CZ304973B6

CZ304973B6 - Protinádorová analoga ecteinascidinu ET-743, jejich použití, farmaceutický prostředek je obsahující

Info

Publication number: CZ304973B6
Application number: CZ2002-3751A
Authority: CZ
Inventors: Ignacio Manzanares; Maria JesĂşs Martin; Alberto Rodriguez; Simon Munt; Carmen Cuevas; Marta Perez
Original assignee: Pharma Mar, S.A.
Priority date: 1999-05-14
Filing date: 2001-05-15
Publication date: 2015-02-25
Also published as: WO2000069862A3; ES2233367T3; BR0110443A; US20080045713A1; DK1185536T3; WO2001087894A1; CZ303536B6; BRPI0110801B1; CN1441805A; HU230646B1; CZ20014102A3; RU2237063C9; WO2000069862A2; CN1229382C; CN1440414A; CZ304966B6; BRPI0010559B1; CY1108095T1; DE60016209D1; BRPI0110801B8

Abstract

Protinádorové sloučeniny mají pětičlenný kondenzovaný cyklus ecteinascidinové struktury obecného vzorce I, které mají 1,4 můstkovou skupinu, kterou mají ecteinascidiny. Mají v C-1 pozici substituent, vybraný z případně chráněné nebo pozměněné aminomethylenové skupiny nebo případně chráněné nebo pozměněné hydroxymethylenové skupiny.

Description

Předkládaný vynález popisuje protinádorové sloučeniny a zejména protinádorová analoga ecteinascidinu 743, ET-743.

Dosavadní stav techniky

Evropský patent 309 477 popisuje ecteinascidiny 729, 743, 745, 759A, 759B a 770. Zveřejněné ecteinascidinové sloučeniny mají antibakteriální a další vhodné vlastnosti. Ecteinascidin 743 právě prochází klinickými trialy jako protinádorové činidlo.

Ecteinascidin 743 má složitou tris tetrahydroisochinolinfenolovou strukturu následujícího vzorce E

V ecteinascidinu 743 má 1, 4 můstek strukturu vzorce IV:

Další známé ecteinascidiny zahrnují sloučeniny s různě přemostěným systémem cyklických kruhů, tak, jak se vyskytuje v ecteinascidinech 722 a 736, kde má můstek strukturu vzorce V:

- 1 CZ 304973 B6

(V) ecteinascidinech 583 a 597, kde má můstek strukturu vzorce VI:

a ecteinascidinech 594 a 596, kde má můstek strukturu vzorce VII:

Celková struktura těchto a odvozených sloučenin je uvedena v J. Am. Chem. Soc. (1996) 118, 9017-9023. Tento článek je uveden v citacích.

Ecteinascidiny jsou v současné době připravovány izolací z extraktů marine tunicate Ectein15 ascidin turbinata. Výtěžek je nízký a byly hledány jiné preparativní postupy.

Syntetický postup pro přípravu ecteinascidinových sloučenin je popsán v US patentu 5 721 362, viz. také WO 9812198. Nárokovaný způsob je dlouhý a komplikovaný. Pro ilustraci je uvedeno 38 příkladů, každý popisuje jeden nebo více kroků syntetického postupu pro získání ecteinascidi20 nu 743.

Nárok 25 US 5 721 362 je zaměřen na meziprodukt fenolovou sloučeninu, uvedenou vzorcem 11, kterou také popisujeme jako meziprodukt 11 nebo Int- 11. Má následující bis tetrahydrohydroisochinolinfenolovou strukturu II:

-2CZ 304973 B6

kde MOM je methoxymethylový substituent a TBDPS je tert- butyldifenylsilylový substituent.

Z meziproduktu 11 je možné syntetizovat další zajímavé protinádorové činidlo, ftalascidin, viz. Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 96, 3496-3501, 1999. Ftalascidin je bis tetrahydroisochinolinfenolový derivát vzorce III:

Obecněji jsou ftalascidin a příbuzné sloučeniny popsány ve WO 0018233. Nárok 1 je zaměřen na

kde substituenty, definované sloučeninami obecných vzorců R_h R₂, R₃, R4, R₅, R^, R₇, R₈ a R₉, jsou nezávisle vybrány ze skupiny, která se skládá ze sloučenin obecných vzorců H, OH, OR', SH, SR', SOR', SO₂R₂', NO₂, NH₂, NHR', N(R')₂, NHC(O)R', CN, halogenu, =0, C(=O)H, C(=O)R', CO₂H, CO₂R', Ci až C₁₂ alkylu, C₂ až C₁₂ alkenylu, C₂ až C_!2 alkynylu, substituované20 ho nebo nesubstituovaného arylu, substituovaného nebo nesubstituovaného arylalkylu a substituovaného nebo nesubstituovaného heteroaromátu;

-3 CZ 304973 B6 kde každá ze skupin obecného vzorce R' je nezávisle vybrána ze skupiny, která se skládá z H, OH, NO₂, NH₂, SH, CN, halogenu =0, C(=O)H, C(=O)CH₃, CO₂H, CO₂CH₃, Q až C_l2 alkylu, C₂ až C]₂ alkenylu, C₂ až C_]2 alkynylu, arylu, aralkylu a heteroaromátu;

kde každý z čárkovaných kruhů znázorňuje jednu, dvě nebo tři volitelné dvojné vazby; kde sloučeniny obecného vzorce R₇ a R_s mohou být připojeny na karbocyklický nebo heterocyklický kruhový systém;

a kde sloučeniny obecného vzorce X, a X₂ jsou každá nezávisle definovány, jak je uvedeno výše pro sloučeniny obecného vzorce R] až R₈ a dále zahrnují různé dovolené definice.

Dále jsou známy přirozeně získávané sloučeniny, které nemají přemostění cyklického systému. Zahrnují bis tetrahydroisochinolinfenolové protinádorové- antimikrobiální antibiotika safraciny a saframyciny a mořské přírodní produkty renieramyciny, a xestomycin, izolovaný z kultivovaných mikrobů nebo hub. Všechny mají obvykle dimerickou tetrahydroisochinolinovou uhlíkatou kostru. Tyto sloučeniny mohou být rozděleny do čtyř typů, typy I až IV, podle oxidačního charakteru aromatických kruhů. Typ I, dimerické isochinolinchinony, je systém vzorce VIII, nejvíce obvykle se vyskytující v této třídě sloučenin, viz. následující tabulku I.

Tabulka I

Obecná struktura saframycinových antibiotik typu I.

-4CZ 304973 B6

sloučenina	substituenty R^14a	obecných R^14b	vzorců R²¹	_R25a	R₂₅b	R^25c
saframycin A	H	H	CN	0	0	ch₃
saframycin B	H	H	H	0	0	ch₃
saframycin C	H	OCH3	H	0	0	ch₃
saframycin G	H	OH	CN	0	0	ch₃
saframycin H	H	H	CN	OH	CH2COCH3 ch₃
saframycin S	H	H	OH	0	0	ch₃
saframycin Y3	H	H	CN	NH₂	Η	ch₃
saframycin Ydi	H	H	CN	nh₂	H	C2H5
saframycin Adi	H	H	CN	0	0	C₂H₅
saframycin Yd2	H	H	CN	nh₂	H	H
saframycin Y2b	H	Q⁴	CN	nh₂	H	ch₃
saframycin Y2b- a	H	Q⁴	CN	nh₂	H	c₂h₅
saframycin AH2	H	H	CN	H“	OH“	ch₃
saframycin AH2AC	H	H	CN	H	OAc	ch₃
saframycin AHi	H	H	CN	OH“	H“	ch₃
saframycin AHiAc	H	H	CN	OAc	H	CH3
saframycin AR3	H	H	H	H	OH	CH₃

“ přiřazení jsou zaměnitelná.

^b kde obecná skupina Q je obecného vzorce IX:

Aromatické deriváty typu I byly zjištěny v saframycinech A, B a C; G a H; a S, izolovaných 5 z Streptomyces lavendulae jako minoritní sloučeniny. Kyano derivát saframycinu A, nazývaný kyanochinonamin, je známý z japonské Kokaie JP- A2 59/225189 a 60/084288. Saframyciny Y₃,

Ydi, Ad] a Yd₂ byly produkovány 5*. lavendulae usměrněnou biosyntézou s vhodným doplněním kultivačního média. Saframycinové Y₂b a Y₂b <i dimery, tvořené navázáním dusíku na C-25jedné jednotky na C-14 jiné, byly také produkovány v doplněném kultivačním médiu S. lavendulae. io Saframycin ARi (=AH₂), produkt mikrobiální redukce saframycinu A na C-25, produkovaný

Rhodococcus amidophilus, je také připraven nestereoselektivní chemickou redukcí saframycinu

-5CZ 304973 B6

A borohydridem sodným jako 1: 1 směs epimerů, následovanou chromatografickou separací (jiný AH] izomer je méně polární]. Další redukovaný produkt saframycin AR₃, 21-dekyano-25dihydro-saframycin A, (= 25-dihydrosaframycin B) byl připraven stejnou mikrobiální konverzí. Jiným typem mikrobiální konverze saframycinu A, využívající druh Nocardia, vzniká saframycin

Ba další redukcí druhem Mycobacterium vzniká saframycin AH'Ac. 25-O-acetáty saframycinu AH₂ a AlL byly pro biologické studie připraveny také chemicky.

Sloučeniny typu I vzorce X byly také izolovány z mořských hub, viz. tabulka II.

Tabulka II

Obecné struktury sloučenin typu I z mořských hub.

O^R

	substituenty	obecných	vzorců
R™	r™	R²¹	R
renieramycin A	OH	H	H	-C(CH₃)= ch- ch₃
renieramycin B	OC₂H₅	H	H	-C(CH₃)= ch- ch₃
renieramycin C	OH	0	0	-C(CH₃)= ch- ch₃
renieramycin D	OC₂H₅	0	0	-C(CH₃)= ch- ch₃
renieramycin E	H	H	OH	-C(CH₃)= ch- ch₃
renieramycin F	OCH₃	H	OH	-C(CH₃)= ch- ch₃
xestomycin	och₃	H	H	-ch₃

Renieramyciny A až D byly izolovány z antimikrobiálního extraktu houby, druhu Reniera, získávané v Mexiku, společně s biogeneticky příbuznými monomerickými isochinoliny renieronem a podobnými sloučeninami. Struktura renieramycinu A byla původně navržena s převrácenou stereochemií na C-3, C-l 1 a C-13. Nicméně úspěšná prohlídka ^!H NMR dat pro nové, příbuzné sloučeniny renieramyciny E a F, izolované ze stejné houby, získané v Palau, odhalila, že spojení kruhů renieramycinů bylo stejné jako saframycinů. Tento výsledek vedl k závěru, že dříve navržená stereochemie renieramycinů A a D musí být stejná jako saframycinů.

Xestomycin byl nalezen v houbě druhu Xestospongia, získané z vod Sri Lanky.

-6CZ 304973 B6

Sloučeniny typu II vzorce XI s redukovaným hydrochinonovým kruhem zahrnují saframyciny D a F, izolované z S. lavendulae a saframyciny Mx-1 a Mx-2, izolované z Myxococcus xanthus. Viz. tabulka III.

Tabulka III

Sloučeniny obecného typu II

OCH3

substituenty obecných vzorců

sloučeniny	RHa	R^14b	R²¹	R^25a	R_25b	_r25c
saframycin D	0	0	H	0	0	ch₃
saframycin F	0	0	CN	0	0	ch₃
saframycin Mx- 1	H	OCH₃	OH	H	ch₃	nh₂
saframycin Mx- 2	H	OCH₃	H	H	ch₃ nh₂

Skelet typu III byl nalezen v antibiotikách safracinech A a B, izolovaných z kultivované Pseudomonas fluorescens. Tyto antibiotika obecného vzorce XII se skládají z tetrahydroisochinolinchinonové podjednotky a tetrahydroisochinolinfenolové podjednotky.

ŇH₂ kde sloučenina obecného vzorce R²¹ v safraninu A je -H a v safraninu B je -OH. Saframycin R, jediná sloučenina, určená jako skelet typu IV, byl také izolován zS lavendulae. Tato sloučenina

-7CZ 304973 B6 vzorce XIII, která se skládá z hydrochinonového kruhu s glykolesterovým postranním řetězcem na jednom z fenolických kyslíků, je myslitelný prolék saframycinu A, protože snižuje jeho toxicitu.

Všechny tyto známé sloučeniny mají kondenzovaný systém pěti kruhů A až E, jak je ukázáno v následující struktuře vzorce XIV:

Kruhy A a £ jsou fenolické v ecteinascidinech a některých dalších sloučeninách, zatímco v jiných sloučeninách, zejména saframycinech, jsou kruhy A a E chinolické. Ve známých sloučeninách jsou kruhy B a D tetrahydro, zatímco Cje perhydro.

Podstata vynálezu

Předkládaný vynález popisuje nové sloučeniny s kondenzovaným systémem pěti kruhů A až E. Zejména popisuje nové sloučeniny, které mohou být připraveny z meziproduktů, popsaných v WO 9812198 nebo novým postupem, který je součástí tohoto vynálezu. V tomto dalším ohledu odkazujeme na náš WO 0069862, publikovaný 23. listopadu 2000, a který se týká hemisyntetických způsobů a nových sloučenin. Předkládaná přihláška nárokuje přednosti od správy souborů PCT a včleňujeme pro rozšíření toho, co je zde zveřejněno, odkazem tento text, který není v předkládaném popisu.

V WO 0069862 jsou popsány různé způsoby pro přípravu ecteinascidinových sloučenin, které zahrnují ecteinascidin 743, stejně jako ecteinascidinových analogů, které zahrnují ftaliscidin. Předkládaný vynález je založen částečně na použití meziproduktů z WO 0069862 pro přípravu dalších analogů ecteinascidinů.

Objevili jsme, že sloučeniny podle vynálezu mají mimořádnou aktivitu při léčbě rakoviny, jako jsou leukémie, rakovina plic, rakovina tlustého střeva, rakovina ledvin a melanom.

-8CZ 304973 B6

Předkládaný vynález poskytuje způsob léčby savce, především člověka, postiženého rakovinou, který zahrnuje podávání postiženému jedinci léčebně účinné množství sloučeniny podle vynálezu nebo z ní připraveného farmaceutického prostředku.

Předkládaný vynález také popisuje farmaceutické přípravky, které obsahují jako aktivní složku sloučeninu nebo sloučeniny podle vynálezu, stejně tak postupy pro jejich přípravu.

Příklady farmaceutických prostředků zahrnují pevné (tablety, pilulky, kapsle, granule atd.) nebo tekuté (roztoky, suspenze nebo emulze) s vhodným prostředkem pro orální, místní nebo parenterální podávání a mohou obsahovat čistou sloučeninu nebojí ve spojení s nějakým nosičem nebo jinými farmakologicky účinnými sloučeninami. Tyto prostředky mohou být vyžadovány sterilní, jestliže jsou podávány parenterálně.

Podávání sloučenin nebo prostředků podle předkládaného vynálezu může být provedeno některým vhodným způsobem, jako je nitrožilní infúze, orální přípravky, intraperitoneální nebo nitrožilní podání. Upřednostňujeme používání doby infuzí až do 24 hodin, přednostně 2 až 12 hodin s více upřednostňovanými 2 až 6 hodinami. Kratší doby infúzí, které dovoluje léčba za provedení bez přenocování v nemocnici, jsou zvláště vhodné. Nicméně jestliže je to nutné, mohou infuze být 12 až 24 hodin nebo dokonce delší. Infuze mohou být prováděny ve vhodných intervalech 2 až 4 týdny. Farmaceutické prostředky, obsahující sloučeniny podle vynálezu, mohou být podány lipozomy nebo nanokuličkovým zapouzdřením, v nepřetržitě uvolňujících přípravcích nebo jinými standardními prostředky.

Správná dávka sloučenin se bude lišit podle konkrétního přípravku, způsobu podání a konkrétní situace, pacienta a léčeného nádoru. Ostatní faktory, jako věk, tělesná váha, pohlaví, stravy, doby podávání, rychlosti vylučování, stav pacienta, kombinace léků, reakce citlivosti a nebezpečnosti nemoci, se zváží. Podávání může být provedeno kontinuálně nebo periodicky v maximálně tolerované dávce.

Sloučeniny a prostředky podle předkládaného vynálezu mohou být použity s dalšími léky pro zajištění kombinované léčby. Jiné léky mohou tvořit část stejného prostředku nebo být poskytnuty jako samostatný prostředek pro podávání ve stejné nebo jiné době. Identita dalších léků není konkrétně omezena a vhodní kandidáti zahrnují:

a) léky s antimitotickými účinky, zejména těch, které jsou zaměřeny na cytoskeletální prvky, které zahrnují mikrotobulámí modulátory, jako jsou taxánové léky (jako je taxol, paclitaxel, taxoter, docetaxel), podofylotoxiny nebo vinkové alkaloidy (vincristin, vinblastin);

b) antimetabolické léky, jako je 5-fluorouracil, cytarabin, gemcitabin, purinové analoga, jako je pentostatin, methotrexát;

c) alkylační činidla, jako jsou dusíkaté yperity (jako je cyklofosfamid nebo ifosfamid);

d) léky, které jsou zaměřeny na DNA, jako jsou antracyklinové léky adriamycin, doxorubicin, farmorubicin nebo epirubicin;

e) léky, které jsou zaměřeny na topoizomerázy, jako je etoposid;

f) hormony a hormonoví agonisté nebo antagonisté, jako jsou estrogeny, antiestrogeny (tamoxifen a příbuzné sloučeniny) a androgeny, flutamid, leuprorelin, goserelin, cyprotron nebo octreotid;

g) léky, které jsou zaměřeny na převod signálů v nádorových buňkách, které zahrnují protilátkové deriváty, jako je herceptin;

-9CZ 304973 B6

h) alkylační činidla, jako jsou léky s platinou (cis- platin, carbonplatin, oxaliplatin, paraplatin) nebo nitrosomočoviny;

i) léky potenciálně ovlivňující metastáze nádorů, jako je matrix metalloproteinových inhibitorů;

j) genové terapie a protisměrová činidla;

k) proti látkové léky;

l) další bioaktivní sloučeniny mořského původu, především didemniny, jako je aplidin;

m) steroidová analoga, konkrétně dexamethason;

n) protizánětlivé léky, konkrétně dexamethason;

o) antiemetické léky, konkrétně dexamethason;

p) prostředky chránící kosterní svalstvo, jako je L- kamitin nebo prekurzory aminokyselin.

Předkládaný vynález se také dotýká sloučenin podle vynálezu pro použití v metodách léčby a použití sloučenin při přípravě prostředků pro léčbu rakoviny.

V jednom aspektu vynálezu sloučeniny 2, 3, 5, 8-OH-2 a 14 až 21, popsané v jednom nebo více dřívějších patentových přihlášek, nenárokujeme pro naší PCT přihlášku, publikovanou jako 0069862. V příbuzném aspektu se předkládaný vynález dotýká sloučenin, které se liší vzhledem k jednomu nebo více substituentů, přítomných na C—1, C-5, C-7, C-8 nebo C-18 ve sloučeninách těchto dřívějších GB patentových přihlášek.

Sloučeniny podle vynálezu zahrnují sloučeniny, které nemají hydroxy skupinu na pozici C- 18. Dále sloučeniny podle vynálezu zahrnují sloučeniny, které nemají dikarboximidomethyl substituent, jako ftalimidomethyl, na pozici C-l. Konkrétně poskytujeme aktivní sloučeniny, kde není substituent obecného vzorce X,, jakje uvedeno na předposlední řádce na straně 19 WO 0018233.

V jednom aspektu jsou analoga podle tohoto vynálezu typicky obecného vzorce XVIIa:

OCH₃ h₃c.

(XVIIa), nebo vzorce XVIIb:

- 10CZ 304973 B6

kde sloučenina obecného vzorce R¹ je volitelně chráněná nebo pozměněná aminomethylenová skupina, volitelně chráněná nebo pozměněná hydroxymethylenová skupina; sloučenina obecného vzorce R⁴ je -H;

sloučenina obecného vzorce R⁵ je -OH;

sloučenina obecného vzorce R⁷ je -OCH3 a sloučenina obecného vzorce R⁸ je -OH nebo sloučeniny obecných vzorců R⁷ a R⁸ společně tvoří skupina -O-CH2-0-;

sloučeniny obecných vzorců R^14a a R^14b jsou obě -H nebo jedna je -H a druhá je -OH, -OCH₃nebo -OCH2CH3, nebo sloučeniny obecných vzorců R^l4a a R^14b společně tvoří keto skupinu; a sloučenina obecného vzorce R¹⁵ je -H nebo -OH;

sloučenina obecného vzorce R²¹ je -H, -OH nebo -CN;

a deriváty zahrnují jejich acyl deriváty, zejména kde sloučenina obecného vzorce R⁵ je acetyloxy nebo jiná acyloxy skupina až do 4 uhlíkových atomů.

V předkládaném vynálezu klíčová třída produktů zahrnuje ftalascidin a má obecný vzorec XX:

kde sloučenina obecného vzorce R¹ je amidomethylenová skupina; sloučenina obecného vzorce R⁵ je malý oxy-postranní řetězec; a sloučenina obecného vzorce R²¹ je kyano skupina nebo hydroxy skupina. Pro ftalascidin je sloučenina obecného vzorce R¹ ftalimidomethylenová skupina; sloučenina obecného vzorce R⁵ acetoxy skupina; a sloučenina obecného vzorce R²¹ je kyano skupina. Ostatní skupiny pro sloučeninu obecného vzorce R¹ zahrnují mono- a di-N-substituované amidomethyleny, stejně jako další cyklické amidomethyleny, a ostatní skupiny pro sloučeninu obecného vzorce R⁵ zahrnují dále Ci až C₄ acyl skupiny, stejně jako Ci až C4 alkyl skupiny.

- 11 CZ 304973 B6

V předkládaném vynálezu klíčová třída meziproduktů a analogů zahrnuje meziprodukt 11 a má obecný vzorec XXI:

(xxi), kde sloučeniny obecných vzorců Proť a Prot² jsou hydroxy chránící skupiny, přednostně odlišné. Pro meziprodukt 11 samotný je sloučenina obecného vzorce Prot¹ methoxymethyl skupina a sloučenina obecného vzorce Prot² je t-butyldifenylsilyl skupina.

Ve světle předcházejících vysvětlení můžeme vidět, že předkládaný vynález poskytuje původní analoga a původní meziproduktové sloučeniny. V závislosti na kruhu A sloučeniny obsahují tento obecný vzorec XXIIa:

(XXIIa), nebo obecný vzorec XXIIb:

kde:

sloučenina obecného vzorce R¹ je -CH₂NH₂ nebo -CH₂OH nebo chráněné nebo pozměněné varianty takových skupin a sloučenina obecného vzorce R⁴ je -H;

sloučenina obecného vzorce R⁵ je -OH chráněná nebo pozměněná varianta takové skupiny;

- 12 CZ 304973 B6 sloučeniny obecných vzorců R^14a a R^14b jsou obě -H nebo jedna je -H a druhá -OH nebo chráněné nebo pozměněné varianty takových skupin, -OCH₃ nebo -OCH₂CH₃ nebo sloučeniny obecných vzorců R^14a a R^14b společně tvoří keto skupinu;

sloučenina obecného vzorce R¹² je -H, -CH₃ nebo -CH₂CH₃-;

sloučenina obecného vzorce R¹⁵ je -H, -OH nebo chráněné nebo pozměněné varianty takových skupin; a sloučenina obecného vzorce R¹⁸ je -OH nebo chráněná nebo pozměněná varianta takové skupiny.

V jedné části jsou přednostně alespoň sloučeniny obecných vzorců R¹, R⁵, R^14a a R^14b, R¹⁵ nebo R chráněné nebo pozměněné skupiny.

V jedné části předkládaného vynálezu skupina obecného vzorce R¹ není terč. butyldifenylsilyl substituent a/nebo skupina obecného vzorce R¹⁸ není methoxymethyloxy skupina.

Přednostně je sloučenina obecného vzorce R¹ -CH₂NH₂ nebo -CH₂OH nebo chráněné nebo pozměněné varianty takových skupin a sloučenina obecného vzorce R⁴ je -H.

Přednostně jsou sloučeniny obecných vzorců R^l4a a R^14b obě -H.

Přednostně je sloučenina obecného vzorce R¹² -CH₃.

Jedna upřednostňovaná třída meziproduktů zahrnuje sloučeninu, která byla určena jako sloučenina 25 obecného vzorce:

Upřednostňovaná třída je tak obecného vzorce, kde skupina MOM je nahrazena jinou chránící skupinou a/nebo alkyl je nahrazen jinou chránící skupinou.

Jiné upřednostňované třídy meziproduktů zahrnují sloučeniny, které byly určeny jako sloučeniny 17, 43 a 45.

-13 CZ 304973 B6

Jiné N-acyl deriváty mohou být snadno vytvořeny ze sloučeniny 45 a jsou důležitou částí tohoto vynálezu. Vhodné acyl skupiny zahrnují dříve zmíněné. Odpovídající 21-hydroxy sloučeniny jsou také užitečné a jsou mezi aktivními sloučeninami, které jsme objevili.

Z dat aktivit a jiných důvodů můžeme vidět, že aktivní sloučeniny podle tohoto vynálezu zahrnují upřednostňovanou třídu sloučenin obecného vzorce XXIII:

kde sloučenina obecného vzorce R¹ je taková, jak byla dříve definována pro vzorec XVIIb a je přednostně pozměněná aminomethylenová skupina prostřední velikosti;

sloučenina obecného vzorce R⁵ je taková, jak byla dříve definována pro vzorec XVIIb a je přednostně pozměněná hydroxy skupina malé velikosti;

sloučenina obecného vzorce R je taková, jak byla dříve definována a je přednostně -CH₃-; a sloučenina obecného vzorce R²¹ je hydroxy nebo kyano skupina.

Sloučenina obecného vzorce R¹ je vhodně hydrofobní skupina a která tak nemá volnou amino, hydroxy nebo jinou hydrofilní funkční skupinu. Typicky je sloučenina obecného vzorce R¹ obecná skupina -CH2-NH2-CO-R^a, kde sloučenina obecného vzorce R^a je taková, jak byla definována, ale přednostně má lineární řetězec délky menší než 20 atomů, lépe menší než 15 nebo 10 atomů, kde 1, 4-fenyl je počítán jako řetězec délky čtyř atomů a podobné úvahy se používají na další cyklické skupiny (například 1, 2-cyklohexyl je řetězec délky dvou) a lineární řetězec menší než 10, 15 nebo 20 atomů může být sám substituován. Zejména data naznačují dosažitelnou rovnováhu mezi tím nemít takovou skupinu obecného vzorce jako R^a-CO- a mít velkou, rozměrnou skupinu. V jedné variaci upřednostňujeme, že sloučenina obecného vzorce R¹ neobsahuje cyklické skupiny, zvláště aromatické skupiny. V podobných variacích předkládaný vynález nepřináší sloučeniny, které jsou popsány v článku Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 96, 3496-3501, 1999, zahrnutého zde odkazem. Naše upřednostňované skupiny pro sloučeninu obecného vzorce R¹ neobsahují substituenty odpovídající sloučenině obecného vzorce CH2R₂, ukázané v tabulce 1 tohoto článku, zejména skupiny obecných vzorců A, B, C a D pro R₂.

- 14CZ 304973 B6

Sloučenina obecného vzorce R⁵ je přednostně acetylová skupina.

Ve zvláště upřednostňovaných sloučeninách je sloučenina obecného vzorce R¹ acetylovaný na -NH₂ skupině a naaříklad N-acyl deriváty mohou být tvořeny skupinou -CH₂NH₂ a skupinou obecného vzorce -CH₂NH- aa. Acyl deriváty mohou být jejich N-acyl nebo N-thioacyl deriváty. Acyl skupiny mohou být obecného vzorce -CO-R³, kde sloučenina obecného vzorce R^a je taková, jak byla definována a je vybrána podle uvedených kritérií. Vhodné acyl skupiny zahrnují alanyl, arginyl, asparagyl, cystyl, glutamyl, glutaminyl, glycyl, histidyl, hydroxyprolyl, isoleucyl, leucyl lysyl, methionyl, fenylalanyl, prolyl, seryl, threonyl, thyronyl, tryptofyl, tyrosyl, valyl, stejně jako ostatní aminokyselinové acyl skupiny, které mohou být L- nebo D-. Takové aminokyselinové acyl skupiny jsou pro získání hydrofobicity přednostně připraveny na amino skupině.

Ve variaci upřednostňujeme, že skupina obecného vzorce R¹ je pozměněná hydroxymethylenová skupina. Podobné úvahy se uplatní s pozměněnou aminomethylenovou skupinou.

Vynález se dotýká sloučenin, kde jsou různé substituenty okolo druhu definovány v WO 0018233, kte ý zahrnuje odkazem. Tak, jak je vhodné, mohou být substituenty v předkládaných sloučeninách vybrány mezi jinými možnostmi ze sloučenin obecných vzorců H, OH, OR', SH, SR', SOR, SO₂R', NO₂, NH₂, NHR', N(R')₂, NHC(O)R', CN, halogenu, =0, C, až C₆alkylu, substituovaného nebo nesubstituovaného arylu, substituovaného nebo nesubstituovaného aralkylu a substituovaného nebo nesubstituovaného heteroaromátu;

kde každá ze sloučenin obecného vzorce R' je nezávisle vybrána ze skupiny, která se skládá z H, OH, NO₂, NH₂, SH. CN, halogenu, =0, C(=O)H, C(=O)CH₃, CO₂H, CO₂CH₃, Cj až C₆ alkylu, fenylu, benzylu a heteroaromátu.

Vhodné halogenové substituenty ve sloučeninách podle předkládaného vynálezu zahrnují F, Cl, Bral.

Alkylové skupiny přednostně mají od 1 do asi 12 uhlíkových atomů, lépe 1 až asi 8 uhlíkových atomů, ještě lépe 1 až asi 6 uhlíkových atomů a nejlépe 1, 2, 3 nebo 4 uhlíkové atomy. Methyl, ethyl a propyl, který zahrnuje isopropyl, jsou zvláště upřednostňované alkylové skupiny ve sloučeninách podle předkládaného vynálezu. Jak je zde používáno, výraz alkyl, pokud není jinak uvedeno, se týká cyklických i necyklických skupin, ačkoliv cyklické skupiny budou obsahovat alespoň tříčlenný uh líkový kruh.

Upřednostňované alkenylové a alkynylové skupiny ve sloučeninách podle předkládaného vynálezu mají jednu nebo více nenasycených vazeb a od 2 do asi 12 uhlíkových atomů, přednostně 2 až asi 8 uhlíkových atomů, lépe 2 až asi 6 uhlíkových atomů, ještě lépe 1, 2, 3 nebo 4 uhlíkové atomy. Výraz alkenyl a alkynyl, jak je zde používáno, se týká cyklických i necyklických skupin, ačkoliv nerozvětvené nebo rozvětvené necyklické skupiny jsou obecně upřednostňovány.

Upřednostňované akoxylové skupiny ve sloučeninách podle předkládaného vynálezu zahrnují skupiny, které mají jednu nebo více kyslíkatých vazeb a od 1 do asi 12 uhlíkových atomů, přednostně 1 až asi 8 uhlíkových atomů a lépe 1 až asi 6 uhlíkových atomů a nejlépe 1, 2, 3 nebo 4 uhlíkové atomy.

Upřednostňované alkylthiolové skupiny ve sloučeninách podle předkládaného vynálezu mají jednu nebo více thioetherových vazeb a od 1 do asi 12 uhlíkových atomů, přednostně 1 až asi 8 uhlíkových atomů a lépe 1 až asi 6 uhlíkových atomů. Alkylthiolové skupiny, které mají 1, 2, 3 nebo 4 uhlíkové atomy, jsou zvláště upřednostňovány.

Upřednostňované alkylsulfinylové skupiny ve sloučeninách podle předkládaného vynálezu zahrnují takové skupiny, které mají jednu nebo více sulfoxidových (SO) skupin a od 1 do asi 12 uhlí- 15CZ 304973 B6 kových atomů, přednostně 1 až asi 8 uhlíkových atomů a lépe 1 až asi 6 uhlíkových atomů. Alkylsulfmylové skupiny, které mají 1, 2, 3 nebo 4 uhlíkové atomy, jsou zvláště upřednostňovány.

Upřednostňované alkylsulfonylové skupiny ve sloučeninách podle předkládaného vynálezu zahrnují takové skupiny, které mají jednu nebo více sulfoxidových (SO₂) skupin a od 1 do asi 12 uhlíkových atomů, přednostně 1 až asi 8 uhlíkových atomů a lépe 1 až asi 6 uhlíkových atomů. Alkylsulfonylové skupiny, které mají 1, 2, 3 nebo 4 uhlíkové atomy, jsou zvláště upřednostňovány.

Upřednostňované aminoalkylové skupiny zahrnují takové skupiny, které mají jednu nebo více primárních, sekundárních a/nebo terciárních amino skupin a od 1 do asi 12 uhlíkových atomů, přednostně 1 až asi 8 uhlíkových atomů, lépe 1 až asi 6 uhlíkových atomů, nejlépe 1, 2, 3 nebo 4 uhlíkové atomy. Sekundární a terciární amino skupiny jsou obecně více upřednostňovány než primární aminové složky.

Vhodné heteroaromatické skupiny ve sloučeninách podle předkládaného vynálezu obsahují jeden, dva nebo tři heteroatomy, vybrané z N, O nebo S atomů a zahrnují např. kumarinyl, zahrnující 8-kumarinyl, chinolinyl, zahrnující 8-chinolinyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrimidyl, furyl, pyrrolyl, thienyl, thiazolyl, oxazolyl, imidazolyl, indolyl, benzofuranyl a benzothiazol. Vhodné heteroalicyklické skupiny ve sloučeninách podle předkládaného vynálezu obsahují jeden, dva nebo tři heteroatomy, vybrané zN, O nebo S atomů a zahrnují např. tetrahydrofuranyl, tetrahydropyranyl, piperidinyl, morfolino a pyrrolidinylové skupiny.

Vhodné karbocyklické arylové skupiny ve sloučeninách podle předkládaného vynálezu zahrnují jedno a vícekruhové sloučeniny, zahrnující vícekruhové sloučeniny, které obsahují oddělené a/nebo spojené arylové skupiny. Typické karbocyklické arylové skupiny obsahují 1 až 3 oddělené nebo spojené kruhy a od 6 do asi 18 uhlíkových atomů kruhu. Zvláště upřednostňované karbocyklické arylové skupiny zahrnují fenyl, zahrnující substituovaný fenyl, jako je 2-substituovaný fenyl, 3-substituovaný fenyl, 2, 3-substituovaný fenyl, 2, 5-substituovaný fenyl, 2, 3, 5-substituovaný a 2, 4, 5-substituovaný fenyl, zahrnující to, že jeden nebo více fenylových substituentů je elektron- odebírající skupina, jako je halogen, kyano, nitro, alkanoyl, sulfmyl, sulfonyl a podobně; nafityl, zahrnující 1-nafityl a 2-nafiyl; bifenyl; fenanthryl; a antracyl.

Doporučení zde uvedené pro substituované skupiny ve sloučeninách podle předkládaného vynálezu se týkají přesně vymezených složek, které mohou být substituovány na jedné nebo více dostupných pozicích jednou nebo více vhodnými skupinami, např. halogen, jako je fluoro, chloro, bromo ajodido; kyano; hydroxyl; nitro; azido; alkanoyl, jako je Cl až C6 alkanoyl skupina, jako je acyl a podobně; karboxamido; alkyl skupiny, zahrnující takové skupiny, které mají 1 až asi 2 uhlíkové atomy nebo od 1 do asi 6 uhlíkových atomů a přednostně 1 až 3 uhlíkové atomy; alkenyl a alkynyl skupiny, zahrnující skupiny, které mají jednu nebo více nenasycených vazeb a od 2 do asi 12 uhlíků nebo 2 až asi 6 uhlíkových atomů; alkoxy skupiny, které mají jednu nebo více kyslíkatých vazeb a od 1 do asi 12 uhlíkových atomů nebo 1 až asi 6 uhlíkových atomů; aryloxy, jako jsou fenoxy; alkylthiolové skupiny, zahrnující takové složky, které mají jednu nebo více thioetherových vazeb a od 1 do asi 12 uhlíkových atomů nebo 1 až asi 6 uhlíkových atomů; alkylsulfínylové skupiny, zahrnující takové složky, které mají jednu nebo více sulfínylových vazeb a od 1 do asi 12 uhlíkových atomů nebo 1 až asi 6 uhlíkových atomů; alkylsulfonylové skupiny, zahrnující takové složky, které mají jednu nebo více sulfonylových vazeb a od 1 do asi 12 uhlíkových atomů nebo 1 až asi 6 uhlíkových atomů; aminoalkylové skupiny, jako jsou skupiny, které mají jeden nebo více N atomů a od 1 do asi 12 uhlíkových atomů nebo 1 až asi 6 uhlíkových atomů; karbocyklické aryly, které mají 6 nebo více uhlíků, zejména fenyl (např. sloučenina obecného vzorce R je substituovaná nebo nesubstituovaná bifenylová složka); a aralkyl, jako je benzyl.

Zjednodušeně, v látkách obecného vzorce:

- 16CZ 304973 B6

mají upřednostňované sloučeniny podle předkládaného vynálezu jednu nebo více z následujících vymezení:

Sloučenina obecného vzorce R] je sloučenina obecného vzorce -OR, kde sloučenina obecného vzorce R je H, acyl, zejména acetyl, alkyl-CO-(alkyl je až do asi 20 uhlíkových atomů, přednostně od 1 do asi 12 uhlíkových atomů a zejména lichá čísla uhlíkových atomů, jako je 3, 5, 7 a 9), cykloalkyl-alkyl-CO- a zejména alkylové skupiny s koncovou cyklohexylovou skupinou a až do šesti dalšíc i uhlíkových atomů v postranním řetězci nebo chránící skupina, zejména methoxymethyl, a sloučenina obecného vzorce Ri je nejvíce OH.

Sloučenina obecného vzorce R₂ je methoxy.

Sloučenina obecného vzorce R₃ je methyl.

Sloučenina obecného vzorce R4 je vodík.

Sloučenina obecného vzorce R₅ je methyl nebo vodík, zejména methyl.

Sloučenina obecného vzorce R je -CN nebo -OH.

Sloučenina obecného vzorce X₃ je sloučenina obecného vzorce -NHR', -NH-aa-R' nebo -OR', kde sloučenina obecného vzorce aa je volitelně chráněná aminokyselinová acylová skupina, zejména alanin, fenylalanin, cystein, prolin, valin, arginin, tryptofan nebo jiná aminokyselina. Další možnosti pro sloučeninu obecného vzorce X_t zahrnují sloučeniny obecných vzorců -N(R')₂, -N(R')-aa- R' a -N-(aa- R')₂. V případě nějaké skupiny obecného vzorce -aa-R' je sloučenina obecného vzorce R' obvykle aminoskupina na aminokyselině a mohou být dva takové substituenty. Sloučenina obecného vzorce R' je přednostně H; alkyl-CO- (alkyl je až do 25 uhlíkových atomů, jako je až do 17, 19 nebo 21 uhlíkových atomů a přednostně lichá čísla uhlíkových atomů, odpovídající mastné kyselině karboxylové kyseliny sudého počtu uhlíkových atomů nebo jinak nízkému počtu uhlíkových atomů, jako je 1 až 6), zejména CH₃-(CH₂)_n-CO-, kde n je například 1, 2, 4, 12 nebo 16; alkenylu, zejména allylu; haloalkyl-CO-, zejména CF3-CO-; cykloalkyl-alkyl-CC>-, přednostně alkylové skupině s koncovou cyklohexylovou skupinou a až do šesti dalších uhlíkových atomů v postranním řetězci, zejména cyklohexyl-(CH₂)_n-CO-, kde n je například 1 nebo 2; haloalkyl-O-CO-, zejména trichloroethoxykarbonyl; arylalkyl-CO- nebo arylalkenyl-CO-, zejména fenyl-methyl/ethyl/vinyl-CO-, kde aryl může být substituován jako v trifluoromethylcinriamoylu; volitelně substituovaný heteroaryl-CO-, kde substituent a heterocyklická skupina jscu takoví, jak jsou diskutováni jinde, jako v 2-chloronikotinoylu; alkenylCO-, zejména krotonyl; volitelně substituovaný aminoalkyl-CO-, konkrétně acyl aminokyseliny, zejména alanin, fenylalanin, cystein, prolin, valin, arginin, tryptofan nebo jiná aminokyselina nebo tyto pozměněné , jako v Boc- fenylalanin, valin, prolin, arginin nebo tryptofan, nebo jako ve fenethylalaninu, trifluoroethylacetylalaninu, trifluorodiacetylalaninu a jejich izomerech, nebo diacetyl- nebo dipropionyl-trifluoroacetyl, nebo jako v Cbz-Val- nebo skupině pomyslně odvozené od cysteinu a která má obecný vzorec Prot^SH-S-CH₂-C(=NOProt°^H)-CO- nebo Prot^SH-SCH=C(-OProt°^H)-CO-, kde sloučeniny obecných vzorců Prot^SH a Prot^OH jsou chránící skupiny

- 17CZ 304973 B6 pro thiol a pro hydroxyl, zejména kde sloučenina obecného vzorce Prot^SH je Fm a sloučenina obecného vzorce Prot^OH je methoxy pro první vzorec nebo MOM pro druhý vzorec; nebo jiné možnosti, jako je chránící skupina, jako je v alkoxykarbonylu, jako je Boc, nebo sloučenina obecného vzorce PhNR/CS. Různé skupiny mohou být substituovány tak, jak je uvedeno jinde v tomto vymezení.

Sloučeniny obecných vzorců R₇ a R₈ jsou -O-CH2-O- nebo sloučenina obecného vzorce R₇ je =0 a sloučenina obecného vzorce R₈ je OMe, zejména sloučeniny obecných vzorců R₇ a R₈ jsou -O-CH2-O-.

Sloučenina obecného vzorce R9 je methyl.

Sloučenina obecného vzorce X2 je sloučenina obecného vzorce -OR, kde sloučenina obecného vzorce R je přednostně H; alkyl-CO-, zejména acetyl; alkenyl, zejména allyl; alkenyl-O-CO-, zejména allyl-O-CO-; haloalkyl-CO-, zejména trifluoromethylkarbonyl nebo chloromethylkarbonyl nebo 2-chloroethylkarbonyl nebo perfluoropropylkarbonyl.

Speciálního zájmu jsou sloučeniny, kde:

Sloučenina obecného vzorce Ri je sloučenina obecného vzorce -OR, kde sloučenina obecného vzorce R je H nebo acetyl, alkyl-CO-, zejména η-propyl-CO-, a sloučenina obecného vzorce R] je nejvíce OH.

Sloučenina obecného vzorce R₂ je methoxy.

Sloučenina obecného vzorce R₃ je methyl.

Sloučenina obecného vzorce R4 je vodík.

Sloučenina obecného vzorce R5 je methyl.

Sloučenina obecného vzorce R<> -CN nebo -OH.

Sloučenina obecného vzorce X, je sloučenina obecného vzorce -NHR', kde sloučenina obecného vzorce R' je přednostně alkenyl, zejména allyl, alkyl-CO-(alkyl je 1 až 6 uhlíkových atomů, zejména CH₃-(CH2)_n-CO-, kde n je například 1 až 6 a lépe 1 až 4); cykloalkyl-alkyl-COzejména cyklohexyl-(CH2)n-CO, kde n je 1 nebo 2; arylalkyl-CO- nebo arylalkenyl-CO-, zejména fenethylkarbonyl, fenylvinylkarbonyl nebo benzylkarbonyl, alkenyl-CO-, zejména CH₃-CH=CH-CO-; acyl aminokyseliny, zejména Cbz-Val-; volitelně substituovaný heteroarylCO-, zejména 2-chloropyridinylkarbonyl, nebo sloučenina obecného vzorce X] je sloučenina obecného vzorce -NH-aa-R', kde aa je alanin, fenylalanin, tryptofan nebo valin; sloučenina obecného vzorce R' je aminokyselinový substituent a je arylalkyl-CO-, zejména fenethylkarbonyl nebo benzylkarbonyl; alkyl-CO- (alkyl je 1 až 6 uhlíkových atomů, zejména CH₃-(CH₂)_n-CO-, kde n je například 1 až 6 a lépe 1, 2 nebo 4); alkenyl-CO-, zejména CH₃-CH=CH-CO-; nebo chránicí skupina, zejména alkoxy-CO, jako je Boc;

nebo sloučenina obecného vzorce Xi je sloučenina obecného vzorce OR', kde sloučenina obecného vzorce R' je přednostně alkyl-CO- (alkyl je 1 až 6 uhlíkových atomů, zejména CH₃-(CH2)nCO-, kde n je například 1 až 6 a lépe 2); arylalkenyl-CO, zejména fenethylkarbonyl, fenylvinylkarbonyl nebo trifluoromethylcinnamoyl.

Sloučeniny obecných vzorců R₇ a Rs jsou -O-CH2-O-.

Sloučenina obecného vzorce Říje methyl.

-18CZ 304973 B6

Sloučenina obecného vzorce X₂ je sloučenina obecného vzorce -OR, kde sloučenina obecného vzorce R je přednostně H; acetyl, allyloxykarbonyl, chloromethylkarbonyl nebo perfluoropropylkarbonyl; a sloučenina obecného vzorce R je nejčastěji H; acetyl nebo allyloxykarbonyl.

Zejména upřednostňovaná část předkládaného vynálezu jsou původnímu ecteinascidinu podobné sloučeniny s následujícími obecnými strukturami I, II a III, které byly připraveny ze sloučenin 17, 25, 43 a 45, odvozených od kyanosafracinu B. Sloučenina 25 odpovídá syntetickému meziproduktu 3, popsaného v US patentu 6 124 292.

Me

(I) («) (ΠΙ), kde sloučeniny obecných vzorců R', X₂, R| a R₆ je každá nezávisle vybrána ze skupiny, definované níže:

R'	X₂	Ri
H	OH	OH
CH2CH-CH2	OAc	OAc
COCH2CH3	OCH₂CH=CH₂	OMOM
coch₂ch₂ch₃	ocooch₂ch=ch₂	OCOCH₂C₆H„
CO(CH₂)₄CH₃	OCOCF3	OCOCH₂CH₂C6H„
CO(CH₂)i₂CH₃	OCOCH₂C1	ococh₂ch₂ch₃
CO(CH₂)₁₆CH₃	OCOCH₂CH₂C1	OCO(CH₂)₄CH₃
COCH₂C₆Hh	ococf₂cf₂cf₃	OCO(CH₂)₈CH₃
coch₂ch₂c₆h, , COOCH₂C1₃ COCH₂Ph COCH₂CH₂Ph coch=chch₃ COCH=CHPh		OCO(CH₂),₆CH₃

-19CZ 304973 B6

COCH=CHArCF₃

COCH(CH₃)NHCOCH₂CH₂Ph

CO-(S)-CH(CH₃)NHCOCF₃

CO-(R)-CH(CH₃)NHCOCF₃

CO-(S)-CH(NHCbz)CH(CH₃)₂

Boc

CSNHPh

Cl

Ve vzorcích XVIIa nebo XVIIb je sloučenina obecného vzorce R¹ typicky aminomethylen, amidomethylen nebo sloučenina obecného vzorce R¹ se sloučeninou obecného vzorce R⁴ tvoří skupinu IV nebo V. Vhodné amidomethylenové skupiny zahrnují ty, které mají vzorec -CH₂NH-CO-CHCH₃-NH₂, odvozené od alaninu, a podobné skupiny, odvozené od jiných aminokyselin, především D i L glycinu, valinu, leucinu, isoleucinu, fenylalaninu, tyrosinu, tryptofanu, methioninu, cysteinu, aspartátu, asparaginu, kyselině glutamové, glutaminu, lysinu, argininu, prolinu, šeřinu, threoninu, histidinu a hydroxyprolinu. Obecný vzorec pro skupinu obecného vzorce

R¹ je pak -CH₂-NH-aa, kde aa označuje aminokyselinovou acyl skupinu.

Skupina obecného vzorce R¹ může být acylována na -NH₂ skupině a například N-acyl deriváty mohou být tvořeny ze skupiny -CH₂-NH₂ a skupiny obecného vzorce -CH₂-NH-aa. Acyl deriváty mohou být N-acyl nebo N-thioacyl deriváty, stejně jako cyklické amidy. Názorně mohou být acyl skupiny alkanoyl, haloaroyl, nitroaroyl nebo jiné acyl skupiny. Acyl skupiny mohou být obecného vzorce -CO-R³, kde sloučenina obecného vzorce R^a může být různé skupiny jako alkyl, alkoxy, alkylen, arylalkyl, arylalkylen, acyl aminokyseliny nebo heterocykl, každá volitelně substituovaná halo, kyano, nitro, karboxyalkyl, alkoxy, aryl, aryloxy, heterocyklyl, heterocyklyloxy, alkyl, amino nebo substituovaný amin. Jiné acylační činidla zahrnují isothiokyanáty, jako jsou arylisothiokyanáty, především fenylísothiokyanát. Alkylové, alkoxy nebo alky lenové skupiny sloučeniny obecného vzorce R^a vhodně mají 1 až 6 nebo 12 uhlíkových atomů a mohou být lineární, rozvětvené nebo cyklické. Arylové skupiny jsou typicky fenyl, bifenyl nebo nafityl. Heterocyklické skupiny mohou být aromatické nebo částečně nebo zcela nenasycené a vhodně

-20CZ 304973 B6 mají 4 až 8 atomů kruhu, přednostně 5 nebo 6 atomů kruhu, s jedním nebo více heteroatomy, vybraných z dusíku, siry nebo kyslíku.

Bez vyčerpání všech možností obvykle skupiny obecného vzorce R^a zahrnují alkyl, haloalkyl, alkoxyalkyl, haloalkoxyalkyl, arylalkylen, haloalkylarylalkylen, acyl, haloacyl, arylalkyl, alkenyl a aminokyselinu. Například skupina obecného vzorce R^a-CO- může být acetyl, trifluoracetyl, 2, 2, 2-trichloroethoxykarbonyl, isovalerylkarbonyl, trans-3-{trifluoromethyl) cinnamoylkarbonyl, heptafluorobutyrylkarbonyl, dekanoylkarbonyl, trans-cinnamoylkarbonyl, butyrylkarbonyl, 3chloropropyonylkarbonyl, cinnamoylkarbonyl, 4-methylcinnamoylkarbonyl, hydrocinnamoylkarbonyl, nebo trans-hexenoylkarbonyl, nebo alanyl, arginyl, aspartyl, asparagyl, cystyl, glutamyl, glycyl, histidyl, hydroxypropyl, isoleucyl, leucyl, lysyl, methionyl, fenylalanyl, prolyl, seryl, threonyl, thyronyl, tiyptofýl, tyrosyl, valyl, stejně jako další méně obvyklé aminokyselinové acyl skupiny, stejně jako fitalimido a další cyklické amidy. Další příklady lze nalézt v seznamech chránících skupin.

Sloučeniny, kde je sloučenina obecného vzorce -CO-R³ odvozena z aminokyseliny a obsahuje amino skupinu, mohou tvořit acyl deriváty. Vhodné N-acyl částice zahrnují dipeptidy, které střídavě mohou tvořit N-acyl deriváty.

V důležitém aspektu tohoto vynálezu jsou popsány upřednostňované sloučeniny obecného vzorce:

kde:

sloučenina obecného vzorce R¹ je sloučenina obecného vzorce -CH2-N(R^a)2 nebo -CH₂-OR^a, kde sloučenina obecného vzorce R^a je H; alkyl-CO-; haloalkyl-CO-; cykloalkylalkyl-CO-; haloalkyl-O-CO-; arylalkyl-CO-; arylalkenyl-CO-; heteroaryl-CO-; alkenyl-CO-; alkenyl; acyl aminokyseliny; nebo chránící skupina;

sloučenina obecného vzorce R⁵ je sloučenina obecného vzorce -OR, kde sloučenina obecného vzorce R je H; alkyl-CO-; cykloalkyl-CO-; haloalkyl-CO- nebo chránící skupina;

sloučenina obecného vzorce R¹⁸ je sloučenina obecného vzorce R, kde sloučenina obecného vzorce R je H; alkyl-CO-; cykloalkyl-CO-; nebo chránící skupina; sloučenina obecného vzorce R²¹ je -CN nebo -OH.

Typicky taková sloučenina má obecný vzorec:

-21 CZ 304973 B6

kde sloučeniny obecných vzorců R¹, R⁵, R¹⁸ a R²¹ jsou takové, jak jsou definovány. V upřednostňovaných sloučeninách podle tohoto vynálezu může být sloučenina obecného vzorce R¹ sloučenina obecného vzorce -CH₂-NHR^a.

Sloučenina obecného vzorce R^a může být sloučenina obecného vzorce -aa- R^b, kde aa je acyl aminokyseliny a sloučenina obecného vzorce R^b je taková, jak je definováno pro sloučeninu obecného vzorce R^a. Acyl aminokyseliny je volitelně dále substituován jedním nebo více skupinami obecného vzorce R^a.

V dalších upřednostňovaných sloučeninách je sloučenina obecného vzorce R¹ sloučenina obecného vzorce -CH2-NH-aa- R^b, kde aa je aminokyselina a sloučenina obecného vzorce R^b je vodík; chránící skupina; arylalkenyl-CO-; haloalkyl-CO-; alkyl-CO-; arylalkyl-CO-; nebo acyl aminokyseliny. Takové sloučeniny zahrnují ty, kde sloučenina obecného vzorce R¹ sloučenina obecného vzorce -CH2-NH-aa-R^b, kde aa je alanin a sloučenina obecného vzorce R^b je vodík, Boc, PhNHCS-, CF3CO-, PhNAcCS-, trifluorocinnamoyl, cinnamoyl, C3F7CO-, butyryl, 3chloroproprionyl, hydrocinnamoyl, hexanoyl, fenylacetyl, Cbz-val nebo acetyl; sloučenina obecného vzorce -CH2-aa-R^b, kde aa je valin a sloučenina obecného vzorce R^b je Cbz nebo Boc; sloučenina obecného vzorce -CH2-aa-R^b, kde aa je fenylalanin a sloučenina obecného vzorce R^bje Boc; sloučenina obecného vzorce -CH2-aa-R^b, kde aa je arginin a sloučenina obecného vzorce R^b je Boc; nebo sloučenina obecného vzorce -CH2-aa-R^b, kde aa je tryptofan a sloučenina obecného vzorce R^b je Boc.

Sloučenina obecného vzorce R¹ může být sloučenina obecného vzorce -CH2-NR^a-aa-R^b, kde aa je aminokyselina, sloučenina obecného vzorce R^a je alkyl-CO- a sloučenina obecného vzorce R^bje haloalkyl-CO-. Takové sloučeniny zahrnují ty, kde sloučenina obecného vzorce R¹ je sloučenina obecného vzorce -CH2-NR^a-aa-R^b, kde aa je acetylalanin, sloučenina obecného vzorce R^aje acetyl nebo butyryl a sloučenina obecného vzorce R^b je CF3-CO-.

Sloučenina obecného vzorce R¹ může být sloučenina obecného vzorce -CH2-NHR^a, kde sloučenina obecného vzorce R^a je vodík; chránící skupina; alkyl-CO-; alkenyl-CO-; aiylalkenyl-CO-; arylalkyl—CO—; heteroaryl—CO—; cykloalkylalkyl—CO—; nebo alkenyl. Takové sloučeniny zahrnují ty, kde sloučenina obecného vzorce R¹ je sloučenina obecného vzorce -CH2-NHR^a, kde sloučenina obecného vzorce R^a je vodík, Troc, acetyl; isovaleroyl, dekanoyl, cinnamoyl, hydrocinnamoyl, fenylacetyl, propionyl, myristoyl, stearoyl, hexanoyl, krotonyl, chloronikotinoyl, cyklohexylacetyl, cyklohexylpropionyl nebo allyl.

Sloučenina obecného vzorce R¹ může být sloučenina obecného vzorce -CH2-OR^a, kde sloučenina obecného vzorce R^a je vodík; chráněný cystein; cysteinový derivát obecného vzorce Prot^SH-S-CH2-C(NHProt^NH)-CO-, kde sloučeniny obecných vzorců Prot^SH a Prot^Nfl jsou chránící skupiny pro thiol a pro amino skupinu; chránící skupina; alkyl-CO-; arylalkyl-CO-; arylalkenyl-CO-;

cysteinový derivát obecného vzorce Prot^SH-S-CH₂-C(=NOProt°^H)-CO-, kde sloučeniny obecných vzorců Prot^SH a Prot^NH jsou chránící skupiny pro thiol a pro hydroxy skupinu; nebo cysteinový derivát obecného vzorce Prot^SH-S-CH=C(-OProt°^H)-CO-, kde sloučeniny obecných vzorců Prot^SH a Prot^NH jsou chránící skupiny pro thiol a pro hydroxy skupinu. Takové sloučeniny

-22CZ 304973 B6 zahrnují ty, kde sloučenina obecného vzorce R¹ je sloučenina obecného vzorce -CH2-OR^a, kde sloučenina obecného vzorce R^a je vodík; S-Fm-O-TBDMS-cystein; cysteinový derivát obecného vzorce Prot^-řl-C^-CfNHProť^j-CO-, kde sloučenina obecného vzorce Prot^SH je Fm a sloučenina obecného vzorce Prot^NH je Troc; TBDPS; butyryl; trifluormethylcinnamoyl; cinnamoyl; hydrocinnamoyl; cysteinový derivát obecného vzorce Prot^SH-S-CH2-C(=NOProt°^H)CO-, kde sloučenina obecného vzorce Prot^SH je Fm a sloučenina obecného vzorce Prot^OH je methoxy; nebo cysteinový derivát obecného vzorce Prot^SH-S-CH=C(-OProt°^H)-CO-, kde sloučenina obecného vzorce Prot^SH je Fm a sloučenina obecného vzorce Prot^OH je MOM.

V těchto upřednostfiovaných sloučeninách je sloučenina obecného vzorce R⁵ vhodně sloučenina obecného vzorce -OR, kde sloučenina obecného vzorce R je H; alkyl-CO, kde alkyl má lichý počet uhlíkových atomů, ω- cyklohexylalkyl- CO-; nebo chránící skupina.

V těchto upřednostňovaných sloučeninách je sloučenina obecného vzorce R¹⁸ vhodně sloučenina obecného vzorce -OR, kde sloučenina obecného vzorce R je H; alkyl-CO; nebo chrániči skupina;

V jedné variaci, která se týká meziproduktů, je kruh A pozměněn zabudováním substruktury, ukázané jako vzorec XX nebo XXI, diskutované dále.

V další variaci, která se týká meziproduktů, může být skupina obecného vzorce R'-CH₂O-COCfu-CH₂-S-Prot³, odvozené od sloučeniny vzorce XIX, kde sloučeniny obecných vzorců Prot³a Fu mají indikační význam. V takovém případě jsou sloučeniny obecných vzorců R⁷ a R⁸ z oxymethylenové skupiny. Skupina obecného vzorce R¹⁸ je obvykle chráněná. Obvykle je sloučenina obecného vzorce R² kyano.

Přednostně jsou sloučeniny obecných vzorců R^14a a R^14b vodíky. Přednostně je sloučenina obecného vzorce R¹⁵ vcdík. O-acylderiváty jsou vhodné alifatické O-acylderiváty, zejména acylderiváty 1 až 4 uhlíkových atomů, a typicky O- acetyl skupina, především v pozici 5.

Vhodné chránící skupiny pro fenoly a hydroxylové skupiny zahrnují ethery a estery, jako je alkyl, alkoxyalkyl, aryloxy alkyl, alkoxyalkoxyalkyl, alkylsilylalkoxyalkyl, alkylthioalkyl, arylthioalkyl, azidoalkyl, cyanoallyl, chloroalkyl, heterocykl, arylacyl, haloarylacyl, cykloalkylalkyl, alkenyl, cykloalkyl, alkylaiylalkyl, alkoxyarylalkyl, nitroarylalkyl, haloarylalkyl, alkylaminokarbonylarylalkyl, alkylsulfiriylarylaiky 1, alkylsily 1 a další ethery, a arylacyl, arylalkyluhličitan, alifatický uhličitan, alkylsulfmylarylalkyluhličitan, alkyluhličitan, arylhaloalkyluhličitan, arylalkenyluhličitan, arylkarbamát, ai kylfosfanyl, alkylfosfmothioyl, arylsfosfmothionyl, arylalkylsulfonát a další estery. Takové skupiny mohou být volitelně substituovány dříve uvedenými skupinami ve sloučenině obecného vzorce R¹.

Vhodné chránící skupiny pro aminy zahrnují karbamáty, amidy a další chránící skupiny, jako je alkyl, arylalkyl, sulfo- nebo haloarylalkyl, haloalkyl, alkylsilylalkyl, arylalkyl, cykloalkylalkyl, alkylarylalkyl, heterocykloalkyl, nitroarylalkyl, acylaminoalkyl, nitroaryldithioarylalkyl, dicykloalkylkarboxamidoalkyl, cykloalkyl, alkenyl, arylalkenyl, nitroarylalkenyl, heterocykloalkenyl, heterocyklo, hydrox/heterocyklo, alkyldithio, alkoxy- nebo halo- nebo alkylthionylarylalkyl, heterocykloacyl a další karbamáty, a alkanoyl, haloalkanoyl, arylalkanoyl, alkenoyl, heterocykloacyl, aroyl, arylaroyl, haloaroyl, nitroaroyl a další amidy, stejně jako alkyl, alkenyl, alkylsilylalkoxyalkyl, alkoxyalkyl, kyanoalkyl, heterocyklo, alkoxyarylalkyl, cykloalkyl, nitroaryl, arylalkyl, alkoxy- nebo hydroxyarylalkyl a mnoho dalších skupin. Takové skupiny mohou být volitelně substituováiy dříve uvedenými skupinami ve sloučenině obecného vzorce R¹.

Příklady takových ciránicích skupin jsou uvedeny v následujících tabulkách, chránící skupiny pro -OH skupinu

-23 CZ 304973 B6

ethery methyl	zkratka
methoxymethyl	MOM
benzyloxymethyl	BOM
methoxyethoxymethyl	MEM
2-(trimethy 1 si lyl)ethoxy methyl	SEM
methylthiomethyl	MTM
fenylthiomethyl azidomethyl kyanomethyl 2,2-dichloro-l, 1 -difluorethyl 2-chloroethyl 2-bromoethyl	PTM
tetrahydropyranyl	THP
1-ethoxy ethyl fenacyl 4-bromofenacyl cyklopropylmethyl allyl propargyl isopropyl cyklohexyl Z-butyl benzyl 2,6-dimethylbenzyl	EE
4-methoxybenzyl o-nitrobenzyl 2,6-dichlorobenzyl 3,4-dichlorobenzyl 4-(dimethylamino)karbonylbenzyl	MPM ne
4-methy 1 sulfiny lbenzy 1 9-anthrylmethyl 4-picolyl heptafluoro-p-tolyl tetrafluoro-4-pyridyl	Msib
trimethylsilyl	TMS
Z-butyldimethylsilyl	TBDMS
Z—butyldi feny Isi ly 1	TBDPS
triisopropylsilyl	TIPS

-24CZ 304973 B6 estery arylmravenčan arylacetát aryllevulinát arylpivaloát arylbenzoát aryl-9-fluorokarboxylát arylmethyluhličitan

1- adamantyluhličita n /—butyluhličitan

4-methylsulfmylbenzyluhličitan

2,4-dimethylpent-3 -yluhličitan aryl 2,2,2-trichloretliyluhličitan arylvinyluhličitan arylbenzyluhličitan arylkarbamát dimethylfosfinyl dimethylfosfinothioyl difenylfosfinothioyl arylmethansulfonan aryltoluensulfonan aryl 2-formylbenzer sulfonan chránící skupiny pro -NH₂ skupinu karbamáty methyl ethyl

9-fluorenylmethyl

9-(2-sulfo)fluorenyl methyl

9-(2,7-dibromo)fluorenylmethyl 17-tetrabenzo [a, c,g, Jfluorenylmethyl

2- chloro-3-indenylrriethyl benz[/] inden-3-ylmethyl

2,7-di-r-butyl[9-( 1C, 10-dioxo-l 0,10,10,10tetrahydrothioxanthy l)]methyl

2,2,2-trichloroethyl

BOC-OAr

Msz-OAr

Doc-OAr

Dmp-OAr

Mpt-OAr

Dpt-OAr zkratka

Fmoc

Tbfmoc

Climoc

Bímoc

DBD-Tmoc

Troc

-25 CZ 304973 B6

2—trimethylsilylethyl

2-fenylethyl

-(1 -adamanty 1)-1 -methy lethy 1 2-chloroethyl

1, l-dimethyl-2-chloroethyl

1,1 -dimethyl-2-bromoethyl

1, l-dimethyl-2,2-dibromoethyl 1, l-dimethyl-2,2,2-trichloroethyl 1 -methyl-1 -(4-bifeny 1 )ethy 1

1- (3,5-di-t-buty lfenyl)-1 -1-methy lethy 1

2— (2'— a 4'-pyridyl)ethyl

2,2-bis(4'-nitrofenyl)ethyl «-(2-pivaloy lamino)-1,1 -dimethy lethyl 2-[(2-nitrofeny 1) d ith i o]—1 -feny lethy 1 2-(«,/7-dicyklohexylkarboxamido)ethyl Z-butyl

1- adamanty 1

2- adamantyl vinyl allyl

1-isopropylallyl cinnamyl

4-nitrocinnamyl

3- (3'-pyridyl)prop-2-enyl

8- chinolyl «-hydroxypiperidinyl alkyldithio benzyl p-methoxybenzyl p-nitrobenzyl bromobenzyl p-chlorobenzyl

2,4-dichlorobenzyl

4- methylsulfinylbenzyl

9- anthrylmethyl difenylmethyl fenothiazinyl-( 10)-karbonyl n -/Moluensulfonylaminokarbonyl n -fenylaminothiokarbonyl ,

Teoc hZ

Adpoc

DB-Z-BOC

TCBOC

Bpoc

Z-Burmeoc

Pyoc

Bnpeoc

NpSSPeoc

BOC

1- Adoc

2- Adoc Voc

Aloe nebo Alloc

Ipaoc

Coc

Noc

Paloc

Cbz nebo Z

Moz

PNZ

Msz

26CZ 304973 B6 amidy formamid acetamid chloroacetamid trifluoroacetamid fenylacetamid

3-fenylpropanamid pent-4-enamid picolinamid

3- pyridy lkarboxam i d benzamid /7-fenylbenzamid n-ftalimid «-tetrachloroftalimid

4- nitro-n-ftalimid «-dithiasukcinimid «-2,3-difenylmaleimid n-2,5-dimethy lpyrrol «-2,5-bis(triisopropyl)pyrrol «-1,1,4,4-tetramethyldisiliazacyklopentát adukt

1,1,3,3-tetramethyl-1,3-disilaisoindolin zvláštní -NH chránicí skupiny «-methylamin «-/-butylamin «-allylamin n-[2-trimethylsilyle1hoxy)methylamin «-3-acetoxypropylainin «-kyanomethylamin «-(1 -isopropyl-4-ni tro-2-oxo-3-pyrrolin -3-yl)amin «-2,4-dimethoxybenzylamin

2-azanorbomylény «-2,4-dinitrofenylamin «-benzylamin «-4-methoxybenzyla min «-2,4-dimethoxyben zylamin «-2-hydroxybenzyla nin

TFA

TCP

Dts

BIPSOP

STABASE

BSB

SEM

Dmb

Bn

MPM

DMPM

Hbn

27CZ 304973 B6 «-(difenylmethyl)amino DPM «-bis(4-methoxyfenyl)methylamin n-5-dibenzosuberylamin DBS n-trifenylmethy lamin Tr n-[(4-methoxyfenyl)difenylmethyl]amino MMTr n-9-fenylurenylamin Pf «-ferocenylmethylamin Fcm n-2-pikolylamin n '-oxid n-1,1-dimethylthiomethylenamin «-benzylidenamin «-p-methoxybenzylidenamin n-difenylmethylenamin n-(5,5-dimethyl-3-oxo-1 -cyklohexenyl)amin n-nitroamin n-nitrosoamin difenylfosfínamid Dpp dimethylthiofosfinamid Mpt difenylthiofosfínamid PPt dibenzylfosforamidát

2- nitrobenzensulfenamid Nps n-l-(2,2,2-trifluoro-l, l-difenyl)ethylsulfenamid TDE

3- nitro-2-pyridinsulfenamid Npys p-toluensulfonamid Ts benzensu lfonamid

Příklady upřednostňovaných způsobů podle tohoto vynálezu budou nejdříve uvedeny s výchozími sloučeninami 45, 43 a 25. Uznává se, že konkrétní substituenty, zejména v pozicích C-5 a ΟΙ 8, se mohou ve světle předkládaného vysvětlení lišit.

Upřednostňované způsoby přípravy sloučenin vzorců I, II a III jsou popsány níže v následujících reakčních schématech s příklady typických substituujících skupin.

Schéma 1

(⁴⁵) (KRí = CN)) (KRe = OH))

Jak je objasněno ve schématu 1, první krok přípravy upřednostňovaných sloučenin 1 (kde sloučenina obecného vzorce Ri = OH, sloučenina obecného vzorce X₂ = OAc a sloučenina obecného vzorce = CN nebo OH) podle předkládaného vynálezu ze sloučeniny 45 je konverze s vyso-28CZ 304973 B6 kým výtěžkem amino skupiny na amidovou skupinu. Po acylaci amino skupiny je druhý krok přeměna CN skupiny na OH skupiny reakcí s dusičnanem stříbrným v AcCN/H₂O.

Příprava ostatních sloučenin obecného vzorce I podle předkládaného vynálezu, začínající ze sloučeniny 17, je popsána níže (schéma 4).

Schéma 2

(43 ) (ll (R₆ = CN)) ( = OH))

Jak je objasněno ví schématu 2, další skupina zajímavých derivátů vzorce II (kde sloučenina obecného vzorce R, = OH, sloučenina obecného vzorce X₂ = OAc a sloučenina obecného vzorce R« = CN nebo OH) může být získána ze sloučeniny 43 použitím následujícího postupu. Acylace aminoskupiny poskytuje odpovídající amid a přeměnu CN skupiny na OH skupinu reakcí s dusičnanem stříbrným v AcCN/H₂O.

Příprava ostatních sloučenin obecného vzorce II podle předkládaného vynálezu, začínající ze sloučeniny 17, je popsána níže (schéma 4).

Schéma 3

(25)

Upřednostňovaný postup pro přípravu sloučenin vzorce II je přeměna sloučeniny 25 na odpovídající esterový derivát acylaci OH skupiny, odchránění fenolové skupiny, následované acylaci a odchráněním MOM skupiny za získání odpovídajícího esteru, následované přeměnou CN skupiny na OH skupinu reakcí s dusičnanem stříbrným v AcCN/H₂O za získání sloučeniny vzorce III

-29CZ 304973 B6 (kde sloučenina obecného vzorce R, = OH, sloučenina obecného vzorce X₂ = OAc a sloučenina obecného vzorce Ré = CN nebo OH).

Ostatní sloučeniny obecného vzorce I a II podle předkládaného vynálezu mohou být připraveny 5 ze sloučeniny 17 přes aminový meziprodukt 120, jak je popsáno ve schématu 4.

Schéma 4

Následující další sloučeniny podle předkládaného vynálezu (zahrnující například 140 a 141) byly připraveny z kyanosafracinu B (2), jak je podrobně popsáno v příkladech (schéma 5).

Schéma 5

(141)

-30CZ 304973 B6

Jak odborník snadno pochopí, reakční schémata zde popsaná mohou být pozměněna a/nebo spojena různými způsoby a sloučeniny tak získané jsou brány za součást tohoto vynálezu. Zejména výchozí látka a/nebo činidla a reakce se mohou lišit v dalších vhodných kombinacích substituujících skupin ve vzorcích I, II a III.

V příbuzném aspeklu je předkládaný vynález zaměřen na použití známé sloučeniny, safracinu B, také se vztahující na chinonamin, v hemisynthetické syntéze.

Obecněji se vynález, týká hemisynthetického postupu pro přípravu meziproduktů, derivátů a příbuzných struktur ec einascidinu nebo jiných tetrahydroisochinolinfenolových sloučenin, začínající z přírodního bis tetrahydroisochinolin alkaloidů. Vhodné výchozí látky pro hemisynthetický postup, zahrnují třídy saframycinových a safracinových antibiotik, dostupných z různých kultivační živná půda, i také třídy reineramicinových a xestomycinových sloučenin, dostupných z mořských hub.

Obecný vzorec XV oro výchozí látky je následující:

kde:

sloučenina obecného vzorce R¹ je amidomethylenová skupina, jako je sloučenina obecného vzorce -CH2-NH-CO-CR^25aR^25bR^25c, kde sloučeniny obecných vzorců R^25a a R^25b tvoří ketoskupinu nebo jedna je -OH, -NH2 nebo -OCOCH₃ a druhá je -CH₂COCH₃, -H, -OH nebo -OCOCH₃, což je zajištěné, jestliže když je sloučenina obecného vzorce R^25a -OH nebo -NH2, pak sloučenina obecného vzorce R^25b není -OH a sloučenina obecného vzorce R^25c je -H, -CH3 nebo -CH₂CH₃, nebo sloučenina obecného vzorce R¹ je acyloxymethylenová skupina, jako je sloučenina obecného vzorce -CH₂-O-CO-R, kde sloučenina obecného vzorce R je -C(CH₃)=CH-CH₃ rebo -CH₃;

sloučeniny obecných vzorců R⁵ a R⁸ jsou nezávisle vybrány z -H, -OH nebo -OCOCH₂OH nebo sloučeniny obecných vzorců R⁵ a R⁸ jsou obě keto a kruh A je p-benzochinonový kruh;

sloučeniny obecných vzorců R^14a a R^14b jsou obě -H nebo jedna je -H a druhá je -OH, -OCH₃nebo OCH₂CH₃, nebo sloučeniny obecných vzorců R^i4a a R^14b dohromady tvoří keto skupinu;

sloučeniny obecných vzorců R¹⁵ a R¹⁸ jsou nezávisle vybrány z -H nebo -OH, nebo sloučeniny obecných vzorců R¹⁵ a R¹⁸ jsou obě keto a kruh A je p-benzochinonový kruh; a sloučenina obecného vzorce R²’ je -OH nebo -CN.

Obecnější vzorec pro tuto třídu sloučenin je uveden níže:

-31 CZ 304973 B6

kde substituující skupiny, definované sloučeninami obecných vzorců R_b R₂, R₃, R4, R5, Ró, R7, R₈, R9, R10, jsou každá nezávisle vybrány ze skupiny, která se skládá z H, OH, OCH₃, CN, =0, CH₃; kde sloučenina obecného vzorce X jsou různé amidové nebo esterové funkční skupiny, obsažené ve zmíněných přírodních produktech;

kde každý čárkovaný kruh znázorňuje jednu, dvě nebo tři volitelné dvojné vazby.

Tak jsme podle předkládaného vynálezu popsali hemisyntetické cesty pro přípravu meziproduktů, zahrnující meziprodukt 11, a tak pro přípravu ecteinascidinových sloučenin, stejně jako ftalascidinu a dalších sloučenin. Hemisyntetické cesty podle vynálezu obsahují pro dosažení žádaného produktu množství transformačních kroků. Každý krok je sám o sobě v souladu s tímto vynálezem. Vynález není omezen na cesty, které jsou zde uvedeny, a alternativní cesty mohou být získány například změnou transformačních kroků, jestliže je to vhodné.

Zejména tento vynález zahrnuje získání 21-kyano výchozí látky obecného vzorce XVI:

kde sloučeniny obecných vzorců R¹, R⁵, R⁸, R^Ua, R^14b, R¹⁵ a R¹⁸ jsou takové, jak byly definovány.

Ostatní sloučeniny vzorce XVI s různými substituenty na pozici 21 mohou také být možnou výchozí látkou. Obecně je kandidátem derivát, schopný přípravy nukleofilním přemístěním 21hydroxy skupiny sloučenin vzorce XV, kde sloučenina obecného vzorce R²¹ je hydroxy skupina cis. Příklady vhodných 21- substituentů zahrnují, ale nejsou na ně omezeny:

merkapto skupinu;

alkylthio skupinu (alkylová skupina má od 1 do 6 uhlíkových atomů);

arylthio skupina (arylová skupina má od 6 do 10 uhlíkových atomů a je nesubstituovaná nebo substituovaná 1 až 5 substituenty, vybranými z například alkyl skupiny, která má od 1 do 6 uhlíkových atomů, alkoxy skupiny, která má od 1 do 6 uhlíkových atomů, halogenových atomů, merkapto skupin a nitro skupin);

amino skupina;

-32CZ 304973 B6 mono- nebo dialkylamino (nebo každá alkylová skupina, která má od 1 do 6 uhlíkových atomů);

mono- nebo diarylamino skupina (nebo každá arylová skupina, jak je definována výše ve vztahu k arylthio skupinám);

α-karbonylalkyl skupina obecného vzorce -C(R^a)(R^b)-C(=O)R^c, kde sloučeniny obecných vzorců R^a a R^b jsou vybrány z vodíkových atomů, alkylové skupiny, která má od 1 do 20 uhlíkových atomů, arylových skupin (jak jsou definovány výše ve vztahu k arylthio skupinám) a aralkyl skupiny (ve kterých je alkylová skupina, která má od 1 do 4 uhlíkových atomů, substituována arylovou skupinou, definovanou výše ve vztahu k arylthio skupinám), s podmínkou, že jedna ze sloučenin obecných vzorců R^a a R^b je vodíkový atom;

sloučenina obecného vzorce R^c je vybrána z vodíkového atomu, alkylové skupiny, která má od 1 do 20 uhlíkových atomů, arylových skupin (jak jsou definovány výše ve vztahu k arylthio skupinám), aralkyl skupiny (ve které je alkylová skupina, která má od 1 do 4 uhlíkových atomů, substituována arylovou skupinou, definovanou výše ve vztahu k arylthio skupinám), alkoxy skupiny, která má od 1 do 6 uhlíkových atomů, aminoskupiny nebo mono- nebo dialkylamino skupiny, jak je definováno výše.

Tak se v obecnějším aspektu předkládaný vynález týká postupů, kde první krok je tvorba 21derivátu použitím nukleofilního činidla. Takové sloučeniny zmiňujeme jako 21-Nuc sloučeniny.

Přítomnost 21- kyano skupiny je nutná pro některé konečné produkty, zejména ecteinascidin 770 a ftalascidin, zatímco pro jiné konečné produkty hraje roli jako chránící skupina, která může být snadno přeměněna na jiný substituent, jako je 21-hydroxy skupina ecteinascidinu 743 nebo 21hydroxyftalascidin. Zavedení 21-kyano sloučeniny jako výchozí látky účinně stabilizuje molekulu během průběhu syntetických kroků, až je vhodně odstraněna. Ostatní 21-Nuc sloučeniny mohou poskytnout tuto a další výhody.

V jednom důležitém aspektu předkládaný vynález spočívá v použití 21-kyano sloučeniny obecného vzorce XVI pří přípravě bis- nebo tris tetrahydroisochinolinfenolových sloučenin. Produkty, které mohou být připraveny, zahrnují meziprodukty, jako je meziprodukt 11, a ecteinascidiny a ftalascidin, stejně jako nové a známé sloučeniny odvozené struktury.

Upřednostňované výchozí látky zahrnují ty sloučeniny vzorců XV nebo XVI, kde sloučeniny obecných vzorců R^Ma a R^14b jsou obě vodík. Upřednostňované výchozí látky také zahrnují sloučeniny vzorců XV nebo XVI, kde sloučenina obecného vzorce R¹⁵ je vodík. Dále upřednostňované výchozí látky zahrnují sloučeniny vzorců XV nebo XVI, kde kruh E je fenolický kruh. Upřednostňované výchozí látky dále zahrnují sloučeniny vzorců XV nebo XVI, kde alespoň jedna, lépe alespoň dvě nebo tři sloučeniny obecných vzorců R⁵, R⁸, R¹⁵ a R¹⁸ nejsou vodík.

Příklady vhodných výchozích látek podle tohoto vynálezu zahrnují saframycin A, saframycin B, saframycin C, saframycin G, saframycin H, saframycin S, saframycin Y₃, saframycin Ydi, saframycin Ad_b saframycin Yd₂, saframycin AH₂, saframycin AH₂Ac, saframycin AH_b saframycin AH]Ac, saframycin AR₃, renieramycin A, renieramycin B, renieramycin C, renieramycin D, renieramycin E, ren ieramycin F, xestomycin, saframycin D, saframycin F, saframycin Mx-1, saframycin Mx-2, safracin A, safracin B a safracin C. Upřednostňované výchozí látky mají kyano skupinu v poz ci 21, pro skupinu obecného vzorce R²¹.

Ve zvláště upřednostňovaném aspektu vynález zahrnuje hemisyntetický postup, kde jsou transformační kroky aplikovány na afracinu B:

-33 CZ 304973 B6

( SAFRACIN B).

Safracin B ukazuje kruhový systém velmi příbuzný ecteinascidinům. Tato sloučenina má stejnou pentacyklovou strukturu a stejné substituenty v pravém aromatickém kruhu, kruhu E. Safracin B také vykazuje velmi podobné znaky s některými syntetickými meziprodukty v celkové syntéze ET-743, konkrétně s meziproduktem 11. Takový meziprodukt může být transformován na ET743 použitím dobře zavedeným způsobem. Syntetická konverze safracinu B na meziprodukt 11 bude proto provedena hemisyntetickým způsobem za získání ET-743.

Tak připravujeme meziprodukt 11, připravený z této sloučeniny safracinu B, a sloučeniny, odvozené od meziproduktu 11, konkrétně ecteinascidinové sloučeniny. Dále připravujeme ftalascidin ze safracinu B. Vynález se také týká použití safracinu B při produkci meziproduktu 11, ftalascidinu, ecteinascidinových sloučenin a dalších meziproduktů podle vynálezu. Vynález se také týká sloučenin zde popsaných, odvozených od navrhovaných výchozích látek, a použití těchto sloučenin při přípravě takových sloučenin.

Upřednostňované výchozí látky podle tohoto vynálezu mají 21- kyano skupinu. Současně nejvíce upřednostňovaná sloučenina podle předkládaného vynálezu je sloučenina vzorce 2. Tato sloučenina je získávána přímo ze safracinu B a považuje se za klíčový meziprodukt v hemisyntetickém postupu.

Ve vztahujícím se aspektu připravujeme kyanosafracin B fermentací safracin B produkujícího kmene Pseudomonas fluorescens a zpracování kultivační živné půdy za použití kyanidového iontu. Upřednostňovaný kmen Pseudomonas fluorescens je kmen A2- 2, FERM BP-14, který je využíván v postupu EP 055 299. Vhodným zdrojem kyanidového iontu je kyanid draselný. Při typickém zpracování je živná půda zfiltrována a je přidán přebytek kyanidového iontu. Po vhodném intervalu míchání, tak 1 hodinu, je pH změněno na alkalické, uvedeno pH 9,5, a organickou extrakcí se získá surový extrakt, který může být dále čištěn za získání kyanosafracinu B.

-34CZ 304973 B6

Safracin B obsahuje alanylový postranní řetězec. V jednom aspektu vynálezu jsme objevili, že chránění volné amirio skupiny Boc skupinou poskytuje velké výhody.

Obecně konverze 21-kyano výchozí látky na ecteinascidinový analog podle tohoto vynálezu může být provedeno v souladu s naší také nevyřízenou PCT patentovou přihláškou, plný odkaz wpp83894, který také nárokuje přednostní právo z PCT souboru, publikovaného jako WO 0069862, publikovaného 23. listopadu 2000, a který se týká hemisyntetických způsobů a nových sloučenin. Zahrnujeme text naší také nevyřízené PCT přihlášky, plný odkaz wpp83894, odkazem na rozsah, který je tam zveřejněn, který není v předkládaném popisu.

Typicky hemisyntéza analogu podle tohoto vynálezu zahrnuje:

a) konverzi, jestliže je nezbytná, chinonového systému pro kruh E na fenolový systém

b) konverzi, jestliže je nezbytná, chinonového systému na kruh A na fenolový systém;

c) konverzi fenolového systému pro kruh A na methylendioxyfenolový kruh; a

d) pozměnění, jestliže je vhodné, jako je acylace.

Krok a, konverze, jestliže je nezbytná, chinonového systému pro kruh E na fenolový systém, může být provedena obvyklými redukčními postupy. Vhodný reagenční systém je vodík s katalyzátorem palladium- uhlík, ačkoliv může být použit jiný redukující systém.

Krok b, konverze, jestliže je nezbytná, chinonového systému pro kruh A na fenolový systém, je analogická kroku a a není třeba více podrobností.

Krok c, konverze fe nolového systému pro kruh A na methylendioxyfenolový kruh, může být provedena více způsoby, možno společně s krokem b. Například chinonový kruh A může být demethylován na methoxy substituentu v pozici 7 a redukován na dihydrochinon a uzavřen vhodným elektrofilním činidlem, jako jsou CH₂Br₂, BrCH₂Cl nebo podobné dvojvazné činidlo, přímo dávající methylendioxy kruhový systém, nebo dvojvazným činidlem, jako je thiokarbonyldiimidazol, který dává substituovaný methylendioxy kruhový systém, který může být konvertován na žádaný kruh.

Pozměnění v kroku d může zahrnovat acylaci, například skupinou obecného vzorce R^a-CO-, stejně jako konverzi 12-NCH₃ skupiny na 12-NH nebo 12-NCH₂CH₃. Taková konverze může být provedena před nebo po ostatních krocích použitím dostupných metod.

Pro znázornění je ny ní provedeno transformování kyanosafracinu B pro přípravu nových analogů kratší a jednodušší cestou. Kyanosafracin B může být transformován na meziprodukt 25;

(mez-25) a z tohoto derivátu je možné si představit další analoga podle tohoto vynálezu.

-35CZ 304973 B6

Jeden způsob podle tohoto vynálezu transformuje kyanosafracin B na meziprodukt 25 přes posloupnost reakcí, které zahrnují nezbytně (1) odstranění methoxy skupiny, umístěné na kruhu A, (2) redukci kruhu A a vytvoření methylendioxy skupiny v jedné baňce, (3) hydrolýzu amidové funkční skupiny, umístěné na uhlíku 1, (4) přeměněna zbývající amino skupiny na hydroxy 1 skupinu.

Konverze 2-kyano sloučeniny na meziprodukt 25 obvykle zahrnuje následující kroky (viz. schéma II):

vytvoření chráněné sloučeniny vzorce 14 reakcí 2 s fér/-butoxykarbonylanhydridem; konverzi 14 na dvojnásobně chráněnou sloučeninu vzorce 15 reakcí s bromoethylmethyletherem a diisopropylethylaminem v acetonitrilu;

selektivní odstranění methoxy skupiny z chinonového systému na 15 za získání sloučeniny vzorce 16 reakcí s methanolovým roztokem hydroxidu sodného;

přeměna 16 na methylendioxy sloučeninu vzorce 18 použitím následující upřednostňované posloupnosti: (1) chinonová skupina sloučeniny 16 je redukována 10% Pd/C ve vodíkové atmosféře; (2) hydrochinonový meziprodukt je konvertován na methylendioxy sloučeninu vzorce 17 reakcí bromochloromethanu a uhličitanu česného ve vodíkové atmosféře; (3) 17 je transformována na sloučeninu vzorce 18 chráněním volné hydroxylové skupiny jako skupiny obecného vzorce OCH₂R. Tato reakce je provedena se sloučeninou obecného vzorce BrCH₂R a uhličitanem česným, kde sloučenina obecného vzorce R může být aryl, CH= CH₂, sloučenina obecného vzorce OR' apod.;

odstranění /erí-butoxykarbonylu a methoxymethyl chránících skupin 18 za získání sloučeniny vzorce 19 reakcí s roztokem HC1 v dioxanu. Také tato reakce je provedena smícháním 18 s roztokem kyseliny trifluorooctové v dichlormethanu;

vytvoření thiomočovinové sloučeniny vzorce 20 reakcí 19 s fenylisothiokyanátem;

konverze sloučeniny vzorce 20 na aminovou sloučeninu vzorce 21 reakcí s roztokem kyseliny chlorovodíkové v dioxanu;

přeměna sloučeniny vzorce 21 na A-Troc derivát 22 reakcí s trichloroethylchloromravenčanem a pyridinem;

vytvoření chráněné hydroxy sloučeniny vzorce 23 reakcí 22 s bromoethylmethyletherem a diisopropylethylaminem;

přeměna sloučeniny vzorce 23 na A-H derivát 24 reakcí s kyselinou octovou a zinkem; konverze sloučeniny vzorce 24 na hydroxy sloučeninu vzorce 25 reakcí s dusitanem sodným v kyselině octové. Volitelně může být použit oxid dusičitý ve směsi kyseliny octové a acetonitrilu, následované reakcí s hydroxidem sodným. Také může být použit dusitan sodný ve směsi acetanhydridkyselina octová, následovaná reakcí s hydroxidem sodným.

-36CZ 304973 B6 schéma II

(25)

Konverze meziproduktu 25 na jiné analoga podle tohoto vynálezu je pak snadno proveditelné, jak ukazuje například sihéma II, které obvykle zahrnuje následující kroky:

přeměna sloučeniny vzorce 24 na derivát 30 chráněním primární hydroxylové funkční skupiny ío (S)-N-2,2,2-trichloroethoxykarbonyl-S-(9H-fluoren-9-ylmethyl)cysteinem 29;

konverzi chráněné sloučeniny vzorce 30 na fenolový derivát 31 odštěpením allylové skupiny tributylstanniumhydridem a dichloropalladium-bis(trifenylfosfinem);

přeměna fenolové sloučeniny vzorce 31 na sloučeninu vzorce 32 oxidací anhydridem benzenselenidu za nízké te oloty;

-37CZ 304973 B6

Cesta, popsaná výše pro přeměnu meziproduktu 25, může být obvykle pozměněna za tvorby jiných derivátů.

Podrobněji, konverze výchozí 21-kyano sloučeniny na příbuzný produkt podle tohoto vynálezu, jako je jeden vzorce XX, obvykle zahrnuje následující kroky:

b) vytvoření skupiny obecného vzorce -R⁵ v pozici 5 na kruhu A:

c) vytvoření skupiny obecného vzorce -R¹ v pozici 1 na kruhu 5; a

d) konverzi, jestliže je nezbytná, chinonového systému pro kruh A na fenolový systém;

e) konverzi fenolového systému pro kruh A na methylendioxyfenolový kruh.

Tyto kroky mají mnoho shodných prvků s kroky, popsanými dříve. Krok c typicky zahrnuje vytvoření skupiny-CH₂NH₂ v pozici 1 a její acylaci.

Ftalascidin může být připraven použitím meziproduktů, popsaných v konverzi kyanosafracinu B na meziprodukt 25. Například meziprodukty 21 a 17 jsou vhodně výchozí látky pro přípravu ftalascidinu a další analoga podle tohoto vynálezu.

Jak je ukázáno ve schématu V, postup pro syntetickou přípravu ftalascidinu, začínající od meziproduktu 21, obsahuje následující kroky:

přeměnu 21 na sloučeninu vzorce 27 reakcí s anhydridem ftalovým v dichlormethanu a karbonyldiimidazolu.

přeměnu 27 na ftalascidin reakcí s tributylstanniumhydridem a dichloropalladium-bis(trifenylfosfmem) nebo zásaditým médiem, následovanou reakcí s acetylchloridem.

-38CZ 304973 B6 schéma V

(ftalascidin)

Jak je ukázáno ve schématu VI, postup pro syntetickou přípravu ftalascidinu, začínající od meziproduktu 17, obsahuje následující kroky:

acetylaci hydroxyl o vé skupiny sloučeniny 17 acetylchloridem a pyridinem za získání acetylovaného meziproduktu vzorce 42;

odstranění fórZ-butoxykarbonylu a methoxymethyl chránících skupin 42 za získání sloučeniny vzorce 43 reakcí s roztokem HC1 v dioxanu. Také tato reakce je provedena smícháním 42 s roztokem kyseliny trifluorooctové v dichlormethanu;

vytvoření thiomočovinové sloučeniny vzorce 44 reakcí 43 s fenylisothiokyanátem;

konverze sloučeniny vzorce 44 na aminovou sloučeninu vzorce 45 reakcí s roztokem kyseliny chlorovodíkové v dioxanu;

přeměna 45 na ftalascidin reakcí s anhydridem ftalovým v dichlormethanu a karbonyldiimidazolu.

Další analoga mohou být připravena například z 43 nebo 45 podobným způsobem.

-39CZ 304973 B6 schéma VI

(17)

(42)

(43)

(ftalascidin)

(45)

Konverze 21-kyano sloučeniny na meziprodukt 11 nebo příbuzný meziprodukt vzorce XXI obvykle zahrnuje následující kroky:

b) vytvoření obecné skupiny -OProt¹ v pozici 18 na kruhu £;

c) vytvoření obecné skupiny -CH₂-OProť v pozici 1 na kruhu 5; a

e) konverzi fenolového systému pro kruh A na methylendioxyfenolový kruh.

Krok b, vytvoření obecného skupiny -OProt¹ v pozici 18 na kruhu E, je typickou chránicí reakcí pro fenolovou skupinu a nevyžaduje žádné speciální komentáře. Vhodné podmínky jsou vybrány v závislosti na charakteru chránicí skupiny. Další kroky jsou podobné dalším reakcím.

Krok c, vytvoření obecné skupiny -CH₂-OProt' v pozici 1 na kruhu B, je obvykle provedeno vytvořením skupiny -CH₂-NH₂ v pozici 1 a pak konverzí aminové funkční skupiny na hydroxylovou funkční skupinu a ochráněním. Tak kde výchozí látky mají skupinu obecného vzorce R¹, která je sloučeninou obecného vzorce -CH2-NH-CO-CR^25aR^25bR^25c, pak je to podstata odstranění N-acyl skupiny. Kde výchozí látky mají skupinu obecného vzorce R¹, která je sloučeninou obecného vzorce -CH2-O-CO-R, pak nemusí být nutná žádná změna pro ecteinascidinový produkt, kde je sloučenina obecného vzorce R¹ stejná. Pro ostatní produkty to je podstata odstranění Oacyl skupiny. Pro takové deacylace jsou dostupné různé postupy. V jedné variaci je deacylace a konverze na hydroxylovou funkční skupinu provedena v jednom kroku. Potom hydroxylová skupina může být acylována nebo jinak pozměněna za získání vhodné skupiny obecného vzorce R¹.

US patent 5 721 362 popisuje syntetické způsoby pro přípravu ET-743 přes dlouhou vícekrokovou syntézu. Jeden z meziproduktů této syntézy je meziprodukt 11. Použitím kyanosafracinu B

-40CZ 304973 B6 jako výchozí látky je možné dorazit k meziproduktu 11 za zajištění mnohem kratší cesty pro přípravu tohoto mezipr oduktu a tak zlepšit způsob přípravy ET-743.

Kyanosafracin B může být konvertován na meziprodukt 25 způsoby, popsanými výše. Z meziproduktu 25 je možné dorazit k meziproduktu 11 použitím následujících kroků, viz. schéma VII:

vytvořením chráněné skupiny vzorce 26 reakcí 25 s /er/-butyldifenylsilylchloridem v přítomnosti báze;

konečným odštěpením allylové skupiny tributylstanniumhydridem a dichloropalladium-bís(trifenylfosfinem) z 26, což vede k vytvoření meziproduktu 11.

schéma VII

BujSnH

Jedna součást syntetického postupu předkládaného vynálezu pro transformaci safracinu B na meziprodukt lije pozměnění a rozšíření schéma VIII a obsahuje následující kroky:

stereospecifíckou konverzi sloučeniny safracin B na sloučeninu vzorce 2 selektivním nahražením OH CN reakcí s KCN a kyselém prostředí;

vytvoření thiomočovinové sloučeniny vzorce 3 reakcí sloučeniny vzorce 2 s fenylisothiokyanátem;

konverzi thiomočovinové sloučeniny vzorce 3 na acetamid vzorce 5 hydrolýzou v kyselém prostředí, následovanou adicí acetanhydridu; aminový meziprodukt vzorce 4 může být izolován ukončením hydrolýzy v kyselém prostředí hydrogenuhličitanem sodným, ale tento meziprodukt je vysoce nestálý a je rychle přeměněn na pětičetný cyklický imin, jmenovitě sloučeninu 6;

vytvoření chráněné sloučeniny vzorce 7 reakcí s bromomethylmethyletherem a diisopropylethylaminem a dichlormethanu;

-41 CZ 304973 B6 selektivní demethylace methoxy skupiny chinonového systému sloučeniny vzorce 7 na sloučeninu vzorce 8 reakcí s methanolovým roztokem hydroxidu sodného;

přeměněním sloučeniny vzorce 8 na methylendioxy sloučeninu vzorce následujícím upřednostňovaným postupem: (1) chinonová skupina sloučeniny 8 je redukována 10% Pd/C ve vodíkové atmosféře; (2) hydrochinonový meziprodukt je konvertován na methylendioxy sloučeninu vzorce 9 reakcí bromochloromethanu a uhličitanu česného ve vodíkové atmosféře; (3) sloučeninu vzorce 9 je transformována na sloučeninu vzorce 10 chráněním volné hydroxylové skupiny jako skupiny obecného vzorce OCH₂R reakcí se sloučeninou obecného vzorce BrCH₂R a uhličitanu česného, kde sloučenina obecného vzorce R může být aryl, CH=CH₂, sloučenina obecného vzorce OR' apod.; konverze acetamidové skupiny sloučeniny vzorce 10 na odpovídající hydroxylovou skupinu vzorce 11 reakcí oxidu dusičitého ve směsi kyseliny octové a acetylacetátu, následované reakcí s hydroxidem sodným; volitelně může být použit dusitan sodný ve směsi acetanhydrid- kyselina octová, následuje reakce s hydroxidem sodným; volitelně může být acetamidová skupina sloučeniny vzorce 10 přeměněna na primární amino skupinu reakcí s hydrazinem nebo s Boc₂O, DMAP, následovaná hydrazinem; takový primární amin může být přeměněn na odpovídající hydroxylovou skupinu (sloučenina vzorce 11) oxidativní konverzí primárního aminu na odpovídající aldehyd 4-formyl-l-methylpyridiniumbenzensulfonátem nebo jiným pyrimidinovým iontem, následuje reakce s DBU nebo jinou bází a další hydrolyzace, následuje redukce aldehydu na odpovídající hydroxyl skupinu tetrahydridohlinitanem lithným nebo jiným redukčním činidlem;

vytvoření chráněné sloučeniny vzorce 26 reakcí s chloridem t—butyldifenylsilyl a dimethylaminopyridin v dichlormethanu;

přeměnou silylované sloučeniny vzorce 26 na meziprodukt 11 odchráněním chránící skupiny obecného vzorce OCH₂R reakcí za redukujících podmínek nebo kyselých podmínek. Typické postupy jsou s palladiovou černí ve vodíkové atmosféře nebo ve vodném TFA nebo tributylstanniumhydridu a dichloro bis(trifenylfosfinpalladiumem).

V ještě další upřednostňované modifikaci může být kyano sloučenina vzorce 2 přeměněna na meziprodukt 11 doplněním schématu II, která zahrnuje další kroky:

vytvoření chráněné hydroxy sloučeniny vzorce 26 reakcí 25 s chloridem ZerZ-butyldifenylsilylem v přítomnosti báze;

konečné odštěpení allylové skupiny tributylstanniumhydridem a dichloropalladium-bis(trifenylfosfmem) z 26, což vede k vytvoření meziproduktu 11.

Tak je možné přeměnit kyanosafracín B na množství meziproduktů a derivátů s možnou protinádorovou léčebnou aktivitou. Tyto meziprodukty mohou být připraveny z již popsaných sloučenin nebo použitím alternativních cest.

Meziprodukty zde popsané obsahují sloučeninu 47 a množství amidových derivátů, připravených použitím sloučenin 45 nebo 43.

Ve schématu VIII je popsáno vytvoření sloučeniny 47 použitím následujícího postupu: vytvoření thiomočovinové sloučeniny vzorce 3 reakcí sloučeniny vzorce 2 s fenylisothiokyanátem;

-42CZ 304973 B6 selektivní demethyace methoxy skupiny chinonového systému sloučeniny vzorce 7 na sloučeninu vzorce 8 reakcí s methanolovým roztokem hydroxidu sodného;

přeměněním sloučeniny vzorce 8 na methylendioxy sloučeninu vzorce 10 následujícím upřednostňovaným postupem: (1) chinonová skupina sloučeniny 8 je redukována 10% Pd/C ve vodíkové atmosféře; (2) hydrochinonový meziprodukt je konvertován na methylendioxy sloučeninu vzorce 9 reakcí brornochloromethanu a uhličitanu česného ve vodíkové atmosféře; (3) sloučeninu vzorce 9 je transformována na sloučeninu vzorce 10 chráněním volné hydroxylové skupiny jako allyloxy skupiny reakcí s allylbromidem a uhličitanem česným;

přeměnou sloučeniny vzorce 9 na acetyl derivát 46 reakcí s acetylchloridem v pyridinu; přeměnou sloučeniny vzcrce 46 na odchráněnou sloučeninu 47 reakcí s kyselinou chlorovodíkovou v dioxanu.

schéma VIII

(2)

t)HO 6,SUOIOXAN ZlAcjO

OMe o* «*

(6)

NH

A (5) (4)

(8)

Ostatní užitečné amidové meziprodukty- deriváty jsou připraveny z již popsaného meziproduktu 45 použitím dalšího schématu:

-43CZ 304973 B6 schéma IX

NH

O^R

Druhý krok je nepovinný. Tento postup je důležitou částí vynálezu, konkrétně kde skupina obecného vzorce R je skupinou obecného vzorce R^a, tak, jak byla dříve definována. Dále schéma VIII může být snadno rozšířeno pro umožnění přípravy sloučenin vzorce XXIII zahrnutím výchozí látky odlišné skupiny v pozici 5, buď skupiny přímo zamýšlené pro produkt, nebo skupiny, která může být odstraněna nebo jinak pozměněna za získání žádané skupiny.

Ze sloučeniny 45 může být skupina analogů připravena pomocí následujícího postupu:

acylace amino skupiny sloučeniny vzorce 45 širokou skupinou acylových derivátů za získání 15 odpovídajících amidů, kde upřednostňované acylové skupiny jsou acetyl, cinnamoylchlorid, ptrifluorocinnamoylchlorid, isovalerylchlorid, fenylísothiokyanát nebo aminokyseliny, nebo jiné příklady dříve uvedených skupin obecného vzorce R^aCO-;

přeměna CN skupiny na OH skupinu reakcí s dusičnanem stříbrným ve směsi AcN/H₂O.

Ostatní užitečné amidové meziprodukty-deriváty jsou připraveny z již popsaného meziproduktu 43 použitím dalšího schématu:

-44CZ 304973 B6 schéma X

Ze sloučeniny 43 může být získána další skupina zajímavých derivátů pomocí následujícího postupu:

(a) acylace amino skupiny sloučeniny vzorce 43 širokou skupinou acylových derivátů za získání odpovídajících amidů, kde upřednostňované acylové skupiny jsou acetyl, cinnamoylchlorid, ptrifluorocinnamoylchlorid, isovalerylchlorid nebo aminokyseliny, nebo jiné příklady dříve uvedených skupin obecného vzorce R^aCO-.

(b) přeměna CN skupiny na OH skupinu reakcí s dusičnanem stříbrným ve směsi AcN/H₂O.

Pro aktivní sloučeniny je důležitý postup v souladu s vynálezem následující:

kde sloučenina obecného vzorce R⁵ pro konečný produkt je taková, jak je definována pro sloučeninu XXII a může se lišit ve výchozí látce a přeměna na ně je součást postupu, sloučenina obecného vzorce R¹⁸ je hydroxylová skupina v konečném produktu, ale může být chráněnou hydroxy skupinou ve výchozí látce a přeměna na ně je součást postupu, sloučenina obecného vzorce R¹² pro konečný produkt může být stejná, jako ve výchozí látce nebo může být na ně přeměněna, což je součást postupu,

-45CZ 304973 B6 sloučenina obecného vzorce R²¹ pro konečný produkt je taková, jak je definována, a jestliže hydroxy skupina může být vytvořena z kyano skupiny, což je součást postupu, sloučenina obecného vzorce R^a je taková, jak je definována, a může být dále acylována, což je součást postupu, za získání konečného produktu s acylovanou skupinou obecného vzorce R^a, jak je diskutováno.

Sloučenina obecného vzorce R⁵ je ve výchozí látce přednostně oxyacetyl nebo malá oxyacylova10 ná skupina a při reakci se nezmění. Sloučenina obecného vzorce R¹⁸ je ve výchozí látce přednostně hydroxylová skupina a při reakci se nezmění. Sloučenina obecného vzorce R¹² je ve výchozí látce přednostně -NCH₃- a při reakci se nezmění. Sloučenina obecného vzorce R²¹ pro konečný produkt je taková, jak je definována, a jestliže hydroxy skupina může být vytvořena z kyano skupiny, což je součást postupu. Sloučenina obecného vzorce R^a je v konečném produktu přednostně taková, jak je definována ve vztahu ke sloučenině vzorce XXIII.

Další důležitý způsob podle tohoto vynálezu zahrnuje reakci:

Další důležitý způsob podle tohoto vynálezu zahrnuje reakci, kde skupina obecného vzorce R¹, která je aminomethylen, je přeměněna na hydroxymethylenovou skupinu.

Další důležitý způsob podle tohoto vynálezu zahrnuje reakci pro přípravu 21-kyano sloučeniny vzorce XVI, která obsahuje reagující sloučeninu vzorce XV:

-46CZ 304973 B6 kde sloučeniny obecných vzorců R¹, R⁵, R^14a, R^14b, R¹⁵ a R¹⁸ jsou takové, jak jsou definovány, a sloučenina obecného vzorce R²¹ je hydroxy skupina, se zdrojem kyanidového iontu, za získání žádané 21-kyano sloučeniny.

Dále jsou také předvedeny postupy, používající jiné nukleofil- obsahující sloučeniny, pro přípravu podobných sloučenin vzorce XVI, kde pozice 21 je chráněná jinou nukleofilní skupinou, 21Nuc skupinou. Například 21-Nuc sloučenina vzorce XVI s alkylamino substituentem v pozici 21 může být připravena reakcí sloučeniny vzorce XV, kde sloučenina obecného vzorce R²¹ je hydroxy skupina, s vhodným alkylaminem. 21-Nuc sloučenina vzorce XVI s alkylthio substituentem v pozici 21 může být také připravena reakcí sloučeniny vzorce XV, kde sloučenina obecného vzorce R²¹ je hydroxy skupina, s vhodným alkanthiolem. Volitelně může být připravena 21-Nuc sloučenina vzorce XVI s α-karbonylalkyl substituentem v pozici 21 reakcí sloučeniny vzorce XV, kde sloučenina obecného vzorce R²¹ je hydroxy skupina, s vhodnou karbonylovou sloučeninou, typicky v přítomnosti báze. Pro další 21-Nuc sloučeniny jsou dostupné další syntetické cesty.

Jiná důležitá reakce podle tohoto vynálezu zahrnuje reakci 21-kyano produktu podle tohoto vynálezu za vytvoření 21-hydroxy sloučeniny. Takové sloučeniny mají zajímavé vlastnosti in vivo.

Pro vyhnutí se pochybnostem uvádíme, že stereochemické znaky jsou v této patentové přihlášce na základě našeho porozumění správné stereochemie v přírodních látkách. Pro případ, že je objevena chyba ve stanovené stereochemii, pak vhodná oprava musí být provedena na formuláři, uvedeném všude v této patentové přihlášce. Dále pro případ, že je možnost pozměnění syntézy, se tento vynález rozšiřuje na stereoizomery.

cytotoxická aktivita

sloučenina	ICso(pM)
P-388	A-549	HT-29	MEL-28	cv-i	DU-145
ou· o Γ « NH i ° 2	0.009	0,018	0,018	0,018	0,023
Obb “V 14	0,15	>0,15	0,15	>0,15

-47CZ 304973 B6

0. ,Μ·	1,44	1,44	1,44	1,44
0 -JL il i α«Ο'^ζ^χγ^χ ó	'^ζ^*γ^χ<'Ν-Τ·Μ· k ČN 0 / m« 2--' ’V ' 15
	, OH·
o AW
	-Ý 16	>1,5	>1,5	>1,5	>1,5
OH	\| v ^OWe
“•Ά ii I	-T-M·
o T '-o	k ČN 0 ř « >-o-(- °*r ^x π	1,4	1,4	1,4	1,4
\	! OU« ^Ckz'°'v_!A<^M* ¹ JT
	^Z\'^A- N-T-U·

v_ ó	Vo-l· 18	0,01	0,01	0,01	0,01
\	OM« ηΟ-^^,Μ·
m<^X Ύ
“kv-N^x-^
o	k ÓM MH	0,08	0,16	0,01	0,16
	’V 19
\	ÚMC
	Μ -1 - M«
w	0,01	0,01	0,01	0,01
	.sMCSnhPw ⁰ \ 20
	OM·
‘••ν-Λξ	rYa* *k .N„	0,019	0,019	0,019	0,019
o T \-o	^4 21
\	OM· JZÍ
Μβ^χΛ^
V-o	k ČN NN	0,014	0,014	0,014	0,014	0,014	0,014
	₀^_d.CH,CO, 22
	OM·
ς	^.0___Ο^Λγ**·
Μ.^Λ II	Y^Y^Nj-Me
>—o	k ČN NM	0,13	0,13	0,13	0,13	0,13	0,13
	₀Λ„-ονο. 23

-48CZ 304973 B6

CUM Ů-O 1» CM -Λ A ***» 24	0,18	1,8	1,8	1,8	1,8	1,8
\ -Λ- 25	0,2	0,2	0,2	0,2		0,2
T °* ^Ολ/λ <mo\ s 3Z T * ΎιΓ vT’^ ^ ** \-o ix 35	0,008	0,008	0,008	0,008
o I OM· ο/η mOkÁ, Αβθ\ S Τ' T “i M· V-o ČM 36	0,01	0,01	0,01	0,01
OM· OM jT T \-o J £h yr í> 28	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001
1 OM* Ο^θχ^Λν·“· OM Γ J U*^xL qj H-l-M· tíw •V 42	0,13	0,13	0,13	0,13		0,13
OMc ho^JL, ° 12 T “'yVvtt“ °^v° T 43	0,008	0,016	0,008	0,008		0,016
OM· HO^Js-,Μ· QM JL_ T ^o<-° -»> J^nmcsmm ° 1 44	0,001	0,001	0,001	0,001		0,001
OM· OM Τ' J 45	0,01	0,01	0,01	0,01		0,01

-49CZ 304973 B6

OMe «ύ/ύ Ol CN NH Sn^SCHN^^A 1 3	0,015	0,015	0,015	0,015	0,018
□u« 6	2,171	2,171	2,171	2,171	2,171
ou« KO^JL,*· ILI.y iro γ ; 0 V. ČN NK 5	0,005	0,005	0,005	0,005
1 ůMe O^O^Á,* ;á/a ⁰ ř·!⁰* \| <A 7	0,22	0,22	0,22	0,22	0,22
! 1 Γ Ο^ΟγΛγ“· •yAAA „ΙαΛα ° il ; o V. CN □A 8	>9	>18,1	>18,1	>18,1	>18,1
1 O«« o^o^aL·-“· OH 1 J “«νΑγ-γ^Χ,. C_O k, ČN NH cA 9	>1,77	>1,77	>1,77	>1,77		>1,77
i f* Ί ^AAv“· V-0 L SM NM <A 10	>1,65	>1,65	>1,65	>1,65		>1,65

-50CZ 304973 B6

_ť)ak. Ma Ota Ίζ j \-o L^cn A 46	0,016	0,016	0,016	0,016	0,016
OM· ΗΟ^Α^,Μ· Ota J J **'Τ^ζ2^χ^Ύ^^^
°\_₀ lj« o-< 47	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001
OM· M0_Á Ui Ota JT J
V-Ó L. CM NH - <AA. 4g	0,0008	0,001	0,0008	0,0008	0,001
OM· Ota 1 J VIJ, Ao» ₄₉	0,007	0,007	0,007	0,007	0,007
OM· «^Α,μ» Ota JÍ T U· \—O L, ČN	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001
OMe ^H0'vA_Y'^M* OM JT j * '^sť^^XV‘t^z>í ^AW ftv S— O \ ČN NH <Α]“* NH I 0^ 51	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001
OMe hck-L/M· OAC 1 0 Ut θχχχ^ \-O \ ČN NH oA*“· w	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001
2
OM· mo.á u· OAc Tj ** θΛγν,Ν^Α V-0 ( ČN □Vy* m. o 53	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001

-51 CZ 304973 B6

— es «-Tmc θλΧ,.ν^ V-Ó V ČM MU _cA>^_vcf, ie I 54	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001
OMe
“yScY^. v. o V. éw NH oA^NK-^-CF,__ m« o 55	0,01	0,01	0,01	0,01	0,01
* Om· e* jH JJ
\_o oX“*¹ ' s6	0,18	0,9	0,18	0,8	0,9
ΟΜ»
Ort Tj “•^A^xOíu, 11 i > o-vSr '-θ X“ ..nmCSnm**·» °T 57	0,14	0,14	0,14	0,14	0,14
OMe V—ó v čw Λ*“Γ₅8	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001
OMe
JL j XXIx A-O X ČN zjř\ Λ’Χ⁰ ue ° «0	0,001	0,001	0,0001	0,001	0,0005
60
OMe ho^>A_u<
_o ^zvS'^N'/^> 1 v—O X ČH NH cAw, 61	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001
OMe HO^Js^Me OAť Jj J i η I >** c/W’ v. O X ČH NH _M i. 0 62	0,001	0,001		0,0005	0,001

-52CZ 304973 B6

OMe OAC X 1 '—O * CM ‘‘ÚO 63	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001
cue «oUsyM· oac XT “•>Áx-v<> Λγγ^ o \ ČN NH _M „ Ϊ ' 64	0,001	0,001		0,001	0,001
OMe HOk^jky-Mt OAC Jk.J YXX$“* ^-0 \ CN HH 65	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001
OMe HO^^kyMe OAe X J ,/Χί/ V-0 OH NH -- «	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001
OMe HO^JkyUe OAe J2 JI ₀W> '—O \ ÓH Me 0 O/	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001
OUa HO-k,* OAS X_Í 68	0,0008	0,001	0,0008	0,0008	0,001
OMe HO^^kyM· OAe XT oVW N- O \ OH MM cAf“* HH \| o^' 69	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001
OMe HO^ykyM· OAe X J ^'Τ^'''τΓ^Χ'''Τ^ΖΝ^Μ» _ολΧ.Μ* Á— O X OH MM 70	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001

-53CZ 304973 B6


OMe OAc T jj _c-Vy“< C-0 \ OH NH 71	0,0008	0,0008	0,0001	0,0008		0,0001
OMe OAc Ιζ Jj Ίφα^ C-O \ CN NH ·* ^0 72	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001
OMe hC^A^m· OAe Tj χχχ>“* V_O \ ČH _Ojťo 73	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001
OMe OAc Jf “λΧί?~ <Χι Bh NH 74	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001
OMe ΗΟ^λγ Wt OAe JT 9 oYyV 0 7 CN NH 1 O^jCHlh! γ2	0,1	0,1	0,1	0,1		0/1
OMe OAC JLJ “rV^L cn-Y C-0 \ CH NH O^iCHjh,	0,1	0,1	0/1	0/1		0,1
CMe OAC £^ j 0 \ ČN NH <A—77	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001
OMe W<xJ^M· □ac 77j) “’ίζΧΥ· ⁰^Ο 1 CN NH 78	0,0001	0,0008	0,0001	0,0001		0,0008

-54CZ 304973 B6


OMe oac 77 j ΌφΟΤ?“' V-0 1 CN NH i MMMt 79	0,001	0,001	0,001	0,001		0,001
OMe MO^Jsy,»* oac X j ^-0 I OM ^Ow	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001
1-H 00 J g λ-\3 ,=.	0,0007	0,0007	0,0007	0,0007		0,0007
OMe HOs^jíkyM· 0Λ6 T j AW V-ο OH NH <A 82	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001
OMe OAc XT k-0 \ CN NH 83	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001
OMe HOsJsy-U* OAe X J ^0>— o \ OH _OX*X 84	0,0001	0,0008	0,0001	0,0001		0,0008
OMe ^HO,s^>r^M· OAe X J Me. JL^-s^x<*r ΥΎΐ^ΝςΜ» Αν/ '-O ( CM λ-’υ-Λ Me ⁰ 8 5	0,0006	0,001	0,0006	0,001		0,0006

-55 CZ 304973 B6

OMe Me OAC ‘ II ζχχχγ V- o 1 ČN NH ₀A.-“« NH <A---— ₈₆	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001
OMe Μθ ^We ΟΧ Jí θλΧ,^ V-O 1 ČN ”ΫΓΟ₈₇	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001
OMe HO^Js. M* OAc T JJ “‘Ύ^· O X ČN r h •*rr se	0,0007	0,0007	0,0007	0,0007		0,0007
OMe HífÁ/M» OAc T Η Me JL χ-χ. fll ^NJ^M« '—0 ČN NH _M i. ⁰ 89	0,001	0,007	0,001	0,001		0,007
OMe ΟνΑ,Μϊ OAc 1 J οΥΎΥ Y-0 ČN NH NHCM °VyV i. 0 1 90	0,01	0,01	0,01	0,01		o θ'
ou· KO-Á,* OAc Γ J ^1/ V-O \ Ort ¥ H — X ⁰ 91	0,001	0,001	0,001	0,001		0,001
OMe OAc T J ^w’ Υγ''! 2* θΥγΝγ V-ó OH NH _H I \|l Me 0 9 2	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001

-56CZ 304973 B6

OMe	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001
o o	»*4m« c%z \ ó« NK „Yy- NH <A~M3
OM* HO^Js^fcU OAc Ji J
0	r t ^Nť·* Líz
\-o	\ 6h <rro_M	0,0007	0,0007	0,0007	0,0007		0,0007
	OMc
OAc j
n	ΓΤ N—Mt L.L>*
\-o	1 ÓH MM _M οΛ*^νΤ^· X » 95	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001		0,0001
	OMe HO_K JL ,.Mt
OAc Γ J ^Μ*\Α/^Λ'ζΟζ XXX>
v-o	\ ÓH MM ₀^Ky— Ma ^D 96	0,001	0,007	0,001	0,001		0,007
Y	OM· MOMO^Js^Me
	4
Y-O	\ cw 97	>1	>1	>1	>1		>1
Y	OM·
	/t »4* ULz
°\_o	ČN O U 98	>1	>1	>1	>1		>1
Y	OtAe MOMO<Js^,»A·
	ť^T LLZ
'—O	\ CN ^ΛΌ 9»	θ/7	θ/7	0/7	0/7	0,7	0/7

-57CZ 304973 B6

OMe UOMOs^k^M· ^'o lY 1 II ' _ΟΎΎ ' '—O \ CN 0 V íoo	0,1	OJ	OJ	oj	OJ
OU« „•VrV k-o cn 101	0,1	0,1	0,1	OJ	OJ
OMc WOMCK^k^Mc OK JL J k—O \ CN O	0,1	0,1	OJ	0,1	OJ
OMC MOMO^Jsy·»* OK JT f Mc. JL 't TTT NrM» _oJXl/ '—O \ CN ₁₀₃	0,1	0,1	OJ	0,1	OJ
OUe MOMO^^ky Mc o« JJ ^wiyVvQ C-O ČN 104	0,1	0,1	oj	OJ	OJ
OKU WOMCkJv,·^·
°** jz J ζχχχχ· '-O \ CN Λ-- 105	0,1	0,1	OJ	OJ	OJ
OUe -^uoVr ctty c- o \ CN O _ο<*Μί^γ^γ- Cř j U 106	0,6	0,6	0,6	0,6	0,6

-58CZ 304973 B6

OMe MOMoXyM* OAc jT T k-O CN ^0<^O 107	0,1	0,1	0,1	0,1	0,1
OMe ιλμοΙμ» OAe ΊΓ J Mt„ ^—0 I ČN 0 o^V’! ~ U¹ 108	0,01	0,07	0,07	0,07	0,07
OMe MO<Js.Me o*« JL J '—O \ CN <A^ 109	0,0001	0,0008	0,0008	0,0008	0,0008
OM· H(\A,M« OAe j _o0X> ''—O * CN O	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001
OMe HOsJs^Me OAc X. J M· x_Js^z-s^z^*T r ii T H—Me ,Vv/ '—O \ CN X 111	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001
OMe ΗθΑ.Μ< °** JL j X>C£> ^O * ČN x	0,0007	0,0007	0,0007	0,0007	0,0007
OMe HOlX-M· OAí T J TřT 7* oW> <-0 QH X 113	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001

-59CZ 304973 B6

OMe - OAc J 0 \ OH 0 ^Q!?^'O^,Cř,n4	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001
CMe OA£ T J θΛ^ΛγΝχ-^ 0 _VÓH „5	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001
OMe ř<\Á,U« OAc T Jj ‘“ySVa* θλΧ,Νγ^ k—0 \ OH ^o„<	0,0001	0,0007	0,0007	0,0007	0,0007
\ ?“* j MOMOs-^-Me 0^0 J if oWA k- 0 ČN NH i 117	0,06	0,06	0,06	0,06	0,06
<o _o^o ry” “«γ^γ-γΑύ. ο^ΤΎ^ηΑ V-ο \ w NH _nA^»NM, ° 1 118	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001
k OMe ? HO^Av^Me </S TJ °v-o w NH A^NHCSNHPh ⁰ i 119	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001
N k o·* ⁰ ΚΛ X Λ o^o ^mYXX'l^X οΎΎΎ V 120	0,06	0,06	0,06	0,06	0,06

-60CZ 304973 B6

O*^»0 o i» \—o	OMc \|^/Sy N-í-bW Li^ 4 _ ,o ° °^^a 121	0,006	0,006	0,006	0,006	0,006

O' ,°T ť ⁰	ou«
Ύ o Jř o	[''''γ'Ν-I-··· U.J> í° 122	o,i	0,1	0,1	0,1	0,1
\ o-C_o «sÁ. I ,	OWt ho^JL,·*
θ' Γ ''—O	K. CM HH % U 124	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001
OH Ue^^^zL, } j	OM< HO. Á.W« ''’Ύ'^ Η-Τ-Μ»
o τ ^—0	\ CM Hrt % V 125	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001
	CUM '''Y^n-J-m·
ο'Ύ'¹ '—o	K. OH NH % U 126	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001
0^0	Otte ''^Υ'^Ν-j-U·
©^Z T k— O	% U 127	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001

-61 CZ 304973 B6

'—O K. OH ,28	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001
\ °* 1 UOMCL^A-,Μ» °^° Xj °Yfx % U 129	0,1	0,1	0,1	o,i	0,1
MM MOMC-^Χ,Μβ ON jTj “^,νγγ\ϊ«. σχί °*s X2 130	0,1	0,1	0,1	0,1	0,1
£<M« ň’ MCWO^-A^, M· o*% TY “ΆαΤτ áv/ NH ^0 ...	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5
Ci_x =* ¹ OUOK-k^U< 0% νΑ<->τ<Χ_β cW '—o Á. Σν NH % V¹ 132	0,1	o,i	o,i	o,i	OJ
& L CM· J MOMO.^k-M· a** o JT~ J} %Α-γ<Χ JXJLt '—O V CN NH % V 133	0,05	0,05	0,05	0,05	0,05

-62CZ 304973 B6

Lp F Tf ΜΟΜηλ,* JT í '—O X. ČN HH % V 134	θ,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5
OM· A Mv* FjC^o Γ J *** 0 X CM ř*4 % 135	0,01	0,01	0,01	0,01		0,01
o»· 1 ho^J^m· o^o XT M· . T^ nJ-m· '—o X čit NH % V 136	0,001	0,001	0,001	0,001		0,001
a L OM· A Vr A U 137	0,01	0,01	0,01	0,01		0,01
ρψί f-L/ OM· F J^F ΗΟ,ΑΑμ· ο·Ά ITT Y^Y*Y2’“· '—O X CN A V 138	0,006	0,006	0,006	0,006		0,006
Cl. OM· A Yy“ ^-O X CN A U 139	0,01	0,01	0,01	0,01		0,01

-63CZ 304973 B6

ΟΜβ Μ· “‘χΧΎΐχ ~Λτ> r 0 . CM ΝΜ Χ^Ν-,Λο ο ¹ 140	0,08	0,08	0,08	0,08		0,08
ΟΜ« ΟχχΛχ<“* Ol CM ’ΥΥ· - 141	0,01	0,01	0,01	0,01	0,01	0,01
•x CMe HO.Á.* OAC jj J Me. xL xx/XT Ο'ΥΥ'Τ·'^ <~O □«ix^HKBee Lp. 174		0,0013	0,0013
OM HO-Jx^U· OAe ΊΙΤΊΓ crrť NM O«x^***« 175		0,007	0,007
OM· MO^ ^Jx. M· ΟΑβ jj oV\ⁿa v. 0 V. CN * a«. °yj 176		0,014	0,014
OM· tO^^^Ue OAC ' J Me. χζ^ x-x. ^z'^Y'T\j_<
^—0 k ΪΝ ř<1 KM S. M NW&4M 177		>1	>1
OM· 'Oyky'* OM X j V-o i. CN NH _σ«*^ΝΗβΜ N n		0,00012	0,00012
178

-64CZ 304973 B6

OMC OAc JÍ J *** -1-M· \— O ίχ CM NM s° 179	0,012	0,012
OM* k\Á> om j7 jT °\-o < 5í ^oJO Q^ÍC 180	0,00015	0,00015
OM* o*« Tj ^γν^γΊΜ·»!» Ú-O 4. OH Ml 181	0,00015	0,00015
OM* HCL^-JA· OM T J Z? 182	0,0015	0,0015
£=<£ Γ OM j ^yVvWu. O K, CH 183	0,013	0,013
OM* OM J2 JT *α 0^ 184	0,0015	0,0015

-65CZ 304973 B6

ΑΛ Ι“,. OAC T jf V- O X ČN NH 185		0,12	0,12
X ?** OAC JÍ i Ass/ “vV/X.
O \_o	í. CN NH ^οΛ—ρ» 186		0,0014	0,0014
OAc Uc^xL	X °*** *^XX?S°'sAv'^M< '''Vn-T-Uí
<>T V-o	W ^οβΚ-^Ρ. 187		0,013	0,013
Oac “<<Α,	X °*** 'Vn-J-*
0 ]T k_o	·«? 0		0,012	0,012
	188
OAc ’ίΛγ	A °“· '-^Z'O_xJsy** ''''Aw-J-ue
q' t ' V—o	k. ČN ř*< O		0,06	0,06
	189
OAc X	OM·
ΊΓ Ί OJ ^-0	k CN KM 0=^,8 CF, mT o 190		0,013	0,013

-66CZ 304973 B6

ϊ °“* OAC JH J ‘Lo X^ Λ'Υ⁵ w i 191	0,13	0,13
OMe AcO^ -X .M> Ote Jk J yScys^“· O (. CM NAC CF, -iř S 192	0,12	0,12
X ?** ^Z^^AO_XÁ Mí Ote Xl 193	0,11	0,11
X θ*' '^x^s^^z'^'^,z^O_xJ<_xMe Ote jy j “‘YÝV^ V-0 í. ČM °V γ“· M. O 194	0,012	0,012
A ?** Ή/ °X* Ote £J ^ΜΎΊ^ΖΛχΓ^/'^“¹· ⁰ Nrf^Cí tAyiUcF, **· O 195	0,012	0,012
0 OM· o* jyj **^vZ^r^z^sť^zS‘ h-J-M· O 1. ČW MM ο^γϋγϋτ, M. o 196	0,1	o,i
OM· O** ^MQJ*jT V-O V ČM NM^Xtex	0,0018	0,0018

-67CZ 304973 B6

197
1	OM* HO. X. 'o	u«
Λ o	Ύ Ύ 'n-J-m* i I - O V. CN 0		0,0015	0,0015
		198
o l\| π	□ Me -.XX	Ue
o T
	v. CN O 0=^5— N. OMe	ťX o		>1	>1
		199
	OMe MOMO^Js^» T ¥	le
“Ά, ii
o' Ύ V-o	''o™
		ix		0,056	0,056
		o
		202

cytotoxická aktivita (M)

kompaktní nádor	linie	OC. %Az* OAC 1 < XX 1 * π 66	CM· j7 jT V- o V OH Χ“γ“· Mc O 67	Ott* te* jTjT <-0 \ ÓH 70	te tu« j7 j '—o \ OH 80
měchýře	5637	6,02E-10	3,42E-10	l,91E-10	2.04E-11
prsu	MX-1	l,65E-06	NA	2,38E-09	NA
tlustého střeva	HT-29	7,S4E-10	l,97E-08	2,12E-09	8,44E-12
žaludeční	Hs746t	7,90E-12	2,18E-O9	7,10E-l 1	2,21E-09
jater	SK-HEP-1	1/79E-12	6,01E-l 1	3,15E-09	9,91E-11
NSCL	A549	3,25E-09	7,68E-06	NA	NA
vaječníků	SK-OV-3	4,39E-11	l,02E-07	8,74E-09	NA
slinivky břišní	PANC-1	7,22E-11	4,17E-09	l,29E-10	l,19E-10

-68CL 304973 B6

hrtanu	FADU	5,4IE-11	l,58E-09	3,71E-10	5,98E-09
prostaty	PC3	6,65E-09	2,15E-09	4,70E-09	l,52E-10
prostaty	DU-145	5,73E-10	l,83E-07	2,22E-09	NA
prostaty	LNCAP	5,45E-10	2J7E-10	3,94E-11
ledvin	786-0	6,58ε-] 2	1/9E-09	l,72E-09	l,03E-10
SCL	NCI-H187	7,14E-14	9,57E-10	7,78E-14
retinoblastom	Y-79	7,14E-14	7,36E-1O	8,85E-11
melanom	Mel-28	2,60E-10	3J7E-09	2,18E-09	l,23E-10
fibrosarkom	SW-694	9,91E-10	NA	l,39E-06	NA
chondrosarkom	CHSA	3,24E-1O	6.77E-09	l,39E-09	2,30E-10
osteosarkom	OSA-FH	l_z94E-09	l,39E-09	l,09E-09	1,11E-10

kompaktní nádor	linie	ou· 0 í 1 : M> 0 92	Ou* X jf ** _oXXJ>“ \-0 ŮH Áro 94	ou· OAc X j °V-0 \ ÓM AO 81
měchýře	5637	l,65E-10	7,85E-10	3,18-09
prsu	MX-1	NA	2,85E-06	NA
tlustého střeva	HT-29	7,43E-10	],2E-10	NA
žaludeční	Hs746t	9,35E-I0	6,25E-09	l,37E-07
jater	SK-HEP-1	1/0E-09	9,03E-10	9,50E-09
NSCL	A549	NA	NA	NA
vaječníků	SK-OV-3	NA	NA
slinivky břišní	PANC-1	8,93 E-10	2,58E-9	L03E-08
hrtanu	FADU	8,41E-10	3,77E-08	1J4E-09
prostaty	PC3	8,13E-1O		9,34E-09
prostaty	DU-145	NA	NA	NA
prostaty	LNCAP		NA
ledvin	786-0	7,88E-10	2,90E-09	l,00E-O8
SCL	NCI-H187		2,07E-12
retinoblastom	Y-79		lySlE-11	7,78E-09

-69CZ 304973 B6

melanom	Mel-28	Ι,ΟδΕ-09	1J3E-09	4/8E-09
fibrosarkom	SW-694	NA
chondrosarkom	CHSA	l,08E-09	2,25E-09	1,09É-08
osteosarkom	OSA-FH	8,84E-10	1,35-08	9,50E-09

leukémie & lymfomy	linie	OU* o*» Tj Ťpd?· 1 ÓM o 66	o* IL jT '—O V, OH MH 'ΥΎ'¹ Kta 0 67	ÚM* V-ο 1 OH 70	Ο» <m« T jT *>-0 \ ón 80
ALL leukémie postihující promyelocyty	HL60				9_z3SE-09
.ALL akutní lymfoblastická	Molt 3	6J3E-1O	2,8E-09	5.66E-10	1,55E-14
CML chronická myeloidní	K562				2,33E-07
leukémie B vlasových buněk	Mo-B
lymfom T buněk	H9				1,99E-1J
lymfom kožních T buněk	Hut78	5.5OE-11	2.57E-10	4,62E-9	6,21E-11
nediferencovaný lymfom	MC116	2,15E-10	2,65E-1O	3,SE-09	NA
Burkittův lymfom B buněk	RAMOS				7,77E-13
lymfom	U-937	1/77E-1O	5,27E-11	3,28E-11	3,06E-l 1
—------— - z histiocytů

-70CZ 304973 B6

leukémie & lymfomy	linie	Ota i«- J TXA' L o 92	OtM Kli l* Ota JÍ T o \ óm 94	Cm* Ota jy j \ OH ΛΟ 81
ALL leukémie postihující promyelocyty	HL60	5_z92E-09	l,23E-10	3,97E-10
ALL akutní lymfoblastická	Molt3	7,53E-12	8_z85E-10	2,54E-09
CML chronická myeloidní	K562	l,09E-08	4,45E-08
leukémie B vlasových buněk	Mo-B
lymfom T buněk	H9	4_z48E-09	l,14E-08
lymťom kožních T buněk	Hut 78	9,9E-10	l,06E-08	7,46E-09
nediferencovaný lymfom	MCI 16	NA	1/1E-09	1J3E-08
Burkittův lymfom B buněk	RAMOS	5,26-11	8,85E-10	7/5E-09
lymfom z histiocytů	U-937	5,15E-10

-71 CZ 304973 B6

kompaktní nádor	linie	OMe OAe £ ) '—O X ÓH 71	OMe OAc JT j ''—O \| OH NH 1 93
měchýře	5637	2,81E-09	2,84E-10
prsu	MX-1	2,50E-06	NA
tlustého střeva	HT-29	NA	8,97E-09
žaludeční	Hs746t	2,97E-08	9,19E-09
jater	SK-HEP-1	5,07E-09	l_z08E-09
NSCL	A549	NA	9,41E-09
vaječníků	SK-OV-3	2,21 E-07	NA
slinivky břišní	PANC-1	2,90E-09	l,00E-09
hrtanu	FADU	7,94E-09	l,39E-08
prostaty	PC3	1,46-08	9,32E-10
prostaty	DU-145	NA	NA
prostaty	LNCAP	5,39E-09
ledvin	786-0	6,55E-09	l,72E-09
SCL	NC1-H187	3,98E-11
retinoblastom	Y-79	3J4E-09
melanom	Mel-28	3,05E-08	1.15E-09
fibrosarkom	SW-694	NA	NA
chondrosarkom	CHSA	l,73E-08	2J0E-09
osteosarkom	OSA-FH	8,56E-08	l,30E-09

kompaktní nádor	linie	OM« OAc jT jí .Wv ''—O \ ÓH NH tA-' 82	OMt OAC JT T ΥΥτ 7 \-0 \ ÓH NM _u <Αγ^ΝΎ~ Me 0 95
měchýře	5637	9,9lE-10	l,17E-09
prsu	MX-1	NA	l,92E-09

-72CZ 304973 B6

tlustého střeva	HT-29	NA	NA
žaludeční	Hs746t	l,36E-09	8,15E-09
jater	SK-HEP-1	1J7E-09	6,21 E-09
NSCL	A549	NA	NA
vaječníků	SK-OV-3	2.90E-08	NA
slinivky břišní	PANC-1	l,37E-09	8,61 E-09
hrtanu	FADU	3.05E-08	4,38E-08
prostaty	PC3
prostaty	DU-145	NA	NA
prostaty	LNCAP	2,38E-08	1.77E-08
ledvin	786-0	2,27E-09	l,54E-08
SCL	NCI-H187	2/1E-11	9,89E-1 1
retinoblastom	Y-79	3,O8E-1O	7,45E-10
melanom	Mel-28	2,85E-09	l,42E-08
ftbrosarkom	SW-694
chondrosarkom	CHSA	l,63E-09	2,91E-08
osteosarkom	OSA-FH	4,37E-09	l,15E-08

leukémie & lymfomy	linie	V? Ote j V-O OM hH 71	Cm Ote jLJ V»O \ OM NH 93
ALL leukémie postihující promyelocyty	HL60		l,50E-08
ALL
akutní lymfoblastická	Molt3	l,62E-09	3,87E-09
CML chronická	K562		6,89E-08

-73 CZ 304973 B6

myeloidní
lymfom T buněk	H9		Ι,ΟδΕ-08
lymfom kožních T buněk	Hut 78	7,33E-09	l,97E-09
nediferencovaný lymfom	MCI 16	l,62E-08	3,81E-09
Burkittův lymfom B buněk	RAMOS		1,1E-O9
lymfom z histiocytů	U-937	l,92E-09	I,08E-09

leukémie & lymfomy	linie	O* OA« jj J Vo \ Om NH 82	0*c Ji J co \| ón HH _M oVy~~ Mr « 95
ALL leukémie postihující promyelocyty	HL60	4,93 E-10	7,36E-09
ALL akutní lymfoblastická	Molt 3	9,86E-10	9_f86E-10
CML chronická myeloidní	K562	l,87E-08	l,18E-08
lymfom T buněk	H9	l,20E-08	2,43-08
lymfom kožních Tbuněk	Hut 78
nediferencovaný lymfom	MCI 16	1,04E-09	l_?49E-09
Burkittův lymfom B buněk	RAMOS		5,01E-09

-74CZ 304973 B6

lymfom z histiocytů

U-937

kompaktní nádor	linie	OMe OAc JLX N-TMe oW/ O \ OH O 114	OMe HCkÁ,·* OAe Τ’ J [ϊί 5?** '—o ‘ óh Y-Q 116
měchýře	5637	l,14E-08	1,71 E-08
prsu	MX-1	2,81 E-08	7,25E-13
tlustého střeva	HT-29	4,08E-07	2,96E-07
žaludeční	Hs746t	3,57E-08	l,24E-09
jater	SK-HEP-1	1,63-08	1.94E-09 f
NSCL	A549	2/1E-06	1,56-05
vaječníků	SK-OV-3	7,03E-06	7,78E-08
slinivky břišní	PANC-1	1/03E-08	9,47E-09
hrtanu	FADU	4,59E-07	2,46E-08
prostaty	PC3	7,88E-08
prostaty	DU-145	7,03E-08	l,56E-06
prostaty	LNCAP	5,98E-07	6,83 E-08
ledvin	786-0	l,46E-08	5,26E-12
SCL	NCI-H187	8,O2E-1O	7,78E-14
retinoblastom	Y-79	8,85E-10	7,78E-14
melanom	Mel-28	l,76E-08	5_χ89Ε-08
fibrosarkom	SW-694	3,38E-06	6,69E-06
chondrosarkom	CHSA	2,53E-08	4,49E-08
osteosarkom	OSA-FH	6,34E-08	5,26E-07

-75CZ 304973 B6

kompaktní nádor	linie	OMe OAe JT J Γ Γ T n-tMc /V? '-o X OH ^lXO 115	OMe ^Ha>Ar^Meoac Γ í Γ i T ^H7Me AUV '—o \ OH 0 113
měchýře	5637	7,88E-1O	3/)2E-08
prsu	MX-1	NA	4/75E-08
tlustého střeva	HT-29	8,99E-09	l_z34E-08
žaludeční	Hs746t	2/95E-08	7_z05E-07
jater	SK-HEP-1	l_z29E-09	6_zI2E-08
NSCL	A549	8/22E-06	8,49E-09
vaječmků	SK-OV-3		3,55E-08
slinivky břišní	PANC-1	5/8E-1O	l_z28E-08
hrtanu	FADU	5/0E-11	2.47E-08
prostaty	PC3	7,71E-10	6_z18E-10
prostaty	DU-145	NA	l_z17E-08
prostaty	LNCAP		3/29E-07
ledvin	786-0	9_z23E-10	J_z13E-08
SCL	NCI-H187		2,33E-1O
retinoblastom	Y-79	l_z03E-08	2_z64E-09
melanom	Mel-28	2_z23E-08	l_z25E-08
fibrosarkom	SW-694	8/3E-06	NA
chondrosarkom	CHSA	l_z55E-05	2,95E-08
osteosarkom	OSA-FH	l_z29E-09	5,01 E-08

-76CZ 304973 B6

ALL leukémie postihující promyelocyty	HL60		l,34E-08
ALL akutní lymfoblastická	Mok 3	1.44E-08 t	2,48E-09
CML chronická 'myeloidní	K562	l,56E-07	6_z13E-08
lymfom T buněk	H9	l,56E-07	1/91E-08
lymfom kožních T buněk	Hut 78	6_f47E-08	7,31E-09
nediferencovaný lymfom	MCI 16	l,69E-08	6J8E-09
Burkittův lymfom B buněk	RAMOS	8,86E-09	7J5E-10
lymfom z histiocytů	U-937	7_z6E-08

leukémie & lymfomy	linie	7Γ j v-0 X OH ^0<LX) 115	JL T %-0 X OH 0 113
ALL leukémie postihující promyelocyty	HL60	3,1E-O9
ALL akutní lymfoblastická	Molt3	8,69E-11	4,63E-08

-77CZ 304973 B6

CML chronická myeloidní	K562		2_Z11E-O8
lymťom T buněk	H9	2,17E-08	6/76E-O8
lymfom kožních T buněk	Hut 78	4_#81E-08	2_;06E-08
nediferencovaný lymfom	MCI 16	5,27E-11	l,51E-08
Burkittův lymfom B buněk	RAMOS	l_z86E-09	9_z09E-09
lymfom z histiocytů	U-937		l,03E-08

Příklady uskutečnění vynálezu 5

Předkládaný vynález je objasněn následujícími příklady.

(14)

K roztoku 2 (21,53 g, 39,17 ml) v ethanolu (200 ml) byl přidán fc/7-butoxykarbonylanhydrid (7,7 g, 35,25 ml) a směs se míchala 7 h při 23 °C. Pak se reakční směs zakoncentrovala ve vakuu a zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, hexan: ethylacetát 6:4) za získání 14 (20,6 g, 81 %) jako žluté pevné látky.

Rf: 0,52 (ethylacetát: CHC1₃ 5:2).

-78CZ 304973 B6 'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,49 (s, 1H), 6,32 (bs, 1H), 5,26 (bs, 1H), 4,60 (bs, 1H), 4,14 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 4,05 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,81 (d, J= 4,8 Hz, 1H), 3,7 (s, 3H), 3,34 (br d, J= 7,2 Hz, 1H), 3,18 - 3,00 (m, 5H), 2,44 (d, /= 18,3 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 1,82 (s, 3H), 1,80- 1,65 (m, 1H), 1,48 (s, 9H), 0,86 (d, 7= 5,7 Hz, 3H) ¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 185,5, 180,8, 172,7, 155,9, 154,5, 147,3, 143,3, 141,5, 135,3, 130,4, 129,2, 127,5, 120,2, 117,4, 116,9, 80,2, 60,7, 60,3, 58,5, 55,9, 55,8, 54,9, 54,4, 50,0, 41,6,

40,3, 28,0, 25,3, 24,0, 18,1,15,6, 8,5.

ESI-MS m/z: Calcd. pro σ,₄Η4₃Ν₅Ο₈: 649,7. Nalezeno (M+H)⁺: 650,3.

Příklad 2

(14) (¹⁵)

K míchanému roztoku 14 (20,6 g, 31,75 mmol) v CH₃CN (159 ml) byl přidán diisopropylethylamin (82,96 ml, 476,2 ml), methoxymethylenbromid (25,9 ml, 317,5 ml) a dimethylaminopyridin (155 mg, 1,27 ml) při 0 °C. Směs se míchala při 23 °C 24 h. Reakce byla zastavena při 0 °C vodnou 0,1 N HC1 (750 ml) (pH= 5) a směs byla extrahována CH₂C1₂ (2x 400 ml). Organická fáze byla sušena (síran sodný) a zakoncentrována ve vakuu. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient hexan:ethylacetát 4:1 až hexan:ethylacetát 3:2) za získání 15 (17,6 g, 83 %)jako žluté pevné látky.

Rf: 0,38 (hexan:ethylacetát 3:7).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,73 (s, 1H), 5,35 (bs, 1H), 5,13 (s, 2H), 4,50 (bs, 1H), 4,25 (d, J= 2,7 Hz, 1H), 4,03 (d, 7= 2,7 Hz, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,84 (bs, 1H), 3,82 -3,65 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,56 (s, 3H), 3,39 - 3,37 (m, 1H), 3,20 - 3,00 (m, 5H), 2,46 (d, J= 18 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 1,85 (s, 3H), 1,74 - 1,63 (m, 1H), 1,29 (s, 9H), 0,93 (d, J= 5,1 Hz, 3H)

13.

C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 185,4, 180,9, 172,4, 155,9, 154,5, 149,0, 148,4, 141,6, 135,1, 131,0, 129,9, 127,6, 124,4, 123,7, 117,3, 99,1, 79,3, 60,7, 59,7, 58,4, 57,5, 56,2, 55,9, 55,0, 54,2, 50,0, 41,5, 39,9, 28,0, 25,2, 24,0, 18,1, 15,6, 8,5.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C36H47N5O9: 693,8. Nalezeno (M+H)⁺: 694,3.

-79CZ 304973 B6

Příklad 3

Do baňky, obsahující 15 (8 g, 1,5 ml) v methanolu (1,6 1) byl přidán vodný roztok 1 M hydroxidu sodného (3,2 1) při 0 °C. Reakční směs se míchala 2 h při této teplotě a pak zastavena 6 M HC1 při pH = 5. Směs byla extrahována ethylacetátem (3x 1 1) a spojené organické vrstvy byly sušeny síranem sodným a zakoncentrovány ve vakuu. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na io otevřené koloně (SiO₂, gradient CHCfi až CHC1₃: ethylacetát 2:1) za získání 16 (5,6 mg, 68 %).

Rf: 0,48 (CH₃CN: H₂O 7:3, RP-C18) 'HNMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,73 (s, 1H), 5,43 (bs, 1H), 5,16 (s, 2H), 4,54 (bs, 1H), 4,26 (d, 15 J= 1,8 Hz, 1H), 4,04 (d, J= 2,7 Hz, 1H), 3,84 (bs, 1H), 3,80 - 3,64 (m, 1H), 3,58 (s, 3H), 3,41 3,39 (m, 1H), 3,22 - 3,06 (m, 5H), 2,49 (d, J= 18,6 Hz, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,30-2,25 (m, 1H), 2,24 (s, 3H), 1,87 (s, 3H), 1,45 - 1,33 (m, 1H), 1,19 (s, 9H), 1,00 (br d, J= 6,6 Hz, 3H) ¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 184,9, 180,9, 172,6, 154,7, 151,3, 149,1, 148,6, 144,7, 132,9, 20 131,3, 129,8, 124,5, 123,7, 117,3, 116,8, 99,1, 79,4, 59,8, 57,7, 56,2, 55,6, 54,9, 54,5, 50,1, 41,6,

40,1, 28,0, 25,3, 24,4, 18,1, 15,7, 8,0.

ESI-MS m/z: Calcd. pro CjsIEsNsO,: 679,7. Nalezeno (M+H)⁺: 680,3.

Příklad 4

-80CZ 304973 B6

Pro odplynění roztoku sloučeniny 16 (1,8 g, 2,6 ml) v DMF (221 ml) byl přidán 10% Pd/C (360 mg) při 0 °C a roztok se míchal pod H₂ (atmosférický tlak) 45 min. Reakční směs byla zfiltrována přes celit pod argonem do baňky, obsahující bezvodý Cs₂CO₃ (2,58 g, 7,92 ml). Pak byl přidán bromochloromethan (3,40 ml, 52,8 ml) a zkumavka byla uzavřena a míchána při 100 °C 2 h. Reakce byla ochlazena, zfiltrována přes vrstvu celitu a promyta CH₂C1₂. Organická vrstva byla zakoncentrována a sušena (síran sodný) za získání 17 jako hnědé olejovité látky, která byla použita v dalším kroku bez dalšího čištění.

Rf: 0,36 (hexan:ethylacetát 1:5, SiO₂).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,68 (s, 1H), 6,05 (bs, 1H), 5,90 (s, 1H), 5,79 (s, 1H), 5,40 (bs, 1H), 5,31 - 5,24 (m, 2H), 4,67 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 4,19 (d, J= 2,7 Hz, 1H), 4,07 (bs, 1H), 4,01 (bs, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,67 (s, 3H), 3,64 - 2,96 (m, 5H), 2,65 (d, J= 18,3 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 2,01 - 1,95 (m, 1H), 1,28 (s, 9H), 0,87 (d, J= 6,3 Hz, 3H) ’³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 172,1, 162,6, 154,9, 149,1, 145,7, 135,9, 130,8, 130,7, 125,1,

ESI-MS m/z: Calcd. pro C^F^O,: 693,34. Nalezeno (M+H)⁺: 694,3

Příklad 5

Me

Me.

NH (17)

NH

Do baňky, obsahující 17 (1,83 g, 2,65 ml) v DMF (13 ml) byl přidán Cs₂CO3 (2,6 g, 7,97 ml) aallylbromid (1,15 ml, 13,28 ml) při 0 °C. Výsledná směs se míchala při 23 °C 1 h. Reakční směs byla zfiltrována přes vrstvu celitu a promyta CH₂C1₂. Organická vrstva byla sušena a zákoncentrována (síran sodný). Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, CHCfi: ethylacetát 1:4) za získání 18 (1,08 mg, 56 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,36 (CHCl₃:ethylacetát 1:3).

’H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,70 (s, 1H), 6,27 - 6,02 (m, 1H), 5,94 (s, 1H), 5,83 (s, 1H), 5,37 (dd, Λ = 1,10 Hz, J₂ = 16,8 Hz, 1H), 5,40 (bs, 1H), 5,25 (dd, J, = 1,0 Hz, J₂ = 10,5 Hz, 1H), 5,10 (s, 2H), 4,91 (bs, 1H), 4,25 - 4,22 (m, 1H), 4,21 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 4,14 - 4,10 (m, 1H), 4,08 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 4,00 (bs, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,59 (s, 3H), 3,56 - 3,35 (m, 2H), 3,26 - 3,20 (m, 2H), 3,05 - 2,96 (dd, J_x = 8,1 Hz, J₂ = 18 Hz, 1H), 2,63 (d, J= 18 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,09 (s, 3H), 1,91 - 1,80 (m, 1H), 1,24 (s, 9H), 0,94 (d, /= 6,6 Hz, 3H)

- 81 CZ 304973 B6 ¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 172,0, 154,8, 148,8, 148,6, 148,4, 144,4, 138,8, 133,7, 130,9,

130,3, 125,1, 124,0, 120,9, 117,8, 117,4, 112,8, 112,6, 101,1, 99,2, 73,9, 59,7, 59,3, 57,7, 56,9, 56,8, 56,2, 55,2, 40,1,34,6, 31,5, 28,1, 26,4, 25,1, 22,6, 18,5, 15,7, 14,0, 9,2.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C39H51N5O9: 733,4. Nalezeno (M+H)⁺: 734,4.

Příklad 6

K roztoku 18 (0,1 g, 0,137 ml) v dioxanu (2 ml) byla přidána 4,2 M HCl/dioxan (1,46 ml) a směs se míchala 1,2 h při 23 °C. Reakce byla zastavena při 0 °C sat. vodným roz. hydrogenuhličitanu sodného (60 ml) a extrahována ethylacetátem (2x 70 ml). Organické vrstvy byly sušeny (síran sodný) a zakoncentrovány ve vakuu za získání 19 (267 mg, 95 %) jako bílé pevné látky tak, že byla použita v následných reakcích bez dalšího čištění.

Rf: 0,52 (ethylacetát.methanol 10:1, SiO₂).

'HNMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,49 (s, 1H), 6,12 - 6,00 (m, 1H), 5,94 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 5,34 (dd, J= 1,0 Hz, J= 17,4 Hz, 1H), 5,25 (dd, J= 1,0 Hz, J= 10,2 Hz, 1H), 4,18 - 3,76 (m, 5H), 3,74 (s, 3H), 3,71 - 3,59 (m, 1H), 3,36 - 3,20 (m, 4H), 3,01 -2,90 (m, 1H), 2,60 (d, J= 18,0 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,97 - 1,86 (m, 1H), 0,93 (d, J= 8,7 Hz, 3H) ¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 175,5, 148,4, 146,7, 144,4, 142,4, 138,9, 133,7, 131,3, 128,3,

120,8, 117,9, 117,4, 113,8, 112,4, 101,1, 74,2, 60,5, 59,1, 56,5, 56,1, 56,3, 56,0, 55,0, 50,5, 41,6,

39,5, 29,5, 26,4, 24,9, 21,1, 15,5, 9,33.

ESI—MS m/z: Calcd. pro C3₂H₃9N5O₆: 589. Nalezeno (M+H) : 590.

Příklad 7

-82CZ 304973 B6

K roztoku 19 (250 mg, 0,42 ml) v CH2CI2 (1,5 ml) byl přidán fenylisothiokyanát (0,3 ml, 2,51 ml) a směs se míchala při 23 °C 1 h. Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu a zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient hexan až 5:1 hexan:ethylacetát) za získání 20 (270 mg, 87 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,56 (CHC1₃: ethylacetát 1:4).

’HNMR (300 MHz, CDCI3): δ 8,00 (bs, 1H), 7,45 - 6,97 (m, 4H), 6,10 (s, 1H), 6,08-6,00 (m, 1H), 5,92 (s, 1H), 5,89 (s, 1H), 5,82 (s, 1H), 5,40 (dd, J= 1,5 Hz, J= 17,1 Hz, 1H), 3,38 (bs, 1H), 5,23 (dd, J= 1,5 Hz, J = 10,5 Hz, 1H), 4,42 - 4,36 (m, 1H), 4,19 - 4,03 (m, 5H), 3,71 (s, 3H), 3,68 - 3,17 (m, 4H), 2,90 (dd, J= 7,8 Hz, J= 18,3 Hz, 1H), 2,57 (d, J= 18,3 Hz, 1H), 2,25 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,90 (dd, /=12,3 Hz, J= 16,5 Hz, 1H), 0,81 (d, J= 6,9 Hz, 3H).

’³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 178,4, 171,6, 148,6, 146,8, 144,3, 142,7, 138,7, 136,2, 133,6,

ESI-MS m/z: Calcd: pro C₃₉H44N₆O₆: 724,8. Nalezeno (M+H)⁺: 725,3.

Příklad 8

Me

4.2N HCI v dioxanu min., 23 °C

NH

Me

K roztoku 20 (270 mg, 0,37 ml) vdioxanu (1 ml) byla přidána 4,2 M HCl/dioxan (3,5 ml) a reakční směs se míchala při 23 °C 30 min. Pak byl přidán ethylacetát (20 ml) a Η₂Ο (20 ml) a organická vrstva byla . Vodná fáze byla zalkalizována nasyceným vodným roz. hydrogenuhličitanu sodného (60 ml) (pH = 8) při 0 °C a pak extrahována CH₂C1₂ (2x 50 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny (síran sodný) a zakoncentrovány ve vakuu. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, ethylacetát:methanol 5:1) za získání sloučeniny 21 (158 mg, 82 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,3 (ethylacetát:methanol 1:1).

Ή NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,45 (s, 1H), 6,12-6,03 (m, 1H), 5,91 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 5,38 (dd, / = 1,2 Hz, J₂ = 17,1 Hz, 1H), 5,24 (dd, J_x = 1,2 Hz, J₂ = 10,5 Hz, 1H), 4,23 - 4,09 (m, 4H), 3,98 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 3,90 (bs, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,36 - 3,02 (m, 5H), 2,72 - 2,71 (m, 2H), 2,48 (d, J= 18,0 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,85 (dd, J, = 11,7 Hz, J₂ =

15,6 Hz, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 148,4, 146,7, 144,4, 142,8, 138,8, 133,8, 130,5, 128,8, 121,5,

-83CZ 304973 B6

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₂₉H₃₄N4O₅: 518,3. Nalezeno (M+H)⁺: 519,2.

Příklad 9

K roztoku 21 (0,64 g, 1,22 ml) v CH₂C1₂ (6,13 ml) byl přidán pyridin (0,104 ml, 1,28 ml) a 2,2,2trichlorethylchloromravenčan (0,177 ml, 1,28 ml) při -10 °C. Směs se míchala při této teplotě 1 h a pak byla reakce zastavena přídavkem 0,1 N HC1 (10 ml) a reakční směs byla extrahována CH₂C1₂ (2x 10 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným a zakoncentrována ve vakuu. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, hexan:ethylacetát 1:2) za získání 22 (0,84 g, 98 %) jako bílé pěny.

Rf: 0,57 (ethylacetát:methanol 5:1).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,50 (s, 1H), 6,10 - 6,00 (m, 1H), 6,94 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,87 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,73 (bs, 1H), 5,37 (dq, J, = 1,5 Hz, J₂ = 17,1 Hz, 1H), 5,26 (dq, 7 = 1,8 Hz, 7 = 10,2 Hz, 1H), 4,60 (d, J= 12 Hz, 1H), 4,22 - 4,10 (m, 4H), 4,19 (d, J= 12 Hz, 1H), 4,02 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,37 - 3,18 (m, 5H), 3,04 (dd, 7 = 8,1 Hz, J₂ = 18 Hz, 1H), 2,63 (d, 7= 18 Hz, 1H), 2,31 (s,3H), 2,26 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,85 (dd, J_x = 12,3 Hz, J₂ = 15,9 Hz, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 154,3, 148,5, 146,7, 144,5, 142,8, 139,0, 133,8, 130,7, 128,7,

121,3, 120,8, 117,8, 117,7, 116,8, 112,7, 101,2, 77,2, 74,3, 60,7, 59,9, 57,0, 56,4, 55,3, 43,3,

41,7, 31,6, 26,4, 25,3, 22,6, 15,9, 14,1, 9,4.

ESI-MS m/z: Calcd. pro CjjHjANA: 694,17. Nalezeno (M+H)⁺: 695,2.

Příklad 10

K roztoku 22 (0,32 g, 0,46 ml) v CH₃CN (2,33 ml) byl přidán diisopropylethylamin (1,62 ml, 9,34 ml), bromomethylmethylether (0,57 ml, 7,0 ml) a dimethylaminopyridin (6 mg, 0,046 ml) při 0 °C. Směs byla zahřáta na 30 °C na 10 h. Pak byla reakční směs zředěna dichlormethanem (30 ml) a nalita do vodného roztoku HC1 při pH = 5 (10 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku za získání zbytku, který byl čiš-84CZ 304973 B6 těn sloupcovou chromatografíí na otevřené koloně (SiO₂, hexan :ethylacetát 2:1) za získání 23 (0,304 g, 88 %) jako bílé pěny.

Rf: 0,62 (hexan:ethylacetát 1:3).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,73 (s, 1H), 6,10 (m, 1H), 5,94 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,88 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 5,39 (dq, J_x = 1,5 Hz, 7₂ = 17,1 Hz, 1H), 5,26 (dq, = 1,8 Hz, J₂ = 10,2 Hz, 1H), 5,12 (s, 2H), 4,61 (d, 7 = 12 Hz, 1H), 4,55 (t, J = 6,6 Hz, 1H), 4,25 (d, J= 12 Hz, 1H), 4,22 4,11 (m, 4H), 4,03 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,38 - 3,21 (m, 5H), 3,05 (dd, 7, = 8,1 Hz, J₂ = 18 Hz, 1H), 2,65 (d, J= 18 Hz, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 1,79 (dd, 7, = 12,3 Hz, 7₂ = 15,9 Hz, 1H);

13,

C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 154,3, 148,6, 148,4, 144,5, 139,0, 133,6, 130,6, 130,1, 125,07,

124,7, 124,0, 121,1, 117,7, 112,6, 101,2, 99,2, 77,2, 74,4, 74,1, 59,8, 59,8, 57,7, 57,0, 56,7, 56,68, 55,3, 43,2,41,5, 26,4, 25,2, 15,9, 9,3.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₄H₃₉C1₃N₄O₈: 738,20. Nalezeno (M+H)⁺: 739,0.

Příklad 11

K suspenzi 23 (0,304 g, 0,41 ml) v 90% vodné kyselině octové (4 ml) byl přidán práškový zinek (0,2 g, 6,17 ml) a reakční směs se míchala 7 hodin při 23 °C. Směs byla zfiltrována přes vrstvu celitu, který byl promyt CH₂C1₂. Organická vrstva byla promyta vodným sat. roztokem hydrogenuhličitanu sodného (pH = 9) (15 ml) a sušena síranem sodným. Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku za získání 24 (0,191 g, 83 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,3 (ethylacetát:methanol 5:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,68 (s, 1H), 6,09 (m, 1H), 5,90 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,83 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,39 (dq, 7 = 1,5 Hz, 7₂ = 17,1 Hz, 1H), 5,25 (dq, 7 = 1,5 Hz, 7=10,2 Hz, 1H), 5,10 (s, 2H), 4,22 - 4,09 (m, 3H), 3,98 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 3,89 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,57 (s, 3H), 3,37 - 3,17 (m, 3H), 3,07 (dd, 7, = 8,1 Hz, J₂ = 18 Hz, 1H), 2,71 (m, 2H), 2,48 (d, 7 = 18 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 1,80 (dd, 7 = 12,3 Hz, J₂ = 15,9 Hz, 1H)

C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 148,5, 148,2, 144,3, 138,7, 133,7, 130,7, 129,9, 125,0, 123,9,

121,3, 117,9, 117,5, 113,6, 112,0, 101,0, 99,2, 74,0, 59,8, 59,7, 58,8, 57,6, 57,0, 56,2, 55,2, 44,2,

41,5, 31,5, 26,4, 25,6, 22,5,16,7, 14,0, 9,2.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₁H₃₈N₄O₆: 562,66. Nalezeno (M+H)⁺: 563,1.

-85CZ 304973 B6

Příklad 12

K roztoku 24 (20 mg, 0,035 ml) v H₂O (0,7 ml) a THF (0,7 ml) byl přidán NaNO₂ (12 mg, 0,17 ml) a 90% vodný roztok AcOH (0,06 ml) při 0 °C a směs se míchala při 0 °C 3 h. Po zředění CH₂C1₂ (5 ml) byla organická vrstva promyta vodou (1 ml), sušena síranem sodným a zkoncentrována za vakua. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, hexan:ethylacetát 2:1) za získání 25 (9,8 mg, 50 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,34 (hexan:ethylacetát 1:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,71 (s, 1H), 6,11 (m, 1H), 5,92 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,87 (d, J=

I, 5 Hz, 1H), 5,42 (dq, J_x = 1,5 Hz, J₂ = 17,1 Hz, 1H), 5,28 (dq, J_x = 1,8 Hz, J₂ = 10,2 Hz, 1H), 5,12 (s, 2H), 4,26 - 4,09 (m, 3H), 4,05 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 3,97 (t, 2H), 3,72 (s, J= 3,0 Hz, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,67 - 3,32 (m, 4H), 3,58 (s, 3H), 3,24 (dd, J, = 2,7 Hz, J₂ = 15,9 Hz, 1H), 3,12 (dd,

J, = 8,1 Hz, J₂ = 18,0 Hz, 1H), 2,51 (d, J= 18 Hz, 1H), 2,36 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 1,83 (dd, A = 12,3 Hz, J₂ = 15,9 Hz, 1H) ¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 148,7, 148,4, 138,9, 133,7, 131,1, 129,4, 125,1, 123,9, 120,7,

117.6, 117,5, 113,2, 112,3, 101,1, 99,2, 74,0, 63,2, 59,8, 59,7, 57,9, 57,7, 57,0, 56,5, 55,2, 41,6,

29.6, 26,1,25,6, 22,6, 15,7, 9,2.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₁H₃₇N₄O₇: 563,64. Nalezeno (M+H)/ 564,1.

Příklad 13

Výchozí látka (2,0 g, 5,90 ml) byla přidána k suspenzi hydridu sodného (354 mg, 8,86 ml) v THF (40 ml) při 23 °C, následně suspenze reagovala s allylchloromravenčanem (1,135 ml, 8,25 ml) při 23 °C a pak byla zahřívána pod zpětným chladičem 3 hodiny. Suspenze byla ochlazena, filtrována, pevná látka promyta ethylacetátem (100 ml) a filtrát byl zakoncentrován. Surová olejovitá látka byla rozpuštěna v hexanu (100 ml) a uschována ve 4 °C přes noc. Potom bylo rozpouštědlo dekantováno a světle žlutá suspenze reagovala s CH₂C1₂ (20 ml) a vysrážela se v hexanu (100 ml). Po 10 minutách bylo rozpouštědlo opět dekantováno. Postup se opakoval až do získání bílé pevné látky. Bílá pevná látka, byla odfiltrována a sušena za získání sloučeniny 29 (1,8 g, 65 %) jako bílé pevné látky.

-86CZ 304973 B6 ’HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,74 (d, 7= 7,5 Hz, 2H), 7,62 (d, J = 6,9 Hz,2H), 7,33 (t, 7= 7,5 Hz, 2H), 7,30 (t, J= 6,3 Hz, 2H), 5,71 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 4,73 (d, 7 = 7,8 Hz, 2H), 4,59 (m, 1H), 4,11 (t, J= 6,0 Hz, 1H), 3,17 (dd, 7 = 6,0 Hz, J= 2,7 Hz, 2H), 3,20 (dd, J= 5,4 Hz, J = 2,1 Hz, 2H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 173,6, 152,7, 144,0, 139,7, 137,8, 126,0, 125,6, 123,4, 118,3, 73,4, 52,4,45,5,35,8,33,7.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₂₀H₁₈Cl₃NO₄S: 474,8. Nalezeno (M+Na)⁺: 497,8.

Příklad 14

Směs sloučeniny 25 (585 mg, 1,03 ml) a sloučeniny 29 (1,47 mg, 3,11 ml) byla modifikována bezvodým toluenem (3 x 10 ml). K roztoku 25 a 29 vbezvodém CH₂C1₂ (40 ml) byl přidán DMAP (633 mg, 5,18 ml) a EDC. HC1 (994 mg, 5,18 ml) při 23 °C. Reakční směs se míchala při 23 °C 3 h. Směs byla rozdělena nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a vrstvy byly odděleny. Vodná vrstva byla promyta CH₂C1₂ (50 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny síranem sodným, filtrovány a zakoncentrovány. Surová látka byla čištěna sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (ethylacetát/hexan 1:3) za získání 30 (1,00 g, 95 %) jako světle krémově žluté pevné látky.

'HNMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,72 (m, 2H), 7,52 (m, 2H), 7,38 (m, 2H), 7,28 (m, 2H), 6,65 (s, 1H), 6,03 (m, 1H), 5,92 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,79 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,39 (m, 1H), 5,29 (dq, 7 = 10,3 Hz, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,10 (s, 2H), 4,73 (d,7= 11,9 Hz, 1H), 4,66 (d, 7= 11,9 Hz, 1H), 4,53 (m, 1H), 4,36 - 3,96 (m, 9H), 3,89 (t, 7= 6,4 Hz, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,55 (s, 3H), 3,33 (m, 1H),

3,20 (m, 2H), 2,94 (m, 3H), 2,59 (m, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,83 (dd, 7 = 16,0 Hz, 7= 11,9 Hz, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 169,7, 154,0, 148,8, 148,4, 145,7, 144,5, 140,9, 139,0, 133,7,

130.9, 130,6, 127,6, 127,0, 124,8, 124,6, 124,1, 120,8, 119,9, 118,2, 117,7, 117,3, 112,7, 112,1,

101,3, 99,2, 74,7, 73,9, 64,4, 59,8, 57,7, 57,0, 56,8, 55,4, 53,3, 46,7, 41,4, 36,5, 34,7, 31,5, 26,4,

24.9, 22,6, 15,7, 14,0, 9,1.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C5iH₅₃Cl₃N40ioS: 1020,4. Nalezeno (M+H)⁺: 1021,2.

-87CZ 304973 B6

Příklad 15

K roztoku 30 (845 mg, 0,82 ml), kyseliny octové (500 mg, 8,28 ml) a (PPh₃)₂PdCl₂ (29 mg, 0,04 ml) v bezvodém CH₂C1₂ 20 ml při 23 °C byl přidán po kapkách Bu₃SnH (650 mg, 2,23 ml). Reakční směs se míchala při této teplotě 15 min. za bublání. Reakce byla zastavena vodou (50 ml) a surová látka extrahována CH₂C1₂ (3x 50 ml). Organické vrstvy byly sušeny síranem sodným, filtrovány a zakoncentrovány. Surová látka byla čištěna sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (ethylacetát/hexan v gradientu od 1:5 do 1:3) za získání 31 (730 mg, 90 %) jako světle krémově žluté pevné látky.

*H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,72 (m, 2H), 7,56 (m, 2H), 7,37 (m, 2H), 7,30 (m, 2H), 6,65 (s, 1H), 5,89 (s, 1H), 5,77 (s, 1H), 5,74 (s, 1H), 5,36 (d, J= 5,9 Hz, 1H), 5,32 (d, J= 5,9 Hz, 1H),

5,20 (d, J= 9,0 Hz, 1H), 4,75 (d, J= 12,0 Hz, 1H), 4,73 (m, 1H), 4,48 (d, J= 11,9 Hz, 1H), 4,08 (m, 4H), 3,89 (m, 1H), 3,86 (t, J= 6,2 Hz, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,69 (s, 3H), 3,38 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 3,02 - 2,89 (m, 4H), 2,67 (s, 1H), 2,61 (s, 1H), 2,51 (dd, J= 14,3 Hz, J= 4,5 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 1,95 (s, 3H), 1,83 (m, 1H).

ⁿC NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 168,2, 152,5, 148,1, 146,2, 144,4, 144,3, 143,3, 139,6, 134,6,

129,7, 129,6, 126,2, 125,6, 123,4, 123,3, 121,6, 118,5, 116,3, 110,7, 110,2, 105,1, 99,4, 98,5,

75,2, 73,3, 61,7, 58,4, 57,9, 56,3, 56,1, 55,1, 54,7, 53,9, 51,9, 45,2, 40,1, 35,6, 33,3, 24,8, 23,3, 14,5, 7,3.

ESI-MS m/z: Calcd. pro 980,3 Nalezeno (M+H)⁺: 981,2.

Příklad 16

-88CZ 304973 B6

K roztoku 31 (310 mg, 0,32 ml) v bezvodém CH₂C1₂ (15 ml) při -10 °C byl přidán roztok 70% anhydridu benzenselenidu (165 mg, 0,32 ml) v bezvodém CH₂C1₂ (7 ml) prostřednictvím kanyly, teplota byla udržována na -10 °C. Reakční směs se míchala při -10 °C 5 min. Při této teplotě byl přidán nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného (30 ml). Vodná vrstva byla promyta více CH₂C1₂ (40 ml). Organické vrstvy byly sušeny síranem sodným, filtrovány a zakoncentrovány. Surová látka byla čištěna sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (ethylacetát/hexan v gradientu od 1:5 do 1:1) za získání 32 (287 mg, 91 %, HPLC: 91,3 %) jako světle krémově žluté pevné látky a jako směs dvou izomerů (65:35), které byly použity v dalším kroku.

' H NMR (300 MHz, CDCfi): δ (směs izomerů) 7,76 (m, 4H), 7,65 (m, 4), 7,39 (m, 4H), 7,29 (m, 4H), 6,62 (s, 1H), 6,55 (s, 1H), 5,79 - 5,63 (m, 6H), 5,09 (s, 1H), 5,02 (d, J= 6,0 Hz, 1H), 4,99 (d, J= 6,0 Hz, 1H), 4,80 - 4,63 (m, 6H), 4,60 (m, 1H), 4,50 (m, 1H), 4,38 (d, J= 12,8 Hz, J= 7,5 Hz, 1H), 4,27 (dd, J = 12,8 Hz, ./ = 7,5 Hz, 1H), 4,16 - 3,90 (m, 10H), 3,84 (s, 3H), 3,62 (s, 3H), 3,50 (s, 3H), 3,49 (s, 3H), 3,33 - 2,83 (m, 14H), 2,45 - 2,18 (m, 2H), 2,21 (s, 6H), 2,17 (s, 6H), 1,77 (s, 6H), 1,67 (m, 2H).

C NMR (75 MHz, CDCfi): δ (směs izomerů) 168,6, 168,4, 158,6, 154,8, 152,8, 152,5, 147,3,

147,2, 146,8, 144,1, 144,0, 140,8, 139,7, 137,1, 129,8, 129,3, 128,4, 128,7, 126,5, 125,5, 123,7,

123,6, 123,5, 123,4, 122,2, 121,3, 118,3, 115,8, 115,5, 110,2, 106,9, 103,5, 103,2, 100,1, 99,6,

97.9, 97,7, 93,8, 73,4, 70,9, 69,2, 64,9, 62,5, 59,3, 58,9, 58,4, 56,7, 56,3, 56,2, 55,4, 55,2, 55,1,

54.9, 54,7, 54,3, 54,1, 53,8, 52,8, 45,5, 40,5, 40,0, 39,8, 35,8, 35,5, 33,9, 33,7, 30,1, 28,8, 24,2, 24,1, 21,2, 14,5, 14,4, 12,7, 6,0, 5,7.

ESI-MS m/z: Calcd. pro (WWnS: 996,3 Nalezeno (M+H)⁺: 997,2.

Příklad 17

Reakční baňka byla dvakrát ožehnuta, vícekrát pročištěna vakuem/argonem a pro reakci umístěna do argonové atmosféry. Do roztoku DMSO (39,1 ml, 0,55 ml, 5 dílů) v bezvodém CH₂C1₂(4,5 ml) byl po kapkách přidán anhydrid kyseliny trifluorooctové (3,7 ml, 0,22 ml, 2 díly) při -78 °C. Reakční směs se míchala při -78 °C 20 minut, pak byl přidán roztok 32 (110 mg, 0,11 ml, HPLC: 91,3 %) v bezvodém CH₂C1₂ (1 ml pro hlavní přídavek a 0,5 ml pro promytí) při -78 °C prostřednictvím kanyly. V průběhu přídavku byla teplota v obou baňkách udržována na -78 °C a nastala barevná změna ze žluté na hnědou. Reakční směs se míchala při -40 °C 35 minut. V průběhu této části se roztok změnil ze žluté na tmavě zelenou. Poté byl po kapkách přidán ^lPr₂Net (153 ml, 0,88 ml, 8 dílů) a reakční směs byla udržována při 0 °C 45 minut, v průběhu této části se roztok změnil hnědý. Pak byl po kapkách přidán t-butanol (41,6 ml, 0,4 ml, 4 dílů) a 2‘butyl-fifiS^-tetramethylguanidin (132,8 ml, 0,77 ml, 7 dílů) a reakční směs se míchala při 23 °C 40 minut. Poté byl po kapkách přidán acetanhydrid (104,3 ml, 1,10 ml, 10 dílů) a reakční směs se míchala při 23 °C dále 1 hodinu. Pak byla reakční směs zředěna CH₂C1₂ (20 ml) a promyta vodným nasyceným roztokem NH₄C1 (50 ml), hydrogenuhličitanem sodným (50 ml) a chlo-89CZ 304973 B6 ridem sodným (50 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny síranem sodným, filtrovány a zakoncentrovány. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografíí na otevřené koloně (eluent:ethylacetát:hexanový gradient od 1:3 do 1:2) za získání sloučeniny 33 (54 mg, 58 %) jako světle žluté pevné látky.

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,85 (s, 1H), 6,09 (s, 1H), 5,99 (s, 1H), 5,20 (d, J= 5,8 Hz, 1H), 5,14 (d,J = 5,3 Hz, 1H), 5,03 (m, 1H), 4,82 (d, J= 12,2 Hz, 1H), 4,63 (d,7= 12,0 Hz, 1H), 4,52 (m, 1H), 4,35 - 4,17 (m, 4H), 3,76 (s, 3H), 3,56 (s, 3H), 3,45 (m, 2H), 2,91 (m, 2H), 2,32 (s, 3H),

2,28 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,12 (m, 2H), 2,03 (s, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 168,5, 167,2, 152,7, 148,1, 147,1, 144,5, 139,6, 139,1, 130,5, 129,0, 123,7, 123,5, 123,3, 118,8, 116,5, 112,1, 100,6, 97,8, 73,3, 60,5, 59,4, 59,2, 58,3, 57,6, 57,4,56,1,53,3,53,1,40,6,40,0,31,3,22,2, 18,9, 14,4, 8,1.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₆H₃₉C1₃N₄Oi,S: 842,1. Nalezeno (M+H)⁺: 843,1.

Příklad 18

K roztoku 33 (12 mg, 0,014 ml) v suchém dichloromethanu (1,2 ml) acetonitrilu pro HPLC (1,2 ml) byl přidán při 23 °C iodid sodný (21 mg, 0,14 ml) a čerstvě destilovaný (přes hydrid vápenatý za atmosférického tlaku) trimethylsilylchlorid (15,4 mg, 0,14 ml). Reakční směs se změnila na oranžovou. Po 15 min byl roztok zředěn dichloromethanem (10 ml) a byl promyt čerstvým vodným nasyceným roztokem Na₂S₂O₄ (3x 10 ml). Organické vrstvy byly sušeny síranem sodným, filtrovány a zakoncentrovány. Byla získána sloučenina 34 (13 mg, kvantitativně) jako světle žlutá pevná látka, která byla použita bez dalšího čištění.

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,85 (s, 1H), 6,09 (s, 1H), 5,99 (s, 1H), 5,27 (d, J= 5,8 Hz, 1H), 5,14 (d, J= 5,3 Hz, 1H), 5,03 (d, 7= 11,9, 1H), 4,82 (d, 7= 12,2 Hz, 1H), 4,63 (d, 7= 13,0 Hz, 1H), 4,52 (m, 1H), 4,34 (m, 1H), 4,27 (bs, 1H), 4,18 (m, 2H), 3,76 (s, 3H), 3,56 (s, 3H), 3,44 (m, 1H), 3,42 (m, 1H), 2,91 (m, 2H), 2,32 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,03 (s, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₄H₃₅N₄Oi₀S: 798,1. Nalezeno (M+H)⁺: 799,1

-90CZ 304973 B6

Příklad 19

K roztoku 34 (13 mg, 0,016 ml) ve směsi kyselina octová/H₂O (90:10, 1 ml) byl přidán práškový zinek (5,3 mg, 0,081 ml) při 23 °C. Reakční směs byla zahřáta na 70 °C na 6 h. Po této době byl ochlazen na 23 °C, zředěn CH₂C1₂ (20 ml) a promyt vodným nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (15 ml) a vodným roztokem Et₃N (15 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a zakoncentrována. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně s oxidem křemičitým-NH₂ (eluent:ethylacetát:hexanový gradient od 0:100 do 50:50) za získání sloučeniny 35 (6,8 mg, 77 % pro dva kroky) jako světle žluté pevné látky.

’HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,51 (s, 1H), 6,03 (dd, J = 1,3 Hz, J= 26,5 Hz, 2H), 5,75 (bs, 1H), 5,02 (d, J= 11,6 Hz, 1H), 4,52 (m, 1H), 4,25 (m, 2H), 4,18 (d, J= 2,5 Hz, 1H), 4,12 (dd, J = 1,9 Hz, J= 11,5 Hz, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,40 (m, 2H), 3,26 (t, J= 6,4 Hz, 1H), 2,88 (m, 2H), 2,30 -2,10 (m, 2H), 2,30 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,18 (m, 3H), 2,02 (s, 3H).

13,

C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 174,1, 168,4, 147,8, 145,4, 142,9, 140,8, 140,1, 131,7, 130,2, 129,1, 128,3, 120,4, 118,3, 117,9, 113,8, 111,7, 101,7, 61,2, 59,8, 59,2, 58,9, 54,4, 53,8, 54,4,

41,3, 41,5, 34,1, 23,6, 20,3,15,5, 9,4.

ESI-MS m/z: Calcd. pro CnH^NitOgS: 622,7. Nalezeno (M+H)⁺: 623,2.

Příklad 20

Roztok jV-methylpyridin-4-karboxaldehydiodidu (378 mg, l,5mmol) vbezvodém DMF (5,8 ml) byl promyt bezvodým toluenem (2x 10 ml) pro odstranění vody azeotropním odstraněním toluenu. Roztok 35 (134 mg, 0,21 mmol), předtím promyté bezvodým toluenem (2x 10 ml), v bezvodém CH₂C1 (destilovaném přes CaH₂, 7,2 ml) byl pomocí kanyly přidán při 23 °C k tomuto oranžovému roztoku. Reakční směs se míchala při 23 °C 4 hodiny. Po této době byl po kapkách přidán DBU (32,2 μΐ, 0,21 mmol) při 23 °C a míchán 15 minut při 23 °C. K reakční směsi byl přidán čerstvý vodný nasycený roztok kyseliny šťavelové (5,80 ml) a reakční směs se míchala 30 minut při 23 °C. Pak byla reakční směs ochlazena na 0 °C a po kapkách byl přidán NaHCO₃, následoval přídavek vodného nasyceného roztoku NaHCO₃. Směs byla extrahována Et₂O.

-91 CZ 304973 B6

Do vodné vrstvy byl přidán K₂CO₃ a byla extrahována Et₂O. Spojené organické vrstvy byly sušeny MgSO₄ a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Surová látka byla čištěna sloupcovou chromatografíí na otevřené koloně (AcOEt/hexan od 1:3 do 1:1) za získání sloučeniny 36 (77 mg, 57 %) jako světle žluté pevné látky.

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,48 (s, 1H), 6,11 (d, 7 = 1,3 Hz, 1H), 6,02 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 5,70 (bs, 1H), 5,09 (d, J= 11,3 Hz, 1H), 4,66 (bs, 1H), 4,39 (m, 1H), 4,27 (d, 7= 5,6 Hz, 1H),

4,21 (d, 7= 10,5 Hz, 1H), 4,16 (d, 7= 2,6 Hz, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,54 (d,7=5,l Hz, 1H), 3,42 (d, 7= 8,5 Hz, 1H), 2,88 - 2,54 (m, 3H), 2,32 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 2,04 (s, 3H). ¹³CNMR (75 MHz, CDC1₃): δ 186,7, 168,5, 160,5, 147,1, 146,4, 142,9, 141,6, 140,7, 130,4, 129,8, 121,7 (2C), 120,0, 117,8, 117,1, 113,5, 102,2, 61,7, 61,4, 60,3, 59,8, 58,9, 54,6, 41,6, 36,9, 29,7,

24,1,20,3, 15,8, 14,1,9,6.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃iH₃₁N₃O₉S: 621,7. Nalezeno (M+H)⁺: 622,2.

Příklad 21

K roztoku 36 (49 mg, 0,08 ml) a 2-[3-hydroxy-4-methoxyfenyl]ethylamin (46,2 mg, 0,27 ml) v ethanolu (2,5 ml) byl přidán silikagel (105 mg) při 23 °C. Reakční směs se míchala při 23 °C 14 h. Pak byla zředěna hexanem a nalita na chromatografickou kolonu (ethylacetát:hexan od 1:3 do 1:1) za získání Et-770 (55 mg, 90 %) jako světle žluté pevné látky.

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,60 (s, 1H), 6,47 (s, 1H), 6,45 (s, 1H), 6,05 (s, 1H), 5,98 (s, 1H), 5,02 (d, 7= 11,4 Hz, 1H), 4,57 (bs, 1H), 4,32 (bs, 1H), 4,28 (d, 7= 5,3 Hz, 1H), 4,18 (d, 7 = 2,5 Hz, 1H), 4,12 (dd, 7 = 2,1 Hz, 7 = 11,5 Hz, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,62 (s, 3H), 3,50 (d, 7 = 5,0 Hz, 1H), 3,42 (m, 1H), 3,10 (ddd, 7= 4,0 Hz, 7= 10,0 Hz, 7= 11,0 Hz, 1H), 2,94 (m, 2H), 2,79 (m, 1H), 2,61 (m, 1H), 2,47 (m, 1H), 2,35 (m, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,09 (m, 1H), 2,04 (s, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C^H^N^oS: 770,7. Nalezeno (M+H)⁺: 771,2.

-92CZ 304973 B6

Příklad 22

OMe

K roztoku 21 (22 mg, 0,042 ml) v CH₂C1₂ (0,8 ml) byl přidán anhydrid fialový (6,44 mg, 0,042 ml) a reakční směs se míchala 2 h při 23 °C. Pak byl přidán karbonyldiimidazol (1 mg, 0,006 ml) a směs se míchala při 23 °C 7 h. Pak byl přidán karbonyldiimidazol (5,86 mg, 0,035 ml) a reakční směs se míchala 23 °C dalších 7 h. Roztok byl zředěn CH₂C1₂ (15 ml) a proío myt 0,1 N HC1 (15 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, hexan:ethylacetát 2:1) za získání 27 (26,4 mg, 96 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,58 (ethylacetát).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,73 -7,64 (m, 4H), 6,40 (s, 1H), 6,12 - 6,01 (m, 1H), 5,63 (s, 1H), 5,58 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 5,37 (dd, 7, = 1,8 Hz, J₂ = 17,4 Hz), 5,23 (dd, J, = 1,8 Hz, J₂ = 10,5 Hz, 1H), 5,12 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 4,22 - 4,15 (m, 3H), 4,08 (d, J= 1,8 Hz, 1H), 3,68 (s, 3H), 3,59 - 3,55 (m, 2H), 3,35 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 3,27 - 3,16 (m, 2H), 3,05 (dd, J_x = 8,1 Hz, J₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,64 (d, J= 18,0 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,09 (s, 3H), 1,80 (dd, J, =

11,4 Hz, J₂ = 15 Hz, 1H);

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 167,7, 148,9, 146,4, 144,2, 142,6, 139,5, 134,0, 133,5, 132,0, 131,0, 128,3, 123,0, 121,3, 120,9, 118,1, 117,5, 116,8, 113,6, 112,4, 100,8,74,5, 60,6, 60,5,57,7,

56,6, 55,6, 55,5, 42,3, 41,7, 26,6, 25,5, 15,9, 9,46.

ESI-MS m/z: Calcd: pro C3₇H₃₅N₄O₇: 648,79. Nalezeno (M+H)⁺: 649,3.

Příklad 23

-93 CZ 304973 B6

K roztoku 27 (26 mg, 0,041 ml) v CH₂C1₂ (11 ml) byla při 23 °C přidána kyselina octová (11 ml), (PPh₃)₂PdCl₂ (2,36 mg) a Bu₃SnH (28 ml, 0,10 ml). Po míchání při této teplotě 2 h byla reakční směs nalita na výplň otevřené kolony pro sloupcovou chromatografií (SiO₂, gradient hex až hexan:ethylacetát 2:1) za získání 28 (24,7 mg, 99 %)jako bílé pevné látky.

Rf: 0,33 (hexan:ethylacetát2:l).

*H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,75 - 7,70 (m, 2H), 7,69 - 7,65 (m, 2H), 6,39 (s, 1H), 5,82 (bs, 1H), 5,50 (d, / = 1,5 Hz, 1H), 5,0 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 4,45 (bs, 1H), 4,23 - 4,19 (m, 2H), 4,10 4,09 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,60 - 3,48 (m, 2H), 3,36 - 3,33 (m, 1H), 3,26 - 3,20 (m, 1H), 3,14 3,08 (m, 1H), 3,98 (d, J= 14,4 Hz, 1H), 2,61 (d, J= 18,3 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 1,85 (dd, /, = 12 Hz, /₂ = 15,3 Hz, 1H);

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 167,8, 146,4, 145,1, 143,9, 142,7, 137,1, 134,0, 133,5, 131,9,

130,8, 128,4, 122,9, 120,8, 118,0, 116,8, 114,0, 113,4, 106,4, 100,4, 60,6, 60,5, 57,8, 56,6, 55,5,

55,2, 42,6, 41,5, 25,6, 25,5, 15,8, 8,9.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃4H₃₂N₄O₇: 608,6. Nalezeno (M+H)⁺: 609,2.

Příklad 24

K roztoku 28 (357 mg, 0,058 ml) v CH₂C1₂ (3 ml) byl při 0 °C přidán acetylchlorid (41,58 ml, 0,28 ml) a pyridin (47,3 ml, 0,58 ml). Reakční směs se míchala 1 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (15 ml) a promyt 0,1 N HCI (15 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (RP-18, CH₃CN: H₂O 60:40) za získání ftalascidinu (354 mg, 94 %) jako bílé pevné látky:

Rf: 0,37 (CH₃CN:H₂O 7:3, RP-18).

*H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,72 - 7,68 (m, 2H), 7,67 - 7,63 (m, 2H), 6,38 (s, 1H), 5,69 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 5,64 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,30 (bs, 1H), 4,25 - 4,21 (m, 2H), 4,02 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 3,64 - 3,62 (m, 5H), 3,33 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 3,21 - 3,16 (m, 1H), 3,02 (dd, /, = 8,1 Hz, /₂= 18 Hz, 1H), 2,76 (dd, /, = 1,8 Hz, /₂ = 15,6 Hz, 1H), 2,63 (d, / =17,7 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H),

2,28 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,0 (s, 3H), 1,73 (dd, J_} = 12,0 Hz, /₂ = 15,3 Hz, 1H);

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 168,5, 167,6, 146,2, 144,2, 142,5, 141,0, 140,5, 133,4, 131,8, 130,7, 128,2, 120,9, 120,8, 117,9, 116,4, 113,6, 101,1, 60,4, 60,0, 57,0, 56,3, 55,6, 55,4, 41,6,

41,5, 26,5, 25,2, 20,2, 15,7, 9,4.

-94CZ 304973 B6

ESI-MS m/z: Calcd. pro C36H34N4O8: 650. Nalezeno (M+H)⁺: 651,2.

Příklad 25

K roztoku 17 (300 mg, 0,432 ml) v CH₂C1₂ (2 ml) byl při 0 °C přidán acytelchlorid (30,7 ml, 0,432 ml) a pyridin (34,9 ml, 0,0432 ml). Reakční směs se míchala 2 h při této teplotě a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (15 ml) a promyt 0,1 N HC1 (15 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku za získání 42 (318 mg, 100 %) jako bílé pevné látky, která byla v následných reakcích použita bez dalšího čištění.

Rf: 0,5 (ethylacetát:methanol 5:1).

'HNMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,66 (s, 1H), 5,93 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,83 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,42 (t, J= 6,6 Hz, 1H), 5,07 (d, J= 5,7 Hz, 1H), 4,98 (d, J= 5,7 Hz, 1H), 4,16 (d, J= 1,8 Hz, 1H), 4,11 (d, 7 = 2,7 Hz, 1H), 3,98 (bs, 1H), 3,73 - 3,61 (m, 2H), 3,64 (s, 3H), 3,52 - 3,48 (m, 1H), 3,50 (s, 3H), 3,33 (d, 7= 9,6 Hz, 1H), 3,17 - 3,14 (m, 1H), 2,97-2,87 (m, 1H), 2,75-2,70 (d, J= 16,8 Hz, 1H), 2,26 (s, 6H), 2,16 (s, 3H), 1,96 (s, 3H), 1,70 (dd, 7, = 11,7 Hz, /> = 15,6 Hz,

1H), 1,33 (s, 9H), 0,59 (d,7= 6,0 Hz, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 172,0, 168,3, 162,3, 148,2, 144,4, 140,4, 140,2, 130,9, 130,5,

125,3, 123,4, 120,8, 117,6, 112,7, 111,7, 101,4, 99,1, 79,2, 59,5, 58,8, 57,5, 57,4, 56,4, 55,5, 55,0,41,3,39,0, 28,2, 26,4, 19,9, 18,4, 9,1.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C38H49N5O10: 735,82. Nalezeno (M+H)⁺: 736,3.

Příklad 26

-95CZ 304973 B6

K roztoku 42 (318 mg, 0,432 ml) v CH₂C1₂ (2,16 ml) byla přidána kyselina trifluoroctová (1,33 ml, 17,30 ml) a reakční směs se míchala 3,5 h při 23 °C. Reakce byla zastavena při 0 °C nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (60 ml) a extrahována CH₂C1₂ (2x 70 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny (síran sodný) a zakoncentrovány ve vakuu. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, ethylacetát:methanol 20:1) za získání 43 (154 mg, 60 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,22 (ethylacetát:methanol 5:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,47 (s, 1H), 6,22 (bs, 1H), 5,95 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,88 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 4,08 - 4,06 (m, 2H), 4,01 (bs, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,49 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 3,33 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 3,26 - 3,22 (m, 1H), 2,95 (dd, J, = 8,1 Hz, J₂ = 18 Hz, 1H), 2,80 - 2,76 (m, 2H), 2,58 (d, J= 18 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 1,96 (s, 3H), 1,77 (dd, J, = 12,3 Hz, J₂ = 15,6 Hz, 1H), 0,90 (d, J= 6,9 Hz, 3H).

C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 174,8, 169,0, 146,8, 144,4, 142,8, 140,5, 140,2, 131,1, 128,8,

120,8, 120,5, 117,1, 112,9, 111,6, 101,5, 60,3, 59,0, 56,5, 56,3, 55,6, 55,1, 50,2, 41,6, 39,5, 26,8,

26,3, 24,9, 20,2, 15,4, 9,2.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₁H₃₇N₅O₇: 591,65. Nalezeno (M+H) : 592,3.

Příklad 27

_oA^nh₂

Me (43)

K roztoku 43 (154 mg, 0,26 ml) vCH₂Cl₂ (1,3 ml) byl přidán fenylisothiokyanát (186 ml, 1,56 ml) a směs se míchala při 23 °C 2 h. Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu a zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient hexan až hexan:ethylacetát 1:1) za získání 44 (120 mg, 63 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,41 (ethylacetát:methanol 5:1).

‘HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 8,17 (s, 1H), 7,49 - 7,44 (m, 3H), 7,31 - 7,24 (m, 3H), 7,05 (d, J= 6,9 Hz, 1H), 5,98 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,87 (d, /= 1,2 Hz, 1H), 5,52 (bs, 1H), 4,54 (t, J = 6,6 Hz, 1H), 4,15 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 4,03 (d, J = 2,7 Hz, 2H), 3,80 (bs, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,40 (bs, 1H), 3,32 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 3,16 (d, J= 11,7 Hz, 1H), 2,82 - 2,61 (m, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,01 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,80 (dd, Λ = 12,0 Hz, J₂ = 15,9 Hz, 1H), 0,62 (d, J= 6,0 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 178,5, 171,9, 168,7, 146,7, 144,5, 142,6, 140,6, 140,3, 136,3, 131,0, 129,9, 128,9, 126,7, 124,4, 120,9, 120,6, 117,7, 116,6, 112,7, 111,9, 101,4, 60,4, 58,7,

57,5, 56,1, 55,7, 55,1, 53,3, 41,4, 38,8, 26,3, 24,4, 20,2, 18,1, 15,3, 9,2.

-96CZ 304973 B6

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₈H₄₂N₆O7S: 726,3. Nalezeno (M+H)⁺: 727,3.

Příklad 28

(45)

K roztoku 44 (120 mg, 0,165 ml) vdioxanu (0,9 ml) byla přidána 5,3 N HCl/dioxan (1,8 ml) a reakční směs se míchala při 23 °C 2,5 h. Pak byl do této reakční směsi přidán CH₂C1₂ (10 ml) a H₂O (5 ml) a organická vrstva byla dekantována. Vodní fáze byla zalkalizována nasyceným vod. roz. hydrogenuhličitanu sodného (20 ml) (pH = 8) při 0 °C a pak extrahována CH₂C1₂ (2x 15 ml). Spojené organické extrakty byly sušeny (síran sodný) a zakoncentrovány ve vakuu za získání 45 (75 mg, 87 %) jako bílé pevné látky, která byla použita v následných reakcích bez dalšího čištění.

Rf: 0,23 (ethylacetát:methanol 5:1).

‘HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,43 (s, 1H), 5,94 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,87 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 4,10 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 3,98 (d, J= 2,4 Hz, 2H), 3,91 (bs, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,34 - 3,25 (m, 2H), 3,05 (dd, 7 = 1,8 Hz, 7₂ = 8,1 Hz, 1H), 2,80 - 2,73 (m, 3H), 2,46 (d, J= 18 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 1,98 (s, 3H), 1,79 (dd, 7 = 12,6 Hz, 7 = 16,2 Hz, 1H);

C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 168,7, 146,7, 144,4, 142,9, 140,4, 130,4, 128,9, 121,1, 120,8,

117,8, 116,8, 113,6, 111,5, 101,4, 67,6, 60,5, 59,8, 58,4, 56,6, 55,8, 55,3, 43,6, 41,8, 31,3, 25,6, 20,2, 15,6, 9,2.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₂₈H₃₂N₄O6: 520,58. Nalezeno (M+H)⁺: 521,3.

Příklad 29

K roztoku 45 (10 mg, 0,02 ml) v CH₂C1₂ (0,4 ml) byl přidán anhydrid fialový (2,84 mg, 1,02 ml) a reakční směs se míchala 2 h při 23 °C. Pak byl přidán karbonyldiimidazol (0,5 mg, 0,0003 ml) a reakční směs se míchala při 23 °C 7 h. Pak byl přidán karbonyldiimidazol (2,61 mg, 0,016 ml)

-97CZ 304973 B6 a reakční směs se míchala při 23 °C dalších 17 h. Roztok byl zředěn CH2CI2 (10 ml) a promyt 0,1 N HC1 (5 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (RP-18, CH₃CN:H₂O 60:40) za získání ftalascidinu (11,7 mg, 93 %)jako bílé pevné látky.

Rf: 0,37 (CH₃CN:H₂O 7:3, RP-18).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,72 - 7,68 (m, 2H), 7,67 - 7,63 (m, 2H), 6,38 (s, 1H), 5,69 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 5,64 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,30 (bs, 1H), 4,25 - 4,21 (m, 2H), 4,02 (d, J= 2,1 Hz,

1H), 3,64 - 3,62 (m, 5H), 3,33 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 3,21 - 3,16 (m, 1H), 3,02 (dd, J_x = 8,1 Hz,

J₂ = 18 Hz, 1H), 2,76 (dd, 7, = 1,8 Hz, J₂ = 15,6 Hz, 1H), 2,63 (d, J= 17,7 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H),

2,28 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,0 (s, 3H), 1,73 (dd, Λ = 12,0 Hz, J₂ = 15,3 Hz, 1H);

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 168,5, 167,6, 146,2, 144,2, 142,5, 141,0, 140,5, 133,4, 131,8, 15 130,7, 128,2, 120,9, 120,8, 117,9, 116,4, 113,6, 101,1, 60,4, 60,0, 57,0, 56,3, 55,6, 55,4, 41,6,

41,5, 26,5,25,2, 20,2, 15,7, 9,4.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C^H^N^: 650. Nalezeno (M+H)⁺: 651,2.

Příklad 30

K roztoku 25 (18 mg, 0,032 ml) v DMF (0,05 ml) byl přidán při 0 °C kat. DMAP (0,5 mg, 0,004 ml), imidazol (5 mg, 0,08 ml) a fórZbutyldifenylsilylchlorid (12,5 ml, 0,048 ml) a reakční směs se míchala 6 h při 23 °C. Při 0 °C byla přidána voda (10 ml) a vodná fáze byla extrahována hexan:ethylacetátem 1:10 (2x 10 ml). Organická vrstva byla sušena (síran sodný), fdtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Surová látka byla čištěna sloupcovou chroma30 tografií na otevřené koloně (SiO₂, hexan:ethylacetát 3:1) za získání 26 (27 mg, 88 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,29 (hexan:ethylacetát 3:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,61 - 7,58 (m, 2H), 7,42 - 7,28 (m, 8H), 6,71 (s, 1H), 6,19 6,02 (m, 1H), 5,78 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,64 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,40 (dd, 7, = 1,2 Hz, J₂ = 17,1 Hz, 1H), 5,27 (dd, J_x = 1,2 Hz, J₂ = 10,2 Hz, 1H), 5,13 (s, 2H), 4,45 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 4,24 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 4,17 - 4,06 (m, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,64 (dd, J_x = 2,4 Hz, J₂ = 9,9 Hz, 1H), 3,59 (s, 3H), 3,42 - 3,21 (m, 4H), 3,10 (dd, 7, = 8,1 Hz, J₂ = 17,7 Hz, 1H), 2,70 (d, J= 17,7 Hz, 1H),

2,33 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 2,08 - 1,89 (m, 1H), 0,87 (s, 9H);

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 148,5, 148,3, 148,1, 144,0, 139,0, 135,6, 133,8, 133,1, 132,6,

130,5, 130,3, 129,6, 129,4, 127,5, 127,5, 127,4, 125,1, 124,3, 121,6, 118,5, 117,5, 112,9, 111,7,

100,8, 99,2, 74,0, 67,7, 61,5, 59,6, 59,0, 57,7, 57,1, 55,4, 41,6, 29,6, 26,6, 25,5,18,8, 15,8, 9,2.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₄7H5₅N₃O₇Si: 801,3. Nalezeno (M+H)⁺: 802,3.

-98CZ 304973 B6

Příklad 31

K roztoku 26 (7 mg, 0,0087 ml) VCH2CI2 (0,15 ml) byla přidána při 23 °C kyselina octová (2,5 mg, 0,044 ml), (PPh₃)2PdCl₂ (0,5 mg, 6,96x 10^ ml) a Bu₃SnH (3,5 ml, 0,013 ml). Reakční směs se míchala při této teplotě 1 h. Roztok byl zředěn směsí hexan:ethylacetát 5:1 a nalit na výplň otevřené kolony pro sloupcovou chromatografíi (SiO₂, gradient 5:1 až 1:1 hexan:ethylacetát) za získání ET-11 (5 mg, 75 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,36 (hexamethylacetát 1:5, oxid křemičitý).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,56 (m, 2H), 7,41 -7,25 (m, 8H), 6,67 (s, 1H), 5,72 (d, J= 1,0 Hz, 1Η), 5,58 (d, J = 1,0 Hz, 1H), 5,51 (s, 1H), 5,38 (d, J = 5,75 Hz, 1H), 5,16 (d, J= 5,7 Hz, 1H), 4,57 (d, J= 2,9 Hz, 1H), 4,21 (m, 1H), 4,09 (m, 1Η), 3,72 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 3,68 (dd, J_x = 2,1 Hz, J₂ = 10,4 Hz, 1H), 3,38 - 3,26 (m, 3H), 3,11 (dd, J_x = 2,5 Hz, J₂ = 15,7 Hz, 1H), 3,01 (dd, Λ = 8,9 Hz, J₂ = 17,9 Hz, 1H), 2,70 (d, J= 17,9 Hz, IH), 2,31 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 1,89 (dd, Λ = 12,1 Hz, J₂ = 15,7 Hz, 1Η), 0,9 (s, 9H);

C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 149,0, 147,4, 145,3, 144,3, 136,3, 135,7, 135,4, 133,2, 130,9,

130,5, 129,6, 129,5, 127,5, 125,0, 118,6, 112,5, 112,1, 105,7, 100,5, 99,8, 68,5, 61,5, 59,7, 58,8,

57,7, 56,9, 56,5, 55,4, 41,7, 26,6, 26,2, 25,5, 18,9, 15,8, 14,2, 8,7.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C44H51N5O7SÍ: 761. Nalezeno (M+H)⁺: 762.

Příklad 32

Roztok 2 (3 g, 5,46 ml) a fenylthiokyanátu (3,92 ml, 32,76 ml) v CH₂C1₂ (27 ml) se míchal při 23 °C 1,5 h. Reakční směs se rozdělila mezi CH₂C1₂ (10 ml) a H₂O (5 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a zakoncentrována. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient hex až 2:3 hexamethylacetát) za získání 3 (3,29 g, 88 %) jako žluté pevné látky.

Rf: 0,27 (ACN: H₂O 3:2, RP-C18);

-99CZ 304973 B6 'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,77 (bs, 1H), 7,42 - 7,11 (m, 5H), 6,65 (d, 1H), 6,29 (s, 1H), 5,6 - 5,5 (m, 1H), 4,19 - 4,14 (m, 2H), 4,08 (d, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,87 - 3,65 (m, 6H), 3,77 (s, 3H), 3,37 - 2,98 (m, 8H), 2,50 (d, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 1,96 (s, 1H), 1,87 (s, 3H), 1,81 1,75 (m, 1H), 0,96 (d, 3H);

^I3C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 185,7, 180,9, 178,9, 172,0, 155,7, 147,1, 143,2, 142,4, 136,0, 135,1, 130,5, 129,9, 129,3, 128,5, 126,9, 124,4, 117,4, 116,3, 77,1, 60,9, 58,6, 56,2, 55,8, 55,0, 54,6, 53,5, 41,7, 40,3, 25,1, 24,5, 18,4, 15,8, 8,7.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₆H4oN60₆S: 684,4. Nalezeno (M+H)⁺: 685,2.

Příklad 33

(4)

Roztok 3 (0,143 g, 0,208 ml) v 6,5 M HCl/dioxan (150 ml) se míchal při 23 °C 6 h. Pak byl do této reakční směsi přidán toluen (3 ml) a organická vrstva byla dekantována. Látka byla rozdělena mezi nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (3 ml) a CHC1₃ (3x 3 ml). Organické vrstvy byly sušeny a zakoncentrovány za získání hlavní sloučeniny jako směsi 4 a 6 (4:6 90:10), které pomalu za stání cyklizovaly na 6.

Rf: 0,4 (ethylacetát:methanol 5:1, oxid křemičitý);

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,45 (s, 1H), 4,16 (m, 1H), 4,02 (d, 1H), 3,96 (s, 3H), 3,79 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,35 (m, 1H), 3,20 - 3,00 (m, 3H), 2,87 (d, 1H), 2,75 (d, 1H), 2,43 (d, 1H), 2,34 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 1,93 (s, 3H), 1,72 - 1,5 (m, 3H);

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₂₆H₃oN40₅: 478,5. Nalezeno (M+H)⁺: 479,2.

Příklad 34

-100CZ 304973 B6

Roztok 3 (0,143 g, 0,208 ml) v 6,5 M HCl/dioxan (150 ml) se míchal při 23 °C 1 h. Po odpaření rozpouštědla byl získán zbytek, který byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (ethylacetát/methanol/triethylamin 100:25:0,1) za získání 6 (80 mg, 83 %) jako žluté pevné látky. Rf: 0,26 (ACN: H₂O 3:2, RP-C18);

H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,46 (s, 1H), 5,9 (bs, 1H), 4,67 (dd, 7= 18,3 Hz, J= 7,8 Hz, 1H), 4,24 (d, 1H), 4,16 (s, 3H), 3,93 (d, J= 2,7 Hz, 1H), 3,8 (m, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,45 (m, 2H), 3,08 (dd, 7= 17,9 Hz, 7= 3,6 Hz, 1H), 2,78 (m, 1H), 2,55 (d, 1H), 2,3 (m, 1H), 2,3 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 1,90 (s,3H);

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 186,2, 162,1, 154,9, 146,9, 145,3, 143,0, 130,1, 129,4, 128,1, 125,0, 121,4, 116,4, 116,2, 66,6, 60,7, 60,7, 60,1, 59,6, 58,8, 55,6, 54,9, 41,9, 25,3, 24,7, 15,7,

8,9.

ESI-MS m/z: Calcd: pro C26H28N4O4: 460,5. Nalezeno (M+H) : 461,1.

Příklad 35

K roztoku 3 (2,38 g, 3š,47 ml) v dioxanu (5 ml) byla přidána 5,3 M HC1 v dioxanu (34 ml) a reakční směs se míchala při 23 °C 45 minut. Pak byl přidán Ac₂O (51 ml, 539,5 ml) a směs se míchala 4 h. Reakční směs byla ochlazena na 0 °C a při této teplotě rozdělena mezi vodný nasycený roztok Na₂CO₃ (300 ml) a ethylacetát (300 ml). Organická fáze byla sušena síranem sodným, filtrována a zakoncentrována. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient CH2CI2 až CH₂Cl2:ethylacetát 1:2) za získání 5 (1,75 g, 97 %)jako žluté pevné látky.

Rf: 0,53 (ACN: H₂O 3:2, RP-C18).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,51 (s, 1H), 5,98 (bs, 1H), 4,84 (dd, 1H), 4,17 (d, 1H), 4,00 (d, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,85 (bs, 1H), 3,81 (m, 1H), 3,74 (s, 3H), 3,70 (d, 1H), 3,23 (m, 1H), 3,11 (dd, 1H), 3,09 (m, 1H), 2,93 (m, 2H), 2,44 (d, 1H), 3,67 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 1,70 (s, 3H), 1,60 - 1,50 (m, 2H), 1,29 (s, 3H);

13,

C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 185,9, 180,8, 169,9, 160,2, 156,2, 147,0, 143,1, 140,4, 136,1,

130,6, 129,6, 127,9, 120,4, 117,2, 61,0, 60,7, 58,6, 55,7, 55,1, 54,3, 41,8, 41,1, 25,7, 23,9, 22,2,

15,7, 8,7.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₂8H₃₂N4O₆: 520,6. Nalezeno (M+H)⁺: 521,1.

- 101 CZ 304973 B6

Příklad 36

K roztoku 5 (1,75 g, 3,36 ml) v CH2CI2 (17 ml) byl přidán při 0 °C diisopropylethylamin (11,71 ml, 67,23 ml), DMAP (20 mg, 0,17 ml) a bromomethylmethylether (4,11 ml, 50,42 ml). Po 6 h při 23 °C byla reakční směs rozdělena mezi CH₂C1₂ (50 ml) a vodný nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného (25 ml). Organická fáze byla sušena síranem sodným a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Surová látka byla čištěna sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (RP-18, CH₃CN/H₂O 1/1) za získání 7 (1,32 g, 70 %)jako žluté pevné látky.

Rf: 0,34 (ACN:H₂O 2:3, RP-C18);

'HNMR (300 MHz, CDClj): δ 6,74 (s, 1H), 5,14 (s, 2H), 4,82 (m, 1H), 4,22 (d, 1H), 4,00 (d, 3H), 4,0 (m, 1H), 3,83 (m, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,4 (m, 1H), 3,2 - 2,95 (m, 6H), 2,43 (d, 1H), 2,37 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 1,89 (s, 3H), 1,5 - 1,4 (m, 2H), 1,31 (s, 3H);

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 185,9, 180,7, 169,6, 156,2, 148,9, 148,5, 140,3, 136,2, 131,3, 130,1, 127,7, 124,6, 123,7, 117,3, 99,5, 99,2, 60,9, 59,7, 58,8, 57,7, 56,4, 55,7, 55,0, 54,2, 51,0,

41,6, 41,0, 40,5, 25,5, 23,9, 22,3, 19,3, 15,6, 14,6, 8,6.

ESI-MS m/z: Calcd: pro C₃₀H₃₆N₄O₇: 564,6. Nalezeno (M+H)⁺: 565,3.

Příklad 37

(7)

(₈)

K roztoku 7 (0,37 g, 0,65 ml) v methanolu (74 ml) byl při 0 °C přidán 1 M hydroxid sodný (130 ml). Reakční směs se míchala 15 minut a pak byla reakce zastavena při 0 °C úpravou 6 M HC1 na pH = 5. Směs byla extrahována ethylacetátem (3x 50 ml) a spojené organické vrstvy byly sušeny síranem sodným a zakoncentrovány ve vakuu. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (RP-18, CH₃CN: H₂O 1:1) za získání 8 (232 mg, 65 %) jako žluté olejovité látky.

- 102CZ 304973 B6

Rf: 0,5 (ACN: H₂O 3:2, RP-C18);

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,75 (s, 1H), 5,15 (s, 2H), 4,86 (m, 1H), 4,26 (d, 1H), 4,01 (d, 1H), 3,88 - 3,81 (m, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,39 (m, 1H), 3,27 - 3,21 (m, 1H), 3,18 3,08 (m, 2H), 3,03 - 2,97 (m, 1H), 2,47 (d, 1H), 2,37 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 1,90 (s, 3H), 1,57 1,46 (m, 2H), 1,33 (s,3H);

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 185,3, 180,6, 175,9, 151,5, 148,9, 148,6, 143,3, 133,7, 131,5,

129,9, 124,7, 123,5, 117,1, 117,0, 99,2, 59,8, 58,7, 57,8, 56,3, 55,3, 54,9, 54,3, 41,5, 40,7, 29,6, 25,5, 24,4,22,2, 20,7, 15,7, 8,0.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C^H^N^: 550,6. Nalezeno (M+H)⁺: 551,2.

Příklad 38

(8) -^o (9)

K odplyněnému roztoku sloučeniny 8 (240 mg, 0,435 ml) v DMF (30 ml) byl přidán 10% Pd/C (48 mg) a reakční směs se míchala pod H₂ (atmosférický tlak) 1 h. Reakční směs byla zfiltrována přes vrstvu celitu pod argonem do Schlenkovy zkumavky jako bezbarvý roztok, obsahující bezvodý Cs₂CO₃ (240 mg, 0,739 ml). Pak byl přidán bromochlormethan (0,566 ml, 8,71 ml). Zkumavka byla uzavřena a míchala se při 90 °C 3 h. Reakční směs byla ochlazena a zfiltrována přes celit a promyta CH₂C1₂. Organická vrstva byla zakoncentrována a sušena (síran sodný) za získání 9 (232 mg, 65 %) jako hnědé olejovité látky, která byla použita v dalším kroku bez dalšího čištění.

Rf: 0,36 (SiO₂, hexan:ethylacetát 1:5) 'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,71 (s, 3H), 5,89 (d, 1H), 5,81 (d, 1H), 5,63 (bs, 1H), 5,33 (d, 1H), 5,17 (d, 1H), 4,97 (m, 1H), 4,20 (d, 1H), 4,09 (m, 1H), 3,99 (m, 1H), 3,68 (m, 1H), 3,65 (s, 6H), 3,59 - 3,47 (m, 4H), 3,37 - 3,27 (m, 2H), 3,14 - 2,97 (m, 2H), 2,62 (d, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 1,72 (m, 1H), 1,36 (s, 3H);

13,

C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 169,8, 149,1, 147,4, 145,5, 136,2, 130,9, 130,8, 125,0, 122,9,

117,7, 112,6, 111,8, 106,4, 100,8, 99,8, 59,8, 58,9, 57,7, 56,6, 56,4, 55,5, 55,2, 41,6, 40,1, 29,6,

25,9, 25,0, 22,6, 15,6, 8,8.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃oH₃₆SiN₄0₇: 564,6. Nalezeno (M+H)⁺: 565,3.

- 103 CZ 304973 B6

Příklad 39

Do baňky, obsahující 9 (245 mg, 0,435 ml) v DMF (4 ml), byl přidán při 0 °C uhličitan česný (425 mg, 1,30 ml) a allylbromid (376, 4,35 ml) a směs se míchala při 23 °C 1 h. Reakční směs byla zfiltrována přes vrstvu celitu a rozdělena mezi CH2CI2 (25 ml). Organická fáze byla sušena (síran sodný) a zakoncentrována za sníženého tlaku za získání zbytku, který byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, CHCl₃:ethylacetát 1:2) za získání 10 jako žluté olejovité látky (113 mg, 43 %).

Rf: 0,36 (hexamethylacetát 1:5) ‘HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,74 (s, 1H), 6,3 - 6,0 (m, 1H), 5,94 (d, 1H), 5,87 (d, 1H), 5,43 5,36 (m, 2H), 5,22 (s, 2H), 5,00 (m, 1H), 4,22 (m, 1H), 4,17-4,01 (m, 1H), 3,98 (m, 2H), 3,71 3,67 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,62 - 3,51 (m, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,39 - 3,37 (m, 1H), 3,31 - 3,26 (m, 3H), 3,09 (dd, 1H), 2,56 (d, 1H), 2,36 (s,3H), 2,21 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 2,24 - 2,10 (m, 1H), 1,82 -1,73 (m, 1H), 1,24 (bs, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 169,4, 148,8, 148,3, 139,1, 133,7, 130,9, 130,3, 125,2, 120,2,

117,7, 113,1, 112,6, 101,3, 99,3, 74,1, 59,7, 59,3, 57,8, 57,0, 56,1, 55,2, 41,6, 41,0, 40,9, 29,7, 26,3,22,5, 15,6, 9,3.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C^Hto^Cb: 604,7. Nalezeno (M+H)⁺: 605,3.

K roztoku 9 (22 mg, 0,039 ml) v CH₂C1₂ (0,2 ml) byl přidán při 0 °C acetylchlorid (2,79 ml, 0,039 ml) a pyridin (3,2 ml, 0,039 ml). Reakční směs se míchala 1 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt 0,1 N HC1 (5 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku za získání 46 (22 mg, 93 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,4 (hexamethylacetát 1:5);

- 104CZ 304973 B6 'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,74 (s, 1H), 5,97 (d, J= 0,9 Hz, 1H), 5,91 (d, J= 0,9 Hz, 1H), 5,12 (d, 7= 5,7 Hz, 2H), 5,04 (d, J= 5,7 Hz, 1H), 4,90 (t, J= 6 Hz, 1H), 4,17 (d, J= 2,7 Hz, 1H), 4,05 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,01 (bs, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,57 (s, 3H), 3,50 - 3,44 (m, 2H), 3,38 3,36 (m, 1H), 3,30 - 3,26 (m, 1H), 3,00 (dd, 7, = 7,8 Hz, 7₂ = 18,0 - 3,44 (m, 2H), 3,38 - 3,36 (m, 1H), 3,30 - 3,26 (m, 1H), 3,00 (dd, 7, = 7,8 Hz, 7₂ = 18,0 Hz, 1H), 2,79 (d, 7= 12,9 Hz, 1H), 2,60 (d, 7= 18,0 Hz, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,32 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,68 (dd, 7, =

11,7 Hz, 7₂ = 15,6 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₂H₃8N₄O₈: 606,67. Nalezeno (M+H)⁺: 607,3.

K roztoku 46 (8 mg, 0,013 ml) v dioxanu (0,1 ml) byla přidána 5,3 N HCl/dioxan (0,5 ml) areakční směs se míchala při 23 °C 1 h. Pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (5 ml) a promyt 0,1 N HC1 (3 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku za získání 47 (5 mg, 70 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,4 (hexan.ethylacetát 1:5);

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,51 (s, 1H), 5,97 (d, 7- 1,2 Hz, 1H), 5,91 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 4,97 (bs, 1H), 4,11 (bs, 1H), 4,04 - 4,02 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,65 (d, 7= 2,1 Hz, 2H), 3,56 3,30 (m, 2H), 3,04 (dd, 7 = 7,5 Hz, 7₂ = 18 Hz, 1H), 2,80 (d, 7= 14,4 Hz, 1H), 2,59 (d, 7= 18,3 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,76 (dd, 7, = 12,0 Hz, 7₂= 15,9 Hz, 1H), 1,33 (s, 3H), 1,25 (s, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₀H34N₄O₇: 562,61. Nalezeno (M+H)⁺: 563,3.

Příklad 42

isovalerylchlorid , py, CH₂Čl₂. 0°C 1h

- 105 CZ 304973 B6

K roztoku 45 (10 mg, 0,0192 ml) v CH₂C1₂ (0,3 ml) byl přidán při 0 °C isovalerylchlorid (2,34 ml, 0,0192 ml) a pyridin (1,55 ml, 0,0192 ml). Reakční směs se míchala 1 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (5 ml) a promyt 0,1 N HCI (3 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, hex:ethylacetát 1:2) za získání 48 (11 mg, 95 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,12 (hex:ethylacetát 1:2).

’HNMR (300 MHz, CDCf): δ 6,50 (s, 1H), 5,98 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,91 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,75 (s, 1H), 5,02 (t, J= 5,4 Hz, 1H), 4,10 (d,/= 1,5 Hz, 1H), 4,06 (d, J= 2,7 Hz, 1H), 4,02 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,76 - 3,71 (m, 1H), 3,86 - 3,28 (m, 3H), 3,04 (dd, /, = 8,1 Hz, J₂ =

18,3 Hz, 1H), 2,78 (d, J= 15,9 Hz, 1H), 2,55 (d, J= 18 Hz, 1H), 2,32 (s, 6H), 2,26 (s, 3H), 1,98 (s, 3H), 1,84 - 1,68 (m, 2H), 1,36 (d, J= 7,2 Hz, 2H), 0,69 (d, /=6,6 Hz, 3H), 0,62 (d, / = 6,6 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C33H40N4O7: 604,69. Nalezeno (M+H)⁺: 605,3.

Příklad 43

Λ

O (CH₂)_e (49) ¹

Me

K roztoku 45 (10 mg, 0,0192 ml) v CH₂C1₂ (0,3 ml) byl přidán při 0 °C isovalerylchlorid (3,98 ml, 0,0192 ml) a pyridin (1,55 ml, 0,0192 ml). Reakční směs se míchala 1 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (5 ml) a promyt 0,1 N HCI (3 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, hex:ethylacetát 1:2) za získání 49 (12,4 mg, 96 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,7 (ethylacetát:methanol 10:1).

’HNMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,50 (s, 1H), 5,98 (d, /= 1,5 Hz, 1H), 5,91 (d, /= 1,5 Hz, 1H), 5,73 (s, 1H), 5,08 (t, /= 5,4 Hz, 1H), 4,10 (d, /= 1,5 Hz, 1H), 4,05 (m, 1H), 4,01 (m, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,65 - 3,61 (m, 1H), 3,40 - 3,27 (m, 3H), 3,03 (dd, / = 8,1 Hz, /₂= 18,6 Hz, 1H), 2,78 (d, /= 13,2 Hz, 1H), 2,57 (d, /= 18,3 Hz, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,79 (dd, /, = 12,0 Hz, /₂ = 16,5 Hz, 1H), 1,73 - 1,42 (m, 4H), 1,33 - 1,18 (m, 10H), 1,03 (m, 2H), 0,87 (t, /= 6,6 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C38H50N4O7: 674,83. Nalezeno (M+H)⁺: 675,3.

-106CZ 304973 B6

Příklad 44

trans-C₁₀H_eCIF₃O, py.

CH₂CI₂.0°, 1h.

K roztoku 45 (14,5 mg, 0,0278 ml) v CH₂C1₂ (0,3 ml) byl přidán při 0 °C trans-3-trifluormethylcinnamoylchlorid (4,76 ml, 0,0278 ml) a pyridin (2,25 ml, 0,0278 ml). Reakční směs se míchala 1 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (5 ml) a promyt 0,1 N HC1 (3 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografíí na otevřené koloně (SiO₂, hex: ethylacetát 1:1) za získání 50 (18,7 mg, 94 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,64 (ethylacetát:methanol 5:1).

’H NMR (300 MHz, CDClj): δ 7,74 - 7,75 (m, 4H), 7,23 (d, J= 16,0 Hz, 1H), 6,34 (s, 1H), 6,12 (d, J= 16,0 Hz, 1H), 6,07 (d, 7 = 0,9 Hz, 1H), 5,96 (d, 7= 0,9 Hz, 1H), 4,39 (d, 7= 2,4 Hz, 1H), 4,07 - 4,05 (m, 1H), 3,81 (bs, 1H), 3,46 - 3,51 (m, 3H), 3,42 (s, 3H), 3,09 (brd, 7= 12,0 Hz, 1H), 2,94 - 2,85 (m, 2H), 2,74 (d, 7= 18,3 Hz, 1H), 2,38 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,80 (s, 3H), 1,84- 1,75 (m, 1H).

C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 168,7, 165,3, 146,5, 144,7, 142,6, 140,6, 138,0, 135,9, 131,0,

130,9, 129,1, 128,6, 125,8, 125,7, 124,5, 124,4, 122,7, 121,2, 117,8, 116,5, 113,0, 112,0, 101,7,

60,4, 59,1, 56,5, 56,4, 55,6, 55,3, 41,8, 40,3, 26,6, 25,1, 20,3, 15,4, 9,3.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₈H₃₇N₄O₇: 718,72. Nalezeno (M+H)⁺: 719,3.

K roztoku 43 (33 mg, 0,0557 ml) v CH₂C1₂ (0,4 ml) byl přidán při 0 °C isovalerylchlorid (6,79 ml, 0,0557 ml) a pyridin (4,5 ml, 0,0557 ml). Reakční směs se míchala 1 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (5 ml) a promyt 0,1 N HC1 (3 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chro- 107CZ 304973 B6 matografií na otevřené koloně (SiO₂, hex: ethylacetát 1:2) za získání 51 (34 mg, 91 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,09 (hex:ethylacetát 1:2).

’HNMR (300 MHz, CDCfi): δ 6,46 (s, 1H), 6,10 (bs, 1H), 5,99 (d, J= 0,9 Hz, 1H), 5,90 (d, J= 0,9 Hz, 1H), 5,30 (t, J= 6,0 Hz, 1H), 4,10 - 4,05 (m, 3H), 3,81 (bs, 1H), 3,74 (s, 3H), 3,54 (bs, 1H), 3,38 - 3,36 (m, 1H), 3,29 - 3,21 (m, 1H), 3,00 (dd, Λ = 8,0 Hz, J₂ = 18,0 Hz, 1H), 2,25 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,95 - 1,90 (m, 3H), 0,87 (d, J= 6,6 Hz, 6H), 0,76 (d, J= 6,0 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₆H4₅N₅O₈: 675,77. Nalezeno (M+H) : 676,3.

Příklad 46

(43) (52) H J

K. roztoku 43 (33 mg, 0,0557 ml) v CH₂C1₂ (0,4 ml) byl přidán při 0 °C trans-3-trifluormethylcinnamoylchlorid (9,52 ml, 0,0557 ml) a pyridin (4,5 ml, 0,0557 ml). Reakční směs se míchala 1 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (5 ml) a promyt 0,1 N HC1 (3 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, hex: ethylacetát 1:2) za získání 52 (40 mg, 92 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,21 (hex:ethylacetát 1:2).

'H NMR (300 MHz, CDCfi): δ 7,74 - 7,47 (m, 4H), 6,49 (s, 1H), 6,34 (s, 1H), 6,40 (d, J= 15,6 Hz, 1H), 6,00 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,90 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,47 (t, J= 6 Hz, 1H), 4,12-4,09 (m, 3H), 3,93 (bs, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,59 - 3,58 (m, 1H), 3,38 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 3,29 (d, J= 12,0 Hz, 1H), 3,00 (dd, Λ = 8,1 Hz, ,/₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,79 - 2,78 (m, 1H), 2,65 (d, J= 18,3 Hz, 1H), 2,29 (s, 6H), 2,28 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 1,84 - 1,80 (m, 1H), 1,84 - 1,80 (m, 1H), 0,85 - 0,84 (m, 3H).

^,3C NMR (75 MHz, CDCfi): δ 171,9, 168,8, 164,4, 146,9, 144,6, 143,0, 140,5, 140,5, 139,3,

135.7, 131,1, 131,0, 129,4, 129,1, 126,0, 124,1, 124,0, 122,4, 121,1, 120,7, 120,6, 117,7, 116,9,

112.8, 112,0, 101,6, 60,6, 59,3, 57,1, 56,3, 55,9, 55,2, 49,0, 41,7, 49,9, 26,5, 25,1, 20,2, 18,4, 15,7, 9,3.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C4iH₄₂F₃N5O₈: 789,8. Nalezeno (M+H)⁺: 790,3.

-108CZ 304973 B6

K roztoku 43 (10 mg, 0,0169 ml) v CH₂C1₂ (0,2 ml) byl přidán při 23 °C trifluoracetanhydrid (2,38 μΐ, 0,0169 ml). Reakční směs se míchala 5 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (5 ml) a promyt 0,1 N HC1 (3 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, hex: ethylacetát 3:2) za získání 53 (10,7 mg, 93 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,57 (ethylacetát:methanol 5:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,45 (s, 1H), 6,00 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 5,90 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,87 (bs, 1H), 5,32 (bs, 1H), 4,12 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 4,08 (d, J= 1,8 Hz, 1H), 3,78 - 3,56 (m,

3H), 3,72 (s, 3H), 3,40 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 3,25 (d, 7 = 9,3 Hz, 1H), 3,00 (dd, 7, = 8,4 Hz, 7₂ =

18,0 Hz, 1H), 2,77 (dd, 7i = 2,1 Hz, 7₂ = 15,9 Hz, 1H), 2,68 (d, 7= 18,6 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,75 (dd, 7, = 11,4 Hz, /> = 15,9 Hz, 1H), 0,69 (d, 7 =

6,3 Hz, 3H).

C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 170,1, 168,6, 156,0, 147,0, 144,6, 143,0, 140,4, 131,0, 129,4,

120,9, 120,7, 117,6, 116,8, 112,4, 112,1, 101,6, 60,5, 59,0, 57,1, 56,3, 55,6, 55,2, 48,7, 41,6,

39,4, 26,5, 24,9, 20,2, 17,8, 15,4, 9,2.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₃H₃₆F₃N₅O₈: 687,63. Nalezeno (M+H)⁺: 688,66.

Příklad 48

K roztoku 19 (11 mg, 0,0169 ml) v CH₂C1₂ (0,2 ml) byl přidán při 23 °C trifluoracetanhydrid (2,38 μΐ, 0,0169 ml). Reakční směs se míchala 5 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (5 ml) a promyt 0,1 N HC1 (3 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo

-109CZ 304973 B6 bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, hex:ethylacetát 3:2) za získání 54 (10,7 mg, 93 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,6 (ethylacetát:methanol 5:1).

'HNMR (300 MHz, CDCf): δ 7,33 (d, J= 6,3 Hz, 1H), 6,45 (s, 1H), 6,04 (m, 1H), 5,95 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,84 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 5,32 (m, 2H), 5,21 (m, 1H), 4,11 (m, 4H), 3,73 (s, 3H), 3,64 (m, 2H), 3,51 (m, 1H), 3,37 (d, J= 8,7 Hz, 1H), 3,22 (m, 2H), 3,03 (dd, 7 = 8,1 Hz, 7 =

18,3 Hz, 1H), 2,60 (d, 7= 18,3 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 1,86 (dd, 7, = 12 Hz, 7₂ = 16,2 Hz, 1H), 0,82 (d, 7= 7,2 Hz, 3H).

^!3C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 170,0, 156,0, 148,4, 147,1, 144,3, 143,0, 138,7, 133,8, 130,5,

129,4, 120,6, 120,4, 117,6, 117,5, 117,0, 113,5, 112,5, 112,4, 101,1, 74,1, 66,8, 60,4, 59,3, 56,9,

56,6, 56,3, 55,4, 48,7, 41,6, 40,1, 26,2, 25,0, 17,6, 15,4, 9,1.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃5H₃9F₃N₅O₇: 685,69. Nalezeno (M+H)⁺: 686,3.

Příklad 49

K roztoku 54 (100 mg, 0,0415 ml) v CH₂C1₂ (4 ml) se míchala při 23 °C kyselina octová (40 ml), (PPh₃)₂PdCl₂ (8,4 mg, 0,012 ml) a Bu₃SnH (157 ml, 0,56 ml). Po míchání při této teplotě 2 h byla reakční směs nalita na výplň otevřené koloně pro sloupcovou chromatografií (SiO₂, gradient hex až hexan:ethylacetát 2:1) za získání 55 (90 mg, 96 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,6 (hexan:ethylacetát 1:2).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,55 (d, 7= 7,2 Hz, 1H), 6,45 (s, 1H), 5,90 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,82 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,37 (t, 7= 6,0 Hz, 1H), 4,15 (d, 7= 2,1 Hz, 1H), 4,04 (d, 7= 1,8 Hz, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,66 - 3,53 (m, 2H), 3,37 - 3,31 (m, 2H), 3,19 - 3,15 (d, 7= 11,7 Hz, 1H), 3,08 - 3,00 (m, 2H), 2,56 (d, 7- 18,3 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 1,91 (dd, 7 = 12,0 Hz, 7₂ = 15,6 Hz, 1H), 0,84 (d, 7= 6,9 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 170,1, 156,3, 147,3, 144,9, 144,4, 143,3, 136,7, 130,7, 129,3,

120.6, 117,6, 117,4, 114,4, 112,1, 107,7, 101,0, 85,8, 60,5, 59,3, 56,5, 56,4, 56,2, 55,2, 48,9,

41.6, 40,9, 25,7, 25,3, 18,0, 15,6, 8,7.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₂H₃5F₃N₅O7: 645,63. Nalezeno (M+H)⁺: 646,2.

-110CZ 304973 B6

Příklad 50

(56)

K roztoku 17 (200 mg, 0,288 ml) v CH₂C1₂ (1,44 ml) byla přidána kyselina trifluorooctová (888 ml, 11,53 ml) a reakční směs se míchala 4 h při 23 °C. Reakce byla zastavena při 0 °C nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (60 ml) a reakční směs extrahována ethylacetátem (2x 70 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny (síran sodný) a zakoncentrovány ve vakuu za získání 56 (147 mg, 93 %) jako bílé pevné látky, která byla použita v následných reakcích bez dalšího čištění.

Rf: 0,19 (ethylacetát:methanol 5:1).

'H NMR (300 MHz, CD₃OD): δ 6,48 (s, 1H), 5,88 (d, J = 0,9 Hz, 1H), 5,81 (d, J= 0,9 Hz, 1H), 4,35 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 4,15 (d, J= 1,8 Hz, 1H), 3,99 - 3,98 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,52 - 2,96 (m, 7H), 2,68 (d, J= 18,3 Hz, 1H), 2,24 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 1,85 (dd, J_x = 11,7 Hz, J₂ = 15,6 Hz, 1H), 0,91 (d,J= 6,6 Hz, 3H).

^,3C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 173,2, 149,1, 145,6, 144,9, 138,0, 132,2, 130,6, 121,4, 119,6,

117,4, 114,3, 109,2, 102,5, 82,3, 60,4, 58,4, 58,3, 57,8, 56,6, 50,1, 42,3, 41,6, 27,8, 26,2, 19,5, 15,5, 9,8.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₂₉H₃₅N₅O₆: 549,62. Nalezeno (M+H)⁺: 550,3. 25

Příklad 51

K roztoku 56 (10 mg, 0,018 ml) v CH₂C1₂ (0,4 ml) byl přidán fenylisothiokyanát (13 ml, 0,109 ml) a reakční směs se míchala při 23 °C 1,5 h. Směs byla zakoncentrována ve vakuu a zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografíí na otevřené koloně (SiO₂, gradient hexan až 1:1 hexan:ethylacetát) za získání 57 (8 mg, 65 %) jako bílé pevné látky.

-111 CZ 304973 B6

Rf: 0,57 (ethylacetát:methanol 10:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,88 (bs, 1H), 7,41 - 7,36 (m, 2H), 7,27 -7,22 (m, 1H), 7,02 7,00 (d, J= 8,7 Hz, 2H), 6,71 (d, J= 7,2 Hz, 1H), 6,31 (s, 1H), 6,17 (bs, 1H), 5,93 (d, J=

1,2 Hz, 1H), 5,83 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,55 (bs, 1H), 5,20 - 5,17 (m, 1H), 4,16 (d, J= 1,8 Hz, 1H), 4,05 (bs, 1H), 4,02 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,75 - 3,71 (m, 1H), 3,35 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,28 - 3,19 (m, 2H), 3,12 - 2,97 (m, 2H), 2,50 (d, 7= 18,3 Hz, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,15 - 2,09 (dd, J_x = 11,4 Hz, J₂ = 15,9 Hz, 1H), 1,95 (s, 3H), 0,88 (d, J= 6,9 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 178,5, 171,7, 147,2, 145,0, 144,3, 143,3, 137,0, 135,7, 130,6,

130,4, 129,6, 127,5, 124,3, 120,6, 117,7, 117,2, 115,3, 112,1, 108,3, 100,9, 60,9, 59,5, 56,7, 56,5, 56,2, 55,2, 54,1, 41,7, 41,1, 26,3, 25,4, 18,5, 15,8, 9,0.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C^Rto^C^S: 684,81. Nalezeno (M+H)⁺: 685,3.

Příklad 52

K roztoku 57 (45 mg, 0,065 ml) v CH₂C1₂ (0,5 ml) byl přidán při 0 °C acetylchlorid (4,67 ml, 0,65 ml) a pyridin (5,3 ml, 0,065 ml). Reakční směs se míchala 3 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt 0,1 N HC1 (5 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (RP-18, CH₃CN:H₂O 40:60) za získání 58 (14 mg, 28 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,34 (CH₃CN:H₂O 7:15).

‘HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 11,90 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 7,45 - 7,40 (m, 3H), 7,18 - 7,15 (m, 2H), 6,58 (s, 1H), 6,00 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,89 (d, 7 = 1,2 Hz, 1H), 5,70 (s, 1H), 5,37 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 4,48 (m, 1H), 4,23 (bs, 1H), 4,07 (bs, 2H), 3,85 - 3,75 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,46 3,41 (m, 2H) 3,24 - 3,20 (m, 1H), 3,00 - 2,95 (m, 1H), 2,87 - 2,75 (m, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,85 (dd, 7, = 11,4 Hz, J₂ = 15,6 Hz, 1H), 1,66 (s, 3H), 0,82 (d, J= 6,0 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 182,6, 174,3, 171,0, 146,6, 144,6, 142,7, 142,3, 140,7, 140,2, 131,3, 129,8, 129,3, 128,9, 128,8, 121,5, 120,4, 117,3, 116,6, 112,8, 112,0, 111,3, 101,5, 60,5, 59,0, 57,6, 56,2, 55,9, 55,3, 55,1, 41,6, 39,4, 27,8, 26,5, 24,8, 20,2, 17,1, 15,5, 9,3.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C^NéOsS: 768,88. Nalezeno (M+H)⁺: 769,2.

- 112CZ 304973 B6

Příklad 53

Me (57)

Roztok 57 (130 mg, 0,189 ml) v dioxanu (1 ml), byla přidána 5,3 N HCl/dioxan (1,87 ml) a reakční směs se míchala při 23 °C 4 h. Pak byl do této reakční směsi přidán CH2CI2 (15 ml) a H₂O (10 ml) a organická vrstva byla slita. Vodná fáze byla zalkalizována nasyceným vod. roz. hydrogenuhličitanu sodného (60 ml) (pH = 8) při 0 °C a pak extrahována ethylacetátem (2x 50 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny (síran sodný) a zakoncentrovány ve vakuu za získání 59 (63 mg, 70 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,15 (ethylacetát.methanol 5:1).

‘HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,67 (s, 1H), 5,99 (d, J= 0,9 Hz, 1H), 5,91 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 5,10 (bs, 1H), 4,32 (d, J= 7,2 Hz, 1H), 4,25 (dd, J, = 3,6 Hz, J₂ = 9,3 Hz, 1H), 3,7 (s, 3H), 3,71 3,64 (m, 2H), 3,50 (dd, J, = 2,4 Hz, J₂ = 15,9 Hz, 1H), 3,42 - 3,37 (m, 2H), 3,16 (dd, J, = 3,6 Hz, J₂ = 12,9 Hz, 1H), 2,57 (dd, J, = 9,3 Hz, J₂ = 12,9 Hz, 1H), 2,27 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,91 (dd, J, = 12,0 Hz, J₂= 15,9 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₂6H3₀N₄O₅: 478,5. Nalezeno (M+H)⁺: 479,3.

Příklad 54

Roztok 43 (20 mg, 0,0338 ml) v CH₂C1₂ (0,3 ml), při 0 °C byl přidán cinnamoylchlorid (5,63 mg, 0,0338 mmol) a pyridin (2,73 ml, 0,0338 mmol). Reakční směs se míchala 1 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt 0,1 N HC1 (5 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, EtOAc: MeOH 20:1) za získání 60 (22 mg, 90 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,56 (EtOAc:MeOH 5:1).

- 113 CZ 304973 B6 'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,51 (s, 1H), 7,50 -7,47 (m, 2H), 7,36 - 7,35 (m, 2H), 6,43 (s, 1H), 6,36 (brd, ./= 15,9 Hz, 2H), 6,01 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,90 (brd, 7= 1,5 Hz, 2H), 5,42 (t, 7 = 6,0 Hz, 1H), 4,12 - 4,07 (m, 3H), 3,96 - 3,95 (m, 1H), 3,73 (bs, 3H), 3,58 (bs, 2H), 3,39 (d, 78,7 Hz, 1H), 3,25 (d, 7 = 11,7 Hz, 1H), 3,0 (dd, J_x = 7,5 Hz, 7₂ = 17,7 Hz, 1H), 2,78 (d, 7 = 15,9 Hz, 1H), 2,67 (d, 7= 16,5 Hz, 1H), 2,29 (s, 6H), 2,23 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,82 (dd, 7, =

11,4 Hz, T₂ = 15,6 Hz, 1H), 0,83 (d, J= 6,0 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 172,0, 165,0, 146,9, 144,6, 143,1, 141,0, 140,5, 134,8, 131,0, 129,7, 129,1, 128,8, 127,8, 125,5, 123,8, 123,0, 121,1, 120,5, 117,7, 116,9, 112,8, 112,0, 101,9,

60,6, 59,2, 57,1, 56,4, 55,9, 55,3, 48,8, 41,7, 40,0, 26,5, 25,1, 20,3, 18,5, 15,7, 9,3.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C40H43N5O8: 721,8. Nalezeno (M+H)⁺: 722,3.

Příklad 55

Roztok 45 (19 mg, 0,0364 ml) v CH₂C1₂ (0,3 ml), při 0 °C byl přidán heptafluorobutyrylchlorid (5,44 mg, 0,0364 mmol) a pyridin (2,95 ml, 0,0364 mmol). Reakční směs se míchala 1 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt 0,1 N HC1 (5 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, EtOAc: MeOH 20:1) za získání 61 (11,7 mg, 45 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,76 (EtOAc:MeOH 5:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,46 (s, 1H), 6,12 (bs, 1H), 5,98 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,93 (d, 7=

1,2 Hz, 1H), 5,72 (bs, 1H), 4,13 - 4,11 (m, 2H), 4,0 (d, 7= 2,4 Hz, 1H), 3,98 - 3,96 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,39 (d, 7= 7,5 Hz, 1H), 3,39 - 3,28 (m, 2H), 3,09 (dd, 7 = 8,1 Hz, 7₂ = 18,0 Hz, 1H), 2,80 (d, 7= 16,2 Ηζ,ΙΗ), 2,46 (d, 7= 18,3 Hz, 1H), 2,32 (s, 6H), 2,21 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,80 (dd, 7] = 12,0 Hz, 7₂ = 16,2 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C32H31F7N4O7: 716,6. Nalezeno (M+H)⁺: 717,2.

-114CZ 304973 B6

Roztok 43 (24 mg, 0,04 mmol) v CH2CI2 (0,3 ml), při 0 °C byl přidán butyrylchlorid (4,15 ml, 0,04 mmol) a pyridin (3,28 ml, 0,04 mmol). Reakční směs se míchala 1 h a pak byl roztok zředěn CH2CI2 (10 ml) a promyt 0,1 N HC1 (5 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, EtOAc: MeOH 20:1) za získání 62 (24 mg, 90 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,35 (EtOAc:MeOH 5:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,47 (s, 1H), 6,10 (d, J= 6,5 Hz, 1H), 6,0 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,91 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,86 (bs, 1H), 5,31 (d, 7= 6,9 Hz, 1H), 4,11-4,06 (m, 3H), 3,85 - 3,81 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,59-3,53 (m, 2H), 3,38 (d, J= 7,5 Hz, 1H), 3,27-3,22 (m, 1H), 3,0 (dd, 7, = 7,8 Hz, 7₂ = 17,4 Hz, 1H), 2,79 (d, 7= 15,3 Hz, 1H), 2,63 (d, 7= 17,7 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,0 (s, 3H), 1,80 (dd, 7 = 12,0 Hz, 7₂ = 15,9 Hz, 1H), 1,58 (q, 7= 7,2 Hz, 2H), 0,89 (t, 7 =

7,2 Hz, 3H), 0,76 (d, 7= 6,6 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro Cs-sHoNý-O^: 661,64. Nalezeno (M+H)⁺: 662,3.

Příklad 57

C₉H₇CIO. Py,

CH₂CI₂,0°, 1h.

Roztok 43 (19 mg, 0,0364 ml) v CH₂C1₂ (0,3 ml), při 0 °C byl přidán cinnamoylchlorid (6,06 mg, 0,0364 mmol) a pyridin (2,95 ml, 0,0364 mmol). Reakční směs se míchala 1 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt 0,1 N HC1 (5 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, EtOAc: MeOH 20:1) za získání 63 (20,1 mg, 85 %) jako bílé pevné látky.

- 115CZ 304973 B6

Rf: 0,65 (EtOAc:MeOH 5:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,39 - 7,29 (m, 5H), 6,42 (s, 1H), 6,01 (d, 7 = 1,5 Hz, 1H), 5,92 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,73 (bs, 1H), 5,24 (t, 7= 6,8 Hz, 1H), 4,12 - 4,08 (m, 3H), 3,66 - 3,64 (m, 2H), 3,58 (bs, 3H), 3,36 (d, 7= 8,7 Hz, 1H), 3,29 (d, 7= 12 Hz, 1H), 2,98 (dd, Λ = 8,1 Hz, 7₂ = 18 Hz, 1H), 2,33 (s, 6H), 2,29 (s,3H), 2,01 (s, 3H), 1,84 (dd,7, = 12,0 Hz,7₂ = 15,9 Hz, 1H). ESI-MS m/z: Calcd. pro C^H^N^: 650,72. Nalezeno (M+H)⁺: 651,2.

Příklad 58

Roztok 43 (20 mg, 0,0338 ml) v CH₂C1₂ (0,3 ml), při 0 °C byl přidán 3-chloropropionylchlorid (3,22 ml, 0,0338 mmol) a pyridin (2,73 ml, 0,0338 mmol). Reakční směs se míchala 1 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt 0,1 N HC1 (5 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, EtOAc: MeOH 20:1) za získání 64 (20,5 mg, 89 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,32 (EtOAc:MeOH 5:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,48 (s, 3H), 6,28 (m, 1H), 5,99 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,91 (d, 7 =

1,2 Hz, 1H), 5,86 (bs, 1H), 5,31 (m, 1H), 4,08 - 4,07 (m, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,72 - 3,53 (m, 5H), 3,39 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 3,24 (d, 7= 12,0 Hz, 1H), 3,00 (dd, 7i = 8,1 Hz, 7₂ = 18,0 Hz, 1H), 2,79 (d, 7= 13,5 Hz, 1H), 2,50 (t, 7= 6,3 Hz, 2H), 2,32 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,0 (s, 3H), 1,79 (dd, 7, = 12,3 Hz, 7₂ = 14,8 Hz, 1H), 0,81 (d, 7= 6,3 Hz, 3H).

Příklad 59

butyrylehlorid

Py.CHzCIa.lh.OO

(65)

Roztok 43 (19 mg, 0,0364 ml) v CH₂C1₂ (0,3 ml), při 0 °C byl přidán butyrylehlorid (3,78 ml, 0,0364 mmol) a pyridin (2,95 ml, 0,0364 mmol). Reakční směs se míchala 1 h a pak byl roztok

-116CZ 304973 B6 zředěn CH2CI2 (10 ml) a promyt 0,1 N HC1 (5 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografíí na otevřené koloně (SiO₂, EtOAc: MeOH 20:1) za získání 64 (19 mg, 87 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,60 (EtOAc:MeOH 5:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,50 (s, 1H), 5,98 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,91 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,75 (s, 1H), 5,01 (t, 7 = 6,4 Hz, 1H), 4,10 - 4,09 (m, 1H), 4,06 (d, 7= 2,1 Hz, 1H), 4,03 - 4,02 (m, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,67 - 3,60 (m, 1H), 3,42 - 3,35 (m, 2H), 3,29 (d, 7= 12,0 Hz, 1H), 3,02 (dd, 7] = 7,8 Hz, 7₂ = 17,7 Hz, 1H), 2,79 (d, 7= 14,1 Hz, 1H), 2,56 (d, 7= 18,3 Hz, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 1,78 (dd, 7, = 12,0 Hz, 7₂ = 15,9 Hz, 1H), 1,63 (s, 3H), 1,53 1,46 (m, 2H), 1,28 - 1,16 (m, 2H), 0,68 (t, 7= 7,2 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₂H₃₈N₄O₇: 590,67. Nalezeno (M+H)⁺: 591,2.

Příklad 60

K roztoku 50 (31,7 mg, 0,044 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/0,5 ml) byl přidán AgNO₃ (225 mg, 1,32 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 17 h. Pak byl při 0°C přidán solný roztok (10 ml) a vod. nas. roz. NaHCO₃ (10 ml) a směs se míchala 15 min, zfiltrovala přes vrstvu celitu a promyla CH₂C1₂ (20 ml). Roztok byl slit a organická vrstva byla sušena a zakoncentrována za vakua. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografíí na otevřené koloně (SiO₂, EtOAc:MeOH 5:1) za získání 66 (16 mg, 51 %)jako bílé pevné látky.

Rf: 0,26 (EtOAc:MeOH 5:1).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,66 - 7,42 (m, 4H), 7,20 (bs, 1H), 6,44 (s, 1H), 5,97 (b, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,90 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,76 (bs, 1H), 5,28 (bs, 1H), 4,54 (bs, 1H), 4,43 (bs, 1H), 4,00 (bs, 1H), 3,68 - 3,57 (m, 4H), 3,47 (d, 7= 3,3 Hz, 1H), 3,40 (d, J= 11,7 Hz, 1H), 3,17 (d, 7= 6,9 Hz, 1H), 2,92 (dd, J, = 8,1 Hz, 7₂ = 17,7 Hz, 1H), 2,74 (d, J= 17,1 Hz, 1H), 2,48 (d, 7= 18,6 Hz, 1H), 2,32 (s, 6H), 2,28 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,76 (dd, 7, = 12,0 Hz, 7₂ = 16,2 Hz, 1H). ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₇H₃₈F₃N₃O₈: 709. Nalezeno (M+H)⁺: 692,3.

-117CZ 304973 B6

Příklad 61

AgNO₃, CH₃CN/H₂O 24h. 23 °C

K roztoku 53 (57 mg, 0,0828 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/0,5 ml) byl přidán AgNO₃ (650 mg, 3,81 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 24 h. Pak byl při 0 °C přidán solný roztok (10 ml) a vod. nas. roz. NaHCO₃ (10 ml) a směs se míchala 15 min, zfiltrovala přes vrstvu celitu a promyla CH₂C1₂ (20 ml). Roztok byl slit a organická vrstva byla sušena a zakoncentrována za vakua. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, EtOAc:MeOH 5:1) za získání 67 (28 mg, 50 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,28 (EtOAc:MeOH 10:1).

’HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,47 (s, 1H), 5,97 (s, 1H), 5,88 (s, 1H), 5,35 (bs, 1H), 4,51 (bs, 1H), 4,41 (bs, 1H), 4,12 - 4,05 (m, 1H), 4,00 (d, J= 2,7 Hz, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,64 (bs, 1H), 3,46 (d, J= 3,3 Hz, 1H), 3,34 (d, 7= 11,4 Hz, 1H), 3,18 (d, 7= 7,5 Hz, 1H), 2,95 (dd, 7 = 8,4 Hz, 7 = 18,3 Hz, 1H), 2,70 (d, 7= 15,6 Hz, 1H), 2,48 (d, 7= 17,7 Hz, 1H), 2,28 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 1,98 (s, 3H), 1,68 (dd, 7 = 12 Hz, 7₂ = 15,6 Hz, 1H), 0,86 (d, 7= 6,3 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₂H₃₇F₃N₄O9: 678,66. Nalezeno (M⁺-17): 661,2.

Příklad 62

K roztoku 48 (32 mg, 0,0520 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/0,5 ml) byl přidán AgNO₃ (270 mg, 1,58 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 24 h. Pak byl při 0 °C přidán solný roztok (10 ml) a vod. nas. roz. NaHCO₃ (10 ml) a směs se míchala 15 min, zfiltrovala přes vrstvu celitu a promyla CH₂C1₂ (20 ml). Roztok byl slit a organická vrstva byla sušena a zakoncentrována za vakua. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, EtOAc:MeOH 5:1) za získání 68 (18 mg, 50 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,40 (EtOAc.MeOH 5:1).

-118CZ 304973 B6 'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,50 (s, 1H), 5,95 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 5,88 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,23 (d, J= 6,9 Hz, 1H), 4,45 (d, 3,3 Hz, 1H), 4,38 (s, 1H), 4,01 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 3,78 (m,

1H), 3,77 (s, 3H), 3,41 - 3,37 (m, 1H), 3,17 - 3,15 (m, 1H), 2,96 (dd, Jj = 7,8 Hz, J₂ = 18,0 Hz, 1H), 2,70 (d, /= 15,3 Hz, 1H), 2,40 (d, J= 18,0 Hz, 1H), 2,30 (s, 6H), 2,27 (s, 3H), 1,76 - 1,65 (m, 1H), 1,35 - 1,25 (m, 2H), 0,89 - 0,82 (m, 1H), 0,69 (d, J= 6,6 Hz, 3H), 0,58 (d, ./ = 6,6 Hz, 3H).

Příklad 63

K roztoku 51 (27 mg, 0,04 mmol) VCH3CN/H2O (1,5 ml/0,5 ml) byl přidán AgNO₃ (204 mg, 1,19 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 24 h. Pak byl při 0 °C přidán solný roztok (10 ml) a vod. nas. roz. NaHCO₃ (10 ml) a směs se míchala 15 min, zfíltrovala přes vrstvu celitu a promyla CH₂C1₂ (20 ml). Roztok byl slit a organická vrstva byla sušena a zakoncentrována za vakua. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, EtOAc:MeOH 5:1) za získání 69 (10 mg, 38 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,38 (EtOAc:MeOH 5:1).

^]HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,48 (s, 1H), 6,16 (bs, 1H), 5,98 (d, /= 1,5 Hz, 1H), 5,89 (d, J=

1,5 Hz, 1H), 5,33 (t, J= 6,0 Hz, 1H), 4,50 (m, 1H), 4,40 (m, 1H), 4,11 - 4,09 (m, 1H), 4,00 (d, J= 2,6 Hz, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,41 - 3,32 (m, 3H), 3,18 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 2,94 (dd, J_x = 8,4 Hz, J₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,70 (d, J= 14,4 Hz, 1H), 4,45 (d, J= 18,3 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 2,00 - 1,86 (m, 3H), 1,74 (m, 1H), 0,87 (d, J = 6,3 Hz, 6H).

Příklad 64

K roztoku 63 (15 mg, 0,023 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/0,5 ml) byl přidán AgNO₃ (118 mg, 0,691 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 24 h. Pak byl při 0 °C přidán solný roztok (10 ml) a vod. nas. roz. NaHCO₃ (10 ml) a směs se míchala 15 min, zfíltrovala přes vrstvu celitu

- 119CZ 304973 B6 a promyla CH₂C1₂ (20 ml). Roztok byl slit a organická vrstva byla sušena a zakoncentrována za vakua. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, EtOAc:MeOH 5:1) za získání 70 (20,1 mg, 85 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,43 (EtOAc:MeOH 5:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,38 - 7,28 (m, 5H), 6,48 (s, 1H), 5,98 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,91 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,75 (bs, 1H), 5,38 (brd, 1H), 5,30 (bs, 1H), 4,53 (m, 1H), 4,42 (m, 1H), 4,02 (d, J= 2,7 Hz, 1H), 3,78 - 3,65 (m, 5H), 3,46 - 3,40 (m, 2H), 3,17 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 2,94 (dd, J_x = 7,8 Hz, J₂ = 17,7 Hz, 1H), 2,73 (d, J= 16,8 Hz, 1H), 2,45 (d, J= 18,0 Hz, 1H), 2,31 (s, 6H), 2,28 (s, 3H), 1,97 (s, 3H), 1,77 (dd, J, = 12,0 Hz, J₂ = 15,3 Hz, 1H).

Příklad 65

(71)

K roztoku 65 (25 mg, 0,042 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/0,5 ml) byl přidán AgNO₃ (215 mg, 1,269 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 24 h. Pak byl při 0 °C přidán solný roztok (10 ml) a vod. nas. roz. NaHCO₃ (10 ml) a směs se míchala 15 min, zfiltrovala přes vrstvu celitu a promyla CH₂C1₂ (20 ml). Roztok byl slit a organická vrstva byla sušena a zakoncentrována za vakua. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, EtOAc:MeOH 5:2) za získání 71(16 mg, 65 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,05 (EtOAc:MeOH 5:2).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,50 (s, 1H), 5,95 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,78 (s, 1H), 5,19 (bs, 1H), 4,45 (d, /= 3,3 Hz, 1H), 4,37 (bs, 1H), 4,11 (brd, J= 4,8 Hz, 1H), 4,01 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 3,76 (s, 1H), 3,71 - 3,69 (m, 1H), 3,49 - 3,35 (m, 1H), 3,24 (d, J= 13,5 Hz, 1H), 3,15 (d, /= 9,3 Hz, 1H), 2,95 (dd, J, = 8,1 Hz, J₂ = 17,7 Hz, 1H), 2,70 (d, J= 15,6 Hz, 1H), 2,40 (d, /= 18,0 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 1,96 (s, 3H), 1,75 - 1,66 (m, 1H), 1,52 - 1,17 (m, 2H), 0,66 (d, 7=7,2 Hz, 3H).

Příklad 66

- 120CZ 304973 B6

K roztoku 45 (35 mg, 0,0672 mmol) v CH2CI2 (0,3 ml) byl přidán při 0 °C hydrocinnamoylchlorid (11,58 μΐ, 0,00672 mmol) a pyridin (5,43 μΐ, 0,0672 mmol). Reakční směs se míchala

1.5 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt 0,1 N HC1 (5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO4, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient hex:ethylacetát 2:1 až ethylacetát) za získání 72 (30 mg, 65 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,51 (ethylacetát:MeOH 10:1).

‘HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,23 - 7,12 (m, 3H), 7,05 - 7,00 (m, 2H), 5,97 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,91 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,73 (s, 1H), 5,04 (brt, 1H), 4,08 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 4,02 (bs, 1H), 4,00 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 3,58 (dd, = 4,5 Hz, J₂ = 13,8 Hz, 1H), 3,47 (bs, 3H), 3,33 (d, J =

7.5 Hz, 1H), 3,29 (dt, J_x = 2,7 Hz, J₂ = 11,7 Hz, 1H), 3,00 (dd, J, = 7,8 Hz, J₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,79 (d, J= 14,1 Hz, 1H), 2,58 - 2,50 (m, 3H), 2,32 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,03 (s, 3H), 2,01 (s, 3H), 1,94- 1,76 (m, 4H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C37H40N4O7: 652,7. Nalezeno (M+Na)⁺: 675,3.

Příklad 67

K roztoku 45 (45 mg, 0,0576 mmol) v CH₂C1₂ (0,3 ml) byl přidán při 0 °C fenylacetylchlorid (7,6 μΐ, 0,00576 mmol) a pyridin (4,6 μΐ, 0,0576 mmol). Reakční směs se míchala 1 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt 0,1 N HC1 (5 ml). Organická vrstva byla sušena Ňa₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient hex:ethylacetát 3:1 až hex:ethylacetát 1:1) za získání 73 (25,8 mg, 70 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,5 (hex:ethylacetát:MeOH 5:10:2).

‘HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,18 - 7,17 (m, 3H), 6,85 (bs, 2H), 6,54 (s, 1H), 5,89 (d, J=

1,5 Hz, 1H), 5,83 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,76 (s, 1H), 5,08 (bs, 1H), 4,12 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 4,09 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 3,98 (bs, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,51 - 3,46 (m, 2H), 3,35 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 3,25 (dt, J_x = 2,7 Hz, J₂ = 12,0 Hz, 1H), 3,03 (d, J= 8,7 Hz, 1H), 3,02 - 2,94 (m, 2H), 2,75 (d, J= 16,8 Hz, 1H), 2,63 (d, J= 18,0 Hz, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 1,98 (s, 3H), 1,80 (dd, Ji = 12,0 Hz, J₂ =16,2 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₆H₃₈N₄O₇: 638,7. Nalezeno (M+l)⁺: 639,2.

- 121 CZ 304973 B6

Příklad 68

K roztoku 45 (30 mg, 0,0576 mmol) v CH₂C1₂ (0,3 ml) byl přidán při 0 °C propyonylchlorid (5 μΐ, 0,00576 mmol) a pyridin (4,6 μΐ, 0,0576 mmol). Reakční směs se míchala lha pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt 0,1 N HC1 (5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO4, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografíí na otevřené koloně (SiO₂, gradient hex.ethylacetát 5:1 až hex:ethylacetát 1:1) za získání 74 (23 mg, 70 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,59 (hex:ethylacetát:MeOH 5:10:2).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,50 (s, 1H), 5,97 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,91 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,76 (s, 1H), 5,00 (t, 1H), 4,09 (d, /=1,2 Hz, 1H), 4,04 )bs, 2H), 3,74 (s, 3H), 3,62 (dd, /, =

6,6 Hz, J₂ = 13,2 Hz, 1H), 3,43 (bs, 1H), 3,37 (d, /= 8,4 Hz, 1H), 3,29 (d, /= 12,0 Hz, 1H), 3,02 (dd, /, = 8,1 Hz, J₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,80 (d, /= 14,4 Hz, 1H), 2,55 (d, /= 18,0 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,78 (dd, /, = 12,0 Hz, J₂ = 15,6 Hz, 1H), 1,64 - 1,50 (m, 2H), 0,70 (t,/= 7,8 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₁H₃₆N₄O7: 576,6. Nalezeno (M+l)⁺: 577,2.

Příklad 69

cA\CH₂)₁₂ (75) I

K roztoku 45 (15 mg, 0,0288 mmol) v CH₂C1₂ (0,25 ml) byl přidán při 0 °C myristoylchlorid (7,83 μΐ, 0,0288 mmol) a pyridin (2,3 μΐ, 0,0288 mmol). Reakční směs se míchala 1 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt 0,1 N HC1 (5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografíí na otevřené koloně (SiO₂, gradient hex:ethylacetát 6:1 až hex:ethylacetát 1:1) za získání 75 (15 mg, 71 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,65 (hex:ethylacetát:MeOH 10:10:1).

- 122CZ 304973 B6 'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,49 (s, 1H), 5,97 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,91 (d, J= 1,2 Hz, 1H),

5,72 (s, 1H), 4,99 (t, 1H), 4,09 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 4,05 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 4,02 (bs, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,61 - 3,59 (m, 1H), 3,39 (bs, 1H), 3,35 (d, 7= 7,8 Hz, 1H), 3,29 (d, 7= 12,3 Hz, 1H), 3,04 (dd, 7, = 8,1 Hz, 7₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,78 (d, 7= 15,6 Hz, 1H), 2,55 (d, 7= 18,3 Hz, 1H), 2,32 (s, 6H), 2,25 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,78 (dd, 7 = 12,3 Hz, 7₂ = 15,0 Hz, 1H), 1,25 - 1,24 (m, 12H), 0,87 (t, 7= 6,0 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₄₂H₅₈N₄O₇: 730,9. Nalezeno (M+l)⁺: 731,4.

Příklad 70

O^(CH₂),6 (76) | ²

K roztoku 45 (15 mg, 0,0288 mmol) v CH₂C1₂ (0,25 ml) byl přidán při 0 °C stearoylchlorid (9,7 μΐ, 0,0288 mmol) a pyridin (2,3 μΐ, 0,0288 mmol). Reakční směs se míchala lha pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt 0,1 N HC1 (5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient hex:ethylacetát 3:1 až hex:ethylacetát 1:1) za získání 76 (15 mg, 70 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,46 (hex:ethylacetát:MeOH 10:10:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,49 (s, 1H), 5,98 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,91 (d, 7= 1,5 Hz, 1H),

5,73 (s, 1H), 4,99 (t, 7= 5,7 Hz, 1H), 4,09 (d, 7= 1,8 Hz, 1H), 4,05 (d, 7= 2,4 Hz, 1H), 4,01 (bs, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,61 - 3,59 (m, 1H), 3,38 (bs, 1H), 3,36 (d, 7= 7,2 Hz, 1H), 3,28 (d, 7 = 12,0 Hz, 1H), 3,03 (dd, 7, = 7,8 Hz, 7₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,78 (d, 7= 15,9 Hz, 1H), 2,57 (d, 7 =

18,3 Hz, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,77 (dd, 7, = 11,7 Hz, 7₂ = 15,6 Hz, 1H), 1,25 - 1,24 (m, 16H), 0,87 (t, 7= 6,3 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₄₆H66N₄O₇: 786,4. Nalezeno (M+22)⁺: 809,5.

Příklad 71

- 123 CZ 304973 B6

K roztoku 45 (31 mg, 0,0595 mmol) v CH₂C1₂ (0,3 ml) byl přidán při 0 °C hexanoylchlorid (8,32 μΐ, 0,0595 mmol) a pyridin (4,8 μΐ, 0,0595 mmol). Reakční směs se míchala 1,5 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt 0,1 N HCI (5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient hex:ethylacetát 3:2 až ethylacetát) za získání 77 (26 mg, 70 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,65 (ethylacetát:MeOH 10:1).

’HNMR (300 MHz, CDCf): δ 6,50 (s, 1H), 5,98 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,91 (d, J= 1,5 Hz, 1H),

5,74 (s, 1H), 5,00 (t, J= 5,4 Hz, 1H), 4,09 (d, J= 2,7 Hz, 1H), 4,05 (d, /= 2,4 Hz, 1H), 4,01 (bs, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,61 - 3,58 (m, 1H), 3,02 (dd, J, = 8,1 Hz, /₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,78 (d, J =

14,4 Hz, 1H), 2,56 (d, J= 18,3 Hz, 1H), 2,31 (s, 6H), 2,25 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,78 (dd, / = 12,0 Hz, /₂ = 15,9 Hz, 1H), 1,53 - 1,40 (m, 2H), 1,29 - 1,12 (m, 4H), 1,07-0,97 (m, 2H), 0,81 (t,/=7,5 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C34H42N4O7: 618,7. Nalezeno (M+l)⁺: 619,3.

Příklad 72

prupionylchlorid py CH₂CI₂, 0°C. 1h

K roztoku 45 (20 mg, 0,0384 mmol) v CH₂Cl₂ (0,3 ml) byl přidán při 0 °C trans-krotonylchlorid (3,68 μΐ, 0,0384 mmol) a pyridin (3,1 μΐ, 0,0384 mmol). Reakční směs se míchala 1 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt 0,1 N HCI (5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient hex:ethylacetát 4:1 až ethylacetát) za získání 78 (16 mg, 71 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,55 (ethylacetát:MeOH 5:1).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,50 - 6,40 (m, 1H), 6,46 (s, 1H), 5,97 (d, /= 1,5 Hz, 1H), 5,91 (d, /= 1,5 Hz, 1H), 5,77 (s, 1H), 5,08 (bst, 1H), 4,10 (d, /= 1,5 Hz, 1H), 4,05 (m, 2H), 3,78 (s, 3H), 3,67 (bs, 1H), 3,42 - 3,29 (m, 3H), 3,04 (dd, / = 8,1 Hz, /₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,78 (d, / =

15,3 Hz, 1H), 2,53 (d, /= 18,3 Hz, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 1,98 (s, 3H), 1,79 (dd, / = 12,0 Hz, /₂ = 15,6 Hz, 1H), 1,70 (dd, /, = 1,2 Hz, /₂ = 6,6 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C32H3₆N₄O₇: 588,6. Nalezeno (M+l)⁺: 589,3.

- 124CZ 304973 B6

Příklad 73

K roztoku 45 (50 mg, 0,096 mmol) v CH₂C1₂ (0,5 ml) byl přidán při 0 °C Cbz-L-Val-OH (24,12 mg, 0,096 mmol) a karbonyldiimidazol (18,7 mg, 0,115 mmol). Reakční směs se míchala 16 h při pokojové teplotě a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (15 ml) a promyt 0,1 N HC1 (10 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, hex:EtOAc 4:1) za získání 79 (25 mg, 34 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,7 (ethylacetát:MeOH 5:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,33 - 7,28 (m, 5H), 6,45 (s, 1H), 5,96 (s, 1H), 5,90 (bs, 1H), 5,82 (s, 1H), 5,53 (bs, 1H), 5,09 (bs, 1H), 5,05 (d, 7= 3,3 Hz, 2H), 4,16 (bs, 1H), 4,09 (d, J=

2,4 Hz, 1H), 4,02 (bs, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,74 (m, 1H), 3,37 - 3,35 (m, 2H), 3,26 - 3,21 (m, 3H), 3,00 (dd, J, = 8,1 Hz, 7₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,77 (d, 7= 15,6 Hz, 1H), 2,55 (d, 7= 18,0 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 1,98 (s, 3H), 1,70 - 1,66 (m, 1H), 0,65 (d, 7= 6,6 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C41H47N5O9: 753,8. Nalezeno (M+22)⁺: 754,2.

Příklad 74

(80)

K roztoku 72 (18 mg, 0,0275 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/0,5 ml) byl přidán AgNO₃(140,5 mg, 0,827 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 24 h. Pak byl při 0 °C přidán solný roztok (10 ml) a vod. nas. roz. NaHCO₃ (10 ml) a směs se míchala 15 min, zfiltrovala přes vrstvu celitu a promyla CH₂C1₂ (20 ml). Roztok byl extrahován a organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a zakoncentrována za vakua. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, EtOAc:MeOH 10:1) za získání 80 (13 mg, 74 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,37 (EtOAc:MeOH 5:1).

- 125 CZ 304973 B6 'H NMR (300 MHz, CDCfi): δ 7,23 - 7,11 (m, 3H), 7,06 - 7,01 (m, 2H), 6,43 (s, 1H), 5,95 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 5,88 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,71 (bs, 1H), 5,19 (bs, 1H), 4,45 (d, J= 3,0 Hz, 1H), 4,37 (bs, 1H), 4,02 - 3,96 (m, 1H), 3,75 - 3,68 (m, 2H), 3,48 (s, 3H), 3,41 - 3,36 (m, 2H), 3,28 3,24 (m, 1H), 3,15 (d, J= 7,5 Hz, 1H), 3,01 - 2,88 (m, 2H), 2,70 (d, J= 15,9 Hz, 1H), 2,57 2,51 (m, 2H), 2,31 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,00 (s, 6H), 1,77 - 1,68 (m, 1H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃6H₄₁N₃O8: 643,3. Nalezeno (M-17)⁺: 626,2.

Příklad 75

K roztoku 73 (23 mg, 0,036 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/0,5 ml) byl přidán AgNO₃ (183 mg, 1,08 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 24 h. Pak byl při 0 °C přidán solný roztok (10 ml) a vod. nas. roz. NaHCCfi (10 ml) a směs se míchala 15 min, zfiltrovala přes vrstvu celitu a promyla CH₂C1₂ (20 ml). Roztok byl extrahován a organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a zakoncentrována za vakua. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient EtOAc:MeOH 5:1 až MeOH) za získání 81 (9,3 mg, 41 %) jako bílé pevné látkyRf: 0,3 (EtOAc.MeOH 5:1).

’HNMR (300 MHz, CDCfi): δ 7,17-7,13 (m, 3H), 6,85 (m, 2H), 6,54 (s, 1H), 5,90 (d, J =

1,5 Hz, 1H), 5,84 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,22 (m, 1H), 4,43 (bs, 1H), 4,39 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 4,00 (d, 7 = 2,4 Hz, 1H), 3,71 (s, 3H) 3,64 - 3,29 (m, 2H), 3,16 (d, 7= 8,7 Hz, 1H), 2,98 - 2,88 (m, 3H), 2,67 (d, 7= 14,8 Hz, 1H), 2,45 (d, 7= 18,3 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 1,97 (s, 3H), 1,68 (dd, 7 = 12,8 Hz, 7₂ = 14,7 Hz, 1H).

ESI—MS m/z: Calcd. pro C₃₅H₃9N₃O₈: 629,7. Nalezeno (M —OH): 612,3.

Příklad 76

- 126CZ 304973 B6

K roztoku 74 (20 mg, 0,0346 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/l ml) byl přidán AgNO₃ (176,6 mg, 1,04 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 24 h. Pak byl při 0 °C přidán solný roztok (10 ml) a vod. nas. roz. NaHCO₃ (10 ml) a směs se míchala 15 min, zfiltrovala přes vrstvu celitu a promyla CH₂C1₂ (20 ml). Roztok byl extrahován a organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a zakoncentrována za vakua. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, EtOAc:MeOH 1:1) za získání 82 (12,9 mg, 66 %)jako bílé pevné látky.

Rf: 0,3 (EtOAc:MeOH 5:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,50 (s, 1H), 5,95 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,89 (d, 7 = 1,2 Hz, 1H), 5,19 (d, 1H), 4,46 (d, 7= 3,0 Hz, 1H), 4,38 (d, 7= 1,8 Hz, 1H), 4,00 (d, 7= 2,1 Hz, 1H), 3,74 (s, 3H) 3,70 - 3,66 (m, 1H), 3,38 (d, 7 = 2,7 Hz, 7₂ = 13,2 Hz, 1H), 3,25 (d, J= 13,8 Hz, 1H), 3,16 (d, 7= 7,5 Hz, 1H) 2,96 (dd, J_x = 7,2 Hz, 7₂ = 17,7 Hz, 1H), 2,71 (d, 7= 15,6 Hz, 1H), 2,40 (d, 7= 18,0 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 1,97 (s, 3H), 1,71 (dd, J_x = 11,7 Hz, 7₂= 15,3 Hz, 1H), 1,60 - 1,48 (m, 2H), 0,67 (t, 7= 7,5 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₀H₃₇N₃O₈: 567,6. Nalezeno (M-17): 550,2.

Příklad 77

AgNO₃

CH₃CN/H₂O rt, 24 h

(83)

K roztoku 77 (14 mg, 0,0226 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/l ml) byl přidán AgNO₃ (115,3 mg, 0,68 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 24 h. Pak byl při 0 °C přidán solný roztok (10 ml) a vod. nas. roz. NaHCO₃ (10 ml) a směs se míchala 15 min, zfiltrovala přes vrstvu celitu a promyla CH₂C1₂ (15 ml). Roztok byl extrahován a organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a zakoncentrována za vakua. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, EtOAc:MeOH 5:1) za získání 83 (9 mg, 65 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,25 (EtOAc:MeOH 5:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,50 (s, 1H), 5,96 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,89 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,73 (bs, 1H), 4,44 (d, 7= 3,6 Hz, 1H), 4,37 (s, 1H), 4,01 (d, 7= 2,4 Hz, 1H), 3,77 (s, 3H) 3,73 3,64 (m, 1H), 3,39 (dt, J, = 8,1 Hz, J₂ = 9,3 Hz, 1H), 3,22 (d, 7= 14,5 Hz, 1H), 3,16 (d, 7 =

7,5 Hz, 1H), 2,95 (dd, 7, = 8,1 Hz, 7₂ = 17,4 Hz, 1H), 2,70 (d, 7= 14,5 Hz, 1H), 2,41 (d, 7=

18,3 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 1,96 (s, 3H), 1,71 (dd, J_x = 12,0 Hz, 7, = 15,6 Hz, 1H), 1,48 - 1,46 (m, 2H), 1,24 - 1,10 (m, 4H), 1,00 - 0,95 (m, 2H), 0,80 (t, J= 7,2 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₃H4₃N₃O₈: 609,7. Nalezeno (M-17)⁺: 592,3.

- 127CZ 304973 B6

Příklad 78

K roztoku 78 (15 mg, 0,025 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/l ml) byl přidán AgNO₃ (130 mg, 0,764 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 24 h. Pak byl při 0 °C přidán solný roztok (10 ml) a vod. nas. roz. NaHCO₃ (10 ml) a směs se míchala 15 min, zfiltrovala přes vrstvu celitu a promyla CH₂C1₂ (15 ml). Roztok byl extrahován a organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a zakoncentrována za vakua. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient EtOAc až EtOAciMeOH 1:1) za získání 84 (10 mg, 71 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,19 (EtOAc:MeOH 5:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,49 (s, 1H), 6,47 - 6,37 (m, 1H), 5,94 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,88 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,77 (bs, 1H), 5,26 (d, 7= 5,7 Hz, 1H), 4,93 (d, 7= 14,7 Hz, 1H), 4,48 (d, 7=

11,1 Hz, 1H), 4,38 (d, J= 2,7 Hz, 1H), 4,02 (d, 7= 2,1 Hz, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,76 - 3,72 (m, 1H), 3,42 (dt, 7 = 2,7 Hz, 7₂ = 18,0 Hz, 1H), 2,70 (d, 7= 15,0 Hz, 1H), 2,38 (d, 7= 18,0 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 1,95 (s, 3H), 1,72 (dd, 7 = 12,3 Hz, 7₂ = 17,4 Hz, 1H), 1,98 (dd, 7j =

1,5 Hz, T₂ = 6,9 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃iH₃₇N₃O₈: 579,6. Nalezeno (M-17)⁺: 562,3.

Příklad 79

K roztoku 43 (25 mg, 0,422 mmol) v CH₂C1₂ (0,3 ml) byl přidán při 0 °C hydrocinnamoylchlorid (6,27 μΐ, 0,422 mmol) a pyridin (3,41 μΐ, 0,422 mmol). Reakční směs se míchala 1 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt 0,1 N HC1 (5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient hex:EtOAc 4:1 až EtOAc) za získání 85 (30 mg, 68 %) jako bílé pevné látky.

-128CZ 304973 B6

Rf: 0,54 (EtOAc:MeOH 10:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,28 - 7,14 (m, 5H), 6,45 (s, 1H), 6,07 (brd, 1H), 5,99 (d, 7=

1.2 Hz, 1H), 5,90 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,88 (s, 1H), 5,31 (brt, 1H), 4,09 - 4,06 (m, 3H), 3,80 3,75 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,57 - 3,51 (m, 2H), 3,38 (d, 7= 7,5 Hz, 1H), 3,24 (m, 1H), 3,00 (dd, 7 = 8,4 Hz, 7₂ = 18,0 Hz, 1H), 2,89 - 2,85 (m, 2H), 2,79 (d, 7= 16,5 Hz, 1H), 2,61 (d, 7 = 18,0 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,79 (dd, 7, = 12,3 Hz, 7₂ =

16.2 Hz, 1H), 0,72 (d, 7= 6,6 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₄oH4₅N₅0₈: 723,8. Nalezeno (M+23)⁺: 746,3.

Příklad 80

K roztoku 43 (20 mg, 0,0338 mmol) vCH₂C1₂ (0,25 ml) byl přidán při 0 °C hexanoylchlorid (4,72 μΐ, 0,0338 mmol) a pyridin (2,73 μΐ, 0,0338 mmol). Reakční směs se míchala 1 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt 0,1 N HC1 (5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient hex:EtOAc 1:1 až EtOAc) za získání 86 (10 mg, 43 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,74 (EtOAc:MeOH 10:1).

’H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,47 (s, 1H), 6,12 (brd, 1H), 6,00 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,91 (d, 7=

1,2 Hz, 1H), 5,30 (m, 1H), 4,09 - 3,99 (m, 3H), 3,84 - 3,82 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,57 - 3,55 (m, 2H), 3,39 (d, 7= 6,9 Hz, 1H), 3,24 (d, 7= 12,0 Hz, 1H), 3,04 (dd, 7_t = 9,0 Hz, 7₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,77 (d, 7= 115,3 Hz, 1H), 2,63 (d, 7= 18,0 Hz, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,80 (dd, Λ = 11,7 Hz, 7₂ = 15,6 Hz, 1H), 1,55 - 1,50 (m, 2H), 1,30 - 1,22 (m, 6H), 0,87 (t, 7= 6,9 Hz, 3H), 0,75 (d, J= 6,6 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃7H₄₇N₅0g: 689,8. Nalezeno (M+l)⁺: 690,3.

- 129CZ 304973 B6

Příklad 81

K roztoku 43 (33 mg, 0,0557 mmol) v CH₂C1₂ (0,4 ml) byl přidán při 0 °C fenylacetylchlorid (7,36 μΐ, 0,0557 mmol) a pyridin (4,5 μΐ, 0,0557 mmol). Reakční směs se míchala 1 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt 0,1 N HC1 (5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografíí na otevřené koloně (SiO₂, gradient hex:EtOAc 2:1) za získání 87 (13 mg, 32 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,63 (hex:EtOAc:MeOH 5:10:2).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,37 - 7,20 (m, 5H), 6,26 (s, 1H), 6,14 (d, J= 6,6 Hz, 1H), 5,98 (d, /= 1,2 Hz, 1H), 5,83 (s, 1H), 5,27 (d, J= 6,2 Hz, 1H), 4,11 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 4,07 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 4,04 (s, 1H), 3,86 - 3,81 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,54 - 3,53 (m, 2H), 3,44 (bs, 2H), 3,36 (d, / = 8,1 Hz, 1H), 3,22 (dt, J, = 2,7 Hz, Λ = 12,0 Hz, 1H), 2,93 (dd, J₇ = 7,2 Hz, J₂ =

18,3 Hz, 1H), 2,77 (d, J= 14,4 Hz, 1H), 2,59 (d, J= 18,0 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 2,01 (s, 3H), 1,78 (dd, / = 10,8 Hz, J₂ = 15,6 Hz, 1H), 0,65 (d, J= 6,3 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C39H43N5O8: 709,8. Nalezeno (M+l)⁺: 710,3.

Příklad 82

K roztoku 43 (30 mg, 0,05 mmol) v CH₂C1₂ (0,3 ml) byl přidán při 0 °C propionylchlorid (4,40 μΐ, 0,05 mmol) a pyridin (4,04 μΐ, 0,05 mmol). Reakční směs se míchala 1 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (15 ml) a promyt 0,1 N HC1 (10 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografíí na otevřené koloně (SiO₂, gradient hex:EtOAc 1:1 až EtOAc) za získání 88 (18 mg, 56 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,49 (hex:EtOAc:MeOH 1:10:2).

-130CZ 304973 B6 'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,46 (s, 1H), 6,16 (brd, 1H), 5,99 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,95 (s, 1H), 5,90 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 5,34 (brt, 1H), 4,12 - 4,06 (m, 3H), 3,84 (bs, 1H), 3,74 (s, 3H), 3,63 (dd, J, = 6,3 Hz, 7 = 12,9 Hz, 1H), 3,50 - 3,48 (m, 1H), 3,39 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 3,23 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 3,00 (dd, 7 = 8,4 Hz, 7 = 18,3 Hz, 1H), 2,78 (d, 7= 15,6 Hz, 1H), 2,63 (d, 7 =

18,3 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 1,87- 1,80 (m, 1H), 1,06 (t,7= 7,5 Hz, 3H), 0,74 (d,7= 6,9 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₄H₄|N5O₈: 647,7. Nalezeno (M+l)⁺: 648,2.

Příklad 83

K roztoku 43 (20 mg, 0,0338 mmol) v CH₂C1₂ (0,3 ml) byl přidán při 0 °C propionylchlorid (3,238 μΐ, 0,0338 mmol) a pyridin (2,73 μΐ, 0,0338 mmol). Reakční směs se míchala lha pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt 0,1 N HC1 (5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient hex:EtOAc 3:1 až AcOEt) za získání 89 (11,5 mg, 52 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,57 (EtOAc:MeOH 10:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,82 -6,70 (m, 1H), 6,46 (s, 1H), 6,11 (d, 1H), 6,00 (d, 7=

1,5 Hz, 1H), 5,89 (d,7= 1,5 Hz, 1H), 5,85 (s, 1H), 5,77 (dd,7 = 1,5 Hz,7₂ = 15,3 Hz, 1H), 5,37 (bst, 1H), 4,13 - 4,06 (m, 3H), 3,19 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,55 (m, 2H), 3,38 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 3,23 (d, 7= 11,4 Hz, 1H), 3,00 (dd, 7 = 8,4 Hz, 7₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,78 (d, 7= 15,0 Hz, 1H), 2,65 (d, 7= 18,0 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,85 - 1,82 (m, 4H), 0,77 (d, 7= 6,3 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₅H₄iN₅O₈: 659,7. Nalezeno (M+l)⁺: 660,3.

Příklad 84

- 131 CZ 304973 B6

K roztoku 43 (15 mg, 0,0253 mmol) v CH2CI2 (0,3 ml) byl přidán při 0 °C Cbz-L-Val-OH (6,39 mg, 0,0253 mmol) a karbonyldiimidazol (4,86 mg, 0,03 mmol). Reakční směs se míchala 16 h při pokojové teplotě a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (15 ml) a promyt 0,1 N HC1 (10 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografíí na otevřené koloně (SiO₂, gradient hex.'EtOAc 1:1 až EtOAc) za získání 90 (6,7 mg, 32 %)jako bílé pevné látky.

Rf: 0,79 (EtOAc:MeOH 5:1).

‘HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,35 (bs, 5H), 6,46 (s, 1H), 6,28 (d, J= 6,0 Hz, 1H), 5,98 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,89 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,77 (s, 1H), 5,44 (bs, 1H), 5,30 (bs, 1H), 5,08 (s, 2H), 4,09 - 4,06 (m, 3H), 3,94 - 3,89 (m, 1H), 3,70 - 3,66 (m, 5H), 3,38 (d, 7= 11,7 Hz, 1H), 3,01 96 (dd, 7; = 7,8 Hz, 7₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,79 (d, 7= 14,1 Hz, 1H), 2,63 (d, 7= 18,0 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,97-1,81 (m, 2H), 0,83 (d, 7= 6,6 Hz, 3H), 0,80 (d, J= 6,6 Hz, 3H), 0,75 (d, 7= 6,9 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₄₄H₅₂N₆O₁₀: 824,9. Nalezeno (M+l)⁺: 825,4.

Příklad 85

K roztoku 62 (20 mg, 0,030 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/1 ml) byl přidán AgNO₃ (154 mg, 0,9 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 24 h. Pak byl při 0 °C přidán solný roztok (10 ml) a vod. nas. roz. NaHCO₃ (10 ml) a směs se míchala 15 min, zfiltrovala přes vrstvu celitu a promyla CH₂C1₂ (15 ml). Roztok byl extrahován a organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a zakoncentrována za vakua. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografíí na otevřené koloně (SiO₂, gradient EtOAc až EtOAc:MeOH 3:1) za získání 91 (13 mg, 66 %)jako bílé pevné látky. Rf: 0,18 (EtOAc:MeOH 10:1).

‘HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,49 (s, 1H), 6,16 (d, 1H), 5,98 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,89 (d, 7=

1,5 Hz, 1H), 5,32 (bs, 1H), 4,41 (bs, 1H), 4,00 (bs, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,70 - 3,65 (m, 2H), 3,37 3,32 (m, 2H), 3,19 - 3,17 (m, 1H), 2,94 (dd, 7j = 9,0 Hz, 7₂ = 15,0 Hz, 1H), 2,74 (d, 7= 15,9 Hz, 1H), 2,46 (d, 7= 17,1 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,04 - 2,01 (m, 2H), 1,98 (s, 3H), 1,64 - 1,62 (m, 1H), 1,54 - 1,52 (m, 2H), 0,89 - 0,84 (m, 6H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C34ELMN4O9: 652,7. Nalezeno (M-17)⁺: 635,3.

- 132CZ 304973 B6

Příklad 86

K roztoku 85 (10 mg, 0,0138 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/1 ml) byl přidán AgNO₃ (70,4 mg, 0,414 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 24 h. Pak byl při 0 °C přidán solný roztok (10 ml) a vod. nas. roz. NaHCO₃ (10 ml) a směs se míchala 15 min, zfiltrovala přes vrstvu celitu a promyla CH₂C1₂ (15 ml). Roztok byl extrahován a organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtroío vána a zakoncentrována za vakua. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient EtOAc až EtOAc:MeOH 4:1) za získání 92 (7 mg, 71 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,20 (EtOAc:MeOH 5:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,25 - 7,13 (m, 5H), 6,47 (s, 1H), 6,13 (brd, 1H), 5,97 (d, J=

1,2 Hz, 1H), 5,88 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,34 (brt, 1H), 4,50 (bs, 1H), 4,40 (bs, 1H), 4,00 (bs, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,70 - 3,65 (m, 3H), 3,34 (d, J= 11,7 Hz, 1H), 3,17 (d, 7= 5,1 Hz, 1H), 2,98-2,83 (m, 3H), 2,72 (d, J= 14,4 Hz, 1H), 2,44 (d, J= 19,2 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,27 (s, 6H), 1,97 (s, 3H), 1,72 (m, 1H), 0,82 (d, 7= 6,6 Hz,3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C39H46N4O9: 714,8. Nalezeno (M-17)': 697,3.

Příklad 87

K roztoku 86 (6 mg, 0,0087 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/1 ml) byl přidán AgNO₃ (44 mg, 0,26 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 24 h. Pak byl při 0 °C přidán solný roztok (10 ml) a vod. nas. roz. NaHCO₃ (10 ml) a směs se míchala 15 min, zfiltrovala přes vrstvu celitu a promyla CH₂C1₂ (15 ml). Roztok byl extrahován a organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a zakoncentrována za vakua. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient EtOAc až EtOAc:MeOH 5:1) za získání 93 (5 mg, 85 %) jako bílé pevné látky.

- 133 CZ 304973 B6

Rf: 0,018 (EtOAc.MeOH 50:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,48 (s, 1H), 6,17 (d, 1H), 5,98 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,89 (d, J =

1,5 Hz, 1H), 5,33 (bs, 1H), 4,51 (d, 1H), 4,40 (d, 1H), 4,00 (d, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,76 - 3,65 (m,

2H), 3,36 - 3,32 (m, 2H), 3,18 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 2,98 - 2,89 (m, 1H), 2,71 (d, J= 15,0 Hz,

1H), 2,45 (d, J= ΥΊ,Ί Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 1,98 (s, 3H), 1,68 - 1,50 (m, 3H), 1,29 - 1,19 (m, 6H), 0,88 - 0,84 (m, 6H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₆H4₈N₄O₉: 680,7. Nalezeno (M-17)⁺: 663,3.

Příklad 88

K roztoku 87 (12 mg, 0,0169 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/1 ml) byl přidán AgNO₃ (86 mg, 0,507 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 24 h. Pak byl při 0 °C přidán solný roztok (10 ml) a vod. nas. roz. NaHCO₃ (10 ml) a směs se míchala 15 min, zfiltrovala přes vrstvu celitu a promyla CH₂C1₂ (15 ml). Roztok byl extrahován a organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtro20 vána a zakoncentrována za vakua. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient EtOAc až EtOAc:MeOH 5:1) za získání 94 (8,8 mg, 74 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,28 (EtOAc:MeOH 5:1).

‘HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,34 -7,18 (m, 5H), 6,37 (s, 1H), 6,20 (d, 1H), 5,96 (d, J=

1,5 Hz, 1H), 5,88 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,30 (t, 1H), 4,50 (bs, 1H), 4,39 (d, 7= 1,8 Hz, 1H), 3,99 (d, 7= 2,1 Hz, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,69 - 3,60 (m, 3H), 3,37 - 3,30 (m, 3H), 3,17 (d, 7= 18,1 Hz, 1H), 2,89 (dd, 7, = 7,5 Hz, 7₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 1,99 (s,

3H), 1,71 (dd, 7/= 11,7 Hz, 7₂= 15,0 Hz, 1H), 0,77 (d, 7= 6,6 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C^RmN^: 700,7. Nalezeno (M-17)⁺: 683,2.

- 134CZ 304973 B6

Příklad 89

K roztoku 88 (14 mg, 0,0216 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/1 ml) byl přidán AgNO₃ (110 mg, 0,648 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 24 h. Pak byl při 0 °C přidán solný roztok (10 ml) a vod. nas. roz. NaHCO₃ (10 ml) a směs se míchala 15 min, zfíltrovala přes vrstvu celitu a promyla CH₂C1₂ (15 ml). Roztok byl extrahován a organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a zakoncentrována za vakua. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient EtOAc až EtOAc:MeOH 5:1) za získání 95 (9,7 mg, 70 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,16 (EtOAc:MeOH 5:1).

^]HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,48 (s, 1H), 6,10 (d, 1H), 5,97 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,89 (d, J=

1,2 Hz, 1H), 5,36 (bs, 1H), 4,51 (d, 1H), 4,40 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 4,00 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,76 -3,62 (m, 3H), 3,33 (d, J= 11,7 Hz, 1H), 3,18 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 2,94 (dd, Λ = 8,4 Hz, J₂ = 16,5 Hz, 1H), 2,72 (d, J= 15,0 Hz, 1H), 2,45 (d, J= 18,3 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 1,97 (s, 3H), 1,86 (m, 2H), 1,73 (dd, J, = 12,0 Hz, J₂ = 15,0 Hz, 1H), 1,05 (t, J= 7,8 Hz, 3H), 0,83 (d, J= 6,9 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C33H42N4O9: 638,7. Nalezeno (M-17)⁺: 621,2.

Příklad 90

K roztoku 89 (10 mg, 0,015 mmol) v CH3CN/H₂O (1,5 ml/1 ml) byl přidán AgNCb (77,2 mg, 0,454 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 24 h. Pak byl při 0 °C přidán solný roztok (10 ml) a vod. nas. roz. NaHCC>3 (10 ml) a směs se míchala 15 min, zfíltrovala přes vrstvu celitu a promyla CH₂C1₂ (15 ml). Roztok byl extrahován a organická vrstva byla sušena Na₂SO4, filtrována a zakoncentrována za vakua. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient EtOAc až EtOAc:MeOH 1:1) za získání 96 (9 mg, 92 %) jako bílé pevné látky. Rf: 0,016 (EtOAc:MeOH 5:1).

- 135CZ 304973 B6 'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,76 - 6,69 (m, 1H), 6,47 (s, 1H), 6,18 (brd, 1H), 5,97 (d, J=

I, 5 Hz, 1H), 5,88 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,71 (dd, 7 = 1,5 Hz, J₂ = 16,2 Hz, 3H), 5,32 (bs, 1H), 4,50 (m, 1H), 4,41 (m, 1H), 3,99 (m, 1H), 3,78 (m, 4H), 3,64 -3,58 (m, 2H), 3,34 (d, J =

II, 1 Hz, 1H), 3,17 (d, J= 8,6 Hz, 1H), 2,95 (dd, 7 = 7,5 Hz, 7 = 17,4 Hz, 1H), 2,70 (d, J =

16,2 Hz, 1H), 2,48 (d, J= \Ί,Ί Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,17 (s, 6H), 1,97 (s, 3H), 1,82 - 1,74 (m, 4H), 0,88 (t, 7 = 5,2 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C34H42N4O9: 650,7. Nalezeno (M-17)⁺: 633,3.

Příklad 91

K roztoku 25 (100 mg, 0,177 mmol) v CH₂CN1₂ (0,5 ml) byl přidán při 0 °C butyrylchlorid (24 μΐ, 0,23 mmol) a pyridin (17 μΐ, 0,212 mmol). Reakční směs se míchala 2 h při pokojové teplotě a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (30 ml) a promyt 0,1 N HC1 (20 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, hex: EtOAc 3:1) za získání 97 (99 mg, 88 %) jako bezbarvé olejovité látky.

Rf: 0,64 (hex:EtOAc 1:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,66 (s, 1H), 6,16 - 6,05 (m, 1H), 5,93 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,87 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,40 (dd, 7 = 1,2 Hz, 7₂ = 17,1 Hz, 1H), 5,26 (dd, 7 = 1,2 Hz, 7₂ = 10,2 Hz, 1H), 5,13 - 5,08 (m, 2H), 4,44 (dd, 7 = 3,6 Hz, J₂ = 11,1 Hz, 1H), 4,21 - 4,07 (m, 5H), 3,74 (m, 1H), 3,72 (s, 1H), 3,57 (s, 3H), 3,35 (d, 7= 10,5 Hz, 1H), 3,26 - 3,21 (m, 2H), 3,98 (dd, 7 =

8,7 Hz, J₂ = 18,0 Hz, 1H), 2,54 (d, 7= 18,0 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 1,92 - 1,65 (m, 3H), 1,42 - 1,34 (m, 2H), 0,80 (t, 7= 7,5 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃5H₄₃N₃O₉: 633,7. Nalezeno (M+l)⁺: 634,3.

Příklad 92

- 136CZ 304973 B6

K roztoku 25 (100 mg, 0,177 mmol) v CH₂CN₂ (0,4 ml) byl přidán při 0 °C trans-3-(trifluormethyl)cinnamoylchlorid (35 μΐ, 0,23 mmol) a pyridin (17 μΐ, 0,212 mmol). Reakční směs se míchala 1 h při pokojové teplotě a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (30 ml) a promyt 0,1 N HC1 (20 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, hex: EtOAc 6:1 až hex:EtOAc 1:1) za získání 98 (122 mg, 90 %) jako bílé pevné látky. Rf: 0,478 (hex:EtOAc 1:1).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,64 - 7,48 (m, 4H), 7,37 (d, J= 15,6 Hz, 1H), 6,62 (s, 1H), 6,16 - 6,07 (m, 1H), 6,12 (d, J= 15,6 Hz, 1H), 5,94 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,89 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,41 (dd, A = 1,8 Hz, J₂ = 17,1 Hz, 1H), 5,28 (dd, Ji = 1,8 Hz, J₂ = 12,0 Hz, 1H), 5,04 (q, J= 6,0 Hz, 1H), 4,60 (dd, J, = 3,3 Hz, J₂ = 11,1 Hz, 1H), 4,22 - 4,15 (m, 5H), 3,90 (dd, J, = 4,2 Hz, J₂ =

ESI-MS m/z: Calcd. pro GuHraF^Og: 761,7. Nalezeno (M+l)⁺: 762,3.

Příklad 93

OMe

Me

Me hydrocinnamoylchlorid , py

Me

OH

K roztoku 25 (68 mg, 0,12 mmol) v CH₂C1₂ (0,4 ml) byl přidán při 0 °C hydrocinnamoylchlorid (20 μΐ, 1,12 mmol) a pyridin (10 μΐ, 1,01 mmol). Reakční směs se míchala 2 h při pokojové teplotě a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (30 ml) a promyt 0,1 N HC1 (20 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, hex: EtOAc 5:1 až hex:EtOAc 2:1) za získání 99 (41 mg, 49 %) jako bílé pevné látky. Rf: 0,47 (hex:EtOAc 1:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,29 - 7,18 (m, 3H), 7,0,4 - 7,02 (m, 2H), 6,66 (s, 1H), 6,16 6,07 (m, 1H), 5,93 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,87 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,40 (dd, J, = 1,7 Hz, J₂ = 17,4 Hz, 1H), 5,26 (dd, Ji = 1,7 Hz, J₂ = 10,2 Hz, 1H), 5,09 (dd, J_; = 6,0 Hz, J₂ = 8,7 Hz, 1H), 4,43 (dd, J, = 3,3 Hz, J₂ = 11,1 Hz, 1H), 4,20 - 4,14 (m, 3H), 4,06 (t, J= 3,7 Hz, 1H), 4,02 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 3,72 (dd, J_x = 4,5 Hz, J₂ = 11,1 Hz, 1H), 3,56 (s, 3H), 3,55 (s, 3H), 3,32 (brd, J=

8,7 Hz, 1H), 3,26 (dd, J_x = 1,9 Hz, J₂ = 8,1 Hz, 1H), 3,23 - 3,20 (m, 1H), 3,01 (brd, J= 8,1 Hz, 1H), 3,23 - 3,20 (m, 1H), 3,26 (dd, Ji = 1,9 Hz, J₂ = 8,1 Hz, 1H), 2,95 (d, J= 1,8 Hz, 1H), 2,71 2,64 (m, 3H), 2,53 (d, J= 17,7 Hz, 1H), 2,26 (s, 3H), 2,14 (s, 6H), 1,83 (dd, J_f = 12,3 Hz, J₂ = 15,9 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₄₀H45F₃N₃O₈: 695,3. Nalezeno (M+l)⁺: 696,3.

- 137CZ 304973 B6

Příklad 94

K roztoku 25 (100 mg, 0,177 mmol) VCH2CI2 (0,4 ml) byl přidán při 0 °C cinnamoylchlorid (35 mg, 0,21 mmol) a pyridin (17 μΐ, 0,21 mmol). Reakční směs se míchala 2 h při pokojové teplotě a pak byl roztok zředěn CH2CI2 (30 ml) a promyt 0,1 N HC1 (20 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, hex: EtOAc 6:1) za získání 100 (94 mg, 76 %)jako bílé pevné látky. Rf: 0,49 (hex:EtOAc 1:1).

'H NMR (300 MHz, CDCh): δ 7,42 - 7,33 (m, 6H), 6,62 (s, 1H), 6,16 - 6,05 (m, 1H), 6,10 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 5,94 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,88 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,43 (dd, 7 = 3,0 Hz, J₂ =

17,1 Hz, 1H), 5,27 (dd, 7 = 3,0 Hz, 7₂ = 12,0 Hz, 1H), 5,04 (q, 7= 6,0 Hz, 1H), 4,55 (dd, 7 = 3,9 Hz, 7 = 11,1 Hz, 1H), 4,22 - 4,15 (m, 5H), 3,87 (dd, 7 = 4,5 Hz, 7₂ = 11,1 Hz, 1H), 3,55 (s, 3H), 3,39 (s, 3H), 3,36 - 3,33 (m, 1H), 3,26 - 3,22 (m, 2H), 2,98 (dd, 7 = 8,1 Hz, J₂ = 17,7 Hz, 1H), 2,63 (d, 7= 17,7 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,03 (s, 3H), 1,82 (dd, 7, = 11,7 Hz, J₂ = 15,3 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₄oH₄₃N₃0₈: 693,3. Nalezeno (M+l)⁺: 694,3.

Příklad 95

K roztoku 97 (40 mg, 0,063 mmol) v CH₂C1₂ (0,7 ml) byla přidána při 23 °C kyselina octová (17,8 μΐ), Pd (PPh₃)₂Cl₂ (3,64 mg, 0,0052 mmol) a Bu₃SnH (67,9 μΐ, 0,252 mmol) Reakční směs se míchala 2 h při této teplotě a pak byl roztok nalit na výplň otevřené kolony pro sloupcovou chromatografií (SiO₂, gradient hex: EtOAc 5:1 až hex:EtOAc 3:1) za získání 101 (30 mg, 80 %) jako bílé pevné látky. Rf: 0,4 (hex:EtOAc 1:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,65 (s, 1H), 5,90 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,82 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,54 (s, 1H), 5,33 (d, J= 6,0 Hz, 1H), 5,13 (d, 7= 6,0 Hz, 1H), 4,54 (s, 1H), 5,33 (d, 7= 6,0 Hz, 1H), 5,13 (d, 7= 6,0 Hz, 1H), 4,54 (dd, 7 = 3,6 Hz, 7 = 11,4 Hz, 1H), 4,18 (d, 7= 2,1 Hz, 1H), 4,13 (d, 7= 2,4 Hz, 1H), 4,07 (d, 7= 3,3 Hz, 1H), 3,75 (dd, 7 = 3,9 Hz, J₂ = 11,1 Hz, 1H), 3,70

-138CZ 304973 B6 (s, 3H), 3,35 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,24 (dd, J, = 2,7 Hz, J₂ = 8,7 Hz, 1H), 3,10 (dd, J, = 2,4 Hz, J₂ = 15,0 Hz, 1H), 3,01 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 2,95 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 2,58 (d, J= 18,3 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,89 - 1,66 (m, 3H), 1,36 - 1,25 (m, 2H), 0,77 (t, J = 7,5 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₂H₃₉N₃O₈: 593,6. Nalezeno (M+l)⁺: 594,8.

Příklad 96

K roztoku 98 (37 mg, 0,0485 mmol) v CH₂C1₂ (0,7 ml) byla přidána při 23 °C kyselina octová (20 μΐ), Pd (PPh₃)₂Cl₂ (4 mg, 0,0057 mmol) a Bu₃SnH (53 μΐ, 0,194 mmol) Reakční směs se míchala 5 h při této teplotě a pak byl roztok nalit na výplň otevřené kolony pro sloupcovou chromatografíi (SiO₂, gradient hex: EtOAc 6:1 až hex:EtOAc 2:1) za získání 102 (25 mg, 71 %) jako bílé pevné látky. Rf: 0,38 (hex:EtOAc 1:1).

Ή NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,63 - 7,60 (m, 2H), 7,50 - 7,49 (m, 2H), 7,24 (d, ./ = 15,9 Hz, 1H), 6,59 (s, 1H), 5,98 (d, J= 15,9 Hz, 1H), 5,92 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,84 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 5,66 (s, 1H), 5,20 (d, ./=6,0 Hz, 1H), 4,87 (d, J= 6,0 Hz, 1H), 4,71 (dd, J, = 2,7 Hz, J₂ =

10.8 Hz, 1H), 4,16 - 4,15 (m, 3H), 3,93 (dd, J, = 3,3 Hz, J₂ = 11,1 Hz, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,36 (brd, J= 10,2 Hz, 1H), 3,26 (brd, J= 11,7 Hz, 1H), 3,10 (brd, J= 15,0 Hz, 1H), 2,96 (dd, J, =

7.8 Hz, J₂ = 17,7 Hz, 1H), 2,62 (d, J= \Ί,Ί Hz, 1H), 2,27 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 1,97 (s, 3H), 1,79 (dd, / = 12,0 Hz, J₂ = 15,8 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₈H₃₈F₃N₃O₈: 721,7. Nalezeno (M+l)⁺: 722,2.

Příklad 97

K roztoku 99 (41 mg, 0,059 mmol) vCH₂Cl₂ (1 ml) byla přidána při 23 °C kyselina octová (25 μΐ), Pd (PPh₃)₂Cl₂ (5 mg, 0,0071 mmol) a Bu₃SnH (63 μΐ, 0,235 mmol). Reakční směs se míchala 4,5 h při této teplotě a pak byl roztok nalit na výplň otevřené kolony pro sloupcovou chro- 139CZ 304973 B6 matografíi (SiO₂, gradient hex: EtOAc 6:1 až hex:EtOAc 1:1) za získání 103 (34,2 mg, 89 %) jako bílé pevné látky. Rf: 0,49 (hex:EtOAc 1:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,24 - 7,15 (m, 3H), 7,03 - 7,01 (m, 2H), 6,65 (s, 1H), 5,89 (bs, 1H), 5,82 (bs, 1H), 5,49 (s, 1H), 5,31 (d,7= 15,9 Hz, 1H), 5,12 (d,7= 6,0 Hz, 1H), 4,53 (dd,7 =

3,3 Hz, J₂ = 11,1 Hz, 1H), 4,18 (d, J= 2,7 Hz, 1H), 4,07 (m, 2H), 3,75 (dd, J, = 3,9 Hz, J₂ =

11,1 Hz, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,62 (s, 3H), 3,32 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 3,25 (d, J= 10,8 Hz, 1H), 3,12 (d, J= 14,7 Hz, 1H), 3,00 (d, 7 = 7,8 Hz, 1H) 2,94 (d, 7= 8,1 Hz, IH), 2,66 - 2,60 (m, 3H), 2,57 (d, 7 = 18,0 Hz, 1H), 2,28 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 2,10 (bs, 3H), 1,83 - 1,74 (m, 1H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₇H₄iN₃O₈: 655,7. Nalezeno (M+l)⁺: 656,3.

Příklad 98

K roztoku 100 (40 mg, 0,0576 mmol) vCH₂C1₂ (1 ml) byla přidána při 23 °C kyselina octová (25 μΐ), Pd (PPh₃)₂Cl₂ (4,8 mg, 0,007 mmol) a Bu₃SnH (62 μΐ, 0,23 mmol). Reakční směs se míchala 5 h při této teplotě a pak byl roztok nalit na výplň otevřené kolony pro sloupcovou chromatografii (SiO₂, gradient hex:EtOAc 4:1 až hex:EtOAc 1:1) za získání 104 (30 mg, 82 %) jako bílé pevné látky. Rf: 0,41 (hex:EtOAc 1:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,36 (s, 5H), 7,30 (d, 7= 16,2 Hz, 1H), 6,59 (s, 1H), 5,99 (d, 7=

16,2 Hz, 1H), 5,91 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,84 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,60 (s, 1H), 5,20 (d, 7= 5,6 Hz, 1H), 4,94 (d, 7= 5,6 Hz, 1H), 4,63 (dd, 7 = 3,3 Hz, 7₂ = 11,4 Hz, 1H), 4,18 - 4,15 (m, 3H), 3,91 (dd, 7 = 3,9 Hz, 7 = 11,1 Hz, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,49 (s, 3H), 3,35 (brd, 7= 15,0 Hz, 1H), 3,26 (brd, 7= 11,4 Hz, 1H), 3,10 (brd, 7= 15,0 Hz, 1H), 2,96 (dd, 7 = 8,4 Hz, 7₂ = 18,0 Hz, 1H), 2,63 (d, 7= 18,0 Hz, 1H), 2,27 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,80 (dd, 7, = 12,0 Hz, 7₂ = 14,4 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₇H₃₉N₃O₈: 653,7. Nalezeno (M+23)⁺: 676,2.

- 140CZ 304973 B6

K roztoku 101 (24 mg, 0,041 mmol) v CH₂C1₂ (0,4 ml) byl přidán při 0 °C acetylchlorid (3 μΐ, 0,041 mmol) a pyridin (3,3 μΐ, 0,041 mmol). Reakční směs se míchala 2 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (15 ml) a promyt 0,1 N HC1 (5 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient hex: EtOAc 5:1 až hex:EtOAc 1:1) za získání 105 (23 mg, 88 %) jako bílé pevné látky. Rf: 0,40 (hex:EtOAc 1:1).

’HNMR (300 MHz, CDCfi): δ 6,66 (s, 1H), 5,97 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,91 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 4,58 (d, 7= 3,0 Hz, 1H), 4,54 (d, 7= 3,0 Hz, 1H), 4,07 (t, 7= 3,3 Hz, 1H), 3,77 (dd, 7 = 3,9 Hz, 7₂ = 11,4 Hz, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,57 (s, 3H), 3,35 (d, 7= 10,2 Hz, 1H), 3,22 (dd, 7 = 2,7 Hz, 7 = 11,7 Hz, 1H), 2,98 (dd, 7 = 8,1 Hz, 7₂ = 18,0 Hz, 1H), 2,80 (d, J= 13,5 Hz, 1H), 2,58 (d, 7 = 18,0 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,89 - 1,79 (m, 2H), 1,72 1,66 (m, 1H), 1,37 - 1,25 (m, 2H), 0,78 (t, 7= 7,5 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C^H^O.,: 635,7. Nalezeno (M+1)⁺: 636,8.

Příklad 100

K roztoku 102 (16 mg, 0,022 mmol) v CH₂Cfi (0,2 ml) byl přidán při 0 °C acetylchlorid (1,9 μΐ, 0,0266 mmol) a pyridin (2,15 μΐ, 0,0266 mmol). Reakční směs se míchala 1,5 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt 0,1 N HC1 (7 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient hex: EtOAc 4:1 až EtOAc 1:1) za získání 106 (12 mg, 71 %) jako bílé pevné látky. Rf: 0,60 (hex:EtOAc 1:1).

’H NMR (300 MHz, CDCfi): δ 7,83 (bs, 1H), 7,65 - 7,58 (m, 2H), 7,49 - 7,44 (m, 1H), 7,14 (d, 7 = 16,2 Hz, 1H), 6,62 (s, 1H), 6,06 (d, 7= 16,2 Hz, 1H), 6,00 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,95 (d, 7=

1,2 Hz, 1H), 5,02 (d, 7= 5,7 Hz, 1H), 4,96 (bs, 1H), 4,92 (d, 7= 5,7 Hz, 1H), 4,15 - 4,11 (m, 3H), 3,88 (dd, 7 = 3,3 Hz, 7 = 11,1 Hz, 1H), 3,08 (bs, 3H), 2,93 (dd, 7 = 8,1 Hz, 7 = 18,3 Hz, 1H), 2,80 (d, 7 = 13,2 Hz, 1H), 2,64 (d, 7= 18,0 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,69 (dd,7 = 11,7 Hz,7₂ = 15,9 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₄oH4oF₃N₃09: 763,7. Nalezeno (M+l)⁺: 764,2.

-141 CZ 304973 B6

Příklad 101

K roztoku 103 (34 mg, 0,052 mmol) v CH₂C1₂ (0,2 ml) byl přidán při 0 °C acetylchlorid (4,4 μΐ, 0,062 mmol) a pyridin (5 μΐ, 0,062 mmol). Reakční směs se míchala 1,5 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt 0,1 N HC1 (7 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient hex: EtOAc 4:1 až EtOAc) za získání 107 (25,5 mg, 70 %)jako bílé pevné látky. Rf: 0,48 (hex:EtOAc 1:1).

‘HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,25 - 7,14 (m, 3H), 7,06 - 7,04 (m, 2H), 6,66 (s, 1H), 5,96 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 5,91 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,11 (d, 7=5,4 Hz, 1H), 4,14 (d, 7=3,3 Hz, 1H), 4,07 (d, 7= 3,6 Hz, 1H), 4,04 (d, 7= 2,7 Hz, 1H), 3,78 (dd, 7, = 3,3 Hz, 7₂ = 10,8 Hz, 1H), 3,55 (s, 3H), 3,51 (s, 3H), 3,33 (brd, 7= 8,1 Hz, 1H), 3,23 (dt, Λ = 2,7 Hz, 7₂ = 11,7 Hz, 1H), 2,97 (dd, J, = 8,1 Hz, 7> = 18,0 Hz, 1H), 2,81 (d, 7= 14,1 Hz, 1H), 2,63 - 2,52 (m, 3H), 2,33 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,26 - 2,02 (m, 2H), 2,09 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 1,74 (dd, J, = 12,0 Hz, 7₂ = 15,6 Hz, 1H). ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃9H4₃N₃O9.· 697,7. Nalezeno (M+l)⁺: 698,3.

K roztoku 104 (29 mg, 0,0443 mmol) v CH₂C1₂ (0,3 ml) byl přidán při 0 °C acetylchlorid (3,77 μΐ, 0,053 mmol) a pyridin (4,3 μΐ, 0,053 mmol). Reakční směs se míchala 2 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (15 ml) a promyt 0,1 N HC1 (10 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient hex:EtOAc 4:1 až EtOAc) za získání 108 (21,6 mg, 70 %) jako bílé pevné látky. Rf: 0,58 (hex:EtOAc 1:1).

‘HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,47 - 7,44 (m, 2H), 7,35 - 7,34 (m, 3H), 7,29 (d, 7= 15,9 Hz, 1H), 6,62 (s, 1H), 5,99 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,93 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,05 (d, 7= 5,7 Hz, 1H), 4,94 (d, 7= 5,7 Hz, 1H), 4,81 (d, 7= 11,5 Hz, 1H), 4,16 - 4,11 (m, 3H), 3,34 (brd, J= 5,4 Hz,

- 142CZ 304973 B6

1H), 3,24 (bs, 3H), 3,22 -3,20 (m, 2H), 2,94 (dd, J, = 8,1 Hz, J₂= 18,0 Hz, 1H), 2,80 (d, J= 14,1 Hz, 1H), 2,64 (d, J= 18,0 Hz, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,09 (s, 3H), 1,94 (s, 3H), 1,71 (dd, J, = 11,7 Hz, J₂ = 15,6 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C39H41N3O9: 695,7. Nalezeno (M+l)⁺: 696,2.

Příklad 103

TFA

CH₂C1₂, 3,5 h 0C 23°C

K roztoku 105 (16 mg, 0,025 mmol) v CH₂C1₂ (0,2 ml) byla přidána při 0 °C kyselina trifluoroctová (77 μΐ, 1 mmol) a reakční směs se míchala 3,5 h při 23 °C. Reakce byla zastavena při 0 °C nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (15 ml) a reakční směs byla extrahována ethylacetátem (2x 10 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, hex: EtOAc 1:1) za získání 109 (12 mg, 81 %) jako bílé pevné látky. Rf: 0,32 (hex:EtOAc 1:1).

'HNMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,43 (s, 1H), 5,97 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,91 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,69 (s, 1H), 4,51 (dd, J, = 3,3 Hz, J₂ = 11,1 Hz, 1H), 4,10 - 4,05 (m, 3H), 3,78 - 3,77 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,33 (d, /= 8,1 Hz, 1H), 3,22 (dt, / = 2,7 Hz, J₂ = 12,0 Hz, 1H), 2,96 (dd, J, =

8,4 Hz, J₂ = 17,7 Hz, 1H), 2,80 (d, J= 15,6 Hz, 1H), 2,55 (d, J= 18,0 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,01 (s, 3H), 1,87-1,66 (m, 3H), 1,37- 1,27 (m, 2H), 0,77 (t, J= 7,5 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C3₂H_3IN₃O9: 591,6. Nalezeno (M+l)⁺: 592,8.

Příklad 104

K roztoku 106 (90 mg, 0,1178 mmol) v CH₂C1₂ (0,3 ml) byla přidána při 0 °C kyselina trifluoroctová (750 μΐ, 4,71 mmol) a reakční směs se míchala 7 h při 23 °C. Reakce byla zastavena při 0 °C nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (20 ml) a reakční směs byla extrahována ethylacetátem (2x 15 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chro- 143 CZ 304973 B6 matografií na otevřené koloně (SiO₂, hex: EtOAc 1:1) za získání 110 (71 mg, 84 %) jako bílé pevné látky. Rf: 0,6 (hex:EtOAc 1:1).

*H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,76 (bs, 1H), 7,62 - 7,57 (m, 2H), 7,48 - 7,45 (m, 1H), 7,12 (d, J = 16,2 Hz, 1H), 6,37 (s, 1H), 6,00 (d, J= 16,2 Hz, 1H), 5,98 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,92 (d, 7 =

1,2 Hz, 1H), 5,60 (bs, 1H), 4,88 (d,7= 10,2 Hz, 1H), 4,14 (bs, 1H), 4,10 (d,7= 2,4 Hz, 1H), 4,03 (d, 7= 2,4 Hz, 1H), 3,89 (dd, 7 = 2,7 Hz, 7₂ = 11,4 Hz, 1H), 3,32 (d, 7= 8,4 Hz, 1H), 3,26 - 3,21 (m, 4H), 2,91 (dd, 7, = 8,1 Hz, 7₂ = 18,0 Hz, 1H), 2,82 (d, 7= 13,8 Hz, 1H), 2,58 (d, J= 18,0 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 1,89 (s, 3H), 1,84 (dd, 7 = 12,0 Hz, 7₂ = 15,6 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₈H₃₆F₃N₃O₈: 719,7. Nalezeno (M+l)⁺: 720,3.

Příklad 105

K roztoku 107 (20 mg, 0,286 mmol) v CH₂C1₂ (0,2 ml) byla přidána při 0 °C kyselina trifluoroctová (88 μΐ, 1,144 mmol) a reakční směs se míchala 4 h při 23 °C. Reakce byla zastavena při 0 °C nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (15 ml) a reakční směs byla extrahována ethylacetátem (2x 10 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, hex: EtOAc 1:1) za získání 111 (18 mg, 96 %) jako bílé pevné látky. Rf: 0,39 (hex:EtOAc 1:1).

*H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,23 - 7,16 (m, 3H), 7,06 - 7,04 (m, 2H), 6,43 (s, 1H), 5,96 (d, 7 = 1,5 Hz, 1H), 5,90 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 6,66 (s, 1H), 4,52 (dd, 7 = 3,3 Hz, 7₂ = 11,1 Hz, 1H), 4,07 (s, 1H), 4,05 (d, 7=3,3 Hz, 1H), 4,03 (d, 7=2,4 Hz, 1H), 3,76 (dd, 7 = 3,6 Hz, 7 =

11,1 Hz, 1H), 3,56 (s, 3H), 3,31 (d, 7=7,5 Hz, 1H), 3,23 (d, 7= 12,0 Hz, 1H), 2,95 (dd, 7 = 8,1 Hz, 7₂ = 18,0 Hz, 1H), 2,80 (d, 7= 15,3 Hz, 1H), 2,63 - 2,58 (m, 2H), 2,53 (d, 7= 18,0 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,61 (s, 3H), 2,21 - 2,09 (m, 2H), 2,13 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,85 (dd, 7, =

11,7 Hz, 7₂ = 115,3 Hz, 1H). ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₇H₃₉N₃O₈: 653,7. Nalezeno (M+l)⁺: 654,3.

-144CZ 304973 B6

Příklad 106

K roztoku 108 (14 mg, 0,2 mmol) v CH₂C1₂ (0,4 ml) byla přidána při 0 °C kyselina trifluoroctová (61,5 μΐ, 0,8 mmol) a reakční směs se míchala 6 h při 23 °C. Reakce byla zastavena při 0 °C nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (15 ml) a reakční směs byla extrahována ethylacetátem (2x 10 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografíí na otevřené koloně (SiO₂, hex:EtOAc 2:1) za získání 112 (12 mg, 92 %) jako bílé pevné látky. Rf: 0,36 (hex:EtOAc 1:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,46 - 7,45 (m, 2H), 7,35 - 7,20 (m, 4H), 6,38 (s, 1H), 6,05 (d, J= 15,9 Hz, 1H), 5,98 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,93 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,57 (s, 1H), 4,74 (d, 7=

9,3 Hz, 1H), 4,17 - 4,13 (m, 2H), 4,08 (d, 7= 1,9 Hz, 1H), 3,89 (dd, 7 = 3,6 Hz, 7₂= 11,4 Hz, 1H), 3,33 (m, 5H), 3,26 - 3,22 (m, 1H), 2,93 (dd, 7 = 9,0 Hz, 7 = 17,4 Hz, 1H), 2,34 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 1,97 (s, 3H), 1,81 (dd, 7, = 12,0 Hz, 7₂ = 15,6 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C37H37N3O8: 651. Nalezeno (M+l)⁺: 652,2.

Příklad 107

K roztoku 109 (10 mg, 0,017 mmol) v CH₂C1₂/H₂O (10 ml, 0,017 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/1 ml) byl přidán AgNO₃ (86 mg, 0,5 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 24 h. Pak byl 0 °C přidán solný roztok (10 ml) a vod. nas. roz. NaHCO₃ (10 ml) a směs se míchala 15 min, zfiltrovala přes vrstvu celitu a promyla CH₂C1₂ (15 ml). Roztok byl extrahován a organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a zakoncentrována za vakua. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografíí na otevřené koloně (SiO₂, gradient EtOAc až EtOAc:MeOH 3:1) za získání 113 (7 mg, 71 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,41 (EtOAc: MeOH 5:1).

- 145CZ 304973 B6 'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,45 (s, 1H), 5,95 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,88 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,65 (bs, 1H), 4,50 - 4,48 (m, 2H), 4,44 (d, 7= 2,1 Hz, 1H), 3,96 (d, 7= 3,0 Hz, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,74 - 3,70 (m, 1H), 3,30 (d, 7= 12,3 Hz, 1H), 3,13 (d, 7= 7,5 Hz, 1H), 2,86 (dd, 7, =

5,7 Hz, 7₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,73 (d, 7= 14,7 Hz, 1H), 2,48 (d, 7= 17,7 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,17 (s, 6H), 2,00 (s, 3H), 1,86 - 1,55 (m, 3H), 1,42 - 1,23 (m, 2H), 0,75 (t, 7= 7,5 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro 0₃ιΗ₃₈Ν₂0₉: 582,6. Nalezeno (M-17)⁺: 565,3.

Příklad 108

K roztoku 110 (42,8 mg, 0,059 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/l ml) byl přidán AgNO₃ (303 mg, 1,78 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 24 h. Pak byl 0 °C přidán solný roztok (10 ml) a vod. nas. roz. NaHCO₃ (10 ml) a směs se míchala 15 min, zfiltrovala přes vrstvu celitu a promyla CH₂C1₂ (20 ml). Roztok byl extrahován a organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a zakoncentrována za vakua. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient EtOAc až EtOAc: MeOH 5:1) za získání 114 (30 mg, 71 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,30 (EtOAc: MeOH 5:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,75 (bs, 1H), 7,61 - 7,56 (m, 2H), 7,45 - 7,42 (m, 1H), 7,12 (d, 7 = 16,2 Hz, 1H), 6,38 (s, 1H), 6,02 (d, 7= 16,2 Hz, 1H), 5,97 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,90 (d, 7 =

1,5 Hz, 1H), 5,50 (bs, 1H), 4,87 (bs, 1H), 4,56 (m, 1H), 4,45 (bs, 1H), 3,92 (d 7= 2,4 Hz, 1H), 3,31 (dt, J, = 3,6 Hz, 7₂ = 12,9 Hz, 1H), 3,21 (bs, 3H), 3,13 (d, 7= 7,8 Hz, 1H), 2,82 (dd, 7, =

8,1 Hz, 7₂ = 18,0 Hz, 1H), 2,75 (d, J= 14,7 Hz, 1H), 2,49 (d, 7= 18,0 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 1,89 (s, 3H), 1,78 (dd, J, = 12,0 Hz, 7₂ = 15,6 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₇H₃₇F₃N₂O₉: 710,6. Nalezeno (M-17)⁺: 693,2.

-146CZ 304973 B6

Příklad 109

K. roztoku 111 (12 mg, 0,018 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/1 ml) byl přidán AgNO₃ (93,5 mg, 0,55 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 24 h. Pak byl při 0 °C přidán solný roztok (10 ml) a vod. nas. roz. NaHCO₃ (10 ml) a směs se míchala 15 min, zfiltrovala přes vrstvu celitu a promyla CH₂C1₂ (15 ml). Roztok byl extrahován a organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a zakoncentrována za vakua. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient EtOAc až EtOAc: MeOH 5:1) za získání 115 (10 mg, 86 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,43 (EtOAc: MeOH 5:1).

’H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,23 - 7,14 (m, 3H), 7,05 - 7,03 (m, 2H), 6,45 (s, 1H), 5,93 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 5,88 (d, 7 = 1,2 Hz, 1H), 5,63 (brd, 1H), 4,55 - 4,49 (m, 2H), 4,43 (d, 7= 2,7 Hz, 1H), 3,96 (d 7=3,1 Hz, 1H), 3,80 -3,73 (m, 1H), 3,56 (bs, 3H), 3,32 (dt, 7/ = 3,3 Hz, 7₂ =

12.6 Hz, 1H), 3,13 (d, 7= 6,0 Hz, 1H), 2,86 (dd, 7, = 7,5 Hz, 7₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,74 (d, 7 =

14.7 Hz, 1H), 2,61 - 2,56 (m, 2H), 2,47 (d, 7= 18,0 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,01 (s, 3H), 1,99 - 1,94 (m, 2H), 1,78 (dd, J, = 11,7 Hz, 7₂ = 15,0 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₆H₄₀N₂O₉: 644,7. Nalezeno (M-17)⁺: 627,2.

Příklad 110

K roztoku 112 (12 mg, 0,018 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/1 ml) byl přidán AgNO₃ (93 mg, 0,55 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 24 h. Pak byl 0 °C přidán solný roztok (10 ml) a vod. nas. roz. NaHCO₃ (10 ml) a směs se míchala 15 min, zfiltrovala přes vrstvu celitu a promyla CH₂C1₂ (15 ml). Roztok byl extrahován a organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a zakoncentrována za vakua. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient EtOAc až EtOAc:MeOH 1:1) za získání 116 (8 mg, 70 %) jako bílé pevné látky.

- 147CZ 304973 B6

Rf: 0,41 (EtOAc: MeOH 5:1).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,44 - 7,43 (m, 2H), 7,34 - 7,27 (m, 4H), 6,39 (s, 1H), 6,03 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 5,96 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,90 (d, 7 = 1,5 Hz, 1H), 5,55 (m, 1H), 4,47 (m, 1H), 4,50 (m, 1H), 3,94 (d 7= 3,6 Hz, 1H), 3,85 (dd, J, = 3,3 Hz, 7₂ = 11,1 Hz, 1H), 3,66 (bs, 3H), 3,34 - 3,31 (m, 2H), 3,13 (d, 7= 5,1 Hz, 1H), 2,93 - 2,73 (m, 2H), 2,53 (d, 7= 18,0 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,03 (s, 3H), 1,94 - 1,82 (m, 1H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₆H₃₈N₂O₉: 642,7. Nalezeno (M-17)⁺: 625,2.

Příklad 111

K roztoku 17 (6,28 g, 9,06 mmol) v CH₂C1₂ (45,3 ml) byl přidán při 0 °C chloromravenčan alylnatý (3,85 ml, 36,24 mmol) a pyridin (2,93 ml, 36,24 mmol). Reakční směs se míchala 16 h při 23 °C a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (150 ml) a promyt 0,1 N HC1 (2x 100 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, fdtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku za získání 117 (5,96 g, 84 %), který byl použit v následujících krocích bez dalšího čištění.

Rf: 0,56 (CH₂Cl₂:EtOAc 1:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,72 (s, 1H), 6,05 - 5,94 (m, 1H), 6,01 (s, 1H), 5,91 (s, 1H), 5,44 (dd, 7/ = 1,2 Hz, 7₂ = 17,1 Hz, 1H), 5,35 (dd, J, = 1,2 Hz, 7₂ = 10,5 Hz, 1H), 5,34 (m, 1H), 510 (d, 7= 5,7 Hz, 1H), 5,05 (d, 7= 5,7 Hz, 1H), 4,68 (d, 7= 5,7 Hz, 1), 4,65 (dt, 7, = 1,2 Hz, 7₂ = 6 Hz, 1H), 4,18 (d, J= 9 Hz, 2H), 4,04 (bs, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,67 - 3,60 (m, 1H), 3,55 (s, 3H), 3,43 - 3,41 (m, 2H), 3,29 3,25 (m, 2H), 3,00 (dd, J, = 8,7 Hz, 7₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,90 (dd, 7, =

2,4 Hz, 7₂ = 16,2 Hz, 1H), 2,75 (d, 7= 18,3 Hz, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 1,83 (dd, 7 = 11,4 Hz, 7₂ = 15,9 Hz, 1H), 1,39 (s, 9H), 0,73 (d, 7= 6,9 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 172,1, 152,8, 148,6, 148,3, 144,6, 140,7, 140,6, 131,5, 131,2,

131,1, 130,4, 125,3, 125,0, 123,3, 120,9, 119,1, 118,8, 117,6, 112,9, 112,0, 101,6, 99,2, 71,8, 69,0, 68,4, 59,7, 59,2, 57,6, 57,3, 56,7, 55,8, 55,2, 41,4, 39,9, 28,2, 26,0, 25,0, 18,6, 15,6, 9,0.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C40H51N5OH: 777,8. Nalezeno (M+l)⁺: 778,3.

-148CZ 304973 B6

Příklad 112

K roztoku 117 (3,96 g, 5,09 mmol) vMeOH (37,4 ml) byl přidán při 0 °C trimethylchlorsilan (6,5 ml, 50,9 mmol). Reakční směs se míchala 4 h při 23 °C a pak bylo rozpouštědlo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl rozpuštěn v EtOAc (70 ml) a promyt nasyceným vodným roztokem NaHCO₂ (2x 45 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo ío odstraněno za vakua za získání 118 (2,77 g, 86 %), který byl použit v následujících krocích bez dalšího čištění.

Rf: 0,61 (hex:EtOAc 1:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,50 (s, 1H), 6,45 (m, 1H), 6,10 - 6,03 (m, 1H), 6,00 (s, 1H), 5,93 (s, 1H), 5,47 (dd, J, = 1,2 Hz, J₂ = 17,1 Hz, 1H), 5,38 (dd, J, = 1,2 Hz, J₂ = 10,5 Hz, 1H), 4,81 4,68 (m, 2H), 4,10 - 4,03 (m, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,70-3,44 (m, 2H), 3,35 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 3,28 (dt, 7 = 2,7 Hz, 7 = 9 Hz, 1H), 2,98 (dd, 7 = 7,8 Hz, 7=18 Hz, 1H), 2,90 (dd, 7 = 2,7 Hz, 7 = 16,2 Hz, 1H), 2,78 (dd, 7 = 6,9 Hz, 7, = 14,1 Hz, 1H), 2,63 (d, 7= 18,3 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 1,88 (dd, 7, = 13,2 Hz, J₂ = 15,6 Hz, 1H), 0,95 (d, 7= 6,9 Hz, 3H).

13,

C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 175,8, 152,9, 146,6, 146,6, 144,6, 142,5, 140,8, 140,6, 131,5, 131,3, 128,5, 121,1, 120,8, 118,9, 117,8, 117,0, 113,2, 111,9, 101,7, 68,9, 60,6, 59,1, 56,6, 56,4, 55,7, 55,2, 50,5, 41,7, 39,4, 26,1, 25,0, 21,0, 15,6, 9,2.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₃H₃₉N₅O₈: 633,

Příklad 113 . Nalezeno (M+l)⁺: 634,2.

_oA>nh₂(118) I

(119)

- 149CZ 304973 B6

K roztoku 118 (3,52 g, 5,56 mmol) v CH₂C1₂ (28 ml) byl přidán při 23 °C fenylisothiokyanát (3,99 ml, 33,36 mmol). Reakční směs se míchala 3 h a pak bylo rozpouštědlo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně za získání 119 (3,5 g, 82 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,52 (CH₂Cl₂:EtOAc 1:5).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,69 (bs, 1H), 7,49 - 7,46 (m, 2H), 7,34 - 7,21 (m, 2H), 6,96 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 6,06 - 5,97 (m, 1H), 6,03 (s, 1H), 5,96 (bs, 1H), 5,91 (s, 1H), 5,66 (s, 1H), 5,47 (dd, Ji = 1,5 Hz, J₂ = 17,1 Hz, 1H), 5,37 (dd, 7/ = 1,5 Hz, 7₂ = 10,5 Hz, 1H), 5,36 (s, 1H), 4,75 4,70 (m, 2H), 4,54 - 4,49 (m, 1H), 4,14 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 4,07 - 4,06 (m, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,44 (m, 1H), 3,35 (d, 7= 8,1 Hz, 1H), 3,21 (dt, J_x = 2,7 Hz, 7₂ = 6,6 Hz, 1H), 2,94 - 2,82 (m, 2H), 2,63 (d, 7= 18 Hz, 1H), 2,24 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 1,90 (dd, 7, = 11,7 Hz, 7₂ = 15,9 Hz, 1H), 0,71 (d, 7= 6,9 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 178,6, 171,9, 152,8, 146,7, 144,5, 142,6, 140,8, 140,5, 136,3, 131,3, 131,0, 129,9, 129,8, 128,9, 126,7, 125,2, 124,3, 121,1, 120,6, 118,9, 117,7, 116,5, 112,8,

112,1, 101,6, 68,9, 60,5, 58,9, 57,3, 56,1, 55,9, 55,1, 53,3, 41,5, 39,2, 25,9, 24,6, 20,9, 15,4, 9,1.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₄oH₄₄N₃0₈S: 768,8. Nalezeno (M+l)⁺: 769,3.

Příklad 114

K roztoku 119 (3,38 g, 4,4 mmol) v MeOH (22 ml) byl přidán při 0 °C trimethylchlorosilan (2,3 ml, 22 mmol). Reakční směs se míchala 1,5 h při 23 °C a pak bylo rozpouštědlo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl rozpuštěn v EtOAc (70 ml) a promyt 0,1 N HC1 (2x 75 ml). Vodná fáze byla zalkalizována nasyceným vodným roztokem NaHCO₂ a extrahována CH₂CI₂ (2x 100 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za vakua za získání 120 (2,47 g, 100 %) jako bílé látky, která byla použita v následujících krocích bez dalšího čištění.

Rf: 0,26 (EtOAc:MeOH 5:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,45 (s, 1H), 6,05 - 5,98 (m, 1H), 5,97 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,90 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,44 (dd, J_x = 1,2 Hz, 7₂ = 17,1 Hz, 1H), 5,35 (dd, J_x = 1,2 Hz, 7₂ =10,2 Hz, 1H), 4,75 - 4,71 (m, 2H), 4,12 - 4,10 (m, 1H), 3,99 (d, 7= 2,4 Hz, 1H), 3,92 (bs, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,36 - 3,26 (m, 2H), 3,06 (dd, J_x = 8,4 Hz, 7₂ = 18 Hz, 1H), 2,89 (dd, J_x = 2,7 Hz, 7₂ = 15,9 Hz, 1H), 2,75 - 2,73 (m, 2H), 2,48 (d, 7= 18 Hz, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 1,85 (dd,7i = 11,7 Hz,7₂ = 15,6 Hz, 1H).

- 150CZ 304973 B6 ¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 153,0, 146,6, 144,5, 142,8, 140,7, 131,5, 130,5, 128,9, 121,3, 120,9, 119,1, 117,9, 116,7, 113,8, 111,6, 101,5, 69,0, 60,6, 59,8, 58,7, 56,5, 56,0, 55,3, 44,2, 41,8,31,7, 26,1,25,7, 15,7, 9,2.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C30H34N4O7: 562,6. Nalezeno (M+l)⁺: 563,2.

Příklad 115

K roztoku 120 (2,57 g, 4,4 mmol) v CH2CI2 (44 ml) byl přidán při -20 °C TrocCl (0,9 ml, 6,6 mmol) a pyridin (0,53 ml, 6,6 mol). Reakční směs se míchala 30 min. při 0 °C a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (50 ml) a promyt 0,1 N HC1 (2x 25 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku za získání 121 (3,24 g, 100 %), který byl použit v následujících krocích bez dalšího čištění.

Rf: 0,62 (EtOAc:MeOH 5:1).

’HNMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,50 (s, 1H), 6,07 - 6,01 (m, 1H), 5,99 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,93 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,68 (s, 1H), 5,46 (dd, Ji = 1,2 Hz, J = 17,1 Hz, 1H), 5,37 (dd, J = 1,2 Hz, J = 10,5 Hz, 1H), 4,74 (t, J= 5,7 Hz, 2H), 4,63 - 4,62 (m, 1H), 4,54 (d, J= 12 Hz, 1H), 4,30 (d, J= 12 Hz, 1H), 4,14-4,11 (m, 2H), 4,02-4,01 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,36 - 3,26 (m, 3H), 3,04 (dd, J = 8,1 Hz, J₂ = 17,7 Hz, 1H), 2,91 (dd, J = 2,4 Hz, J₂ = 15,6 Hz, 1H), 2,60 (d, J= 17,7 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 1,84 (dd, J = 12 Hz, J = 15,9 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C33H35CI3N4O9: 738,0. Nalezeno (M+l)⁺: 737,2.

Příklad 116

K roztoku 121 (0,45 g, 0,60 mmol) v CH₂CN (4 ml) byl přidán při 0 °C diisopropylethylamin (2,17 ml, 12,46 mmol), bromomethylmethylether (0,76 ml, 9,34 mmol) a dimethylaminopyridin

- 151 CZ 304973 B6 (8 mg, 0,062 mmol). Reakční směs se zahřála na 40 °C na 5 h. Pak se reakční směs zředila CH₂C1₂ (50 ml) a promyla 0,1 N HCI (2x 25 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno sníženého tlaku za získání 122 (0,453 g, 95 %), který byl použit v následujících krocích bez dalšího čištění.

Rf: 0,31 (RP-18 CH₃CN-H₂O 8:2).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,70 (s, 1H), 6,05 - 5,99 (m, 1H), 5,97 (s, 1H), 5,92 (s, 1H), 5,43 (dd, Ji = 1,2 Hz, J₂ = 17,1 Hz, 1H), 5,34 (dd, Ji = 1,2 Hz, J₂ = 10,5 Hz, 1H), 5,10 - 5,04 (m, 2H), 4,72 - 4,68 (m, 2H), 4,60 (t, J= 5,7 Hz, 1H), 4,49 (d, /= 21,3 Hz, 1H), 4,38 (d, J= 12,3 Hz, 1H), 4,18 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,03 - 4,00 (m, 2H), 3,71 (s, 3H), 3,54 (s, 3H), 3,38 - 3,22 (m, 4H), 3,04 (dd, Ji = 7,8 Hz, J₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,91 (dd, J = 2,4 Hz, J₂ = 15,9 Hz, 1H), 2,61 (d, J= 18 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,03 (s, 3H), 1,76 (dd, J = 11,7 Hz, J₂ = 15,6 Hz, 1H). ESI-MS m/z: Calcd. pro C33H39CI3N4O10: 782,0. Nalezeno (M+l)⁺: 783,2.

Příklad 117

K roztoku 122 (0,45 g, 0,579 mmol) v 90% vodném roztoku kyseliny octové (6ml/l ml) byl přidán práškový zinek (0,283 g, 4,34 mmol) a reakční směs se míchala 6 h a při 23 °C. Pak byla směs zfiltrována přes vrstvu celitu, která se promyla CH₂C1₂ (25 ml). Organická vrstva byla promyta vodným nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (pH= 9) (2x 15 ml), sušena Na₂SO₄, zfiltrována a roztok byl odstraněn za sníženého tlaku za získání 123 (0,351 g, 100 %), který byl použit v následujících krocích bez dalšího čištění.

Rf: 0,38 (SiO₂ EtOAc:MeOH 5:1).

'HNMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,68 (s, 1H), 6,06-5,99 (m, 1H), 5,97 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,91 (d, J= 1,25 Hz, 1H), 5,44 (dd, J, = 1,5 Hz, J₂ = 17,4 Hz, 1H), 5,36 (dd, J = 1,5 Hz, J₂ = 10,2 Hz, 1H), 5,08 (q, / = 5,7 Hz, 2H), 5,74 - 4,70 (m, 2H), 4,02 (d, /= 3 Hz, 1H), 4,00 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 3,91 (m, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,56 (s, 3H), 3,37 - 3,35 (m, 1H), 3,29 (t, J= 2,7 Hz, 1H), 3,08 (dd, J, = 7,5 Hz, J₂ = 18 Hz, 1H), 2,90 (dd, J, = 2,7 Hz, J₂ = 15,9 Hz, 1H), 2,74 (dd, J = 2,4 Hz, J₂ = 5,1 Hz, 2H), 2,48 (d, J= 18 Hz, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 1,80 (dd, J = 12 Hz, J₂= 15,9 Hz, 2H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C3₂H3₈N₄O₈: 606,6. Nalezeno (M+l)⁺: 607,3.

- 152CZ 304973 B6

Příklad 118

K roztoku 120 (100 mg, 0,177 mmol) v CH2CI2 (0,7 ml) byl přidán při 0 °C cinnamoylchlorid (29,5 mg, 0,177 mmol) a pyridin (14,37 μΐ, 0,177 mmol). Reakční směs se míchala 1,5 h a pak byl roztok zředěn CH2CI2 (15 ml) a promyt 0,1 N HC1 (10 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient hex.EtOAc 2:1 až hex:EtOAc 1:3) za získání 124 (86 mg, 70 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,77 (EtOAc:MeOH 5:1).

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,39 - 7,26 (m, 5H), 7,25 (d, J= 15,6 Hz, 1H), 6,44 (s, 1H), 6,01 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,94 (d, 7 = 1,2 Hz, 1H), 5,68 (s, 1H), 5,65 (d, 7= 15,6 Hz, 1H), 5,44 (dd, 7 = 1,2 Hz, 7 = 17,1 Hz, 1H), 5,35 (dd, 7 = 1,2 Hz, 7₂ = 10,5 Hz, 1H), 5,18 (t, 7= 6 Hz, 1H), 4,73 - 4,69 (m, 2H), 4,11 - 4,09 (m, 3H), 3,66 - 3,58 (m, 2H), 3,65 (s, 3H), 3,38 - 3,31 (m, 3H), 3,02 (dd, 7 = 8,4 Hz, 7₂ = 18,3 Hz, 1), 2,92 (dd, 7 = 2,7 Hz, 7₂ = 15,6 Hz, 1H), 2,59 (d, 7= 18,3 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,89 (dd, 7 = 12,3 Hz, J₂ = 16,2 Hz, 1H).

13.

C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 165,5, 152,7, 146,6, 144,4, 142,6, 140,7, 140,5, 140,1, 134,7,

131,2, 130,6, 129,3, 128,7, 128,4, 127,6, 120,8, 120,5, 120,3, 118,9, 117,6, 116,5, 113,2, 111,8,

101,6, 68,8, 60,4, 59,0, 56,2, 56,1, 55,7, 55,0,41,5, 40,6, 25,9, 25,1, 15,5, 9,0.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C39H40N4O8: 692,7. Nalezeno (M+l)⁺: 693,2.

Příklad 119

K roztoku 124 (495 mg, 0,713 mmol) v CH₂C1₂ (28 ml) byla přidána při 0 °C kyselina octová (163 μΐ), Pd (PPh₃)2Cl₂ (50 mg, 0,0713 mmol) a Bu₃SnH (384 μΐ, 1,42 mmol). Reakční směs se míchala 2 h při 23 °C a pak byl roztok nalit na výplň otevřené kolony pro sloupcovou chromato- 153CZ 304973 B6 grafii (SiO₂, gradient hex: EtOAc 1:1 až EtOAc) za získání 125 (435 mg, 100 %) jako bílé pevné látky. Rf: 0,22 (hex:EtOAc 1:2).

'HNMR(300 MHz, CDC1₃): δ 7,36-7,33 (m, 5H), 7,28 (d,7= 15,9 Hz, 1H), 6,45 (s, 1H), 5,90 (s, 1H), 5,83 (s, 1H), 5,55 (d, 7= 15,6 Hz, 1H), 5,24 (t, 7= 12,9 Hz, 1H), 4,17 (d, 7= 1,8 Hz, 1H), 4,10 - 4,07 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,46 - 3,32 (m, 3H), 3,14 - 3,00 (m, 2H), 2,54 (d, 7 = 18 Hz, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,05 (s, 6H), 1,89 (dd, 7 = 12 Hz, 7₂ = 15,3 Hz, 1H).

13,

C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 165,7, 146,9, 145,1, 144,2, 143,0, 140,8, 136,5, 134,5, 130,6,

129,4, 128,9, 127,9, 127,7, 120,8, 119,8, 117,8, 114,1, 112,9, 107,1, 100,8, 60,5,59,2, 56,4, 56,0, 55,1, 41,4, 30,7, 25,5, 25,3, 15,5, 8,9.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₅H₃₆N₄O₆: 608,6. Nalezeno (M+l)⁺: 609,2.

Příklad 120

K roztoku 125 (86 mg, 0,124 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/l ml) byl přidán AgNO₃ (632 mg, 3,72 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 24 h. Pak byl přidán při 0 °C solný roztok (10 ml) a vod. nas. roz. NaHCO₃ (10 ml) a směs se míchala 15 min, zfiltrovala přes vrstvu celitu a promyla CH₂C1₂ (20 ml). Roztok byl extrahován a organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a zakoncentrována za vakua. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient EtOAc až EtOAc:MeOH 2:1) za získání 126 (70 mg, 83 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,07 (EtOAc:MeOH 5:1).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,40 - 7,28 (m, 5H), 7,25 (d, 7= 15,6 Hz, 1H), 6,48 (s, 1H), 6,00 - 5,94 (m, 1H), 5,96 (s, 1H), 5,92 (s, 1H), 5,89 (s, 1H), 5,53 (d, 7= 15,6 Hz, 1H), 5,42 - 5,36 (m, 2H), 5,31 (dd, 7 = 1,2 Hz, 7₂ = 10,8 Hz, 1H), 4,71 - 4,65 (m, 2H), 4,51 (d, 7= 3 Hz, 1H), 4,42 (bs, 1H), 4,07 (bs, 1H), 3,79 (dd, 7 = 7,8 Hz, 7 = 12,9 Hz, 1H), 3,68 (s, 3), 3,62 - 3,59 (m, 1H), 3,41 - 3,37 (m, 1H), 3,16 (d, 7= 7,8 Hz, 1H), 2,95 (dd, 7 = 7,5 Hz, 7₂ = 17,4 Hz, 1H), 2,88 2,83 (m, 1H), 2,43 (d, 7 = 18 Hz, 1H), 2,28 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,81 (dd, 7 = 11,7 Hz, 7= 15,3 Hz, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 165,5, 152,9, 146,7, 144,5, 144,4, 142,7, 141,0, 140,0, 134,6,

131,4, 130,7, 129,2, 128,8, 128,5, 127,8, 127,7, 124,6, 121,2, 120,9, 118,9, 116,5, 114,9, 114,7,

111,3, 101,6, 93,3, 92,3, 83,2, 68,9, 60,6, 57,8, 56,8, 56,6, 56,3, 52,5, 52,2, 41,6, 26,1, 24,6, 15,6,

9,1.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C^ELhNDq: 683,7. Nalezeno (M-17)⁺: 666,3.

-154CZ 304973 B6

Příklad 121

K roztoku 120 (1,61 g, 2,85 mmol) v CH₂C1₂ (4 ml) byl přidán při 0 °C hydrocinnamoylchlorid (423 μΐ, 2,85 mmol) a pyridin (230 μΐ, 2,85 mmol). Reakční směs se míchala 1,5 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (50 ml) a promyt 0,1 N HC1 (30 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chro10 matografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient hex:EtOAc 2:1 až EtOAc) za získání 127 (1,64 mg, 83 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,63 (EtOAc:MeOH 5:1).

’H NMR (300 MHz, CDCfi): δ 7,26 - 7,14 (m, 3H), 7,04 - 7,01 (m, 2H), 6,44 (s, 1H), 6,07 5,99 (m, 1H), 5,97 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 5,91 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,75 (bs, 1H), 5,45 (dd, 7 =

1,5 Hz, 7₂ = 17,4 Hz, 1H), 5,36 (dd, 7 = 1,5 Hz, 7 = 10,2 Hz, 1H), 5,03 (t, J= 5,7 Hz, 1H), 5,74 - 5,66 (m, 2H), 4,09 (d, 7= 2,4 Hz, 1H), 4,01 (bs, 1H), 3,97 (d, 7= 2,7 Hz, 1H), 3,62 (dd, 7 = 8,4 Hz, 7 = 13,5 Hz, 1H), 3,42 (s, 3H), 3,37 - 3,28 (m, 3H), 3,04 - 2,87 (m, 3H), 2,67 - 2,46 (m,

4H), 2,29 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 2,03 (s, 3H), 1,83 - 1,79 (m, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCfi): δ 171,8, 152,8, 146,7, 144,5, 144,4, 142,7, 140,9, 140,8, 140,6,

131,4, 130,7, 128,9, 128,4, 128,2, 128,1, 126,0, 120,8, 120,4, 118,9, 117,6, 116,6, 113,0, 111,9,

101,6, 68,9, 60,3, 59,0, 56,3, 56,2, 55,6, 55,1, 41,6, 40,3, 37,7, 31,0, 25,9, 25,2, 15,5, 9,1.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃9H₄₂N₄0í_i: 694,3. Nalezeno (M+l)⁺: 695,3.

Příklad 122

K roztoku 127 (50 mg, 0,072 mmol) v CH₃CN/H₂O (l,5ml/l ml) byl přidán AgNCfi (444 mg, 2,16 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 24 h. Pak byl přidán při 0 °C solný roztok

- 155 CZ 304973 B6 (10 ml) a vod. nas. roz. NaHCO₃ (10 ml) a směs se míchala 15 min, zfiltrovala přes vrstvu celitu a promyla CH2CI2 (15 ml). Roztok byl extrahován a organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a zakoncentrována za vakua. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografíí na otevřené koloně (SiO₂, gradient EtOAc až EtOAc:MeOH 3:1) za získání 128 (30 mg, 61 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,65 (EtOAc:MeOH 5:1).

*H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,22 - 7,11 (m, 3H), 7,06 - 7,03 (m, 2H), 6,43 (s, 1H), 6,08 5,98 (m, 1H), 5,96 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 5,90 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,66 (bs, 1H), 5,44 (dd, J_x =

1,5 Hz, /₂ = 17,4 Hz, 1H), 5,36 (dd, /, = 1,5 Hz, J₂ = 10,5 Hz, 1H), 4,78 - 4,65 (m, 2H), 4,44 (d, J= 3 Hz, 1H), 4,36 (bs, 1H), 3,99 (td, /, = 2,1 Hz, J₂ = 9,9 Hz, 1H), 3,78 -3,67 (m, 1H), 3,56 (dt, / = 1,5 Hz, /₂ = 11,1 Hz, 1H), 3,43 (s, 3H), 3,30 - 3,12 (m, 2H), 3,02 - 2,89 (m, 1H), 2,83 (dd, / = 2,7 Hz, J₂ = 15,9 Hz, 1H), 2,62 - 2,51 (m, 2H), 2,36 (d, / =18,6 Hz, 1H), 2,27 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,86 - 1,66 (m, 3H).

C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 171,6, 146,7, 141,2, 141,1, 131,5, 130,5, 128,9, 128,3, 128,2, 128,2, 125,9, 124,7, 121,1, 121,0, 118,8, 111,3, 101,6, 94,0, 92,3, 83,2, 68,8, 60,3, 57,9, 56,6,

56,3, 52,3, 52,0, 41,7, 41,6, 41,1, 37,9, 31,1, 31,0, 26,1, 24,6, 15,5, 9,2.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C38H43N3O9: 685,7. Nalezeno (M-17)⁺: 668,3.

Příklad 123

K roztoku 127 (1,64 mg, 2,36 mmol) v CH₃CN (12 ml) byl přidán při 0 °C diisopropylethylamin (8,22 ml, 47,2 mmol), bromomethylmethylether (2,89 ml, 35,4 mmol) a dimethylaminopyridin (29 mg, 0,236 mmol). Reakční směs se zahřála na 40 °C na 5 h. Pak se reakční směs zředila CH₂C1₂ (80 ml) a promyla 0,1 N HC1 (3x 25 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno sníženého tlaku za získání 129 (1,46 g, 84 %), který byl použit v následujících krocích bez dalšího čištění.

Rf: 0,24 (RP-18 CH₃CN-H₂O 8:2).

Ή NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,27 - 7,11 (m, 3H), 7,05 - 7,02 (m, 2H), 6,67 (s, 1H), 6,08 5,98 (m, 1H), 5,96 (d, / = 1,2 Hz, 1H), 5,90 (d, / = 1,2 Hz, 1H), 5,44 (dd, / = 1,2 Hz, /₂ = 17,1 Hz, 1H), 5,34 (dd, /, = 1,2 Hz, J₂ = 10,5 Hz, 1H), 5,05 (d, /= 6 Hz, 1H), 5,00 (d, J= 6 Hz, 1H), 4,97 (t, /=5,1 Hz, 1H), 4,75 - 4,68 (m, 2H), 4,16 (d, /= 2,7 Hz, 1H), 3,98 - 3,97 (m, 1H), 3,68 - 3,67 (m, 1H), 3,65 - 3,61 (m, 1H), 3,52 (s, 3H), 3,35 (s, 3H), 3,32 - 3,26 (m, 3H), 3,05 2,86 (m, 3H), 2,59 - 2,48 (m, 2H), 2,30 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,94 (s, 3H), 1,91 - 1,67 (m, 3H).

- 156CZ 304973 B6 ¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 171,4, 152,7, 148,5, 148,3, 144,5, 140,9, 140,8, 140,4, 131,1,

130.9, 130,4, 130,1, 128,4, 128,2, 126,0, 124,6, 123,7, 120,3, 119,0, 112,9, 111,8, 101,6, 99,1,

68.9, 59,4, 59,1, 57,5, 56,7, 56,3, 55,4, 55,1, 41,5, 40,2, 37,7, 30,9, 25,8, 25,2, 15,5, 9,0.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C41H46N4O9: 738,8. Nalezeno (M+23)⁺: 761,2.

Příklad 124

HSnBiij, Pd(PPh₃)₂CI₂AcOK:CH₂CI₂, 5 h

0°C — 23°C

K roztoku 129 (1,46 g, 1,97 mmol) v CH2CI2 (40 ml) byla přidána při 0 °C kyselina octová (450 μΐ), Pd (PPh₃)2Cl₂ (138 mg, 0,197 mmol) a Bu₃SnH (1,06 ml, 3,95 mmol). Reakční směs se míchala 5 h při 23 °C a pak byl roztok nalit na výplň otevřené kolony pro sloupcovou chromatografií (SiO₂, gradient hex: EtOAc 1:1 až EtOAc) za získání 130 (1,1 g, 85 %) jako bílé pevné látky. Rf: 0,22 (hex:EtOAc 1:2).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,21 - 7,12 (m, 3H), 6,98 - 6,95 (m, 2H), 5,86 (s, 1H), 5,84 (s, 1H), 5,79 (bs, 1H), 5,26 (d, J= 6 Hz, 1H), 5,11 (d, 7 = 6 Hz, 1H), 5,05 (t, 7= 5,7 Hz, 1H), 4,19 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 4,03 (d, 7= 2,4 Hz, 1H), 3,99 (bs, 1H), 3,65 (s, 3H), 3,56 (s, 3H), 3,53 3,42 (m, 2H), 3,34 (d, 7= 8,7 Hz, 1H), 3,27 (brd, 7= 11,7 Hz, 1H), 3,11 (d, J= 15 Hz, 1H), 2,99 (dd, 7, = 8,4 Hz, 7₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,64 - 2,52 (m, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 1,84 (t, 7= 7,8 Hz, 2H), 1,71 (dd, 7, = 12,9 Hz, 7₂ = 13,5 Hz, 1H).

C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 171,7, 149,0, 147,6, 140,6, 132,1, 131,9, 130,9, 130,5, 128,5,

128,4, 128,3, 128,0, 126,0, 124,9, 124,6, 123,1, 117,6, 100,8, 99,6, 59,6, 58,9, 57,6, 56,6, 56,5,

55,6, 55,1, 54,5, 37,8, 31,5, 31,1, 25,9, 25,1, 22,6, 15,5, 8,8.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C^KL^O?: 654,7. Nalezeno (M⁺+Na): 655,1.

Příklad 125

- 157CZ 304973 B6

K roztoku 130 (130 mg, 0,198 mmol) v CH2CI2 (1 ml) byl přidán při 0 °C trifluoroacetanhydrid (41,9 μΐ, 0,297 mmol) a pyridin (24 μΐ, 0,297 mmol). Reakční směs se míchala 2,5 h a pak byl roztok zředěn CH2CI2 (10 ml) a promyt 0,1 N HC1 (7 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient hex:EtOAc 4:1 až hex.EtOAc 1:4) za získání 131 (93 mg, 62 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,30 (hex:EtOAc 1:2).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,25 - 7,16 (m, 3H), 7,04 - 7,02 (m, 2H), 6,78 (s, 1H), 6,02 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,95 (d, 7 = 1,2 Hz, 1H), 5,11 (d, 7= 6,6 Hz, 1H), 4,98 (d, 7= 6,6 Hz, 1H), 4,95 (t, 7 = 6,3 Hz, 1H), 4,61 (bs, 1H), 4,30 (s, 1H), 4,08 (s, 1H), 3,96 (d, 7 = 7,2 Hz, 1H), 3,66 - 3,54 (m, 1H), 3,50 (s, 3H), 3,39 (s, 3H), 3,19 (dd, 7, = 7,8 Hz, 7₂ =18,3 Hz, 1H), 2,88 (d, 7= 18,6 Hz, 1H), 2,79 (dd, 7, = 2,7 Hz, 7₂ = 15,9 Hz, 1H), 2,66 - 2,62 (m, 1H), 2,57 (s, 3H), 2,06 (s, 6H), 1,94 - 1,87 (m, 1H), 1,77- 1,68 (m, 2H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₉H4iF₃N₄O₈: 750,7. Nalezeno (M+Na)⁺: 751,2.

Příklad 126

K roztoku 130 (130 mg, 0,198 mmol) v CH₂C1₂ (2 ml) byl přidán při 0 °C chloroacetylchlorid (23,65 μΐ, 0,297 mmol) a pyridin (24 μΐ, 0,297 mmol). Reakční směs se míchala 1,5 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt 0,1 N HC1 (7 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient hex:EtOAc 2:1 až hex:EtOAc 1:1) za získání 132 (130 mg, 90 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,31 (hex:EtOAc 1:2).

Ή NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,24 - 7,15 (m, 3H), 7,07 - 7,05 (m, 2H), 6,69 (s, 1H), 6,00 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,94 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,11 (d, 7= 5,7 Hz, 1H), 5,04 (d, 7= 5,7 Hz, 1H), 4,93 (m, 1H), 4,36 (s, 2H), 4,16 (d, J= 2,7 Hz, 1H), 4,01 (m, 2H), 3,64 (dd, J, = 6,9 Hz, 7₂ = 12,3 Hz, 1H), 3,54 (s, 3H), 3,40 (s, 3H), 3,38 - 3,35 (m, 2H), 2,29 (dt, J_x = 3 Hz, 7₂ =12 Hz, 1H), 3,03 (dd, J, = 7,8 Hz, 7₂ = 18 Hz, 1H), 2,77 (dd, 7, = 2,4 Hz, 7₂ = 16,2 Hz, 1H), 2,58 - 2,52 (m, 3H), 2,32 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,92 - 1,85 (m, 1H), 1,76 - 1,65 (m, 2H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 171,6, 164,9, 148,3, 144,6, 140,9, 140,8, 139,8, 132,1, 131,9,

131,1, 130,0, 128,2, 126,0, 125,0, 124,6, 123,5, 120,1, 117,5, 113,0, 111,5, 101,7, 99,1, 64,9,

59,7, 58,9, 57,7, 56,6, 56,4, 55,2, 55,1, 41,5, 40,2, 39,9, 37,7, 30,9, 26,3, 25,1, 15,4, 9,1.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃9H₄₃C1N₄O₈: 730,2. Nalezeno (M+Na)⁺: 731,1.

. 1 SR CZ 304973 B6

Příklad 127

K roztoku 130 (130 mg, 0,198 mmol) v CH₂C1₂ (2 ml) byl přidán při 0 °C chloropropionylchlorid (28,35 μΐ, 0,297 mmol) a pyridin (24 μΐ, 0,297 mmol). Reakční směs se míchala 1,5 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt 0,1 N HC1 (7 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chroío matografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient hex:EtOAc 1:1) za získání 133 (94 mg, 64 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,43 (hex:EtOAc 1:2).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,23 - 7,12 (m, 3H), 7,06 - 7,04 (m, 2H), 6,69 (s, 1H), 5,97 (s, 1H), 5,92 (s, 1H), 5,08 (d, 7= 6 Hz, 1H), 5,00 (d, 7= 6 Hz, 1H), 4,97 (m, 1H), 4,16 (bs, 1H), 4,00 (m, 1H), 3,88 (t, 7= 6,9 Hz, 2H), 3,75 (t, 7= 6,9 Hz, 1H), 3,59 (dd, 7, = 6,3 Hz, 7 = 12,3 Hz, 1H), 3,53 (s, 3H), 3,37 (s, 3H), 3,03 - 3,26 (m, 1H), 3,17 - 2,97 (m, 3H), 2,83 -2,73 (m, 2H), 2,58 - 2,52 (m, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,03 (s, 6H), 1,93 -1,86 (m, 1H), 1,79 - 1,64 (m, 2H).

C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 171,9, 167,8, 148,3, 144,7, 140,8, 132,1, 132,0, 131,1, 130,2, 128,2, 126,1, 125,2, 124,6, 123,7, 122,2, 120,2, 117,6, 114,7, 112,9, 111,8, 101,7, 99,3, 74,9, 65,0, 59,6, 59,0, 57,7, 56,7, 56,4, 55,4, 55,1, 41,5, 38,5, 37,8, 37,2, 31,0, 26,4, 25,2, 15,5, 9,3.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₄oH4₅C1N₄0₈: 744,2. Nalezeno (M+Na)⁺: 745,0.

Příklad 128

K roztoku 130 (160 mg, 0,244 mmol) v CH₂C1₂ (2 ml) byl přidán při 0 °C heptafluorobutyrylchlorid (54,5 μΐ, 0,366 mmol) a pyridin (40 μΐ, 0,49 mmol). Reakční směs se míchala 2 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (15 ml) a promyt 0,1 N HC1 (10 ml). Organická vrstva byla sušena

-159CZ 304973 B6

Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient hex:EtOAc 2:1 až hex:EtOAc 1:4) za získání 134 (120 mg, 63 %)jako bílé pevné látky.

Rf: 0,40 (hex:EtOAc 1:2).

’H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,25 - 7,16 (m, 3H), 7,04 - 7,02 (m, 2H), 6,77 (s, 1H), 6,02 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 5,96 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,11 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 4,95 (d, J= 6,6 Hz, 1H), 4,94 (m, 1H), 4,58 (m, 1H), 4,25 (bs, 1H), 4,06 (bs, 1H), 3,88 (d, 7= 6,9 Hz, 2H), 3,64 (dd, J_x =

7,5 Hz, 7₂ = 12,9 Hz, 1H), 3,55 - 3,53 (m, 1H), 3,49 (s, 3H), 3,38 (s, 3H), 3,17 (dd, 7, = 8,1 Hz, 7₂ = 18,9 Hz, 1H), 2,85 (d, 7= 18,3 Hz, 1H), 2,77 (dd, J_} = 2,7 Hz, 7₂ = 16,2 Hz, 1H), 2,60 - 2,57 (m, 3H), 2,56 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 2,03 (s, 3H), 1,96 -1,88 (m, 1H), 1,79 - 1,69 (m, 2H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₄₁H4iF₇N₄O₈: 850,7. Nalezeno (M+l)⁺: 851,3.

Příklad 129

K roztoku 131 (93 mg, 0,123 mmol) vCH₂Cl₂ (1 ml) byla přidána při 0 °C kyselina trifluorooctová (381 μΐ, 4,95 mmol) a reakční směs se míchala 6 h při 23° C. Reakce byla zastavena při 0 °C nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (15 ml) a reakční směs byla extrahována ethylacetátem (2x 10 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny síranem sodným, filtrovány a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku za získání 135 (65 mg, 75 %) jako bílé pevné látky, která byla použita v dalších krocích bez dalšího čištění. Rf: 0,26 (hex:EtOAc 1:1).

’H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,24 - 7,15 (m, 3H), 7,04 - 7,01 (m, 2H), 6,45 (s, 1H), 6,03 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,97 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,62 (s, 1H), 4,97 (m, 1H), 4,09 (d, 7= 1,8 Hz, 1H), 4,03 (bs, 1H), 3,99 (d, 7= 2,4 Hz, 1H), 3,73 (dd, 7/ = 7,5 Hz, 7₂ = 12 Hz, 1H), 3,38 (s, 3H), 3,34 - 3,28 (m, 3H), 3,05 (dd, 7i = 8,4 Hz, 7₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,75 (dd, J, = 3,3 Hz, 7₂ =16,5 Hz, 1H), 2,60 - 2,47 (m, 3H), 2,30 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,91 - 1,65 (m, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₇H₃₇F₃N₄O₇: 706,2. Nalezeno (M+l)⁺: 707,2.

-160CZ 304973 B6

Příklad 130

K roztoku 130 (130 mg, 0,177 mmol) v CH₂C1₂ (1 ml) byla přidána při 0 °C kyselina trifluorooctová (545 μΐ, 7,08 mmol) a reakční směs se míchala 3,5 h při 23 °C. Reakce byla zastavena při 0 °C nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (15 ml) a reakční směs byla extrahována ethylacetátem (2x 10 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny síranem sodným, filtrovány a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku za získání 136 (118 mg, 97 %) jako bílé pevné látky, která byla použita v dalších krocích bez dalšího čištění. Rf: 0,27 (hex:EtOAc 1:1).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,23 - 7,13 (m, 3H), 7,06 - 7,03 (m, 2H), 6,45 (s, 1H), 5,98 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,91 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,04 (t, J= 4,5 Hz, 1H), 4,37 (bs, 2H), 4,13 (d, 7 =

2,1 Hz, 1H), 4,03 (bs, 2H), 3,68 - 3,61 (dd, 7; = 7,2 Hz, 7 = 12,3 Hz, 1H), 3,40 (s, 3H), 3,37 3,28 (m, 3H), 3,02 (dd, 7 = 8,4 Hz, 7₂ = 18,6 Hz, 1H), 2,75 (dd, 7 = 2,7 Hz, 7₂ = 15,9 Hz, 1H), 2,58-2,50 (m, 3H), 2,32 (s, 3H), 2,01 (s, 6H), 1,94 -1,67 (m, 3H).

13.

C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 171,8, 165,0, 146,8, 144,6, 142,9, 141,0, 140,9, 139,8, 132,0,

130.3, 129,4, 128,5, 128,3, 126,0, 120,8, 120,1, 117,4, 116,1, 113,0 111,5, 101,7, 60,5, 58,7,

56.3, 56,2, 55,2, 55,0, 41,5, 40,4, 39,5, 37,7, 31,0, 29,6, 26,4, 25,3, 15,5, 9,2.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₇H₃₉C1N₄O₇: 686,2. Nalezeno (M+l)⁺: 687,2.

Příklad 131

K roztoku 133 (94 mg, 0,126 mmol) v CH₂C1₂ (1 ml) byla přidána při 0 °C kyselina trifluorooctová (385 μΐ, 5,0 mmol) a reakční směs se míchala 2,5 h při 23 °C. Reakce byla zastavena při 0°C nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (15 ml) a reakční směs byla extrahována ethylacetátem (2x 10 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny síranem sodným, filtrovány a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku za získání 137 (118 mg, 97 %) jako

- 161 CZ 304973 B6 bílé pevné látky, která byla použita v dalších krocích bez dalšího čištění. Rf: 0,24 (hex:EtOAc 1:1).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,25 - 7,14 (m, 3H), 7,05 - 7,03 (m, 2H), 6,44 (s, 1H), 5,98 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,92 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,82 (s, 1H), 5,20 (t, J= 4,8 Hz, 1H), 4,07 (d, J =

2,1 Hz, 1H), 4,01 (bs, 2H), 3,98 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 3,93 - 3,84 (m, 2H), 3,63 (dd, J, = 1,5 Hz, J₂= 6,9 Hz, ,/₃ = 12 Hz, 1H), 3,44 (bs, 3H), 3,37 - 3,26 (m, 3H), 3,11 -3,06 (m, 2H), 3,01 (dd, J_x = 8,4 Hz, J₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,80 (brd, J= 13,8 Hz, 1H), 2,58 -2,47 (m, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,03 (s, 3H), 2,01 (s, 3H), 193 -1,68 (m, 3H).

^I3C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 171,7, 168,0, 146,7, 144,6, 142,8, 142,1, 141,0, 140,8, 140,1,

130,7, 129,0, 128,2, 126,0, 122,2, 120,9, 116,7, 114,7 113,1, 111,7, 102,3, 101,7, 72,0, 60,4,

59,1, 56,4, 56,3, 55,7, 55,2, 41,7, 40,3, 38,8, 37,8, 37,1, 31,0, 26,4, 25,2, 15,5, 9,4.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C_3gH₄₁ClN₄O₇: 700,2. Nalezeno (M+l)⁺: 723,1.

Příklad 132

K roztoku 134 (46 mg, 0,054 mmol) v CH₂C1₂ (1 ml) byla přidána při 0 °C kyselina trifluorooctová (166 μΐ, 2,16 mmol) a reakční směs se míchala 10 h při 23 °C. Reakce byla zastavena při 0 °C nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (15 ml) a reakční směs byla extrahována ethylacetátem (2x 10 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny síranem sodným, filtrovány a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku za získání 138 (35 mg, 80 %) jako bílé pevné látky, která byla použita v dalších krocích bez dalšího čištění. Rf: 0,26 (hex:EtOAc 1:1).

Ή NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,23 - 7,12 (m, 3H), 7,04 - 7,01 (m, 2H), 6,45 (s, 1H), 6,03 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,97 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,64 (s, 1H), 4,98 (m, 1H), 4,09 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 4,03 (bs, 1H), 3,98 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 3,75 (dd, J, = 9,6 Hz, J₂ = 14,1 Hz, 1H), 3,35 (s, 3H), 3,29 - 3,24 (m, 3H), 3,04 (dd, J_x = 7,8 Hz, J₂ = 18,0 Hz, 1H), 2,74 (dd, Ji = 3,0 Hz, J₂ = 16,8 Hz, 1H), 2,57 - 2,45 (m, 3H), 2,30 (s, 3H), 2,03 (s, 6H), 1,92 - 1,64 (m, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₉H₃₇F₃N₄O₇: 806,7. Nalezeno (M+l)⁺: 807,3.

-162CZ 304973 B6

Příklad 133

K roztoku 136 (45 mg, 0,065 mmol) v CH2CI2 (0,3 ml) byl přidán při 0 °C acetylchlorid (4,65 μΐ, 0,065 mmol) a pyridin (5,2 μΐ, 0,065 mmol). Reakční směs se míchala 4 h a pak byl roztok zředěn CH2CI2 (15 ml) a promyt 0,1 N HC1 (7 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient hex:EtOAc 5:1 až EtOAc) za získání 139 (27 mg, 57 %) jako bílé pevné látky. Rf: 0,36 (hex:EtOAc 1:2).

’H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,26 - 7,14 (m, 3H), 7,07 - 7,04 (m, 2H), 6,84 (s, 1H), 6,00 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,94 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 4,94 (t, 7= 5,1 Hz, 1H), 4,39 - 4,38 (m, 2H), 4,02 (bs, 2H), 3,67 (d, 7= 3 Hz, 1H), 3,60 - 3,54 (m, 1H), 3,47 - 3,35 (m, 3H), 3,42 (s, 3H), 3,26 (dt, 7 =

4,8 Hz, 7 = 8,7 Hz, 1H), 3,02 (dd, J₇ = 8,1 Hz, 7 = 18,3 Hz, 1H), 2,64 - 2,38 (m, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 2,03 (s, 3H), 1,95 - 1,69 (m, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₉H4iClN₄O₈: 729,2. Nalezeno (M+23)⁺: 752,3.

Příklad 134

K roztoku 2 (15 mg, 0,0273 mmol) v CH₂C1₂ (0,2 ml) byl přidán při 0 °C acetylchlorid (1,94 μΐ, 0,0273 mmol) a pyridin (2,20 μΐ, 0,0273 mmol). Reakční směs se míchala 20 minut a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (15 ml) a promyt 0,1 N HC1 (5 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient hex:EtOAc až EtOAc:MeOH 5:1) za získání 140 (9 mg, 56 %) jako světle žluté pevné látky. Rf: 0,56 (EtOAc 5:1).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,52 (s, 1H), 6,40 (s, 1H), 5,73 (d, J= 7,5 Hz, 1H), 5,95 (d, 7=

6,9 Hz, 1H), 4,20 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 4,00 (s, 3H), 3,86 (d, J= 4,5 Hz, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,78 3,77 (m, 1H), 3,40 - 3,35 (m, 2H), 3,24 (dt, 7 = 3,6 Hz, 7₂ = 11,4 Hz, 1H), 3,17 (d, 7= 7,8 Hz,

-163 CZ 304973 B6

1H), 3,11 (d, J= 7,5 Hz, 1H), 3,04 (dd, 7 = 3,6 Hz, 7 = 18,6 Ηζ,ΙΗ), 2,92 (dt, 7 = 3,3 Hz, J₂ =

14,1 Hz, 1H), 2,43 (d,7= 18,0 Hz, 1H), 2,37 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 1,89 (s, 3H), 1,79 (s, 3H), 1,75 (dd, 7 = 2,7 Hz, J₂ = 6,9 Hz, 1H), 0,99 (d, 7= 7,5 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C31H37N5O7: 591,6. Nalezeno (M+l)⁺: 592,3.

Příklad 135

K roztoku 2 (15 mg, 0,0273 mmol) v CH₂C1₂ (0,2 ml) byl přidán při 23 °C trifluoroacetylanhydrid (3,85 μΐ, 0,0273 mmol). Reakční směs se míchala 30 minut a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (15 ml) a promyt 0,1 N HC1 (5 ml). Organická vrstva byla sušena síranem sodným, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient EtOAc až EtOAc:MeOH 4:1) za získání 141 (12,1 mg, 69 %)jako světle žluté pevné látky. Rf: 0,73 (EtOAc:MeOH 5:1).

*H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,90 (d, 7= 6,6 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,11 (d, 7= 6,6 Hz, 1H), 4,47 (bs, 1H), 4,23 (bs, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,93 (bs, 1H), 3,85 - 3,81 (m, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,40 3,36 (m, 2H), 3,23 (d, 7, = 7,2 Hz, J₂ = 18,6 Hz, 1H), 3,13 - 3,08 (m, 3H), 1,86 (s, 3H), 1,74 (dd, 7 = 10,8 Hz, J₂ = 16,8 Hz, 1H), 1,07 (d, J= 6,9 Hz, 3H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C3iH₃₄F₃N5O7: 645,6. Nalezeno (M+l)⁺: 646,3.

Příklad 136

K roztoku 45 (30 mg, 0,058 mmol) v CH₂C1₂ (0,87 ml) byl přidán při pokojové teplotě DIPEA (15,0 ml, 0,086 mmol), EDC HC1 (27,6 mg, 0,145 mmol), N-Boc-fenylalanin (22,9 mg, 0,086 mmol) a DMAP (0,7 mg, 0,006 mmol) a reakční směs se míchala 4 h. Pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt postupně 0,1 N HC1 (5 ml) a roztokem 10% NaHCO₃ (5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku.

-164CZ 304973 B6

Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, hex:EtOAc 1:2) za získání 174 (17 mg, 38 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,35 hex:EtOAc 1:2.

’H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,24 - 7,15 (m, 3H), 7,05 - 7,02 (m, 2H), 6,43 (s, 1H), 5,88 (s, 1H), 5,78 (s, 1H), 5,64 (s, 1H), 5,63 (bs, 1H), 4,80 (bs, 1H), 3,98 (s, 1H), 3,95 (bs, 2H), 3,75 (bs, 1H), 3,58 (bs, 1H), 3,53 (bs, 3H), 3,38 (m, 1H), 3,17 - 3,10 (m, 3H), 2,90 (dd, J = 8,7 Hz, J₂ = 17,7 Hz, 1H), 2,10 (s, 3H), 1,94 (s, 3H), 1,76 (dd, J = 12,3 Hz, J₂ = 15,6 Hz, 1H), 1,19 (bs, 9H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 171,2, 168,8, 146,6, 144,6, 142,8, 140,6, 137,0, 130,7, 129,5, 129,0, 128,4, 126,8, 121,1, 121,0, 117,8, 116,7, 113,3, 111,8, 101,5, 60,5, 59,7, 57,0, 56,4, 55,3,

41,9, 41,6, 38,7, 31,6, 29,7, 28,2, 26,5, 25,2, 22,6, 20,3, 15,7, 14,1, 9,3.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C42H49N5O9: 767,87. Nalezeno (M+l)⁺: 768,3.

Příklad 137

K roztoku 45 (30 mg, 0,058 mmol) v CH₂C1₂ (0,87 ml) byl přidán při pokojové teplotě DIPEA (15,0 ml, 0,086 mmol), EDC HC1 (27,6 mg, 0,145 mmol), N-Boc-valin (18,8 mg, 0,086 mmol) a DMAP (0,7 mg, 0,006 mmol) a reakční směs se míchala 4 h. Pak byl roztok zředěn CH2CI2 (10 ml) a promyt postupně 0,1 N HC1 (5 ml) a roztokem 10% NaHCO₃ (5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO4, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, hex:EtOAc 1:2) za získání 175 (18 mg, 43 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,25 hex:EtOAc 1:1.

*H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,42 (s, 1H), 5,97 (s, 1H), 5,82 (s, 1H), 5,73 (bs, 1H), 5,50 (bs, 1H), 4,82 (bs, 1H), 4,15 (bs, 1H), 4,03 (bs, 1H), 3,96 (bs, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,61 (m, 1H), 3,41 3,15 (m, 3H), 2,96 (dd, J = 8,4 Hz, J = 18,3 Hz, 1H), 2,72 (d, J= 16,5 Hz, 1H), 2,53 (d, J = 18 Hz, 1H), 2,25 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 1,93 (s, 3H), 1,81 (dd, J = 14,1 Hz, J₂ = 14,7 Hz, 1H), 1,34 (s, 9H), 0,83 - 0,76 (m, 2H), 0,61 (d, J= 6,3 Hz, 3H), 0,54 (d, J= 6,3 Hz, 3H).

13,

C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 171,6, 168,7, 155,4, 146,8, 144,5, 142,9, 140,7, 130,7, 128,8,

120,6, 117,7, 116,8, 113,3, 111,9, 101,4, 60,6, 60,0, 59,3, 57,2, 56,3, 55,2, 41,7, 29,7, 29,3, 28,2,

26,2, 25,2, 22,6, 20,3, 18,9,17,7,15,7,14,1, 9,3.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C38H49N5O9: 719,82. Nalezeno (M+l)⁺: 720,3.

-165CZ 304973 B6

Příklad 138

K roztoku 45 (38 mg, 0,073 mmol) v CH₂C1₂ (1,09 ml) byl přidán při 23 °C DIPEA (19,0 ml, 0,109 mmol), EDC HC1 (34,9 mg, 0,182 mmol), N-Boc-prolin (23,5 mg, 0,109 mmol) a DMAP (0,8 mg, 0,007 mmol) a reakční směs se míchala 4,5 h. Pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt postupně 0,1 N HC1 (5 ml) a roztokem 10% NaHCO₃ (5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn ío sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, hex:EtOAc 1:1) za získání 176 (33 mg,

%) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,14 hex:EtOAc 1:2.

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,49 (s, 1H), 6,02 (bs, 1H), 5,90 (s, 1H), 5,74 (s, 1H), 4,19 (bs, 1H), 4,09 (bs, 1H), 3,98 (bs, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,38 (d,7 = 6 Hz, 2H), 3,22 (d,7= 11,7 Hz, 1H), 3,15 - 2,99 (m, 2H), 2,80 (d, 7= 15,3 Hz, 1H), 2,63 - 2,58 (m, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,26 (s, 6H), 1,99 (s, 3H), 1,78- 1,62 (m, 1H), 1,50-0,83 (m, 7H), 1,21 (s, 9H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 171,6, 168,7, 155,4, 146,8, 144,5, 142,9, 140,7, 130,7, 128,8,

26,2, 25,2, 22,6, 20,3, 18,9, 17,7, 15,7, 14,1, 9,3.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C^H^NsO?: 717,81, Nalezeno (M+l)⁺: 718,3.

Příklad 139

K roztoku 45 (50 mg, 0,144 mmol) vCH₂Cl₂ (0,96 ml) byl přidán při 23 °C DIPEA (41,8 ml, 0,240 mmol), EDC HC1 (46,0 mg, 0,240 mmol), N-Boc-argininhydrochlorid hydrát (47,2 mg, 0,144 mmol) a DMAP (1,1 mg, 0,01 mmol) a reakční směs se míchala 4 h. Pak bylo rozpouštědlo

- 166CZ 304973 B6 odstraněno ve vakuu a zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, hex:EtOAc 1:2) za získání 177 (58 mg, 78 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,40 MeOH:EtOAc 1:5.

*H NMR (300 MHz, CDCfi): δ 7,53 (bs, 1H), 6,95 (bs, 3H), 6,54 (bs, 1H), 6,48 (s, 1H), 6,07 (s, 1H), 6,00 (bs, 1H), 5,88 (s, 1H), 5,11 (bs, 1H), 4,23 (s, 1H), 4,08 (s, 1H), 4,02 (s, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,70 (bs, 1H), 3,48 (bs, 1H), 3,37 (d, J= 6,9 Hz, 1H), 3,18 (d, J= 10,2 Hz, 1H), 3,00 - 2,94 (m, 3H), 2,82 - 2,70 (m, 2H), 2,34 (s, 3H), 2,25 (s, 6H), 1,99 (s, 3H), 1,73 (brt, 7= 14,1 Hz, 1H), 1,40 (s, 9H), 1,25 (bs, 3H), 0,95 - 0,85 (m, 2H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCfi): δ 171,6, 168,7, 155,4, 146,8, 144,5, 142,9, 140,7, 130,7, 128,8,

26,2, 25,2, 22,6, 20,3, 18,9, 17,7, 15,7, 14,1, 9,3.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C39H₅₂N₈O₉: 776,88. Nalezeno (M+l)⁺: 777,3.

Příklad 140

NH₂

EDC.HC1. CH₂CI₂ (45)

K roztoku 45 (50 mg, 0,096 mmol) vCH₂Cfi (1,44 ml) byl přidán při 23 °C DIPEA (25,8 ml, 0,144 mmol), EDC HC1 (46,0 mg, 0,240 mmol), N—Boc—tryptofan (43,8 mg, 0,144 mmol) aDMAP (1,2 mg, 0,009 mmol) a reakční směs se míchala 4 h. Pak byl roztok zředěn CH₂C1₂(10 ml) a promyt postupně 0,1 N HC1 (5 ml) a roztokem 10% NaHCCfi (5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, hex:EtOAc 1:2) za získání 178 (57 mg, 74 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,12 hex:EtOAc 1:1.

’H NMR (300 MHz, CDCfi): δ 8,50 (bs, 1H), 7,73 - 7,71 (m, 1H), 7,13 - 7,12 (m, 3H), 6,51 (s, 1H), 5,72 (s, 1H), 5,36 (bs, 1H), 5,28 (bs, 1H), 4,95 (bs, 1H), 4,41 (bs, 1H), 4,05 (s, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,50 (bs, 2H), 3,30 - 3,17 (m, 4H), 2,89 - 2,82 (m, 3H), 2,40 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 2,03 (s, 3H), 1,49 (s, 9H), 1,26 - 1,25 (m, 2H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₄₄H₅₀N6O₉: 806,90. Nalezeno (M+l)⁺: 807,3.

- 167CZ 304973 B6

Příklad 141

K roztoku 178 (43 mg, 0,053 mmol) v CH₂CN/H₂O (3 ml/2 ml) byl přidán AgNO₃ (271 mg,

1,60 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 17 h. Pak byl přidán při 0 °C vod. nas. roz. NaCl (10 ml) a vod. nas roz. NaHCO₃ (10 ml) a směs se míchala 15 min, zfiltrovala přes vrstvu celitu a promyla CH₂C1₂ (20 ml). Roztok byl dekantován a organická vrstva byla sušena a zakoncentroío vána za vakua. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂,

EtOAc:MeOH 5:1) za získání 179 (24 mg, 56 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,38 EtOAc:MeOH 5:1.

Ή NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 8,40 (s, 1H), 7,66 (bs, 1H), 7,25 - 7,21 (m, 1H), 7,16 - 7,09 (m,

2H), 6,45 (s, 1H), 5,75 (s, 1H), 5,55 (bs, 1H), 5,45 (s, 1H), 5,25 (bs, 1H), 4,36 (bs, 1H), 4,16 (bs,

1H), 4,05 (bs, 1H), 3,95 (s, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,35 - 3,02 (m, 6H), 2,83 - 2,73 (m, 3H), 2,35 (s,

3H), 2,24 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,77 (dd, 7, = 12 Hz, 7₂ = 15,3 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₄₃H₅iN₅Oi₀: 797,89. Nalezeno (M-17)⁺: 780.

Příklad 142

K roztoku 45 (50 mg, 0,0960 mmol) v CH₂C1₂ (0,7 ml) byl přidán při 0 °C 2-chloronikotinoylchlorid (17,7 mg, 0,101 mmol) a pyridin (8,1 ml, 0,101 mmol). Reakční směs se míchala 1,5 h a pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (5 ml) a promyt 0,1 N HC1 (3 ml). Organická vrstva byla sušena

Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupco-168CZ 304973 B6 vou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, hex:EtOAc 1:1) za získání 180 (45 mg, 71 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,18 (hex:EtOAc 1:2).

Ή NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 8,32 - 8,29 (m, 1H), 7,38 - 7,34 (m, 1H), 7,14 - 7,09 (m, 1H), 6,14 (s, 1H), 5,97 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,92 - 5,91 (m, 2H), 5,75 (dd, J= 2,1 Hz, 1H), 4,18 (d, 7 = 2,1 Hz, 1H), 4,15 (s, 1H), 4,07 (s, 1H), 3,91 - 3,73 (m, 2H), 3,68 (s, 3H), 3,36 (d, 7= 7,5 Hz, 1H), 3,31 (dt, 7/ = 2,4 Hz, 7₂ = 11,7 Hz, 1H), 2,92 (dd, 7 = 8,1 Hz, 7₂ = 18 Hz, 1H), 2,80 (d, 7 = 16,2 Hz, 1H), 2,58 (d,7= 18 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,97 1,83 (m, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 168,6, 164,8, 150,3, 147,2, 146,5, 144,6, 142,5, 140,6, 139,0,

130,9, 130,5, 128,8, 122,3, 120,8, 120,3, 117,6, 116,3, 112,7, 112,1, 101,6, 60,6, 58,8, 56,5, 56,3,

55,6, 55,1, 41,6, 39,8, 31,5, 26,2, 24,9, 20,3, 15,5, 9,3.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃4H₃4C1N₅O₇: 659,2. Nalezeno (M+l)⁺: 660,1.

Příklad 143

K roztoku 180 (39 mg, 0,059 mmol) v CH₃CN/H₂O (3 ml/2 ml) byl přidán AgNO₃ (301 mg, 1,77 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 17 h. Pak byl přidán při 0 °C vod. nas. roz. NaCl (10 ml) a vod. nas. roz. NaHCO₃ (10 ml) a směs se míchala 15 min, zfiltrovala přes vrstvu celitu a promyla CH₂C1₂ (20 ml). Roztok byl dekantován a organická vrstva byla sušena a zakoncentrována za vakua. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, EtOAc:MeOH 5:1) za získání 181 (28 mg, 73 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,24 EtOAc:MeOH 5:1.

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 8,33 - 8,31 (m, 1H), 7,40 - 7,35 (m, 1H), 7,16 - 7,09 (m, 2H), 6,20 (s, 1H), 5,98 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,96 (s, 1H), 5,92 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,63 (bs, 1H), 4,60 (bs, 1H), 4,47 (bs, 1H), 4,02 - 3,95 (m, 2H), 3,69 (s, 3H), 3,65 - 3,56 (m, 1H), 3,48 (s, 3H), 3,43 - 3,38 (m, 1H), 3,17 (brd, 7= 7,2 Hz, 1H), 2,88 (dd, 7, = 8,7 Hz, 7= 18,3 Hz, 1H), 2,74 (d, 7 = 15,3 Hz, 1H), 2,40 (d,7= 18,3 Hz, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,77 (dd, 7 = 12 Hz, 7= 15 Hz, 1H).

C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 168,1, 165,0, 150,0, 147,2, 146,5, 144,4, 142,5, 140,9, 138,7,

131,5, 130,2, 128,9, 122,3, 121,1, 120,7, 116,1, 114,4, 111,4, 101,5, 82,6, 60,6, 57,8, 56,2, 52,1, 41,6,31,5,26,4, 24,5, 22,6, 20,3, 15,6, 14,1,9,3.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₃H₃₅C1N₄O₈: 650,2. Nalezeno (M-17)⁺: 633,3.

-169CZ 304973 B6

Příklad 144

(182)

K. roztoku 45 (30 mg, 0,058 mmol) v CH₂C1₂ (0,87 ml) byl přidán při 0 °C DIPEA (15,0 ml, 0,086 mmol), EDC HC1 (27,6 mg, 0,145 mmol), kyselina cyklohexyloctová (12,2 mg, 0,086 mmol) a DMAP (0,7 mg, 0,006 mmol) a reakční směs se míchala 5 h. Pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt postupně 0,1 N HC1 (5 ml) a roztokem 10% NaHCO₃ (5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, hex:EtOAc 1:2) za získání 182 (10 mg, 27 %)jako bílé pevné látky.

Rf:0,ll hex: EtOAc 1:1.

‘H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,50 (s, 1H), 5,98 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 5,91 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,75 (s, 1H), 5,02-4,91 (m, 1H), 4,11 (bs, 1H), 4,04 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 4,01 (bs, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,72 - 3,69 (m, 1H), 3,38 - 3,29 (m, 3H), 3,05 (dd, J_x = 7,8 Hz, 7₂ = 18,0 Hz, 1H), 2,77 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 2,54 (d, 7= 18,6 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,32 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 1,98 (s, 3H), 1,79 (dd,7, = 11,7 Hz, 7₂ = 15,6 Hz, 1H), 1,59-0,61 (m, 13H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃6H(₄N₄O7: 644,76. Nalezeno (M+l)⁺: 645,3.

Příklad 145

(45) (183) o'

K roztoku 45 (30 mg, 0,058 mmol) v CH₂C1₂ (0,87 ml) byl přidán při 0 °C DIPEA (15,0 ml, 0,086 mmol), EDC HC1 (27,6 mg, 0,145 mmol), kyselina cyklohexyloctová (12,2 mg, 0,086 mmol) a DMAP (0,7 mg, 0,006 mmol) a reakční směs se míchala 5 h. Pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt postupně 0,1 N HC1 (5 ml) a roztokem 10% NaHCO₃ (5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, hex: EtOAc 1:2) za získání 183 (17 mg, 38 %) jako bílé pevné látky.

-170CZ 304973 B6

Rf: 0,13 hex:EtOAc 1:1.

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,87 (s, 1H), 5,99 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,92 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 4,95 (t, J= 5,7 Hz, 1H), 4,08 (bs, 1H), 4,00 (bs, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,64 (d, J= 1,8 Hz, 2H), 3,38 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 3,33 - 3,32 (m, 1H), 3,27 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 3,06 (dd, /, = 7,8 Hz, J₂ = 18,0 Hz, 1H), 2,65 - 2,59 (m, 1H), 2,50 - 2,47 (m, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,27 (s, 6H), 1,99 (s, 3H), 1,78 - 1,74 (m, 1H), 1,60 - 0,62 (m, 26H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C44H56N4O8: 768,94. Nalezeno (M+l)⁺: 769,3.

Příklad 146

K roztoku 45 (30 mg, 0,058 mmol) v CH₂C1₂ (0,87 ml) byl přidán při 0 °C DIPEA (15,0 ml, 0,086 mmol), EDC HC1 (27,6 mg, 0,145 mmol), kyselina cyklohexylpropionová (13,5 mg, 0,086 mmol) a DMAP (0,7 mg, 0,006 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 6 h. Pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt postupně 0,1 N HC1 (5 ml) a roztokem 10% NaHCO₃(5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografíí na otevřené koloně (SiO₂, hex: EtOAc 1:2) za získání 184 (15 mg, 39 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,15 hex:EtOAc 1:1.

'H NMR (300 MHz, CDCf): δ 6,50 (s, 1H), 5,98 (s, 1H), 5,91 (s, 1H), 5,74 (s, 1H), 5,01 (t, J = 1,5 Hz, 1H), 4,09 (bs, 1H), 4,06 (s, 1H), 4,02 (bs, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,64 - 3,58 (m, 1H), 3,42 3,41 (m, 1H), 3,36 (d, J= 7,5 Hz, 2H), 3,28 (d, J= 12,3 Hz, 1H), 3,05 (dd, / = 8,6 Hz, J₂ =

Hz, 1H), 2,79 (d, J= 14,7 Hz, 1H), 2,57 (d, J= 18 Hz, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,53 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,77 (dd, / = 12,0 Hz, J₂ = 15,9 Hz, 1H), 1,62 - 0,71 (m, 15H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃7H4₆N₄O7: 658,78. Nalezeno (M+l)⁺: 659,3.

- 171 CZ 304973 B6

Příklad 147

K roztoku 45 (30 mg, 0,058 mmol) vCH₂C1₂ (0,87 ml) byl přidán při 0 °C DIPEA (15,0 ml,

0,086 mmol), EDC HC1 (27,6 mg, 0,145 mmol), kyselina cyklohexylpropionová (13,5 mg,

0,086 mmol) a DMAP (0,7 mg, 0,006 mmol) a reakční směs se míchala 6 h. Pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt postupně 0,1 N HC1 (5 ml) a roztokem 10% NaHCO₃ (5 ml). Orgaío nická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku.

Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografíí na otevřené koloně (SiO₂, hex:EtOAc 1:2) za získání 185 (21 mg, 46 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,17 hex:EtOAc 1:1.

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,86 (s, 1H), 5,99 (s, 1H), 5,92 (s, 1H), 4,97 (t, J= 5,4 Hz, 1H),

4,10 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 4,01 (bs, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,64 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 3,51 (bs, 1H), 3,37 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 3,23 (d, J= 11,1 Hz, 1H), 3,02 (dd, 7 = 7,8 Hz, 7=18 Hz, 1H), 2,69 - 2,59 (m, 4H), 2,35 (s, 3H), 2,26 (s, 6H), 2,00 (s, 3H), 1,76 - 0,72 (m, 30H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 173,1, 171,1, 168,2, 147,9, 144,7, 142,5, 140,7, 140,3, 130,9,

130,6, 127,7, 123,3, 120,0, 117,5, 113,1, 111,9, 101,6, 60,5, 59,0, 57,3, 56,7, 55,2, 55,0, 41,6,

39,9, 37,2, 33,5, 33,0, 32,9, 32,9, 32,8, 32,5, 32,4, 31,9, 31,7, 29,7, 29,3, 26,6, 26,5, 26,2, 24,9,

20,3, 15,8, 14,1,9,4.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₄₆H₆oN₄Os: 796,4. Nalezeno (M+l)⁺: 797,5.

Příklad 148 30

K roztoku 72 (111 mg, 0,162 mmol) v CH₂C1₂ (0,81 ml) byl přidán při 0 °C DIPEA (56,3 ml, 0,324 mmol), butyrylchlorid (33,6 ml, 0,324 mmol) a DMAP (1,96 mg, 0,016 mmol) a reakční

- 172CZ 304973 B6 směs se míchala 5 h při této teplotě. Pak byl roztok zředěn CH2CI2 (10 ml) a promyt postupně 0,1 N HCI (5 ml) a roztokem 10% NaHCO₃ (5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (RP-18, CH3CN: H₂O 1:1) za získání 186 (65,4 mg, 54 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,21 hex:EtOAc 1:2.

Ή NMR (300 MHz, CDCf): δ 7,24 - 7,15 (m, 3H), 7,12 - 7,04 (m, 2H), 6,84 (s, 1H), 5,98 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 5,92 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 4,97 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 4,03 (m, 3H), 3,63 (d, J =

2.7 Hz, 1H), 3,50 (m, 2H), 3,44 (s, 3H), 3,37 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,24 (dt, J, = 2,7 Hz, J₂ =

11.7 Hz, 1H), 3,02 (dd, J = 8,1 Hz, J₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,65 - 2,54 (m, 7H), 2,35 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,07 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,87- 1,75 (m, 3H), 1,08 (t, J= 7,5 Hz, 3H).

13,

C NMR (75 MHz, CDCf): δ 171,7, 170,8, 168,2, 147,8, 144,7, 142,5, 140,8, 140,6, 140,3,

131.1, 130,5, 128,3, 128,2, 127,6, 126,0, 123,2, 117,5, 112,9, 111,8, 101,6, 60,2, 59,0, 57,3, 56,6,

55.1, 54,9, 41,5, 39,9, 37,8, 36,0, 31,0, 26,5, 24,8, 22,6, 20,2, 18,5, 15,6, 13,7, 9,3.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₄iH(6N₄O₈: 722,83. Nalezeno (M+l)⁺: 723,2.

Příklad 149

K roztoku 72 (80 mg, 0,122 mmol) v CH₂C1₂ (0,61 ml) byl přidán při 0 °C DIPEA (64,0 ml, 0,367 mmol), hexanoylchlorid (49,5 ml, 0,367 mmol) a DMAP (1,50 mg, 0,012 mmol) a reakční směs se míchala při této teplotě 5 h. Pak byl roztok zředěn CH₂Cf (10 ml) a promyt postupně 0,1 N HCI (5 ml) a roztokem 10% NaHCCf (5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (RP-18, CH₃CN:H₂O 6:4) za získání 187 (86,1 mg, 94 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,25 hex:EtOAc 1:2.

'H NMR (300 MHz, CDCf): δ 7,20 - 7,06 (m, 3H), 6,99 - 6,97 (m, 2H), 5,91 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,90 (m, 1H), 3,96 (d, J= 3 Hz, 2H), 3,57 - 3,55 (m, 1H), 3,43 (bs, 2H), 3,36 (bs, 3H), 3,29 (brd, J= 10,5 Hz, 1H), 3,18 (d, J= 11,7 Hz, 1H), 2,97 (dd, J_x = 4,8 Hz, J₂ = 12 Hz, 1H), 2,58 2,46 (m, 6H), 2,28 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), 2,07 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,95 (s, 3H), 1,86 - 1,66 (m, 7H), 1,41 - 1,38 (m, 2H), 0,86 - 0,81 (m, 3H).

13,

C NMR (75 MHz, CDCf): δ 171,7, 171,0, 168,2, 147,8, 144,7, 142,5, 140,8, 140,6, 140,3,

131,1, 130,5, 128,3, 128,2, 127,6, 126,0, 117,5, 112,9, 111,8, 101,6, 60,2, 59,0, 57,3, 56,6, 55,1, 55,0, 41,5, 39,9, 37,8, 34,1,31,3, 31,1, 26,6, 24,8, 24,7, 22,3, 20,2, 15,6, 13,8.

- 173 CZ 304973 B6

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₄₃H₅₀N₄O₈: 750,88. Nalezeno (M+l)⁺: 751,3.

Příklad 150

K roztoku 85 (80 mg, 0,110 mmol) v CH₂C1₂ (0,55 ml) byl přidán při 0 °C DIPEA (57,7 ml, 0,331 mmol), butyrylchlorid (34,4 ml, 0,331 mmol) a DMAP (1,30 mg, 0,011 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 5 h. Pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt postupně 0,1 N HC1 (5 ml) a roztokem 10% NaHCO₃ (5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (RP-18, CH₃CN:H₂O 1:1) za získání 188 (70,1 mg, 80 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,54 MeOH:EtOAc 1:5.

*H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,28 - 7,14 (m, 5H), 6,80 (s, 1H), 6,07 (d, J= 6,6 Hz, 1H), 6,00 (d, 7 = 1,5 Hz, 1H), 5,90 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 5,35 (t, 7= 5,4 Hz, 1H), 4,12 (d, 7= 2,4 Hz, 1H), 4,05 (bs, 1H), 3,89 (brt, 7= 6,9 Hz, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,64 - 3,63 (m, 1H), 3,59 - 3,45 (m, 2H), 3,40 (brd, 7 = 7,8 Hz, 1H), 3,20 (dt, 7, = 2,7 Hz, 7₂ = 12 Hz, 1H), 3,00 (dd, 7, = 8,1 Hz, 7₂ = 18 Hz, 1H), 2,87 (t, J= 8,1 Hz, 2H), 2,71 (d, 7= 18,6 Hz, 1H), 2,66-2,61 (m, 1H), 2,58 (t, 7 = 7,2 Hz, 2H, 2,41 - 2,35 (m, 2H), 2,33 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,90 - 1,77 (m, 3H), 1,08 (t, 7= 7,2 Hz, 3H), 0,69 (d, 7= 6,9 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 172,0, 171,3, 170,8, 168,5, 147,7, 144,7, 142,5, 140,6, 140,5,

140,3, 131,0, 130,7, 128,4, 128,2, 127,7, 126,1, 123,1, 120,3, 117,5, 112,7, 111,8, 101,6, 60,3,

59,1, 57,3, 57,2, 55,4, 54,9, 48,2, 41,5, 39,5, 38,0, 36,0, 31,4, 26,8, 26,6, 24,6, 20,1, 18,5, 18,1,

15,7, 13,7, 9,2.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C44H51N5O9: 793,9. Nalezeno (M+l)⁺: 794,3.

Příklad 151

- 174CZ 304973 B6

K roztoku 85 (80 mg, 0,110 mmol) v CH₂C1₂ (0,55 ml) byl přidán při 0 °C D1PEA (57,7 ml, 0,331 mmol), hexanoylchlorid (46,3 ml, 0,331 mmol) a DMAP (1,30 mg, 0,011 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 5 h. Pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt postupně 0,1 N HC1 (5 ml) a roztokem 10% NaHCO₃ (5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (RP-18, CH₃CN:H₂O 1:1) za získání 189 (80 mg, 88 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,23 hex:EtOAc 1:3.

‘H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,21 - 7,08 (m, 5H), 6,74 (s, 1H), 6,00 (d, J= 6,9 Hz, 1H), 5,94 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,84 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,24 (t, J= 5,4 Hz, 1H), 4,06 (bs, 1H), 4,00 (bs, 1H), 3,83 (t, J= 6 Hz, 1H), 3,59 (s, 3H), 3,57 (m, 1H), 3,53 - 3,40 (m, 2H), 3,33 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 3,14 (d, J= 11,7 Hz, 1H), 2,94 (dd, 7, = 8,4 Hz, 7₂ = 18 Hz, 1H), 2,81 (t, 7, = 7,5 Hz, 2H), 2,65 (d, 7= 18 Hz, 1H), 2,60 - 2,54 (m, 1H), 2,52 (t, 7= 7,2 Hz, 2H), 2,35 - 2,29 (m, 2H), 2,27 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 1,95 (s, 3H), 1,76 - 1,60 (m, 3H), 1,35 - 1,29 (m, 2H), 1,84 (m, 2H), 1,85 - 0,78 (m, 3H), 0,62 (t, 7= 6,6 Hz, 3H).

^I3C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 172,0, 171,3, 171,1, 168,4, 147,8, 144,8, 144,8, 142,6, 140,7,

140,5, 131,2, 130,6, 128,4, 128,3, 127,7, 126,2, 123,1, 120,3, 117,5, 112,6, 112,0, 101,7, 60,4,

59.1, 57,4, 57,2, 55,4, 54,9, 48,3, 41,5, 39,6, 38,1, 34,1, 33,6, 31,5, 31,3, 26,7, 24,7, 22,3, 20,2,

18.2, 15,7, 13,9, 9,3.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C^HssNjOg: 821,96. Nalezeno (M+l)⁺: 822,3.

Příklad 152

K roztoku 53 (100 mg, 0,145 mmol) v CH₂C1₂ (0,72 ml) byl přidán při 0 °C DIPEA (50,6 ml, 0,291 mmol) a acetylchlorid (20,7 ml, 0,291 mmol) a reakční směs se míchala 4 h při 23 °C. Pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt postupně 0,1 N HC1 (5 ml) a roztokem 10% NaHCO₃(5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, hex:EtOAc 1:2) za získání 190 (27 mg, 25 %)jako bílé pevné látky.

Rf: 0,24 hex:EtOAc 1:1.

’H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,82 (s, 1H), 6,02 (d, 7= 0,9 Hz, 1H), 5,92 (d, 7= 0,9 Hz, 1H), 5,30 (bs, 1H), 4,14 (d, 7= 2,7 Hz, 1H), 4,10 (s, 1H), 3,90 - 3,73 (m, 2H), 3,68 (s, 3H), 3,67 (bs, 1H), 3,49 (bs, 1H), 3,42 (brd, 7= 8,1 Hz, 1H), 3,24 - 3,20 (m, 1H), 3,01 (dd, 7 = 8,4 Hz, 7₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,78 (d, 7= 18 Hz, 2H), 2,64 (brd, 7= 15,6 Hz, 1H), 2,36 (s, 1H), 2,34 (s, 3H),

- 175CZ 304973 B6

2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,77 (dd, J, = 11,7 Hz, J₂ = 15,6 Hz, 1H), 1, 0,65 (d, J =

6,6 Hz, 3H).

13.

C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 170,2, 168,6, 168,1, 167,6, 147,9, 144,9, 142,8, 140,5, 131,5, 131,0, 127,7, 123,2, 120,3, 117,5, 112,3, 112,2, 101,7, 60,4, 59,0, 57,4, 57,2, 55,2, 54,9, 48,6,

41,5, 39,1, 36,6, 29,7, 26,7, 24,6, 20,7, 20,2, 17,6, 15,5, 13,9, 9,2.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C^HjsFjNjO.,: 729,70. Nalezeno (M+l)⁺: 730,3.

Příklad 153

(53) (191) ^Me θ

K roztoku 53 (150 mg, 0,218 mmol) v CH2CI2 (1,09 ml) byl přidán při 0 °C DIPEA (151,9 ml, 0,87 mmol), butyrylchlorid (90,6 ml, 0,87 mmol) a DMAP (2,70 mg, 0,02 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 4 h. Pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt postupně 0,1 N HC1 (5 ml) a roztokem 10% NaHCO₃ (5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (RP-18, CH₃CN:H₂O 4:1) za získání 191 (20,2 mg, 12 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,3 hex:EtOAc 1:1.

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,81 (s, 1H), 6,03 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,92 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,16 (t, J= 5,4 Hz, 1H), 4,13 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 4,10 (bs, 1H), 3,87 - 3,82 (m, 1H), 3,80 - 3,74 (m, 1H), 3,68 (s, 3H), 3,64 (d, J= 3 Hz, 1H), 3,52 - 3,47 (m, 1H), 3,42 (brd, J= 7,2 Hz, 1H), 3,24 - 3,20 (m, 1H), 3,02 (dd, J_x = 8,1 Hz, J₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,77 (d, J= \Ί,Ί Hz, 1H), 2,64 (brd, J= 16,2 Hz, 1H), 2,58 (t, J= 7,2 Hz, 2H), 2,33 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,87 - 1,73 (m, 3H), 1,08 (t, J= 7,2 Hz, 3H), 0,68 (d, J= 6,6 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 172,8, 172,1, 170,4 157,8, 150,0, 146,9, 144,8, 142,6, 142,5,

133,3, 132,8, 129,6, 125,3, 122,3, 119,5, 118,4, 115,7, 114,3, 114,2, 103,8, 62,4, 61,0, 59,4, 59,2,

57,2, 57,0, 50,6, 43,6,41,2,38,1,31,7, 28,7, 26,6, 22,2, 20,6, 19,7, 17,5, 15,7, 11,2.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₇H₄₂F₃N₅O₉: 757,75. Nalezeno 758,5 (M+l)⁺: 780,5 (M+23)⁺.

- 176CZ 304973 B6

Příklad 154

K roztoku 53 (150 mg, 0,218 mmol) v CH₂C1₂ (1,09 ml) byl přidán při 0 °C DIPEA (151,9 ml,

0,87 mmol), acetylchlorid (62,0 ml, 0,87 mmol) a DMAP (2,70 mg, 0,02 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 5 h. Pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt postupně 0,1 N HC1 (5 ml) a roztokem 10% NaHCO₃ (5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozio pouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (RP-18, CH₃CN:H₂O 1:1) za získání 192 (111 mg, 62 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,25 hex:EtOAc 1:1.

'HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,80 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 5,81 (s, 1H), 4,70 (dd,7, = 2,4 Hz, 7₂ = 9,9 Hz, 1H), 4,20 (d, 7= 6,3 Hz, 1H), 4,09 (s, 1H), 3,74 (s, 3H), 3,60 (s, 1H), 3,28 (d, 7= 7,5 Hz, 1H), 3,17 (d, 7= 12 Hz, 1H), 3,07 (dd, 7 = 7,2 Hz, 7₂ = 18,3 Hz, 1H), 2,93 (d, 7= 13,2 Hz, 1H), 2,66 (d, 7= 15,3 Hz, 1H), 2,53 (t, 7= 17,7 Hz, 1H), 2,47 - 2,20 (m, 1H), 2,37 (s, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,96 (s, 3H), 1,72 (t, 7= 14,4 Hz, 1H),

1,53 (d, 7= 6,9 Hz, H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 174,1, 168,6, 168,4, 167,5, 147,7, 144,8, 142,6, 142,2, 140,4,

131,5, 130,5, 126,9, 123,3, 120,4, 117,5, 112,4, 111,8, 101,1, 60,7, 60,6, 57,6, 57,2, 56,6, 55,3,

52,7, 48,3, 41,5, 31,6, 29,7, 26,4, 25,5, 23,0, 22,6, 20,7, 20,5, 20,2, 17,8, 15,9, 14,1, 9,5.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C^Ht^NsO,,: 813,7. Nalezeno (M+l)⁺: 814,3.

Příklad 155

- 177CZ 304973 B6

K roztoku 53 (150 mg, 0,218 mmol) v CH₂C1₂ (1,09 ml) byl přidán při 0 °C DIPEA (151,9 ml, 0,87 mmol), butyrylchlorid (90,6 ml, 0,87 mmol) a DMAP (2,70 mg, 0,02 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 4 h. Pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt postupně 0,1 N HC1 (5 ml) a roztokem 10% NaHCO₃ (5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (RP-18, CH₃CN:H₂O 4:1) za získání 193 (58 mg, 30 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,38 hex:EtOAc 1:1.

*H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,85 (s, 1H), 5,99 (d, 7 = 1,2 Hz, 1H), 5,90 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,47 - 5,42 (m, 2H), 4,09 - 4,08 (m, 2H), 3,69 (s, 3H), 3,66 (m, 1H), 3,41 (d, J= 7,5 Hz, 1H), 3,28 - 3,18 (m, 2H), 3,07 (dd, J_x = 8,1 Hz, 7₂ = 18 Hz, 1H), 2,66 (d, J= 18,6 Hz, 1H), 2,61 - 2,39 (m, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,01 (s, 3H), 1,95 - 1,79 (m, 6H), 1,72 - 1,59 (m, 6H), 1,09 (t, J= 7,5 Hz, 3H), 0,99 - 0,94 (m, 6H), 0,85 (d, J= 6,9 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 171,2, 170,7, 169,1, 168,4, 148,1, 145,0, 142,7, +40,9, 140,6,

131,2, 130,5, 128,4, 123,4, 119,9, 117,6, 113,0, 112,1, 101,9, 60,7, 59,5, 57,6, 56,5, 55,7, 55,2,

41,8, 41,4, 36,3, 35,8, 29,9, 27,0, 25,3, 20,5, 20,0, 18,8, 18,3, 15,8, 14,0, 13,8, 13,4, 12,7, 9,6.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₄₅H5₄F₃N₅O₁₁: 897,93. Nalezeno (M+l)⁺: 898,3.

Příklad 156

K roztoku 53 (150 mg, 0,218 mmol) vCH₂C1₂ (1,09 ml) byl přidán při 0 °C DIPEA (151,9 ml, 0,87 mmol), hexanoylchlorid (121,9 ml, 0,87 mmol) a DMAP (2,70 mg, 0,02 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 4 h. Pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt postupně 0,1 N HC1 (5 ml) a roztokem 10% NaHCO₃ (5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (RP-18, CH₃CN:H₂O 4:1) za získání 194 (37,5 mg, 22 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,32 hex:EtOAc 1:1.

Ή NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,80 (s, 1H), 6,02 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,92 (d, 7= 1,2 Hz, 1H),

5.22 (t, J= 5,7 Hz, 1H), 4,13 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 4,09 (s, 1H), 3,88 - 3,81 (m, 1H), 3,80 - 3,71 (m, 1H), 3,67 (s, 3H), 3,64 (d, 7 = 3 Hz, 1H), 3,52 - 3,43 (m, 1H), 3,41 (brd, 7= 6,6 Hz, 1H),

3.23 - 3,19 (m, 1H), 3,00 (dd, 7] = 8,7 Hz, 7₂ = 18,6 Hz, 1H), 2,77 (d, 7= 18 Hz, 1H), 2,67 - 2,56 (m, 3H), 2,33 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,01 (s, 3H), 1,82 - 1,74 (m, 4H), 1,43 - 1,38 (m, 3H), 0,97 - 0,88 (m, 3H), 0,67 (d, 7= 6,9 Hz, 3H).

-178CZ 304973 B6 ¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 171,2, 170,3, 168,6, 148,2, 145,1, 143,0, 140,8, 140,7, 131,7,

131,1, 127,8, 123,5, 120,6, 117,7, 112,5 102,0, 60,7, 59,2,57,6, 57,4,55,4,55,2,48,9,41,8, 34,4,

31,8, 31,6, 29,9, 26,9, 25,0, 24,8, 22,9, 22,5, 20,4, 17,9, 15,8, 14,3, 14,1, 9,5.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C39H46F3N5O9: 785,81. Nalezeno: 786 (M+l)⁺, 805,5 (M+23)⁺.

Příklad 157

K roztoku 53 (150 mg, 0,218 mmol) v CH2CI2 (1,09 ml) byl přidán při 0 °C DIPEA (75,9 ml, 0,436 mmol) a dekanoylchlorid (92,7 ml, 0,436 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 4 h. Pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt postupně 0,1 N HC1 (5 ml) a roztokem 10%

NaHCO₃ (5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (RP-18, CH₃CN:H₂O 1:1) za získání 195 (75 mg, 41 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,32 hex:EtOAc 1:1.

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,82 (s, 1H), 6,03 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 5,93 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,26 (bs, 1H), 4,15 (s, 1H), 4,11 (s, 1H), 3,89 - 3,75 (m, 2H), 3,68 (s, 3H), 3,65 (bs, 1H), 3,52 3,44 (m, 1H), 3,43 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 3,22 (brd, 7 = 11,4 Hz, 1H), 3,03 (dd, 7 = 7,8 Hz, 7₂ = 17,4 Hz, 1H), 2,78 (d, 7= 17,7 Hz, 1H), 2,69 - 2,56 (m, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,23 (s,

3H), 2,03 (s, 3H), 1,83 - 1,74 (m, 3H), 1,83 - 1,74 (m, 12H), 0,90 - 0,88 (m, 3H), 0,68 (d, 7 =

Hz, 3H).

C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 171,0, 170,1, 168,4, 148,0, 144,8, 142,8, 140,5, 131,5, 130,8,

127,5, 123,3, 120,3, 117,5, 112,3, 112,2, 101,7, 60,4, 59,0, 57,4, 57,2, 55,1, 55,0, 48,6, 41,5,

39,1, 34,2, 31,8, 29,4, 29,2, 26,7, 25,0, 24,6, 22,6, 20,2, 17,6, 15,5, 14,0, 9,2.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C^Hs^NsCL: 841,91. Nalezeno (M+l)⁺: 842,3.

- 179CZ 304973 B6

Příklad 158

K roztoku 53 (150 mg, 0,218 mmol) v CH₂C1₂ (1,09 ml) byl přidán při 0 °C DIPEA (75,9 ml, 0,436 mmol) a stearoylchlorid (147,3 ml, 0,436 mmol) a reakční směs se míchala při 23 °C 4 h. Pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt postupně 0,1 N HC1 (5 ml) a roztokem 10% NaHCO₃ (5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (RP-18, CH₃CN:H₂O 1:1) za získání 196 (86 mg, 41 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,42 hex:EtOAc 1:1.

Ή NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,81 (s, 1H), 6,03 (s, 1H), 5,92 (s, 1H), 5,21 (bs, 1H), 4,14 (s, 1H), 4,10 (s, 1H), 3,88 - 3,74 (m, 2H), 3,67 (s, 3H), 3,64 (d, J = 3 Hz, 1H), 3,49 (brd, 7 =

14,7 Hz, 1H), 3,42 (d, 7= 8,1 Hz, 1H), 3,22 (brd, 7= 11,4 Hz, 1H), 3,02 (dd, 7 = 8,7 Hz, 7₂ =

18,6 Hz, 1H), 2,78 (d, 7= 18 Hz, 1H), 2,68 - 2,56 (m, 3H), 2,33 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,82 - 1,73 (m, 3H), 1,42 - 1,19 (m, 28H), 0,87 (t, 7= 7,2 Hz, 3H), 0,67 (d, 7= 6,6 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 171,0, 170,2, 168,5, 147,9, 144,8, 142,8, 140,4, 131,4, 130,9,

127,5, 123,3, 120,4, 117,5, 112,4, 112,1, 101,7, 60,4, 58,9, 57,4, 57,2, 55,2, 55,0, 48,6, 41,5, 39,0, 34,2, 31,9, 29,7, 29,6, 29,4, 29,3, 29,2, 26,7, 25,1, 24,6, 22,7, 20,2, 17,6, 15,5, 14,1, 9,2.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C5iH7oF₃N₅0₉: 953,5. Nalezeno (M+l)⁺: 954,4.

K roztoku 45 (10 mg, 0,019 mmol) vCH₂Cl₂ (0,095 ml) byl přidán při 23 °C triethylamin (2,94 ml, 0,021 mmol) a allylbromid (2,0ml, 0,023 mmol). Reakční směs se míchala 6 h a pak bylo rozpouštědlo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, MeOH:EtOAc 1:5) za získání 197 (3,8 mg, 35 %) jako bílé pevné látky.

-180CZ 304973 B6

Rf: 0,19 EtOAc:MeOH 5:1.

^!H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,43 (s, 1H), 5,95 (s, 1H), 5,89 (s, 1H), 5,62 - 5,59 (m, 1H), 4,94 - 4,84 (m, 2H), 4,19 (s, 1H), 4,08 (s, 1H), 3,98 (t, J= 4,5 Hz, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,32 - 3,26 (m, 2H), 3,07 (dd, 7_; = 7,5 Hz, J₂ = 17,4 Hz, 1H), 2,89 (d, J= 6 Hz, 2H), 2,80 (d, J= 3,9 Hz, 1H), 2,76 (d, J= 3,3 Hz, 1H), 2,57 - 2,52 (m, 2H), 2,33 (s, 6H), 2,24 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,88 - 1,79 (dd, Ji = 12,9 Hz, J₂ = 15,6 Hz, 1H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₁H₃6N₄O₆: 560,64. Nalezeno (M+l)⁺: 561,3.

Příklad 160

K roztoku 146 (50 mg, 0,096 mmol) v CH2CI2 (0,96 ml) byl přidán při 23 °C pyridin (11,7 ml, 0,144 mmol) a cinnamoylchlorid (24,0 mg, 0,144 mmol) a reakční směs se míchala 18 h při této teplotě. Pak byl roztok zředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt postupně 0,1 N HC1 (5 ml) a roztokem 10% NaHCO₃ (5 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, hex:EtOAc 1:2) za získání 198 (54 mg, 86 %) jako bílé pevné látky.

Rf: 0,45 hex:EtOAc 1:1.

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,41 - 7,37 (m, 6H), 6,38 (s, 1H), 6,19 - 6,03 (m, 1H), 6,08 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 5,93 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,88 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,62 (s, 1H), 5,38 (dd, J_x = 1,5 Hz, J₂ = 17,1 Hz, 1H), 5,26 (dd, 7, = 1,5 Hz, J₂ = 10,5 Hz, 1H), 4,47 (dd, 7, = 3,6 Hz, 7, =

10,8 Hz, 1H), 4,23 - 4,11 (m, 5H), 3,89 (dd, 7/ = 4,8 Hz, 7₂ = 11,1 Hz, 1H), 3,51 (s, 3H), 3,34 (brd, 7= 8,4 Hz, 1H), 3,27 - 3,21 (m, 2H), 2,97 (dd, 7, = 7,8 Hz, 7₂ = 17,7 Hz, 1H), 2,28 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 1,91 (dd, J_x = 12 Hz, J₂ = 15,6 Hz, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 166,5, 148,8, 146,7, 144,7, 144,5, 142,7, 139,5, 134,4, 134,1,

131,1, 130,6, 129,1, 128,7, 128,2, 121,9, 121,2, 118,5, 117,8, 116,8, 112,9, 112,7, 101,5, 74,7,

65,2, 60,7, 60,6, 57,4, 56,8, 56,6, 55,7,41,9, 31,8, 26,7, 25,5, 22,9, 15,9, 14,4, 9,7.

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₃₈H₃₉N₃O₇: 649,7. Nalezeno (M+l)⁺: 650,3.

- 181 CZ 304973 B6

Příklad 161

K roztoku 161 (78,5 mg, 0,146 mmol) a derivátu cysteinu (81,1 mg, 0,247 mmol) vbezvodém CH2CI2 (7,3 ml) byl přidán při 23 °C DMAP (50 mg, 0,41 mmol) a EDC. HC1 (78,1 mg, 0,41 mmol). Reakční směs se míchala při 23 °C v argonové atmosféře 1,5 h. Směs byla zředěna CH2CI2 (20 ml) a extrahována vodným nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (25 ml). Vodná fáze byla extrahována dalším CH₂C1₂ (20 ml) a spojené organické extrakty byly sušeny Na₂SO₄, filtrovány a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Surová reakční směs byla čištěna sloupcovou chromatografíí na otevřené koloně (vnitřní průměr kolony 2 cm, výška oxidu křemičitého 10 cm) směsí ethylacetát/hexan gradientovým způsobem, od 1:4 až 3:1, jako eluentem. Sloučenina 199 (113 mg, 88 %) byla získána jako světle žlutá pevná látka.

Rf: 0,36 hex: EtOAc 1:1.

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,76 (d, J= 7,8 Hz, 2H), 7,63 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,40 (t, J=

7,6 Hz, 2H), 7,29 (t, J= 7,6 Hz, 2H), 6,54 (s, 1H), 5,80 (s, 1H), 5,74 (s, 1H), 5,10 (d, /= 5,7 Hz, 1H), 5,08 (d, J= 5,7 Hz, 1H), 4,50 (dd, J, = 4,9 Hz, J₂ = 11,8 Hz, 1H), 4,20 - 4,05 (m, 4H), 4,02 (s, 3H), 3,81 (s, 3H), 3,61 (d, J= 13,8 Hz, 1H), 3,55 (d, J= 13,8 Hz, 1H), 3,50 (s, 3H), 3,21 (m, 1H), 3,06 (m, 1H), 3,00 (d, /= 6,0 Hz, 2H), 2,90 (dd, J= 8,9 Hz, J= 17,4 Hz, 1H), 2,79 (s, 1H), 2,56 (m, 1H), 2,50 (dd, J= 4,8 Hz, J= 14,9 Hz, 1H), 2,21 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), 1,80 (s, 3H), 1,75 (m, 2H).

ESI-MS m/z: Calcd. pro 848,3. Nalezeno: 849,3 (M+l)⁺, 871,3 (M+23)⁺.

HPLC: Podmínky: Kolona: Simmetry Cl8, mobilní fáze: CH₃CN/H₂O v gradientu od 50 až 100 % po dobu 25 minut. 0 = 1 ml/min, t = 40 °C. Retenční čas: 16,04 minut. HPLC čistota na plochu: 89,29 %.

Příklad 162

- 182CZ 304973 B6

K roztoku 161 (80 mg, 0,148 mmol) a derivátu cysteinu (76 mg, 0,223 mmol) vbezvodém CH₂C1₂ (6,8 ml) byl přidán při 23 °C DMAP (45 mg, 0,37 mmol) a EDC. HC1 (71 mg, 0,37 mmol). Reakční směs se míchala při 23 °C v argonové atmosféře 2,5 h. Pak byla směs zředěna CH₂C1₂ (20 ml) a extrahována vodným nasyceným roztokem hydrogenuhliěitanu sodného (25 ml). Vodná fáze byla extrahována dalším CH₂C1₂ (20 ml) a spojené organické extrakty byly sušeny Na₂SO₄, filtrovány a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Surová reakční směs byla čištěna sloupcovou chromatografíí na otevřené koloně (vnitřní průměr kolony 2 cm, výška oxidu křemičitého 10 cm) směsí ethylacetát/hexan gradientovým způsobem, od 1:4 až 3:1, jako eluentem. Sloučenina 200 (83 mg, 65 %) byla získána jako světle žlutá pevná látka.

Rf: 0,5 hex:EtOAc 1:1.

Ή NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,71 (m, 3H), 7,49 (d, J= 7,3 Hz, 2H), 7,36 (t, J= 7,3 Hz, 2H), 7,32 -7,23 (m, 2H), 6,65 (s, 1H), 5,80 (s, 1H), 5,79 (s, 1H), 5,13 (d, 7=6,1 Hz, 1H), 5,11 (d, 7=6,1 Hz, 1H), 5,05 (d, J= 6,1 Hz, 1H), 5,01 (d, 7=6,3 Hz, 1H), 4,76 (dd, 7= 3,9 Hz, 7=

11,9 Hz, 1H), 4,15-4,03 (m, 4H), 3,96 (t, .7 = 4,0 Hz, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,55 (s, 3H), 3,51 (s, 3H), 3,34 - 3,29 (m, 2H), (s, 3H), 3,24 (dd, 7= 5,5 Hz, 7= 13,5 Hz, 1H), 3,03 (m, 1H), 2,97 (t, 7=7,5 Hz, 1H), 2,44 - 2,35 (m, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 1,98 (dd, 7 = 8,06 Hz, J= 15,1 Hz, 2H), 1,75 (s, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 196,98, 161,13, 158,21, 149,01, 148,78, 145,05, 144,91, 141,01,

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₄₇H4₉N₃O_nS: 863,97. Nalezeno: 865,0 (M+l)⁺, 887,1 (M+23)⁺.

HPLC: Podmínky: Kolona: Simmetry Cl8, mobilní fáze: CH₃CN/H₂O v gradientu od 50 až 100 % po dobu 25 minut. 0 = 1 ml/min, t = 40 °C. Retenční čas: 15,36 minut. HPLC čistota na plochu: 91,56 %.

Příklad 163

OMe

Me

O

OH (161)

EDC.HCI, DMAP. DCM

OMe

Kroztoku 161 (418 mg, 0,77 mmol) a derivátu cysteinu (321 mg, 0,77 mmol) vbezvodém CH₂C1₂ (35 ml) byl přidán při 23 °C DMAP (235 mg, 1,92 mmol) a EDC. HC1 (369 mg, 1,92 mmol) a reakční směs se míchala v argonové atmosféře 2 h. Směs byla zředěna CH₂C1₂(20 ml) a extrahována vodným nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (25 ml). Vodná fáze byla extrahována dalším CH₂C1₂ (20 ml) a spojené organické extrakty byly sušeny Na₂SO₄, filtrovány a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Surová reakční směs byla čištěna sloupcovou chromatografíí na otevřené koloně (vnitřní průměr kolony 3 cm, výška oxidu křemi- 183 CZ 304973 B6 čitého 11 cm) směsí ethylacetát/hexan gradientovým způsobem, od 1:3 až 3:1, jako eluentem. Sloučenina 201 (372 mg, 52 %) byla získána jako světle žlutá pevná látka.

Rf: 0,41 hex:EtOAc 1:1.

*H NMR (300 MHz, CDCfi): δ 7,76 - 7,64 (m, 4H), 7,41 - 7,30 (m, 4H), 6,54 (s, 1H, majoritní izomer), 6,51 (s, 1H, minoritní izomer), 5,69 (s, 1H, minoritní izomer), 5,67 (s, 1H, majoritní izomer), 5,60 (s, 1H, minoritní izomer), 5,57 (s, 1H, majoritní izomer), 5,08 (s, 2H), 4,26 (t, J = 5,1 Hz, 1H, minoritní izomer), 4,23 (t, J = 4,9 Hz, 1H, majoritní izomer), 4,07 -4,03 (m, 3H), 3,98 - 3,88 (m, 3H), 3,84 (s, 3H), 3,71 (dt, J, = 5,6 Hz, J₂ = 10,0 Hz, 1H), 3,49 (s, 3H, majoritní izomer), 3,49 (s, 3H, minoritní izomer), 3,40 (dt, = 5,6 Hz, J₂= 9,5 Hz, 1H), 3,18 (m, 3H),

3,11 (m,lH), 2,91 - 2,82 (m, 1H), 2,48 - 2,28 (m, 2H), 2,24 (s, 3H), 2,16 (s, 3H, majoritní izomer), 2,14 (s, 3H, minoritní izomer), 2,03 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,91 (dt, J\ = 8,8 Hz, J₂ = 14,4 Hz, 1H), 1,76 (s, 3H, minoritní izomer), 1,76 (s, 3H, majoritní izomer), 0,85 (s, 9H, minoritní izomer), 0,85 (s, 9H, majoritní izomer), 0,04 a 0,01 (s, 6H, oba izomery).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C₅iH₆₁N₃O₁₀SSi: 935,4. Nalezeno: 936,4 (M+l)⁺, 958,3 (M+23)⁺.

Příklad 164

K roztoku 25 (2 mg, 0,0035 mmol) a přebytku derivátu cysteinu v bezvodém CH₂C1₂ (0,2 ml) byl přidán při 23 °C přebytek DMAP a EDC. HC1. Reakční směs se míchala při 23 °C v argonové atmosféře 14 h. Pak byla směs zředěna CH₂C1₂ (10 ml) a promyta nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (10 ml). Vodná fáze byla extrahována dalším CH₂C1₂ (10 ml). Spojené organické extrakty byly sušeny Na₂SO₄, filtrovány a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Surová reakční směs byla čištěna sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, hex:EtOAc 4:1) za získání 202 jako světle žluté pevné látky.

'H NMR (300 MHz, CDCfi) (špatná citlivost): δ 7,78 - 7,62 (m, 4H), 7,41 - 7,26 (m, 4H), 6,73 (s, 1H), 6,10 (m, 1H), 5,92 (d, J= 1,3 Hz, 1H), 5,88 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 5,40 - 5,22 (m, 2H),

5,11 (s, 3H), 5,02 (d, J= 13,8 Hz, 1H), 4,29 - 4,02 (m, 6H), 3,97 (m, 1H), 3,72 (d, / = 12,5 Hz, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,51 (d, J= 12,3 Hz, 2H), 3,50 (s, 3H), 3,49 - 3,20 (m, 4H), 2,54 -2,28 (m, 4H), 2,40 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,16 (s, 3H).

Fermentační procesy

Příklad A

Předkvasné médium YMP3, obsahující 1 % glukózy; 0,25% hovězího extraktu; 0,5 % baktopeptonu; 0,25 % NaCl; 0,8 % CaCO₃, bylo zaočkováno 0,1 % zamraženého vegetativního inokula, kmen A2- 2 Pseudomonas fluorescens, a inkubovány na rotační třepačce (250 rpm) při 27 °C.

-184CZ 304973 B6

Po 30 h inkubace byla předkvasná kultura přidána do míchaného fermentoru s produkčním médiem, které se skládá z 2 % dextrózy; 4 % mannitolu, 2 % sušených pivovarských kvasinek (Vitalevor' Biolux, Belgium)·, 1 % (NtLOSC^; 0,04 % K₂HPO₄; 0,8 % KC1; 0,001 % FeCl₃; 0,1 % LTyr; 0,8 % CO₃Ca; 0,05 % PPG-2000; 0,2 % protipěnivého silikonu (ASSAF-100, RHODIA UK). Sterilizace byla provedena při 122 °C 30 minut. Objem inokula byl 2 % (obj.). Teplota byla 27 °C (0 až 16 h) a 24 °C od 16 h do konce procesu (41 hodin). Tlak rozpuštěného kyslíku byl zvýšen na 25 %. pH bylo udržováno na 6,0 zředěnou kyselinou sírovou od 28 hodiny až do ukončení procesu. Přetlak byl 0,5 baru. 1% mannitol nebo sorbitol byl přidáván od 16 h do ukončení procesu (při dvoudenním běhu) a 2% pro tři dny fermentačního procesu.

Po 41 nebo 64 hodinách musí být fermentační půda pro získání safracinu B extrahována nebo musí pro získání safracinu B-kyano reagovat s KCN ve vyčeřené půdě.

Příklad B

Získání safracinu B-kyano ze surového extraktu.

Vyčeření nebo filtrace fermentační půdy při pH 6 odstraní pevné částice. pH vyčeřené půdy bylo upraveno na pH 9,5 zředěným hydroxidem sodným a vyčeřená půda byla extrahována dvakrát 2:1 (obj.) ethylacetátem, methylenchloridem nebo butylacetátem. Extrakce byla provedena v míchané nádobě během 20', teplota směsi byla udržována mezi 8 až 10 °C. Kapalinovou rozdělovači centrifugací byly odděleny dvě fáze. Organická fáze byla sušena bezvodým nebo zmraženým síranem sodným a pak pro odstranění ledu filtrována. Tato organická fáze (ethylacetátová vrstva) byla odpařena až do získání olejovitého surového extraktu.

Příklad C

Získání safracinu B-kyano z vyčeřené půdy.

Vyčeření nebo filtrace fermentační půdy při pH 6 odstraní pevné částice. pH vyčeřené půdy bylo upraveno na pH 3,9 koncentrovanou kyselinou octovou. Do vyčeřené půdy bylo přidáno 0,5 gramu na litr KCN a byla inkubována při 20 °C 1 hodinu za třepání. Pak byla teplota snížena na 15 °C a pH upraveno na 9,5 zředěným hydroxidem sodným a vyčeřená půda byla extrahována ethylacetátem v poměru 2:1,5. Extrakce byla provedena v míchané nádobě během 20 minut, teplota směsi byla udržována mezi 8 až 10 °C. Kapalinovou rozdělovači centrifugací byly odděleny dvě fáze. Organická fáze byla sušena bezvodým síranem sodným. Tato organická fáze (ethylacetátová vrstva) byla odpařena až do získání olejovitého surového extraktu. Tento extrakt byl čištěn sloupcovou chromatografií na otevřené koloně (SiO₂, gradient 20:1 až 10: až 5. 1 ethylacetát:methanol) za kvantitativního získání sloučeniny 2 jako světle žluté pevné látky.

Rf: 0,55 (ethylacetát:methanol 5:1): t_R = 19,9 min [HPLC, Delta Pack C4, 5 μΐ, 300 A, 150x 3 mm, λ = 215 nm, průtok = 0,7 ml/min, temp = 50 °C, grád.: CH₃CN- vod. roz. NaOAc (10 mM) 85 %- 70 % (20')];

‘H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,54 (dd, 7, = 4,4 Hz, 7₂ = 8,4 Hz, 1H), 6,44 (s, 1H), 4,12 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 4,04 (d, 7 = 2,4 Hz, 1H), 4,00 (s, 3H), 3,87 (bs, 1H), 3,65 (ddd, 7, = 1,5 Hz, 7₂ =

8,7 Hz, 7 = 9,9 Hz, 1H), 3,35 (br. D, 7= 8,4 Hz, 1H), 3,15 - 2,96 (m, 4H), 2,92 (q, J= 7,2 Hz, 1H), 2,47 (d, 7= 18,3 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), 1,83 (s, 3H), 1,64 (ddd, 7 = 2,7 Hz, 7=11,1 Hz, 7₃ = 14,1 Hz, 1H), 0,79 (d, 7= 2,4 Hz, 1H);

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 186,0 (q), 175,9 (q), 156,2 (q), 146,8 (q), 142,8 (q), 140,7 (q), 136,6 (q), 130,5 (q), 128,8 (q), 127,0 (q), 120,5 (q), 117,4 (q), 116,5 (q), 60,8 (q), 60,4 (s), 58,7

- 185 CZ 304973 B6 (t), 56,2 (s), 55,7 (s), 54,8 (s), 54,8 (s), 54,4 (s), 50,0 (s), 41,6 (t), 39,8 (d), 25,2 (d), 24,4 (d), 21,2 (t), 15,5 (t), 8,4 (t).

ESI-MS m/z: Calcd. pro C29H35N5O6: 549,6. Nalezeno: (M+Na)⁺: 572,3.

Příklad D

Médium (50 1), složené z dextrózy (2 %), mannitolu (4 %) sušených pivovarských kvasinek (2 %), síranu amonného (1 %), středního fosforečnanu draselného (0,04 %), chloridu draselného (0,8 %), chloridu železitého hexahydrátu (0,001 %), L-tyrosinu (0,1 %), uhličitanu vápenatého (0,8 %), póly propylenglykolu 2000 (0,05%) a protipěnivého ASSAF 1000 (0,2 %), bylo nalito do nádoby-fermentoru se 75 1 celkovou kapacitou a, po sterilizaci, bylo zaočkováno předkvasnou kulturou (2 %) kmene A2-2 (FERM BP-14) a provzdušňovaná kultivace za třepání probíhala při 27 °C až 24 °C 64 hodin (provzdušňování 75 1 za minutu a třepání 350 až 500 rpm). pH bylo udržováno automatickým přívodem zředěné kyseliny sírové od 27. hodiny do ukončení procesu. 2% mannitol byl přidáván od 16. hodiny do ukončení procesu. Kultivační médium (45 1) tak získané bylo, po odstranění buněk centrifugací, upraveno na pH 9,5 zředěným hydroxidem sodným, dvakrát extrahováno 25 litry ethylacetátu. Směs byla umístěna do míchané nádoby při 8 °C na 20 minut. Kapalnou rozdělovači centrifugací byly odděleny dvě fáze. Organická fáze byla zmražena na -20 °C a pak pro odstranění ledu filtrována a odpařena až do získání 40 g olejovitého tmavého surového extraktu. Po zavedení kyano skupiny a čistění byly získány 3,0 g safracinu B kyano.

Příklad E

Médium (50 1), složené z dextrózy (2 %), mannitolu (4 %), sušených pivovarských kvasinek (2 %), síranu amonného (1 %), středního fosforečnanu draselného (0,02 %), chloridu draselného (0,2 %), chloridu železitého hexahydrátu (0,001 %), L-tyrosinu (0,1 %), uhličitanu vápenatého (0,8 %), póly propylenglykolu 2000 (0,05 %) a protipěnivého ASSAF 1000 (0,2 %), bylo nalito do nádoby-fermentoru se 75 1 celkovou kapacitou a, po sterilizaci, bylo zaočkováno předkvasnou kulturou (2 %) kmene A2-2 (FERM BP-14) a provzdušňovaná kultivace za třepání probíhala při 27 °C až 24 °C 41 hodin (provzdušňování 75 1 za minutu a třepání 350 až 500 rpm). pH bylo udržováno automatickým přívodem zředěné kyseliny sírové od 28. hodiny do ukončení procesu. 1% mannitol byl přidáván od 16. hodiny do ukončení procesu. Kultivační médium (45 1) tak získané bylo, po odstranění buněk centrifugací, upraveno na pH 3,9 200 ml konc. kyseliny octové. Bylo přidáno 25 gramů kyanidu draselného 97% a po 1 hodině třepání při 20 °C bylo pH upraveno na 9,5 1500 ml roztoku hydroxidu sodného. Pak bylo extrahováno 35 litry ethylacetátu. Směs byla umístěna do míchané nádoby při 8 °C na 20 minut. Kapalnou rozdělovači centrifugací byly odděleny dvě fáze. Organická fáze byla sušena bezvodým síranem sodným a odpařena až do získání 60 g olejovitého tmavého surového extraktu.

Po chromatografií bylo získáno 4,9 g safracinu B kyano.

Citace

Evropský patent 309 477.

US patent 5 721 362.

Sakai, R., Jares-Erijman, E. A., Manzanares, I., Elipe, Μ. V. S. a Rinehart, K. L. J. Am. Chem. Soc. (1996) 118, 9017-9023.

-186CZ 304973 B6

Martinez, E. J., Owa, T., Schreiber, S. L. a Corey, E. J. Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 1999, 96, 3496-3501.

Japanese Kokai JP-A2 59/225189.

Japanese Kokai JP-A2 60/084288.

Arai, T., Kubo, A.: V The Alkaloids, Chemistry and Pharmacology; Brossi, A. Ed.; Academie: New York, 1983, roč. 21; str. 56-110.

Remers, W. A.: V The Chemistry of Antitumor Antibiotics; č. 2; Wiley; New York, 1988, str. 93118.

Gulavita, N. K., Scheuer, P. J., Desilva, E. D.: Abst. Indo-Spojené státy Sym. na bioaktivní sloučeniny z mořských organismů, Goa, Indie, Únor 23-27, 1989, str. 28.

Arai, T., Takahashi, K., Kubo, A. J. Antibiot., 1977, 30, 1015-1018.

Arai, T., Takahashi, K., Nakahara, S., Kubo, A. Experientia, 1980, 36, 1025-1028.

Mikami, Y., Takahashi, K., Yazawa, K., Hour-Young, C., Arai, T., Saito, N., Kubo, A. J. Antibiot., 1988,41,734-740.

Arai, T., Takahashi, K., Ishiguro, K., Yazawa, K. J. Antibiot., 1980, 33, 951-960.

Yazawa, K., Takahashi, K., Mikami, Y., Arai, T., Saito, N., Kubo, A. J. Antibiot., 1986, 39, 1639-1650.

Arai, T., Yazawa, K., Takahashi, K., Maeda, A., Mikami, Y. Antimicrob. Agent Chemother., 1985, 28, 5-11.

Takahashi, K., Yazawa, K., Kishi, K., Mikami, Y., Arai, T., Kubo, A. J. Antibiot., 1982, 35, 196— 201.

Yazawa, K., Asaoka, T., Takahashi, K., Mikami, Y., Arai, T. J. Antibiot., 1982, 35, 915-917. Frincke, J. M., Faulkner, D. J. J. Am. Chem. Soc., 1982, 104, 265—269.

He, Η. Y., Faulkner, D. J. J. Org. Chem., 1989, 54, 5822-5824.

Kubo, A., Saito, N., Kitahara, Y., Takahashi, K., Tazawa, K., Arai, T. Chem. Phar. Bull., 1987, 35,440-442.

Trowitzsch-Kienast, W., Irschik, H„ Reichenback, H., Wray, V., Hófle, G. Liebigs Ann. Chem., 1988, 475^181.

Ikeda, Y., Idemoto, H., Hirayama, F., Yamamoto, K., Asano, T., Munakata, T. J. Antibiot., 1983, 36, 1279-1283.

Asaoka, T., Yazawa, K., Mikami, Y., Arai, T., Takahashi, J. J. Antibiot., 1982, 35, 1708-1710.

Lown, J. W., Hanstock, C. C., Joshua, A. V., Arai, T., Takahashi, K. J. Antibiot., 1983, 36, 1184— 1194.

Munakata et al., americký patent 4 400 752, 1984.

- 187CZ 304973 B6

Y. IkedaetaL, The Journal of Antibiotics. roč. XXXVI, č. 10, 1284, 1983. R. Cooper, S. Unger. The Journal of Antibiotics. roč. XXXVIII, č. 1, 1985.

Corey et al., americký patent 5 721 362. 1998.

Corey et al., J. Am. Chem. Soc., roč. 118, str. 9202-92034, 1996.

Proč. Nati. Acad. Sci. USA, roč. 96, str. 3496-3501, 1999.

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims

1. Sloučenina vzorce:

kde:

R¹ je -CH2-NHR^a nebo -CH2-OR^a, kde R^a je alkyl-CO-; haloalkyl-CO-; cykloalkylalkylCO-; halogenalkyl-O-CO-; arylalkenyl-CO-; heteroaryl-CO-; alkenyl-CO-; alkenyl; nebo acyl aminokyseliny;

R⁵ je -OR, kde R je H; alkyl-CO-; cykloalkyl-CO- nebo halogenalkyl-CO-;

R¹⁸ je -OR, kde R je H; alkyl-CO-; cykloalkylalkyl-CO-;

R²¹ je-CN;

nebo

R¹ je -CH2-N(R^a)2 nebo -CH₂-OR^a, kde R^a je H; alkyl-CO-; halogenalkyl-CO-; cykloalkylalkyl-CO-; halogenalkyl-O-CO-; arylalkyl-CO-; arylalkenyl-CO-; heteroaryl-CO-; alkenyl-CO-; alkenyl nebo acyl aminokyseliny;

R⁵ je OR, kde R je H; alkyl-CO-; cykloalkyl-CO- nebo halogenalkyl-CO-;

R¹⁸ je -OR, kde R je H; alkyl-CO- nebo cykloalkylalkyl-CO-;

R²¹ je-OH;

- 188 CZ 304973 B6 přičemž alkyl je skupina mající 1 až 12 atomů uhlíku;

cykloalkyl má 3 až 12 atomů uhlíku;

alkenyl má 2 až 12 atomů uhlíku;

aryl skupina má 1 až 3 oddělené nebo fúzované kruhy a 6 až 18 atomů uhlíku;

heteroaryl je vybrán zkoumarinyl, chinolinyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrimidyl, furyl, pyrrolyl, thienyl, thiazolyl, oxazolyl, imidazolyl, indolyl, benzofuranyl a benzothiazolyl; a acyl aminokyseliny obsahuje alanyl, arginyl, aspartyl, asparagyl, cystyl, glutamyl, glutaminyl, glycyl, histidyl, hydroxyprolyl, isoleucyl, leucyl, lysyl, methionyl, fenylalanyl, prolyl, seryl, threonyl, tryonyl, tryptofyl, tyrosyl a valyl;

nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

2. Sloučenina podle nároku 1 následujícího vzorce:

kde R¹, R⁵, R¹⁸ a R²¹ jsou definované v nároku 1.

3. Sloučenina podle nároku 1, která má vzorec:

kde R¹, R⁵, R¹⁸ a R²¹ jsou definované v nároku 1.

4. Sloučenina podle nároku 2 nebo 3, kde R¹ je -CH2-NHR^a nebo -CH2-OR^a, kde R^a je alkyl— CO-; halogenalkyl-CO-; halogenalkyl-O-CO-; arylalkenyl-CO-; alkenyl-CO- nebo acyl aminokyseliny;

-189CZ 304973 B6

R⁵ je -OR, kde R je vybraný ze skupiny skládající se z H a C1-C4 alkyl-CO-;

R¹⁸ je -OH; a

R²¹ je-CN;

přičemž v definici R^a:

alkyl je skupina mající 1 až 12 atomů uhlíku;

cykloalkyl má 2 až 12 atomů uhlíku;

aryl skupina je fenyl, bifenyl nebo nafitylová skupina.

5. Sloučenina podle nároku 2 nebo 3, kde R¹ je -CH₂-OR^a, kde R^a je halogenalkyl-CO-; cykloalkylalkyl-CO-; halogenalkyl-O-CO-; arylalkenyl-CO-; heteroaryl-CO-; alkenyl-CO-; nebo alkenyl;

R⁵ je -OR, kde R je H; alkyl-CO-; cykloalkyl-CO- nebo halogenalkyl-CO-;

R¹⁸ je -OR, kde R je H; alkyl-CO- nebo cykloalkylalkyl-CO-; a

R²¹ je-CN;

přičemž alkyl je skupina mající 1 až 12 atomů uhlíku;

cykloalkyl má 3 až 12 atomů uhlíku;

alkenyl má 2 až 12 atomů uhlíku;

heteroaryl je pyridyl.

6. Sloučenina podle nároku 2 nebo 3, kde:

R¹ je -CH2-N(R^a)2 nebo -CH₂-OR^a, kde R^aje H; alkyl-CO-; halogenalkyl-CO-; halogenalkyl-O-CO-; arylalkyl-CO-; arylalkenyl-CO-; alkenyl-CO- nebo acyl aminokyseliny;

R¹⁸ je-OH; a

R²¹ je-OH;

přičemž v definici R^a:

alkyl je skupina mající 1 až 12 atomů uhlíku;

alkenyl má 2 až 12 atomů uhlíku;

aryl skupina je fenyl, bifenyl nebo nafitylová skupina.

-190CZ 304973 B6

7. Sloučenina podle nároku 2 nebo 3, kde R¹ je -CH2-N(R^a)2, kde R^aje H; halogenalkyl-CO-; cykloalkylalkyl-CO-; halogenalkyl-O-CO-; arylalkyl-CO-; heteroaryl-CO-; alkenyl-COnebo alkenyl;

R⁵ je -OR, kde R je H; alkyl-CO-; cykloalkyl-CO- nebo halogenalkyl-CO-;

R¹⁸ je -OR, kde R je H; alkyl-CO- nebo cykloalkylalkyl-CO-; a

R²¹ je-OH;

alkyl je skupina mající 1 až 12 atomů uhlíku;

cykloalkyl má 3 až 12 atomů uhlíku;

alkenyl má 2 až 12 atomů uhlíku;

aryl skupina má 1 až 3 oddělené nebo fúzované kruhy a 6 až 18 atomů uhlíku; a heteroaryl je pyridyl.

8. Sloučenina podle nároku 2 nebo 3, kde

R¹ je -CH₂-OR^a, kde R^aje H; alkyl-CO-; halogenalkyl-CO-; cykloalkylalkyl-CO-; halogenalkyl-O-CO-; aiylalkyl-CO-; arylalkenyl-CO-; heteroaryl-CO-; alkenyl-CO-; alkenyl nebo acyl aminokyseliny;

R⁵ je -OR, kde R je H; alkyl-CO-; cykloalkyl-CO- nebo halogenalkyl-CO-;

R¹⁸ je -OR, kde R je H; alkyl-CO- nebo cykloalkylalkyl-CO-; a

R²¹ je-OH;

přičemž alkyl je skupina mající 1 až 12 atomů uhlíku;

cykloalkyl má 3 až 12 atomů uhlíku;

alkenyl má 2 až 12 atomů uhlíku;

aiyl skupina má 1 až 3 oddělené nebo fúzované kruhy a 6 až 18 atomů uhlíku; a heteroaryl je pyridyl.

9. Sloučenina podle nároku 4 nebo 6, kde R¹ je -CH₂-NHR^a.

10. Sloučenina podle nároku 7, kde R¹ je -CH₂-NHR^a.

11. Sloučenina podle nároku 4 nebo 6, kde R^a je -aa-R^b, kde aa je acyl aminokyseliny a R^b je definovaný stejně jako pro R^a v nároku 4 nebo 6.

12. Sloučenina podle nároku 8, kde R^a je -aa-R^b, kde aa je acyl aminokyseliny a R^bje definovaný stejně jako pro R^a v nároku 8.

- 191 CZ 304973 B6

13. Sloučenina podle nároku 11, kde acyl aminokyseliny je dále substituovaný jednou nebo více skupinami R^a.

14. Sloučenina podle nároku 12, kde acyl aminokyseliny je dále substituovaný jednou nebo více skupinami R^a.

15. Sloučenina podle nároku 4 nebo 6, kde R¹ je -CH₂-NH-aa-R^b, kde aa je acyl aminokyseliny a R^b je vodík; karbamát chránící skupina; arylalkenyl-CO-; halogenalkyl-CO-; alkyl-CO-; arylalkyl-CO-; nebo acyl aminokyseliny;

přičemž aiyl, alkenyl a alkyl jsou definovány v nároku 4 nebo 6.

16. Sloučenina podle nároku 15, kde R¹ je -CH2-NH-aa-R^b, kde aa je alanyl a R^b je vybraný ze skupiny skládající se z vodíku, Boc, PhNHCS-, CF3CO-, trans(trifluormethyl)cinamoyl, cinamoyl, C3F7CO-, butyryl, 3-chlorpropionoyl, hydrocinamoyl, fenylacetyl a acetyl; -CH₂-NH-aaR^b, kde aa je valyl a R^b je vybraný ze skupiny skládající se z Cbz a Boc; -CH2-NH-aa-R^b, kde aa je fenylalanyl a R^b je Boc; -CH2-NH-aa-R^b, kde aaje prolyl a R^b je Boc; -CH2-NH-aa-R^b, kde aaje arginyl a R^bje Boc; nebo -CH2-NH-aa-R^b, kde aaje tryptoíyl a R^bje Boc.

17. Sloučenina podle nároku 6, kde R¹ je -CH₂-NR^a-aa-R^b, kde aaje acyl aminokyseliny, R^a je alkyl-CO- a R^b je halogenalkyl-CO-, přičemž alkyl je definovaný v nároku 6.

18. Sloučenina podle nároku 17, kde R¹ je -CH₂-NR^a-aa-R^b, kde aaje acetylalanyl, R^aje acetyl nebo butyryl, a R^b je CF3-CO-.

19. Sloučenina podle nároku 4, kde R²¹ je -CN a R¹ je -CH₂-NHR^a, kde R^a je alkyl-CO-; alkenyl-CO- nebo arylalkenyl-CO-;

přičemž alkyl a alkenyl jsou definovány v nároku 4.

20. Sloučenina podle nároku 19, kde R¹ je -CH₂-NHR^a, kde R^a je acetyl, isovaleryl, dekanoyl nebo cinamoyl.

21. Sloučenina podle nároku 19, kde R¹ je -CH₂-NHR^a, kde R^a je propionyl, myristoyl, stearoyl, hexanoyl nebo krotonyl.

22. Sloučenina podle nároku 6, kde R²¹ je -OH a R¹ je -CH₂-NHR^a, kde R^a je vodík; chránící skupina; alkyl-CO-; arylalkyl-CO- nebo arylalkenyl-CO-; přičemž alkyl arylalkyl, arylalkenyl a heteroaryl jsou definovány v nároku 6.

23. Sloučenina podle nároku 7, kde R²¹ je -OH a R¹ je -CH₂-NHR^a, kde R^a je vodík; alkenylCO-; arylalkyl-CO-; heteroaryl-CO-; cykloalkylalkyl-CO- nebo alkenyl, přičemž alkenyl, arylalkyl, arylalkyl, heteroaryl a cykloalkylalkyl jsou definovány v nároku 7.

24. Sloučenina podle nároku 22, kde R¹ je -CH₂-NHR^a, kde R^a je vodík, Troc, acetyl, isovaleroyl, dekanoyl, cinamoyl, hydrocinamoyl nebo fenylacetyl.

25. Sloučenina podle nároku 22, kde R¹ je -CH₂-NHR^a, kde R^a je propionyl, myristoyl, stearoyl, hexanoyl nebo krotonyl.

26. Sloučenina podle nároku 23, kde R¹ je -CH₂-NHR^a, kde R^a je cyklohexylacetyl, cyklohexylpropionyl nebo allyl.

27. Sloučenina podle nároku 4, kde R²¹ je -CN a R¹ je -CH₂-OR^a, kde R^a je chráněný cystein; alkyl-CO-; nebo arylalkenyl-CO-, přičemž alkyl a arylalkenyl jsou definovány v nároku 4.

- 192CZ 304973 B6

28. Sloučenina podle nároku 27, kde R¹ je -CH₂-OR^a, kde R^a je butyryl; trans(trifluormethyl)cinamoyl nebo cinamoyl.

29. Sloučenina podle nároku 6, kde R²¹ je -OH a R¹ je -CH₂-OR^a, kde R^a je vodík; chráněný cystein; alkyl-CO-; arylalkyl-CO-; nebo arylalkenyl-CO-, přičemž alkyl, arylalkyl a arylalkenyl jsou definovány v nároku 6.

30. Sloučenina podle nároku 29, kde R¹ je -CH₂-OR^a, kde R^a je vodík, butyryl, trans(trifluormethyljcinamoyl, cinamoyl nebo hydrocinamoyl.

31. Sloučenina podle nároku 8, kde R²¹ je -OH a R¹ je -CH2-OR^a, kde R^a je vybraný ze skupiny skládající se z vodíku; chráněného cysteinu; cysteinového derivátu vzorce Prot^SH-S-CH2CH(NHProt^NH)-CO-, kde Prot^SH a Prot^NH jsou chrániči skupiny pro thiol a pro amino skupinu; alkyl-CO-; arylalkyl-CO-; arylalkenyl-CO-; cysteinového derivátu vzorce Prot^SH-S-CH₂C(=NOProt°^H)-CO-, kde Prot^SH je chránící skupina pro thiol a Prot^OHje chránící skupina pro hydroxy skupinu; a cysteinového derivátu vzorce Prot^SH-S-CH=C(-OProt°^H)-CO-, kde Prot^SH je chránící skupina pro thiol a Prot^OH je chrániči skupina pro hydroxy skupinu, přičemž alkyl, arylalkyl a arylalkenyl jsou definovány v nároku 8.

32. Sloučenina podle nároku 31, kde R^a je vybraný ze skupiny skládající se z vodíku; S-9fluorenylmethyl-O-TBDMS-cysteinu; cysteinového derivátu vzorce Prot^SH-S-CH2CH(NHProt^NH)-CO-, kde Prot^SH je 9-fluorenylmethyl a Prot¹⁴¹¹ je Troc; butyryl; (trifluormethyl)cinamoyl; cinamoyl; cysteinového derivátu vzorce Prot^SH-S-CH2-C(=NOProt°^H)-CO-, kde Prot^SH je 9-fluorenylmethyl a Prot^OH je methoxy; a cysteinového derivátu vzorce Prot^SH-SCH=C(-OProt°^H)-CO-, kde Prot^SH je 9-fluorenylmethyl a Prot^OH je MOM.

33. Sloučenina podle nároku 7, kde R⁵ je -OR, kde R je H; alkyl-CO, kde alkyl má lichý počet atomů uhlíku nebo ω-cyklohexylalkyl-CO-;

přičemž alkyl je definován v nároku 7.

34. Sloučenina podle nároku 5 nebo 8, kde R⁵ je -OR, kde R je H; alkyl-CO, kde alkyl má lichý počet atomů uhlíku nebo ω-cyklohexylalkyl-CO-;

přičemž alkyl je definován v nároku 5 nebo 8.

35. Sloučenina podle nároku 4 nebo 6, kde R⁵ je -OCOCH₃.

36. Sloučenina podle kteréhokoliv z předchozích nároků 33 nebo 34, kde R⁵ je -OCOCH₃.

37. Sloučenina podle nároku 7 nebo 8, kde R¹⁸ je -OR, kde R je H nebo alkyl-CO-;

přičemž alkyl je definován v nároku 7 nebo 8.

38. Sloučenina podle nároku 5, kde R¹⁸ je -OR, kde R je H nebo alkyl-COpřičemž alkyl je definován v nároku 5.

39. Sloučenina podle kteréhokoliv z předchozích nároků 37 nebo 38, kde R¹⁸ je -OH.

40. Sloučenina podle nároku 1, která má obecný vzorec I:

- 193 CZ 304973 B6 kde R¹ je vybraný z CH2NHR^a a CH2OR^a, a R^a, R⁵, R¹⁸, a R²¹ jsou každý nezávisle vybraný z níže definovaných skupin:

R^a

COCH2CH2CH3

COCH=CHPh

O _r5 _r18 _r21

OH OH CN

OAc

COCH(CH₃)NHCOCH₂CH₂Ph

CO-(S)-CH(CH₃)NHCOCF₃

CO-(R)-CH(CH₃)NHCOCF₃

CO-(S)-CH(NHCbz)CH(CH₃)₂

I Boc

ŇHBoc ^HyJx^NHBoc ν'

H

- 194

41. Sloučenina podle nároku 1, která má obecný vzorec II:

kde R¹ je vybraný z CH2NHR^a a CH2OR^a, a R^a, R⁵, R¹⁸, a R²¹ jsou každý nezávisle vybraný z níže definovaných skupin:

R^a R^s

COCH₂CH₂CH₃ OH

R¹⁸ R²¹

OH CN

COCH(CH₃)NHCOCH₂CH₂Ph

CO-(S)-CH(CH₃)NHCOCF₃

CO-(R)-CH(CH₃)NHCOCF₃

CO-(S)-CH(NHCbz)CH(CH₃)₂

I Boc ^ολό

I NH

0^γχ^_ΝΛ_ΝΗ!

NHBoc ^H

- 195

42. Sloučenina podle nároku 1, která má obecný vzorec I:

kde R¹ je CH₂-NH-CO-CHCH₃-NHR^b a R^b, R⁵, R¹⁸, a R²¹ jsou každý nezávisle vybraný z níže definovaných skupin:

R^b R⁵

H OH

COCH₂CH₂CH₃ OAc

COCH₂Ph

COCH₂CH₂Ph

COCH=CHPh

R¹⁸

OH

R²¹

CN

CSNHPh.

43. Sloučenina podle nároku 1, která má obecný vzorec II:

15 kde R¹ je CH₂-NH-CO-CHCH₃-NHR^b a R^b, R⁵, R¹⁸, a R²¹ jsou každý nezávisle vybraný z níže definovaných skupin:

-196CZ 304973 B6

R^b

H

COCH2CH2CH3

COCH₂Ph

COCH₂CH₂Ph

R⁵

OH

OAc _r18

OH

R²¹

CN

CSNHPh.

(ΠΙ), (IV), kde R', X₂, Ri, a R_Ď jsou každý nezávisle vybraný z níže definovaných skupin:

R X2 Ri ch₂ch=ch₂ OH OH CN COCH2CH3 OAc OAc CO(CH₂)4CH₃ OCOCH₂C₆Hn ococf₃ OCOCH₂CH₂C₆Hn ococh₂ci OCOCH₂CH₂CH₃ COCH₂C₆Hi, ococh₂ch₂ci OCO(CH₂)₄CH₃ COCH₂CH₂C₆Hh ococf₂cf₂cf₃ OCO(CH₂)₈CH₃ coch=chch₃

- 197CZ 304973 B6

COCH(CH₃)NHCOCH₂CH₂Ph

CO-(S)-CH(NHCbz)CH(CH₃)₂

I Boc

YS

I NH

ŇHBoc ^H

45. Sloučenina podle nároku 1, která má obecný vzorec V:

(V), kde R', X₂, Ri a R₆ jsou každý nezávisle vybraný z níže definovaných skupin:

-198CZ 304973 B6

R x₂ Ri Re CH₂CH=CH₂ OH OH CN coch₂ch₃ OAc OAc CO(CH₂)₄CH₃ OCOCH₂C₆Hn ococf₃ OCOCH₂CH₂C6H,i ococh₂ci ococh₂ch₂ch₃ COCHzCéHn ococh₂ch₂ci oco(ch₂)₄ch₃ COCIhCIbCeHn ococf₂cf₂cf₃ OCO(CH₂)₈CH₃

COCH₂Ph

COCH₂CH₂Ph

COCH=CHCH₃

COCH(CH₃)NHCOCH₂CH₂Ph

CO-(S)-CH(CH₃)NHCOCF₃

CO-(R)-CH(CH₃)NHCOCF₃

CO<S)-CH(NHCbz)CH(CH₃)₂

Boc

I Boc

NH

-199 CZ 304973 B6

46. Sloučenina podle nároku 1, která má obecný vzorec I:

5 kde R¹ je vybraný z CH2NHR^a, CH2OR^a, a CH₂-NH-CO-CHCH₃-NHR^a; a R^a, R⁵, R¹⁸ a R²¹ jsou každý nezávisle vybraný z níže definovaných skupin:

R^a

H

COCH2CH2CH3

COCH₂Ph

COCH₂CH₂Ph

COCH-CHPh

O

R⁵ R¹⁸ R²¹

OH OH OH

OAc

COCH(CH₃)NHCOCH₂CH₂Ph

CO-(S)-CH(CH₃)NHCOCF₃

CO-(R)-CH(CH₃)NHCOCF₃

CO-(S)-CH(NHCbz)CH(CH₃)₂ | Boc

-200CZ 304973 B6 i NH =·.._ Η ²

NHBoc

47. Sloučenina podle nároku 1, která má obecný vzorec II:

kde R¹ je vybraný z CH2NHR^a, CH2OR^a, a CH₂-NH-CO-CHCH₃-NHR^a; a R^a, R⁵, R¹⁸ a R²¹ jsou každý nezávisle vybraný z níže definovaných skupin:

R^a

H

COCH₂CH₂CH₃

COCH₂Ph

COCH₂CH₂Ph

COCH=CHPh

O

R⁵

OH

OAe

R¹⁸ R²¹

OH OH

COCH(CH₃)NHCOCH2CH₂Ph

CO-(S)-CH(CH₃)NHCOCF₃

CO-(R)-CH(CH₃)NHCOCF₃

CO-(S)-CH(NHCbz)CH(CH₃)₂

-201 CZ 304973 B6

NH

Ϊ

- N^NH₂

NHBoc ^H

48. Sloučenina podle nároku 1, která má obecný vzorec III, IV nebo V:

(V), (ΠΙ), (IV), kde R', X₂, Ri a Re jsou každý nezávisle vybraný z níže definovaných skupin:

R X₂ Ri Ró

H OH OH OH

CH₂CH=CH₂ OAc OAc

-202CZ 304973 B6

COCH₂CH₃ OCH₂CH=CH₂ CO(CH₂)₄CH₃ ococh₂c₆h„ ococf₃ OCOCH₂CH₂C₆Hh ococh₂ci ococh₂ch₂ch₃ COCH₂C₆H_u ococh₂ch₂ci OCO(CH₂)₄CH₃ COCH₂CH₂C6Hii ococf₂cf₂cf₃ OCO(CH₂)₈CH₃

COCH₂Ph

COGH₂CH₂Ph

COCH=CHCH₃

COCH(CH₃)NHCOCH₂CH₂Ph

CO-(S)-CH(NHCbz)CH(CH₃)₂

O i NH >Υ~^,ΑνΗ, =;.« h ¹

NHBoc

49. Sloučenina podle nároku 1, která má vzorec:

-203 CZ 304973 B6

Me (43) (47) (48)

-204CZ 304973 B6

Λ

O ,{CH₂), (49)

OMe

O (50) ₀ÁjANH^CF₃Me O (53) °V^HY^CFs

Me O (55)

-205 CZ 304973 B6

-206CZ 304973 B6 cAc₃f₇ (61) (62)

(63) (64) nebo

-207CZ 304973 B6

Λ'' (65)

50. Sloučenina podle nároku 1, která má vzorec:

(74) (77)

-208CZ 304973 B6 (79) (86) (87)

-209CZ 304973 B6 (88) (89) (109)

-210CZ 304973 B6

OMe (125) (174) (175)

-211 CZ 304973 B6 (176) (177)

(183)

-212CZ 304973 B6 (184) (185)

-213 CZ 304973 B6 (197)

-214CZ 304973 B6

51. Sloučenina podle nároku 1 vzorce 50

52. Sloučenina podle nároku 1 vzorce 112 ío

53. Sloučenina podle nároku 1 vzorce (67)

Me o

-215 CZ 304973 B6 (68) (70) (71)

54. Sloučenina podle nároku 1 vzorce (80)

-216CZ 304973 B6 (82) (83) (84)

-217CZ 304973 B6 (91).

OMe (94)

-218CZ 304973 B6 (96) (113)

-219CZ 304973 B6

(Π6)

55. Sloučenina podle nároku 1 vzorce 66

-220CZ 304973 B6

56. Sloučenina podle nároku 1 vzorce 116

5

57. Sloučenina následujícího vzorce (42) (46)

-221 CZ 304973 B6 (54) (75) (76) (97)

-222CZ 304973 B6

(100) (101)

-223 CZ 304973 B6

OMe (104) (105) (106) (108)

-224CZ 304973 B6

-225CZ 304973 B6 (180)

-226CZ 304973 B6

-227CZ 304973 B6

58. Sloučenina podle nároku 57, která má vzorec (42) (46) (54)

59. Sloučenina podle nároku 57 vzorce (75)

-228 CZ 304973 B6 (76) (97) (98) (100)

-229CZ 304973 B6 (101) (102)

OMe (104) (105)

-230CZ 304973 B6 (106)

-231 CZ 304973 B6 (119) (124)

-232CZ 304973 B6

-233 CZ 304973 B6

60. Sloučenina podle nároku 59 vzorce 100

61. Sloučenina podle nároku 59 vzorce 102

62. Sloučenina podle nároku 59 vzorce 104

-234CZ 304973 B6

63. Sloučenina podle nároku 59 vzorce 108

64. Sloučenina podle nároku 59 vzorce 198

65. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu podle kteréhokoliv z předchozích nároků 1 až 64 společně s farmaceuticky přijatelným nosičem.

66. Sloučenina podle kteréhokoliv z předchozích nároků 1 až 64, pro použití pro léčbu nádoru.

Konec dokumentu