CZ299722B6 - Kukurice tolerantní ke glyfosfátu PV-ZMGT32(nk603), DNA konstrukt PV-ZMGT32(nk603) nesoucí toleranci rostlin ke glyfosfátu a zpusob jeho detekce v rostlinných vzorcích - Google Patents
Kukurice tolerantní ke glyfosfátu PV-ZMGT32(nk603), DNA konstrukt PV-ZMGT32(nk603) nesoucí toleranci rostlin ke glyfosfátu a zpusob jeho detekce v rostlinných vzorcích Download PDFInfo
- Publication number
- CZ299722B6 CZ299722B6 CZ20012203A CZ20012203A CZ299722B6 CZ 299722 B6 CZ299722 B6 CZ 299722B6 CZ 20012203 A CZ20012203 A CZ 20012203A CZ 20012203 A CZ20012203 A CZ 20012203A CZ 299722 B6 CZ299722 B6 CZ 299722B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- dna
- seq
- maize
- molecule
- glyphosphate
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
- C12N15/8275—Glyphosate
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
- C12N15/8221—Transit peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
- C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/13—Plant traits
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/158—Expression markers
Abstract
Rešení poskytuje konstrukt DNA, který propujcuje toleranci transgenní rostline kukurice. Jsou také poskytnuty testy na detekci prítomnosti prípadu kukurice PV-ZMGT32(nk603), založené na sekvenci DNA rekombinantního konstruktu vloženého do genomu a na genomových sekvencích sousedících s místem vložení.
Description
Oblast techniky
Vynález se týká oblasti molekulární biologie rostlin, konkrétně se vynález týká konstrukce DNA, který nese toleranci rostlin ke glyfosfátu. Konkrétněji se vynález týká kukuřice PV10 ZMGT32(nk603), která je tolerantní ke glyfosfátu a testů sloužících k detekci přítomnosti DNA
PV-ZMGT32(nk603) z kukuřice ve vzorcích ajejich složkách.
Dosavadní stav techniky
Vynález se týká rostliny kukuřice (Zen mays) PV-ZMGT32(nk603), tolerantní k herbicidu glyfosfátu a rostlinného expresního konstruktu kukuřičné rostliny PV-ZMGT32(nk603) a jejích potomků.
Kukuřice je důležitá plodina a je primárním zdrojem výživy v mnoha oblastech světa. Na kukuřici byly aplikovány biotechnologické způsoby za účelem zlepšení agronomických vlastností a kvality produktu. Jednou z takových agronomických vlastností je tolerance k herbicidu glyfosfátu. Tato vlastnost kukuřicí dává exprese transgenu v rostlinách kukuřice patent US 6 040 497).
O expresi cizích genů v rostlině je známo, že je ovlivněna pozicí na chromosomu, případně strukturou chromatínu (například heterochromatin), nebo přítomností tránskripčních regulačních úseků (například zesilovačů) v blízkosti místa začlenění (Weising a kok, Ann, Rev. Genet, 22: 421 477, 1988). Za tímto účelem je mnohdy nezbytné prohledávat velké množství případů, aby byl identifikován případ, pro který je charakteristická optimální exprese zavedeného genu. U rostlin a u dalších organizmů bylo například zjištěno, že se úroveň exprese může velmi lišit případ od případu. Mohou zde být také rozdíly v prostorovém nebo časovém profilu exprese, například rozdíly v relativní expresi transgenu v různých rostlinných pletivech, které však neodpovídají předpokládané distribuci vzhledem k transkripčním regulačním úsekům přítomným v zavedeném genovém konstruktu. Za tímto účelem se obvykle vytvoří stovky až tisíce případů a tyto přísady se prohledávají na výskyt určitého případu, který má požadovanou hladinu exprese transgenu a distribuci exprese vhodnou ke komerčním účelům. Případ, který má požadovanou hladinu nebo distribuci exprese transgenu je užitečný pro přenos transgenu do jiného genetického pozadí . pohlavním křížením s použitím obvyklých-pěstitelských postupů. Potomstvo takových křížení zachovává charakteristiku exprese transgenu původního transformanta. Taková strategie se používá k zajištění spolehlivé exprese genu v řadě variant, které jsou dobře adaptované na místní růstové podmínky.
Schopnost detekovat přítomnost konkrétního případu za účelem stanovení, zda potomci pohlavního křížení obsahují inkriminovaný transgen, by byla výhodná. Navíc způsob detekce konkrét45 ního případu by byl například užitečný při dodržování omezení nařízených pro předobchodní schvalování a označování potravin odvozených z rekombinantních rostlin kukuřice. Přítomnost transgenu je možné detekovat kterýmkoli známým způsobem detekce nukleových kyselin, jako je polymerázová řetězová reakce (PCR) nebo hybrídizace DNA s použitím sond. Tyto detekční způsoby se však obecně zaměřují na často užívané úseky genů, jako jsou promotory, terminátory, geny pro selekční znaky atd. Výsledkem je to, že tyto způsoby nemohou být použity například pro rozlišení mezi různými případy, zvláště pak takovými, které byly vytvořeny s použitím stejného konstruktu DNA, dokud není známa sekvence oblastí chromosomální DNA („sousední DNA“), přiléhajících k zavedené DNA. PCR analýza specifická pro jednotlivé případy je diskutována například Windelem a kol. (Med, Fac. Landbouw, Univ. Genet 64/5b: 459 - 462, 1999), který identifikoval případ 40-3-2 tolerance ke glyfosfátu u sóji. Použil PCR s párem primerů
- 1 CZ 299722 B6 spojujících úsek, který přemosťuje spoj mezi vloženou DNA a sousední DNA. Konkrétně jeden primer obsahoval sekvenci z vložené DNA a druhý primer obsahoval sekvenci ze sousední DNA.
Podstata vynálezu
Úkolem vynálezu je poskytnut konstrukt DNA, který nese toleranci k herbicidu glyfosfátu, když je exprimován v rostlinné buňce. S výhodou se tento vynález týká metody šlechtění tolerance ke glyfosfátu u rostlin kukuřice.
Dalším cílem vynálezu je poskytnout kompozice a způsoby, potřebné k detekci přítomnosti transgenního/genomového vloženého úseku z nové rostliny kukuřice nazvané PV-ZMGT32(nk603). Jsou poskytnuty molekuly DNA, které obsahují alespoň jednu sekvenci spojení PV-ZMGT32(nk603), vybrané ze skupiny složené z 5' TGTAGCGGCCCACGCGTGGT 3' (Sekv. čís. 9), 5'
TACCACGCGACACACTCC 3' (Sekv. čís. 10) a 5' TGCTGTTCTGCTGACTTT 3' (Sekv. čís. 11) a jejich komplementárních řetězců. Sekvence spojení zde přemosťuje spoj mezi heterologní DNA vloženou do genomu a DNA z kukuřičných buněk, která sousedí s místem vložení a je charakteristická pro každý případ. Rostlina kukuřice a semeno, které obsahují tyto molekuly jsou předmětem vynálezu.
Nová molekula DNA 5r ACCAAGCTTTTATAATAG 3' (Sekv. cis. 12) a její komplementární řetězec, kde je molekula DNA nová v PV-ZMGT32(nk603) ajeho potomcích. Rostlinná buňka a semeno, které obsahují tuto molekulu, jsou předmětem vynálezu.
Dále molekuly DNA podle vynálezu obsahují nový transgenní/genomový vložený úsek, Sekv. Čís. 7 a Sekv. čís. 8 a jsou homologní, nebo komplementární k Sekv. čís. 7 a Sekv. čís. 8.
Dalším předmětem vynálezu jsou molekuly DNA, které obsahují dostatečně dlouhou transgenní část DNA Sekv. čís. 7 a podobně dostatečně dlouhou část sousední kukuřičné DNA sekvence na
5' konci Sekv, čís. 7; nebo podobně dostatečně dlouhou část transgenní DNA Sekv. Čís. 8 a podobně dostatečně dlouhou část sousední kukuřičné DNA sekvence na 3'konci transgenu, kde jsou tyto molekuly DNA užitečné coby primery při způsobech amplífikace DNA, za účelem poskytnutí produktu amplifikace DNA specificky vytvořeného z DNA PV-ZMGT32(nkóO3) ajeho potomků. Výrazem „dostatečně dlouhá část“ je míněno alespoň 11 nukleotidů.
Dalším úkolem vynálezu je poskytnout způsoby detekce přítomnosti DNA, která odpovídá případu kukuřice PV-ZMGT32(nk603) ve vzorku. Tento způsob se skládá ze: (a) spojení vzorku, který obsahuje DNA se sadou DNA primerů, který poskytuje při použití s genomovou DNA izolovanou z případu PV-ZMGT32(nk603) amplifikační produkt, který je diagnostikou případu kukuřičného případu PV-ZMGT32(nk603); (b) provedení amplifikační reakce nukleové kyseliny, která poskytuje amplifikační produkt; a (c) detekce amplífikačního produktu. Pár molekul DNA, složený z páru DNA primerů, které jsou homologní nebo komplementární k Sekv. čís. 7 nebo Sekv. čís. 8, které fungují v amplifikační reakci nukleových kyselin za vytvoření amplifikačního produktu DN A charakteristického pro PV-ZMGT32(nk603). Konkrétněji se jedná o pár molekul DNA, který zahrnuje pár primerů DNA a kde jsou tyto molekuly identifikovány jako Sekv. čís. 13, případně její komplementární řetězec a Sekv, čís. 14 nebo její komplementární řetězec; Sekv. čís. 15, případně její komplementární řetězec a Sekv. čís. 16 nebo její komplementární řetězec. Produkt amplifikace zahrnující molekuly DNA Sekv. čís. 13 a Sekv. čís. 14. Produkt amplifikace zahrnující molekuly DNA Sekv. čís, 15 a Sekv. čís. 16. Produkt amplifikace získaný výše zmíněným způsobem, který hybridizuje za stringentních podmínek k sekvencím Sekv. čís. 9 a Sekv. čís. 10, Sekv. čís. 11 a Sekv. čís. 12.
Dalším cílem o vynálezu je způsob detekce přítomnosti molekuly DNA, odpovídající případu PV-ZMGT32(nk603), ve vzorku. Tyto způsoby zahrnují: (a) smíchání vzorku obsahujícího
DNA, která byla extrahována z rostliny kukuřice, a molekuly sondy, která hybridizuje za strin-2CZ 299722 B6 gentních podmínek s genomovou DNA případu kukuřice PV-ZMGT32(nk603) a nehybridizuje za stringentních podmínek s DNA kontrolní rostliny; (b) působení stringentních hybridizačních podmínek na vzorek a sondu; a (c) detekci hybridizace sondy s DNA. Konkrétněji se jedná o způsob detekce přítomnosti molekuly DNA, odpovídající případu PV-ZMGT32(nk603), ve vzor5 ku. Tyto způsoby zahrnují: (a) smíchání vzorku obsahujícího DNA, která byla extrahována z rostliny kukuřice, a molekuly sondy obsahující Sekv. čís, 9 a Sekv. čís. 10, Sekv. čís. 11 a Sekv. čís. 12, kde zmíněná sonda hybridizuje za stringentních podmínek s genomovou DNA případu kukuřice PV-ZMGT32(nk603) a nehybridizuje za stringentních podmínek s DNA kontrolní rostliny; (b) působení stringentních hybridizačních podmínek na vzorek a sondu; a (c) detekci hybridizace sondy s DNA.
Dalším cílem vynálezu je poskytnout způsoby šlechtění tolerance ke glyfosfátu u rostlin kukuřice, které zahrnují: (a) extrakci vzorku DNA z potomků kukuřičných rostlin; (b) zprostředkování kontaktu mezi vzorkem DNA a molekulou nukleové kyseliny, kódující znak, a vybrané ze skupi15 ny sestávající ze Sekv. čís. 9, Sekv. Čís. 10, Sekv. čís. 11, Sekv. čís. 12 ajejich komplementární řetězce; (c) provedení způsobu šlechtění s pomocí znaku na vlastnost tolerance ke glyfosfátu, kde je vlastnost tolerance ke glyfosfátu spojena s komplementárním řetězcem molekuly nukleové 4 kyseliny kódující znak.
Vynález se dále vztahuje na soupravu k detekci DNA, která obsahuje alespoň jednu molekulu DNA dostatečné délky souvislých homologních nukleotidů, nebo sekvenci komplementární k Sekv. čís. 7 nebo Sekv. čís. 8. Tato sekvence slouží jako primer nebo sonda specifická pro případ kukuřice PV-ZMGT32(nkó03), který má přístupové číslo ATCC PTA-2478 a odvozených potomků. Dále je předmětem vynálezu buňka rostliny kukuřice tolerantní ke glyfosfátu, která je poskytovaná ATCC sbírkou semen PTA-2478 potomků nebo jejich částí. Dále je předmětem vynálezu transgenní buňka tolerantní ke glyfosfátu obsahující do genomu inkorporovanou DNA kódující toleranci ke glyfosfátu EPSPS a DNA s nukleotidovou sekvencí Sekv. čís. 9, Sekv. čís. 10, Sekv. čís. 11 a Sekv. čís. 12. Dále je to jádro kukuřičné buňky tolerantní ke glyfosfátu obsahující do genomu inkorporovanou DNA kódující toleranci ke glyfosfátu EPSPS a DNA s nukleotidovou sekvencí Sekv. čísl. 9, Sekv. čís. 10, Sekv. cis. 11 a Sekv. čís. 12.
Předešlé a další předměty a cíle vynálezu budou lépe objasněny v následujícím podrobném popisu vynálezu a doprovodných obrázcích.
Tato přihláška nárokuje prioritu z US prozatímní přihlášky 60/213 567, podané 22/06/00; US prozatímní přihlášky 60/214 215, podané 13/10/00 a US prozatímní přihlášky 60/240 014, podané 13/10/00. Následující definice a způsoby jsou uvedeny pro lepší definování tohoto vynálezu a provedení odborníků v oboru při praktikování tohoto vynálezu. Pokud není uvedeno jinak, měly by být výrazy chápány dle obvyklého užití mezi odborníky. Definice obvyklých výrazů z mole40 kulami biologie mohou být nalezeny také v Riger a kol., Glossary of Genetics: Classical and Molecular, páté vydání, Springer-Verlag; New York, 1991; a Lewin, Genes V, Oxford University Press: New York, 1994. Názvosloví bází DNA bylo použito tak jak je ustanoveno v 37 CFR §1.822.
Výraz „kukuřice, zde použitý, znamená. Zea Mays neboli kukuřici a zahrnuje veškeré rostlinné varianty, které mohou být vyšlechtěny z kukuřice, včetně divokých typů.
Výraz „zahrnuje, zde použitý, znamená „včetně, avšak bez omezení na“.
„Glyfosfát“ odpovídá N-fosfonometylglycinu a jeho solím, glyfosfát je aktivní složkou herbicidu Roundupu® (Monsanto Co.). Působení „herbicidu glyfosfátu“ odpovídá působení herbicidů Roundupu®, Roundupu Ultra®, Roundupu Ultra Max® nebo jakékoli další směsi, která obsahuje glyfosfát. Výběr aplikačních dávek přípravků glyfosfátu, které obsahují biologicky aktivní dávku, je v možnostech obvyklého zemědělského technika.
-3CZ 299722 B6
Konstrukt DNA je soubor navzájem pospojovaných molekul DNA, který poskytuje jednu nebo více expresních kazet. Konstrukt DNA je s výhodou plazmid, který umožňuje replikaci sebe sama v bakteriální buňce a obsahuje různá rozpoznávací místa pro restrikční endonukleázy, které jsou užitečné k zavádění molekul DNA, které poskytují funkční genetické úseky, tj. mimo jiné promotory, introny, zaváděcí sekvence, kódující sekvence, 3'terminaění kodóny. Expresní kazety obsažené v konstruktu DNA zahrnují genetické úseky, které umožňují transkripcí mediátorové RNA. Expresní kazeta může být sestavena tak, aby umožňovala expresi v prokaryotních nebo eukaryotních buňkách. Expresní kazety podle vynálezu jsou nejlépe konstruovány tak, aby umožnily expresi v eukaryotních buňkách. Kombinace expresních kazet u transgenních rostlin může vést k neočekávaným fenotypům.
Transgenní „případ“ je vyroben transformací rostlinné buňky konstruktem heterologní DNA, který obsahuje expresní kazetu nukleových kyselin, zahrnující kýžený transgen, regeneraci populace rostlin, které jsou výsledkem inzerce transgenu do genomu rostliny a výběr konkrétních rost15 lín, pro které je charakteristické začlenění do genomu na určitém místě. Pojem „případ“ odpovídá původnímu transformantu a potomku transformanta, který' zahrnuje heterologní DNA. Výraz „případ“ také odpovídá potomku, který býl vytvořen pohlavním křížením mezi transformanty a jinými variantami a který zahrnuje heterologní DNA. I po opakovaném křížení s rodičovskou generací se nachází vložená DNA spolu se sousední DNA na stejném místě na chromosomu.
Výraz „případ“ se také vztahuje na DNA z originálního transformanta, která zahrnuje vloženou DNA a sousední genomové sekvence bezprostředně přiléhající ke vložené DNA. Je možné očekávat, že bude přenesen do potomstva, které získá vloženou DNA spolu s kýženým transgenem jako výsledek pohlavního křížení jedné rodičovské linie, obsahující vloženou DNA (například původní transformant a potomek, jako výsledek samoopylení) a rodičovské linie, která neobsahuje vloženou DNA, Rostlina PV-ZMGT32(nk603) tolerantní ke glyfosfátu může být vypěstována z prvního pohlavního křížení první rodičovské rostliny kukuřice zahrnující rostlinu kukuřice, která byla vypěstována z transgenní rostliny kukuřice PV-ZMGT32(nk603) mající přístupové číslo ATCC PTA-2478 a jejich potomků, odvozených od transformantu s expresní kazetou podle vynálezu, která zaručuje toleranci k aplikaci herbicidu glyfosfátu a druhé rodíěov30 ské rostliny kukuřice, která postrádá toleranci k herbicidu glyfosfátu, což tedy vede k pluralitě prvotních rostlin potomků; a samoopylením prvotní rostliny potomka, což povede ke skupině druhotných rostlin potomků a následnou selekcí druhotných rostlin potomků na základě tolerance k herbicidu glyfosfátu. Tyto kroky mohou dále obsahovat zpětné křížení prvotních rostlin potomků resistentních ke glyfosfátu, nebo prvotní rodičovské rostliny kukuřice nebo terciární rodiěovs35 ké rostliny, což vede k vzniku rostlin kukuřice, které jsou schopny tolerovat aplikaci herbicidu glyfosfátu. Budiž na srozuměnou, že mohou být také kříženy dvě transgenní rostliny za vzniku nové dceřinné rostliny, která obsahuje dva exogenní geny, které se nezávisle segregují. Samoopy lení-vhodného potomka může mít za výsledek rostlinu, která je homozygotem pro oba vložené exogenní geny. Zpětné křížení s rodičovskou rostlinou a křížení s rostlinou, která není trans40 genní, jsou také zahrnuty, podobně jako vegetativní propagace. Popis dalších způsobů křížení, které jsou obecně využívány pro různé znaky a plodiny může být nalezen v jednom z několika odkazů, například Fehr, v Breeding Methods for Cultivar Development, editor: J. Wilcox, American Society of Agronomy, Madison Wí (1987).
„Sonda“ je izolovaná nukleová kyselina, ke které je připojena konvenční, detekovatelná značka, nebo reportérova molekula, například radioaktivní isotop, ligand, chemiluminiscenění látka nebo enzym. Takováto sonda je komplementární k řetězci cílové nukleové kyseliny. Podle vynálezu je komplementární k řetězci genomové DNA z případu kukuřice PV-ZMGT32(nk603), ať již se jedná o rostlinu kukuřice nebo vzorek obsahující DNA ze zmíněného případu. Sondy podle vynálezu nezahrnují pouze desoxyríbonukleové, případně ribonukleové kyseliny, ale také polyamidy a další látky, které se váží specificky na cílovou sekvenci DNA a které mohou být použity k detekci přítomnosti cílové sekvence DNA.
„Primery“ jsou izolované nukleové kyseliny, které v rámci hybridizace nukleových kyselin, tep55 lotně hybridizují ke komplementárnímu cílovému řetězci DNA, za vzniku hybridu mezi prime-4CZ 299722 B6 rem a cílovým řetězcem DNA. Dále jsou tyto primery prodlužovány podle cílového řetězce DNA s pomocí polymerázy, například DNApolymerázy. Páry primerů podle vynálezu jsou používány k amplifikací cílové sekvence nukleové kyseliny, například polymerázovou řetězovou reakcí (PCR), nebo jinými konvenčními způsoby amplifikace nukleových kyselin.
Primery a sondy mají dostatečný počet nukleotidů, aby se specificky vázaly na cílovou sekvenci DNA za podmínek hybridizace nukleových kyselin nebo za podmínek daných technikem. Taková délka může být jakákoli délka dostatečná k použití při zvoleném způsobu detekce. Obecně jsou užívány délky 11 nebo více nukleotidů, s výhodou 18 nebo více nukleotidů, výhodněji 24 a více ío nukleotidů a nejlépe 30 a více nukleotidů. Takovéto primera a sondy jsou schopny specificky hybridizovat s cílovou sekvencí za vysoce přísných hybridizačních podmínek. S výhodou mají primery a sondy podle vynálezu kompletní podobnost sekvence DNA následných nukleotidů s cílovou sekvencí. Konvenčními způsoby však mohou být vytvořeny sondy, které se od cílové sekvence DNA liší, ale zachovávají si schopnost hybridizovat s cílovou sekvencí DNA.
Způsoby přípravy a použití sond a primerů jsou popsány například v Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Druhé vydání, svazek 1-3, vydavatelé: Sambrook a kol., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989 (zde dále jako Sambrook a kol., 1989); Current Protocols in Molecular Biology, Editor Ausubel a kol., Greene Publishing and Wiley-lnter20 science, New York, 1992 (s pravidelnými obnovami) (zde dále jako Ausubel a kol., 1992); a Innis a kol., PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Academie Press: San Diego, 1990. Páry primerů pro PCR mohou být odvozeny od známé sekvence, například s použitím počítačových programů, určených k tomuto účelu jako je Primer (verze 0.5, © 1991 Whitehead Institute for Biomedical Research, Cambridge, MA).
'
Primery a sondy založené na sousedních a vložených sekvencích DNA, které jsou popsány zde, mohou být použity k ověření (a je-li třeba k opravě) přiložených sekvencí s použitím konvenčních způsobů, například opětným klonováním a sekvenováním takových sekvencí.
Primery a sondy nukleových kyselin podle vynálezu hybridizují za přísných podmínek s cílovou sekvencí DNA. Jakýkoli konvenční způsob amplifikace může být použit k identifikaci přítomnosti DNA z transgenního případu ve vzorku. Molekuly nukleových kyselin nebo jejich fragmenty jsou schopné specifické hybridizace s jinými molekulami nukleových kyselin za určitých podmínek. Za účelem použití vynálezu, jsou dvě molekuly označeny jako schopné vzájemné specifické hybridizace tehdy, když jsou tyto dvě molekuly schopny vytvořit antiparalelní dvouřetězcovou strukturu nukleových kyselin. Molekula nukleové kyseliny je označena jako „komplementární“ kjiné molekule nukleové kyseliny, jestliže se tyto dvě molekuly vyznačují kompletní komplementaritu. Za účelem použití vynálezu, jsou dvě molekuly označeny jako „kompletně komplementární“, když každý nukleotid z jedné molekuly je komplementární nukleotidu ve druhé molekule. Dvě molekuly jsou označeny jako „minimálně komplementární“, jestliže jedna s druhou hybridizují s dostatečnou stabilitou, která umožní aby zůstaly hybridizo váné jedna k druhé za konvenčních „vysoce přísných“ podmínek. Konvenční přísné podmínky jsou popsány v Sambrook a kol., 1989 a v Haymes a kol., v: Nucleic Acid Hybridízation, A Practical Aproach, IRL Press, Washington, DC (1985). Odchylky od komplementární sekvence jsou proto možné tak dlouho, dokud zcela nezamezí schopnost molekuly tvořit dvouřetězcovou strukturu. Za úče lem použití molekuly nukleové kyseliny jako primerů nebo sondy, musí být pouze dostatečně komplementární sekvence, aby byla schopna stabilní dvouřetězcovou strukturu v konkrétním použitém rozpouštědle a koncentraci solí.
Dostatečně homologní sekvence je, pro použití zde, molekula nukleové kyseliny, která specificky hybridizuje s komplementární molekulou nukleové kyseliny, se kterou je srovnávána, za vysoce přísných podmínek. Vhodné přísné podmínky, které podporují hybridizaci DNA, například 6,0 x chlorid sodný/citronan sodný (SSC) při 45 °C, následované promýváním 2,0 x SSC při 50 °C, jsou odborníkům známy nebo mohou být nalezeny v Current Protocols in Molecular Biology,
John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1 - 6.3.6. Například koncentrace solí v promývacím kroku
-5CZ 299722 B6 může být volena od slabě přísných podmínek hybridizace v přibližně 2,0 x SSC při 50 °C po vysoce stringentní v přibližně 0,2 x SSC při 50 °C. Navíc teplota promývacího kroku může být zvýšena ze slabě stringentních podmínek pří pokojové teplotě okolo 22 °C po vysoce přísné podmínky hybridizace při přibližně 65 °C. Jak teplota, tak soli mohou být měněny nebo může být držena konstantní koncentrace solí nebo teplota, zatímco druhá proměnná je měněna. S výhodou bude nukleová kyselina podle vynálezu specificky hybridizovat s jednou ěi více molekul nukleových kyselin uvedených jako Sekv. čís. 9, 10, 11 a 12 nebo jejich komplementy ci fragmenty i za mírně přísných podmínek, například v cca 2,0 x SSC při 65 °C. Ve zvláště výhodném provedení vynálezu bude nukleová kyselina podle vynálezu specificky hybridizovat s jednou či více moleío kulami nukleových kyselin uvedených jako Sekv. čís, 9 až 12, nebo jejich komplementy či fragmenty i za vysoce přísných podmínek hybridizace. V dalším provedení vynálezu obsahuje značená molekula nukleové kyseliny podle vynálezu sekvenci nukleové kyseliny značenou jako Sekv. čís. 9 až 12, nebo komplement či fragment některé z nich. V dalším provedení vynálezu sdílí výhodná značená molekula nukleové kyseliny podle vynálezu mezi 80 a 100 % nebo 90 a 100 % identickou sekvenci se sekvencí nukleové kyseliny vedenou jako Sekv, čís. 9 až 12 nebo komplementem či fragmentem kterékoli z nich. V dalším provedení vynálezu sdílí výhodná značená molekula nukleové kyseliny podle vynálezu mezi 95 a 100% identickou sekvenci se sekvencí nukleové kyseliny vedenou jako Sekv. čís. 9 až 12 nebo komplementem či fragmentem kterékoli z nich. Sekv. čís. 9 až 12 mohou být použity jako značky při šlechtění rostlin ve způsobech iden20 tifíkace potomků genetického křížení podobných způsobům popsaným pro analýzu jednoduchých opakování sekvence DNA značením v „DNA markers“: Protocols, Applications and overviews: (1997) 173 - 195, vydavatelé: Cregan a kol., Wiley-Uss NY; všechny jsou zde začleněny jako odkazy ve své podstatě. Hybridizace sondy a cílové molekuly DNA může být detekována jakýmkoli z mnoha způsobů, známých odborníkům. Mezi tyto způsoby patří, avšak je to neomezuje, fluorescenční značky, radioaktivní značky, značky založené na protilátkách a chemiluminiscentní značky,
S ohledem na amplifikaci cílové sekvence nukleové kyseliny (například s pomocí PCR) s využitím konkrétního amplifikačního páru primerů jsou „přísné podmínky hybridizace“ takové pod30 minky, které dovolí amplifikačnímu páru hybridizovat pouze s cílovou sekvencí nukleové kyseliny, na kterou by se primer s odpovídající sekvencí divokého typu (nebo komplementární) vázal. S výhodou je tak vytvořen v teplotní amplifikační reakci DNA jedinečný produkt amplifikace.
Výraz „specifický k (cílové sekvenci)“ značí, že primer nebo sonda za přísných podmínek hybri35 dizuje pouze s cílovou sekvencí ve vzorku, který tuto cílovou sekvenci obsahuje. Zde použitý výraz „amplifikovaná DNA“ nebo „amplikon“ značí produkt amplifikace cílové sekvence nukleové kyseliny, která je součástí templátu. Využití je například ve stanovení, zda kukuřičná . rostlina, vzešlá z pohlavního křížení, obsahuje transgenní případ kukuřičné rostliny podle vynálezu v genomové DNA. DNA extrahovaná z pletiva kukuřičné rostliny může být podrobena způso40 bu amplifikace DNA s použitím páru DNA primerů. Tento pár zahrnuje první primer odvozený od sousedních sekvencí v genomu rostliny, přiléhajících k místu vložení vložené heterologní DNA. Tímto způsobem je možné vytvořit produkt amplifikace, který je charakteristický pro tento případ DNA, Tento amplifikační produkt má také charakteristickou délku a charakteristickou sekvenci. Délka amplikonu se pohybuje v rozmezí od součtu délek primerů plus jeden pár nukleotidových bází, s výhodou plus asi padesát párů nukleotidových bází, výhodněji plus asi dvěstěpadesát párů nukleotidových bází, nej výhodněji plus asi čtyři stapadesát párů nukleotidových bází. Připadne může být pár primerů odvozen od sousedních sekvencí na obou stranách vložené DNA, přičemž je vytvořen amplikon, který obsahuje celou vloženou sekvenci nukleotidů (například fragment DNA MLU1 z expresního konstruktu pMON25496, Obr. I, přibližně 6706 párů nukleotidových bází). Clen páru primerů může být odvozen od genomové sekvence rostliny, která je umístěna v určité vzdálenosti od vložené sekvence DNA, Tato vzdálenost se může pohybovat v rozmezí od jednoho páru nukleotidových bází až po omezení amplifikační reakce, neboli kolem dvaceti tisíc párů nukleotidových bází. Použitím výrazu „amplikon“ jsou specificky vyloučeny dimery primerů, které mohou být vytvořeny při termální reakci amplifikace DNA.
-6CZ 299722 B6
Amplifikace nukleových kyselin může být provedena kterýmkoli odborníkům známým způsobem amplifikace nukleových kyselin, včetně polymerázové řetězové reakce (PCR). Je známo několik amplifikačních způsobů a jsou mimo jiné popsány v patentu US 4 683 195 a US 4 683 202 a PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Editoři: Innis a kol.,
Academie Press, San Diego, 1990. Byly vyvinuty způsoby PCR amplifikace schopné amplifikovat do 22 kb genomové DNA a do 42 kb DNA z bakteriofágy (Cheng a kol., Proč. Natí. Acad. Sci. USA 91: 5695 - 5699, 1994). Tyto způsoby amplifikace DNA spolu s jinými známými způsoby mohou být použity při uplatňování vynálezu v praxi. Sekvence heterologní vložené DNA nebo sousedních sekvencí DNA z případu kukuřice ZMGT32(nk603) může být ověřena (a v prí10 pádě potřeby opravena) amplifikací této sekvence z DNA extrahované ze semen nebo rostliny s přístupovým číslem PTA-2478 ATCC sbírky, a to s použitím primerů DNA odvozených od sekvencí zde poskytnutých a následným standardním sekvenováním PCR amplifikačního produktu nebo klonované DNA.
Amplikon vytvořený těmito způsoby může být detekován řadou způsobů. Jedním z těchto způsobů je „Genetic Bit Analvsis“ (Nikiforov a kol., Nucleic Acid Res. 22: 4167-4175, 1994). V této metodice je poskytnut primer DNA, jehož sekvence přemosťuje jak sousední sekvenci genomové DNA, tak sekvenci vložené DNA. Oligonukleotid je imobilizován v jamkách na mikrotitrační desce. Následně po PCR kýženého úseku (s použitím jednoho primerů ve vložené sekvenci a jednoho na sousední sekvenci genomové DNA) může být jednořetězcový produkt PCR hybridizován k tmobilizovanému oligonukleotidu a slouží jako templát k prodlužovací reakci o jednu bázi s použitím DNApolymerázy a značených ddNTP specifických pro předpokládanou další bázi. Výstup může být fluorescenční nebo založený na EL1SA. Signál ukazuje na přítomnost vložené/sousední sekvence díky úspěšné amplifikací, hybridizaci a prodloužení o jednu bázi.
Další způsob je pyrosekvenační technika, jak byla popsána Wingem (Innov. Pharma. Tech. 00:18 - 24, 2000). V tomto způsobu je vytvořen oligonukleotid, který přemosťuje spoj vložené DNA a sousední oblasti genomové DNA. Tento oligonukleotid je hybridizován s jednořetězcovým produktem PCR kýženého úseku (jeden primer ve vložené sekvenci a jeden v sousední genomové sekvenci), Následuje inkubace v přítomnosti DNApolymerázy, ATP, sulfurylasy, luciferasy, apyrasy, adenosin-5-fosfosíranu a luciferinu, DNTP jsou přidávána jednotlivě a výsledek inkorporace, jehož výsledkem je světelný signál je měřen. Světelný signál indikuje přítomnost transgenu vložené/sousední sekvence, díky úspěšné amplifikací, hybridizaci a prodlužování o jednu či více bází.
Další způsob, který může být použit k detekci amplikonu podle vynálezu je fluorescenční polarizace jak byla popsána Chenem a kol. (Genome Res. 9: 492 - 498, 1999). Při použití tohoto způsobuje vytvořen oligonukleotid, který přemosťuje spoj vložené DNA a sousední oblasti genomové DNA. Tento oligonukleotid je hybridizován s jednořetězcovým produktem PCR kýženého úseku (jeden primer ve vložené sekvenci a jeden v sousední genomové sekvenci). Následuje inkubace v přítomnosti DNApolymerázy a fluorescenčně značených ddNTP. Prodlužování o jednu bázi má za výsledek inkorporaci fluorescenčně značených ddNTP. Inkorporaci je možné měřit jako změnu polarizace na fluorimetru. Změna polarizace indikuje přítomnost transgenu vložené/sousední sekvence, díky úspěšné amplifikací, hybridizaci a prodloužení o jednu bázi.
Taqman ® (PE Applied Biosystems, Foster City, CA) je popsán coby způsob detekce a kvantifikace přítomnosti DNA sekvence a je plně srozumitelný z instrukcí poskytovaných výrobcem. Krátce, je vyrobena sonda, tvořená oligonukleotidem FRET, která přemosťuje spoj vložené DNA a sousední oblasti genomové DNA. Sonda FRET a PCR primery (jeden primer ve vložené sek50 věnci a jeden v sousední genomové sekvenci) jsou cyklovány v přítomnosti termostabilní polymerázy a dNTP. Hybridizace sondy FRET má za výsledek štěpení a uvolnění fluorescenční Části z části zhášecí na sondě FRET. Fluorescenční signál indikuje přítomnost sousední/transgenní vložené sekvence, díky úspěšné amplifikací a hybridizaci.
-7CZ 299722 B6
Bylo popsáno použití molekulárních majáků při detekci sekvencí, jak je popsáno v Tyangi a kol. ' (Nátuře Biotech. 14: 303 - 308, 1996). Krátce, je vyrobena sonda, tvořená oligonukleotidem í
FRET, která přemosťuje spoj vložené DNA a sousední oblasti genomové DNA. Jedinečná struk- .;· tura sondy FRET má za výsledek takovou sekundární strukturu, která drží fluorescenční a zhášecí část molekuly v těsné blízkosti. Sonda FRET je spolu s PCR primeiy (jeden primer ve vložené sekvenci a jeden v sousední genomové sekvenci) cyklována v přítomnosti termostabilní polyme- í rázy a dNTP. Po úspěšné amplífikací PCR následuje hybridizace sondy FRET s cílovou sekvencí, což má za následek zrušení sekundární struktury sondy a separaci fluorescenční a zhášecí části molekuly. Výsledkem je fluorescenční signál. Fluorescenční signál indikuje přítomnost sou10 sední/transgenní vložené sekvence, díky úspěšné amplífikací a hybridizaci.
Následující příklady použití vynálezu demonstrují příklady určitých výhodných provedení vynálezu. Odborníci by měli ocenit, že v příkladech zahrnuté techniky které následně představují přístupy byly shledány vynálezci dobře fungujícími v praxi vynálezu a tudíž mohou být považovány za ustavení příkladů výhodných pro praxi. Nicméně by měli odborníci, ve světle předkládaného vynálezu, ocenit, že mohou být učiněny mnohé změny specifického provedení, které bylo přiloženo a stále získají stejný či podobný výsledek bez opuštění ducha a předmětu vynálezu.
Přehled obrázků na výkresech
Obr. 1. Mapa plazmidu pMON25496
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Transgenní případ kukuřice PV~ZMGT32(nk603) (dále značený jako nk603) byl vytvořen bombardováním embrya kukuřice mikroprojektily (Songstad a kol., In Vitro Cell Plant 32: 179-183, 1996) s použitím lineárního fragmentu DNA, vyštěpeného restrikční endonukleázou Mlu\ zpMON25496 (Obr. 1). Tento fragment DNA obsahuje dvě expresní kazety, které společně odpovídají za toleranci kukuřice ke glyfosfátu. První kazeta je složena z promotoru rýžového aktinu 1 a intronu (P-Os.Actl a I-Os.Actl, patent US 5 641 876), který je funkčně spojen s chloroplastovým transitním peptidem EPSPS zArabidopsis (TS-At.EPSPS:CTP2, Klee a kol., Mol. Gen. Genet. 210: 47 - 422,1987), který je dále funkčně spojen s 5-enol-pyruvylšikimát-3fosfatasou (EPSPS) zAgribacteria .ψ.kmene CP4 (AGRTU.tvn9/í/CP4. patent US 5 633 435), který je opět funkčně spojen s transkripčním terminátorem nopalinsyntetasy (T-AGRTZ.nos,
Fraley a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. USA 80: 4805 - 4807, 1983). Druhá transgenní expresní kazeta je složena z 35S promotoru viru mozaiky květáku, která obsahuje tandemově zdvojený zesilovací úsek (P-CaMV.35S, Kay a kol, Science 236: 1299 - 1302, 1987; patent US 5 164 316), který je funkčně spojen s intronem Hsp70 ze Zea mays (I-Zm.Hsp70, patent US 5 362 865), který je opět funkčně spojen s chloroplastovým transitním peptidem EPSPS zJra/?/Jcy?5M’(TS-At.EPSPS:CTP2, Klee a kol, Mol Gen. Genet. 210: 47 - 422, 1987), kterýje dále funkčně spojen s 5-enol-pyruvylšikimát-3-fosfatasou (EPSPS) zAgribacteria sp. kmene CP4 (AGRTU.ňro^:CP4, patent US 5 633 435), kterýje opět funkčně spojen stranskripčním terminátorem nopalinsyntetasy (T-AGRTU.nos, Fraley a kol, Proč. Nati Acad. Sci. USA 80: 4803 - 4807, 1983). Po bombardování byly vybrány transgenní kalusy, tolerantní ke glyfos50 fátu na médiu, které obsahovalo 3 mM glyfosfát. Následně byly regenerovány rostliny. Bylo vyrobeno třistačtyři rostlin z 91 nezávislých transgenních případů. 2 této populace byla vybrána nk603, na základě nejvhodnější kombinace charakteristik, včetně tolerance ke glyfosfátu, zemědělských schopností a pouze jedné kopie transgenního vložení. Testy případu nk603 a od něj odvozených potomků ve skleníku i na poli prokázaly, že toto transgenní vložení odpovídá za toleranci, která překračuje komerční specifikace pro plnou vegetativní i reproduktivní toleranci
-8CZ 299722 B6 ke 340 g glyfosfátu na 0,4 hektaru (840 g na hektar; 0,9 kg Roundupu Ultra na 0,4 hektaru) při aplikaci na listové stádium V4 a V8.
Příklad 2
Případ kukuřice nk'603, tolerantní ke glyfosfátu, byl porovnán s komerčním standardem GA21 patent US 6 040 497), který je v současné době dostupný, na toleranci k vegetativnímu poškození glyfosfátem a na účinek ňa výnos. GA21 obsahuje alespoň 3 tandemově uspořádané expresní kazety v genomu případu kukuřice GA21 (SCP/GMO/232-Final, European Commission Health & Consumer Protection Directorate-General). Transgenní kazeta se skládá z promotoru aktinu 1 z rýže a intronu spojeného s chloroplastovým transitním peptidem ribulosa-1,5-bisfosfátkarboxylasy, spojeného s modifikovanou kukuřičnou EPSPS rezistentní ke glyfosfátu a s transkripčním terminátorem nopalinsynsyntetásy. Rostliny nkó03 a GA21 byly vysety do řádků na části pole. Bylo na ně působeno následujícím způsobem: 1) nepostříkané, 2) postříkané Roundupem Ultra® o koncentraci 1,8 kg na 0,4 hektaru, v listovém stádiu V4 a znovu Roundupem Ultra® o koncentraci 1,8 kg na 0,4 hektaru, v listovém stádiu V8, 3) postříkané Roundupem Ultra® o koncentraci 2,7 kg na 0,4 hektaru, v listovém stádiu V4 a znovu Roundupem Ultra® o koncentraci 2,7 kg na 0,4 hektaru, v listovém stádiu V8. Vegetativní tolerance byla měřena jako procento vegetativního poranění, stanovené z počtu malformovaných listů vytvořených 10 dnů po aplikaci herbicidu v listovém stadiu V8. Byl měřen výnos na každé části pole v bušlech (=35,2 1) na 0,4 hektaru a procento snížení výnosu stanovené pro jednotlivé koncentrace herbicidu vztažené na nepostříkanou část. Výsledky, které jsou uvedeny v tabulce 1 ukazují, že nk603 vykazuje nižší procento vegetativního poranění než je tomu u GA21 rostlin. Podobně je nižší snížení výnosu u případu nk603. Nízký výskyt vegetativního poranění byl objeven i na nepostříkaných částech pole, což je možné přisoudit různým jiným vnějším faktorům, než vystavení herbicidu glyfosfátu. Dvojitá expresní kazeta pMON25496 v nk603 byla porovnána s vegetativním poraněním a plodností tří nezávislých případů kukuřice, které byly získány pouhou expresí genu tolerance ke glyfosfátu (AGRTU.aroA.CP4), řízenou promotorem CaMV.35S. Bylo objeveno, že dvojitá expresní kazeta udělovala vyšší stupeň vegetativní i reproduktivní tolerance, než tři nezávislé případy kukuřice (příklady 1, 2 a 3), které obsahovaly pouze gen tolerance ke glyfosfátu (AGRTU,aroA.CP4), řízený promotorem CaMV.35S. Vysoká hladina vegetativní tolerance vůči poranění herbicidem glyfosfátem byla objevena u nk603 a dalších tří případů kukuřice, odvozených od pMON25496 v porovnání s průměrným poraněním 6 případů kukuřice odvozených od konstruktu, kde je exprese genu pro toleranci ke glyfosfátu řízena pouze promotorem a intronem aktinu z rýže (POs.Actl/I-Os.Actl), Rostliny transformované dvojitou expresní kazetou vykazovaly vyšší toleranci k vegetativnímu a fertilitnímu poranění než rostliny získané transformací jednoduchou expresní kazetou, což vedlo ke snížení ztráty výnosu v důsledku aplikace herbicidu glyfosfátu. Konstrukt pMON25496 poskytnul dvě expresní kazety v jednom umístění v nk603, které propůjčily vyšší stupeň tolerance ke glyfosfátu, než trojité vložení, které se objevuje u komerčního standardu GA21.
-9CZ 299722 Bó
Tabulka 1. Tolerance nkó03 ke glyfosfátu - vegetativní poranění, výtěžek a hodnocení fertility
| Případ | Působení | % veg. poranění* | Výnos 1/hektar (bušl/akr) | % snížení výnosu |
| GA21 | Nepostříkané | 0,3 | 12207,9 (142,2) | |
| 1,8 kg (64 oz) Roundupu Ultra® ve V4 následované 1,8 kg'(64 óz) vé V 8 | 5,3 | 11512,5 (134,1) | 5,7 | |
| .2,7 kg (96 óz) Roundupu Ultra® ve V4 následované 2,7 kg (96 oz) ve V8 | 8,3 | 11083,2. (129,1) | 9,2 | |
| nk6Ó3 | Nepostříkané, | 0,9 | 12499,8 (145,6) | |
| 1,8 kg (64 oz) Roundupu Ultra® ve V4 následované 1,8 kg (64 oz) ve V8 | 2,9 | 11 890,2 (138,5) | 4,9 | |
| 2,7 kg (96 oz) Roundupu Ultra® ve V4 následované 2,7 kg (96 oz) ve V 8 | 4,7 | 12027,6 (140,1). | 3,8 |
| Působení | Hodnocení fertility* * | |
| nk603 | 1,8 kg (64 oz) Roundupu Ultra® ve V8 | 4,5 |
| CaMV.35S příp. 1 | 1,8 kg (64 oz) Roundupu Ultra® vé V 8. | 2,0 |
| CaMV.35S příp. 2 | 1,8 kg (64 oz) Roundupu Ultra® ve. V8 | 2,2 |
| CaMV;35S příp. 3 | 1,8 kg (64 oz) Roundupu Ultra®, ve V8 | 2,4 |
| Působení | Prům. % veg, Poranění* ' | |
| Nk603 plus 3 další. pMON25496. případy | 3,6 kg (128 oz) Roundupu Ultra® ve V4 následované 3,6 kg (128 oz) ve V8 | 22,9 |
| Šest případů jednoduchých kazet. P-Os. Act 1 | 3,6 kg (128 oz)· Roundupu Ultra® ve V4 následované 3,6 kg (128 oz) ve V8 | 28,9 |
* Vegetativní poranění, získané 10 dnů po působení ve V8, je jedno měření provedení ke stanovení vegetativního poranění jako odpovědi na působení glyfosfátu. ** Hodnocení fertility samčích rostlin: 4 - 5 = plně fertilní; 3 = znatelně snížené šíření pylu; 0 - 2 = zcela sterilní - velmi sterilní, nevhodné ke komerčnímu použití.
-10CZ 299722 B6
Příklad 3 i
Odpovídající sousední molekuly DNA znkó03 byly klonovány s použitím ligačních adaptérů a .1 „nested“ PCR jak je popsáno vkitu Genome Walker™ (katalogové číslo K1807-1, CloneTech í
Laboratories, lne., Palo Alto, CA). Nejprve byla purifikována genomová DNA z případu nk6O3 * s způsobem využívajícím CTAB (Rogers a kok, Plant Mok Biol, 5: 69 - 76, 1985). Genomová DNA knihovna byla připravena k amplifikaci dle instrukcí výrobce (Genome Walker™,
CloneTech Laboratories, lne, Palo Alto, CA). V nezávislých reakcích byla genomová DNA štěpena přes noc při 37 °C následujícími restrikčními endonukleázami, které štěp s tupým koncem:
£coRV, Seal, Dral, Prali (CloneTech Laboratories, lne, Palo Alto, CA). Reakční směs byla extrahována do směsi fenol-.chloroform. DNA byla vysrážena z vodné fáze přídavkem etanolu a sedimentována centrifugách Následně byla rozsuspendována v pufru Tris-EDTA (100 mM TrisHC1, pH 8,0, 1 mM EDTA). Purifikované fragmenty genomové DNA byly ligovány s adaptéry Genome Walker™, dle protokolu výrobce. Reakce byla v každé směsi zastavena zahřáním (70 °C,
5 min). Směs byla zředěna 1 Okřát pufrem Tris-EDTA. Jeden mikrolitr z každé ligace byl amplifikován v 50 μΐ reakci, která obsahovala 1 μΐ dané knihovny ligované s adaptérem, 1 μΐ primerů specifického pro adaptér Genome Walker™ API (5' GTATATCGACTCACTATAGGGC 3ř,
Sekv. čís. 1) o koncentraci 10 μΜ, 1 μΐ oligonukleotidu specifického pro transgen nk603 o koncentraci 10 μΜ.
(5' TGACGTATCAAAGTACCGACAAAAACATCC 3', Sekv. čís. 2), 1 μΐ deoxyribonukleotidů1, 2,5 μΐ dímetylsulfoxidu, 5 μΐ 10 krát koncentrovaného reakčního pufru obsahujícího MgCl2i 0,5 μΐ (2,5 jednotek) termostabilní DNApolymerázy Amplitaq (PE Applied Biosystems, Foster City, CA a směs byla doplněna H2O do 50 μΐ. Reakce byla prováděna v termocykleru s použitím vypočítané teplotní kontroly a byly aplikovány následující cyklické podmínky: 1 cyklus 95 °C po dobu 9 min; 7 cyklů 94 °C po dobu 2 s, 70 °C po dobu 3 min; 36 cyklů 94 °C po dobu 2 s, 65 °C po dobu 3 min; 1 cyklus 65 °C po dobu 4 min. Jeden μΐ z každé reakce byl zředěn 50 krát vodou a amplifikován v sekundární reakcí (1 μΐ odpovídající zředěné primární reakce), 1 μΐ 10μΜ Genome Walker™ „nested adapter“ primem AP2 (5' ACTATAGGGCACGCGTGGT 3', Sekv.
čís. 3, dodávaná výrobcem), 1 μί 10 μΜ oligonukleotidu specifického pro transgen nk603. .
(5'CTTTGTTTTATTTTGGACTATCCCGACTC 3', Sekv. čís. 4), 1 μί deoxyribonukleotidtrifosfátů, 2,5 μί dímetylsulfoxidu, 5 μί 10 krát koncentrovaného reakčního pufru obsahujícího MgCl2,
0,5 μί (2,5 jednotek) termostabilní DNApolymerázy Amplitaq (PE Applied Biosystems, Foster
City, CA a směs byla doplněna H2O do 50 μί. Reakce byla prováděna v termocykleru s použitím vypočítané teplotní kontroly a byly aplikovány následující cyklické podmínky: 1 cyklus 95 ŮC po dobu 9 min;- 5 cyklů 94 °C po dobu 2 s, 70 °C po dobu 3 min; 24 cyklů 94 °C po dobu 2 s, 65 °C po dobu 3 min; 1 cyklus 65 °C po dobu 4. min.
Produkt PCR, který reprezentuje úsek přemosťující spojení mezi nk603 transgenním vloženým úsekem a sousední kukuřičnou DNA byl purifikován s pomocí agarózové gelové elektroforézy, následované purifikací z agarózové matrice s použitím QIAquick Gel Extraction Kitu (katalogové číslo 28704, Qiagen lne., Valencia, CA). PCR produkt byl následně přímo klonován do vektoru pGEM-T Easy (katalogové číslo A1360, Promega Madison, WI). Identita klonovaného produktu PCR a jeho vztah s Mlu I fragmentem pMON25496 byl ověřen s pomocí analýzy sekvence DNA (ΑΒΪ PrismTM 377, PE Biosystems, Foster City, CA a program na analýzu sekvencí DNASTAR, DNASTAR lne., Madisin, WI).
Podobně byla amplifikoyána a klonována sekvence kukuřičné DNA sousedící s 3' koncem nk603 s pomocí „nested“ primerů, specifických pro gen, jako je Sekv. čís. 5 (5'AGATTGAATCCTGTTGCCGGTCTTGC3') a Sekv, čís. 6 (5'GCGGTGTCATCTATGTTACTAGATCGGG3ř), které tepelně hybridizovaly k transkripčnímu terminátoru T-AGRTU.nos. V transgenní/genomové inzerci jsou přítomny dva transkripční terminátory T-AGRTU.nos. Jeden uvnitř konstruktu a jeden na 3' konci konstruktu sousedícího s kukuřičnou genomovou DNA. PCR produkty vytvoře-11CZ 299722 B6 né v této reakci byly sekvenovány a DNA sekvence, která přemosťuje spojení mezi transgenem a sousední sekvencí byla odlišena od produktu vnitřního T-AGRTU.nos, srovnáním známých genetických úseků konstruktu pMON25496, jak bylo výše popsáno. Sekvence kukuřičné DNA sousedící na obou stranách s vloženým transgenem byla stanovena pro nk603 sekvenováním amplifíkačního produktu odvozeného od GenomeWalker a porovnána se známou sekvencí transgenu. Na 5' konci vloženého transgenu byla stanovena sekvence úseku, sousedícího se spojem, o délce 498 bp (Sekv. čís, 7). Ten se skládal z 304 párů bází (bp) sousední genomové DNA kukuřice (nukleotidy 1 - 304 ze Sekv. čís. 7), 45 bp náležejících k DNA sekvenci konstruktu pMON25496 (nukleotidy 305 - 349 ze Sekv. čís. 7) a 149 bp DNA sekvence z 5' konce Pío OOs.Actl (nukleotidy 350 - 498 ze Sekv. čís. 7).
Byla stanovena sekvence úseku o délce 1183 párů bází okolo 3' spoje vloženého úseku (Sekv. čís. 8), která začíná úsekem 164 párů bází ztranskripčního terminátoru T-AGRTU.nos (nukleotidy 1-164 ze Sekv. čís. 8), 217 párů bází sekvence DNA konstruktu pMON25496 (nukleotidy
165 - 381 ze Sekv. čís. 8), 305 párů bází kukuřičných plastidových genů rspl 1 a rpoA (částečné segmenty obou genů, které odpovídají bázím 63- 363 dostupným vGenebank s přístupovým číslem X0781O a které odpovídá bázím 382 - 686 ze Sekv. čís. 8) a ze zbývající sekvence DNA zahrnující genomovou DNA sekvenci kukuřice, sousedící s místem integrace (odpovídá nukleotidům 687- 1183 ze Sekv. čís. 8). Spojovací molekuly DNA Sekv. čís. 9, Sekv. čís. 10, Sekv.
čís. 11 a Sekv. čís. 12 jsou nové molekuly DNA v nk603 a jsou pro případ kukuřice nk603 a její potomky charakteristické. Spojovací molekuly Sekv. čís. 9, Sekv. čís. 10 a, Sekv. čís. 11 reprezentují cca 9 nukleotidů na každé straně místa vložení transgenního fragmentu DNA a genomové DNA kukuřice. Sekv. čís. 9 se nalézá v pozici 295 - 314 Sekv. čís. 7. Spojovací sekvence Sekv. čís. 10 a 11 se nacházejí v pozicích 373 - 390 a 678 - 695 Sekv. čís. 8 a reprezentují spojovací molekuly ze sekvence konstruktu DNA s plastidovou DNA kukuřice (Sekv. čís. 10) a sekvence konstruktu s genomovou DNA kukuřice (Sekv. čís. 11). Sekv. čís. 12 se nachází v pozici 156 173 Sekv. čís. 8 a reprezentuje novou molekulu DNA v nk603, protože je to fůze terminační sekvence T-AGRTU.nos s invertovaným fragmentem DNA promotoru aktinu z rýže.
Příklad 4
Pár DNA primerů specifických pro případ byl použit k výrobě amplikonu charakteristického pro nk603. Tento pár primerů zahrnuje, ovšem není tím omezen, Sekv. čís. 13 a Sekv. čís. 14 pro 5' amplikon molekuly DNA a Sekv. čís. 15 a Sekv. čís. 16 pro 3' amplikon molekuly DNA. Krom těchto párů primerů je předmětem tohoto vynálezu jakýkoli pár odvozený od Sekv. čís, 7 a Sekv. čís, 8, který při použití v reakci amplifikace DNA, dává vzniknout amplikonu, který je charakteristický pro nk603. Amplifikační podmínky pro tuto analýzu, týkající se 5' spojovacího useku vloženého transgenu/úseku genomu, jsou zobrazeny v tabulce 2 a tabulce 3.
Stejný způsob je aplikován pro amplifikaci 3' amplikonu molekuly DNA s použitím primerů DNA c podobě Sekv. čís. 15 a Sekv. čís. 16, avšak jakákoli modifikace těchto způsobů, které používá molekul DNA nebo jejich komplementů k tvorbě amplikonu molekuly DNA charakteristické pro nk603 je v rámci obvyklé znalosti problematiky. Navíc byl začleněn jako vnitřní standard pro podmínky reakce, kontrolní pár primerů (Sekv. čís. 17 a 18) k amplifikaci endogenního kukuřičného genu. Analýza extraktu DNA z rostlinného pletiva nk603 by měla obsahovat pozitivní kontrolu ve formě extraktu DNA z nk603, negativní kontrolu ve formě extraktu DNA z kukuřičné rostliny, která není nk603 a negativní kontrolu, která neobsahuje žádný DNA extrakt jako templát. Další molekuly DNA primerů dostatečné délky mohou být, odborníky ve způso50 bech amplifikace DNA, vybrány ze Sekv, čís. 7 a Sekv. čís. 8 a mohou být optimalizovány podmínky pro tvorbu amplikonu, které se liší od způsobů z tabulky 2 a tabulky 3, jejichž výsledkem je však amplikon charakteristický pro nk603. Použití takových modifikovaných sekvencí primerů s pozměněnými způsoby z tabulky 2 a 3 jsou také předmětem tohoto vynálezu. Předmětem tohoto vynálezu je amplikon, kde alespoň jedna molekula DNA primerů dostatečné délky je odvozena
-12CZ 299722 Bó ze Sekv. čís. 7 a Sekv. čís. 8 a který je charakteristický pro nk603. Předmětem tohoto vynálezu je j amplikon, kde alespoň jedna molekula DNA primeru dostatečné délky je odvozena za jakéhokoli . j genetického úseku pMON25496 a který je charakteristický pro nk603. Zkouška na amplikon j nk603 může být provedena s použitím termocykleru Robocykleru Stratagene, MJ Engine, í
Perkin-Elmer 9700 nebo Eppendorf Mastercycler Gradient, jak je ukázáno v tabulce 3, nebo 1 způsobem a na přístroji, známém odborníkům.
Tabulka 2
Provedení PCR a reakční směs pro potvrzení úseku spoje mezi vloženým transgenem a genomem nk603.
| Krok | Látka | Množství | Komentář |
| 1 | Voda bez nukleas | Doplnit do 20 μί | - |
| 2 | ÍO x reakční pufr (s MgCf) | 2,o μ | Výsledná koncentrace 1 x pufr a,l;$mM MgCf |
| 3 | 10 mM roztok dATP, dCTP, dGTP a dTTP | 0,4 μί | Finální, koncentrace každého dNTPje200pM. |
| 4 . | Primer specifický k případu (Sekv. | 0,4μ1 | Výsledná koncentrace 0,2 μΜ |
| čís, 13) (rozsuspendovaný na koncentraci 10 μΜ v lx TH pufru nebo ve vodě prosté nukleas) | |||
| 5 | Primer specifický k případu (Sekv. čís. 14): (rozsuspendovaný na koncentraci 10 μΜ v lx TEpufru nebo ve. vodě prosté nukleas) | 0,4 μΐ | Výsledná koncentrace 0,2 μΜ |
| 6 | Primer kontrolní (Sekv. čís. 17) (rozsuspendovaný na koncentraci, 10 μΜ v lx TE pufru nebo ve vodě prosté nukleas) | 0,2 μΐ | Výsledná koncentrace 0,1 μΜ |
| 7 | Primer kontrolní (Sekv. čís. 18) (rozsuspendovaný ňá koncentraci 10 μΜ vlx TE pufru nebo ve vodě prosté nukleas) | 0,2 μΐ | Výsledná koncentrace 0,1 μΜ |
| 8 | Rnasa, prostá Dnas (500 ng/μϊ) | 0,1 μϊ | 50ng/reákci |
| 9 | DNApolymerasa.RÉDTaq (1 jednotka/μΙ) | 1,0gl(je doporučeno vyměnit, pipety před dalším í krokem) | 1 jednotka/réakci |
-13CZ 299722 Bó
| 10 | Extrahovaná DNA (templát): • Vzorky k analýze * jednotlivé listy * smíchané listy (maximum je 50 listů najednou) • Negativní kontrola • Negativní, kontrola • Pozitivní kontrola | • 10-200 ng genómové DNA • 200ng genomové DNA -· 50 ng genomové DNA kukuřice; (nk603) • bez DNA templátu • 50 ng genomové DNArtkÓ03 |
Tabulka 3.
Doporučené parametry pro různé termocyklery. Jemně zamíchat a, pokud je třeba (termocykler nemá vyhřívané víku), přidat 1-2 kapky minerálního oleje na vrch každé reakce. Pokračuje < s použitím Robocykleru Stratagene, MJ Engine, Perkin-Elmer 9700 nebo Eppendorf Mastercycler Gradient za následujících parametrů cyklů.
Poznámka: Běh by na termocykleru MJ Engine nebo Eppendorf Mastercycler Gradient měl odpovídat vypočítaným parametrům. Na přístroji Perkin Elmer 9700 by měl být nastavěn teplotní náběh („ramp“) na maximum.
| Číslo cyklu | Nastavení: Robocykler Stratagene |
| 1 | 94 °G 3 minuty· |
| 38 | 94· °C 1 minuta 60 °G 1 minuta 72 °C 1 minuta |
| 1 | 72 °C 10 minut |
- 14QZ 299722 B6 τ
ί
| Číslo cyklu | Nastavení: MJ Engine nebo Perkin. Elmer'9700 | ||
| 1 | 94 °C | 3 minuty | |
| 38 | 94 °C | 10 sekund | |
| 60 °C | 30 sekund | ||
| 72 °C | 1 minuta | ||
| l | 72 °C | 10 minut |
| číslo cyklu | Nastavení: Eppendorf Mastercycler Gradient |
| 1 | 94 °C 3 minuty |
| 38 | 94 °C 15 sekund 60 °C 15 sekund 72 °C 1 minuta |
| 1 | 72 °C 10 minut |
Vklad firmy Monsanto Company, v podobě semen případu kukuřice PV.ZMGT32(nk603), popsaných výše, byl učiněn pod záštitou Budapešťské dohody se sbírkou American Culture
Collection (ATCC), 1081 University Boutevard, Manassas, Va. 20110. Přístupové číslo ATCC je PTA-2478, Vklad bude uchován v depozitáři po dobu 30 let, nebo 5 let od poslední žádosti, nebo po dobu účinnosti patentu, cokoli bude delší a bude-li třeba bude kdykoli vyměněn.
Po znázornění a vysvětlení principů podle vynálezu by mělo být odborníkům jasné, že je možné uspořádání a detaily vynálezu modifikovat bez odchýlení od těchto principů. Nárokujeme si veškeré změny, které jsou v duchu a rámci připojených nároků.
Veškeré publikace a publikované patenty v tomto popisu citované jsou zahrnuty jako odkazy ve stejné míře, jako by byla každá jednotlivá publikace či patent specificky a individuálně označen k zahrnutí jako odkaz.
Claims (10)
- PATENTOVÉ NÁROKY 1 11. Molekula DNA obsahující sekvenci nukleotidů identifikované jako Sekv. čís. 7 nebo Sekv. 20 ČÍS. 8.
- 2. Pár molekul DNA obsahující první a druhou molekulu DNA, přičemž obě molekuly mají nejméně 11 přilehlých nukleotidů ze Sekv. čís. 7, nebo jejího komplementárního řetězce a které fungují jako DNA primery nebo sondy, charakteristické pro DNA extrahovanou z rostliny kuku25 řiče PV-ZMGT32(nk603) nebo jejích potomků.
- 3. Pár molekul DNA obsahující první a druhou molekulu DNA, přičemž obě molekuly mají nejméně 11 přilehlých nukleotidů ze Sekv. čís. 8, nebo jejího komplementárního řetězce a které fungují jako DNA primery nebo sondy, charakteristické pro DNA extrahovanou z rostliny kuku30 řiče PV-ZMGT32(nk603) nebo jejích potomků,
- 4. Způsob detekce přítomnosti molekuly DNA, vybrané ze skupiny sestávající ze Sekv. čís. 7 a Sekv. čís. 8 ve vzorku, vyznačující se tím, že zahrnuje:-15CZ 299722 Bó (a) extrakci vzorku DNA z rostliny kukuřice;(b) zprostředkování kontaktu mezi vzorkem DNA a párem molekul DNA primerů zahrnující J molekuly DNA primeru s nejméně 11 přilehlými nukleotidy ze Sekv. čís. 7 nebo jejího komple- J mentámího řetězce, nebo ze Sekv. čís. 8 nebo jejího komplementárního řetězce; |
- 5 (c) poskytnutí podmínky amplifikační reakce nukleových kyselin; Í (d) provedení amplifikační reakce, a tím vytvoření molekuly DNA amplikonu; a 1 (e) detekci molekuly DNA amplikonu.5. Způsob detekce přítomnosti molekuly DNA vybrané ze skupiny sestávající ze Sekv. čís. Ί a io Sekv. čís. 8 ve vzorku DNA, vy z n a č uj íc í se tím, že obsahuje:(a) extrakci vzorku DNA z rostliny kukuřice;(b) zprostředkování kontaktu mezi vzorkem DNA a molekulou identifikovanou jako Sekv. čís. 9,Sekv. čís, 10, Sekv. čís. 11 nebo Sekv. čís. 12, kde molekula DNA je sonda DNA, která hybridizuje za přísných hybridizačních podmínek s molekulou DNA vybranou ze skupiny sestávající ze is Sekv. čís. 7 nebo Sekv. čís. 8 a nehybridizuje za přísných hybridizačních podmínek se vzorkem DNA, který neobsahuje molekulu identifikovanou jako Sekv. čís. 7 nebo Sekv. čís. 8;(c) působení přísných hybridizačních podmínek na vzorek a sondu; a detekci hybridizace sondy s DNA.20
- 6. Molekula DNA vybraná ze skupiny sestávající ze Sekv. čís. 9, Sekv. čís. 10, Sekv. čís. 11,Sekv. čís. 12 a jejich komplementární řetězce.
- 7. Způsob šlechtění tolerance ke glyfosfátu u rostlin kukuřice vyznačující se tím, že obsahuje:25 a) extrakci vzorku DNA z kukuřičných rostlin potomků;b) zprostředkování kontaktu mezi vzorkem DNA a molekulou nukleové kyseliny, kódující znak, a vybrané ze skupiny sestávající ze Sekv. čís. 9, Sekv. čís. 10, Sekv. čís. 11, Sekv. čís. 12 a jejich komplementární řetězce;c) provedení způsobu šlechtění s pomocí znaku na vlastnost tolerance ke glyfosfátu, kde je vlast30 nost tolerance ke glyfosfátu spojena s komplementárním řetězcem, molekuly nukleové kyseliny kódující znak.
- 8. Kit pro detekci DNA obsahující alespoň jednu molekulu DNA s nejméně 11 přilehlými nukleotidy homologními nebo komplementárními k Sekv. čís. 7, nebo Sekv. čís. 8, která slouží35 jako ĎNA primer nebo sonda specifická pro případ kukuřice PV-ZMGT32(nk603) a její potomky,
- 9. Buňka rostliny kukuřice tolerantní ke glyfosfátu, přičemž tato buňka je poskytovaná ATCC sbírkou semen PTA-2478 potomků nebo jejich částí.
- 10. Transgenní buňka kukuřice tolerantní ke glyfosfátu obsahující do genomu inkorporovanou molekulu DNA kódující toleranci ke glyfosfátu EPSPS a DNA s nukleotidovou sekvencí SEQ ID NO:9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 a SEQ ID NO: 12.45 11. Jádro kukuřičné buňky obsahující do genomu inkorporovanou molekulu DNA kódující toleranci ke glyfosfátu EPSPS a DNA s nukleotidovou sekvencí SEQ ID NO:9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 aSEQIDNO:12.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US21356700P | 2000-06-22 | 2000-06-22 | |
| US24001400P | 2000-10-13 | 2000-10-13 | |
| US24121500P | 2000-10-13 | 2000-10-13 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20012203A3 CZ20012203A3 (cs) | 2002-02-13 |
| CZ299722B6 true CZ299722B6 (cs) | 2008-10-29 |
Family
ID=27395887
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2008-437A CZ305949B6 (cs) | 2000-06-22 | 2001-06-18 | Kukuřičná rostlina PV-ZMGT32(nk) nebo její část, tolerantní ke glyfosfátu, její potomstvo a její semena |
| CZ20012203A CZ299722B6 (cs) | 2000-06-22 | 2001-06-18 | Kukurice tolerantní ke glyfosfátu PV-ZMGT32(nk603), DNA konstrukt PV-ZMGT32(nk603) nesoucí toleranci rostlin ke glyfosfátu a zpusob jeho detekce v rostlinných vzorcích |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2008-437A CZ305949B6 (cs) | 2000-06-22 | 2001-06-18 | Kukuřičná rostlina PV-ZMGT32(nk) nebo její část, tolerantní ke glyfosfátu, její potomstvo a její semena |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (8) | US6825400B2 (cs) |
| EP (3) | EP1582592B1 (cs) |
| CN (2) | CN100350043C (cs) |
| AR (4) | AR031665A1 (cs) |
| AT (2) | ATE466945T1 (cs) |
| BG (1) | BG65315B1 (cs) |
| BR (2) | BR122013026754B1 (cs) |
| CA (1) | CA2349841C (cs) |
| CY (2) | CY1106109T1 (cs) |
| CZ (2) | CZ305949B6 (cs) |
| DE (2) | DE60118660T2 (cs) |
| DK (3) | DK1167531T3 (cs) |
| ES (3) | ES2564464T3 (cs) |
| HU (2) | HU230814B1 (cs) |
| ID (1) | ID30575A (cs) |
| MX (1) | MXPA01006407A (cs) |
| PL (1) | PL199928B1 (cs) |
| PT (2) | PT1167531E (cs) |
| RS (1) | RS49990B (cs) |
| SI (3) | SI1167531T1 (cs) |
| UY (1) | UY26788A1 (cs) |
Families Citing this family (331)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BR122013026754B1 (pt) * | 2000-06-22 | 2018-02-27 | Monsanto Company | Molécula de dna e processos para produzir uma planta de milho tolerante à aplicação do herbicida glifosato |
| EP1322773A2 (en) | 2000-09-29 | 2003-07-02 | Monsanto Technology LLC | Glyphosate tolerant wheat plant 33391 and compositions and methods for detection thereof |
| AU2002218413A1 (en) | 2000-11-30 | 2002-06-11 | Ses Europe N.V. | Glyphosate resistant transgenic sugar beet characterised by a specific transgene insertion (t227-1), methods and primers for the detection of said insertion |
| JP2006508680A (ja) * | 2002-12-05 | 2006-03-16 | モンサント テクノロジー エルエルシー | コヌカグサ事象ａｓｒ−３６８ならびにその検出のための組成物および方法 |
| DK2267136T3 (da) | 2003-01-31 | 2013-11-04 | Monsanto Technology Llc | Glyphosattolerante lucerne-begivenheder og fremgangsmåder til detektering deraf |
| CA2524493C (en) * | 2003-05-02 | 2013-06-25 | Dow Agrosciences Llc | Corn event tc1507 and methods for detection thereof |
| US7157281B2 (en) * | 2003-12-11 | 2007-01-02 | Monsanto Technology Llc | High lysine maize compositions and event LY038 maize plants |
| HUE025703T2 (en) | 2003-12-15 | 2016-04-28 | Monsanto Technology Llc | MON88017 corn plant and compositions, and a method for detecting them |
| US7855323B2 (en) * | 2004-02-10 | 2010-12-21 | Monsanto Technology Llc | Recombinant DNA for gene suppression |
| AR047598A1 (es) * | 2004-02-10 | 2006-01-25 | Monsanto Technology Llc | Semilla de maiz transgenica con mayor contenido de aminoacidos |
| US7683237B2 (en) * | 2004-02-10 | 2010-03-23 | Monsanto Technology Llc | Maize seed with synergistically enhanced lysine content |
| JP2007530036A (ja) | 2004-03-25 | 2007-11-01 | シンジェンタ パーティシペーションズ アクチェンゲゼルシャフト | Ｍｉｒ６０４系統トウモロコシ |
| BRPI0509541A (pt) | 2004-03-30 | 2007-09-18 | Monsanto Technology Llc | métodos para controlar agentes patógenos de planta utilizando n-fosfonometilglicina |
| US20070197474A1 (en) * | 2004-03-30 | 2007-08-23 | Clinton William P | Methods for controlling plants pathogens using N-phosphonomethylglycine |
| PL2308977T5 (pl) * | 2004-04-30 | 2017-10-31 | Dow Agrosciences Llc | Nowy gen odporności na herbicydy |
| US7323556B2 (en) * | 2004-09-29 | 2008-01-29 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Corn event DAS-59122-7 and methods for detection thereof |
| AP2693A (en) * | 2005-05-27 | 2013-07-16 | Monsanto Technology Llc | Soybean event MON89788 and methods for detection thereof |
| CA2616535A1 (en) | 2005-07-29 | 2007-02-08 | Monsanto Technology Llc | Development of novel germplasm using segregates from transgenic crosses |
| BRPI0615088A2 (pt) * | 2005-08-24 | 2009-07-14 | Pioneer Hi Bred Int | composições que fornecem toleráncia a herbicidas múltiplos e métodos de uso das mesmas |
| EP1931790B1 (en) * | 2005-10-03 | 2012-01-25 | Monsanto Technology, LLC | Transgenic plant seed with increased lysine |
| EP1934354B1 (en) | 2005-10-13 | 2017-11-08 | Monsanto Technology, LLC | Methods for producing hybrid seed |
| EP3241430B1 (en) | 2005-10-28 | 2020-08-26 | Dow AgroSciences LLC | Novel herbicide resistance genes |
| WO2007087279A2 (en) * | 2006-01-23 | 2007-08-02 | Board Of Trustees Of Michigan State University | Methods for breeding glyphosate resistant plants and compositions thereof |
| PE20080886A1 (es) * | 2006-10-03 | 2008-08-21 | Monsanto Technology Llc | Metodo para la produccion de semilla de maiz hibrido y composiciones producidas a partir del mismo |
| TWM318228U (en) * | 2006-11-02 | 2007-09-01 | Datafab Sys Inc | Structure for protecting terminal of memory card adapter |
| EP2209897A1 (en) * | 2007-11-15 | 2010-07-28 | Monsanto Technology, LLC | Soybean plant and seed corresponding to transgenic event mon87701 and methods for detection thereof |
| KR101597376B1 (ko) | 2008-02-15 | 2016-02-26 | 몬산토 테크놀로지 엘엘씨 | 트랜스제닉 계통 ｍｏｎ８７７６９에 상응하는 대두 식물 및 종자, 및 그의 검출 방법 |
| PL2247736T3 (pl) * | 2008-02-29 | 2013-10-31 | Monsanto Technology Llc | Zdarzenie MON87460 rośliny kukurydzy oraz kompozycje i sposoby do jego wykrywania |
| EP2113172A1 (de) * | 2008-04-28 | 2009-11-04 | Bayer CropScience AG | Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen |
| WO2010024976A1 (en) | 2008-08-29 | 2010-03-04 | Monsanto Technology Llc | Soybean plant and seed corresponding to transgenic event mon87754 and methods for detection thereof |
| CA2738474C (en) | 2008-09-29 | 2020-05-12 | Monsanto Technology Llc | Soybean transgenic event mon87705 and methods for detection thereof |
| AR075126A1 (es) * | 2009-01-29 | 2011-03-09 | Bayer Cropscience Ag | Metodo para el mejor uso del potencial de produccion de plantas transgenicas |
| US10555527B2 (en) | 2009-05-18 | 2020-02-11 | Monsanto Technology Llc | Use of glyphosate for disease suppression and yield enhancement in soybean |
| UA115762C2 (uk) | 2009-11-23 | 2017-12-26 | Монсанто Текнолоджи Ллс | Рекомбінантна молекула днк, яка вказує на присутність трансгенної події mon 87427 маїсу |
| BR112012018108A2 (pt) | 2010-01-22 | 2015-10-20 | Bayer Ip Gmbh | combinações acaricidas e/ou inseticidas de ingredientes ativos |
| CN101812527B (zh) * | 2010-04-20 | 2014-09-17 | 北京农业职业学院 | 一种快速检测6种转基因玉米的方法 |
| AU2011261580B2 (en) | 2010-06-04 | 2013-12-19 | Monsanto Technology Llc | Transgenic brassica event MON 88302 and methods of use thereof |
| AU2011302508B2 (en) * | 2010-09-15 | 2016-09-29 | Corteva Agriscience Llc | Monoclonal antibodies and detection methods for enzymes that confer resistance to 2,4-dichlorophenoxyacetic acid |
| WO2012051199A2 (en) | 2010-10-12 | 2012-04-19 | Monsanto Technology Llc | Soybean plant and seed corresponding to transgenic event mon87712 and methods for detection thereof |
| WO2012065944A1 (en) | 2010-11-15 | 2012-05-24 | Bayer Cropscience Ag | N-aryl pyrazole(thio)carboxamides |
| BR112013012966A2 (pt) | 2010-11-29 | 2016-08-23 | Bayer Ip Gmbh | iminas alfa, beta - insaturadas |
| MX2013005356A (es) | 2010-12-01 | 2013-07-05 | Bayer Ip Gmbh | Uso de fluopyram para combatir nematodos en cultivos. |
| EP2460407A1 (de) | 2010-12-01 | 2012-06-06 | Bayer CropScience AG | Wirkstoffkombinationen umfassend Pyridylethylbenzamide und weitere Wirkstoffe |
| US20130345058A1 (en) | 2011-03-10 | 2013-12-26 | Wolfram Andersch | Use of lipochito-oligosaccharide compounds for safeguarding seed safety of treated seeds |
| EP3295797A1 (en) | 2011-03-23 | 2018-03-21 | Bayer Intellectual Property GmbH | Active compound combinations |
| US20140051575A1 (en) | 2011-04-08 | 2014-02-20 | Juergen Benting | Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives |
| ES2714714T3 (es) | 2011-04-22 | 2019-05-29 | Bayer Cropscience Ag | Composiciones de compuestos activos que comprenden un derivado de (tio)carboximida y un compuesto fungicida |
| EP2720543B1 (en) | 2011-06-14 | 2018-08-22 | Bayer CropScience AG | Use of an enaminocarbonyl compound in combination with a biological control agent |
| UA121189C2 (uk) | 2011-07-01 | 2020-04-27 | Монсанто Текнолоджи Ллс | Конструкція рекомбінантної днк, яка індукує чоловічу стерильність в трансгенній рослині, та спосіб її застосування |
| BR112014001808A2 (pt) | 2011-07-28 | 2017-10-31 | Genective | evento vc0-01981-5 do milho tolerante ao glifosato e kit e método para a detecção do mesmo |
| BR112014002855A2 (pt) | 2011-08-10 | 2017-02-21 | Bayer Ip Gmbh | combinações do composto ativo que incluem derivados específicos do ácido tetrâmico |
| WO2013026740A2 (en) | 2011-08-22 | 2013-02-28 | Bayer Cropscience Nv | Methods and means to modify a plant genome |
| EP2561759A1 (en) | 2011-08-26 | 2013-02-27 | Bayer Cropscience AG | Fluoroalkyl-substituted 2-amidobenzimidazoles and their effect on plant growth |
| CN102952861B (zh) * | 2011-08-26 | 2014-12-31 | 深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心 | 转基因玉米多重pcr-dhplc检测引物及检测方法 |
| JP6002225B2 (ja) | 2011-09-12 | 2016-10-05 | バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ | 殺菌性４−置換−３−｛フェニル［（ヘテロシクリルメトキシ）イミノ］メチル｝−１，２，４−オキサジアゾール−５（４ｈ）−オン誘導体 |
| AR087874A1 (es) | 2011-09-16 | 2014-04-23 | Bayer Ip Gmbh | Uso de acilsulfonamidas para mejorar el rendimiento de las plantas |
| CA2848622A1 (en) | 2011-09-16 | 2013-03-21 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Use of 5-phenyl- or 5-benzyl-2-isoxazoline-3-carboxylates for improving plant yield |
| AR087873A1 (es) | 2011-09-16 | 2014-04-23 | Bayer Ip Gmbh | Uso de fenilpirazolin-3-carboxilatos para mejorar el rendimiento de las plantas |
| CN103842507A (zh) | 2011-10-04 | 2014-06-04 | 拜耳知识产权有限责任公司 | 通过抑制酵母氨酸脱氢酶基因控制真菌和卵菌的RNAi |
| CA2792804A1 (en) | 2011-10-18 | 2013-04-18 | Dow Agrosciences Llc | Materials and methods for detecting the aryloxyalkanoate dioxygenase gene (aad-12) containing event pdab4472-1606 in plants |
| CN102409094B (zh) * | 2011-11-17 | 2013-06-26 | 四川省农业科学院分析测试中心 | 转基因玉米nk603品系特异定量pcr精准检测方法 |
| CN102409092B (zh) * | 2011-11-17 | 2013-06-26 | 四川省农业科学院分析测试中心 | 转基因玉米nk603结构特异定量pcr精准检测方法 |
| MX2014005976A (es) | 2011-11-21 | 2014-08-27 | Bayer Ip Gmbh | Derivados de n-[(silil trisustituido)metil]-carboxamida fungicidas. |
| CN105906567B (zh) | 2011-11-30 | 2019-01-22 | 拜耳知识产权有限责任公司 | 杀真菌的n-二环烷基和n-三环烷基(硫代)羧酰胺衍生物 |
| WO2013092519A1 (en) | 2011-12-19 | 2013-06-27 | Bayer Cropscience Ag | Use of anthranilic acid diamide derivatives for pest control in transgenic crops |
| KR102028893B1 (ko) | 2011-12-29 | 2019-10-07 | 바이엘 인텔렉쳐 프로퍼티 게엠베하 | 살진균 3-[(1,3-티아졸-4-일메톡시이미노)(페닐)메틸]-2-치환-1,2,4-옥사디아졸-5(2h)-온 유도체 |
| KR102028903B1 (ko) | 2011-12-29 | 2019-10-07 | 바이엘 인텔렉쳐 프로퍼티 게엠베하 | 살진균 3-[(피리딘-2-일메톡시이미노)(페닐)메틸]-2-치환-1,2,4-옥사디아졸-5(2h)-온 유도체 |
| WO2013110594A1 (en) | 2012-01-25 | 2013-08-01 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Active compound combinations containing fluopyram and biological control agent |
| MX350563B (es) | 2012-01-25 | 2017-09-11 | Bayer Ip Gmbh | Combinaciones de compuestos activos que contienen fluopiram, bacillus y un agente de control biologico. |
| US8975469B1 (en) | 2012-02-21 | 2015-03-10 | Pioneer Hi Bred International Inc | Maize hybrid X13C704HR |
| US8952229B1 (en) | 2012-02-21 | 2015-02-10 | Pioneer Hi Bred International Inc | Maize inbred PH1K0H1 |
| BR122019010667B1 (pt) | 2012-02-27 | 2020-12-22 | Bayer Intellectual Property Gmbh | combinação, método para controle de fungos fitopatogênicos prejudiciais e uso da referida combinação |
| WO2013139949A1 (en) | 2012-03-23 | 2013-09-26 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Compositions comprising a strigolactame compound for enhanced plant growth and yield |
| EP2836489B1 (en) | 2012-04-12 | 2016-06-29 | Bayer Cropscience AG | N-acyl-2-(cyclo) alkylpyrrolidines and piperidines useful as fungicides |
| CA2865599C (en) | 2012-04-20 | 2020-10-27 | Bayer Cropscience Ag | N-cycloalkyl-n-[(heterocyclylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives |
| WO2013156560A1 (en) | 2012-04-20 | 2013-10-24 | Bayer Cropscience Ag | N-cycloalkyl-n-[(trisubstitutedsilylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives |
| UA126903C2 (uk) | 2012-05-08 | 2023-02-22 | Монсанто Текнолоджи Ллс | Об'єкт кукурудзи mon 87411 |
| EP2662362A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | Pyrazole indanyl carboxamides |
| EP2847171A1 (en) | 2012-05-09 | 2015-03-18 | Bayer CropScience AG | 5-halogenopyrazole indanyl carboxamides |
| EP2662361A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | Pyrazol indanyl carboxamides |
| EP2662363A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | 5-Halogenopyrazole biphenylcarboxamides |
| US9249104B2 (en) | 2012-05-09 | 2016-02-02 | Bayer Cropscience Ag | Pyrazole indanyl carboxamides |
| EP2662364A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | Pyrazole tetrahydronaphthyl carboxamides |
| EP2662360A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | 5-Halogenopyrazole indanyl carboxamides |
| EP2662370A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | 5-Halogenopyrazole benzofuranyl carboxamides |
| AR091104A1 (es) | 2012-05-22 | 2015-01-14 | Bayer Cropscience Ag | Combinaciones de compuestos activos que comprenden un derivado lipo-quitooligosacarido y un compuesto nematicida, insecticida o fungicida |
| EP2854535A1 (en) | 2012-05-30 | 2015-04-08 | Bayer Cropscience AG | Compositions comprising a biological control agent and an insecticide |
| PT2854549T (pt) | 2012-05-30 | 2018-11-28 | Bayer Cropscience Ag | Composição que compreende um agente de controlo biológico e fluopicolida |
| EP3409120A1 (en) | 2012-05-30 | 2018-12-05 | Bayer CropScience Aktiengesellschaft | Composition comprising a biological control agent and a fungicide |
| CN107027809A (zh) | 2012-05-30 | 2017-08-11 | 拜耳作物科学股份公司 | 包含生物防治剂和选自呼吸链复合物i或ii抑制剂的杀真菌剂的组合物 |
| EP2854542B1 (en) | 2012-05-30 | 2018-08-01 | Bayer Cropscience AG | Compositions comprising a biological control agent and an insecticide |
| US9380787B2 (en) | 2012-05-30 | 2016-07-05 | Bayer Cropscience Ag | Composition comprising a biological control agent and a fungicide selected from inhibitors of amino acid or protein biosynthesis, inhibitors of ATP production and inhibitors of the cell wall synthesis |
| TR201816247T4 (tr) | 2012-05-30 | 2018-11-21 | Bayer Cropscience Ag | Metalaksil ve metalaksil-m'den seçilen bir fungisit ve bir biyolojik kontrol ajanı içeren bileşim. |
| DK2854547T3 (en) | 2012-05-30 | 2018-11-26 | Bayer Cropscience Ag | COMPOSITION CONTAINING A BIOLOGICAL PESTICID AND TRIFLOXY STROBIN |
| BR112015002176A2 (pt) | 2012-07-31 | 2017-07-04 | Bayer Cropscience Ag | composições que compreendem uma mistura pesticida de terpeno e um inseticida |
| WO2014043435A1 (en) | 2012-09-14 | 2014-03-20 | Bayer Cropscience Lp | Hppd variants and methods of use |
| EP2719280A1 (en) | 2012-10-11 | 2014-04-16 | Bayer CropScience AG | Use of N-phenylethylpyrazole carboxamide derivatives or salts thereof for resistance management of phytopathogenic fungi |
| EP2908640B1 (en) | 2012-10-19 | 2019-10-02 | Bayer Cropscience AG | Method of plant growth promotion using carboxamide derivatives |
| US20150250176A1 (en) | 2012-10-19 | 2015-09-10 | Bayer Cropscience Ag | Method for enhancing tolerance to abiotic stress in plants using carboxamide or thiocarboxamide derivatives |
| ES2665320T3 (es) | 2012-10-19 | 2018-04-25 | Bayer Cropscience Ag | Procedimiento de tratamiento de plantas contra hongos resistentes a fungicidas usando derivados de carboxamida o de tiocarboxamida |
| UA114822C2 (uk) | 2012-10-19 | 2017-08-10 | Байєр Кропсайнс Аг | Комбінації активних сполук, що містять карбоксамідні похідні |
| EP2735231A1 (en) | 2012-11-23 | 2014-05-28 | Bayer CropScience AG | Active compound combinations |
| CN104812247A (zh) | 2012-11-30 | 2015-07-29 | 拜耳作物科学股份公司 | 二元杀真菌混合物 |
| EA030235B1 (ru) | 2012-11-30 | 2018-07-31 | Байер Кропсайенс Акциенгезельшафт | Тройные фунгицидные смеси |
| UA117819C2 (uk) | 2012-11-30 | 2018-10-10 | Байєр Кропсайєнс Акцієнгезелльшафт | Подвійні пестицидні і фунгіцидні суміші |
| BR112015012054A2 (pt) | 2012-11-30 | 2017-07-11 | Bayer Cropscience Ag | mistura fungicida ou pesticida binária |
| BR112015012519A2 (pt) | 2012-11-30 | 2017-07-11 | Bayer Cropscience Ag | misturas ternárias fungicidas e pesticidas |
| BR112015012785A2 (pt) | 2012-12-03 | 2017-07-11 | Bayer Cropscience Ag | composição compreendendo um agente de controle biológico e um fungicida |
| WO2014086753A2 (en) | 2012-12-03 | 2014-06-12 | Bayer Cropscience Ag | Composition comprising biological control agents |
| CA2893077A1 (en) | 2012-12-03 | 2014-06-12 | Bayer Cropscience Ag | Composition comprising a biological control agent and a fungicide |
| WO2014086758A2 (en) | 2012-12-03 | 2014-06-12 | Bayer Cropscience Ag | Composition comprising a biological control agent and an insecticide |
| EP2925146A2 (en) | 2012-12-03 | 2015-10-07 | Bayer CropScience AG | Composition comprising a biological control agent and a fungicide |
| EP2925142B1 (en) | 2012-12-03 | 2018-01-31 | Bayer CropScience AG | Composition comprising a biological control agent and an insecticide |
| US20150289518A1 (en) | 2012-12-03 | 2015-10-15 | Bayer Cropscience Ag | Composition comprising a biological control agent and an insecticide |
| CN105451563A (zh) | 2012-12-03 | 2016-03-30 | 拜耳作物科学股份公司 | 包含生物防治剂的组合物 |
| WO2014090765A1 (en) | 2012-12-12 | 2014-06-19 | Bayer Cropscience Ag | Use of 1-[2-fluoro-4-methyl-5-(2,2,2-trifluoroethylsulfinyl)phenyl]-5-amino-3-trifluoromethyl)-1 h-1,2,4 tfia zole for controlling nematodes in nematode-resistant crops |
| AR093996A1 (es) | 2012-12-18 | 2015-07-01 | Bayer Cropscience Ag | Combinaciones bactericidas y fungicidas binarias |
| IN2015DN04206A (cs) | 2012-12-19 | 2015-10-16 | Bayer Cropscience Ag | |
| MX2015010259A (es) | 2013-02-11 | 2015-10-29 | Bayer Cropscience Lp | Composiciones que comprenden un agente de control biologico basado en la cepa nrrl b-50550 de streptomyces microflavus y otro agente de control biologico. |
| EP2953464A1 (en) | 2013-02-11 | 2015-12-16 | Bayer Cropscience LP | Compositions comprising gougerotin and a fungicide |
| CA2899334A1 (en) | 2013-02-11 | 2014-08-14 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising gougerotin and an insecticide |
| US8907159B1 (en) | 2013-02-13 | 2014-12-09 | Pioneer Hi Bred International Inc | Maize inbred PH24DM |
| US8916744B1 (en) | 2013-02-13 | 2014-12-23 | Pioneer Hi Bred International Inc | Maize inbred PH24DV |
| US8921672B1 (en) | 2013-02-13 | 2014-12-30 | Pioneer Hi Bred International Inc | Maize inbred PH24DS |
| RU2020105862A (ru) | 2013-03-07 | 2020-02-28 | Атеникс Корп. | Гены токсинов и способы их применения |
| CN105307492B (zh) | 2013-04-19 | 2018-03-30 | 拜耳作物科学股份公司 | 二元杀虫或除虫混合物 |
| WO2014170345A2 (en) | 2013-04-19 | 2014-10-23 | Bayer Cropscience Ag | Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants |
| WO2014177514A1 (en) | 2013-04-30 | 2014-11-06 | Bayer Cropscience Ag | Nematicidal n-substituted phenethylcarboxamides |
| TW201507722A (zh) | 2013-04-30 | 2015-03-01 | Bayer Cropscience Ag | 做為殺線蟲劑及殺體內寄生蟲劑的ｎ－（２－鹵素－２－苯乙基）－羧醯胺類 |
| EP3013802B1 (en) | 2013-06-26 | 2019-08-14 | Bayer Cropscience AG | N-cycloalkyl-n-[(bicyclylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives |
| EP3502127B1 (en) | 2013-10-09 | 2023-07-26 | Monsanto Technology LLC | Transgenic corn event mon87403 and methods for detection thereof |
| AR097995A1 (es) | 2013-10-14 | 2016-04-27 | Syngenta Participations Ag | Método para sembrar filas de cultivos |
| RU2685723C1 (ru) | 2013-12-05 | 2019-04-23 | Байер Кропсайенс Акциенгезелльшафт | Производные n-циклоалкил-n-{ [2-(1-замещенный циклоалкил)фенил]метилен} -(тио)карбоксамида |
| US10071967B2 (en) | 2013-12-05 | 2018-09-11 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | N-cycloalkyl-N-{[2-(1-substitutedcycloalkyl)phenyl]methylene}-(thio)carboxamide derivatives |
| EP2885970A1 (en) | 2013-12-21 | 2015-06-24 | Bayer CropScience AG | Fungicide compositions comprising compound I, at least one succinate dehydrogenase (SDH) inhibitor and at least one triazole fungicide |
| CA2942171C (en) | 2014-03-11 | 2023-05-09 | Bayer Cropscience Lp | Hppd variants and methods of use |
| WO2015160618A1 (en) | 2014-04-16 | 2015-10-22 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising ningnanmycin and a biological control agent |
| WO2015160620A1 (en) | 2014-04-16 | 2015-10-22 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising ningnanmycin and an insecticide |
| WO2015160619A1 (en) | 2014-04-16 | 2015-10-22 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising ningnanmycin and a fungicide |
| CA2963122A1 (en) | 2014-10-15 | 2016-04-21 | Monsanto Technology Llc | Herbicide tolerance genes and methods of use thereof |
| US11033593B2 (en) | 2014-11-14 | 2021-06-15 | Basf Plant Science Company Gmbh | Brassica events LBFLFK and LBFDAU and methods for detection thereof |
| CN104745708A (zh) * | 2015-04-02 | 2015-07-01 | 湖南省食品安全生产工程技术研究中心 | 一种转基因玉米nk603品系的lamp检测试剂盒及检测方法 |
| EP3283476B1 (en) | 2015-04-13 | 2019-08-14 | Bayer Cropscience AG | N-cycloalkyl-n-(biheterocyclyethylene)-(thio)carboxamide derivatives |
| CN104878090B (zh) * | 2015-04-30 | 2019-01-15 | 北京大北农科技集团股份有限公司 | 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9877的核酸序列及其检测方法 |
| CN104830846B (zh) * | 2015-04-30 | 2018-10-30 | 北京大北农科技集团股份有限公司 | 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9898的核酸序列及其检测方法 |
| CN104878096B (zh) * | 2015-04-30 | 2019-01-15 | 北京大北农科技集团股份有限公司 | 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9868的核酸序列及其检测方法 |
| CN104830847B (zh) * | 2015-04-30 | 2019-01-11 | 北京大北农科技集团股份有限公司 | 用于检测玉米植物dbn9936的核酸序列及其检测方法 |
| CN104878094B (zh) * | 2015-04-30 | 2019-01-15 | 北京大北农科技集团股份有限公司 | 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9888的核酸序列及其检测方法 |
| CN104846084B (zh) * | 2015-04-30 | 2019-02-01 | 北京大北农科技集团股份有限公司 | 用于检测玉米植物dbn9927的核酸序列及其检测方法 |
| CN104830845B (zh) * | 2015-04-30 | 2018-10-30 | 北京大北农科技集团股份有限公司 | 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9878的核酸序列及其检测方法 |
| CN104878095B (zh) * | 2015-04-30 | 2018-10-26 | 北京大北农科技集团股份有限公司 | 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9858的核酸序列及其检测方法 |
| EP3097782A1 (en) | 2015-05-29 | 2016-11-30 | Bayer CropScience Aktiengesellschaft | Methods for controlling phytopathogenic nematodes by combination of fluopyram and biological control agents |
| WO2017011462A1 (en) * | 2015-07-15 | 2017-01-19 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Use of elongator genes to improve plant disease resistance |
| BR112018004779A8 (pt) | 2015-09-11 | 2022-08-09 | Bayer Cropscience Lp | Variantes de hppd e métodos de uso |
| CN105331725B (zh) * | 2015-11-30 | 2018-04-24 | 中国农业大学 | 转maroACC基因抗除草剂玉米CC-2的侧翼序列及其应用 |
| RU2019104918A (ru) | 2016-07-29 | 2020-08-28 | Байер Кропсайенс Акциенгезельшафт | Комбинации активных соединений и способы защиты материала размножения растений |
| CA3043493A1 (en) | 2016-11-23 | 2018-05-31 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Axmi669 and axmi991 toxin genes and methods for their use |
| BR112019011293A2 (pt) | 2016-12-19 | 2019-10-08 | Basf Se | compostos de fórmula i, intermediários, composição agroquímica, uso e método para combater fungos nocivos fitopatogênicos |
| WO2018136604A1 (en) | 2017-01-18 | 2018-07-26 | Bayer Cropscience Lp | Bp005 toxin gene and methods for its use |
| AR110756A1 (es) | 2017-01-18 | 2019-05-02 | Bayer Cropscience Lp | Uso de bp005 para el control de patógenos de planta |
| US11425910B2 (en) | 2017-02-21 | 2022-08-30 | Basf Se | Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| BR112019018056A2 (pt) | 2017-03-07 | 2020-08-11 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | molécula de ácido nucleico recombinante, cassete de expressão, célula hospedeira, plantas, sementes transgênicas, polipeptídeo recombinante, métodos para conferir tolerância e para controlar ervas daninhas, produto de utilidade e uso da sequência de nucleotídeos |
| EP3606912A1 (en) | 2017-04-07 | 2020-02-12 | Basf Se | Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| WO2018188962A1 (en) | 2017-04-11 | 2018-10-18 | Basf Se | Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| EP3612029A1 (en) | 2017-04-21 | 2020-02-26 | Bayer CropScience LP | Method of improving crop safety |
| WO2018202487A1 (en) | 2017-05-04 | 2018-11-08 | Basf Se | Substituted 5-(haloalkyl)-5-hydroxy-isoxazoles for combating phytopathogenic fungi |
| WO2018202491A1 (en) | 2017-05-04 | 2018-11-08 | Basf Se | Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| WO2018219797A1 (en) | 2017-06-02 | 2018-12-06 | Basf Se | Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| EP3642187A1 (en) | 2017-06-19 | 2020-04-29 | Basf Se | 2-[[5-(trifluoromethyl)-1,2,4-oxadiazol-3-yl]aryloxy](thio)acetamides for combating phytopathogenic fungi |
| WO2019025250A1 (en) | 2017-08-04 | 2019-02-07 | Basf Se | SUBSTITUTED TRIFLUOROMETHYLOXADIAZOLES FOR COMBATING PHYTOPATHOGENIC FUNGI |
| WO2019038042A1 (en) | 2017-08-21 | 2019-02-28 | Basf Se | SUBSTITUTED TRIFLUOROMETHYLOXADIAZOLES FOR THE CONTROL OF PHYTOPATHOGENIC FUNGI |
| BR112020004441B1 (pt) | 2017-09-18 | 2024-01-16 | Basf Se | Compostos da fórmula i, composição agroquímica, semente revestida, uso de compostos e método não-terapêutico de combate de fungos |
| WO2019068811A1 (en) | 2017-10-06 | 2019-04-11 | Bayer Aktiengesellschaft | COMPOSITIONS COMPRISING FLUOPYRAM AND TIOXAZAFENE |
| BR112020008096A2 (pt) | 2017-10-24 | 2020-11-03 | Basf Se | método para conferir tolerância a um herbicida e planta de soja transgênica |
| BR112020008092A2 (pt) | 2017-10-24 | 2020-09-15 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | método para conferir tolerância a um herbicida e planta de soja transgênica |
| US11147275B2 (en) | 2017-11-23 | 2021-10-19 | Basf Se | Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| WO2019121143A1 (en) | 2017-12-20 | 2019-06-27 | Basf Se | Substituted cyclopropyl derivatives |
| WO2019137995A1 (en) | 2018-01-11 | 2019-07-18 | Basf Se | Novel pyridazine compounds for controlling invertebrate pests |
| WO2019145221A1 (en) | 2018-01-29 | 2019-08-01 | BASF Agro B.V. | New agrochemical formulations |
| WO2019154663A1 (en) | 2018-02-07 | 2019-08-15 | Basf Se | New pyridine carboxamides |
| WO2019154665A1 (en) | 2018-02-07 | 2019-08-15 | Basf Se | New pyridine carboxamides |
| UA126830C2 (uk) | 2018-03-01 | 2023-02-08 | Басф Агро Б.В. | Фунгіцидні композиції мефентрифлуконазолу |
| WO2019219464A1 (en) | 2018-05-15 | 2019-11-21 | Basf Se | Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| WO2019224092A1 (en) | 2018-05-22 | 2019-11-28 | Basf Se | Pesticidally active c15-derivatives of ginkgolides |
| US11091768B2 (en) | 2018-05-23 | 2021-08-17 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture | Fruit-specific promoters |
| JP2021525774A (ja) | 2018-06-04 | 2021-09-27 | バイエル アクチェンゲゼルシャフトＢａｙｅｒ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ | 除草活性二環式ベンゾイルピラゾール |
| EP3613736A1 (en) | 2018-08-22 | 2020-02-26 | Basf Se | Substituted glutarimide derivatives |
| EP3628158A1 (en) | 2018-09-28 | 2020-04-01 | Basf Se | Pesticidal mixture comprising a mesoionic compound and a biopesticide |
| ES2955718T3 (es) | 2018-10-23 | 2023-12-05 | Basf Se | Compuestos pesticidas tricíclicos |
| EP3643705A1 (en) | 2018-10-24 | 2020-04-29 | Basf Se | Pesticidal compounds |
| EP3670501A1 (en) | 2018-12-17 | 2020-06-24 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole compounds as fungicides |
| MA54689B1 (fr) | 2019-01-11 | 2023-07-31 | Basf Se | Formes cristallines de 1-(1,2-diméthylpropyl)-n-éthyl-5-méthyl-n-pyridazine-4-yl-pyrazole-4-carboxamide |
| EP3696177A1 (en) | 2019-02-12 | 2020-08-19 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| US20220240508A1 (en) | 2019-05-10 | 2022-08-04 | Bayer Cropscience Lp | Active compound combinations |
| EP3769623A1 (en) | 2019-07-22 | 2021-01-27 | Basf Se | Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests |
| WO2020239517A1 (en) | 2019-05-29 | 2020-12-03 | Basf Se | Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests |
| WO2020244970A1 (en) | 2019-06-06 | 2020-12-10 | Basf Se | New carbocyclic pyridine carboxamides |
| MX2021014864A (es) | 2019-06-06 | 2022-01-18 | Basf Se | N-(pirid-3-il)carboxamidas fungicidas. |
| WO2020244969A1 (en) | 2019-06-06 | 2020-12-10 | Basf Se | Pyridine derivatives and their use as fungicides |
| EP3766879A1 (en) | 2019-07-19 | 2021-01-20 | Basf Se | Pesticidal pyrazole derivatives |
| AU2020318591A1 (en) | 2019-07-22 | 2022-02-17 | Bayer Aktiengesellschaft | 5-amino substituted pyrazoles and triazoles as pest control agents |
| MX2022000951A (es) | 2019-07-23 | 2022-02-14 | Bayer Ag | Novedosos compuestos de heteroaril-triazol como plaguicidas. |
| AU2020318590A1 (en) | 2019-07-23 | 2022-02-17 | Bayer Aktiengesellschaft | Novel heteroaryl-triazole compounds as pesticides |
| WO2021022069A1 (en) | 2019-08-01 | 2021-02-04 | Bayer Cropscience Lp | Method of improving cold stress tolerance and crop safety |
| EP3701796A1 (en) | 2019-08-08 | 2020-09-02 | Bayer AG | Active compound combinations |
| WO2021058659A1 (en) | 2019-09-26 | 2021-04-01 | Bayer Aktiengesellschaft | Rnai-mediated pest control |
| WO2021063736A1 (en) | 2019-10-02 | 2021-04-08 | Basf Se | Bicyclic pyridine derivatives |
| EP4037485A1 (en) | 2019-10-02 | 2022-08-10 | Bayer Aktiengesellschaft | Active compound combinations comprising fatty acids |
| WO2021063735A1 (en) | 2019-10-02 | 2021-04-08 | Basf Se | New bicyclic pyridine derivatives |
| TW202128663A (zh) | 2019-10-09 | 2021-08-01 | 德商拜耳廠股份有限公司 | 作為殺蟲劑之新穎雜芳基三唑化合物 |
| WO2021069567A1 (en) | 2019-10-09 | 2021-04-15 | Bayer Aktiengesellschaft | Novel heteroaryl-triazole compounds as pesticides |
| EP4055010A1 (de) | 2019-11-07 | 2022-09-14 | Bayer Aktiengesellschaft | Substituierte sulfonylamide zur bekämpfung tierischer schädlinge |
| WO2021097162A1 (en) | 2019-11-13 | 2021-05-20 | Bayer Cropscience Lp | Beneficial combinations with paenibacillus |
| TW202134226A (zh) | 2019-11-18 | 2021-09-16 | 德商拜耳廠股份有限公司 | 作為殺蟲劑之新穎雜芳基-三唑化合物 |
| US20220408727A1 (en) | 2019-11-18 | 2022-12-29 | Bayer Aktiengesellschaft | Active compound combinations comprising fatty acids |
| TW202136248A (zh) | 2019-11-25 | 2021-10-01 | 德商拜耳廠股份有限公司 | 作為殺蟲劑之新穎雜芳基-三唑化合物 |
| CN115335392A (zh) | 2020-01-31 | 2022-11-11 | 成对植物服务股份有限公司 | 植物避荫反应的抑制 |
| EP4107151A1 (en) | 2020-02-18 | 2022-12-28 | Bayer Aktiengesellschaft | Heteroaryl-triazole compounds as pesticides |
| EP3708565A1 (en) | 2020-03-04 | 2020-09-16 | Bayer AG | Pyrimidinyloxyphenylamidines and the use thereof as fungicides |
| CN115697045A (zh) | 2020-04-16 | 2023-02-03 | 成对植物服务股份有限公司 | 控制分生组织大小以改良作物的方法 |
| WO2021209490A1 (en) | 2020-04-16 | 2021-10-21 | Bayer Aktiengesellschaft | Cyclaminephenylaminoquinolines as fungicides |
| TW202200570A (zh) | 2020-04-21 | 2022-01-01 | 德商拜耳廠股份有限公司 | 作為殺蟲劑之經２—（雜）芳基取代的稠合雜環衍生物 |
| EP3903581A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-03 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors i |
| CN115443267A (zh) | 2020-04-28 | 2022-12-06 | 巴斯夫欧洲公司 | 杀害虫化合物 |
| EP3903584A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-03 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors iv |
| EP3903583A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-03 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors iii |
| EP3903582A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-03 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ii |
| US20230348392A1 (en) | 2020-05-06 | 2023-11-02 | Bayer Aktiengesellschaft | Pyridine (thio)amides as fungicidal compounds |
| TW202208347A (zh) | 2020-05-06 | 2022-03-01 | 德商拜耳廠股份有限公司 | 作為殺蟲劑之新穎雜芳基三唑化合物 |
| EP4149929A1 (en) | 2020-05-12 | 2023-03-22 | Bayer Aktiengesellschaft | Triazine and pyrimidine (thio)amides as fungicidal compounds |
| EP3909950A1 (en) | 2020-05-13 | 2021-11-17 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| US20230192617A1 (en) | 2020-05-19 | 2023-06-22 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | Azabicyclic(thio)amides as fungicidal compounds |
| EP4156909A1 (en) | 2020-06-02 | 2023-04-05 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods for controlling meristem size for crop improvement |
| US20230278994A1 (en) | 2020-06-04 | 2023-09-07 | Bayer Aktiengesellschaft | Heterocyclyl pyrimidines and triazines as novel fungicides |
| CN116057056A (zh) | 2020-06-10 | 2023-05-02 | 拜耳公司 | 作为杀真菌剂的氮杂双环取代的杂环化合物 |
| WO2021249800A1 (en) | 2020-06-10 | 2021-12-16 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole compounds as fungicides |
| EP3945089A1 (en) | 2020-07-31 | 2022-02-02 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors v |
| CA3186972A1 (en) | 2020-06-17 | 2021-12-23 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods for controlling meristem size for crop improvement |
| BR112022025941A2 (pt) | 2020-06-18 | 2023-01-10 | Bayer Ag | Derivados de 3-(piridazin-4-il)-5,6-di-hidro-4h-1,2,4-oxadiazina como fungicidas para proteção de cultura |
| US20230292747A1 (en) | 2020-06-18 | 2023-09-21 | Bayer Aktiengesellschaft | Composition for use in agriculture |
| BR112022025710A2 (pt) | 2020-06-19 | 2023-03-07 | Bayer Ag | 1,3,4-oxadiazol pirimidinas e 1,3,4-oxadiazol piridinas como fungicidas |
| UY39276A (es) | 2020-06-19 | 2022-01-31 | Bayer Ag | Uso de compuestos de 1,3,4–oxadiazol–2–ilpirimidina para controlar microorganismos fitopatógenos, métodos de uso y composiciones. |
| UY39275A (es) | 2020-06-19 | 2022-01-31 | Bayer Ag | 1,3,4-oxadiazol pirimidinas como fungicidas, procesos e intermediarios para su preparación, métodos de uso y usos de los mismos |
| BR112022025692A2 (pt) | 2020-06-19 | 2023-02-28 | Bayer Ag | 1,3,4-oxadiazóis e seus derivados como fungicidas |
| EP3929189A1 (en) | 2020-06-25 | 2021-12-29 | Bayer Animal Health GmbH | Novel heteroaryl-substituted pyrazine derivatives as pesticides |
| CN116033828A (zh) | 2020-07-02 | 2023-04-28 | 拜耳公司 | 作为害虫防治剂的杂环衍生物 |
| CN111826387A (zh) * | 2020-07-07 | 2020-10-27 | 黑龙江省农业科学院农产品质量安全研究所 | 一种转基因玉米品系鉴定阳性质粒分子 |
| EP3939961A1 (en) | 2020-07-16 | 2022-01-19 | Basf Se | Strobilurin type compounds and their use for combating phytopathogenic fungi |
| WO2022017836A1 (en) | 2020-07-20 | 2022-01-27 | BASF Agro B.V. | Fungicidal compositions comprising (r)-2-[4-(4-chlorophenoxy)-2-(trifluoromethyl)phenyl]-1- (1,2,4-triazol-1-yl)propan-2-ol |
| EP3970494A1 (en) | 2020-09-21 | 2022-03-23 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors viii |
| WO2022033991A1 (de) | 2020-08-13 | 2022-02-17 | Bayer Aktiengesellschaft | 5-amino substituierte triazole als schädlingsbekämpfungsmittel |
| WO2022053453A1 (de) | 2020-09-09 | 2022-03-17 | Bayer Aktiengesellschaft | Azolcarboxamide als schädlingsbekämpfungsmittel |
| WO2022058327A1 (en) | 2020-09-15 | 2022-03-24 | Bayer Aktiengesellschaft | Substituted ureas and derivatives as new antifungal agents |
| EP3974414A1 (de) | 2020-09-25 | 2022-03-30 | Bayer AG | 5-amino substituierte pyrazole und triazole als schädlingsbekämpfungsmittel |
| EP4236691A1 (en) | 2020-10-27 | 2023-09-06 | BASF Agro B.V. | Compositions comprising mefentrifluconazole |
| CN112266419B (zh) * | 2020-10-29 | 2023-02-03 | 中国科学院微生物研究所 | 一种人工合成的抗除草剂蛋白 |
| WO2022090071A1 (en) | 2020-11-02 | 2022-05-05 | Basf Se | Use of mefenpyr-diethyl for controlling phytopathogenic fungi |
| WO2022090069A1 (en) | 2020-11-02 | 2022-05-05 | Basf Se | Compositions comprising mefenpyr-diethyl |
| WO2022106304A1 (en) | 2020-11-23 | 2022-05-27 | BASF Agro B.V. | Compositions comprising mefentrifluconazole |
| KR20230121790A (ko) | 2020-12-14 | 2023-08-21 | 바스프 에스이 | 술폭시민 살충제 |
| EP3915971A1 (en) | 2020-12-16 | 2021-12-01 | Bayer Aktiengesellschaft | Phenyl-s(o)n-phenylamidines and the use thereof as fungicides |
| JP2023554063A (ja) | 2020-12-18 | 2023-12-26 | バイエル・アクチエンゲゼルシヤフト | 作物における耐性植物病原性真菌を防除するためのｄｈｏｄｈ阻害剤の使用 |
| WO2022129188A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Bayer Aktiengesellschaft | 1,2,4-oxadiazol-3-yl pyrimidines as fungicides |
| WO2022129196A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Bayer Aktiengesellschaft | Heterobicycle substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides |
| WO2022129190A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Bayer Aktiengesellschaft | (hetero)aryl substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides |
| EP4036083A1 (de) | 2021-02-02 | 2022-08-03 | Bayer Aktiengesellschaft | 5-oxy substituierte hetereozyklen, als schädlingsbekämpfungsmittel |
| CA3210785A1 (en) | 2021-02-11 | 2022-08-18 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying cytokinin oxidase levels in plants |
| EP4043444A1 (en) | 2021-02-11 | 2022-08-17 | Basf Se | Substituted isoxazoline derivatives |
| US20220380792A1 (en) | 2021-02-25 | 2022-12-01 | Pairwise Plants Services, Inc | Methods and compositions for modifying root architecture in plants |
| BR112023019400A2 (pt) | 2021-03-30 | 2023-12-05 | Bayer Ag | 3-(hetero)aril-5-clorodifluorometil-1,2,4-oxadiazol como fungicida |
| WO2022207496A1 (en) | 2021-03-30 | 2022-10-06 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
| EP4333616A1 (en) | 2021-05-03 | 2024-03-13 | Basf Se | Additives for enhancing the pesticidal effectiveness of pesticidal microorganisms |
| BR112023022763A2 (pt) | 2021-05-06 | 2024-01-02 | Bayer Ag | Imidazóis anulados substituídos por alquilamida e uso dos mesmos como inseticidas |
| KR20240007207A (ko) | 2021-05-12 | 2024-01-16 | 바이엘 악티엔게젤샤프트 | 살충제로서의 2-(헤트)아릴-치환된 융합된 헤테로사이클 유도체 |
| EP4091451A1 (en) | 2021-05-17 | 2022-11-23 | BASF Agro B.V. | Compositions comprising mefentrifluconazole |
| WO2022243109A1 (en) | 2021-05-18 | 2022-11-24 | Basf Se | New substituted quinolines as fungicides |
| WO2022243111A1 (en) | 2021-05-18 | 2022-11-24 | Basf Se | New substituted pyridines as fungicides |
| KR20240008857A (ko) | 2021-05-18 | 2024-01-19 | 바스프 에스이 | 살진균제로서의 신규한 치환된 피리딘 |
| CN117897050A (zh) | 2021-06-17 | 2024-04-16 | 成对植物服务股份有限公司 | 大豆中生长调节因子家族转录因子的修饰 |
| UY39827A (es) | 2021-06-24 | 2023-01-31 | Pairwise Plants Services Inc | Modificación de genes de ubiquitina ligasa e3 hect para mejorar los rasgos de rendimiento |
| WO2023278651A1 (en) | 2021-07-01 | 2023-01-05 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for enhancing root system development |
| EP4119547A1 (en) | 2021-07-12 | 2023-01-18 | Basf Se | Triazole compounds for the control of invertebrate pests |
| WO2023011957A1 (en) | 2021-08-02 | 2023-02-09 | Basf Se | (3-quinolyl)-quinazoline |
| WO2023011958A1 (en) | 2021-08-02 | 2023-02-09 | Basf Se | (3-pirydyl)-quinazoline |
| CA3229056A1 (en) | 2021-08-12 | 2023-02-16 | Pairwise Plants Services, Inc. | Modification of brassinosteroid receptor genes to improve yield traits |
| CA3228942A1 (en) | 2021-08-13 | 2023-02-16 | Bayer Aktiengesellschaft | Active compound combinations and fungicide compositions comprising those |
| WO2023023496A1 (en) | 2021-08-17 | 2023-02-23 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying cytokinin receptor histidine kinase genes in plants |
| EP4140986A1 (en) | 2021-08-23 | 2023-03-01 | Basf Se | Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests |
| AU2022335669A1 (en) | 2021-08-25 | 2024-02-01 | Bayer Aktiengesellschaft | Novel pyrazinyl-triazole compounds as pesticides |
| EP4140995A1 (en) | 2021-08-27 | 2023-03-01 | Basf Se | Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests |
| WO2023034731A1 (en) | 2021-08-30 | 2023-03-09 | Pairwise Plants Services, Inc. | Modification of ubiquitin binding peptidase genes in plants for yield trait improvement |
| AR126938A1 (es) | 2021-09-02 | 2023-11-29 | Pairwise Plants Services Inc | Métodos y composiciones para mejorar la arquitectura de las plantas y los rasgos de rendimiento |
| EP4144739A1 (de) | 2021-09-02 | 2023-03-08 | Bayer Aktiengesellschaft | Anellierte pyrazole als schädlingsbekämpfungsmittel |
| EP4151631A1 (en) | 2021-09-20 | 2023-03-22 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| AU2022352997A1 (en) | 2021-09-21 | 2024-04-04 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for reducing pod shatter in canola |
| WO2023060028A1 (en) | 2021-10-04 | 2023-04-13 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods for improving floret fertility and seed yield |
| US20230116819A1 (en) | 2021-10-07 | 2023-04-13 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods for improving floret fertility and seed yield |
| WO2023072671A1 (en) | 2021-10-28 | 2023-05-04 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ix |
| WO2023072670A1 (en) | 2021-10-28 | 2023-05-04 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors x |
| WO2023078915A1 (en) | 2021-11-03 | 2023-05-11 | Bayer Aktiengesellschaft | Bis(hetero)aryl thioether (thio)amides as fungicidal compounds |
| WO2023099445A1 (en) | 2021-11-30 | 2023-06-08 | Bayer Aktiengesellschaft | Bis(hetero)aryl thioether oxadiazines as fungicidal compounds |
| EP4194453A1 (en) | 2021-12-08 | 2023-06-14 | Basf Se | Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests |
| AR127904A1 (es) | 2021-12-09 | 2024-03-06 | Pairwise Plants Services Inc | Métodos para mejorar la fertilidad de floretes y el rendimiento de semillas |
| EP4198033A1 (en) | 2021-12-14 | 2023-06-21 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| EP4198023A1 (en) | 2021-12-16 | 2023-06-21 | Basf Se | Pesticidally active thiosemicarbazone compounds |
| WO2023147526A1 (en) | 2022-01-31 | 2023-08-03 | Pairwise Plants Services, Inc. | Suppression of shade avoidance response in plants |
| WO2023148028A1 (en) | 2022-02-01 | 2023-08-10 | Globachem Nv | Methods and compositions for controlling pests |
| WO2023148030A1 (en) | 2022-02-01 | 2023-08-10 | Globachem Nv | Methods and compositions for controlling pests in corn |
| WO2023156402A1 (en) | 2022-02-17 | 2023-08-24 | Basf Se | Pesticidally active thiosemicarbazone compounds |
| WO2023168217A1 (en) | 2022-03-02 | 2023-09-07 | Pairwise Plants Services, Inc. | Modification of brassinosteroid receptor genes to improve yield traits |
| EP4238971A1 (en) | 2022-03-02 | 2023-09-06 | Basf Se | Substituted isoxazoline derivatives |
| WO2023192838A1 (en) | 2022-03-31 | 2023-10-05 | Pairwise Plants Services, Inc. | Early flowering rosaceae plants with improved characteristics |
| US20230357789A1 (en) | 2022-04-07 | 2023-11-09 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for improving resistance to fusarium head blight |
| US20230383305A1 (en) | 2022-04-21 | 2023-11-30 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for improving yield traits |
| US20230348922A1 (en) | 2022-05-02 | 2023-11-02 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for enhancing yield and disease resistance |
| WO2023213670A1 (en) | 2022-05-03 | 2023-11-09 | Bayer Aktiengesellschaft | Crystalline forms of (5s)-3-[3-(3-chloro-2-fluorophenoxy)-6-methylpyridazin-4-yl]-5-(2-chloro-4-methylbenzyl)-5,6-dihydro-4h-1,2,4-oxadiazine |
| WO2023213626A1 (en) | 2022-05-03 | 2023-11-09 | Bayer Aktiengesellschaft | Use of (5s)-3-[3-(3-chloro-2-fluorophenoxy)-6-methylpyridazin-4-yl]-5-(2-chloro-4-methylbenzyl)-5,6-dihydro-4h-1,2,4-oxadiazine for controlling unwanted microorganisms |
| US20230416767A1 (en) | 2022-05-05 | 2023-12-28 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying root architecture and/or improving plant yield traits |
| WO2024006679A1 (en) | 2022-06-27 | 2024-01-04 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying shade avoidance in plants |
| US20240002873A1 (en) | 2022-06-29 | 2024-01-04 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement |
| WO2024006791A1 (en) | 2022-06-29 | 2024-01-04 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement |
| WO2024028243A1 (en) | 2022-08-02 | 2024-02-08 | Basf Se | Pyrazolo pesticidal compounds |
| US20240043857A1 (en) | 2022-08-04 | 2024-02-08 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for improving yield traits |
| WO2024036240A1 (en) | 2022-08-11 | 2024-02-15 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement |
| US20240090466A1 (en) | 2022-09-08 | 2024-03-21 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for improving yield characteristics in plants |
| EP4342885A1 (en) | 2022-09-20 | 2024-03-27 | Basf Se | N-(3-(aminomethyl)-phenyl)-5-(4-phenyl)-5-(trifluoromethyl)-4,5-dihydroisoxazol-3-amine derivatives and similar compounds as pesticides |
| EP4295688A1 (en) | 2022-09-28 | 2023-12-27 | Bayer Aktiengesellschaft | Active compound combination |
| WO2024068518A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-heteroaryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
| WO2024068519A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
| WO2024068517A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
| WO2024068520A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998044140A1 (en) * | 1997-04-03 | 1998-10-08 | Dekalb Genetics Corporation | Glyphosate resistant maize lines |
| US5948956A (en) * | 1997-10-16 | 1999-09-07 | Oms Investments, Inc. | Transgenic plants and method for node segment transformation |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4683195A (en) | 1986-01-30 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences |
| US4683202A (en) | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
| US5164316A (en) | 1987-01-13 | 1992-11-17 | The University Of British Columbia | DNA construct for enhancing the efficiency of transcription |
| US5641876A (en) | 1990-01-05 | 1997-06-24 | Cornell Research Foundation, Inc. | Rice actin gene and promoter |
| US5633435A (en) | 1990-08-31 | 1997-05-27 | Monsanto Company | Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthases |
| US5593874A (en) * | 1992-03-19 | 1997-01-14 | Monsanto Company | Enhanced expression in plants |
| US5362865A (en) | 1993-09-02 | 1994-11-08 | Monsanto Company | Enhanced expression in plants using non-translated leader sequences |
| US5853973A (en) * | 1995-04-20 | 1998-12-29 | American Cyanamid Company | Structure based designed herbicide resistant products |
| US6040497A (en) * | 1997-04-03 | 2000-03-21 | Dekalb Genetics Corporation | Glyphosate resistant maize lines |
| US6448476B1 (en) | 1998-11-17 | 2002-09-10 | Monsanto Technology Llc | Plants and plant cells transformation to express an AMPA-N-acetyltransferase |
| BR122013026754B1 (pt) * | 2000-06-22 | 2018-02-27 | Monsanto Company | Molécula de dna e processos para produzir uma planta de milho tolerante à aplicação do herbicida glifosato |
| EP1322773A2 (en) * | 2000-09-29 | 2003-07-02 | Monsanto Technology LLC | Glyphosate tolerant wheat plant 33391 and compositions and methods for detection thereof |
| JP2006508680A (ja) * | 2002-12-05 | 2006-03-16 | モンサント テクノロジー エルエルシー | コヌカグサ事象ａｓｒ−３６８ならびにその検出のための組成物および方法 |
-
2001
- 2001-02-22 BR BR122013026754-9A patent/BR122013026754B1/pt active IP Right Grant
- 2001-02-22 BR BRPI0100752A patent/BRPI0100752B1/pt active IP Right Grant
- 2001-06-01 US US09/872,051 patent/US6825400B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-07 ID IDP00200100445D patent/ID30575A/id unknown
- 2001-06-15 SI SI200130562T patent/SI1167531T1/sl unknown
- 2001-06-15 DK DK01202314T patent/DK1167531T3/da active
- 2001-06-15 EP EP05105879A patent/EP1582592B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-15 ES ES10154997.0T patent/ES2564464T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-15 DE DE60118660T patent/DE60118660T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-15 SI SI200130973T patent/SI1582592T1/sl unknown
- 2001-06-15 ES ES05105879T patent/ES2343252T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-15 AT AT05105879T patent/ATE466945T1/de active
- 2001-06-15 DE DE60142092T patent/DE60142092D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-15 PT PT01202314T patent/PT1167531E/pt unknown
- 2001-06-15 SI SI200131049T patent/SI2210951T1/sl unknown
- 2001-06-15 DK DK05105879.0T patent/DK1582592T3/da active
- 2001-06-15 EP EP01202314A patent/EP1167531B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-15 EP EP10154997.0A patent/EP2210951B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-15 PT PT05105879T patent/PT1582592E/pt unknown
- 2001-06-15 ES ES01202314T patent/ES2261330T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-15 AT AT01202314T patent/ATE323168T1/de active
- 2001-06-15 DK DK10154997.0T patent/DK2210951T3/en active
- 2001-06-18 RS YUP-437/01A patent/RS49990B/sr unknown
- 2001-06-18 CZ CZ2008-437A patent/CZ305949B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-06-18 CZ CZ20012203A patent/CZ299722B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-06-20 CA CA2349841A patent/CA2349841C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-21 HU HU0800015A patent/HU230814B1/hu unknown
- 2001-06-21 MX MXPA01006407A patent/MXPA01006407A/es active IP Right Grant
- 2001-06-21 HU HU0102569A patent/HU226193B1/hu unknown
- 2001-06-22 CN CNB011220368A patent/CN100350043C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-22 CN CNA2007101543414A patent/CN101186918A/zh active Pending
- 2001-06-22 UY UY26788A patent/UY26788A1/es not_active IP Right Cessation
- 2001-06-22 PL PL348225A patent/PL199928B1/pl unknown
- 2001-06-22 BG BG105637A patent/BG65315B1/bg unknown
- 2001-06-22 AR ARP010102985A patent/AR031665A1/es active IP Right Grant
-
2004
- 2004-03-01 US US10/790,430 patent/US7193071B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-08-16 US US10/919,423 patent/US20070292854A1/en not_active Abandoned
-
2006
- 2006-04-19 AR ARP060101550A patent/AR053231A2/es unknown
- 2006-06-29 CY CY20061100886T patent/CY1106109T1/el unknown
- 2006-11-03 US US11/592,497 patent/US7582434B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2008
- 2008-03-11 AR ARP080100998A patent/AR065690A2/es unknown
- 2008-08-15 AR ARP080103584A patent/AR066163A2/es unknown
-
2009
- 2009-07-21 US US12/460,523 patent/US8273959B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2010
- 2010-06-15 CY CY20101100549T patent/CY1110083T1/el unknown
-
2012
- 2012-05-18 US US13/475,841 patent/US8722969B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2014
- 2014-03-06 US US14/199,883 patent/US9701980B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2017
- 2017-05-24 US US15/604,462 patent/US20170327838A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998044140A1 (en) * | 1997-04-03 | 1998-10-08 | Dekalb Genetics Corporation | Glyphosate resistant maize lines |
| US5948956A (en) * | 1997-10-16 | 1999-09-07 | Oms Investments, Inc. | Transgenic plants and method for node segment transformation |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ299722B6 (cs) | Kukurice tolerantní ke glyfosfátu PV-ZMGT32(nk603), DNA konstrukt PV-ZMGT32(nk603) nesoucí toleranci rostlin ke glyfosfátu a zpusob jeho detekce v rostlinných vzorcích | |
| US10851385B2 (en) | Corn plant event MON87460 and compositions and methods for detection thereof | |
| EP1885176B1 (en) | Soybean event mon89788 and methods for detection thereof | |
| TWI647308B (zh) | 基因轉殖米品系１７３１４及其使用方法 | |
| WO2023081614A2 (en) | Transgenic corn event zm_bcs216090 and methods for detection and uses thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20210618 |