DE1198484B - Verfahren zur Darstellung von reinem Proscillaridin - Google Patents

Description

BUNDESREPUBLIK DEUTSCHLAND

DEUTSCHES

PATENTAMT

AUSLEGESCHRIFT

Int. α.:

A61k

Deutsche Kl.: 30 h-2/03

Nummer: 1198 484

Aktenzeichen: K 51257IV a/30 h

Anmeldetag: 2. November 1963

Auslegetag: 12. August 1965

Proscillaridin ist ein Herzglykosid vom Typ der Hexadienolide. Es wurde bisher in technischem Maßstab noch nicht hergestellt. In der frischen Zwiebel von Scilla maritima kommt Proscillaridin praktisch nicht vor, wohl hingegen das native Hauptglykosid Scilla-Glykosid A (Scillaren A), aus welchem Proscillaridin unter der Einwirkung des Ferments Scillarenase durch Abspaltung eines Glukose-Moleküls entsteht. Nach herkömmlicher Auffassung ist Scillarenase nur in der frischen Zwiebel enthalten. Läßt man die frische zerkleinerte Zwiebel längere Zeit stehen, so erfolgt ein fermentativer Abbau von Scilla-Glykosid A zu Proscillaridin.

In der getrockneten Droge ist Proscillaridin in wechselnder Menge vorhanden, jedoch wurde bisher zur Vermeidung der fermentativen Spaltung empfohlen, die Zwiebel schnell zu trocknen oder mit anorganischen Salzen zu verreiben, da auf diese Weise das Ferment inaktiviert wird und die Glykoside im nativen Zustand erhalten bleiben. Auf Grund des bisherigen Standes der Technik mußte man demnach annehmen, daß Proscillaridin nur durch Fermentierung der frischen Droge gewonnen werden konnte. Überraschenderweise wurde jedoch festgestellt, daß auch die getrocknete Zwiebel entgegen den Erwartungen noch das voll aktive Ferment Scillarennase enthält, wodurch es möglich wird, Proscillaridin auch aus der gelagerten Handelsware darzustellen.

Wird die zerkleinerte Droge angefeuchtet bzw. in Wasser aufgeschwemmt, so tritt die gewünschte Fermentation ein, wobei die Spaltungsgeschwindigkeit von der Einwirkungsdauer und der Fermentationstemperatur abhängig ist. Das Scilla-Glykosid A, dessen Anteil an den Gesamtglykosiden der getrockneten Zwiebel etwa 50% ausmacht, wird bei Temperaturen von etwa 20 bis 55° C vollständig zu Proscillaridin verseift. Bei zu langer Fermentationsdauer bzw. zu hoher Fermentationstemperatur hingegen wird das gebildete Proscillaridin durch Abspaltung eines Rhamnose-Moleküls unerwünschterweise weiter abgebaut zum Aglukon.

Aus der wäßrigen Aufschwemmung der Droge wird das Proscillaridin nach beendeter Fermentation mit einem geeigneten organischen Lösungsmittel extrahiert, durch Chromatographie von toxischen Begleitstoffen befreit und schließlich durch Umlösen in reiner kristallisierter Form gewonnen.

Für die Extraktion des Proscillaridins aus der Fermentationsaufschwemmung eignen sich unter anderem Lösungsmittel wie Essigester, Chloroform oder Butanol. Vor Durchführung der Chromatographie wird der Extrakt zur Trockne eingedampft und der Verfahren zur Darstellung von reinem
Proscillaridin

Anmelder:

Knoll Aktiengesellschaft,
Chemische Fabriken,
Ludwigshafen/Rhein, Knollstr. 50

Als Erfinder benannt:

Dr. Walter Steidle, Limburgerhof

Rückstand in Dioxan gelöst. Als Adsorptionsmittel für die Chromatographie eignet sich Kieselgel oder Aluminiumoxyd. Die anschließende Elution des Proscillaridins kann mit Toluol erfolgen, dem steigende Mengen einer Methanol-Dioxan-Mischung zugesetzt werden. Man kann aber auch Chloroform, Methyläthylketon und Mischungen dieser Zusätze verwenden. Als Lösungsmittel für das Umkristallisieren des aus der Hauptfraktion gewonnenen Proscillaridins eignen sich Methanol, Äthanol oder deren Mischungen mit Wasser.

Das erfindungsgemäße Verfahren zur Darstellung von reinem Proscillaridin ist in mehrfacher Hinsicht bedeutungvoll. Abgesehen von der Möglichkeit, statt frischer Meerzwiebel die handelsübliche Droge (z. B. Bulbus Scillae DAB 6) auf Proscillaridin zu verarbeiten, werden bei der beschriebenen Arbeitsmethode in einfacher Weise weniger wirksame bzw. toxische Begleitstoffe abgetrennt. Proscillaridin unterscheidet sich zwar in bezug auf die günstige Beeinflussung der Herzinsuffizienz nicht von dem nativen Scilla-Glykosid A, es wird jedoch, wie gefunden wurde, bei oraler Medikamentation wesentlich besser resorbiert.

Beispiel

350 g getrocknete geschnittene Droge werden 2 Stunden lang in 1,11 Wasser bei 50° C fermentiert. Anschließend wird die Aufschwemmung dreimal mit je 1,21 Essigester extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden zur Trockne eingedampft, der Rückstand in 2 ml Dioxan gelöst und an der 20fachen Menge Kieselgel (bezogen auf den Trocknungsrückstand) chromatographiert. Die Elution des Proscillaridins

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erfolgt mit Toluol, dem steigende Mengen einer Methanol-Dioxan-Misehung zugesetzt werden. Die proscillaridinhaltige Hauptfraktion wird zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird aus Methanol umkristallisiert. Man erhält reines Proscillaridin vom Schmelzpunkt 227 bis 230° C; cc= -93,5° C (in Methanol).

Die anfallenden gesammelten Mutterlaugen können erneut chromatographiert werden. Man gewinnt so den größten Teil des noch verbliebenen Proscillaridins.

Zu dem gleichen Ergebnis gelangt man, wenn man die wäßrige Aufschwemmung der Droge 24 Stunden bei Zimmertemperatur fermentiert und wie oben an~ gegeben aufarbeitet.

Claims (1)

1. Patentanspruch:

   Verfahren zur Darstellung von reinem Proscillaridin, dadurch gekennzeichnet, daß man getrocknete zerkleinerte Meerzwiebeln in Wasser 24 bis 2 Stunden bei Temperaturen von etwa 20 bis 55° C fermentiert, die Aufschwemmung mit Essigester, Chloroform oder Butanol extrahiert, den Extrakt vom Lösungsmittel befreit und in Dioxan an Kieselgel oder Aluminiumoxyd chromatographiert, mit Toluol und steigenden Mengen einer Methanol-Dioxan-Misehung eluiert und aus der Hauptfraktion des Eluats das Proscillaridin in an sich bekannter Weise gewinnt.

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