CZ337797A3 - Nový atenuovaný kmen viru zůsobujícího reprodukční a respirační syndrom prasat (PRRS), vakciny a diagnostické kity od něho odvozené a postupy pro jeho získání - Google Patents

Nový atenuovaný kmen viru zůsobujícího reprodukční a respirační syndrom prasat (PRRS), vakciny a diagnostické kity od něho odvozené a postupy pro jeho získání Download PDF

Info

Publication number
CZ337797A3
CZ337797A3 CZ973377A CZ337797A CZ337797A3 CZ 337797 A3 CZ337797 A3 CZ 337797A3 CZ 973377 A CZ973377 A CZ 973377A CZ 337797 A CZ337797 A CZ 337797A CZ 337797 A3 CZ337797 A3 CZ 337797A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
strain
prrs
virus
attenuated
vaccine
Prior art date
Application number
CZ973377A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ286766B6 (en
Inventor
Burch Reina Alemany
Maso Enric Espuňa
Pujadas Pere Riera
Roca Narcis Saubi
Original Assignee
Laboratorios Hipra, S. A.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Laboratorios Hipra, S. A. filed Critical Laboratorios Hipra, S. A.
Publication of CZ337797A3 publication Critical patent/CZ337797A3/cs
Publication of CZ286766B6 publication Critical patent/CZ286766B6/cs

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C12N7/04—Inactivation or attenuation; Producing viral sub-units
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552—Veterinary vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/10011—Arteriviridae
    • C12N2770/10021—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/10011—Arteriviridae
    • C12N2770/10034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/10011—Arteriviridae
    • C12N2770/10061—Methods of inactivation or attenuation
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/815—Viral vaccine for porcine species, e.g. swine

Description

Nový atenuovaný kmen viru způsobujícího reprodukční a respirační syndrom prasat (PRRS), vakciny a diagnostické kity od něho odvozené a postupy pro jeho získání.
Oblast techniky
Tento vynález se týká nového atenuovaného kmenu viru způsobujícího chorobu prasat známou jako reprodukční a respirační syndrom prasat (PRRS). Atenuační a replikační postupy virulentního kmene za použití nového klonu buněk získaného z opičích ledvin umožňují přípravu vakcín a diagnostických kitů, které dovolují časnou diagnosu PRRS a účinou preventivní léčbu tohoto onemocnění.
Dosavadní stav techniky
V roce 1987 byla prvně detekována v Severní americe choroba prasat, která byla v tom okamžiku definována jako Záhadná choroba prasat nebo MSD, a později byla známá jako syndrom prasečí neplodnosti a poruch respirace, neboli SIRS. Velmi podobný syndrom byl' poprvé detekován ve střední evropě v roce 1990 a později se šířil do jiných evropských zemí, včetně Španělska. Na začátku bylo onemocnění v Evropě pojmenováno jako Epidemické potraty a respirační syndrom u vepřů neboli PEARS a nakonec jako Reprodukční a respirační syndrom prasat neboli PRRS. Toto pojmenování bylo ve světě akceptováno pro toto onemocnění.
Je již známo, že etiologickým agens PRRS je malý enkapsulovaný RNA virus, poprvé izolovaný v Holandsku a pojmenovaný jako Lelystad virus. Bylo naznačeno, že virus patří * W · 9 9 9 9 9 * ·· · · ·*· · * ke skupině Arteviridae. Tento virus byl popsán v patentové přihlášce PCT WO-92/21357 a v Evropské patentové přihlášce EP-B-0587780 (Stichting Centraal Diegeneeskundig Instituut), kde druhá je odvozena od první. Pro účely této přihlášky byl izolát výše uvedečného viru deponován v Institut Pasteur of Paris, pod číslem 1-1102.
Severoamerický typ viru byl izolován téměř simultáně s evropským typem viru, jak je popsáno v patentové přihlášce PCT WO 93/03760 (Collins et al.) a v evropské patentové přihlášce EP-A_0529584 (Boehringer lng.). Pro účely této přihlášky byl izolát výše uvedečného viru deponován v Američan Type Culture Collection (ATCC), č. VR-2332.
Evropský a severoamerický typ viru jsou jasně odlišné, nejen s ohledem na serologickou reaktivitu, ale také s ohledem na stupeň homologie sekvence nukleotidů signifikantních RNA fragmentů. Na orvních dvou stranách evropské patentové přihlášky EP-A-0676467 (Akzo) je podrobný popis těchto rozdílů, s rozsáhlou citací literatury. Ve výše uvedené patentové přihlášce je usouzeno, že evropský typ a americký typ virů jasně divergovali před dlouhou dobou. V důsledku toho může být očekáváno, že eventuální účinná vakcina proti jednomu z těchto typů bude málo nebo nebude vůbec účinná proti druhému typu.
Byly izolovány různé kmeny jak z evropského, tak z amerického typu viru. Každý kmen má svou vlastní specifickou charakteristiku, a několik kmenů bylo objektem patentové přihlášky. Například, patentová přihláška PCT WO-93/07898 (Akzo) popisuje evropský kmen, a vakcinu od něho odvozenou, deponovaný v CNCM (Institut Pasteur), č. 1-1140. Patentová přihláška PCT • ·
WO-93/14196 a evropská patentová přihláška EP-A-541418 (Rhone-Merieux), obě odvozené od přihlášky stejné priority, popisují novy kmen izolovaný ve Francii, deponovaný v CNCM (Institut Pasteur), č. 1-1153. Evropská patentová přihláška EP-A-0595436 (Solvay) popisuje nový kmen amerického typu, více viruentní než dříve popsané, a jeho vakcinu. Tento kmen byl deponován v ATCC, ale přírůstkové číslo není v této přihlášce podrobně uvedeno. Konečně, španělská patentová přihláška ES-A-2074950 (Cyanamid Iberica) popisuje takzvaný španělský kmen, který je odlišný od jiných evropských a amerických kmenů. Tento španělský kmen byl deponován v European Animal Cell Culture Collection (EACCC), č. V93070108.
Závěrem, zdá se jasné, že etiologické agens PRRS ukazuje mnoho variet a pro účinný boj proti této chorobě, jsou potřeba vakcíny různých typů závisející na kmenu viru, který infikuje prasata.
U sviní je onemocnění charakterizováno ztrátou apetitu, anorexií, poruchami reprodukce (potraty, předčasnými porody, porody mrtvých nebo slabých selat a smrtí plodu, s nebo bez mumifikace). Některá infikovaná prasata mohou zemřít. Méně obvyklými příznaky je transientní modré zbarvení uší, břicha nebo vulvy; podle tohoto byla choroba prvně známa jako modrý potrat v Holandsku a modré uši ve Velké Britanii. U novorozených selat může být pozorována dušnost nebo třes, zatímco u starších selat je častější posteriomí paresa a ataxie. Při vrcholu vypuknutí onemocnění je mortalita během prvních dní omezena, ale může dosáhnout až 80% u desetideních selat. Infikovaná krmená selata pijí méně a vykazují více respiračních problémů.
« ·
Inkubační doba onemocnění je velmi variabilní, v rozmezí od 5 do 37 dní (I.B. Robertson Eurp. Comm. Comm. Seminář on PRRS, 11: 4-5, Brussels, 1991). Někdy se onemocnění šíří velmi pomalu, ale pokud je postižena farma, pak může onemocnění přetrvávat několik měsíců (B. Thacker, Int. Symp. on SIRS, St. Paul/Minnesota, 1992).
Protilátky proti viru byly detekovány imunoperoxidasovou technikou (imunoperoxidasový monovrstevný test, zde IPMA) v den 6 po-infekci, jak je popsáno Wensvoortem, G., et al. (The Vet. Quart. 13: 121 - 130, 1991). Titry protilátek mohou dosáhnout 1/20000 o pět dní později, a obyčejně persistují více než 12 měsíců. Nicméně, některá prasata se stanou seronegativními o 4 5 měsíců později, jak to popsal V. Ohlinger et al., Meredith, M. De. Pig Dis. Info. Center Cambridge, 12/1992. Tito autoři byli schopni izolovat virus po infekci z různých orgánů, s titrem viru dosahujícím 104 TCIDso (infekční dávka pro tkáňovou kulturní 50%) 6 dní po infekci v homogenátech plic, séra, plasmy a krevních buněk. Toto ukazuje, že virus a protilátky spolu mohou persistovat několik týdnů. Kromě toho, je dobře známo, že zvířata, která přežívají vypuknutí onemocnění mohou být zdrojem infekce pro citlivá zvířata. Viremie může být detekována od dnu 1 po infekci a může trvat do 56 dní, ačkoliv je obvykle kratší.
··♦
Při hematogenním šíření viru může virus dosáhnout placcenty pregnantních sviní. Bylo ukázáno, že virus může procházet placentou a způsobovat smrt plodu. Maximální citlivost plodu se vyskytuje během třetí třetiny gestace. Kromě toho, virus je schopen replikace v plodu bez toho, že by způsobil jeho smrt. Nicméně, virus nebyl nikdy izolován z mumifikovaných nebo autolysovaných plodů.
» ·
U selat se nástup onemocnění projevuje tehdy, když je hladina kolostrálních mateřských protilátek snížena. U živě narozených selat od sviní infikovaných v poslední třetině březosti byly pozorovány některé případy selat s protilátkami proti viru před tím, než byla pozorována sekrece kolostra. Obvykle tato zvířata vykazují viremii při narození (C. Terpstra et al., Vet. Q. 13: 131 - 136, 1991) .
I přes destrukci velkého počtu makrofágů nebyla imunosupresorická aktivita PRRS-způsobujícího viru jasné prokázána. Nicméně, asociované sekundární infekce jsou časté, a způsobují vážné ekonomické ztráty na prasečích farmách.
V současnosti byl PRRS virus nalezen ve většině zemí s významnou populací prasat.
V současnosti je PRRS jednou z nejvýznamnějších onemocnění postihujících prasata díky sekundárním ztrátám, jak přímým, tak nepřímým, způsobeným sekundárními agens po infekci PRRS virem.
Použití inaktivovaných vakcin produkovaných v prasečích kulturách alveolárních makrofágů (PAM) dává akceptovatelné výsledky na laboratorní úrovni, ale účinnost v polních podmínkách závisí, částečně, na podmínkách prostředí a na chovu vakcinovaných zvířat.
Jedním z problémů, které brání získání imunologických produktů proti PRRS viru je omezená dostupnost stabilních substrátů pro replikaci viru.
Dosud mohl být PRRS virus amplifikován pouze v kulturách » F · · · » » « · · · ♦ · · · • · · · · · · • · · · r · • * · • · prasečích alveolárních makrofágů (PAM) (Wensvoort G., et al., v The Vet. Quart., 13: 121 - 130, 1991). Potřeba použití zdravých prasat jistého věku pro získání těchto makrofágů implikovala vážné překážky. Kromě toho, citlivost na virovou infekci nebyla garantována v získaných PAM, protože buněčné substráty odvozené od různých zvířat jsou již různé. Toto určovalo hlavní překážku při produkci antigeních vsádek konstantní a homogení kvality a každá vsádka musela být hodnocena pro určení její citlivosti.
Ze všech těchto důvodů, redukovaná dostupnost stabilního kontinuálního buněčného hostitele vážně bránila studiu strategií pro získání mutantů na základě replikace PRRS viru v buněčných substrátech a selekci atenuovaných variet.
Jedním z hlavních problémů, který má být vyřešen, je potřeba neutralizace virulentního viru vyhýbající se jeho replikaci v PAM, protože replikace viru způsobuje jejich destrukci.
Z toho plyne, že adaptace viru na stabilní substrát odvozený od transformované buněčné linie poskytne vhodný nástroj jak pro získání atenuovaných mutantů, tak pro přípravu inaktivních vakcin, což eliminuje závislost a variabilitu PAM.
Patentová přihláška PCT WO-94/18311 (Miles) navrhuje propagaci jistých kmenů PRRS viru v jedinečném klonu, označeném jako klon 9009B, odvozeném od ledvině buněčné linie afrických zelených opic, označené jako linie MA-104 (M) patentovou přihláškou, odvozené od komerční buněčné linie známé jako MA-104. V patentové přihlášce není uvedeno přírůskové číslo uvedeného jedinečného klonu a proto je hodnocení přihlášky a reprodukování obtížné.
• » * ·
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu je novy atenuovaný kmen PRRS viru, který umožňuje získání, stabilním a reprodukovatelným způsobem, neškodných vakcin pro prasata s vysokou účinností při prevenci PRRS.
Jiný předmět předkládaného vynálezu spočívá v novém buněčném klonu odvozeném od stabilní lopičí ledvině buněčné linie MA-104, schopný umožnit růst PRRS viru ve vysokých titrech a umožnit získání stabilního virového zisku selektovaného atenuovaného kmenu, a získání postupu uvedeného buněčného klonu.
Jiným předmětem předkládaného vynálezu jsou účinné vakciny proti PRRS onemocnění, které mohou být získány z nového atenuovaného kmenu a z jeho mutantů, spolu s postupy pro jejich získání.
Ještě jiným předmětem předkládaného vynálezu jsou diagnostické kity pro PRRS onemocnění, kteé mohou být získány z nového atenuovaného kmenu a z jeho mutantů^ spolu s postupy pro jejich získání.
Atenuovaný kmen PRRS viru, který je předmětem předkládaného vynálezu, byl odvozen atenuováním virulentního kmene izolovaného od infikovaných prasat ze španělské farmy. Pro splnění podmínek popisu byl tento atenuovaný kmen deponován v Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM)z Institute Pasteur, s přírůákovým číslem 1-1642. Datum uložení je 23.11.1995.
* · ·
Atenuování virulentního kmene a replikace atenuovaného kmene byly provedeny sériovým pasážováním v buněčném klonu, který je také předmětem předkládaného vynálezu, a který byl autory označen jako Klon-8. Tento klon je odvozen od komerční opičí ledvině buněčné linie známé jako MA-104. Také pro splnění podmínek popisu bylo provedeno uložení klonu-8, ve stejný den jako je uvedeno výše, v CNCM z institut Pasteur, s přírůstkovým číslem 1-1643.
Nejprve, komerční buněčná linie MA-104 byla klonována pro selekci a pro izolaci klonu 8. Toto klonování bylo provedeno suspendováním buněk ve vhodném kultivačním mediu (např. Earlovu minimálním esenciálním mediu (Earle's MEM) s fetálním hovězím sérem (FBS)), umístěním suspense při různým koncentracích, selekcí a trypsinizováním klonů a jejich expandováním v kultivačních nádobách. Klony získané tímto způsobem byly postupně klonovány za použití popsaných technik, dokud nebyly | získány dobře diferencované klony. |
Po odstranění klonů, které vykazovaly nepravidelné chování nebo které bylo obtížné amplifikovat, byly selektované klony testovány s ohledem na citlivost k infekci k počátečnímu virulentnímu kmenu PRRS viru. Klon 8 byl selektován díky své ’ i vysoké citlivosti pro replikaci virového kmene (vysoké TCIDso) a reprodukovatelnosti a konzistenci získaného výnosu viru.
Virulentní kmen byl atenuován sekvenční replikací v kulturách klon-8, preferenčně při 34 °C. Obsah infekčních virových částic byl určen pro jodnocení replikační životaschopnosti a ' cytopatický účinek (CPE) byl byl vyšetřován s cílem určit stupeň adaptace. Podle získaných výsledků je virus schopen replikace v * Λ • « klonu-8 bez ztráty životaschopnosti, alespoň po dobu 20 pasáží, a atenuací vzniká prakticky neškodný virus, který si zachovává svou antigenní aktivitu.
V důsledku toho je získán atenuovaný kmen PRRS viru, který je předmětem předkládaného vynálezu, stabilním a průmyslově reprodukovatelným způsobem, což usnadňuje jeho použití pro získání PRS vakcin a PRRS diagnostických kitů.
Srovnávací testy mezi skupinami prasat infikovanými buď virulentním kmenem, nebo atenuovaným kmenem jasně ukázaly, že atenuovaný kmen je neškodný pro zvířata, která jsou jím infikována. Na druhou stranu, atenuovaný kmen, který je předmětem předkládaného vynálezu, vykazuje vysokou replikační účinnost u seronegativních prasat a je schopen vyvolat serokonversi u zvířat inokulovaných dávkou 200 TCIDso intramuskulárně. Protilátky vyvolané tímto způsobem persistují alespoň 80 dní.
Dále, atenuovaný kmen, který je předmětem předkládaného vynálezu, je výborným základem pro přípravu vakcin pro preventivní léčbu prasat proti PRRS. Takové vakciny mohou být připraveny za použití dobře známých metod odborníky v oboru a v různých běžných formách, jako jsou vodné disperse,‘olejové emulse, liposomové kompozice, lyofilizované formy atd. Vakcinové kompozice mohou být doplněny různými adjuvans, jako jsou imunostimulans, emulsifikátory, stabilizátory, atd. Vakciny mohou být podány intramuskulárně nebo subkutálně, intranasálně, intratracheálně, kutálně, perkutálně nebo intrakutálně.
Účinné dávky vakciny se budou velmi lišit, v preferované »
• * formě rozmezí od 102 do 10® TCIDso atenuovaného kmenu, který je předmětem předkládaného vynálezu.
Získané vakciny, také předmět předkládaného vynálezu, mohou být také formulovány jako polyvalentní vakciny, spolu s jiným živým nebo inaktivovaným virem prasat, nebo spolu s živou nebo inaktivovanou bakterií.
Jak je odborníkům v oboru zřejmé, mohou být také připraveny vakciny obsahující virové antigeny odvozené od virového kmene, který je předmětem předkládaného vynálezu, například vakciny obsahující uvedený kmen ve zcela inaktivované formě za použití jakékoliv běžné metody, například tepelné nebo chemické metody, vakciny obsahující obaly nebo RNA fragmenty uvedeného kmenu a podobně.
Atenuovaný kmen, který je předmětem předkládaného vynálezu, může být také použit pro přípravu vhodných diagnostických kitů za použití běžných technik - obsahujících antigení elementy schopné detekovat protilátky u seropozitivních zvířat. Například, IPMA postupy pro detekci PRRS protilátek mohou obsahovat následující kroky:
a) Adaptaci atenuovaného kmenu, který je předmětem předkládaného vynálezu, na stabilní buněčnou kulturu, preferovaně klon-8, na kultivační mikroplotně, tak, že každá jamka je infikována asi okolo 20 - 40 infekčními částicemi.
b) Fixaci infikovaných buněk na pevnou fázi za použití známých fixačních látek.
r ♦
c) Detekci sérových protilátek prasat jejich inkubací na mikroplotně, a potom barvením uvedených protilátek na mikroplotně IPMA technikami.
Přehled obrázků na výkresech
Dvě strany se čtyřmi obrázky jsou připojeny k předkládanému popisu a jsou jeho součástí. Obrázky jsou ilustrativní a nijak neomezují předkládaný popis.
Obrázek 1 ukazuje dvourozměrný obrázek representující vývoj rektální teploty u březích prasnic inokulovaných intranasálním způsobem atenuovaným kmenem, který je předmětem předkládaného vynálezu.
Obrázek 2 je dvourozměrný obrázek representující vývoj hmotnosti selat, která se narodila prasnicím inokulovaným atenuovaným kmenem, který je předmětem předkládaného vynálezu.
Obrázek 3 je dvourozměrný obrázek representující kinetiku kolostrálních protilátek jak byla určena IPMA, v potomstvu prasnic vakcinovaných atenuovaným kmenem, který je předmětem předkládaného vynálezu. Nízké titry u potomstva prasnic 1 a 10 při narození jsou způsobeny skutečností, že některá selata ještě nesála kolostrum v době odběru krve.
Obrázek 4 ukazuje trojrozměrný obrázek representující vývoj protilátkové odpovědi u selat inokulovaných intramuskulární cestou 200, 2000, a 20000 TCIDso atenuovaného kmenu, který je předmětem předkládaného vynálezu.
• ·
Příklady provedení vynálezu
Je ukázáno několik příkladů postupů s cílem podrobněji ilustrovat popis předkládaného vynálezu. Takové příklady neomezují rozsah vynálezu.
Příklad 1: Získání buněčných klonů ze stabilní buněčné linie opičích ledvin MA-104.
Šest pasáží selektovaného PRRS virulentního kmene bylo provedeno za použití stabilní buněčné linie opičích ledvin MA-104 dodané od European Animal Cell Culture Collection (EACCC), přírůstkové číslo 85102918, ve statické kultivační buněčné monovrstvě kultivované v plastových kultivačních nádobách v Earle's MEM mediu doplněném 10% fetálním hovězím sérem (FBS), při 37 °C a bez doplňování CO2. Sklizeň viru byla provedena 6-7 dní po inokulaci v každé pasáži.
Pro studium zisku virové sklizně byla buněčná linie inokulována virulentním kmenem při různých sílách infekce (zde MOI) . Výtěžky sklizně viru byly nízké (mezi JLO3 a 104 TCIDso/ml) a nedostatečné pro použití v produkci vakciny, i po čtyřech adaptačních pasážích.
«··
V těchto pokusech bylo pozorováno, že pouze část infikovaných buněk byla citlivá na virulentní virus, zatímco zbytek buněk zůstával refrakterní na infekci. Z tohoto důvodu byla buněčná linie klonována s cílem selektovat tu populaci buněk, která je zcela citlivá na virulentní kmen.
Klonální selekce byla provedena následovně:
• ♦ r + · »· f · f * · *·«·» *** f-í-4 «« * · 0 » ·♦· · ·« f»
Suspense buněčné linie byla ředěna v Earle MEM s 20% FBS a různá ředění byla umístěna do 96 jamkové mikroplotny (NUNCR). Plotny byly inkubovány po 8 dní při 37 °C v 5% C02. V den 3 byly jamky obsahující pouze jednu buňku identifikovány mikroskopicky a byly trypsinizovány v den 8. Tímto způsobem bylo získáno 44 klonů. Potom byly získané klony expandovány v kultivačních nádobách, dokud nebyla získána suspense 5 x 10? buněk/ml. Tyto buňky byly potom klonovány podruhé a potřetí za použití stejného postupu.
Po třetím klonování bylo 44 získaných klonů expandováno, dokud nebylo získáno 25 ml buněčné suspense každého klonu obsahujícího 6 x 10e buněk/ml. Medium použité v tomto procesu obsahovalo 20% FBS.
Tyto klony byly dále selektovány podle jejich růstových charakteristik a podle jejich životaschopnosti.
Příklad 2: Selekce buněčného klonu klon-8
Klony získané v předchozím příkladu byly hodnoceny podle jejich růstové účinosti, a ty, které vykazovali amplifikační problémy, nepravidelnou morfologii nebo je bylo obtížné udržovat při 37 °C, byly odstraněny. 35 klonů bylo odstraněno po této předchozí selekci a zbylých 9 klonů bylo selektováno.
Selektované buněčné klony byly infikovány PRRS virem virulentního kmene při osmi pasážích viru (P-8) v PAM kulturách (jak popsal Bloemberg, M. et al., Vet. Microb. 42: 361 - 371, 1994). Adaútační proces pro buněčné klony byl proveden před tím: virus byl replikován při 37 °C během 3 pasáží udržováním 80 • * »
90% konfluentní monovrstvy v kontaktu s virovou suspensí během 6 dnů a potom zmražen při -80 °C a rozmražen o 24 hodin později.
Earle MEM doplněné 10% FBS a gentamycinem (0,4 mg/ml) bylo použito jako infekční medium. Nebyly použity ani sloučeniny proti houbám, ani sloučeniny proti kvasinkám. Každá sklizeň viru získaná tímto způsobem byla titrována v korespondujícím buněčném klonu. Po analýze výsledků bylo uzavřeno, že 9 klonů bylo citlivých na virovou infekci, s titrem rovným nebo větším než 104·2 TCIDso/ml. Výsledky jsou ukázány v tabulce 1.
Tabulka 1: Sensitivita získaných buněčných klonů k selektovanému virulentnímu kmenu
Klon nebo buněčná linie Titr jako TCID /ml J 50
neklonovaná buněčná linie 103
klon 1 ίο3·73
klon 2 104'3
klon 3 10s .2
klon 4 103·3
klon 8 10s
klon 29 103·73
klon 30 103·38
klon 41 IQS.sa
klon 44 104·2
Jak je vidět v tabulce 1, neklonovaná buněčná linie vykazuje velmi nízkou sensitivitu pro virus a proto se její použití jako antigenu pro získání účinné vakciny nezdá možné. Tabulka 1 také *> r ukazuje, že některé klony, zejména klon 8, jsou více sensitivní k viru než neklonovaná buněčná linie. Klon-8 je zejména zaznamenání hodný. Titry vyšší než 10e TCIDso/ml mohou být získány při sklizni viru z klonu-8.
V souladu s výsledky popsanými výše byl selektován klon-8. Bylo provedeno několik testů pro studium spolehlivosti tohoto klonu. V různých testech byly titry virové sklizně vysoce reprodukovatělně, s hodnotami mezi 10s a 10v TCID /ml.
Příklad 3: Získání atenuovaného kmene viru
Atenuovaný kmen viru, který je předmětem předkládaného vynálezu, byl získán replikací selektovaného virulentního kmenu při 34 °C v klon-8 buněčných kulturách.
Virem infikované monovrstvy buněk klonu 8 byly udržovány při 34 °C dokud nebylo vyvinuto CPE. CPE bylo detekováno 24 a 48 hodin později než v kulturách udržovaných při 37 °C.Nicméně, nebyly nalezeny žádné signofikantní rozdíly ve vlastnostech CPE vyvinutých při obou teplotách.
Vzniklé virové sklizně byly titrovány za použití ^buněčných monovrstev klonu-8. Dále byla identita viru ověřena IPMA.
Virus byl inokulován do 75 cm2 buněčné monovrstvy klonu-8 okolo konfluence a byla umožněna adsorpce při 34 °C po 2 hodiny. Potom bylo infekční medium přidáno k monovrstvě. Infekčním mediem bylo Earle modifikované minimální esenciální medium doplněné 10% FBS a předem ohřáté na 34 °C.
r ř
» • * · r * r
cm3 nádoby byly umístěny při 34 °C v inkubátoru a deně kontrolovány, doku nebylo pozorováno CPE. Když 80 - 95% buněčné monovrstvy vykazovalo CPE, obvykle mezi 5 a 7 dnem po infekci, byla provedena virová sklizeň. Virová sklizeň byla potom centrifugována při 2000 rpm a supernatant byl titrován pro určení titru viru (TCIDso/ml).
Za použití výše popsané metody bylo provedeno 20 pasáží. Obsah viru byl hodnocen při pasáži P.l, P.5, P.10 a P.20. Výsledky ukazují, že virus může být replikován v buněčné monovrstvě klonu-8 při 34 °C, bez jakékoliv ztráty životaschopnosti, alespoň do pasáže P.20 (tabulka 2).
Tabulka 2: Vývoj viru propagovaného v klonu-8 při 34 °C od pasáže P.l do pasáže P.20.
Pasáž v klonu-8
Obsah viru v TCID /ml
50'
P.l • 10s-5
P.5 10s-v
P.10 10®'®
P.15 10=.6
P.20 10e -2
Další výsledky potvrdily, že klon-8 buněčná monovrstva může být infikována při MOI 0,001.
Pokusy provedé podle následujícího příkladu ukázaly, že od P.20 odvozený kmen viru byl neškodný pro prasata.
> ·
Příklad 4: Biologická charakterizace atenuovaného virového kmene a účinky vakcinace tímto kmenem
Počátečním virovým kmenem použitým pro získání atenuovaného kmene viru, který je předmětem předkládaného vynálezu, je virulentní kmen. Hlavní účinky na březí svině jsou předčasné porody a slabá, mrtvá a/nebo mumifikoované novorozená selata. Infikované svině také ukazují depresi a 3 - 5 denní periodu mírné anorexie v den 4 - 5 po infekci.
Čtyři těhotné svině (označené 01, 02, 03 a 06) byly infikovány intranasálně 10s·6 TCIDso počátečního virulentního kmene. Dvě neinfkované svině (označené 73 a 74) byly použity jako kontroly. Výsledky jsou ukázány v tabulce 3.
Tabulka 3: Účinky na potomstvo březích sviní inokulovaných virulentním virem
Svině Inokulace Počet narozených Počet mrtvých
č. virulentním selat selat do
virem živá mrtvá mumi f ikovaná' odstavení
01 + 10 2 0 2
02 + 15 0 0 a-· 4
03 + 6 5 0 2
06 + 6 6 0 1
73 - 13 0 0 0
74 - 10 0 0 0
Pouze infikované svině porodily v očekávaném datu. Infikované svině měly 2, O, 5 a 6 mrtvěnarozených selat a 2, 4, 2 a 1 slabých selat, v příslušném pořadí. Slabá selata zamřela několik dní po narození. Při odstavení bylo průměrně 11 selat od každé kontroly naživu. Pouze průměrně 6,5 selat od každé infikované svině bylo naživu při odstavení. Při odstavení byla průměrná hmotnost selat 4,621 g (selata od infikovaných sviní) a 5,365 g (selata od kontrolních sviní). Virulentní PRRS virus byl izolován z homogenizováných plic slabých selat. Po vystavení infekci jak infikované svině, tak jejich potomstvo serokonvertovalo.
Byla provedena biologická charakterizace atenuovaného kmenu viru, který je předmětem předkládaného vynálezu, podle specifických testů, za použití prasat obou pohlaví.
Test neškodnosti byl proveden u 3 PRRS seronegativních březích sviní z malé farmy, kde PRRS infekce nebyla nikdy detekována. Svině byly inokulovány v poslední třetině těhotenství, kdy je sensitivita na virus maximální. Dávka 10e TCID /svini
O atenuovaného viru byla podána intranasálním způsobem mezi dnem 78 a 93 březosti. Po inokulaci viru zůstaly fyziologické konstanty třech sviní nezměněny a rektální teplota byla v mezích normálu (viz. obr. 1). Tři svině také vykazovaly očekávaná data. Získané výsledky jsou shrnuty v tabulce 4.
r f e > » · r · · * f e * * · · t * ř
Γ - · f » λ r· » t · · · Λ
- r · · f • · » * *
Tabulka 4: Účinky na potomstvo březích sviní inokulovaných atenuovaným virem
Svině č. Inokulace atenuovaným virem Počet narozených selat živá mrtvá mumifikovaná Počet úmrtí způsobených PRRS do odstavení
1 + 13 0 3 0
2 + 4 1 0 0
10 + 16 0 1 0
Tři svině porodily 13, 4 a 16 selat, v příslušném pořadí. Vitalita novorozených selat byla považována za normální. Nicméně, několik mumifikovaných selat bylo nalezeno v potomstvu dvou sviní. Toto může být považováno za normální vzhledem k velkým vrhům těchto sviní. Vývoj hmotnosti selat byl ve všech případech považován za normální (viz. obr. 2) a a byl do konce pozorování v normálních mezích (45 dní) . Symptomy slabosti a onemocnění, které mohou souviset s infekcí PRRS virem, nebyly * J pozorovány u jakéhokoliv selete. Dále, PRRS virus nebyl detekován ani v krvi, ani ve vzorcích séra od novorozených selat.
Stejně tak nebyl PRRS virus detekován ve vzorcích krve a séra od březích sviní 21 - 36 dní po inokulaci viru. Všechny tyto skutečnosti potvrzují neškodnost atenuovaného kmene PRRS u březích sviní, které jsou nej citlivější kategorií pro infekci přirozeným typem viru. Všechny vzorky séra od novorozených selatod inokulovaných březích sviní byly negativní, když byly vyšetřovány na přítomnost PRRS viru v PAM kulturách za použití r r r r běžných technik. Tři svině inokulované atenuovaným virem měly humorální protilátky s titry IPMA 1/480 v den 45 po porodu, s tím, že byly stabilní s malými odchylkami od tohoto dne. Svině byly seropozitivní již 21 den po inokulaci. Jak je vidět na obrázku 3, selata od inokulovaných sviní byly seropozitivní po sání kolostra a zůstávaly seropozitivní alespoň do 75 dní věku.
Další test neškodnosti byl proveden ve skupině 12 březích sviní v poslední třetině těhotenství. Osm sviní bylo vakcinováno intramuskulárně 39 dávkami vakciny (10s TCIDso) a zbylé čtyři svině byly použity jako kontroly pro hodnocení účinků atenuovaného kmene na parametry reprodukce. Žádné změny nebyly pozorovány ve fyziologických parametrech vakcinovaných sviní, které ukazovaly očekávaná data. Výsledky jsou ukázány v tabulce
5. Jak je vidět z této tabulky, jak osm inokulovaných sviní, tak Čtyři kontrolní svině vykazovaly normální počet selat. Selata také měla normální životaschopnost.
00 ω 00 w -4 CO •u <Λ 151 143 121 116 102 »O 0X CO Al 86 č. svině 1
3 0 3 0 3 0 3 0 *< A ca m: φ <· >< <# <» o ca o ca «< <9 a *< 0» í> o » n 5 03 5
Η-» 1 H* O M 4- M + M 1 R- 4- o M -b H* 4- O >-* 4· í ό i ? £ i - » ~ 2. < “ _ 3. “ ' s 3 2 - * a s s ~ 5 2 i » ? F 2
> N 23 í HO co >-* ca U 00 μ* On M M O w ca μ-» ω co M F* M MM a ď *0 <-5< > N< ·.>»
75’ » h- o o o M o o >— bj o h- -s 2 * “ s 5 Λ *a, c g £·» N< s< <w 2. = - s- a 2 2‘ s n « 2 3 = - a -- o = a a O » o· o<
• v ·
ίΛ S “
n > +· o O h-* >-* o o μ- o o o H* o > O S 3í *’ ϋ *·· rx -x 3 a rt » ,Λ - 2 ř? E 2,
-h
M >—· O w o o bJ μ- h- w O o h- 3 — «Λ » O š 5 a g s e · Cí 2. 2* “ rx
- O o ru o o o M o O «· 3 «β th ’ 3 ? o s
1
bJ M* A KO co ** •4 w bj h* >-* Λ μca O w NJ Ϊ “ í*l a 2 η Ji? - 3 ·* -
Tabulka 5: ÍJěinck inokulnce atemiovanélio vím na parametry reprodukce u březích sviní v poslední třetině březosti i
»* r ' t * » t r f f f f r r · # · ' ♦ » , t t » t t f » » r p z · ·· • · * ’ ' t » i · * r r
Atenuovaný virus, který je předmětem předkládaného vynálezu, se účinně replikuje v PRRS seronegativních selatech. Toto je demonstrováno skutečností, tak malá dávka, jaklo je 200 TCIDso podaná intramuskulárně může replikovat a indukovat serokonversi u prasat. Jak je vidět z obrázku 4, indukované protilátky persistují po dobu alespoň 52 dní u inokulovaných zvířat.
Atenuovaný virus, který je předmětem předkládaného vynálezu, se nešířil na čtyři neinokulovaná sentinelová selata umístěná spolu se skupinou osmi intramuskulárně inokulovaných selat. Skutečnost, že virus není přenášen na nevakcinovaná zvířata ilustruje vhodnost atenuovaného kmenu pro vakcinu. Kromě toho, u vakcinovaných prasat nebyla pozorována žádná leukopenie ani jiné klinické příznaky, které by ukazovaly na to, že atenuovaný virus je také neškodný, pokud je podán intramuskulárně. Průměrně 86% inokulovaných selat se stalo seropozitivními již 11 den po inokulaci.
Atenuovaný virus, který je předmětem předkládaného vynálezu, indukuje protektivní imunitní odpověď u vakcinovaných prasat, která brání klinickým účinkům infekce virulentním PRRS kmenem. Tak nebyly žádné klinické příznaky pozorovány u 75% čtyři týdny starých vakcinovaných selat, pokud byly infikovány virulentním virem. Na druhou stranu, jak je vidě z tabulky 6, 80% nevakcinovaných kontrolních selat mělo signifikantní zvýšení rektální teploty po pokusné infekci. Dále, při nekropsii provedené 19 dnů po pokusné infekci vykazovala vakcinovaná selata signifikantně menší plicní lése než kontrolní nevakcinovaná selata. Podobně, po pokusné infekci byl virulentní virus nalezen pouze u 25% vakcinovaných zvířat, zatímco u nevakcinovaných kontrolních zvířat mohl být virulentní virus ♦ » * ♦ · ·
-- ♦ » · ♦ *
Tato deposita jsou k dispozici veřejnosti za podmínek specifikovaných v Budapešťské smlouvě. Toto nemůže být interpretováno jako licence pro provádění předmětu předkládaného vynálezu, což by bylo porušení práv přihlašovatele předkládaného vynálezu.

Claims (20)

  1. n. a r o 3c y
    1. Atenuovaný kmen viru způsobujícího chorobu prasat známou jako reprodukční a respirační syndrom prasat (PRRS), který koresponduje zcela depositu s přírůákovým číslem 1-1642 v CNCM Institut Pasteur uloženému 23.11.1995.
  2. 2. Vakcina pro ochranu prasat proti onemocnění známému jako reprodukční a respirační syndrom prasat (PRRS), která obsahuje virový kmen nárokovaný v nároku 1 a/nebo alespoň jeden virový antigen, který je možné získat od tohoto kmenu.
  3. 3. Vakcina podle nároku 2, kde virový antigen je inaktivovaný virus.
  4. 4. Vakcina podle nároku 2, která obsahuje mezi 102 a 10e TCIDgo atenuovaného kmene viru.
  5. 5. Vakcina podle nároků 2 nebo 3, kde dávka vakciny obsahuje množství virového antigenu, které je ekvivalentní množství produkovanému mezi 102 a 10s TCIDso atenuovaného kmene viru.
  6. 6. Vakcina podle jakéhokoliv z nároků 2-5, která obsahuje další imunostimulační adjuvans a/nebo emulsifikátory a/nebo stabilizátory.
  7. 7. Vakcina podle jakéhokoliv z nároků 2-6, která obsahuje další viry prasat, buď živé, nebo inaktivované, v buď jednotlivé, nebo v kombinované formě.
  8. 8. Vakcina podle jakéhokoliv z nároků 2-6, která obsahuje další živé nebo inaktivované bakterie.
  9. 9. Buněčný klon odvozený od stabilní buněčné linie opičích ledvin MA-104, která koresponduje zcela depositu s přírůstkovým číslem 1-1643 v CNCM Institut Pasteur uloženému 23.11.1995.
  10. 10. Postup pro získání atenuovaného kmeny PRRS viru vyznačující se tím, že se skládá v podstatě z modifikace virulentního kmene postupným pasážováním v buněčném klonu podle nároku 9.
  11. 11. Způsob podle nároku 10 vyznačující se tím, že je v postupných pasážích udržována teplota 34 °C.
  12. 12. Způsob pro přípravu aktivní vakciny proti PRRS vyznačující se tím, že se skládá v podstatě z propagace virového kmene podle nároku 1 v buněčném klonu podle nároku 9.
  13. 13. Způsob podle nároku 12 vyznačující se tím, že virový kmen je propagován při 34 °C.
  14. 14. Způsob podle jakéhokoliv z nároků 12 nebo 13 vyznačující se tím, že získaný atenuovaný kmen je formulován jako bud' vodná disperse nebo jako olejová emulse, liposomové kompozice nebo v lyofilizované formě, buď s nebo bez adjuvans podle nároku 6.
  15. 15. Způsob podle jakéhokoliv z nároků 12 až 14 vyznačuj ícísetím, že obsahuje inaktivaci, buď tepelnou, nebo chemickou, získaného atenuovaného kmenu, dokud «· · *
    není zcela inaktivován.
  16. 16. Diagnostivký způsob pro PRRS vyznačující se tím, že obsahuje atenuovaný kmen podle nároku 1 a/nebo alespoň jeden jeho virový antigen.
  17. 17. Způsob pro detekci PRRS protilátek vyznačuj ícísetím, že obsahuje následující kroky:
    a) Adaptaci atenuovaného virového kmenu podle nároku 1 pro růst ve stabilní buněčné kultuře na kultivační mikroplotně takovým způsobem, že každá jamka je infikována přibližně 20 - 40 infekčními částicemi.
    b) Fixaci infikovaných buněk na pevnou fázi za použití známých fixačních látek.
    c) Detekci protilátek ze séra prasat inkubací protilátek na mikroplotně a barvením protilátek za použití IPMA technik.
  18. 18. Způsob podle hároku 17 v y z n a S u jJí c í se tím, že stabilní buněčná kultura je buněčný klon podle nároku 9.
    I
  19. 19. Použití atenuovaného virového kmenu podle nár‘óku 1 pro výrobu vakcíny proti onemocnění prasat známému jako PRRS.
  20. 20. Použití atenuovaného virového kmenu podle nároku 1 pro výrobu kitů pro detekci onemocnění prasat známého jako PRRS.
CZ19973377A 1996-01-25 1996-12-04 Attenuated virus strain, process of its preparation, vaccine, process of its preparation, cellular clone and use of the attenuated strain CZ286766B6 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ES09600168A ES2102971B1 (es) 1996-01-25 1996-01-25 Nueva cepa atenuada del virus causante del sindrome respiratorio y reproductivo porcino (prrs), las vacunas y medios de diagnostico obtenibles con la misma y los procedimientos para su obtencion.

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ337797A3 true CZ337797A3 (cs) 1998-03-18
CZ286766B6 CZ286766B6 (en) 2000-06-14

Family

ID=8293550

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19973377A CZ286766B6 (en) 1996-01-25 1996-12-04 Attenuated virus strain, process of its preparation, vaccine, process of its preparation, cellular clone and use of the attenuated strain

Country Status (13)

Country Link
US (1) US6001370A (cs)
EP (1) EP0835929A1 (cs)
JP (1) JP3068204B2 (cs)
KR (1) KR19980703268A (cs)
CN (1) CN1185806A (cs)
BR (1) BR9604888A (cs)
CA (1) CA2216436A1 (cs)
CZ (1) CZ286766B6 (cs)
ES (1) ES2102971B1 (cs)
HU (1) HUP9801124A3 (cs)
PL (1) PL185841B1 (cs)
UA (1) UA68326C2 (cs)
WO (1) WO1997027288A1 (cs)

Families Citing this family (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK0587780T4 (da) * 1991-06-06 2008-10-13 Boehringer Ingelheim Vetmed Smitstof, som forårsager Mystery Swine Disease,vaccinepræparater og diagnostiske sæt
US6380376B1 (en) * 1992-10-30 2002-04-30 Iowa State University Research Foundation Proteins encoded by polynucleic acids of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV)
US6773908B1 (en) 1992-10-30 2004-08-10 Iowa State University Research Foundation, Inc. Proteins encoded by polynucleic acids of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV)
US6592873B1 (en) * 1992-10-30 2003-07-15 Iowa State University Research Foundation, Inc. Polynucleic acids isolated from a porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) and proteins encoded by the polynucleic acids
US5695766A (en) * 1992-10-30 1997-12-09 Iowa State University Research Foundation Highly virulent porcine reproductive and respiratory syndrome viruses which produce lesions in pigs and vaccines that protect pigs against said syndrome
US20040224327A1 (en) * 1996-10-30 2004-11-11 Meulenberg Johanna Jacoba Maria Infectious clones of RNA viruses and vaccines and diagnostic assays derived thereof
EP0839912A1 (en) * 1996-10-30 1998-05-06 Instituut Voor Dierhouderij En Diergezondheid (Id-Dlo) Infectious clones of RNA viruses and vaccines and diagnostic assays derived thereof
EP1153139B1 (en) 1999-02-10 2009-04-01 Serono Genetics Institute S.A. Polymorphic markers of the lsr gene
EP1157121B1 (en) * 1999-03-08 2013-04-24 Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH Prrsv replicon
AU4482200A (en) 1999-04-22 2000-11-10 United States Department Of Agriculture Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine, based on isolate ja-142
SG83740A1 (en) * 1999-08-10 2001-10-16 Inst Of Molecular Agrobiology An attenuated porcine reproductive and respiratory syndrome virus strain and methods of use
US7338787B2 (en) 2000-01-14 2008-03-04 Serono Genetics Institute S.A. Nucleic acids encoding OBG3 globular head and uses thereof
EP1156111A1 (en) * 2000-05-19 2001-11-21 Stichting Dienst Landbouwkundig Onderzoek Chimeric arterivirus-like particles
CA2427787C (en) 2000-12-07 2012-07-17 Syngenta Limited Herbicide resistant plants
MXPA03006818A (es) * 2001-01-30 2004-10-15 Lauridsen Group Inc Metodos y composiciones para modular el sistema inmune de animales.
KR20050040172A (ko) * 2003-10-27 2005-05-03 주식회사 중앙백신연구소 돼지 생식기호흡기 증후군 바이러스 불활화 백신의 제조방법
TW200604526A (en) * 2004-06-18 2006-02-01 Unviersity Of Minnesota Identifying virally infected and vaccinated organisms
US7632636B2 (en) 2004-09-21 2009-12-15 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Porcine reproductive and respiratory syndrome isolates and methods of use
US8178103B2 (en) 2004-11-19 2012-05-15 Intervet International B.V. Porcine reproductive and respiratory syndrome virus strains and compositions
PT1904631E (pt) 2005-06-24 2012-07-16 Univ Minnesota Vírus srrp, clones infecciosos, os seus mutantes e processos de utilização
HUE054868T2 (hu) 2005-12-29 2021-10-28 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Multivalens PVC2 immunogén készítmények és eljárások ezek elõállítására
CN100523177C (zh) * 2007-01-09 2009-08-05 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 猪繁殖与呼吸综合症病毒弱毒疫苗株及其应用
US20110117129A1 (en) * 2008-08-25 2011-05-19 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Vaccine Against Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome (HP PRRS)
TWI627281B (zh) 2009-09-02 2018-06-21 百靈佳殷格翰家畜藥品公司 降低ｐｃｖ－２組合物殺病毒活性之方法及具有改良免疫原性之ｐｃｖ－２組合物
MX346636B (es) 2011-02-17 2017-03-27 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Procedimiento para la produccion a escala comercial de prrsv.
DK2675475T3 (en) 2011-02-17 2015-09-14 Boehringer Ingelheim Vetmed NEW EUROPEAN PRRSV TRIAL
KR101281361B1 (ko) * 2011-07-18 2013-07-02 서울대학교산학협력단 북미형 돼지 생식기 호흡기 증후군 바이러스 예방 백신 조성물 및 이를 포함하는 혼합백신 조성물
US9187731B2 (en) 2011-07-29 2015-11-17 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh PRRS virus inducing type I interferon in susceptible cells
WO2013017570A1 (en) 2011-07-29 2013-02-07 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Novel prrs virus inducing type i interferon in susceptible cells
JP6386999B2 (ja) * 2012-05-17 2018-09-05 ゾエティス・エルエルシー ブタ生殖および呼吸症候群（ｐｒｒｓ）ウイルスに対する離乳前の効果的なワクチン接種
CA2892948C (en) 2012-12-07 2022-09-20 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Porcine reproductive and respiratory syndrome virus compositions and uses thereof
CN105073130A (zh) 2013-03-15 2015-11-18 勃林格殷格翰动物保健公司 猪生殖与呼吸综合征病毒、组合物、疫苗及使用方法
MX2020010248A (es) 2013-12-20 2020-10-16 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Variante del virus prrs, clon de adnc del virus europeo y sus usos.
MY191895A (en) 2016-11-03 2022-07-18 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Vaccine against porcine parvovirus and porcine reproductive and respiratory syndrome virus and methods of production thereof

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK0587780T4 (da) * 1991-06-06 2008-10-13 Boehringer Ingelheim Vetmed Smitstof, som forårsager Mystery Swine Disease,vaccinepræparater og diagnostiske sæt
KR0138092B1 (ko) * 1991-08-26 1998-04-30 제임스 씨. 데세사레 미확인(Mystery) 돼지 질병 관련 바이러스제
DE601062T1 (de) * 1991-08-26 1995-05-18 James Edward Collins Vakzine gegen und diagnosemethode für das schweine-unfruchtbarkeits- und atmungs-syndrom (suas).
JPH07501049A (ja) * 1991-10-14 1995-02-02 アクゾ・ノベル・エヌ・ベー ブタ生殖・呼吸系症候群ワクチン及び診断方法
SK98695A3 (en) * 1993-02-08 1996-11-06 Bayer Ag Process for growing porcine reproductive and respiratory syndrome virus and its use in vaccines
ATE206455T1 (de) * 1994-04-11 2001-10-15 Akzo Nobel Nv Europäische vakzinstämme des fortplanzungs- atmungs-syndromsvirus des schweins

Also Published As

Publication number Publication date
BR9604888A (pt) 1998-12-15
JPH10507372A (ja) 1998-07-21
PL185841B1 (pl) 2003-08-29
PL322455A1 (en) 1998-02-02
CN1185806A (zh) 1998-06-24
CA2216436A1 (en) 1997-07-31
ES2102971B1 (es) 1998-03-01
WO1997027288A1 (es) 1997-07-31
EP0835929A1 (en) 1998-04-15
ES2102971A1 (es) 1997-08-01
CZ286766B6 (en) 2000-06-14
UA68326C2 (en) 2004-08-16
MX9707302A (es) 1998-06-30
JP3068204B2 (ja) 2000-07-24
KR19980703268A (ko) 1998-10-15
US6001370A (en) 1999-12-14
HUP9801124A3 (en) 1999-09-28
HUP9801124A2 (hu) 1998-08-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6001370A (en) Attenuated strain of the virus causing the porcine reproductive respiratory syndrome (PRRS), and vaccines
EP0683816B1 (en) Process for growing porcine reproductive and respiratory syndrome virus and its use in vaccines
EP0830142B1 (en) Prrs (porcine reproductive and respiratory syndrome) virus vaccine
CA2076744C (en) Viral agent associated with mystery swine disease
JPH07289250A (ja) ブタ生殖呼吸症候群ウイルス（ｐｒｒｓｖ）のヨーロッパワクチン株
SK119498A3 (en) Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine
US7906311B2 (en) Cotton rat lung cells for virus culture
EP1543113B1 (en) Chicken astrovirus type 2
MXPA97007302A (en) New attenuated cepa of the virus causing the respiratory and reproductive swine syndrome (prrs), vaccines and diagnostic media obtained with the same and the procedures for your obtenc
ZA200408458B (en) Cotton rat lung cells for virus culture
JP2005520572A (ja) ウイルス培養用のコットンラット肺細胞

Legal Events

Date Code Title Description
IF00 In force as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20041204