oolloldale Sarluinmilfateiepension mim Ooagulieren bringt. Bei Iu.2"*Aoetamldo_3«meroaptopropionamld wurde kein Coagu·* Heren des Colloid« festgestellt, und es hat offensichtlich •in· herhebliche Fähigkeit, die Viskosität der Mueoprotein~ lösung In Gegenwart der colloidalen Bariu&eulfateuBpeneion su vermindern.

Die ouoolytiflchen Eigeneohaften der erfindungegemäfi erhältlichen Terbindungen tind £ür alle ihre optischen formen und Stereoisomeren gleloh. la wird hervorgehoben, daß jede der erfindungemäe erhältlichen Verbindungen wenigstens ein atyemetriachee Kohlenetoffatoee enthält und in fällen* die von der Art der Substituenten R _fR ,R*,F und R beetismt werden, mehl-ale ein aeyrattrleohee Kohlenetoffaton. Es eel darauf hingewiesen, daß alle etereoieoseren Formen im Rahmen der Erfindung liegen.

^N Bfleplel 1 (a)

«teilt dme get&ttigtG Eöftaanlisoiie Lüeuiig von Ammoniek Mit einem Voluosa ^on etwa ?_f1 1 her» küklt aie auf 10 bie

8 881 / 1 C 4 S BAD ORIGINAL

15⁰O und löat darin 133 g (0,51 Mol) S-BenÄyl-Iroyatois oethyleatarhydroehlorid. Bann .führt man eine we it ar a ß Ammoniakgaa mit mäßiger Geschwindigkeit in die kalte LS-sung ein. Darauf wird der Sollen dicht Terschloaaen und 3 Tage bei Zimmertomperatur gehalten. Nach Abkühlen wird die Lösung duroh Deetillatlon bet verminderten Druok eingeengt, Die eich ein Vtterachlag bildet. Man gibt 500 ml trockenen Xther au dtr Aufeohläomung und aatamelt den Hiaderaohlag, wodurch man 54 β (43£) eines veiQdn Faatatoffe erhält, der btiai TTmkrietElliaieren au· Äthanol das analytiach reine Aflddhydroohlorideftli liefert*

».210 - 212⁰Or (ί·Μ«)|Γ«ϋ^²⁵ - +24·3 (ο 0,5, Waeee*).

Anal. B«r. für O₁₀H₁₄K₂OS^HOlI H 11,36? S 12,99t öl 14,37. Sif.tl 11,421 8 12,93l 01 14,94.

!•lter· 62 g (38 j) Ij-2-Amino-3-benÄyithiopropionaaid werden al· freie B*·· duroh Bintngen dor Mutterlauge und 7er« dünnen alt trocken·* Ither isoliert und duroh ITiiikrietallieieren, au· faaeer und dann au· ithylaoetab, gereinigt»

». 75,5 - 77,5°0

»er. für O₁₀H₁₄S₂OSt 0 57,11; H S,71? Ϊ 13_f32i 15,25. Oef.t 0 57,03 |B 6, TOf I 13,32| S 14,85.

■-.■■ rad

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14 -3> 2-iüaino 3->mercaptopropion8.mld^hydrochlorid

Man Ib'at 38 g (0,18 Hol* L-2 Amino 3-benzylthioproplonamid in 550 ml flüssigen Ammoniak und vcroetzt es mit kleinen StUokohen Natrium, bis für eine Zeit von 10 Minuten eins blaue Färbung beßtehen bleibt, überschüssiges Natriumamid wird dann durch Zugabe von Anuconiuinohlorid in kleinen Anteilen zersetzt und das Lösungsmittel Ainmouiak wird verdampfen golassen* Ben festen Rückstand löst man in 200 ml Wasser, säuert die Lösung mit 130 ml 6n Salzsäure an und extrahiert iweimal mit je 250 ml Xther. Bio wässrige Schicht wird erwärmt, um eingeschlossenen Xther auszutreiben und mit einer Lösung aus 68 g Kerouriohlorld in 60 al 6n Salzsäure und 100 ml Wassei' versetzt. Den gebildeten niederschlag läßt man 3 Stunden bei Zimmertemperatur stehen und hält dabei die Lögung in einer Atmosphäre aus trockenem Stickstoffgas« BIe Überstehende flüssigkeit wird abdeoantlert und der Niederschlag wird mit Wasser verrieben, abfiltriert und gewaschen, Bann wird er in 600 ml 3n Salaeäure suspendiert und 3 Stunden lang alt Sohwefelwasserntoffgae behandelt. Während dieser Zeit fällt Ifei-suriiulfid aua und wird abfiltriert. Durch Einengen dee Filtrate bei 40 ~ 50⁰C erhält man einen creafarber Hen Feststoff, der getrocknet und aus 165 ml 1)0 ^lgem Hetiutnol uakristalliflierfe wird. Ausbeute 15 g (53 $) elnea weiflen

ORIGINAL 909881/1649

Feststoffe F, 186,5 - 187,5⁰O (Ze».).

Anal* ber« für O₃H₅I₂OS⁰HOIx K 17,87l SH 21,1 j Gef.t S 17,94; SH 20..9.

Eine Suspension aue 10,5 g (0_P05 Mol) L-2-Amino -3-benzylthiopropionamid in 100 ml Xthylacetat wird mit ? g (0_sO69 Mol) Acetanhydrid behandelt. Infolge der exothoi*raeu Reaktion steigt die Temperatur auf etwa 40⁰C. Ee bilde-s eich, eino Iiöaiing, worauf rasch eine Ausfällung dee Produkte folgt* Dann wird die Mischung 10 Minuten auf 65⁰O erwärmt· Nach Abkühlen wird da« Produkt abfiltriert, auf dem Filter mit Äthylacetat gewaschen und getrocknet, wodurch man 10,5 g (83$) Produkt erhält. Dieses liefert bein ünkrietallisieren aue 85 £-igea wässrigen Xthanol das gereinigte Produkt von P, 150 - 151,5⁰Oj ₃)ZS^ _tj3o_f98° (o 2,Xthanol).

Anel« Ber. für 0₁2^H16^li2⁰2^S| ° ⁵⁷*¹²ί ^{H 6}»39? BM.1,1-0. i 0. 57p24j H 6·48| N 10 _s 90

»09|.»1/;1fii9

(ά) If2«Ao»tamido«-3-merctptopropiouoiiid durch AostYlltrtmg

Sin· Suepenβion Ton 11g (0,07 KoI) L-2-Anino-3-Mtr~ oaptopropionamid»hydroohlorid In 80 al !Tetrahydrofuran \ind 17,4 ml Wasser wird alt 10,9 g (0,08 Hol) Iatrlua~ aoetattrlhydrat behandelt· Van kühlt die R«aktionealsohung auf 0 - 5⁰O und gibt in einer Zelt Ton 20 Minuten 6,7 el (0,07 Mol) Aoetanhydrid «u_; Die Mischung wird 16 Stunden bei Zimmertemperatur gerührt und dann mit 3 al 6n SaIrsäure in 200 al Tetrahydrofuran angelUuert. Hach Abfiltrieren Ton latriueohlorid wird das Piltrat eingeengt» wodurch man da« Produkt als weiBen feststoff erhält, der bei« Umkristallieieren aus 60 al Äthanol 7 g (61£) weißen ?eot-•toff tob T 147 - 149°0 liefert. [4,1 _B 25 _β „_{η 92}° (o 5#Waseer).

Anal. Ber. für O₅H₁₀V₂O₂St 0 57,02? H 6,21; V 17,27. Qef.i 0 36,9+J H 6,24? K 16,99-

( ·) L-2—Aoeta^aldo*-5«»Baroaptoproploiw<3 d du?roh

In einta Behälter, der 500 al flüssiges Ammoniak enthält, werden glviwietitig anteilwelse 25,2 g (0,1 Mol) L-2-Aoetaaido-^^ensylthiopropionamid und etwa 5,5 g Torher in kleine' StUoke gesohnittenes metallisches Natrium gegeben.

80088 1/1649 - βΑΟ original

Hachde* dl« blaue fMrbung der Lorning 10 Minuten lane bestehen geblieben let, «μ das Vorliegen tint· HatrluBr» asidübereohu···· anseigt, wird 4a· LBeungeaittel Ammoniak ▼erdampft, lüden un einen Stroa yon trockenem Stiekatoffga· über die 18sung leitet. Der feat· Rückstand wird im Vakuum getrocknet, mit 40 nl Siewaeaer behandelt und Bit konzentrierter Salatäure auf pH 4-5 angaalltiert· 9aa Produkt wird abfiltriert und getrocknet. Sie Ausbaut· betragt 8,1 g (50*). Duron tftekriitallieieren au· 90 £-igea wäeerige» Xthanol erhält nan da« gereinigte Produkt το». F. 148 -²⁵- -12,28° (ο 5, Waeeer).

!•iapiel 2

lift· LOiWeT tob 8,1 g (0,05 XoI) I-Aoetyl-L-oyetein in 90 SI fttrahyirofuraa in BtioketoffatBoaphire wird auf 10⁰O gekühlt «ad Bit 4,25 g (0,05 MoI) öyolopentylaain ver-•etat. Bann Tarmieoht aan «it dar Reaktioaamieohung 10,5 g (0,051 MoX) M,I'-Oi03rolohasarloarbodii«id worauf die ¥«a9«ratur auf t5*0 ansteigt, und kühlt von auaeea, üb ein weiteres Ansteigen der temperatur au rerhindern. lachdew die anflftflioh· leaktion naohgelaaeen hat, wird die Reaktionamiaohmg üh«r laoht bei liaaerteaperatur gerührt. Al· lebenprod\)kt gebildeter !,!»-Dioyolohexylharnetoff wird abfiltsierl

BADORIÖINAI.

. ~ 18 «

und daa Piltrat wird eingeent, wodurch man das gewünschte Produkt erhält.

Beispiel 3

(a) L-2~Amino~ben8ylthlo-NHBethylpropionamld

Bit Arbeitsweise von Beispiel 1 (a) wird mit 13,1g (0,05 Hol) 8-Bensyl-Ir=oyetein-methyleeter,>hydrochlorid und 200 ml ■ethanollschem Methylamin anstelle des methanolischen Ammoniaks wiederholt. Baa gewünschte W-Methylproplonamidderlvat wird in der gleichen Weise wie in Beispiel 1 beschrieben» gewonnen.

(b) Ir*2*-Ao#faaido—3'"^^<ttiiylthlo—ii—iiethylpropionamid

Produkt au· der vorhergehenden Stufe (Beispiel 3)(a) wird alt einer Lesung von 4 g Xatriuaacetat in 25 al Wasser vermischt und alt 10 Bl Acetanhydrid behandelt. Die Temperatur steigt auf 60⁰O und das Produkt scheidet sioh als weißer Peststoff ab. Ss wird abfiltriert, gewaschen und getrocknet. Die Auebeate betriV S 1O₉O g (75 t). Durch Umkristallisieren, xunaohst aus ethanol und dann aus Xthylacetat, erhält man das gereinigte Produkt f. 155,5 - 156,5⁰C CcQ-^⁵ = -19,69° (o 2, Xthanol).

AmI. Bor. für O₁₃H₁₈H₂O₂St C 58,62; H 6,811 I 10,52. . Gef.s C 58,661 H 6,97; H 10,37.

BADORIGiNAL. 809881/1649

(c) L 3-3 · - Dithio-OiB- 2 aoetamido-fl«methylpropionamid

Man IaBi aas Produkt von Beispiel 3 (b) nach der in Beispiel Hb) beschriebenen Arbeiteweise mit Natrium und flüssigem Ammoniak reagieren* Ale Produkt wird die oben bezeichnete Dithio-bis-Verbindung etatt dee einfachen Cystein derivate isoliert«, das man durch Debenzy¹ iening :jrhUlt, Die Auebeute beträgt 2..0 g {60 5»), Durch Urakri8tall⁴.8ieren aus Methanol erhält man die gereinigte Substanz vom Ρ« 263,5 · 264,5⁰C (Zers.), DQ^ « -^76> 75° (c 1 ,Wasser),

Anal, Bero für C-.2^H22^N4⁰4^S2^: ° ⁴¹'¹²^ ^{H 6}*³⁵· öef,» G 41,14; H 6,40.

Dieeee Produkt kaum auoh aus L-Cystin-diBiethylester.dihydroohlorld duroh Behandlung mit methanol!echem Methylamin und aneohließende Acetylierung, wie in Beispiel 4 beschrieben, hergestellt werden.

(d) L-2-Acetamldo-3-mercapto-N~methvlproplonamid

Bint Miechung aus 8 g L-3.t3'~-Ditliio-bis~ 2-acetamido-N-methylpropionamid und 5 g Zinkstaub wird unter Ruhren mit 68 ml 0,07 η Salzsäure 2 Stunden auf 40 - 50⁰C erwärmt. Dann filtriert man nichtumgesetstes Zink ab und engt das Pi!trat ein, wodurch man 2,8 g (35 $>) dee gewünschten Produkte erhält. Dieses wird 2 mal in einer Atmosphäre aus trockenem

809881/;m.9

Stickstoff aue Äthanol umkristallisiert. Das gereinigte Produkt ist ein weißer Feststoff vom P. 196 - 199⁰O, -27,9° (c 1, Wasser).

Anal. Ber. für C₆H₁₂N₂O₂S: 0 40,89; H 6,87; I 15,77; SH 18,76*

öef.i C 41,06; H 6,81; H 15,77; SH 19,3.

Beispiel 4 L-3·3' ■ 'Bithlo-bia-^-aoetamidopropionamid J

6 g (0,018 Mol) L-Gyetin-dimethyleater-dihydrochlorid werden iu 160 «1 Methanol gegeben, das bei 10 - 15°° mit Ammoniak gesättigt wurde· Buroh die Raaktionelöeung wird eine weitere 1/2 Stunde Aononiakgas geleitet, dann wird die Mischung dicht verschlossen und zwei Tage bei Zimmertemperatur gehalten· Bann engt man durch Yerdampfen von überschüssiges Ammoniak und duroh Abdestillieren der Hauptsenge das Lösungsmittels ein. Bas gebildet· L-OyetinÄiaaid wird als gelber Feetatoff erhalten, der ohne witere Reinigung duroh Behandlung mit einer Lösung von 2,9 g latriumaoetmt la 20 al taster und mit 3#5 «1 Acetanhydrid bei 50⁰O auetyliert wird. Bann tagt muk die Ltftung ear trookne ein und verreibt den Rückstindceit Methanol. Ber leststoff wird abfiltriert, mit Methanol gewasohth und getrocknet.

• 89881/1649 . ^BAD

Die Auebeute beträgt 4 g (70 #). Durch Umkristallisieren dea Produkte aus Wasser erhält man einen weißen Feetetoff von >. 240,5 _ 241,5⁰C (Zera.)i ftjp²⁵ * -124,49° (ö 1 H₃O)₀

Anal. Ber. für C₁₀H₁₈N₄O₄S₂ϊ 0 37,25; H 5,63; N 17,38. i C 37„55i H 5,90; N 17,68

Dieeet Produkt wird dann wie in Beispiel 3 (d) beschrieben, durch Reduktion mit Zink und Salzsäure in L-2~Acetamido -3-■eroaptopropionaaid Übergeführt.

Boiapiel 5 Dt Ii~2~Hexanoamido-3-mercaptc —»3-aethyl -N, N-dimethylbutyriMnid

H-Hexanoylieopropyliden-D^L-penicilamin. wird aue 2*2,5,5-Tetraaethyl-4-carboiy-D,Ir thiaBolidin und Hexanoylchlorid in Pyridi hergestellt. Eine Lösung aus 0,05 Mol dieses Stoffs und 6,95 ml Triäthylaüin in100 ml Methylenohlorid wird mit 5,4 g (0,05 Mol) Xthylohlorforaiat bei -8⁰C behandelt. Dann wird eine vorge kühlte lösung von 0,05 Mol Dimethylamin in 40 ml Methylenchlorid zugegeben. Die Mischung wird etwa 20Minuten bei -5⁰C und dann etwa ewei lage bei Zimmertemperatur gerührt. Dann verdünnt man mit Methylenohlorid auf etwa 1 1 und wäscht nacheinander mit jeweils 100 ml 5 ^ iger wässriger Salzsäure,

SO0S81/1S49 . feAD ORIGINAL

5 #-igem wässrigem Bicarbonat und Wasser. Dann wird daa lösungsmittel bei vermindertem Druck aus der Methylenchloridschicht abdestilliert, wodurch man einen RUoketand erhält, der hauptsächlich aus 3 -Hexanoyl- 4-dimethylcarbanioyl-2»2,5,5 tetramethylthiazolidin besteht» Sin Teil davon, nämlich 2,0 bis 2.5 go .wird über Macht mit 20 ml einer 10 ^-igen Lösung von Hercurichlorid in Methanol stehengelassen. Dann erwärmt man die Mischung 45 Minuten auf einem Dampfbad und verdünnt mit 100 ml Wasser. Der gebildete Niederschlag wird abfiltriert und in wässriger Suspension mit Schwefelwasserstoff behandeltο Da« entstandene Mercurisulfid wird abfiltriert. Durch Eindampfen des Filtrate im Vakuum zur Trookne erhält man das gewünschte Produkt.

Beispiel 6 Ir-2-Acetamido-5"mercapto-N-Allylpropionainld

Die Arbeitsweise von Beispiel 2 wird mit Allylamin anstelle det dort angegebenen Cyolopentylamine wiederholt, wodurch man da· gewünschte Produkt erhält.

8AD ORIGINAL

909881/1^49

■■:■■. · -23. ■■■ ;

Beispiel 7
(a) L~2~BensBinido-3-bensylthiopropionamid

0,20 Mol Ir-2~Amino~3-bens5ylthiopropionamid werden wie in Beispiel 1 (a) beschrieben hergestellt und mit einer Lösung von 16,4 g (0,20 Mol) Natriumatetat in 130 ml Wasser vermischt. Diese Mischung wird dann mit 31-2 g (0,22 Mol) Benzoylchlorid versetzt, worauf eine exotherme Reaktion eintritt» Zu der gebildeten viskosen Aufschlämmung $.bt man weitere 100 ml Wasser Ku, damit die Mischung besser gehandhabt werden kann. Bann wird das Produkt abfiltriert, mit Wasser gewaschen und im Vakuum getrocknet. Durch zweimaliges Umkristallisieren aus Xthanol erhält man das gereinigte Produkt vom F₀ 164 - 165⁰O (Zers.) ⁵ a -73*40° (o 1, Methanol).

Anal. B«r. für O₁₇H₁₈H₂O₂Si C 64,94? H.5,78, N 8,91* S 10,20.

Gef.j C 64,89j| H $,85; N 8,7Oi S 10,21.

(b) L-2-Bengamido-3~meroaptopropionamid

Durch DebeMylierung _dee Produkts von Beispiel 7 (et) nach der in Beispiel 1 (e) btaohriebenen Arbeiteweiee erhält man

909881/164 9 BAD

dar· gewüxu-ehte Produkt.

ίIiI..?- IJT., -M*-h*o ¹^⁸ (2. PTopionamido-proplonainia)

54 1 giOJ'¹ K'-"i } L C-ye'feindsne.-i/hy- f;Rter_edihydroohior.1d f/erdcn duroh ^r. ¹^v* lange behandlung mit 400 ml gesättigtem, we-.eaer irt^tiii rcUiHJ. ».Hi.-erbt-v. Amnorr.ak I)Pi ?inrt«rtemperaiur in das ]ii«Tn:!o übergeführte Dann enpt nan die Lösung durch /l(l( f»ti.11.1(1 rn äee Löaungemlitöa und von überechUeeigen Arun^nlol' hei vci-mindnrtem. Druck ein. Der RUcketend wird ii. tin^r !'('rung von 16,4 g (0_f?0 Mol) Natriumacetat in¹ 50 ml ■W»frf!©i guependlc'it und mit 40 ml (0,31 Mol) Pr'opionsäureanl> >^r!*trld l^haiidelt* wobei eine exotherme Reaktion erfolgt. Dann 1 fherulfc!⁴. n>nn die iöeung mit Entfärbungskohle, filtriert, fiif-i nir Trofi '.ne ein und kri «tall iai ert den gummi artigen Rück £"-ti-.1Vi öAiivli Verreiben ΐϊιίt Xthylacetat und Wasser um. Das Roh-1 Tf-(VhH vira 'ZweJEial aus JCthanol umkrietallisiert«- P_n 192 · f^tj * -107,29° (c 1, C₂H₅

Anel,- Ber, für ^₁₂ ^H22^N4⁰4^S2ⁱ ° ⁴¹*¹²* ^{H 6}'³⁴ϊ ^{N 1}5,991 Gef.t G 40_t78i II 6,29! N 15,71? S 18,01.

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~ 25 -
Cb) L ~2-Propionaaldo-5-«»rcaptopropioanaid

Diese Verbindung wird aus dem Produkt von Beispiel 8 (a) nach der Arbeitsweise von Beispiel 3 (d) hergestellt und durch Umkristallisieren aus Xthanol/XthylacQtat gereinigt, wodurch man das gereinigte Produkt als weißen kristallinen Feststoff erhält, P« 160 - 162>5°C (Zers.)? AJ_D ²⁵ - -14,65° (o 1, CH»0H).

Anal. Ber, für OgH₁₂N₂O₂St 0 40*89? H 6,86? H 15,90; 3 18,20.

• Sef.i C 41» 1Oi H 6,961 »15*78? 'S-18#29.

au^

tuaproböu fan I Ii^iiikeiiliiaiiapaciaacfi mi%

I- bra ίη 1*ϊ-Γ.

BAD ORIGINAL

und einem pH-Wert von 7,0 wurden hergestellt und Anteile davon von 0*1 ml wurden mit 0,9 al des homogenisierte! Sputum? vermischt, das einen pH~^ert von 7,4 aufwies. Die Mischungen wurden für die in der Tabelle angegebenen Zeiten bei 37⁰C gehalten. Dann wurden ihre relativen Viskositäten mit einem Ostwald Semimikroviekosimeter mit einer Kugel von 1 ml Passungsvermögen gemessen. Ea wurde ein Viskosimeter mit einer Durohflußzeit für destilliertes Wasser ron 10 bis 15 Sekunden gewählt, Die Viskosität des homogenisierten Sputums erwiea sioh als so hoch, daß kein Durchfluß einer Mischung von 0,9 ml davon mit 0,1 ml einer 0,9 $-*igen wässrigen Natriumchloridlöeung durch das Viskoslmeterrohr erfolgte»

Die beobachteten relativen Viskositäten sind in der folgenden Tabelle aufgeführt. Die angegebenen Zahlen wurden nach der Formel n/n ~ erhalten, in der η die Zeit in Sekunden, die die behandelte Sputumprobe zum Durchfließen des Viskosimetera benötigt, und Ii dl» Durcüfluöaeit von Wasser durch das Viskos Ja»fcerrohr bsdautet-. Bio Brgsbniaaä bestätigen die Akti„ vitäfc *m\ t-^At^tamido-J'-^uOapfcoyiOpionsmid gegenüber Jcshlsiiü μίί-l iis'^ii feni«r ·_ν>1;ι^ erlinhfce Wirksamlr^it Im Vergleich zn N-Αι?styl J< --./jtölü

ORIGINAL

1/ 1049

	menechlichem Sputum	60 Min. ^	15 Min.»	30 Min«	60 Hin.	ι
Tabelle IV	Probe I	32	81	• 2b	9
Verf lü s s iguiyL. ▼< >&.	30 Min»	36	—
-	95	4	46
Frttilö.eung¹'	116
0,15 i■ H--Acetyl-Ii»■ oyeteiu	9
0,15 .# H-Aoetyl L- cyptein' 4 0_f09 ^ Kc- ■"viiumohlorid
0,15 9δ L-2-Acetamidc J-iRor-oaptopropioft-

0,1$ 5* L-2-Aoetamido-3 ■ Bierceptopropionamid ■ί 0,09 > Natriumchlorid 15 4 41

¹ 0,9 al i3omog«niiitrfe«ß Sputum (pH T_f4) nit C-.₁1 al Prüf iiSewng (iß 7,0) Terettiti ReRktioiietsir-jci'iutux *7 (·'? angegtV-ene Koneentretionen einft

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15A3766

Beiepiel 10 Vaginaltauetten

Aua den folgenden Bestandteilen wurden Tabletten zur Einführung in die Vagina mit folgender Zusammensetzung pro Tablette her gestelltt

L-2 Acetamido 3-mercaptoproplonamid	Baispiel 11	100,0 mg •
Cetylpyridiniumchlorid	Inhalierlösun«	4.0 mg
Tyrothricin	5,0 mg
Natrimnbicarbonat	50,0 mg
Natriumäthylendiamintetraaeetat	1(0 mg
lactoaepulver	bia auf 1,0 g

Ie wurde ein© wässrige Lösung zut Behandlung τοη respiratorischen Eongeetionen durch Inhalieren mit folgender Zusammensetzung bergest eilt ϊ

Ma auf 100 ai

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Diese Lösung wird ait Hatriumhydroxyd auf pH 7 eingestellt und durch Vernebeln in eine Gesichtsmaske, ein Mundstück oder ein Abichirmzelt in Dosen von 3 bis 5 ml verabreicht.

Beispiel 12 SputufflunterBuchung

Sine Zusammensetzung für die Sputumuntersuohung im Laboratorium wird aus folgenden Bestandteilen hergestellt:

4 #-ige« waser. Natriumhydroxyd 25 ml

0,1 m Trlnatriurneitrat 25 ml

L-2-Acetamido-3-mercaptopropionamid 0,25 g

Etwa 10 ml der Sputumprobe werden mit einem gleichen Volumen dieses Reagens vermischt und 15 Minuten bei Zimmertemperatur gehalten· Dann wird die liieohung mit einem 2 - bia 3-fachen Volumen destillierten Wassere verdünnt, und der Inhalt wird rermieoht und 15 Minuten zentrifugiert» Die überstehende Flüssigkeit wird abgegossen, und das verbleibende Sediment wird nach Anfärben mikroskopisch untersucht oder lea Beimpfen ron Hälirkulturmedien für die morphologische Idantifiaierung vor lebenden, Organismen verwendet * Diese Methode nignet sieh besonders für di« Untorsuenung von tuberkulöse» SfUtUBe

· ^eAD0R'^elNAL

Β·1·Ρΐβ1 Mitt·! iitr Waa«nbchandluim

Eine sur Anwendung in der Hase geeignet· Zueejuiineet sling wird aue folgenden Beetandteilen hergestellt. Diee· Zuiaatmeneetzung eignet sich zum Eintropfen in die Käse oder «um Eineprühen aus einem Zerstäuber oder einem Nitrosolbehälter.

L-2-Aoetaeido-3-niercaptopropionamid HatriuBXtnylendiamintetraacetat CetylpyridiniUÄOhlorid De·till. Vae*«r

•aur·· Vatrliwpbosphat

	auf	10,0	β
		0,1	β
	0,02	β
bit	100,0	Bl
	0,5

Wi*«r. Iatriu*hydro3cyd Fho«pliortäur· bie auf pH 6,5

Beispiel (a) I^^Foraiygldo^^&ip&gnjj^^

Produkt

BAD

- 31 (Tb₁).,

Bine Mischung aus 0,015 Äol des in Beispiel 14 (a) be Bchriebenqn'Propionamidderivata, 2 g Phenol und 50 ml Trifluoreesigeäure wird 20 Minuten auf Rüokflußtemperatur erwärmt. Dann deetilliert man die Hauptmenge dee LöBungamittels eue der Reaktionsmischung al und Termiectit die erhaltene dicke Aufechlämmung mit Waseer und Xther. Das Produkt wird abfiltriert, mit der gleichtn LöBungeraittelmiBchung gewaeclien und durch TJmkristallieieren gereinigte

Beispiel· .15.- 21

BAD

Beispiel

Amin Produkt

15 Piperidin 16 Pyrrolidin 17 H-Methylpiperazin 18 Morpholin 19 Thiamorpbolin 20 Hexamethylenimin 21 Cyclopropylamin H-(I-2^ ?ormamido~3'inercapto propionyl)piperidin

N~( L-2~Fonnemido-3-niereapto propionyl)pyrrolidin

l-(I"2-Pormamido-3-ittercaptG-propionyl) -4-*methylpiperazin

N- (L-2-Pormamido~3-Jnercapto -propionyl)morpholin

H-(L-2-Pormamido-3-Bercapto · propionyl)thianorpholin

N~(L-2~Formamido~3-mercaptopropionyl)hexamethylenimin

oyclopropylpropionaaid

^BAD

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Claims

P a t e η t a η β ρ r Ü ο h e

1c Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formal

R¹

2 ^R
R*

R⁵CONH

worin

1 2

R tind R Waeeerstoffatome oder Alkylgruppen mit bis zu

A -

4 Kohlenetoffatomen, .

R* ein Waeaerstoffatom oder eine Alkyl-, Aralkyl- oder Aryl gruppe Bit biβ Ku 9 Kohlenetoffatomen,

^R4 5

^^ H einen Piperidino-, Pyrrolidino·-, H⁸^R -Piper asino-g

Morpholino-, Thiamorpholino- oder reet oder eine Aminogruppe bedeuten, worin

R* ein Waeseretoffatom oder einen -uneubs-tituiertsn oder bie su 2 Hydroxylgruppen eubstituierten Alkyl·»» Alkenyl»« Oyoloftlkyl- oder Oyoloalkaoylreat mit bis zu 5 Kö&lenetoff atomen und

BAD

R* ein Waeseretoffatom oder einen unsubetituierten oder duroh bis tu 2 Hydroxylgruppen eubatituierten niederen Alkylreet mit bis zu A Kohlenetoffatomen bedeutet, dadurch gekennzeichnet, daß man Cystein oder ein Subetltu+ioneprodukt von Oyatein der Formel

R¹

Q-S-C-CH-(X)₀Y

B²HH₂

worin Q ein Waeeeretoffatom oder«eine leicht entfernbare Sohutsgruppe und Y ein Waeeeretoffatom oder eine Alkylgruppe

1 2 % ^v

bedeutet und R , R und R^ wie oben definiert sind, mit einem Amin der Formel R^R⁵HH, worin R* und R⁵ wie oben definiert sind, und mit einem acylierenden Kittel umsetst, das wenigstens einen Rest der formel E*C0- aufweist, wobei die Umsetzung mit dem AMa und mit Sem schlierenden Mittel in beliebiger Reihenfolge geschieht_s und &&B man die gegebenenfalls Yorhande&e Sohutsgruppe entfernt oder daß man ein Bie-I-»0yloyetln der formel

B¹ H⁵

R²IHOOS'

^ßAD

55 -

zu dem gewünschten N-AcylCyatein reduzierte

2* Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als Schutzgruppe Q eine Benzylgruppe verwendet«.

3- Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man ein N-Acylcysteinderivat der Formel

R¹ HSG-CHCO₉H

R²NHCOR³

mit einem Amin der Pormel R^R-NH, worin R , R^fcV R^, R und R wie in Anspruch 1 definiert sind, in Gegenwart eines Dicyclo alkyloarbodiimide umsetzt.

4ο Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß man S-Benzylcysteinmethyiesterhydrochlorid mit Ammojiiat in Gegenwart von Methanol »u 2-AiiinO'3-ben«ylthiopropionamid -hydrochlorid urneetat, da« Beneylthiopropionamid mit Acetanhydrid in Gegenwart τοη Xthylaoetet aoetyliert und das 2*Aoetaaido-3~benEylthiop?opionAaid durch Behandlung nit metallischem Katriua in flüssigem Ammoniak debenzyiiert.

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5. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß m*n durch Erwärmen einer Mischung von 3,3'-Dithio™ bis-ft? acetaaido-H-methylpropionamidJund Zinkstaub in Gegenwart von verdünnter Salzsäure 2-Acetamido-3-ner~ capto-N-propionamid herstellt.

6. Yerfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß Mm durch Behandlung von Cystindimethylesterdihydro-Chlorid ait einer gesättigten wasserfreien aeth&nftlischen Lösung von Aiuwniak das entsprechende BiSMiö herstellt, das so erhaltene Disjiid eit Propionsäureonhydrid in Gegenwart einer wässrigen Lösung von Matriuaacttat acyliert und das erhaltene 3,3'-Dithio-bis~(2-propionaaiäopropioiuuaid mit Zink in Gegenwart von verdünnter Sals· säure trwämt.