DE934715C - Trennen der Komponenten des Actinomycins C - Google Patents

Description

• Trennen der Komponenten des Actinomycins C Im deutschen Patent 930 579 ist ein Verfahren vorgeschlagen worden, nach dem das nach dem deutschen Patent 9 z 2 or o zugängliche Actinomycin C in präparativem Maßstab in sehne Komponenten getrennt werden kann. Das geschieht unter Anwendung der Verteilungschromatographie.
• Außer Actinomycin C sind noch weitere Acfiinomycine, auf biologischem Wege gewinnbar. Dazu gehören z. B. das. Aetinomycin A, das. von W ak s -man isoliert worden, ist, das von Todd und Mitarbeiter isolierte Actimmmyain B, ferner die Actinornycine I und X, die von: B rockmann beschrieben; worden; sind; und weitere Actinomycine, wie z. B. das Actinomycin J, das von: Hirato und N a k a n i s k i beschrieben worden ist. Bei, der papierchromatographischen Untersuchung dieser Actinomycine hat Brockmann gefunden, d'aß sie ebenfalls nicht einheitlich silnd, sondern Gemische aus verschiedenen Komponenten darstellen. (Angewand-te Chemie 66, i [z9541).
• Die papierchromatographisahe Methode ist zur präparativen. Trennung der Gemische nicht geeignet. Es wurde aber gefunden, daß die für Actinomycin C im Hauptpatent vorgeschlagene präparative Trennungsmethode sich zur Trennung der Komponenten aller auf biologischem Wege an-

  fallenden Actinomycine anwenden läßt, indem man

  an Stelle des Aabinömycin-C-Gemiisches andere

  ActinomycinrGemische der Verteilungschronnato-

  graphie unterwirft. Auch. hier ist es wesentlich, da.ß

  man für die Vertenlungschramatographie Paare

  von nicht miteinander mischbaren Lösungsmitteln

  einsetzt, von denen eines. eine wäßrige Phase dar-

  stellt, in, der sich das Actinomyoin in möglichst

  hoher Konzentration löst, während als andere

  Phase ein organisches Lösungsmittel verwendet

  wird.. Die im Hauptpatent beschriebenen wäßrigen

  Lösungen von Siailzen von. aromatischen .Qxycarbon-

  säurem. oder Oxysulfosäuren sind, wie sich bei -der

  weiterem. Bearbeitung gezeigt hat, vorzügliche wäß-

  rige Lösungsmittel nicht nur für Actinomycin C,

  sondern auch für die übrigenActinomyain-Gemische.

  Es gelingt, in ihnen so hoble Konzentrationen her-

  zustellen, daß die Verteilungschromatographie

  leicht in präparativem Maßstab an geeigneten Trä-

  gern, wie z. B. Zellulosepulver, durchgeführt werden

  kann.

  Als Kationen. der Salze der aromatischen Oxy-

  carbonsäuren oller Oxys,ulfosäuren sind. am

  organische wie organische Ionen brauchbar. Die

  aromatischen Oxyrarbons.äurem: bzw. Oxys.ulfo-

  säuren, können eine oder mehrere phenolische

  Hydroxylgruppen enthalten. Diese phenolischen

  Hydroxylgruppen brauchen' nicht in freier Form

  vorzuliegen, sondern können, z. B: durch- Alkyl-

  gruppen substituiert sein.

  Als, organisches Lösungsmittel, die mit diesen

  wäßrigen Lösungen. nicht oder nur beschränkt

  mischbar sein dürfen,, haben sich höhere aliphatische

  Alkohole oder Äther, z. B. Methylbutyläther oder

  Dibutyläther; sowie Ester bewährt. Es ist zweck-

  mäßig, die Zusammensetzung dies organischen

  Lösungsmittels so zu wählen, daß es- in seinem

  Lösungsvermögen für die Actihvomycin-Gemische

  hinter dem des wäßrigen Lösungsmittels zuxÜck-

  bleiht. Das läßt sich durch Mischung von zwei ver-

  schiedenen Lösungsmitteln leicht erreichen., z. B,

  durch Mischungen von Butanol mit Dibu.tyläthelr

  in geeignetem Verhältnis. Da, im allgemeinen die

  Löslichkeit der Actinomycine in organischen Lö-

  sungsmitteln. weit höher isst als die in: wäßrigen

  Lösungsmitteln:, bereitet die Auswahl eines geeig-

  neten. organischen Lösungsmittels keine Schwierig-

  keiten.

  Beispiel I

  Zur präpärativen Trennung dies' Actinomycins

  Bo 6o j, dras: von Streptomy'ces spec. Ba- 509 gebildet

  wird und seinem chrom-atographischen Verhalten

  nach dein ActinomyainI von Brockmann nahe-

  steht verwendet man -ein Lös.ungsmitfelpaar, das

  aus. 2,5 Volumteilen Di-n-butyläther, 2,5 Volum-

  teilen 'Bütamol und 5 - Volumteilen einer 8o/oigen

  wäßrigen Lösung des m-kresobinsaurea 'Natriums

  besteht. Die Lösungsmittel werden. durch anhaltemr-

  des. Schütteln ins. Gleichgewicht gesetzt, die wäß-

  rige Phase abgetrennt und. mit ihr ein homogener,

  luftblasenfreier Brei aus - _ Zellulose angerührt.

  Dieser- wird in einem Chromaitographierobr unter

  Anwendung eines geringen Überdruckes zu einer

  Säule von 5,3 cm. Durchmesser und q¢ cm Länge

  zusammengedrückt. Nach Durchdrücken von

  2ooccm organischer Phase werden 5 gActinomycin-

  Gemisch Do6oi, gelöst in wenig organischer Phase,

  auf diel Säule gegebeln; und unter konstantem Über-

  druck durch laufendes .Nachgeben organischer,

  mobiler Phase verteilt. Die Komponenten, des

  Actinomycin-Gemisches Bo 6oj erscheinen an der

  Säule als vier getrennte, rote Zonen, die fraktio-

  nieret eluiert und nach bekannten Verfahren auf-

  gearbeitet- und -kristallisiert werden können: Den

  Hauptanteil des. getrenntenActinomycin-Gemrisches

  Bo 6oj enthält die zweite Zone, aus, der nach zwei-

  maligem- Umkristallisiereh 2 g reinstes Aatino-

  myci@n.erhaltem: wird. _ -

  Beispiel 2

  Der Stamm Winid.73j (vgl. Brockmann und

  Pfennig, Z. phys. Chemie292, 77, [I953]), aus

  einer Erdprobe aus.- der Kadabari bei Windhuk

  isoliert, bildet ein Actinomyain-Gemisch, dhs als

  Actinomycin X bezeichnet wird,.

  Aatinomycin X, in Submerskultur hergestellt,

  wird in, die Komponenten: getrennt, indem man, als

  2-Phasen@System eine; Mischung von 1,5 Volum-

  teilen D@i-n-b@utylätb.er und 3,5 Volumteillen Essig-

  ester einerseits und 5 Volumtei.lelni einer ioo/oigem

  wäßrigen Lösung von m-kresotinsaurem Natrium

  andererseits nach vorheriger gegenseitiger Sätti-

  gung verwendet. Wie im Beispiel. z beschrlieben;

  werden 5 g Actinomycin X,. gelöst in Zoo ccm der

  organischen, Phase, auf eine Zellulosesäule ge-

  geben,, die mit der wäßrigen Phase bereitet ist, und,

  unter konstantem Überdruck. durch laufendes Nach-

  geben organischer Phrase verteilet. Die Komponenten

  des. AGtinomycinrX-Gemiscbes wandern mit ver-

  schiedener -Geschwitdigkeit in der Säule nach

  unten, so daß sich, nach einiger Zeit drei verschier-

  den stärk rotgefärbte Zonen heriaushildm Durch

  weiteres Nachgeben des Lösungsmittelgemisches

  werden die drei -Zonen aus der Säule heraus-

  gewaschen und fraktioniert. aufgefangen. Jede ein-

  zelne Fraktion wird unter vermindertem Drück

  von den, Lösungsmitteln befreit, dann in warmem

  Benzol aufgenommen, von dem kresotin,3äune-

  haltigen Rückstand: durch Filtration; abgetrennt

  und zur weiteren. Reinigung an eine kleine Alumi-

  niumäxydsäule- äd-soxbiert. --Aus dem Aluminium-

  oxyd's.äullen löst min die Acbinomyc;ine mit Essig-

  ester heraus. Die Essigesterlösungen werden unter

  normalem Druck bis zur beginnenden Kristalle=

  sation -eingeengt.

  Ausbeute: Aus der ersten Fraktion r,8. g Actino-

  mycin X2, aus der zweiten Fraktion. I;2 g Actino-

  mycin X1 und aus der dAtten Fraktion. o,6 g Acti-

  no@mycin Xo.

  Aus den Mutterlaugen können noch weitere

  Mengen: gewonnen, werden.

  In der gleichen Weise können auch andere

  Aatinomycine in ihre -Komponenten aufgespalten

  werden, z. B. auch die nach dem Verfahren des deutschen Patents 94q.395 erhältlichen biosynthetischen Actinomycin-Gemische.

Claims (1)

1. PATENTANSPRUCH: . Die Anwendung der Vertieilungschromatographie zur Trennung der Komponenten von auf biologischem Wege anfallenden Actinomycinen nach dem Patent 930 579, dadurch gekennzeichnet, daß hier an Stelle des Actinomycin-C-Gemisches andere auf mikrob-iologischem Wege entstandene Actinomycin-G.emische der Verteilungschromatographie unterworfen werden.