DE1445828A1

DE1445828A1 - Neues Cephalosporansaeurederivat und Verfahren zu seiner Herstellung

Info

Publication number: DE1445828A1
Application number: DE19631445828
Authority: DE
Inventors: Vincent Arkley; Stephen Eardley; Long Alan Gibsen
Original assignee: Glaxo Laboratories Ltd
Current assignee: Glaxo Laboratories Ltd
Priority date: 1962-12-14
Filing date: 1963-12-14
Publication date: 1969-04-17
Also published as: DE1795600B2; DK125138C; CH469023A; BR6355431D0; NL7304127A; GB1028563A; DK121861B; AT249861B; DE1795600A1; SE320073B; CH442310A; CS158177B2; SE350509B; CS154598B2; DK125138B; MY6800009A; CY415A

Description

D.-. R. KoenigsbeWjer Cipl. i'lv/s. R. Holzhauer Patentanwälte München 2, Brfiuhausstrafee 4/IU

10/N
(2/2/1)

Glaxo Laboratories limited, Greenford, Middlesex, England

Heues Cephalosporansäurederivai; und Verfahren zu seiner Herstellu:-..-;

Die Erfindung "betrifft ein neues Derivat der 7-Aminocephalosporansäure (7-ACA), deren Strukturformel gewöhnlich folgendermaßen dargestellt wird:

2?^H2

O=C H 5 4^3C - CH₂OAc

CO₂H

sowie die Herstellung dieses Derivats. Die .erfindungsgs- *mäße Verbindung ist das H-(7,2^l-Thienylacetamidoceph-3-e«^ 3-ylmethyl)-pyridinium-4-carboxylat und ha-c die Formel

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NtUt Untertagen (Art 711 Abe. 2 Nr. l Salz 3 des XnderungaoM. v. 4. fr.

-2- . -144582%

Es wurde gefunden, daß die erfindungsgemäße Verbindung eia (gutes oatifelotisches SpeKtrum sowohl gegea grawpo si ti ve als auch gegen gramnegative Organismen, aufweist? wie bei spiels= weise im Tierversuch nachgewiesen, wurde₉ und au&erdem eine allgerneinögute Widerstandsfähigkeit gegen, äen kngxiSf durch Panicil'iQse erzeugende Staphylococcen aufweist. Die Verbindung ■besitzt auch eine gut© Xii-vivo-Stabilität und ferner eine sehr gute V/asser löslichkeit«

Erfindungsgemäß wird die Verbindung der J?orael Ti hergestellt _β man eine Verblnduag der allgezaeinen 3¹

ΕΪΪΗ

CH₂PAc _v Ila

oder ein. wasserlösliches SaIs derselben, worin. R ein Wasserstoff atom oder eine Shienylacety!gruppe darstellt ₉ alt PjiridifL

iaasetst/
in an sich bekannter V/eise/^na^ie erhaltene Verb£ndu»g₃ fall«$ Ii ein Wasser at of fatoia darstellt» thienylacet^lisrto

Bei der bevorzugten. Ausführungsforni der Erfiaaduag-v/ird eiaa Verbindung der Formel

#_% ^- OH₂ -.CO-NH- CH

0 _a c Έ^ ^J CH₂OAc

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oder ein wasserlösliches Salz derselben, mit Pyridin in. einem stark polaren Medium umgesetzt« Soweit SaXse von Verbindungen der Pormel IHverwendet werden, eignen eich ZoB» die Natrium-, Kalium» oder Ammoniumsalze. Wasser stellt meistens das geeignetste Medium dar, aber es kann auch ein mit Wasser mischbares organisches Lösungsmittel, wie Ν,Ν-Dimethylforinamid oder Aceton zugegeben werden, obwohl hierdurch leicht die Ausbeute ver~ ringert wird.

Die Heaktienstemperatur liegt günstig bei mindestens 15⁰C, im allgemeinen jedoch unter 7O⁰C.

Die Reaktionsdauer hängt von der angewendeten. Temperatur ab, laut sich jedoch durch einen Vorversuch bestimmen.

Die Reaktioneteilnehmer werden vorteilhaft in einsm Verhältnis von einem Moläquivalent der Verbindung III ssu I bis 10 hoI« äquivalenten Pyridin verwendet. Der pH-Wert der Lösung wird vorteilhaft in den Grenzen von 5 bis 8, vorzugsweise 6 bis 7» gehalten. Falls notwendig, sollte der pH-Wert der Lösung auf den gewünschten Wert durch Zusatz eines Puffers, wie z.B. Ammoniumacetat oder bei Verwendung eines Alkalisalzes der Verbindung der allgemeinen Formel III, durch Zugabe von z.B. Essigsäure, eingestellt werden.

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Das Heaktionsprodukt läßt sich aus. der Beaktionsmischung, die z.B. nicht umgesetzte Verbindung der IOrmel III und ander© .Substanzen enthalten kann, durch übliche Verfahren abtrennen» zu denen Kristallisation, Elektrophorese» Papierchromatographie oder Behandlung mit einem Ionenaustauschharz gehör en<>

Ein bequemes Verfahren besteht darin» überschüssiges Pyridin mit der Verbindung der Formel III in Wasser umzusetzen, bis man eine optimale Ausbeute an der gewünschten Verbindung II erzielt hat. überschüssiges Pyridin und ein Seil der nicht umgesetzten Verbindung III werden dann mit einem organischen Lösungsmittel» beispielsweise Methylenchlorid» extrahiert und die restliche Lösung wird durch ein Anioneneustauacherharz» z.B. in Form des Acetats» percoliert, um alle Verbindungen mit freier Carboxylgruppe und den liest der nicht umgesetzten Verbindung III zu entfernen« Die restliche Lösung wird dann konzentriert» z.B. in einem Rotationsverdampfer,

VÄ6y

und gefriestrocknet. Der Rückstand kann dann aus einem geeigneten Lösungsmittel» z.B. Methanol» kristallisiert oder durch Fällung gereinigt werden» z.B. aus methanolischer Lösung durch Zusatz von Aceton·

Die Verbindungen der oben angegebenen Formel III können durch Umsetzung von 7.JaCA mit einem Thienylacetylieruugsmittel hergestellt werden. Geeignete Thienylacetylierungsmittel sind im allgemeinen diejenigen, welche sich zum Thienylacetylieren

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von Aminoamiden, z.B. Peptiden, eignen« wozu insbesondere Thieny!acetylhalogenide, insbesondere die Chloride oder Bromide und die gemischten Anhydride, z„B. von Thieny!essigsäure und einem Alkylhalogenformiat abgeleitete, gehören. Die Acylierung läßt sich bequem in wäßrigem Medium ausführen,-z«B. in einem wäßrigen wassermischbaren Keton, v/ie Aceton, oder wäßrigem Tetrahydrofuran, vorzugsweise auch in Gegenwart eines säurebindenden Mittels, z.B. Natriumbicarbonat. Der pH-Wert wird während der Reaktion vorzugsweise bei 5 bis 7 gehalten und die Reaktion kann bei Temperaturen von 0 bis 25 C durchgeführt werden. Die Acylierung kann auch in einem organischen I&sungsmittelmedium, z.B. Eseigsäureäthylester, ausgeführt werden, wobei z.B. einfach zum Rückfluß erhitzt wird.

Wie oben erwähnt (R » H in Formel Ha), kann auch 7-ACA zuerst mit Pyridin unter Bildung einer Verbindung der Formel

umgesetzt werden, gefolgt von der Acylierung der erhaltenen Verbindung mit einem Ihienylacetylierungsmittel« Diese Reaktionen können im allgemeinen unter den oben für die Umsetzung mit Pyridin und die Acylierungsreaktion beschriebenen Bedingungen ausgeführt werden*

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Nach einem Alternativverfahren kann die Verbindung der Formel Vau&aua einer Verbindung der Formel

H00C.CH(CH₂)₃C0NH - G

•ί-0 m ο—ü . 1- CH^ii' j _VI

co.

nach an sich für die Umwandlung von Cephalosporin C in 7~ACA bekannten Methoden hergestellt werden» Die Verbindung der Formel VI kann aus Cephalosporin C durch Umsetzung mit Pyridin nach analogen Verfahren hergestellt werden, wie sie oben für die Umsetzung von Verbindungen der Formel III mit Pyridin beschrieben wurden«

Die hier beschriebene neue Verbindung wird unter Bezugnahme auf die Substanz Cepham (siehe J.A.C.So 1962» 84» 3400) beschriebene :

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Die erfindungsgemäße Verbindung besitzt ein breites Invivo-Wirkungsspektrum, und zu den empfindlichen Organismen gehören Staph. aureus (einschließlich, der penicillinresistenten Stämme), Streptococcus pneumoniae, Strept. pyogenes, Strept. viridans, Corynebacterium diphtheriae, Nelseeria catarrhalis und N. gonorrlibeas, Clostridium septicum, Cl. welchii, E. coli, Salmonella typhi, S.typhimurium, S. paratyphi, verschiedene Shigella-Arten, Proteus mirabilis, H. pertussis, Leptospira icterohaemorrhagiae, I». pomona und I. canicola. Es ergab sich auch, daß sie gegen Staphylococcenpenicillinase sehr beständig ist, einen hohen Serumspiegel in vivo aufrechterhält und eine viel größere In-vivo-Stabilität aufweist als die entsprechende Verbindung der Formel III (wie durch hohe Urinspiegel bewiesen wird) und auch eine bessere Löslichkeit in Wasser (etwa 20 % Gewicht/Gewicht bei etwa 20⁰C) zeigt.

N-(7,2^l-Thienylacetamidoceph-3-em-3-ylmethyl)-pyridinium-4-carboxylat besitzt bei Labortieren eine niedrige akute Organtoxizität. Die intravenösen und subkutanen DL^Q-V/erte, an Mäusen bestimmt, sind 1,3 und 8,5 g/kg, und dii subkutane DL^q bei Ratten beträgt 5,5 g/kg. Einzelne intramuskulär verabreichte Dosen erzeugten keine Anzeichen für eine allgemeine oder lokale Toxizität bei Verabreichung an Kaninchen (0,2 g/kg), Katzen (0,2 oder 1 g/kg), Hunde (0,1, 0,2 oder 0,5 g/kg) und Affen (0,2 g/kg) und Mäuse, Ratten und Katzen nahmen Oraldosen von 15,3 bzv.. 0,1 g/kg auf, ohne irgendwelche Begleiterscheinungen. Kistologische Untersuchen der Injektionsstellen zeigten,daß die

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Verbindung weniger Schäden verursachte als KTatriumpenic.iliin G. · ,.Bei Kaninchen,' Mäusen/" Meerschweinchen, Affen und: Ratten, denen ' ;die 'Verbindung in Einzelinjektionen von 50," 2ÖÖ,~20Ö, 200 bzw. -; /.1000 mg/kg "■ verabreicht würde/ zeigten'sich keine Anzeichen von'■■'■■

ilfephro'toxiiiitätV NieresiftunJctioneteete

: welche die·-Verbindung duroh intravenöse ^

erhielten, zeigten, dass' die .Substanz 'einf acl/ Glomerularf iltra- ,■' tion ausgeschieden wurde und dass sie keine Wirkung auf den ITie-·

|.renpiasin8^1u.ss.,^'die::Kla^ die Fähigkeit zur · ·>

,5fHeäbB0rption-von Glucose hat*.Subakute.-.T.oxizitätsyersuche an .·

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Zum besseren Verständnis der Erfindung werden die folgenden >.* Beispiele angegeben. Die UV-Absorption betrifft Lösungen,in -·; Wasser oder wäßrigem Phosphatpuff er von pH 6 ,Ö.fDie Schmelzpunkte^ der Verbindungen wurden in Capillarröhrchen gemessen. ν

Die Papierchromatographie wurde auf Whatman Hr..1 Papier, ge- puffert mit Oy 1m~l7atriumacetat pH 5» ausgeführt. Als Lösungsmittelsyetem wurde Essigester/n-Butanol/0,1m-Katriumacetat 8 '· · 3gpffit1 t 8 verwendet. Die Chromatographie wurde absteigend durchgeführt. ' ■ '■ '" : ^; '■;. · . ·· \_: T~ · .

Die Elektrophorese wurde auf Whatman JMM Papieren bei einem Gradienten von 30 Volt pro cm ausgeführt.' Verwendete Pufferlösungen:

a) pH 1,9» Essigsäure/Ameisensäure/Aceton/Wasser 84 i 17 t 105 i 495; ■■·'.■ ; '. . _ V V. ■■■·'.- . .ι. ■- ^;- · . ' ■ -Ζ

b) pH 7» O,05m-Dinatriumhydrogenphosphat (pH-Wert mit Phosphorsäure eingestellt). . ' , .

Die Fraktionen auf den Papierchromatogrammen und Elektrophoreto-' grammen wurden bei Bestrahlung der Papiere mit UV-Licht als dunkle Flecken aufgefunden. Zwitterionen liefen als Basen in der Elektrophorese bei pH 1,9, wurden jedoch bei pH 7 nicht bewegt.

Beispiel 1

a) 7.2'-Thienylaoetamidocephaloaporaneäure 5,00 Q durch ein Sieb von etwa 0,15 mm lichter Maschenweite gesiebte 7-Aminocephalosporansäure wurde⁷¹ in 200 ml siedendem Essig-

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ORtöWM.

ester suspendiert und 4,42 g (1,5 $£Uivalente) 2-ihienylacetylchlorid (Cagniant, Bull. soc. chim. Prance, 1949_f 847) in 20 ml .Essigester wurden zugegeben. Die Mischung wurde 40 Kinuten zvas, Rückfluss erhitzt, abgekühlt und filtriert. Dann, wurden.5,03 ml · Anilin zugesetzt und nach einer Stunde wurde die Mischung einmal · mit 150 ml, zweimal mit 100 ml .und einmal mit 50 ml 37»iger Hatriumbicarbonatlösung extrahiert und die'alkalischen Extrakte wurden dreimal mit je 100 ml Essigester gewaschen. Die wäßrige Lösung wurde, auf pH 1,2 angesäuert und zweimal mit je 150 ml 'Essigeeter extrahiert*. Der'Essigesterextrakt wurde viermal mit .40 ml Wasser gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum auf ein niederes Volumen eingeengt. Es schieden sich 2,5 g rohe 7,2'-Ihlenylaootamidoaephaloeporan8äurQ ab, die abfiltriert wurde. Eindampfung des Piltrats ergab weitere 2,60 g (71 i>) des Produktes, die durch Kristallisation aus Essigeeter und dann aus wäßrigem Aceton gereinigt wurden. P. 156 bis 157°"~(Zersetzung) Λ max. 237 ψ Λ £ * H.400), 261 ψ (£ = 8 900),· /IkJ^ = +84° (c s 0,5 in Dioxan)* Das Natriums al ζ vom Pr 204 bie 205° (Zersetzung), /ßüf-% ^β +135° (ο « .1,0 in Wasser) wurde durch Be-. handlung der Säure in Essigesterlösung mit 1Obigem Hatriumäthylhexanoat in n-Butanol hergestellt.^.;^;.;;.;,:..;'.:; W- .!. ^^--; · '

Analyse;

Berechnet V_::
Gefunden:

ORIGINAL

b) N-(7»2*->3?hienylacetamidooeph-5~em-5--y!methyl)- , p.vri flinium-4-carboxylat

10 ml Pyridin (.10 Äquivalente) wurden unter Rühren zu einer Suspension von 5 g 7t^2l-5Chienylacetamidocephalosporansäure in 45 ml Wasser gegeben· Sie Säure löste sich auf und ergab eine Lösung von pH 6,5* Diese lösung wurde 16 Stunden bei 46⁰O unter Stickstoff stehengelassen und dann viermal mit je 20 ml Methylenchlorid extrahiert·' Nachdem die Lösung dann in einem Rotationsverdampfer "bei weniger als 40° konzentriert worden war, wurde sie über eine Dowex-1-Säule in Acetatform gegeben. Die Eluatfraktionen, welche die gewünschten Pyridinderivate enthielten (polarimetrie ch gemessen), wurden'vereinigt und gefriergetrocknet» Durch Verreiben des gefriergetrockneten Feststoffs (1,75 g) mit Methanol wurden 994 mg (19 ^) dee Pyridinderivate in Form eines weiseen Feststoffs erhalten, λ max. 257 mu (B-j _ca ^s 365); Xlnflektion 256 ταμ (S^_0n- 328) | fäj^ « +45° (ο ■« 0,64 in Y/aeser). *~

Analyse« OjgEj7VjO^S₂*·1 H₂O . .

Berechnet! 0 52,6 £ H 4,4 1* N 9,7 # S 14,8 $ aefundenj 52,3 4,4 9,8 14,4

Die methanolische Mutterlauge wurde in einem Rotationsverdampfer bei nicht mehr als 40° eingeengt und dann langsam in ein grosses Volumen magnetisch gerührten Acetone (ca. 500 ml) gegeben. Auf . diese Weise wurden weitere 301 mg (6 #) des gewünschten Pyridinderivate .als hellgelber fester Stoff· erhalten. Λ max. 237 i * ²⁸⁸*^; ^ lafAktion 255 mji (B^_0n -207).

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Γ;; a) K-7-AininoGeT3h--5"em*3-ylmethylT3yridinium-4-carboxylat '" ;"10,0 g 7-ATflinooephalosporansäure wurden in 1 liter V/asser sus-, pendiert und 40 ml Pyridin (10 Äquivalente) .wurden' zugegeben, '.-?!

f^!; Diese iÖBung vom pH-Wort 6,4- wurde 60. Stunden "bei 35⁰C stehen-·. .·.; ^'gelassen und dann 2 Tage in. den Eissohrank gestellt. Dann wurde ν

M-. " ' ' ■■·■■·· ··'.·' ·.'■·... . ' ■■;. ..V die Misohung dreimal mit. je 1 .Xiter Methylenchlorid extrahiert · ··' •^und die wäßrige Schicht wurde duroh eine ^:4Q χ 3,3 cm Säule von ·.; i^:.Dowex-1~Harz in Porm des Acetats (pH 4,5) laufen gelassen. Das ■_■■".« .■^: Harz wurde mit 700. ml Wasser eluiert, bis das Eluat den optische!

ίίDrehwert 0 aufwies.. Daö Eluat wurde dann mit überschüssigem :''·}!

'•KDowex-50-Hs.rz gerührt, bie der pH der lösung 2,5 war. Dann wurde; ν das Harz abfiltriert, mit ViTasser gewaschen, bis die Waschflüs- 3 {'sigkeiten farblos waren und dann mit 250 ml \7asser gerührt und y .,,mit 7n-Ammoniak auf pH 7,0·eingestellt.; Das Harz wurde abfil-" ;·/■.* ,·; triertjiiiiit Tiasser gewaschen und die Waschflüssigkeit und das ·. ^l!

V'Piltrat v/urden gefriergetrocknet. Man erhielt so 1,03 g (9,6 $).,

•einer'rohen Probe von If-_;7-Arainoceph-3^ta'em-3-ylmethylpyridinium-rv

!JVcarboxyiat. "\ max. 255 >iß ;²56,ΐγι -(B]J_n ·« 349, £ » 10 150); ;ξ" ^:λ~ V ^nu^---'«?1760'^ (ß-Iactamy und .^^λκ"·^: t-an.r\T^:v = no* w,- ι jaaac*"¹""»': "."·'. .-■· ·· ■·...-.. - ■ -····■

■'■' einen.Potentialgradienten von .15#5.·Volt; pro.·cm.'jf^':: ^ii??pi^^- l·^'-

•b) ·Ν-(7.2'-Thienvlacetawtidoceph-^-em^-ylraethyl)- .·

C-' Eine/'Löeung.von;. 10 mg .N-^Aminooeph-^-em-J-ylmethylpyridinium-

-ι,- H45828

4-carboxylat in 10 ml Wasser wurde mit überschüssigem Thienyl-2-acetylchlorid (5 Äquivalente) behandelt, und die Mischung wurde 1 Stunde bei Zimmertemperatur geschüttelt und dann papierchromatographisch (n-Propanol/ Wasser 7:3) im aufsteigenden System und durch Elektrophorese bei pTj 1,9 untersucht. Das N"-(7,2'-Thienylacetamidoceph-3-em-3-y!methyl)-pyridinium-4-carboxylat wurde gefunden. Rp = 0,66, bezogen auf 7-Phenylacetamidocephalosporansäure, Beweglichkeit als Kation bei der Elektrophorese: 1,8 cm bei 15,5 YoIt pro cm. Es zeigte ein gleiches Verhalten wie das in Beispiel 1b) hergestellte Material, das auf diesen Papieren als Standard verwendet wurde.

Die biologischen Eigenschaften der in den obigen Beispie-.len hergestellten Verbindung zeigt, folgende Tabelle. Die Staph. aureus-Stämme A und C waren penicillinresistent, während der Stamm B penicillinempfindlich war.

Reagensglasverdünnungs- Schutz von Mäu-

versuch (γ/ml) sen (ED^/mg/kg/

Dosis) ^5vJ grampositiv gramnegativ subkutan

CQ CQ CQ Ρ» CQ

Cl) Φ Φ UH

f4 . f-i U ρ5 Ή CQ

pj ρ$ ρί Q ^Q pi

CO <lj Oa PQ CO O Ή ·Η CO Φ PQ '¹^

··· H ,df-! ί4 H

ΑΘΑΘΛ0 O Pi^l pig o

co co cd cd co co +* · co

-P-P -P-P -P-P · · U »-P ·

coco coco coco W co Ph coco pq

0*,62^!0,02I<0,5 I 8 A 8 2 <6,25

Die erfindungsgemäße Verbindung ist den aus "The Biochemical Journal", Bd. 79, 1961, S. 403 bis 407 bekannten Verbindungen in ihrer Wirkung deutlich überlegen.

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Claims

Patentansprüche

1.) B^--C7,2'-a?hienylacetamidoceph-3-em-3-ylmet]iyl)-pyridinium-4-carboxylat der Formel

,-CO-NH - CH

0 =

2.) Verfahren zur Herstellung von ^-(T^'-Thi ceph-3~em-3-ylmethyl)-pyridinium-4-carboxylat, dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der allgemeinen Formel

- CH-

Ha

O = C IT /J CH₂OAc

worin R ein Wasserstoffatom oder eine Thienylacetylgruppe bedeutet, oder ein wasserlösliches Salz derselben, in an sich bekannter Weise mit Pyridin umgesetzt und die erhaltene Verbindung, falls R ein Wasserstoffato. bedeutet, thienylacetyliert wird.

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ORIGINAL INSPECTED

3.) Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der Formel

U VCH₂-CO-IiH - CH

0 = C N ^J. _ CH₂OAc III

oder ein wasserlösliches Salz derselben in stark polarem Medium mit Pyridin umgesetzt wird.

4.) Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß es bei einer Temperatur von mindestens 15⁰C durchgeführt wird.

5.) Verfahren nach Anspruch 3 oder 4, dadurch gekennzeichnet, daß ei
wird.

daß es bei einer Temperatur unter 70⁰C durchgeführt

6.) Verfahren nach einem der Ansprüche 2 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß als polares Medium Wasser verwendet wird.

7.) Verfahren nach einem der Ansprüche 2 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß als polares Medium eine Mischung von Wasser und einem mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel verwendet wird.

8*.) Verfahren nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß als wassermischbares organisches Lösungsmittel N,N-Dimethylformamid oder Aceton verwendet werden.

9.) Verfahren nach einem der Ansprüche 3 bis 8, dadurch gekennzeichnet, daß die Umsetzung der Verbindung III

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mit Pyridin unter Verwendung von 1 bis 10 Mol-Äquivalenten des letzteren durchgeführt wird.

10.) Verfahren nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß überschüssiges Pyridin und ein Teil der nicht-umgesetzten Verbindung III danach mit einem organischen Lösungsmittel extrahiert werden und die verbleibende lösung durch ein Ionenaustauscherharz percoliert wird, um alle carboxylischen Verbindungen und den Rest der nicht-umgesetzten Verbindung III zu entfernen, und danach konzentriert und gefriergetrocknet wird.

11.) Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß der Rückstand aus einem geeigneten Lösungsmittel kristallisiert und durch Ausfällung gereinigt wird.

12.) Verfahren nach einem der Ansprüche 5 bis 11, dadurch gekennzeichnet, daß die Umsetzung der Verbindung III mit Pyridin bei einem Pg-Wert von 5 bis 8 erfolgt.

13.) Verfahren nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, daß die Umsetzung bei einem p™ von 6 bis 7 erfolgt.

14.) Verfahren nach einem der Ansprüche 3 bis 13, dadurch gekennzeichnet, daß die Verbindung der Formel III durch Umsetzung von 7-ACA mit einem Thienylacetylchlorid oder -bromid hergestellt wird.

15.) Verfahren nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, daß die Acylierung in wäßrigem Medium ausgeführt wird.

16.) Verfahren nach Anspruch 15, dadurch gekennzeichnet, daß die Umsetzung in Gegenwart eines säurebindenden Mittels ausgeführt wird.

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17.) Verfahren nach Anspruch 15 oder 16, dadurch gekennzeichnet, daß der ρττ-Wert während der Acylierung
auf 5 bis 7 gehalten wird.

18.) Verfahren nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, daß die Acylierung in einem organischen Lösungsmittel ausgeführt wird.

19.) Verfahren nach Anspruch 18, dadurch gekennzeichnet, daß als lösungsmittel Essigester verwendet wird.

20.) Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß 7-ACA mit Pyridin umgesetzt wird unter Bildung einer Verbindung der Eormel

und die erhaltene Verbindung mit einem Acylierungsmittel thienylacetyliert wird.

21.) Verfahren nach Anspruch 20, dadurch gekennzeichnet, daß als Acylierungsmittel ein QJhienylacetylchlorid oder -bromid verwendet wird,

22.) Verwendung von M"—(7,2'-Thienylacetamidoceph-S-em-S- ~ylme^iyl)-pyridinium-4-carboxylat als Antibiotikum.

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