DE1492049C3 - Verfahren zur Gewinnung von Cephalosporin C aus einem dieses Antibiotikum neben Cephalosporin N enthaltenden fermentierten Medium - Google Patents

Description

der feinteiligen Form (XE 58) von »Amberqlite-Harz IR 4B«, in der Acetatform und im Gleichgewicht mit der Ammoniumacetat-Pufferlösung aufgegeben. Die Eluierung erfolgte mit derselben, durch eine Micropumpe mit konstanter Geschwindigkeit zugeführten Pufferlösung, wobei alle 5 Minuten Fraktionen von 2 ml aufgefangen wurden. Proben aus den ungeradzahligen Fraktionen wurden mit der Pufferlösung entsprechend verdünnt und die optischen Dichten der so erhaltenen Lösungen bei 260 μπι).

An Hand der Kurve aus den jeweiligen optischen Dichten wurden geeignete Fraktionen vereinigt, (hier die Fraktionen 95 bis 170) und die Lösung lyophilisiert, um den Hauptanteil an Ammoniumacetat zu entfernen.

Der Kolbeninhalt wurde dann gemäß dem vorliegenden Verfahren in 2 ml Wasser gelöst und auf eine kleine Kolonne (5X1 cm) von »Dowex-50 X 8-Harz« in der Wasserstofform (Körnung 38 bis 76 μ) aufgegeben. Nach Einsickern der Lösung wurde die Kolonne rasch mit 15 ml Wasser gewaschen, das Harz aus der Kolonne entfernt und in 10 ml Wasser aufgenommen, worauf das Gemisch unter Rühren mit η NaOH auf einem pH-Wert von

ίο 6,5 titriert wurde. Dann wurde das Harz abfiltriert und mit Wasser ausgewaschen und das mit den Waschwassern vereinigte Filtrat lyophilisiert. Das hierbei anfallende Natriumsalz von Cephalosporine war aus wenig Wasser leicht in kristallisierter Form zu erhalten.

Claims (1)

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haltene Anionen an der Kolonne absorbiert werden,

Patentanspruch: während der Rest der Lösung zusammen mit allen

darin enthaltenen Kationen durch die Kolonne hin-

Verfahren zur Gewinnung von Cephalospo- durchläuft. Das Cephalosporin C kann dann aus der rin C aus einem geklärten fermentierten Medium, 5 Kolonne eluiert werden und ist dann frei von katiodas Cephalosporine neben CephalsoporinN ent- nischen Verunreinigungen.

• hält, unter Verwendung von Ionenaustauschern, Es hat sich jedoch erwiesen, daß bei diesem be-

wobei das geklärte Medium mit einem stark saure kannten Reinigungsverfahren das Eluat noch anioni-Gruppen in Wasserstofform enthaltenden Katio- sehe Verunreinigungen enthalten kann, und bisher nenaustauscher auf einen pH-Wert von 2.8 bis io war kein einfaches Verfahren bekannt, mittels dessen 4,0 eingestellt, der Kationenaustauscher von dem man diese Verunreinigungen mit Hilfe von Anionenangesäuerten Medium abgetrennt und dieses austauschern hätte entfernen können. Es wurde aber durch einen starken Anionenaustauscher in Form gefunden, daß das im Eluat aus der ersten Reinieines Salzes mit einer schwachen, flüchtigen, mo- gungsstufe enthaltene Cephalosporin C wegen der nobasischen organischen Säure unter Entfernung 15 Gegenwart einer Aminogruppe in dem zwitterionipraktisch der gesamten Chloridionen und ande- sehen Cephalosporin C-Molekül an gewissen Katioren organischen Anionen hindurchgeführt wird, nenaustauschern absorbiert und hiervon wieder eluworauf aus dem Perkolat das Cephalosporin C iert werden kann, ohne daß die Wirksamkeit des Angewonnen wird, nach Patent 1126 564, da- tiobiotikums beeinträchtigt wird. Auf diese an sich durch gekennzeichnet, daß man das 20 überraschende Weise kann das CephalosporinC von Perkolat zwecks Reinigung des zu gewinnenden noch mitgeführten anionischen Verunreinigungen ge-Cephalosporins C über einen stark sauren, SuI- trennt werden," da diese an dem Kationenaustauscher fonsäuregruppen enthaltenden Kationenaustau- nicht absorbiert werden. Durch Spülen der Kationenscher führt und das am Austauscherharz adsor- austauscherkolonne mit wäßriger Natriumlauge erbierte Cephalosporin C durch Eluieren des Har- 25 hält man dann eine Lösung des Na-Salzes des Cezes mit wäßriger Natronlauge in Form einer Lö- phalosporins, aus der man das Wasser durch Lyphilisung seines Na-Salzes freisetzt und diese un- sieren abtrennt.

schließend lyophilisiert. ' Besonders gut geeignete starke Kationenaustau

scher sind die unter den geschützten Handelbezeich-30 nungen »Dowex 50« und »Amberlite 120« im Han-

del erhältlichen Harze sowie Sulfoäthylcellulose. Da

viel© Kationen leichter absorbiert werden als das Cephalosporin C müssen bei der Behandlung von Per-

Das Hauptpatent betrifft ein Verfahren zur Ge- kolaten, die noch größere Mangen an kationischen winnung von Cephalosporine aus einem geklärten 35 Verunreinigungen enthalten, verhältnismäßig große fermentierten Medium, das Cephalosporin C neben Harzmengen verwendet werden, um Verluste an Ce-Cephalosporin N enthält, unter Verwendung von phalosporin C zu vermeiden.
Ionenaustauschern, das dadurch gekennzeichnet ist, .

daß das geklärte Medium mit einem stark saure Beispiel

Gruppen in der Wasserstofform enthaltenden Katio- 40 Aus einem durch die Kultur von Cephalosporium nenaustauscher auf einen pH-Wert von 2,8 bis 4,0 I.M.I. 49, 137 erhaltenen Kulturmedium (200ml) eingestellt wird, dann der Kationenaustauscher von wurde zunächst nach dem Hauptpatent das Cephalodem angesäuerten Medium abgetrennt und dieses sporin N entfernt. Hierzu wurde das Medium mit Esdurch einen starken Anionenaustauscher in seiner sigsäure auf einen pH-Wert von 5,5 eingestellt und Form eines Salzes mit einer schwachen, flüchtigen, 45 das Mycel und andere supendierte Feststoffe durch monobasischen organischen Säure unter Entfernung Zentrifugieren abgetrennt. Die so erhaltene, noch praktisch der gesamten Chloridionen und anderer trübe Flüssigkeit wurde abgegossen und die Festanorganischer Anionen durchgeführt wird, worauf stoffe mit 200 ml Wasser nachgewaschen. Die abgedas Cephalosporin C aus dem Perkolat gewonnen gossene Flüssigkeit wurde mit den Waschwässern wird. 50 vereinigt und durch Zusatz von »Dowex 50 X 8

In Weiterentwicklung dieses älteren Verfahrens (Η-Form)« auf einen pH.-Wert von 2,8 gebracht, wurde nun gefunden, daß es von besonderem Vorteil Nach Abzentrifugieren des Harzes wurde die Flüssigfür die Reinheit des zu gewinnenden Cephalospo- keit drei Stunden bei 37° C gehalten um das darin rins C ist, wenn man gemäß dem Kennzeichen des enthaltene Cephalosporin N in die der Penicillinsäure vorliegenden Verfahrens das wie oben erhaltene Per-.55 entsprechende Verbindung umzuwandeln,
kolat zwecks Reinigung des zu gewinnenden Cepha- Die Flüssigkeit wurde dann im Vakuum bei etwa

losporinsC über einen stark sauren, Sulfonsäure- 24° C auf 10 ml eingedampft und von dem abgegruppen enthaltenden Kationenaustauscher führt und schiedenen weißen gummiartigen Niederschlag abdas vm Austauscherharz absorbierte Cephalospo- zentrifugiert. Die klare dunkelbraune Flüssigkeit rin C durch Eluieren des Harzes mit wäßriger Na- 60 wurde über eine Kolonne »Amberlite IRA 400« (76 tronlauge in Form einer Lösung seines Na-Salzes bis 152 μ) in der Acetatform geleitet und mit 30 ml freisetzt und diese anschließend lyophilisiert. Wasser nachgespült. Auf diese Weise wurden die

1 In der britischen Patentschrift 810 196 wird vorge- Chloride und anderen organischen Ionen absorbiert, schlagen, zur Reinigung von Cephalosporin C Anio- während alles Cephalosporin C in das Eluat und das nenaustauscher zu verwenden. Die rohe, Cephalo- 65 Waschwasser ging, woraus es durch Lyophilisieren sporin C enthaltende Lösung wird dabei auf eine Ko- als braunes Pulver genommen wurde. Dieses wurde lonne des Anionenaustauschers aufgebracht, so daß in 2 ml einer Ammoniumacetatpufferlösung vom das Cephalosporin C und andere in der Lösung ent- pH-Wert 5,0 (0,2 Mol) gelöst und auf eine Kolonne