CZ305949B6 - Kukuřičná rostlina PV-ZMGT32(nk) nebo její část, tolerantní ke glyfosfátu, její potomstvo a její semena - Google Patents

Kukuřičná rostlina PV-ZMGT32(nk) nebo její část, tolerantní ke glyfosfátu, její potomstvo a její semena Download PDF

Info

Publication number
CZ305949B6
CZ305949B6 CZ2008-437A CZ2008437A CZ305949B6 CZ 305949 B6 CZ305949 B6 CZ 305949B6 CZ 2008437 A CZ2008437 A CZ 2008437A CZ 305949 B6 CZ305949 B6 CZ 305949B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
dna
seq
maize
sequence
plant
Prior art date
Application number
CZ2008-437A
Other languages
English (en)
Inventor
Carl F. Behr
Gregory R. Heck
Catherine Hironaka
Jinsong You
Original Assignee
Monsanto Technology Llc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27395887&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ305949(B6) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Monsanto Technology Llc filed Critical Monsanto Technology Llc
Publication of CZ305949B6 publication Critical patent/CZ305949B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
    • C12N15/8275—Glyphosate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
    • C12N15/8221—Transit peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/13—Plant traits
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Abstract

Technické řešení se týká kukuřičné rostliny PV ZMGT32(nk603) nebo její části, tolerantní ke glyfosfátu, jejíž genom obsahuje vložený úsek DNA kódující EPSPS, přičemž vložený úsek DNA má 5' a 3' spojení s genomovou DNA kukuřice obsahující Sekv. č. 7 a Sekv. č. 8, a jejího potomstva. Dále se vynález týká kukuřičné rostliny nebo její části, tolerantní ke glyfosfátu, jejíž genom obsahuje vložený úsek DNA kódující EPSPS a Sekv. č. 9, 10, 11 a 12, a jejího potomstva. Vynález se rovněž týká semena kukuřičné rostliny, která má fenotyp tolerantní ke glyfosfátu a obsahuje Sekv. č. 9, 10, 11 a 12. Vzorek semena je uložen v Americké Sbírce „American Type Culture Collection“ (ATCC) pod přístupovým číslem PTA-2478.

Description

Kukuřičná rostlina PV-ZMGT32(nk) nebo její část, tolerantní ke glyfosfátu, její potomstvo a její semena
Oblast techniky
Vynález se týká oblasti molekulární biologie rostlin, konkrétně se vynález týká kukuřičné rostliny nebo její části, která nese toleranci rostlin ke glyfosfátu. Dále se vynález týká potomstva této kukuřičné rostliny a jejích semen.
Dosavadní stav techniky
Vynález se týká rostliny kukuřice (Zea mays) PV-ZMGT32(nk603), tolerantní k herbicidu glyfosfátu a rostlinného expresního konstruktu kukuřičné rostliny PV-ZMGT32(nk603) a jeho potomků.
Kukuřice je důležitá plodina a je primárním zdrojem obživy v mnoha oblastech světa. Na kukuřici byly aplikovány biotechnologické způsoby za účelem zlepšení agronomických vlastností a kvality produktu. Jednou z takových agronomických vlastností je tolerance k herbicidu glyfosfátu. Tato vlastnost kukuřici dává exprese transgenu v rostlinách kukuřice (US patent 6 040 497).
O expresi cizích genů v rostlině je známo, že je ovlivněna pozicí na chromosomu, případně strukturou chromatinu (například heterochromatin), nebo přítomností transkripčních regulačních úseků (například zesilovačů) v blízkosti místa začlenění (Weising a kol., Ann. Rev. Genet. 22: 421 477, 1988). Za tímto účelem je mnohdy nezbytné prohledávat velké množství případů, aby byl identifikován případ, pro který je charakteristická optimální exprese zavedeného genu. U rostlin a u dalších organizmů bylo například zjištěno, že se úroveň exprese může velmi lišit případ od případu. Mohou zde být také rozdíly v prostorovém nebo časovém profilu exprese, například rozdíly v relativní expresi transgenu v různých rostlinných pletivech, které však neodpovídají předpokládané distribuci vzhledem k transkripčním regulačním úsekům přítomným v zavedeném genovém konstruktu. Za tímto účelem se obvykle vytvoří stovky až tisíce případů a tyto případy se prohledávají na výskyt určitého případu, který má požadovanou hladinu exprese transgenu a distribuci exprese vhodnou ke komerčním účelům. Případ, který má požadovanou hladinu nebo distribuci exprese transgenu je užitečný pro přenos transgenu do jiného genetického pozadí pohlavním křížením s použitím obvyklých pěstitelských postupů. Potomstvo takových křížení zachovává charakteristiku exprese transgenu původního transformanta. Taková strategie se používá k zajištění spolehlivé exprese genu v řadě variant, které jsou dobře adaptované na místní růstové podmínky.
Schopnost detekovat přítomnost konkrétního případu za účelem stanovení, zda potomstvo pohlavního křížení obsahuje inkriminovaný transgen, by byla výhodná. Navíc způsob detekce konkrétního případu by byl například užitečný při dodržování omezení nařízených pro předobchodní schvalování a označování potravin odvozených z rekombinantních rostlin kukuřice. Přítomnost transgenu je možné detekovat kterýmkoli známým způsobem detekce nukleových kyselin, jako je polymerázová řetězová reakce (PCR) nebo hybridizace DNA s použitím sond. Tyto detekční způsoby se však obecně zaměřují na často užívané úseky genů, jako jsou promotory, terminátory, geny pro selekční znaky atd. Výsledkem je to, že tyto způsoby nemohou být použity například pro rozlišení mezi různými případy, zvláště pak takovými, které byly vytvořeny s použitím stejného konstruktu DNA, dokud není známa sekvence oblastí chromosomální DNA („sousední DNA“), přiléhajících k zavedené DNA. PCR analýza specifická pro jednotlivé případy je diskutována například Windelem a kol. (Med. Fac. Landbouww, Univ. Genet 64/5b: 459 - 462, 1999), který identifikoval případ 40-3-2 tolerance ke glyfosfátu u sóji. Použil PCR s párem primerů spojujících úsek, který přemosťuje spoj mezi vloženou DNA a sousední DNA. Konkrétně jeden primer obsahoval sekvenci z vložené DNA a druhý primer obsahoval sekvenci ze sousední DNA.
- 1 CZ 305949 B6
Podstata vynálezu
Úkolem vynálezu je poskytnut konstrukt DNA, který nese toleranci k herbicidu glyfosfátu, když je exprimován v rostlinné buňce. S výhodou se tento vynález týká metody výroby a výběru jednoděložné rostliny kukuřice, která je tolerantní ke glyfosfátu. DNA konstrukt je složen ze dvou transgenních expresních kazet. První expresní kazeta obsahuje molekulu DNA aktinu 1 z rýže (Oryzae sativa) a intron rýžového aktinu 1 funkčně spojený s molekulou DNA kódující sekvenci transitního peptidů, opět funkčně spojenou s molekulou DNA, kódující fosfátovou rezistenci 5enolpyruvylšikimát-3-fosfátsyntetasu (EPSPS), funkčně spojenou s molekulou DNA, složenou z 3' transkripčního terminátoru. Druhá transgenní expresní kazeta z DNA konstruktu je složená z molekuly DNA promotoru 35S viru mozaiky květáku, která je funkčně spojena s molekulou DNA obsahující intron Hsp70, funkčně spojený s molekulou DNA kódující sekvenci tranzitního peptidů do chloroplastů, opět funkčně spojenou s molekulou DNA kódující rezistenci ke glyfosfátu 5-enolpyruvylšikimát-3-fosfátsyntetasu (EPSPS), funkčně spojenou s molekulou DNA tvořenou 3' transkripčním terminátorem.
V konkrétnější podobě je poskytnut konstrukt DNA, který když je exprimován v rostlinné buňce a rostlinách, zodpovídá za toleranci k herbicidu glyfosfátu. Vynález se s výhodou týká způsobu výroby a selekce rostlin kukuřice tolerantních ke glyfosfátu. DNA konstrukt se skládá ze dvou expresních kazet. První expresní kazeta obsahuje molekulu DNA aktinu 1 z rýže (Oryzae sativa) a intron rýžového aktinu 1 funkčně spojený s molekulou DNA kódující sekvenci transitního peptidu EPSPS z Arabidopsis, opět funkčně spojenou s molekulou DNA, kódující fosfátovou rezistenci 5-enolpyruvylšikimát-3-fosfátsyntetasu (EPSPS) izolovanou z Agrobacteria tumefaciens sp. kmen CP4, funkčně spojenou s molekulou DNA, složenou z transkripčního terminátoru nopalinsyntetasy. Druhá transgenní expresní kazeta z DNA konstruktu je složená z molekuly DNA promotoru 35S viru mozaiky květáku, která obsahuje tandemově zdvojený zesilovací úsek, která je funkčně spojena s molekulou DNA obsahující intron Hsp70 ze Zea mays, funkčně spojený s molekulou DNA kódující sekvenci transitního peptidů do chloroplastů (EPSPS) z Arabidopsis, opět funkčně spojenou s molekulou DNA kódující rezistenci ke glyfosfátu 5-enolpyruvylšikimát-3-fosfátsyntetasu (EPSPS) izolovanou z Agrobacteria tumefaciens sp. kmen CP4, funkčně spojenou s molekulou DNA tvořenou transkripčním terminátorem nopalinsyntetasy.
V dalším cíli vynálezu je poskytnuta kompozice a způsoby, potřebné k detekci přítomnosti transgenního/genomového vloženého úseku z nové rostliny kukuřice nazvané PV-ZMGT32(nk603). Jsou poskytnuty molekuly DNA, které obsahují alespoň jednu sekvenci spojení PV-ZMGT32(nk603), vybrané ze skupiny složené z 5' TGTAGCGGCCCACGCGTGGT 3' (Sekv. č. 9), 5' TACCACGCGACACACTCC 3' (Sekv. č. 10) a 5' TGCTGTTCTGCTGACTTT 3' (Sekv. č. 11) a jejich komplementárních řetězců. Sekvence spojení zde přemosťuje spoj mezi heterologní DNA vloženou do genomu a DNA z kukuřičných buněk, která sousedí s místem vložení a je charakteristická pro každý případ. Rostlina kukuřice a semeno, které obsahují tyto molekuly, jsou předmětem vynálezu.
Nová molekula DNA 5' ACCAAGCTTTTATAATAG 3' (Sekv. č. 12) a její komplementární řetězec, kde je molekula DNA nová v PV-ZMGT32(nk603) a jeho potomstvu. Rostlina kukuřice a semeno, které obsahují tuto molekulu, jsou předmětem vynálezu.
Dále molekuly DNA podle vynálezu obsahují nový transgenní/genomový vložený úsek, Sekv. č. 7 a Sekv. č. 8 a jsou homologní, nebo komplementární k Sekv. č. 7 a Sekv. č. 8.
Molekuly DNA, které obsahují dostatečně dlouhou transgenní část DNA Sekv. č. 7 a podobně dostatečně dlouhou část sousední kukuřičné DNA sekvence na 5'konci Sekv. č. 7; nebo podobně dostatečně dlouhou část transgenní DNA Sekv. č. 8 a podobně dostatečně dlouhou část sousední kukuřičné DNA sekvence na 3'konci transgenu, kde jsou tyto molekuly DNA užitečné coby příměry při způsobech amplifikace DNA, za účelem poskytnutí produktu amplifíkace DNA speci
-2CZ 305949 B6 ficky vytvořeného z DNA PV-ZMGT32(nk603) a jeho potomstva jsou dalším předmětem vynálezu.
Dalším úkolem vynálezu je poskytnout způsoby detekce přítomnosti DNA, která odpovídá případu kukuřice PV-ZMGT32(nk603) ve vzorku. Tento způsob se skládá z (a) spojení vzorku, který obsahuje DNA se sadou DNA primerů, který poskytuje při použití s genomovou DNA izolovanou z případu PV-ZMGT32(nk603) amplifikační produkt, který je diagnostikou případu kukuřičného případu PV-ZMGT32(nk603); (b) provedení amplifikační reakce nukleové kyseliny, která poskytuje amplifikační produkt; a (c) detekce amplifikačního produktu. Pár molekul DNA, složený z páru DNA primerů, které jsou homologní nebo komplementární k Sekv. č. 7 nebo Sekv. č. 8, které fungují v amplifikační reakci nukleových kyseliny za vytvoření amplifikačního produktu DNA charakteristického pro PV-ZMGT32(nk603). Konkrétněji se jedná o pár molekul DNA, který zahrnuje pár primerů DNA a kde jsou tyto molekuly identifikovány jako Sekv. č. 13, případně její komplementární řetězec a Sekv. č. 14 nebo její komplementární řetězec; Sekv. č. 15, případně její komplementární řetězec a Sekv. č. 16 nebo její komplementární řetězec. Produkt amplifikace zahrnující molekuly DNA Sekv. č. 13 a Sekv. č. 14. Produkt amplifikace zahrnující molekuly DNA Sekv. č. 15 a Sekv. č. 16. Produkt amplifikace získaný výše zmíněným způsobem, který hybridizuje za stringentních podmínek k sekvencím Sekv. č. 9 a Sekv. č. 10., Sekv. č. 1 1 a Sekv. č. 12.
Dalším cílem o vynálezu je způsob detekce přítomnosti molekuly DNA, odpovídající případu PV-ZMGT32(nk603), ve vzorku. Tyto způsoby zahrnují: (a) smíchání vzorku obsahujícího DNA, která byla extrahována z rostliny kukuřice, a molekuly sondy, která hybridizuje za stringentních podmínek s genomovou DNA případu kukuřice PV-ZMGT(nk603) a nehybridizuje za stringentních podmínek s DNA kontrolní rostliny; (b) působení stringentních hybridizačních podmínek na vzorek a sondu; a (c) detekci hybridizace sondy s DNA. Konkrétněji se jedná o způsob detekce přítomnosti molekuly DNA, odpovídající případu PV-ZMGT32(nk603), ve vzorku. Tyto způsoby zahrnují: (a) smíchání vzorku obsahujícího DNA, která byla extrahována z rostliny kukuřice, a molekuly sondy obsahující Sekv. č. 9 a Sekv. č. 10, Sekv. č. 11 a Sekv. č. 12, kde zmíněná sonda hybridizuje za stringentních podmínek s genomovou DNA případu kukuřice PVZMGT(nk603) a nehybridizuje za stringentních podmínek sDNA kontrolní rostliny; (b) působení stringentních hybridizačních podmínek na vzorek a sondu; a (c) detekci hybridizace sondy s DNA.
Dalším cílem vynálezu je poskytnout způsoby výroby rostlin kukuřice, které jsou tolerantní vůči aplikaci glyfosfátu a které zahrnují: (a) pohlavní křížení první rodičovské linie kukuřice, která obsahuje expresní kazetu podle vynálezu odpovídající za toleranci k aplikaci glyfosfátu a druhotnou rodičovskou linii kukuřice, která není tolerantní vůči glyfosfátu, které vytváří různé rostliny potomstva; a (b) výběru rostlin potomstva, které tolerují aplikaci glyfosfátu. Tyto způsoby mohou případně obsahovat ještě další krok zpětného křížení rostlin potomstva se sekundární rodičovskou linií a výroby rostliny kukuřice, která se normálně množí a toleruje aplikaci glyfosfátu.
Dalším cílem vynálezu je poskytnout způsob výběru rostlin kukuřice tolerantních ke glyfosfátu podle vynálezu a jejich potomstva. Způsob zahrnuje extrakci DNA ze vzorku rostliny, spojení DNA se značenou molekulou nukleové kyseliny, vybranou ze skupiny zahrnující Sekv. č. 9 a Sekv. č. 10, Sekv. č. 11 nebo Sekv. č. 12, nebo jejich komplementy, detekci hybridizace zmíněné značené molekuly nukleové kyseliny s DNA a provedení analýzy genetických vazeb znaku tolerance ke glyfosfátu křížením s použitím značení vzhledem ke značené molekule nukleové kyseliny.
Vynález poskytuje způsob výroby kukuřičné rostliny tolerantní k herbicidu glyfosfátu, která zahrnuje transformaci rostliny kukuřice konstruktem DNA (pMON25496), výběr kukuřičné buňky na základě tolerance k působení efektivního množství glyfosfátu a růst této kukuřičné buňky do rostliny kukuřice schopné plodit. Výsledná rostlina může být samooplozena, nebo křížena s kompatibilní variantou za účelem vytvoření pregenu, tolerantního ke glyfosfátu.
-3CZ 305949 B6
Vynález se dále vztahuje na soupravu k detekci DNA, která obsahuje alespoň jednu molekulu DNA dostatečné délky souvislých homologních nukleotidů, nebo sekvenci komplementární k Sekv. č. 7 nebo Sekv. č. 8. Tato sekvence slouží jako primer nebo sonda specifická pro případ kukuřice PV-ZMGT32(nk603), který má přístupové číslo ATCC PTA-2478 a odvozených potomků. Dále je předmětem vynálezu rostlina kukuřice nebo její části vytvořené růstem kukuřičné rostliny PV-ZMGT32(nk603), tolerantní ke glyfosfátu, pyl a vajíčka kukuřičné rostliny PVZMGT32(nk603). Dále jsou to jádra vegetativních buněk, jádra pylových buněk a jádra vaječných buněk rostliny kukuřice PV-ZMGT32(nk603) a potomků od ní odvozených. Dále je předmětem vynálezu rostlina kukuřice a semena PV-ZMGT32(nk603), které poskytují s primery DNA z tohoto vynálezu specifický amplifikační produkt.
Předešlé a další předměty a cíle vynálezu budou lépe objasněny v následujícím podrobném popisu vynálezu a doprovodných obrázcích.
Přihláška nárokuje užitek z U.S. prozatímní přihlášky 60/213,567, podané 06/22/00; U.S Provisional Application 60/214,215, podané 10/13/00 a U.S Provisional Application 60/240,014, podané 10/13/00. Jsou poskytnuty následující definice a způsoby, aby bylo možné lépe definovat tento vynález a k uvedení těch, kteří jsou zběhlí vdané problematice, do tohoto vynálezu. Pokud není uvedeno jinak, měly by být výrazy chápány dle obvyklého užití mezi odborníky. Definice obvyklých výrazů z molekulární biologie mohou být nalezeny také v Riger a kol., Glossaiy of Genetics: Classical and Molecular, páté vydání, Springer-Verlag: New York, 1991; a Lewin, Genes V, Oxford University Press: New York, 1994. Názvosloví bází DNA bylo použito tak, jak je ustanoveno v 37 CFR § 1.822.
Výraz „kukuřice“, zde použitý, znamená Zea Mays nebo kukuřici a zahrnuje veškeré rostlinné varianty, které mohou být vyšlechtěny z kukuřice, včetně divokých typů.
Výraz „zahrnuje“, zde použitý, znamená „včetně avšak bez omezení na“.
„Glyfosfát“ odpovídá N-fosfonometylglycin a jeho solím, glyfosfát je aktivní složkou herbicidu Roundupu® (Monsanto Co.). Působení „herbicidu glyfosfátu“ odpovídá působení herbicidů Roundupu®, Roundupu Ultra®, Roundupu Ultra Max® nebo jakékoli další směsi, která obsahuje glyfosfát. Výběr aplikačních dávek přípravků glyfosfátu, které obsahují biologicky aktivní dávku, je v možnostech obvyklého zemědělského technika.
Konstrukt DNA je soubor navzájem pospojovaných molekul DNA, který poskytuje jednu nebo více expresních kazet. Konstrukt DNA je s výhodou plazmid, který umožňuje replikaci sebe sama v bakteriální buňce a obsahuje různá rozpoznávací místa pro restrikční endonukleázy, které jsou užitečné k zavádění molekul DNA, které poskytují funkční genetické úseky, tj. mimo jiné promotory, introny, zaváděcí sekvence, kódující sekvence, 3'terminační kodóny. Expresní kazety obsažené v konstruktu DNA zahrnují genetické úseky, které umožňují transkripci mediátorové RNA. Expresní kazeta může být sestavena tak, aby umožňovala expresi v prokaryontních nebo eukaryotních buňkách. Expresní kazety podle vynálezu jsou nejlépe konstruovány tak, aby umožnily expresi v eukaryotních buňkách. Kombinace expresních kazet u transgenních rostlin může vést k neočekávaným fenotypům. V tomto vynálezu zvýšila kombinace kazety promotoru aktinu 1 z rýže a promotoru CaMV 35S v konstruktu DNA (pMON25496) u transgenní rostliny toleranci k herbicidu glyfosfátu v porovnání se samotnou jednou kazetou a komerčním standardem GA21, který obsahuje tři kopie kazety promotoru aktinu 1 z rýže.
Transgenní „případ“ je vyroben transformací rostlinné buňky konstruktem heterologní DNA, který obsahuje expresní kazetu nukleových kyselin, zahrnující kýžený transgen, regeneraci populace rostlin, které jsou výsledkem inzerce transgenu do genomu rostliny a výběr konkrétních rostlin, pro které je charakteristické začlenění do genomu na určitém místě. Pojem „případ“ odpovídá původnímu transformantu a potomstvu transformanta, který zahrnuje heterologní DNA. Výraz „případ“ také odpovídá potomstvu, které bylo vytvořeno pohlavním křížením mezi transformanty
-4CZ 305949 B6 a jinými variantami, a které zahrnuje heterologní DNA. I po opakovaném křížení s rodičovskou generací se nachází vložená DNA spolu se sousední DNA na stejném místě na chromosomu. Výraz „případ“ se také vztahuje na DNA z originálního transformanta, která zahrnuje vloženou DNA a sousední genomové sekvence bezprostředně přiléhající ke vložené DNA. Je možné očekávat, že bude přenesen do potomstva, které získá vloženou DNA spolu s kýženým transgenem jako výsledek pohlavního křížení jedné rodičovské linie, obsahující vloženou DNA (například původní transformant a potomek, jako výsledek samoopylení) a rodičovské linie, která neobsahuje vloženou DNA. Rostlina PV-ZMGT32(nk603) tolerantní ke glyfosfátu může být vypěstována z prvního pohlavního křížení první rodičovské rostliny kukuřice zahrnující rostlinu kukuřice, která byla vypěstována z transgenní rostliny kukuřice PV-ZMGT32(nk603) mající přístupové číslo ATCC PTA-2478 a jejich potomků, odvozených od transformantů s expresní kazetou podle vynálezu, která zaručuje toleranci k aplikaci herbicidu glyfosfátu a druhé rodičovské rostliny kukuřice, která postrádá toleranci k herbicidu glyfosfátu, což tedy vede k pluralitě rostlin prvotního potomstva; a samoopylením rostliny prvotního potomstva, což povede k pluralitě rostlin druhotného potomstva, a následnou selekcí rostlin druhotného potomstva na základě tolerance k herbicidu glyfosfátu. Tyto kroky mohou dále obsahovat zpětné křížení rostlin prvotního potomstva resistentních ke glyfosfátu, nebo prvotní rodičovské rostliny kukuřice nebo terciární rodičovské rostliny, což vede k vzniku rostlin kukuřice, které jsou schopny tolerovat aplikaci herbicidu glyfosfátu. Budiž na srozuměnou, že mohou být také kříženy dvě transgenní rostliny za vzniku nové dceřiné rostliny, která obsahuje dva exogenní geny, které se nezávisle segregují. Samoopylení vhodného potomstva může mít za výsledek rostlinu, která je homozygotem pro oba vložené exogenní geny. Zpětné křížení s rodičovskou rostlinou a křížení s rostlinou, která není transgenní, jsou také zahrnuty, podobně jako vegetativní propagace. Popis dalších způsobů křížení, které jsou obecně využívány pro různé znaky a plodiny může být nalezen v jednom z několika odkazů, například Fehr, v Breeding Methods for Cultivar Development, editor: J. Wilcox, American Society of Agronomy, Madison WI (1987).
„Sonda“ je izolovaná nukleová kyseliny, ke které je připojena konvenční, detekovatelná značka, nebo reportérová molekula, například radioaktivní isotop, ligand, chemiluminiscenční látka nebo enzym. Takováto sonda je komplementární k řetězci cílové nukleové kyseliny. Podle vynálezu je komplementární k řetězci genomové DNA z případu kukuřice PV-ZMGT32(nk603), ať již se jedná o rostlinu kukuřice nebo vzorek obsahující DNA ze zmíněného případu. Sondy podle vynálezu nezahrnují pouze desoxyribonukleové, případně ribonukleové kyseliny, ale také polyamidy a další látky, které se váží specificky na cílovou sekvenci DNA a které mohou být použity k detekci přítomnosti cílové sekvence DNA.
„Příměry“ jsou izolované nukleové kyseliny, které v rámci hybridizace nukleových kyselin, teplotně hybridizují ke komplementárnímu cílovému řetězci DNA, za vzniku hybridu mezi primerem a cílovým řetězcem DNA. Dále jsou tyto primery prodlužovány podle cílového řetězce DNA s pomocí polymerázy, například DNApolymerázy. Páry primerů podle vynálezu jsou používány k amplifikaci cílové sekvence nukleové kyseliny, například polymerázovou řetězovou reakcí (PCR), nebo jinými konvenčními způsoby amplifikace nukleových kyselin.
Primery a sondy mají dostatečný počet nukleotidů, aby se specificky vázaly na cílovou sekvenci DNA za podmínek hybridizace nukleových kyselin nebo za podmínek daných technikem. Taková délka může být jakákoli délka dostatečná k použití při zvoleném způsobu detekce. Obecně jsou užívány délky 11 nebo více nukleotidů, s výhodou 18 nebo více nukleotidů, výhodněji 24 a více nukleotidů a nejlépe 30 a více nukleotidů. Takovéto primera a sondy jsou schopny specificky hybridizovat s cílovou sekvencí za vysoce přísných hybridizačních podmínek. S výhodou mají primery a sondy podle vynálezu kompletní podobnost sekvence DNA následných nukleotidů s cílovou sekvencí. Konvenčními způsoby však mohou být vytvořeny sondy, které se od cílové sekvence DNA liší, ale zachovávají si schopnost hybridizovat s cílovou sekvencí DNA.
Způsoby přípravy a použití sond a primerů jsou popsány například v Molecular Cloning: A Laboratory Manuál, Druhé vydání, svazek 1 - 3 , vydavatelé: Sambrook a kol., Cold Spring Harbor
-5CZ 305949 B6
Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989 (zde dále jako Sambrook a koi., 1989); Current Protocols in Molecular Biology, Editor Ausubel a koi., Greene Publishing and WileyInterscience, New York, 1992 (s pravidelnými obnovami) (zde dále jako Ausubel a koL, 1992); a Innis a kol., PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Academie Press: San Diego, 1990. Páry primerů pro PCR mohou být odvozeny od známé sekvence, například s použitím počítačových programů, určených k tomuto účelu jako je Primer (verze 0.5, © 1991 Whitehead Institute for Biomedical Research, Cambridge, MA).
Primery a sondy založené na sousedních a vložených sekvencích DNA, které jsou popsány zde, mohou být použity k ověření (a je-li třeba k opravě) přiložených sekvencí s použitím konvenčních způsobů, například opětným klonováním a sekvenováním takových sekvencí.
Primery a sondy nukleových kyselin podle vynálezu hybridizují za přísných podmínek s cílovou sekvencí DNA. Jakýkoli konvenční způsob amplifikace může být použit k identifikaci přítomnosti DNA z transgenního případu ve vzorku. Molekuly nukleových kyselin nebo jejich fragmenty jsou schopné specifické hybridizace s jinými molekulami nukleových kyselin za určitých podmínek. Za účelem použití vynálezu, jsou dvě molekuly označeny jako schopné vzájemné specifické hybridizace tehdy, když jsou tyto dvě molekuly schopny vytvořit antiparalelní dvouřetězcovou strukturu nukleových kyselin. Molekula nukleové kyseliny je označena jako „komplementární“ k jiné molekule nukleové kyseliny, jestliže se tyto dvě molekuly vyznačují kompletní komplementaritou. Za účelem použití vynálezu, jsou dvě molekuly označeny jako „kompletně komplementární“, když každý nukleotid z jedné molekuly je komplementární nukleotidu ve druhé molekule. Dvě molekuly jsou označeny jako „minimálně komplementární“, jestliže jedna s druhou hybridizují s dostatečnou stabilitou, která umožní, aby zůstaly hybridizované jedna k druhé za konvenčních „vysoce přísných“ podmínek. Konvenční přísné podmínky jsou popsány v Sambrook a kol., 1989 a v Haymes a kol., v: Nucleic Acid Hybridization, A Practical Aproach, IRL Press, Washington, DC (1985). Odchylky od komplementární sekvence jsou proto možné tak dlouho, dokud zcela nezamezí schopnost molekuly tvořit dvouřetězcovou strukturu. Za účelem použití molekuly nukleové kyseliny jako primem nebo sondy, musí být pouze dostatečně komplementární sekvence, aby byla schopna stabilní dvouřetězcovou strukturu v konkrétním použitém rozpouštědle a koncentraci solí.
Dostatečně homologní sekvence je, pro použití zde, molekula nukleové kyseliny, která specificky hybridizuje s komplementární molekulou nukleové kyseliny, se kterou je srovnávána, za vysoce přísných podmínek. Vhodné přísné podmínky, které podporují hybridizaci DNA, například 6,0 x chlorid sodný/citronan sodný (SSC) při 45 °C, následované promýváním 2,0 x SSC při 50 °C, jsou odborníkům známy nebo mohou být nalezeny v Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1 - 6.3.6. Například koncentrace solí v promývacím kroku může být volena od slabě přísných podmínek hybridizace v přibližně 2,0 x SSC při 50 °C po vysoce stringentní v přibližně 0,2 x SSC při 50 °C. Navíc teplota promývacího kroku může být zvýšena ze slabě stringentních podmínek při pokojové teplotě okolo 22 °C po vysoce přísné podmínky hybridizace při přibližně 65 °C. Jak teplota, tak soli mohou být měněny nebo může být držena konstantní koncentrace solí nebo teplota, zatímco druhá proměnná je měněna. S výhodou bude nukleová kyselina podle vynálezu specificky hybridizovat s jednou či více molekul nukleových kyselin uvedených jako Sekv. č. 9, 10, 11 a 12 nebo jejich komplementy či fragmenty i za mírně přísných podmínek, například v cca 2,0 x SSC při 65 °C. Ve zvláště výhodném provedení vynálezu bude nukleová kyselina podle vynálezu specificky hybridizovat s jednou či více molekulami nukleových kyselin uvedených jako Sekv. č. 9 až 12, nebo jejich komplementy či fragmenty i za vysoce přísných podmínek hybridizace. V dalším provedení vynálezu obsahuje značená molekula nukleové kyseliny podle vynálezu sekvenci nukleové kyseliny značenou jako Sekv. č. 9 až 12, nebo komplement či fragment některé z nich. V dalším provedení vynálezu sdílí výhodná značená molekula nukleové kyseliny podle vynálezu mezi 80% a 100% nebo 90% a 100% identickou sekvenci se sekvencí nukleové kyseliny vedenou jako Sekv. č. 9 až 12 nebo komplementem či fragmentem kterékoli z nich.
-6CZ 305949 B6
V dalším provedení vynálezu sdílí výhodná značená molekula nukleové kyseliny podle vynálezu mezi 95% a 100% identickou sekvenci se sekvencí nukleové kyseliny vedenou jako Sekv. č. 9 až 12 nebo komplementem či fragmentem kterékoli z nich. Sekv. č. 9 až 12 mohou být použity jako značky při šlechtění rostlin ve způsobech identifikace potomků genetického křížení podobných způsobům popsaným pro analýzu jednoduchých opakování sekvence DNA značením v „DNA markers: Protocols, Applications and overviews: (1997) 173 -185, vydavatelé: Cregan a kol., Wiley-Liss NY; všechny jsou zde začleněny jako odkazy ve své podstatě. Hybridizace sondy a cílové molekuly DNA může být detekována jakýmkoli z mnoha způsobů, známých odborníkům. Mezi tyto způsoby patří, avšak je to neomezuje, fluorescenční značky, radioaktivní značky, značky založené na protilátkách a chemiluminiscentní značky.
S ohledem na amplifikaci cílové sekvence nukleové kyseliny (například s pomocí PCR) s využitím konkrétního amplifikačního páru primerů jsou „přísné podmínky hybridizace“ takové podmínky, které dovolí amplifikačnímu páru hybridizovat pouze s cílovou sekvencí nukleové kyseliny, na kterou by se primer s odpovídající sekvencí divokého typu (nebo komplementární) vázal. S výhodou je tak vytvořen v teplotní amplifikační reakci DNA jedinečný produkt amplifikace.
Výraz „specifický k (cílové sekvenci)“ značí, že primer nebo sonda za přísných podmínek hybridizuje pouze s cílovou sekvencí ve vzorku, který tuto cílovou sekvenci obsahuje. Zde použitý výraz „amplifikovaná DNA“ nebo „amplikon“ značí produkt amplifikace cílové sekvence nukleové kyseliny, která je součástí templátu. Využití je například ve stanovení, zda kukuřičná rostlina, vzešlá z pohlavního křížení, obsahuje transgenní případ kukuřičné rostliny podle vynálezu v genomové DNA. DNA extrahovaná z pletiva kukuřičné rostliny může být podrobena způsobu amplifikace DNA s použitím páru DNA primerů. Tento pár zahrnuje první primer odvozený od sousedních sekvencí v genomu rostliny, přiléhajících k místu vložení vložené heterologní DNA. Tímto způsobem je možné vytvořit produkt amplifikace, který je charakteristický pro tento případ DNA. Tento amplifikační produkt má také charakteristickou délku a charakteristickou sekvenci. Délka amplikonu se pohybuje v rozmezí od součtu délek primerů plus jeden pár nukleotidových bází, s výhodou plus asi padesát párů nukleotidových bází, výhodněji plus asi dvěstěpadesát párů nukleotidových bází, nej výhodněji plus asi čtyřistapadesát párů nukleotidových bází. Případně může být pár primerů odvozen od sousedních sekvencí na obou stranách vložené DNA, přičemž je vytvořen amplikon, který obsahuje celou vloženou sekvenci nukleotidů (například fragment DNA MLU1 z expresního konstruktu pMON25496, Obr. 1, přibližně 6706 párů nukleotidových bází). Clen páru primerů může být odvozen od genomové sekvence rostliny, která je umístěna v určité vzdálenosti od vložené sekvence DNA. Tato vzdálenost se může pohybovat v rozmezí od jednoho páru nukleotidových bází až po omezení amplifikační reakce, neboli kolem dvaceti tisíc párů nukleotidových bází. Použitím výrazu „amplikon“ jsou specificky vyloučeny dimery primerů, které mohou být vytvořeny při termální reakci amplifikace DNA.
Amplifikace nukleových kyselin může být provedena kterýmkoli odborníkům známým způsobem amplifikace nukleových kyselin, včetně polymerázové řetězové reakce (PCR). Je známo několik amplifikačních způsobů a jsou mimo jiné popsány v U.S. patentu 4,683,195 a 4,683,202 a v PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Editoři: Innis a kol., Academie Press, San Diego, 1990. Byly vyvinuty způsoby PCR amplifikace schopné amplifikovat do 22 kb genomové DNA a do 42 kb DNA z bakteriofágy (Cheng a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. USA 91: 5695 - 5699, 1994). Tyto způsoby amplifikace DNA spolu s jinými známými způsoby mohou být použity při uplatňování vynálezu v praxi. Sekvence heterologní vložené DNA nebo sousedních sekvencí DNA z případu kukuřice ZMGT32(nk603) může být ověřena (a v případě potřeby opravena) amplifikaci této sekvence z DNA extrahované ze semen nebo rostliny s přístupovým číslem PTA-2478 ATCC sbírky, a to s použitím primerů DNA odvozených od sekvencí zde poskytnutých a následným standardním sekvenováním PCR amplifikačního produktu nebo klonované DNA.
Amplikon vytvořený těmito způsoby může být detekován řadou způsobů. Jedním z těchto způsobuje „Genetic Bit Analysis“ (Nikiforov a kol., Nucleic Acid Res. 22: 4167 - 4175, 1994). V této
-7CZ 305949 B6 metodice je poskytnut primer DNA, jehož sekvence přemosťuje jak sousední sekvenci genomové DNA, tak sekvenci vložené DNA. Oligonukleotid je imobilizován v jamkách na mikrotitrační desce. Následně po PCR kýženého úseku (s použitím jednoho primeru ve vložené sekvenci a jednoho na sousední sekvenci genomové DNA) může být jednořetězcový produkt PCR hybridizován k imobilizovánému oligonukleotidu a slouží jako templát k prodlužovací reakci o jednu bázi s použitím DNApolymerázy a značených ddNTP specifických pro předpokládanou další bázi. Výstup může být fluorescenční nebo založený na ELISA. Signál ukazuje na přítomnost vložené/sousední sekvence díky úspěšné amplifíkaci, hybridizaci a prodloužení o jednu bázi.
Další způsob je pyrosekvenační technika, jak byla popsána Wingem (Innov. Pharma. Tech. 00:18 - 24, 2000). V tomto způsobu je vytvořen oligonukleotid, který přemosťuje spoj vložené DNA a sousední oblasti genomové DNA. Tento oligonukleotid je hybridizován s jednořetězcovým produktem PCR kýženého úseku (jeden primer ve vložené sekvenci a jeden v sousední genomové sekvenci). Následuje inkubace v přítomnosti DNApolymerázy, ATP, sulfurylasy, luciferasy, apyrasy, adenosin-5-fosfosíranu a luciferinu. DŇTP jsou přidávána jednotlivě a výsledek inkorporace, jehož výsledkem je světelný signál, je měřen. Světelný signál indikuje přítomnost transgenu vložené/sousední sekvence, díky úspěšné amplifíkaci, hybridizaci a prodlužování o jednu či více bází.
Další způsob, který může být použit k detekci amplikonu podle vynálezu je fluorescenční polarizace, jak byla popsána Chenem a kol. (Genome Res. 9: 492 - 498, 1999). Při použití tohoto způsobu je vytvořen oligonukleotid, který přemosťuje spoj vložené DNA a sousední oblasti genomové DNA. Tento oligonukleotid je hybridizován s jednořetězcovým produktem PCR kýženého úseku (jeden primer ve vložené sekvenci a jeden v sousední genomové sekvenci). Následuje inkubace v přítomnosti DNApolymerázy a fluorescenčně značených ddNTP. Prodlužování o jednu bázi má za výsledek inkorporaci fluorescenčně značených ddNTP. Inkorporaci je možné měřit jako změnu polarizace na fluorimetru. Změna polarizace indikuje přítomnost transgenu vložené/sousední sekvence, díky úspěšné amplifíkaci, hybridizaci a prodloužení o jednu bázi.
Taqman ® (PE Applied Biosystems, Foster City, CA) je popsán coby způsob detekce a kvantifikace přítomnosti DNA sekvence a je plně srozumitelný z instrukcí poskytovaných výrobcem. Krátce, je vyrobena sonda, tvořená oligonukleotidem FRET, která přemosťuje spoj vložené DNA a sousední oblasti genomové DNA. Sonda FRET a PCR primery (jeden primer ve vložené sekvenci a jeden v sousední genomové sekvenci) jsou cyklovány v přítomnosti termostabilní polymerázy a dNTP. Hybridizace sondy FRET má za výsledek štěpení a uvolnění fluorescenční části zčásti zhášecí na sondě FRET. Fluorescenční signál indikuje přítomnost sousední/transgenní vložené sekvence, díky úspěšné amplifíkaci a hybridizaci.
Bylo popsáno použití molekulárních majáků při detekci sekvencí, jak je popsáno v Tyangi a kol. (Nature Biotech. 14: 303 - 308, 1996). Krátce, je vyrobena sonda, tvořená oligonukleotidem FRET, která přemosťuje spoj vložené DNA a sousední oblasti genomové DNA. Jedinečná struktura sondy FRET má za výsledek takovou sekundární strukturu, která drží fluorescenční a zhášecí část molekuly v těsné blízkosti. Sonda FRET je spolu s PCR primery (jeden primer ve vložené sekvenci a jeden v sousední genomové sekvenci) cyklována v přítomnosti termostabilní polymerázy a dNTP. Po úspěšné amplifíkaci PCR následuje hybridizace sondy FRET s cílovou sekvencí, což má za následek zrušení sekundární struktury sondy a separaci fluorescenční a zhášecí části molekuly. Výsledkem je fluorescenční signál. Fluorescenční signál indikuje přítomnost sousední/transgenní vložené sekvence, díky úspěšné amplifíkaci a hybridizaci.
Následující příklady použití vynálezu demonstrují příklady určitých výhodných provedení vynálezu. Odborníci by měli ocenit, že v příkladech zahrnuté techniky, které následně představují přístupy, byly shledány vynálezci dobře fungujícími v praxi vynálezu, a tudíž mohou být považovány za ustavení příkladů výhodných pro praxi. Nicméně by měli odborníci, ve světle předkládaného, ocenit, že mohou být učiněny mnohé změny specifického provedení, které bylo přiloženo a stále získají stejný či podobný výsledek bez opuštění ducha a předmětu vynálezu.
-8CZ 305949 B6
Objasnění výkresů
Obr. 1. Mapa plazmidu pMON25496
Příklady uskutečnění vynálezu
Příklad 1
Transgenní případ kukuřice PV-ZMGT32(nk603) (dále značený jako nk603) byl vytvořen bombardováním embrya kukuřice mikroprojektily (Songstad a kol., In Vitro Cell Plant 32: 179-183, 1996) s použitím lineárního fragmentu DNA, vyštěpeného restrikční endonukleázou Afwl z pMON25496 (Obr. 1). Tento fragment DNA obsahuje dvě expresní kazety, které společně odpovídají za toleranci kukuřice ke glyfosfátu. První kazeta je složena z promotoru rýžového aktinu 1 a intronu (P-Os.Actl a I-Os.Actl, U.S. Patent 5 641 876), který je funkčně spojen s chloroplastovým transitním peptidem EPSPS z Arabidopsis (TS-At.EPSPS:CTP2, Klee a kol., Mol. Gen. Genet. 210: 47 - 422, 1987), který je dále funkčně spojen s 5-enol-pyruvylšikimát-3-fosfatasou (EPSPS) z Agribacteria sp. kmene CP4 (AGRTU.aroJ:CP4, U.S. patent č. 5,633,435), který je opět funkčně spojen s transkripčním terminátorem nopalinsyntetasy (T-AGRTU.nos, Fraley a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. USA 80: 4803 - 4807, 1983). Druhá transgenní expresní kazeta je složena z 35S promotoru viru mozaiky květáku, která obsahuje tandemově zdvojený zesilovací úsek (P-CaMV.35S, Kay a kol., Science 236: 1299 - 1302,1987; U.S. patent 5,164,316), který je funkčně spojen s intronem Hsp70 ze Zea mays (I-Zm.Hsp70, U.S. patent 5,362,865), který je opět funkčně spojen s chloroplastovým transitním peptidem EPSPS z Arabidopsis (TSAt.EPSPS:CTP2, Klee a kol., Mol. Gen. Genet. 210: 47 - 422, 1987), který je dále funkčně spojen s 5-enol-pyruvylšikimát-3-fosfatasou (EPSPS) z Agribacteria sp. kmene CP4 (AGRTU.íwotí:CP4, U.S. Patent 5,633,435), který je opět funkčně spojen s transkripčním terminátorem nopalinsyntetasy (T-AGRTU.nos, Fraley a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. USA 80: 4803 - 4807, 1983). Po bombardování byly vybrány transgenní kalusy, tolerantní ke glyfosfátu na médiu, které obsahovalo 3 mM glyfosfát. Následně byly regenerovány rostliny. Bylo vyrobeno třistačtyři rostlin z 91 nezávislých transgenních případů. Z této populace byla vybrána nk603, na základě nejvhodnější kombinace charakteristik, včetně tolerance ke glyfosfátu, zemědělských schopností a pouze jedné kopie transgenního vložení. Testy případu nk603 a od něj odvozených potomků ve skleníku i na poli prokázaly, že toto transgenní vložení odpovídá za toleranci, která překračuje komerční specifikace pro plnou vegetativní i reproduktivní toleranci k 340 g glyfosfátu na 0,4 hektaru (840 g na hektar; 0,9 kg Roundupu Ultra na 0,4 hektaru) při aplikaci na listové stádium V4 a V8.
Příklad 2
Případ kukuřice nk603, tolerantní ke glyfosfátu, byl porovnán s komerčním standardem GA21 (U.S. patent 6,040,497), který je v současné době dostupný, na toleranci k vegetativnímu poškození glyfosfátem a na účinek na výnos. GA21 obsahuje alespoň 3 tandemově uspořádané expresní kazety v genomu případu kukuřice GA21 (SCP/GMO/232-Final, European Commission Health & Consumer Protection Directorate-General). Transgenní kazeta se skládá z promotoru aktinu 1 z rýže a intronu spojeného s chloroplastovým transitním peptidem ribulosa-l,5-bisfosfátkarboxylasy, spojeného s modifikovanou kukuřičnou EPSPS rezistentní ke glyfosfátu a s transkripčním terminátorem nopalinsynsyntetasy. Rostliny nk603 a GA21 byly vysety do řádků na části pole. Bylo na ně působeno následujícím způsobem: 1) nepostříkané, 2) postříkané Roundupem Ultra® o koncentraci 1,8 kg na 0,4 hektaru, v listovém stádiu V4 a znovu Roundupem Ultra® o koncentraci 1,8 kg na 0,4 hektaru, v listovém stádiu V8, 3) postříkané Roundupem Ultra® o koncentraci 2,7 kg na 0,4 hektaru, v listovém stádiu V4 a znovu Roundupem Ultra® o koncentraci 2,7 kg na 0,4 hektaru, v listovém stádiu V8. Vegetativní tolerance byla měřena jako procen
-9CZ 305949 B6 to vegetativního poranění, stanovené z počtu malformovaných listů vytvořených 10 dnů po aplikaci herbicidu v listovém stadiu V8. Byl měřen výnos na každé části pole v bušlech (=35,2 1) na 0,4 hektaru a procento snížení výnosu stanovené pro jednotlivé koncentrace herbicidu vztažené na nepostříkanou část. Výsledky, které jsou uvedeny v tabulce 1, ukazují, že nk603 vykazuje nižší procento vegetativního poranění než je tomu u GA21 rostlin. Podobně je nižší snížení výnosu u případu nk603. Nízký výskyt vegetativního poranění byl objeven i na nepostříkaných částech pole, což je možné přisoudit různým jiným vnějším faktorům, než výstavem herbicidu glyfosfátu. Dvojitá expresní kazeta pMON25496 v nk603 byla porovnána s vegetativním poraněním a plodností tří nezávislých případů kukuřice, které byly získány pouhou expresí genu tolerance ke glyfosfátu (AGRTU.aroA.CP4), řízenou promotorem CaMV.35S. Bylo objeveno, že dvojitá expresní kazeta udělovala vyšší stupeň vegetativní i reproduktivní tolerance, než tři nezávislé případy kukuřice (příklady 1, 2 a 3), které obsahovaly pouze gen tolerance ke glyfosfátu (AGRTU.aroA.CP4), řízený promotorem CaMV.35S. Vysoká hladina vegetativní tolerance vůči poranění herbicidem glyfosfátem byla objevena u nk603 a dalších tří případů kukuřice, odvozených od pMON25496 v porovnání s průměrným poraněním 6 případů kukuřice odvozených od konstruktu, kde je exprese genu pro toleranci ke glyfosfátu řízena pouze promotorem a intronem aktinu z rýže (P-Os.Actl/l-Os.Actl). Rostliny transformované dvojitou expresní kazetou vykazovaly vyšší toleranci k vegetativnímu a fertilitnímu poranění než rostliny získané transformací jednoduchou expresní kazetou, což vedlo ke snížení ztráty výnosu v důsledku aplikace herbicidu glyfosfátu. Konstrukt pMON25496 poskytnul dvě expresní kazety v jednom umístění v nk603, které propůjčily vyšší stupeň tolerance ke glyfosfátu, než trojité vložení, které se objevuje u komerčního standardu GA21.
Tabulka 1. Tolerance nk603 ke glyfosfátu - vegetativní poranění, výtěžek a hodnocení fertility
Případ Působení % veg. poranění* Výnos 1/hektar (bušl/akr) % snížení výnosu
GA21 Nepostříkané 0,3 12207,9 (142,2)
1,8 kg (64 oz) Roundupu Ultra® ve V4 následované 1,8 kg (64 oz) ve V8 5,3 11512,5 (134,1) 5,7
2,7 kg (96 oz) Roundupu Ultra® ve V4 následované 2,7 kg (96 oz) ve V8 8,3 11083,2 (129,1) 9,2
nk603 Nepostříkané 0,9 12499,8 (145,6)
1,8 kg (64 oz) Roundupu Ultra® ve V4 následované 1,8 kg (64 oz)ve V8 2,9 11 890,2 (138,5) 4,9
2,7 kg (96 oz) Roundupu Ultra® ve V4 následované 2,7 kg (96 oz) ve V8 4,7 12027,6 (140,1) 3,8
-10CZ 305949 B6
Působení Hodnocení fertility**
nk603 1,8 kg (64 oz) Roundupu Ultra® ve V8 4,5
CaMV.35S příp. 1 1,8 kg (64 oz) Roundupu Ultra® ve V8 2,0
CaMV.35S příp. 2 1,8 kg (64 oz) Roundupu Ultra® ve V8 2,2
CaMV.35S příp. 3 1,8 kg (64 oz) Roundupu Ultra® ve V8 2,4
Působení Prům. % veg. Poranění*
Nk603 plus 3 další pMON25496 případy 3,6 kg (128 oz) Roundupu Ultra® ve V4 následované 3,6 kg (128 oz) ve V8 22,9
Šest případů jednoduchých kazet P-Os.Actl 3,6 kg (128 oz) Roundupu Ultra® ve V4 následované 3,6 kg (128 oz) ve V8 28,9
* Vegetativní poranění, získané 10 dnů po působení ve V8, je jedno měření provedené ke stanovení vegetativního poranění jako odpovědi na působení glyfosfátu. ** Hodnocení fertility samčích rostlin: 4 - 5 = plně fertilní; 3 = znatelně snížené šíření pylu; 0 - 2 = zcela sterilní - velmi sterilní, nevhodné ke komerčnímu použití.
Příklad 3
Odpovídající sousední molekuly DNA z nk603 byly klonovány s použitím ligačních adaptérů a „nested“ PCR jak je popsáno v kitu Genome Walker™ (katalogové číslo K.I 807-1, CloneTech Laboratories, lne, Palo Alto, CA). Nejprve byla purifikována genomová DNA z případu nk603 způsobem využívajícím CTAB (Rogers a kol., Plant Mol. Biol. 5: 69 - 76, 1985). Genomová DNA knihovna byla připravena k amplifikaci dle instrukcí výrobce (Genome Walker™, CloneTech Laboratories, lne, Palo Alto, CA). V nezávislých reakcích byla genomová DNA štěpena přes noc při 37 °C následujícími restrikčními endonukleázami, které štěpí s tupým koncem: EcoRN, Seal, Dral, PvmII (CloneTech Laboratories, lne, Palo Alto, CA). Reakční směs byla extrahována do směsi fenokchloroform. DNA byla vysrážena z vodné fáze přídavkem etanolu a sedimentována centrifugací. Následně byla rozsuspendována v pufru Tris-EDTA (100 mM TrisHC1, pH 8,0, 1 mM EDTA). Purifikované fragmenty genomové DNA byly ligovány s adaptéry Genome Walker™, dle protokolu výrobce. Reakce byla v každé směsi zastavena zahřáním (70 °C, 5 min). Směs byla zředěna 1 Okřát pufrem Tris-EDTA. Jeden mikrolitr z každé ligace byl amplifíkován v 50 μΐ reakci, která obsahovala 1 μΐ dané knihovny ligované s adaptérem, 1 μΐ příměrů specifického pro adaptér Genome Walker™ API (5' GTATATCGACTCACTATAGGGC 3', Sekv. č. 1) o koncentraci 10 μΜ, 1 μΙ oligonukleotidu specifického pro transgen nk603 o koncentraci 10 μΜ.
(5' TGACGTATCAAAGTACCGACAAAAACATCC 3', Sekv. č. 2), 1 μΐ deoxyribonukleotidů1, 2,5 μΙ dimetylsulfoxidu, 5 μΐ 10 krát koncentrovaného reakčního pufru obsahujícího MgCl2, 0,5 μΐ (2,5 jednotek) termostabilní DNApolymerázy Amplitaq (PE Applied Biosystems, Foster City, CA a směs byla doplněna H2O do 50 μΐ. Reakce byla prováděna v termocykleru s použitím vypočítané teplotní kontroly a byly aplikovány následující cyklické podmínky: 1 cyklus 95 °C po dobu 9 min; 7 cyklů 94 °C po dobu 2 s, 70 °C po dobu 3 min; 36 cyklů 94 °C po dobu 2 s, 65 °C po dobu 3 min; 1 cyklus 65 °C po dobu 4 min. Jeden μΐ z každé reakce byl zředěn 50krát vodou a amplifíkován v sekundární reakci (1 μΐ odpovídající zředěné primární reakce, 1 μΐ 10 μΜ Geno
- 11 CZ 305949 B6 me WalkerTM „nested adapter“ primeru AP2 (5' ACTATAGGGCACGCGTGGT 3', Sekv. č. 3, dodávaná výrobcem), 1 μΐ 10 μΜ oligonukleotidu specifického pro transgen nk603.
(5'CTTTGTTTTATTTTGGACTATCCCGACTC 3', Sekv. Č. 4), 1 μΐ deoxyribonukleotidtrifosfátů, 2,5 μΐ dimetylsulfoxidu, 5 μΙ 10 krát koncentrovaného reakčního pufru obsahujícího MgCl2, 0,5 μΐ (2,5 jednotek) termostabilní DNApolymerázy Amplitaq (PE Applied Biosystems, Foster City, CA a směs byla doplněna H2O do 50 μΙ. Reakce byla prováděna v termocykleru s použitím vypočítané teplotní kontroly a byly aplikovány následující cyklické podmínky: 1 cyklus 95 °C po dobu 9 min; 5 cyklů 94 °C po dobu 2 s, 70 °C po dobu 3 min; 24 cyklů 94 °C po dobu 2 s, 65 °C po dobu 3 min; 1 cyklus 65 °C po dobu 4 min.
Produkt PCR, který reprezentuje úsek přemosťující spojení mezi nk603 transgenním vloženým úsekem a sousední kukuřičnou DNA byl purifikován s pomocí agarózové gelové elektroforézy, následované purifikací z agarózové matrice s použitím QIAquick Gel Extraction Kitu (katalogové číslo 28704, Qiagen Inc., Valencia, CA). PCR produkt byl následně přímo klonován do vektoru pGEM-T Easy (katalogové číslo A1360, Promega, Madison, WI). Identita klonovaného produktu PCR a jeho vztah s Miu I fragmentem pMON25496 byl ověřen s pomocí analýzy sekvence DNA (ABI PrismTM 377, PE Biosystems, Foster City, CA a program na analýzu sekvencí DNASTAR, DNASTAR Inc., Madison, WI).
Podobně byla amplifikována a klonována sekvence kukuřičné DNA sousedící s 3 ’ koncem nk603 s pomocí „nested“ primerů, specifických pro gen, jako je Sekv. č. 5 (5' AGATTGAATCCTGTTGCCGGTCTTGC3') a Sekv. č. 6 (5'GCGGTGTCATCTATGTTACTAGATCGGG3'), které tepelně hybridizovaly k transkripčnímu terminátoru T-AGRTU.nos. V transgenní/genomové inzerci jsou přítomny dva transkripční terminátory T-AGRTU.nos. Jeden uvnitř konstruktu a jeden na 3' konci konstruktu sousedícího s kukuřičnou genomovou DNA. PCR produkty vytvořené v této reakci byly sekvenovány a DNA sekvence, která přemosťuje spojení mezi transgenem a sousední sekvencí byla odlišena od produktu vnitřního T-AGRTU.nos, srovnáním známých genetických úseků konstruktu pMON25496, jak bylo výše popsáno. Sekvence kukuřičné DNA sousedící na obou stranách s vloženým transgenem byla stanovena pro nk603 sekvenováním amplifikačního produktu odvozeného od Genome Walker™ a porovnána se známou sekvencí transgenu. Na 5' konci vloženého transgenu byla stanovena sekvence úseku, sousedícího se spojem, o délce 498 bp (Sekv. č. 7). Ten se skládal z 304 párů bází (bp) sousední genomové DNA kukuřice (nukleotidy 1 - 304 ze Sekv. č. 7), 45 bp náležejících k DNA sekvenci konstruktu pMON25496 (nukleotidy 305 - 349 ze Sekv. č. 7) a 149 bp DNA sekvence z 5' konce P-Os. Actl (nukleotidy 350 - 498 ze Sekv. č. 7)
Byla stanovena sekvence úseku o délce 1183 párů bází okolo 3' spoje vloženého úseku (Sekv. č. 8), která začíná úsekem 164 párů bází z transkripčního terminátoru T-AGRTU.nos (nukleotidy 1 - 164 ze Sekv. č. 8), 217 párů bází sekvence DNA konstruktu pMON25496 (nukleotidy 165 381 ze Sekv. č. 8, 305 párů bází kukuřičných plastidových genů rspfVa rpoA (částečné segmenty obou genů, které odpovídají bázím 63 - 363 dostupným v Genebank s přístupovým číslem X07810 a které odpovídají bázím 382 - 686 ze Sekv. č. 8) a ze zbývající sekvence DNA zahrnující genomovou DNA sekvenci kukuřice, sousedící s místem integrace (odpovídá nukleotidům 687 - 1183 ze Sekv. č. 8). Spojovací molekuly DNA Sekv. č. 9, Sekv. č. 10, Sekv. č. 11 a Sekv. č. 12 jsou nové molekuly DNA v nk603 a jsou pro případ kukuřice nk603 a její potomstvo charakteristické. Spojovací molekuly Sekv. č. 9, Sekv. č. 10 a, Sekv. č. 11 reprezentují cca 9 nukleotidů na každé straně místa vložení transgenního fragmentu DNA a genomové DNA kukuřice. Sekv. č. 9 se nalézá v pozici 295 - 314 Sekv. č. 7. Spojovací sekvence Sekv. č. 10 a 11 se nacházejí v pozicích 373 - 390 a 678 - 695 Sekv. č. 8 a reprezentují spojovací molekuly ze sekvence konstruktu DNA s plastidovou DNA kukuřice (Sekv. č. 10) a sekvence konstruktu s genomovou DNA kukuřice (Sekv. č. 11). Sekv. č. 12 se nachází v pozici 156 - 173 Sekv. č. 8 a reprezentuje novou molekulu DNA vnk603, protože je to fúze terminační sekvence T-AGRTU.nos s invertovaným fragmentem DNA promotoru aktinu z rýže.
- 12CZ 305949 B6
Příklad 4
Pár DNA primerů specifických pro případ byl použit k výrobě amplikonu charakteristického pro nk603. Tento pár primerů zahrnuje, ovšem není tím omezen, Sekv. č. 13 a Sekv. č. 14 pro 5' amplikon molekuly DNA a Sekv. č. 15 a Sekv. č. 16 pro 3' amplikon molekuly DNA. Krom těchto párů primerů je předmětem tohoto vynálezu jakýkoli pár odvozený od Sekv. č. 7 a Sekv. č. 8, který při použití v reakci amplifikace DNA, dává vzniknout amplikonu, který je charakteristický pro nk603. Amplifikační podmínky pro tuto analýzu, týkající se 5' spojovacího úseku vloženého transgenu/úseku genomu jsou zobrazeny v tabulce 2 a tabulce 3.
Stejný způsob je aplikován pro amplifikaci 3' amplikonu molekuly DNA s použitím primerů DNA c podobě Sekv. č. 15 a Sekv. č. 16, avšak jakákoli modifikace těchto způsobů, která používá molekul DNA nebo jejich komplementů k tvorbě amplikonu molekuly DNA charakteristické pro nk603 jev rámci obvyklé znalosti problematiky. Navíc byl začleněn jako vnitřní standard pro podmínky reakce, kontrolní pár primerů (Sekv. č. 17 a 18) k amplifikaci endogenního kukuřičného genu. Analýza extraktu DNA z rostlinného pletiva nk603 by měla obsahovat pozitivní kontrolu ve formě extraktu DNA z nk603, negativní kontrolu ve formě extraktu DNA z kukuřičné rostliny, která není nk603 a negativní kontrolu, která neobsahuje žádný DNA extrakt jako templát. Další molekuly DNA primerů dostatečné délky mohou být, odborníky ve způsobech amplifikace DNA, vybrány ze Sekv. č. 7 a Sekv. č. 8 a mohou být optimalizovány podmínky pro tvorbu amplikonu, které se liší od způsobů z tabulky 2 a tabulky 3, jejichž výsledkem je však amplikon charakteristický pro nk603. Použití takových modifikovaných sekvencí primerů s pozměněnými způsoby z tabulky 2 a 3 jsou také předmětem tohoto vynálezu. Předmětem tohoto vynálezu je amplikon, kde alespoň jedna molekula DNA primem dostatečné délky je odvozena ze Sekv. č. 7 a Sekv. č. 8, a který je charakteristický pro nk603. Předmětem tohoto vynálezu je amplikon, kde alespoň jedna molekula DNA primem dostatečné délky je odvozena z jakéhokoli genetického úseku pMON25496 a který je charakteristický pro nk603. Zkouška na amplikon nk603 může být provedena s použitím termocyklem Robocyklem Stratagene, MJ Engine, Perkin-Elmer 9700 nebo Eppendorf Mastercycler Gradient, jak je ukázáno v tabulce 3, nebo způsobem a na přístroji, známém odborníkům.
Tabulka 2
Provedení PCR a reakční směs pro potvrzení úseku spoje mezi vloženým transgenem a genomem nk603.
Krok Látka Množství Komentář
1 Voda bez nukleas Doplnit do 20 μΐ -
2 10 x reakční pufr (s MgCh) 2,0 μΐ Výsledná koncentrace 1 x pufr a l,5mMMgC12
3 lOmM roztok dATP, dCTP, dGTP adTTP 0,4 μΐ Finální koncentrace každého dNTPje 200uM
4 Primer specifický k případu (Sekv. 0,4 μΙ Výsledná koncentrace 0,2μΜ
- 13 CZ 305949 B6
čís. 13) (rozsuspendovaný na koncentraci ΙΟμΜ v lx TE pufru nebo ve vodě prosté nukleas)
5 Primer specifický k případu (Sekv. čís. 14) (rozsuspendovaný na koncentraci 1 ομΜ v 1 x TE pufru nebo ve vodě prosté nukleas) 0,4 μΐ Výsledná koncentrace 0,2μΜ
6 Primer kontrolní (Sekv. čís. 17) (rozsuspendovaný na koncentraci ΙΟμΜ v lx TE pufru nebo ve vodě prosté nukleas) 0,2 μΐ Výsledná koncentrace 0, ΙμΜ
7 Primer kontrolní (Sekv. čís. 18) (rozsuspendovaný na koncentraci ΙΟμΜ v lx TE pufru nebo ve vodě prosté nukleas) 0,2 μΐ V ýsledná koncentrace 0,1 μΜ
8 Rnasa, prostá Dnas (500 ng/μΙ) 0,1 μΐ 50 ng/reakci
9 DNApolymerasa REDTaq (1 jednotka/μΙ) 1,0 μΐ Ge doporučeno vyměnit pipety před dalším krokem) 1 jednotka/reakci
10 Extrahovaná DNA (templát): • Vzorky k analýze * jednotlivé listy * smíchané listy (maximum je 50 listů najednou) • Negativní kontrola • Negativní kontrola • Pozitivní kontrola • 10-200 ng genomové DNA • 200 ng genomové DNA • 50 ng genomové DNA kukuřice (nk603) • bez DNA templátu • 50 ng genomové DNA nk603
Tabulka 3
Doporučené parametry pro různé termocyklery. Jemně zamíchat a, pokud je třeba (termocykler nemá vyhřívané víku), přidat 1 až 2 kapky minerálního oleje na vrch každé reakce. Pokračujte s použitím Robocykleru Stratagene, MJ Engine, Perkin-Elmer 9700 nebo Eppendorf Mastercycler Gradient za následujících parametrů cyklů.
-14CZ 305949 B6
Poznámka: Běh by na termocykleru MJ Engine nebo Eppendorf Mastercycler Gradient měl odpovídat vypočítaným parametrům. Na přístroji Perkin Elmer 9700 by měl být nastaven teplotní náběh („ramp) na maximum.
Číslo cyklu Nastavení: Robocykler Stratagene
1 94 °C 3 minuty
38 94 °C 1 minuta 60 °C 1 minuta 72 °C 1 minuta
1 72 °C 10 minut
Číslo cyklu Nastavení: MJ Engine nebo Perkin Elmer 9700
1 94 °C 3 minuty
38 94 °C 10 sekund 60 °C 30 sekund 72 °C 1 minuta
1 72 °C 10 minut
v Číslo cyklu Nastavení: Eppendorf Mastercycler Gradient
1 94 °C 3 minuty
38 94 °C 15 sekund 60 °C 15 sekund 72 °C 1 minuta
1 72 °C 10 minut
Vklad firmy Monsanto Company, v podobě semen případu kukuřice PV.ZMGT32(nk603), popsaných výše, byl učiněn pod záštitou Budapešťské dohody se sbírkou American Culture Collection (ATCC), 1081 University Boulevard, Manassas, Va. 20110. Přístupové číslo ATCC je PTA-2478. Vklad bude uchován v depozitáři po dobu 30 let, nebo 5 let od poslední žádosti, nebo po dobu účinnosti patentu, cokoli bude delší a bude-li třeba, bude kdykoli vyměněn.
Po znázornění a vysvětlení principů podle vynálezu by mělo být odborníkům jasné, že je možné uspořádání a detaily vynálezu modifikovat bez odchýlení od těchto principů. Nárokujeme si veškeré změny, které jsou v duchu a rámci připojených nároků.
Veškeré publikace a publikované patenty v tomto popisu citované jsou zahrnuty jako odkazy ve stejné míře, jako by byla každá jednotlivá publikace či patent specificky a individuálně označen k zahrnutí jako odkaz.

Claims (5)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Kukuřičná rostlina nebo její část, tolerantní ke glyfosfátu, vyznačující se tím, že její genom obsahuje vložený úsek DNA kódující EPSPS, přičemž vložený úsek DNA má 5' a 3' spojení s genomovou DNA kukuřice obsahující Sekv. č. 7 a Sekv. č. 8.
  2. 2. Kukuřičná rostlina nebo její část, tolerantní ke glyfosfátu, vyznačující se tím, že její genom obsahuje vložený úsek DNA kódující EPSPS a Sekv. č. 9, 10, 11 a 12.
  3. 3. Kukuřičná rostlina podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že rostlina je potomkem rostliny obsahující případ kukuřice PV-ZMGT32(NK603) a kde reprezentativní vzorek semen obsahující tento případ je uložen v Americké Sbírce „American Type Culture Collection“ (ATCC) pod přístupovým číslem PTA-2478.
  4. 4. Potomstvo kukuřičné rostliny tolerantní ke glyfosfátu podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že jeho genom obsahuje vložený úsek DNA kódující EPSPS a Sekv. č. 9, 10, 11 a 12.
  5. 5. Semeno kukuřičné rostliny, vyznačující se tím, že obsahuje případ kukuřice PV-ZMGT32(NK603) a kde reprezentativní vzorek semen obsahující tento případ je uložen v Americké Sbírce „American Type Culture Collection“ (ATCC) pod přístupovým číslem PTA2478.
CZ2008-437A 2000-06-22 2001-06-18 Kukuřičná rostlina PV-ZMGT32(nk) nebo její část, tolerantní ke glyfosfátu, její potomstvo a její semena CZ305949B6 (cs)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US21356700P 2000-06-22 2000-06-22
US24121500P 2000-10-13 2000-10-13
US24001400P 2000-10-13 2000-10-13

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ305949B6 true CZ305949B6 (cs) 2016-05-18

Family

ID=27395887

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2008-437A CZ305949B6 (cs) 2000-06-22 2001-06-18 Kukuřičná rostlina PV-ZMGT32(nk) nebo její část, tolerantní ke glyfosfátu, její potomstvo a její semena
CZ20012203A CZ299722B6 (cs) 2000-06-22 2001-06-18 Kukurice tolerantní ke glyfosfátu PV-ZMGT32(nk603), DNA konstrukt PV-ZMGT32(nk603) nesoucí toleranci rostlin ke glyfosfátu a zpusob jeho detekce v rostlinných vzorcích

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20012203A CZ299722B6 (cs) 2000-06-22 2001-06-18 Kukurice tolerantní ke glyfosfátu PV-ZMGT32(nk603), DNA konstrukt PV-ZMGT32(nk603) nesoucí toleranci rostlin ke glyfosfátu a zpusob jeho detekce v rostlinných vzorcích

Country Status (21)

Country Link
US (8) US6825400B2 (cs)
EP (3) EP2210951B1 (cs)
CN (2) CN101186918A (cs)
AR (4) AR031665A1 (cs)
AT (2) ATE323168T1 (cs)
BG (1) BG65315B1 (cs)
BR (2) BRPI0100752B1 (cs)
CA (1) CA2349841C (cs)
CY (2) CY1106109T1 (cs)
CZ (2) CZ305949B6 (cs)
DE (2) DE60118660T2 (cs)
DK (3) DK1582592T3 (cs)
ES (3) ES2261330T3 (cs)
HU (2) HU230814B1 (cs)
ID (1) ID30575A (cs)
MX (1) MXPA01006407A (cs)
PL (1) PL199928B1 (cs)
PT (2) PT1582592E (cs)
RS (1) RS49990B (cs)
SI (3) SI1582592T1 (cs)
UY (1) UY26788A1 (cs)

Families Citing this family (331)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BRPI0100752B1 (pt) 2000-06-22 2015-10-13 Monsanto Co moléculas e pares de moléculas de dna, processos para detectar molécula de dna e para criar um traço tolerante a glifosato em plantas de milho, bem como kit de detecção de dna
US6689880B2 (en) 2000-09-29 2004-02-10 Monsanto Technology Llc DNA molecule for detecting glyphosate tolerant wheat plant 33391 and progeny thereof
EP1337669A2 (en) 2000-11-30 2003-08-27 Ses Europe N.V./S.A. Glyphosate resistant transgenic sugar beet characterised by a specific transgene insertion (t227-1), methods and primers for the detection of said insertion
US7569747B2 (en) 2002-12-05 2009-08-04 Monsanto Technology Llc Bentgrass event ASR-368 and compositions and methods for detection thereof
MXPA05008143A (es) 2003-01-31 2006-03-09 Monsanto Technology Llc Eventos de alfalfa tolerantes a glifosato y metodos para su deteccion.
EP1620571B1 (en) * 2003-05-02 2015-07-01 Dow AgroSciences LLC Corn event tc1507 and methods for detection thereof
US7157281B2 (en) * 2003-12-11 2007-01-02 Monsanto Technology Llc High lysine maize compositions and event LY038 maize plants
HUE025703T2 (en) 2003-12-15 2016-04-28 Monsanto Technology Llc MON88017 corn plant and compositions, and a method for detecting them
US7683237B2 (en) * 2004-02-10 2010-03-23 Monsanto Technology Llc Maize seed with synergistically enhanced lysine content
AR047598A1 (es) * 2004-02-10 2006-01-25 Monsanto Technology Llc Semilla de maiz transgenica con mayor contenido de aminoacidos
US7855323B2 (en) 2004-02-10 2010-12-21 Monsanto Technology Llc Recombinant DNA for gene suppression
US7361813B2 (en) 2004-03-25 2008-04-22 Syngenta Participations Ag Corn event MIR604
US20070197474A1 (en) * 2004-03-30 2007-08-23 Clinton William P Methods for controlling plants pathogens using N-phosphonomethylglycine
CA2561145C (en) 2004-03-30 2014-10-28 Monsanto Technology Llc Methods for controlling plant pathogens using n-phosphonomethylglycine
SI2308977T2 (sl) * 2004-04-30 2017-07-31 Dow Agrosciences Llc Novi geni z rezistenco na herbicide
CA2588243C (en) * 2004-09-29 2013-06-11 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Corn event das-59122-7 and methods for detection thereof
AP2693A (en) 2005-05-27 2013-07-16 Monsanto Technology Llc Soybean event MON89788 and methods for detection thereof
AU2006276110A1 (en) 2005-07-29 2007-02-08 Monsanto Technology Llc Development of novel germplasm using segregates from transgenic crosses
WO2007024782A2 (en) 2005-08-24 2007-03-01 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions providing tolerance to multiple herbicides and methods of use thereof
ATE542912T1 (de) * 2005-10-03 2012-02-15 Monsanto Technology Llc Transgene pflanzensamen mit erhöhtem lysin
US8334430B2 (en) 2005-10-13 2012-12-18 Monsanto Technology Llc Methods for producing hybrid seed
ES2612119T3 (es) 2005-10-28 2017-05-12 Dow Agrosciences Llc Nuevos genes de resistencia a herbicidas
CA2639900C (en) * 2006-01-23 2014-08-26 Board Of Trustees Of Michigan State University Methods for breeding glyphosate resistant plants and compositions thereof
AR063127A1 (es) * 2006-10-03 2008-12-30 Monsanto Technology Llc Metodo para la produccion de semilla de maiz hibrido y composiciones producidas a partir del mismo
TWM318228U (en) * 2006-11-02 2007-09-01 Datafab Sys Inc Structure for protecting terminal of memory card adapter
BR122017018105B1 (pt) * 2007-11-15 2024-01-23 Monsanto Technology Llc Molécula de dna genômico de soja transgênica
JP5767813B2 (ja) 2008-02-15 2015-08-19 モンサント テクノロジー エルエルシー トランスジェニック事象ｍｏｎ８７７６９に対応するダイズ植物および種子ならびにそれらを検出する方法
EP2247736B1 (en) 2008-02-29 2013-05-15 Monsanto Technology, LLC Corn plant event mon87460 and compositions and methods for detection thereof
EP2113172A1 (de) * 2008-04-28 2009-11-04 Bayer CropScience AG Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
US9078406B2 (en) 2008-08-29 2015-07-14 Monsanto Technology Llc Soybean plant and seed corresponding to transgenic event MON87754 and methods for detection thereof
CN102164476A (zh) 2008-09-29 2011-08-24 孟山都技术公司 大豆转基因事件mon87705及其检测方法
AR075126A1 (es) * 2009-01-29 2011-03-09 Bayer Cropscience Ag Metodo para el mejor uso del potencial de produccion de plantas transgenicas
US10555527B2 (en) 2009-05-18 2020-02-11 Monsanto Technology Llc Use of glyphosate for disease suppression and yield enhancement in soybean
EP3144391A3 (en) 2009-11-23 2017-06-21 Monsanto Technology LLC Transgenic maize event mon 87427 and the relative development scale
BR112012018108A2 (pt) 2010-01-22 2015-10-20 Bayer Ip Gmbh combinações acaricidas e/ou inseticidas de ingredientes ativos
CN101812527B (zh) * 2010-04-20 2014-09-17 北京农业职业学院 一种快速检测6种转基因玉米的方法
MX2012014066A (es) 2010-06-04 2013-01-24 Monsanto Technology Llc Evento de brassica transgenica mon 88302 y metodos para su uso.
MX337137B (es) * 2010-09-15 2016-01-22 Dow Agrosciences Llc Anticuerpos monoclonales y metodos de deteccion de enzimas que confieren resistencia a acido 2, 4-diclorofenoxiacetico.
CN103270173B (zh) 2010-10-12 2017-11-21 孟山都技术公司 对应于转基因事件mon87712的大豆植物和种子及其检测方法
BR112013012080A2 (pt) 2010-11-15 2016-07-19 Bayer Ip Gmbh n-aril pirazol (tio) carboxamidas
BR112013012966A2 (pt) 2010-11-29 2016-08-23 Bayer Ip Gmbh iminas alfa, beta - insaturadas
EP2460407A1 (de) 2010-12-01 2012-06-06 Bayer CropScience AG Wirkstoffkombinationen umfassend Pyridylethylbenzamide und weitere Wirkstoffe
AP3519A (en) 2010-12-01 2016-01-11 Bayer Ip Gmbh Use of fluopyram for controlling nematodes in crops and for increasing yield
CA2823999C (en) 2011-03-10 2020-03-24 Bayer Intellectual Property Gmbh Use of lipochito-oligosaccharide compounds for safeguarding seed safety of treated seeds
CN103491785A (zh) 2011-03-23 2014-01-01 拜耳知识产权有限责任公司 活性化合物组合
US20140051575A1 (en) 2011-04-08 2014-02-20 Juergen Benting Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
EA029682B1 (ru) 2011-04-22 2018-04-30 Байер Интеллекчуал Проперти Гмбх Комбинации активных соединений, содержащие производное соединение (тио)карбоксамида и фунгицидное соединение
PL2720543T3 (pl) 2011-06-14 2019-03-29 Bayer Cropscience Ag Zastosowanie związku enaminokarbonylowego w kombinacji ze środkiem kontroli biologicznej
EP2726493B1 (en) 2011-07-01 2020-10-14 Monsanto Technology LLC Methods and compositions for selective regulation of protein expression
CA2842833A1 (en) 2011-07-28 2013-01-31 Genective Glyphosate tolerant corn event vco-o1981-5 and kit and method for detecting the same
US9265252B2 (en) 2011-08-10 2016-02-23 Bayer Intellectual Property Gmbh Active compound combinations comprising specific tetramic acid derivatives
BR122014004140B8 (pt) 2011-08-22 2023-03-28 Bayer Cropscience Ag Vetor recombinante ou construção recombinante, bem como métodos para obter e produzir uma planta de algodão ou célula vegetal tolerante a um inibidor de hppd, e para cultivar um campo de plantas de algodão
CN102952861B (zh) * 2011-08-26 2014-12-31 深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心 转基因玉米多重pcr-dhplc检测引物及检测方法
EP2561759A1 (en) 2011-08-26 2013-02-27 Bayer Cropscience AG Fluoroalkyl-substituted 2-amidobenzimidazoles and their effect on plant growth
MX347562B (es) 2011-09-12 2017-05-03 Bayer Ip Gmbh Derivados fungicidas de 3-fenil[(heterociclilmetoxi)imino]metil}-1 ,2,4-oxadiazol-5(4h)-ona sustituidos en 4.
UA113967C2 (xx) 2011-09-16 2017-04-10 Застосування 5-феніл- або 5-бензил-2-ізоксазолін-3-карбоксилатів для покращення урожайності рослин
CA2848620C (en) 2011-09-16 2020-03-10 Bayer Intellectual Property Gmbh Use of cyprosulfamide for inducing a growth regulating response in useful plants and increasing the yield of harvested plant organs therefrom
UA114093C2 (xx) 2011-09-16 2017-04-25 Спосіб збільшення врожаю корисних рослин
PL2764101T3 (pl) 2011-10-04 2017-09-29 Bayer Intellectual Property Gmbh RNAi do kontroli grzybów i lęgniowców poprzez hamowanie genu dehydrogenazy sacharopinowej
AR088363A1 (es) 2011-10-18 2014-05-28 Dow Agrosciences Llc MATERIALES Y METODOS PARA LA DETECCION DEL EVENTO pDAB4472-1606 QUE CONTIENE EL GEN ARILOXIALCANOATO DIOXIGENASA (AAD-12) EN PLANTAS
CN102409092B (zh) * 2011-11-17 2013-06-26 四川省农业科学院分析测试中心 转基因玉米nk603结构特异定量pcr精准检测方法
CN102409094B (zh) * 2011-11-17 2013-06-26 四川省农业科学院分析测试中心 转基因玉米nk603品系特异定量pcr精准检测方法
CA2856361A1 (en) 2011-11-21 2013-05-30 Bayer Intellectual Property Gmbh Fungicide n-[(trisubstitutedsilyl)methyl]-carboxamide derivatives
AR089656A1 (es) 2011-11-30 2014-09-10 Bayer Ip Gmbh Derivados de n-bicicloalquil- y n-tricicloalquil-(tio)-carboxamida fungicidas
AU2012357896B9 (en) 2011-12-19 2016-12-15 Bayer Cropscience Ag Use of anthranilic acid diamide derivatives for pest control in transgenic crops
TWI558701B (zh) 2011-12-29 2016-11-21 拜耳知識產權公司 殺真菌之３－［（１，３－噻唑－４－基甲氧基亞胺）（苯基）甲基］－２－經取代之－１，２，４－二唑－５（２ｈ）－酮衍生物
JP6002242B2 (ja) 2011-12-29 2016-10-05 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ 殺菌性３−［（ピリジン−２−イルメトキシイミノ）（フェニル）メチル］−２−置換−１，２，４−オキサジアゾール−５（２ｈ）−オン誘導体
US20150011389A1 (en) 2012-01-25 2015-01-08 Bayer Intellectual Property Gmbh Active Compound Combinations Containing Fluopyram and Biological Control Agent
MX350563B (es) 2012-01-25 2017-09-11 Bayer Ip Gmbh Combinaciones de compuestos activos que contienen fluopiram, bacillus y un agente de control biologico.
US8952229B1 (en) 2012-02-21 2015-02-10 Pioneer Hi Bred International Inc Maize inbred PH1K0H1
US8975469B1 (en) 2012-02-21 2015-03-10 Pioneer Hi Bred International Inc Maize hybrid X13C704HR
PE20190342A1 (es) 2012-02-27 2019-03-07 Bayer Ip Gmbh Combinaciones de compuestos activos
WO2013139949A1 (en) 2012-03-23 2013-09-26 Bayer Intellectual Property Gmbh Compositions comprising a strigolactame compound for enhanced plant growth and yield
US9357778B2 (en) 2012-04-12 2016-06-07 Bayer Cropscience Ag N-acyl-2-(cyclo)alkypyrrolidines and piperidines useful as fungicides
EP2838363A1 (en) 2012-04-20 2015-02-25 Bayer Cropscience AG N-cycloalkyl-n-[(trisubstitutedsilylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives
EP2838893B1 (en) 2012-04-20 2019-03-13 Bayer Cropscience AG N-cycloalkyl-n-[(heterocyclylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives
US9441240B2 (en) 2012-05-08 2016-09-13 Monsanto Technology Llc Corn event MON 87411
EP2662360A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole indanyl carboxamides
EP2662364A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazole tetrahydronaphthyl carboxamides
EP2662362A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazole indanyl carboxamides
US9249104B2 (en) 2012-05-09 2016-02-02 Bayer Cropscience Ag Pyrazole indanyl carboxamides
JP6326043B2 (ja) 2012-05-09 2018-05-16 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト ５−ハロゲノピラゾールインダニルカルボキサミド類
EP2662363A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole biphenylcarboxamides
EP2662370A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole benzofuranyl carboxamides
EP2662361A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazol indanyl carboxamides
AR091104A1 (es) 2012-05-22 2015-01-14 Bayer Cropscience Ag Combinaciones de compuestos activos que comprenden un derivado lipo-quitooligosacarido y un compuesto nematicida, insecticida o fungicida
IN2014DN08912A (cs) 2012-05-30 2015-05-22 Bayer Cropscience Ag
IN2014DN10220A (cs) 2012-05-30 2015-08-07 Bayer Cropscience Ag
CN104507311A (zh) 2012-05-30 2015-04-08 拜尔农作物科学股份公司 包含生物防治剂和杀虫剂的组合物
PL2854547T3 (pl) 2012-05-30 2019-02-28 Bayer Cropscience Ag Kompozycja zawierająca środek kontroli biologicznej i trifloksystrobinę
PL2854548T4 (pl) 2012-05-30 2019-04-30 Bayer Cropscience Ag Kompozycja zawierająca środek do kontroli biologicznej i środek grzybobójczy wybrany z metalaksylu- i metalalksylu-M
CN104507315A (zh) 2012-05-30 2015-04-08 拜尔农作物科学股份公司 包含生物防治剂和选自呼吸链复合物i或ii抑制剂的杀真菌剂的组合物
WO2013178658A1 (en) 2012-05-30 2013-12-05 Bayer Cropscience Ag Compositions comprising a biological control agent and an insecticide
ES2698061T3 (es) 2012-05-30 2019-01-30 Bayer Cropscience Ag Composición que comprende un agente de control biológico y fluopicolida
CN104602520A (zh) 2012-07-31 2015-05-06 拜尔农作物科学股份公司 包括杀虫萜烯混合物和杀虫剂的组合物
WO2014043435A1 (en) 2012-09-14 2014-03-20 Bayer Cropscience Lp Hppd variants and methods of use
EP2719280A1 (en) 2012-10-11 2014-04-16 Bayer CropScience AG Use of N-phenylethylpyrazole carboxamide derivatives or salts thereof for resistance management of phytopathogenic fungi
CA2888556C (en) 2012-10-19 2020-07-07 Bayer Cropscience Ag Method of plant growth promotion using carboxamide derivatives
EA026839B1 (ru) 2012-10-19 2017-05-31 Байер Кропсайенс Аг Комбинации активных соединений, содержащие карбоксамидные соединения
MX363731B (es) 2012-10-19 2019-04-01 Bayer Cropscience Ag Metodo para tratar plantas frente a hongos resistentes a fungicidas usando derivados de carboxamida o tiocarboxamida.
EP2908642B1 (en) 2012-10-19 2022-02-23 Bayer Cropscience AG Method for enhancing tolerance to abiotic stress in plants by using carboxamide or thiocarboxamide derivatives
EP2735231A1 (en) 2012-11-23 2014-05-28 Bayer CropScience AG Active compound combinations
MX2015006327A (es) 2012-11-30 2015-10-05 Bayer Cropscience Ag Mezclas fungicidas ternarias.
CN104918493B (zh) 2012-11-30 2018-02-06 拜尔农作物科学股份公司 三元杀真菌和杀虫混合物
UA117820C2 (uk) 2012-11-30 2018-10-10 Байєр Кропсайєнс Акцієнгезелльшафт Подвійна фунгіцидна або пестицидна суміш
WO2014083031A2 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Bayer Cropscience Ag Binary pesticidal and fungicidal mixtures
JP6367215B2 (ja) 2012-11-30 2018-08-01 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト 二成分殺菌剤混合物
WO2014086750A2 (en) 2012-12-03 2014-06-12 Bayer Cropscience Ag Composition comprising a biological control agent and an insecticide
MX2015006500A (es) 2012-12-03 2015-08-14 Bayer Cropsciense Ag Composicion que comprende un agente de control biologico y un fungicida.
WO2014086758A2 (en) 2012-12-03 2014-06-12 Bayer Cropscience Ag Composition comprising a biological control agent and an insecticide
WO2014086753A2 (en) 2012-12-03 2014-06-12 Bayer Cropscience Ag Composition comprising biological control agents
US9730455B2 (en) 2012-12-03 2017-08-15 Bayer Cropscience Ag Composition comprising a biological control agent and an insecticide
PT3318129T (pt) 2012-12-03 2020-02-18 Bayer Cropscience Ag Composição compreendendo uma combinação de paecilomyces lilacinus e fluopiram
MX2015006946A (es) 2012-12-03 2015-09-08 Bayer Cropscience Ag Composicion que comprende agentes de control biologico.
MX2015006578A (es) 2012-12-03 2015-08-05 Bayer Cropscience Ag Composicion que comprende un agente de control biologico y un fungicida.
WO2014090765A1 (en) 2012-12-12 2014-06-19 Bayer Cropscience Ag Use of 1-[2-fluoro-4-methyl-5-(2,2,2-trifluoroethylsulfinyl)phenyl]-5-amino-3-trifluoromethyl)-1 h-1,2,4 tfia zole for controlling nematodes in nematode-resistant crops
AR093996A1 (es) 2012-12-18 2015-07-01 Bayer Cropscience Ag Combinaciones bactericidas y fungicidas binarias
US9428459B2 (en) 2012-12-19 2016-08-30 Bayer Cropscience Ag Difluoromethyl-nicotinic- tetrahydronaphtyl carboxamides
AU2014214634A1 (en) 2013-02-11 2015-08-06 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising a streptomyces-based biological control agent and an insecticide
MX2015010313A (es) 2013-02-11 2015-11-18 Bayer Cropscience Lp Composiciones que comprenden gougerotina y por lo menos un agente de control biologico.
WO2014124369A1 (en) 2013-02-11 2014-08-14 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising a streptomyces-based biological control agent and a fungicide
US8916744B1 (en) 2013-02-13 2014-12-23 Pioneer Hi Bred International Inc Maize inbred PH24DV
US8921672B1 (en) 2013-02-13 2014-12-30 Pioneer Hi Bred International Inc Maize inbred PH24DS
US8907159B1 (en) 2013-02-13 2014-12-09 Pioneer Hi Bred International Inc Maize inbred PH24DM
JP2016516397A (ja) 2013-03-07 2016-06-09 アテニックス・コーポレーションＡｔｈｅｎｉｘ Ｃｏｒｐｏｒａｔｏｎ 毒素遺伝子及びその使用方法
EP2986117A1 (en) 2013-04-19 2016-02-24 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Binary insecticidal or pesticidal mixture
CN105555135B (zh) 2013-04-19 2018-06-15 拜耳作物科学股份公司 涉及邻苯二甲酰胺衍生物应用的用于改善对转基因植物生产潜能的利用的方法
TW201507722A (zh) 2013-04-30 2015-03-01 Bayer Cropscience Ag 做為殺線蟲劑及殺體內寄生蟲劑的ｎ－（２－鹵素－２－苯乙基）－羧醯胺類
WO2014177514A1 (en) 2013-04-30 2014-11-06 Bayer Cropscience Ag Nematicidal n-substituted phenethylcarboxamides
WO2014206953A1 (en) 2013-06-26 2014-12-31 Bayer Cropscience Ag N-cycloalkyl-n-[(bicyclylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives
EP3054764B1 (en) 2013-10-09 2018-12-05 Monsanto Technology LLC Transgenic corn event mon87403 and methods for detection thereof
AR097995A1 (es) 2013-10-14 2016-04-27 Syngenta Participations Ag Método para sembrar filas de cultivos
CN105793243A (zh) 2013-12-05 2016-07-20 拜耳作物科学股份公司 N-环烷基-n-{[2-(1-取代的环烷基)苯基]亚甲基}-(硫代)甲酰胺衍生物
TW201607929A (zh) 2013-12-05 2016-03-01 拜耳作物科學公司 Ｎ－環烷基－ｎ－｛［２－（１－經取代環烷基）苯基］亞甲基｝－（硫代）甲醯胺衍生物
EP2885970A1 (en) 2013-12-21 2015-06-24 Bayer CropScience AG Fungicide compositions comprising compound I, at least one succinate dehydrogenase (SDH) inhibitor and at least one triazole fungicide
EP3117003B1 (en) 2014-03-11 2019-10-30 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Hppd variants and methods of use
WO2015160620A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising ningnanmycin and an insecticide
WO2015160618A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising ningnanmycin and a biological control agent
WO2015160619A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising ningnanmycin and a fungicide
PE20220012A1 (es) 2014-10-15 2022-01-11 Monsanto Technology Llc Genes de tolerancia a herbicidas y metodos para usar los mismos
CN115094081A (zh) 2014-11-14 2022-09-23 巴斯夫植物科学有限公司 增加种子油中生育酚含量的材料和方法
CN104745708A (zh) * 2015-04-02 2015-07-01 湖南省食品安全生产工程技术研究中心 一种转基因玉米nk603品系的lamp检测试剂盒及检测方法
CN107531676A (zh) 2015-04-13 2018-01-02 拜耳作物科学股份公司 N‑环烷基‑n‑(双杂环基亚乙基)‑(硫代)羧酰胺衍生物
CN104878095B (zh) * 2015-04-30 2018-10-26 北京大北农科技集团股份有限公司 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9858的核酸序列及其检测方法
CN104878090B (zh) * 2015-04-30 2019-01-15 北京大北农科技集团股份有限公司 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9877的核酸序列及其检测方法
CN104830847B (zh) * 2015-04-30 2019-01-11 北京大北农科技集团股份有限公司 用于检测玉米植物dbn9936的核酸序列及其检测方法
CN104878096B (zh) * 2015-04-30 2019-01-15 北京大北农科技集团股份有限公司 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9868的核酸序列及其检测方法
CN104830846B (zh) * 2015-04-30 2018-10-30 北京大北农科技集团股份有限公司 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9898的核酸序列及其检测方法
CN104830845B (zh) * 2015-04-30 2018-10-30 北京大北农科技集团股份有限公司 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9878的核酸序列及其检测方法
CN104846084B (zh) * 2015-04-30 2019-02-01 北京大北农科技集团股份有限公司 用于检测玉米植物dbn9927的核酸序列及其检测方法
CN104878094B (zh) * 2015-04-30 2019-01-15 北京大北农科技集团股份有限公司 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9888的核酸序列及其检测方法
EP3097782A1 (en) 2015-05-29 2016-11-30 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Methods for controlling phytopathogenic nematodes by combination of fluopyram and biological control agents
US10829779B2 (en) 2015-07-15 2020-11-10 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Use of elongator genes to improve plant disease resistance
US10597674B2 (en) 2015-09-11 2020-03-24 Basf Agricultural Solutions Seed, Us Llc HPPD variants and methods of use
CN105331725B (zh) * 2015-11-30 2018-04-24 中国农业大学 转maroACC基因抗除草剂玉米CC-2的侧翼序列及其应用
CA3032030A1 (en) 2016-07-29 2018-02-01 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Active compound combinations and methods to protect the propagation material of plants
US11091772B2 (en) 2016-11-23 2021-08-17 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC AXMI669 and AXMI991 toxin genes and methods for their use
BR112019011293A2 (pt) 2016-12-19 2019-10-08 Basf Se compostos de fórmula i, intermediários, composição agroquímica, uso e método para combater fungos nocivos fitopatogênicos
US11286498B2 (en) 2017-01-18 2022-03-29 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Use of BP005 for the control of plant pathogens
UY37571A (es) 2017-01-18 2018-08-31 Bayer Cropscience Lp Gen de toxina bp005 y procedimientos para su uso
US11425910B2 (en) 2017-02-21 2022-08-30 Basf Se Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2018165091A1 (en) 2017-03-07 2018-09-13 Bayer Cropscience Lp Hppd variants and methods of use
US20200045974A1 (en) 2017-04-07 2020-02-13 Basf Se Substituted Oxadiazoles for Combating Phytopathogenic Fungi
WO2018188962A1 (en) 2017-04-11 2018-10-18 Basf Se Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2018195256A1 (en) 2017-04-21 2018-10-25 Bayer Cropscience Lp Method of improving crop safety
WO2018202491A1 (en) 2017-05-04 2018-11-08 Basf Se Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
JP7160487B2 (ja) 2017-05-04 2022-10-25 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 植物病原菌を駆除するための置換５－（ハロアルキル）－５－ヒドロキシ－イソオキサゾール
WO2018219797A1 (en) 2017-06-02 2018-12-06 Basf Se Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
EP3642187A1 (en) 2017-06-19 2020-04-29 Basf Se 2-[[5-(trifluoromethyl)-1,2,4-oxadiazol-3-yl]aryloxy](thio)acetamides for combating phytopathogenic fungi
WO2019025250A1 (en) 2017-08-04 2019-02-07 Basf Se SUBSTITUTED TRIFLUOROMETHYLOXADIAZOLES FOR COMBATING PHYTOPATHOGENIC FUNGI
WO2019038042A1 (en) 2017-08-21 2019-02-28 Basf Se SUBSTITUTED TRIFLUOROMETHYLOXADIAZOLES FOR THE CONTROL OF PHYTOPATHOGENIC FUNGI
US11076596B2 (en) 2017-09-18 2021-08-03 Basf Se Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2019068811A1 (en) 2017-10-06 2019-04-11 Bayer Aktiengesellschaft COMPOSITIONS COMPRISING FLUOPYRAM AND TIOXAZAFENE
WO2019083810A1 (en) 2017-10-24 2019-05-02 Basf Se IMPROVING HERBICIDE TOLERANCE FOR 4-HYDROXYPHENYLPYRUVATE DIOXYGENASE (HPPD) INHIBITORS BY NEGATIVE REGULATION OF HPPD EXPRESSION IN SOYBEANS
WO2019083808A1 (en) 2017-10-24 2019-05-02 Basf Se IMPROVING HERBICIDE TOLERANCE AGAINST HPPD INHIBITORS BY REGULATION OF PUTATIVE REDUCED 4-HYDROXYPHENYLPYRUVATE REDUCES IN SOYBEANS
WO2019101511A1 (en) 2017-11-23 2019-05-31 Basf Se Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2019121143A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Basf Se Substituted cyclopropyl derivatives
WO2019137995A1 (en) 2018-01-11 2019-07-18 Basf Se Novel pyridazine compounds for controlling invertebrate pests
WO2019145221A1 (en) 2018-01-29 2019-08-01 BASF Agro B.V. New agrochemical formulations
WO2019154665A1 (en) 2018-02-07 2019-08-15 Basf Se New pyridine carboxamides
CA3088722A1 (en) 2018-02-07 2019-08-15 Basf Se New pyridine carboxamides
WO2019166257A1 (en) 2018-03-01 2019-09-06 BASF Agro B.V. Fungicidal compositions of mefentrifluconazole
WO2019219464A1 (en) 2018-05-15 2019-11-21 Basf Se Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2019224092A1 (en) 2018-05-22 2019-11-28 Basf Se Pesticidally active c15-derivatives of ginkgolides
WO2019226938A1 (en) 2018-05-23 2019-11-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture Fruit-specific promoters
WO2019233863A1 (de) 2018-06-04 2019-12-12 Bayer Aktiengesellschaft Herbizid wirksame bizyklische benzoylpyrazole
EP3613736A1 (en) 2018-08-22 2020-02-26 Basf Se Substituted glutarimide derivatives
EP3628158A1 (en) 2018-09-28 2020-04-01 Basf Se Pesticidal mixture comprising a mesoionic compound and a biopesticide
JP7443357B2 (ja) 2018-10-23 2024-03-05 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 三環式の殺有害生物化合物
EP3643705A1 (en) 2018-10-24 2020-04-29 Basf Se Pesticidal compounds
EP3670501A1 (en) 2018-12-17 2020-06-24 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds as fungicides
EP3908584B1 (en) 2019-01-11 2023-04-26 Basf Se Crystalline forms of 1-(1,2-dimethylpropyl)-n-ethyl-5-methyl-n-pyridazin-4-yl-pyrazole-4-carboxamide
EP3696177A1 (en) 2019-02-12 2020-08-19 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
CA3139524A1 (en) 2019-05-10 2020-11-19 Bayer Cropscience Lp Active compound combinations
CN113923987A (zh) 2019-05-29 2022-01-11 巴斯夫欧洲公司 用于防除动物害虫的介离子咪唑鎓化合物和衍生物
EP3769623A1 (en) 2019-07-22 2021-01-27 Basf Se Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests
WO2020244970A1 (en) 2019-06-06 2020-12-10 Basf Se New carbocyclic pyridine carboxamides
AU2020286573A1 (en) 2019-06-06 2021-12-23 Basf Se Fungicidal n-(pyrid-3-yl)carboxamides
WO2020244969A1 (en) 2019-06-06 2020-12-10 Basf Se Pyridine derivatives and their use as fungicides
EP3766879A1 (en) 2019-07-19 2021-01-20 Basf Se Pesticidal pyrazole derivatives
CN114341116A (zh) 2019-07-22 2022-04-12 拜耳公司 5-氨基取代的吡唑和三唑作为杀虫剂
AU2020317609A1 (en) 2019-07-23 2022-02-24 Bayer Aktiengesellschaft Novel heteroaryl-triazole compounds as pesticides
JP2022541807A (ja) 2019-07-23 2022-09-27 バイエル・アクチエンゲゼルシヤフト 殺有害生物剤としての新規なヘテロアリール－トリアゾール化合物
WO2021022069A1 (en) 2019-08-01 2021-02-04 Bayer Cropscience Lp Method of improving cold stress tolerance and crop safety
EP3701796A1 (en) 2019-08-08 2020-09-02 Bayer AG Active compound combinations
WO2021058659A1 (en) 2019-09-26 2021-04-01 Bayer Aktiengesellschaft Rnai-mediated pest control
WO2021064075A1 (en) 2019-10-02 2021-04-08 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations comprising fatty acids
WO2021063735A1 (en) 2019-10-02 2021-04-08 Basf Se New bicyclic pyridine derivatives
WO2021063736A1 (en) 2019-10-02 2021-04-08 Basf Se Bicyclic pyridine derivatives
CN114867529A (zh) 2019-10-09 2022-08-05 拜耳公司 作为农药的新的杂芳基三唑化合物
AR120176A1 (es) 2019-10-09 2022-02-02 Bayer Ag Compuestos de heteroarilo-triazol como pesticidas
WO2021089673A1 (de) 2019-11-07 2021-05-14 Bayer Aktiengesellschaft Substituierte sulfonylamide zur bekämpfung tierischer schädlinge
WO2021097162A1 (en) 2019-11-13 2021-05-20 Bayer Cropscience Lp Beneficial combinations with paenibacillus
TW202134226A (zh) 2019-11-18 2021-09-16 德商拜耳廠股份有限公司 作為殺蟲劑之新穎雜芳基-三唑化合物
WO2021099271A1 (en) 2019-11-18 2021-05-27 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations comprising fatty acids
TW202136248A (zh) 2019-11-25 2021-10-01 德商拜耳廠股份有限公司 作為殺蟲劑之新穎雜芳基-三唑化合物
UY39058A (es) 2020-01-31 2021-08-31 Pairwise Plants Services Inc Suppresión de la respuesta de evasión a la sombra en plantas
EP4107151A1 (en) 2020-02-18 2022-12-28 Bayer Aktiengesellschaft Heteroaryl-triazole compounds as pesticides
EP3708565A1 (en) 2020-03-04 2020-09-16 Bayer AG Pyrimidinyloxyphenylamidines and the use thereof as fungicides
CN115697045A (zh) 2020-04-16 2023-02-03 成对植物服务股份有限公司 控制分生组织大小以改良作物的方法
WO2021209490A1 (en) 2020-04-16 2021-10-21 Bayer Aktiengesellschaft Cyclaminephenylaminoquinolines as fungicides
AU2021260029A1 (en) 2020-04-21 2022-11-24 Bayer Aktiengesellschaft 2-(het)aryl-substituted condensed heterocyclic derivatives as pest control agents
EP3903582A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ii
EP3903581A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors i
EP3903583A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors iii
EP3903584A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors iv
BR112022021631A2 (pt) 2020-04-28 2022-12-06 Basf Se Compostos, composição, métodos para combater ou controlar pragas invertebradas, para proteger plantas em crescimento e para tratar ou proteger um animal, semente e uso de um composto
TW202208347A (zh) 2020-05-06 2022-03-01 德商拜耳廠股份有限公司 作為殺蟲劑之新穎雜芳基三唑化合物
JP2023538713A (ja) 2020-05-06 2023-09-11 バイエル、アクチエンゲゼルシャフト 殺真菌性化合物としてのピリジン（チオ）アミド
US20230180756A1 (en) 2020-05-12 2023-06-15 Bayer Aktiengesellschaft Triazine and pyrimidine (thio)amides as fungicidal compounds
EP3909950A1 (en) 2020-05-13 2021-11-17 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
BR112022023550A2 (pt) 2020-05-19 2023-01-03 Bayer Cropscience Ag (tio)amidas azabicíclicas como compostos fungicidas
CN116096230A (zh) 2020-06-02 2023-05-09 成对植物服务股份有限公司 控制分生组织大小以改良作物的方法
WO2021245087A1 (en) 2020-06-04 2021-12-09 Bayer Aktiengesellschaft Heterocyclyl pyrimidines and triazines as novel fungicides
EP3945089A1 (en) 2020-07-31 2022-02-02 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors v
BR112022024413A2 (pt) 2020-06-10 2023-02-07 Bayer Ag Heterociclos substituídos com azabiciclila como fungicidas inovadores
WO2021249800A1 (en) 2020-06-10 2021-12-16 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds as fungicides
UY39278A (es) 2020-06-17 2022-01-31 Pairwise Plants Services Inc Métodos para el control del tamaño del meristemo para la mejora de cultivos
CN116157017A (zh) 2020-06-18 2023-05-23 拜耳公司 作为杀菌剂用于作物保护的3-(哒嗪-4-基)-5,6-二氢-4h-1,2,4-噁二嗪衍生物
BR112022025344A2 (pt) 2020-06-18 2023-01-03 Bayer Ag Composição para uso na agricultura
WO2021255091A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 Bayer Aktiengesellschaft 1,3,4-oxadiazoles and their derivatives as fungicides
UY39276A (es) 2020-06-19 2022-01-31 Bayer Ag Uso de compuestos de 1,3,4–oxadiazol–2–ilpirimidina para controlar microorganismos fitopatógenos, métodos de uso y composiciones.
WO2021255089A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 Bayer Aktiengesellschaft 1,3,4-oxadiazole pyrimidines and 1,3,4-oxadiazole pyridines as fungicides
UY39275A (es) 2020-06-19 2022-01-31 Bayer Ag 1,3,4-oxadiazol pirimidinas como fungicidas, procesos e intermediarios para su preparación, métodos de uso y usos de los mismos
EP3929189A1 (en) 2020-06-25 2021-12-29 Bayer Animal Health GmbH Novel heteroaryl-substituted pyrazine derivatives as pesticides
BR112022026904A2 (pt) 2020-07-02 2023-01-24 Bayer Ag Derivados de heterocicleno como agentes de controle de pragas
CN111826387A (zh) * 2020-07-07 2020-10-27 黑龙江省农业科学院农产品质量安全研究所 一种转基因玉米品系鉴定阳性质粒分子
EP3939961A1 (en) 2020-07-16 2022-01-19 Basf Se Strobilurin type compounds and their use for combating phytopathogenic fungi
WO2022017836A1 (en) 2020-07-20 2022-01-27 BASF Agro B.V. Fungicidal compositions comprising (r)-2-[4-(4-chlorophenoxy)-2-(trifluoromethyl)phenyl]-1- (1,2,4-triazol-1-yl)propan-2-ol
EP3970494A1 (en) 2020-09-21 2022-03-23 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors viii
WO2022033991A1 (de) 2020-08-13 2022-02-17 Bayer Aktiengesellschaft 5-amino substituierte triazole als schädlingsbekämpfungsmittel
WO2022053453A1 (de) 2020-09-09 2022-03-17 Bayer Aktiengesellschaft Azolcarboxamide als schädlingsbekämpfungsmittel
WO2022058327A1 (en) 2020-09-15 2022-03-24 Bayer Aktiengesellschaft Substituted ureas and derivatives as new antifungal agents
EP3974414A1 (de) 2020-09-25 2022-03-30 Bayer AG 5-amino substituierte pyrazole und triazole als schädlingsbekämpfungsmittel
CN116209355A (zh) 2020-10-27 2023-06-02 巴斯夫农业公司 包含氯氟醚菌唑的组合物
CN112266419B (zh) * 2020-10-29 2023-02-03 中国科学院微生物研究所 一种人工合成的抗除草剂蛋白
WO2022090071A1 (en) 2020-11-02 2022-05-05 Basf Se Use of mefenpyr-diethyl for controlling phytopathogenic fungi
WO2022090069A1 (en) 2020-11-02 2022-05-05 Basf Se Compositions comprising mefenpyr-diethyl
WO2022106304A1 (en) 2020-11-23 2022-05-27 BASF Agro B.V. Compositions comprising mefentrifluconazole
EP4259627A1 (en) 2020-12-14 2023-10-18 Basf Se Sulfoximine pesticides
EP3915971A1 (en) 2020-12-16 2021-12-01 Bayer Aktiengesellschaft Phenyl-s(o)n-phenylamidines and the use thereof as fungicides
WO2022129188A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft 1,2,4-oxadiazol-3-yl pyrimidines as fungicides
JP2023554063A (ja) 2020-12-18 2023-12-26 バイエル・アクチエンゲゼルシヤフト 作物における耐性植物病原性真菌を防除するためのｄｈｏｄｈ阻害剤の使用
WO2022129196A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft Heterobicycle substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides
WO2022129190A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft (hetero)aryl substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides
EP4036083A1 (de) 2021-02-02 2022-08-03 Bayer Aktiengesellschaft 5-oxy substituierte hetereozyklen, als schädlingsbekämpfungsmittel
EP4043444A1 (en) 2021-02-11 2022-08-17 Basf Se Substituted isoxazoline derivatives
US20220259612A1 (en) 2021-02-11 2022-08-18 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying cytokinin oxidase levels in plants
WO2022182834A1 (en) 2021-02-25 2022-09-01 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying root architecture in plants
WO2022207494A1 (en) 2021-03-30 2022-10-06 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
WO2022207496A1 (en) 2021-03-30 2022-10-06 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
IL308130A (en) 2021-05-03 2023-12-01 Basf Se Additives to improve the effectiveness of pesticides of exterminating microorganisms
KR20240005019A (ko) 2021-05-06 2024-01-11 바이엘 악티엔게젤샤프트 알킬아미드 치환된, 환형 이미다졸 및 살충제로서의 이의 용도
WO2022238391A1 (de) 2021-05-12 2022-11-17 Bayer Aktiengesellschaft 2-(het)aryl-substituierte kondensierte heterocyclen-derivate als schädlingsbekämpfungsmittel
EP4091451A1 (en) 2021-05-17 2022-11-23 BASF Agro B.V. Compositions comprising mefentrifluconazole
CA3218889A1 (en) 2021-05-18 2022-11-24 Wassilios Grammenos New substituted pyridines as fungicides
EP4341258A1 (en) 2021-05-18 2024-03-27 Basf Se New substituted pyridines as fungicides
WO2022243109A1 (en) 2021-05-18 2022-11-24 Basf Se New substituted quinolines as fungicides
US20220411813A1 (en) 2021-06-17 2022-12-29 Pairwise Plants Services, Inc. Modification of growth regulating factor family transcription factors in soybean
UY39827A (es) 2021-06-24 2023-01-31 Pairwise Plants Services Inc Modificación de genes de ubiquitina ligasa e3 hect para mejorar los rasgos de rendimiento
WO2023278651A1 (en) 2021-07-01 2023-01-05 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for enhancing root system development
EP4119547A1 (en) 2021-07-12 2023-01-18 Basf Se Triazole compounds for the control of invertebrate pests
WO2023011958A1 (en) 2021-08-02 2023-02-09 Basf Se (3-pirydyl)-quinazoline
WO2023011957A1 (en) 2021-08-02 2023-02-09 Basf Se (3-quinolyl)-quinazoline
US20230078990A1 (en) 2021-08-12 2023-03-16 Pairwise Plants Services, Inc. Modification of brassinosteroid receptor genes to improve yield traits
KR20240039209A (ko) 2021-08-13 2024-03-26 바이엘 악티엔게젤샤프트 활성 화합물 조합물 및 이를 포함하는 살진균제 조성물
US20230063927A1 (en) 2021-08-17 2023-03-02 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying cytokinin receptor histidine kinase genes in plants
EP4140986A1 (en) 2021-08-23 2023-03-01 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
IL310966A (en) 2021-08-25 2024-04-01 Bayer Ag Pyrazyl-triazole as pesticidal compounds
EP4140995A1 (en) 2021-08-27 2023-03-01 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
CA3230167A1 (en) 2021-08-30 2023-03-09 Pairwise Plants Services, Inc. Modification of ubiquitin binding peptidase genes in plants for yield trait improvement
AR126938A1 (es) 2021-09-02 2023-11-29 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para mejorar la arquitectura de las plantas y los rasgos de rendimiento
EP4144739A1 (de) 2021-09-02 2023-03-08 Bayer Aktiengesellschaft Anellierte pyrazole als schädlingsbekämpfungsmittel
EP4151631A1 (en) 2021-09-20 2023-03-22 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
WO2023049720A1 (en) 2021-09-21 2023-03-30 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for reducing pod shatter in canola
US20230108968A1 (en) 2021-10-04 2023-04-06 Pairwise Plants Services, Inc. Methods for improving floret fertility and seed yield
WO2023060152A2 (en) 2021-10-07 2023-04-13 Pairwise Plants Services, Inc. Methods for improving floret fertility and seed yield
WO2023072671A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ix
WO2023072670A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors x
WO2023078915A1 (en) 2021-11-03 2023-05-11 Bayer Aktiengesellschaft Bis(hetero)aryl thioether (thio)amides as fungicidal compounds
WO2023099445A1 (en) 2021-11-30 2023-06-08 Bayer Aktiengesellschaft Bis(hetero)aryl thioether oxadiazines as fungicidal compounds
EP4194453A1 (en) 2021-12-08 2023-06-14 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
AR127904A1 (es) 2021-12-09 2024-03-06 Pairwise Plants Services Inc Métodos para mejorar la fertilidad de floretes y el rendimiento de semillas
EP4198033A1 (en) 2021-12-14 2023-06-21 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
EP4198023A1 (en) 2021-12-16 2023-06-21 Basf Se Pesticidally active thiosemicarbazone compounds
WO2023147526A1 (en) 2022-01-31 2023-08-03 Pairwise Plants Services, Inc. Suppression of shade avoidance response in plants
WO2023148028A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Globachem Nv Methods and compositions for controlling pests
WO2023148030A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Globachem Nv Methods and compositions for controlling pests in corn
WO2023156402A1 (en) 2022-02-17 2023-08-24 Basf Se Pesticidally active thiosemicarbazone compounds
WO2023168217A1 (en) 2022-03-02 2023-09-07 Pairwise Plants Services, Inc. Modification of brassinosteroid receptor genes to improve yield traits
EP4238971A1 (en) 2022-03-02 2023-09-06 Basf Se Substituted isoxazoline derivatives
WO2023192838A1 (en) 2022-03-31 2023-10-05 Pairwise Plants Services, Inc. Early flowering rosaceae plants with improved characteristics
WO2023196886A1 (en) 2022-04-07 2023-10-12 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving resistance to fusarium head blight
WO2023205714A1 (en) 2022-04-21 2023-10-26 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving yield traits
US20230348922A1 (en) 2022-05-02 2023-11-02 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for enhancing yield and disease resistance
WO2023213626A1 (en) 2022-05-03 2023-11-09 Bayer Aktiengesellschaft Use of (5s)-3-[3-(3-chloro-2-fluorophenoxy)-6-methylpyridazin-4-yl]-5-(2-chloro-4-methylbenzyl)-5,6-dihydro-4h-1,2,4-oxadiazine for controlling unwanted microorganisms
WO2023213670A1 (en) 2022-05-03 2023-11-09 Bayer Aktiengesellschaft Crystalline forms of (5s)-3-[3-(3-chloro-2-fluorophenoxy)-6-methylpyridazin-4-yl]-5-(2-chloro-4-methylbenzyl)-5,6-dihydro-4h-1,2,4-oxadiazine
WO2023215809A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying root architecture and/or improving plant yield traits
US20230416771A1 (en) 2022-06-27 2023-12-28 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying shade avoidance in plants
WO2024006791A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement
US20240002873A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement
WO2024028243A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 Basf Se Pyrazolo pesticidal compounds
WO2024030984A1 (en) 2022-08-04 2024-02-08 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving yield traits
WO2024036240A1 (en) 2022-08-11 2024-02-15 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement
US20240090466A1 (en) 2022-09-08 2024-03-21 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving yield characteristics in plants
EP4342885A1 (en) 2022-09-20 2024-03-27 Basf Se N-(3-(aminomethyl)-phenyl)-5-(4-phenyl)-5-(trifluoromethyl)-4,5-dihydroisoxazol-3-amine derivatives and similar compounds as pesticides
WO2024068518A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-heteroaryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
EP4295688A1 (en) 2022-09-28 2023-12-27 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combination
WO2024068519A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
WO2024068520A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
WO2024068517A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998044140A1 (en) * 1997-04-03 1998-10-08 Dekalb Genetics Corporation Glyphosate resistant maize lines
US5948956A (en) * 1997-10-16 1999-09-07 Oms Investments, Inc. Transgenic plants and method for node segment transformation

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US5164316A (en) 1987-01-13 1992-11-17 The University Of British Columbia DNA construct for enhancing the efficiency of transcription
US5641876A (en) 1990-01-05 1997-06-24 Cornell Research Foundation, Inc. Rice actin gene and promoter
US5633435A (en) 1990-08-31 1997-05-27 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthases
US5593874A (en) 1992-03-19 1997-01-14 Monsanto Company Enhanced expression in plants
US5362865A (en) * 1993-09-02 1994-11-08 Monsanto Company Enhanced expression in plants using non-translated leader sequences
US5853973A (en) * 1995-04-20 1998-12-29 American Cyanamid Company Structure based designed herbicide resistant products
US6040497A (en) * 1997-04-03 2000-03-21 Dekalb Genetics Corporation Glyphosate resistant maize lines
WO2000029596A1 (en) * 1998-11-17 2000-05-25 Monsanto Company Phosphonate metabolizing plants
BRPI0100752B1 (pt) * 2000-06-22 2015-10-13 Monsanto Co moléculas e pares de moléculas de dna, processos para detectar molécula de dna e para criar um traço tolerante a glifosato em plantas de milho, bem como kit de detecção de dna
US6689880B2 (en) * 2000-09-29 2004-02-10 Monsanto Technology Llc DNA molecule for detecting glyphosate tolerant wheat plant 33391 and progeny thereof
US7569747B2 (en) * 2002-12-05 2009-08-04 Monsanto Technology Llc Bentgrass event ASR-368 and compositions and methods for detection thereof

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998044140A1 (en) * 1997-04-03 1998-10-08 Dekalb Genetics Corporation Glyphosate resistant maize lines
US5948956A (en) * 1997-10-16 1999-09-07 Oms Investments, Inc. Transgenic plants and method for node segment transformation

Also Published As

Publication number Publication date
CA2349841A1 (en) 2001-12-22
PL348225A1 (en) 2002-01-02
PL199928B1 (pl) 2008-11-28
EP1582592A1 (en) 2005-10-05
US20100017902A1 (en) 2010-01-21
EP2210951B1 (en) 2016-01-06
DE60142092D1 (de) 2010-06-17
AR053231A2 (es) 2007-04-25
SI1167531T1 (sl) 2006-10-31
US20070292854A1 (en) 2007-12-20
US20170327838A1 (en) 2017-11-16
HU0800015D0 (en) 2008-03-28
US20140304849A1 (en) 2014-10-09
DE60118660T2 (de) 2007-03-29
CZ20012203A3 (cs) 2002-02-13
ES2343252T3 (es) 2010-07-27
EP2210951A3 (en) 2011-01-05
HU226193B1 (en) 2008-06-30
EP1167531B1 (en) 2006-04-12
RS49990B (sr) 2008-09-29
CY1106109T1 (el) 2011-06-08
ATE323168T1 (de) 2006-04-15
SI2210951T1 (sl) 2016-04-29
AR031665A1 (es) 2003-10-01
CN101186918A (zh) 2008-05-28
PT1167531E (pt) 2006-07-31
BRPI0100752B1 (pt) 2015-10-13
HUP0102569A2 (hu) 2003-08-28
BR0100752A (pt) 2002-02-13
CZ299722B6 (cs) 2008-10-29
AR065690A2 (es) 2009-06-24
ES2564464T3 (es) 2016-03-22
CA2349841C (en) 2012-12-11
SI1582592T1 (sl) 2010-08-31
EP1167531A1 (en) 2002-01-02
AR066163A2 (es) 2009-07-29
BR122013026754B1 (pt) 2018-02-27
CN1332246A (zh) 2002-01-23
ATE466945T1 (de) 2010-05-15
US8722969B2 (en) 2014-05-13
DK2210951T3 (en) 2016-03-21
DK1167531T3 (da) 2006-08-14
US20070056056A1 (en) 2007-03-08
US6825400B2 (en) 2004-11-30
BG65315B1 (bg) 2008-01-31
CN100350043C (zh) 2007-11-21
CY1110083T1 (el) 2015-01-14
EP1582592B1 (en) 2010-05-05
ID30575A (id) 2001-12-27
US9701980B2 (en) 2017-07-11
US20120329654A1 (en) 2012-12-27
DE60118660D1 (de) 2006-05-24
PT1582592E (pt) 2010-06-16
EP2210951A2 (en) 2010-07-28
US20040139493A1 (en) 2004-07-15
DK1582592T3 (da) 2010-08-16
ES2261330T3 (es) 2006-11-16
US7193071B2 (en) 2007-03-20
UY26788A1 (es) 2001-10-25
BG105637A (en) 2002-04-30
US8273959B2 (en) 2012-09-25
HU0102569D0 (en) 2001-08-28
US7582434B2 (en) 2009-09-01
MXPA01006407A (es) 2004-05-11
US20020013960A1 (en) 2002-01-31
HU230814B1 (hu) 2018-06-28
YU43701A (sh) 2003-12-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ305949B6 (cs) Kukuřičná rostlina PV-ZMGT32(nk) nebo její část, tolerantní ke glyfosfátu, její potomstvo a její semena
JP6167075B2 (ja) ダイズ事象ｍｏｎ８９７８８およびその検出方法
US7381861B2 (en) Cotton event MON 88913 and compositions and methods for detection thereof
AU2002215363A1 (en) Cotton event PV-GHGT07(1445) and compositions and methods for detection thereof
WO2002034946A2 (en) Cotton event pv-ghgt07(1445) and compositions and methods for detection thereof
EP2112224A2 (en) Development of novel germplasm using segregates from transgenic crosses

Legal Events

Date Code Title Description
MK4A Patent expired

Effective date: 20210618