CZ303536B6

CZ303536B6 - Polosyntetické metody a nové slouceniny

Info

Publication number: CZ303536B6
Application number: CZ20014102A
Authority: CZ
Inventors: Cuevas@Carmen; Perez@Marta; Francesch@Andrés; Fernández@Carolina; Luis Chicharro@José; Gallego@Pilar; Zarzuelo@Maria; la Calle@Fernando de; Manzanares@Ignacio
Original assignee: Pharma Mar, S. A.
Priority date: 1999-05-14
Filing date: 2000-05-15
Publication date: 2012-11-21
Also published as: CZ304966B6; BG107301A; ES2231486T3; WO2000069862A2; BRPI0010559B8; MY130271A; ATE283273T1; SK287879B6; CZ304973B6; BG65896B1; BR0010559A; CA2372058C; CZ20023746A3; CA2406095A1; NO20015547D0; CA2406095C; US7241892B1; BR0110801A; WO2000069862A3; US20040002602A1

Abstract

Rešení se týká zpusobu prípravy sloucenin vzorce XVIIb a vzorce XXIIb z kyanosloucenin vzorce XVI, pricemž slouceninou vzorce XXIIb muže být ekteinascidin 743 a ekteinascidin 770, a meziproduktu pro jejich prípravu.

Description

Vynález se týká syntetických metod, se zvláštním důrazem na polosyntetické metody.

Dosavadní stav techniky 10

Evropský patent 309 477 se týká ekteinascidinů 729, 743, 745, 759A, 759B a 770. Bylo zjištěno, že sloučeniny ekteinascidinů mají antibakteriální ajiné užitečné vlastnosti. Protinádorové vlastnosti ekteinascidinů 743 se nyní ověřují v klinických studiích.

Ekteinascidin 743 má komplexní tris(tetrahydroisochinolinfenol)ovou strukturu obecného vzorce I

V současné době se tato sloučenina připravuje izolací z extraktů Ecteinascidin turbin ata. Protože výtěžek je nízký, hledají se jiné způsoby přípravy ekteinascidinů.

Syntetický proces přípravy sloučenin ekteinascidinů je popsán v US Patentu 5 721 362. Patentová metoda je dlouhá a komplikovaná, sestávající z 38 příkladů, popisujících každý krok syntézy až k přípravě ekteinascidinů 743.

Patentový nárok Číslo 25 z US nároků 5 721 362 je zaměřen na fenolový meziprodukt obecného vzorce í, který se rovněž nazývá meziproduktu číslo 11. Tato sloučenina má následující bis(tetrahydroisochinolinfenol)ovou strukturu II:

OCH3

- 1 CZ 303536 B6 kde MOM je methoxymethylová substituční skupina aTBSPSje 3,5-t-butyldifenylsilylová substituční skupina.

Z meziproduktu 11 je možné syntetizovat jinou zajímavou protinádorovou látku, ftalascidin. Víz 5 Proč. Nati. Sci. USA, 96, 3496-3501, 1999. Ftalascidin je bis(tetrahydroisochinolin)ový derivát obecného vzorce III:

ίο V ekteinascidinu 743 má 1,4 můstek strukturu obecného vzorce IV:

Další známé ekteinascidiny zahrnují sloučeniny s jinými systémy přemostění cyklických kruhů, 15 jak se to například děje v ekteinascidinu 722 a 736, kde můstek má strukturu obecného vzorce V:

Dalším příkladem je ekteinascidin 583 a 597, kde můstek má strukturu obecného vzorce VI:

- 2 CZ 303536 B6

(V/)

Jiným příkladem je ekteinascidin 594 a 596, kde můstek má strukturu obecného vzorce VII:

(W)

Kompletní struktura těchto a příbuzných sloučenin je uvedena v J. Am. Chem. Soc., 1996, 118, 9 017-9 023. Odkaz na článek se nachází v seznamu citované literatury.

io Další známé sloučeniny neobsahují systém přemostěných cyklických kruhů. Tyto zahrnují bis(tetrahydroisochinolinchinolin)y - protinádorové a antimikrobiální látky safraciny a saframyciny, a přírodní mořské produkty renieramyciny a xestomyciny, izolované z kultur mikrobů nebo hub. Všechny mají společnou dimerickou tetrahydroisoch i no línovou uhlíkovou kostru. Podle charakteru oxidace aromatických kruhů je možné tyto sloučeniny rozdělit do čtyř typů I až IV.

Typ I, neboli dimerické isochinolinchinony, představují systém o obecném vzorci VIII. Nej častěji se vyskytují v této skupině sloučenin - viz tab. I:

Tab.I

Struktura saframyc i nových antibiotik typu I

( VM)

-3CZ 303536 B6

Substituční skupina

Sloučenina	r<4.		R²¹	r2S.	_R25b	rZSc
Saframycin A	H	H		CN	O	O	ch₃
Saframycin B	H	H		H	O	O	ch₃
Saframycin C	H	och₃	H	o	o	ch₃
Saframycin G	H	OH		CN	0	o	ch₃
Saframycin H	H	H		CN	OH	CH₂C0CH₃ ch₃
Saframycin S	H	H		OH	O	o	ch₃
Saframycin Y₃	H	H		CN	NH₂	H	ch₃
saframycin Ydj	H	H	CN	nh₂	H	c₂h₅
saframycin Ad)	H	H	CN	o	O	C₂H₅
saframycin Yd₂	H	H	CN	NH₂	H	H
saframycin Υ»	H	Q*	CN	nh₂	H	ch₃
saframycin Y₂b-d	H	Q*	CN	nh₂	H	c₂h₅
saframycin AH₂	H	H	CN	H*	OH*	ch₃
saframycin AH₂Ac	H	H	CN	H	OAc	ch₃
saframycin AH)	H	H	CN	OH⁰	H^a	ch₃
saframycin AHiAc	H	H	CN	OAc	H	CHí
saframycin AR₃	H	H	H	H	OH	ch₃

^a navzájem zaměnitelné ^b kde skupina Q má obecný vzorec IX:

-4CZ 303536 B6

Aromatické kruhy typu I se nacházejí v saframycinech A, B, C, G, H a S, které je možno vyizolovat ze Straptomyces lavendulae v malém množství. Kyano derivát saframycinu A, který se nazývá kyanochinonamin, je znám z japonského kokai JP-A2 59/225 189 a 60/084 288. Safra5 myciny Y₃, Yd_b Adi a Yd₂ byly připraveny z organismu 5. lavendulae procesem přímé biosyntézy při vhodné suplementaci média, v němž organismus rostl. Rovněž byly vytvořeny dimery saframycinu Y2b a Y₂t> <i tvořené navázáním dusíku na C-25 jedné podjednotky na C-l4 druhé podjednotky. Tyto sloučeniny pocházejí z kultur 5. lavendulae rostoucích v supiementovaných médiích. Saframycin ARi(=AH₂), mikrobiální produkt redukce saframycinu A na C-25, vytvo10 řený mikroorganismem Rhodococcus amidophilus byl také připraven nonstereoselektivní chemickou redukcí saframycinu A pomocí borohydrátu sodného jako směs epimerů 1:1, která byla následována chromatografickou separací (druhý AH_t isomer je méně polární).

Produkt další redukce, saframycin AR₃, 2 l-dekyano-25-dihydro saframycin A, (tj. 25 dihydro15 saframycin B) byl vytvořen stejnou mikrobiální konverzí. Jiným typem mikrobiální konverze saframycinu A pomocí Nocardia spec. byl vytvořen saframycin B a další redukcí mikroorganismem Mycobacterium spec. byl vytvořen saframycin AH^]Ac. Pro biologické experimenty byly rovněž připraveny 25-O-acetáty saframycinu AH₂ a AHi.

Sloučeniny typu I obecného vzorce X byly izolovány z mořských sasanek-viz tab. 2

Tab.2

Struktury sloučenin typu I pocházejících z mořských sasanek

-5CZ 303536 B6

	Substituent
_Rw>		R²¹	R
renieramycin A	OH	H	H	-C(CH₃)=CH-CH₃
renieramycin B	OC₂H₅	H	H	-C(CH₃>CH-CH₃
renieramycin C	OH	O	O	-C(CH₃)»CH-CH₃
renieramycin D	OC₂Hj	O	0	-C(CH₃)=CH-CHj
renieramycin E	H	H	OH	-C(CH₃)«CH-CH₃
renieramycin F	och₃	H	OH	-C(CH₃)=CH-CH₃
xestomycin	och₃	H	H	-ch₃

Renieramyciny A az D byly izolovány z antimikrobiálního extraktu houby Reniera spec., pocházející z Mexika, společně s biogeneticky příbuznými monomerickými isochinoliny, jako jsou renieron a příbuzné sloučeniny.

Struktura renieramycínu A byla původně stanovena pomocí invertované stereochemie na C—3, C— 11 a C-l3. Nicméně důkladným rozborem dat získaných pomocí ^]H NMR analýzy příbuzných sloučenin renieramycínu E a F, izolovaných ze stejné sasanky nalezené v Palau, bylo zjištěno, že spojení kruhů renieramycinů je identické se spojením kruhů nalezeným u saframycinů. Toto zjištění vedlo k závěru, že původně stanovená stereochemie renieramycinů A až D musí být stejná jako u saframycinů.

Xestomycin byl nalezen v sasance Xestospongia spec., žijící ve vodách Srí Lanky.

Sloučeniny typu II obecného vzorce XI nesoucí redukovaný hydrochinonový kruh zahrnují saframyciny D a F, izolované ze S.lavendulae a safřamyciny Mx-1 a Mx-2 izolované z Myxococcusxanthus. Viz tab. 3.

Tab.3

(Xl)

-6CZ 303536 B6

Substitucnts

Compound	R¹⁴*	R^l4b	R²'	R²⁵*	_R25h	r25c
saframycin D	O	O	H	0	0	ch₃
saframycin F	o	O	CN	0	0	ch₃
saframycin Mx-1	H	OCHj	OH	H	CH₃	NHj
saframycin Mx-2	H	och₃	H	H	ch₃	nh₂

Kostra typu III byla nalezena v antibioticích safracin A a B, izolovaných z kultury Pseudomonas fluorescens.

Tato antibiotika obecného vzorce XII se skládají z tetrahydroisochinolinchinonové a tctrahydroisochinolinfenolové podjednotky,

_oA/CH,

ŇHz kde

R²¹ je -H v safracinu A a -OH v safracinu B.

Saframycin R, jediná sloučenina, klasifikovaná jako sloučenina nesoucí kostru typu IV, byl rovněž izolován ze S.lavendulae. Tato sloučenina obecného vzorce XIII, sestávající z hydrochinonového kruhu s postranním glykolesterovým řetězcem na jednom zfenolických kyslíků je pravděpodobně výhodnější nežli saframycin A, a to díky její mírné toxicitě.

OCHi

O

-7 CZ 303536 B6

Všechny tyto známé sloučeniny mají systém fúzovaných pěti kruhů A až E, jakje znázorněno na následující struktuře obecného vzorce XIV:

V ekteinascidinech a některých dalších sloučeninách jsou kruhy A a E fenolické, zatímco v jiných sloučeninách, hlavně v saframycinech jsou kruhy A a E chinonické. Ve známých sloučeninách jsou kruhy B a D tetrahydro, zatímco kruh C je perhydro.

Předmětem vynálezu je potřeba výroby aktivních sloučenin nesoucích systém fúzovaných pěti kruhů ze sloučenin dnes známých. Rovněž je předmětem potřeba vývoje alternativních cest pro syntézu ekteinascidinů a příbuzných sloučenin. Takovéto způsoby syntézy představují mnohem ekonomičtější přístup kjiž známým proti nádorovým látkám, a také dovolují přípravu nových aktivních sloučenin.

Podstata vynálezu

Vynález je zaměřen na použití známé sloučeniny safracin B, nazývanou také chinonamin, v polosyntetické syntéze.

Obecněji, vynález je podobný polosyntetickému procesu přípravy meziproduktů, derivátů a příbuzných struktur ekteinascidinů nebo jiných sloučenin tetrahydroisochinolinfenolu, počínaje z přírodních bis(tetrahydroisochinolin)ových alkaloidů. Vhodný výchozí materiál polosyntetické25 ho procesu zahrnuje třídy saframyc i nových a safracinových antibiotik, nacházejících se v kultivačních médiích různých mikroorganizmů, jako i třídy sloučenin reineramycinu a xestomycinu, nacházejících se v mořských sasankách.

Obecný vzorec XV výchozích sloučenin je následující:

(XV).

kde R¹ je amidomethylová skupina jako například Clf- NH-CO-CR^25aR^25bR^25c, kde R^25b tvoří keto- skupina nebo jedna je -OH, -NH2 nebo -OCOCH3 a druhá je -CH2COCH3, -H, -OH nebo

-OCOCH3, když R^25a je -OH nebo -NH₂, potom R^25b není -OH a R^25c je -H, ÁH, nebo

-8CZ 303536 B6

-CH₂CH₃, nebo R¹ je acyloxymethylenová skupina jako například -CH₂-0-CO-R, kde R je -C(CH₃)=CH-CH₃ nebo-€H₃, kde R⁵ a R⁸ jsou vybrány nezávisle z -H, -OH nebo -OCOCH₂OH, nebo R⁵ a R⁸ jsou oba keto a kruhu A je p-benzochinonový

R^14a a R^,4b jsou oba -H nebo jeden je -H a druhý je -OH, -OCH₃ nebo -OCH₂CH₃, nebo R^l4d a R^14b tvoří společně keto skupinu

R¹⁵ a R¹⁸ jsou vybrány nezávisle z -H, nebo -OH a kruh E je benzenový kruh, nebo R¹⁵ a R¹⁸ jsou oba keto a kruh E je p-benzochinonový a kde R²’je -OH nebo-CN

Obecnější vzorec této třídy sloučenin je znázorněn níže:

kde substituční skupiny definované jako R,, R₂, R₃, R4, R₅, Rb, R7, Rs- R9, Rio jsou nezávisle vybírány ze skupiny skládající se z-H, -OH. OCH₃, CN, =O, CH₃;

kde X představuje různé amidové nebo esterové funkční skupiny obsažené v přírodních produktech;

kde každý tečkovaný kruh představuje jednu, dvě nebo tři případné dvojné vazby.

V předkládaném vynálezu se definují polosyntetické postupy pro přípravu meziproduktů zahrnujících meziprodukt 11, a tudíž pro přípravu sloučenin ekteinascidinu, jako i ftalascidinu a přídatných sloučenin. Polosyntetické postupy vynálezu zahrnují velký počet kroků potřebných k dosažení kýženého produktu. Každý krok sám o sobě je proces související s předkládaným vynálezem. Vynález není omezen pouze na postupy zde uvedené; alternativní postupy, jako například změna pořadí jednotlivých kroků jsou rovněž možné.

Tento vynález se zakládá na dostatečném množství 21- kyano reaktantu jako výchozí sloučeniny obecného vzorce XVI:

OCH3

-9CZ 303536 B6

(2)

Kyanosafracin B se připravuje zkvašováním safracinu B produkujícího kmene Pseudomonas fluorescens a zpracováním kultivačního média pomocí kyanidového iontu. Výhodným kmenem

Pseudomonas fluorescens je kmen A2-2, FERM BP-14, který se využívá při přípravě EP 055 299. Vhodným zdrojem kyanidového iontu je kyanid draselný. Kultivační médium se zfíltruje a přidá se nadbytek kyanidového iontu. Po jedné hodině třepání se upraví pH na hodnotu 9,5 a po organické extrakci se získá hrubý buněčný extrakt. Následnou purifikací hrubého extraktu se získá kyanosafracin B.

Stereochemie uvedená v tomto patentu je založená na poznatcích správné stereochemie přírodních produktů. V případě, že by byla odhalena chyba v použité stereochemii, je nutno učinit potřebné opravy ve vzorcích v rozsahu celého patentu. Z důvodu, že uvedené syntézy je možno modifikovat, se tento vynález rozšiřuje o stereoizomery.

Produkty tohoto vynálezu jsou typicky obecného vzorce XVII:

nebo obecného vzorce XVIIb

(XVIIb) kde

- 12CZ 303536 B6

R^l je případně chráněná nebo derivatizovaná aminomethylenová skupina, jako například skupina R^l definovaná pro vzorec XV;

R⁴je-H;

nebo

R¹ a R⁴ společně tvoří skupinu o obecném vzorci IV, V, VI nebo VII:

R⁵je -H nebo-OH:

R⁷ je -OCH3 a R⁸ je -OH nebo R⁷ a R⁸ společně tvoří skupinu -O-CH2O;

R^14a a R^14b jsou oba -H nebo jeden je -H a druhý je -OH, --OCH3 nebo -OCH2CH3, nebo Rt4a _a pJ4b _Sp₀|_eg_ng rvoří keto skupinu; a

R¹⁵ je-H nebo-OH;

R²¹je-H, -OH nebo-CN;

a deriváty zahrnující acyl deriváty, především ty, kde R⁵ je acetyl oxy nebo jiná acyloxy skupina 25 nesoucí maximálně 4 atomy uhlíku, a zahrnující deriváty, ve kterých skupina-NCH₃ v poloze 12 je nahrazena skupinou -NH nebo -NCH2CH3 a deriváty, ve kterých -NH₂ skupina ve sloučenině obecného vzorce Vije případně derivatizovaná.

Ve sloučeninách obecného vzorce XVIIa nebo XVIIb je R¹ typicky aminomethylen, amido30 methylen, nebo R¹ společně s R⁴ tvoří skupinu IV nebo V. Vhodné amidomethylenové skupiny zahrnují skupiny obecného vzorce -CH₂-NH-CO-CHCH₃-NH₂ odvozené od alaninu a podobné skupiny odvozené od jiných aminokyselin, především D- a L- glycin, valin, leucin, isoleucin, fenylalanin, tyrosin, tryptofan, methionin, cystein, asparát, asparagin, kyselina glutamová, glutamin, lysin, arginin, prolin, serin, threonin, histidin a hydroxy prolin. Obecný vzorec skupiny R¹ je

5 potom —C H₂—N H-aa, kde aa představ uj e am inoacy 1.

Skupina R¹ může být acylovaná na skupině -NH₂ a například N-acylové deriváty se připraví ze skupin -CH2-NH2 a -CH₂-NN-aa. Acyl deriváty můžou být N-acyl deriváty nebo z nich Nthioacyl deriváty, stejně jako cyklické amidy.

Pro ilustraci, acyl skupiny můžou být alkanoyl, haloalkanoyl, arylalkanoyl, alkenoyl, heterocykly lacyl, aroyl, arylaroyl, haloaroyl, nitroaroyl nebo jiné acyl skupiny. Acyl skupiny mají obecný vzorec -CO-R³, kde R^a představuje různé skupiny jako například alkyl, alkoxy, alkylen, ary laiky 1, aty laiky len, aminoacyl nebo heterocyklyl, každý případně substituovaný halo, kyano,

- 13 CZ 303536 B6 nitro, karboxyalkyl, alkoxy, aryl, aryloxy, heterocyklyl, heterocyklyloxy, alkyl, amino nebo substituovanou amino skupinu.

Jiné alkylující látky zahrnují isothiokyanáty, jako například aryl isothiokyanáty, především fenylisokyanát,. Alkyl, alkoxy nebo alkylenová skupina R^a nese vhodně 1 až 6 až 12 atomů uhlíku a může být lineární, větvená nebo cyklická, Arylové skupiny jsou typicky fenyl, bifenyl nebo nafty 1.

Heterocyklylové skupiny můžou být aromatické nebo částečně nebo úplně nenasycené a vhodně mají 4 až 8 kruhových atomů, nejlépe 5 nebo 6 kruhových atomů, sjedním nebo více heteroatomy, kterými jsou buď dusík, síra nebo kyslík.

Aniž by byl seznam kompletní, typické R^a skupiny zahrnují alkyl, haloalkyl, alkoxyalkyl, haloalkoxyalkyl, arylalkylen, haloalkylary laiky len, acyl, haloacyl, arylalkyl, alkenyl a aminokyselinu.

Například R^a-CO může být acetyl, trifluoracetyl, 2,2,2-trichlorethoxy karbonyl, isovaleryl, trans3-(trifluormethyl)cinamoyl, heptafluorbutyryl, dekanoyl, trans-cinamoyl, butyryl, 3-chlorpropyonyl, cinamoyl, 4-methylcinamoyl, hydrocinamoyl nebo transhexenoyl nebo alanyl, arginyl, aspartyl, asparagyl, cystyl, glutamyl, glutaminyl, glycyl, histidyl, hydroxypropyl, isoleucyl, leucyl, lysyl, methionyl, fenylalanyl, propyl, seryl, threonyl, thyronyl, tryptofyl, tyrosyl, valyl, jako i jiné méně známé am i noacyl skupiny, jako i ftalimido a jiné cyklické amidy. Jiné příklady je možné najít v seznamu chránících skupin.

Sloučeniny, kde -CO-R^a je odvozen od aminokyseliny a obsahuje aminoskupinu, můžou samy tvořit acylové deriváty. Vhodné N-acylové sloučeniny zahrnují dipeptidy, které jsou obratem schopny tvořit N-acylové deriváty.

V jedné modifikaci, která se týká meziproduktů, je kruh A pozměněn tak, že inkorporuje podstrukturu, uvedenou jako sloučenina obecného vzorce XX nebo XXI, jak bude pojednáno níže.

V jiné modifikaci, která se týká meziproduktů, může být skupina R¹ -CILO-CO-Cfu CíT-SProt³ odvozená od sloučeniny obecného vzorce XIX, kde Prot³ a Fu mají naznačené významy.

V takovém případě, R⁷ a R⁸ tvoří oxymethylenoxy skupinu. Skupina R¹⁸ je obvykle chráněna. R²¹je obvykle kyano.

R^l4a a R^14b jsou s výhodou atomy vodíku. R¹⁵ je s výhodou atom vodíku. O-acylové deriváty jsou výhodně alifatické O-acyl deriváty, hlavně acylové deriváty o velikosti 1 až 4 uhlíkových atomů, a typicky je to O-acetylová skupina, především na pozici 5.

Vhodné chránící skupiny pro fenoly a hydroxy skupiny zahrnují ethery a estery, jako jsou alkyl, alkoxyalkyl, aryloxyalkyl, alkoxyalkoxyalkyl, alkylsilylalkoxyalkyl, alkylthioalkyl, arylthioalkyl, azidoalkyl, kyanoalkyl, chloralkyl heterocyklyl, arylacyl, haloarylacyl, cykloalkylalkyl, alkenyl, cykloalkyl, alkylarylalkyl, alkoxyarylalkyl, nitroarylalkyl, haloarylaiky 1, alkylaminokarbonylarylalkyl, alkyl sulfinylary laiky 1, alkylsilyl ajiné ethery, stejně jako arylacyl, ary laiky lkarbonát, alifatický karbonát, alkylsulfinylarylalkyl karbonát, alkyl karbonát, arylhaloalkyl karbonát, arylalkenyl karbonát, aryl karbamát, alkyl fosfinyl, alkylfosfinothioyl, aryl fosfinothioyl, arylalkyl sulfonát ajiné estery. Tyto skupiny se případně můžou nahradit výše uvedenými skupinami vR¹.

Vhodné chránící skupiny aminů zahrnují karbamáty, amidy ajiné chránící skupiny,jako například alkyl, arylaldyl, sulfo-nebo halo-arylalkyl, haloalkyl, alky lsily laiky I, arylalkyl, cykloalkylalkyl, alkylarylalkyl, heterocyklyl alkyl, nitroarylalkyl, acylaminoalkyl, nitroaryldithioarylalkyl, dicykloalkylkarboxamidoalkyl, cykloalkyl, alkenyl, arylalkenyl, ni troaryl alkenyl, heterocyklylalkenyl, heterocyklyl, hydroxyheterocyklyl, alkyldithio, alkoxy nebo halo- nebo alkylsulfínyl arylalkyl, heterocyklylacyl, aroyl, arylaroyl, haloaroyl, nitroaroyl a jiné amidy, jako i

- 14CZ 303536 B6 alkyl, aldenyl, alkylsilylalkoxyalkyl, alkoxyalkyl, kynaoalkyl, heterocyklyl, alkoxyarylalkyl, cykloalkyl, nitroaryl, ary laiky 1, alkoxy- nebo hydroxy- aiy laiky 1 a mnoho jiných skupin. Tyto skupiny se případně můžou nahradit výše uvedenými skupinami v R.'.

Příklady chránících skupin jsou uvedeny v následujících tabulkách:

Ochrana -OH skupiny

Ethery Zkratka io

methyl
methoxymethyl	MOM
benzyloxymethyl	BOM
methoxyethoxymethyl	MEM
2-(trimethylsiÍyl)ethoxymethyl	SEM
methylthiomethyl	MTM
fenylthiomethyl azidomethyl kyanomethyl 2,2-dichlor-l, l-difluorethyl 2-chlorethyl 2-bromethyl	PTM
tetrahy dropy raný 1	THP
1-ethoxyethyl fenacyl 4-bromfenacyl cyklopropylmethyl allyl propargyl isopropyl cyklohexyl Z-butyl benzyl 2,6—dimethylbenzyl	EE
4—methoxy benzyl o-nitrobenzyl 2,6-dichlorbenzyl 3,4—dichlorbenzyl 4-(dÍmethylamino)karbonylbenzyl	MPM/Pft
4-methy 1 su lfiny 1 benzy 1 9-anthryl methyl 4-pikolyl heptafluor-/7-to ly 1 tetrafl uor—4-py ridy 1	Msib
trimethylsilyl	TMS
Z-butyldimethylsilyl	TBDMS
Z-butyl difenyl sily 1	TBDPS
triisopropylsilyl Estery aiyl formiát aryl acetát aryl levulinát	TIPS
aryl pivaloát aryl benzoát aryl 9-fluorkarboxylát aryl methyl karbonát	ArOPv

- 15CZ 303536 B6 kde R¹, R^s, R⁸, R¹⁵ a R¹⁸ jsou popsány výše.

Jiné sloučeniny obecného vzorce XVI s různými substítuenty v poloze 21 rovněž představují možný výchozí materiál. Obecně, jakýkoliv derivát, který je možné vyrobit nukleofilním nahrazením 21- hydroxylové skupiny sloučenin obecného vzorce XV, kde R²¹ je hydroxylová skupina, je derivátem kandidátním. Příklady vhodných 21-substituentů zahrnují následující funkční skupiny, nicméně nejsou na ně omezeny:

merkapto-skup ina;

alkylthio skupina (alkylová skupina nesoucí 1 až 6 uhlíkových atomů);

arylthio skupina (arylová skupina nesoucí 6 až 10 uhlíkových atomů, nesubstituovaná nebo substituovaná 1 až 5 substítuenty, vybranými například z: alkylová skupina nesoucí 1 až 6 atomů uhlíku, alkoxy skupiny nesoucí 1 až 6 atomů uhlíku, halogenové atomy, merkapto skupiny a nitro skupiny);

amino-skupina;

mono nebo dialkyl amino-skupina (tato nebo každá alkylová skupina nesoucí 1 až 6 uhlíkových atomů);

mono nebo diaryl amino-skupina (tato nebo každá arylová skupina definována stejně jako výše zmíněné arylthio skupiny);

α-karbonylalkyl skupina obecného vzorce -C(R^aXR^b)-C(=O)Rj kde

R^a a R^b jsou vybrány z atomů vodíku, alkylových skupin nesoucích 1 až 20 atomů uhlíku, arylových skupin (jak definováno výše v souvislosti s arylthio skupinami) a aralkyl-skupin (v kterých alkylová skupina nesoucí 1 až 4 atomy uhlíku je nahrazena arylovou skupinou, definovanou výše v souvislosti s arylthio-skupinami), pod podmínkou, že jeden z R^a a R^b je atom vodíku;

R^c je vybrán z atomů vodíku, alkylové skupiny nesoucí 1 až 20 atomů uhlíku, arylových skupin (jak definováno výše s souvislosti s arylthio skupinami), aralkylové skupiny (v kterých alkylová skupina nesoucí 1 až 4 atomy uhlíku je nahrazena arylovou skupinou, definovanou výše v souvislosti s arylthio skupinami), alkoxy-skupiny nesoucí 1 až 6 atomů uhlíku, aminoskupiny a mono— nebo dialkylamino skupiny jako uvedeno výše.

Z obecnějšího hlediska souvisí předkládaný vynález s procesy, ve kterých je prvním krokem příprava 21-derivátu za použití nukleofilního činidla. Sloučeniny tohoto druhu se nazývají 21-Nuc sloučeniny.

Přítomnost 21—kyano-skupiny je nutná pro některé konečné produkty, především ekteinascidín 770 a ftalascidin, zatímco pro jiné konečné produkty působí jako ochranná skupina, která může být okamžitě přeměněna v jiný substituent, jako například 21—hydroxy skupinu ekteinascidinu 743 nebo 21-hydroxyftalascidinu. Zavedení 21- kyano sloučeniny jako výchozího materiálu výrazně stabilizuje molekulu v průběhu dalších syntetických kroků, než je případně odstraněna. Jiné 21-Nuc sloučeniny nabízejí tuto a jiné výhody.

Z jednoho důležitého hlediska tkví předkládaný vynález v použití 21-kyano sloučeniny o obecném vzorci XVI při přípravě bis- nebo tris-(tetrahydroisochinolinfenol)ových sloučenin. Produkty, které se připraví, zahrnují meziprodukty, jako například meziprodukt 11 a ekteinascidiny a ftalascidin, jako i nové a známé sloučeniny příbuzné struktury.

Výhodným výchozím materiálem jsou sloučeniny obecného vzorce XV, kde R^14a a R^14bjsou oba atomy vodíku. Vhodným výchozím materiálem jsou také sloučeniny obecného vzorce XV nebo XVI, kde R¹⁵ je atom vodíku. Dalším výhodným výchozím materiálem jsou sloučeniny obecného vzorce XV nebo XVI, kde kruh E je fenolový. Výhodným výchozím materiálem jsou sloučeniny

- 10CZ 303536 B6 obecného vzorce XV nebo XVI, kde alespoň jeden, lépe alespoň dva nebo tři z R⁵, R⁸, R¹⁵ a R^l* nejsou atomy vodíku.

Příklady vhodného výchozího materiálu pro tento vynález zahrnují saframycin A, saframycin B, 5 saframycin C, saframycin G, saframycin H, saframycin S, saframycin Y₃, saframycin Y_d|, saframycin Adi, saframycin Yd₂, saframycin AH₂, saframycin AH₂Ac, saframycin AHi, saframycin

AHiAc, saframycin AR₃, renieramycin A, renieramycin B, renieramycin C, renieramycin D, renieramycin E, renieramycin F, xestomycin, saframycin D, saframycin F, saframycin Mx-I, saframycin Mx-2, safracin A, safracin B a saframycin R.

Vhodný výchozí materiál nese kyanoskupinu v poloze 21 (pro skupinu R²¹).

Obzvlášť významnou okolností je, že vynález zahrnuje polosyntetický proces, ve kterém se transformační kroky týkají safracinu B.

Safracin B představuje kruhový systém úzce příbuzný s ekteinascidiny. Tato sloučenina má stejnou pentacyklovou strukturu a stejný substituční vzorec aromatického kruhu E. Rovněž je safracin B velmi podobný některým syntetickým meziproduktům celkové syntézy ET-743, především meziproduktu 11.

Meziprodukt tohoto druhu se přeměňuje v ET-743 pomocí dobře zavedené metody. Syntetická konverze safracinu B v meziproduktu 11 tudíž představuje polosyntetickou metodu pro získání ET-743.

Tímto způsobem se ze safracinu B připraví meziprodukt 11 a sloučeniny odvozené od meziproduktu 11, konkrétně sloučeniny ekteinascidinu. Dále se ze safracinu B připraví ftalascidin. Předkládaný vynález souvisí s použitím safracinu B v přípravě meziproduktu 11, ftalascidínu, sloučenin ekteinascidinu a jiných meziproduktů vynálezu. Vynález rovněž souvisí se sloučeninami popsanými v předkládaném vynálezu a se sloučeninami odvozenými od jiných uvedených vhodných výchozích materiálů, jako i s použitím těchto sloučenin při přípravě těchto sloučenin.

Výhodnější výchozí produkty tohoto vynálezu nesou 21-kyano skupinu. V současné době nejvýhodnější sloučeninou předkládaného vynálezu je sloučenina obecného vzorce 2. Tento produkt se získá přímo ze safracinu B a je považován za klíčový meziprodukt v polosyntetickém procesu.

-11 CZ 303536 B6

1-adamantyl karbonát /-butyl karbonát BOC-OAr

4—methyl sul fínyl benzyl karbonát Msz-Oar

2,4—dimethylpent-3-yl karbonát Doc-Oar aryl 2,2,2-trichlorethyl karbonát aryl vinyl karbonát aryl benzyl karbonát aryl karbamát dimethylfosfhinyl Dmp-OAr dimethylfosfínothioyl Mpt-OAr difenylfcsfinothioyl Dpt-Oar aryl methansulfonát aryl toluensulfonát aryl 2-formyl benzen sulfonát

Ochrana-NH₂ skupiny

Karbamáty Zkratka methyl ethyl

9-fluorenylmethyl Fmoc

9-(2-su lfo)fl uoreny 1 methy 1 9-(2,7-dibrom)fluorenylmethyl 17-tetrabenzo[fl,c,g_> z] fl uoreny lmethyl Tbfmoc

2-chlor-3-indenylmethyl Climoc benz[/]inden-3—ylmethyl Bimoc

2,7-di-/-butyl[9-( 10,10-dioxo-l 0,10, 10,10-tetrahydrothioxanthyl)]methyl DBD-Tmoc 2,2,2-trichlorethyl Troc

2-trimethylsilylethyl Teoc

2-pfenyl ethyl hZ

-(1 -adamantyl)-! —methy lethyl Adpoc 2-chlorethyl

1,1 -dimethyl-2-chlorethy 1

1.1— dimethyl-2-bromethyl

1,1 —dimethy 1-2,2-dibromethyl DB-/-BOC

1,1 -dimethy 1-2,2,2-trichlorethy 1 TCBOC

-methyl-1 -(4-bifenyl)ethy 1 Bpoc

1- (3,5- di-/-butylfenyl)-l-l-methylethyl /-Burmeoc

2- (2 -a 4 '-pyridyl)ethyl Pyroc

2.2- bis(4'-nÍtrofenyl)ethyl Bnpeoc /7-(2-píval oy lam ino)-1,1-dimethy lethyl

2-[(2-nitrofenyl)dithio]-l-pfeny lethyl NpSSPeoc 2-(«,zz-dicyklohexylkarboxamido)ethyl /-butyl

-adamantyl

2- adamantyl vinyl allyl

1-isopropylallyl cinnamyl

4-nitrocinnamyl

3- (3'-pyridyl)prop-2-enyl 8-chinolyl w-hydroxypiperidinyl

BOC

1- Adoc

2- Adoc Voc

Aloe or Alloc

Ipaoc

Coc

Noc

Paloc

- 16CZ 303536 B6 alkyldithio benzyl p-methoxybenzyl /wiitrobenzyl /7-brombenzyl p-chlorbenzyl

2,4-dichlorbenzyl

4-methylsulfinylbenzyl

Cbz/Z

Moz

PNZ

Msz

9-anthrylmethyl difenylmethyl fenothiazíny!-( 10)-karbonyl η’-ρ-Αο 1 uens u 1 fony 1 am i nokarbony 1 n -fenylaminothiokarbonyl

Amidy formami acetamid chloracetamid trifluoracetamid TFA fenylacetamid

3-fenyl propanamidpent-4-en amid pikolinamid

3- py r i dy 1 karboxam i d benzamid p-fenyl benzamid n-fthalimid n-tetrachlorfthalimid TCP

4- nitro-n-fthalimid n-dithiasukcinimid Dts n-2,3-difenylmaleimid n-2,5-dimethylpyrrol n-2,5-bis(triisopropylsiloxyl)pyrrol BIPSOP n-1,1,4,4—tetramethyldisiliazacyklopentant addukt STABASE

1,1,3,3-tetramethyl-l ,3-disilaisoindolin BSB

Zvláštní -NH chránící skupiny n-methylamin n-Z-butylamin n-ally lamin «-[2-trimethylsilyl)ethoxy]methylamin SEM n-3-acetoxypropy lamin n-kyan omethy 1 am ί n n-(l-isopropyI-4-nitro-2-oxo-3-pyiTolin-3-yl)amin n-2,4-dimethoxybenzylamin Dmb

2-azanorbomenes «-2,4-d initrofeny lam i n n-benzylamin Bn o n—4-methoxy benzy lam ί η Μ P M n-2,4-dimethoxybenzylamin DMPM n-2-hydroxybenzy lamin Hbn «-(difenylmethyl)amino DPM n-b i s(4-methoxy feny 1) methy 1 am i n n-5-dibenzosuberylamin DBS

-17CZ 303536 B6 n-trifenylmethy lamin Tr n-[(4-methoxyfenyl)difenylmethyl]amino MMTr «-9-fenylflurenylamin Pf «-ferrocenylmethy lamin Fcm «-2-pikolylamin «'-oxid «-1,1-dimethylethiomethylenamin «-benzyl idenam i n «-p-methoxy benzyl idenamin «-difenylmethylenamin n-(5,5-dimethyl-3-oxo-l-cyklohexenyI)amin n-nitroamin «-nitrosoamin difenylfosfinamid Dpp dimethylthiofosfinamid Mpt difenylthiofosfínamid Ppt dibenzyl fosforamidát

2- nitrobenzen sul fenám id Nps «—1 -(2,2,2-trifluor-l, 1 -difenyl)ethylsulfenamid TDE

3- nitro-2-pyridinsulfenamid Npys /Moluensulfonamid Ts benzensulfonamid

Safracin B obsahuje alanylový postranní řetězec. Bylo zjištěno, že chránění volné amino skupiny Boc skupinou je velmi prospěšné.

Konkrétní ekteinascidinové produkty tohoto vynálezu zahrnují sloučeniny obecného vzorce XVIII:

(XVIII), kde R¹ aR⁴ tvoří skupinu obecného vzorce IV, V, VI nebo VII:

vzácněji skupinu obecného vzorce IV nebo V;

- 18 CZ 303536 B6

R²¹ je -H, -OH nebo -CN, vzácněji -OH nebo -CN;

a jejich acylové deriváty, vzácněji 5-acyl deriváty zahrnující 5-acyl derivát.

Příklady provedení vynálezu

Příprava ekteinascidinu 743 a příbuzných sloučenin

Obecně, přeměna 21-kyano výchozí sloučeniny na ekteinascidin -například obecného vzorce XVIII-zahmuje:

a) v případě potřeby přeměnu E kruhu chinonového systému na systém fenolový

b) v případě potřeby přeměnu A kruhu chinonového systému na systém fenolový

c) přeměnu A kruhu fenolového systému na methylendioxyfenolový kruh

d) tvorbu přemostěného spiro kruhového systému obecného vzorce IV, VI nebo VII přes pozici 1 a 4 kruhu B; a

e) derivatizaci, podle potřeby, jako například acylace

Krok (a) -v případě potřeby přeměna E kruhu chinonového systému na systém fenolový, se provede obvyklým redukčním procesem. Vhodným reakčním systémem je vodík s paladiovo-uhlíkovým katalyzátorem, ačkoliv je možno použít jakýkoliv jiný redukční systém.

Krok (b) - v případě potřeby přeměna A kruhu chinonového systému na systém fenolový, je analogický kroku (a).

Krok (c) -přeměna A kruhu fenolového systému na methylendioxyfenolový kruh, může být ovlivněn různými způsoby, pravděpodobně společně s krokem (b). Například, chinonový kruh může být demethylován na methoxy skupině na pozici 7 a redukován na dihydrochinon a zachycen vhodnou elektrofilní látkou jako například CH₂Br₂, BrCH₂Cl nebo podobnou dvoumocnou látkou, čímž se přímo získá methylendioxy kruhový systém, nebo pomocí dvoumocného reagentu jako například thiokarbonyldiimidazol, čímž se získá substituovaný methylendioxy kruhový systém, který se může konvertovat v kýžený kruh.

Krok (d) je typicky ovlivněn vhodnou substitucí na pozici 1 pomocí premosťovacího reagens, který napomáhá formaci kýženého můstku tím, že tvoří exendo chinonmethid na pozici 4 a dovoluje methidu reagovat s 1- substituentem za tvorby přemostěné struktury. S výhodou používaná přemosťující reagencia jsou obecného vzorce XIX:

kde Fu představuje chráněnou funkční skupinu, jako například -NHProt⁴³ nebo OProt^4b;

Prot³ je chránící skupina a tečkovaná čára naznačuje případnou dvojnou vazbu.

Methid se s výhodou připraví vnesením hydroxy skupiny v poloze 10 v oblasti spoje kruhů A a

B, čímž vznikne produkt o obecném vzorci XX:

-19CZ 303536 B6

ι *, (XX), nebo výhodněji produkt o obecném vzorci XXI:

kde skupina R se zvolí tak, aby vznikla sloučenina obecného vzorce IV, V, VI nebo VII. Pro první dvě takové sloučeniny má skupina R obvykle tvar —CHFu—CFh-SProť.

Chránící skupiny mohou být poté odstraněny a modifikovány podle potřeby tak, aby vznikla kýžená sloučenina.

Typický postup pro krok (d) je uveden v US Patentu 5 721 362, který je zde citován. Zvláštní odkazy jsou učiněny k pasáži sloupce 8, krok (1) a příklad 33 US Patentu, a k příbuzným oblastem.

Derivatizace v kroku (e) zahrnuje acylaci, například pomocí skupiny R^a-CO, jako i přeměnu 12NCH₃ skupiny na 12-NH nebo 12-NCH₂CH₃. Tato reakce může předcházet nebo následovat jiné kroky.

Pro ilustraci, nyní je možné přeměnit sloučeninu kyanosafracinu B obecného vzorce 2 na ET743. Tento způsob přípravy ET-743 je mnohem přímočařejší a kratší, než nabízely drive známé metody. Kyanosafracin B se přeměňuje na meziprodukt 25;

a z tohoto derivátu je možné připravit velké množství cysteinových derivátů, které se poté přemění v ET-743. S výhodou používané cysteinové deriváty jsou znázorněny pomocí těchto sloučenin obecného vzorce:

-20CZ 303536 B6

Retrosyntetická analýza pro přípravu ET-743 při použití sloučeniny 29 je znázorněna na schématu I.

NHTroc

Schéma I

Podle schématu I je možné získat ET-743 v 21 lineárních krocích. Tato metoda přeměňuje kyanosafřacin B v meziprodukt 25, a to pomocí sledu reakcí, které zahrnují (1) odstranění methoxy skupiny umístěné v kruhu A, (2), redukci kruhu A a formaci methylendioxy skupiny; to vše v jedné reakční nádobě, (3) hydrolýzu amidové funkční skupiny na uhlíku 1, (4) přeměnu vzniklé amino skupiny v hydroxylovou skupinu. Reakční postup nechrání primární alkoholovou funkční skupinu v poloze 1 v kruhu B sloučeniny 25; reakce přímo využívá cysteinový zbytek 29 na přípravu meziproduktu 27. Derivát cystein 29 je chráněn na amino skupině s β-β-β-trichlorethoxykarbonylovou chránící skupinou, aby se zachovala kompatibilita s existující allylovou a MOM skupinou. Meziprodukt 27 je okamžitě oxidován a zacyklován. Tyto okolnosti, společně s různou deprotektivní strategií v pozdějších stadiích reakce představují nové cesty syntézy, přístupnější průmyslovému vývoji než proces vedený pod názvem US 5 721 362.

Přeměna sloučeniny 2-kyano v meziproduktu 25 obvykle zahrnuje tyto kroky (viz schéma II):

• přípravu chráněné sloučeniny obecného vzorce 14, vzniklé reakcí 2 s anhydridem tercbutoxykarbony 1 u;

-21 CZ 303536 B6 • přeměnu sloučeniny 14 v chráněnou sloučeninu obecného vzorce 15, vzniklé reakcí s brommethylmethyl etherem a diisopropylethylaminem v acetonitrilu;

• selektivní odstranění methoxy skupiny chinonového systému v sloučenině 15, čímž se získá sloučenina obecného vzorce 16, vzniklá reakcí s methanol ovým roztokem hydroxidu sodného;

• přeměnu sloučeniny 16 ve sloučeninu dioxymethylenovou obecného vzorce 18 tak, že se využije tato posloupnost reakcí:

(1) chinonová skupina sloučeniny 16 se redukuje 10% Pd/C ve vodíkové atmosféře;

(2) hydrochinonový meziprodukt se přemění v methylendioxy sloučeninu obecného vzorce 17 tak, že reaguje s bromchlormethanem a cesium karbonátem ve vodíkové atmosféře;

(3) sloučenina 17 se přeměňuje v sloučeninu obecného vzorce 18 tím, že se chrání volná hydroxy lová skupina za vzniku OCH₂R. Tato reakce probíhá s BrCH₂R a cesium karbonátem, kde R může být aryl, CH=CH₂, OR' atd.

• odstranění /erč-b utoxy karbony lu a methyl oxymethy lových chránících skupin sloučeniny 18 dovoluje přípravu sloučeniny obecného vzorce 19 tím, že reaguje s roztokem HCl v dioxanu. Tato reakce se rovněž uskuteční smícháním sloučeniny 18 s roztokem trifluoroctové kyseliny v dichlormethanu;

• přípravu sloučeniny thiourey obecného vzorce 20 tím, že reaguje sloučenina 19 s fenylisothiokyanátem;

• konverzi sloučeniny obecného vzorce 20 v amino sloučeninu obecného vzorce 21 tím, že reaguje s roztokem HCl v dioxanu;

• přeměnu sloučeniny obecného vzorce 21 vN-Toc derivát 22 tím, že reaguje s trichlorethyl chlorformiátem a pyridinem;

• přípravu chráněné hydroxy sloučeniny obecného vzorce 23 tím, že reaguje 22 s brom methyl methy letherem a diisopropylethylaminem;

• přeměnu sloučeniny obecného vzorce 23 v -NH derivát 24 tím, že reaguje s kyselinou octovou a zinkem;

• přeměnu sloučeniny obecného vzorce 24 v hydroxy sloučeninu obecného vzorce 25 tím, že reaguje s nitritem sodným a kyselinou octovou. Jinou možností je použití nitrogen tetroxidu v kombinaci s kyselinou octovou a acetonitrilem, s následnou aplikací hydroxidu sodného. Je možné také použít nitrit sodný v kombinaci s acetanhydridem kyseliny octové, s následnou aplikací hydroxidu sodného.

-22CZ 303536 B6

Schéma II:

Přeměna meziproduktu 25 v ET-743 pomocí derivátu cysteinu 29 obvykle zahrnuje tyto kroky (viz schéma III):

• přeměnu sloučeniny obecného vzorce 24 v derivát 30 tím, že se odstraní primární hydroxy lová funkční skupina (S)-N-2,2,2-trichIorethoxykarbonyl-S-(9H-fluoren-9-ylmethyl)cysteinem 29;

io · konverze chráněné sloučeniny obecného vzorce 30 v derivát fenolu 31 tím, že se odštěpí allylová skupina tributyItín hydridem a dichlorpaladium-bis(trifenylfosfin)em;

• přeměna fenolové sloučeniny obecného vzorce 31 ve sloučeninu obecného vzorce 32 tím, že se oxiduje anhydridem benzenselenínu pří nízké teplotě;

• přeměna hydroxy sloučeniny obecného vzorce 32 v lakton 33 tímto postupem;

-23CZ 303536 B6 (1) Sloučenina obecného vzorce 32 reaguje s dvěma ekvivalenty triflic anhydridu a pěti ekvivalenty DMSO (2) přidá se osm ekvivalentů diisopropylethylaminu;

(3) přidají se čtyři ekvivalenty t-butyl alkoholu;

(4)přidá se sedm ekvivalentů 2-terc-butyl-l,l,3,3-tetramethylguanidinu;

(5) přidá se deset ekvivalentů acetanhydridu;

• přeměnu laktonové sloučeniny obecného vzorce 33 v hydroxylovou sloučeninu 34 tím, že se odstraní MOM chránící skupina pomocí TMSI;

• štěpení N-trichlorethoxykarbonylové skupiny sloučeniny obecného vzorce 34 na sloučeninu ío 35 tím, že reaguje s Zn/AcOH;

• přeměnu aminosloučeniny 35 v odpovídající α-keto laktonovou sloučeninu 36 tím, že reaguje s N-methylpyridinium karboxaldehyd chloridem, s následným DBU;

• přípravu ET-770 tím, že sloučenina obecného vzorce 36 reaguje s 3-hydroxy—4-methoxyfenylethylaminem;

přeměnu ET-770 v ET-743 tím, že reaguje s dusičnanem stříbrným ve směsi s AcN/H₂O

SjAejO.CHjC»,

Schéma III

-24CZ 303536 B6

Cesty syntézy popsané výše, vedoucí k přeměně meziproduktu 25 v ET-743, můžou být výhodně modifikovány pomocí jiných derivátů cysteinu, například sloučeniny 37, s názvem 2-methoxymethoxyloxy-3-(9H-f1uoren-9-ylmethyl)-propenová kyselina. Tato sloučenina již má keto skupinu ve formě enoletheru, zatímco jiná cysteinová analoga obsahují aminoskupinu, která musí být přeměněna v keto skupinu procesem transaminace. Tato reakce má výtěžek 55 až 60 %. Použitím sloučeniny 37 je možné podstatně zvýšit výtěžek lineární syntézy, protože se lze vyhnout transaminačnímu kroku.

Konverze meziproduktu 25 v ET-743 za použití derivátu cysteinu 37 může být provedena io podobným způsobem a se stejnými reagenty, na rozdíl od derivátu cysteinu 29, s výjimkou přeměn (f) a (g). Reakční postup je popsán ve schématu IV:

Schéma IV

Sloučenina 38 se rovněž připraví tím, že reaguje meziprodukt 12 popsaný v US patentu

N 5 721 362 s meziproduktem 37. Tato reakce představuje výrazné zlepšení reakčního schématu popsaného v US patentu.

-25CZ 303536 B6

Příprava ftalascidinu a příbuzných sloučenin

V předkládaném vynálezu zahrnuje klíčová skupina produktů ftalascidin s následujícím obecným vzorcem XX

kde R¹ je amidomethylenová skupina; R⁵ je krátký oxy-postranní řetězec; a R²¹ je kyano skupina nebo hydroxy skupina. V případě ftalascidinu, R’ je ftalimidomethylenová skupina; R⁵ je acetoxy skupina; R²¹ je kyano skupina. Jiné skupiny představující R¹ zahrnují mono-a di-N-amidomethyleny jako i jiné cyklické amidomethy lény, a jiné skupiny představující R⁵ zahrnují C¹ až C⁴acylové skupiny, jako i C¹ až C⁴ alkylové skupiny.

Konverze 21-kyano sloučeniny ve ftalascidin nebo příbuzné sloučeniny obecného vzorce XX obvykle zahrnuje následující kroky:

a) v případě potřeby konverzi E kruhu chinonového systému v systém fenolový;

b) tvorbu R⁵ skupiny na pozici 5 v kruhu A;

c) tvorbu R¹ skupiny na pozici 1 v kruhu B;

d) v případě potřeby konverzi A kruhu chinonového systému v systém fenolový;

e) v případě potřeby konverzi A kruhu fenolového systému v kruh methylend ioxy fenolový.

Uvedené kroky jsou velmi podobné těm, které byly uvedeny při přípravě ekteinascidinů. Krok (c) obvykle zahrnuje tvorbu -CH₂NH₂ skupiny v poloze 1 a její acy láci.

Ftalascidin se připraví pomocí meziproduktů popsaných v části pojednávající o přeměně kyanosafracinu B v meziprodukt 25. Například meziprodukty 21 a 17 jsou vhodné výchozí sloučeniny pro přípravu ftalascidinu.

Jak bude uvedeno níže ve schématu V, proces syntetické přípravy ftalascidinu počínající meziproduktem 21 zahrnuje tyto po sobě následující kroky:

• přeměnu sloučeniny 21 na sloučeninu obecného vzorce 27 s tím, že reaguje s ftalát-anhydridem v dichlormethanu a karbonylimidazolu.

• konverzi sloučeniny 27 na ftalascidin tím, že reaguje s tributy 1tin hydridem a dichlorpaladium-bis(trifenylfosfin)em nebo zásaditým médiem, následována reakcí s acetyl chloridem.

-26CZ 303536 B6

Schéma V

Jak bude uvedeno níže ve schématu VI, proces syntetické přípravy ftalascidinu počínaje meziproduktem 17 zahrnuje tyto po sobě následující kroky:

• Acetylaci hydroxylové skupiny sloučeniny obecného vzorce 17 pomocí acetyl chloridu a pyridinu tak, že vznikne acetylovaný meziprodukt obecného vzorce 42;

• Odstranění /erc-butoxykarbonylu a ochranné methyl oxy methylové skupiny sloučeniny 42 pro io přípravu sloučeniny obecného vzorce 43 tím, že reaguje s roztokem HCI v dioxanu. Této reakce je rovněž dosaženo smícháním sloučeniny 42 s roztokem trifluoroctové kyseliny v dichlormethanu;

• Přípravu sloučeniny thiourey obecného vzorce 44 tím, že reaguje 43 s fenylisothiokyanátem;

• Konverzi sloučeniny obecného vzorce 44 v amino sloučeninu obecného vzorce 45 tím, že 15 reaguje s roztokem HCI v dioxanu;

• Přeměnu 45 ve ftalascidin tím, že reaguje s ftalát anhydridem v dichlormethanu a karbonylimidazolu.

-27CZ 303536 B6

Schéma VI

Příprava meziproduktu 11 a příbuzných meziproduktů

Retrosyntetická analýza je popsána v následujícím schématu

V předkládaném vynálezu zahrnuje klíčová skupina meziproduktů meziprodukt 11 a má obecný vzorec XXI

OProP (XXI), kde Prot¹ a Prot² jsou hydroxy chránící skupiny, podle možnosti rozdílné. Co se týče samotného meziproduktu 11, je Prot¹ skupina představována methoxymethylovou skupinou, Prot² je t-butyldifenylsilylová skupina.

-28CZ 303536 B6

Konverze 21- kyano sloučeniny na meziprodukt 11 nebo příbuzné meziprodukty obecného vzorce XXI obvykle zahrnuje tyto po sobě jdoucí kroky:

a) v případě potřeby konverzi E kruhu chinonového derivátu na systém fenolový

b) tvorbu -OProť skupiny v poloze 18 v kruhu E;

c) tvorbu -CH₂-OProt² skupiny v poloze 1 v kruhu B;

d) v případě potřeby konverzi kruhu A chinonového systému na fenolový systém;

e) konverzi fenolového systému kruhu A na methylendioxyfenolový kruh.

Krok (b), tvorba -OProť skupiny v poloze 18 kruhu E, je typickou chránící reakcí fenolové skupiny. Reakční podmínky se vyberou podle charakteru chránící skupiny. Další kroky jsou podobné io jiným reakcím.

Krok (c), tvorba -CH₂-OProt² skupiny v poloze 1 kruhu B, se obvykle uskutečňuje tvorbou -CH2NH2 na pozici 1 a poté přeměnou aminové funkční skupiny na hydroxy a chráněním. Reaktant s funkční skupinou R¹ ve tvaru -CH2-NH-CO-CR^25aR^25bR^25c ztratí N-acylovou skupinu. V případě, že výchozí produkt nese skupinu R¹ ve tvaru -CH2-O-CO-R, není potřeba ekteinas15 cidin nijak upravovat, protože jeho R¹ substituční skupina je stejná.

Co se týče jiných produktů, je potřeba odstranit O-acylovou skupinu. Pro tyto deacylace jsou k dispozici různé metody. V jedné z nich je deacylace a konverze na hydroxylovou funkční skupinu uskutečněna vjednom kroku. Poté je hydroxylová skupina acetylována nebo jakkoliv jinak upravována tak, aby vznikla vhodná R¹ funkční skupina.

US patent 5 721 362 popisuje syntetickou metodu na přípravu ET-743 sestávající z mnoha kroků. Jeden z meziproduktů syntézy je meziprodukt 11. Použitím kyanosafracinu B jako výchozí sloučeniny je možné dosáhnout meziproduktu 11 mnohem jednodušším způsobem a tudíž zlepšit metodu na přípravu ET-743.

Kyanosafracin B je přeměněn na meziprodukt 25 pomocí výše popsané metody. Meziprodukt 11 se z meziproduktu 25 získá pomocí těchto kroků (viz schéma VII).

• tvorba chráněné hydroxy sloučeniny obecného vzorce 26 tím, že reaguje 25 s tercbutyldifenylsily(chloridem za přítomnosti báze;

• konečné odštěpení allylové skupiny pomocí tributyltin hydridu a dichlorpaladiumbis(trifenylfosfin)em na sloučeninu 26, které vede k tvorbě meziproduktu 11.

Schéma VII

-29CZ 303536 B6

Představa syntetického procesu, uvedená v předkládaném vynálezu a zaměřená na přeměnu safracinu B na meziprodukt 11, je modifikací schématu VIII a skládá se z těchto kroků:

• stereospecifické přeměny sloučeniny obecného vzorce 1 (safracin B) na sloučeninu obecného vzorce 2 tím, že se selektivně nahradí -OH skupina -CN skupinou tím, že reaguje s KCN v kyselém prostředí;

• tvorby sloučeniny thiourey obecného vzorce 3 tím, že reaguje sloučenina obecného vzorce 2 s fenylisothiokyanátem;

• přeměny sloučeniny thiourey obecného vzorce 3 na acetamid obecného vzorce 5 tím, že se hydrolyzuje v kyselém prostředí a je následován přidáním acetanhydrídu; meziprodukt amino sloučenina obecného vzorce 4 se připraví ukončením hydrolýzy v kyselém prostředí s bikarbonátem sodným. Tento meziprodukt je ale značně nestabilní a je okamžitě přeměněn na pětičlenný cyklický imin 6;

• tvorby chráněné sloučeniny obecného vzorce 7 tím že reaguje s brommethylmethyletherem a diisopropylethylaminem v dichlormethanu;

• selektivní demethylaci methoxy skupiny chinonového systému sloučeniny obecného vzorce 7 na sloučeninu obecného vzorce 8 tím, že reaguje s roztokem methanolu a hydroxidu sodného;

• přeměny sloučeniny obecného vzorce 8 na methylendioxy sloučeninu obecného vzorce 9 tím, že dojde k:

(1) chinonová skupina sloučeniny 8 se redukuje s 10% Pd/C ve vodíkové atmosféře;

(2) hydrochinonový meziprodukt je přeměněn na methylendioxy sloučeninou obecného vzorce 9 tím, že reaguje s bromchlormethanem a cesium karbonátem ve vodíkové atmosféře;

(3) sloučenina obecného vzorce 9 je přeměněna na sloučeninu obecného vzorce 10 tím, že se chrání volná hydroxylová skupina jako OCH₂R skupina tím, že reaguje s BrCH₂R a cesium karbonátem, kde R představuje aryl, CH=CH₂, OR' atd.;

(4) přeměně acetamidové skupiny sloučeniny obecného vzorce 10 na odpovídající hydroxylovou skupinu obecného vzorce 11 tím, že reaguje s nitrogen tetroxidem ve směsi s kyselinou octovou a octanu sodného, následována přidáním hydroxidu sodného;

(5) případně se acetamidová skupina sloučeniny obecného vzorce 10 přemění na primární aminovou skupinu tím, že reaguje s hydrazínem nebo s Boc₂O, DMAP následována přidáním hydrazinu; tento primární amin se přemění na odpovídající hydroxylovou skupinu (sloučenina obecného vzorce 11) tím, že se primární amin oxidativně přemění na odpovídající aldehyd s 4-formyl-lmethylpyridinium sulfonátem nebo jiným pyridiniovým iontem, následovaným DBU nebo jinou zásadou a další hydrolýzou a následován redukcí aldehydu na odpovídající hydroxylovou skupinu pomocí hydří du litnoh Hnitého nebo jiné redukující látky;

(6) tvorbě chráněné sloučeniny obecného vzorce 26 tím, že reaguje s t-buty ldifeny lsilyl chloridem adimethylaminopyridinem v dichlormethanu;

(7) přeměně silylované sloučeniny obecného vzorce 26 na meziprodukt 11 tím, že se odkryje OCH₂R ochranná skupina tím, že reaguje v kyselém nebo zásaditém prostředí. Typické reakce zahrnují paladiovou čerň ve vodíkové atmosféře, nebo vodný roztok TFA, nebo tributyltin hydrid a dichlor bis(trifenylfosfin palladium).

V ještě jiné úpravě reakčního postupu dochází k přeměně kyano sloučeniny obecného vzorce 2 na meziprodukt 11 pomocí rozšířeného schématu II, které zahrnuje tyto kroky:

• tvorbu chráněné hydroxy sloučeniny obecného vzorce 26 tím, že reaguje 25 s tercbutyldifenylsilyl chloridem v přítomnosti zásady;

• závěrečné odštěpení allylové skupiny pomocí tributyltin hydridu a dichlorpaladiumbis(trifenylfosfin) na sloučeninu 26, která vede ke přípravě meziproduktu 11.

-30CZ 303536 B6

Příprava aktivních sloučenin

Kyanosafracin B se přeměňuje ve velký počet meziproduktů a derivátů s potenciální proti nádorovou terapeutickou aktivitou. Tyto meziprodukty se dají vytvořit z již popsaných sloučenin, nebo použitím alternativních reakčních postupů.

Meziprodukty zde popsané zahrnují sloučeninu 47 a mnoho dalších amidových derivátů, které se připraví pomocí sloučenin 45 nebo 43.

Na schématu VIII je popsána příprava sloučeniny 47 za použití těchto kroků:

• příprava sloučeniny thiourey obecného vzorce 3 tím, že reaguje sloučenina obecného vzorce 2 s fenylisothiokyanátem;

• přeměna sloučeniny thiourey obecného vzorce 3 na acetamid obecného vzorce 5 tím, že dochází k hydrolýze v kyselém prostředí a následnému přidání acetanhydridu. Meziproduktem je aminová sloučenina obecného vzorce 4, která se izoluje ukončením hydrolýzy v kyselém prostředí pomocí bikarbonátu sodného. Meziprodukt je velmi nestabilní a okamžitě se přeměňuje na pětičlenný cyklický imin 6;

• příprava chráněné sloučeniny obecného vzorce 7 tím, že reaguje s brommethylmethyletherem a diisopropylethylaminem v dichlormethanu;

• selektivní demethylace methoxy skupiny chinonového systému sloučeniny obecného vzorce 7 na sloučeninu obecného vzorce 8 tím, že reaguje s methanolovým roztokem hydroxidu sodného;

• přeměna sloučeniny obecného vzorce 8 na methylendioxy sloučeninu obecného vzorce 10 pomocí těchto reakčních kroků:

(1) chinonová skupina sloučeniny 8 se redukuje pomocí 10% Pd/C ve vodíkové atmosféře;

(2) hydrochinonový meziprodukt se přemění na methylendioxy sloučeninu obecného vzorce 9 tím, že reaguje s bromchlormethanem a cesium karbonátem ve vodíkové atmosféře;

(3) sloučenina obecného vzorce 9 se přeměňuje na sloučeninu obecného vzorce 10 tím, že se chrání volná hydroxy lová skupina jakou je allyloxy skupina tím, že reaguje s allyl bromidem a cesium karbonátem;

• přeměna sloučeniny obecného vzorce 9 na acetyl derivát 46 tím, že reaguje s acetylchloridem v pyridinu;

• přeměna sloučeniny obecného vzorce 46 na nechráněnou sloučeninu 47 tím, že reaguje s kyselinou chlorovodíkovou v dioxanu.

-31 CZ 303536 B6

Schéma VIII

Jiné užitečné deriváty amidových meziproduktů se vytvoří z již popsaného meziproduktu 45 pomocí následujícího schématu:

io Druhý krok není bezprostředně nutný. Tento proces představuje důležitou část vynálezu, obzvlášť tam, kde skupina Rje skupinou R\ jak bylo uvedeno drive. Schéma VIII je možné snadno rozší-32CZ 303536 B6 řit tak, že umožní přípravu sloučenin obecného vzorce XXIII tím, že se ve výchozí sloučenině v poloze 5 umístí jiná funkční skupina, a to buď skupina přímo potřebná pro produkt, nebo skupina, kterou je možno odstranit nebo jinak modifikovat tak, že vznikne kýžená funkční skupina.

Schéma IX

Ze sloučeniny 45 se připraví skupina analog pomocí následujících reakčních kroků:

• acylace amino skupiny sloučeniny obecného vzorce 45 pomocí velké skupiny acylových derivátů, které poskytnou odpovídající amidy, kde preferovanými acylovými skupinami jsou acetyl, cinnamoylchlorid, p-trifluorcinnamoylchlorid, isovalerylchlorid-fenylisothiokyanát nebo aminokyseliny, nebo jiné výše uvedené skupiny R^aCO~.

• transformace -CN skupiny na -OH skupinu tím, že reaguje s nitrátem stříbrným ve směsi s AcN/H₂O.

Jiné užitečné deriváty amidového meziproduktu se připraví použitím již popsaného meziproduktu 43 podle následujícího schématu:

(43)

Schéma X

Použitím následujícího postupu se ze sloučeniny 43 získá jiná skupina zajímavých derivátů.

a) acylace amino skupiny sloučeniny obecného vzorce 43 pomocí velké škály acylových derivátů, které poskytnou odpovídající amidy, kde preferovanými acylovými skupinami jsou acetyl, cinnamoylchlorid, p-trifluorcinnamoylchlorid, isovalerylchlorid nebo aminokyseliny, nebo jiné výše uvedené sloučeniny skupiny R^aCO-.

b) transformace -CN skupiny na -OH skupinu tím, že reaguje s nitrátem stříbra ve směsi AcN/H₂O.

Nové meziprodukty

Vzhledem k předcházejícímu je zřejmé, že v předkládaném vynálezu se vyskytuje mnoho meziproduktů. Podle charakteru kruhu A, mají tyto meziprodukty obecný vzorec XXIIa

-33CZ 303536 B6

nebo obecného vzorce XXIIb

kde R¹ je -CH₂NH₂ nebo -CíhOH, chráněná, nebo derivatizovaná varianta takovéto skupiny a R⁴je-H;

nebo

R^l a R⁴ společně tvoří skupinu obecného vzorce IV, V, VI nebo VII

R⁵ je OH, chráněná nebo derivatizovaná varianta takovéto skupiny;

R^,4a a R^l4b jsou obě -H nebo jedna je -H a druhá je -OH, chráněná nebo derivatizovaná varianta 20 takovéto skupiny, -OCH, nebo -OCH₂CH₃, nebo R^l4a a R^l4b tvoří společně keto skupinu.

-34CZ 303536 B6

R¹² je -H, -CH₃ nebo -CH₂CH₃;

R¹⁵ je ΌΗ, chráněná nebo derivatizovaná varianta takovéto skupiny;

R¹⁸ je -OH, chráněná nebo derivatizovaná varianta takovéto skupiny.

R²¹je-H, -OH nebo -CN.

V jednom uspořádání, alespoň R^l, R⁵, R^!4a, R^!4b, R¹⁵ nebo R¹⁸ je chráněná nebo derivatizovaná skupina.

V jedné modifikaci tohoto vynálezu nepředstavuje R¹ skupina 3,5-1-butyldifenylsily 1 a/nebo skupina R¹⁸ není methoxymethylová.

R¹ je s výhodou -CH2NH2 nebo -CH₂OH, chráněná nebo derivatizovaná varianta této skupiny a R⁴je-H;

nebo

R^l a R⁴ tvoří společně skupinu:

R^14a a R^,4b jsou s výhodou oba -H.

Jedna důležitá kategorie meziproduktů obsahuje sloučeninu, nazvanou jako sloučenina 25, která má obecný vzorec:

V obecném vzorci uvedené kategorie sloučenin je skupina MOM nahraditelná jakoukoliv chránící skupinou.

Jiné důležité meziprodukty zahrnují sloučeniny nazvané jako sloučeniny 45 a 47. Ze sloučeniny 45 se jednoduchým způsobem připraví N-acyl deriváty, které jsou důležitou součástí předkláda-35 CZ 303536 B6 ného vynálezu. Vhodné acylové skupiny již byly uvedeny výše. Odpovídající aktivní 21-hydroxy sloučeniny jsou rovněž důležité a jsou součástí tohoto vynálezu.

Nové aktivní sloučeniny

Bylo zjištěno, že sloučeniny tohoto vynálezu, které byly původně připraveny jako meziprodukty, mají výrazné účinky při léčbě maligních nádorů, jako například leukémie, nádory plic, střeva, ledvin a melanomu.

Předkládaný vynález tudíž nabízí možnost léčby karcinomů savců, především člověka, terapeuticky efektivní dávkou sloučeniny vynálezu, jako i jejich farmakologických sloučenin.

Předkládaný vynález se týká rovněž farmaceutických přípravků, které jako aktivní složku obsahují sloučeninu nebo sloučeniny vynálezu, jako i proces jejich přípravy.

Příklady farmaceutických přípravků zahrnují jakékoliv pevné (tablety, pilulky, kapsle, granule) nebo kapalné (roztoky, suspenze nebo emulze) přípravky s vhodným složením, nebo přípravky pro orální, místní nebo parenterální podávání. Tyto přípravky obsahují buď čistou sloučeninu nebo v kombinaci s nosičem nebo jinou farmakologicky aktivní látkou. Tyto přípravky musí být sterilní, v případě, že se podávají parenterálně.

Podávání sloučenin nebo přípravků předkládaného vynálezu je buď ve formě intravenóžních infuzí, orálních preparátů, nebo jsou podávány intraperitoneálně. S výhodou se použije 24 hodinová infuze, ještě výhodněji infuze 1 až 12 hodin, nejlépe 2 až 6 hodin. Krátké infuzní Časy, které dovolují krátkou nemocniční hospitalizaci, jsou obzvlášť výhodné. Nicméně, v případě potřeby je možné nastavit čas infuze na 12 až 24 hodin. Infuze se opakují ve vhodných intervalech 2 až 4 týdnů. Farmakologické přípravky, které obsahují sloučeniny uvedené v předkládaném vynálezu, se do těla nemocného dopraví ve formě lipozomů nebo nanosférových měchýrků ve formě dovolující uvolnění aktivních látek, nebo použitím jiných standardních prostředků dodání účinné látky na místo působení.

Správná dávka sloučenin se liší podle konkrétního přípravku, způsobu aplikace, konkrétního stavu nemocného a nádoru, který je potřeba léčit. Jiné faktory, jako například věk, tělesná hmotnost, pohlaví, dieta, doba podávání, poměr vylučování aktivní látky, stav pacienta, kombinace léků, citlivost na podávané látky a závažnost onemocnění se musí rovněž zohlednit. Podávání může probíhat kontinuálně nebo periodicky s maximální tolerovatelnou dávkou.

Sloučeniny a přípravky předkládaného vynálezu mohou být použity v kombinaci s jinými léky ve formě kombinované terapie. Jiné léky mohou být součástí stejného přípravku, nebo můžou být podávány jako samostatný přípravek současně nebo s časovým odstupem. Jiné léky nejsou nijak speciálně omezeny a vhodnými kandidáty jsou:

a) léky s antimitotickým účinkem, především ty, které jsou založené proti cytoskeletu buňky, zahrnující modulátory mikrotubulů, jako například taxanové látky (taxol, paklitaxel, taxoter, docetaxel), podoíylotoxiny nebo vinca alkaloidy (vincristin, vinblastin);

b) antimetabolity, jako například 5-fluoruracil, cytarabin, gemcitabin, purinová analoga (jako například pentostatin, methotrexát);

b) alkylující látky jako například cyklofosfamid nebo ifosfamid;

c) látky, kterých cílem je DNA, jako například antracykliny adriamycin, doxorubicin, farmorubicin nebo epirubicin;

d) látky, kterých cílem je topoizomeráza jako například etoposid;

e) hormony nebo antagonisté hormonů jako například estrogeny, antiestrogeny (tamoxifen a příbuzné sloučeniny) a androgeny, flutamid, leuprorelin, goserelin, cyprotron nebo octreotid;

-36CZ 303536 B6

f) látky, kterých cílem je přenos signálů v maligní buňce, zahrnující deriváty protilátek jako například herceptin;

g) alkylující látky jako například deriváty platiny (cis-platina, karbonplatina, oxaliplatina, paraplatina) nebo nítrosourea;

h) látky potenciálně ovlivňující metastázy tumorů jako například inhibitory matrixových metaloproteáz;

i) genová terapie a antisense-látky;

j) protilátková terapie;

k) jiné bioaktivní sloučeniny mořského původu, hlavně dideminy jako například aplidin;

1) stero idní analoga, konkrétně dexamethason;

m) antiemetické látky, konkrétně dexamethason.

Předkládaný vynález se týká rovněž sloučenin vynálezu použitelných v metodice léčby a použití sloučenin při přípravě přípravků pro léčbu rakoviny.

Cytotoxická aktivita Buněčné kultury.

Buňky byly udržovány v logaritmické fázi růstu v EMEM (Eagle's Minimum Essential Medium) s EBS (Earle's Balanced Salts), s 2mM L-glutaminem, neesenciálními aminokyselinami, bez bikarbonátu sodného (EMEM/neaa).

Médium bylo doplněno o 10% fetální telecí sérum /FCS/, 10-2 M bikarbonát sodný a 0,1 g/l penicilin-G a streptomycin sulfát.

Pomocí jednoduché modifikované metody (Bergeron et al., 1984) byla testována a srovnávána protinádorová aktivita sloučenin. V experimentech byly použity tyto linie: P-388 (suspenzní kultura maligních lymfoidních buněk pocházejících z DBA/2 myši), A-549 (kultura lidského plicního karcinomu rostoucí v jedné vrstvě), HT-29 (lidská kultura karcinomu střeva rostoucí v jedné vrstvě) a MEL-28 (lidská kultura maligního melanomu rostoucí v jedné vrstvě).

P-388 byly vysety do 16 mm komůrek s hustotou lxlO⁴ buněk na jednu komůrku v 1 ml MEM 5 FCS média, které obsahovalo přesnou koncentraci testované látky. Pro kontrolu exponenciálního růstu buněk byly odděleně vysety stejné buňky, rostoucí ovšem v médiu bez přídavku testo35 vaně látky. Všechny experimenty byly provedeny v duplikátu. Po třech dnech inkubace při 37 °C, 10% CO₂ ve vlhké atmosféře (98 %) byly komůrky nabarveny 0,1% krystalovou violetí. Přibližná IC50 byla stanovena srovnáním růstu buněk v komůrkách s testovanou látkou s buňkami v komůrkách rostoucích bez přítomnosti testované látky.

1. Raymond J. Bergeron, Paul F. Cavanaugh, Jr., Steven J. Kline: Robert G. Hughes, Jr., Gary T.

Elliot a Carl W. Porter. Antineoplastic and antiherpetic activity of spermidine catecholamide iron chelators. Biochem. Bioph. Res. Comm. 1984, 121 (3), 848-854

2. Alan C. Schoeder, Robert G. Hughes, Jr. a Alexander Bloch. Effects of Acyclíc Pyrimidine Nucleoside Analoges. J. Med. Chem. 1981,24, 1078-1083

-37CZ 303536 B6

Cytotoxická aktivita

Sloučenina	ICsoOíM)
	P-388	A-549	HT-29	MEL-28	CV-1	DU-145
OMi o Γ Sm BM V 2	0,009	0,018	0,018	0,018	0,023
OHl 'V” *^u	0,15	>0,15	0,15	>0,15
¹ i“· ^e T 15	1,44	1,44	1,44	1,44
X>E “i 1«	>1,5	>1^	>1,5	>1,⁵
t-·· 'ÝčKyli.	b⁴	l,⁴	l,⁴	V
s ₀ L ig	0,01	0,01	0,01	0,01
A“ 19	0,08	0,16	0,01	0,16

-38CZ 303536 B6

A 20	0,01	0,01	0,01	opi
	0,019	0,019	0,019	0,019
22	0,014	0,014	0,014	0ρΐ4	0,014	0,014
W* <Λ-°^ 23	0,13	0,13	0,13	0,13	0,13	0,13
'_v ° X^rÝ W\	0,18	1,8	1,8	1,8	1,8	1,8
\jtó~ 25	ομ	0,2	0,2	ομ		ομ
*** r-τ sťWr *UK 35	0,008	0,008	0,008	0,008
-5--- 36	0,01	0,01	0,01	ορι
Υ/* O 28	0,001	0,001	οροί	0,001	0,001	0,001
⁶^Χ^* °% _α f- ^^42	0,13	0,13	0,13	0,13		0,13

-39CZ 303536 B6

•#ř? A- 43	0,008	0,016	0,008	0,008		0,016
44	0/X)l	0,001	0,001	0,001		0,001
	0,01	0,01	0,01	0/H		0,01
R*^emy4,_o 3	0,015	0,015	0,015	0,015	0,018
:%$<	2,171	2,171	2,171	2,171	2,171
A 5	0/)05	0,005	0/)05	0/K)5
Z 7	0,22	0,22	0,22	0,22	0,22
*sX> t/C £	>9	>18,1	>18,1	>18,1	>18,1

-40 CZ 303536 B6

---35- «Λ- 9	>1,77	>1,77	>1,77	>1,77	>1,77
•y<ř <A 10	>1,65	>1,65	>1,65	>1,65	>1,65
A 46	0/)16	0,016	0,016	0,016	0,016
Λ 47	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001
48	0,0008	0,001	0,0008	0,0008	0,001
^eS^v“ ow JT JT &&r A“ 44	0,007	0,007	0,007	0,007	0,007
A? ^'so	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001
-sT Λ- /r ₅₁	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001
A? >•4 «V- •^XCsz	0,001	0,001	οροί	0/)01	0,001

-41 CZ 303536 B6

--“SE- ** * o 53	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001
* ť“ i&r „Zs-yf. *·» o 54	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001
-ŮM· ·*· β 55	0,01	0,01	0,01	0,01	0,01
!** ^r se	0,18	0,9	0,18		0,9
*? -57	0,14	0,14	0,14	0,14	0,14
-3-- %.© ° v * 58	0,001	0,001	0,001	0,001	0,001
Ote Kk^k-Mt ©AC J2 Y ζ£ι2ί>~ *k~o HM 0 « 60	0,001	0/ΧΠ	0,0005	0/ΧΠ	0,0005
Ote MOsJ^lte Oc 3Σ J ‘χςν^ v-o Λ CH o*ez, 61	0/)01	0,001	0/XH	0,001	0,001
rt\Jy* ©< JL Y ^&v^2>Y é« » _u 62	0,001	O/XH	0,0005	0,0005	0,001

-42 CZ 303536 B6

v-o 1 i* WI ^63	0,0001	0,0001	0/)001	0,0001	0,0001
O · ČM w ° 64	0/)01	0/)01	0/001	O/XH	0,001
CM o T T i CN w« 65	0/)001	0,0005	0/)001	0,0001	0/)005
OM* OAt jC T ώοό^* 6 OO	0/)001	0,0001	0/ΧΧΠ	o/xxn	0,0001
CA CMC ΐ w oV-Y* o 67	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001	0,0001

Z těchto údajů je možné vidět, že aktivní sloučeniny předkládaného vynálezu zahrnuje zajímavou třídu sloučenin obecného vzorece XXIII

kde R¹ je jak bylo definováno výše pro obecný vzorec XVIIb a je s výhodou středně velká derivatizovaná aminomethylenová skupina

R⁵ je jak bylo definováno výše pro obecný vzorec XVIIb a je s výhodou menší derivatizovaná hydroxy skupina

R^t2 je jako uvedeno výše, a je s výhodou -CH₃ a

R²¹ je hydroxy nebo kyano skupina.

R¹ je s výhodou hydrofobní skupina, která tudíž nemá volnou amino, hydroxy nebo jinou hydrofilní funkční skupinu. R¹ je typicky skupina -CH2-NH₂-CO-R^a, kde R^a je jak bylo uvedeno, s výhodou má ovšem lineární řetězec kratší než 20 atomů, ještě výhodněji méně než 15 nebo 10

-43 CZ 303536 B6 atomů, kde 1,4-fenyl se počítá jako řetězec o délce 4 atomů a podobně je to i s jinými cyklickými skupinami (například 1,2-cyklohexyl je řetězec dlouhý 2 atomy). Lineární řetězec kratší než 10, 15 nebo 20 atomů může být nahrazen. Podle těchto údajů je potřeba najít rovnováhu mezi sloučeninou, nenesoucí žádnou skupinu R^a-CG- a sloučeninou nesoucí objemnou skupinu.

V jedné modifikace se upřednostňuje R¹ bez cyklických skupin, hlavně bez skupin aromatických.

V příbuzné variantě není předkládaný vynález zaměřen na přípravu sloučenin popsaných v článku Proč. Nati. Acad. Sci USA, 96, 3 496-3 501, 1999, který se nachází v citované literatuře. Naše s výhodou používané skupiny R¹ nezahrnují odpovídající substituenty CH₂R₂, nachá10 zející se v tabulce 1 citovaného článku, obzvlášť skupiny A, B, C a D pro R₂.

R⁵ je s výhodou acetyloxy skupina.

V mimořádně důležitých sloučeninách je skupina R¹ acetyl ováná na -NH₂ skupině a například 15 N-acyl deriváty je možné připravit ze skupin -CN₂NH₂ a -CH₂-NH-aa. Acylové deriváty jsou jejich N-acyl ové nebo N-thioacylové deriváty, Acylová skupina má obecný vzorec -CO-R³, kde R^a je vybrán tak, aby splňoval uvedená kriteria. Vhodné acyl skupiny zahrnují alanyl, arginyl, aspartyl, aspargyl, cystyl, glutamyl, glutaminyl, glycyl, histidyl, hydroxypropyl, isoleucyl, leucyl, lysyl, methionyl, fenylalanyl, prolyl, seiyl, threonyl, tyronyl, tryptofyl, tyrosyl, valyl, jako i jiné aminokyselinové zbytky. Tyto aminokyselinové zbytky jsou s výhodou derivatizované na amino skupině, čímž sloučenině dodávají hydrofobicitu.

V jedné modifikaci je R¹ derivatizovaná hydroxy methylenová skupina. Podobné je to s derivatizovanou aminomethylenovou skupinou.

S ohledem na zmíněné aktivní sloučeniny, předkládaný patent zahrnuje tento proces:

kde skupina R⁵ ve výsledném produktu je stejná jako pro sloučeninu XXII a může se lišit ve výchozí sloučenině a být konvertována v nijako součást procesu,

R¹⁸ je hydroxy skupina ve výsledném produktu, ale může být chráněnou hydroxy skupinou ve výchozí sloučenině a konvertována v nijako součást procesu,

R¹² skupina ve výchozí sloučenině je stejná jako ve výsledném produktu, neboje v ní přeměněna jako součást procesu,

R²¹ ve výsledném produktu je jak již bylo uvedeno a v případě, že hydroxy skupina je tvořena z kyano skupiny jako součást procesu,

R^a je jak už bylo uvedeno a je acyl ován a jako součást procesu za vzniku konečného produktu nesoucího acylovanou R^a skupinu.

R⁵ je ve výchozí sloučenině s výhodou acetyloxy nebo jiná malá acyloxy skupina a v průběhu reakce se nemění. R¹⁸ je ve výchozí sloučenině s výhodou hydroxy skupina a v průběhu reakce se nemění. R²¹ ve výsledném produktu je jak již bylo uvedeno a hydroxy skupina je tvořena z kyano

-44CZ 303536 B6 skupiny jako součást procesu. R^a se nachází ve výsledném produktu a je definován ve vztahu ke sloučenině obecného vzorce XXXIII.

Jiná důležitá metoda předkládaného vynálezu zahrnuje reakci:

OMe

Jiná důležitá metoda předkládaného vynálezu zahrnuje reakci, kde R¹, představující aminomethylen se přeměňuje v hydroxy methy lenovou skupinu.

Jiná důležitá metoda předkládaného vynálezu zahrnuje reakci, kde sloučenina nesoucí skupinu

R¹, představující hydroxymethylen reaguje se sloučeninou obecného vzorce XIX

Prot

3/'

(XIX), kde Fu představuje chráněnou funkční skupinu, Prot3 je chránící skupina a tečkovaná čára představuje případnou dvojnou vazbu.

Jiná důležitá metoda předkládaného vynálezu zahrnuje reakci pro přípravu 21-kyano sloučeniny obecného vzorce XVI, která zahrnuje reakci sloučeniny obecného vzorce XV

(XV), kde R¹, R⁵, R^14a, R^I4b, R^{i5 *} a R¹⁸ byly již definovány a R²¹ je hydroxy skupina, se zdrojem kyanidového iontu za vzniku 21-kyano sloučeniny.

-45 CZ 303536 B6

Je možné využít i procesů, které využívají sloučeniny obsahující nukleofil pro přípravu podobných sloučenin obecného vzorce XVI, ve kterých poloha 21 je chráněna jinou nukleofilní skupinou (21-Nuc skupinou). Například 2l-Nuc sloučenina obecného vzorce XVI s alkylamino sub5 stituentem v poloze 21 se připraví reakcí sloučeniny obecného vzorce XV, kde R²¹ je hydroxy skupina, s vhodným alkylaminem. 21-Nuc sloučenina obecného vzorce XVI s alkylthio substituentem v poloze 21 se připraví reakcí sloučeniny obecného vzorce XV, kde R²¹ je hydroxy skupina, s vhodným alkanthiolem. Případně, 21-Nuc sloučenina obecného vzorce XVI s a-karbonylalkylem jako substituentem v poloze 21 se připraví reakcí sloučeniny obecného vzorce XV, kde R²¹ je hydroxy skupina, s vhodnou karbonylovou sloučeninou, typicky za přítomnosti zásady. Pro přípravu jiných 21-Nuc sloučenin je možné použít i alternativní způsoby.

Jiná důležitá reakce předkládaného vynálezu zahrnuje reakci 21-kyano produktu předkládaného vynálezu, ve které vzniká 21-hydroxy sloučenina. Tyto sloučeniny mají zajímavé in vivo vlast15 nosti.

Příklady provedení předkládaného vynálezu

K roztoku 2 (21,53 g, 39,17 mmolu) v ethanolu (200 ml) byl přidán Zerc-butoxykarbonyl anhydrid (7,7 g, 35,25 mmolu) a směs byla míchána 7 h pri teplotě 23 °C. Poté byla reakce koncentrována in vacuo a zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO₂, hexanrethylacetát 6:4) za vzniku 14 (20,6 g, 81 %) jako žluté pevné látky.

Rf: 0,52 (ethylacetát: CHCb 5:2).

’H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,49 (s, IH), 6,32 (bs, IH), 5,26 (bs, IH), 4,60 (bs, IH), 4,14 (d, J= 2,4 Hz, IH), 4,05 (d, .7= 2,4 Hz, IH), 3,94 (s, 3H), 3,81 (d, J= 4,8 Hz, IH), 3,7 (s, 3H), 3,34 (brd, V- 7,2 Hz, IH), 3,18-3,00 (m, 5H), 2,44 (d, .7 = 18,3 Hz, IH), 2,29 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 1,82 (s,3H), 1,80-1,65 (m, 1H), 1,48 (s, 9H), 0,86 (d,.7= 5,7 Hz, 3H) ^l3C NMR (75 MHz, CDCb): δ 185,5, 180,8, 172,7, 155,9, 154,5, 147,3, 143,3, 141,5, 135,3,

130,4, 129,2, 127,5, 120,2, 117,4, 116,9, 80,2, 60,7, 60,3, 58,5, 55,9, 55,8, 54,9, 54,4, 50,0, 41,6, 40,3,28,0,25,3,24,0, 18,1, 15,6, 8,5.

ESI-MS m/z počítáno pro CuHj-MOs: 649,7. Zjištěno (M+H)⁺: 650,3

-46CZ 303536 B6

Příklad 2

(14) («)

Za stálého míchání roztoku 14 (20,6 g, 31,75 mmol) vCH₃CN (159 ml) při 0 °C byl přidán diisopropylethylamin (82,96 ml, 476,2 mmol), methoxymethylenbromid (25,9 ml, 317,5 mmol) a dimethylaminopyridin (155 mg, 1,27 mmol). Směs byla míchána při 23 °C 24 h. Reakce byla ukončena při 0 °C pomocí vodného roztoku O,1M HCI (750 ml) (pH=5), a extrahována CH2CI2 (2x 400 ml). Organická fáze byla usušena (síran sodný) a zakoncentrovaná in vacuo. Zbytek byt purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO₂, gradient hexan: ethyl acetát 4 : 1 až hexamethylacetát 3:2) za vzniku 15 (17,6 g, 83 %) ve formě žluté pevné látky.

Rf: 0,38 (hexan:ethylacetát 3:7).

*H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,73 (s, 1H), 5,35 (bs, 1H), 5,13 (s, 2H), 4,50 (bs, 1H), 4,25 (d, 15 J= 2,7 Hz, 1H), 4,03 (d, 2,7 Hz, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,84 (bs, 1H), 3,82 -3,65 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,56 (s, 3H), 3,39 - 3,37 (m, 1H), 3,20-3,00 (m, 5H), 2,46 (d, J= 18 Hz, 1), 2,33 (s, 3H), 2,23 (s,3H), 1,85 (s, 3H), 1,75- 1,63 (m, 1H), l,29(s,9H), 0,93 (d, 7-5,1 Hz, 3H) ^t3C NMR (75 MHz, CDCf): δ 185,4, 180,9, 172,4, 155,9, 154,4, 149,0, 148,4, 141,6 , 135,1, 131,0, 129,9, 127,6, 124,4, 123,7, 117,3, 99,1, 79,3, 60,7, 59,7, 58,4, 57,5, 56,2, 55,9, 55,0, 54,2,

50,0, 41,5, 39,9, 28,0, 25,2, 24,0, 18,1, 15,6, 8,5.

ESI-MS m/z: počítáno pro C₃₆H₄7N₅O₉: 693,8. Zjištěno (M+H)⁺: 694,3

Do nádoby obsahující 15 (8 g, 11,5 mmol) v methanolu (1,6 1) byl při teplotě 0 °C přidán vodný 30 roztok 1M hydroxidu sodného (3,2 1). Reakce byla 2 h míchána při teplotě 0°Ca poté nastavena

-47CZ 303536 B6

6M HCl na pH=5. Směs byla extrahována ethylacetátem (3x 1 1) a smíchané organické vrstvy byly usušeny (síran sodný) a zakoncentrovány in vacuo. Zbytek byl purifíkován pomocí sloupcové chromatografie (SiO₂, gradient CHC1₃ k CHC1₃: ethylacetát 2:1) za vzniku 16 (5,3 mg, 68 %).

Rf: 0,48 (CH₃CN:H₂O 7:3, RP-C18)

Ή NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,73 (s, IH), 5,43 (bs, IH), 5,16 (s, 2H), 4,54 (bs, IH), 4,26 (d, J- 1,8 Hz, 1H), 4,04 (d, J= 2,7 Hz, IH), 3,84 (bs, IH), 3,80 - 3,64 (m, 1H), 3,58 (s, 3H), 3,41 3,39 (m, IH), 3,22 -3,06 (m, 5H), 2,49 (d, 18,6 Hz, IH), 2,35 (s, 3H), 2,30-2,25 (m, IH),

2,24 (s, 3H), 1,87 (s, 3H), 1,45 - 1,33 (m, 1 Η), 1,19 (s, 9H), 1,00 (br d, J = 6,6 Hz, 3H) ¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 184,9, 180,9, 172,6, 154,7, 151,3, 149,1, 148,6, 144,7 , 132,9,

131,3, 129,8, 124,5, 123,7, 117,3, 116,8, 99,1, 79,4, 59,8, 58,6, 57,7, 56,2, 55,6, 54,9, 54,5, 50,1,

41,6, 40,1,28,0, 25,3, 24,4, 18,1, 15,7, 8,0.

ESI-MS m/z: počítáno pro C₃₅H4₅N₅O9: 679,7. Zjištěno (M+H)⁺: 680,3

Příklad 4

Kodplyněnému roztoku sloučeniny 16 (1,8 g, 2,64 mmol) v DMF (221 ml) bylo přidáno 10% Pd/C (360 mg) a roztok byl míchán ve vodíkové atmosféře (atmosférický tlak) 45 min. Reakce byla přefiltrována přes celit v argonové atmosféře do nádoby obsahující bezvodý Cs₂CO₃ (2,58 g, 7,92 mmol). Poté byl přidán bromchlormethan (3,40 ml, 52,8 mmol). Nádoba s reakční směsí byla uzavřena a směs byla míchána při 100 °C 2 h. Reakce byla zchlazena, filtrována přes vrstvu celitu a promyta CH₂C1₂. Organická vrstva byla zakoncentrována a vysušena (síran sodný) za vzniku 17 ve formě hnědé olejovité látky, která byla použita v dalším kroku bez jakékoliv purifikace.

Rf: 0,36 (hexan:ethylacetát 1:5, SiO₂).

^lH NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,68 (s, IH), 6,05 (bs, IH), 5,90 (s, IH), 5,79 (s, IH), 5,40 (bs, IH), 5,31 -5,24(m, 2H), 4,67 (d, J= 8,1 Hz, IH), 4,193 (d,J=2,7 Hz, 1H),4,O7 (bs, IH), 4,01 (bs, IH), 3,70 (s, 3H), 3,67 (s, 3H), 3,64 - 2,96 (tn, 5H), 2,65 (d, ./= 18,3 Hz, IH), 2,33 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 2,01 - 1,95 (m, IH), 1,28 (s, 9H), 0,87 (d, J= 6,3 Hz, 3H) ^HC' NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 172,1, 162,6, 154,9, 149,1, 145,7, 135,9, 130,8, 130,7, 125,1, 123,1, 117,8, 100,8, 99,8, 76,6, 59,8, 59,2, 57,7, 57,0, 56,7, 55,8, 55,2, 49,5, 41,6, 40,1, 36,5,

31,9,31,6, 29,7, 28,2, 26,3,25,0, 22,6, 18,2, 15,8, 14,1,8,8.

ESI-MS m/z: počítáno pro C₃₆H47N₅O₉: 693,34. Zjištěno (M+H)⁺: 694,3

-48CZ 303536 B6

Příklad 5

<”> (18)

Do nádoby obsahující roztok 17 (1,83 g, 2,65 mmol) v DMF (13 ml), byl přidán Cs₂CO₃ (2,6 g, 7,97 mmol) a allylbromid (1,15 ml, 13,28 mmol) při teplotě 0°C. Výsledná směs byla míchána při 23 °C lh. Reakční směs byla filtrována přes vrstvu celitu a promyta CH₂C1₂. Organická vrstva byla vysušena a zakoncentrována (síran sodný). Zbytek byl purifikován sloupcovou chromato10 grafií (SiO₂, CHCf:ethylacetát 1:4) za vzniku 18 (1,08 mg, 56 %) ve formě bílé pevné látky.

Rf: 0,36 (CHCl₃:ethylacetát 1:3).

’HNMR(300 MHz, CDC1₃): S 6,70 (s, 1H), 6,27 -6,02 (m, 1H), 5,94 (s, 1H), 5,83 (s, 1H), 5,37 (dd, 7/ = 1,01 Hz. 7,- 16,8 Hz, 1H), 5,40 (bs, 1H), 5,25 (dd,7/ = 1,0 Hz, J₂= 10,5 Hz, 1H), 5,10 (s, 2H), 4,91 (bs, 1H), 4,25-4,22 (m, 1H),4,21 (d, 7= 2,4 Hz, 1H), 4,14 - 4,10 (m, lH),4,08(d,

7= 2,4 Hz, 1H), 4,00 (bs, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,59 (s, 3H), 3,56 - 3,35 (m, 2H), 3,26 - 3,20 (m, 211),3,05 -2.96 (dd, 7/ = 8.1 Hz,7₂= 18 Hz, 1H), 2,63 (d,7 = 18 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,09 (s, 3H), 1,91 - 1,80 (m, 1H), 1,24 (s, 9H), 0,94 (d,7= 6,6 Hz, 3H) ¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 172,0, 154,8, 148,8, 148,6, 148,4, 144,4, 138,8, 133,7, 130,9,

130,3, 125,1, 124,0, 120,9, 117,8, 117,4, 112,8, 112,6, 101,1, 99,2, 73,9, 59,7, 59,3, 57,7, 56,9,

56,8, 56,2, 55,2, 40,1, 34,6, 31,5, 28,1, 26,4, 25,1, 22,6, 18,5, 15,7, 14,0, 9,2.

ESI-MS m/z počítáno pro C39H51N5O9: 733,4. Zjištěno (M+H)⁺: 734,4

Příklad 6

-49CZ 303536 B6

K roztoku 18 (0,1 g, 0,137 mmol) v dioxanu (2 ml) byl přidán 4,2M HCl/dioxan (1,46 ml) a směs byla míchána při 23 °C 1,2 h. Reakce byla zastavena při 0 °C pomocí nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (60 ml) a extrahovaná ethylacetátem (2x 70 ml). Organické vrstvy byly spojeny a vysušeny (síran sodný) a zakoncentrovány in vacuo za vzniku 19 (267 mg,

95 %) ve formě bílé pevné látky, která byla v dalších reakcích použita bez jakékoliv purifikace.

Rf: 0,17 (ethylacetát; methanol 10:1, SiO₂) *HNMR (300 MHz, CDCl-0: δ 6,49 (s, IH), 6,12 -6,00 (m, IH), 5,94 (s, IH), 5,86 (s, IH), 5,34 (dd, J= 1,0 Hz, J= 17,4 Hz, IH), 5,25 (dd, 7= 1,0 Hz, J= 10,2 Hz, IH), 4,18 - 3,76 (m, 5H), 3,74 (s, 3H), 3,71 - 3,59 (m, IH), 3,36 - 3,20 (m, 4H), 3,01 - 2,90 (m, IH), 2,60 (d, 7= 18,0 Hz, IH), 2,29 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,97 - 1,86 (m, IH), 0,93 (d, J= Β,Ί Hz, 3H) ¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 175,5, 148,4, 146,7, 144,4, 142,4, 138,9, 133,7, 131,3, 128,3,

120,8, 117,9, 117,4, 113,8, 112,4, 101,1,74,2, 60,5, 59,1,56,5, 56,1 56,3, 56,0, 55,0, 50,5, 41,6, 39,5, 29,5, 26,4, 24,9, 21,1, 15,5, 9,33.

ESI-MS m/z počítáno pro C32H39N5O6: 589. Zjištěno (M+H)⁺: 590

Příklad 7

K roztoku 19 (250 mg, 0,42 mmol) vCH₂Cl₂ (1,5 ml) byl přidán fenylisothiokyanát (0,3 ml, 2,51 mmol) a směs byla míchána při 23 °C 1 h. Reakční směs byla zakoncentrována in vacuo a zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO₂, gradient hexan až 5 : 1 hexan:ethylacetát) za vzniku 20 (270 mg, 87 %) ve formě bílé pevné látky.

Rf: 0,56 (CHCl₃:ethy1acetát 1:4) ’H NMR (300 MHz, CDCf): δ 8,00 (bs, IH), 7,45 - 6,97 (m, 4H), 6,10 (s, IH), 6,08 -6,00 (m, lH),5,92(s, IH), 5,89 (s, IH), 5,82 (s, IH), 5,40 (dd, 7= 1,5 Hz, 7- 17,1 Hz, lH),3,38(bs,

IH), 5,23 (dd, 7 = 1,5 Hz, 7 = 10,5 Hz, IH), 4,42 -4,36 (m, IH), 4,19-4,03 (m, 5H), 3,71 (s, 3H), 3,68 - 3,17 (m, 4H), 2,90 (dd,7=7,8 Hz, 7- 18,3 Hz, IH), 2,57 (d, 7- 18,3 Hz, IH), 2,25 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,90 (dd,7= 12,3 Hz, 7= 16,5 Ηζ,ΙΗ), 0,81 (d,7=6,9 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 178,4, 171,6, 148,6, 146,8, 144,3, 142,7, 138,7, 136,2, 133,6,

130,7, 129,8, 126,6, 124,2, 124,1, 120,9, 120,5, 117,7, 117,4, 116,7, 112,6, 112,5, 101,0, 74,0,

60,6, 59,0, 57,0, 56,2, 56,1,55,0, 53,3, 41,4, 39,7, 26,3, 24,8, 18,3, 15,5, 9,2.

ESI-MS m/z počítáno pro C₃₉H₄₄N₆O₆S: 724,8. Zjištěno (M+Hý: 725,3 40

-50CZ 303536 B6

Příklad 8

Me (20)

(21)

K roztoku 20 (270 mg, 0,37 mmol) v dioxanu (l ml) byl přidán 4,2M CCl/dioxan (3,5 ml) a reakční směs byla míchána při 23 °C 30 min. Poté byl přidán ethylacetát (20 ml) a H₂O (20 ml) a organická vrstva byla zcentri fugo vána. Vodná báze byla bazifi kována pomocí saturovaného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (60 ml) (pH=8) při 0 °C a poté extrahována CH₂Cl₂(2x 50 ml). Organické extrakty byly spojeny a vysušeny (síran sodný) a zakoncentrovány in io vacuo. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO₂, ethylacetát:methanol) za vzniku sloučeniny 21 (158 mg, 82 %) ve formě bílé pevné látky.

Rf: 0,3 (ethylacetát:methanol 1:1).

‘HNMR (300 MHz, CDCh): δ 6,45 (s, IH), 6,12-6,03 (m, IH), 5,91 (s, IH), 5,85 (s, IH), 5,38 15 (dd, Ji = 1,2 Hz, J₂ = 17,1 Hz, 1H), 5,24 (dd, J, = 1,2 Hz, J₂ = 10,5 Hz, IH), 4,23 - 4,09 (m, 4H),

3,98 (d, J= 2,1 Hz, IH), 3,90 (bs, IH), 3,72 (s, 3H), 3,36-3,02 (m, 5H), 2,72 - 2,71 (m, 2H), 2,48 (d, J= 18,0 Hz, IH), 2,33 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,85 (dd, Λ = 11,7 Hz, J₂ = 15,6 Hz, IH).

^I3C NMR (75 MHz, CDCh): δ 148,4, 146,7, 144,4, 142,8, 138,8, 133,8, 130,5, 128,8, 121,5, 20 120,8, 118,0, 117,5, 116,9, 113,6, 112,2, 101,1, 74,3, 60,7, 59,9, 58,8, 56,6, 56,5, 55,3, 44,2,

41,8, 29,7, 26,5,25,7, 15,7, 9,4.

ESI-MS m/z počítáno pro Cs^N^: 518,3. Zjištěno (M+H)⁺: 519,2

Příklad 9

K roztoku 21 (0,64 g, 1,22 mmol) v CH₂C1₂ (6,13 ml) byl přidán pyridin (0,104 ml, 1,28 mmol) a 2,2,2-trichlorethylchlorformiát (0,177 ml, 1,28 mmol) při teplotě -10 °C. Reakční směs byla míchána při této teplotě 1 h, a poté byla reakce zastavena přidáním 0,lM HCI (10 ml) a extrahována CH₂C1₂ (2x 10 ml). Organická vrstva byla vysušena (síran sodný) a zakoncentrována in

-51 CZ 303536 B6 vacuo. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografíe (SiO₂, hexan:ethylacetát 1:2) za vzniku 22 (0,84 g, 98 %) ve formě bílé pěnovité pevné látky.

Rf; 0,57 (ethylacetát.methanol 5:1).

^lH NMR (300 MHz, CDCh): δ 6,50 (s, IH), 6,10-6,00 (m, IH), 6,94 (d, J= 1,5 Hz, IH), 5,87 (d, J= 1,5 Hz, IH), 5,73 (bs, IH), 5,37 (dq, = 1,5 Hz, J₂ = 17,1 Hz, IH), 5,26 (dq, J, = 1,8 Hz, J₂ = 10,2 Hz, IH), 4,60 (d, J= 12 Hz„ IH), 4,22 - 4,10 (m, 4H), 4,19 (d, 7= 12 Hz, IH), 4,02 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,37 - 3,18 (m, 5H), 3,04 (dd, J_} = 8,1 Hz, J₂ = 18 Hz, IH), 2,63 (d, 7= 18 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,85 (dd, 7/ = 12,3 Hz, J₂ = 15,9 Hz, IH). ¹³C NMR (75 MHz, CDCh): δ 154,3, 14á,5, 146,7, 144,5, 142,8, 139,0, 133,8, 130,7, 128,7,

121,3, 120,8, 117,8, 117,7, 116,8, 112,7, 101,2, 77,2, 74,3, 60,7, 59,9, 57,0, 56,4, 55,3, 43,3,

41,7,31,6, 26,4, 25,3,22,6, 15,9, 14,1,9,4.

ESI-MS m/z počítáno pro C32H35CI3N4O7: 694,17. Zjištěno (M+H)⁺: 695,2

Příklad 10

Me

K roztoku 22 (0,32 g, 0,46 mmol) v CH₃CN (2,33 ml) byl přidán diisopropylethy lamin (1,62 ml, 9,34 mmol), brommethylmethylether (0,57 ml, 7,0 mmol) a dimethylaminopyridin (6 mg, 0,046 mmol) pri teplotě 0 °C. Reakční směs byla zahřívána pri 30 ^PC 10 h. Poté byla reakční směs naředěna dichlormethanem (30 ml) a přidána do vodného roztoku HCl, pH 5 (10 ml). Organická vrstva byla vysušena (síran sodný) a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem za vzniku zbytku, který byl purifikován pomocí sloupcové chromatografíe (SiO₂, hexan:ethylacetát 2 : 1) za vzniku 23 (0,304 g, 88 %) ve formě bílé pěnovité pevné látky.

Rf: 0,62 (hexan:ethylacetát 1 : 3).

^!H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,73 (s, IH), 6,10 (m, 1H), 5,94 (d, 7= 1,5 Hz, IH), 5,88 (d, 7 =

1,5 Hz, IH), 5,39 (dq, 7_; = 1,5 Hz, J₂ = 17,1 Hz, IH), 5,26 (dq, 7/ = 1,8 Hz, J₂ - 10,2 Hz, IH), 5,12 (s,2H), 4,61 (d,7= 12Hz, lh), 4,55 (t, 7= 6,6 Hz, IH), 4,25 (d,7= 12Hz, IH), 4,22 - 4,11 (m, 4H), 4,03 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,38 - 3,21 (m, 5H), 3,05 (dd, 7/-8,1 Hz, J₂ = 18 Hz, IH), 2,65 (d,7= 18,0 Hz, IH), 2,32 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,12 (s,3H), 1,79 (dd,7/= 12,3

Hz, 7, - 15,9 Hz, IH);

^l3C NMR (75 MHz, CDCh): δ 154,3, 148,6, 148,4, 144,5, 139,0, 133,6, 130,6, 130,1, 125,07, 124,7, 124,0, 121,1, 117,7, 112,6, 101,2, 99,2, 77,2, 74,4, 74,1, 59,8, 59,8, 57,7, 57,0, 56,8, 56,68, 55,3, 43,2, 41,5, 26,4, 25,2, 15,9, 9,3.

ESI-MS m/z počítáno pro C34H39CI3N4O8: 738,2. Zjištěno (M+H)⁺: 739,0

-52CZ 303536 B6

Příklad 11

K suspenzi 23 (0,304 g, 0,41 mmol) v 90% vodném roztoku kyseliny octové (4 ml) byl přidán zinkový prášek (0,2 g, 6,67 mmol) a reakční směs byla míchána při 23 °C 7 h. Směs byla filtrována přes vrstvu cel i tu, která byla pomyta CH₂C1₂. Organická vrstva byla promyta saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (pH 9) (15 ml) a vysušena (síran sodný). Rozpouštědlo bylo odpařeno podtlakem za vzniku 24 (0,191 g, 83 %) ve formě bílé pevné látky.

Rf: 0,3 (ethylacetát:methanol 5:1).

*H NMR (300 MHz, CDCfi): δ 6,68 (s, 1H), 6,09 (m, 1H), 5,90 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 5,83 (d, 7 =

1,5 Hz, 1H), 5,39 (dq, 7y = 1,5 Hz, Λ = 17,1 Hz, 1H), 5,25 (dq, J_t = 1,5 Hz, J₂ = 10,2 Hz, 1H), 5,10 (s, 2H), 4,22 - 4,09 (m, 3H), 3,98 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 3,89 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,57 (s, 3H), 3,37 - 3,17 (m, 3H), 3,07 (dd, J, = 8,1 Hz, J₂ = 18 Hz, 1H), 2,71 (m, 2H), 2,48 (d, 7 = 18 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,19 (s, 3 H), 2,17 (s, 3H), 1,80 (dd, 7/- 12,3 Hz,7₂= 15,9 Hz, 1H) ¹³C NMR (75 MHz, CDCfi): δ 148,5, 148,2, 144,3, 138,7, 133,7, 130,7, 129,9, 125,0, 123,9,

121,3, 117,9, 117,5, 113,6, 112,0, 101,0, 99,2, 74,0, 59,8, 59,7, 58,8, 57,6, 57,0, 56,2, 55,2, 44,2,

41,5,31,5,26,4, 25,6, 22,5, 16,7, 14,0,9,2.

ESI-MS m/z počítáno pro ^|Η₃₈Ν4θ₆: 562,66. Zjištěno (M+H)⁺: 563,1

Příklad 12

K roztoku 24 (20 mg, 0,035 mmol) v H₂O (0,7 ml) a THF (0,7 ml) byl přidán NaNO₂ (12 mg, 0,17 mmol) a 90% vodný roztok AcOH (0,06 ml) při teplotě 0 °C a při této teplotě byla reakční směs míchána 3 h. Po naředění CH₂C1₂ (5 ml) byla organická vrstva promyta vodou (1 ml), vysušena přes síran sodný a zakoncentrovaná in vacuo. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO₂, hexan:ethylacetát 2:1) za vzniku 25 (9,8 mg, 50 %) ve formě bílé pevné látky.

Rf: 0,34 (hexan:ethylacetát 1:1).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,71 (s, 1H), 6,11 (m, 1H), 5,92 (d,7= 1,5 Hz, 1H), 5,87 (d,7 =

1,5 Hz, 1H), 5,42 (dq, 7_; = 1,5 Hz, J₂ = 17,1 Hz, 1H), 5,28 (dq, J, = 1,5 Hz, J₂ = 10,2 Hz, 1H),

-53CZ 303536 B6

5,12 (s, 2H), 4,26 - 4,09 (m, 3H), 4,05 (d, J= 2,4 Hz, IH), 3,97 (d, J= 3,0, IH), 3,70 (s, 3H), 3,67 - 3,32 (m, 4H), 3,58 (s, 3H), 3,24 (dd, J_t = 2,7 Hz, J₂ = 15,9 Hz, 1H), 3,12 (dd, J, = 8,1 Hz, J₂ = 18,0 Ηζ,ΙΗ), 2,51 (d, J= 18 Hz, IH), 2,36 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 1,83 (dd, Λ = 12,3 Hz,/2= 15,9 Hz, IH) ^l3C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 148,7, 148,4, 138,9, 133,7, 131,1, 129,4, 125,1, 123,9, 120,7,

117.6, 117,5, 113,2, 112,3, 101,1, 99,2, 74,0, 63,2, 59,8, 59,7, 57,9, 57,7, 57,0, 56,5, 55,2, 41,6,

29.6, 26,1,25,6, 22,6, 15,7, 9,2.

ESI-MS m/z počítáno pro C₃iH₃₇N₃O₇: 563,64. Zjištěno (M+H)⁺: 564,1

2,2,2-trich (orethylch (orořorm iát

NaH, THF, wflux

Výchozí sloučenina (2,0 g, 5,90 mmol) byla přidána k suspenzi hydridu sodného (354 mg, 8,86 mmol) v THF (40 ml) při teplotě 23 °C. Poté byl k suspenzi přidán allylchlorformiát (1,135 ml, 8,25 mmol) při teplotě 23 °C a tato reakce probíhala 3 h. Suspenze byla ochlazena, odfiltrována, pevná látka byla promyta ethylacetátem (100 ml) a filtrát byl zakoncentrován. Ole20 jovitý hrubý produkt byl rozetřen s hexanem (100 ml) a přes noc uložen do 4 °C. Poté bylo rozpouštědlo odcentrifugováno a ke světle žluté řídké hmotě byl přidán CH2CI2 (20 ml). Reakční směs byla precipitována hexanem (100 ml). Po 10 minutách bylo rozpouštědlo opět odcentrifugováno. Tato procedura byla opakována do té doby, až se objevila bílá pevná látka. Bílá pevná látka byla odfiltrována a vysušena za vzniku sloučeniny 29 (1,80 g, 65 %) ve formě bílé pevné látky.

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,74 (d, J= 7,5 Hz, 2H), 7,62 (d, J= 6,9 Hz, 2H), 7,33 (t, J =

7,5 Hz, 2H), 7,30 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 5,71 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,73 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 4,59 (m, 1H), 4,11 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 3,17 (dd, J = 6,0 Hz, J = 2,7 Hz, 2H), 3,20 (dd, J = 5,4 Hz, J =

2,1 Hz, 2H).

^]3C NMR (75 MHz, CDCI₃): δ 173,6, 152,7, 144,0, 139,7, 137,8, 126,0, 125,6, 123,4, 118,3,

73,4, 52,4,45,5,35,8,33,7.

ESI-MS m/z počítáno pro C₂₀Hi₈Ci₃NO₄S: 474,8. Zjištěno (M+H)^f: 497,8 35

Příklad 14

-54CZ 303536 B6

Směs sloučeniny 25 (585 mg, 1,03 mmol) a sloučeniny 29 (1,47 g, 3,11 mmol) byla azeotropována bezvodým toluenem (3x 10 ml). K roztoku 25 a 29 v bezvodém CH₂C1₂ (40 ml) byl přidán DMAP (633 mg, 5,18 mmol) a EDC.HC1 (994 mg, 5,18 mmol) při teplotě 23 °C. Reakční směs byla míchána 3 h při 23 °C. Směs byla rozdělena pomocí nasyceného vodného roztoku hydrogenuhliěítanu sodného (50 ml) a vrstvy byly odděleny. Vodná fáze byla promyta CH2CI2 (50 ml). Organické fáze byly spojeny a vysušeny přes síran sodný, filtrovány a zakoncentrovány. Hrubý produkt byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (ethylacetát/hexan 1 : 3) za vzniku 30 (1,00 g, 95 %) ve formě bledě smetanově žluté pevné látky.

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,72 (m, 2H), 7,52 (m, 2H), 7,38 (m, 2H), 7,28 (m, 2H), 6,6 (s, IH), 6,03 (m, IH), 5,92 (d, J= 1,5 Hz, IH), 5,79 (d, J= 1,5 Hz, IH), 5,39 (m, IH), 5,29 (dq, J = 10,3 Hz, J= 1,5 Hz, IH), 5,10 (s, 2H), 4,73 (d, J= 11,9 Hz, IH), 4,66 (d, J= 11,9 Hz, 1H),4,53 (m, IH), 4,36 - 3,96 (m, 9H), 3,89 (t, J= 6,4 Hz, IH), 3,71 (s, 3H), 3,55 (s, 3H), 3,33 (m, IH), 3,20 (m, 2H), 2,94 (m, 3H), 2,59 (m, IH), 2,29 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,83 (dd, 7=16,0 Hz,7= 11,9 Hz, IH).

^,3C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 169,7, 154,0, 148,8, 145,7, 144,5, 140,9, 139,0, 133,7, 130,9,

130.6, 127,6, 127,0, 124,8, 124,6, 124,1, 120,8, 119,9, 118,2, 117,7, 117,3, 112,7, 112,1, 101,3,

99,2, 74,7, 73,9, 64,4, 59,8, 57,7, 57,0, 56,8, 55,4, 53,3, 46,7. 41.4. 36.5. 34.7. 31.5. 26.4, 24,9,

22.6, 15,7, 14,0, 9,1.

ESI-MS m/z počítáno pro C51H53C13N4O10S: 1020,4. Zjištěno (M+H)⁺: 1021,2

Příklad 15

K roztoku 30 (854 mg, 0,82 mmol) byla při teplotě 23 °C přidána kyselina octová (500 mg, 30 8,28 mmol), (PPh₃)₂PdCl2 (29 mg, 0,04 mmol) v bezvodém CH₂CI₂ (20 ml) a po kapkách

Bu₃SnH (650 mg, 2,23 mmol). Reakční směs byla míchána při této teplotě 15 min. Reakce byla zastavena vodou (50 ml) a extrahována CH₂C1₂ (3x 50 ml). Spojené organické fáze byly vysušeny přes síran sodný, filtrovány a zakoncentrovány. Hrubý produkt byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (ethylacetát/hexan v gradientu od 1 : 5 až po 1 : 3) za vzniku slouče35 niny 31 (730 mg, 90 %) ve formě světle smetanově žluté pevné látky.

‘H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,72 (m, 2H), 7,56 (m, 2H), 7,37 (m, 2H), 7,30 (m, 2H), 6,65 (s, IH), 5,89 (s, IH), 5,77 (s, IH), 5,74 (s, IH), 5,36 (d, J= 5,9 Hz, IH), 5,32 (d, J= 5,9 Hz, IH), 5,20 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,75 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 4,73 (m, 1H), 4,48 (d, J = 11,9 Hz, 1H), 4,08

-55CZ 303536 B6 (m, 4H), 3,89 (m, 1H), 3,86 (t, J= 6,2 Hz, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,69 (s, 3H), 3,38 (m, 1H), 3,25 (m, IH), 3,02 - 2,89 (m, 4H), 2,67 (s, IH), 2,61 (s, 1H), 2,51 (dd, J = 14,3 Hz, J = 4,5 Hz, IH), 2,29 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 1,95 (s, 3H), 1,83 (m, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, CDClj): δ 168,2, 152,5, 148,1, 146,2, 144,4, 144,3, 143,3, 139,6, 134,6, 129,7, 129,6, 126,2, 125,6, 123,4, 123,3, 121,6, 118,5, 116,3, 110,7, 110,2, 105,1, 99,4, 98,5,

75,2, 73,3, 61,7, 58,4, 57,9, 56,3, 56,1, 55,1, 54,7, 53,8, 51,9, 45,2, 40,1, 35,6, 33,3, 24,8, 23,3,

14,5, 7,3.

ESI-MS m/z počítáno pro C48H49C1JN4O10: 980,3. Zjištěno (M+H)⁺: 981,2

Příklad 16

(JI)

K roztoku 31 (310 mg, 0,32 mmol) v bezvodém CH₂C1₂ (15 ml) při teplotě -10 °C byl pomoct kanyly přidán roztok 70% anhydridu benzenselenu (165 mg, 0,32 mmol) v bezvodém CH₂C1₂(7 ml). Teplota reakce byla udržována na -10 °C a míchána 5 min. Při této teplotě byl přidán nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného (30 ml). Vodná fáze byla promyta nadbytkem CH₂C1₂ (40 ml). Spojené organické vrstvy byly vysušeny přes síran sodný, filtrovány a zakoncentrovány. Hrubý extrakt byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (ethylacetát/hexan v gradientu od 1 : 5 až po 2 : 1) za vzniku 32 (287 mg, 91 %, HPLC: 91,3 %) ve formě směsi dvou isomerů (65 : 35) světle smetanově žluté pevné látky, které byly použity v následujícím kroku.

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ (Směs izomerů) 7,76 (m, 4H), 7,65 (m, 4H), 7,39 (m, 4H), 7,29 (m, 4H), 6,62 (s, 1H), 6,55 (s, 1H), 5,79 - 5,63 (m, 6H), 5,09 (s, 1H), 5,02 (d, J= 6,0 Hz, 1H), 4,99 (d, 7=6,0 Hz, 1H), 4,80-4,63 (m, 6H), 4,60 (m, 1H), 4,50 (m, 1H), 4,38 (d, 7 = 12,8 Hz,

7=7,5 Hz, 1H), 4,27 (dd, J= 12,8 Hz, 7= 7,5 Hz, 1H), 4,16 - 3,90 (m, 1 OH), 3,84 (s, 3H), 3,62 (s, 3H), 3,50 (s, 3H), 3,49 (s, 3H), 3,33 - 2,83 (m, 14H), 2,45 - 2,18 (m, 2H), 2,21 (s, 6H), 2,17 (s, 6H), 1,77 (s, 6H), 1,67 (m, 2H).

^,3C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ (Směs izomerů) 168,6, 168,4, 158,6, 154,8, 152,8, 152,5, 147,3,

147.2, 146,8, 144,1, 144,0, 140,8, 139,7, 137,1, 129,8, 129,3, 128,4, 128,7, 126,5, 125,5, 123,7,

1 23,6, 123,5, 123,4, 122,2, 121,3, 118,3, 115,8, 115,5, 110,2, 106,9, 103,5, 103,2, 100,1, 99,6,

97.9, 97,7, 93,8, 73,4, 70,9, 69,2, 64,9, 62,5, 59,3, 58,9, 58,4, 56,7, 56,3, 56,2, 55,4, 55,2, 55,1,

54.9, 54,7, 54,3, 54,1, 53,8, 52,8, 45,5, 45,5, 40,5, 40,0, 39,8, 35,8, 35,5, 33,9, 33,7, 30,1, 28,8,

24.2.24.1.21.2, 14,5, 14,4, 12,6, 6,0,5,7.

ESI-MS m/z počítáno pro CjgH^CnN^nS: 996,3 Zjištěno (M+H)⁺: 997,2

-56CZ 303536 B6

Příklad 17

(32) (33)

Reakční nádoba byla dvakrát vypálena plamenem, vícekrát protažena vakuein/argonem a uskladněna v argonové atmosféře. K. roztoku DMSO (39,1 μΐ, 0,55 mmol, 5 ekvivalentů) v bezvodém CH₂C1₂ (4,5 ml) byl po kapkách přidán anhydrid trifluormethansulfonové kyseliny (37,3 μΙ, 0,22 mmol, 2 ekvivalent), při teplotě -78 °C. Reakční směs byla míchána při -78 °C 20 min, poté byl kanylou přidán roztok 32 (110 m, 0,11 mmol, HPLC: 91,3 %) v bezvodém CH₂C1₂ (1 ml jako io hlavní přídavek, 0,5 ml pro promývání), při -78 °C. Po dobu přidávání reaktantů byla teplota reakční směsi udržována na -78 °C v obou nádobách a barva směsi se změnila ze žluté na hnědou. Reakční směs byla míchána při teplotě —40 °C po dobu 35 min. Barva roztoku se změnila ze žluté na tmavě zelenou. Poté byl po kapkách přidán 'Pr₂NEt (153 μΐ, 0,88 mmol, 8 ekvivalentů) a teplota reakční směsi byla udržována na 0 °C po dobu 45 min a barva roztoku se změnila na hně15 dou. Poté byl po kapkách přidán t-butanol (41,6 μΐ, 0,44 mmol, 4 ekvivalenty) a 2-butyl1,1,3,3-tetramethylguanidin (154,6 μΐ, 0,77 mmol, 7 ekvivalentů). Reakční směs byla míchána 40 min pri teplotě 23 °C. Poté byl po kapkách přidán acetanhydrid (104,3 μΙ, 1,10 mmol, 10 ekvivalentů) a reakční směs byla další hodinu udržována při teplotě 23 °C, Poté byla reakční směs naředěna CH₂C1₂ (20 ml) a promyta vodným nasyceným roztokem NH₄C1 (50 ml), hydro20 genuhličitanu sodného (50 ml) a chloridu sodného (50 ml). Spojené organické fáze byly usušeny přes síran sodný, filtrovány a zakoncentrovány. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (eluční činidlo: ethylacetát/hexanový gradient od 1 : 3 až po 1 : 2) za vzniku sloučeniny 33 (54 mg, 58 %) ve formě světle žluté pevné látky.

’H~NMR (300 MHz, CDCL): δ 6,85 (s, IH), 6,09 (s, IH), 5,99 (s, IH), 5,20 (d, J= 5,8 Hz, IH), 5,14(d, J=5,3 Hz, IH), 5,03 (m, IH), 4,82 (d,J= 12,2 Hz, 1H),4,63 (d,J= 12,0 Hz, 1H),4,52 (m, 1H), 4,35 - 4,17 (m, 4H), 3,76 (s, 3H), 3,56 (s, 3H), 3,45 (m, 2H), 2,91 (m, 2H), 2,32 (s, 3H),

2,28 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,12 (m, 2H), 2,03 (s, 3H), ^t3C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 168,5, 167,2, 152,7, 148,1, 147,1, 144,5, 139,6, 139,1, 130,5, 129,0, 123,7, 123,5, 123,3, 118,8, 116,5, 112,1, 100,6, 97,8, 73,3, 60,5, 59,4, 59,2, 58,3, 57,6, 57,4, 56,1, 53,3, 53,1,40,6, 40,0, 31,0, 22,2, 18,9, 14,4, 8,1.

ESI-MS m/z počítáno pro C₃6H₃9Ci₃N4OnS: 842,1. Zjištěno (M+H)⁺: 834,1

-57 CZ 303536 B6

Příklad 18

(33) (34)

K roztoku 33 (12 mg, 0,014 mmol) v suchém dichlormethanu 1,2 ml) a HPLC čistém acetonitrilu (1,2 ml) byl přidán při teplotě 23 °C jodid sodný (21 mg, 0,14 mol) a čerstvě destilovaný (přes kalciumhydrid pod atmosférickým tlakem) trimethylsilylchlorid (15,4 mg, 0,14 mmol). Barva reakční směsi se změnila na oranžovou. Po 15 min byl roztok naředěn dichlormethanem (10 ml) a promyt čerstvým vodou nasyceným roztokem Na₂S₂O₄ (3x 10 ml). Organická fáze byla vysušena ío přes síran sodný, filtrována a zakoncentrována. Byla získána sloučenina 34 (13 mg, kvantitativní) ve formě světle žluté pevné látky, která byla dále použita bez jakékoliv purifikace.

^lH-NMR (300 MHz, CDCh): δ 6,85 (s, IH), 6,09 (s, IH), 5,99 (s, IH), 5,27 (d, J= 5,8 Hz, IH), 5,14 (d,J= 5,3 Hz, IH), 5,03 (d,J= 11,9 Hz, IH), 4,82 (d,J= 12,2 Hz, IH), 4,63 (d,J= 13,0

Hz, IH), 4,52 (m, IH), 4,34 (m, IH), 4,27 (bs, IH), 4,18 (m, 2H), 3,76 (s, 3H), 3,56 (s, 3H), 3,44 (m, IH), 3,42 (m, IH), 2,91 (m, 2H), 2,32 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,03 (s, 3H).

ESI-MS m/z počítáno pro C34H35N4O10S: 798,1. Zjištěno (M+H)⁺: 799,1

Příklad 19

(34) (35)

K roztoku 34 (13 mg, 0,016 mmol) ve směsi octové kyseliny ve vodě (90 : 1, 1 ml) byl přidán zinkový prášek (5,3 mg, 0,081 mmol) při teplotě 23 °C. Reakční směs byla zahřívána 6 h na teplotu 70 °C. Poté byla reakce ochlazena na 23 °C, naředěna CH₂C1₂ (20 ml) a promyta vodným nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (15 ml) a vodným roztokem E^N (15 ml). Organická fáze byla vysušena přes síran sodný, filtrována a zakoncentrována. Zbytek byl purifi30 kován pomocí sloupcové chromatografie silika-NH2 (eluční činidlo: ethylacetát/hexanový gradient od 0 : 100 až po 50 : 50) za vzniku sloučeniny 35 (6,8 mg, 77 % - 2 kroky) ve formě světle žluté pevné látky.

-58CZ 303536 B6 ¹ H-NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 6,51 (s, 1H), 6,03 (dd, J= 1,3 Hz, J - 26,5 Hz, 2H), 5,75 (bs, 1H), 5,02 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 4,52 (m, 1H), 4,25 (m, 2H), 4,18 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 4,12 (dd, J = 1,9 Hz, J= 11,5 Hz, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,40 (m, 2H), 3,26 (t, J= 6,4 Hz, 1H), 2,88 (m, 2H), 2,30 -2,10 (m, 2H), 2,30 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), 2,02 (s, 3H).

^I3C-NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 174,1, 168,4, 147,8, 145,4, 142,9, 140,8, 140,1, 131,7, 130,2, 129,1, 128,3, 120,4, 118,3, 117,9, 113,8, 111,7, 101,7, 61,2, 59,8, 59,2, 58,9, 54,4, 53,8, 54,4, 41,3, 41,5, 34,1,23,6, 20,3, 15,5, 9,4.

ESI-MS m/z počítáno pro C₃₁H₃4N₄OgS: 622,7. Zjištěno (M+H)⁺: 632,2

Příklad 20

K roztoku 36 (49 mg, 0,08 mmol) a 2-/3-hydroxy-4-methoxyfenyl/ethyl aminu (46,2 mg, 0,27 mmol) v ethanolu (2,5 ml) byl přidán silikagel (105 mg) při teplotě 23 °C. Reakční směs byla míchána při teplotě 23 °C po dobu 14 h. Reakční směs byla naředěna hexanem a nalita do chromatografické kolony (ethylacetát/hexan od 1:3 až do 1:1) za vzniku Et-770 (55 mg, 90 %) ve formě světle žluté pevné látky.

‘H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,60 (s, 1H),6,47 (s, 1H), 6,45 (s, 1H),6,O5 (s, 1H), 5,98 (s, 1H), 5,02 (d, J= 11,4 Hz, 1H), 4,57 (bs, 1H), 4,32 (bs, 1H), 4,28 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 4,18 (d, J= 2,5 Hz, 1H), 4,12 (dd, J=2,l Hz, J= 11,5 Hz, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,62 (s, 3H), 3,50 (d,J= 5,0 Hz,

1H), 3,42 (m, 1H), 3,10 (ddd, J= 4,0 Hz,./- 10,0 Hz, J= 11,0 Hz, 1H), 2,94 (m, 2H), 2,79 (m,

1H), 2,61 (m, 1H), 2,47 (m, 1H), 2,35 (m, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,09 (m, 1H), 2,04 (s,3H).

ESI-MS m/z počítáno pro C^IW^OjoS: 770,7. Zjištěno (M+H)⁺: 771,2 30

Příklad 22

-59CZ 303536 B6

K roztoku 21 (22 mg, 0,042 mmol) vCH₂Cl₂ (0,8 ml) byl přidán ftalát anhydrid (6,44 mg, 0,042 mmol) a reakční směs byla míchána při 23 °C po dobu 2 h. Poté byl přidán karbonyldiimidazol (1 mg, 0,006 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě 23 °Č 7 h. Poté byl přidán karbonyldiimidazol (5,86 mg, 0,035 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě 23 °C dalších 17 h. Roztok byl nareděn CH₂C1₂ (15 ml) a promyt 0,lM HCI (15 ml). Organická fáze byla vysušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO₂, hexan :ethylacetát 2 : 1) za vzniku 27 (26,4 mg, 96 %) ve formě bílé pevné látky.

Rf: 0,58 (ethylacetát).

¹ H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,73 - 7,64 (m, 4H), 6,40 (s, IH), 6,12 - 6,01 (m, IH), 5,63 (s, 1H), 5,58 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,37 (dd, 7/=1,8 Hz, J₂ = 17,4 Hz), 5,23 (dd, 7/ = 1,8 Hz, J₂ = 10,5 Hz, IH), 5,12 (d, J= 1,5 Hz, IH), 4,22 - 4,15 (m, 3H), 4,08 (d, J= 1,8 Hz, IH), 3,68 (s, 3H), 3,59 - 3,55 (m, 2H), 3,35 (d, J = 8,1 Hz, IH), 3,27 - 3,16 (m, 2H), 3,05 (dd, J_} = 8,1 Hz, J₂ 18,3 Hz, IH), 2,64 (d, 7 = 18,0 Hz, IH), 2,30 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,09 (s, 3H), 1,80 (dd, 7/ =

11,4 Hz,7₂=15Hz, IH);

¹³C-NMR (75 MHz, CDCh): δ 167,7, 148,9, 146,4, 144,2, 142,6, 139,5, 134,0, 133,5, 132,0, 131,0, 128,3, 123,0, 121,3, 120,9, 118,1, 117,5, 116,8, 113,6, 112,4, 100,8, 74,5, 60,6, 60,5, 57,7,

56,6, 55,6, 55,5,42,3, 41,7, 26,6, 25,5, 15,9, 9,46.

ESI-MS m/z počítáno pro C₃7H₃5N4O₇: 648,79. Zjištěno (M+H)⁺: 649,3

Příklad 23

K roztoku 27 (26 mg, 0,041 mmol) v CH₂C1₂ (11 ml) byla přidána octová kyselina (11 ml), 30 (PPh₃)PdCl₂ (2,36 mg) a Bu₃SnH (28 ml, 0,10 mmol) při teplotě 23 °C. Po dvouhodinovém míchání při této teplotě byla reakční směs nalita na separační kolonu (SÍO₂, gradient po hexan:ethylacetát 2 : 1) za vzniku 28 (24,7 mg, 99 %) ve formě bílé pevné látky.

Rf: 0,33 (hexan: ethyl acetát 2:1).

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,75 - 7,70 (m, 2H), 7,69 - 7,65 (m, 2H), 6,39 (s, 1Η), 5,82 (bs, IH), 5,50 (d, 7= 1,5 Hz, IH), 5,0 (d,7= 1,5 Hz, 1H),4,45 (bs, IH), 4,23-4,19 (m, 2H), 4,104,09 (m, IH), 3,73 (s, 3H), 3,60 - 3,48 (m, 2H), 3,36 -3,33 (m, IH), 3,26 - 3,20 (m, IH), 3,143,08 (m, IH), 3,98 (d,7= 14,4 Hz, IH), 2,61 (d,7= 18,3 Hz, IH), 2,30(s,3H), 2,23 (s, 3H), 2,06 (s,3H), 1,85 (dd,7/= 12 Hz,7₂= 15,3 Hz);

¹³C-NMR (75 MHz, CDCh): δ 167,8, 146,4, 145,1, 143,9, 142,7, 137,1, 133,5, 131,9, 130,8, 128,4, 122,9, 120,8, 118,0, 116,8, 114,0, 113,4, 106,4, 100,4, 60,6, 60,5, 57,8, 56,6, 55,5, 55,2, 42,6,41,5,25,6, 25,5, 15,8, 8,9.

ESI-MS m/z počítáno pro C^H^Ch: 608,6. Zjištěno (M+H)⁺: 609,2

-60CZ 303536 B6

Příklad 24

K roztoku 28 (375 mg, 0,58 mmol) vCH₂C1₂ (3 ml) byl přidán acetylchlorid (41,58 μΐ, 0,58 mmol) a pyridin (47,3 μΐ, 0,58 mmol) při teplotě 0 °C. Reakční směs byla míchána 1 h a poté byl roztok naředěn CH₂C1₂ (15 ml) a propláchnut O,1M HCI (15 ml). Organická fáze byla vysušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (RP-18, CH₃CN:H₂O 60 : 40) za vzniku ftalascidinu io (354 mg, 94 %) ve formě bílé pevné látky.

Rf: 0,37 (CH₃CN:H₂O 7:3 RP-18).

'H-NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 7,72 - 7,68 (m, 2H), 7,67 - 7,63 (m, 2H), 6,38 (s, IH), 5,69 (d, J = 1,2 Hz, IH), 5,64 (d,J= 1,2 Hz, IH), 5,30 (bs, IH), 4,25-4,21 (m, 2H), 4,02 (d, 7= 2,1 Hz,

IH), 3,64 - 3,62 (m, 5H), 3,33 (d, J= 8,4 Hz, IH), 3,31 -3,16 (m, IH), 3,02 (dd, J, = 8,1 Hz, J₂= 18 Hz, IH), 2,76 (dd, 7, = 1,8 Hz, J₂ = 15,6 Hz, IH), 2,63 (d, J= 17,7 Hz, IH), 2,29 (s, 3H),

2,28 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,0 (s, 3H), 1,73 (dd,7, = 12,0 Hz,7₂= 15,3 Ηζ,ΙΗ)) ^,3C-NMR (75 MHz, CDC1₃)): δ 168,5, 167,6, 146,2, 144,2, 142,5, 141,0, 140,5, 133,4, 131,8,

130,7, 128,2, 120,9, 120,8, 117,9, 116,4, 113,6, 101,1, 60,4, 60,0, 57,0, 56,3, 55,6, 55,4, 41,6,

41,5,26,5,25,2,20,2, 15,7,9,4.

ESI-MS m/z počítáno pro C^H^N^s: 650. Zjištěno (M+H)⁺: 651,2

Příklad 25

(17) (42)

K roztoku 17 (300 mg, 0,432 mmol) v CH₂Cl₂ (2 ml) byl při teplotě 0 °C přidán acetylchlorid 30 (30,7 μΐ, 0,432 mmol) a pyridin (34,9 μΙ, 0,432 mmol). Reakční směs byla míchána 2 h při tep-6l CZ 303536 B6 lotě 0 °C a poté byl roztok naředěn pomocí CH2CI2 (15 ml) a propláchnut 0,lM HCl (15 ml). Organická vrstva byla vysušena přes vrstvu síranu sodného, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem za vzniku sloučeniny 42 (318 mg, 100 %) v podobě bílé pevné látky, která byla použita v následujících reakcích bez další purifikace.

Rf: 0,5 (ethylacetát:methanol 5:1).

¹ H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,66 (s, IH), 5,93 (d, J = 1,2 Hz, IH), 5,83 (d, J= 1,2 Hz, IH), 5,42 (t, J= 6,6 Hz, IH), 5,07 (d, J= 5,7 Hz, IH), 4,98 (d, / = 5,7 Hz, IH), 4,16 (d, J= 1,8 Hz, IH), 4,11 (d, J= 2,7 Hz, IH), 3,98 (bs, IH), 3,73 - 3,61 (m, 2H), 3,64 (s, 3H), 3,52 - 3,48 (m, IH), 3,50 (s, 3H), 3,33 (d, J= 9,6 Hz, IH), 3,17 - 3,14 (m, IH), 2,97 - 2,87 (m, IH), 2,75 - 2,70 (d, J = 16,8 Hz, 1 H),2,26 (s, 6H), 2,16 (s, 3H), 1,96 (s, 3H), 1,70 (dd, //=11,7 Hz, J₂ = 15,6 Hz, IH), 1,3 (s, 9H), 0,59 (d, J= 6,0 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 172,0, 168,3, 162,3, 148,2, 144,4, 140,4, 140,2, 130,9, 130,5, 125,3, 123,4, 120,8, 117,6, 112,7, 111,7, 101,4, 99,1, 79,2, 59,5, 58,8, 57,5, 57,4, 56,4, 55,5, 55,0, 41,3, 39,0, 28,2, 26,4, 24,6, 19,9, 18,4, 15,4, 9,1.

ESI-MS m/z počítáno pro C₃₈H4₉N₅Oio: 735,82. Zjištěno (M+H)⁺: 736,3

Příklad 26

Me (43)

K roztoku 42 (318 mg, 0,432 mmol) v CH2CI2 (2,16 ml) byla přidána trifluoroctová kyselina (1,33 ml, 17,30 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě 23 °C 3,5 h. Reakce byla zastavena při teplotě 0 °C pomocí nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (60 ml) a extrahována CH2CI2 (2x 70 ml). Spojené organické vrstvy byly vysušeny (síran sodný) a zakoncentrovány in vacuo. Zbytek byl purifíkován pomocí sloupcové chromatografie (SiO₂, ethylacetát: methanol 20 : 1) za vzniku sloučeniny obecného vzorce 43 (154 mg, 60 %) v podobě bílé pevné látky.

Rf: 0,22 (ethylacetát: methanol 5 : 1).

'H-NMR (300 MHz, CDCb): δ 6,47 (s, IH), 6,22 (bs, IH), 5,95 (d,<Z= 1,2 Hz, IH), 5,88 (d,/ = 1,2 Hz, IH), 4,08 - 4,06 (m, 2H), 4,01 (bs, IH), 3,69 (s, 3H), 3,49 (d, J = 3,6 Hz, IH), 3,33 (d, J -8,1 Hz, IH), 3,26-3,22 (m, IH), 2,95 (dd, / = 8,1 Hz, Λ = 18 Hz, IH), 2,80 - 2,76 (m, 2H), 2,58 (d,/ = 18 Hz, IH), 2,29 (s,3H), 2,27 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 1,96 (s, 3H), l,77(dd,// = 12,3 Hz,Λ= 15,6 Hz, IH), 0,90 (d,/=6,9 Hz, 3H).

ⁿC NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 174,8, 169,0, 146,8, 144,4, 142,8, 140,5, 140,2, 131,1, 128,8,

120,8, 120,5, 117,1, 112,9, 111,6, 101,5, 60,3, 59,0, 56,5, 56,3, 55,6, 55,1, 50,2, 41,6, 39,5, 26,8, 26,3,24,9, 20,2, 15,4, 9,2.

ESI-MS m/z počítáno pro C₃,H₃₇N₅O₇: 591,65. Zjištěno (M+H)⁺: 592,3

-62CZ 303536 B6

Příklad 27

K roztoku 43 (154 mg, 0,26 mmol) v CH2CI2 (1,3 ml) byl přidán fenylisothiokyanát (186 μΐ, 1,56 mmol) a reakční směs byla při teplotě 23 °C míchána 2 h. Reakční směs byla zakoncentrována in vacuo a zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO₂, gradient hexan až po hexan: ethylacetát 1 : 1) za vzniku sloučeniny obecného vzorce 44 (120 mg, 63 %) v podobě bílé pevné látky.

Rf: 0,41 (ethylacetát:methanol 5 : 1).

'H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 8,17 (s, 1H), 7,49 - 7,44 (m, 3H), 7,31 - 7,24 (m, 3H), 7,05 (d, J= 6,9 Hz, 1H), 5,98 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 5,87 (t, J = 1,2 Hz, 1H), 5,52 (bs, 1H), 4,54 (t, J= 6,6 Hz, 1H), 4,15 (d, 7= 2,1 Hz, 1H), 4,03 (d, J= 2,7 Hz, 2H), 3,80 (bs, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,40 (bs, 1H), 3,32 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 3,16 (d, J= 11,7 Hz, 1H), 2,82-2,61 (m, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,01 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,80 (dd, Λ = 12,0 Hz, J₂ - 15,9 Hz, 1H), 0,62 (d, 7=6,0 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 178,5, 171,9, 168,7, 146,7, 144,5, 142,6, 140,6, 140,3, 136,3, 131,0, 129,9, 128,9, 126,7, 124,4, 120,9, 120,6, 117,7, 116,6, 112,7, 111,9, 101,4, 60,4, 58,7,

57,5, 56,1, 55,7, 551, 53,3, 41,4, 38,8, 26,3, 24,4, 20,2, 18,1, 15,3, 9,2.

ESI-MS m/z počítáno pro C38H42N6O7S: 726,3. Zjištěno (M+H)⁺: 727,3

Příklad 28

K roztoku 44 (120 mg, 0,165 mmol) v dioxanu (0,9 ml) byl přidán 5,3M HCl/dioxan (1,8 ml) a 30 reakční směs byla při teplotě 23 °C míchána 2,5 h. Poté byl k reakční směsi přidán CH₂C1₂ (10 ml) a H₂O (5 ml) a organická fáze byla odcentrifugována. Vodná fáze byla alkalizována

-63CZ 303536 B6 pomocí roztoku saturovaného hydrogenuhličitanu sodného (20 ml) (pH 8) při teplotě 0°C a poté extrahována pomocí CH₂C1₂ (2x 15 ml). Spojené organické extrakty byly vysušeny (síran sodný) a zakoncentrovány in vacuo za vzniku sloučeniny obecného vzorce 45 (75 mg, 87 %) ve formě bílé pevné látky, která byla použita v následujících reakcích bez další purifikace.

Rf: 0,23 (ethylacetát:methanol 5:1).

¹ H-NMR (300 MHz, CDCb): δ 6,43 (s, 1H), 5,94 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 5,87 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 4,10(d,7=2,l Hz, 1H), 3,98 (d, 7=2,4 Hz, 1H),3,91 (bs, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,34 - 3,25 (m, 2H), 3,05 (dd, 7/ = 1,8 Hz,7₂ = 8,l Hz, 1H), 2,80-2,73 (m, 3H), 2,46 (d,7 = 18 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H),

2,28 (s,3H), 2,20 (s, 3H), 1,98 (s,3H), 1,79 (dd,7,= 12,6 Hz,7₂= 16,2 Hz, 1H);

¹³C NMR (75 MHz, CDCb): δ 168,7, 146,7, 144,4, 142,9, 140,4, 130,4, 128,9, 121,1, 120,8,

117,8, 116,8, 113,6, 111,5, 101,4, 67,6, 60,5, 59,8, 58,4, 56,6, 55,8, 55,3, 43,6, 41,8, 31,3, 25,6,

20,2, 15,6,9,2.

ESI-MS m/z počítáno pro C₂₈H₃₂N4O₆: 520,58. Zjištěno (M+H)⁺: 521,3

Příklad 29

(«)

Me (Ftalascldln)

K roztoku 45 (10 mg, 0,02 mmol) vCH₂Cl₂ (0,4 ml) byl přidán ftalát anhydrid (2,84 mg, 0,02 mmol) a reakční směs byla při teplotě 23 °C míchána 2 h. Poté byl přidán karbony lim idazol (0,5 mg, 0,003 mmol) a reakční směs byla při teplotě 23 °C míchána 7 h. Poté byl přidán karbonylimidazol (2,61 mg, 0,016 mmol) a reakční směs byla při teplotě 23 °C míchána dalších 7 h. Roztok byl naředěn pomocí CH₂C1₂ (10 ml) a promyt 0,lM HCI (5 ml). Organická vrstva byla vysušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (RP-18, CH₃CN:H₂O 60 : 40) za vzniku ftalascidinu (11,7 mg, 93 %) ve formě bílé pevné látky.

Rf: 0,37 (CH₃CN:H₂O 7 : 3, RP-18), ‘H-NMR (300 MHz, CDCb): δ 7,72 - 7,68 (m, 2 h), 7,67 - 7,63 (m, 2 h), 6,38 (s, 1H), 5,69 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,64 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,30 (bs, 1H), 4,25 -4,21 (m, 2H), 4,02 (d,7=2,l Hz, 1H), 3,64 - 3,62 (m, 5H), 3,33 (d,7= 8,4 Hz, 1H), 3,21 -3,16(m, 1H), 3,02 (dd, 7/ = 8,1 Hz, 7₂ = 18 Hz, 1H), 2,76(dd,7/= 1,8 Hz. 7,- 15,6 Hz, 1H),2,63 (d,7= 17,7 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H),

2,28 (s,3H), 2,21 (s, 3H), 2,0(s, 3H), 1,73 (dd,7,= 12,0 Hz,7₂ = 15,3 Hz, 1H));

¹³C NMR (75 MHz, CDCb): δ 168,5, 167,6, 146,2, 144,2, 142,5, 141,0, 140,5, 133,4, 131,8, 130,7, 128,2, 120,9, 120,8, 117,9, 116,4, 113,6, 101,1, 60,4, 60,0, 57,0, 56,3, 55,6, 55,4, 41,6,

41,5,26,5,25,2, 20,2, 15,7, 9,4.

ESI-MS m/z počítáno pro C36H34N4O8: 650. Zjištěno (M+H)⁺: 651,2

-64CZ 303536 B6

Příklad 30

K roztoku 25 (18 mg, 0,032 mmol) v DMF (0,05 ml) byl při teplotě 0 °C přidán DMAP (0,5 mg, 0,004 mmol), imidazol (5 mg, 0,08 mmol) a Zerc-butyldifenylsilylchlorid (12,5 μΐ, 0,048 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě 23 °C 6 h. Při teplotě 0 °C byla přidána voda (10 ml) a vodná fáze byla extrahována pomocí hexan:ethylacetát 1:10 (2x 10 ml). Organická vrstva byla vysušena (síran sodný), filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno ve vakuu. Hrubý extrakt byl io purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO?, hexan:ethylacetát 3:1) za vzniku sloučeniny obecného vzorce 26 (27 mg, 88 %) ve formě bílé pevné látky.

Rf: 0,29 (hexan:ethylacetát 3 : 1).

’Η-NMR (300 MHz, CDCh): δ 7,61 - 7,58 (m, 2H), 7,42 - 7,28 (m, 8H), 6,71 (s, IH), 6,19 6,02 (m, IH), 5,78 (d,7 = 1,2 Hz, IH), 5,64 (d,7 = 1,2 Hz, IH), 5,40 (dd, Λ = 1,2 Hz, 7,= 17,1 Hz, IH), 5,27 (dd, 7/= l ,2 Hz, J₂ = 10,2 Hz, IH), 5,13 (s, 2H), 4,45 (d,7 =2,4 Hz, 1H),4,24 (d, 7= 2,1 Hz, IH), 4,17 - 4,06 (m, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,64 (dd, J, = 2,4 Hz, J₂ = 9,9 Hz, 1H), 3,59 (s,3H), 3,42-3,21 (m, 4H), 3,10 (dd, Λ = 8,1 Hz,7₂ = 17,7 Hz, IH), 2,70 (d, 7= 17,7 Hz, IH), 2,33 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 2,08 - 1,89 (m, IH), 0,87 (s, 9H);

^,3C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 148,5, 148,3, 148,1, 144,0, 139,0, 135,6, 135,4, 133,8, 133,1,

132,6, 130,5, 130,3, 129,6, 129,4, 127,5, 127,4, 125,1, 124,3, 121,6, 118,5, 117,5, 112,9, 111,7, 100,8, 99,2, 74,0, 67,7, 61,5, 59,6, 59,0, 57,7, 57,1, 55,4, 41,6, 29,6, 26,6, 25,5, 18,8, 15,8, 9,2.

ESI-MS m/z počítáno pro C47H₅₅N₃O7SÍ: 801,3. Zjištěno (M+H)⁺: 802,3

Příklad 31

K roztoku 26 (7 mg, 0,0087 mmol) v CH₂C1₂ (0,15 ml) byla při teplotě 23 °C přidána octová kyselina (2,5 μΐ, 0,044 mmol), (PPh₃)₂PdCl₂ (0,5 mg, 6,96 x 10* mmol) a Bu₃SnH (3,5 μΐ, 0,013 mmol). Při této teplotě byla reakční směs míchána 1 h. Roztok byl naředěn směsí hexanxthylacetát 5 : 1 (0,5 ml) a nalit na sloupec separační kolony (SiO₂, gradient 5 : 1 až po 1 : 1 hexan:ethylacetát) za vzniku sloučeniny obecného vzorce ET-11 (5 mg, 75 %) ve formě bílé pevné látky.

-65CZ 303536 B6 ίο

Rf: 0,36 (hexan:ethylacetát 1:1, silika).

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,56 (m, 2H), 7,41 - 7,25 (m, 8H), 6,67 (s, IH), 5,72 (d, J= 1,0 Hz, IH), 5,58 (d, J= 1,0 Hz, IH), 5,51 (s, IH), 5,38 (d, J= 5,75 Hz, IH), 5,16 (d, J= 5,7 Hz, IH), 4,57 (d, J= 2,9 Hz, IH), 4,21 (m, IH), 4,09 (m, IH), 3,72 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 3,68 (dd, J_t= 2,1 Hz, J₂ = 10,4 Hz, IH), 3,38 - 3,26 (m, 3H), 3,11 (dd, J_} = 2,5 Hz, J₂ = 15,7 Hz, IH), 3,01 (dd, 7, = 8,9 Hz, J₂= 17,9 Hz, IH), 2,70 (d, J= 17,9 Hz, IH), 2,31 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 1,89 (dd, 7/ = 12,1 Hz, J₂ = 15,7 Hz, IH), 0,9 (s, 9H));

¹³C NMR (75 MHz, CDCh): δ 149,0, 147,4, 145,3, 144,3, 136,3, 135,7, 135,4, 133,2, 130,9,

130,5, 129,6, 129,5, 127,5, 125,0, 118,6, 112,5, 112,1, 105,7, 100,5, 99,8, 68,5, 61,5, 59,7, 58,8, 57,7, 56,9, 56,5,55,4,41,7, 26,6, 26,2,25,5, 18,9, 15,8, 14,2, 8,7.

ESI-MS m/z počítáno pro C44H51N3O7S1: 761. Zjištěno (M+H)⁺: 762

Příklad 32

PhHNSCKN

Roztok, složený z roztoku 2 (3,0 g, 5,46 mmol) a fenylisothiokyanátu (3,92 ml, 32,76 mmol) v CH2CI2 (27 ml) byl pri teplotě 23 °C míchán 1,5 h. Reakční směs byla rozdělena mezi CH2CI2 (10 ml) a H₂O (5 ml). Organická vrstva byla vysušena přes síran sodný, filtrována a zakoncentrována. Zbytek byl purifíkován pomocí sloupcové chromatografie (SiO₂, gradient hexan až hexan:ethylacetát 2 : 3) za vzniku sloučeniny obecného vzorce 3 (3,29 g, 99 %) ve formě žluté pevné látky.

Rf: 0,27 (ACN:H₂O 3 : 2, RP-C18);

'H-NMR (300 MHz, CDCh): δ 7,77 (bs, IH), 7,42 - 7,11 (m, 5H), 6,65 (d, IH), 6,29 (s, IH), 5,6 - 5,5 (m, IH), 4,19 - 4,14 (m, 2 h), 4,08 (d, IH), 3,92 (s, 3H), 3,87-3,65 (m, 6H), 3,77 (s, 3H), 3,37-2,98 (m, 8H), 2,50 (d, IH), 2,31 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 1,96 (d, IH), 1,87 (s, 3H), 1,81 1,75 (m, IH), 0,96 (d, 3H);

ⁿC NMR (75 MHz, CDCh): δ 185,7, 180,9, 178,9, 172,0, 155,7, 147,1, 143,2, 142,2, 136,0, 135,1, 130,5, 129,9, 129,3, 128,5, 126,9, 124,4, 120,2, 117,4, 116,3, 77,1, 60,9, 58,6, 56,2, 55,8, 55,0, 54,6, 53,5,41,7,40,3, 25,1, 24,5, 18,4, 15,8, 8,7

ESI-MS m/z počítáno pro C^^ON^CXS: 684,8. Zjištěno (M+H)*: 685,2

-66CZ 303536 B6

Příklad 33

Roztok 3 (0,143 g, 0,208 mmol) v 6,5M roztoku HCl/dioxan (150 ml) byl při teplotě 23 °C míchán 6 h. Poté byl k reakční směsi přidán toluen (3 ml) a organická vrstva byla odcentrifugována. Zbytek byl rozdělen mezi nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného (3 ml) CHC1₃ (3x 3 ml). Organické vrstvy byly vysušeny a zakoncentrovány za vzniku sloučeniny jako směsi sloučenin 4 a 6 (4:6 90:10), která pomalu stáním cyklizuje na sloučeninu 6.

io

Rf: 0,4 (ethylacetát:methanol 5:1, silika);

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,45 (s, IH), 4,16 (m, IH), 4,02 (d, IH), 3,96 (s, 3H), 3,79 (m, 2 h), 3,75 (s, 3H), 3,35 (m, IH), 3,20 - 3,00 (m, 3H), 2,87 (d, IH), 2,75 (d, IH), 2,43 (d, IH), 2,34 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 1,93 (s, 3H), 1,72 - 1,5 (m, 3H);

ESI-MS m/z počítáno pro C₂6H₃oN₄0₅: 478,5. Zjištěno (M+H)⁺: 479,2

Příklad 34

Roztok 3 (0,143 g, 0,208 mmol) v 6,5M HC1 v dioxanu (150 ml) byl při teplotě 23 °C míchán 1 h. Odpařením rozpouštědla vznikl zbytek, který byl purifikován pomocí sloupcové chromato25 grafie (ethylacetát.-methanol.'triethylamin 100 ; 25 : 0,1) za vzniku sloučeniny 6 (80 mg, 83 %) ve formě žluté pevné láky.

Rf: 0,26 (ACN:H₂O 3 : 2, RP-C18);

'H NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 6,46 (s, IH), 5,9 (bs, IH), 4,67 (dd, 7- 18,3 Hz, J= 7,8 Hz, IH),

4,24 (d, IH), 4,16 (s, 3H), 3,93 (d,7= 2,7 Hz, IH), 3,8 (m, 2 h), 3,77 (s, 3H), 3,45 (m, 2 h), 3,08 (dd, 7- 17,9 Hz, 7= 3,6 Hz, IH), 2,78 (m, IH), 2,55 (d, IH), 2,3 (m, IH), 2,3 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 1,90 (s,3H);

-67CZ 303536 B6 ^BC NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 186,2, 162,1, 154,9, 146,9, 145,3, 143,0, 130,1, 129,4, 128,1, 125,0, 121,4, 116,4, 116,2, 66,6, 60,7, 60,7, 60,1, 59,6, 58,8, 55,6, 54,9, 41,9, 25,3, 24,7, 15,7, 8,9.

ESI-MS m/z počítáno pro C26H28N4O4: 460,5. Zjištěno (M+H)⁺: 461,1

Příklad 35

K roztoku 3 (2,38 g, 3,47 mmol) v dioxanu (5 ml) byl přidán 5,3M HCI v dioxanu (34 ml) a reakční směs byla míchána při teplotě 23 °C 45 min. Poté byl přidán AcO₂ (51 ml, 539,5 mmol) a reakční směs byla míchána 4 h. Reakční směs byla ochlazena na 0 °C a při této teplotě rozdělena mezi vodný nasycený roztok Na₂CO₃ (300 ml) a ethylacetát (300 ml). Organická fáze byla vysušena přes síran sodný, filtrována a zakoncentrována. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO₂, gradient CH₂C1₂ až CH₂Cl₂:ethyIacetát 1 : 2) za vzniku sloučeniny 5 (1,75 g, 97 %) ve formě žluté pevné látky.

Rf: 0,53 (ACN:H₂O 3 : 2, RP-C18);

‘H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,51 (s, IH), 5,98 (bs, IH), 4,84 (dd, IH), 4,17 (d, IH), 4,00 (d, IH), 3,99 (s,3H), 3,85 (bs, IH), 3,81 (m, IH), 3,74 (s, 3H), 3,70 (d, IH), 3,23 (m, IH), 3,11 (dd, IH), 3,09 (m, IH), 2,93 (m, 2 h), 2,44 (d, IH), 3,67 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 1,70 (s, 3H), 1,60-1,50 (m,2h), 1,29 (s,3H);

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 185,9, 180,8, 169,9, 160,2, 156,2, 147,0, 143,1, 140,4, 136,1,

130,6, 129,6, 127,9, 120,4, 117,2, 61,0, 60,7, 58,6, 56,1, 55,7, 55,1, 54,3, 41,8, 41,1, 25,7, 23,9,

22,2, 15,7,8,7.

ESI-MS m/z počítáno pro C₂₈H₃₂N₄O₆: 520,6. Zjištěno (M+H)⁺: 521,1

Příklad 36

-68CZ 303536 B6

K roztoku 5 (1,75 g, 3,36 mmol) v CH₂C1₂ (17 ml) byl pri teplotě 0 °C přidán diisopropylethylamin (11,71 ml, 67,23 mmol), DMAP (20 mg, 0,17 mmol) a brommethylmethylether (4,11 ml, 50,42 mmol). Po 6 h při teplotě 23 °C byla reakční směs rozdělena mezi CH₂CI₂ (50 ml) a nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (25 ml). Organická fáze byla vysušena přes síran sodný a rozpouštědlo bylo odstraněno ve vakuu. Hrubý extrakt byl purifikován pomocí sloupcové chromatografíe (RP-18, CH₃CN:H₂O 1:1) za vzniku sloučeniny 7 (1,32 g, 70 %) ve formě žluté pevné látky.

Rf: 0,34 (ACN:H₂O 2 : 3, RP-C18);

ío *H NMR (300 MHz, CDCh): δ 6,74 (s, IH), 5,14 (s, 2 h), 4,82 (m, IH), 4,22 (d, IH), 4,00 (s, 3H), 4,0 (m, IH), 3,83 (m, 2 h), 3,7 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,4 (m, IH), 3,2 - 2,95 (m, 6H), 2,43 (d, IH), 2,37(s,3H), 2,22 (s, 3H), l,89(s,3H), 1,5-1,4 (m, 2 h), 1,31 (s, 3H);

¹³C NMR (75 MHz, CDCh): δ 185,9, 180,7, 169,9, 156,2, 148,9, 148,5, 140,3, 136,2, 131,3, 130,1, 127,7, 124,6, 123,7, 117,3, 99,5, 99,2, 60,9, 59,7, 58,8, 57,7, 56,4, 55,7, 55,0, 54,2, 51,0,

41,6, 41,0, 40,5, 25,5, 23,9, 22,3, 19,3, 15,6, 14,6, 8,6.

ESI-MS m/z počítáno pro C30H36N4O7: 564,6. Zjištěno (M+H/: 565,3

K roztoku 7 (0,37 g, 0,65 mmol) v methanolu (74 ml) byl při teplotě 0 °C přidán 1M hydroxid sodný (130 ml). Reakční směs byla míchána 15 min a poté byla nastavena při teplotě 0 °C pomocí 6M HCl na pH 5. Reakční směs byla extrahována ethylacetátem (3x 50 ml) a spojené organické vrstvy byly vysušeny přes síran sodný a zákoncentrovány ve vakuu. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografíe (RP-18, CH3CN:H₂O 1:1) za vzniku sloučeniny 8 (232 mg, 65 %) ve formě žluté olejovité látky.

Rf: 0,5 (ACN:H₂O 3 : 2, RP-C18);

'H NMR (300 MHz, CDCh): δ 6,75 (s, IH), 5,15 (s, 2 h), 4,86 (m, IH), 4,26 (d, IH), 4,01 (d, IH), 3,88 - 3,81 (m, 2 h), 3,70 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,39 (m, IH), 3,27 - 3,21 (m, IH), 3,18 3,08 (m, 2 h), 3,03 -2,97 (m, IH), 2,47 (d, IH), 2,37 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 1,90 (s, 3H), 1,57 1,46 (m,2h), 1,33 (s, 3H);

^,3C NMR (75 MHz, CDCh): δ 185,3, 180,6, 175,9, 170,1, 151,5, 148,9, 148,6, 143,3, 133,7, 131,5, 129,9, 124,7, 123,5, 117,1, 117,0 99,2, 59,8, 58,7, 57,8, 56,3, 55,3, 54,9, 54,3,41,5, 40,7,

29,6, 25,5, 24,4, 22,2, 20,7, 15,7, 8,0,

ESI-MS m/z počítáno pro C29H34N4O7: 550,6. Zjištěno (M+H)⁺; 551,2

-69CZ 303536 B6

K odpiyněnému roztoku sloučeniny 8 (240 mg, 0,435 mmol) v DMF (30 ml) byl přidán 10% Pd/C (48 mg) a reakční směs byla míchána ve vodíkové atmosféře (atmosférický tlak) 1 h. Reakční směs byla filtrována přes vrstvu celitu pod argonem od Schlenkovy zkumavky jako bezbarvý roztok, obsahující bezvodý Cs₂CO₃ (240 mg, 0,739 mmol). Poté byl přidán bromchlormethan (0,566 ml, 8,71 mmol). Zkumavka byla uzavřena a reakční směs byla míchána při teplotě 90 °C 3 h. Reakční směs byla ochlazena a filtrována přes vrstvu celitu a promyta CH₂C1₂. Organická vrstva byla zakoncentrována a vysušena (síran sodný) za vzniku sloučeniny 9 ve formě hnědé olejovité látky, která byla použita v následujícím kroku bez další purifikace.

Rf: 0,36 (SiO₂, hexamethylacetát 1 : 5) 'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,71 (s, 3H), 5,89 (d, 1H), 5,81 (d, 1H), 5,63 (bs, 1H), 5,33 (d, 1H), 5,17 (d, 1H), 4,97 (m, 1H), 4,20 (d, 1H), 4,09 (m, 1H), 3,99 (m, 1H), 3,68 (m, 1H), 3,65 (s, 6H), 3,59 - 3,47 (m, 4H), 3,37 - 3,27 (m, 2 h), 3,14 - 2,97 (m, 2 h), 2,62 (d, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 1,72 (m, 1H), 1,36 (s, 3H);

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 169,8, 149,1, 147,4, 145,5, 136,2, 130,9, 130,8, 125,0, 122,9,

117,7, 112,6, 111,8, 106,4, 100,8, 99,8, 59,8, 58,9, 57,7, 56,6, 56,4, 55,5, 55,2, 41,6, 40,1, 29,6, 25,9, 25,0, 22,6, 15,6, 8,8.

ESI-MS m/z počítáno pro C₃₀H₃₆SiN₄O7: 564,6. Zjištěno (M+H)⁺: 565,3

Příklad 39

NH

A (9) (19)

Do nádoby obsahující sloučeninu 9 (245 mg, 0,435 mmol) v DMF (4 ml) byl při teplotě 0 °C přidán uhličitan česný (425 mg, 1,30 mmol) a allylbromid (376 μΐ, 4,35 mmol) a směs byla míchána při 23 °C 1 h. Reakční směs byla filtrována přes vrstvu celitu a rozdělena mezi CH₂CI₂ (25 ml) a H₂O (10 ml). Organická fáze byla usušena (síran sodný) a zakoncentrována podtlakem za vzniku zbytku, který byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO₂, CHCl₃:ethylacetát 1 : 2) za vzniku sloučeniny 10(113 mg, 43 %) ve formě žluté olejovité látky.

- 70 CZ 303536 B6

Rf: 0,36 (hexamethylacetát 1 : 5) *H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,74 (s, 1H), 6,3 - 6,0 (m, 1H), 5,94 (d, 1H), 5,87 (d, 1H), 5,43 5,36 (m, 2 h), 5,22 (s, 2 h), 5,00 (m, lH),4,22(m, 1H), 4,17-4,01 (m, 1H), 3,98 (m, 2 h), 3,71 3,67 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,62 - 3,51 (m, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,39 - 3,37 (m, 1H), 3,31 - 3,26 (m, 3H), 3,09 (dd, 1H), 2,56 (d, 1H), 2,36 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 2,24-2,10 (m, 1H), 1,82- 1,73 (m, 1H), l,24(bs,3H) ^,3C NMR (75 MHz, CDC1₃): δ 169,4, 148,8, 148,3, 139,1, 133,7, 130,9, 130,3, 125,2, 120,2,

117,7, 113,1, 112,6, 101,3, 99,3, 74,1, 59,7, 59,3, 57,8, 57,0, 56,1, 56,1, 55,2, 41,6, 41,0, 40,9, 29,7,26,3,22,5, 15,6,9,3.

ESI-MS m/z počítáno pro C33H40N4O7: 604,7. Zjištěno (M+H)⁺: 605,3

Příklad 40

Λ

Me

Λ (8) (46)

K roztoku 9 (22 mg, 0,039 mmol) v CH₂C1₂ (0,2 ml) byl při teplotě 0 °C přidán acetylchlorid 20 (2,79 μΐ, 0,039 mmol) a pyridin (3,2 μΐ, 0,039 mmol). Reakční směs byla míchána 1 h a poté byl roztok naředěn CH₂C1₂ (10 ml) a propláchnut 0,lM HC1 (5 ml). Organická fáze byla vysušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem za vzniku sloučeniny 46 (22 mg, 93 %) ve formě bílé pevné látky.

Rf: 0,4 (hexan:ethylacetát 1 : 5) 'HNMR (300 MHz, CDCh): δ 6,74 (s, 1H), 5,97 (d, J= 0,9 Hz, 1H), 5,91 (d, 7=0,9 Hz, 1H), 5,12 (d, 7= 5,7 Hz, 2 h), 5,04 (d, 7= 5,7 Hz, 1H), 4,90 (t, 7= 6 Hz, 1H), 4,17 (d, 7= 2,7 Hz, 1H), 4,05 (d, 7= 2,7 Hz, 1H), 4,01 (bs, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,57 (s, 3H), 3,50 - 3,44 (m, 2 h), 3,38 3,36 (m, 1H), 3,30-3,26 (m, 1H), 3,00 (dd, 7/ = 7,8 Hz,7₂ = 18,0 Hz, 1H), 2,79 (d,7 = 12,9 Hz,

1H), 2,60 (d,7 = 18,0 Hz, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,32 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,68 (dd,

7, = 11,7 Hz, 7₂= 15,6 Hz, IH).

ESI-MS m/z počítáno pro C32H38N4O8: 606,67 Zjištěno (M+H)⁺ 607,3

-71 CZ 303536 B6

K roztoku 46 (8 mg, 0,013 mmol) v dioxanu (0,1 ml) byl přidán 5,3M roztok HCI v dioxanu (0,5 ml) a reakční směs byla míchána při teplotě 23 °C 1 h. Poté byl roztok naředěn pomocí CH₂C1₂ (5 ml) a propláchnut 0,lM HCI (3 ml). Organická vrstva byla vysušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem za vzniku sloučeniny 47 (5 mg, 70 %) ve formě bílé pevné látky, io

Rf: 0,4 (hexan:ethylacetát 1 : 5) ^lHNMR (300 MHz, CDC1₃):66,51 (s, 1H), 5,97 (d,7 = 1,2 Hz, 1H), 5,91 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 4,97 (bs, 1H), 4,11 (bs, 1H), 4,04 - 4,02 (m, 2 h), 3,75 (s, 3H), 3,65 (d, J = 2,1 Hz, 2 h), 3,56 3,30 (m, 2 h), 3,04 (dd, J, = 7,5 Hz, J₂ = 18 Hz, 1H), 2,80 (d, J= 14,4 Hz, 1H), 2,59 (d,7 =

18,3 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,76 (dd, Jj = 12,0 Hz, J₂ = 15,9 Hz, 1H),

1,33 (s, 3H), 1,25 (s, 3H).

ESI-MS m/z počítáno pro C30H34N4O7: 562,61 Zjištěno (M+H/ 563,3

Příklad 42

K roztoku 45 (10 mg, 0,0192 mmol) v CH₂C1₂ (0,3 ml) byl při teplotě 0 °C přidán isovalerylchlorid (2,34 μΐ, 0,00192 mmol) a pyridin (1,55 μΐ, 0,0192 mmol). Reakční směs byla míchána 1 h a poté byl roztok naředěn pomocí CH₂C1₂ (5 ml) a propláchnut 0,lM HCI (3 ml). Organická vrstva byla vysušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografíe (SiO₂, hexan:ethylacetát 1 : 2) za vzniku sloučeniny 48 (11 mg, 95 %) ve formě bílé pevné látky.

Rf: 0,12 (Hex:ethylacetát 1 : 2) 'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,50 (s, 1H), 5,98 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,91 (d,7 = 1,5 Hz, 1H),

5,75 (s, 1H), 5,02 (d, J =5,4 Hz, 1H), 4,10 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 4,06 (d, 7= 2,7 Hz, 1H), 4,02 (d,

-72CZ 303536 B6

J= 2,7 Hz, IH), 3,77 (s, 3H), 3,76 - 3,71 (m, IH), 3,86 - 3,28 (m, 3H), 3,04 (dd, J, = 8,1 Hz, J₂= 18,3 Hz, IH), 2,78 (d, J= 15,9 Hz, IH), 2,55 (d, J= 18 Hz, IH), 2,32 (s, 6H), 2,26 (s, 3H). 1,98 (s, 3H), 1,84 - 1,68 (m, 2 h), 1,36 (d, J= 7,2 Hz, 2 h), 0,69 (d, J= 6,6 Hz, 3H), 0,62 (d, 7=6,6 Hz, 3H).

ESI-MS m/z počítáno pro C33H40N4O7: 604,69 Zjištěno (M+H)⁺ 605,3

(49)

K roztoku 45 (10 mg, 0,0192 mmol) vCH₂C1₂ (0,3 ml) byl při teplotě 0 °C přidán isovalerylchlorid (2,34 μϊ, 0,0192 mmol) a pyridin (1,55 μϊ, 0,0192 mmol). Reakční směs byla míchána 1 h a poté byl roztok naředěn CH2CI2 (5 ml) a propláchnut 0,lM HCl (3 ml). Organická vrstva byla vysušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifíkován pomocí sloupcové chromatografie (SiO₂, hexan:ethylacetát 1 : 2) za vzniku sloučeniny 49 (12,4 mg, 96 %) ve formě bílé pevné látky.

Rf: 0,7 (ethylacetát:methanol 0:1).

*H NMR (300 MHz, CDClj: δ 6,50 (s, IH), 5,98 (d, J = 1,5 Hz, IH), 5,91 (d, 7= 1,5 Hz, IH), 5,74 (s, IH), 5,08 (t, J= 5,4 Hz, IH), 4,10 (d, J= 5,1 Hz, IH), 4,05 (m, IH), 4,01 (m, IH), 3,76 (s, 3H), 3,65-3,61 (m, IH), 3,40 - 3,27 (m, 3H), 3,03 (dd,/, = 8,l Hz,7₂ = 18,6 Hz, IH), 2,78 (d, J= 13,2 Hz, IH), 2,57 (d, J= 18,3 Hz, IH), 2,32 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 1,99 (s,

3H), 1,79 (dd, J, = 12,0 Hz, J₂ = 16,5 Hz, IH), 1,73 - 1,42 (m, 4H), 1,33 - 1,18 (m, 10H), 1,03 (m, 2 h), 0,87 (t, J= 6,6 Hz, 3H).

ESI-MS m/z počítáno pro C38H50N4O7: 674,83 Zjištěno (M+H)⁺ 675,5

-73CZ 303536 B6

K roztoku 45 (14,5 mg, 0,0278 mmol) v CH₂C1₂ (0,3 ml) byl při teplotě 0 °C přidán trans-3trifluormethylcinnamoylchlorid (4,76 μΙ, 0,0278 mmol) a pyridin (2,25 μΐ, 0,0278 mmol). Reakční směs byla míchána 1 h a poté byl roztok naředěn CH₂C1₂ (5 ml) a propláchnut 0,IM HCI (3 ml). Organická fáze byla vysušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO₂, hexan :ethylacetát 1 : 1) za vzniku sloučeniny 50 (18,7 mg, 94 %) ve formě bílé pevné látky.

io

Rf: 0,64 (ethylacetát:methanol 5:1).

^]H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,74 - 7,55 (m, 4H), 7,23 (d, J= 16,0 Hz, IH), 6,34 (s, IH), 6,12 (d, 7 = 16,0 Hz, IH), 6,07 (d, 7= 0,9 Hz, IH), 5,96 (d,.7 =0,9 Hz, IH), 4,39 (d,7= 2,4 Hz, IH), 4,07 -4,05 (m, 1 H), 3,81 (bs, IH), 3,46-3,51 (m, 3H), 3,42 (s, 3H), 3,09 (brd, 7= 12,0 Hz, IH), 2,94 - 2,85 (m, 2 h), 2,74 (d, 7= 18,3 Hz, IH), 2,38 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,80 (s,3H), 1,84- 1,75 (m, IH).

^,3C NMR (75 MHz, CDC1₃)): δ 168,7, 165,3, 146,5, 144,7, 142,6, 140,6, 138,0, 135,9, 131,0,

130,9, 129,1, 128,6, 125,8, 125,7, 124,5, 124,4, 122,7, 121,2, 117,8, 116,5, 113,0, 112,0, 101,7,

60,4, 59,1, 56,5, 56,4, 55,6, 55,3,41,8,40,3, 26,6, 25,1, 20,3, 15,4, 9,3.

ESI-MS m/z počítáno pro C₃₈H₃₇F₃N₄O₇: 718,72 Zjištěno (M+H)⁺ 719,3

K roztoku 43 (33 mg, 0,0557 mmol) v CH₂C1₂ (0,4 ml) byl při teplotě 0 °C přidán isovalerylchlorid (6,79 μΐ, 0,0557 mmol) a pyridin (4,5 μΐ, 0,0557 mmol). Reakční směs byla míchána 1 h a poté byl roztok naředěn CH₂C1₂ (5 ml) a promyt 0,lM HCI (3 ml). Organická fáze byla usušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO₂, hexan:ethylacetát 1 : 2) za vzniku sloučeniny 51 (34 mg, 91 %) ve formě bílé pevné látky.

Rf: 0,09 (Hex:ethylacetát 1 : 2).

'H NMR (300 MHz, CDCh): δ 6,46 (s, IH), 6,10 (bs, IH), 5,99 (d, 7 = 0,9 Hz, IH), 5,90 (d, 7 = 0,9 Hz, IH), 5,30 (t,7= 6,0 Hz, IH), 4,10-4,05 (m, 3H), 3,81 (bs, IH), 3,74 (s, 3H), 3,54 (bs, IH), 3,38 -3,36 (m, 1H), 3,29 - 3,21 (m, IH), 3,00 (dd,7/ - 8,0 Hz, J₂ = 18,0 Hz, IH), 2,25 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,95 - 1,90 (m, 3H), 0,87 (d, 7 = 6,6 Hz, 6H), 0,76 (d, 7=6,0 Hz, 3H).

ESI-MS m/z počítáno pro C₃₆H₄5N₅O₈: 675,77 Zjištěno (M+H)* 676,3

-74CZ 303536 B6

K roztoku 43 (33 mg, 0,0557 mmol) v CH₂C1₂ (0,4 ml) byl při teplotě 0 °C přidán trans-3-trifluormethylcinnamoylchlorid (9,52 μΐ, 0,0557 mmol) a pyridin (4,5 μΐ, 0,0557 mmol). Reakční směs byla míchána 1 h a poté byl roztok naředěn CH₂Cl₂ (5 ml) a promyt 0,lM HCÍ (3 ml). Organická vrstva byla vysušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO₂, hexan:ethylacetát 1 : 2) io za vzniku sloučeniny 52 (40 mg, 92 %) ve formě bílé pevné látky.

Rf: 0,21 (hexan.ethylacetát 1 : 2).

*H NMR (300 MHz, CD₃OD): δ 7,74 - 7,47 (m, 4H), 6,49 (s, IH), 6,40 (d, J= 15,6 Hz, IH),

6,00 (d, J= 1,5 Hz, IH), 5,90 (d, 1,5 Hz, IH), 5,47 (t, J- 6 Hz, IH), 4,12 - 4,09 (m, 3H), is 3,93 (bs, IH), 3,71 (s, 3H), 3,59-3,58 (m, IH), 3,38 (d,/ = 7,8 Hz, IH), 3,29 (d, J= 12,0 Hz,

IH), 3,00 (dd, Λ = 8,1 Hz, Λ = 18,3 Hz, IH), 2,79-2,79 (m, IH), 2,65 (d,/= 18,3 Hz, 1H),2,29 (s, 6H), 2,28 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 1,84 - 1,80 (m, IH), 0,85-0,84 (m, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 171,9, 168,8, 164,4, 146,9, 144,6, 143,0, 140,5, 140,5, 139,3,

135.7, 131,1, 131,0, 129,4, 129,1, 126,0, 124,1, 124,0, 122,4, 121,1, 120,7, 120,6, 117,7, 116,9,

112,8, 112,0, 101,6, 60,6, 59,3, 57,1, 56,3, 55,9, 55,2, 49,0, 41,7, 49,9, 26,5, 25,1, 20,2, 18,4,

15.7, 9,3.

ESI-MS m/z počítáno pro C4iH4₂F₃N₅O₈: 789,8. Zjištěno (M+H)⁺: 790,3

Příklad 47

K roztoku sloučeniny 43 (10 mg, 0,0169 mmol) v CH₂Cl₂ (0,2 ml) byl pri teplotě 23 °C přidán anhydrid trifluoroctové kyseliny (2,38 μΐ, 0,0169 mmol). Reakční směs byla míchána 5 h a poté

-75CZ 303536 B6 byl roztok naředěn CH₂C1₂ (5 ml) a promyt O,1M HC1 (3 ml). Organická vrstva byla vysušena pres síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO₂, hexan:ethylacetát 3:2) za vzniku sloučeniny 53 (10,7 mg, 93 %) ve formě bílé pevné látky.

Rf: 0,57 (ethylacetát:methanol 5:1).

^]H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,45 (s, IH), 6,00 (d, 7= 1,2 Hz, IH), 5,90 (d, 7= 1,2 Hz, IH), 5,87 (bs, IH), 5,32 (bs, IH), 4,12 (d, 7= 2,1 Hz, IH), 4,08 (d, 7= 1,8 Hz, IH), 3,78 -3,56 (m, 3H), 3,72 (s, 3H), 3,40 (d,7= 8,1 Hz, IH), 3,25 (d, 7=9,3 Hz, IH), 3,00 (dd,7, = 8,4 Hz, J₂ = 18,0 Hz, IH), 2,77 (dd, J, = 2,1 Hz, J₂ = 15,9 Hz, IH), 2,68 (d, 7= 18,6 Hz, IH), 2,30 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,75 (dd, 7, = 11,4 Hz, J₂ = 15,9 Hz, IH), 0,69 (d, 7=6,3 Hz, 3H).

^,3C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 170,1, 168,6, 156,0, 147,0, 144,6, 143,0, 140,6, 140,4, 131,0,

129,4, 120,9, 120,7, 117,6, 116,8, 112,4, 112,1, 101,6, 60,5, 59,0, 57,1, 56,3, 55,6, 55,2, 48,7,

41,6, 39,4,26,5, 24,9, 20,2, 17,8, 15,4, 9,2.

ESI-MS m/z počítáno pro C₃₃H₃₆F₃N₅O₈: 687,63. Zjištěno (M+H)⁺: 688,66

Příklad 48

K roztoku sloučeniny 19(11 mg, 0,0169 mmol) v CH₂C1₂ (0,2 ml) byl při teplotě 23 °C přidán anhydrid trifluoroctové kyseliny (2,38 μΐ, 0,0169 mmol). Reakční směs byla míchána 5 h a poté byl roztok naředěn CH₂C1₂ (5 ml) a promyt 0,lM HC1 (3 ml). Organická vrstva byla vysušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO₂, hexan:ethylacetát 3 : 2) za vzniku sloučeniny 54 (10,7 mg, 93 %) ve formě bílé pevné látky.

Rf: 0,6 (ethylacetát:methanol 5:1), ’H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,33 (d, 7= 6,3 Hz, 1H), 6,45 (s, IH), 6,04 (m, IH), 5,95 (d, 7 =

1,5 Hz, IH), 5,84 (d, 7= 1,5 Hz, IH), 5,32 (m, 2 h), 5,21 (m, IH), 4,11 (m, 4H), 3,73 (s, 3H), 3,64 (m, 2 h), 3,51 (m, IH), 3,37 (d, 7= 7,8 Hz, IH), 3,22 (m, 2 h), 3,03 (dd, 1H,7, = 8,1 Hz, J₂= 18,3 Hz, IH), 2,60 (d, 7= 18,3 Hz, IH), 2,29 (s, 3H), 2,24 (s, 3H),2,08 (s,3H), 1,86 (dd, 7,= 12 Hz,7₂= 16,2 Hz, IH), 0,82 (d,7= 7,2 Hz, 3H).

^,3C NMR (75 MHz, CDCI₃) δ 170,0, 156,0, 148,4, 147,1, 144,3, 143,0, 138,7, 133,8, 130,5,

129,4, 120,6, 120,4, 117,6, 117,5, 117,0, 113,5, 112,5, 112,4, 101,1, 74,1, 66,8, 60,4, 59,3, 56,9,

56,6, 56,3, 55,4, 48,7, 41,6, 40,1,26,2, 25,0, 17,6, 15,4, 9,1.

ESI-MS m/z počítáno pro C₃5H₃9F₃N₅O₇: 685,69. Zjištěno (M+H)*: 686,3

-76 CZ 303536 B6

Příklad 49

K roztoku 54 (100 mg, 0,145 mmol) v CH₂C1₂ (4 ml) byla při teplotě 23 °C přidána octová kyselina (40 ml), (PPh₃)₂PdCl₂ (8,4 mg, 0,012 mmol) a Bu₃SnH (15,7 ml, 0,56 mmol). Při této teplotě byla reakční směs míchána 2 h a poté nalita na sloupec separační kolony (SiO₂, gradient hexan:ethylacetát 2 : 1) za vzniku sloučeniny 55 (90 mg, 96 %) ve formě bílé pevné látky.

io Rf: 0,6 (hexan: ethyl acetát 1 : 2).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,55 (d, 7 = 7,2 Hz, IH), 6,45 (s, IH), 5,90 (d, J= 1,2 Hz, IH), 5,82 (d, 7= 1,2 Hz, IH), 5,37 (t, J= 6,0 Hz, IH), 4,15 (d, 7= 2,1 Hz, IH), 4,04 (d, 7= 1,8 Hz, IH), 3,70 (s, 3H), 3,66-3,53 (m, 2 h), 3,37-3,31 (m, 2 h), 3,19-3,15 (d,7= 11,7 Hz, IH), 3,08 - 3,00 (m, 2 h), 2,56 (d, 7= 18,3 Hz, IH), 2,30 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 1,91 (dd,

Ji = 12,0 Hz, J₂ = 6,9 Hz, 3H).

^BC NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 170,1, 156,3, 147,3, 144,9, 144,4, 143,3, 136,7, 130,7, 129,3,

120.6, 117,6, 117,4, 114,4, 112,1, 107,7, 101,0, 85,8, 60,5, 59,3, 56,5, 56,4, 56,2, 55,2, 48,9,

41.6, 40,9, 25,7, 25,3, 18,0, 15,6, 8,7.

ESI-MS m/z počítáno pro C₃₂H₃5F₃N₅O₇: 645,63. Zjištěno (M+H)⁺: 646,2

Příklad 50

(17) («I

K roztoku 17 (200 mg, 0,288 mmol) vCH₂Cl₂ (1,44 ml) byla přidána tifluoroctová kyselina (888 μΙ, 11,53 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě 23 °C 4 h. Reakce byla zastavena při teplotě 0 °C pomocí nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (60 ml) a extrahována ethylacetátem (2x 70 ml). Spojené organické vrstvy byly vysušeny (síran sodný) a

-77CZ 303536 B6 zakoncentrovány in vacuo za vzniku sloučeniny 56 (147 mg, 93 %) v podobě bílé pevné látky, která byla použita v následujících reakcích bez další purifikace.

Rf: 0,19 (ethylacetáfcmethanol 5 : 1).

*H NMR (300 MHz, CD₃OD): δ 6,48 (s, IH), 5,88 (d, 7= 0,9 Hz, IH), 5,81 (d, 7= 0,9 Hz, IH), 4,35 (d, J = 2,4 Hz, IH), 4,15 (d, J= 1,8 Hz, IH), 3,99 - 3,98 (m, IH), 3,70 (s, 3H), 3,52 - 2,96 (m, 7H), 2,68 (d, J= 18,3 Hz, IH), 2,24 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 1,85 (dd, J_s = 11,7 Hz,

7₂ = 15,6 Hz, IH), 0,91 (d,7=6,6 Hz, 3H).

¹³C NMR (75 MHz, CDCh) δ 173,2, 149,1, 145,6, 144,9, 138,0, 132,2, 130,6, 121,6, 119,6, 117,4, 114,3, 109,2, 102,5, 82,3, 60,4, 58,4, 58,3, 57,8, 56,6, 50,1, 42,3, 41,6, 27,8, 26,2, 19,5, 15,5,9,8.

ESI-MS m/z počítáno pro C₂₉H₃₅N_SO₆: 549,62. Zjištěno (M+H)⁺: 550,3

Příklad 51

Me (57)

K roztoku 56 (10 mg, 0,018 mmol) vCH₂Cl₂ (0,4 ml) byl přidán fenylisothiokyanát (13 μΐ, 0,109 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě 23 °C 1,5 h. Reakční směs byla zakoncentrována in vacuo a zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO₂, gradient hexan až po hexan:ethylacetát 1 : 1) za vzniku sloučeniny 57 (8 mg, 65 %) ve formě bílé pevné látky.

Rf: 0,57 (ethylacetát:methanol 10 : 1).

’H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,88 (bs, IH), 7,41 - 7,36 (m, 2 h), 7,27 - 7,22 (m, IH), 7,02 7,00 (d, J = 7,8 Hz, 2 h), 6,71 (d, J = 7,2 Hz, 1 H), 6,31 (s, IH), 6,17 (bs, IH), 5,93 (d, J= 1,2 Hz, IH), 5,83 (t, J= 1,2 Hz, IH), 5,55 (bs, IH), 5,20-5,17 (m, IH), 4,16 (d, 7 = 1,8 Hz, IH), 4,05 (bs, IH), 4,02 (d, 7- 2,4 Hz, IH), 3,79 (s, 3H), 3,75 - 3,71 (m, IH), 3,35 (d, 7= 7,8 Hz, IH), 3,28 - 3,19 (m, 2 h), 3,12 - 2,97 (m, 2 h), 2,50 (d, 7= 18,3 Hz, IH), 2,32 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,15 -2,09 (dd, 7, = 11,4 Hz, J₂ = 15,9 Hz, IH), 1,95 (s, 3H), 0,88 (d, 7= 6,9 Hz, 3H).

^,3C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 178,5, 171,7, 147,2, 145,0, 144,3, 143,3, 137,0, 135,7, 130,6,

130,4, 129,6, 127,5, 124,3, 120,6, 117,7, 117,2, 115,3, 112,1, 108,3, 100,9, 60,9, 59,5, 56,7, 56,5, 56,2, 55,2, 54,1,41,7, 41,1, 26,3, 25,4, 18,5, 15,8, 9,0.

ESI-MS m/z počítáno pro C₃6H₄oN₆0₆S: 684,81. Zjištěno (M+H)*: 685,3.

-78CZ 303536 B6

Příklad 52

(57) (58)

K roztoku 57 (45 mg, 0,065 mmol) v CH₂C1₂ (0,5 ml) byl přidán při teplotě 0 °C acetylchlorid (4,67 μΐ, 0,065 mmol) a pyridin (5,3 μΐ, 0,065 mmol). Reakční směs byla míchána 3 h a poté byl roztok naředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt 0,lM HCl (5 ml). Organická vrstva byla vysušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (RP-18, CH₃CN:H₂O 40:60) za vzniku sloučeniny 58 (14 mg, io 28 %) ve formě bílé pevné látky.

Rf; 0,34 (CH₃CN: H₂O 7 : 15).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 11,90 (d, J = 6,6 Hz, IH), 7,45 -- 7,40 (m, 3H), 7,18 - 7,15 (m,2h), 6,58 (s, IH), 6,00 (d,7 = 1,2 Hz, IH), 5,89 (d, J= 1,2 Hz, IH), 5,70 (s, IH), 5,37 (t, J = 4,8 Hz, IH), 4,48 (m, IH), 4,23 (bs, IH), 4,07 (bs, 2 h), 3,85 - 3,75 (m, IH), 3,70 (s, 3H), 3,46 3,41 (m, 2 h), 3,24 - 3,20 (m, IH), 3,00 - 2,95 (m, IH), 2,87 - 2,75 (m, IH), 2,31 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,00 (s,3H), 1,85 (dd,7,= 11,4 Hz,7₂= 15,6 Hz, IH), 1,66 (s, 3H), 0,82 (d,

7=6,0 Hz, 3H).

^,3C NMR (75 MHz, CDC1₃) δ 182,6, 174,3, 171,0, 146,6, 144,6, 142,7, 142,3, 140,7, 140,2, 131,3, 129,8, 129,3, 128,9, 128,8, 121,5, 120,4, 117,3, 116,6, 112,8, 112,0, 111,3, 101,5, 60,5, 59,0, 57,6, 56,2, 55,9, 55,3, 55,1, 41,6, 39,4, 27,8, 26,5, 24,8, 20,2, 17,1, 15,5, 9,3.

ESI-MS m/z počítáno pro C₄oH₄₄N₆0₈S: 768,88. Zjištěno (M+H)⁺: 769,2

Příklad 53

Me

(W) (59)

K roztoku 57 (130 mg, 0,189 mmol) v dioxanu (1 ml) byl přidán 5,3M HCl/dioxan (1,87 ml) a reakční směs byla při teplotě 23 °C míchána 4 h. Poté byl k reakční směsi přidán CH₂CI₂ (15 ml) a H₂O (10 ml) a organická fáze byl odcentrifugována. Vodná fáze byla alkalízována pomocí roz-79CZ 303536 B6 toku saturovaného hydrogenuhličitanu sodného (60 ml) (pH 8) při teplotě 0 °C a poté extrahována pomocí ethylacetátu (2x 50 ml). Spojené organické extrakty byly vysušeny (síran sodný) a zakoncentrovány in vacuo za vzniku sloučeniny 59 (63 mg, 70 %) ve formě bílé pevné látky.

Rf: 0,15 (ethylacetát:methanol 5:1).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,67 (s, 1H), 5,99 (d, J= 0,9 Hz, 1H), 5,91 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,10 (bs, 1H), 4,32 (d, 7=7,2 Hz, 1H), 4,25 (dd, 7/ = 3,6 Hz, J₂ = 9,3 Hz, 1H), 3,7 (s,3H),3,71 3,64 (m, 2 h), 3,50 (dd, J, = 2,4 Hz, J₂ = 15,9 Hz, 1H), 3,42 - 3,37 (m, 2 h), 3,16 (dd, 7/ = 3,6 Hz, J₂ = 12,9 Hz, 1H), 2,57 (dd, J_: = 9,3 Hz, J₂ = 12,9 Hz, 1H), 2,27 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,91 (dd, ίο 7/= 12,0 Hz, 7₂ = 15,9 Hz, 1H).

ESI-MS m/z počítáno pro C₂₆H₃0N₄O₅: 478,5. Zjištěno (M+H)⁺: 479,3

Příklad 54

(<3)

Trans-CtHeOO, Py CHtCíj. lh,0*C

(W)

K roztoku 43 (20 mg, 0,0338 mmol) v CH₂C1₂ (0,3 ml) byl při teplotě 0 °C přidán cinnamoylchlorid (5,63 ml, 0,0338 mmol) a pyridin (2,73 ml, 0,0338 mmol). Reakční směs byla míchána 1 h a poté byl roztok naředěn CH₂C1₂ (10 ml) a propláchnut 0,lM HCl (5 ml). Organická vrstva byla vysušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO₂, EtOAc:MeOH 20 : 1) za vzniku sloučeniny 60 (22 mg, 90 %) ve formě bílé pevné látky.

Rf: 0,56 (EtOAc-.MeOH 5:1).

*H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 7,51 (s, 1H), 7,50 - 7,47 (m, 2H), 7,36 - 7,35 (m, 2H), 6,43 (s, 1H), 6,36 (brd, J= 15,9 Hz, 2H),6,01 (d,7= 1,5 Hz, 1H), 5,90 (brd, J~- 1,5 Hz, 2H), 5,42 (t, 7 = 6,0 Hz, 1H), 4,12 - 4,07 (m, 3H), 3,96 - 3,95 (m, 1H), 3,73 (bs, 3H), 3,58 (bs, 2H), 3,39 (d,

7=8,7Hz, 1H), 3,25 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 3,0 (dd, 7, = 7,5 Hz, J₂ = 17,7 Hz, 1H), 2,78 (d,

J= 15,9 Hz, ΪΗ), 2,67 (d, J= 16,5 Hz, 1H), 2,29 (s, 6H), 2,23 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,82 (dd,

Ji = 11,4 Hz, = 15,6 Hz, 1H), 0,83 (d, 7=6,0 Hz, 3H).

^t3C NMR (75 MHz, CDCI₃) δ 172,0, 165,0, 146,9, 144,6, 143,1, 141,0, 140,5, 134,8, 131,0, 129,7, 129,1, 128,8, 127,8, 125,5, 123,8, 123,0, 121,1, 120,5, 117,7, 116,9, 112,8, 112,0, 101,9,

60,6, 59,2, 57,1,56,4, 55,9, 55,3, 48,8, 41,7, 40,0, 26,5, 25,1, 20,3, 18,5, 15,7, 9,3.

ESI-MS m/z počítáno pro C₄₀H₄₃N₅O8: 721,8. Zjištěno (M+H)*: 722,3

-80 CZ 303536 B6

Příklad 55

C3F7COCI, py

CH₂C)₂.1h.0*C (46)

(61)

Roztok 45 (I9mg, 0,0364 mmol) v CH₂C1₂ (0,3 ml) byl při teplotě 0 °C přidán heptafluorbutyrylchlorid (5,44 μΙ, 0,0364 mmol) a pyridin (2,95 ml, 0,0364 mmol). Reakční směs byla míchána 1 h a poté byl roztok naředěn CH₂C1₂ (10 ml) a propláchnut 0,lM HCI (5 ml). Organická vrstva byla vysušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO₂, AtOAc.MeOH 20 : 1) za vzniku sloučeniny 61 (11,7 mg, 45 %) ve formě bílé pevné látky.

Rf: 0,76 (EtOAc:MeOH 5:1).

’H NMR (300 MHz, CDCE): δ 6,46 (s, 1H), 6,12 (bs, 1H), 5,98 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 5,93 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,72 (bs, 1H), 4,13-4,11 (m, 2H), 4,0 (d,7=2,4 Hz, 1H), 3,98 - 3,96 (m, 1H),

3,73 (s, 3H), 3,39 (d, 7= 7,5 Hz, 1H), 3,39 - 3,28 (m, 2H), 3,09 (dd, 7, = 8,1 Hz, J₂ = 18,0 Hz,

IH), 2,80 (d, 7= 16,2 Hz, 1H), 2,46 (d,7= 18, Hz, 1H), 2,32 (s, 6H), 2,21 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,80 (dd, 7/ = 12,0 Hz, J₂ = 16,2 Hz, IH).

ESI-MS m/z počítáno pro C32H31F7N4O7: 716,6. Zjištěno (M+H)⁺: 717,2

Příklad 56

K roztoku 43 (24 mg, 0,04 mmol) v CH₂C1₂ (0,3 ml) byl při teplotě 0 °C přidán butyrylchlorid (4,15 μΐ, 0,04 mmol) a pyridin (3,28 μΐ, 0,04 mmol). Reakční směs byla míchána 1 h a poté byl roztok naředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt 0,1 M HCI (5 ml). Organická vrstva byla vysušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifikován pomo30 cí sloupcové chromatografie (SiO₂, AtOAc:MeOH 20 : 1) za vzniku sloučeniny 62 (24 mg, 90 %) ve formě bílé pevné látky.

-81 CZ 303536 B6

Rf: 0,35 (EtOAc:MeOH 5 : 1).

*H NMR (300 MHz, CDCb): δ 6,47 (s, IH), 6,10 (d, / = 6,5 Hz, IH), 6,0 (d, J= 1,5 Hz, IH), 5,91 (d, J= 1,5 Hz, IH), 5,86 (bs, IH), 5,31 (d,/=6,9 Hz, IH), 4,11-4,06 (m, 3H), 3,85 -3,81 (m, IH), 3,75 (s, 3H), 3,59 - 3,53 (m, 2H), 3,38 (d, /= 7,5 Hz, IH), 3,27 - 3,22 (m, IH), 3,0 (dd, /₇ = 7,8 Hz, J₂ = 17,4 Hz, IH), 2,79 (dd, /= 15,3 Hz, IH), 2,63 (d, /= 17,7 Hz, IH), 2,31 (s,

3H), 2,0 (s, 3H), 1,80 (dd, /, = 12,0 Hz, J₂ = 15,9 Hz, IH), 1,59 (q, / = 7,2 Hz, 2H), 0,89 (t, /= 7,2 Hz, 3H), 0,76 (d,/= 6,6 Hz, 3H).

ESI-MS m/z počítáno pro C33H43N5O8: 716,6. Zjištěno (M+H)⁺: 717,2

Příklad 57

OMe

K roztoku 43 (19 mg, 0,0364 mmol) v CH₂C1₂ (0,3 ml) byl při teplotě 0 °C přidán cinnamoylchlorid (6,06 mg, 0,0364 mmol) a pyridin (2,95 μΐ, 0,0364 mmol). Reakční směs byla míchána 1 h a poté byl roztok naředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt O,1M HCl (5 ml). Organická vrstva byla vysušena přes síran sodný a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifíkován pomocí sloupcové chromatografie (SiO₂, AtOAc:MeOH 20:1) za vzniku sloučeniny 63 (20,1 mg, 85 %) ve formě bité pevné látky.

Rf: 0,65 (EtOAcrMeOH 5:1).

'H NMR (300 MHz, CDCb): δ 7,39 - 7,29 (m, 5H), 6,42 (s, IH), 6,01 (d, / = 1,5 Hz, IH), 5,92 (d, / = 1,5 Hz, IH), 5,73 (bs, IH), 5,24 (t, /= 6,8 Hz, IH), 4,12 - 4,08 (m, 3H), 3,66 - 3,64 (m,

2H), 3,58 (bs, 3H), 3,36 (d,/= 8,7 Hz, IH), 3,29 (d, /-12,0 Hz, IH), 2,98 (dd, /, = 8,1 Hz, J₂ = 18 Hz, IH), 2,33 (s, 6H), 2,29 (s, 3H), 2,01 (s, 3H), l,84(dd,/_z = 12,0 Hz,/₂ = 15,9 Hz, IH). ESI-MS m/z počítáno pro C37H38N4O7: 650,72. Zjištěno (M+H)⁺: 651,2

-82CZ 303536 B6

K roztoku 43 (20 mg, 0,0338 mmol) v CH₂C1₂ (0,3 ml) byl při teplotě 0 °C přidán 3-chlorpropionylchlorid (3,22 ml, 0,0338 mmol) a pyridin (2,73 μί, 0,0338 mmol). Reakční směs byla míchána 1 h a poté byl roztok naředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt 0,lM HC1 (5 ml). Organická vrstva byla vysušena přes síran sodný a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifíkován pomocí sloupcové chromatografie (SiO₂, AtOAc:MeOH 20 : 1) za vzniku sloučeniny ío 64 (20,5 mg, 89 %) ve formě bílé pevné látky.

Rf: 0,32 (EtOAc:Hexan 5:1).

’H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,48 (s, 3H), 6,28 (m, IH), 5,99 (d, J= 1,2 Hz, IH), 5,91 (d, 7- 1,2 Hz, IH), 5,86 (bs, IH), 5,31 (m, IH), 4,08 - 4,07 (m, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,72 - 3,53 (m,

5H), 3,39 (d, 7= 8,1 Hz, IH), 3,24 (d,7= 12,0 Hz, IH), 3,00 (dd,7, = 8,1 Hz,7₂= 18,0 Hz, IH),

2,79 (d, 7= 13,5 Hz, IH), 2,50 (t, 7 = 6,3 Hz, 2H), 2,32 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,0 (s,3H), 1,79 (dd,7,= 12,3 Hz, J₂= 14,8 Hz, IH), 0,81 (d,7=6,3 Hz, 3H).

K roztoku 43 (19 mg, 0,0364 mmol) v CH₂C1₂ (0,3 ml) byl při teplotě 0 °C přidán butyrylchlorid 25 (3,78 μί, 0,0364 mmol) a pyridin (2,95 μί, 0,0364 mmol). Reakční směs byla míchána 1 h a poté byl roztok naředěn CH₂C1₂ (10 ml) a promyt 0,lM HC1 (5 ml). Organická vrstva byla vysušena přes síran sodný a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifíkován pomocí sloupcové chromatografie (SÍO₂, AtOAc:MeOH 20 : 1) za vzniku sloučeniny 64 (19 mg, 87 %) ve formě bílé pevné látky.

-83CZ 303536 B6

Rf: 0,60 (EtOAc:MeOH 5:1).

*H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,50 (s, 1H), 5,98 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,91 (d,7 = 1,5 Hz, 1H), 5,75 (s,lH), 5,01 (t, 7= 6,4 Hz, 1H), 4,10 - 4,09 (m, 1H), 4,06 (d, 7= 2,1 Hz, 1H), 4,03 - 4,02 (m, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,67 - 3,60 (m, 1H), 3,42 -3,35 (m, 2H), 3,29 (d, 7= 12,0 Hz, 1H), 3,02 (dd, 7, = 7,8 Hz, J₂ = 17,7 Hz, 1H), 2,79 (d, 7, = 14,1 Hz, 1H), 2,56 (d, 7= 18,3 Hz, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 1,78 (dd, 7, = 12,0 Hz, J₂ = 15,9 Hz, 1H), 1,63 (s, 3H), 1,53 1,46 (m, 2H), 1,28 - 1,16 (m, 2H), 0,68 (t, 7= 7,2 Hz, 3H).

ESI-MS m/z počítáno pro ίΑΗ^Ν,ιΟγ'. 590,67. Zjištěno (M+H)⁺: 591,2 io

Příklad 60

K roztoku 50 (31,7 mg, 0,044 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/0,5 ml) byl přidán AgNO₃ (225 mg, 1,32 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě 23 °C 17 h. Poté byl přidán solný roztok (10 ml) a vodou saturovaný roztok NaHCO₃ (10 ml) a reakční směs byla míchána 15 min, zfiltrována přes vrstvu celitu a promyta CH₂CI₂ (20 ml). Roztok byl zcentrifugován a organická fáze byla vysušena a zakoncentrována in vacuo. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO₂, AtOAc:MeOH 5 : 1) za vzniku sloučeniny 66 (16 mg, 51 %) ve formě bílé pevné látky.

Rf: 0,26 (EtOAc:MeOH 5:1).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,66 - 7,42 (m, 4H), 7,20 (bs, 1H), 6,44 (s, 1H), 5,97 (b. 7- 1,2 Hz, 1H), 5,90 (d, 7 = 1,2 Hz, 1H), 5,76 (bs, 1H), 5,28 (bs, lH),4,54(bs, 1H),4,43 (bs, 1H), 4,00 (bs, 1H), 3,68-3,57 (m, 4H), 3,47 (d,7=3,3 Hz, 1H),3,4O (d, 7 = 11,7 Hz, 1H), 3,17 (d, 7= 6,9 Hz, 1H), 2,92 (dd, 7/= 8,1 Hz,7₂ = 17,7 Hz, 1H), 2,74 (d, 7= 17,1 Hz, 1H), 2,48 (d, 7= 18,6 Hz, 1H), 2,32 (s, 6H), 2,28 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), l,7ó(dd,7, = 12,0 Hz,7₂= 16,2 Hz, 1H).

ESI-MS m/z počítáno pro C₃₇H₃₈F₃N₃O₈: 709. Zjištěno (M+H)⁺: 692,3

-84CZ 303536 B6

Me O fc3)

AgNOa.CHsCN/HzO

24h.23*Č

Me O (67)

K roztoku 53 (57 mg, 0,0828 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/0,5 ml) byl přidán AgNO₃ (650 mg, 3,81 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě 23 °C 24 h. Poté byl přidán solný roztok (10 ml) a vodou saturovaný roztok NaHCO₃ (10 ml) a reakční směs byla míchána 15 min, zfiltrována přes vrstvu celitu a promyta CH₂C1₂ (20 ml). Roztok byl zcentrifugován a organická fáze byla vysušena a zakoncentrována in vacuo. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO₂, AtOAc:MeOH 5 : 1) za vzniku sloučeniny 67 (28 mg, 50 %) ve formě bílé pevné látky.

Rf: 0,28 (EtOAc:MeOH 10:1).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,47 (s, IH), 5,97 (s, IH), 5,88 (s, IH), 5,35 (bs, IH), 4,51 (bs, IH), 4,41 (bs, IH), 4,12-4,05 (m, IH), 4,00 (d, J= 2,7 Hz, IH), 3,77 (s, 3H), 3,64 (bs, IH), 3,46 (d, J= 3,3 Hz, IH), 3,34 (d, J= 11,4 Hz, IH), 3,18 (d, /= 7,5 Hz, IH), 2,95 (dd, J, = 8,4

Hz, Λ - 18,3 Hz, IH), 2,70 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 2,48 (d, J = 17,7 Hz, IH), 2,28 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,26 (s,3H), 1,98 (s, 3H), 1,68 (dd,J/= 12 Hz, Λ = 15,6 Hz, IH), 0,86 (d,.7=6,3 Hz,3H).

ESI-MS m/z počítáno pro C₃₂H₃₇F₃N4O₉: 678,66. Zjištěno (M+H)⁺: 661,2

K roztoku 48 (32 mg, 0,0529 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/0,5 ml) byl přidán AgNO₃ (270 mg, 1,58 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě 23 °C 24 h. Poté byl přidán solný roztok (10 ml) a vodou saturovaný roztok NaHCO₃ (10 ml) a reakční směs byla míchána 15 min, zfiltrována přes vrstvu celitu a promyta CH₂C1₂ (20 ml). Roztok byl zcentrifugován a organická fáze byla vysušena a zakoncentrována in vacuo. Zbytek byt purifikován pomocí sloupcové chromatografíe (SiO₂, AtOAciMeOH 5 : 1) za vzniku sloučeniny 68 (18 mg, 56 %) ve formě bílé pevné látky.

-85CZ 303536 B6

Rf: 0,40 (EtOAc:MeOH 5:1).

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,50 (s, 1H), 5,95 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,88 (d, 7 = 1,2 Hz, 1H), 5,23 (d, 7= 6,9 Hz, 1H), 4,45 (d, 7= 3,3 Hz, 1H), 4,38 (s, 1H), 4,01 (d, 7= 2,4 Hz, 1H), 3,78 (m, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,41 - 3,37 (m, 1H), 3,17 - 3,15 (m, 1H), 2,96 (dd, 7, = 7,8 Hz, J₂ = 18,0 Hz,

1H), 2,70 (d, 7= 15,3 Hz, 1H), 2,40 (d, 7= 18,0 Hz, lh), 2,30 (s, 6H), 2,27 (s, 3H), 1,76 - 1,6 (m, 1H), 1,35 - 1,25 (m, 2H), 0,89 - 0,82 (m, 1H), 0,69 (d, 7= 6,6 Hz, 3H), 0,58 (d, 7= 6,6 Hz, 3H)

K roztoku 51 (27 mg, 0,04 mmol) v CH₃CN/H2O (1,5 ml/0,5 ml) byl přidán AgNO₃ (204 mg,

1,19 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě 23 °C 24 h. Poté byl přidán solný roztok (10 ml) a vodou saturovaný roztok NaHCO₃ (10 ml) a reakční směs byla míchána 15 min, zfiltrována přes vrstvu celitu a promyta CH2CI2 (20 ml). Roztok byl zcentrifugován a organická fáze byla vysušena a zakoncentrována in vacuo. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO₂, AtOAc:MeOH 5 : 1) za vzniku sloučeniny 69 (10 mg, 38 %) ve formě bílé pevné látky.

Rf: 0,38 (EtOAc:MeOH 5:1).

*H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,48 (s, 1H), 6,16 (bs, 1H), 5,98 (d,7= 1,5 Hz, 1H), 5,89 (d,7 = 1,5 Hz, 1H), 5,33 (t,7= 6,0 Hz, 1H), 4,50 (m, 1H), 4,40 (m, 1H), 4,11 -4,09 (m, 1H), 4,00 (d,

7= 2,6 Hz, IH), 3,78 (s, 3H), 3,41 - 3,32 (m, 3H), 3,18 (d, J= 8,4 Hz, IH), 2,94 (dd, 7/ = 8,4 Hz,

J₂= 18,3 Hz, IH), 2,70 (d,7= 14,4 Hz, 1H),4,45 (d,7= 18,3 Hz, IH), 2,31 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 2,00 - 1,86 (m, 3H), 1,73 (m, 1H), 0,87 (d,7- 6,3 Hz, 6H).

-86CZ 303536 B6

Příklad 64

K. roztoku 63 (15 mg, 0,023 mmol) v CH₃CN/H₂O (1,5 ml/0,5 ml) byl přidán AgNO₃ (118 mg, 0,691 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě 23 °C 24 h. Poté byl přidán solný roztok (10 ml) a vodou saturovaný roztok NaHCO₃ (10 ml) a reakční směs byla míchána 15 min, zfiltrována přes vrstvu celitu a promyta CH₂C1₂ (20 ml). Roztok byl zcentrifugován a organická fáze byla vysušena a zakoncentrována in vacuo. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatoio grafie (SiO₂, AtOAe:MeOH 5 : 1) za vzniku sloučeniny 70 (20,1 mg, 85 %) ve formě bílé pevné látky.

Rf: 0,43 (EtOAc:MeOH 5:1).

^[H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 7,38 - 7,28 (m, 5H), 6,48 (s, IH), 5,98 (d, J= 1,5 Hz, IH), 5,91 15 (d, J= 1,5 Hz, IH), 5,75 (bs, IH), 5,38 (brd, IH), 5,30 (bs, IH), 4,53 (m, IH), 4,42 (m, IH), 4,02 (d, J= 2,7 Hz, IH), 3,78 - 3,65 (m, 5H), 3,46 - 3,40 (m, 2H), 3,17 (d, J= 7,8 Hz, IH), 2,94 (dd, J, = 7,8 Hz, J₂ = 17,7 Hz, 1H), 2,73 (d, J = 16,8 Hz, 1H), 2,45 (d, J = 18,0 Hz, 1H), 2,31 (s, 6H), 2,28 (s, 3H), 1,97 (s, 3H), 1,77 (dd,/, = 12,0 Hz,Λ = 15,3 Hz, IH).

K roztoku 65 (25 mg, 0,042 mmol) vCH₃CN/H₂O (1,5 ml/0,5 ml) byl přidán AgNO₃ (215,56 mg, 1,269 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě 23 °C 24 h. Poté byl přidán solný roztok (10 ml) a vodou saturovaný roztok NaHCO₃ (10 ml) a reakční směs byla míchána 15 min, zfiltrována přes vrstvu celitu a promyta CH₂C1₂ (20 ml). Roztok byl zcentrifugován a organická fáze byla vysušena a zakoncentrována in vacuo. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chro30 matografie (SiO₂, AtOAc:MeOH 5 : 2) za vzniku sloučeniny 71 (16 mg, 65 %) ve formě bílé pevné látky.

-87CZ 303536 B6

Rf: 0,05 (EtOAc:MeOH 5 : 2), ^]H NMR (300 MHz, CDClj: δ 6,50 (s, IH), 5,95 (d,J=l,5 Hz, IH), 5,78 (s, lH),5,19(bs, IH), 4,45 (d, 7=3,3 Hz, IH), 4,37 (bs, IH), 4,11 (brd, 7= 4,8 Hz, 1H),4,O1 (d,7=2,l Hz, IH), 3,76 (s, IH), 3,71 -3,69 (m, IH), 3,49-3,35 (m, IH), 3,24 (d, 7= 13,5 Hz, 1H),3,15 (d,7=9,3 Hz,

IH), 2,95 (dd, J_} = 8,1 Hz, J₂ = \Ί,Ί Hz, IH), 2,70 (d, J= 15,6 Hz, IH), 2,40 (d, 7= 18,0 Hz, IH), 2,31 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 1,96 (s, 3H), 1,75 - 1,66 (m, IH), 1,52 - 1,17 (m, 2H), 0,66 (t, 7=7,2 Hz, 3H).

Zkvašovací procesy

Příklad A

Kultivační médium ZMP3 obsahující 1% glukózu, 0,25% hovězí vývar, 0,5% bekto-pepton,

0,25% NaCl a 0,8% CaCO₃ bylo naočkováno 0,1% zmraženou vegetativní kulturou mikroorganismu Pseudomonas fluorescens, kmen A2-2. Bakteriální kultura byla inkubována na rotační třepačce (250 ot/min) při teplotě 27 °C. Po 30h inkubaci byla kultura přenesena do fermentoru, kde za stálého třepání probíhala další inkubace v produkčním médiu obsahujícím 2% dextrosu, 4% manitol, 2% sušené pivovarnické kvasnice (vitalevor R Biolux, Belgie), 1% (NHJ2SO4,

0,04% K₂HPO₄, 0,8% KCl, 0,001% FeCl₃,0,l% L-Tyr, 0,8% CaCO₃, 0,05% PPG-200, 0,2% protipěnivého silikonu (ASSAF-100, RHODIA UK). Sterilizace proběhla při teplotě 122 °C 30 min. Zaočkovaný objem byl 2 % (v/v). Teplota byla 27 °C (0 až 16 h) a 24 °C od 16 h až do konečného zpracování (41 h). Kultura rostla v kyslíkové atmosféře 25%. pH bylo udržováno na hodnotě 6,0 pomocí kyseliny sírové od 28h inkubace až do konečného zpracování. Přetlak byl 50 kPa (0,5 bar). Od 16h kultivace byl do kultivačního média přidán 1% manitol nebo sorbol (na 2 dny) a 2% manitol nebo sorbol na 3 dny v období fermentačního procesu.

Po 41 nebo 64 hodinách se extrahuje fermentační médium pro získání safracinu B, nebo po přidání KCN do kultivačního média je možné z vyčeřeného média získat kyanosafracin B.

Příklad B

Získání kyanosafracínu B z hrubého extraktu

Vy čeření nebo filtrace fermentačního média při pH 6 odstraní pevné části. Vy čeřené kultivační médium bylo nastaveno na pH 9,5 pomocí naředěného hydroxidu sodného a dvakrát extrahováno pomocí 2 : 1 (v/v) ethylacetátu, methylenchloridu nebo butylacetátu. Extrakce probíhala za stálého třepání 20 min, teplota směsi byla udržována v rozmezí 8 až 10 °C. Obě fáze byly centrifugací odděleny a organická fáze byla vysušena pomocí bezvodého síranu sodného. Jiným způsobem separace je zamražení a poté filtrace pro odstranění krystalů ledu. Organická fáze (ethylacetátová vrstva) byla odpařována do té doby, až byl získán olejovitý hrubý extrakt.

Příklad C

Vy čeření nebo filtrace fermentačního média při pH 6 odstraní pevné části. Vy čeřené kultivační médium bylo nastaveno na pH 3,9 pomocí koncentrované kyseliny octové. Do vyčeřeného extraktu byl přidán KCN v koncentraci 0,5 g na litr média a reakční směs byla za stálého míchání inkubována při teplotě 20 °C 1 h. Poté byla teplota snížena na 15 °C a pH bylo pomocí naředěného hydroxidu sodného nastaveno na hodnotu 9,5. Reakční směs byla extrahována pomocí 2:1,5 (v/v) ethylacetátu. Extrakce probíhala za stálého třepání 20 min, teplota směsi byla udržována v rozmezí 8 až 10 °C. Centrifugací byly odděleny obě fáze. Organická fáze byla vysušena pomocí bezvodého síranu sodného. Organická fáze (ethylacetátová vrstva) byla odpařována tak dlou55 ho, až byl získán olejovitý hrubý extrakt. Tento extrakt byl purifikován pomocí sloupcové chro-88CZ 303536 B6 matografie (SiO₂, gradient 20 : 1 přes 1 : 1 až po 5 : 1 ethyl acetát: methanol) za kvantitativního vzniku sloučeniny 2 ve formě světle žluté pevné látky.

Rf: 0,55 (ethylacetát:methanol 5 : 1); t_R = 19,9 min [HPLC, Delta Pack C4, 5μπι, 300 A, 5 150x3 mm, λ=215 nm, flow = 0,7 ml/min, temp = 50 °C, grád.: CH₃CN-aq. NaOAc (10mM)

85%-70% (20')];

^lH NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 6,54 (dd, J, = 4,4 Hz, J₂ = 8,4 Hz, 1H), 6,44 (s, IH), 4,12 (d, J = 2,4 Hz, IH), 4,04 (d, J = 2,4 Hz, IH), 4,00 (s, 3H), 3,87 (bs, IH), 3,65 (ddd, 7/ = 1,5 Hz, J₂ = 8,7 Hz, J₃ = 9,9 Hz, IH), 3,35 (br. D. ./= 8,4 Hz, IH), 3,15 - 2,96 (m, 4H), 2,92 (q, J = 7,2

Hz, IH), 2,47 (d, J= 18,3 Hz, IH), 2,29 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), 1,83 (s, 3H), 1,64 (ddd, J_} = 2,7 Hz. 11,1 Hz,Λ = 14,1 Hz, IH), 0,79 (d, 7= 7,2 Hz, 3H);

¹³C NMR (75 MHz, CDCh): δ 186,0 (q), 175,9 (q), 156,2 (q), 146,8 (q), 142,8 (q), 140,7 (q), 136,6 (q), 130,5 (q), 128,8 (q), 127,0 (q), 120,5 (s), 117,4 (q), 116,5 (q), 60,8 (t), 60,4 (s), 58,7 (t), 56,2 (s), 55,7 (s), 54,8 (s), 54,8 (s), 54,4 (s), 50,0 (s), 41,6 (t), 39,8 (d), 25,2 (d), 24,4 (d), 21,2 (t), 15,5 (t), 8,4 (t).

ESI-MS m/z počítáno pro C29H35N5O6: 549,6. Zjištěno (M+H)⁺: 572,3

Příklad D

Médium (50 1) složené z 2% dextrosy, 4% mannitolu, 2% sušených pivovarnických kvasnic, 1% síranu amonného, 0,04% hydrogenfosforečnanu draselného, 0,8% chloridu draselného, 0,001% chloridu železitého, 0,1% L-tyrosinu, 0,8% uhličitanu vápenatého, 0,05% polypropylenglykolu

2000 a 0,2% protipěnivé sloučeniny ASSAF 1000 bylo nalito do fermentační nádoby o objemu

1 a po sterilizaci naočkováno 2% kulturou kmene A2-2 (FERM BP-14). Kultivace za přístupu vzduchu probíhala při teplotě od 27 do 24 °C po dobu 64 h (provzdušňování 75 1 za minutu a třepání 350 až 500 otáček za minutu). pH bylo kontrolováno pomocí automatického přidávání ředěné kyseliny sírové od 27. hodiny kultivace až po finální zpracování. Od 16. hodiny kultivace byl přidán 2% manitol. Po odcentrifugování buněk bylo získáno médium (45 1) a pomocí ředěného hydroxidu sodného bylo pH nastaveno na 9,5. Poté bylo dvakrát extrahováno 25 litry ethylacetátu. Extrakce probíhala za stálého třepání při teplotě 8 °C 20 min. Centrifugací byly odděleny obě fáze. Organické fáze byly zamraženy na teplotu -20 °C a zfiltrovány pro odstranění krystalků ledu a odpařovány až do okamžiku, kdy bylo získáno 40 g olejově tmavého hrubého extraktu. Po zavedení kyanidové skupiny a purifikaci bylo získáno 3,0 g kyanosafracinu B.

Příklad E

Médium (50 1) složené z 2% dextrosy, 4% manitolu, 2% sušených pivovarnických kvasnic, 1% síranu amonného, 0,02% hydrogenfosforečnanu draselného, 0,2% chloridu draselného, 0,001% chloridu železitého, 0,1% L-tyrosinu, 0,8% uhličitanu vápenatého, 0,05% polypropylenglykolu 2000 a 0,2% protipěnivé sloučeniny ASSAF 1000 bylo nalito do fermentační nádoby o objemu 75 1 a po sterilizaci naočkováno 2% kulturou kmene A2-2 (FERM BP-14). Kultivace za přístupu vzduchu probíhala při teplotě od 27 do 24 °C po dobu 41 h (provzdušňování 75 1 za minutu a třepání 350 až 500 otáček za minutu). pH bylo kontrolováno pomocí automatického přidávání ředěné kyseliny sírové od 28. hodiny kultivace až po finální zpracování. Od 16. hodiny kultivace byl přidán 1% manitol. Po odcentrifugování buněk bylo získáno médium (45 I) a pomocí 200 ml koncentrované kyseliny octové bylo pH nastaveno na 3,9. Bylo přidáno 25 g 97% KCN a po 1 h třepání bylo pH média pomocí 1500 ml 10% roztoku hydroxidu sodného nastaveno na hodnotu 9,5. Poté bylo médium extrahováno 35 litry ethylacetátu. Extrakce probíhala za stálého třepání při teplotě 8 °C 20 min. Centrifugací byly odděleny obě fáze. Organické fáze byly vysušena pomocí bezvodého síranu sodného a odpařována do okamžiku, kdy bylo získáno 60 g olejově tmavého hrubého extraktu.

-89CZ 303536 B6

Po chromatografické separaci bylo získáno 4,9 g kyanosafracinu B.

Citovaná literatura

European Patent 309,477.

US patent 5,721,362.

Sakai, r., Jares-Erijman, E.A., Manzanares, L, Elipe, M.V.S., and Rinehart, K.L.J. Am. Chem. Soc. (1996) 118, 9017-9023

Martinez, E. J., Owa, T., Schreiber, S. L. and Corey, E. J. Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 1999, 96, io 3496-3501.

Japanese Kokai JP-A2 59/225189.

Japanese Kokai JP-A2 60/084288.

Arai, T.: Kubo, A. In The Alkaloids, Chemistry and Pharmacology; Brossi, A. Ed.; Academie: New York, 1983, Vol 21; pp 56-110.

Remers, W. A.: In The Chemistry of Antitumor Antibiotics; Vol. 2; Wiley: New York. 1988, pp 93-118.

Gulavita N. K.: Scheuer, P. J.: Desilva, E. D. Abnst. Indo-United States Symp. on Bioactive Compounds from Marině Organisms, Goa, India, Feb. 23-27, 1989, p. 28.

Arai, T; Takahashi, K.; Kubo, A. J. Antibiot, 1977, 30, 1015-1018.

Arai. T.; Takahashi, K.; Nakahara, S.; Kubo, A. Experientia 1980, 36, 1025-1028.

MÍ kam ί, Y.; Takahashi, K; Yazawa, K.; Hour-Young, C.; Arai, T.; Saito, N.; Kubo, A. J. Antibiot. 1988, 41, 734-740,

Arai, T.; Takahashi, K.; Ishiguro, K.; Yazawa, K. J. Antibiot. 1980,33, 951-960.

Yazawa, K.; Takahashi, K.; Mikami, Y.; Arai, T.; Saito, N.; Kubo, A. J. Antibiot. 1986, 39,

1639-1650.

Arai, T.; Yazawa, K.; Takahashi, K.; Maeda, A.; Mikami, Y. Antimicrob. Agent Chemother. 1985, 28, 5-11.

Takahashi, K.; Yazawa, K.; Kishi, K.; Mikami, Y.; Arai, T.; Kubo, A. J. Antibiot. 1982, 35, 196— 201.

Yazawa, K.; Asaoka, T.; Takahashi, K.; Mikami, Y.; Arai, T. J. Antibiot. 1982, 35, 915-917. Frinkce, J. M.; Faulkner, D. J. J. Am. Chem. Soc. 1982, 104, 265-269.

He, H.-Y.; Faulkner, D. J.7. Org. Chem. 1989, 54, 5822-5824.

Kubo, A.; Saito, N.; Kitahara, Y.; Takahashi, K.; Tazawa, K.; Arai, T. Chem. Pharm. Bull. 1987, 35, 440-442,

Trowitzsch-Kienast, W.; Irschik, H.; Reichenback, H.; Wray, V.; Hófle, G. Liebigs Ann. Chem. 1988, 475—481.

Ikeda, Y.; Idemoto, H.; Hirayama, F.; Yamamoto, K.; Iwao, K.; A sáno, T.; Munakata, T. J. Antibiot. 1983,36, 1279-1283.

Asaoka, T.; Yazawa, K.; Mikami, Y. Arai, T.; Takahashi, K. J. Antibiot. 1982, 35, 1708-1710.

Lown, J. W.; Hanstock, C. C.; Joshua, A. V.; Arai, T; Takahashi, K. J. Antibiot. 1983, 36, 1184— 1194.

Munakata et al. United States Patent 4, 400, 752, 1984.

Y. Ikeda etal. The Journal of Antibiotics. VOL XXXVI, N° 10, 1284, 1983.

R. Cooper, S. Unger. The Journal of Antibiotics. VOL XXXVIII, N°l, 1985.

Corey et al. United States Patent 5, 721,362. 1998.

Corey et al. J. Am. Chem. Soc. vol 118 pp 9202-92034, 1996.

Proč. Nati. Acad. Sci. USA. Vol. 96, pp 3496-3501, 1999.

Claims

5 1. Způsob přípravy sloučeniny vzorce XVIIb:

(XVIIb), ve kterém:

R¹ je aminomethylenová skupina, chráněná aminomethylenová skupina, a acylem derivatizovaná aminomethylenová skupina, hydroxymethylenová skupina, chráněná hydroxymethylenová skupina nebo acylem derivatizovaná hydroxymethylenová skupina a

15 R⁴je-H; nebo

R¹ a R⁴ dohromady tvoří skupinu vzorce IV, V, VI nebo VII;

R⁵je -H, -OH;

25 R⁷ je -OCH3 a R⁸ je -OH nebo R⁷ a R⁸ dohromady tvoří skupinu -O-CH2-O-;

R^14a a R^14b jsou obě-H nebo jedno je -H a druhé je -OH, -OCH₃ nebo -OCH₂CH₃ nebo

R^14a a R^,4b dohromady tvoří keto skupinu;

R^l5je-H, —OH;

R²¹je-H, -OH nebo-CN;

35 nebo jejích derivátů, kde OH skupina substituentu R⁵ sloučeniny vzorce XVIIb je derivatizovaná acylem, a/nebo -NH₂ skupina sloučeniny vzorce Vije derivatizovaná acylem, vyznačující se tím, že 21 -kyano sloučenina vzorce XVI:

-91 CZ 303536 B6 (XVI), ve kterém:

R¹ je amidomethylenová skupina nebo acyloxymethylenová skupina;

R^{5 * *} a R⁸ jsou nezávisle vybrány z -H, -OH nebo -OCOCH₂OH a kruh A je benzenový kruh, nebo R⁵ a R⁸ jsou obě ketoskupiny a kruh A je p-benzochinonový kruh;

R¹²je-CH₃;

_Ri4a _{a R}ub j_sou __{H ne}b_o j_ecjno je -H a druhé je -OH, -OCH₃ nebo -OCH₂CH₃ nebo 15 R^14a a R^l4b dohromady tvoří ketoskupinu; a

R¹⁵ a R¹⁸ jsou nezávisle vybrány z -H nebo -OH a kruh E je benzenový kruh, nebo R¹⁵ a R¹⁸ jsou obě ketoskupiny a kruh E je /7-benzochinonový kruh;

20 za předpokladu, že alespoň jeden z kruhů A nebo E je y?-benzochinonový kruh;

reaguje způsobem zahrnujícím podle potřeby kroky:

a) přeměnu chinonového systému kruhu E na fenolový systém;

b) přeměnu chinonového systému kruhu A na fenolový systém;

25 c) přeměnu fenolového systému kruhu A na methylendioxyfenolový kruh;

d) v případě, že R¹ a R⁴ společně tvoří skupinu vzorce IV, V, VI nebo VII tak tvorbu přemostěného spiro kruhového systému vzorce IV, V, VI nebo VII přes pozici 1- a pozici 4- v kruhu B;

e) acylaci; a

f) přeměnu 21-kyano substituentu na substituent -H nebo -OH;

čímž se získá požadovaná sloučenina vzorce XVIIb.
2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že krok a) převedení chinonového systému kruhu E na fenolový systém se provede redukcí za použití vodíku s katalyzátorem palla35 diem na uhlí.
3. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že krok b) převedení chinonového systému kruhu A na fenolový systém se provede redukcí za použití vodíku s katalyzátorem palladiem na uhlí.
4. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že sestává přinejmenším z kroků b),

c) , d), e) a ť).
5. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že R¹ a R⁴

45 dohromady tvoří skupinu vzorce IV, V, VI nebo VII a krok d) vytvoření přemostěného spiro kruhového systému přes pozici 1- a pozici 4- v kruhu B se provede substitucí v pozici 1-92CZ 303536 B6 s přemosťujícím činidlem tvořícím exendo chinonový methid v pozici 4- a reakcí methidu se substituentem 1-tak, že vznikne přemostěný spiro kruhový systém.
6. Způsob podle nároku 5, vyznačující se tím, že se jako přemosťující činidlo pou5 žije sloučenina vzorce XIX

Prot³ (XIX), kde Fu představuje chráněnou funkční skupinu, Prot³ je chránící skupina a tečkovaná čára předlo stavuje případnou dvojnou vazbu.
7. Způsob podle nároku 6, vyznačující se tím, žeFuje skupina -NHProt^4a nebo -OProt^4b, kde Prot^4a je amino chránící skupina a Prot^4b je hydroxy chránící skupina.

is
8. Způsob podle nároku 7, vyznačující se tím, že se jako přemosťující činidlo použije lnt-29 nebo int 37 následujících vzorců:

20 kde Troc je 2,2,2-trichlorethoxykarbonylová skupina a MOM je methoxy methy lová skupina.
9. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 5 až 8, vyznačující se tím, že tvorba methidu zahrnuje zavedení hydroxylové skupiny v pozici 10- na spojení kruhů A a B, čímž se získá částečná struktura vzorce XX:

(XX), ve kterém R je vybrána pro vytvoření požadované skupiny vzorce IV, V, VI nebo VII.

30 10. Způsob podle nároku 9, vyznačující se tím, že se zavede hydroxylová skupina v pozici 10~ na spojení kruhů A a B za vzniku částečné struktury vzorce XXÍ:

-93CZ 303536 B6 cArve kterém skupina R odpovídá definici uvedené v nároku 9.

5 11. Způsob podle nároku 9 nebo 10, vyznačující se tím, že skupina R ie -CHFuCFf-SProt', ve které Fu je chráněná funkční skupina jako je -NHProt^4a nebo OProC a Prot³ je thiolová chránící skupina.

12. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 11, vyznačující se tím, že se použije io 21-kyano sloučenina vzorce XVI získaná zavedením 21—kyano skupiny do saframycinu A, saframyc inu B, saframycinu C, saframycinu G, saframycinu H, saframycinu S, saframycinu Y₃, saframycinu Y_db saframycinu Ad_b saframycinu Yd₂, saframycinu AH₂, saframycinu AH₂Ac, saframycinu AH_b saframycinu AH,Ac, saframycinu AR₃, renieramycinu A, renieramycinu B, renieramycinu C, renieramycinu D, renieramycinu E, renieramycinu F, xestomycinu, saframy15 cínu D, saframycinu F, saframycinu Mx-1, saframycinu Mx-2, safracínu A nebo safracinu B neboje saframycin R.

13. Způsob podle nároku 12, vyznačující se tím, že se jako 21-kyano sloučenina vzorce XVI použije kyanosafracin B, sloučenina 2, vzorce:

(sloučenina 2).

14. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 13, vyznačující se tím, že R⁵ ve sloučenině vzorce XVIIb je alkanoyloxyl z 1 až 5 atomů uhlíku.

15. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 14, vyznačující se tím, že R⁵ ve sloučenině vzorce XVIIb je acetyloxyl.

16. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 15, vyznačující se tím, že R^14a a R^14b30 ve sloučenině vzorce XVIIb je vodík.

17. Způsob podle kteréhokoliv z nároků lažló, vyznačující se tím, že R¹⁵ ve sloučenině vzorce XVIIb je vodík.

-94CZ 303536 B6

18. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 17, vyznačující se tím, že R²' ve sloučenině vzorce XVIIb je -OH nebo -CN.

5 19. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 18, vyznačující se tím, že R a R ve sloučenině vzorce XVIIb dohromady tvoří skupinu -O-CH2-O-.

20. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 19, vyznačující se tím, že R¹ a R⁴ ve sloučenině vzorce XVIIb dohromady tvoří skupinu vzorce IV, V, VI nebo VII:

21. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, 12 až 19, vyznačující se tím, žeR¹ve sloučenině XVIIb je případně chráněná nebo acy lem derivatizovaná aminomethylenová sku15 pina, případně chráněná nebo acylem derivatizovaná hydroxy methy lenová skupina a R⁴ je -H.

22. Způsob podle nároku 21, vyznačující se tím, že R¹ ve sloučenině vzorce XVIIb je skupina -CH₂-NH₂ nebo -CH₂-NH-aa, ve které aa je acyl amino kyselinová skupina,

20 23. Způsob podle nároku 22, vyznačující se tím, že sloučenina vzorce XVIIb je Ν'acyl derivát skupiny R¹, když -CH₂NH₂ nebo -CH₂-NH-aa.

24. Způsob podle nároku 23, vyznačující se tím, že R¹ ve sloučenině vzorce XVIIb je Λ'-acyl derivát, ve kterém acylová skupina má vzorec -CO-R³, ve kterém R^a je alkyl, alkoxyl,

25 alkenyl, aralalkyl, arylalkenyl, amino kyselinový acyl nebo heterocyklyl s tím, že každý je případně substituovaný halogenem, kyanoskupinou, nitroskupinou, karboxyalkýlem, alkoxylem, ary lem, aryloxylem, heterocyklylem, heterocyklyloxylem, alkylem, aminem nebo substituovaným aminem; nebo acylová skupinaje aa.

30 25. Způsob podle nároků 22, 23 nebo 24, vyznačující se tím, že je přítomná jedna nebo více aa skupin, a kterou je alanyl, arginyl, aspartyl, asparagyl, cystyl, glutamyl, glutaminyl, glycyl, histidyl, hydroxyprolyl, isoleucyl, leucyl, lysyl, methionyl, fenylalanyl, prolyl, seryl, threonyl, thyronyl, tryptofyl, ty rosy 1 nebo valyl.

35 26. Způsob podle kteréhokoliv z nároků laž25, vyznačující se tím, že v kterékoliv reakci je jedna nebo více substituovaných skupin chráněných chránící skupinou,

27. Způsob přípravy sloučeniny vzorce XXIIb:

-95CZ 303536 B6 ve kterém

5 R¹ je -CH₂NH₂ nebo -CH₂OH nebo chráněná nebo derivatizovaná verze takové skupiny a R⁴je-H; nebo

R¹ a R⁴ dohromady tvoří skupinu vzorce IV, V, VI nebo VII:

R⁵ je -OH nebo chráněná nebo derivatizovaná verze takové skupiny;

15 R¹² je -H, -CH₃ nebo-CH₂CH₃;

R^14a a R^l4b jsou obě -H nebo jedna je -H a druhá je -OH nebo chráněná nebo derivatizovaná verze takové skupiny, -OCH₃ nebo -OCH₂CH₃ nebo

20 R^14a a R^l4b dohromady tvoří ketoskupinu;

R¹⁵ je -H, -OH nebo chráněná nebo derivatizovaná verze takové skupiny;

R¹⁸ je -OH nebo chráněná nebo derivatizovaná verze takové skupiny; a

R²¹ je-H, -OH nebo-CN;

vyznačující se tím, že 21-kyano sloučenina vzorce XVI:

-96CZ 303536 B6 ve kterém:

R¹ je amidomethylenová skupina nebo acyloxymethylenová skupina;

5 R⁵ a R^s jsou nezávisle vybrány z -H, -OH nebo -OCOCH₂OH a kruh A je benzenový kruh, nebo

R⁵ a R⁸ jsou obě ketoskupiny a kruh A je/?-benzochinonový kruh;

Rⁱ² je -H, -CH₃ nebo -CH₂CH₃;

R^14a a R^14b jsou obě -H nebo jedno je-H a druhé je -OH, -OCH₃ nebo -OCH₂CH₃ nebo R^,4a a R^l4b dohromady tvoří ketoskupinu; a

15 R^,s a R¹⁸ jsou nezávisle vybrány z -H nebo -OH a kruh E je benzenový kruh, nebo R¹⁵ a R¹⁸ jsou obě ketoskupiny a kruh E je p-benzochinonový kruh;

za předpokladu, že alespoň jeden z kruhů A nebo E je /?-benzochinonový kruh; reaguje způsobem zahrnujícím podle potřeby kroky:

20 a) přeměnu chinonového systému kruhu E na fenolový systém;

b) přeměnu chinonového systému kruhu A na fenolový systém;

c) přeměnu fenolového systému kruhu A na methylendioxyfenolový kruh;

d) tvorbu přemostěného spiro kruhového systému vzorce IV, V, VI nebo VII přes pozici 1- a pozici 4- v kruhu B;

25 e) derivatizaci; a

f) přeměnu 21-kyano substituentu na substituent -H nebo -OH; čímž se získá požadovaná sloučenina vzorce XXIIb.

28. Způsob podle nároku 27, vyznačující se tím, že ve sloučenině vzorce XXIIb, R⁵30 je OH, R¹⁴“ a R^l4bjsou H a R¹⁸ je OH.

29. Způsob podle nároku 27, vyznačující se tím, že sloučeninou vzorce XXIIb je ekteinascidin 743 nebo ekteinascidin 770:

30. Způsob podle nároku 27, vyznačující se tím, že sloučeninou vzorce XXIIb je ecteinascidin 743 vzorce

-97CZ 303536 B6

31. Způsob podle nároku 27, v y z n a č u j í c í se t í m, že produkt má vzorec XXIII:

ve kterém

R^l je amidomethy lenová skupina, chráněná aminomethylenová skupina, derivatizovaná amino10 methylenová skupina, hydroxymethylenová skupina, chráněná hydroxymethylenová skupina nebo derivatizovaná hydroxymethylenová skupina;

R⁵ je acetyloxy nebo jiná acylová skupina mající až 4 atomy uhlíku;

15 R^l2je-CH₃a

R²¹ je hydroxy nebo kyanoskupina.

32. Způsob podle nároku 31, vy z n a č uj í c í se t í m , že R¹ je skupina-CH₂NH-CO-R^a, 20 ve které R^a má lineární řetězec délky méně než 20 atomů.

33. Způsob podle nároku 32, vyznačující se tím, že R^a má lineární řetězec délky méně než 15 atomů.

25 34. Způsob podle nároku 33, vyznačující se tím, že R^a má lineární řetězec délky méně než 10 atomů.

35. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 27 nebo některého z nároků 29 až 34, vyznačující se tím, že R⁵jeacetyloxylováskupina.

-98CZ 303536 B6

36. Způsob podle nároku 31, vyznačující se tím, že sloučenina vzorce XXIII je ftalascidin vzorce III:

37. Způsob podle nároků 22, 23 nebo 24, vyznačující se tím, že aa je alanyl.

38. Způsob podle nároku 37, vyznačující se tím, že alanylová skupina je chráněna butoxykarbonylovou skupinou.

39. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 38, vyznačující se tím, že se sloučenina vzorce přemění na sloučeninu vzorce

20 kde R¹ a R¹⁸ odpovídají definici v nároku 1 nebo 27.

40. Způsob podle nároku 39, vyznačující se tím, že R¹⁸ je MOM chráněná OH skupina.

25 41. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 40, vyznačující se tím, že se sloučenina vzorce

-99QZ 303536 B6 kde R¹ a R¹⁸ odpovídají definici v nároku 1 nebo 27.

42. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 41, vyznačující se tím, že zahrnuje io reakci, ve které se sloučenina se skupinou R¹, kterou je aminomethylen, převede na sloučeninu se skupinou R¹, kterou je hydroxymethylenová skupina.

43. Sloučenina vzorce XVI ve kterém R¹ je případně chráněná nebo acy lem derivatizovaná aminomethy lenová skupina, kde chránící skupina pro aminomethylenovou skupinu je vybrána z alkylu, alkenylu, alkylsilylalkoxyalkylu, alkoxyalkylu, kyanoalkylu, heterocykly lu, alkoxyarylalkylu, cykloalkylu, nitroarylu,

20 arylalkylu a hydroxyarylalkylu;

acylová skupina pro acylem derivatizovanou aminomethylenovou skupinu je vybrána z aroylu, arylaroylu, halogenaroylu a nitroaroylu; nebo acylová skupina pro acylem derivatizovanou aminomethylenovou skupinu je vybraná zacetylu, trifluoracetylu, 2,2,2-trichlorethoxykarbonylu, isovalerylu, trans-3-(trifluormethyl)cinamoyI,

25 heptafluorbutyrylu, dekanoylu, trans-cinamoylu, butyrylu, 3-chlorpropyonylu, cinamoylu, 4methylcínamoylu, hydrocinamoylu nebo trans-hexenoylu, alanylu, arginylu, aspartylu, asparagylu, cystylu, glutamylu, glutaminylu, glycylu, histidylu, hydroxyprolylu, isoleucylu, leucylu, lysylu, methionylu, fenylalanylu, prolylu, serylu, threonylu, thyronylu, tryptofylu, tyrosylu a valylu; a

30 R¹⁸ je etherem chráněná OH skupina, kde chránící ether je vybraný z alkyl etheru, alkoxyalkyl etheru, arytoxyalkyl etheru, a Ikoxyalky loxy alkyl etheru, alkylsilylalkoxyalkyl etheru, alkylthioalkyl etheru, arylthioalkyl etheru, azidoalkyl etheru, kyanoalkyl etheru, chloralkyl etheru, hetero- 100CZ 303536 B6 cyklyl etheru, cykloalky laiky 1 etheru, alkenyl etheru, cykloalkyl etheru, alkylarylalky 1 etheru, alkoxy arylalkyl etheru, nitroarylalkyl etheru, halogenary laiky 1 etheru, alkylaminokarbonylarylalkyl etheru, alkylsulfinylaiylalkyl etheru a alkylsilyl etheru;

kde alkyl skupina má 1 až 12 atomů uhlíku;

5 alkoxy skupina má 1 až 12 atomů uhlíku;

alkenyl skupina má 2 až 12 atomů uhlíku;

aryl skupina je vybrána z fenylu, bifenylu a naftylu; a heterocyklická skupina má 4 až 8 atomů v kruhu, s jedním nebo více heteroatomy vybranými z dusíku, kyslíku a síry.

o

44. Sloučenina podle nároku 43, kterou je sloučenina vzorce:

15 kde Boc je t-butoxykarbonylová skupina.

45. Sloučenina vzorce ve kterém R* je případně chráněná nebo acylem derivatizovaná aminomethylenová skupina, kde chránící skupina pro aminomethylenovou skupinu je vybrána z alkylu, alkenylu, alkyl sily loxyalkylu, alkoxyalkylu, kyanoalkylu, heterocyklylu, alkoxyarylalkylu, cykloalkylu, nitroarylu, arylalkylu a hydroxyarylalkylu;

25 acylová skupina pro acylem derivatizovanou aminomethylenovou skupinu je vybrána zaroylu, arylaroylu, halogenaroylu a nitroaroylu; nebo acylová skupina pro acylem derivatizovanou aminomethylenovou skupinu je vybrána z acetylu, trifluoracetylu, 2,2,2-trichlorethoxykarbonylu, isovalerylu, trans~3 jtriťluormethyl)cinamoyl, heptafluorbutyrylu, dekanoylu, trans-cinamoylu, butyrylu, 3-chlorpropyonylu, cinamoylu, 430 methylcinamoylu, hydrocinamoylu, nebo trans-hexenoylu, alanylu, arginylu, aspartylu, asparagylu, cystylu, glutamylu, glutaminylu, glycylu, histidylu, hydroxyprolylu, isoleucylu, teucylu, lysylu, methionylu, fenylalanylu, prolylu, seiylu, threonylu, thyronylu, tryptofylu, tyrosylu a valylu; a

- 101 CZ 303536 B6

R¹⁸ je etherem nebo esterem chráněná OH skupina, kde ether je vybraný z alkyl etheru, alkoxyalkyl etheru, aryloxyalkyl etheru, alkoxyalkyloxyalkyl etheru, alkylsilylalkoxyalkyl etheru, alkylthioalkyl etheru, arylthioalkyl etheru, azidoalkyl etheru, kyanoalkyl etheru, chloralkyl etheru, heterocyklyl etheru, cykloalkylalkyl etheru, alkenyl etheru, cykloalkyl etheru, alkylarylalkyl

5 etheru, alkoxyarylalkyl etheru, nitroarylalkyl etheru, halogenary laiky 1 etheru, alky lam inokarbonylarylalkyl etheru, alkyl sulfinylarytal kyl etheru a alkylsilyl etheru;

chránící ester je vybraný z arylalkylkarbonátu, alkylsulfinylarylalkylkarbonátu, alkylkarbonátu, ary lhalogenalkyl karbonátu, arylalkenyl karbonátu, arylkarbanátu, alkylfosfinylu, alkylfosfinthioylu a arylalkylsulfonátu;
10 kde alkyl skupina mál až 12 atomů uhlíku; alkoxy skupina mál až 12 atomů uhlíku; alkenyl skupina má 2 až 12 atomů uhlíku; aryl skupina je vybrána z fenylu, bifenylu a naftylu; a heterocyklická skupina má 4 až 8 atomů v kruhu, s jedním nebo více heteroatomy vybranými
15 z dusíku, kyslíku a síry.

46. Sloučenina podle nároku 45, kterou je sloučenina vzorce:

kde Boc je t-butoxykarbonylová skupina.

47. Sloučenina obecného vzorce:

ve kterém R^l je chráněná nebo acylem derivatizovaná aminomethylenová skupina, kde chránící skupina pro aminomethylenovou skupinu je vybrána z alkylu, alkenylu, alkylsilylalkoxyalkylu, aikoxyalkylu, kyanoalkylu, alkoxyarylalkylu, cykloalkylu, nitroarylu, arylalkylu nebo hydroxy30 arylalkylu;

acylová skupina pro acylem derivatizovanou aminomethylenovou skupinu je vybrána z aroylu, arylaroylu, halogenaroylu a nitroaroylu; nebo acylová skupina pro acylem derivatizovanou aminomethylenovou skupinu je vybrána z acetylu, trifluoracetylu, 2,2,2-trichlorethoxykarbonylu, isovalerylu, trans-3-(trifluormethyl)cinamoyl,

- 102CZ 303536 B6 heptafluorbutyrylu, dekanoylu, trans-cinamoylu, butyrylu, 3-chlorpropyonylu, cinamoylu, 4methylcinamoylu, hydrocinamoylu, nebo trans-hexenoylu, alanylu, arginylu, aspartylu, asparagylu, cystylu, glutamylu, glutaminylu, glycylu, histidylu, hydroxyprolylu, isoleucylu, leucylu, lysylu, methionylu, fenylalanylu, prolylu, serylu, threonylu, thyronylu, tryptofylu, tyrosytu a

5 valylu; a

R¹⁸ je etherem nebo esterem chráněná OH skupina, kde ether je vybraný z alkyl etheru, alkoxy alkyl etheru, aryloxyalkyl etheru, alkoxyalkyloxyalkyl etheru, alkylsilylalkoxyalkyl etheru, alkylthioalkyl etheru, arylthioalkyl etheru, azidoalkyl etheru, kyanoalkyl etheru, chloralkyl etheru, heterocyklyl etheru, cykloalkylalkyl etheru, alkenyl etheru, cykloalkyl etheru, alkoxy ary laiky 1 io etheru, nitroary laiky 1 etheru, ha logenaryl alkyl etheru, alky lamin okarbonyl ary lalkyl etheru, alkylsulfinylarylalkyl etheru a alkylsilyl etheru;

chránící ester je vybraný z aryl alky Ikarbonátu, alky lsulfinylary laiky Ikarbonátu, alkylkarbonátu, arylhalogenalkylkarbonátu, ary lalkeny Ikarbonátu, arylkarbamátu, alkylfosfinylu, alkylfosfínthioylu a ary laiky lsulfonátu;

15 kde alkyl skupina má 1 až 12 atomů uhlíku; alkoxy skupina má 1 až 12 atomů uhlíku; alkenyl skupina má 2 až 12 atomů uhlíku; aryl skupina je vybrána z fenylu, bifenylu a nafty lu; a heterocyklická skupina má 4 až 8 atomů v kruhu, s jedním nebo více heteroatomy vybranými
20 z dusíku, kyslíku a síry.

48. Sloučenina podle nároku 47, kterou je sloučenina vzorce:

kde Boc je t-butoxykarbonylová skupina.

Konec dokumentu