DE1241779B - Verfahren zur mikrobiologischen Herstellung von Glutaminsaeure - Google Patents

Description

BUNDESREPUBLIK DEUTSCHLAND

DEUTSCHES

PATENTAMT

AUSLEGESCHRIFT

Int. CL:

C12d

Deutsche Kl.: 6b-16/02

Nummer: 1 241 779

Aktenzeichen: C 28370IV a/6 b

Anmeldetag: 9. November 1962

Auslegetag: 8. Juni 1967

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur mikrobiologischen Herstellung von Glutaminsäure durch Züchten eines Stammes von Brevibacterium divaricatum in einem üblichen, als Kohlehydratquelle enzymatisches Hydrol enthaltenden wäßrigen Nährmedium.

Aus der französischen Patentschrift 1248 227 ist es bekannt, als Kohlehydratquelle bei der Glutaminsäureherstellung mit Hilfe von Brevibacterium divaricatum durch Hydrolyse mit Säure gewonnenes Stärkehydrolysat der Jamswurzel zu verwenden. Die Gewinnung derartiger Hydrolysate ist jedoch verhältnismäßig aufwendig und kostspielig, so daß man sich darum bemühte, andere, für die Glutaminsäureherstellung verwendbare Hydrolysate zu finden, die als Abfallmaterial bei anderen Verfahren in großen Mengen anfallen und daher einen niedrigen Gestehungspreis besitzen. Ein derartiges Material ist das enzymatische Hydrol, das als Abfallmaterial oder Rückstand aus enzymatischen Hydrolyseverfahren der Kornzuckerindustrie anfällt.

Enzymatisches Hydrol besteht beispielsweise aus Melassen, die man als Mutterlauge beim Umkristallisieren von Zucker erhält, und kann sehr unterschiedlich zusammengesetzt sein. Beispielsweise enthält dieses Hydrol etwa 80% Feststoffe, wovon der Hauptanteil aus Dextrose besteht. Jedoch können auch andere Kohlehydrate in wesentlichen Anteilen enthalten sein. Die Analyse eines typischen handelsüblichen enzymatischen Hydrols ergibt folgende Zusammensetzung:

Feststoff 79,8%

Asche 1,7%

Hydrolysierbares Kohlehydrat 71,8 %

Dextroseäquivalent (von aschefreien

Feststoffen) 75,1%

Dextroseäquivalent 100%

Dextrose 64,1 %

Maltose 7,0%

Trisaccharide 6,4%

Tetrasaccharide und höher.. 22,5%
Wasser 20,0%

Da derartiges enzymatisches Hydrol in großen Mengen zur Verfügung steht, wurden viele Versuche unternommen, um es als Kohlehydratquelle für die mikrobiologische Glutaminsäureherstellung verwenden zu können. Dabei wurden aber nur verhältnismäßig geringe Ausbeuten erzielt.

Das Verfahren nach der Erfindung zur mikrobiologischen Herstellung von Glutaminsäure durch Züchten eines Stammes von Brevibacterium divaricatum in einem übliche Stickstoffsubstanzen und Mineralsalze und als Kohlehydratquelle enzymatisches Verfahren zur mikrobiologischen Herstellung
von Glutaminsäure

Anmelder:

Commercial Solvents Corporation,
Terre Haute, Ind. (V. St. A.)

Vertreter:

Dr. H.-H. Willrath, Patentanwalt,
Wiesbaden, Hildastr. 18

Als Erfinder benannt:
Winfred Nay McCutchan,

Phil H. Hidy, Terre Haute, Ind. (V. St. A.)

Beanspruchte Priorität:

_ao V. St. v. Amerika vom 15. November 1961
(152 628)

as Hydrol enthaltenden wäßrigen Nährmedium zeichnet sich nun dadurch aus, daß man mit Säure hydrolysiertes enzymatisches Hydrol einsetzt.

Bei Verwendung eines solchen mit Säure hydrolysierten enzymatischen Hydrols erzielt man nunmehr überraschenderweise beachtlich bessere Ausbeuten als bei Verwendung von enzymatischem Hydrol selbst. Die Ausbeutesteigerung ist deshalb besonders überraschend, da sie wesentlich höher ist als die durch die Säurehydrolyse erzielte Steigerung des Monosaccharidgehaltes des enzymatischen Hydrols.

Zum Nachweis des überraschenden Vorteils einer Verwendung mit Säure hydrolysierten enzymatischen Hydrols nach dem Verfahren der Erfindung wurden Vergleichsversuche unter Verwendung eines wäßrigen Nährmediums folgender Zusammensetzung durchgeführt:

Kohlehydrate, Gesamtmenge 10 g

K₂HPO₁ 0,1 g

MgSO₄ · 7 H₂O 0,05 g

⁴S Harnstoff 0,8 g

MnSO₄ 4 ppm

FeSO₄ 4 ppm

Wasser 89 g

Bei einem der beiden durchgeführten Versuche wurde ein nicht nachhydrolysiertes enzymatisches Hydrol verwendet, dessen Gesamtmenge an Kohle-

709 589/132

3 4

hydraten 77,4 Gewichtsprozent, bezogen auf die Dikaliumphosphat, sowie Spurenmineralien, wie Man-

Menge des Hydrols, ausmachte. Die Gesamtmenge gan, Magnesium und Eisen, in Verbindungen, wie

an Monosacchariden, bezogen auf das Gewicht des z. B. Magnesiumsulfat, Ferrosulfat oder Mangansulfat,

Hydrols, betrug 64 Gewichtsprozent, was 83 Ge- erforderlich. Bei Durchführung des Verfahrens nach

wichtsprozent, bezogen auf die Gesamtmenge an 5 der Erfindung hält man vorzugsweise das Nährmedium

Kohlehydraten, in diesem Hydrol entspricht. Um in während der ganzen Gärperiode von üblicherweise

dem Nährmedium eine Gesamtmenge von 10 g Kohle- 2 oder 3 Tagen auf einem pH-Wert im Bereich von

hydraten vorliegen zu haben, wurden demnach etwa 6 bis 9. Eine geeignete Hydrolysemethode besteht

12,93 g nicht nachhydrolysiertes Hydrol zur Herstel- darin, daß man eine verdünnte Lösung von enzy-

lung des Nährmediums verwendet, so daß dieses io matischem Hydrol unter Druck in einem Autoklav

8,3 g Monosaccharide enthielt. mit verdünnter Säure behandelt. Hierzu können die

671 g Hydrol wurden auf 4000 ml mit 0,1 n-H₂SO₄ meisten Säuren, wie Salzsäure, Schwefelsäure und

verdünnt und der Nachhydrolyse unterzogen. Dabei Salpetersäure, benutzt werden, wobei relativ kleine

erhielt man ein mit Säure hydrolysiertes enzymatisches Säuremengen genügen. Erfolgreiche Hydrolysierung

Hydrol mit einem Gesamtkohlehydratgehalt von 15 kann man schon mit 0,65 η-Säure durchführen. Es

13,86 Gewichtsprozent, bezogen auf das Gewicht des erwies sich jedoch als notwendig, inerte Gefäße, z. B.

nachhydrolysierten Hydrols, und einem Gehalt von aus Glas oder mit Glasauskleidung, zu gebrauchen,

12,29 Gewichtsprozent an Monosacchariden, eben- um eine Vergiftung der Gärungen zu vermeiden, bei

falls bezogen auf das Gewicht des nachhydrolysierten denen das hydrolysierte enzymatische Hydrol verwendet

Hydrols, was einer Menge von 88,7 Gewichtsprozent, 20 werden soll. Es ist zweckmäßig, die Verweilzeit im

bezogen auf die in dem nachhydrolysierten Hydrol Autoklav so kurz wie möglich zu halten, weil sonst

vorliegenden Kohlehydrate, entspricht. Der geringere vermutlich Hydroxymethylfurfurol gebildet wird.

Gesamtgehalt an Kohlehydraten in dem nachhydroly- Dieses ist vermutlich auch für den Organismus bei der

sierten enzymatischen Hydrol gegenüber dem nicht Glutaminsäuregärung giftig. Deshalb sind Hydrolysen

nachhydrolysierten Hydrol ist eine Folge der Ver- 25 mit Verweilzeiten im Autoklav von nur 10 Minuten

dünnung während der Hydrolyse. mit guten Ergebnissen durchgeführt worden. Tem-

Um in dem Nährmedium eine Gesamtmenge von peraturen im Autoklav von etwa 155° C führen zu sehr

10 g Kohlehydraten zu erhalten, wurden in diesem guten Ergebnissen.

Fall 73 g der Lösung des nachhydrolysierten Hydrols Die folgenden Beispiele dienen zur Erläuterung

zugesetzt, so daß das Nährmedium in diesem Fall 30 der Erfindung.

8,87 g Monosaccharide enthielt. Auf die zu dem B e i s d i e 1 1
Nährmedium zugesetzte Wassermenge wurde das

Verdünnungswasser des Hydrols in beiden Vergleichs- Eine Impfkultur wurde durch Vereinigung von 20 g

versuchen angerechnet. Cerelose, 4 g Harnstoff, 0,5 g K₂HPO₄, 0,25 g MgSO₄ ·

In beiden Vergleichsversuchen enthielt also das 35 7 H₂O, 1 g autolysierter Hefe, genügend Wasser und

Nährmedium die gleiche Gesamtmenge an Kohle- NH₄OH zur Ergänzung auf 500 ml bei einem pH von

hydraten in Höhe von 10 g, von denen im Falle des 7,3 vereinigt. Von diesem Nähi boden wurden Anteile

nicht nachhydrolysierten enzymatischen Hydrols 83 %, von 60 ml in Kolben gegeben und 15 Minuten unter

im Falle des nach der Erfindung nachhydrolysierten 0,7 kg/cm² Druck sterilisiert. Jeder Kolben wurde

enzymatischen Hydrols 88,7% als Monosaccharide 40 mit einer Kultur von Brevibacterium divaricatum

vorlagen. Die Steigerung des Monosaccharidgehaltes NRRL B-2312 beimpft. Diese Kolben wurden dann

durch Nachhydrolyse beträgt somit 6,9 %> bezogen etwa 16 Stunden bei 29 bis 31⁰C unter Belüftung und

auf den Monosaccharidgehalt des nicht nachhydroly- Bewegung bebrütet. Anteile dieses Impfmediums

sierten enzymatischen Hydrols. wurden zum Impfen von Nährmedien verwendet.

Bei gleichen Züchtungsbedingungen erhielt man 45 181 g enzymatisches Hydrol wurden mit 5,3 ml unter Verwendung des nicht nachhydrolysierten konzentrierter Salzsäure (37%) und genügend Wasser enzymatischen Hydrols als Kohlehydratquelle 33,2 g zur Auffüllung auf 1000 ml versetzt. Die erhaltene Glutaminsäure pro Liter, während man bei Verwen- Lösung war 0,065normal und wurde in einen 2-1-Kolben dung des mit Säure nachhydrolysierten enzymatischen gegeben. Die Lösung wurde so berechnet, daß sie Hydrols 39,4 g pro Liter erzielte. Diese Steigerung 50 13 Gewichtsprozent hydrolysierbare Kohlehydrate entspricht 18,7%, bezogen auf die mit nicht nach- enthielt, und beim Versuch zeigte sich, daß sie 14 Gehydrolysiertem enzymatischem Hydrol erzielte Glut- wichtsprozent Gesamtkohlehydrate enthielt. Der Kolaminsäureausbeute, ben mit der Lösung wurde dann 10 Minuten bei einer

Die Methode der Züchtung des Brevibacterium Temperatur von 158 ⁰C unter einem Druck von divaricatum ist im übrigen in den USA.-Patent- 55 5,6 kg/cm² in den Autoklav gesetzt. Nach der Vorschriften 2 978 383 und 2 978 384 beschrieben. Kurz stehenden Hydrolyse zeigte die Lösung einen Gehalt gesagt, verläuft das Verfahren zur Herstellung von von 13,1 Gewichtsprozent Zucker, die eine Fehlingsche Glutaminsäure in der Weise, daß man einen Glutamin- Lösung reduzierten. Ein Anteil der vorstehenden säure erzeugenden Stamm von Brevibacterium di- Lösung von 385 ml wurde dann mit 4 g Harnstoff, varicatum auf ein wäßriges Nährmedium impft, das 60 0,5 g K₂HPO₄, 0,25 g MgSO₄ · 7 H₂O und 0,5 g die obenerwähnten Nährstoffe enthält. Die Gärung autolysierter Hefe, 1 ml MnSO₄-Lösung (4 ppm der wird vorzugsweise bei Temperaturen im Bereich von Gesamtlösung), 1 ml FeSO₄-Lösung (4 ppm der Geetwa 28 bis etwa 31⁰C unter submersen Bedingungen samtlösung) und genügend Wasser und Ammoniak verbei Rühren und Belüftung durchgeführt. Als Stick- mischt, um 500 ml Lösung mit pH 7 herzustellen, stoffquelle werden organische oder anorganische 65 Diese Lösung wurde dann 15 Minuten bei 0,7 kg/cm* Verbindungen, z. B. als Harnstoff, Ammoniumchlorid, Druck sterilisiert, und Anteile von 20 ml wurden in Ammoniumsulfat, verwendet. Für gute Ausbeuten sterile V₂-1-Kolben gegeben. Nach dem Sterilisieren sind auch eine Quelle für Kalium und Phosphor, wie wurden die Kolben mit 1 ml (5%) einer 16stündigen

Impfkultur geimpft, die wie oben gewonnen worden war. Die Kolben wurden bei einer auf 29 bis 31° C während der ganzen Gärung gehaltenen Temperatur bebrütet, und der pH-Wert wurde während der ersten 30 Stunden der Gärung mit Harnstoff auf 7,0 gehalten. Die Kolben wurden während der ganzen Gärung geschüttelt. Untersuchungen zeigten 31,6 g Glutaminsäure je Liter Gärlösung nach 24stündiger Gärung und 42,5 g Glutaminsäure je Liter Gärmedium nach 48stündiger Gärung.

Beispiel 2

279 g enzymatisches Hydrol wurden mit 5,3 ml konzentrierter Salzsäure (37%) und genügend Wasser zur Ergänzung auf 1000 ml versetzt. Die entstehende Lösung war 0,065normal und wurde in einen 2-1-Kolben gegeben. Die Lösung wurde auf einen Gehalt von 20 Gewichtsprozent hydrolysierbaren Kohlehydraten berechnet und zeigte bei der Untersuchung 21,6 Gewichtsprozent Gesamtkohlehydrate. Der die Lösung enthaltende Kolben wurde 20 Minuten bei einer Temperatur von 153 ⁰C unter einem Druck von 4,2 kg/cm² im Autoklav behandelt. Nach dieser Hydrolysierung zeigte sich ein Gehalt von 21,4 Gewichtsprozent Zucker, die eine Fehlingsche Lösung reduzierten. Ein Anteil von 385 ml der vorstehenden Lösung wurden dann mit 4 g Harnstoff, 0,5 g K₂HPO₄, 0,2 g MgSO₄ - 7 H₂O, 0,5 g autolysierter Hefe, 1 ml MnSO₄-Lösung (4 ppm der Gesamtlösung), ImI FeSO₄-Lösung (4 ppm der Gesamtlösung) und genügend Wasser und Ammoniak vermischt, um 500 ml Lösung mit pH 7 zu erhalten. Diese Lösung wurde dann 15 Minuten unter 0,7 kg/cm² Druck sterilisiert, und Anteile von 20 ml wurden in sterile ¹I₂-I-KoYbSn gegeben. Nach der Sterilisierung wurden die Kolben mit 1 ml (5 %) eines 16stündigen Impfmediums geimpft, das, wie im Beispiel 1 beschrieben, hergestellt war. Der Kolben wurde dann bei einer Temperatur, die auf 29 bis 31⁰C während der ganzen Gärung gehalten wurde, und bei einem während der ersten 30 Stunden der Gärung mit Harnstoff auf 7,0 gehaltenen pH-Wert bebrütet. Der Kolben wurde während der ganzen Gärung geschüttelt. Untersuchungen zeigten 26,2 g Glutaminsäure je Liter Gärmedium nach 24 Stunden Gärung und 41,5 g Glutaminsäure je Liter Gärmedium nach 48 Stunden Gärung.

Beispiel 3

181 g enzymatisches Hydrol wurden mit 5,3 ml konzentrierter Salzsäure (37%) und genügend Wasser zur Auffüllung auf 1000 ml versetzt. Diese Lösung war 0,065normal und wurde in einen 2-1-Kolben gegeben. Die Lösung war so berechnet, daß sie 13 Gewichtsprozent hydrolysierbares Kohlehydrat enthielt und zeigte bei einer Untersuchung 15,5 Gewichtsprozent Gesamtkohlehydrate. Der Kolben mit der Lösung wurde dann 5 Minuten bei einer Temperatur von 158 ⁰C unter einem Druck von 5,6 kg/cm² im Autoklav eingeschlossen. Nach dieser Hydrolysierung zeigte sich ein Gehalt von 11,6 Gewichtsprozent Zucker, die eine Fehlingsche Lösung reduzierten. Ein Anteil von 385 ml der vostehenden Lösung wurde dann mit 4 g Harnstoff, 0,5 g K₂HPO₄, 0,25 g MgSO₄ · 7 H₂O, 0,5 g autolysierter Hefe, 1 ml MnSO₄-Lösung (4 ppm der Gesamtlösung), 1 ml FeSO₄-Lösung (4 ppm der Gesamtlösung) und genügend Wasser und Ammoniak vermischt, um 500 ml Lösung von pH 7 zu erhalten. Diese Lösung wurde dann 15 Minuten bei 0,7 kg/cm² Druck sterilisiert, und Anteile von 20 ml wurden in sterile V₂-I^-Kolben gegeben. Nach der Sterilisierung wurde der Kolben mit 1 ml (5%) einer 16stündigen Impfkultur geimpft, die, wie im Beispiel 1 beschrieben, hergestellt war. Der Kolben wurde dann bei einer auf 29 bis 31⁰C während der ganzen Gärung gehaltenen Temperatur und unter Aufrechterhaltung eines pH-Wertes von 7,0 während der ersten 30 Stunden der Gärung

ίο mit Harnstoff bebrütet.

Der Kolben wurde während der ganzen Gärung geschüttelt. Untersuchungen ergaben 30,3 g Glutaminsäure je Liter Gärmedium nach 24 Stunden Gärung und 35,6 g Glutaminsäure je Liter Gärmedium nach 48 Stunden Gärung.

Beispiel 4

348 g enzymatisches Hydrol wurden mit 5,3 ml konzentrierter Salzsäure (37%) und genügend Wasser zur Ergänzung auf 1000 ml versetzt. Diese Lösung war 0,065normal und wurde in einen 2-1-Kolben gegeben. Die Lösung war so berechnet, daß sie 25 Gewichtsprozent hydrolysierbares Kohlehydrat enthielt und zeigte bei der Untersuchung 28,8 Gewichtsprozent Gesamtkohlehydrate. Der Kolben mit der Lösung wurde 12,5 Minuten bei einer Temperatur von 153°C unter einem Druck von 4,6 kg/cm² im Autoklav eingeschlossen. Nach dieser Hydrolysierung zeigte sich ein Gehalt von 25,4 Gewichtsprozent Zucker, die eine Fehlingsche Lösung reduzierten. Ein Anteil von 385 ml dieser Lösung wurde dann mit 4 g Harnstoff, 0,5 g K₂HPO₄, 0,25 g MgSO₄ · 7 H₂O, 0,5 g autolysierter Hefe, 1 ml MnSO₄-Lösung (4 ppm der Geamtlösung), 1 ml FeSO₄-Lösung (4 ppm der Gesamtlösung) und genügend Wasser und Ammoniak vermischt, um 500 ml Lösung von pH 7 zu erhalten. Diese Lösung wurde dann 15 Minuten unter einem Druck von 0,7 kg/cm² sterilisiert, und Anteile von 20 ml wurden in sterile 72-l-Kolben gegeben. Nach der Sterilisierung wurden die Kolben mit 1 ml (5 %) ^emes 16 Stunden alten Impfmediums geimpft, das, wie im Beispiel 1 beschrieben, hergestellt war. Der Kolben wurde dann bei einer auf 29 bis 31⁰C während der ganzen Gärung gehaltenen Temperatur unter Aufrechterhaltung von pH 7,0 während der ersten 30 Stunden der Gärung mit Harnstoff bebrütet. Der Kolben wurde während der ganzen Gärung geschüttelt. Untersuchungen zeigten 31,0 g Glutamin je Liter Gärmedium nach 24 Stunden Gärung und 38,0 g Glutaminsäure je Liter Gärmedium nach 48 Stunden Gärung.

Beispiel 5

279 g enzymatisches Hydrol wurden mit 1,8 ml konzentrierter Schwefelsäure (96%) und genügend Wasser zur Ergänzung auf 1000 ml versetzt. Diese Lösung war 0,065normal und wurde in einen 2-1-Kolben gegeben. Die Lösung war so berechnet, daß sie 20 Gewichtsprozent hydrolysierbares Kohlehydrat enthielt, und bei Untersuchung wurde ein Gehalt von 23 Gewichtsprozent Gesamtkohlehydrate gefunden. Der Kolben mit der Lösung wurde dann 15 Minuten bei einer Temperatur von 156°C unter einem Druck von etwa 4,6 kg/cm² im Autoklav eingeschlossen. Nach dieser Hydrolysierung zeigte die Lösung einen Gehalt von 20 Gewichtsprozent Zucker, die Fehlingsche Lösung reduzierten. Ein Anteil der Lösung von 250 ml wurde dann mit 4 g Harnstoff, 0,5 g

K₂HPO₄, 0,25g MgSO₄-7H₂O, 0,5 g autolysierter Hefe, 1 ml MnSO₄-Lösung (4 ppm der Gesamtlösung), 1 ml FeSO₄-Lösung (4 ppm der Gesamtlösung) und genügend Wasser und Ammoniak zur Herstellung von 500 ml Lösung mit pH 7 vermischt. Diese Lösung wurde dann 15 Minuten unter einem Druck von 0,7 kg/cm² sterilisiert, und Anteile von 20 ml wurden in sterile Va-l-Kolben gegeben. Nach der Sterilisierung wurde der Kolben mit 1 ml (5 °/₀) einer 16 Stunden alten Impfkultur geimpft, die, wie im Beispiel 1 beschrieben, hergestellt war. Dann wurde der Kolben bei einer auf 29 bis 31 ° C während der ganzen Gärung gehaltenen Temperatur und Aufrechterhaltung von pH 7,0 während der ersten 30 Stunden der Gärung mit Harnstoff bebrütet. Der Kolben wurde während der ganzen Gärung geschüttelt. Untersuchungen ergaben 31,8 g Glutaminsäure je Liter Gärmedium nach 24 Stunden Gärung und 41,3 g Glutaminsäure je Liter Gärmedium nach 48 Stunden Gärung.

Beispiel 6

186 g enzymatisches Hydrol wurden mit 6,05 ml konzentrierter Salpetersäure (70%) und genügend Wasser zur Ergänzung auf 1000 ml versetzt. Diese Lösung war 0,lnormal und wurde in einen 2-1-Kolben gegeben. Die Lösung war so berechnet, daß sie 13 Gewichtsprozent hydrolysierbare Kohlehydrate enthielt, und nach Untersuchung wurde ein Gehalt von 15 Gewichtsprozent Gesamtkohlehydrate gefunden. Der Kolben mit der Lösung wurde dann 2 Stunden bei einer Temperatur von 124° C unter einem Druck von 1,3 kg/cm² im Autoklav eingeschlossen. Nach dieser Hydrolysierung zeigte die Lösung einen Gehalt von 13,1 Gewichtsprozent Zucker, die Fehlingsche

so

30 Lösung reduzierten. Ein Anteil von 385 ml dieser Lösung wurde dann mit 4 g Harnstoff, 0,5 g K₂HPO₄, 0,25 g MgSO₄ · 7 H₂O, 0,5 g autolysierter Hefe, 1 ml MnSO₄-Lösung (4 ppm der Gesamtlösung), 1 ml FeSO₄-Lösung (4 ppm der Gesamtlösung) und genügend Wasser und Ammoniak zur Herstellung von 500 ml Lösung mit pH 7 vermischt. Diese Lösung wurde dann 15 Minuten unter einem Druck von 0,7 kg/cm* sterilisiert, und Anteile von 20 ml wurden in sterile V₂-1-Kolben gegeben. Nach der Sterilisierung wurden die Kolben mit 1 ml (5 %) einer 16 Stunden alten Impfkultur geimpft, die, wie im Beispiel 1 angegeben, hergestellt war. Die Kolben wurden bei einer auf 29 bis 31°C während der ganzen Gärung gehaltenen Temperatur unter Aufrechterhaltung von pH 7,0 während der ersten 30 Stunden der Gärung mit Harnstoff bebrütet. Die Kolben wurden während der ganzen Gärung geschüttelt. Untersuchungen ergaben 26,1 g Glutaminsäure je Liter Gärmedium nach 24 Stunden Gärung und 38,8 g Glutaminsäure je Liter Gärmedium nach 48 Stunden Gärung.

Claims (1)

1. Patentanspruch:

   Verfahren zur mikrobiologischen Herstellung von Glutaminsäure durch Züchten eines Stammes von Brevibacterium divaricatum in einem übliche Stickstoffsubstanzen und Mineralsalze und als Kohlehydratquelle enzymatisches Hydrol enthaltenden wäßrigen Nährmedium, dadurch gekennzeichnet, daß man mit Säure hydrolysiertes enzymatisches Hydrol einsetzt.

   In Betracht gezogene Druckschriften:
   Französische Patentschrift Nr. 1 248 227.