JP6941171B2 - ブタパルボウイルスおよびブタ繁殖呼吸障害症候群ウイルスに対するワクチン、ならびにこれらを作製する方法 - Google Patents
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Description
本出願は、37 C.F.R.1.821〜1.825に従う配列表を含有する。本出願に付属の配列表は、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる。
A.発明の分野
第1の検討事項では、本発明は、ブタパルボウイルスおよび/またはブタ繁殖呼吸障害症候群ウイルスにより引き起こされる疾患の臨床徴候を軽減することが可能な分離株に特異的なブタパルボウイルスおよびブタ繁殖呼吸障害症候群ウイルスのワクチンに関する。第2の検討事項では、本発明は、さらに、殺ウイルス活性の低減を呈する免疫原性組成物を作製する方法、ならびにこのような免疫原性組成物に関する。
ブタ繁殖呼吸障害症候群ウイルス(PRRSV)とは、Arteriviridae科ウイルスのメンバーであり、Coronaviridae科ウイルスと併せて、Nidovirales目ウイルスに属する。PRRSVは、約15キロベース、一本鎖、プラスセンスのRNAゲノムであって、9つのオープンリーディングフレーム(ORF)、すなわち、ORF1a、ORF1ab、ORF2a、ORF2ab、およびORF3〜ORF7を含むRNAゲノムを伴うエンベロープウイルスである。ORF1aおよびORF1abは、ウイルスプロテアーゼであるnsp1、nsp2、およびnsp4による自己切断およびトランス切断を介して、ウイルス非構造タンパク質(nsp)へとプロセシングされる大型のポリタンパク質をコードする(Snijder and Meulenberg, 1998)。ORF4は、ウイルスエンベロープ内に見出される主要糖タンパク質(GP5)および他の2つの副次的糖タンパク質(GP2aおよびGP3)に隣接する副次的糖タンパク質(GP4)をコードするが、ここで、前記糖タンパク質の全てが、感染性ウイルスの作製に重要である。
同様の臨床症状を引き起こす、2つの別個のPRRSVウイルス遺伝子型であって、ヌクレオチド配列レベルで、約40%異なるウイルス遺伝子型である遺伝子型I(EU)および遺伝子型II(US)が存在する。北米(US)原型株が、VR−2332株であるのに対し、欧州(EU)原型株は、レイスタッドウイルス株である。
ブタパルボウイルスとは、約5100ヌクレオチドの一本鎖DNA分子を含有する、Parvoviridae科内のProtoparvovirus属のParvovirinae亜科の自己複製ウイルスである(Cotmore et al., 2014: Arch Virol.: 159(5): 1239-1247; Molitor et al., 1984: Virology: 137(2):241-54)。ビリオンへは、DNAのマイナス鎖だけがパッケージングされている。ウイルスのゲノムは、3つのカプシドタンパク質(VP1、VP2、VP3)、および1つの非構造タンパク質(NS1)をコードする。パルボウイルスのカプシドは、約22〜25ナノメートルの直径であり、VP1サブユニットおよびVP2サブユニットから構成される。これらのタンパク質は、同じRNA分子の、代替的なスプライス形に由来し、したがって、配列が重複する。さらに、ブタパルボウイルスは、ネコ汎白血球減少症ウイルス、イヌパルボウイルス、および齧歯動物パルボウイルスとの、高レベルの配列類似性を呈する(Ranz et al., 1989: J. gen. Virol: 70:2541-2553)。
ブタパルボウイルス(PPV)感染は、世界中で、繁殖用ブタにおける生殖障害の一般的な原因である。血清学的研究は、ブタパルボウイルスは、世界の全てのブタ産出地域に広がり、動物のうちの、最大で80%が、セロコンバージョンを示すことを示す。
ブタパルボウイルス(PPV)は、ブタにおいて、生殖障害を引き起こす結果として、妊娠した雌ブタにおける、死および胎仔のミイラ化、死産、ならびに他の生殖障害をもたらす(Joo & Johnson. 1976. Veterinary Bulletin 46, 653-660; Mengeling. 1978. J. Am. Vet. Med. Assoc. 172, 1291-1294)。
PPVは、感受性の(非免疫)未経産ブタおよび雌ブタが、妊娠時に感染すると、生殖障害を誘導する。これは、ウイルスが、疾患を引き起こす唯一の時点である。ブタにおける感染は、ウイルス摂取後または吸入後に生じる。次いで、PPVは、血流中を循環し、妊娠したブタでは、胎盤を超え、発生しつつある胚および胎仔に感染する。自然感染後には、おそらく、ブタの生涯にわたり存続する能動免疫が発現する。能動免疫が、妊娠の前に生じれば、発生しつつある子豚は、影響を受けない。出生時に、子豚は、雌ブタからの初乳中の母体免疫を受け、この母体免疫は、最大で20週齢にわたり存続する。雌ブタにおける能動免疫レベルが高度であるほど、雌ブタが子豚へと受け渡す母体免疫の量も多い。その後、PPVの自然感染が生じる場合もある。
現在利用可能なPPVワクチンは、天然ウイルスを、ブタ由来の初代細胞または確立された細胞株において増殖させることにより作製されている。この後、感染性ウイルスを単離し、化学的薬剤により不活化させて、最終的に、全細胞死滅ウイルスワクチンを得る。しかし、天然の感染性ウイルスを増殖させる、このような工程には、バイオセキュリティーおよび安全性考慮の点で問題がある。
先行技術では既に、組換えPPVワクチンについて記載されている。しかし、現在までのところ、市販されているのは、全細胞死滅ワクチンだけである。したがって、これまでのところ、適切な組換えPPVサブユニットワクチンは、開発されておらず、有効かつ安全であることが示されていないと考えられる。これまでに記載された、組換えPPVサブユニットワクチンは、制御された実験室における抗原投与実験では調べられていない。査定された組換えPPVサブユニットワクチンは、全細胞死滅PPVワクチンほどは働かなかった、または組換えPPVサブユニットワクチンは安全でなかった(副作用を示した)。
Adriaan F.G. Antonis. “A novel recombinant virus-like particle vaccine for prevention of porcine parvovirus-induced reproductive failure” Vaccine 24 (2006) 5481-5490
Chen Y. Guo W. “A novel recombinant pseudorabies virus expressing parvovirus VP2 gene: Immunogenicity and protective efficacy in swine” Virology Journal 2011, 8:307
Merenga et al. “Large scale production and downstream processing of a recombinant porcine parvovirus vaccine” Appl Microbiol Biotechnol. 2002 Jun;59(1):45-50. Epub 2002 Apr 16
A. Jozwik, J. Manteufel, H.-J. Selbitz and U. Truyen. Vaccination against porcine parvovirus protects against disease, but does not prevent infection and virus shedding after challenge infection with a heterologous virus strain. Journal of General Virology (2009), 90, 2437-2441
中国特許出願第CN102488895号は、ブタサーコウイルス、ブタパルボウイルス、およびPRRSVからなる三重ウイルス様粒子ワクチンについて開示している。この三重VLPワクチンは、PCV−2主要構造タンパク質であるCAPタンパク質、PPV VP2タンパク質のエピトープ、およびPRRSV GP5タンパク質のエピトープを含有する。
ロシア特許出願第2004108484号は、PRRSVおよびPPVに対する不活化ワクチンについて開示している。この不活化ワクチンは、継代細胞培養物である、Marc−145中で複製され、アミノエチルエチレンイミン(AEEI)で不活化させた、PRRSウイルス株に由来する抗原材料と、継代YPK細胞培養物中で複製され、AEEIで不活化させた、PPV株に由来する抗原材料とを含有する。
中国特許出願第CN104288760号は、免疫量の2型ブタサーコウイルス抗原、免疫量のPRRSV抗原、およびPPV抗原を含むワクチン組成物について開示している。
中国特許出願第CN102727881号は、高度に病原性のPRRS JXAI−R株と、PPV二重生ワクチンとについて開示している。
Puig et al. (http://info.hipra.com/DOCS/UNISTRAIN/PUBLICATIONS/ESPHM-2015/1-Clinical-protection.pdf) relate to vaccination of the mixed administration of the inactivated ERYSENG Parvo and inactivated UNISTRAIN PRRS vaccines manufactured by Hipra
Zeew EJL et al. (Journal of General Virology 2007, 88(2): 420-427) describes a study of the virulence and cross-neutralitzation capability of recent parvovirus field isolates and vaccine viruses in experimentally infected pregnant gilts
米国特許出願2014/0322267号は、交差保護における使用のための、PCV2A亜型(PCV2A)のORF2タンパク質に関する。
欧州特許出願第2,460,818号は、PCV2免疫原性組成物およびこのような組成物を作製する方法に関する。
米国特許第7,700,285号は、PCV2免疫原性組成物およびこのような組成物を作製する方法に関する。
PCT特許出願第WO2013/024113号は、インフルエンザH5ワクチンに関する。
米国特許出願2015/0283229号は、ブタ流行性下痢ウイルスワクチンに関する。
したがって、その異なる態様における本発明は、本明細書で開示される請求項および条項に従い実施される。
本発明の第1の検討事項
第1の検討事項では、本発明は、
a)少なくとも1つのブタパルボウイルス(PPV)抗原であって、PPVに含有される、任意の抗原である、少なくとも1つのPPV抗原と、
b)少なくとも1つのブタ繁殖呼吸障害症候群(PRRS)ウイルス抗原であって、PRRSウイルスに含有される、任意の抗原である、少なくとも1つのPRRSウイルス抗原と
を含む免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せに関する。
本発明は、さらに、本明細書で記載および/もしくは特許請求される、免疫原性組成物もしくは組合せワクチンもしくは組合せを含むキットに関する。
本発明は、さらに、医薬、好ましくは、ワクチンを調製するための、本明細書で記載および/もしくは特許請求される、免疫原性組成物もしくは組合せワクチンもしくは組合せ、または本明細書で記載および/もしくは特許請求されるキットの使用に関する。
有利なことには、本発明により提供される実験データは、本発明のPPV VP2サブユニットワクチン成分が、完全死滅ウイルスと同様に効果的であることを開示する。PPV VP2から構成される組換えサブユニットワクチンを用いることにより、大がかりな不活化工程(完全死滅ウイルスワクチンを作出する場合、天然PPVを不活化させるために必要である)を回避することができて、有利であろう。
第2の検討事項では、本発明は、組換えタンパク質を含む免疫原性組成物を作製する方法であって、以下の順序で、
(i)・第1の液体、
・組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造、ならびに
・前記組換えタンパク質をコードする核酸配列を含むベクター
を含む混合物を用意する/得るステップと;
(ii)第2の液体を、ステップ(i)の混合物へと添加するステップであって、第2の液体が、第1の液体と異なるステップと;
(iii)さらなる第2の液体を、ステップ(ii)から得られる混合物へと、さらに添加し、第1の液体および/または第2の液体の一部を、このような、組み合わされた混合物から除去することにより、混合物中の、組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造を洗浄し、任意選択で、これを最終的に濃縮するステップと;
(iv)不活化剤を、ステップ(iii)から得られる混合物へと添加することにより、ベクターを不活化させるステップと;
(v)中和剤を、ステップ(iv)から得られる混合物へと添加することにより、不活化剤を中和するステップと
を含む方法に関する。
(a)培養物中の感受性の細胞への、前記組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造をコードする核酸配列を含むベクターの感染を可能とするステップであって、前記組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造を、前記ベクターにより発現させるステップと、
(b)その後、組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造を、細胞培養物から回収するステップであって、少なくとも1つのフィルター、より好ましくは、2つのフィルターを通す精密濾過を好ましくは含む分離ステップを介して、細胞破砕物を、組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造から分離することが好ましく、少なくとも1つのフィルターが、好ましくは、組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造より大きな小孔サイズを有し、特に、約0.1μm〜約4μmの小孔サイズを有するステップと
を含む手順により得られる、本明細書で記載および/または特許請求される方法に関する。
以下の図面は、本明細書の一部を形成し、本発明のある特定の態様をさらに裏付けるために組み入れられる。これらの図面のうちの1つまたは複数を、本明細書に提示される具体的な実施形態についての詳細な記載と組み合わせて参照することにより、本発明をよりよく理解することができる。
一態様では、本発明は、
(a)少なくとも1つのブタパルボウイルス(PPV)抗原であって、PPVに含有される、任意の抗原である、少なくとも1つのPPV抗原と、
(b)少なくとも1つのブタ繁殖呼吸障害症候群(PRRS)ウイルス抗原であって、PRRSウイルスに含有される、任意の抗原である、少なくとも1つのPRRSウイルス抗原と
を含む免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せに関する。
当業者には、「ブタパルボウイルス」または「PPV」という用語が周知である。しかし、「ブタパルボウイルス」は、一本鎖DNA分子を含有する、Parvoviridae科内のParvovirus属の自己複製ウイルスである。ウイルスのゲノムは、3つのカプシドタンパク質(VP1、VP2、VP3)、および1つの非構造タンパク質(NS1)をコードする。ブタにおいて、PPVにより引き起こされる疾患は、SMEDI(死産、ミイラ化、胚死、および不妊の頭字語)と称することが多い。本発明の範囲内の「ブタパルボウイルス」という用語は、ブタパルボウイルス、ならびにParvoviridae科内のProtoparvovirus属のParvovirinae亜科の、全ての株、遺伝子型、および血清型を包含する。
本発明の範囲内の「少なくとも1つのブタパルボウイルス(PPV)抗原」および「少なくとも1つのブタ繁殖呼吸障害症候群(PRRS)ウイルス抗原」という用語は、単一のPPV抗原および/またはPRRSV抗原から、多数の抗原を含む全ウイルスまでの、あらゆる抗原を包含する。
別の態様では、本発明は、PPVが、弱毒化生/改変生PPVウイルス、死滅/不活化PPVウイルス、死滅/不活化PPV株014、ブタパルボウイルスのドイツ野生分離株であるPPV−27aおよびPPV−143a、ならびにブタパルボウイルスのワクチンウイルスであるPPV−NADL−2およびPPV−IDT(MSV)からなる群から選択される、本明細書で記載および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せに関する。
本発明の範囲内の、「死滅させた」または「不活化させた」という用語は、適切な対象に感染する能力を有さず(生ウイルスと対比される)、かつ/または天然ウイルスと比較して、それらの感染性が与えられていないPPVおよび/またはPRRSVに関する。特に、死滅/不活化ウイルスは、その天然宿主細胞に感染しえない(もはや)。
別の態様では、本発明は、少なくとも1つのPPV抗原が、1つまたは複数のPPVサブユニットである、本明細書で記載および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せに関する。
「ウイルスタンパク質2」または「VP2」という用語は、ブタパルボウイルスのカプシドタンパク質であるVP2に関する。当業者には、「ウイルスタンパク質2」または「VP2」という用語が周知である。
「タンパク質」、「アミノ酸」、および「ポリペプチド」という用語は、互換的に使用される。「タンパク質」という用語は、天然におけるアミノ酸ならびにこれらの誘導体から構成される、アミノ酸残基の配列を指す。当技術分野では、天然におけるアミノ酸が周知であり、生化学の標準的な教科書に記載されている。アミノ酸配列内では、アミノ酸残基は、ペプチド結合により接続される。さらに、2つのアミノ酸配列を、カルボキシル末端(C末端)およびアミノ末端(N末端)と称する。「タンパク質」という用語は、本質的に精製されたタンパク質、またはこれに加えて、他のタンパク質を含むタンパク質調製物を包含する。さらに、用語はまた、タンパク質断片にも関する。さらに、用語は、化学修飾タンパク質を含む。このような修飾は、人工的修飾の場合もあり、リン酸化、グリコシル化、ミリストイル化など、天然における修飾の場合もある。
・228位のアミノ酸において、グルタミン酸(glutamic acidまたはglutamate)残基を有し、かつ/または
・414位のアミノ酸において、セリン残基を有し、かつ/または
・419位のアミノ酸において、グルタミン残基を有し、かつ/または
・436位のアミノ酸において、トレオニン残基
を有し、
アミノ酸位置の番号付けが、野生型PPV VP2のアミノ酸配列を指す、本明細書で記載および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せに関する。
「アミノ酸位置の番号付けが、野生型PPV VP2のアミノ酸配列を指す」という用語は、全長野生型PPV VP2タンパク質のアミノ酸配列を指す、アミノ酸位置の番号付けに関する。好ましくは、本明細書で言及されるアミノ位置の番号付けは、579アミノ酸残基を有し、(N末端の)アミノ酸1位において、メチオニン残基を含む、野生型PPV VP2タンパク質配列を指す。「アミノ酸位置の番号付けが、野生型PPV VP2のアミノ酸配列を指す」という用語は、配列番号1に例示的に示される、野生型PPV VP2(PPV 27a VP2)を包含する。
・25位のアミノ酸において、イソロイシン残基を有し、かつ/または
・36位のアミノ酸において、セリン残基を有し、かつ/または
・37位のアミノ酸において、イソロイシン残基
をさらに有し、
アミノ酸位置の番号付けが、野生型PPV VP2のアミノ酸配列を指す、本明細書で記載および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せに関する。
別の態様では、本発明は、アミノ酸位置の番号付けが、配列番号1に示されるアミノ酸配列を指す、本明細書で記載および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せに関する。
別の態様では、本発明は、PPV VP2が、組換えPPV VP2である、本明細書で記載および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せに関する。
別の態様では、本発明は、PPV VP2が、組換えバキュロウイルスにより発現させたPPV VP2である、本明細書で記載および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せに関する。
別の態様では、本発明は、PPV VP2が、配列番号1、配列番号2、および/または配列番号5〜16のアミノ酸配列と、少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、本明細書で開示および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せに関する。
別の態様では、本発明は、PPV VP2が、配列番号1、配列番号2、または配列番号5〜16のアミノ酸配列を含むか、もしくはこれからなるか、または、配列番号1、配列番号2、もしくは配列番号5〜16に由来する、少なくとも210個、少なくとも250個、もしくは少なくとも300個の連続アミノ酸残基を有する任意の断片を含むか、もしくはこれからなる、本明細書で開示および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せに関する。
別の態様では、本発明は、PPV VP2が、配列番号1、配列番号2、および/または配列番号5〜16のアミノ酸配列と、少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列によりコードされる、本明細書で開示および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せに関する。
別の態様では、本発明は、PPV VP2が、配列番号1、配列番号2、および/または配列番号5〜16のアミノ酸配列と、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、少なくとも99.1%、少なくとも99.2%、少なくとも99.3%、少なくとも99.4%、少なくとも99.5%、少なくとも99.6%、少なくとも99.7%、少なくとも99.8%、または少なくとも99.9%の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列によりコードされる、本明細書で開示および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せに関する。
別の態様では、本発明は、PPV VP2が、配列番号1、配列番号2、または配列番号5〜16のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列によりコードされる、本明細書で開示および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せに関する。
配列の比較は、比較される2つの配列の全長にわたり実行することもでき、2つの配列の断片にわたり実行することもできる。比較は、比較される2つの配列の全長にわたり実行することが典型的である。しかし、配列同一性は、例えば、20、50、100、またはこれを超える連続アミノ酸残基の領域にわたり実行することもできる。
「防御的免疫応答」または「防御性免疫」は、感染した宿主により通常提示される臨床徴候の軽減もしくは欠如、迅速な回復時間、および/または感染性の持続期間の短縮、または感染した宿主の組織もしくは体液もしくは排出物における病原体力価の低下により裏付けられるであろう。
宿主が、新たな感染への抵抗性を増強し、かつ/または疾患の臨床重症度を軽減するように、防御的免疫応答を提示する場合は、「免疫原性組成物」または「組合せ」を、「ワクチン」と記載する。
別の態様では、本発明は、単回投与のために製剤化される、本明細書で開示および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せに関する。
単回投与のための容量については、本明細書の別の箇所で規定した。
本明細書で開示および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せは、局所投与または全身投与することが好ましい。従来使用されている、適切な投与経路は、鼻腔内投与、静脈内投与、筋内投与、腹腔内投与、皮下投与のほか、吸入など、経口投与または非経口投与である。しかし、化合物の性質および作用方式に応じて、本明細書で開示および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せは、他の経路により投与することもできる。本明細書で開示および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せは、筋内投与することが最も好ましい。
別の態様では、本発明は、妊娠時および授乳時の未経産ブタおよび/または雌ブタに安全である、本明細書で開示および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せに関する。
別の態様では、本発明は、妊娠30日目、好ましくは、妊娠40日目からの未経産ブタおよび/または雌ブタに安全である、本明細書で開示および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せに関する。
別の態様では、本発明は、少なくとも1つの薬学的に許容される担体をさらに含む、本明細書で開示および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せに関する。
「薬学的に許容される担体」という用語は、任意かつ全ての溶媒、分散媒、コーティング、安定化剤、希釈剤、防腐剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤、吸着遅延剤、アジュバント、免疫刺激剤、およびこれらの組合せを含む。
本発明の一態様では、薬学的に許容される担体は、カルボマーである。
好ましくは、免疫原性組成物は、例えば、インターロイキン、インターフェロン、または他のサイトカインなど、1つまたは複数の他の免疫調節剤をさらに含みうる。本発明の文脈で有用な、アジュバントおよび添加剤の量および濃度は、当業者にたやすく決定されうる。
別の態様では、本発明は、少なくとも1つの薬学的に許容される担体が、カルボマーである、本明細書で開示および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せに関する。
別の態様では、本発明は、0.1μg〜50μgのPPV VP2抗原、好ましくは、0.5μg〜10μgのPPV VP2抗原、より好ましくは、1.0μg〜10μgのPPV VP2抗原、および/または3.9〜7.0 log10TCID50のPRRSウイルスを含む、本明細書で開示および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せに関する。
別の態様では、本発明は、約3.9〜7.0 log10TCID50の間のPRRSウイルスを含む、本明細書で開示および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せに関する。
別の態様では、本発明は、ワクチンである、本明細書で開示および特許請求される、免疫原性組成物または組合せに関する。
「ワクチン」という用語については、本明細書の別の箇所で、既に記載した。しかし、宿主が、新たな感染への抵抗性を増強し、かつ/または疾患の臨床重症度を軽減するように、防御的免疫応答を提示する場合は、免疫原性組成物または組合せを、「ワクチン」と記載する。
本出願では、「〜を防御する」および「予防」および「〜を防止すること」という用語を互換的に使用する。これらの用語については、別の箇所で規定した。
別の態様では、本発明は、北米分離株および/もしくは欧州分離株による抗原投与に対して防御する、本明細書で開示および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せに関する。
別の態様では、本発明は、北米分離株および/もしくは欧州分離株に対して交差防御性である、本明細書で開示および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せに関する。
別の態様では、本発明は、それを必要とする対象におけるPPVおよび/またはPRRSVへの感染により引き起こされる臨床徴候を、処置および/または予防するのに有効である、本明細書で開示および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せに関する。「処置および/もしくは予防」、「臨床徴候」、および「それを必要とする」という用語については、別の箇所で規定した。
別の態様では、本発明は、PPVの同種抗原投与および/もしくは異種抗原投与、および/またはPRRSウイルスの同種抗原投与および/もしくは異種抗原投与に対して防御する、本明細書で開示および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せに関する。
別の態様では、本発明は、PPVの北米分離株および/もしくは欧州分離株による抗原投与に対して、かつ/またはPRRSウイルスの北米分離株および/もしくは欧州分離株による抗原投与に対して防御する、本明細書で開示および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せに関する。
別の態様では、本発明は、それを必要とする対象における、PPV感染および/またはPRRSウイルス感染により引き起こされる臨床徴候を、処置および/または予防するのに有効である、本明細書で開示および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せに関する。
さらに、本発明は、本明細書で記載および特許請求されるPPV VP2を含むウイルス様粒子を提供する。
「ウイルス様粒子」(VLP)という用語はまた、複数のPPV VP2から構成されるVLPも包含する。
さらに、本発明は、本明細書で記載されるポリヌクレオチドまたはベクターを含む細胞を提供する。好ましくは、ベクターは、バキュロウイルスである。
当業者には、「細胞」という用語が周知である。「細胞」という用語は、動物細胞、原生生物細胞、植物細胞、または真菌細胞などの真核細胞を包含する。好ましくは、真核細胞は、CHO細胞、BHK細胞、もしくはCOS細胞などの哺乳動物細胞、またはSaccharomyces cerevisiaeなどの真菌細胞、またはSf9などの昆虫細胞である。
本発明の別の態様では、細胞は、昆虫細胞である。
本明細書で使用される「昆虫細胞」とは、昆虫種に由来する細胞または細胞培養物を意味する。本発明との関連で、特に目的となるのは、Spodoptera frugiperda種およびTrichoplusia ni種に由来する昆虫細胞である。
好ましくは、本明細書で言及される昆虫細胞は、Spodoptera frugiperda(Sf)細胞、またはSpodoptera frugiperdaに由来する細胞株に由来する細胞であり、より好ましくは、Sf9細胞およびSf+細胞からなる群から選択される。本明細書で言及される昆虫細胞は、それぞれ、好ましくは、Spodoptera frugiperda(Sf)細胞、またはSpodoptera frugiperdaに由来する細胞株に由来する細胞であり、より好ましくは、Sf9細胞およびSf+細胞からなる群から選択される。
さらに、本発明は、本明細書で記載および特許請求されるPPV VP2を作製する方法であって、細胞に、本明細書で記載されるベクターをトランスフェクトするステップを含む方法を提供する。
当業者には、「ベクター」という用語が周知である。当技術分野で公知の「ベクター」という用語は、ポリヌクレオチド構築物、典型的に、遺伝子的素材を、宿主細胞へと伝染させるのに使用される、プラスミドまたはウイルスを指す。ベクターは、例えば、ウイルス、プラスミド、コスミド、またはファージでありうる。本明細書で使用されるベクターは、DNAから構成される場合もあり、RNAから構成される場合もある。一部の実施形態では、ベクターは、DNAから構成される。
本明細書で使用される「作動可能に連結された」という用語は、調節エレメントと、遺伝子またはそのコード領域との接続について記載するように使用される。典型的に、遺伝子の発現は、1つまたは複数の調節エレメント、例えば、限定せずに述べると、構成的プロモーターまたは誘導的プロモーター、組織特異的調節エレメント、およびエンハンサーの制御下に置かれる。遺伝子またはコード領域は、調節エレメント「に作動可能に連結される」か、またはこれ「に作動的に連結される」か、またはこれ「と作動可能に会合した」といい、遺伝子またはコード領域が、調節エレメントに制御されるか、またはこの影響を受けることを意味する。例えば、プロモーターが、コード配列の転写または発現をもたらす場合、プロモーターは、コード配列に作動可能に連結されている。
本明細書で使用される「プロモーター」という用語は、RNAポリメラーゼの結合を可能とし、遺伝子の転写を方向付けるヌクレオチド配列である。典型的に、プロモーターは、遺伝子の転写開始部位に対して近位である、遺伝子の5’側非コード領域に位置する。転写の誘発において機能するプロモーター内の配列エレメントは、コンセンサスヌクレオチド配列を特徴とすることが多い。プロモーターの例は、細菌、酵母、植物、ウイルス、および哺乳動物(ヒトを含む)に由来するプロモーターを含むがこれらに限定されない。プロモーターは、誘導的プロモーターの場合もあり、抑制性プロモーターの場合もあり、かつ/または構成的プロモーターの場合もある。誘導的プロモーターは、それらの制御下における、DNAからの転写のレベルの上昇であって、温度の変化など、培養条件における何らかの変化に応答する上昇を誘発する。
ウイルスベクターの作出は、当技術分野で周知である、任意の適切な遺伝子操作法であって、限定せずに述べると、制限エンドヌクレアーゼ消化、ライゲーション、形質転換、プラスミド精製、およびDNAシーケンシングの標準法を含み、例えば、Sambrook et al. (Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, N.Y. (1989))において記載されている遺伝子操作法を使用して達することができる。
さらに、本発明は、本明細書で記載されるPPV VP2を作製する方法であって、細胞、好ましくは、昆虫細胞に、本明細書で記載されるバキュロウイルスを感染させるステップを含む方法を提供する。
別の態様では、本発明は、少なくとも1つのブタパルボウイルス(PPV)抗原と、少なくとも1つのブタ繁殖呼吸障害症候群(PRRS)ウイルス抗原とが、単一の容器に併せて含有されるか、または互いと空間的に分離され、好ましくは、2つまたはこれを超える個別の容器に含有される、本明細書で開示および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せに関する。
別の態様では、本発明は、少なくとも1つのブタパルボウイルス(PPV)抗原と、少なくとも1つのブタ繁殖呼吸障害症候群(PRRS)ウイルス抗原とが、2つまたはこれを超える個別の容器に、互いと別々に、好ましくは、いずれも、乾燥凍結形態または凍結形態で、互いと独立に含有された、本明細書で開示および特許請求されるキットであって、空間的に分離された少なくとも1つのPPV抗原と、少なくとも1つのPRRSウイルス抗原とを混合するための取扱説明書をさらに含み、好ましくは、このような取扱説明書が、少なくとも1つのPPV抗原を含有する容器の内容物を、少なくとも1つのPPRSウイルス抗原を含有する容器の内容物と組み合わせる指示を含有し、より好ましくは、このような取扱説明書が、少なくとも1つのブタパルボウイルス(PPV)抗原と、少なくとも1つのブタ繁殖呼吸障害症候群(PRRS)ウイルス抗原とを、対象へと、同時に、より好ましくは、同じまたは異なる投与部位に、個別に同時に、逐次的に(任意の順序で)、かつ/または時間を前後して投与するものとする指示を含有する、本明細書で開示および特許請求されるキットに関する。
別の態様では、本発明は、ブタにおける疾患を処置および/もしくは予防するための指示をさらに含み、かつ/またはPPV感染および/もしくはPRRSウイルス感染を処置および/もしくは予防するための指示をさらに含み、好ましくは、本明細書で開示および特許請求され、このようなキットに含有される免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せのPPV構成要素(好ましくは、分離されたキット構成要素としての)、およびPRRSV構成要素(好ましくは、分離されたキット構成要素としての)の、関連する使用のための指示をさらに含む、本明細書で開示および特許請求されるキットに関する。
本発明の別の態様では、本発明のPPVおよび/またはPRRSVを不活化させる結果として、本明細書で記載されるウイルスタンパク質2(VP2)を伴う、全不活化ウイルスをもたらす。
好ましいホルマリン不活化条件は、約0.02%(容量/容量)〜2.0%(容量/容量)、より好ましくは、約0.1%(容量/容量)〜1.0%(容量/容量)、さらにより好ましくは、約0.15%(容量/容量)〜0.8%(容量/容量)、なおより好ましくは、約0.16%(容量/容量)〜0.6%(容量/容量)の間のホルマリン濃度を含み、最も好ましくは、約0.2%(容量/容量)〜0.4%(容量/容量)の間のホルマリン濃度を含む。インキュベーション時間は、PPVおよび/またはPRRSVの耐性に依存する。一般に、不活化工程は、PPVおよび/またはPRRSVの増殖が、適切な培養系で検出されえなくなるまで実施される。
好ましくは、本発明の不活化PPVおよび/またはPRRSVは、環化バイナリーエチレンイミン(BEI)により不活化されるが、これは、バイナリーエチレンイミン(BEI)へと環化された、2−ブロモエチレンアミンヒドロブロミド(BEA)の溶液の添加を含む。
本発明の不活化PPVおよび/またはPRRSVは、Nature, 1974, 252, 252-254またはJournal of Immunology, 1978, 120, 1109-1113において記載されている技術など、公知の技術を使用して、リポソームへと組み込むことができる。本発明の別の実施形態では、本発明の不活化PPVを、多糖、ペプチド、タンパク質など、またはこれらの組合せなど、適切な生体化合物へとコンジュゲートさせることができる。
「〜を免疫化すること」という用語は、免疫化される対象への、免疫原性組成物の投与による能動的免疫化であって、これにより、このような免疫原性組成物に含まれる抗原に対する免疫応答を引き起こす能動的免疫化に関する。
さらに、本明細書で提示される免疫原性組成物による、それを必要とする対象の免疫化は、PPVおよび/またはPRRSVへの感染により、対象の感染の防止を結果としてもたらす。なおより好ましくは、免疫化は、PPVおよび/またはPRRSVへの感染に対する、有効で、長期持続的な、免疫学的応答を結果としてもたらす。前記期間は、1カ月間を超えて、好ましくは、2カ月間を超えて、好ましくは、3カ月間を超えて、より好ましくは、4カ月間を超えて、より好ましくは、5カ月間を超えて、より好ましくは、6カ月間を超えて持続することが理解されるであろう。免疫化は、免疫化された全ての対象において有効ではありえないことを理解されたい。しかし、用語は、群れの対象のうちの著明な部分が、有効に免疫化されることを要求する。
別の態様では、本発明は、PPVおよび/もしくはPRRSウイルスの感染の処置および/もしくは防止、PPVおよび/もしくはPRRSウイルスの感染により引き起こされる臨床徴候の軽減、防止、もしくは処置、またはPPVおよび/もしくはPRRSウイルスの感染により引き起こされる疾患の処置および/もしくは防止のための、本明細書で記載および特許請求される、免疫原性組成物もしくは組合せワクチンもしくは組合せ、またはキットの使用に関する。
別の態様では、本発明は、対象を免疫化する方法であって、このような対象へと、本明細書で記載および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ(または分離されたキットの構成要素)を投与するステップを含む方法に関する。
別の態様では、本発明は、それを必要とする対象における、好ましくは、ブタにおける、PPV感染および/またはPRRSウイルス感染により引き起こされる臨床徴候、好ましくは、ブタ繁殖呼吸障害症候群を処置および/または防止する方法であって、対象へと、治療有効量の、本明細書で記載および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ(または分離されたキットの構成要素)を投与するステップを含む方法に関する。
別の態様では、本発明は、対象における生殖障害を、同じ種の非免疫化対照群の対象と比較して軽減する方法であって、対象へと、治療有効量の、本明細書で記載および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ(または分離されたキットの構成要素)を投与するステップを含む方法に関する。
別の態様では、本発明は、ブタパルボウイルス感染に対して、胚および胎仔を保護するための、繁殖用ブタ(雌ブタおよび未経産ブタ)の能動的免疫化のための方法であって、このようなブタ(雌ブタおよび未経産ブタ)へと、治療有効量の、本明細書で記載および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ(または分離されたキットの構成要素)を投与するステップを含む方法に関する。
別の態様では、本発明は、前記対象が、ブタ、ウシ、ネコ、およびイヌ、好ましくは、ブタ、より好ましくは、雌ブタおよび/または未経産ブタからなる群から選択される、本明細書で記載および特許請求される方法に関する。
別の態様では、本発明は、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ(または分離されたキットの構成要素)が、1回、または2回もしくはこれを超える回数にわたり投与される、本明細書で記載および特許請求される方法に関する。
別の態様では、本発明は、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ(または分離されたキットの構成要素)が、未経産ブタおよび/または雌ブタへと、好ましくは、未経産ブタおよび/または少なくとも3週齢である雌ブタへと、より好ましくは、未経産ブタおよび/または妊娠前の雌ブタへと、なおより好ましくは、妊娠時および授乳時の雌ブタへと投与される、本明細書で記載および特許請求される方法に関する。
別の態様では、本発明は、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ(または分離されたキットの構成要素)が、妊娠時および授乳時の未経産ブタおよび/または雌ブタ、ならびに妊娠前の未経産ブタに安全である、本明細書で記載および特許請求される方法に関する。
別の態様では、本発明は、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ(または分離されたキットの構成要素)が、妊娠30日目、好ましくは、妊娠40日目からの雌ブタおよび/または未経産ブタに安全である、本明細書で記載および特許請求される方法に関する。
別の態様では、本発明は、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ(または分離されたキットの構成要素)が、PPVの同種抗原投与および/もしくは異種抗原投与、および/またはPRRSウイルスの同種抗原投与および/もしくは異種抗原投与に対して防御する、本明細書で記載および特許請求される方法に関する。
別の態様では、本発明は、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ(または分離されたキットの構成要素)が、PPVの北米分離株および/もしくは欧州分離株による抗原投与に対して、かつ/またはPRRSウイルスの北米分離株および/もしくは欧州分離株による抗原投与に対して防御する、本明細書で記載および特許請求される方法に関する。
別の態様では、本発明は、本明細書で記載および特許請求される方法であって、胚および/もしくは胎仔の感染および死、またはこれらの組合せを特徴とする、一過性の白血球減少症および生殖障害の、同じ種の非免疫化対照群の対象と比較した軽減からなる群から選択される、少なくとも1つの有効性パラメータの改善を結果としてもたらす方法に関する。
別の態様では、本発明は、対象を免疫化する方法であって、前記免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せを、このような対象(または分離されたキットの構成要素)へと投与するステップを含む方法における使用のための、本明細書で記載および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ(または分離されたキットの構成要素)に関する。
別の態様では、本発明は、対象における生殖障害を、同じ種の非免疫化対照群の対象と比較して軽減する方法であって、対象へと、治療有効量の、前記免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ(または分離されたキットの構成要素)を投与するステップを含む方法における使用のための、本明細書で記載および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ(または分離されたキットの構成要素)に関する。
別の態様では、本発明は、対象における胚死および胎仔死を、同じ種の非免疫化対照群の対象と比較して軽減する方法であって、対象へと、治療有効量の、前記免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ(または分離されたキットの構成要素)を投与するステップを含む方法における使用のための、本明細書で記載および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ(または分離されたキットの構成要素)に関する。
別の態様では、本発明は、前記対象が、ブタ、ウシ、ネコ、およびイヌ、好ましくは、ブタ、より好ましくは、雌ブタおよび/または未経産ブタからなる群から選択される、本明細書で記載および特許請求される使用のための、本明細書で記載および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ(または分離されたキットの構成要素)に関する。
別の態様では、本発明は、1回、または2回もしくはこれを超える回数にわたり投与される、本明細書で記載および特許請求される使用のための、本明細書で記載および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ(または分離されたキットの構成要素)に関する。
別の態様では、本発明は、未経産ブタおよび/または雌ブタ、好ましくは、少なくとも3週齢である雌ブタ、より好ましくは、妊娠前の雌ブタ、なおより好ましくは、妊娠時および授乳時の雌ブタへと投与される、本明細書で記載および特許請求される使用のための、本明細書で記載および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ(または分離されたキットの構成要素)に関する。
別の態様では、本発明は、妊娠時および授乳時の未経産ブタおよび/または雌ブタに安全である、本明細書で記載および特許請求される使用のための、本明細書で記載および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ(または分離されたキットの構成要素)に関する。
別の態様では、本発明は、0.1μg〜50μgのPPV VP2抗原、好ましくは、0.5μg〜10μgのPPV VP2抗原、より好ましくは、1.0μg〜10μgのPPV VP2抗原、および/または3.9〜7.0 log10TCID50のPRRSウイルスを含む、本明細書で記載および特許請求される使用のための、本明細書で記載および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ(または分離されたキットの構成要素)に関する。
別の態様では、本発明は、PPVの同種抗原投与および/もしくは異種抗原投与に対して防御し、かつ/またはPRRSウイルスの同種抗原投与および/もしくは異種抗原投与に対して防御する、本明細書で記載および特許請求される使用のための、本明細書で記載および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ(または分離されたキットの構成要素)に関する。
別の態様では、本発明は、PPVの北米分離株および/もしくは欧州分離株に対して交差防御性であり、かつ/またはPRRSウイルスの北米分離株および/もしくは欧州分離株に対して交差防御性である、本明細書で記載および特許請求される使用のための、本明細書で記載および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ(または分離されたキットの構成要素)に関する。
別の態様では、本発明は、前記方法が、胚および/もしくは胎仔の感染および死、またはこれらの組合せを特徴とする、一過性の白血球減少症および生殖障害の、同じ種の非免疫化対照群の対象と比較した軽減からなる群から選択される、少なくとも1つの有効性パラメータの改善を結果としてもたらす、本明細書で記載および特許請求される使用のための、本明細書で記載および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ(または分離されたキットの構成要素)に関する。
「処置および/または予防」という用語は、群れの中の、特定のPPVおよび/もしくはPRRSVへの感染の発生率を低下させること、または特定のPPVおよび/またはPRRSVへの感染により引き起こされるか、もしくはこれと関連する、臨床徴候の重症度の軽減を指す。したがって、「処置および/または予防」という用語はまた、有効量の、本明細書で提示される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せを施された動物の動物群における、特定のPPVおよび/もしくはPRRSVに感染した群れの中の動物数の、このような免疫原性組成物または組合せワクチンもしくは組合せを施されていない動物の動物群と比較した低減(=特定のPPVおよび/またはPRRSVへの感染の発生率を低下させること)、または、通常、PPVおよび/もしくはPRRSVへの感染と関連するか、もしくはこれにより引き起こされる、臨床徴候の重症度の軽減も指す。
本明細書で使用される「有効量」という用語は、対象における免疫応答を誘発するか、またはこれを誘発することが可能な量の抗原を意味するがこれらに限定されない。このような有効量は、群れの中の、特定のPPVおよび/またはPRRSVへの感染の発生率を低下させるか、または特定のPPVおよび/またはPRRSVへの感染の臨床徴候の重症度を軽減することが可能である。
好ましくは、処置された対象の発生率または重症度における、臨床徴候の、本発明の前に利用可能であった免疫原性組成物で処置されていないか、または処置されたが、その後、特定のPPVおよび/またはPRRSVに感染した対象と比較した低下とは、胚および/もしくは胎仔の感染および死、またはこれらの組合せを特徴とする、一過性の白血球減少症および生殖障害を指す。
本出願では、「〜を軽減すること」または「軽減された」または「軽減」または「〜を減少させる」という用語を、互換的に使用する。「軽減」という用語は、臨床徴候を、処置されず(免疫化されず)、その後、特定のPPVおよび/またはPRRSVに感染した対象と比較して、少なくとも10%、より好ましくは、少なくとも20%、さらにより好ましくは、少なくとも30%、なおより好ましくは、少なくとも40%、さらにより好ましくは、少なくとも50%、なおより好ましくは、少なくとも60%、さらにより好ましくは、少なくとも70%、なおより好ましくは、少なくとも80%、なおより好ましくは、少なくとも90%、さらにより好ましくは、少なくとも95%、最も好ましくは、100%軽減することを意味する。
対象1例当たりの投与容量は、ワクチン接種の経路と、対象の週齢とに依存する。好ましくは、単回投与は、約0.2ml〜2.5mlの間、より好ましくは、約0.2ml〜2.0mlの間、なおより好ましくは、約0.2ml〜1.75mlの間、さらにより好ましくは、約0.2ml〜1.5mlの間、なおより好ましくは、約0.4ml〜1.25mlの間、なおより好ましくは、約0.4ml〜1.0mlの間の総容量を有し、0.5mlの単回投与または1.0mlの単回投与が最も好ましい。最も好ましい単回投与は、0.5ml、1ml、1.5ml、または2mlの総容量を有する。
本発明の一態様では、本明細書で記載および特許請求される、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ(または分離されたキットの構成要素)は、2回またはこれを超える回数にわたり投与される。
好ましくは、対象は、ブタである。ブタは、雌動物および雄動物を含むことが理解されている。精子は、PPVを含有する場合があり、この理由から、「ブタ」という言葉には、雌および雄の繁殖用動物が包含される。したがって、「ブタ」という言葉は、雄ブタなどの雄動物のほか、未経産ブタおよび雌ブタなどの雌動物を含む。
本明細書で使用される「未経産ブタ」という用語は、ブタ(porcine)、好ましくは、初回の妊娠(gestation)/妊娠(pregnancy)の前および初回の妊娠時のブタ(pig)を指す。これに対し、本明細書で使用される「雌ブタ」という用語は、ブタ、好ましくは、初回の分娩(その初回の妊娠の肯定的な結果としての)の後のブタを指す。
免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ(または分離されたキットの構成要素)は、局所投与または全身投与することが好ましい。従来使用されている、適切な投与経路は、鼻腔内、静脈内、皮内、経皮、筋内、腹腔内、皮下のほか、吸入など、経口投与または非経口投与である。しかし、化合物の性質および作用方式に応じて、免疫原性組成物は、他の経路により投与することもできる。例えば、このような他の経路は、皮内投与、静脈内投与、血管内投与、動脈内投与、腹腔内投与、髄腔内投与、気管内投与、皮内投与、心内投与、肺葉内(intralobally、intralobarly)投与、髄内投与、肺内投与、直腸内投与、および膣内投与を含む。しかし、免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せは、皮下投与または筋内投与することがより好ましい。免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せは、筋内投与することが最も好ましい。
1.(a)少なくとも1つのブタパルボウイルス(PPV)抗原であって、PPVに含有される、任意の抗原である、少なくとも1つのPPV抗原と、
(b)少なくとも1つのブタ繁殖呼吸障害症候群(PRRS)ウイルス抗原であって、PRRSウイルスに含有される、任意の抗原である、少なくとも1つのPRRSウイルス抗原と
を含む免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
2.PPVが、弱毒化生/改変生PPVウイルス、死滅/不活化PPVウイルス(例えば、Porcilis Parvo)、死滅/不活化PPV株014、ブタパルボウイルスのドイツ野生分離株であるPPV−27aおよびPPV−143aならびにブタパルボウイルスのワクチンウイルスであるPPV−NADL−2およびPPV−IDT(MSV)からなる群から選択される、条項1による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
3.少なくとも1つのPPV抗原が、1つまたは複数のPPVサブユニットである、条項1〜2のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
4.少なくとも1つのPPVサブユニットが、PPVウイルスタンパク質2(VP2)である、条項1〜3のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
5.PPV VP2が、唯一のPPV抗原である、条項4による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
・228位のアミノ酸において、グルタミン酸残基を有し、かつ/または
・414位のアミノ酸において、セリン残基を有し、かつ/または
・419位のアミノ酸において、グルタミン残基を有し、かつ/または
・436位のアミノ酸において、トレオニン残基
を有し、
アミノ酸位置の番号付けが、野生型PPV VP2のアミノ酸配列を指す、条項4〜5のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
7.PPV VP2が、
・25位のアミノ酸において、イソロイシン残基を有し、かつ/または
・36位のアミノ酸において、セリン残基を有し、かつ/または
・37位のアミノ酸において、イソロイシン残基
をさらに有する、条項6による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
8.アミノ酸位置の番号付けが、配列番号1に示されるアミノ酸配列を指す、条項6〜7のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
9.PPV VP2が、組換えPPV VP2である、条項4〜8のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
11.PPV VP2が、配列番号1、配列番号2、および/または配列番号5〜16のアミノ酸配列と、少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、条項4〜10のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
12.PPV VP2が、配列番号1、配列番号2、および/または配列番号5〜16のアミノ酸配列と、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、少なくとも99.1%、少なくとも99.2%、少なくとも99.3%、少なくとも99.4%、少なくとも99.5%、少なくとも99.6%、少なくとも99.7%、少なくとも99.8%、または少なくとも99.9%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、条項11による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
14.PPV VP2が、配列番号1、配列番号2、または配列番号5〜16のアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、条項13による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
15.PPV VP2が、配列番号1、配列番号2、および/または配列番号5〜16のアミノ酸配列と、少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列によりコードされる、条項4〜14のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
17.PPV VP2が、配列番号1、配列番号2、または配列番号5〜16のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列によりコードされる、条項16による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
21.単回投与または2回投与のために製剤化される、条項1〜20のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
22.筋内投与される、条項1〜21のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
24.妊娠30日目、好ましくは、妊娠40日目からの未経産ブタおよび/または雌ブタに安全である、条項23による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
25.少なくとも1つの薬学的に許容される担体をさらに含む、条項1〜24のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
26.少なくとも1つの薬学的に許容される担体が、カルボマーである、条項25による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
27.0.1μg〜50μgのPPV VP2抗原、好ましくは、0.5μg〜10μgのPPV VP2抗原、より好ましくは、1.0μg〜10μgのPPV VP2抗原、および/または3.9〜7.0 log10TCID50のPRRSウイルスを含む、条項4〜26のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
28.ワクチンである、条項1〜27のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せ。
30.PPVの北米分離株および/もしくは欧州分離株による抗原投与に対して、かつ/またはPRRSウイルスの北米分離株および/もしくは欧州分離株による抗原投与に対して防御する、条項1〜29のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
31.PPVの北米分離株および/もしくは欧州分離株に対して交差防御性であり、かつ/またはPRRSウイルスの北米分離株および/もしくは欧州分離株に対して交差防御性である、条項1〜30のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
32.それを必要とする対象における、PPV感染および/またはPRRSウイルス感染により引き起こされる臨床徴候を、処置および/または予防するのに有効である、条項1〜31のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
33.少なくとも1つのブタパルボウイルス(PPV)抗原と、少なくとも1つのブタ繁殖呼吸障害症候群(PRRS)ウイルス抗原とが、単一の容器に併せて含有されるか、または互いと空間的に分離され、好ましくは、2つまたはこれを超える個別の容器に含有される、条項1〜31のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
35.少なくとも1つのブタパルボウイルス(PPV)抗原と、少なくとも1つのブタ繁殖呼吸障害症候群(PRRS)ウイルス抗原とが、2つまたはこれを超える個別の容器に、互いと別々に、好ましくは、いずれも、乾燥凍結形態または凍結形態で、互いと独立に含有され、キットが、空間的に分離された少なくとも1つのPPV抗原と、少なくとも1つのPRRSウイルス抗原とを混合するための取扱説明書をさらに含み、好ましくは、このような取扱説明書が、少なくとも1つのPPV抗原を含有する容器の内容物を、少なくとも1つのPPRSウイルス抗原を含有する容器の内容物と組み合わせる指示を含有し、より好ましくは、少なくとも1つのPPV抗原を含有する容器の液体内容物を、少なくとも1つのPPRSウイルス抗原を含有する容器の乾燥凍結内容物のための希釈剤として使用する、条項34によるキット。
37.医薬、好ましくは、ワクチンを調製するための、条項1〜33のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ、または条項34〜36のうちのいずれか1項によるキットの使用。
38.PPVおよび/もしくはPRRSウイルスの感染の処置および/もしくは防止、PPVおよび/もしくはPRRSウイルスの感染により引き起こされる臨床徴候の軽減、防止、もしくは処置、またはPPVおよび/もしくはPRRSウイルスの感染により引き起こされる疾患の処置および/もしくは防止のための医薬を調製するための、条項37による使用。
40.それを必要とする対象における、好ましくは、ブタにおける、PPV感染および/またはPRRSウイルス感染により引き起こされる臨床徴候、好ましくは、ブタ繁殖呼吸障害症候群を処置および/または防止する方法であって、対象へと、治療有効量の、条項1〜33のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せを投与するステップを含む方法。
41.対象における生殖障害を、同じ種の非免疫化対照群の対象と比較して軽減する方法であって、対象へと、治療有効量の、条項1〜33のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せを投与するステップを含む方法。
42.対象における胚死および胎仔死を、同じ種の非免疫化対照群の対象と比較して軽減する方法であって、対象へと、治療有効量の、条項1〜33のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せを投与するステップを含む方法。
43.前記対象が、ブタ、ウシ、ネコ、およびイヌ、好ましくは、ブタ、より好ましくは、雌ブタおよび/または未経産ブタからなる群から選択される、条項39〜42のうちのいずれか1項による方法。
44.免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せを、1回、または2回もしくはこれを超える回数にわたり投与する、条項39〜43のうちのいずれか1項による方法。
46.免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せを、未経産ブタおよび/または雌ブタ、好ましくは、少なくとも3週齢である雌ブタ、より好ましくは、妊娠前の雌ブタ、なおより好ましくは、妊娠時および授乳時の雌ブタへと投与する、条項39〜45のうちのいずれか1項による方法。
47.免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せが、妊娠時および授乳時の未経産ブタおよび/または雌ブタに安全である、条項39〜46のうちのいずれか1項による方法。
48.免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せが、妊娠30日目、好ましくは、妊娠40日目からの雌ブタおよび/または未経産ブタに安全である、条項39〜47のうちのいずれか1項による方法。
50.免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せが、PPVの同種抗原投与および/もしくは異種抗原投与、および/またはPRRSウイルスの同種抗原投与および/もしくは異種抗原投与に対して防御する、条項39〜49のうちのいずれか1項による方法。
51.免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せが、PPVの北米分離株および/もしくは欧州分離株による抗原投与に対して、かつ/またはPRRSウイルスの北米分離株および/もしくは欧州分離株による抗原投与に対して防御する、条項39〜50のうちのいずれか1項による方法。
52.免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せが、PPVの北米分離株および/もしくは欧州分離株に対して交差防御性であり、かつ/またはPRRSウイルスの北米分離株および/もしくは欧州分離株に対して交差防御性である、条項39〜51のうちのいずれか1項による方法。
54.少なくとも1つのブタパルボウイルス(PPV)抗原と、少なくとも1つのブタ繁殖呼吸障害症候群(PRRS)ウイルス抗原とを、対象へと、同時に、好ましくは、同じまたは異なる投与部位に、個別に同時に、逐次的に(任意の順序で)、かつ/または時間を前後して投与する、条項39〜53のうちのいずれか1項による方法。
55.ブタパルボウイルス感染に対して、胚および胎仔を保護するための、繁殖用ブタ(雌ブタおよび未経産ブタ)の能動的免疫化のための、条項39〜54のうちのいずれか1項による方法であって、このようなブタ(雌ブタおよび未経産ブタ)へと、条項1〜33のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せを投与するステップを含む方法。
56.対象を免疫化する方法であって、前記免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せを、このような対象へと投与するステップを含む方法における使用のための、条項1〜33のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
58.対象における生殖障害を、同じ種の非免疫化対照群の対象と比較して軽減する方法であって、対象へと、治療有効量の、前記免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せを投与するステップを含む方法における使用のための、条項1〜33のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
59.対象における胚死および胎仔死を、同じ種の非免疫化対照群の対象と比較して軽減する方法であって、対象へと、治療有効量の、前記免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せを投与するステップを含む方法における使用のための、条項1〜33のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
61.免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せを、1回、または2回もしくはこれを超える回数にわたり投与する、条項56〜60のうちのいずれか1項による使用のための、条項1〜33のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
62.免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せを、筋内投与する、条項56〜61のうちのいずれか1項による使用のための、条項1〜33のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
63.免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せを、未経産ブタおよび/または雌ブタ、好ましくは、少なくとも3週齢である雌ブタ、より好ましくは、妊娠前の雌ブタ、なおより好ましくは、妊娠時および授乳時の雌ブタへと投与する、条項56〜62のうちのいずれか1項による使用のための、条項1〜33のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
65.免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せが、妊娠30日目、好ましくは、妊娠40日目からの未経産ブタおよび/または雌ブタに安全である、条項56〜64のうちのいずれか1項による使用のための、条項1〜33のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
66.免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せが、0.1μg〜50μgのPPV VP2抗原、好ましくは、0.5μg〜10μgのPPV VP2抗原、より好ましくは、1.0μg〜10μgのPPV VP2抗原、および/または3.9〜7.0 log10TCID50のPRRSウイルスを含む、条項56〜65のうちのいずれか1項による使用のための、条項1〜33のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
67.免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せが、PPVの同種抗原投与および/もしくは異種抗原投与に対して防御し、かつ/またはPRRSウイルスの同種抗原投与および/もしくは異種抗原投与に対して防御する、条項56〜66のうちのいずれか1項による使用のための、条項1〜33のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
69.免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せが、PPVの北米分離株および/もしくは欧州分離株に対して交差防御性であり、かつ/または、PRRSウイルスの北米分離株および/もしくは欧州分離株に対して交差防御性である、条項56〜68のうちのいずれか1項による使用のための、条項1〜33のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
71.少なくとも1つのブタパルボウイルス(PPV)抗原と、少なくとも1つのブタ繁殖呼吸障害症候群(PRRS)ウイルス抗原とを、対象へと、同時に、好ましくは、同じまたは異なる投与部位に、個別に同時に、逐次的に(任意の順序で)、かつ/または時間を前後して投与する、条項56〜70のうちのいずれか1項による使用のための、条項1〜33のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
72.ブタパルボウイルス感染に対して、胚および胎仔を保護するための、繁殖用ブタ(雌ブタおよび未経産ブタ)の能動的免疫化のための方法であって、前記免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せを、このようなブタ(雌ブタおよび未経産ブタ)へと投与するステップを含む方法における使用のための条項1〜33のうちのいずれか1項による免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
一態様では、本発明は、組換えタンパク質を含む免疫原性組成物を作製する方法であって、以下の順序で、
(i)・第1の液体、
・組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造、ならびに
・前記組換えタンパク質をコードする核酸配列を含むベクター
を含む混合物を用意する/得るステップと;
(ii)第2の液体を、ステップ(i)の混合物へと添加するステップであって、第2の液体が、第1の液体と異なるステップと;
(iii)さらなる第2の液体を、ステップ(ii)から得られる混合物へと、さらに添加し、第1の液体および/または第2の液体の一部を、このような、組み合わされた混合物から除去することにより、混合物中の、組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造を洗浄し、任意選択で、これを最終的に濃縮するステップと;
(iv)不活化剤を、ステップ(iii)から得られる混合物へと添加することにより、ベクターを不活化させるステップと;
(v)中和剤を、ステップ(iv)から得られる混合物へと添加することにより、不活化剤を中和するステップと
を含む方法に関する。
本発明の目的では、「第2の液体」とは、通常、細胞、抗原、免疫原性組成物、ワクチンなどと組み合わせて使用される、任意の液体であって、第1の液体と異なる液体を指す。好ましくは、第2の液体は、水溶液であり、なおより好ましくは、薬学的に許容される溶液であり、なおより好ましくは、生理食塩液またはリン酸緩衝液などの緩衝液である。最も好ましくは、第2の液体は、生ウイルスまたは生細菌を、このような液体中で培養または保管する場合に、生ウイルスまたは生細菌に対して殺ウイルス性ではないことを特徴とする。
本発明の目的の「組換えタンパク質」は、任意の組換えタンパク質、好ましくは、PPV VP2タンパク質、より好ましくは、配列番号1、配列番号2、および/または配列番号5〜16の配列との、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、少なくとも99.1%、少なくとも99.2%、少なくとも99.3%、少なくとも99.4%、少なくとも99.5%、少なくとも99.6%、少なくとも99.7%、少なくとも99.8%、少なくとも99.9%、または100%の配列同一性を有する配列を含むか、またはこれからなる、PPV VP2タンパク質を指す。
本発明の目的のための「ベクター」ならびに「前記組換えタンパク質をコードする核酸配列を含むベクター」とは、適切な発現ベクター、好ましくは、バキュロウイルス発現ベクターを指し、次にこれを使用して、DNAによりコードされるタンパク質またはポリペプチドを作製するように、宿主細胞にトランスフェクトする、または、バキュロウイルス発現ベクターの場合には、これに感染させる。
ベクター、ならびに発現のためのベクター(または組換え体)を作製および/または使用するための方法は、米国特許第4,603,112号、同第4,769,330号、同第5,174,993号、同第5,505,941号、同第5,338,683号、同第5,494,807号、同第4,722,848号、同第5,942,235号、同第5,364,773号、同第5,762,938号、同第5,770,212号、同第5,942,235号、同第382,425号、PCT公開第WO94/16716号、同第WO96/39491号、同第WO95/30018号;Paoletti, “Applications of pox virus vectors to vaccination: An update, “PNAS USA 93: 11349-11353, October 1996; Moss, “Genetically engineered poxviruses for recombinant gene expression, vaccination, and safety,” PNAS USA 93: 11341-11348, October 1996;Smithら、米国特許第4,745,051号(組換えバキュロウイルス);Richardson, C. D. (Editor), Methods in Molecular Biology 39, “Baculovirus Expression Protocols” (1995 Humana Press Inc.); Smith et al., “Production of Human Beta Interferon in Insect Cells Infected with a Baculovirus Expression Vector”, Molecular and Cellular Biology, December, 1983, Vol. 3, No. 12, p. 2156-2165;Pennock et al., “Strong and Regulated Expression of Escherichia coli B-Galactosidase in Infect Cells with a Baculovirus vector, “Molecular and Cellular Biology March 1984, Vol. 4, No. 3, p. 406;欧州特許出願第0370573号;1986年10月16日に出願された米国出願第920,197号;欧州特許公開第265785号;米国特許第4,769,331号(組換えヘルペスウイルス);Roizman, “The function of herpes simplex virus genes: A primer for genetic engineering of novel vectors,” PNAS USA 93:11307-11312, October 1996;Andreansky et al., “The application of genetically engineered herpes simplex viruses to the treatment of experimental brain tumors,” PNAS USA 93: 11313-11318, October 1996;Robertson et al., “Epstein-Barr virus vectors for gene delivery to B lymphocytes”, PNAS USA 93: 11334-11340, October 1996;Frolov et al., “Alphavirus-based expression vectors: Strategies and applications,” PNAS USA 93: 11371-11377, October 1996;Kitson et al., J. Virol. 65, 3068-3075, 1991;米国特許第5,591,439号、同第5,552,143号;WO98/00166;いずれも、1996年7月3日に出願され、許可された、米国出願第08/675,556号、および同第08/675,566号(組換えアデノウイルス);Grunhaus et al., 1992, “Adenovirus as cloning vectors,” Seminars in Virology (Vol. 3) p. 237-52, 1993;Ballay et al. EMBO Journal, vol. 4, p. 3861-65, Graham, Tibtech 8, 85-87, April, 1990; Prevec et al., J. Gen Virol. 70, 42434;PCT WO91/11525;Felgner et al. (1994), J. Biol. Chem. 269, 2550-2561, Science, 259: 1745-49, 1993;およびMcClements et al., “Immunization with DNA vaccines encoding glycoprotein D or glycoprotein B, alone or in combination, induces protective immunity in animal models of herpes simplex virus-2 disease”, PNAS USA 93: 11414-11420, October 1996;ならびに米国特許第5,591,639号、同第5,589,466号、および同第5,580,859号のほか、WO90/11092、WO93/19183、WO94/21797、WO95/11307、WO95/20660;とりわけ、DNA発現ベクターに関する、Tang et al., Nature, and Furth et al., Analytical Biochemistryにおいて開示されている方法を介する場合もあり、これと類似する場合もある。また、WO98/33510;Ju et al., Diabetologia, 41: 736-739, 1998(レンチウイルス発現系); Sanfordら、米国特許第4,945,050号;Fischbach et al.(イントラセル);WO90/01543;Robinson et al., Seminars in Immunology vol. 9, pp. 271-283 (1997)(DNAベクター系);Szokaら、米国特許第4,394,448号(生細胞にDNAを挿入する方法);McCormickら、米国特許第5,677,178号(細胞変性ウイルスの使用);および米国特許第5,928,913号(遺伝子送達のためのベクター)のほか、本明細書で引用される他の文献も参照されたい。
好ましいウイルスベクターは、特に、作製細胞が、昆虫細胞であるならば、BaculoGold(BD Biosciences Pharmingen、San Diego、CA)などのバキュロウイルスを含む。バキュロウイルス発現系が好ましいが、当業者により、上記で記載した発現系を含む、他の発現系も、本発明の目的、すなわち、組換えタンパク質の発現のために働くことが理解される。
組換えタンパク質のDNA配列を含有する組換えウイルスベクターは、感受性細胞の感染に使用される場合、約0.03〜1.5、より好ましくは、約0.05〜1.3、さらにより好ましくは、約0.09〜1.1の間であり、最も好ましくは、約0.1〜1.0の間である、好ましい感染多重度(MOI)を有する。好ましくは、上記で言及したMOIは、1mLの細胞培養液に関する。好ましくは、本明細書で記載される方法は、1mL当たりの細胞0.35〜1.9×106個、さらにより好ましくは、1mL当たりの細胞約0.4〜1.8×106個、なおより好ましくは、1mL当たりの細胞約0.45〜1.7×106個であり、最も好ましくは、1mL当たりの細胞約0.5〜1.5×106個への、組換えウイルスベクターであって、組換えタンパク質のDNAを含有し、約0.03〜1.5、より好ましくは、約0.05〜1.3、さらにより好ましくは、約0.09〜1.1の間であり、最も好ましくは、約0.1〜1.0の間であるMOI(感染多重度)を有する組換えタンパク質を発現させる組換えウイルスベクターの感染を含む。
本発明の目的の「不活化剤」とは、従来の任意の不活化法において使用されうる、任意の薬剤を指す。不活化は、当業者に公知の化学的処理および/または物理的処理により実施することができる。好ましい不活化剤は、バイナリーエチレンイミン(BEI)へと環化された、2−ブロモエチレンアミンヒドロブロミド(BEA)の溶液を含む、環化バイナリーエチレンイミン(BEI)を含む。好ましい、さらなる化学的不活化剤は、TritonX−100、デオキシコール酸ナトリウム、臭化セチルトリメチルアンモニウム、β−プロピオラクトン、チメロサール、フェノール、およびホルムアルデヒド(ホルマリン)を含むがこれらに限定されない。
本発明の目的の「中和剤」とは、不活化剤に、ベクターを不活化させることが、もはや可能でなくなるように、本明細書に記載される不活化剤を中和することが可能な、任意の薬剤を指す。不活化剤を中和する薬剤は、好ましくは、チオ硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウムなどである。
(a)培養物中の感受性の細胞への、前記組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造をコードする核酸配列を含むベクターの感染を可能とするステップであって、前記組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造を、前記ベクターにより発現させるステップと、
(b)その後、組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造を、細胞培養物から回収するステップであって、少なくとも1つのフィルター、より好ましくは、2つのフィルターを通す精密濾過を好ましくは含む分離ステップを介して、細胞破砕物を、組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造から分離することが好ましく、少なくとも1つのフィルターが、好ましくは、組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造より大きな小孔サイズを有し、特に、約0.1μm〜約4μmの小孔サイズを有するステップと
を含む手順により得られる、本明細書で記載および特許請求される方法に関する。
別の態様では、本発明は、分離ステップが、
・約2μm〜約4μmの小孔サイズを有する、少なくとも1つのフィルターを通す精密濾過、および/または
・約0.1μm〜約0.8μmの小孔サイズを有する、少なくとも1つのフィルターを通す精密濾過
を含むか、またはこれらからなる、本明細書で記載および特許請求される方法に関する。
別の態様では、本発明は、前記第1の液体が、細胞培養培地の一部を含むか、または細胞培養培地からなり、細胞培養培地が、好ましくは、昆虫細胞培養培地である、本明細書で記載および特許請求される方法に関する。
・好ましくは、配列番号1、配列番号2、および/または配列番号5〜16の配列と、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、少なくとも99.1%、少なくとも99.2%、少なくとも99.3%、少なくとも99.4%、少なくとも99.5%、少なくとも99.6%、少なくとも99.7%、少なくとも99.8%、少なくとも99.9%、または100%の配列同一性を有する配列を含むか、またはこれからなるPPV VP2タンパク質
からなる群から選択される、本明細書で記載および特許請求される方法に関する。
別の態様では、本発明は、複数の前記組換えタンパク質から構成される前記四次構造が、ウイルス様粒子であるか、または複数の前記組換えタンパク質から構成される前記四次構造が、ホモ三量体である、本明細書で記載および特許請求される方法に関する。
別の態様では、本発明は、ベクターが、組換えウイルス、好ましくは、バキュロウイルスであり、かつ/または核酸配列が、DNA配列である、本明細書で記載および特許請求される方法に関する。
別の態様では、本発明は、ステップ(iii)で、前記組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される前記四次構造を、第2の液体で、少なくとも2回、好ましくは、2回〜3回にわたり洗浄し、任意選択で、ステップ(i)の混合物中の、前記組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される前記四次構造の元の体積と比較して、最終的に濃縮する、本明細書で記載および特許請求される方法に関する。より好ましくは、ステップ(iii)で、このような洗浄ステップ、すなわち、透析濾過の工程を、例えば、4℃〜29℃の間の温度、例えば、27℃または4℃など、37℃より低い温度で、より好ましくは、30℃より低い温度で、なおより好ましくは、20℃より低い温度で、なおより好ましくは、10℃より低い温度で実施し、これにより、沈殿(凝集)度を、著明に低減する。
フィルターは、当技術分野における、従来の任意のフィルターでありうる。好ましくは、前記フィルターは、半透膜を含む。さらなる、好ましい形態では、前記半透膜は、組換えタンパク質より小さい平均小孔サイズを有して、これにより、前記組換えタンパク質のうちの少なくとも90%の、前記半透膜孔を通した通過を防止し、フィルターにより、組換えタンパク質を引き留める。
記載される方法のうちのいずれかにおいて使用される、好ましい第2の液体は、緩衝液、好ましくは、生理学的に許容される緩衝液であり、生理食塩液が、特に、好ましい。
別の態様では、本発明は、第2の液体が、緩衝液、好ましくは、洗浄用リン酸緩衝生理食塩液(WPBS)である、本明細書で記載および特許請求される方法に関する。
濃縮ステップと液体添加ステップとは、逐次的に実施する場合、ステップの順序は、問題とならない。例えば、さらなる態様では、液体添加ステップが、前記濃縮ステップの前になされ、代替的な態様では、濃縮ステップが、前記液体添加ステップの前になされる。液体添加ステップおよび濃縮ステップは、それらが実施される順序に関わらず、複数回にわたり実施することができる。例えば、これらのそれぞれのステップの各々は、少なくとも2回、少なくとも3回、少なくとも4回、少なくとも5回、少なくとも10回、所望される最大の回数にわたり実施することができる。一態様では、濃縮ステップおよび液体添加ステップは各々、少なくとも2回にわたり実施される。別の態様では、濃縮ステップおよび液体添加ステップは各々、少なくとも3回にわたり実施される。
別の態様では、本発明は、ステップ(ii)で添加される第2の液体の容量が、およそ、ステップ(iii)で除去される第1の液体および/または第2の液体の容量である本明細書で記載および特許請求される方法に関する。言い換えれば、濃縮ステップは、実施および/または要求されない。
組換えポックスウイルス、アデノウイルス、またはバキュロウイルスなどのウイルスベクターを使用して、組換えタンパク質を作製する場合、適切な不活化処置により、ウイルス核酸を不活化させることが推奨される。このような不活化は、組換えタンパク質の精製中のいかなる時点でもなされうる。したがって、不活化は、組換えタンパク質を含む細胞培養液の採取の直後になされる場合もあり、精密濾過を行う場合は、組換えタンパク質の精密濾過の後でなされる場合もあり、精製ステップを行う場合は、この前に、またはこの後で、例えば、ゲル濾過の前に、またはこの後であり、アニオン交換クロマトグラフィーの前に、またはこの後でなされる場合もある。
別の態様では、本発明は、不活化剤が、アジリジン化合物、好ましくは、バイナリーエチレンイミン(BEI)であり、かつ/または不活化剤が、ベクターと比べモル過剰量で添加される、本明細書で記載および特許請求される方法に関する。
別の態様では、本発明は、ステップ(v)の後で残存する混合物を、薬学的に許容される担体、アジュバント、希釈剤、賦形剤、およびこれらの組合せからなる群から選択される、さらなる成分と混合するステップをさらに含む、本明細書で記載および特許請求される方法に関する。
別の態様では、本発明は、生ウイルスを、免疫原性組成物と、2時間またはこれを超える時間にわたり混合する場合に、前記方法から得られた混合物の殺ウイルス活性が、前記方法を経なかった混合物と比較して、少なくとも10%低減され、かつ/または前記方法により作製された免疫原性組成物が、生ウイルス1mL当たり1log TCID50未満の喪失を引き起こす、本明細書で記載および特許請求される方法に関する。
別の態様では、本発明は、ステップ(v)の後で残存する、組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造を採取するステップ(vi)をさらに含み、特に、クロマトグラフィー手順、好ましくは、サイズ除外クロマトグラフィーにより、組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造を含む採取物を精製するステップをさらに含む、本明細書で記載および特許請求される方法に関する。
別の態様では、本発明は、(精製された)採取された組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造を、少なくとも1つのさらなる抗原と組み合わせるステップをさらに含む、本明細書で記載および特許請求される方法に関する。
別の態様では、本発明は、少なくとも1つのさらなる抗原が、ブタ繁殖呼吸障害症候群(PRRS)ウイルスである、本明細書で記載および特許請求される方法に関する。
本明細書で使用される「〜を採取すること」または「〜を採取する」とは、組換えタンパク質を回収すること(collectingまたはrecovering)を指す。当技術分野で公知である、従来の任意の方法を使用して、組換えタンパク質を、本発明の方法および組成物を伴う使用のために作製するか、または組換えタンパク質が、本明細書で記載される方法を経るときに、組換えタンパク質を回収することができる。特に好ましい採取方式では、前記第1の液体の一部を、前記組換えタンパク質から、濾過ステップを介して除去し、組換えタンパク質を、フィルター残留物から回収または採取する。より好ましい形態では、組換えタンパク質を、本明細書で記載される小孔サイズを有する半透膜の残留物から採取または回収する。
本明細書で提示される方法を経た後で、好ましくは、フィルター残留物から採取された後で残存する組換えタンパク質を、薬学的に許容される担体、アジュバント、希釈剤、賦形剤、およびこれらの組合せからなる群から選択される、さらなる成分と混合する。好ましくは、前記さらなる成分は、アジュバントであり、なおより好ましくは、前記アジュバントは、アクリル酸またはメタクリル酸のポリマーであり、さらにより好ましくは、前記アジュバントは、カルボマーである。
本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」および「獣医学的に許容される担体」は、任意かつ全ての溶媒、分散媒、コーティング、安定化剤、希釈剤、防腐剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤、吸着遅延剤などを含む。
本明細書で使用される「防腐剤」とは、例えば、ゲンタマイシン、メルチオレートなどの抗微生物活性剤を指す。特に、防腐剤の添加は、複数回投与用組成物の調製に最も好ましい。これらの抗微生物的活性の薬剤を、目的の組成物を、任意の微生物汚染について防止するか、または目的の組成物中の任意の微生物増殖を阻害するのに有効な濃度で添加する。
別の態様では、本発明は、本明細書で記載および特許請求される方法により得られる免疫原性組成物に関する。
さらなる態様では、本明細書の方法により作製される免疫原性組成物を含有する組換えタンパク質の殺ウイルス活性は、前記作製法を経なかった免疫原性組成物を含有する組換えタンパク質と比較して、少なくとも10%低減される。より好ましくは、免疫原性組成物を含有する組換えタンパク質の殺ウイルス活性は、前記作製法を経なかった免疫原性組成物を含有する組換えタンパク質と比較して、少なくとも50%低減される。さらにより好ましくは、免疫原性組成物を含有する組換えタンパク質の殺ウイルス活性は、前記作製法を経なかった免疫原性組成物を含有する組換えタンパク質と比較して、少なくとも70%低減される。なおさらにより好ましくは、免疫原性組成物を含有する組換えタンパク質の殺ウイルス活性は、前記作製法を経なかった免疫原性組成物を含有する組換えタンパク質と比較して、少なくとも90%低減される。
加えて、本明細書で使用される「免疫原性の増大または免疫原性の改善」という用語は、目的の抗原を含む免疫原性組成物により引き起こされる免疫応答が、この免疫応答が、細胞媒介性免疫応答であれ、かつ/または抗体媒介性免疫応答であれ、異なる抗原または異なる純度の抗原を含む基準免疫原性組成物と比較して増大することを意味する。好ましい実施形態により、免疫原性の増大または免疫原性の改善という用語は、目的の抗原を含む免疫原性組成物により誘発される抗体媒介性免疫応答が、異なる抗原または異なる純度の抗原を含む基準免疫原性組成物と比較して増大することを意味する。この点で、抗体媒介性免疫応答は、目的の抗原に対して特異的な抗体の産生が、異なる抗原または異なる純度の抗原を含む基準免疫原性組成物により誘発される、抗体の産生と比較して増大することを意味する。
「免疫原性組成物」という用語は、宿主において、目的の抗原に対する細胞媒介性免疫応答および/または抗体媒介性免疫応答を誘発する、少なくとも1つの抗原を含む組成物を意味するがこれらに限定されない。通例、「免疫応答」は、以下の効果:目的の組成物またはワクチンに含まれる、1つまたは複数の抗原を特異的に指向する、抗体、B細胞、ヘルパーT細胞、サプレッサーT細胞、ならびに/または細胞傷害性T細胞および/もしくはガンマ−デルタT細胞の産生または活性化のうちの1つまたは複数を含むがこれらに限定されない。宿主は、新たな感染への抵抗性を増強し、かつ/または疾患の臨床重症度を軽減するように、治療的免疫応答または防御的免疫応答を提示することが好ましいであろう。このような場合、免疫原性組成物は、「ワクチン」である。このような保護は、感染した宿主により通常提示される症状の軽減もしくは欠如、迅速な回復時間、および/または感染した宿主におけるウイルス力価の低下により裏付けられるであろう。
本発明の目的のための「生」ウイルスまたは「生」細菌とは、宿主における複製が可能なウイルスまたは細菌を指す。本発明の、好ましい生ウイルスおよび好ましい生細菌は、それぞれ、PRRSウイルスおよびMycoplasma hyopneumoniae菌である。しかし、生ウイルスまたは生細菌という用語は、それぞれ、PRRSおよびMycoplasma hyopneumoniaeに限定されない。
別の態様では、本発明は、弱毒化生ウイルスが、ブタ繁殖呼吸障害症候群(PRRS)ウイルスである、本明細書で記載および特許請求される免疫原性組成物に関する。
別の態様では、本発明は、免疫原性組成物の1回の投与の後で、PRRSウイルスに対する防御的免疫応答を誘導する、本明細書で記載および特許請求される免疫原性組成物に関する。
別の態様では、本発明は、弱毒化生ウイルス、好ましくは、弱毒化PRRSウイルス、および弱毒化生細菌からなる群から選択される、少なくとも1つのさらなる抗原を含有する、少なくとも1つのさらなる容器をさらに含む、本明細書で記載および特許請求されるキットに関する。
別の態様では、本発明は、医薬、好ましくは、ワクチンとしての使用のための、本明細書で記載および特許請求される免疫原性組成物に関する。
「臨床徴候の発生率の低減または重症度の軽減」という用語は、いずれの動物も、ワクチン中の免疫学的有効成分が由来する病原体に感染するか、またはこれで抗原投与されており、対照群が、ワクチンまたは免疫原性組成物の投与を施されていない場合に、このような徴候のうちのいずれかが、ワクチンの投与を施される動物の発生率または重症度において、「対照群」の動物と比較して低減されることを意味するものとする。この文脈では、「減少」または「軽減」という用語は、ワクチン接種群における、ワクチン接種されていない対照群と比較した、少なくとも10%、好ましくは、25%、なおより好ましくは、50%、最も好ましくは、100%を超える軽減を意味する。
本明細書で使用される「防御的免疫応答」とは、最上で、このような徴候または症状の完全な防止であり、これを含む、目的の病原体に由来する感染の、臨床的、病理学的、または組織病理学的な徴候または症状の、発生率の低減または重症度の低減を指す。
「病理学的徴候」という用語は、顕微鏡的または分子的レベルで、生化学的試験を介して、または剖検時の肉眼により観察可能な感染の徴候を指すものとする。
「組織病理学的徴候」という用語は、感染から生じる組織変化の徴候を指すものとする。
「臨床症状」または「臨床徴候」という用語については、上記で規定されている。
1.組換えタンパク質を含む免疫原性組成物を作製する方法であって、以下の順序で、
(i)・第1の液体、
・組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造、ならびに
・前記組換えタンパク質をコードする核酸配列を含むベクター
を含む混合物を用意する/得るステップと;
(ii)第2の液体を、ステップ(i)の混合物へと添加するステップであって、第2の液体が、第1の液体と異なるステップと;
(iii)さらなる第2の液体を、ステップ(ii)から得られる混合物へと、さらに添加し、第1の液体および/または第2の液体の一部を、このような、組み合わされた混合物から除去することにより、混合物中の、組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造を洗浄し、任意選択で、これを最終的に濃縮するステップと;
(iv)不活化剤を、ステップ(iii)から得られる混合物へと添加することにより、ベクターを不活化させるステップと;
(v)中和剤を、ステップ(iv)から得られる混合物へと添加することにより、不活化剤を中和するステップと
を含む方法。
(a)培養物中の感受性の細胞への、前記組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造をコードする核酸配列を含むベクターの感染を可能とするステップであって、前記組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造を、前記ベクターにより発現させるステップと、
(b)その後、組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造を、細胞培養物から回収するステップであって、少なくとも1つのフィルター、好ましくは、2つのフィルターを通す精密濾過を好ましくは含む分離ステップを介して、細胞破砕物を、組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造から分離することが好ましく、少なくとも1つのフィルターが、好ましくは、組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造より大きな小孔サイズを有し、特に、約0.1μm〜約4μmの小孔サイズを有するステップと
を含む手順により得られる、条項1の方法。
4.分離ステップが、
・約2μm〜約4μmの小孔サイズを有する、少なくとも1つのフィルターを通す精密濾過、および/または
・約0.1μm〜約0.8μmの小孔サイズを有する、少なくとも1つのフィルターを通す精密濾過
を含むか、またはこれらからなる、条項2または3の方法。
5.前記第1の液体が、細胞培養培地の一部を含むか、または細胞培養培地からなり、細胞培養培地が、好ましくは、昆虫細胞培養培地である、条項1〜4のうちのいずれか1項の方法。
6.前記組換えタンパク質が、
・好ましくは、配列番号1、配列番号2、および/または配列番号5〜16の配列と、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、少なくとも99.1%、少なくとも99.2%、少なくとも99.3%、少なくとも99.4%、少なくとも99.5%、少なくとも99.6%、少なくとも99.7%、少なくとも99.8%、少なくとも99.9%、または100%の配列同一性を有する配列を含むか、またはこれからなるPPV VP2タンパク質
からなる群から選択される、条項1〜5のうちのいずれか1項の方法。
8.ベクターが、組換えウイルス、好ましくは、バキュロウイルスであり、かつ/または核酸配列が、DNA配列である、条項1〜7のうちのいずれか1項の方法。
9.前記組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造をコードする核酸を含むベクターが、組換えバキュロウイルスであり、前記バキュロウイルスが、前記組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造をコードするDNA配列を含む、条項1〜8のうちのいずれか1項の方法。
10.ステップ(iii)で、前記組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される前記四次構造を、第2の液体で、少なくとも2回、好ましくは、2回〜3回にわたり洗浄し、任意選択で、ステップ(i)の混合物中の、前記組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される前記四次構造の元の体積と比較して、最終的に濃縮する、条項1〜9のうちのいずれか1項の方法。
12.ステップ(iii)で、第1の液体および/または第2の液体の一部を、混合物から、濾過により除去し、好ましくは、前記組換えタンパク質、および/もしくは複数の前記組換えタンパク質から構成される前記四次構造より小さい平均小孔サイズを有する半透膜を含むフィルターもしくは中空フィルターを用い、かつ/または20kDa〜500kDaのサイズのタンパク質の大部分、好ましくは、実質的に全ての、半透膜を通した通過を防止する、条項1〜11のうちのいずれか1項の方法。
14.ステップ(ii)で添加される第2の液体の容量が、およそ、ステップ(iii)で除去される第1の液体および/または第2の液体の容量である、すなわち、濃縮ステップを、実施および/または要求しない、条項1〜13のうちのいずれか1項の方法。
15.不活化剤が、アジリジン化合物、好ましくは、バイナリーエチレンイミン(BEI)であり、かつ/または不活化剤が、ベクターと比べモル過剰量で添加される、条項1〜14のうちのいずれか1項の方法。
16.中和剤が、チオ硫酸ナトリウムであり、かつ/または中和剤が、不活化剤と比べモル過剰量で添加される、条項1〜15のうちのいずれか1項の方法。
17.ステップ(v)の後で残存する混合物を、薬学的に許容される担体、アジュバント、希釈剤、賦形剤、およびこれらの組合せからなる群から選択される、さらなる成分と混合するステップをさらに含む、条項1〜16のうちのいずれか1項の方法。
18.生ウイルスを、免疫原性組成物と、2時間またはこれを超える時間にわたり混合する場合に、前記方法から得られた混合物の殺ウイルス活性が、前記方法を経なかった混合物と比較して、少なくとも10%低減され、かつ/または前記方法により作製された免疫原性組成物が、生ウイルス1mL当たり1log TCID50未満の喪失を引き起こす、条項1〜17のうちのいずれか1項による方法。
20.ステップ(v)の後で残存する、組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造を採取するステップ(vi)をさらに含み、特に、クロマトグラフィー手順、好ましくは、サイズ除外クロマトグラフィーにより、組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造を含む採取物を精製するステップをさらに含む、条項1〜19のうちのいずれか1項による方法。
21.(精製された)採取された組換えタンパク質、および/または複数の前記組換えタンパク質から構成される四次構造を、少なくとも1つのさらなる抗原と組み合わせるステップをさらに含む、条項1〜20のうちのいずれか1項による方法。
22.少なくとも1つのさらなる抗原が、ブタ繁殖呼吸障害症候群(PRRS)ウイルスである、条項21による方法。
23.条項1〜22のうちのいずれか1項による方法により得られる免疫原性組成物。
24.免疫原性組成物が、弱毒化生ウイルス、好ましくは、弱毒化ブタ繁殖呼吸障害症候群(PRRS)ウイルス、または弱毒化生細菌をさらに含む、条項23による免疫原性組成物。
25.弱毒化生ウイルスが、ブタ繁殖呼吸障害症候群(PRRS)ウイルスである、条項23または24による免疫原性組成物。
26.免疫原性組成物の1回の投与の後で、病原体、好ましくは、病原体を含むこと条項6による組換えタンパク質に対する防御的免疫応答を誘導する、条項23〜25のうちのいずれか1項による免疫原性組成物。
28.条項23〜27のうちのいずれか1項による免疫原性組成物を含有する容器を含むキット。
29.弱毒化生ウイルス、好ましくは、弱毒化PRRSウイルス、および弱毒化生細菌からなる群から選択される、少なくとも1つのさらなる抗原を含有する、少なくとも1つのさらなる容器をさらに含む、条項28によるキット。
30.医薬、好ましくは、ワクチンとしての使用のための、条項23〜29のうちのいずれか1項による免疫原性組成物。
31.動物における、病原体感染の、1つまたは複数の臨床症状を、前記免疫原性組成物を施されない動物と比較して軽減する方法における使用のための、条項23〜29のうちのいずれか1項による免疫原性組成物、および/または条項28または29によるキット。
ブタパルボウイルス(PPV)27a VP2の作製(前段加工)
PPV 27a VP2を、バキュロウイルスを感染させたSF+細胞内で作製し、PCV2 ORF2(WO2006/072065;実施例1〜3)の工程とほぼ同様の工程で、BEIにより不活化させる。しかし、PPV 27a VP2は、「DiamondBac」(Sigma Aldrich、D6192)(PCV2 ORF2のために使用された、旧型のBaculoGold骨格に代わる)と称する、異なるバキュロウイルス骨格を使用する。
ブタパルボウイルス(PPV)27a VP2の作製(後段加工)
後段の加工を含む、2つの連続ステップに従った。「清明化」として公知の工程で、細胞破砕物の除去を行う一方、2倍容量の洗浄用リン酸緩衝生理食塩液(WPBS)を介する、培地成分の除去であって、「透析濾過」と呼ばれる除去を達成する。
PPV 27a VP2バキュロウイルスベクターは、バイオリアクター内で作製する。培地を、あらかじめ滅菌処理するか、または滅菌濾過して、バイオリアクターへと添加する。培地は、拡大培地に由来するSF+細胞と共に添加する。PPV 27a VP2バキュロウイルスの種ウイルスを播種すると同時に、細胞に接種する(共時的感染)。ウイルス繁殖を通して、温度を、27±2℃に維持し、pHをモニタリングする。溶存酸素(DO)は、清浄化圧縮空気および酸素(O2)をスパージングすることにより制御する。ウイルス感染の6〜8日後の間を採取時とし、細胞生存率≦20%の採取基準を達成した。採取時に、小孔サイズを2.0〜4.0μmとするプレフィルターおよび小孔サイズを0.1〜0.8μmとする最終フィルターの、2セットのフィルターを使用して、PPV 27a VP2抗原液を清明化させる。濾過された採取液を、タンク内に回収する。
表1A:2連番のReproCyc PRRS EU(登録商標)である、バッチ番号:3910003A(投与10回分)および3910004A(投与50回分)を、研究のために使用するまで、パッケージング材料内、5℃±3℃で保管した。2連番のPPV 27a VP2である、バッチ番号:7600016A(投与10回分)および7600018B(投与50回分)を、それぞれ、Ingelvac ReproCyc(登録商標)PRRS EUのバッチ3910003A(投与10回分)および3910004A(投与50回分)のための希釈剤として使用した。これらの2つのバッチを、研究のために使用するまで、パッケージング材料内、5℃±3℃で保管した。復元(群1におけるCarbopol含有希釈剤中の復元、または群2における液体ワクチンPPV 27a VP2中の復元)の後、ReproCyc(登録商標)PRRS EUワクチンを、室温(15〜25℃)において、最長で8時間にわたり保管し、0、2、4、および8時間後において、力価について調べた。下記の表1Aにおける、ウイルス滴定(用量2mL当たりのLog10 TCID50)の、T0、T2、T4、およびT8における、群1の結果は、ウイルスの安定性を、最長で8時間にわたり裏付けた。T0、T2、T4、およびT8における、関連する生成物についてのウイルス滴定(用量2mL当たりのLog10 TCID50)についての、群2の結果は、PPV 27a VP2ワクチンが、最大で8時間にわたり、ReproCyc(登録商標)PPRS EUに対する殺ウイルス活性を有さないことを裏付けた。
PRRSV−EUワクチンを、PPV VP2ワクチンと混合する場合の、PRRSV−EUワクチンの有効性
36匹の妊娠していない、繁殖適齢期の、未経産ブタを、各群が12匹ずつの未経産ブタを含む、3つの処置群へと無作為化した。群T01には、0日目および21日目(D0、D21)において、WPBS(洗浄リン酸緩衝生理食塩液)による対照生成物(対照)を施した。群T02には、0日目に、投与1回当たり3.9 log10 TCID50のReproCyc(登録商標)PRRS EU(PRRS株94881)と、ブタパルボウイルスワクチンである、投与1回当たり10μgのPPV−27a VP2(混合)を施し、21日目に、投与1回当たり10μgのPPV−27a VP2だけを施した。乾燥凍結ケーキとしてのReproCyc(登録商標)PRRS EUを、液体のPPV−27a VP2により復元した。群T03には、0日目において、ReproCyc(登録商標)PRRS EU(単独)を施した。未経産ブタに、最小免疫化用量のReproCyc(登録商標)PRRS EUおよび最大相対効力のPPV−27a VP2が施されるように、処置を決定した。初回ワクチン接種の4週間後(28日目)、未経産ブタに、総用量6mL(2mLの筋内および鼻腔1つ当たり2mLずつ)当たり5.5 log10 TCID50の異種PRRSV EU分離株190136で抗原投与し、血清試料を、以下の日数後:31日目、35日目、38日目、42日目、および49日目に回収した。定量的PCR(qPCR)により、PRRSVウイルス血について調べた[Sandra Revilla-Fernandez et al., Journal of Virological Methods 126 (2005) 21-30]。抗原投与用ウイルスである、欧州PRRSウイルス分離株190136は、元は、2004年4月、ドイツ、ニーダーザクセンにおける蔓延時の、PRRSVに典型的な生殖徴候(雌ブタにおける流産および新生仔子豚における虚弱)を示す農場に由来する新生仔子豚の肺組織から得られた。主治獣医は、診断試験のために、肺試料を、BioScreenへと送付した(試料は、2004年4月21日に受領された)。抗原投与用ウイルスは、抗原投与の前に、AK−MA104細胞内で繁殖させ、2代にわたり継代した。
PRRSV−EUワクチンを、PPV VP2ワクチンと混合する場合の、PPV VP2ワクチンの有効性
組合せワクチンの有効性についての評価:実験によるPPV感染に対する、両方のワクチン[ReproCyc(登録商標)PRRS EU(PRRS株94881)およびPPV−27a VP2]の併用の有効性について査定する。
PPV野生株による抗原投与実験に対する有効性:PPVに対する組合せワクチンの有効性について、胎仔におけるPPV感染に基づき査定する。各処置群内の胎仔のうちの≧80%が、PPVについて血清反応陰性であれば、ワクチンは、効果的であると考えられる。
動物愛護:動物は、研究を開始する前に、良好な健康状態および栄養状態にある。組入れおよび無作為化手順の前に、健康検査を行う。研究期間を通して、医薬部外飼料を使用する。飼料補給量は、施設の標準業務手順書に従い、被験動物の週齢、状態、および種に適切である。水は、研究を通して、不断補給される。
ワクチン接種を、交配の3週間前に完了させる場合、単独のPPVワクチンまたはReproCyc(登録商標)PRRS EUと混合されたPPVワクチンによるワクチン接種は、安全かつ効果的であることが結論づけられる。
サブユニットPPVワクチンの調製
German PPV 27a分離株に基づき、PPV VP2抗原を、バキュロウイルスを感染させた昆虫細胞内で発現させるために選択する。ブタパルボウイルス(PPV)27a VP2のヌクレオチド配列は、Genbank受託番号:AY684871.1から得る。PPV 27a VP2コード領域を、逆翻訳し、Drosophila属について、コドンを最適化させる(配列番号4および配列番号3)。コドンを最適化させたPPV 27a VP2遺伝子は、Integrated DNA Technologiesにおいて化学合成する。次いで、PPV 27a遺伝子を、バキュロウイルス移入ベクターであるpVL1393へとサブクローニングし、直鎖化されたバキュロウイルスDiamondBac(登録商標)骨格と共に、Sf9昆虫細胞へと共トランスフェクトして、ポリヘドリンプロモーターの制御下で、PPV 27a VP2遺伝子を含有する組換えバキュロウイルスを作出する。
Sf9昆虫細胞内で発現させたところ、PPV VP2は、非エンベロープVLPへと自己組織化された(データは示さない)。
PPV VP2抗原は、カルボマー(Carbopol)でアジュバント処理する。
PPVワクチンについての概念実証研究
全ての動物研究において、動物は、研究を開始する前に、良好な健康状態および栄養状態にある。無作為化手順の前に、健康検査を行う。研究期間を通して、医薬部外飼料を使用する。飼料補給量は、施設の標準業務手順書に従い、被験動物の週齢、状態、および種に適切である。水は、研究を通して、不断補給される。
このワクチン接種−抗原投与研究の目的は、繁殖前におけるブタパルボウイルス(PPV)サブユニットワクチン(実施例5を参照されたい)について、概念実証的な、用量決定有効性を確立することである。強毒性生PPV分離株(PPV 002346−5;北米株)による抗原投与前の、妊娠約40日目(dG)において、未経産ブタにワクチン接種し、これらを繁殖させた。約90dGにおいて、胎仔を、PPV感染について査定する。
全ての未経産ブタは、0日目、73日目(データは示さない)、および80日目の抗原投与の前において、PPVウイルス血について陰性である(表4)。全ての陰性対照は、87日目において、ウイルス血性であり、7例中4例は、94日目において、ウイルス血性である。
ワクチン接種後、T3の未経産ブタは、追加ワクチン接種の後、セロコンバージョンする。T2は、初回ワクチン接種に対して、血清学的応答を示し、追加ワクチン接種の後、血清反応陽性を維持する。T1の対照未経産ブタは、抗原投与まで、PPVについて血清学的に陰性を維持する。抗原投与後の、全ての陰性対照未経産ブタは、87日目(抗原投与の7日後)に、ウイルス血性である。1例のT3未経産ブタは、87日目に、ウイルス血性である。他の全ての未経産ブタは、これらの時点において、ウイルス血性ではない(表4を参照されたい)。
NTX胎仔の全ては、80日目の剖検において、正常であると考えられる(表5)。129および130日目の最終的な剖検において、T1(陰性対照)胎仔のうちの22.5%が、正常であるのに対し、T3における胎仔のうちの98.39%、およびT2における胎仔のうちの97.62%が、正常である。T1(陰性対照)胎仔の平均サイズおよび平均体重が、それぞれ、11.5cmおよび168.8gであるのに対し、T2における、胎仔の平均サイズおよび平均体重は、それぞれ、17.5cmおよび590.1gである。
全てのT4(NTX)胎仔は、胸部洗浄液試料に対するPCRにより決定される通り、PPV陰性である(表3を参照されたい)。PPV感染は、T1の陰性対照胎仔80例中67例(83.75%)において確認される。PPVに感染していることが確認された、陰性対照胎仔67例中62例は、ミイラ体である。これに対し、PPV感染は、T2胎仔中0.79%だけで確認される。
PPVワクチンの最小免疫化用量の確立(異種US PPV株に対する保護)
このワクチン接種−抗原投与研究の目的は、ブタパルボウイルス(PPV)ワクチンの最小免疫化用量(MID)を確立することである。未経産ブタに、妊娠約40日目(dG)において、強毒性生PPV血清型1分離株(PPV 002346−5)により抗原投与する。抗原投与の後で、ワクチン接種群内の胎仔のうちの≧80%が、PPVについて陰性であれば、ワクチンは、効果的であると考えられる。補助パラメータは、胎仔のサイズ、体重、および状態、未経産ブタの抗原投与後におけるウイルス血状態および未経産ブタの血清学的状態を含む。
未経産ブタ(生殖疾患の既往歴またはPPVに対するワクチン接種を伴わない)を、処置群:T01陰性対照(製品に対応するプラセボ(PMP))およびT02=用量2mL当たり1.0μgのPPVへと無作為化する。処置/抗原投与されていない(NTX)未経産ブタを、全般的健康状態についての対照としての囲いへと、無作為に割りつける。
動物は、ワクチン接種の24時間後または48時間後における異常な体温、ワクチンに帰せられる異常な局所反応、およびワクチン接種に関連する臨床徴候を示さないので、ワクチンは、安全であると考えられる(データは示さない)。
全ての未経産ブタは、74日目および80日目の抗原投与の前、ワクチン接種の前において、PPVウイルス血について陰性である。したがって、ワクチン接種後において、ワクチン投与に関連する臨床徴候は、観察されない。88日目において、10例全てのT01未経産ブタは、ウイルス血性であり、ワクチン接種された、全ての未経産ブタは、陰性である。95日目、102日目、および127日目における、全ての他の血液試料は、全ての処置群で、PPVウイルス血について陰性である(表6)。
128日目および129日目の最終的な剖検において、T01(陰性対照)胎仔のうちの38%が、正常状態であるのに対し、ワクチン群における胎仔のうちの95%が、正常状態である。T01(陰性対照)胎仔の平均サイズおよび平均体重が、それぞれ、14.4cmおよび245.9gであるのに対し、ワクチン接種された母体に由来する胎仔の平均サイズおよび体重は、それぞれ、19.3cmおよび550gである(表7)。したがって、欧州薬局方第01/2008:0965条により確立された、PPVの有効性についての最終パラメータは、処置群内の>80%の胎仔が、PPVについて陰性でなければならないことであるので、ワクチン群は、PPVによる感染からの防御についての基準を満たす。
結論:本発明のPPV VP2サブユニットワクチンは、強毒性異種PPVの抗原投与の後における胎仔の保護を示す。本研究結果は、1μgのPPV VP2サブユニットワクチンだけを使用する場合に、ワクチンが、安全であり、かつ、未経産ブタにおけるウイルス血および胎仔におけるPPV感染を防止するのに効果的であることを明らかにする。さらに、ワクチンが、異種北米抗原投与株に対して防御することも示されている。
PPVワクチンの最小免疫化用量の確立(異種EU PPV株に対する保護)
本研究の目的は、ブタパルボウイルスワクチン(本実施例の後続では、PPVワクチンと呼ばれる、PPV VP2)の免疫の発生について査定することである。加えて、無作為化、盲検、陰性対照ワクチン接種−抗原投与研究デザインを使用して、安全性および有効性についても査定する。
未経産ブタを、無作為に、3つの群へと割りつける。群1および2では、未経産ブタに、3週間間隔で、2回にわたり(0日目および21日目に)ワクチン接種する。2回目の投与は、交配の3週間前に施す。全ての処置を、2mLの容量で、筋内(IM)経路により投与する。群2に、PPVワクチンを施す一方、群1は、対照生成物としての滅菌希釈剤を施されるプラセボ群であり、群3は、いかなる処置も伴わない、厳密対照として用いられる。
妊娠の約90日目である、132〜135日目に、未経産ブタを、安楽死させ、剖検し、胎仔を査定した。
全ての動物は、ワクチン接種前の、−6日目および−1日目において、PCRにより、PPVについて陰性であり、組入れ基準を満たす。ワクチン接種後、抗原投与まで、厳密対照生成物群および対照生成物群の全ての動物は、PPV抗原について陰性であり、したがって、抗原投与前のPPV感染は、除外することができる。
90日目(抗原投与の7日後)に既に、ワクチン接種されていない対照動物のうちの95%は、PPVについて陽性である。97日目には、これらの動物のうちの60%が、なおも、陽性結果を有するが、104日目に、全ての動物は、検査結果が、PPVについて陰性である。これに対し、ワクチン接種群では、90日目、97日目、または104日目における、全ての被験動物は、PPVについて陰性である。
全ての胎仔を、それらの状態について査定し、3つの類別:正常、ミイラ化、および自己分解へと割り当てた。
ミイラ化胎仔および自己分解胎仔の大部分は、対照群において見出される。この群の胎仔のうち、わずかに39.8%が正常状態であるのに対し、ワクチン接種群(PPV群)では、胎仔のうちの97.4%が、正常状態を有する(表11を参照されたい)。
結論:本発明のPPVワクチンは、強毒性異種PPVの抗原投与の後における胎仔の保護を示すことから、1μgのワクチンだけを使用する場合に、ワクチンが、胎仔において、安全であり、かつ、ウイルス血およびPPV感染を防止するのに効果的であることが指し示される。さらに、ワクチンがまた、PPVの異種欧州抗原投与株に対して防御することも示されている。したがって、ワクチンは、異種北米抗原投与株ならびに異種欧州抗原投与株に対して防御するので、広範な保護スペクトルを有する。
繁殖適齢期未経産ブタにおける、PPVサブユニットによる、Erysipelothrix rhusiopathiaeおよび/またはブタ繁殖呼吸障害症候群ウイルスとの組合せワクチンについての、ブタパルボウイルス(PPV)概念実証/ワクチン用量決定
このワクチン接種−抗原投与研究の目的は、Ingelvac(登録商標)PRRSV MLVの、Erysipelothrix rhusiopathiae(Ery)菌ワクチンとの実験的サブユニットブタパルボウイルス(PPV)組合せワクチンとの併用についてのデータを提供し、5〜6カ月齢の未経産ブタにおいて、PPVによる、Ery菌ワクチンとの組合せワクチンの有効性についての概念実証用量決定を確立することである。
67例の未経産ブタは、既に、検査結果が、PPVについて陰性であり、疾患またはワクチン接種についてのPPV既往歴を伴わない群れに由来した。未経産ブタを、3つの囲いへと混在させた、n=9ずつの6つの処置群であって、0日目に、ワクチン接種を施され、21日目に追加接種される処置群:T1:陰性対照、T2:10μgのPPV、T3:0.1μgのPPV+10 logのEry、T4:1.0μgのPPV+10 logのEry、T5:10μgのPPV+10 logのEry、T6:陽性対照(FarrowSure(登録商標)GOLD)へと無作為化した。3例の非処置対照(NTX)の未経産ブタを、囲い1つ当たり1例ずつ組み入れた。加えて、10例の未経産ブタは、別個の建物で飼育し、市販のブタ繁殖呼吸障害症候群(PRRS)ワクチンと組み合わせた場合のPPV有効性について評価するために、T7:Ingelvac(登録商標)PRRSV MLVを再水和させるのに使用される10μgのPPV+10 logのEryを施した。T7は、本実施例9を目的とする群である。
材料:
対照生成物:陰性対照(T1)動物へと投与される対照生成物は、BIVI、St.Joseph MO、USAにおいて、水から精製された注射用水(WFI)を使用して調製された滅菌希釈剤(ロット番号:240)であった。対照生成物は、プラスチック製ボトル内の100mLの容量を充填した提示物として提供された。0日目に、2mLの用量を、右頸部筋肉に適用し、21日目に、2mLの追加用量を、左頸部筋肉に適用した。
抗原投与材料:抗原投与材料は、抗原投与イベントの前に、BIVI−R&D、Ames IAの実験検査技師が調製した。PPV株002346−5は、投与1回当たり5 log10TCID50で、6mLの用量(割当てロット番号:354−021)を目標とし、抗原投与イベント時は、氷上で維持した。抗原投与力価は、4℃で保持された、抗原投与後の残存材料に対するTCID50アッセイにより決定した。抗原投与材料の最終力価は、1mL当たり3.47 logまたは用量6mL当たり4.25 logであった。80日目に、全ての未経産ブタに、右頸部における2mLの筋内に加えた、各鼻腔当たり2mLずつの抗原投与材料を接種した。
剖検および胎仔の査定:79日目に、全てのNTX未経産ブタを、静脈内バルビツール酸系剤の注射により安楽死させ、129日目および130日目に、全ての残存する未経産ブタを安楽死させた。各剖検では、生殖管を摘出し、胎仔を、帝王切開分娩を介して、無菌的に分娩させた。胎仔は、未経産ブタID、次いで、文字(「右子宮角」のRまたは「左子宮角」のL)から構成され、次いで、胎仔が見つかったときの、子宮角分岐部からの番号から構成される胎仔IDにより同定した。胎仔の状態(正常またはミイラ体)、サイズ、および体重を記録した。
胎仔試料の回収:試料の交差汚染を防止するために、剖検時に、かつ、実験室内で、各胎仔および各試料の両方を操作する間に、全ての適切な技法を使用して、作業場および器具を、滅菌処理または清浄化した。試料に、胎仔ID、試料種類、研究日、および回収年月日を表示した。回収日の可能な限り早い時間に、試料を、氷上で、実験検査技師へと搬送した。実験検査技師または指定担当者は、各試料を、適切にサイズ指定され、適切に表示されたチューブへとアリコート分割しながら、交差汚染を防止する適正な技法を使用して、各試料を加工した。1つのアリコートを、ISU−VDLへと提出した。PCRにより、ウイルスの存在を、各試料について測定した。残りのアリコートは、BIVI−R&D、Amesにおいて、−70℃で保管した。
統計学的方法:
実験単位:T1〜T6については、未経産ブタが、実験単位であった。T7との比較を行う場合は、T7の畜舎が他の処置群と別個であることを理解して、飼育室を実験単位とした。
動物数の正当性:欧州薬局方は、ワクチン接種された未経産ブタ少なくとも7例、および対照の未経産ブタ5例に抗原投与することを要求していた(欧州薬局方第01/2008:0965条)。各処置が、未経産ブタの不妊の原因であるのかどうかを問うために、9または10例の未経産ブタを調達した。
盲検化基準:研究を通して、データの収集または実験室アッセイの実施に関与する任意の担当者を、未経産ブタの、処置群T1、T2、T3、T4、T5、およびT6への割付けに対して遮蔽した。T7およびNTXの未経産ブタは、別個に飼育し、血清を、PRRSV抗体について調べたので、これらの2つの群に対しては、担当者を盲検化することができなかった。処置は、データ収集に関与しない人員が投与した。
データ管理:データの統計学的解析は、統計担当者が行った。全てのデータは、管理および解析のために、SAS version 9.2(Cary、USA/North Carolina、SAS Institute Inc.)へとインポートした。
本研究の概要では、Ingelvac(登録商標)PRRSV MLVを再水和させるのに使用される10μgのPPV+10 logのEry群(T7)と比較した、陰性対照(T1)についての比較だけを提示し、T1群、T7群、およびNTX群についてのデータを提示する。
未経産ブタの結果:0日目に、全ての未経産ブタは、ELISAにより、PRRSVについて、血清学的に陰性であった。21日目、80日目、および128日目に、全てのT7未経産ブタは、PRRSVについて、血清反応陽性であった。73日目に、全てのT7未経産ブタは、血清反応陽性であり、全ての他の処置群内の未経産ブタは、血清反応陰性であった。
T7についての幾何平均PPV HI力価は、21日目の追加ワクチン接種の後で、血清反応陽性となり、これを維持したのに対し、T1およびNTX処置についての幾何平均PPV HI力価は、ワクチン接種期において、血清反応陰性(<100)にとどまった。T1およびT7未経産ブタに、PPVで抗原投与した80日目以後、いずれの群も、血清反応陽性であった。
結論として述べると、PRRS MLVを伴う組合せワクチン(10μgのPPV+Ery)は、40dGにおいて、胎仔のウイルス血およびPPV感染を防止するのに効果的であった。
配列番号4は、コドンを最適化させたPPV 27a VP2のヌクレオチド配列であって、グリシンリピートから構成される、VP2コード領域を挟むように、2つのClaI制限酵素部位(アミノ酸25位は、イソロイシン残基であり、アミノ酸36位は、セリン残基であり、アミノ酸37位は、イソロイシン残基である)を有するよう、さらに修飾されたヌクレオチド配列である。しかし、ClaI部位は、VP2コード領域を破壊しない形で導入した。配列番号2は、配列番号4に対応するタンパク質配列である。配列番号3は、コドンを最適化させたPPV 27a VP2のヌクレオチド配列(ClaI制限酵素部位を伴わない)である。配列番号1は、配列番号3に対応するタンパク質配列である。配列番号5〜16は、ClaI部位を伴う(配列番号5〜10)か、またはこれを伴わない(配列番号11〜16)、さらなるPPV VP2タンパク質配列を開示する。配列番号17は、PRRSVレイスタッド野生型配列に対応し、配列番号18は、PRRSVVR2332野生型配列に対応する。
Claims (16)
- a)少なくとも1つのブタパルボウイルス(PPV)抗原であって、前記少なくとも1つのPPV抗原が、1つまたは複数のPPVサブユニットであり、かつ、前記少なくとも1つまたは複数のPPVサブユニットが、PPVウイルスタンパク質2(VP2)であり、好ましくはPPV VP2が、唯一のPPV抗原である、少なくとも1つのPPV抗原と、
b)少なくとも1つのブタ繁殖呼吸障害症候群(PRRS)ウイルス抗原であって、弱毒化生/改変生PRRSウイルスに含有される、任意の抗原である、少なくとも1つのPRRSウイルス抗原と
を含む免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。 - PPVが、弱毒化生/改変生PPV、死滅/不活化PPV、死滅/不活化PPV株014、ブタパルボウイルスのドイツ野生分離株であるPPV−27aおよびPPV−143a、ならびにブタパルボウイルスのワクチンウイルスであるPPV−NADL−2およびPPV−IDT(MSV)からなる群から選択される、請求項1に記載の免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
- PPV VP2が、
・228位のアミノ酸において、グルタミン酸(glutamic acidまたはglutamate)残基を有し、かつ/または
・414位のアミノ酸において、セリン残基を有し、かつ/または
・419位のアミノ酸において、グルタミン残基を有し、かつ/または
・436位のアミノ酸において、トレオニン残基
を有し、
アミノ酸位置の番号付けが、野生型PPV VP2のアミノ酸配列を指す、請求項1または2に記載の免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。 - PPV VP2が、
・25位のアミノ酸において、イソロイシン残基を有し、かつ/または
・36位のアミノ酸において、セリン残基を有し、かつ/または
・37位のアミノ酸において、イソロイシン残基
をさらに有する、請求項3に記載の免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。 - アミノ酸位置の番号付けが、配列番号1に示されるアミノ酸配列を指す、請求項3または4に記載の免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
- PPV VP2が、配列番号1、配列番号2、および/または配列番号5〜16のアミノ酸配列と、少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、請求項1から5までのいずれか1項に記載の免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
- 弱毒化生/改変生PRRSウイルスが、1型遺伝子型弱毒化生/改変生PRRSウイルス、2型遺伝子型弱毒化生/改変生PRRSウイルス、弱毒化生/改変生PRRSウイルス株94881、およびATCC VR2332からなる群から選択される、請求項1から6までのいずれか1項に記載の免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
- 単回投与または2回投与のために製剤化される、請求項1から7までのいずれか1項に記載の免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
- 少なくとも1つの薬学的に許容される担体、好ましくは、カルボマーをさらに含む、請求項1から8までのいずれか1項に記載の免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
- 0.1μg〜50μgのPPV VP2抗原、好ましくは、0.5μg〜10μgのPPV VP2抗原、より好ましくは、1.0μg〜10μgのPPV VP2抗原、および/または3.9〜7.0 log10TCID50の弱毒化生/改変生PRRSウイルスを含む、請求項1から9までのいずれか1項に記載の免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
- 少なくとも1つのブタパルボウイルス(PPV)抗原と、少なくとも1つのブタ繁殖呼吸障害症候群(PRRS)ウイルス抗原とが、単一の容器に併せて含有されるか、または互いと空間的に分離され、好ましくは、2つまたはこれを超える個別の容器に含有される、請求項1から10までのいずれか1項に記載の免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せ。
- 請求項1から11までのいずれか1項に記載の免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せを含むキット。
- 少なくとも1つのブタパルボウイルス(PPV)抗原と、少なくとも1つのブタ繁殖呼吸障害症候群(PRRS)ウイルス抗原とが、2つまたはこれを超える個別の容器に、互いと別々に、好ましくは、いずれも、乾燥凍結形態または凍結形態で、互いと独立に含有され、前記キットが、空間的に分離された少なくとも1つのPPV抗原と、少なくとも1つのPRRSウイルス抗原とを混合するための取扱説明書をさらに含み、好ましくは、このような取扱説明書が、少なくとも1つのPPV抗原を含有する容器の内容物を、少なくとも1つのPPRSウイルス抗原を含有する容器の内容物と組み合わせる指示を含有し、より好ましくは、少なくとも1つのPPV抗原を含有する容器の液体内容物を、少なくとも1つのPPRSウイルス抗原を含有する容器の乾燥凍結内容物のための希釈剤として使用する、請求項12に記載のキット。
- ブタにおける疾患を処置および/もしくは予防するための指示をさらに含み、かつ/またはPPV感染および/もしくはPRRSウイルス感染を処置および/もしくは予防するための指示をさらに含み、好ましくは、本明細書で開示および特許請求され、このようなキットに含有される免疫原性組成物または組合せワクチンまたは組合せのPPV構成要素(好ましくは、分離されたキット構成要素としての)、およびPRRSV構成要素(好ましくは、分離されたキット構成要素としての)の、関連する使用のための指示をさらに含む、請求項12または13に記載のキット。
- 医薬、好ましくは、ワクチンとしての使用のための、請求項1から11までのいずれか1項に記載の免疫原性組成物もしくは組合せワクチンもしくは組合せ、または請求項12から14までのいずれか1項に記載のキット。
- 好ましくは、少なくとも1つのブタパルボウイルス(PPV)抗原と、少なくとも1つのブタ繁殖呼吸障害症候群(PRRS)ウイルス抗原とを、対象へと、同時に、より好ましくは、同じまたは異なる投与部位に、個別に同時に、逐次的に(任意の順序で)、かつ/または時間を前後して投与する、PPVおよび/もしくはPRRSウイルスの感染の処置および/もしくは防止、PPVおよび/もしくはPRRSウイルスの感染により引き起こされる臨床徴候の軽減、防止、もしくは処置、またはPPVおよび/もしくはPRRSウイルスの感染により引き起こされる疾患の処置および/もしくは防止の方法における使用のための、請求項15に記載の免疫原性組成物もしくは組合せワクチンもしくは組合せ。
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