CZ363492A3

CZ363492A3 - Process for preparing a pharmaceutical preparation reducing lipids level in blood

Info

Publication number: CZ363492A3
Application number: CS923634A
Authority: CZ
Inventors: Mate Dr Hidvegi
Original assignee: Mate Dr Hidvegi
Priority date: 1991-12-12
Filing date: 1992-12-11
Publication date: 1993-09-15
Also published as: FR2684877B1; DK148092A; PL296972A1; LU88200A1; BE1006341A3; IL104067A0; GB2262230B; KR930012033A; AU657822B2; FR2684877A1; FI925633A0; NL9202144A; DE4242149A1; ES2055659A1; DK148092D0; GR920100548A; HU913928D0; AU3005492A; JPH05286865A; GB9225866D0

Description

Oblast techniky

Vynález se týká způsobu výroby farmaceutického přípravku selektivně snižujícího hladinu lipidů v krvi, při němž se extrahují semena, kořeny, stonky a/nebo listy vojtěšky, získaný extrakt se popřípadě ' koncentruje a- vzniklý koncentrovaný extrakt se popřípadě zpracovává na suchý prášek nebo granulát.

Dosavadní stav techniky

Brownovi a vztahuj ící

Je známo, že nejdůležitější rizikový faktor pro kardiovaskulární choroby a infarkt myokardu, což jsou choroby, které se nejvýrazněji podílejí na statistice lidské úmrtnosti, má blízký vztah k množství určitých lipidových složek v krvi, které negativně ovlivňují zdraví. Tato skutečnost byla zdůrazněna také udělením Nobelovy ceny Goldsteinovi roku 1985 za jejich nové poznatky, se k chorobám způsobeným cholesterolem.

Z nejdůležitějších publikací z oboru patologie, které se objevily v literatuře (Journal of American Medical Association 248, 1465 [1982]; stejný časopis 256, 2835 [1986]) se mezitím stalo zřejmým, že při horní hranici hladiny cholesterolu v séru, t.j. 6,5 mmol/1, která byla dříve považována za akceptovatelnou, je podíl pacientů, kteří trpí ischemií (t.j. nedostatečnou dodávkou krve, která ohrožuje lidský život), dvojnásobný, ve srovnání s částí populace, u níž je tato koncentrace přibližně 5 mmol/1.

Obzvláště důležité byly výzkumy, které se týkaly jemných detailů objasňujících úlohu jednotlivých lipidových složek v krvi. Na jejich základě se stalo zřejmým, že kromě vysoké hladiny cholesterolu v séru (tzv. hypercholěsterolernié)·'hraje u koronárních chorob srdce rozhodující úlohu také vysoká hladina lipidu triglyceriďovéhd 'typu......v.........séru-- '(-t-zv-.

hypertriglyceridemie) a nesprávné rozdělení poměru lipoproteinů s vysokou hustotou (HDL) k lipoproteinům s nízkou hustotou (LDL) (tzv. dislipopro^teinemie). Tato skutečnost byla m.j. potvrzena výzkumy Fricka a dalších (New Engl. J.. Med. 3.17, 1237 [1987]), které ukazují, že podáváním léků, které přednostně ovlivňují koncentraci těchto tří typů lipidů, zmíněných výše, je možno dosáhnout nejen dvojnásobného, nýbrž i trojnásobného poklesu ischemických chorob a úmrtnosti.

Ze statistických odhadů uskutečněných v několika zemích vyplývá, že přibližně 65 až 76 % dospělé populace vykazuje krvi. Průměrná hladina činí 5,6 až 5,7 mmol/1 3, 265 [1989]). Ve vysoce rizikovou hladinu lipidů v cholesterolu v krvi maďarské populace (Magyar Tudomány [Maďarská věda]

Spojených státech se hladina LDL cholesterolu v romezí od 3,4 do 4,1 mmol/1 považuje za hladinu přijatelnou ze zdravotního hlediska, zatímco vyšší hladina je považována za nebezpečnou (Arch. Intern. Med.. 148,. 36 [1988]).

Hyper- a dyslipoproteinemie se vyvíjí hlavně jako důsledek poruch v metabolismu tuků a je jí možno regulovat podáváním léčiv. Při orálním podávání se tato léčiva buď absorbují, přičemž inhibují biosyntézu liproteinů a urychlují jejich rozklad a vylučování (jako například přípravek Clofibrate nebo deriváty kyseliny nikotinové); nebo se ve střevním traktu neabsorbují a v tomto případě inhibují absorpci lipidů ve střevním traktu (jako například ionexové pryskyřce, sitosterol, dextransulfát apod.). Při podávání těchto léčiv, vsak může docházet i nepříznivým vedlejším účinkům, jako je nausea, diarrhoea a v jiných případech zácpa, plynatost, svalové bolesti, poruchy potence, lithogenese, řidčeji vypadá v ání^Vlasú -a---vedle-jěí^AÍčinky·· .doprovázené ^s.ympbomy^na pokožce.

V případě hyperlipoproteinemie, která představuje vysoké riziko, představuje podávání léčiv, které jě doprovázeno vedlejšími účinky, riziko menší. Naproti tomu pro subjekty, které jsou ohroženy jen, pokud se týče hladiny lipidů v krvi, by bylo žádoucí mít k dispozici přípravek, který by nevykazoval vedlejší účinky, t.j. který by byl. bez rizika a zároveň by měl požadovanou účinnost. Takový přípravek až dosud není znám. Systematické studium, jehož je tento vynález součástí, bylo zaměřeno na vývoj třídy látek tohoto typu.

Nejvyšší pozornost při tom byla zaměřena na saponiny, které z léčiv rostlinného původu vykazují slibný antilipemický účinek.

Saponiny, jejichž fyziologická úloha v rostlinách je v současné době jen velmi málo známa, se vyskytují ve vysokém počtu rostlinných druhů pěstovaných ve velkém měřítku. S několika málo výjimkami jsou tyto saponiny pro člověka toxické.

Podobně je z literatury také známo, že tzv. neutrální nebo kyselé saponiny rostlinného púvodu^jsou schopny selektivně tvořit komplexy se žlučovými kyselinami nebo cholesterolem a jeho deriváty (Biochemistry and Function of Isopentenoids in Plants, monografie, Marcel Dekker, New York, 1984, str. 229 až 246). Tyto saponiny se nalézají ve velkém počtu rostlin.

Z chemického hlediska složkami (CRC Crit. Rev [1987]) sojový sapogenol připojeny různé cukerné jsou nejznámějšími Food Sci. Nutr.

A, B, C , D, Ε , a zbytky. Vyskytuj sapogeninovými 26, 27 až 135

F, k nimž jsou i se v tzv..

- 4 neutrálních ’saponiněch, které /'jsou přítomny~r.V: -určitvchrostlinách. Všechny tyto látky se vyskytují v sóji a vojtěšce a-čás-t—z- -n-ich- —také......v— -některých.......odrůdá_ch_ f azolí,_ hrachu a jetele, jakož i v podzemnici olejně, Lotus corniculatus apod. Jinými neutrálními sapogeniny jsou avenacin A a B, nuatigenin, isonuatigenin apod., v ovsu; solagenin, neochlorogenin, gitogeniny, capsicosides, melongosides, jurubin, v různých druzích brambor a papriky; tomatin v rajčatech; sitosterol” amyrin, gitogeniny apoď.- v různých odrůdách cibule a zejména v česneku; officinalysnin a asparasaponiny v různých druzích chřestu; čajové saponiny v čajovníku; diosgenin, m.j. vkoření rostlin rodu Dioscarea; aescin, aescinialin, kryptoaescin v kaštanech (plodech jírovce). Jiné neutrální sapogeniny lze nalézt v Trigonella foenumgraecum, Yucca, tykvi, okurkách, ostružinách, moruši, Gaylussacia, jahodách, Equisetum a různých odrůdách růží, zejména v šípcích, kořeni žen-šenu apod.

Hlavními reprezentanty kyselých sapogeninů jsou kyselina olealonová, kyselina oleandiolová, kyselina medikagenová, kyselina glycirrhizetová, kyselina epikatonová, kyselina echinocistoová, hederagenin, gypsogenin, medikosid, deriváty helianthosidu apod., které obsahují v jednotlivých saponiněch různé cukerné zbytky. Lze je nalézt v různých odrůdách jetele, vojtěšky, slunečnice, cibule, česneku, muškátového oříšku, špenátu, cukrovky, lékořice, saponaria, velům, konvalinky, klematis apod.

Z hlediska antilipemické účinnosti lze považovat vojtěšku za nejužitečnější, i když nikoliv jediný zdroj saponinu, poněvadž je známo, že všechny saponiny v ní obsažené vytvářejí komplex s cholesterolem (J. Amer. Chem. Soc. 76, 2271 [1954]); byla také podrobně publikována studie tohoto komplexu (Biochim. Biophys. Acta 270, 1818 [1972]).

V* širokém smyslu pdd'-^teřmáhem‘7^yo;j těškaýý-.r.oz.umě jXvšechny rostliny spadající pod rod Medicago L. , zatímco v užším smyslu se pod tímto termínem rozumí nejlépe známý a obvykle pěstovaný druh, t.j. tolice vojtěška (Medicago sativa L.). Z jiných důležitých druhů, které se obvykle pěstují a které mají blízký vztah k tolicí vojtěšce, je možno uvést tolicí písečnou, tolicí srpovitou (Medicago falcata L. ) a tolicí dětelovou (Medicago lupulina L. ) .

Rostlinná osa tolice vojtěšky a vojtěšky písečné se skládá z bylinného stonku, který se vyvíjí z oddenku. Tento oddenek se ve spodní částí rozvětvuje. Listoví vojtěšky se skládá ze srďčovitých—sTožených—trogJLísJskú. List je udržován v různé poloze' řapíkem. U spodních listů tolice vojtěšky jsou stranové části jednotlivých lístků klínovíté a listy mají reversní vejčitý tvar.

Květenství tolice vojtěšky je tvořeno kompaktním chomáčem v němž je obsaženo obvykle 8 až 25 květů. Osa květenství je často delší než celková délka řapíku a listové čepele. Květ má charakteristickou strukturu vikvovitých rostlin. Zelený kalich se skládá z 5 lístků, jejichž povrch je obvykle mírně porostlý chloupky. Délka kvétů je přibližně 10 mm. Barva květové koruny tolice vojtěšky může vykazovat různé nuance od bledě modrého až do tmavě modrofialového odstínu.

Semena tolice vojtěšky mají délku 2 až 2,8 mm, šířku 1,5 až 1,7 mm a tloušbku 1,1 až 1,2 mm. Mají tvar bobu nebo fazole nebo tvar tupého trojúhelníku, jehož symetrie je nar :.’ena stranovým stlačením.

Hlavními složkami, které se vyskytují ve vojtěšce jsou:

a) obecné proteinogenní aminokyseliny, jako je glutamin, asparagin, alanin, arginin, cystein, glycin, histidin, lěučlnj lysin, 'měfhiohiri·,¹ prólin,' seriri, ťýróšíh, tthřěóriiriV· tryprofan, fenylalanin a valin;

b) specifické aminokyseliny (většina z nich jsou volné aminokyseliny, nicméně mohou být přítomny i v zabudované formě v určitých proteinech), t.j. ornithin, citrullin, kyselina gamma-aminomáselná, kyselina gamma-methylglutamová, delta-hydroxylysin, epsilon-amino-alf a-hydroxykapronová kyselina a kanavanin; --------- - ........................-.....

c) aminy, t.j. cholin a trimethylamin;

d) mastné kyseliny, t.j. kyselina linoleová, kyselina olejová, kyselina linolenová a kyselina, stearová;

e) fosfolipidy, t.j. lecithin, cefalin a kyselina fosfatidová;

f) isoprenoidové lipidy, t.j. steroly a triterpenové saponiny;

g) karotinoidy, t.j. karotiny a xantofylly;

h) monoterpeny, t.j. ocimen (hlavní složka vůně vojtěšky);

i) diterpeny, t.j. fytol a fyllochinon;

j) antokyany t.j. diglykosidy delfinidinu, petunidinu a malvidinu;

k) Z furokumarinů se ve vojtěšce vyskytují značná' množství kumestrolu, který vykazuje vysoký uterotrofický účinek. Díky této skutečnosti, může při krmení ovcí vojtěškou dojít ke změně hladiny luteinizačního hormonu, což .může zavinit jejich sterilitu. Tato skutečnost je rizikovým faktorem ϊ u preparátů'’ζ 'vojtěšky*,·»' které.ů_;-.j'pou-urč_eny._ .pro Jconzumaci lidmi [I. Bócsa a L. Szabó Vojtěška a podobné rostliny'', v madarštině, Akadémiai Kiadó, Budapešť, 1987, str. 79 až 80].

1) Vojtěška je velmi bohatá na saponiny vyskytující se v rostlinách rodu Medicago., t.j. na glykosidy vytvořené z pentacyklických sapogeninů a různých cukrů. Nejdúležitějšími sapogeniny jsou sapogenol A, B, C, D, a E, jakož i vojtěšková kyselina a medikagenová kyselina. V rámci rostliny jsou listy přibližně dvakrát bohatší na saponiny ve srovnání s lodyhami, zatímco kořeny obsahují přibližně 10 *x~vetsi mhcržství—sapogeninů než výhon. Složení saponinů; které jsou obsaženy v kořeni, výhonu.

se liší od složení saponinů~vePodle dosavadního stavu techniky se saponiny extrahují z částí vojtéškové rostliny pomocí vodného alkoholu [The American Journal of Nutrition 30, 2061. (1977); Druhé mezinároní sympozium o arterioskleróze v Můnsteru: Clinical Implications of Recent Research Results in Arteriosclerosis, Westdeutscher Verlag, Můnster 1983, str. 242] nebo alkoholem [ Phytochemistry 13, 2253 (1974)].

Účinnost všech saponinů extrahovaných z lodyh a listů vojtěšky na snižování hladiny cholesterolu a lipidů v krvi byla demonstrována na opicích [J. Clin. Invest 67, 156 (1981); Clinical Implications of Recent Research Results in Arteriosclerosis, Westdeutscher Verlag, Můnster 1983, str. 241 až 254 ]. Účinek šrotu ze semen vojtěšky na snižování hladiny cholesterolu a apolipoproteinů v krvi u člověka byl zkoumán v Carolinska Institute (Švédsko) a bylo konstatováno, že denním podáváním 40 g tohoto šrotu je možno snížit velmi vysokou hodnotu koncentrace (9,58 až 8,00 mmol/1) o asi 17 až 18 % (Atherosclerosis 65, 173 (1987)]. Tento účinek však nělzé 'pová žova-t ža^; aostatečný- Z-.=terapeutřckěhct-hled.iska.- · ---- Extraktů/ který lze' získat“ - z......částí- (semen·, -kořene,,...lodyh.

a listů) vojtěškové rostliny známým způsobem, t.j. extrakcí alkoholem nebo vodným alkoholem, je sice možno používat pro snižování hladiny cholesterolu a lipidů v’ krvi, je však známo, že tyto části rostliny obsahují toxický kanavanin [,2-amino-4-(guanidinooxy)máselná kyselina] [The Merck Index, 11. vydání (1989) Rahway, N. J. USA, str. 263] a škodlivé fytoestrogeny (zejména kumestrol (The Merck Index, str. 401). Je tedy používání takových extraktů k terapeutickým účelům doprovázeno nepříznivými, vedlejšími účinky.

Kanavanin je přítomen v množství 1,5 %, vztaženo na sušinu semen a mladých výhonů vojtěškové rostliny. U opic, krmených vojtěškou vyvolává syndrom, který se podobá lupus erithemathosus (Science 216, 415 [1982]).

Obchodně dostupné vojtěškové tablety vyrobené ze sušené vojtěšky obsahují 20 až 190 ppm kumestrolu. To znamená, že se do těla konzumentů těchto vojtěškových tablet dostává denně více než l mg kumestrolu. Takové množství estrogenního hormonu může vést k . patologickým vedlejšímm účinkům [ J. Agric. Food Chem. 32, 173 (1984)].

Žádný z extrakčních postupů, kterých se až dosud používalo pro extrakci vojtěšky, nebyl schopen odstranit nebezpečný obsah kumestrolu a a kanavaninu v extraktu.

Podstata vynálezu

Tento vynález je zaměřen na vývoj postupu, který by umožňoval vyrobit z částí rostliny vojtěšky extrakt prostý jak fytoestrogenů, tak kanavaninu.

Vynález je založen na zjištění, že tento úkol lze úplně vyřešit' tak;^- ze-'*sě’'-''''čášt'i-'vejtěškovér-rostl--iny;;extrahuj í—vodou-nebo vodným roztokem při teplotě alespoň 40 °C a pH nejvýše

8.

Předmětem vynálezu je v souvislosti s tím způsob výroby farmaceutického přípravku. selektivně snižujícího hladinu lipidů v krvi, který se provádí tak, že se extrahují seemena, kořeny, lodyhy a/nebo listy rostliny vojtěšky, získaný extrakt se popřípadě zkoncentruje a vzniklý koncentrovaný extrakt se popřípadě převede na suchý prášek nebo granulát. Podstata tohoto způsobu spočívá v tom, že se extrakce provádí vodou nebo vodným roztokem o teplotě alespoň 4 0 °C a pH. -nejvýše—8—a—ta-kto—z-i-s-kanv_.extrakt se sám nebo spolu s těžko stravitelnými nebo nestravitelnými polysacharidy, stabilizátory koloidů a popřípadě nosiči, kterých se běžné používá ve farmaceutickém průmyslu, převede na farmaceutický přípravek.

Při přednostním provedení způsobu podle vynálezu se extrakce provádí za použití vodného roztoku o teplotě 50 až 120 °C a pH 5,5 až 6,5, s výhodou o teplotě 60 až 70 °C a pH 5,8 až 6,2.

Jako vodného roztoku se účelně používá kyselého roztoku pufru, přednostně vodného roztoku obsahujícího kyselinu octovou a octan sodný; nebo dihydrogenfosforečnan draselný a hydrogenfosforečnan disodný; nebo hydrogenfosforečnan disodný a kyselinu citrónovou.

Pro extrakci se přednostně používá vodného roztoku kyseliny chhlorovodíkové, octové, citrónové, jablečné, vinné, jantarové nebo askorbové nebo soli této kyseliny nebo síranu železa, hořčíku, vápníku, manganu, selenu, zinku, kobaltu a/nebo mědi nebo solí výše uvedených iontů s kyselinou aspartovou nebo glutamovou.

extrakci' še' ‘‘ta-k-ý ze—*še.

vojtěšky nebo suchý prášek z listů vojtěšky extrahuje desetinásobným množstvím vody o těplótě9‘5' až Τ0Ό °C,-po-dobu25 až 35 minut. Po povrchově aktivních polovičním objemem a odpaří do. sucha.

odfiltrování extraktu činidel extrahuje v butanolu. Butanolové se celé množství několika dávkách fáze se spojí

K suchému extraktu se přidá kyselé ochucovadlo, přednostně kyselina citrónová, sladidlo, účelně aspartam, aromatizační činidlo, přednostně mátový nebo mateřídouškový extrakt a stabilizátor koloidní' emulze, přednostně maltodex.trin, v takovém množství aby celkový gravimetricky stanovený obsah saponinů v sušině výsledného produktu činil 1,5 až 30, přednostně 14 % hmotnostních.

Takto získaný produkt, obsahující 14 % hmotnostních saponinů, byl. podroben různým zkouškám. Předně bylo stanoveno metodou známou z literatury (Analyst 114, 965 [1989]), že v produktu nelze nalézt kanavanin, t.j. toxickou aminokyselinu, která se nalézá ve vojtěšce. Podobně bylo zjišťováno, zda produkt neobsahuje kumestrol, t.j. další toxickou látku, která - je charakteristická pro vojtěšku (J. Agric. Food Chem. 32, 173 [1984]). Ani kumestrol nebylo možno v produktu dokázat.

Vzhledem k tomu, že produkt je neškodný v takové míře, že nebylo možno stanovit tzv. akutní toxicitu, t.j. dávku, způsobující 50% mortalitu (hodnotu LD^q) byla s tímto produktem prováděna tzv. subchronická 70-denní studie toxicity na samcích krysy Sprague-Dawley o hmotnosti 160 g. Byly vytvořeny 2 skupiny, z nichž každá obsahovala 12 zvířat. Jedna z těchto skupin sloužila jako kontrolní, zatímco zvířatům ve dr|>jhé skupině bylo do potravy přidáváno 15 % hmotnostních výše uvedeného produktu, vztaženo na sušinu.

_ ...... . _ -11průměrná?-‘dennfc·· spo.třebaťj potravy. ^.byla._ v.._obou, skupinách totožná a v průměru činila 28,0 g (přičemž dolní hranice činila 21,4 a horní hranice 37,3 g) . Denní dávka celkového množství saponinů za den, vztažená na 1 kg tělesné hmotnosti při zkoušce subchronické.toxicity tedy činila 3,67 g (přičemž spodní hranice činila 2,81 g a horní hranice činila 4,81 g).

V průběhu 70-denní zkoušky nebyly v ani jedné ze skupiny pozorovány žádné ztráty. Nebyl zjištěn žádný podstatný rozdíl mezi oběma skupinami, pokud se týče obsahu cukru, močoviny, kyseliny močové, kreatininu, sodíku, draslíku, chloridů, oxidu uhličitého, vápníku, fosforu, celkového množství

-pro-te-i-n-ů-,-^albuminu, bilirubinu, alkalické f osf atasy, erythrocytů, hernatokritu a hemoglobinu v krvi, což j’sou hodnoty, které jsou charakteristické pro hematologický stav. Hladina cholesterolu v krvi však byla u zvířat ze skupiny, které byly podávány saponiny nižší o 18,7 % a hladina triglyceridů o 5,6 %, ve srovnání s kontJrlní skupinou.

Při vyšetření různých orgánů nebyly zjištěny žádné patologické změny na játrech, žaludku, ledvinách, slezině, plicích, srdci a mozku a ani nebyly zjištěny žádné podstatné rozdíly ve hmotnosti. těchto orgánů mezi jednotlivými skupinami. Z těchto důvodů nebylo histologické vyšetření prováděno.

Neutrální a kyselé saponiny z celé směsi účinných přísad produktu podle tohoto vynálezu byly stanoveny chromatografii na tenké vrstvě, následujícím způsobem:

1,0 g produktu se za zahřívání rozpustí ve ICO ml destilované vody a 5 x extrahuje, vždy 10 ml n-butanolu. Spojené butanolové fáze se odpaří za sníženého tlaku dosucha s analytickou přesností. Zbytek představuje gravimetricky stanovený celkový obsah saponinových účinných přísad. Tento

-žbytěk'^ř'šé’' řózpustar v 50 Ani* meťhánolutař· rO2ť'oku^s.eřpouž-i-je-- prp^-< chromatografické stanovení za podmínek uvedených dále:

vrstva:

vyvíjecí systém:

doba sycení silikagel G (Merck) butanol + ethanol + koncentrovaný amoniak (35:-15:30) minut v lázni zakryté filtračním papírem doba vyvíjení:

hodiny doběh: 160 mm aplikace: 25 /Ul methanolového roztoku

Vzhledem k tomu, že kyselé - nebo neutrální saponiny jsou schopny selektivně tvořit emulzní komplex s cholesterolem nebo žlučovými kyselinami a tak inhibovat absorpci lipidů z gastrointestinálního systému, byla vitro, za účelem stanovení emulgační saponinů.

vyvinuta zkouška in schopnosti celé směsi

Podle chromatografického stanovení se celkový saponinový produkt, vyrobený způsobem podle vynálezu, jehož množství činí 14 % (± 0,2 %) (podle gravimetrického stanovení), skládá z 8 saponinů, které jsou přítomny v různých množstvích. 200 mg tohoto produktu se rozpustí v 10,0 ml vody a vzniklý roztok se s míchá s různými množstvími slunečnicového oleje (Sunflower Seed Oil Sigma S 5007, St. Louis, Mo. USA). Vzorek se intenzivně třepe při 35 °C 1 minutu na laboratorní třepačce a potom se stanoví relativní zákal vzniklé emulze, který se vyjádří v %, ve srovnání se vzorkem obsahujícím olej [Fyzikálně-chemické praktikum (v maďarštině) Tankónyvkiadó,

TBUďá^ěšřt7~“''Í96 8, 'svT* TÍ·, ’’s%rV B 3 i 6 ] T ‘ Naftěřěná“~^; 'ďíttT j'šo‘U ^Tsouhrnně uvedena v následující tabulce:

• množství slunečnicového oleje (mg) 0 10 20 40 60 80 100

Zákal (%) 60 8,5 4,5 2,51,7 1,3 1,1

Dvojice těchto dat je možno uvést do vzájemného vztahu obecnou rovnicí, která svým charakterem představuje saturační funkci: nasyceni:

zákal (%) = a . [množství slunečnicového oleje (mg)] ^1//n kde a a n jsou parametry, které jsou závislé na metodě měření a emulguční schopnosti zkoušené látky. Tyto hodnoty byly při prováděném měření: a = 60 á n = 1,19.

Na základě zkoušek s větším počtem vzorků bylo možno konstatovat, že parametr n je ovlivňován hmotnostními poměry a fyzikální formou třepání (například mechanickým nebo magnetostrikčním nebo ultrazvukovým třepáním apod.), kterých bylo při zkoušce použito. Emulgační schopnost zkoušeného vzorku je možno dobře posoudit pomocí komparativních testů, které se provádějí stejným způsobem. Experimentální data lze tedy vždy vyjádřit shora uvedenou rovnicí, přičemž hodnota parametru n je nepřímo úměrná emulgační schopnosti. Vzorek s velmi nízkou povrchovou aktivitou vykazuje nízkou emulgační schopnost a v tomto případě dosahuje hodnota parametru n dokonce 10 až 15. Za použití vzorku s vysokou povrchovou aktivitou se hodnota n blíží 1 a nakonec je i nižší než 1.

Za použití této metody bylo možno objasnit, že těžko stravitelné nebo nestravitelné polysacharidy jsou schopny

- -14 zvýšif ^v*ěmúrgačni’’Schopnošt^:=‘^;rčěréř'šaponih'óveF-'šmiěsí-/ rponěvadž stabilizují emulgovaná koloidní zrna, a proto synergicky zvyšuji*.........ěmúigácní schopnost.......-saponi-nů............-a--- -složekhydrofilně-lipofilního typu, (jako jsou flavonoidy, karotinoidy, terpenoidy apod). V -důsledku toho je možno zvýšit antilipemickou' biologickou účinnnost všech těchto účinných činidel.

Na základě všech těchto pozorování, podle dalšího přednostního provedení způsobu podle vynálezu, obsahuje produkt, kromě kyselých a neutrálních saponinu také těžko stravitelné nebo nestravitelné polysacharidy, které jsou rozpustné v polárních rozpouštědlech a mírně rozpustné v nepolárních rozpouštědlech. Tento produkt se snadno připravuje tak, že se olistěný výhon přečištěné vojtěšky v suchém stavu rozdrtí, potom se smísí s 10-ti násobným objemem vroucí vody a po 1 hodině extrakce se nálev přefiltruje a ochladí. Potom se k filtrátu přidá 55 dílů hmotnostních maltodextrinu, 5 dílů hmotnostních beta-glukanu z ječmene, 5 dílů hmotnostních beta-glukanu z ovsa, 4 díly hmotnostní jablečného pektinu, 4 díly hmotnostní kyseliny citrónové, 1,5 dílu hmotnostního kyseliny askorbové a 0,5 dílu hmotnostního umělého sladidla, vztaženo nna 25 dílů hmotnostních celkové směsi saponinu. Vzniklý kapalný meziprodukt se vysuší v rozprašovací sušárně a dále suší za sníženého tlaku mikrovlnami, néob se jednoduše odpaří do sucha a zpracuje na pevný produkt.

Schopnost produktu, vyrobeného tímto způsobem, inhibovat absorpci lipidů byla zkoušena metodou in vitro, popsanou výše. Hodnota parametru n, kterým je charakterizována emulgační schopnost podle této zkušební metody, činí 1,05, což je hodnota, která je na velmi dobré úrovni.

S '^Imtc^ro3u3ctěm- 'býiý^r»vádény^yý^kuip^. po ^dLobu JL.jmě s řce... .„ , 19 lidským dobrovolníkům ve věku od 31 do 63 let (14 můžů a 5 žen) bylo po dobu 1 měsíce podáváno každodenně 2x1 g tohoto prodktu rozděleného ve 100 ml vody, po snídani a po večeři. Na závěr této zkoušky bylo dosaženo následujícichh výsledků, pokud se týče hladiny lipidů v krvi (mmol/1). Tyto výsledky jsou porovnány s výsledky naměřenými před zahájením zkoušky;

Počáteční hodnoty po 1 měsíci rozdíl střed · rozmezí střed rozmezí ± %

Obsah v krvi:

cholesterol	6,80	4,70-11,20	4,70	3,92-7,15	-30,9
triglyceridy	1,72	0,54-5,60	1,58 .	0,57-4,20	- 8,2
HDL	1,53	1,07-2,20	1,63	1,00-2,43	+7,9
LDL	4,10	3,13-7,95	2,90	2,08-5,36	-29,3

Zjistilo se, že přípravek, vyrobený způsobem podle vynálezu, stimuluje játra ke zvýšenému rozkladu krevního cholesterolu. Tuto schopnost lze připsat selektivnímu specifickému stimulačnímu účinku, který až dosud nebyl v literatuře popsán. Na základě tohoto účinku je možno s příznivou selektivitou ovlivňovat hyperlipemii a zejména nebezpečnou dyslipoproteinemii, poněvadž celková hladina cholesterolu a v rámci ní hladina LDL se sníží, zatímco hladina HDL se zvýší. Další výhodou tohoto přípravku je, že snižuje hladinu triglyceridů.

Extraktu, vyrobeného způsobem podle tohoto vynálezu, se může používat samotného nebo s jinými známými účinými činidly, která jsou užitečná pro snižování hladiny lipidů

- 16 v krvi... Jak jedno zriečně^\^lývá^r72^->^^ěr.ibetnů.7;hgrováděn.^.b.i._^_r

...^....souvislosti s tímto vynálezem, obzvláště vhodného účinku se může dosáhnout za použití extraktu,vyrobeného.....způsobejn, podle _ tohoto vynálezu, v kombinaci s činidly stabilizujícími koloidy polyoxidového a/nebo uhlohydrátového typu.

Pro terapteutické použití se extrakt vyrobený způobem podle- vynálezu- zpracovává bud sám, nebo v kombinaci s jinými podobně působícími činidly, na farmaceutické přípravky, které se zejména hodí pro orální podávání. Při tom se mísí s netoxickými pevnými nebo kapalnými nosiči a/nebo jinými přísadami, kterých se obvykle používá ve farmaceutickém průmyslu a vzniklá, směs se zpracovává na kapalné přípravky, účelně roztoky, sirupy, suspenze nebo gely. Podobně lze také vyrábět pevné granuláty, misitelné s vodou, tablety, tvrdé, želatinové kapsle nebo měkké želatinové kapsle, čípky apod.

Farmaceutické přípravky se vyrábějí způsoby, které jsou ve farmaceutickém průmyslu obecně známy, míšením extraktu s inertními anorganickými nebo organickými, pevnými nebo kapalnými nosiči a zpracováním vzniklých směsí na galenickou formu.

Pro výrobu tablet, dražé a tvrdých želatinových kapslí se jako tyto nosiče hodí laktóza, kukuřičný škrob, bramborový škrob, mastek, uhličitan hořečnatý, stearan hořečnatý, uhličitan vápenatý, kyselina stearová a soli kyseliny stearové. Při výrobě měkkých želatinových kapslí se jako nosičů účelné používá rostlinných olejů, tuků, vosků nebo vhodných polyolů. Pro výrobu roztoků a sirupů se jako nosičů účelně používá vody, polyolů, sacharózy nabo glukózy. Jako vhodné nosiče pro výrobu čípků je možno uvést oleje, vosky, tuky nebo polyoly vhodné konsistence.

,.*·* ' ' ·Γ—:

Farmaceutické přípravky mohou obsahovat také jiné přísady, kterých se obvykle používá při výrobě farmaceutických výrobků, například smačedlá, sladidla a aromatizačni látky, pufry apod..

Denní dávka farmaceutickách přípravků obsahujících extrakt, vyrobený způsobem podle vynálezu, může kolísat v širokém rozmezí, v závislosti na různých faktorech, jako je účinnost účinné látky, stav a věk pacienta apod. U dospělých pacientů obsahuje orální dávka přípravku přibližně 30 áž 1 200, přednostně 300 až 400 mg saponinu. Tato dávka se uvádí pouze pro orientaci a skutečně podávanou dávku by měl v každém jednotlivém případě určit lékař.

K terapeutickým účelům se extrakty vyrobené způsobem podle vynálezu podávají většinou orálně, ve formě tablet nebo kapslí nebo vodorozpustných granulátů nebo tablet.

Způsob podle vynálezu se vyznačuje těmito hlavními výhodami:

a) Umožňuje vyrábět vojtěškový extrakt, který obsahuje nejvýše 9 ppm kumestrolu a nejvýše 1 ppm kanaveninu.

b) Extrakty vyrobené způsobem podle vynálezu obsahují neutrální a kyselé saponiny, které jsou přítomny v příznivém poměru v různých částech vojtěškové rostliny. Ve srovnání s vojtéškovými extrakty, které byly až dosud známy, se s extrakty vyrobenými podle vynálezu dosahuje podstatně lepších terapeutických výsledků při léčbě hypera dyslipoproteinemie.

-18 Způsob' podlé * vynálezu ' je' nén v následujících příkladech provedení. Tyto příklady mají výhradně ilustrativní charaťer á rozsah“výhálězův 'žádném ohledu neomezují. ®

Příklady provedeni vynálezu

Příklad 1

Zpracovává se se 5 x 100 kg sušených vojtěškových listů nebo výhonů rozdrcených tak, aby prošěly sítem III. Extrakce se provádí ve válcovém extraktoru z materiálu vzdorujícího kyselinám o objemu 4 m³. Do zařízení se předloží 1 m³ vody předehřáté nna 90 °C, teplota vody. se zvýší přímou parou na 100 °C, potom se přidá první dávka částí rostlin (100 kg) a extrakce se provádí za míchání 10 minut při 100 °C.

Filtrát se oddělí od zbytku rostlin pomocí šnekového dekantačního zařízení Alfa-Laval. Pomocí refraktometrického stanovení se zjistí, že obsah sušiny v získaném roztoku je 2,5 až 3 % hmotnostní. . Další 4 dávky (vždy 100 kg) rostlinného materiálu se extrahují stejným způsobem a potom se získané roztoky spojí.

Spojené roztoky o pH 5,9 se zkoncentrují při 4 0 až 4 5 °C na obsah sušiny 2.2 až 28 % hmotnostních v kontinuálně pracující odparce za sníženého tlaku. Obsah sušiny se stanoví refraktometricky. Celkový obsah sušiny se vypočítá po zjištění objemu a hustoty koncentrátu.

K tomuto koncentrátu se přidá 13,5 % hmotnostního maltodextrinu (vztaženo na obsah sušiny rostlinného materiálu), rozpuštěného ve vodě, jakožto přísada usnadňující rozprašovací sušení. Potom se koncentrát vysuší rozprašovacím ř-^ÚSěhíí m- při^tfepl^téeS^ác^stůpifc-l 70*~$žrřifc8 °C.

,x s .··«K získanému prášku sé po částech přidá 17,5% hmotnostního rozemletého monohydrátu kyselinny * citrónové a 1,2 % hmotnostního aspartamu a tyto složky se rovnoměrně promísí se základním práškem v homogenizátoru Lódigova typu.

Po granulaci se takto získaný prášek přímo zpracuje na přípravek, který má podobu instantního čaje.

Příklad 2

Způsob popsaný v příkladu 1 se opakuje, pouze s tím rozdílem, že se extrakce provádí vařehím s vodným roztokem' o pH 4,6, který obsahuje 0,1 mol/1 kyseliny octové a 0,1 mol/1 octanu sodného.

P ř í k 1 a d 3

Způsob popsaný v příkladu 1 se opakuje, pouze s tím rozdílem, že se extrakce provádí vařením s vodným roztokem o pH 2,0, který obsahuje 0,01 mol/1 kyseliny chlorovodíkové.

't

Příklad 4 . *

Způsob popsaný v příkladu 1 se opakuje, pouze s tím rozdílem, že se exktrakce provádí po dobu 15 minut za použití vody předehřáté na 40 °C. Spojené roztoky, získané po dekantaci, se zahřejí na teplotu varu a přefiltrují přes tlakový filtr. Po zkoncentrování, které se provádí podle příkladu 1, se filtrát vysuší v rozprašovací sušárně. Získaný

- 20. grá tablety, z nichž každá má hmotnost 800 mg.

P ř i k 1 a- d 5

Způsob popsaný v příkladu 1 se opakuje, pouze s tím rozdílem, že se extrakce provádí vařením s vodným roztokem o pH 5,8, který obsahuje 2g/l.......aspartátu selenu. Po zkoncentrování se neprovádí rozprašovací sušení, nýbrž se ke koncentrátu přidá 0,5 % hmotnostního sorbátu draselného a 0,5 % hmotnostního aspartamu.

Získaného roztoku se může používat jako sirupu.

Příklad 6

Přečištěný a rozemletý šrot z listů vojtěšky (část o hmotnosti 50 kg, z celkem 800 kg dávky) se po dobu 1 hodiny míchá při teplotě 40 °C s 3 m³ vody a vzniklá směs se přefiltruje. Kal rostlinných zbytků se odvodní v kalolisu, tekutina z kalolisu se spojí se filtrátem, směs se podle pořeby doplní vodou na 3 n³ a suspenduje se v ní další část vojtěškového šrotu (50 kg). Po novém míchání, filtraci a zpracování v kalolisu se postup opakuje tak dlouho, dokud se nezpracuje celá dávka 800 kg vojtěškového šrotu. Filtrát o pH 6,0, který se získá v posledním stupni, se zahřeje k varu a přefiltruje. Přidá se 68 kg polysacharidu stabilizujícího suspenzi, 25 kg monohydrátu kyseliny citrónové a 4 kg aspartamu a filtrát se 40 minut tepelně zpracovává v autoklávu při teplotě 120 °C. Po ochlazení na 15 °C se směs přefiltruje a naplní za sterilních podmínek do vzduchotěsných láhví;

•^7“ 'výrotíiíú^ře^pIněhí-m-řďó^l^hVíř-íítíh&Ťrt-tákécJ^ů přidat mikrobiologické stabilizátory.

Příklad 7

Ke 100 kg přečištěných, vysušených a rozdrcených olistěných lodyh vojtěšky se přidá 1 m³ vroucí vody a směs se za pomalého míchání extrahuje. Potom se odfiltruje získaný roztok a odpaří za sníženého tlaku na konečný objem 50 1. Získaný koncentrát se 5 x extrahuje, vždy 5 1 n-butanolu. Butanolové extrakty se spojí a odpaří dosucha. Získaný zbytek se na jemho—'rozemel-e—a—suspenduje-ve—3O^tj-násoJbném_ hmotnostním množství lněného oleje (o čistotě, podle lékopisu) nebo v nativním oleji obsahujícím stejné kyselinové složky nebo v oleji z. tresčích jater nebo jejich směsi. Získaná směs se zapouzdří v měkkých želatinových kapslích způsoby, které jsou o sobě známé ve farmaceutickém průmyslu.

Příklad 8

Šrot vyrobený ze 40,kg sušeného vojtěškového kořene a 50 kg sušených vojtěškových výhonů se zahřívá s 500 1 vody obsahující kyselinu jablečnou, v množství 12 g/1, v autoklávu při teplotě 120 °C, po dobu 30 minut. Získaný extrakt se oddělí od zbytku rostlin v pytlové odstředivce, za sníženého tlaku zkoncentruje na obsah sušiny 14· až 16 % hmotnostních a nakonec lyofilizuje.

Získaný granulát se lisováním zpracuje na tablety nebo še ho použije pro výrobu tvrdých želatinových kapslí.

Claims

1. Způsob' výroby farmaceutického přípravku, selektivně

-------------------------snižují.c.iho...hladinu-—.li.p.i.d.ů-V..krvi.,.Jsterý___se provádí tak,, že se extrahují semena, kořeny, lodyhy a/nebo listy vojtěšky, získaný extrakt se popřípadě zkoncentruje a vzniklý koncentrovaný extrakt se popřípadě převede na suchý prášek nebo- granulát, vyznačující setím, že se extrakce provádí' vodou nebo vodným roztokem· o teplotě alespoň

A * '“.......40 °C a pH nejvýše 8 a takto získaný extrakt se sám nebo spolu s těžko stravitelnými nebo nestravitelnými polysacharidy, a popřípadě nosiči, kterých se běžně používá ve farmaceutickém průmyslu, převede na farmaceutický přípravek.

2. . . Způsob podle nároku 1,.

••.'vy z ^- n a č u jící s e tím, že se extrakce provádí za použití vodného roztoku o teplotě 50 až 120 °C a pH 5,5 až 6,5.

3. Způsob podle nároku 2, vyznačující s e t í m, že se extrakce provádí za použití vodného roztoku o teplotě 60 až 70 °C a pH 5,8 až 6,2. *

4. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, | vyznačující setí m, že se použije vodného t roztoku kyseliny chlorovodíkové, kyseliny octové, kyseliny * citrónové, kyseliny jablečné, kyseliny vinné, kyseliny jantarové nebo kyseliny askorbové.

5. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že se použije vodného* roztoku obsahujícího sůl kyseliny chlorovodíkové, kyseliny octové, kyseliny citrónové, kyseliiny jablečné, kyseliny

-23vinné/'kyseliny - jantarové,-¹ kyseliny askorbové...,nebo kyseliny^ sírové s ionty železa, hořčíku, vápníku, manganu, selenu, zinku, kobaltu a/nebo mědi.

6.. . Způsob podle - nároku 1 nebo- 2, / vyznačuj i. c i se tím, že se použije vodného roztoku soli iontu železa, hořčíku, vápníku, manganu, selenu, zinku, kobaltu a/nebo mědi s kyselinou aspartovou nebo kyselinou: glutamovou.

7. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující s e t i m, že se jako vodného roztoku použije kyselého roztoku pufru.

8. Způsob podle nároku 7, v y z n a č. u. j i c i se. t i m, že se jako kyselého roztoku pufru použije vodného roztoku obsahujícího kyselinu octovou a octan sodný; dihydrogenfosforečnan draselný a hydrogenfosforečnan dvojsodný; hydrogenfosforečnan dvojsodný a kyselinu citrónovou nebo octan sodný.

9.. Farmaceutický přípravek selektivně snižující hladinu lipidů v krvi, připravitelný způsobem podle kteréhokoliv z nároků 1 až 8.

10. Vojtěškový extrakt pro selektivní snižování hladiny lipidů v krvi, vyznačující se tím, že obsahuje nejvýše 1 ppm kanavaninu a nejvýše 9 ppm kumestrolu.