Patents
Search within
Search within the title, abstract, claims, or full patent document: You can restrict your search to a specific field using field names.
Use TI= to search in the title, AB= for the abstract, CL= for the claims, or TAC= for all three. For example, TI=(safety belt).
Search by Cooperative Patent Classifications (CPCs): These are commonly used to represent ideas in place of keywords, and can also be entered in a search term box. If you're searching forseat belts, you could also search for B60R22/00 to retrieve documents that mention safety belts or body harnesses. CPC=B60R22 will match documents with exactly this CPC, CPC=B60R22/low matches documents with this CPC or a child classification of this CPC.
Learn More
Title
Abstract
Claims
Full Document
Find patents
Keywords and boolean syntax (USPTO or EPO format): seat belt searches these two words, or their plurals and close synonyms. "seat belt" searches this exact phrase, in order. -seat -belt searches for documents not containing either word.
For searches using boolean logic, the default operator is AND with left associativity. Note: this means safety OR seat belt is searched as (safety OR seat) AND belt. Each word automatically includes plurals and close synonyms. Adjacent words that are implicitly ANDed together, such as (safety belt), are treated as a phrase when generating synonyms.
Learn More
Search by
Chemistry searches match terms (trade names, IUPAC names, etc. extracted from the entire document, and processed from .MOL files.)
Substructure (use SSS=) and similarity (use ~) searches are limited to one per search at the top-level AND condition. Exact searches can be used multiple times throughout the search query.
Searching by SMILES or InChi key requires no special syntax. To search by SMARTS, use SMARTS=.
To search for multiple molecules, select "Batch" in the "Type" menu. Enter multiple molecules separated by whitespace or by comma.
Learn More
Patent numbers
Search specific patents by importing a CSV or list of patent publication or application numbers.
Polosyntetické metody a nové slouceniny
CZ303536B6
Czechia
- Other languages
English - Inventor
Cuevas@Carmen Perez@Marta Francesch@Andrés Fernández@Carolina Luis Chicharro@José Gallego@Pilar Zarzuelo@Maria la Calle@Fernando de Manzanares@Ignacio
Description
translated from
Vynález se týká syntetických metod, se zvláštním důrazem na polosyntetické metody.
Dosavadní stav techniky 10
Evropský patent 309 477 se týká ekteinascidinů 729, 743, 745, 759A, 759B a 770. Bylo zjištěno, že sloučeniny ekteinascidinů mají antibakteriální ajiné užitečné vlastnosti. Protinádorové vlastnosti ekteinascidinů 743 se nyní ověřují v klinických studiích.
Ekteinascidin 743 má komplexní tris(tetrahydroisochinolinfenol)ovou strukturu obecného vzorce I
V současné době se tato sloučenina připravuje izolací z extraktů Ecteinascidin turbin ata. Protože výtěžek je nízký, hledají se jiné způsoby přípravy ekteinascidinů.
Syntetický proces přípravy sloučenin ekteinascidinů je popsán v US Patentu 5 721 362. Patentová metoda je dlouhá a komplikovaná, sestávající z 38 příkladů, popisujících každý krok syntézy až k přípravě ekteinascidinů 743.
Patentový nárok Číslo 25 z US nároků 5 721 362 je zaměřen na fenolový meziprodukt obecného vzorce í, který se rovněž nazývá meziproduktu číslo 11. Tato sloučenina má následující bis(tetrahydroisochinolinfenol)ovou strukturu II:
OCH3
- 1 CZ 303536 B6 kde MOM je methoxymethylová substituční skupina aTBSPSje 3,5-t-butyldifenylsilylová substituční skupina.
Z meziproduktu 11 je možné syntetizovat jinou zajímavou protinádorovou látku, ftalascidin. Víz 5 Proč. Nati. Sci. USA, 96, 3496-3501, 1999. Ftalascidin je bis(tetrahydroisochinolin)ový derivát obecného vzorce III:
ίο V ekteinascidinu 743 má 1,4 můstek strukturu obecného vzorce IV:
Další známé ekteinascidiny zahrnují sloučeniny s jinými systémy přemostění cyklických kruhů, 15 jak se to například děje v ekteinascidinu 722 a 736, kde můstek má strukturu obecného vzorce V:
Dalším příkladem je ekteinascidin 583 a 597, kde můstek má strukturu obecného vzorce VI:
- 2 CZ 303536 B6
(V/)
Jiným příkladem je ekteinascidin 594 a 596, kde můstek má strukturu obecného vzorce VII:
(W)
Kompletní struktura těchto a příbuzných sloučenin je uvedena v J. Am. Chem. Soc., 1996, 118, 9 017-9 023. Odkaz na článek se nachází v seznamu citované literatury.
io Další známé sloučeniny neobsahují systém přemostěných cyklických kruhů. Tyto zahrnují bis(tetrahydroisochinolinchinolin)y - protinádorové a antimikrobiální látky safraciny a saframyciny, a přírodní mořské produkty renieramyciny a xestomyciny, izolované z kultur mikrobů nebo hub. Všechny mají společnou dimerickou tetrahydroisoch i no línovou uhlíkovou kostru. Podle charakteru oxidace aromatických kruhů je možné tyto sloučeniny rozdělit do čtyř typů I až IV.
Typ I, neboli dimerické isochinolinchinony, představují systém o obecném vzorci VIII. Nej častěji se vyskytují v této skupině sloučenin - viz tab. I:
Tab.I
Struktura saframyc i nových antibiotik typu I
( VM)
-3CZ 303536 B6
Substituční skupina
| Sloučenina | r<4. | R21 | r2S. | R25b | rZSc | ||
| Saframycin A | H | H | CN | O | O | ch3 | |
| Saframycin B | H | H | H | O | O | ch3 | |
| Saframycin C | H | och3 | H | o | o | ch3 | |
| Saframycin G | H | OH | CN | 0 | o | ch3 | |
| Saframycin H | H | H | CN | OH | CH2C0CH3 ch3 | ||
| Saframycin S | H | H | OH | O | o | ch3 | |
| Saframycin Y3 | H | H | CN | NH2 | H | ch3 | |
| saframycin Ydj | H | H | CN | nh2 | H | c2h5 | |
| saframycin Ad) | H | H | CN | o | O | C2H5 | |
| saframycin Yd2 | H | H | CN | NH2 | H | H | |
| saframycin Υ» | H | Q* | CN | nh2 | H | ch3 | |
| saframycin Y2b-d | H | Q* | CN | nh2 | H | c2h5 | |
| saframycin AH2 | H | H | CN | H* | OH* | ch3 | |
| saframycin AH2Ac | H | H | CN | H | OAc | ch3 | |
| saframycin AH) | H | H | CN | OH0 | Ha | ch3 | |
| saframycin AHiAc | H | H | CN | OAc | H | CHí | |
| saframycin AR3 | H | H | H | H | OH | ch3 |
a navzájem zaměnitelné b kde skupina Q má obecný vzorec IX:
-4CZ 303536 B6
Aromatické kruhy typu I se nacházejí v saframycinech A, B, C, G, H a S, které je možno vyizolovat ze Straptomyces lavendulae v malém množství. Kyano derivát saframycinu A, který se nazývá kyanochinonamin, je znám z japonského kokai JP-A2 59/225 189 a 60/084 288. Safra5 myciny Y3, Ydb Adi a Yd2 byly připraveny z organismu 5. lavendulae procesem přímé biosyntézy při vhodné suplementaci média, v němž organismus rostl. Rovněž byly vytvořeny dimery saframycinu Y2b a Y2t> <i tvořené navázáním dusíku na C-25 jedné podjednotky na C-l4 druhé podjednotky. Tyto sloučeniny pocházejí z kultur 5. lavendulae rostoucích v supiementovaných médiích. Saframycin ARi(=AH2), mikrobiální produkt redukce saframycinu A na C-25, vytvo10 řený mikroorganismem Rhodococcus amidophilus byl také připraven nonstereoselektivní chemickou redukcí saframycinu A pomocí borohydrátu sodného jako směs epimerů 1:1, která byla následována chromatografickou separací (druhý AHt isomer je méně polární).
Produkt další redukce, saframycin AR3, 2 l-dekyano-25-dihydro saframycin A, (tj. 25 dihydro15 saframycin B) byl vytvořen stejnou mikrobiální konverzí. Jiným typem mikrobiální konverze saframycinu A pomocí Nocardia spec. byl vytvořen saframycin B a další redukcí mikroorganismem Mycobacterium spec. byl vytvořen saframycin AH]Ac. Pro biologické experimenty byly rovněž připraveny 25-O-acetáty saframycinu AH2 a AHi.
Sloučeniny typu I obecného vzorce X byly izolovány z mořských sasanek-viz tab. 2
Tab.2
Struktury sloučenin typu I pocházejících z mořských sasanek
-5CZ 303536 B6
| Substituent | ||||
| Rw> | R21 | R | ||
| renieramycin A | OH | H | H | -C(CH3)=CH-CH3 |
| renieramycin B | OC2H5 | H | H | -C(CH3>CH-CH3 |
| renieramycin C | OH | O | O | -C(CH3)»CH-CH3 |
| renieramycin D | OC2Hj | O | 0 | -C(CH3)=CH-CHj |
| renieramycin E | H | H | OH | -C(CH3)«CH-CH3 |
| renieramycin F | och3 | H | OH | -C(CH3)=CH-CH3 |
| xestomycin | och3 | H | H | -ch3 |
Renieramyciny A az D byly izolovány z antimikrobiálního extraktu houby Reniera spec., pocházející z Mexika, společně s biogeneticky příbuznými monomerickými isochinoliny, jako jsou renieron a příbuzné sloučeniny.
Struktura renieramycínu A byla původně stanovena pomocí invertované stereochemie na C—3, C— 11 a C-l3. Nicméně důkladným rozborem dat získaných pomocí ]H NMR analýzy příbuzných sloučenin renieramycínu E a F, izolovaných ze stejné sasanky nalezené v Palau, bylo zjištěno, že spojení kruhů renieramycinů je identické se spojením kruhů nalezeným u saframycinů. Toto zjištění vedlo k závěru, že původně stanovená stereochemie renieramycinů A až D musí být stejná jako u saframycinů.
Xestomycin byl nalezen v sasance Xestospongia spec., žijící ve vodách Srí Lanky.
Sloučeniny typu II obecného vzorce XI nesoucí redukovaný hydrochinonový kruh zahrnují saframyciny D a F, izolované ze S.lavendulae a safřamyciny Mx-1 a Mx-2 izolované z Myxococcusxanthus. Viz tab. 3.
Tab.3
(Xl)
-6CZ 303536 B6
Substitucnts
| Compound | R14* | Rl4b | R2' | R25* | R25h | r25c |
| saframycin D | O | O | H | 0 | 0 | ch3 |
| saframycin F | o | O | CN | 0 | 0 | ch3 |
| saframycin Mx-1 | H | OCHj | OH | H | CH3 | NHj |
| saframycin Mx-2 | H | och3 | H | H | ch3 | nh2 |
Kostra typu III byla nalezena v antibioticích safracin A a B, izolovaných z kultury Pseudomonas fluorescens.
Tato antibiotika obecného vzorce XII se skládají z tetrahydroisochinolinchinonové a tctrahydroisochinolinfenolové podjednotky,
oA/CH,
ŇHz kde
R21 je -H v safracinu A a -OH v safracinu B.
Saframycin R, jediná sloučenina, klasifikovaná jako sloučenina nesoucí kostru typu IV, byl rovněž izolován ze S.lavendulae. Tato sloučenina obecného vzorce XIII, sestávající z hydrochinonového kruhu s postranním glykolesterovým řetězcem na jednom zfenolických kyslíků je pravděpodobně výhodnější nežli saframycin A, a to díky její mírné toxicitě.
OCHi
O
-7 CZ 303536 B6
Všechny tyto známé sloučeniny mají systém fúzovaných pěti kruhů A až E, jakje znázorněno na následující struktuře obecného vzorce XIV:
V ekteinascidinech a některých dalších sloučeninách jsou kruhy A a E fenolické, zatímco v jiných sloučeninách, hlavně v saframycinech jsou kruhy A a E chinonické. Ve známých sloučeninách jsou kruhy B a D tetrahydro, zatímco kruh C je perhydro.
Předmětem vynálezu je potřeba výroby aktivních sloučenin nesoucích systém fúzovaných pěti kruhů ze sloučenin dnes známých. Rovněž je předmětem potřeba vývoje alternativních cest pro syntézu ekteinascidinů a příbuzných sloučenin. Takovéto způsoby syntézy představují mnohem ekonomičtější přístup kjiž známým proti nádorovým látkám, a také dovolují přípravu nových aktivních sloučenin.
Podstata vynálezu
Vynález je zaměřen na použití známé sloučeniny safracin B, nazývanou také chinonamin, v polosyntetické syntéze.
Obecněji, vynález je podobný polosyntetickému procesu přípravy meziproduktů, derivátů a příbuzných struktur ekteinascidinů nebo jiných sloučenin tetrahydroisochinolinfenolu, počínaje z přírodních bis(tetrahydroisochinolin)ových alkaloidů. Vhodný výchozí materiál polosyntetické25 ho procesu zahrnuje třídy saframyc i nových a safracinových antibiotik, nacházejících se v kultivačních médiích různých mikroorganizmů, jako i třídy sloučenin reineramycinu a xestomycinu, nacházejících se v mořských sasankách.
Obecný vzorec XV výchozích sloučenin je následující:
(XV).
kde R1 je amidomethylová skupina jako například Clf- NH-CO-CR25aR25bR25c, kde R25b tvoří keto- skupina nebo jedna je -OH, -NH2 nebo -OCOCH3 a druhá je -CH2COCH3, -H, -OH nebo
-OCOCH3, když R25a je -OH nebo -NH2, potom R25b není -OH a R25c je -H, ÁH, nebo
-8CZ 303536 B6
-CH2CH3, nebo R1 je acyloxymethylenová skupina jako například -CH2-0-CO-R, kde R je -C(CH3)=CH-CH3 nebo-€H3, kde R5 a R8 jsou vybrány nezávisle z -H, -OH nebo -OCOCH2OH, nebo R5 a R8 jsou oba keto a kruhu A je p-benzochinonový
R14a a R,4b jsou oba -H nebo jeden je -H a druhý je -OH, -OCH3 nebo -OCH2CH3, nebo Rl4d a R14b tvoří společně keto skupinu
R15 a R18 jsou vybrány nezávisle z -H, nebo -OH a kruh E je benzenový kruh, nebo R15 a R18 jsou oba keto a kruh E je p-benzochinonový a kde R2’je -OH nebo-CN
Obecnější vzorec této třídy sloučenin je znázorněn níže:
kde substituční skupiny definované jako R,, R2, R3, R4, R5, Rb, R7, Rs- R9, Rio jsou nezávisle vybírány ze skupiny skládající se z-H, -OH. OCH3, CN, =O, CH3;
kde X představuje různé amidové nebo esterové funkční skupiny obsažené v přírodních produktech;
kde každý tečkovaný kruh představuje jednu, dvě nebo tři případné dvojné vazby.
V předkládaném vynálezu se definují polosyntetické postupy pro přípravu meziproduktů zahrnujících meziprodukt 11, a tudíž pro přípravu sloučenin ekteinascidinu, jako i ftalascidinu a přídatných sloučenin. Polosyntetické postupy vynálezu zahrnují velký počet kroků potřebných k dosažení kýženého produktu. Každý krok sám o sobě je proces související s předkládaným vynálezem. Vynález není omezen pouze na postupy zde uvedené; alternativní postupy, jako například změna pořadí jednotlivých kroků jsou rovněž možné.
Tento vynález se zakládá na dostatečném množství 21- kyano reaktantu jako výchozí sloučeniny obecného vzorce XVI:
OCH3
-9CZ 303536 B6
(2)
Kyanosafracin B se připravuje zkvašováním safracinu B produkujícího kmene Pseudomonas fluorescens a zpracováním kultivačního média pomocí kyanidového iontu. Výhodným kmenem
Pseudomonas fluorescens je kmen A2-2, FERM BP-14, který se využívá při přípravě EP 055 299. Vhodným zdrojem kyanidového iontu je kyanid draselný. Kultivační médium se zfíltruje a přidá se nadbytek kyanidového iontu. Po jedné hodině třepání se upraví pH na hodnotu 9,5 a po organické extrakci se získá hrubý buněčný extrakt. Následnou purifikací hrubého extraktu se získá kyanosafracin B.
Stereochemie uvedená v tomto patentu je založená na poznatcích správné stereochemie přírodních produktů. V případě, že by byla odhalena chyba v použité stereochemii, je nutno učinit potřebné opravy ve vzorcích v rozsahu celého patentu. Z důvodu, že uvedené syntézy je možno modifikovat, se tento vynález rozšiřuje o stereoizomery.
Produkty tohoto vynálezu jsou typicky obecného vzorce XVII:
nebo obecného vzorce XVIIb
(XVIIb) kde
- 12CZ 303536 B6
Rl je případně chráněná nebo derivatizovaná aminomethylenová skupina, jako například skupina Rl definovaná pro vzorec XV;
R4je-H;
nebo
R1 a R4 společně tvoří skupinu o obecném vzorci IV, V, VI nebo VII:
R5je -H nebo-OH:
R7 je -OCH3 a R8 je -OH nebo R7 a R8 společně tvoří skupinu -O-CH2O;
R14a a R14b jsou oba -H nebo jeden je -H a druhý je -OH, --OCH3 nebo -OCH2CH3, nebo Rt4a a pJ4b Sp0|egng rvoří keto skupinu; a
R15 je-H nebo-OH;
R21je-H, -OH nebo-CN;
a deriváty zahrnující acyl deriváty, především ty, kde R5 je acetyl oxy nebo jiná acyloxy skupina 25 nesoucí maximálně 4 atomy uhlíku, a zahrnující deriváty, ve kterých skupina-NCH3 v poloze 12 je nahrazena skupinou -NH nebo -NCH2CH3 a deriváty, ve kterých -NH2 skupina ve sloučenině obecného vzorce Vije případně derivatizovaná.
Ve sloučeninách obecného vzorce XVIIa nebo XVIIb je R1 typicky aminomethylen, amido30 methylen, nebo R1 společně s R4 tvoří skupinu IV nebo V. Vhodné amidomethylenové skupiny zahrnují skupiny obecného vzorce -CH2-NH-CO-CHCH3-NH2 odvozené od alaninu a podobné skupiny odvozené od jiných aminokyselin, především D- a L- glycin, valin, leucin, isoleucin, fenylalanin, tyrosin, tryptofan, methionin, cystein, asparát, asparagin, kyselina glutamová, glutamin, lysin, arginin, prolin, serin, threonin, histidin a hydroxy prolin. Obecný vzorec skupiny R1 je
5 potom —C H2—N H-aa, kde aa představ uj e am inoacy 1.
Skupina R1 může být acylovaná na skupině -NH2 a například N-acylové deriváty se připraví ze skupin -CH2-NH2 a -CH2-NN-aa. Acyl deriváty můžou být N-acyl deriváty nebo z nich Nthioacyl deriváty, stejně jako cyklické amidy.
Pro ilustraci, acyl skupiny můžou být alkanoyl, haloalkanoyl, arylalkanoyl, alkenoyl, heterocykly lacyl, aroyl, arylaroyl, haloaroyl, nitroaroyl nebo jiné acyl skupiny. Acyl skupiny mají obecný vzorec -CO-R3, kde Ra představuje různé skupiny jako například alkyl, alkoxy, alkylen, ary laiky 1, aty laiky len, aminoacyl nebo heterocyklyl, každý případně substituovaný halo, kyano,
- 13 CZ 303536 B6 nitro, karboxyalkyl, alkoxy, aryl, aryloxy, heterocyklyl, heterocyklyloxy, alkyl, amino nebo substituovanou amino skupinu.
Jiné alkylující látky zahrnují isothiokyanáty, jako například aryl isothiokyanáty, především fenylisokyanát,. Alkyl, alkoxy nebo alkylenová skupina Ra nese vhodně 1 až 6 až 12 atomů uhlíku a může být lineární, větvená nebo cyklická, Arylové skupiny jsou typicky fenyl, bifenyl nebo nafty 1.
Heterocyklylové skupiny můžou být aromatické nebo částečně nebo úplně nenasycené a vhodně mají 4 až 8 kruhových atomů, nejlépe 5 nebo 6 kruhových atomů, sjedním nebo více heteroatomy, kterými jsou buď dusík, síra nebo kyslík.
Aniž by byl seznam kompletní, typické Ra skupiny zahrnují alkyl, haloalkyl, alkoxyalkyl, haloalkoxyalkyl, arylalkylen, haloalkylary laiky len, acyl, haloacyl, arylalkyl, alkenyl a aminokyselinu.
Například Ra-CO může být acetyl, trifluoracetyl, 2,2,2-trichlorethoxy karbonyl, isovaleryl, trans3-(trifluormethyl)cinamoyl, heptafluorbutyryl, dekanoyl, trans-cinamoyl, butyryl, 3-chlorpropyonyl, cinamoyl, 4-methylcinamoyl, hydrocinamoyl nebo transhexenoyl nebo alanyl, arginyl, aspartyl, asparagyl, cystyl, glutamyl, glutaminyl, glycyl, histidyl, hydroxypropyl, isoleucyl, leucyl, lysyl, methionyl, fenylalanyl, propyl, seryl, threonyl, thyronyl, tryptofyl, tyrosyl, valyl, jako i jiné méně známé am i noacyl skupiny, jako i ftalimido a jiné cyklické amidy. Jiné příklady je možné najít v seznamu chránících skupin.
Sloučeniny, kde -CO-Ra je odvozen od aminokyseliny a obsahuje aminoskupinu, můžou samy tvořit acylové deriváty. Vhodné N-acylové sloučeniny zahrnují dipeptidy, které jsou obratem schopny tvořit N-acylové deriváty.
V jedné modifikaci, která se týká meziproduktů, je kruh A pozměněn tak, že inkorporuje podstrukturu, uvedenou jako sloučenina obecného vzorce XX nebo XXI, jak bude pojednáno níže.
V jiné modifikaci, která se týká meziproduktů, může být skupina R1 -CILO-CO-Cfu CíT-SProt3 odvozená od sloučeniny obecného vzorce XIX, kde Prot3 a Fu mají naznačené významy.
V takovém případě, R7 a R8 tvoří oxymethylenoxy skupinu. Skupina R18 je obvykle chráněna. R21 je obvykle kyano.
Rl4a a R14b jsou s výhodou atomy vodíku. R15 je s výhodou atom vodíku. O-acylové deriváty jsou výhodně alifatické O-acyl deriváty, hlavně acylové deriváty o velikosti 1 až 4 uhlíkových atomů, a typicky je to O-acetylová skupina, především na pozici 5.
Vhodné chránící skupiny pro fenoly a hydroxy skupiny zahrnují ethery a estery, jako jsou alkyl, alkoxyalkyl, aryloxyalkyl, alkoxyalkoxyalkyl, alkylsilylalkoxyalkyl, alkylthioalkyl, arylthioalkyl, azidoalkyl, kyanoalkyl, chloralkyl heterocyklyl, arylacyl, haloarylacyl, cykloalkylalkyl, alkenyl, cykloalkyl, alkylarylalkyl, alkoxyarylalkyl, nitroarylalkyl, haloarylaiky 1, alkylaminokarbonylarylalkyl, alkyl sulfinylary laiky 1, alkylsilyl ajiné ethery, stejně jako arylacyl, ary laiky lkarbonát, alifatický karbonát, alkylsulfinylarylalkyl karbonát, alkyl karbonát, arylhaloalkyl karbonát, arylalkenyl karbonát, aryl karbamát, alkyl fosfinyl, alkylfosfinothioyl, aryl fosfinothioyl, arylalkyl sulfonát ajiné estery. Tyto skupiny se případně můžou nahradit výše uvedenými skupinami vR1.
Vhodné chránící skupiny aminů zahrnují karbamáty, amidy ajiné chránící skupiny,jako například alkyl, arylaldyl, sulfo-nebo halo-arylalkyl, haloalkyl, alky lsily laiky I, arylalkyl, cykloalkylalkyl, alkylarylalkyl, heterocyklyl alkyl, nitroarylalkyl, acylaminoalkyl, nitroaryldithioarylalkyl, dicykloalkylkarboxamidoalkyl, cykloalkyl, alkenyl, arylalkenyl, ni troaryl alkenyl, heterocyklylalkenyl, heterocyklyl, hydroxyheterocyklyl, alkyldithio, alkoxy nebo halo- nebo alkylsulfínyl arylalkyl, heterocyklylacyl, aroyl, arylaroyl, haloaroyl, nitroaroyl a jiné amidy, jako i
- 14CZ 303536 B6 alkyl, aldenyl, alkylsilylalkoxyalkyl, alkoxyalkyl, kynaoalkyl, heterocyklyl, alkoxyarylalkyl, cykloalkyl, nitroaryl, ary laiky 1, alkoxy- nebo hydroxy- aiy laiky 1 a mnoho jiných skupin. Tyto skupiny se případně můžou nahradit výše uvedenými skupinami v R.'.
Příklady chránících skupin jsou uvedeny v následujících tabulkách:
Ochrana -OH skupiny
Ethery Zkratka io
| methyl | |
| methoxymethyl | MOM |
| benzyloxymethyl | BOM |
| methoxyethoxymethyl | MEM |
| 2-(trimethylsiÍyl)ethoxymethyl | SEM |
| methylthiomethyl | MTM |
| fenylthiomethyl azidomethyl kyanomethyl 2,2-dichlor-l, l-difluorethyl 2-chlorethyl 2-bromethyl | PTM |
| tetrahy dropy raný 1 | THP |
| 1-ethoxyethyl fenacyl 4-bromfenacyl cyklopropylmethyl allyl propargyl isopropyl cyklohexyl Z-butyl benzyl 2,6—dimethylbenzyl | EE |
| 4—methoxy benzyl o-nitrobenzyl 2,6-dichlorbenzyl 3,4—dichlorbenzyl 4-(dÍmethylamino)karbonylbenzyl | MPM/Pft |
| 4-methy 1 su lfiny 1 benzy 1 9-anthryl methyl 4-pikolyl heptafluor-/7-to ly 1 tetrafl uor—4-py ridy 1 | Msib |
| trimethylsilyl | TMS |
| Z-butyldimethylsilyl | TBDMS |
| Z-butyl difenyl sily 1 | TBDPS |
| triisopropylsilyl Estery aiyl formiát aryl acetát aryl levulinát | TIPS |
| aryl pivaloát aryl benzoát aryl 9-fluorkarboxylát aryl methyl karbonát | ArOPv |
- 15CZ 303536 B6 kde R1, Rs, R8, R15 a R18 jsou popsány výše.
Jiné sloučeniny obecného vzorce XVI s různými substítuenty v poloze 21 rovněž představují možný výchozí materiál. Obecně, jakýkoliv derivát, který je možné vyrobit nukleofilním nahrazením 21- hydroxylové skupiny sloučenin obecného vzorce XV, kde R21 je hydroxylová skupina, je derivátem kandidátním. Příklady vhodných 21-substituentů zahrnují následující funkční skupiny, nicméně nejsou na ně omezeny:
merkapto-skup ina;
alkylthio skupina (alkylová skupina nesoucí 1 až 6 uhlíkových atomů);
arylthio skupina (arylová skupina nesoucí 6 až 10 uhlíkových atomů, nesubstituovaná nebo substituovaná 1 až 5 substítuenty, vybranými například z: alkylová skupina nesoucí 1 až 6 atomů uhlíku, alkoxy skupiny nesoucí 1 až 6 atomů uhlíku, halogenové atomy, merkapto skupiny a nitro skupiny);
amino-skupina;
mono nebo dialkyl amino-skupina (tato nebo každá alkylová skupina nesoucí 1 až 6 uhlíkových atomů);
mono nebo diaryl amino-skupina (tato nebo každá arylová skupina definována stejně jako výše zmíněné arylthio skupiny);
α-karbonylalkyl skupina obecného vzorce -C(RaXRb)-C(=O)Rj kde
Ra a Rb jsou vybrány z atomů vodíku, alkylových skupin nesoucích 1 až 20 atomů uhlíku, arylových skupin (jak definováno výše v souvislosti s arylthio skupinami) a aralkyl-skupin (v kterých alkylová skupina nesoucí 1 až 4 atomy uhlíku je nahrazena arylovou skupinou, definovanou výše v souvislosti s arylthio-skupinami), pod podmínkou, že jeden z Ra a Rb je atom vodíku;
Rc je vybrán z atomů vodíku, alkylové skupiny nesoucí 1 až 20 atomů uhlíku, arylových skupin (jak definováno výše s souvislosti s arylthio skupinami), aralkylové skupiny (v kterých alkylová skupina nesoucí 1 až 4 atomy uhlíku je nahrazena arylovou skupinou, definovanou výše v souvislosti s arylthio skupinami), alkoxy-skupiny nesoucí 1 až 6 atomů uhlíku, aminoskupiny a mono— nebo dialkylamino skupiny jako uvedeno výše.
Z obecnějšího hlediska souvisí předkládaný vynález s procesy, ve kterých je prvním krokem příprava 21-derivátu za použití nukleofilního činidla. Sloučeniny tohoto druhu se nazývají 21-Nuc sloučeniny.
Přítomnost 21—kyano-skupiny je nutná pro některé konečné produkty, především ekteinascidín 770 a ftalascidin, zatímco pro jiné konečné produkty působí jako ochranná skupina, která může být okamžitě přeměněna v jiný substituent, jako například 21—hydroxy skupinu ekteinascidinu 743 nebo 21-hydroxyftalascidinu. Zavedení 21- kyano sloučeniny jako výchozího materiálu výrazně stabilizuje molekulu v průběhu dalších syntetických kroků, než je případně odstraněna. Jiné 21-Nuc sloučeniny nabízejí tuto a jiné výhody.
Z jednoho důležitého hlediska tkví předkládaný vynález v použití 21-kyano sloučeniny o obecném vzorci XVI při přípravě bis- nebo tris-(tetrahydroisochinolinfenol)ových sloučenin. Produkty, které se připraví, zahrnují meziprodukty, jako například meziprodukt 11 a ekteinascidiny a ftalascidin, jako i nové a známé sloučeniny příbuzné struktury.
Výhodným výchozím materiálem jsou sloučeniny obecného vzorce XV, kde R14a a R14bjsou oba atomy vodíku. Vhodným výchozím materiálem jsou také sloučeniny obecného vzorce XV nebo XVI, kde R15 je atom vodíku. Dalším výhodným výchozím materiálem jsou sloučeniny obecného vzorce XV nebo XVI, kde kruh E je fenolový. Výhodným výchozím materiálem jsou sloučeniny
- 10CZ 303536 B6 obecného vzorce XV nebo XVI, kde alespoň jeden, lépe alespoň dva nebo tři z R5, R8, R15 a Rl* nejsou atomy vodíku.
Příklady vhodného výchozího materiálu pro tento vynález zahrnují saframycin A, saframycin B, 5 saframycin C, saframycin G, saframycin H, saframycin S, saframycin Y3, saframycin Yd|, saframycin Adi, saframycin Yd2, saframycin AH2, saframycin AH2Ac, saframycin AHi, saframycin
AHiAc, saframycin AR3, renieramycin A, renieramycin B, renieramycin C, renieramycin D, renieramycin E, renieramycin F, xestomycin, saframycin D, saframycin F, saframycin Mx-I, saframycin Mx-2, safracin A, safracin B a saframycin R.
Vhodný výchozí materiál nese kyanoskupinu v poloze 21 (pro skupinu R21).
Obzvlášť významnou okolností je, že vynález zahrnuje polosyntetický proces, ve kterém se transformační kroky týkají safracinu B.
Safracin B představuje kruhový systém úzce příbuzný s ekteinascidiny. Tato sloučenina má stejnou pentacyklovou strukturu a stejný substituční vzorec aromatického kruhu E. Rovněž je safracin B velmi podobný některým syntetickým meziproduktům celkové syntézy ET-743, především meziproduktu 11.
Meziprodukt tohoto druhu se přeměňuje v ET-743 pomocí dobře zavedené metody. Syntetická konverze safracinu B v meziproduktu 11 tudíž představuje polosyntetickou metodu pro získání ET-743.
Tímto způsobem se ze safracinu B připraví meziprodukt 11 a sloučeniny odvozené od meziproduktu 11, konkrétně sloučeniny ekteinascidinu. Dále se ze safracinu B připraví ftalascidin. Předkládaný vynález souvisí s použitím safracinu B v přípravě meziproduktu 11, ftalascidínu, sloučenin ekteinascidinu a jiných meziproduktů vynálezu. Vynález rovněž souvisí se sloučeninami popsanými v předkládaném vynálezu a se sloučeninami odvozenými od jiných uvedených vhodných výchozích materiálů, jako i s použitím těchto sloučenin při přípravě těchto sloučenin.
Výhodnější výchozí produkty tohoto vynálezu nesou 21-kyano skupinu. V současné době nejvýhodnější sloučeninou předkládaného vynálezu je sloučenina obecného vzorce 2. Tento produkt se získá přímo ze safracinu B a je považován za klíčový meziprodukt v polosyntetickém procesu.
-11 CZ 303536 B6
1-adamantyl karbonát /-butyl karbonát BOC-OAr
4—methyl sul fínyl benzyl karbonát Msz-Oar
2,4—dimethylpent-3-yl karbonát Doc-Oar aryl 2,2,2-trichlorethyl karbonát aryl vinyl karbonát aryl benzyl karbonát aryl karbamát dimethylfosfhinyl Dmp-OAr dimethylfosfínothioyl Mpt-OAr difenylfcsfinothioyl Dpt-Oar aryl methansulfonát aryl toluensulfonát aryl 2-formyl benzen sulfonát
Ochrana-NH2 skupiny
Karbamáty Zkratka methyl ethyl
9-fluorenylmethyl Fmoc
9-(2-su lfo)fl uoreny 1 methy 1 9-(2,7-dibrom)fluorenylmethyl 17-tetrabenzo[fl,c,g> z] fl uoreny lmethyl Tbfmoc
2-chlor-3-indenylmethyl Climoc benz[/]inden-3—ylmethyl Bimoc
2,7-di-/-butyl[9-( 10,10-dioxo-l 0,10, 10,10-tetrahydrothioxanthyl)]methyl DBD-Tmoc 2,2,2-trichlorethyl Troc
2-trimethylsilylethyl Teoc
2-pfenyl ethyl hZ
-(1 -adamantyl)-! —methy lethyl Adpoc 2-chlorethyl
1,1 -dimethyl-2-chlorethy 1
1.1— dimethyl-2-bromethyl
1,1 —dimethy 1-2,2-dibromethyl DB-/-BOC
1,1 -dimethy 1-2,2,2-trichlorethy 1 TCBOC
-methyl-1 -(4-bifenyl)ethy 1 Bpoc
1- (3,5- di-/-butylfenyl)-l-l-methylethyl /-Burmeoc
2- (2 -a 4 '-pyridyl)ethyl Pyroc
2.2- bis(4'-nÍtrofenyl)ethyl Bnpeoc /7-(2-píval oy lam ino)-1,1-dimethy lethyl
2-[(2-nitrofenyl)dithio]-l-pfeny lethyl NpSSPeoc 2-(«,zz-dicyklohexylkarboxamido)ethyl /-butyl
-adamantyl
2- adamantyl vinyl allyl
1-isopropylallyl cinnamyl
4-nitrocinnamyl
3- (3'-pyridyl)prop-2-enyl 8-chinolyl w-hydroxypiperidinyl
BOC
1- Adoc
2- Adoc Voc
Aloe or Alloc
Ipaoc
Coc
Noc
Paloc
- 16CZ 303536 B6 alkyldithio benzyl p-methoxybenzyl /wiitrobenzyl /7-brombenzyl p-chlorbenzyl
2,4-dichlorbenzyl
4-methylsulfinylbenzyl
Cbz/Z
Moz
PNZ
Msz
9-anthrylmethyl difenylmethyl fenothiazíny!-( 10)-karbonyl η’-ρ-Αο 1 uens u 1 fony 1 am i nokarbony 1 n -fenylaminothiokarbonyl
Amidy formami acetamid chloracetamid trifluoracetamid TFA fenylacetamid
3-fenyl propanamidpent-4-en amid pikolinamid
3- py r i dy 1 karboxam i d benzamid p-fenyl benzamid n-fthalimid n-tetrachlorfthalimid TCP
4- nitro-n-fthalimid n-dithiasukcinimid Dts n-2,3-difenylmaleimid n-2,5-dimethylpyrrol n-2,5-bis(triisopropylsiloxyl)pyrrol BIPSOP n-1,1,4,4—tetramethyldisiliazacyklopentant addukt STABASE
1,1,3,3-tetramethyl-l ,3-disilaisoindolin BSB
Zvláštní -NH chránící skupiny n-methylamin n-Z-butylamin n-ally lamin «-[2-trimethylsilyl)ethoxy]methylamin SEM n-3-acetoxypropy lamin n-kyan omethy 1 am ί n n-(l-isopropyI-4-nitro-2-oxo-3-pyiTolin-3-yl)amin n-2,4-dimethoxybenzylamin Dmb
2-azanorbomenes «-2,4-d initrofeny lam i n n-benzylamin Bn o n—4-methoxy benzy lam ί η Μ P M n-2,4-dimethoxybenzylamin DMPM n-2-hydroxybenzy lamin Hbn «-(difenylmethyl)amino DPM n-b i s(4-methoxy feny 1) methy 1 am i n n-5-dibenzosuberylamin DBS
-17CZ 303536 B6 n-trifenylmethy lamin Tr n-[(4-methoxyfenyl)difenylmethyl]amino MMTr «-9-fenylflurenylamin Pf «-ferrocenylmethy lamin Fcm «-2-pikolylamin «'-oxid «-1,1-dimethylethiomethylenamin «-benzyl idenam i n «-p-methoxy benzyl idenamin «-difenylmethylenamin n-(5,5-dimethyl-3-oxo-l-cyklohexenyI)amin n-nitroamin «-nitrosoamin difenylfosfinamid Dpp dimethylthiofosfinamid Mpt difenylthiofosfínamid Ppt dibenzyl fosforamidát
2- nitrobenzen sul fenám id Nps «—1 -(2,2,2-trifluor-l, 1 -difenyl)ethylsulfenamid TDE
3- nitro-2-pyridinsulfenamid Npys /Moluensulfonamid Ts benzensulfonamid
Safracin B obsahuje alanylový postranní řetězec. Bylo zjištěno, že chránění volné amino skupiny Boc skupinou je velmi prospěšné.
Konkrétní ekteinascidinové produkty tohoto vynálezu zahrnují sloučeniny obecného vzorce XVIII:
(XVIII), kde R1 aR4 tvoří skupinu obecného vzorce IV, V, VI nebo VII:
vzácněji skupinu obecného vzorce IV nebo V;
- 18 CZ 303536 B6
R21 je -H, -OH nebo -CN, vzácněji -OH nebo -CN;
a jejich acylové deriváty, vzácněji 5-acyl deriváty zahrnující 5-acyl derivát.
Příklady provedení vynálezu
Příprava ekteinascidinu 743 a příbuzných sloučenin
Obecně, přeměna 21-kyano výchozí sloučeniny na ekteinascidin -například obecného vzorce XVIII-zahmuje:
a) v případě potřeby přeměnu E kruhu chinonového systému na systém fenolový
b) v případě potřeby přeměnu A kruhu chinonového systému na systém fenolový
c) přeměnu A kruhu fenolového systému na methylendioxyfenolový kruh
d) tvorbu přemostěného spiro kruhového systému obecného vzorce IV, VI nebo VII přes pozici 1 a 4 kruhu B; a
e) derivatizaci, podle potřeby, jako například acylace
Krok (a) -v případě potřeby přeměna E kruhu chinonového systému na systém fenolový, se provede obvyklým redukčním procesem. Vhodným reakčním systémem je vodík s paladiovo-uhlíkovým katalyzátorem, ačkoliv je možno použít jakýkoliv jiný redukční systém.
Krok (b) - v případě potřeby přeměna A kruhu chinonového systému na systém fenolový, je analogický kroku (a).
Krok (c) -přeměna A kruhu fenolového systému na methylendioxyfenolový kruh, může být ovlivněn různými způsoby, pravděpodobně společně s krokem (b). Například, chinonový kruh může být demethylován na methoxy skupině na pozici 7 a redukován na dihydrochinon a zachycen vhodnou elektrofilní látkou jako například CH2Br2, BrCH2Cl nebo podobnou dvoumocnou látkou, čímž se přímo získá methylendioxy kruhový systém, nebo pomocí dvoumocného reagentu jako například thiokarbonyldiimidazol, čímž se získá substituovaný methylendioxy kruhový systém, který se může konvertovat v kýžený kruh.
Krok (d) je typicky ovlivněn vhodnou substitucí na pozici 1 pomocí premosťovacího reagens, který napomáhá formaci kýženého můstku tím, že tvoří exendo chinonmethid na pozici 4 a dovoluje methidu reagovat s 1- substituentem za tvorby přemostěné struktury. S výhodou používaná přemosťující reagencia jsou obecného vzorce XIX:
kde Fu představuje chráněnou funkční skupinu, jako například -NHProt43 nebo OProt4b;
Prot3 je chránící skupina a tečkovaná čára naznačuje případnou dvojnou vazbu.
Methid se s výhodou připraví vnesením hydroxy skupiny v poloze 10 v oblasti spoje kruhů A a
B, čímž vznikne produkt o obecném vzorci XX:
-19CZ 303536 B6
ι *, (XX), nebo výhodněji produkt o obecném vzorci XXI:
kde skupina R se zvolí tak, aby vznikla sloučenina obecného vzorce IV, V, VI nebo VII. Pro první dvě takové sloučeniny má skupina R obvykle tvar —CHFu—CFh-SProť.
Chránící skupiny mohou být poté odstraněny a modifikovány podle potřeby tak, aby vznikla kýžená sloučenina.
Typický postup pro krok (d) je uveden v US Patentu 5 721 362, který je zde citován. Zvláštní odkazy jsou učiněny k pasáži sloupce 8, krok (1) a příklad 33 US Patentu, a k příbuzným oblastem.
Derivatizace v kroku (e) zahrnuje acylaci, například pomocí skupiny Ra-CO, jako i přeměnu 12NCH3 skupiny na 12-NH nebo 12-NCH2CH3. Tato reakce může předcházet nebo následovat jiné kroky.
Pro ilustraci, nyní je možné přeměnit sloučeninu kyanosafracinu B obecného vzorce 2 na ET743. Tento způsob přípravy ET-743 je mnohem přímočařejší a kratší, než nabízely drive známé metody. Kyanosafracin B se přeměňuje na meziprodukt 25;
a z tohoto derivátu je možné připravit velké množství cysteinových derivátů, které se poté přemění v ET-743. S výhodou používané cysteinové deriváty jsou znázorněny pomocí těchto sloučenin obecného vzorce:
-20CZ 303536 B6
Retrosyntetická analýza pro přípravu ET-743 při použití sloučeniny 29 je znázorněna na schématu I.
NHTroc
Schéma I
Podle schématu I je možné získat ET-743 v 21 lineárních krocích. Tato metoda přeměňuje kyanosafřacin B v meziprodukt 25, a to pomocí sledu reakcí, které zahrnují (1) odstranění methoxy skupiny umístěné v kruhu A, (2), redukci kruhu A a formaci methylendioxy skupiny; to vše v jedné reakční nádobě, (3) hydrolýzu amidové funkční skupiny na uhlíku 1, (4) přeměnu vzniklé amino skupiny v hydroxylovou skupinu. Reakční postup nechrání primární alkoholovou funkční skupinu v poloze 1 v kruhu B sloučeniny 25; reakce přímo využívá cysteinový zbytek 29 na přípravu meziproduktu 27. Derivát cystein 29 je chráněn na amino skupině s β-β-β-trichlorethoxykarbonylovou chránící skupinou, aby se zachovala kompatibilita s existující allylovou a MOM skupinou. Meziprodukt 27 je okamžitě oxidován a zacyklován. Tyto okolnosti, společně s různou deprotektivní strategií v pozdějších stadiích reakce představují nové cesty syntézy, přístupnější průmyslovému vývoji než proces vedený pod názvem US 5 721 362.
Přeměna sloučeniny 2-kyano v meziproduktu 25 obvykle zahrnuje tyto kroky (viz schéma II):
• přípravu chráněné sloučeniny obecného vzorce 14, vzniklé reakcí 2 s anhydridem tercbutoxykarbony 1 u;
-21 CZ 303536 B6 • přeměnu sloučeniny 14 v chráněnou sloučeninu obecného vzorce 15, vzniklé reakcí s brommethylmethyl etherem a diisopropylethylaminem v acetonitrilu;
• selektivní odstranění methoxy skupiny chinonového systému v sloučenině 15, čímž se získá sloučenina obecného vzorce 16, vzniklá reakcí s methanol ovým roztokem hydroxidu sodného;
• přeměnu sloučeniny 16 ve sloučeninu dioxymethylenovou obecného vzorce 18 tak, že se využije tato posloupnost reakcí:
(1) chinonová skupina sloučeniny 16 se redukuje 10% Pd/C ve vodíkové atmosféře;
(2) hydrochinonový meziprodukt se přemění v methylendioxy sloučeninu obecného vzorce 17 tak, že reaguje s bromchlormethanem a cesium karbonátem ve vodíkové atmosféře;
(3) sloučenina 17 se přeměňuje v sloučeninu obecného vzorce 18 tím, že se chrání volná hydroxy lová skupina za vzniku OCH2R. Tato reakce probíhá s BrCH2R a cesium karbonátem, kde R může být aryl, CH=CH2, OR' atd.
• odstranění /erč-b utoxy karbony lu a methyl oxymethy lových chránících skupin sloučeniny 18 dovoluje přípravu sloučeniny obecného vzorce 19 tím, že reaguje s roztokem HCl v dioxanu. Tato reakce se rovněž uskuteční smícháním sloučeniny 18 s roztokem trifluoroctové kyseliny v dichlormethanu;
• přípravu sloučeniny thiourey obecného vzorce 20 tím, že reaguje sloučenina 19 s fenylisothiokyanátem;
• konverzi sloučeniny obecného vzorce 20 v amino sloučeninu obecného vzorce 21 tím, že reaguje s roztokem HCl v dioxanu;
• přeměnu sloučeniny obecného vzorce 21 vN-Toc derivát 22 tím, že reaguje s trichlorethyl chlorformiátem a pyridinem;
• přípravu chráněné hydroxy sloučeniny obecného vzorce 23 tím, že reaguje 22 s brom methyl methy letherem a diisopropylethylaminem;
• přeměnu sloučeniny obecného vzorce 23 v -NH derivát 24 tím, že reaguje s kyselinou octovou a zinkem;
• přeměnu sloučeniny obecného vzorce 24 v hydroxy sloučeninu obecného vzorce 25 tím, že reaguje s nitritem sodným a kyselinou octovou. Jinou možností je použití nitrogen tetroxidu v kombinaci s kyselinou octovou a acetonitrilem, s následnou aplikací hydroxidu sodného. Je možné také použít nitrit sodný v kombinaci s acetanhydridem kyseliny octové, s následnou aplikací hydroxidu sodného.
-22CZ 303536 B6
Schéma II:
Přeměna meziproduktu 25 v ET-743 pomocí derivátu cysteinu 29 obvykle zahrnuje tyto kroky (viz schéma III):
• přeměnu sloučeniny obecného vzorce 24 v derivát 30 tím, že se odstraní primární hydroxy lová funkční skupina (S)-N-2,2,2-trichIorethoxykarbonyl-S-(9H-fluoren-9-ylmethyl)cysteinem 29;
io · konverze chráněné sloučeniny obecného vzorce 30 v derivát fenolu 31 tím, že se odštěpí allylová skupina tributyItín hydridem a dichlorpaladium-bis(trifenylfosfin)em;
• přeměna fenolové sloučeniny obecného vzorce 31 ve sloučeninu obecného vzorce 32 tím, že se oxiduje anhydridem benzenselenínu pří nízké teplotě;
• přeměna hydroxy sloučeniny obecného vzorce 32 v lakton 33 tímto postupem;
-23CZ 303536 B6 (1) Sloučenina obecného vzorce 32 reaguje s dvěma ekvivalenty triflic anhydridu a pěti ekvivalenty DMSO (2) přidá se osm ekvivalentů diisopropylethylaminu;
(3) přidají se čtyři ekvivalenty t-butyl alkoholu;
(4)přidá se sedm ekvivalentů 2-terc-butyl-l,l,3,3-tetramethylguanidinu;
(5) přidá se deset ekvivalentů acetanhydridu;
• přeměnu laktonové sloučeniny obecného vzorce 33 v hydroxylovou sloučeninu 34 tím, že se odstraní MOM chránící skupina pomocí TMSI;
• štěpení N-trichlorethoxykarbonylové skupiny sloučeniny obecného vzorce 34 na sloučeninu ío 35 tím, že reaguje s Zn/AcOH;
• přeměnu aminosloučeniny 35 v odpovídající α-keto laktonovou sloučeninu 36 tím, že reaguje s N-methylpyridinium karboxaldehyd chloridem, s následným DBU;
• přípravu ET-770 tím, že sloučenina obecného vzorce 36 reaguje s 3-hydroxy—4-methoxyfenylethylaminem;
přeměnu ET-770 v ET-743 tím, že reaguje s dusičnanem stříbrným ve směsi s AcN/H2O
SjAejO.CHjC»,
Schéma III
-24CZ 303536 B6
Cesty syntézy popsané výše, vedoucí k přeměně meziproduktu 25 v ET-743, můžou být výhodně modifikovány pomocí jiných derivátů cysteinu, například sloučeniny 37, s názvem 2-methoxymethoxyloxy-3-(9H-f1uoren-9-ylmethyl)-propenová kyselina. Tato sloučenina již má keto skupinu ve formě enoletheru, zatímco jiná cysteinová analoga obsahují aminoskupinu, která musí být přeměněna v keto skupinu procesem transaminace. Tato reakce má výtěžek 55 až 60 %. Použitím sloučeniny 37 je možné podstatně zvýšit výtěžek lineární syntézy, protože se lze vyhnout transaminačnímu kroku.
Konverze meziproduktu 25 v ET-743 za použití derivátu cysteinu 37 může být provedena io podobným způsobem a se stejnými reagenty, na rozdíl od derivátu cysteinu 29, s výjimkou přeměn (f) a (g). Reakční postup je popsán ve schématu IV:
Schéma IV
Sloučenina 38 se rovněž připraví tím, že reaguje meziprodukt 12 popsaný v US patentu
N 5 721 362 s meziproduktem 37. Tato reakce představuje výrazné zlepšení reakčního schématu popsaného v US patentu.
-25CZ 303536 B6
Příprava ftalascidinu a příbuzných sloučenin
V předkládaném vynálezu zahrnuje klíčová skupina produktů ftalascidin s následujícím obecným vzorcem XX
kde R1 je amidomethylenová skupina; R5 je krátký oxy-postranní řetězec; a R21 je kyano skupina nebo hydroxy skupina. V případě ftalascidinu, R’ je ftalimidomethylenová skupina; R5 je acetoxy skupina; R21 je kyano skupina. Jiné skupiny představující R1 zahrnují mono-a di-N-amidomethyleny jako i jiné cyklické amidomethy lény, a jiné skupiny představující R5 zahrnují C1 až C4 acylové skupiny, jako i C1 až C4 alkylové skupiny.
Konverze 21-kyano sloučeniny ve ftalascidin nebo příbuzné sloučeniny obecného vzorce XX obvykle zahrnuje následující kroky:
a) v případě potřeby konverzi E kruhu chinonového systému v systém fenolový;
b) tvorbu R5 skupiny na pozici 5 v kruhu A;
c) tvorbu R1 skupiny na pozici 1 v kruhu B;
d) v případě potřeby konverzi A kruhu chinonového systému v systém fenolový;
e) v případě potřeby konverzi A kruhu fenolového systému v kruh methylend ioxy fenolový.
Uvedené kroky jsou velmi podobné těm, které byly uvedeny při přípravě ekteinascidinů. Krok (c) obvykle zahrnuje tvorbu -CH2NH2 skupiny v poloze 1 a její acy láci.
Ftalascidin se připraví pomocí meziproduktů popsaných v části pojednávající o přeměně kyanosafracinu B v meziprodukt 25. Například meziprodukty 21 a 17 jsou vhodné výchozí sloučeniny pro přípravu ftalascidinu.
Jak bude uvedeno níže ve schématu V, proces syntetické přípravy ftalascidinu počínající meziproduktem 21 zahrnuje tyto po sobě následující kroky:
• přeměnu sloučeniny 21 na sloučeninu obecného vzorce 27 s tím, že reaguje s ftalát-anhydridem v dichlormethanu a karbonylimidazolu.
• konverzi sloučeniny 27 na ftalascidin tím, že reaguje s tributy 1tin hydridem a dichlorpaladium-bis(trifenylfosfin)em nebo zásaditým médiem, následována reakcí s acetyl chloridem.
-26CZ 303536 B6
Schéma V
Jak bude uvedeno níže ve schématu VI, proces syntetické přípravy ftalascidinu počínaje meziproduktem 17 zahrnuje tyto po sobě následující kroky:
• Acetylaci hydroxylové skupiny sloučeniny obecného vzorce 17 pomocí acetyl chloridu a pyridinu tak, že vznikne acetylovaný meziprodukt obecného vzorce 42;
• Odstranění /erc-butoxykarbonylu a ochranné methyl oxy methylové skupiny sloučeniny 42 pro io přípravu sloučeniny obecného vzorce 43 tím, že reaguje s roztokem HCI v dioxanu. Této reakce je rovněž dosaženo smícháním sloučeniny 42 s roztokem trifluoroctové kyseliny v dichlormethanu;
• Přípravu sloučeniny thiourey obecného vzorce 44 tím, že reaguje 43 s fenylisothiokyanátem;
• Konverzi sloučeniny obecného vzorce 44 v amino sloučeninu obecného vzorce 45 tím, že 15 reaguje s roztokem HCI v dioxanu;
• Přeměnu 45 ve ftalascidin tím, že reaguje s ftalát anhydridem v dichlormethanu a karbonylimidazolu.
-27CZ 303536 B6
Schéma VI
Příprava meziproduktu 11 a příbuzných meziproduktů
Retrosyntetická analýza je popsána v následujícím schématu
V předkládaném vynálezu zahrnuje klíčová skupina meziproduktů meziprodukt 11 a má obecný vzorec XXI
OProP (XXI), kde Prot1 a Prot2 jsou hydroxy chránící skupiny, podle možnosti rozdílné. Co se týče samotného meziproduktu 11, je Prot1 skupina představována methoxymethylovou skupinou, Prot2 je t-butyldifenylsilylová skupina.
-28CZ 303536 B6
Konverze 21- kyano sloučeniny na meziprodukt 11 nebo příbuzné meziprodukty obecného vzorce XXI obvykle zahrnuje tyto po sobě jdoucí kroky:
a) v případě potřeby konverzi E kruhu chinonového derivátu na systém fenolový
b) tvorbu -OProť skupiny v poloze 18 v kruhu E;
c) tvorbu -CH2-OProt2 skupiny v poloze 1 v kruhu B;
d) v případě potřeby konverzi kruhu A chinonového systému na fenolový systém;
e) konverzi fenolového systému kruhu A na methylendioxyfenolový kruh.
Krok (b), tvorba -OProť skupiny v poloze 18 kruhu E, je typickou chránící reakcí fenolové skupiny. Reakční podmínky se vyberou podle charakteru chránící skupiny. Další kroky jsou podobné io jiným reakcím.
Krok (c), tvorba -CH2-OProt2 skupiny v poloze 1 kruhu B, se obvykle uskutečňuje tvorbou -CH2NH2 na pozici 1 a poté přeměnou aminové funkční skupiny na hydroxy a chráněním. Reaktant s funkční skupinou R1 ve tvaru -CH2-NH-CO-CR25aR25bR25c ztratí N-acylovou skupinu. V případě, že výchozí produkt nese skupinu R1 ve tvaru -CH2-O-CO-R, není potřeba ekteinas15 cidin nijak upravovat, protože jeho R1 substituční skupina je stejná.
Co se týče jiných produktů, je potřeba odstranit O-acylovou skupinu. Pro tyto deacylace jsou k dispozici různé metody. V jedné z nich je deacylace a konverze na hydroxylovou funkční skupinu uskutečněna vjednom kroku. Poté je hydroxylová skupina acetylována nebo jakkoliv jinak upravována tak, aby vznikla vhodná R1 funkční skupina.
US patent 5 721 362 popisuje syntetickou metodu na přípravu ET-743 sestávající z mnoha kroků. Jeden z meziproduktů syntézy je meziprodukt 11. Použitím kyanosafracinu B jako výchozí sloučeniny je možné dosáhnout meziproduktu 11 mnohem jednodušším způsobem a tudíž zlepšit metodu na přípravu ET-743.
Kyanosafracin B je přeměněn na meziprodukt 25 pomocí výše popsané metody. Meziprodukt 11 se z meziproduktu 25 získá pomocí těchto kroků (viz schéma VII).
• tvorba chráněné hydroxy sloučeniny obecného vzorce 26 tím, že reaguje 25 s tercbutyldifenylsily(chloridem za přítomnosti báze;
• konečné odštěpení allylové skupiny pomocí tributyltin hydridu a dichlorpaladiumbis(trifenylfosfin)em na sloučeninu 26, které vede k tvorbě meziproduktu 11.
Schéma VII
-29CZ 303536 B6
Představa syntetického procesu, uvedená v předkládaném vynálezu a zaměřená na přeměnu safracinu B na meziprodukt 11, je modifikací schématu VIII a skládá se z těchto kroků:
• stereospecifické přeměny sloučeniny obecného vzorce 1 (safracin B) na sloučeninu obecného vzorce 2 tím, že se selektivně nahradí -OH skupina -CN skupinou tím, že reaguje s KCN v kyselém prostředí;
• tvorby sloučeniny thiourey obecného vzorce 3 tím, že reaguje sloučenina obecného vzorce 2 s fenylisothiokyanátem;
• přeměny sloučeniny thiourey obecného vzorce 3 na acetamid obecného vzorce 5 tím, že se hydrolyzuje v kyselém prostředí a je následován přidáním acetanhydrídu; meziprodukt amino sloučenina obecného vzorce 4 se připraví ukončením hydrolýzy v kyselém prostředí s bikarbonátem sodným. Tento meziprodukt je ale značně nestabilní a je okamžitě přeměněn na pětičlenný cyklický imin 6;
• tvorby chráněné sloučeniny obecného vzorce 7 tím že reaguje s brommethylmethyletherem a diisopropylethylaminem v dichlormethanu;
• selektivní demethylaci methoxy skupiny chinonového systému sloučeniny obecného vzorce 7 na sloučeninu obecného vzorce 8 tím, že reaguje s roztokem methanolu a hydroxidu sodného;
• přeměny sloučeniny obecného vzorce 8 na methylendioxy sloučeninu obecného vzorce 9 tím, že dojde k:
(1) chinonová skupina sloučeniny 8 se redukuje s 10% Pd/C ve vodíkové atmosféře;
(2) hydrochinonový meziprodukt je přeměněn na methylendioxy sloučeninou obecného vzorce 9 tím, že reaguje s bromchlormethanem a cesium karbonátem ve vodíkové atmosféře;
(3) sloučenina obecného vzorce 9 je přeměněna na sloučeninu obecného vzorce 10 tím, že se chrání volná hydroxylová skupina jako OCH2R skupina tím, že reaguje s BrCH2R a cesium karbonátem, kde R představuje aryl, CH=CH2, OR' atd.;
(4) přeměně acetamidové skupiny sloučeniny obecného vzorce 10 na odpovídající hydroxylovou skupinu obecného vzorce 11 tím, že reaguje s nitrogen tetroxidem ve směsi s kyselinou octovou a octanu sodného, následována přidáním hydroxidu sodného;
(5) případně se acetamidová skupina sloučeniny obecného vzorce 10 přemění na primární aminovou skupinu tím, že reaguje s hydrazínem nebo s Boc2O, DMAP následována přidáním hydrazinu; tento primární amin se přemění na odpovídající hydroxylovou skupinu (sloučenina obecného vzorce 11) tím, že se primární amin oxidativně přemění na odpovídající aldehyd s 4-formyl-lmethylpyridinium sulfonátem nebo jiným pyridiniovým iontem, následovaným DBU nebo jinou zásadou a další hydrolýzou a následován redukcí aldehydu na odpovídající hydroxylovou skupinu pomocí hydří du litnoh Hnitého nebo jiné redukující látky;
(6) tvorbě chráněné sloučeniny obecného vzorce 26 tím, že reaguje s t-buty ldifeny lsilyl chloridem adimethylaminopyridinem v dichlormethanu;
(7) přeměně silylované sloučeniny obecného vzorce 26 na meziprodukt 11 tím, že se odkryje OCH2R ochranná skupina tím, že reaguje v kyselém nebo zásaditém prostředí. Typické reakce zahrnují paladiovou čerň ve vodíkové atmosféře, nebo vodný roztok TFA, nebo tributyltin hydrid a dichlor bis(trifenylfosfin palladium).
V ještě jiné úpravě reakčního postupu dochází k přeměně kyano sloučeniny obecného vzorce 2 na meziprodukt 11 pomocí rozšířeného schématu II, které zahrnuje tyto kroky:
• tvorbu chráněné hydroxy sloučeniny obecného vzorce 26 tím, že reaguje 25 s tercbutyldifenylsilyl chloridem v přítomnosti zásady;
• závěrečné odštěpení allylové skupiny pomocí tributyltin hydridu a dichlorpaladiumbis(trifenylfosfin) na sloučeninu 26, která vede ke přípravě meziproduktu 11.
-30CZ 303536 B6
Příprava aktivních sloučenin
Kyanosafracin B se přeměňuje ve velký počet meziproduktů a derivátů s potenciální proti nádorovou terapeutickou aktivitou. Tyto meziprodukty se dají vytvořit z již popsaných sloučenin, nebo použitím alternativních reakčních postupů.
Meziprodukty zde popsané zahrnují sloučeninu 47 a mnoho dalších amidových derivátů, které se připraví pomocí sloučenin 45 nebo 43.
Na schématu VIII je popsána příprava sloučeniny 47 za použití těchto kroků:
• příprava sloučeniny thiourey obecného vzorce 3 tím, že reaguje sloučenina obecného vzorce 2 s fenylisothiokyanátem;
• přeměna sloučeniny thiourey obecného vzorce 3 na acetamid obecného vzorce 5 tím, že dochází k hydrolýze v kyselém prostředí a následnému přidání acetanhydridu. Meziproduktem je aminová sloučenina obecného vzorce 4, která se izoluje ukončením hydrolýzy v kyselém prostředí pomocí bikarbonátu sodného. Meziprodukt je velmi nestabilní a okamžitě se přeměňuje na pětičlenný cyklický imin 6;
• příprava chráněné sloučeniny obecného vzorce 7 tím, že reaguje s brommethylmethyletherem a diisopropylethylaminem v dichlormethanu;
• selektivní demethylace methoxy skupiny chinonového systému sloučeniny obecného vzorce 7 na sloučeninu obecného vzorce 8 tím, že reaguje s methanolovým roztokem hydroxidu sodného;
• přeměna sloučeniny obecného vzorce 8 na methylendioxy sloučeninu obecného vzorce 10 pomocí těchto reakčních kroků:
(1) chinonová skupina sloučeniny 8 se redukuje pomocí 10% Pd/C ve vodíkové atmosféře;
(2) hydrochinonový meziprodukt se přemění na methylendioxy sloučeninu obecného vzorce 9 tím, že reaguje s bromchlormethanem a cesium karbonátem ve vodíkové atmosféře;
(3) sloučenina obecného vzorce 9 se přeměňuje na sloučeninu obecného vzorce 10 tím, že se chrání volná hydroxy lová skupina jakou je allyloxy skupina tím, že reaguje s allyl bromidem a cesium karbonátem;
• přeměna sloučeniny obecného vzorce 9 na acetyl derivát 46 tím, že reaguje s acetylchloridem v pyridinu;
• přeměna sloučeniny obecného vzorce 46 na nechráněnou sloučeninu 47 tím, že reaguje s kyselinou chlorovodíkovou v dioxanu.
-31 CZ 303536 B6
Schéma VIII
Jiné užitečné deriváty amidových meziproduktů se vytvoří z již popsaného meziproduktu 45 pomocí následujícího schématu:
io Druhý krok není bezprostředně nutný. Tento proces představuje důležitou část vynálezu, obzvlášť tam, kde skupina Rje skupinou R\ jak bylo uvedeno drive. Schéma VIII je možné snadno rozší-32CZ 303536 B6 řit tak, že umožní přípravu sloučenin obecného vzorce XXIII tím, že se ve výchozí sloučenině v poloze 5 umístí jiná funkční skupina, a to buď skupina přímo potřebná pro produkt, nebo skupina, kterou je možno odstranit nebo jinak modifikovat tak, že vznikne kýžená funkční skupina.
Schéma IX
Ze sloučeniny 45 se připraví skupina analog pomocí následujících reakčních kroků:
• acylace amino skupiny sloučeniny obecného vzorce 45 pomocí velké skupiny acylových derivátů, které poskytnou odpovídající amidy, kde preferovanými acylovými skupinami jsou acetyl, cinnamoylchlorid, p-trifluorcinnamoylchlorid, isovalerylchlorid-fenylisothiokyanát nebo aminokyseliny, nebo jiné výše uvedené skupiny RaCO~.
• transformace -CN skupiny na -OH skupinu tím, že reaguje s nitrátem stříbrným ve směsi s AcN/H2O.
Jiné užitečné deriváty amidového meziproduktu se připraví použitím již popsaného meziproduktu 43 podle následujícího schématu:
(43)
Schéma X
Použitím následujícího postupu se ze sloučeniny 43 získá jiná skupina zajímavých derivátů.
a) acylace amino skupiny sloučeniny obecného vzorce 43 pomocí velké škály acylových derivátů, které poskytnou odpovídající amidy, kde preferovanými acylovými skupinami jsou acetyl, cinnamoylchlorid, p-trifluorcinnamoylchlorid, isovalerylchlorid nebo aminokyseliny, nebo jiné výše uvedené sloučeniny skupiny RaCO-.
b) transformace -CN skupiny na -OH skupinu tím, že reaguje s nitrátem stříbra ve směsi AcN/H2O.
Nové meziprodukty
Vzhledem k předcházejícímu je zřejmé, že v předkládaném vynálezu se vyskytuje mnoho meziproduktů. Podle charakteru kruhu A, mají tyto meziprodukty obecný vzorec XXIIa
-33CZ 303536 B6
nebo obecného vzorce XXIIb
kde R1 je -CH2NH2 nebo -CíhOH, chráněná, nebo derivatizovaná varianta takovéto skupiny a R4 je-H;
nebo
Rl a R4 společně tvoří skupinu obecného vzorce IV, V, VI nebo VII
R5 je OH, chráněná nebo derivatizovaná varianta takovéto skupiny;
R,4a a Rl4b jsou obě -H nebo jedna je -H a druhá je -OH, chráněná nebo derivatizovaná varianta 20 takovéto skupiny, -OCH, nebo -OCH2CH3, nebo Rl4a a Rl4b tvoří společně keto skupinu.
-34CZ 303536 B6
R12 je -H, -CH3 nebo -CH2CH3;
R15 je ΌΗ, chráněná nebo derivatizovaná varianta takovéto skupiny;
R18 je -OH, chráněná nebo derivatizovaná varianta takovéto skupiny.
R21je-H, -OH nebo -CN.
V jednom uspořádání, alespoň Rl, R5, R!4a, R!4b, R15 nebo R18 je chráněná nebo derivatizovaná skupina.
V jedné modifikaci tohoto vynálezu nepředstavuje R1 skupina 3,5-1-butyldifenylsily 1 a/nebo skupina R18 není methoxymethylová.
R1 je s výhodou -CH2NH2 nebo -CH2OH, chráněná nebo derivatizovaná varianta této skupiny a R4je-H;
nebo
Rl a R4 tvoří společně skupinu:
R14a a R,4b jsou s výhodou oba -H.
Jedna důležitá kategorie meziproduktů obsahuje sloučeninu, nazvanou jako sloučenina 25, která má obecný vzorec:
V obecném vzorci uvedené kategorie sloučenin je skupina MOM nahraditelná jakoukoliv chránící skupinou.
Jiné důležité meziprodukty zahrnují sloučeniny nazvané jako sloučeniny 45 a 47. Ze sloučeniny 45 se jednoduchým způsobem připraví N-acyl deriváty, které jsou důležitou součástí předkláda-35 CZ 303536 B6 ného vynálezu. Vhodné acylové skupiny již byly uvedeny výše. Odpovídající aktivní 21-hydroxy sloučeniny jsou rovněž důležité a jsou součástí tohoto vynálezu.
Nové aktivní sloučeniny
Bylo zjištěno, že sloučeniny tohoto vynálezu, které byly původně připraveny jako meziprodukty, mají výrazné účinky při léčbě maligních nádorů, jako například leukémie, nádory plic, střeva, ledvin a melanomu.
Předkládaný vynález tudíž nabízí možnost léčby karcinomů savců, především člověka, terapeuticky efektivní dávkou sloučeniny vynálezu, jako i jejich farmakologických sloučenin.
Předkládaný vynález se týká rovněž farmaceutických přípravků, které jako aktivní složku obsahují sloučeninu nebo sloučeniny vynálezu, jako i proces jejich přípravy.
Příklady farmaceutických přípravků zahrnují jakékoliv pevné (tablety, pilulky, kapsle, granule) nebo kapalné (roztoky, suspenze nebo emulze) přípravky s vhodným složením, nebo přípravky pro orální, místní nebo parenterální podávání. Tyto přípravky obsahují buď čistou sloučeninu nebo v kombinaci s nosičem nebo jinou farmakologicky aktivní látkou. Tyto přípravky musí být sterilní, v případě, že se podávají parenterálně.
Podávání sloučenin nebo přípravků předkládaného vynálezu je buď ve formě intravenóžních infuzí, orálních preparátů, nebo jsou podávány intraperitoneálně. S výhodou se použije 24 hodinová infuze, ještě výhodněji infuze 1 až 12 hodin, nejlépe 2 až 6 hodin. Krátké infuzní Časy, které dovolují krátkou nemocniční hospitalizaci, jsou obzvlášť výhodné. Nicméně, v případě potřeby je možné nastavit čas infuze na 12 až 24 hodin. Infuze se opakují ve vhodných intervalech 2 až 4 týdnů. Farmakologické přípravky, které obsahují sloučeniny uvedené v předkládaném vynálezu, se do těla nemocného dopraví ve formě lipozomů nebo nanosférových měchýrků ve formě dovolující uvolnění aktivních látek, nebo použitím jiných standardních prostředků dodání účinné látky na místo působení.
Správná dávka sloučenin se liší podle konkrétního přípravku, způsobu aplikace, konkrétního stavu nemocného a nádoru, který je potřeba léčit. Jiné faktory, jako například věk, tělesná hmotnost, pohlaví, dieta, doba podávání, poměr vylučování aktivní látky, stav pacienta, kombinace léků, citlivost na podávané látky a závažnost onemocnění se musí rovněž zohlednit. Podávání může probíhat kontinuálně nebo periodicky s maximální tolerovatelnou dávkou.
Sloučeniny a přípravky předkládaného vynálezu mohou být použity v kombinaci s jinými léky ve formě kombinované terapie. Jiné léky mohou být součástí stejného přípravku, nebo můžou být podávány jako samostatný přípravek současně nebo s časovým odstupem. Jiné léky nejsou nijak speciálně omezeny a vhodnými kandidáty jsou:
a) léky s antimitotickým účinkem, především ty, které jsou založené proti cytoskeletu buňky, zahrnující modulátory mikrotubulů, jako například taxanové látky (taxol, paklitaxel, taxoter, docetaxel), podoíylotoxiny nebo vinca alkaloidy (vincristin, vinblastin);
b) antimetabolity, jako například 5-fluoruracil, cytarabin, gemcitabin, purinová analoga (jako například pentostatin, methotrexát);
b) alkylující látky jako například cyklofosfamid nebo ifosfamid;
c) látky, kterých cílem je DNA, jako například antracykliny adriamycin, doxorubicin, farmorubicin nebo epirubicin;
d) látky, kterých cílem je topoizomeráza jako například etoposid;
e) hormony nebo antagonisté hormonů jako například estrogeny, antiestrogeny (tamoxifen a příbuzné sloučeniny) a androgeny, flutamid, leuprorelin, goserelin, cyprotron nebo octreotid;
-36CZ 303536 B6
f) látky, kterých cílem je přenos signálů v maligní buňce, zahrnující deriváty protilátek jako například herceptin;
g) alkylující látky jako například deriváty platiny (cis-platina, karbonplatina, oxaliplatina, paraplatina) nebo nítrosourea;
h) látky potenciálně ovlivňující metastázy tumorů jako například inhibitory matrixových metaloproteáz;
i) genová terapie a antisense-látky;
j) protilátková terapie;
k) jiné bioaktivní sloučeniny mořského původu, hlavně dideminy jako například aplidin;
1) stero idní analoga, konkrétně dexamethason;
m) antiemetické látky, konkrétně dexamethason.
Předkládaný vynález se týká rovněž sloučenin vynálezu použitelných v metodice léčby a použití sloučenin při přípravě přípravků pro léčbu rakoviny.
Cytotoxická aktivita Buněčné kultury.
Buňky byly udržovány v logaritmické fázi růstu v EMEM (Eagle's Minimum Essential Medium) s EBS (Earle's Balanced Salts), s 2mM L-glutaminem, neesenciálními aminokyselinami, bez bikarbonátu sodného (EMEM/neaa).
Médium bylo doplněno o 10% fetální telecí sérum /FCS/, 10-2 M bikarbonát sodný a 0,1 g/l penicilin-G a streptomycin sulfát.
Pomocí jednoduché modifikované metody (Bergeron et al., 1984) byla testována a srovnávána protinádorová aktivita sloučenin. V experimentech byly použity tyto linie: P-388 (suspenzní kultura maligních lymfoidních buněk pocházejících z DBA/2 myši), A-549 (kultura lidského plicního karcinomu rostoucí v jedné vrstvě), HT-29 (lidská kultura karcinomu střeva rostoucí v jedné vrstvě) a MEL-28 (lidská kultura maligního melanomu rostoucí v jedné vrstvě).
P-388 byly vysety do 16 mm komůrek s hustotou lxlO4 buněk na jednu komůrku v 1 ml MEM 5 FCS média, které obsahovalo přesnou koncentraci testované látky. Pro kontrolu exponenciálního růstu buněk byly odděleně vysety stejné buňky, rostoucí ovšem v médiu bez přídavku testo35 vaně látky. Všechny experimenty byly provedeny v duplikátu. Po třech dnech inkubace při 37 °C, 10% CO2 ve vlhké atmosféře (98 %) byly komůrky nabarveny 0,1% krystalovou violetí. Přibližná IC50 byla stanovena srovnáním růstu buněk v komůrkách s testovanou látkou s buňkami v komůrkách rostoucích bez přítomnosti testované látky.
1. Raymond J. Bergeron, Paul F. Cavanaugh, Jr., Steven J. Kline: Robert G. Hughes, Jr., Gary T.
Elliot a Carl W. Porter. Antineoplastic and antiherpetic activity of spermidine catecholamide iron chelators. Biochem. Bioph. Res. Comm. 1984, 121 (3), 848-854
2. Alan C. Schoeder, Robert G. Hughes, Jr. a Alexander Bloch. Effects of Acyclíc Pyrimidine Nucleoside Analoges. J. Med. Chem. 1981,24, 1078-1083
-37CZ 303536 B6
Cytotoxická aktivita
| Sloučenina | ICsoOíM) | |||||
| P-388 | A-549 | HT-29 | MEL-28 | CV-1 | DU-145 | |
| OMi o Γ Sm BM V 2 | 0,009 | 0,018 | 0,018 | 0,018 | 0,023 | |
| OHl 'V” *^u | 0,15 | >0,15 | 0,15 | >0,15 | ||
| 1 i“· e T 15 | 1,44 | 1,44 | 1,44 | 1,44 | ||
| X>E “i 1« | >1,5 | >1^ | >1,5 | >1,5 | ||
| t-·· 'ÝčKyli. | b4 | l,4 | l,4 | V | ||
| s 0 L ig | 0,01 | 0,01 | 0,01 | 0,01 | ||
| A“ 19 | 0,08 | 0,16 | 0,01 | 0,16 |
-38CZ 303536 B6
| A 20 | 0,01 | 0,01 | 0,01 | opi | ||
| 0,019 | 0,019 | 0,019 | 0,019 | |||
| 22 | 0,014 | 0,014 | 0,014 | 0ρΐ4 | 0,014 | 0,014 |
| W* <Λ-°^ 23 | 0,13 | 0,13 | 0,13 | 0,13 | 0,13 | 0,13 |
| 'v °** X^rÝ** W\ | 0,18 | 1,8 | 1,8 | 1,8 | 1,8 | 1,8 |
| \jtó~ 25 | ομ | 0,2 | 0,2 | ομ | ομ | |
| *** r-τ sťWr *UK 35 | 0,008 | 0,008 | 0,008 | 0,008 | ||
| -5--- 36 | 0,01 | 0,01 | 0,01 | ορι | ||
| Υ/* O 28 | 0,001 | 0,001 | οροί | 0,001 | 0,001 | 0,001 |
| 6^Χ^* °% α f- ^^42 | 0,13 | 0,13 | 0,13 | 0,13 | 0,13 |
-39CZ 303536 B6
| •#ř? A- 43 | 0,008 | 0,016 | 0,008 | 0,008 | 0,016 | |
| 44 | 0/X)l | 0,001 | 0,001 | 0,001 | 0,001 | |
| 0,01 | 0,01 | 0,01 | 0/H | 0,01 | ||
| R*^emy4,o 3 | 0,015 | 0,015 | 0,015 | 0,015 | 0,018 | |
| :%$< | 2,171 | 2,171 | 2,171 | 2,171 | 2,171 | |
| A 5 | 0/)05 | 0,005 | 0/)05 | 0/K)5 | ||
| Z 7 | 0,22 | 0,22 | 0,22 | 0,22 | 0,22 | |
| *sX> t/C £ | >9 | >18,1 | >18,1 | >18,1 | >18,1 |
-40 CZ 303536 B6
| ---35- «Λ- 9 | >1,77 | >1,77 | >1,77 | >1,77 | >1,77 | |
| •y<ř <A 10 | >1,65 | >1,65 | >1,65 | >1,65 | >1,65 | |
| A 46 | 0/)16 | 0,016 | 0,016 | 0,016 | 0,016 | |
| Λ 47 | 0,001 | 0,001 | 0,001 | 0,001 | 0,001 | |
| 48 | 0,0008 | 0,001 | 0,0008 | 0,0008 | 0,001 | |
| *eS^v*“ ow JT JT &&r A“ 44 | 0,007 | 0,007 | 0,007 | 0,007 | 0,007 | |
| A? ^'so | 0,0001 | 0,0001 | 0,0001 | 0,0001 | 0,0001 | |
| -sT Λ- /r 51 | 0,0001 | 0,0001 | 0,0001 | 0,0001 | 0,0001 | |
| A? >•4 «V- •^XCsz | 0,001 | 0,001 | οροί | 0/)01 | 0,001 |
-41 CZ 303536 B6
| --“SE- ** * o 53 | 0,0001 | 0,0001 | 0,0001 | 0,0001 | 0,0001 | |
| * ť“ i&r „Zs-yf. *·» o 54 | 0,001 | 0,001 | 0,001 | 0,001 | 0,001 | |
| -ŮM· ·*· β 55 | 0,01 | 0,01 | 0,01 | 0,01 | 0,01 | |
| !** ^r se | 0,18 | 0,9 | 0,18 | 0,9 | ||
| *? -57 | 0,14 | 0,14 | 0,14 | 0,14 | 0,14 | |
| -3-- %.© ° v * 58 | 0,001 | 0,001 | 0,001 | 0,001 | 0,001 | |
| Ote Kk^k-Mt ©AC J2 Y ζ£ι2ί>~ *k~o HM 0 « 60 | 0,001 | 0/ΧΠ | 0,0005 | 0/ΧΠ | 0,0005 | |
| Ote MOsJ^lte Oc 3Σ J ‘χςν^ v-o Λ CH o*ez, 61 | 0/)01 | 0,001 | 0/XH | 0,001 | 0,001 | |
| rt\Jy* ©*< JL Y &v^2>Y é« »* u 62 | 0,001 | O/XH | 0,0005 | 0,0005 | 0,001 |
-42 CZ 303536 B6
| v-o 1 i* WI ^63 | 0,0001 | 0,0001 | 0/)001 | 0,0001 | 0,0001 | |
| O · ČM w ° 64 | 0/)01 | 0/)01 | 0/001 | O/XH | 0,001 | |
| CM o T T i CN w« 65 | 0/)001 | 0,0005 | 0/)001 | 0,0001 | 0/)005 | |
| OM* OAt jC T *ώοό^** 6 OO | 0/)001 | 0,0001 | 0/ΧΧΠ | o/xxn | 0,0001 | |
| C*A* CMC ΐ w oV-Y* o 67 | 0,0001 | 0,0001 | 0,0001 | 0,0001 | 0,0001 |
Z těchto údajů je možné vidět, že aktivní sloučeniny předkládaného vynálezu zahrnuje zajímavou třídu sloučenin obecného vzorece XXIII
kde R1 je jak bylo definováno výše pro obecný vzorec XVIIb a je s výhodou středně velká derivatizovaná aminomethylenová skupina
R5 je jak bylo definováno výše pro obecný vzorec XVIIb a je s výhodou menší derivatizovaná hydroxy skupina
Rt2 je jako uvedeno výše, a je s výhodou -CH3 a
R21 je hydroxy nebo kyano skupina.
R1 je s výhodou hydrofobní skupina, která tudíž nemá volnou amino, hydroxy nebo jinou hydrofilní funkční skupinu. R1 je typicky skupina -CH2-NH2-CO-Ra, kde Ra je jak bylo uvedeno, s výhodou má ovšem lineární řetězec kratší než 20 atomů, ještě výhodněji méně než 15 nebo 10
-43 CZ 303536 B6 atomů, kde 1,4-fenyl se počítá jako řetězec o délce 4 atomů a podobně je to i s jinými cyklickými skupinami (například 1,2-cyklohexyl je řetězec dlouhý 2 atomy). Lineární řetězec kratší než 10, 15 nebo 20 atomů může být nahrazen. Podle těchto údajů je potřeba najít rovnováhu mezi sloučeninou, nenesoucí žádnou skupinu Ra-CG- a sloučeninou nesoucí objemnou skupinu.
V jedné modifikace se upřednostňuje R1 bez cyklických skupin, hlavně bez skupin aromatických.
V příbuzné variantě není předkládaný vynález zaměřen na přípravu sloučenin popsaných v článku Proč. Nati. Acad. Sci USA, 96, 3 496-3 501, 1999, který se nachází v citované literatuře. Naše s výhodou používané skupiny R1 nezahrnují odpovídající substituenty CH2R2, nachá10 zející se v tabulce 1 citovaného článku, obzvlášť skupiny A, B, C a D pro R2.
R5 je s výhodou acetyloxy skupina.
V mimořádně důležitých sloučeninách je skupina R1 acetyl ováná na -NH2 skupině a například 15 N-acyl deriváty je možné připravit ze skupin -CN2NH2 a -CH2-NH-aa. Acylové deriváty jsou jejich N-acyl ové nebo N-thioacylové deriváty, Acylová skupina má obecný vzorec -CO-R3, kde Ra je vybrán tak, aby splňoval uvedená kriteria. Vhodné acyl skupiny zahrnují alanyl, arginyl, aspartyl, aspargyl, cystyl, glutamyl, glutaminyl, glycyl, histidyl, hydroxypropyl, isoleucyl, leucyl, lysyl, methionyl, fenylalanyl, prolyl, seiyl, threonyl, tyronyl, tryptofyl, tyrosyl, valyl, jako i jiné aminokyselinové zbytky. Tyto aminokyselinové zbytky jsou s výhodou derivatizované na amino skupině, čímž sloučenině dodávají hydrofobicitu.
V jedné modifikaci je R1 derivatizovaná hydroxy methylenová skupina. Podobné je to s derivatizovanou aminomethylenovou skupinou.
S ohledem na zmíněné aktivní sloučeniny, předkládaný patent zahrnuje tento proces:
kde skupina R5 ve výsledném produktu je stejná jako pro sloučeninu XXII a může se lišit ve výchozí sloučenině a být konvertována v nijako součást procesu,
R18 je hydroxy skupina ve výsledném produktu, ale může být chráněnou hydroxy skupinou ve výchozí sloučenině a konvertována v nijako součást procesu,
R12 skupina ve výchozí sloučenině je stejná jako ve výsledném produktu, neboje v ní přeměněna jako součást procesu,
R21 ve výsledném produktu je jak již bylo uvedeno a v případě, že hydroxy skupina je tvořena z kyano skupiny jako součást procesu,
Ra je jak už bylo uvedeno a je acyl ován a jako součást procesu za vzniku konečného produktu nesoucího acylovanou Ra skupinu.
R5 je ve výchozí sloučenině s výhodou acetyloxy nebo jiná malá acyloxy skupina a v průběhu reakce se nemění. R18 je ve výchozí sloučenině s výhodou hydroxy skupina a v průběhu reakce se nemění. R21 ve výsledném produktu je jak již bylo uvedeno a hydroxy skupina je tvořena z kyano
-44CZ 303536 B6 skupiny jako součást procesu. Ra se nachází ve výsledném produktu a je definován ve vztahu ke sloučenině obecného vzorce XXXIII.
Jiná důležitá metoda předkládaného vynálezu zahrnuje reakci:
Jiná důležitá metoda předkládaného vynálezu zahrnuje reakci:
OMe
Jiná důležitá metoda předkládaného vynálezu zahrnuje reakci, kde R1, představující aminomethylen se přeměňuje v hydroxy methy lenovou skupinu.
Jiná důležitá metoda předkládaného vynálezu zahrnuje reakci, kde sloučenina nesoucí skupinu
R1, představující hydroxymethylen reaguje se sloučeninou obecného vzorce XIX
Prot
3/'
(XIX), kde Fu představuje chráněnou funkční skupinu, Prot3 je chránící skupina a tečkovaná čára představuje případnou dvojnou vazbu.
Jiná důležitá metoda předkládaného vynálezu zahrnuje reakci pro přípravu 21-kyano sloučeniny obecného vzorce XVI, která zahrnuje reakci sloučeniny obecného vzorce XV
(XV), kde R1, R5, R14a, RI4b, Ri5 * a R18 byly již definovány a R21 je hydroxy skupina, se zdrojem kyanidového iontu za vzniku 21-kyano sloučeniny.
-45 CZ 303536 B6
Je možné využít i procesů, které využívají sloučeniny obsahující nukleofil pro přípravu podobných sloučenin obecného vzorce XVI, ve kterých poloha 21 je chráněna jinou nukleofilní skupinou (21-Nuc skupinou). Například 2l-Nuc sloučenina obecného vzorce XVI s alkylamino sub5 stituentem v poloze 21 se připraví reakcí sloučeniny obecného vzorce XV, kde R21 je hydroxy skupina, s vhodným alkylaminem. 21-Nuc sloučenina obecného vzorce XVI s alkylthio substituentem v poloze 21 se připraví reakcí sloučeniny obecného vzorce XV, kde R21 je hydroxy skupina, s vhodným alkanthiolem. Případně, 21-Nuc sloučenina obecného vzorce XVI s a-karbonylalkylem jako substituentem v poloze 21 se připraví reakcí sloučeniny obecného vzorce XV, kde R21 je hydroxy skupina, s vhodnou karbonylovou sloučeninou, typicky za přítomnosti zásady. Pro přípravu jiných 21-Nuc sloučenin je možné použít i alternativní způsoby.
Jiná důležitá reakce předkládaného vynálezu zahrnuje reakci 21-kyano produktu předkládaného vynálezu, ve které vzniká 21-hydroxy sloučenina. Tyto sloučeniny mají zajímavé in vivo vlast15 nosti.
Příklady provedení předkládaného vynálezu
K roztoku 2 (21,53 g, 39,17 mmolu) v ethanolu (200 ml) byl přidán Zerc-butoxykarbonyl anhydrid (7,7 g, 35,25 mmolu) a směs byla míchána 7 h pri teplotě 23 °C. Poté byla reakce koncentrována in vacuo a zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO2, hexanrethylacetát 6:4) za vzniku 14 (20,6 g, 81 %) jako žluté pevné látky.
Rf: 0,52 (ethylacetát: CHCb 5:2).
’H NMR (300 MHz, CDC13): δ 6,49 (s, IH), 6,32 (bs, IH), 5,26 (bs, IH), 4,60 (bs, IH), 4,14 (d, J= 2,4 Hz, IH), 4,05 (d, .7= 2,4 Hz, IH), 3,94 (s, 3H), 3,81 (d, J= 4,8 Hz, IH), 3,7 (s, 3H), 3,34 (brd, V- 7,2 Hz, IH), 3,18-3,00 (m, 5H), 2,44 (d, .7 = 18,3 Hz, IH), 2,29 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 1,82 (s,3H), 1,80-1,65 (m, 1H), 1,48 (s, 9H), 0,86 (d,.7= 5,7 Hz, 3H) l3C NMR (75 MHz, CDCb): δ 185,5, 180,8, 172,7, 155,9, 154,5, 147,3, 143,3, 141,5, 135,3,
130,4, 129,2, 127,5, 120,2, 117,4, 116,9, 80,2, 60,7, 60,3, 58,5, 55,9, 55,8, 54,9, 54,4, 50,0, 41,6, 40,3,28,0,25,3,24,0, 18,1, 15,6, 8,5.
ESI-MS m/z počítáno pro CuHj-MOs: 649,7. Zjištěno (M+H)+: 650,3
-46CZ 303536 B6
Příklad 2
(14) («)
Za stálého míchání roztoku 14 (20,6 g, 31,75 mmol) vCH3CN (159 ml) při 0 °C byl přidán diisopropylethylamin (82,96 ml, 476,2 mmol), methoxymethylenbromid (25,9 ml, 317,5 mmol) a dimethylaminopyridin (155 mg, 1,27 mmol). Směs byla míchána při 23 °C 24 h. Reakce byla ukončena při 0 °C pomocí vodného roztoku O,1M HCI (750 ml) (pH=5), a extrahována CH2CI2 (2x 400 ml). Organická fáze byla usušena (síran sodný) a zakoncentrovaná in vacuo. Zbytek byt purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO2, gradient hexan: ethyl acetát 4 : 1 až hexamethylacetát 3:2) za vzniku 15 (17,6 g, 83 %) ve formě žluté pevné látky.
Rf: 0,38 (hexan:ethylacetát 3:7).
*H NMR (300 MHz, CDC13): δ 6,73 (s, 1H), 5,35 (bs, 1H), 5,13 (s, 2H), 4,50 (bs, 1H), 4,25 (d, 15 J= 2,7 Hz, 1H), 4,03 (d, 2,7 Hz, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,84 (bs, 1H), 3,82 -3,65 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,56 (s, 3H), 3,39 - 3,37 (m, 1H), 3,20-3,00 (m, 5H), 2,46 (d, J= 18 Hz, 1), 2,33 (s, 3H), 2,23 (s,3H), 1,85 (s, 3H), 1,75- 1,63 (m, 1H), l,29(s,9H), 0,93 (d, 7-5,1 Hz, 3H) t3C NMR (75 MHz, CDCf): δ 185,4, 180,9, 172,4, 155,9, 154,4, 149,0, 148,4, 141,6 , 135,1, 131,0, 129,9, 127,6, 124,4, 123,7, 117,3, 99,1, 79,3, 60,7, 59,7, 58,4, 57,5, 56,2, 55,9, 55,0, 54,2,
50,0, 41,5, 39,9, 28,0, 25,2, 24,0, 18,1, 15,6, 8,5.
ESI-MS m/z: počítáno pro C36H47N5O9: 693,8. Zjištěno (M+H)+: 694,3
Do nádoby obsahující 15 (8 g, 11,5 mmol) v methanolu (1,6 1) byl při teplotě 0 °C přidán vodný 30 roztok 1M hydroxidu sodného (3,2 1). Reakce byla 2 h míchána při teplotě 0°Ca poté nastavena
-47CZ 303536 B6
6M HCl na pH=5. Směs byla extrahována ethylacetátem (3x 1 1) a smíchané organické vrstvy byly usušeny (síran sodný) a zakoncentrovány in vacuo. Zbytek byl purifíkován pomocí sloupcové chromatografie (SiO2, gradient CHC13 k CHC13: ethylacetát 2:1) za vzniku 16 (5,3 mg, 68 %).
Rf: 0,48 (CH3CN:H2O 7:3, RP-C18)
Ή NMR (300 MHz, CDC13): δ 6,73 (s, IH), 5,43 (bs, IH), 5,16 (s, 2H), 4,54 (bs, IH), 4,26 (d, J- 1,8 Hz, 1H), 4,04 (d, J= 2,7 Hz, IH), 3,84 (bs, IH), 3,80 - 3,64 (m, 1H), 3,58 (s, 3H), 3,41 3,39 (m, IH), 3,22 -3,06 (m, 5H), 2,49 (d, 18,6 Hz, IH), 2,35 (s, 3H), 2,30-2,25 (m, IH),
2,24 (s, 3H), 1,87 (s, 3H), 1,45 - 1,33 (m, 1 Η), 1,19 (s, 9H), 1,00 (br d, J = 6,6 Hz, 3H) 13C NMR (75 MHz, CDC13): δ 184,9, 180,9, 172,6, 154,7, 151,3, 149,1, 148,6, 144,7 , 132,9,
131,3, 129,8, 124,5, 123,7, 117,3, 116,8, 99,1, 79,4, 59,8, 58,6, 57,7, 56,2, 55,6, 54,9, 54,5, 50,1,
41,6, 40,1,28,0, 25,3, 24,4, 18,1, 15,7, 8,0.
ESI-MS m/z: počítáno pro C35H45N5O9: 679,7. Zjištěno (M+H)+: 680,3
Příklad 4
Kodplyněnému roztoku sloučeniny 16 (1,8 g, 2,64 mmol) v DMF (221 ml) bylo přidáno 10% Pd/C (360 mg) a roztok byl míchán ve vodíkové atmosféře (atmosférický tlak) 45 min. Reakce byla přefiltrována přes celit v argonové atmosféře do nádoby obsahující bezvodý Cs2CO3 (2,58 g, 7,92 mmol). Poté byl přidán bromchlormethan (3,40 ml, 52,8 mmol). Nádoba s reakční směsí byla uzavřena a směs byla míchána při 100 °C 2 h. Reakce byla zchlazena, filtrována přes vrstvu celitu a promyta CH2C12. Organická vrstva byla zakoncentrována a vysušena (síran sodný) za vzniku 17 ve formě hnědé olejovité látky, která byla použita v dalším kroku bez jakékoliv purifikace.
Rf: 0,36 (hexan:ethylacetát 1:5, SiO2).
lH NMR (300 MHz, CDC13): δ 6,68 (s, IH), 6,05 (bs, IH), 5,90 (s, IH), 5,79 (s, IH), 5,40 (bs, IH), 5,31 -5,24(m, 2H), 4,67 (d, J= 8,1 Hz, IH), 4,193 (d,J=2,7 Hz, 1H),4,O7 (bs, IH), 4,01 (bs, IH), 3,70 (s, 3H), 3,67 (s, 3H), 3,64 - 2,96 (tn, 5H), 2,65 (d, ./= 18,3 Hz, IH), 2,33 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 2,01 - 1,95 (m, IH), 1,28 (s, 9H), 0,87 (d, J= 6,3 Hz, 3H) HC' NMR (75 MHz, CDC13): δ 172,1, 162,6, 154,9, 149,1, 145,7, 135,9, 130,8, 130,7, 125,1, 123,1, 117,8, 100,8, 99,8, 76,6, 59,8, 59,2, 57,7, 57,0, 56,7, 55,8, 55,2, 49,5, 41,6, 40,1, 36,5,
31,9,31,6, 29,7, 28,2, 26,3,25,0, 22,6, 18,2, 15,8, 14,1,8,8.
ESI-MS m/z: počítáno pro C36H47N5O9: 693,34. Zjištěno (M+H)+: 694,3
-48CZ 303536 B6
Příklad 5
<”> (18)
Do nádoby obsahující roztok 17 (1,83 g, 2,65 mmol) v DMF (13 ml), byl přidán Cs2CO3 (2,6 g, 7,97 mmol) a allylbromid (1,15 ml, 13,28 mmol) při teplotě 0°C. Výsledná směs byla míchána při 23 °C lh. Reakční směs byla filtrována přes vrstvu celitu a promyta CH2C12. Organická vrstva byla vysušena a zakoncentrována (síran sodný). Zbytek byl purifikován sloupcovou chromato10 grafií (SiO2, CHCf:ethylacetát 1:4) za vzniku 18 (1,08 mg, 56 %) ve formě bílé pevné látky.
Rf: 0,36 (CHCl3:ethylacetát 1:3).
’HNMR(300 MHz, CDC13): S 6,70 (s, 1H), 6,27 -6,02 (m, 1H), 5,94 (s, 1H), 5,83 (s, 1H), 5,37 (dd, 7/ = 1,01 Hz. 7,- 16,8 Hz, 1H), 5,40 (bs, 1H), 5,25 (dd,7/ = 1,0 Hz, J2= 10,5 Hz, 1H), 5,10 (s, 2H), 4,91 (bs, 1H), 4,25-4,22 (m, 1H),4,21 (d, 7= 2,4 Hz, 1H), 4,14 - 4,10 (m, lH),4,08(d,
7= 2,4 Hz, 1H), 4,00 (bs, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,59 (s, 3H), 3,56 - 3,35 (m, 2H), 3,26 - 3,20 (m, 211),3,05 -2.96 (dd, 7/ = 8.1 Hz,72= 18 Hz, 1H), 2,63 (d,7 = 18 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,09 (s, 3H), 1,91 - 1,80 (m, 1H), 1,24 (s, 9H), 0,94 (d,7= 6,6 Hz, 3H) 13C NMR (75 MHz, CDC13): δ 172,0, 154,8, 148,8, 148,6, 148,4, 144,4, 138,8, 133,7, 130,9,
130,3, 125,1, 124,0, 120,9, 117,8, 117,4, 112,8, 112,6, 101,1, 99,2, 73,9, 59,7, 59,3, 57,7, 56,9,
56,8, 56,2, 55,2, 40,1, 34,6, 31,5, 28,1, 26,4, 25,1, 22,6, 18,5, 15,7, 14,0, 9,2.
ESI-MS m/z počítáno pro C39H51N5O9: 733,4. Zjištěno (M+H)+: 734,4
Příklad 6
-49CZ 303536 B6
K roztoku 18 (0,1 g, 0,137 mmol) v dioxanu (2 ml) byl přidán 4,2M HCl/dioxan (1,46 ml) a směs byla míchána při 23 °C 1,2 h. Reakce byla zastavena při 0 °C pomocí nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (60 ml) a extrahovaná ethylacetátem (2x 70 ml). Organické vrstvy byly spojeny a vysušeny (síran sodný) a zakoncentrovány in vacuo za vzniku 19 (267 mg,
95 %) ve formě bílé pevné látky, která byla v dalších reakcích použita bez jakékoliv purifikace.
Rf: 0,17 (ethylacetát; methanol 10:1, SiO2) *HNMR (300 MHz, CDCl-0: δ 6,49 (s, IH), 6,12 -6,00 (m, IH), 5,94 (s, IH), 5,86 (s, IH), 5,34 (dd, J= 1,0 Hz, J= 17,4 Hz, IH), 5,25 (dd, 7= 1,0 Hz, J= 10,2 Hz, IH), 4,18 - 3,76 (m, 5H), 3,74 (s, 3H), 3,71 - 3,59 (m, IH), 3,36 - 3,20 (m, 4H), 3,01 - 2,90 (m, IH), 2,60 (d, 7= 18,0 Hz, IH), 2,29 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,97 - 1,86 (m, IH), 0,93 (d, J= Β,Ί Hz, 3H) 13C NMR (75 MHz, CDC13): δ 175,5, 148,4, 146,7, 144,4, 142,4, 138,9, 133,7, 131,3, 128,3,
120,8, 117,9, 117,4, 113,8, 112,4, 101,1,74,2, 60,5, 59,1,56,5, 56,1 56,3, 56,0, 55,0, 50,5, 41,6, 39,5, 29,5, 26,4, 24,9, 21,1, 15,5, 9,33.
ESI-MS m/z počítáno pro C32H39N5O6: 589. Zjištěno (M+H)+: 590
Příklad 7
K roztoku 19 (250 mg, 0,42 mmol) vCH2Cl2 (1,5 ml) byl přidán fenylisothiokyanát (0,3 ml, 2,51 mmol) a směs byla míchána při 23 °C 1 h. Reakční směs byla zakoncentrována in vacuo a zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO2, gradient hexan až 5 : 1 hexan:ethylacetát) za vzniku 20 (270 mg, 87 %) ve formě bílé pevné látky.
Rf: 0,56 (CHCl3:ethy1acetát 1:4) ’H NMR (300 MHz, CDCf): δ 8,00 (bs, IH), 7,45 - 6,97 (m, 4H), 6,10 (s, IH), 6,08 -6,00 (m, lH),5,92(s, IH), 5,89 (s, IH), 5,82 (s, IH), 5,40 (dd, 7= 1,5 Hz, 7- 17,1 Hz, lH),3,38(bs,
IH), 5,23 (dd, 7 = 1,5 Hz, 7 = 10,5 Hz, IH), 4,42 -4,36 (m, IH), 4,19-4,03 (m, 5H), 3,71 (s, 3H), 3,68 - 3,17 (m, 4H), 2,90 (dd,7=7,8 Hz, 7- 18,3 Hz, IH), 2,57 (d, 7- 18,3 Hz, IH), 2,25 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,90 (dd,7= 12,3 Hz, 7= 16,5 Ηζ,ΙΗ), 0,81 (d,7=6,9 Hz, 3H).
13C NMR (75 MHz, CDC13): δ 178,4, 171,6, 148,6, 146,8, 144,3, 142,7, 138,7, 136,2, 133,6,
130,7, 129,8, 126,6, 124,2, 124,1, 120,9, 120,5, 117,7, 117,4, 116,7, 112,6, 112,5, 101,0, 74,0,
60,6, 59,0, 57,0, 56,2, 56,1,55,0, 53,3, 41,4, 39,7, 26,3, 24,8, 18,3, 15,5, 9,2.
ESI-MS m/z počítáno pro C39H44N6O6S: 724,8. Zjištěno (M+Hý: 725,3 40
-50CZ 303536 B6
Příklad 8
Me (20)
(21)
K roztoku 20 (270 mg, 0,37 mmol) v dioxanu (l ml) byl přidán 4,2M CCl/dioxan (3,5 ml) a reakční směs byla míchána při 23 °C 30 min. Poté byl přidán ethylacetát (20 ml) a H2O (20 ml) a organická vrstva byla zcentri fugo vána. Vodná báze byla bazifi kována pomocí saturovaného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (60 ml) (pH=8) při 0 °C a poté extrahována CH2Cl2 (2x 50 ml). Organické extrakty byly spojeny a vysušeny (síran sodný) a zakoncentrovány in io vacuo. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO2, ethylacetát:methanol) za vzniku sloučeniny 21 (158 mg, 82 %) ve formě bílé pevné látky.
Rf: 0,3 (ethylacetát:methanol 1:1).
‘HNMR (300 MHz, CDCh): δ 6,45 (s, IH), 6,12-6,03 (m, IH), 5,91 (s, IH), 5,85 (s, IH), 5,38 15 (dd, Ji = 1,2 Hz, J2 = 17,1 Hz, 1H), 5,24 (dd, J, = 1,2 Hz, J2 = 10,5 Hz, IH), 4,23 - 4,09 (m, 4H),
3,98 (d, J= 2,1 Hz, IH), 3,90 (bs, IH), 3,72 (s, 3H), 3,36-3,02 (m, 5H), 2,72 - 2,71 (m, 2H), 2,48 (d, J= 18,0 Hz, IH), 2,33 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,85 (dd, Λ = 11,7 Hz, J2 = 15,6 Hz, IH).
I3C NMR (75 MHz, CDCh): δ 148,4, 146,7, 144,4, 142,8, 138,8, 133,8, 130,5, 128,8, 121,5, 20 120,8, 118,0, 117,5, 116,9, 113,6, 112,2, 101,1, 74,3, 60,7, 59,9, 58,8, 56,6, 56,5, 55,3, 44,2,
41,8, 29,7, 26,5,25,7, 15,7, 9,4.
ESI-MS m/z počítáno pro Cs^N^: 518,3. Zjištěno (M+H)+: 519,2
Příklad 9
K roztoku 21 (0,64 g, 1,22 mmol) v CH2C12 (6,13 ml) byl přidán pyridin (0,104 ml, 1,28 mmol) a 2,2,2-trichlorethylchlorformiát (0,177 ml, 1,28 mmol) při teplotě -10 °C. Reakční směs byla míchána při této teplotě 1 h, a poté byla reakce zastavena přidáním 0,lM HCI (10 ml) a extrahována CH2C12 (2x 10 ml). Organická vrstva byla vysušena (síran sodný) a zakoncentrována in
-51 CZ 303536 B6 vacuo. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografíe (SiO2, hexan:ethylacetát 1:2) za vzniku 22 (0,84 g, 98 %) ve formě bílé pěnovité pevné látky.
Rf; 0,57 (ethylacetát.methanol 5:1).
lH NMR (300 MHz, CDCh): δ 6,50 (s, IH), 6,10-6,00 (m, IH), 6,94 (d, J= 1,5 Hz, IH), 5,87 (d, J= 1,5 Hz, IH), 5,73 (bs, IH), 5,37 (dq, = 1,5 Hz, J2 = 17,1 Hz, IH), 5,26 (dq, J, = 1,8 Hz, J2 = 10,2 Hz, IH), 4,60 (d, J= 12 Hz„ IH), 4,22 - 4,10 (m, 4H), 4,19 (d, 7= 12 Hz, IH), 4,02 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,37 - 3,18 (m, 5H), 3,04 (dd, J} = 8,1 Hz, J2 = 18 Hz, IH), 2,63 (d, 7= 18 Hz, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,85 (dd, 7/ = 12,3 Hz, J2 = 15,9 Hz, IH). 13C NMR (75 MHz, CDCh): δ 154,3, 14á,5, 146,7, 144,5, 142,8, 139,0, 133,8, 130,7, 128,7,
121,3, 120,8, 117,8, 117,7, 116,8, 112,7, 101,2, 77,2, 74,3, 60,7, 59,9, 57,0, 56,4, 55,3, 43,3,
41,7,31,6, 26,4, 25,3,22,6, 15,9, 14,1,9,4.
ESI-MS m/z počítáno pro C32H35CI3N4O7: 694,17. Zjištěno (M+H)+: 695,2
Příklad 10
Me
Me
K roztoku 22 (0,32 g, 0,46 mmol) v CH3CN (2,33 ml) byl přidán diisopropylethy lamin (1,62 ml, 9,34 mmol), brommethylmethylether (0,57 ml, 7,0 mmol) a dimethylaminopyridin (6 mg, 0,046 mmol) pri teplotě 0 °C. Reakční směs byla zahřívána pri 30 PC 10 h. Poté byla reakční směs naředěna dichlormethanem (30 ml) a přidána do vodného roztoku HCl, pH 5 (10 ml). Organická vrstva byla vysušena (síran sodný) a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem za vzniku zbytku, který byl purifikován pomocí sloupcové chromatografíe (SiO2, hexan:ethylacetát 2 : 1) za vzniku 23 (0,304 g, 88 %) ve formě bílé pěnovité pevné látky.
Rf: 0,62 (hexan:ethylacetát 1 : 3).
!H NMR (300 MHz, CDC13): δ 6,73 (s, IH), 6,10 (m, 1H), 5,94 (d, 7= 1,5 Hz, IH), 5,88 (d, 7 =
1,5 Hz, IH), 5,39 (dq, 7; = 1,5 Hz, J2 = 17,1 Hz, IH), 5,26 (dq, 7/ = 1,8 Hz, J2 - 10,2 Hz, IH), 5,12 (s,2H), 4,61 (d,7= 12Hz, lh), 4,55 (t, 7= 6,6 Hz, IH), 4,25 (d,7= 12Hz, IH), 4,22 - 4,11 (m, 4H), 4,03 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,38 - 3,21 (m, 5H), 3,05 (dd, 7/-8,1 Hz, J2 = 18 Hz, IH), 2,65 (d,7= 18,0 Hz, IH), 2,32 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,12 (s,3H), 1,79 (dd,7/= 12,3
Hz, 7, - 15,9 Hz, IH);
l3C NMR (75 MHz, CDCh): δ 154,3, 148,6, 148,4, 144,5, 139,0, 133,6, 130,6, 130,1, 125,07, 124,7, 124,0, 121,1, 117,7, 112,6, 101,2, 99,2, 77,2, 74,4, 74,1, 59,8, 59,8, 57,7, 57,0, 56,8, 56,68, 55,3, 43,2, 41,5, 26,4, 25,2, 15,9, 9,3.
ESI-MS m/z počítáno pro C34H39CI3N4O8: 738,2. Zjištěno (M+H)+: 739,0
-52CZ 303536 B6
Příklad 11
K suspenzi 23 (0,304 g, 0,41 mmol) v 90% vodném roztoku kyseliny octové (4 ml) byl přidán zinkový prášek (0,2 g, 6,67 mmol) a reakční směs byla míchána při 23 °C 7 h. Směs byla filtrována přes vrstvu cel i tu, která byla pomyta CH2C12. Organická vrstva byla promyta saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (pH 9) (15 ml) a vysušena (síran sodný). Rozpouštědlo bylo odpařeno podtlakem za vzniku 24 (0,191 g, 83 %) ve formě bílé pevné látky.
Rf: 0,3 (ethylacetát:methanol 5:1).
*H NMR (300 MHz, CDCfi): δ 6,68 (s, 1H), 6,09 (m, 1H), 5,90 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 5,83 (d, 7 =
1,5 Hz, 1H), 5,39 (dq, 7y = 1,5 Hz, Λ = 17,1 Hz, 1H), 5,25 (dq, Jt = 1,5 Hz, J2 = 10,2 Hz, 1H), 5,10 (s, 2H), 4,22 - 4,09 (m, 3H), 3,98 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 3,89 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,57 (s, 3H), 3,37 - 3,17 (m, 3H), 3,07 (dd, J, = 8,1 Hz, J2 = 18 Hz, 1H), 2,71 (m, 2H), 2,48 (d, 7 = 18 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,19 (s, 3 H), 2,17 (s, 3H), 1,80 (dd, 7/- 12,3 Hz,72= 15,9 Hz, 1H) 13C NMR (75 MHz, CDCfi): δ 148,5, 148,2, 144,3, 138,7, 133,7, 130,7, 129,9, 125,0, 123,9,
121,3, 117,9, 117,5, 113,6, 112,0, 101,0, 99,2, 74,0, 59,8, 59,7, 58,8, 57,6, 57,0, 56,2, 55,2, 44,2,
41,5,31,5,26,4, 25,6, 22,5, 16,7, 14,0,9,2.
ESI-MS m/z počítáno pro ^|Η38Ν4θ6: 562,66. Zjištěno (M+H)+: 563,1
Příklad 12
K roztoku 24 (20 mg, 0,035 mmol) v H2O (0,7 ml) a THF (0,7 ml) byl přidán NaNO2 (12 mg, 0,17 mmol) a 90% vodný roztok AcOH (0,06 ml) při teplotě 0 °C a při této teplotě byla reakční směs míchána 3 h. Po naředění CH2C12 (5 ml) byla organická vrstva promyta vodou (1 ml), vysušena přes síran sodný a zakoncentrovaná in vacuo. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO2, hexan:ethylacetát 2:1) za vzniku 25 (9,8 mg, 50 %) ve formě bílé pevné látky.
Rf: 0,34 (hexan:ethylacetát 1:1).
'H NMR (300 MHz, CDC13): δ 6,71 (s, 1H), 6,11 (m, 1H), 5,92 (d,7= 1,5 Hz, 1H), 5,87 (d,7 =
1,5 Hz, 1H), 5,42 (dq, 7; = 1,5 Hz, J2 = 17,1 Hz, 1H), 5,28 (dq, J, = 1,5 Hz, J2 = 10,2 Hz, 1H),
-53CZ 303536 B6
5,12 (s, 2H), 4,26 - 4,09 (m, 3H), 4,05 (d, J= 2,4 Hz, IH), 3,97 (d, J= 3,0, IH), 3,70 (s, 3H), 3,67 - 3,32 (m, 4H), 3,58 (s, 3H), 3,24 (dd, Jt = 2,7 Hz, J2 = 15,9 Hz, 1H), 3,12 (dd, J, = 8,1 Hz, J2 = 18,0 Ηζ,ΙΗ), 2,51 (d, J= 18 Hz, IH), 2,36 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 1,83 (dd, Λ = 12,3 Hz,/2= 15,9 Hz, IH) l3C NMR (75 MHz, CDC13): δ 148,7, 148,4, 138,9, 133,7, 131,1, 129,4, 125,1, 123,9, 120,7,
117.6, 117,5, 113,2, 112,3, 101,1, 99,2, 74,0, 63,2, 59,8, 59,7, 57,9, 57,7, 57,0, 56,5, 55,2, 41,6,
29.6, 26,1,25,6, 22,6, 15,7, 9,2.
ESI-MS m/z počítáno pro C3iH37N3O7: 563,64. Zjištěno (M+H)+: 564,1
2,2,2-trich (orethylch (orořorm iát
NaH, THF, wflux
Výchozí sloučenina (2,0 g, 5,90 mmol) byla přidána k suspenzi hydridu sodného (354 mg, 8,86 mmol) v THF (40 ml) při teplotě 23 °C. Poté byl k suspenzi přidán allylchlorformiát (1,135 ml, 8,25 mmol) při teplotě 23 °C a tato reakce probíhala 3 h. Suspenze byla ochlazena, odfiltrována, pevná látka byla promyta ethylacetátem (100 ml) a filtrát byl zakoncentrován. Ole20 jovitý hrubý produkt byl rozetřen s hexanem (100 ml) a přes noc uložen do 4 °C. Poté bylo rozpouštědlo odcentrifugováno a ke světle žluté řídké hmotě byl přidán CH2CI2 (20 ml). Reakční směs byla precipitována hexanem (100 ml). Po 10 minutách bylo rozpouštědlo opět odcentrifugováno. Tato procedura byla opakována do té doby, až se objevila bílá pevná látka. Bílá pevná látka byla odfiltrována a vysušena za vzniku sloučeniny 29 (1,80 g, 65 %) ve formě bílé pevné látky.
'H-NMR (300 MHz, CDC13): δ 7,74 (d, J= 7,5 Hz, 2H), 7,62 (d, J= 6,9 Hz, 2H), 7,33 (t, J =
7,5 Hz, 2H), 7,30 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 5,71 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,73 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 4,59 (m, 1H), 4,11 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 3,17 (dd, J = 6,0 Hz, J = 2,7 Hz, 2H), 3,20 (dd, J = 5,4 Hz, J =
2,1 Hz, 2H).
]3C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 173,6, 152,7, 144,0, 139,7, 137,8, 126,0, 125,6, 123,4, 118,3,
73,4, 52,4,45,5,35,8,33,7.
ESI-MS m/z počítáno pro C20Hi8Ci3NO4S: 474,8. Zjištěno (M+H)f: 497,8 35
Příklad 14
-54CZ 303536 B6
Směs sloučeniny 25 (585 mg, 1,03 mmol) a sloučeniny 29 (1,47 g, 3,11 mmol) byla azeotropována bezvodým toluenem (3x 10 ml). K roztoku 25 a 29 v bezvodém CH2C12 (40 ml) byl přidán DMAP (633 mg, 5,18 mmol) a EDC.HC1 (994 mg, 5,18 mmol) při teplotě 23 °C. Reakční směs byla míchána 3 h při 23 °C. Směs byla rozdělena pomocí nasyceného vodného roztoku hydrogenuhliěítanu sodného (50 ml) a vrstvy byly odděleny. Vodná fáze byla promyta CH2CI2 (50 ml). Organické fáze byly spojeny a vysušeny přes síran sodný, filtrovány a zakoncentrovány. Hrubý produkt byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (ethylacetát/hexan 1 : 3) za vzniku 30 (1,00 g, 95 %) ve formě bledě smetanově žluté pevné látky.
'H-NMR (300 MHz, CDC13): δ 7,72 (m, 2H), 7,52 (m, 2H), 7,38 (m, 2H), 7,28 (m, 2H), 6,6 (s, IH), 6,03 (m, IH), 5,92 (d, J= 1,5 Hz, IH), 5,79 (d, J= 1,5 Hz, IH), 5,39 (m, IH), 5,29 (dq, J = 10,3 Hz, J= 1,5 Hz, IH), 5,10 (s, 2H), 4,73 (d, J= 11,9 Hz, IH), 4,66 (d, J= 11,9 Hz, 1H),4,53 (m, IH), 4,36 - 3,96 (m, 9H), 3,89 (t, J= 6,4 Hz, IH), 3,71 (s, 3H), 3,55 (s, 3H), 3,33 (m, IH), 3,20 (m, 2H), 2,94 (m, 3H), 2,59 (m, IH), 2,29 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,83 (dd, 7=16,0 Hz,7= 11,9 Hz, IH).
,3C NMR (75 MHz, CDC13): δ 169,7, 154,0, 148,8, 145,7, 144,5, 140,9, 139,0, 133,7, 130,9,
130.6, 127,6, 127,0, 124,8, 124,6, 124,1, 120,8, 119,9, 118,2, 117,7, 117,3, 112,7, 112,1, 101,3,
99,2, 74,7, 73,9, 64,4, 59,8, 57,7, 57,0, 56,8, 55,4, 53,3, 46,7. 41.4. 36.5. 34.7. 31.5. 26.4, 24,9,
22.6, 15,7, 14,0, 9,1.
ESI-MS m/z počítáno pro C51H53C13N4O10S: 1020,4. Zjištěno (M+H)+: 1021,2
Příklad 15
K roztoku 30 (854 mg, 0,82 mmol) byla při teplotě 23 °C přidána kyselina octová (500 mg, 30 8,28 mmol), (PPh3)2PdCl2 (29 mg, 0,04 mmol) v bezvodém CH2CI2 (20 ml) a po kapkách
Bu3SnH (650 mg, 2,23 mmol). Reakční směs byla míchána při této teplotě 15 min. Reakce byla zastavena vodou (50 ml) a extrahována CH2C12 (3x 50 ml). Spojené organické fáze byly vysušeny přes síran sodný, filtrovány a zakoncentrovány. Hrubý produkt byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (ethylacetát/hexan v gradientu od 1 : 5 až po 1 : 3) za vzniku slouče35 niny 31 (730 mg, 90 %) ve formě světle smetanově žluté pevné látky.
‘H-NMR (300 MHz, CDC13): δ 7,72 (m, 2H), 7,56 (m, 2H), 7,37 (m, 2H), 7,30 (m, 2H), 6,65 (s, IH), 5,89 (s, IH), 5,77 (s, IH), 5,74 (s, IH), 5,36 (d, J= 5,9 Hz, IH), 5,32 (d, J= 5,9 Hz, IH), 5,20 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,75 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 4,73 (m, 1H), 4,48 (d, J = 11,9 Hz, 1H), 4,08
-55CZ 303536 B6 (m, 4H), 3,89 (m, 1H), 3,86 (t, J= 6,2 Hz, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,69 (s, 3H), 3,38 (m, 1H), 3,25 (m, IH), 3,02 - 2,89 (m, 4H), 2,67 (s, IH), 2,61 (s, 1H), 2,51 (dd, J = 14,3 Hz, J = 4,5 Hz, IH), 2,29 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 1,95 (s, 3H), 1,83 (m, 1H).
13C NMR (75 MHz, CDClj): δ 168,2, 152,5, 148,1, 146,2, 144,4, 144,3, 143,3, 139,6, 134,6, 129,7, 129,6, 126,2, 125,6, 123,4, 123,3, 121,6, 118,5, 116,3, 110,7, 110,2, 105,1, 99,4, 98,5,
75,2, 73,3, 61,7, 58,4, 57,9, 56,3, 56,1, 55,1, 54,7, 53,8, 51,9, 45,2, 40,1, 35,6, 33,3, 24,8, 23,3,
14,5, 7,3.
ESI-MS m/z počítáno pro C48H49C1JN4O10: 980,3. Zjištěno (M+H)+: 981,2
Příklad 16
(JI)
K roztoku 31 (310 mg, 0,32 mmol) v bezvodém CH2C12 (15 ml) při teplotě -10 °C byl pomoct kanyly přidán roztok 70% anhydridu benzenselenu (165 mg, 0,32 mmol) v bezvodém CH2C12 (7 ml). Teplota reakce byla udržována na -10 °C a míchána 5 min. Při této teplotě byl přidán nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného (30 ml). Vodná fáze byla promyta nadbytkem CH2C12 (40 ml). Spojené organické vrstvy byly vysušeny přes síran sodný, filtrovány a zakoncentrovány. Hrubý extrakt byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (ethylacetát/hexan v gradientu od 1 : 5 až po 2 : 1) za vzniku 32 (287 mg, 91 %, HPLC: 91,3 %) ve formě směsi dvou isomerů (65 : 35) světle smetanově žluté pevné látky, které byly použity v následujícím kroku.
'H-NMR (300 MHz, CDC13): δ (Směs izomerů) 7,76 (m, 4H), 7,65 (m, 4H), 7,39 (m, 4H), 7,29 (m, 4H), 6,62 (s, 1H), 6,55 (s, 1H), 5,79 - 5,63 (m, 6H), 5,09 (s, 1H), 5,02 (d, J= 6,0 Hz, 1H), 4,99 (d, 7=6,0 Hz, 1H), 4,80-4,63 (m, 6H), 4,60 (m, 1H), 4,50 (m, 1H), 4,38 (d, 7 = 12,8 Hz,
7=7,5 Hz, 1H), 4,27 (dd, J= 12,8 Hz, 7= 7,5 Hz, 1H), 4,16 - 3,90 (m, 1 OH), 3,84 (s, 3H), 3,62 (s, 3H), 3,50 (s, 3H), 3,49 (s, 3H), 3,33 - 2,83 (m, 14H), 2,45 - 2,18 (m, 2H), 2,21 (s, 6H), 2,17 (s, 6H), 1,77 (s, 6H), 1,67 (m, 2H).
,3C NMR (75 MHz, CDC13): δ (Směs izomerů) 168,6, 168,4, 158,6, 154,8, 152,8, 152,5, 147,3,
147.2, 146,8, 144,1, 144,0, 140,8, 139,7, 137,1, 129,8, 129,3, 128,4, 128,7, 126,5, 125,5, 123,7,
1 23,6, 123,5, 123,4, 122,2, 121,3, 118,3, 115,8, 115,5, 110,2, 106,9, 103,5, 103,2, 100,1, 99,6,
97.9, 97,7, 93,8, 73,4, 70,9, 69,2, 64,9, 62,5, 59,3, 58,9, 58,4, 56,7, 56,3, 56,2, 55,4, 55,2, 55,1,
54.9, 54,7, 54,3, 54,1, 53,8, 52,8, 45,5, 45,5, 40,5, 40,0, 39,8, 35,8, 35,5, 33,9, 33,7, 30,1, 28,8,
24.2.24.1.21.2, 14,5, 14,4, 12,6, 6,0,5,7.
ESI-MS m/z počítáno pro CjgH^CnN^nS: 996,3 Zjištěno (M+H)+: 997,2
-56CZ 303536 B6
Příklad 17
(32) (33)
Reakční nádoba byla dvakrát vypálena plamenem, vícekrát protažena vakuein/argonem a uskladněna v argonové atmosféře. K. roztoku DMSO (39,1 μΐ, 0,55 mmol, 5 ekvivalentů) v bezvodém CH2C12 (4,5 ml) byl po kapkách přidán anhydrid trifluormethansulfonové kyseliny (37,3 μΙ, 0,22 mmol, 2 ekvivalent), při teplotě -78 °C. Reakční směs byla míchána při -78 °C 20 min, poté byl kanylou přidán roztok 32 (110 m, 0,11 mmol, HPLC: 91,3 %) v bezvodém CH2C12 (1 ml jako io hlavní přídavek, 0,5 ml pro promývání), při -78 °C. Po dobu přidávání reaktantů byla teplota reakční směsi udržována na -78 °C v obou nádobách a barva směsi se změnila ze žluté na hnědou. Reakční směs byla míchána při teplotě —40 °C po dobu 35 min. Barva roztoku se změnila ze žluté na tmavě zelenou. Poté byl po kapkách přidán 'Pr2NEt (153 μΐ, 0,88 mmol, 8 ekvivalentů) a teplota reakční směsi byla udržována na 0 °C po dobu 45 min a barva roztoku se změnila na hně15 dou. Poté byl po kapkách přidán t-butanol (41,6 μΐ, 0,44 mmol, 4 ekvivalenty) a 2-butyl1,1,3,3-tetramethylguanidin (154,6 μΐ, 0,77 mmol, 7 ekvivalentů). Reakční směs byla míchána 40 min pri teplotě 23 °C. Poté byl po kapkách přidán acetanhydrid (104,3 μΙ, 1,10 mmol, 10 ekvivalentů) a reakční směs byla další hodinu udržována při teplotě 23 °C, Poté byla reakční směs naředěna CH2C12 (20 ml) a promyta vodným nasyceným roztokem NH4C1 (50 ml), hydro20 genuhličitanu sodného (50 ml) a chloridu sodného (50 ml). Spojené organické fáze byly usušeny přes síran sodný, filtrovány a zakoncentrovány. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (eluční činidlo: ethylacetát/hexanový gradient od 1 : 3 až po 1 : 2) za vzniku sloučeniny 33 (54 mg, 58 %) ve formě světle žluté pevné látky.
’H~NMR (300 MHz, CDCL): δ 6,85 (s, IH), 6,09 (s, IH), 5,99 (s, IH), 5,20 (d, J= 5,8 Hz, IH), 5,14(d, J=5,3 Hz, IH), 5,03 (m, IH), 4,82 (d,J= 12,2 Hz, 1H),4,63 (d,J= 12,0 Hz, 1H),4,52 (m, 1H), 4,35 - 4,17 (m, 4H), 3,76 (s, 3H), 3,56 (s, 3H), 3,45 (m, 2H), 2,91 (m, 2H), 2,32 (s, 3H),
2,28 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,12 (m, 2H), 2,03 (s, 3H), t3C NMR (75 MHz, CDC13): δ 168,5, 167,2, 152,7, 148,1, 147,1, 144,5, 139,6, 139,1, 130,5, 129,0, 123,7, 123,5, 123,3, 118,8, 116,5, 112,1, 100,6, 97,8, 73,3, 60,5, 59,4, 59,2, 58,3, 57,6, 57,4, 56,1, 53,3, 53,1,40,6, 40,0, 31,0, 22,2, 18,9, 14,4, 8,1.
ESI-MS m/z počítáno pro C36H39Ci3N4OnS: 842,1. Zjištěno (M+H)+: 834,1
-57 CZ 303536 B6
Příklad 18
(33) (34)
K roztoku 33 (12 mg, 0,014 mmol) v suchém dichlormethanu 1,2 ml) a HPLC čistém acetonitrilu (1,2 ml) byl přidán při teplotě 23 °C jodid sodný (21 mg, 0,14 mol) a čerstvě destilovaný (přes kalciumhydrid pod atmosférickým tlakem) trimethylsilylchlorid (15,4 mg, 0,14 mmol). Barva reakční směsi se změnila na oranžovou. Po 15 min byl roztok naředěn dichlormethanem (10 ml) a promyt čerstvým vodou nasyceným roztokem Na2S2O4 (3x 10 ml). Organická fáze byla vysušena ío přes síran sodný, filtrována a zakoncentrována. Byla získána sloučenina 34 (13 mg, kvantitativní) ve formě světle žluté pevné látky, která byla dále použita bez jakékoliv purifikace.
lH-NMR (300 MHz, CDCh): δ 6,85 (s, IH), 6,09 (s, IH), 5,99 (s, IH), 5,27 (d, J= 5,8 Hz, IH), 5,14 (d,J= 5,3 Hz, IH), 5,03 (d,J= 11,9 Hz, IH), 4,82 (d,J= 12,2 Hz, IH), 4,63 (d,J= 13,0
Hz, IH), 4,52 (m, IH), 4,34 (m, IH), 4,27 (bs, IH), 4,18 (m, 2H), 3,76 (s, 3H), 3,56 (s, 3H), 3,44 (m, IH), 3,42 (m, IH), 2,91 (m, 2H), 2,32 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,03 (s, 3H).
ESI-MS m/z počítáno pro C34H35N4O10S: 798,1. Zjištěno (M+H)+: 799,1
Příklad 19
(34) (35)
K roztoku 34 (13 mg, 0,016 mmol) ve směsi octové kyseliny ve vodě (90 : 1, 1 ml) byl přidán zinkový prášek (5,3 mg, 0,081 mmol) při teplotě 23 °C. Reakční směs byla zahřívána 6 h na teplotu 70 °C. Poté byla reakce ochlazena na 23 °C, naředěna CH2C12 (20 ml) a promyta vodným nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (15 ml) a vodným roztokem E^N (15 ml). Organická fáze byla vysušena přes síran sodný, filtrována a zakoncentrována. Zbytek byl purifi30 kován pomocí sloupcové chromatografie silika-NH2 (eluční činidlo: ethylacetát/hexanový gradient od 0 : 100 až po 50 : 50) za vzniku sloučeniny 35 (6,8 mg, 77 % - 2 kroky) ve formě světle žluté pevné látky.
-58CZ 303536 B6 1 H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,51 (s, 1H), 6,03 (dd, J= 1,3 Hz, J - 26,5 Hz, 2H), 5,75 (bs, 1H), 5,02 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 4,52 (m, 1H), 4,25 (m, 2H), 4,18 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 4,12 (dd, J = 1,9 Hz, J= 11,5 Hz, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,40 (m, 2H), 3,26 (t, J= 6,4 Hz, 1H), 2,88 (m, 2H), 2,30 -2,10 (m, 2H), 2,30 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), 2,02 (s, 3H).
I3C-NMR (75 MHz, CDC13): δ 174,1, 168,4, 147,8, 145,4, 142,9, 140,8, 140,1, 131,7, 130,2, 129,1, 128,3, 120,4, 118,3, 117,9, 113,8, 111,7, 101,7, 61,2, 59,8, 59,2, 58,9, 54,4, 53,8, 54,4, 41,3, 41,5, 34,1,23,6, 20,3, 15,5, 9,4.
ESI-MS m/z počítáno pro C31H34N4OgS: 622,7. Zjištěno (M+H)+: 632,2
Příklad 20
K roztoku 36 (49 mg, 0,08 mmol) a 2-/3-hydroxy-4-methoxyfenyl/ethyl aminu (46,2 mg, 0,27 mmol) v ethanolu (2,5 ml) byl přidán silikagel (105 mg) při teplotě 23 °C. Reakční směs byla míchána při teplotě 23 °C po dobu 14 h. Reakční směs byla naředěna hexanem a nalita do chromatografické kolony (ethylacetát/hexan od 1:3 až do 1:1) za vzniku Et-770 (55 mg, 90 %) ve formě světle žluté pevné látky.
‘H-NMR (300 MHz, CDC13): δ 6,60 (s, 1H),6,47 (s, 1H), 6,45 (s, 1H),6,O5 (s, 1H), 5,98 (s, 1H), 5,02 (d, J= 11,4 Hz, 1H), 4,57 (bs, 1H), 4,32 (bs, 1H), 4,28 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 4,18 (d, J= 2,5 Hz, 1H), 4,12 (dd, J=2,l Hz, J= 11,5 Hz, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,62 (s, 3H), 3,50 (d,J= 5,0 Hz,
1H), 3,42 (m, 1H), 3,10 (ddd, J= 4,0 Hz,./- 10,0 Hz, J= 11,0 Hz, 1H), 2,94 (m, 2H), 2,79 (m,
1H), 2,61 (m, 1H), 2,47 (m, 1H), 2,35 (m, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,09 (m, 1H), 2,04 (s,3H).
ESI-MS m/z počítáno pro C^IW^OjoS: 770,7. Zjištěno (M+H)+: 771,2 30
Příklad 22
-59CZ 303536 B6
K roztoku 21 (22 mg, 0,042 mmol) vCH2Cl2 (0,8 ml) byl přidán ftalát anhydrid (6,44 mg, 0,042 mmol) a reakční směs byla míchána při 23 °C po dobu 2 h. Poté byl přidán karbonyldiimidazol (1 mg, 0,006 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě 23 °Č 7 h. Poté byl přidán karbonyldiimidazol (5,86 mg, 0,035 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě 23 °C dalších 17 h. Roztok byl nareděn CH2C12 (15 ml) a promyt 0,lM HCI (15 ml). Organická fáze byla vysušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO2, hexan :ethylacetát 2 : 1) za vzniku 27 (26,4 mg, 96 %) ve formě bílé pevné látky.
Rf: 0,58 (ethylacetát).
1 H-NMR (300 MHz, CDC13): δ 7,73 - 7,64 (m, 4H), 6,40 (s, IH), 6,12 - 6,01 (m, IH), 5,63 (s, 1H), 5,58 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,37 (dd, 7/=1,8 Hz, J2 = 17,4 Hz), 5,23 (dd, 7/ = 1,8 Hz, J2 = 10,5 Hz, IH), 5,12 (d, J= 1,5 Hz, IH), 4,22 - 4,15 (m, 3H), 4,08 (d, J= 1,8 Hz, IH), 3,68 (s, 3H), 3,59 - 3,55 (m, 2H), 3,35 (d, J = 8,1 Hz, IH), 3,27 - 3,16 (m, 2H), 3,05 (dd, J} = 8,1 Hz, J2 18,3 Hz, IH), 2,64 (d, 7 = 18,0 Hz, IH), 2,30 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,09 (s, 3H), 1,80 (dd, 7/ =
11,4 Hz,72=15Hz, IH);
13C-NMR (75 MHz, CDCh): δ 167,7, 148,9, 146,4, 144,2, 142,6, 139,5, 134,0, 133,5, 132,0, 131,0, 128,3, 123,0, 121,3, 120,9, 118,1, 117,5, 116,8, 113,6, 112,4, 100,8, 74,5, 60,6, 60,5, 57,7,
56,6, 55,6, 55,5,42,3, 41,7, 26,6, 25,5, 15,9, 9,46.
ESI-MS m/z počítáno pro C37H35N4O7: 648,79. Zjištěno (M+H)+: 649,3
Příklad 23
K roztoku 27 (26 mg, 0,041 mmol) v CH2C12 (11 ml) byla přidána octová kyselina (11 ml), 30 (PPh3)PdCl2 (2,36 mg) a Bu3SnH (28 ml, 0,10 mmol) při teplotě 23 °C. Po dvouhodinovém míchání při této teplotě byla reakční směs nalita na separační kolonu (SÍO2, gradient po hexan:ethylacetát 2 : 1) za vzniku 28 (24,7 mg, 99 %) ve formě bílé pevné látky.
Rf: 0,33 (hexan: ethyl acetát 2:1).
'H-NMR (300 MHz, CDC13): δ 7,75 - 7,70 (m, 2H), 7,69 - 7,65 (m, 2H), 6,39 (s, 1Η), 5,82 (bs, IH), 5,50 (d, 7= 1,5 Hz, IH), 5,0 (d,7= 1,5 Hz, 1H),4,45 (bs, IH), 4,23-4,19 (m, 2H), 4,104,09 (m, IH), 3,73 (s, 3H), 3,60 - 3,48 (m, 2H), 3,36 -3,33 (m, IH), 3,26 - 3,20 (m, IH), 3,143,08 (m, IH), 3,98 (d,7= 14,4 Hz, IH), 2,61 (d,7= 18,3 Hz, IH), 2,30(s,3H), 2,23 (s, 3H), 2,06 (s,3H), 1,85 (dd,7/= 12 Hz,72= 15,3 Hz);
13C-NMR (75 MHz, CDCh): δ 167,8, 146,4, 145,1, 143,9, 142,7, 137,1, 133,5, 131,9, 130,8, 128,4, 122,9, 120,8, 118,0, 116,8, 114,0, 113,4, 106,4, 100,4, 60,6, 60,5, 57,8, 56,6, 55,5, 55,2, 42,6,41,5,25,6, 25,5, 15,8, 8,9.
ESI-MS m/z počítáno pro C^H^Ch: 608,6. Zjištěno (M+H)+: 609,2
-60CZ 303536 B6
Příklad 24
K roztoku 28 (375 mg, 0,58 mmol) vCH2C12 (3 ml) byl přidán acetylchlorid (41,58 μΐ, 0,58 mmol) a pyridin (47,3 μΐ, 0,58 mmol) při teplotě 0 °C. Reakční směs byla míchána 1 h a poté byl roztok naředěn CH2C12 (15 ml) a propláchnut O,1M HCI (15 ml). Organická fáze byla vysušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (RP-18, CH3CN:H2O 60 : 40) za vzniku ftalascidinu io (354 mg, 94 %) ve formě bílé pevné látky.
Rf: 0,37 (CH3CN:H2O 7:3 RP-18).
'H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,72 - 7,68 (m, 2H), 7,67 - 7,63 (m, 2H), 6,38 (s, IH), 5,69 (d, J = 1,2 Hz, IH), 5,64 (d,J= 1,2 Hz, IH), 5,30 (bs, IH), 4,25-4,21 (m, 2H), 4,02 (d, 7= 2,1 Hz,
IH), 3,64 - 3,62 (m, 5H), 3,33 (d, J= 8,4 Hz, IH), 3,31 -3,16 (m, IH), 3,02 (dd, J, = 8,1 Hz, J2 = 18 Hz, IH), 2,76 (dd, 7, = 1,8 Hz, J2 = 15,6 Hz, IH), 2,63 (d, J= 17,7 Hz, IH), 2,29 (s, 3H),
2,28 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,0 (s, 3H), 1,73 (dd,7, = 12,0 Hz,72= 15,3 Ηζ,ΙΗ)) ,3C-NMR (75 MHz, CDC13)): δ 168,5, 167,6, 146,2, 144,2, 142,5, 141,0, 140,5, 133,4, 131,8,
130,7, 128,2, 120,9, 120,8, 117,9, 116,4, 113,6, 101,1, 60,4, 60,0, 57,0, 56,3, 55,6, 55,4, 41,6,
41,5,26,5,25,2,20,2, 15,7,9,4.
ESI-MS m/z počítáno pro C^H^N^s: 650. Zjištěno (M+H)+: 651,2
Příklad 25
(17) (42)
K roztoku 17 (300 mg, 0,432 mmol) v CH2Cl2 (2 ml) byl při teplotě 0 °C přidán acetylchlorid 30 (30,7 μΐ, 0,432 mmol) a pyridin (34,9 μΙ, 0,432 mmol). Reakční směs byla míchána 2 h při tep-6l CZ 303536 B6 lotě 0 °C a poté byl roztok naředěn pomocí CH2CI2 (15 ml) a propláchnut 0,lM HCl (15 ml). Organická vrstva byla vysušena přes vrstvu síranu sodného, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem za vzniku sloučeniny 42 (318 mg, 100 %) v podobě bílé pevné látky, která byla použita v následujících reakcích bez další purifikace.
Rf: 0,5 (ethylacetát:methanol 5:1).
1 H-NMR (300 MHz, CDC13): δ 6,66 (s, IH), 5,93 (d, J = 1,2 Hz, IH), 5,83 (d, J= 1,2 Hz, IH), 5,42 (t, J= 6,6 Hz, IH), 5,07 (d, J= 5,7 Hz, IH), 4,98 (d, / = 5,7 Hz, IH), 4,16 (d, J= 1,8 Hz, IH), 4,11 (d, J= 2,7 Hz, IH), 3,98 (bs, IH), 3,73 - 3,61 (m, 2H), 3,64 (s, 3H), 3,52 - 3,48 (m, IH), 3,50 (s, 3H), 3,33 (d, J= 9,6 Hz, IH), 3,17 - 3,14 (m, IH), 2,97 - 2,87 (m, IH), 2,75 - 2,70 (d, J = 16,8 Hz, 1 H),2,26 (s, 6H), 2,16 (s, 3H), 1,96 (s, 3H), 1,70 (dd, //=11,7 Hz, J2 = 15,6 Hz, IH), 1,3 (s, 9H), 0,59 (d, J= 6,0 Hz, 3H).
13C NMR (75 MHz, CDC13): δ 172,0, 168,3, 162,3, 148,2, 144,4, 140,4, 140,2, 130,9, 130,5, 125,3, 123,4, 120,8, 117,6, 112,7, 111,7, 101,4, 99,1, 79,2, 59,5, 58,8, 57,5, 57,4, 56,4, 55,5, 55,0, 41,3, 39,0, 28,2, 26,4, 24,6, 19,9, 18,4, 15,4, 9,1.
ESI-MS m/z počítáno pro C38H49N5Oio: 735,82. Zjištěno (M+H)+: 736,3
Příklad 26
Me (43)
K roztoku 42 (318 mg, 0,432 mmol) v CH2CI2 (2,16 ml) byla přidána trifluoroctová kyselina (1,33 ml, 17,30 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě 23 °C 3,5 h. Reakce byla zastavena při teplotě 0 °C pomocí nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (60 ml) a extrahována CH2CI2 (2x 70 ml). Spojené organické vrstvy byly vysušeny (síran sodný) a zakoncentrovány in vacuo. Zbytek byl purifíkován pomocí sloupcové chromatografie (SiO2, ethylacetát: methanol 20 : 1) za vzniku sloučeniny obecného vzorce 43 (154 mg, 60 %) v podobě bílé pevné látky.
Rf: 0,22 (ethylacetát: methanol 5 : 1).
'H-NMR (300 MHz, CDCb): δ 6,47 (s, IH), 6,22 (bs, IH), 5,95 (d,<Z= 1,2 Hz, IH), 5,88 (d,/ = 1,2 Hz, IH), 4,08 - 4,06 (m, 2H), 4,01 (bs, IH), 3,69 (s, 3H), 3,49 (d, J = 3,6 Hz, IH), 3,33 (d, J -8,1 Hz, IH), 3,26-3,22 (m, IH), 2,95 (dd, / = 8,1 Hz, Λ = 18 Hz, IH), 2,80 - 2,76 (m, 2H), 2,58 (d,/ = 18 Hz, IH), 2,29 (s,3H), 2,27 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 1,96 (s, 3H), l,77(dd,// = 12,3 Hz,Λ= 15,6 Hz, IH), 0,90 (d,/=6,9 Hz, 3H).
nC NMR (75 MHz, CDC13): δ 174,8, 169,0, 146,8, 144,4, 142,8, 140,5, 140,2, 131,1, 128,8,
120,8, 120,5, 117,1, 112,9, 111,6, 101,5, 60,3, 59,0, 56,5, 56,3, 55,6, 55,1, 50,2, 41,6, 39,5, 26,8, 26,3,24,9, 20,2, 15,4, 9,2.
ESI-MS m/z počítáno pro C3,H37N5O7: 591,65. Zjištěno (M+H)+: 592,3
-62CZ 303536 B6
Příklad 27
K roztoku 43 (154 mg, 0,26 mmol) v CH2CI2 (1,3 ml) byl přidán fenylisothiokyanát (186 μΐ, 1,56 mmol) a reakční směs byla při teplotě 23 °C míchána 2 h. Reakční směs byla zakoncentrována in vacuo a zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO2, gradient hexan až po hexan: ethylacetát 1 : 1) za vzniku sloučeniny obecného vzorce 44 (120 mg, 63 %) v podobě bílé pevné látky.
Rf: 0,41 (ethylacetát:methanol 5 : 1).
'H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 8,17 (s, 1H), 7,49 - 7,44 (m, 3H), 7,31 - 7,24 (m, 3H), 7,05 (d, J= 6,9 Hz, 1H), 5,98 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 5,87 (t, J = 1,2 Hz, 1H), 5,52 (bs, 1H), 4,54 (t, J= 6,6 Hz, 1H), 4,15 (d, 7= 2,1 Hz, 1H), 4,03 (d, J= 2,7 Hz, 2H), 3,80 (bs, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,40 (bs, 1H), 3,32 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 3,16 (d, J= 11,7 Hz, 1H), 2,82-2,61 (m, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,01 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,80 (dd, Λ = 12,0 Hz, J2 - 15,9 Hz, 1H), 0,62 (d, 7=6,0 Hz, 3H).
13C NMR (75 MHz, CDC13): δ 178,5, 171,9, 168,7, 146,7, 144,5, 142,6, 140,6, 140,3, 136,3, 131,0, 129,9, 128,9, 126,7, 124,4, 120,9, 120,6, 117,7, 116,6, 112,7, 111,9, 101,4, 60,4, 58,7,
57,5, 56,1, 55,7, 551, 53,3, 41,4, 38,8, 26,3, 24,4, 20,2, 18,1, 15,3, 9,2.
ESI-MS m/z počítáno pro C38H42N6O7S: 726,3. Zjištěno (M+H)+: 727,3
Příklad 28
K roztoku 44 (120 mg, 0,165 mmol) v dioxanu (0,9 ml) byl přidán 5,3M HCl/dioxan (1,8 ml) a 30 reakční směs byla při teplotě 23 °C míchána 2,5 h. Poté byl k reakční směsi přidán CH2C12 (10 ml) a H2O (5 ml) a organická fáze byla odcentrifugována. Vodná fáze byla alkalizována
-63CZ 303536 B6 pomocí roztoku saturovaného hydrogenuhličitanu sodného (20 ml) (pH 8) při teplotě 0°C a poté extrahována pomocí CH2C12 (2x 15 ml). Spojené organické extrakty byly vysušeny (síran sodný) a zakoncentrovány in vacuo za vzniku sloučeniny obecného vzorce 45 (75 mg, 87 %) ve formě bílé pevné látky, která byla použita v následujících reakcích bez další purifikace.
Rf: 0,23 (ethylacetát:methanol 5:1).
1 H-NMR (300 MHz, CDCb): δ 6,43 (s, 1H), 5,94 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 5,87 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 4,10(d,7=2,l Hz, 1H), 3,98 (d, 7=2,4 Hz, 1H),3,91 (bs, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,34 - 3,25 (m, 2H), 3,05 (dd, 7/ = 1,8 Hz,72 = 8,l Hz, 1H), 2,80-2,73 (m, 3H), 2,46 (d,7 = 18 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H),
2,28 (s,3H), 2,20 (s, 3H), 1,98 (s,3H), 1,79 (dd,7,= 12,6 Hz,72= 16,2 Hz, 1H);
13C NMR (75 MHz, CDCb): δ 168,7, 146,7, 144,4, 142,9, 140,4, 130,4, 128,9, 121,1, 120,8,
117,8, 116,8, 113,6, 111,5, 101,4, 67,6, 60,5, 59,8, 58,4, 56,6, 55,8, 55,3, 43,6, 41,8, 31,3, 25,6,
20,2, 15,6,9,2.
ESI-MS m/z počítáno pro C28H32N4O6: 520,58. Zjištěno (M+H)+: 521,3
Příklad 29
(«)
Me (Ftalascldln)
K roztoku 45 (10 mg, 0,02 mmol) vCH2Cl2 (0,4 ml) byl přidán ftalát anhydrid (2,84 mg, 0,02 mmol) a reakční směs byla při teplotě 23 °C míchána 2 h. Poté byl přidán karbony lim idazol (0,5 mg, 0,003 mmol) a reakční směs byla při teplotě 23 °C míchána 7 h. Poté byl přidán karbonylimidazol (2,61 mg, 0,016 mmol) a reakční směs byla při teplotě 23 °C míchána dalších 7 h. Roztok byl naředěn pomocí CH2C12 (10 ml) a promyt 0,lM HCI (5 ml). Organická vrstva byla vysušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (RP-18, CH3CN:H2O 60 : 40) za vzniku ftalascidinu (11,7 mg, 93 %) ve formě bílé pevné látky.
Rf: 0,37 (CH3CN:H2O 7 : 3, RP-18), ‘H-NMR (300 MHz, CDCb): δ 7,72 - 7,68 (m, 2 h), 7,67 - 7,63 (m, 2 h), 6,38 (s, 1H), 5,69 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,64 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 5,30 (bs, 1H), 4,25 -4,21 (m, 2H), 4,02 (d,7=2,l Hz, 1H), 3,64 - 3,62 (m, 5H), 3,33 (d,7= 8,4 Hz, 1H), 3,21 -3,16(m, 1H), 3,02 (dd, 7/ = 8,1 Hz, 72 = 18 Hz, 1H), 2,76(dd,7/= 1,8 Hz. 7,- 15,6 Hz, 1H),2,63 (d,7= 17,7 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H),
2,28 (s,3H), 2,21 (s, 3H), 2,0(s, 3H), 1,73 (dd,7,= 12,0 Hz,72 = 15,3 Hz, 1H));
13C NMR (75 MHz, CDCb): δ 168,5, 167,6, 146,2, 144,2, 142,5, 141,0, 140,5, 133,4, 131,8, 130,7, 128,2, 120,9, 120,8, 117,9, 116,4, 113,6, 101,1, 60,4, 60,0, 57,0, 56,3, 55,6, 55,4, 41,6,
41,5,26,5,25,2, 20,2, 15,7, 9,4.
ESI-MS m/z počítáno pro C36H34N4O8: 650. Zjištěno (M+H)+: 651,2
-64CZ 303536 B6
Příklad 30
K roztoku 25 (18 mg, 0,032 mmol) v DMF (0,05 ml) byl při teplotě 0 °C přidán DMAP (0,5 mg, 0,004 mmol), imidazol (5 mg, 0,08 mmol) a Zerc-butyldifenylsilylchlorid (12,5 μΐ, 0,048 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě 23 °C 6 h. Při teplotě 0 °C byla přidána voda (10 ml) a vodná fáze byla extrahována pomocí hexan:ethylacetát 1:10 (2x 10 ml). Organická vrstva byla vysušena (síran sodný), filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno ve vakuu. Hrubý extrakt byl io purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO?, hexan:ethylacetát 3:1) za vzniku sloučeniny obecného vzorce 26 (27 mg, 88 %) ve formě bílé pevné látky.
Rf: 0,29 (hexan:ethylacetát 3 : 1).
’Η-NMR (300 MHz, CDCh): δ 7,61 - 7,58 (m, 2H), 7,42 - 7,28 (m, 8H), 6,71 (s, IH), 6,19 6,02 (m, IH), 5,78 (d,7 = 1,2 Hz, IH), 5,64 (d,7 = 1,2 Hz, IH), 5,40 (dd, Λ = 1,2 Hz, 7,= 17,1 Hz, IH), 5,27 (dd, 7/= l ,2 Hz, J2 = 10,2 Hz, IH), 5,13 (s, 2H), 4,45 (d,7 =2,4 Hz, 1H),4,24 (d, 7= 2,1 Hz, IH), 4,17 - 4,06 (m, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,64 (dd, J, = 2,4 Hz, J2 = 9,9 Hz, 1H), 3,59 (s,3H), 3,42-3,21 (m, 4H), 3,10 (dd, Λ = 8,1 Hz,72 = 17,7 Hz, IH), 2,70 (d, 7= 17,7 Hz, IH), 2,33 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 2,08 - 1,89 (m, IH), 0,87 (s, 9H);
,3C NMR (75 MHz, CDC13): δ 148,5, 148,3, 148,1, 144,0, 139,0, 135,6, 135,4, 133,8, 133,1,
132,6, 130,5, 130,3, 129,6, 129,4, 127,5, 127,4, 125,1, 124,3, 121,6, 118,5, 117,5, 112,9, 111,7, 100,8, 99,2, 74,0, 67,7, 61,5, 59,6, 59,0, 57,7, 57,1, 55,4, 41,6, 29,6, 26,6, 25,5, 18,8, 15,8, 9,2.
ESI-MS m/z počítáno pro C47H55N3O7SÍ: 801,3. Zjištěno (M+H)+: 802,3
Příklad 31
K roztoku 26 (7 mg, 0,0087 mmol) v CH2C12 (0,15 ml) byla při teplotě 23 °C přidána octová kyselina (2,5 μΐ, 0,044 mmol), (PPh3)2PdCl2 (0,5 mg, 6,96 x 10* mmol) a Bu3SnH (3,5 μΐ, 0,013 mmol). Při této teplotě byla reakční směs míchána 1 h. Roztok byl naředěn směsí hexanxthylacetát 5 : 1 (0,5 ml) a nalit na sloupec separační kolony (SiO2, gradient 5 : 1 až po 1 : 1 hexan:ethylacetát) za vzniku sloučeniny obecného vzorce ET-11 (5 mg, 75 %) ve formě bílé pevné látky.
-65CZ 303536 B6 ίο
Rf: 0,36 (hexan:ethylacetát 1:1, silika).
'H-NMR (300 MHz, CDC13): δ 7,56 (m, 2H), 7,41 - 7,25 (m, 8H), 6,67 (s, IH), 5,72 (d, J= 1,0 Hz, IH), 5,58 (d, J= 1,0 Hz, IH), 5,51 (s, IH), 5,38 (d, J= 5,75 Hz, IH), 5,16 (d, J= 5,7 Hz, IH), 4,57 (d, J= 2,9 Hz, IH), 4,21 (m, IH), 4,09 (m, IH), 3,72 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 3,68 (dd, Jt = 2,1 Hz, J2 = 10,4 Hz, IH), 3,38 - 3,26 (m, 3H), 3,11 (dd, J} = 2,5 Hz, J2 = 15,7 Hz, IH), 3,01 (dd, 7, = 8,9 Hz, J2= 17,9 Hz, IH), 2,70 (d, J= 17,9 Hz, IH), 2,31 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 1,89 (dd, 7/ = 12,1 Hz, J2 = 15,7 Hz, IH), 0,9 (s, 9H));
13C NMR (75 MHz, CDCh): δ 149,0, 147,4, 145,3, 144,3, 136,3, 135,7, 135,4, 133,2, 130,9,
130,5, 129,6, 129,5, 127,5, 125,0, 118,6, 112,5, 112,1, 105,7, 100,5, 99,8, 68,5, 61,5, 59,7, 58,8, 57,7, 56,9, 56,5,55,4,41,7, 26,6, 26,2,25,5, 18,9, 15,8, 14,2, 8,7.
ESI-MS m/z počítáno pro C44H51N3O7S1: 761. Zjištěno (M+H)+: 762
Příklad 32
PhHNSCKN
Roztok, složený z roztoku 2 (3,0 g, 5,46 mmol) a fenylisothiokyanátu (3,92 ml, 32,76 mmol) v CH2CI2 (27 ml) byl pri teplotě 23 °C míchán 1,5 h. Reakční směs byla rozdělena mezi CH2CI2 (10 ml) a H2O (5 ml). Organická vrstva byla vysušena přes síran sodný, filtrována a zakoncentrována. Zbytek byl purifíkován pomocí sloupcové chromatografie (SiO2, gradient hexan až hexan:ethylacetát 2 : 3) za vzniku sloučeniny obecného vzorce 3 (3,29 g, 99 %) ve formě žluté pevné látky.
Rf: 0,27 (ACN:H2O 3 : 2, RP-C18);
'H-NMR (300 MHz, CDCh): δ 7,77 (bs, IH), 7,42 - 7,11 (m, 5H), 6,65 (d, IH), 6,29 (s, IH), 5,6 - 5,5 (m, IH), 4,19 - 4,14 (m, 2 h), 4,08 (d, IH), 3,92 (s, 3H), 3,87-3,65 (m, 6H), 3,77 (s, 3H), 3,37-2,98 (m, 8H), 2,50 (d, IH), 2,31 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 1,96 (d, IH), 1,87 (s, 3H), 1,81 1,75 (m, IH), 0,96 (d, 3H);
nC NMR (75 MHz, CDCh): δ 185,7, 180,9, 178,9, 172,0, 155,7, 147,1, 143,2, 142,2, 136,0, 135,1, 130,5, 129,9, 129,3, 128,5, 126,9, 124,4, 120,2, 117,4, 116,3, 77,1, 60,9, 58,6, 56,2, 55,8, 55,0, 54,6, 53,5,41,7,40,3, 25,1, 24,5, 18,4, 15,8, 8,7
ESI-MS m/z počítáno pro C^^ON^CXS: 684,8. Zjištěno (M+H)*: 685,2
-66CZ 303536 B6
Příklad 33
Roztok 3 (0,143 g, 0,208 mmol) v 6,5M roztoku HCl/dioxan (150 ml) byl při teplotě 23 °C míchán 6 h. Poté byl k reakční směsi přidán toluen (3 ml) a organická vrstva byla odcentrifugována. Zbytek byl rozdělen mezi nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného (3 ml) CHC13 (3x 3 ml). Organické vrstvy byly vysušeny a zakoncentrovány za vzniku sloučeniny jako směsi sloučenin 4 a 6 (4:6 90:10), která pomalu stáním cyklizuje na sloučeninu 6.
io
Rf: 0,4 (ethylacetát:methanol 5:1, silika);
'H-NMR (300 MHz, CDC13): δ 6,45 (s, IH), 4,16 (m, IH), 4,02 (d, IH), 3,96 (s, 3H), 3,79 (m, 2 h), 3,75 (s, 3H), 3,35 (m, IH), 3,20 - 3,00 (m, 3H), 2,87 (d, IH), 2,75 (d, IH), 2,43 (d, IH), 2,34 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 1,93 (s, 3H), 1,72 - 1,5 (m, 3H);
ESI-MS m/z počítáno pro C26H3oN405: 478,5. Zjištěno (M+H)+: 479,2
Příklad 34
Roztok 3 (0,143 g, 0,208 mmol) v 6,5M HC1 v dioxanu (150 ml) byl při teplotě 23 °C míchán 1 h. Odpařením rozpouštědla vznikl zbytek, který byl purifikován pomocí sloupcové chromato25 grafie (ethylacetát.-methanol.'triethylamin 100 ; 25 : 0,1) za vzniku sloučeniny 6 (80 mg, 83 %) ve formě žluté pevné láky.
Rf: 0,26 (ACN:H2O 3 : 2, RP-C18);
'H NMR (500 MHz, CDC13): δ 6,46 (s, IH), 5,9 (bs, IH), 4,67 (dd, 7- 18,3 Hz, J= 7,8 Hz, IH),
4,24 (d, IH), 4,16 (s, 3H), 3,93 (d,7= 2,7 Hz, IH), 3,8 (m, 2 h), 3,77 (s, 3H), 3,45 (m, 2 h), 3,08 (dd, 7- 17,9 Hz, 7= 3,6 Hz, IH), 2,78 (m, IH), 2,55 (d, IH), 2,3 (m, IH), 2,3 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 1,90 (s,3H);
-67CZ 303536 B6 BC NMR (75 MHz, CDC13): δ 186,2, 162,1, 154,9, 146,9, 145,3, 143,0, 130,1, 129,4, 128,1, 125,0, 121,4, 116,4, 116,2, 66,6, 60,7, 60,7, 60,1, 59,6, 58,8, 55,6, 54,9, 41,9, 25,3, 24,7, 15,7, 8,9.
ESI-MS m/z počítáno pro C26H28N4O4: 460,5. Zjištěno (M+H)+: 461,1
Příklad 35
K roztoku 3 (2,38 g, 3,47 mmol) v dioxanu (5 ml) byl přidán 5,3M HCI v dioxanu (34 ml) a reakční směs byla míchána při teplotě 23 °C 45 min. Poté byl přidán AcO2 (51 ml, 539,5 mmol) a reakční směs byla míchána 4 h. Reakční směs byla ochlazena na 0 °C a při této teplotě rozdělena mezi vodný nasycený roztok Na2CO3 (300 ml) a ethylacetát (300 ml). Organická fáze byla vysušena přes síran sodný, filtrována a zakoncentrována. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO2, gradient CH2C12 až CH2Cl2:ethyIacetát 1 : 2) za vzniku sloučeniny 5 (1,75 g, 97 %) ve formě žluté pevné látky.
Rf: 0,53 (ACN:H2O 3 : 2, RP-C18);
‘H-NMR (300 MHz, CDC13): δ 6,51 (s, IH), 5,98 (bs, IH), 4,84 (dd, IH), 4,17 (d, IH), 4,00 (d, IH), 3,99 (s,3H), 3,85 (bs, IH), 3,81 (m, IH), 3,74 (s, 3H), 3,70 (d, IH), 3,23 (m, IH), 3,11 (dd, IH), 3,09 (m, IH), 2,93 (m, 2 h), 2,44 (d, IH), 3,67 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 1,70 (s, 3H), 1,60-1,50 (m,2h), 1,29 (s,3H);
13C NMR (75 MHz, CDC13): δ 185,9, 180,8, 169,9, 160,2, 156,2, 147,0, 143,1, 140,4, 136,1,
130,6, 129,6, 127,9, 120,4, 117,2, 61,0, 60,7, 58,6, 56,1, 55,7, 55,1, 54,3, 41,8, 41,1, 25,7, 23,9,
22,2, 15,7,8,7.
ESI-MS m/z počítáno pro C28H32N4O6: 520,6. Zjištěno (M+H)+: 521,1
Příklad 36
-68CZ 303536 B6
K roztoku 5 (1,75 g, 3,36 mmol) v CH2C12 (17 ml) byl pri teplotě 0 °C přidán diisopropylethylamin (11,71 ml, 67,23 mmol), DMAP (20 mg, 0,17 mmol) a brommethylmethylether (4,11 ml, 50,42 mmol). Po 6 h při teplotě 23 °C byla reakční směs rozdělena mezi CH2CI2 (50 ml) a nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (25 ml). Organická fáze byla vysušena přes síran sodný a rozpouštědlo bylo odstraněno ve vakuu. Hrubý extrakt byl purifikován pomocí sloupcové chromatografíe (RP-18, CH3CN:H2O 1:1) za vzniku sloučeniny 7 (1,32 g, 70 %) ve formě žluté pevné látky.
Rf: 0,34 (ACN:H2O 2 : 3, RP-C18);
ío *H NMR (300 MHz, CDCh): δ 6,74 (s, IH), 5,14 (s, 2 h), 4,82 (m, IH), 4,22 (d, IH), 4,00 (s, 3H), 4,0 (m, IH), 3,83 (m, 2 h), 3,7 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,4 (m, IH), 3,2 - 2,95 (m, 6H), 2,43 (d, IH), 2,37(s,3H), 2,22 (s, 3H), l,89(s,3H), 1,5-1,4 (m, 2 h), 1,31 (s, 3H);
13C NMR (75 MHz, CDCh): δ 185,9, 180,7, 169,9, 156,2, 148,9, 148,5, 140,3, 136,2, 131,3, 130,1, 127,7, 124,6, 123,7, 117,3, 99,5, 99,2, 60,9, 59,7, 58,8, 57,7, 56,4, 55,7, 55,0, 54,2, 51,0,
41,6, 41,0, 40,5, 25,5, 23,9, 22,3, 19,3, 15,6, 14,6, 8,6.
ESI-MS m/z počítáno pro C30H36N4O7: 564,6. Zjištěno (M+H/: 565,3
K roztoku 7 (0,37 g, 0,65 mmol) v methanolu (74 ml) byl při teplotě 0 °C přidán 1M hydroxid sodný (130 ml). Reakční směs byla míchána 15 min a poté byla nastavena při teplotě 0 °C pomocí 6M HCl na pH 5. Reakční směs byla extrahována ethylacetátem (3x 50 ml) a spojené organické vrstvy byly vysušeny přes síran sodný a zákoncentrovány ve vakuu. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografíe (RP-18, CH3CN:H2O 1:1) za vzniku sloučeniny 8 (232 mg, 65 %) ve formě žluté olejovité látky.
Rf: 0,5 (ACN:H2O 3 : 2, RP-C18);
'H NMR (300 MHz, CDCh): δ 6,75 (s, IH), 5,15 (s, 2 h), 4,86 (m, IH), 4,26 (d, IH), 4,01 (d, IH), 3,88 - 3,81 (m, 2 h), 3,70 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,39 (m, IH), 3,27 - 3,21 (m, IH), 3,18 3,08 (m, 2 h), 3,03 -2,97 (m, IH), 2,47 (d, IH), 2,37 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 1,90 (s, 3H), 1,57 1,46 (m,2h), 1,33 (s, 3H);
,3C NMR (75 MHz, CDCh): δ 185,3, 180,6, 175,9, 170,1, 151,5, 148,9, 148,6, 143,3, 133,7, 131,5, 129,9, 124,7, 123,5, 117,1, 117,0 99,2, 59,8, 58,7, 57,8, 56,3, 55,3, 54,9, 54,3,41,5, 40,7,
29,6, 25,5, 24,4, 22,2, 20,7, 15,7, 8,0,
ESI-MS m/z počítáno pro C29H34N4O7: 550,6. Zjištěno (M+H)+; 551,2
-69CZ 303536 B6
K odpiyněnému roztoku sloučeniny 8 (240 mg, 0,435 mmol) v DMF (30 ml) byl přidán 10% Pd/C (48 mg) a reakční směs byla míchána ve vodíkové atmosféře (atmosférický tlak) 1 h. Reakční směs byla filtrována přes vrstvu celitu pod argonem od Schlenkovy zkumavky jako bezbarvý roztok, obsahující bezvodý Cs2CO3 (240 mg, 0,739 mmol). Poté byl přidán bromchlormethan (0,566 ml, 8,71 mmol). Zkumavka byla uzavřena a reakční směs byla míchána při teplotě 90 °C 3 h. Reakční směs byla ochlazena a filtrována přes vrstvu celitu a promyta CH2C12. Organická vrstva byla zakoncentrována a vysušena (síran sodný) za vzniku sloučeniny 9 ve formě hnědé olejovité látky, která byla použita v následujícím kroku bez další purifikace.
Rf: 0,36 (SiO2, hexamethylacetát 1 : 5) 'H NMR (300 MHz, CDC13): δ 6,71 (s, 3H), 5,89 (d, 1H), 5,81 (d, 1H), 5,63 (bs, 1H), 5,33 (d, 1H), 5,17 (d, 1H), 4,97 (m, 1H), 4,20 (d, 1H), 4,09 (m, 1H), 3,99 (m, 1H), 3,68 (m, 1H), 3,65 (s, 6H), 3,59 - 3,47 (m, 4H), 3,37 - 3,27 (m, 2 h), 3,14 - 2,97 (m, 2 h), 2,62 (d, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 1,72 (m, 1H), 1,36 (s, 3H);
13C NMR (75 MHz, CDC13): δ 169,8, 149,1, 147,4, 145,5, 136,2, 130,9, 130,8, 125,0, 122,9,
117,7, 112,6, 111,8, 106,4, 100,8, 99,8, 59,8, 58,9, 57,7, 56,6, 56,4, 55,5, 55,2, 41,6, 40,1, 29,6, 25,9, 25,0, 22,6, 15,6, 8,8.
ESI-MS m/z počítáno pro C30H36SiN4O7: 564,6. Zjištěno (M+H)+: 565,3
Příklad 39
NH
A (9) (19)
Do nádoby obsahující sloučeninu 9 (245 mg, 0,435 mmol) v DMF (4 ml) byl při teplotě 0 °C přidán uhličitan česný (425 mg, 1,30 mmol) a allylbromid (376 μΐ, 4,35 mmol) a směs byla míchána při 23 °C 1 h. Reakční směs byla filtrována přes vrstvu celitu a rozdělena mezi CH2CI2 (25 ml) a H2O (10 ml). Organická fáze byla usušena (síran sodný) a zakoncentrována podtlakem za vzniku zbytku, který byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO2, CHCl3:ethylacetát 1 : 2) za vzniku sloučeniny 10(113 mg, 43 %) ve formě žluté olejovité látky.
- 70 CZ 303536 B6
Rf: 0,36 (hexamethylacetát 1 : 5) *H NMR (300 MHz, CDC13): δ 6,74 (s, 1H), 6,3 - 6,0 (m, 1H), 5,94 (d, 1H), 5,87 (d, 1H), 5,43 5,36 (m, 2 h), 5,22 (s, 2 h), 5,00 (m, lH),4,22(m, 1H), 4,17-4,01 (m, 1H), 3,98 (m, 2 h), 3,71 3,67 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,62 - 3,51 (m, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,39 - 3,37 (m, 1H), 3,31 - 3,26 (m, 3H), 3,09 (dd, 1H), 2,56 (d, 1H), 2,36 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 2,24-2,10 (m, 1H), 1,82- 1,73 (m, 1H), l,24(bs,3H) ,3C NMR (75 MHz, CDC13): δ 169,4, 148,8, 148,3, 139,1, 133,7, 130,9, 130,3, 125,2, 120,2,
117,7, 113,1, 112,6, 101,3, 99,3, 74,1, 59,7, 59,3, 57,8, 57,0, 56,1, 56,1, 55,2, 41,6, 41,0, 40,9, 29,7,26,3,22,5, 15,6,9,3.
ESI-MS m/z počítáno pro C33H40N4O7: 604,7. Zjištěno (M+H)+: 605,3
Příklad 40
Λ
Me
Λ (8) (46)
K roztoku 9 (22 mg, 0,039 mmol) v CH2C12 (0,2 ml) byl při teplotě 0 °C přidán acetylchlorid 20 (2,79 μΐ, 0,039 mmol) a pyridin (3,2 μΐ, 0,039 mmol). Reakční směs byla míchána 1 h a poté byl roztok naředěn CH2C12 (10 ml) a propláchnut 0,lM HC1 (5 ml). Organická fáze byla vysušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem za vzniku sloučeniny 46 (22 mg, 93 %) ve formě bílé pevné látky.
Rf: 0,4 (hexan:ethylacetát 1 : 5) 'HNMR (300 MHz, CDCh): δ 6,74 (s, 1H), 5,97 (d, J= 0,9 Hz, 1H), 5,91 (d, 7=0,9 Hz, 1H), 5,12 (d, 7= 5,7 Hz, 2 h), 5,04 (d, 7= 5,7 Hz, 1H), 4,90 (t, 7= 6 Hz, 1H), 4,17 (d, 7= 2,7 Hz, 1H), 4,05 (d, 7= 2,7 Hz, 1H), 4,01 (bs, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,57 (s, 3H), 3,50 - 3,44 (m, 2 h), 3,38 3,36 (m, 1H), 3,30-3,26 (m, 1H), 3,00 (dd, 7/ = 7,8 Hz,72 = 18,0 Hz, 1H), 2,79 (d,7 = 12,9 Hz,
1H), 2,60 (d,7 = 18,0 Hz, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,32 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,68 (dd,
7, = 11,7 Hz, 72= 15,6 Hz, IH).
ESI-MS m/z počítáno pro C32H38N4O8: 606,67 Zjištěno (M+H)+ 607,3
-71 CZ 303536 B6
K roztoku 46 (8 mg, 0,013 mmol) v dioxanu (0,1 ml) byl přidán 5,3M roztok HCI v dioxanu (0,5 ml) a reakční směs byla míchána při teplotě 23 °C 1 h. Poté byl roztok naředěn pomocí CH2C12 (5 ml) a propláchnut 0,lM HCI (3 ml). Organická vrstva byla vysušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem za vzniku sloučeniny 47 (5 mg, 70 %) ve formě bílé pevné látky, io
Rf: 0,4 (hexan:ethylacetát 1 : 5) lHNMR (300 MHz, CDC13):66,51 (s, 1H), 5,97 (d,7 = 1,2 Hz, 1H), 5,91 (d, 7= 1,2 Hz, 1H), 4,97 (bs, 1H), 4,11 (bs, 1H), 4,04 - 4,02 (m, 2 h), 3,75 (s, 3H), 3,65 (d, J = 2,1 Hz, 2 h), 3,56 3,30 (m, 2 h), 3,04 (dd, J, = 7,5 Hz, J2 = 18 Hz, 1H), 2,80 (d, J= 14,4 Hz, 1H), 2,59 (d,7 =
18,3 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,76 (dd, Jj = 12,0 Hz, J2 = 15,9 Hz, 1H),
1,33 (s, 3H), 1,25 (s, 3H).
ESI-MS m/z počítáno pro C30H34N4O7: 562,61 Zjištěno (M+H/ 563,3
Příklad 42
K roztoku 45 (10 mg, 0,0192 mmol) v CH2C12 (0,3 ml) byl při teplotě 0 °C přidán isovalerylchlorid (2,34 μΐ, 0,00192 mmol) a pyridin (1,55 μΐ, 0,0192 mmol). Reakční směs byla míchána 1 h a poté byl roztok naředěn pomocí CH2C12 (5 ml) a propláchnut 0,lM HCI (3 ml). Organická vrstva byla vysušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografíe (SiO2, hexan:ethylacetát 1 : 2) za vzniku sloučeniny 48 (11 mg, 95 %) ve formě bílé pevné látky.
Rf: 0,12 (Hex:ethylacetát 1 : 2) 'H NMR (300 MHz, CDC13): δ 6,50 (s, 1H), 5,98 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,91 (d,7 = 1,5 Hz, 1H),
5,75 (s, 1H), 5,02 (d, J =5,4 Hz, 1H), 4,10 (d, 7= 1,5 Hz, 1H), 4,06 (d, 7= 2,7 Hz, 1H), 4,02 (d,
-72CZ 303536 B6
J= 2,7 Hz, IH), 3,77 (s, 3H), 3,76 - 3,71 (m, IH), 3,86 - 3,28 (m, 3H), 3,04 (dd, J, = 8,1 Hz, J2 = 18,3 Hz, IH), 2,78 (d, J= 15,9 Hz, IH), 2,55 (d, J= 18 Hz, IH), 2,32 (s, 6H), 2,26 (s, 3H). 1,98 (s, 3H), 1,84 - 1,68 (m, 2 h), 1,36 (d, J= 7,2 Hz, 2 h), 0,69 (d, J= 6,6 Hz, 3H), 0,62 (d, 7=6,6 Hz, 3H).
ESI-MS m/z počítáno pro C33H40N4O7: 604,69 Zjištěno (M+H)+ 605,3
(49)
K roztoku 45 (10 mg, 0,0192 mmol) vCH2C12 (0,3 ml) byl při teplotě 0 °C přidán isovalerylchlorid (2,34 μϊ, 0,0192 mmol) a pyridin (1,55 μϊ, 0,0192 mmol). Reakční směs byla míchána 1 h a poté byl roztok naředěn CH2CI2 (5 ml) a propláchnut 0,lM HCl (3 ml). Organická vrstva byla vysušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifíkován pomocí sloupcové chromatografie (SiO2, hexan:ethylacetát 1 : 2) za vzniku sloučeniny 49 (12,4 mg, 96 %) ve formě bílé pevné látky.
Rf: 0,7 (ethylacetát:methanol 0:1).
*H NMR (300 MHz, CDClj: δ 6,50 (s, IH), 5,98 (d, J = 1,5 Hz, IH), 5,91 (d, 7= 1,5 Hz, IH), 5,74 (s, IH), 5,08 (t, J= 5,4 Hz, IH), 4,10 (d, J= 5,1 Hz, IH), 4,05 (m, IH), 4,01 (m, IH), 3,76 (s, 3H), 3,65-3,61 (m, IH), 3,40 - 3,27 (m, 3H), 3,03 (dd,/, = 8,l Hz,72 = 18,6 Hz, IH), 2,78 (d, J= 13,2 Hz, IH), 2,57 (d, J= 18,3 Hz, IH), 2,32 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 1,99 (s,
3H), 1,79 (dd, J, = 12,0 Hz, J2 = 16,5 Hz, IH), 1,73 - 1,42 (m, 4H), 1,33 - 1,18 (m, 10H), 1,03 (m, 2 h), 0,87 (t, J= 6,6 Hz, 3H).
ESI-MS m/z počítáno pro C38H50N4O7: 674,83 Zjištěno (M+H)+ 675,5
-73CZ 303536 B6
K roztoku 45 (14,5 mg, 0,0278 mmol) v CH2C12 (0,3 ml) byl při teplotě 0 °C přidán trans-3trifluormethylcinnamoylchlorid (4,76 μΙ, 0,0278 mmol) a pyridin (2,25 μΐ, 0,0278 mmol). Reakční směs byla míchána 1 h a poté byl roztok naředěn CH2C12 (5 ml) a propláchnut 0,IM HCI (3 ml). Organická fáze byla vysušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO2, hexan :ethylacetát 1 : 1) za vzniku sloučeniny 50 (18,7 mg, 94 %) ve formě bílé pevné látky.
io
Rf: 0,64 (ethylacetát:methanol 5:1).
]H NMR (300 MHz, CDC13): δ 7,74 - 7,55 (m, 4H), 7,23 (d, J= 16,0 Hz, IH), 6,34 (s, IH), 6,12 (d, 7 = 16,0 Hz, IH), 6,07 (d, 7= 0,9 Hz, IH), 5,96 (d,.7 =0,9 Hz, IH), 4,39 (d,7= 2,4 Hz, IH), 4,07 -4,05 (m, 1 H), 3,81 (bs, IH), 3,46-3,51 (m, 3H), 3,42 (s, 3H), 3,09 (brd, 7= 12,0 Hz, IH), 2,94 - 2,85 (m, 2 h), 2,74 (d, 7= 18,3 Hz, IH), 2,38 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,80 (s,3H), 1,84- 1,75 (m, IH).
,3C NMR (75 MHz, CDC13)): δ 168,7, 165,3, 146,5, 144,7, 142,6, 140,6, 138,0, 135,9, 131,0,
130,9, 129,1, 128,6, 125,8, 125,7, 124,5, 124,4, 122,7, 121,2, 117,8, 116,5, 113,0, 112,0, 101,7,
60,4, 59,1, 56,5, 56,4, 55,6, 55,3,41,8,40,3, 26,6, 25,1, 20,3, 15,4, 9,3.
ESI-MS m/z počítáno pro C38H37F3N4O7: 718,72 Zjištěno (M+H)+ 719,3
K roztoku 43 (33 mg, 0,0557 mmol) v CH2C12 (0,4 ml) byl při teplotě 0 °C přidán isovalerylchlorid (6,79 μΐ, 0,0557 mmol) a pyridin (4,5 μΐ, 0,0557 mmol). Reakční směs byla míchána 1 h a poté byl roztok naředěn CH2C12 (5 ml) a promyt 0,lM HCI (3 ml). Organická fáze byla usušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO2, hexan:ethylacetát 1 : 2) za vzniku sloučeniny 51 (34 mg, 91 %) ve formě bílé pevné látky.
Rf: 0,09 (Hex:ethylacetát 1 : 2).
'H NMR (300 MHz, CDCh): δ 6,46 (s, IH), 6,10 (bs, IH), 5,99 (d, 7 = 0,9 Hz, IH), 5,90 (d, 7 = 0,9 Hz, IH), 5,30 (t,7= 6,0 Hz, IH), 4,10-4,05 (m, 3H), 3,81 (bs, IH), 3,74 (s, 3H), 3,54 (bs, IH), 3,38 -3,36 (m, 1H), 3,29 - 3,21 (m, IH), 3,00 (dd,7/ - 8,0 Hz, J2 = 18,0 Hz, IH), 2,25 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,95 - 1,90 (m, 3H), 0,87 (d, 7 = 6,6 Hz, 6H), 0,76 (d, 7=6,0 Hz, 3H).
ESI-MS m/z počítáno pro C36H45N5O8: 675,77 Zjištěno (M+H)* 676,3
-74CZ 303536 B6
K roztoku 43 (33 mg, 0,0557 mmol) v CH2C12 (0,4 ml) byl při teplotě 0 °C přidán trans-3-trifluormethylcinnamoylchlorid (9,52 μΐ, 0,0557 mmol) a pyridin (4,5 μΐ, 0,0557 mmol). Reakční směs byla míchána 1 h a poté byl roztok naředěn CH2Cl2 (5 ml) a promyt 0,lM HCÍ (3 ml). Organická vrstva byla vysušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO2, hexan:ethylacetát 1 : 2) io za vzniku sloučeniny 52 (40 mg, 92 %) ve formě bílé pevné látky.
Rf: 0,21 (hexan.ethylacetát 1 : 2).
*H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 7,74 - 7,47 (m, 4H), 6,49 (s, IH), 6,40 (d, J= 15,6 Hz, IH),
6,00 (d, J= 1,5 Hz, IH), 5,90 (d, 1,5 Hz, IH), 5,47 (t, J- 6 Hz, IH), 4,12 - 4,09 (m, 3H), is 3,93 (bs, IH), 3,71 (s, 3H), 3,59-3,58 (m, IH), 3,38 (d,/ = 7,8 Hz, IH), 3,29 (d, J= 12,0 Hz,
IH), 3,00 (dd, Λ = 8,1 Hz, Λ = 18,3 Hz, IH), 2,79-2,79 (m, IH), 2,65 (d,/= 18,3 Hz, 1H),2,29 (s, 6H), 2,28 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 1,84 - 1,80 (m, IH), 0,85-0,84 (m, 3H).
13C NMR (75 MHz, CDC13) δ 171,9, 168,8, 164,4, 146,9, 144,6, 143,0, 140,5, 140,5, 139,3,
135.7, 131,1, 131,0, 129,4, 129,1, 126,0, 124,1, 124,0, 122,4, 121,1, 120,7, 120,6, 117,7, 116,9,
112,8, 112,0, 101,6, 60,6, 59,3, 57,1, 56,3, 55,9, 55,2, 49,0, 41,7, 49,9, 26,5, 25,1, 20,2, 18,4,
15.7, 9,3.
ESI-MS m/z počítáno pro C4iH42F3N5O8: 789,8. Zjištěno (M+H)+: 790,3
Příklad 47
K roztoku sloučeniny 43 (10 mg, 0,0169 mmol) v CH2Cl2 (0,2 ml) byl pri teplotě 23 °C přidán anhydrid trifluoroctové kyseliny (2,38 μΐ, 0,0169 mmol). Reakční směs byla míchána 5 h a poté
-75CZ 303536 B6 byl roztok naředěn CH2C12 (5 ml) a promyt O,1M HC1 (3 ml). Organická vrstva byla vysušena pres síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO2, hexan:ethylacetát 3:2) za vzniku sloučeniny 53 (10,7 mg, 93 %) ve formě bílé pevné látky.
Rf: 0,57 (ethylacetát:methanol 5:1).
]H NMR (300 MHz, CDC13): δ 6,45 (s, IH), 6,00 (d, 7= 1,2 Hz, IH), 5,90 (d, 7= 1,2 Hz, IH), 5,87 (bs, IH), 5,32 (bs, IH), 4,12 (d, 7= 2,1 Hz, IH), 4,08 (d, 7= 1,8 Hz, IH), 3,78 -3,56 (m, 3H), 3,72 (s, 3H), 3,40 (d,7= 8,1 Hz, IH), 3,25 (d, 7=9,3 Hz, IH), 3,00 (dd,7, = 8,4 Hz, J2 = 18,0 Hz, IH), 2,77 (dd, J, = 2,1 Hz, J2 = 15,9 Hz, IH), 2,68 (d, 7= 18,6 Hz, IH), 2,30 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,75 (dd, 7, = 11,4 Hz, J2 = 15,9 Hz, IH), 0,69 (d, 7=6,3 Hz, 3H).
,3C NMR (75 MHz, CDC13) δ 170,1, 168,6, 156,0, 147,0, 144,6, 143,0, 140,6, 140,4, 131,0,
129,4, 120,9, 120,7, 117,6, 116,8, 112,4, 112,1, 101,6, 60,5, 59,0, 57,1, 56,3, 55,6, 55,2, 48,7,
41,6, 39,4,26,5, 24,9, 20,2, 17,8, 15,4, 9,2.
ESI-MS m/z počítáno pro C33H36F3N5O8: 687,63. Zjištěno (M+H)+: 688,66
Příklad 48
K roztoku sloučeniny 19(11 mg, 0,0169 mmol) v CH2C12 (0,2 ml) byl při teplotě 23 °C přidán anhydrid trifluoroctové kyseliny (2,38 μΐ, 0,0169 mmol). Reakční směs byla míchána 5 h a poté byl roztok naředěn CH2C12 (5 ml) a promyt 0,lM HC1 (3 ml). Organická vrstva byla vysušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO2, hexan:ethylacetát 3 : 2) za vzniku sloučeniny 54 (10,7 mg, 93 %) ve formě bílé pevné látky.
Rf: 0,6 (ethylacetát:methanol 5:1), ’H NMR (300 MHz, CDC13): δ 7,33 (d, 7= 6,3 Hz, 1H), 6,45 (s, IH), 6,04 (m, IH), 5,95 (d, 7 =
1,5 Hz, IH), 5,84 (d, 7= 1,5 Hz, IH), 5,32 (m, 2 h), 5,21 (m, IH), 4,11 (m, 4H), 3,73 (s, 3H), 3,64 (m, 2 h), 3,51 (m, IH), 3,37 (d, 7= 7,8 Hz, IH), 3,22 (m, 2 h), 3,03 (dd, 1H,7, = 8,1 Hz, J2 = 18,3 Hz, IH), 2,60 (d, 7= 18,3 Hz, IH), 2,29 (s, 3H), 2,24 (s, 3H),2,08 (s,3H), 1,86 (dd, 7,= 12 Hz,72= 16,2 Hz, IH), 0,82 (d,7= 7,2 Hz, 3H).
,3C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 170,0, 156,0, 148,4, 147,1, 144,3, 143,0, 138,7, 133,8, 130,5,
129,4, 120,6, 120,4, 117,6, 117,5, 117,0, 113,5, 112,5, 112,4, 101,1, 74,1, 66,8, 60,4, 59,3, 56,9,
56,6, 56,3, 55,4, 48,7, 41,6, 40,1,26,2, 25,0, 17,6, 15,4, 9,1.
ESI-MS m/z počítáno pro C35H39F3N5O7: 685,69. Zjištěno (M+H)*: 686,3
-76 CZ 303536 B6
Příklad 49
K roztoku 54 (100 mg, 0,145 mmol) v CH2C12 (4 ml) byla při teplotě 23 °C přidána octová kyselina (40 ml), (PPh3)2PdCl2 (8,4 mg, 0,012 mmol) a Bu3SnH (15,7 ml, 0,56 mmol). Při této teplotě byla reakční směs míchána 2 h a poté nalita na sloupec separační kolony (SiO2, gradient hexan:ethylacetát 2 : 1) za vzniku sloučeniny 55 (90 mg, 96 %) ve formě bílé pevné látky.
io Rf: 0,6 (hexan: ethyl acetát 1 : 2).
'H NMR (300 MHz, CDC13): δ 7,55 (d, 7 = 7,2 Hz, IH), 6,45 (s, IH), 5,90 (d, J= 1,2 Hz, IH), 5,82 (d, 7= 1,2 Hz, IH), 5,37 (t, J= 6,0 Hz, IH), 4,15 (d, 7= 2,1 Hz, IH), 4,04 (d, 7= 1,8 Hz, IH), 3,70 (s, 3H), 3,66-3,53 (m, 2 h), 3,37-3,31 (m, 2 h), 3,19-3,15 (d,7= 11,7 Hz, IH), 3,08 - 3,00 (m, 2 h), 2,56 (d, 7= 18,3 Hz, IH), 2,30 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 1,91 (dd,
Ji = 12,0 Hz, J2 = 6,9 Hz, 3H).
BC NMR (75 MHz, CDC13) δ 170,1, 156,3, 147,3, 144,9, 144,4, 143,3, 136,7, 130,7, 129,3,
120.6, 117,6, 117,4, 114,4, 112,1, 107,7, 101,0, 85,8, 60,5, 59,3, 56,5, 56,4, 56,2, 55,2, 48,9,
41.6, 40,9, 25,7, 25,3, 18,0, 15,6, 8,7.
ESI-MS m/z počítáno pro C32H35F3N5O7: 645,63. Zjištěno (M+H)+: 646,2
Příklad 50
(17) («I
K roztoku 17 (200 mg, 0,288 mmol) vCH2Cl2 (1,44 ml) byla přidána tifluoroctová kyselina (888 μΙ, 11,53 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě 23 °C 4 h. Reakce byla zastavena při teplotě 0 °C pomocí nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (60 ml) a extrahována ethylacetátem (2x 70 ml). Spojené organické vrstvy byly vysušeny (síran sodný) a
-77CZ 303536 B6 zakoncentrovány in vacuo za vzniku sloučeniny 56 (147 mg, 93 %) v podobě bílé pevné látky, která byla použita v následujících reakcích bez další purifikace.
Rf: 0,19 (ethylacetáfcmethanol 5 : 1).
*H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 6,48 (s, IH), 5,88 (d, 7= 0,9 Hz, IH), 5,81 (d, 7= 0,9 Hz, IH), 4,35 (d, J = 2,4 Hz, IH), 4,15 (d, J= 1,8 Hz, IH), 3,99 - 3,98 (m, IH), 3,70 (s, 3H), 3,52 - 2,96 (m, 7H), 2,68 (d, J= 18,3 Hz, IH), 2,24 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 1,85 (dd, Js = 11,7 Hz,
72 = 15,6 Hz, IH), 0,91 (d,7=6,6 Hz, 3H).
13C NMR (75 MHz, CDCh) δ 173,2, 149,1, 145,6, 144,9, 138,0, 132,2, 130,6, 121,6, 119,6, 117,4, 114,3, 109,2, 102,5, 82,3, 60,4, 58,4, 58,3, 57,8, 56,6, 50,1, 42,3, 41,6, 27,8, 26,2, 19,5, 15,5,9,8.
ESI-MS m/z počítáno pro C29H35NSO6: 549,62. Zjištěno (M+H)+: 550,3
Příklad 51
Me (57)
K roztoku 56 (10 mg, 0,018 mmol) vCH2Cl2 (0,4 ml) byl přidán fenylisothiokyanát (13 μΐ, 0,109 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě 23 °C 1,5 h. Reakční směs byla zakoncentrována in vacuo a zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO2, gradient hexan až po hexan:ethylacetát 1 : 1) za vzniku sloučeniny 57 (8 mg, 65 %) ve formě bílé pevné látky.
Rf: 0,57 (ethylacetát:methanol 10 : 1).
’H NMR (300 MHz, CDC13): δ 7,88 (bs, IH), 7,41 - 7,36 (m, 2 h), 7,27 - 7,22 (m, IH), 7,02 7,00 (d, J = 7,8 Hz, 2 h), 6,71 (d, J = 7,2 Hz, 1 H), 6,31 (s, IH), 6,17 (bs, IH), 5,93 (d, J= 1,2 Hz, IH), 5,83 (t, J= 1,2 Hz, IH), 5,55 (bs, IH), 5,20-5,17 (m, IH), 4,16 (d, 7 = 1,8 Hz, IH), 4,05 (bs, IH), 4,02 (d, 7- 2,4 Hz, IH), 3,79 (s, 3H), 3,75 - 3,71 (m, IH), 3,35 (d, 7= 7,8 Hz, IH), 3,28 - 3,19 (m, 2 h), 3,12 - 2,97 (m, 2 h), 2,50 (d, 7= 18,3 Hz, IH), 2,32 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,15 -2,09 (dd, 7, = 11,4 Hz, J2 = 15,9 Hz, IH), 1,95 (s, 3H), 0,88 (d, 7= 6,9 Hz, 3H).
,3C NMR (75 MHz, CDC13) δ 178,5, 171,7, 147,2, 145,0, 144,3, 143,3, 137,0, 135,7, 130,6,
130,4, 129,6, 127,5, 124,3, 120,6, 117,7, 117,2, 115,3, 112,1, 108,3, 100,9, 60,9, 59,5, 56,7, 56,5, 56,2, 55,2, 54,1,41,7, 41,1, 26,3, 25,4, 18,5, 15,8, 9,0.
ESI-MS m/z počítáno pro C36H4oN606S: 684,81. Zjištěno (M+H)*: 685,3.
-78CZ 303536 B6
Příklad 52
(57) (58)
K roztoku 57 (45 mg, 0,065 mmol) v CH2C12 (0,5 ml) byl přidán při teplotě 0 °C acetylchlorid (4,67 μΐ, 0,065 mmol) a pyridin (5,3 μΐ, 0,065 mmol). Reakční směs byla míchána 3 h a poté byl roztok naředěn CH2C12 (10 ml) a promyt 0,lM HCl (5 ml). Organická vrstva byla vysušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (RP-18, CH3CN:H2O 40:60) za vzniku sloučeniny 58 (14 mg, io 28 %) ve formě bílé pevné látky.
Rf; 0,34 (CH3CN: H2O 7 : 15).
'H NMR (300 MHz, CDC13): δ 11,90 (d, J = 6,6 Hz, IH), 7,45 -- 7,40 (m, 3H), 7,18 - 7,15 (m,2h), 6,58 (s, IH), 6,00 (d,7 = 1,2 Hz, IH), 5,89 (d, J= 1,2 Hz, IH), 5,70 (s, IH), 5,37 (t, J = 4,8 Hz, IH), 4,48 (m, IH), 4,23 (bs, IH), 4,07 (bs, 2 h), 3,85 - 3,75 (m, IH), 3,70 (s, 3H), 3,46 3,41 (m, 2 h), 3,24 - 3,20 (m, IH), 3,00 - 2,95 (m, IH), 2,87 - 2,75 (m, IH), 2,31 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,00 (s,3H), 1,85 (dd,7,= 11,4 Hz,72= 15,6 Hz, IH), 1,66 (s, 3H), 0,82 (d,
7=6,0 Hz, 3H).
,3C NMR (75 MHz, CDC13) δ 182,6, 174,3, 171,0, 146,6, 144,6, 142,7, 142,3, 140,7, 140,2, 131,3, 129,8, 129,3, 128,9, 128,8, 121,5, 120,4, 117,3, 116,6, 112,8, 112,0, 111,3, 101,5, 60,5, 59,0, 57,6, 56,2, 55,9, 55,3, 55,1, 41,6, 39,4, 27,8, 26,5, 24,8, 20,2, 17,1, 15,5, 9,3.
ESI-MS m/z počítáno pro C4oH44N608S: 768,88. Zjištěno (M+H)+: 769,2
Příklad 53
Me
(W) (59)
K roztoku 57 (130 mg, 0,189 mmol) v dioxanu (1 ml) byl přidán 5,3M HCl/dioxan (1,87 ml) a reakční směs byla při teplotě 23 °C míchána 4 h. Poté byl k reakční směsi přidán CH2CI2 (15 ml) a H2O (10 ml) a organická fáze byl odcentrifugována. Vodná fáze byla alkalízována pomocí roz-79CZ 303536 B6 toku saturovaného hydrogenuhličitanu sodného (60 ml) (pH 8) při teplotě 0 °C a poté extrahována pomocí ethylacetátu (2x 50 ml). Spojené organické extrakty byly vysušeny (síran sodný) a zakoncentrovány in vacuo za vzniku sloučeniny 59 (63 mg, 70 %) ve formě bílé pevné látky.
Rf: 0,15 (ethylacetát:methanol 5:1).
'H NMR (300 MHz, CDC13): δ 6,67 (s, 1H), 5,99 (d, J= 0,9 Hz, 1H), 5,91 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,10 (bs, 1H), 4,32 (d, 7=7,2 Hz, 1H), 4,25 (dd, 7/ = 3,6 Hz, J2 = 9,3 Hz, 1H), 3,7 (s,3H),3,71 3,64 (m, 2 h), 3,50 (dd, J, = 2,4 Hz, J2 = 15,9 Hz, 1H), 3,42 - 3,37 (m, 2 h), 3,16 (dd, 7/ = 3,6 Hz, J2 = 12,9 Hz, 1H), 2,57 (dd, J: = 9,3 Hz, J2 = 12,9 Hz, 1H), 2,27 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,91 (dd, ίο 7/= 12,0 Hz, 72 = 15,9 Hz, 1H).
ESI-MS m/z počítáno pro C26H30N4O5: 478,5. Zjištěno (M+H)+: 479,3
Příklad 54
(<3)
Trans-CtHeOO, Py CHtCíj. lh,0*C
(W)
K roztoku 43 (20 mg, 0,0338 mmol) v CH2C12 (0,3 ml) byl při teplotě 0 °C přidán cinnamoylchlorid (5,63 ml, 0,0338 mmol) a pyridin (2,73 ml, 0,0338 mmol). Reakční směs byla míchána 1 h a poté byl roztok naředěn CH2C12 (10 ml) a propláchnut 0,lM HCl (5 ml). Organická vrstva byla vysušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO2, EtOAc:MeOH 20 : 1) za vzniku sloučeniny 60 (22 mg, 90 %) ve formě bílé pevné látky.
Rf: 0,56 (EtOAc-.MeOH 5:1).
*H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,51 (s, 1H), 7,50 - 7,47 (m, 2H), 7,36 - 7,35 (m, 2H), 6,43 (s, 1H), 6,36 (brd, J= 15,9 Hz, 2H),6,01 (d,7= 1,5 Hz, 1H), 5,90 (brd, J~- 1,5 Hz, 2H), 5,42 (t, 7 = 6,0 Hz, 1H), 4,12 - 4,07 (m, 3H), 3,96 - 3,95 (m, 1H), 3,73 (bs, 3H), 3,58 (bs, 2H), 3,39 (d,
7=8,7Hz, 1H), 3,25 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 3,0 (dd, 7, = 7,5 Hz, J2 = 17,7 Hz, 1H), 2,78 (d,
J= 15,9 Hz, ΪΗ), 2,67 (d, J= 16,5 Hz, 1H), 2,29 (s, 6H), 2,23 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,82 (dd,
Ji = 11,4 Hz, = 15,6 Hz, 1H), 0,83 (d, 7=6,0 Hz, 3H).
t3C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 172,0, 165,0, 146,9, 144,6, 143,1, 141,0, 140,5, 134,8, 131,0, 129,7, 129,1, 128,8, 127,8, 125,5, 123,8, 123,0, 121,1, 120,5, 117,7, 116,9, 112,8, 112,0, 101,9,
60,6, 59,2, 57,1,56,4, 55,9, 55,3, 48,8, 41,7, 40,0, 26,5, 25,1, 20,3, 18,5, 15,7, 9,3.
ESI-MS m/z počítáno pro C40H43N5O8: 721,8. Zjištěno (M+H)*: 722,3
-80 CZ 303536 B6
Příklad 55
C3F7COCI, py
CH2C)2.1h.0*C (46)
(61)
Roztok 45 (I9mg, 0,0364 mmol) v CH2C12 (0,3 ml) byl při teplotě 0 °C přidán heptafluorbutyrylchlorid (5,44 μΙ, 0,0364 mmol) a pyridin (2,95 ml, 0,0364 mmol). Reakční směs byla míchána 1 h a poté byl roztok naředěn CH2C12 (10 ml) a propláchnut 0,lM HCI (5 ml). Organická vrstva byla vysušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO2, AtOAc.MeOH 20 : 1) za vzniku sloučeniny 61 (11,7 mg, 45 %) ve formě bílé pevné látky.
Rf: 0,76 (EtOAc:MeOH 5:1).
’H NMR (300 MHz, CDCE): δ 6,46 (s, 1H), 6,12 (bs, 1H), 5,98 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 5,93 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,72 (bs, 1H), 4,13-4,11 (m, 2H), 4,0 (d,7=2,4 Hz, 1H), 3,98 - 3,96 (m, 1H),
3,73 (s, 3H), 3,39 (d, 7= 7,5 Hz, 1H), 3,39 - 3,28 (m, 2H), 3,09 (dd, 7, = 8,1 Hz, J2 = 18,0 Hz,
IH), 2,80 (d, 7= 16,2 Hz, 1H), 2,46 (d,7= 18, Hz, 1H), 2,32 (s, 6H), 2,21 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,80 (dd, 7/ = 12,0 Hz, J2 = 16,2 Hz, IH).
ESI-MS m/z počítáno pro C32H31F7N4O7: 716,6. Zjištěno (M+H)+: 717,2
Příklad 56
K roztoku 43 (24 mg, 0,04 mmol) v CH2C12 (0,3 ml) byl při teplotě 0 °C přidán butyrylchlorid (4,15 μΐ, 0,04 mmol) a pyridin (3,28 μΐ, 0,04 mmol). Reakční směs byla míchána 1 h a poté byl roztok naředěn CH2C12 (10 ml) a promyt 0,1 M HCI (5 ml). Organická vrstva byla vysušena přes síran sodný, filtrována a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifikován pomo30 cí sloupcové chromatografie (SiO2, AtOAc:MeOH 20 : 1) za vzniku sloučeniny 62 (24 mg, 90 %) ve formě bílé pevné látky.
-81 CZ 303536 B6
Rf: 0,35 (EtOAc:MeOH 5 : 1).
*H NMR (300 MHz, CDCb): δ 6,47 (s, IH), 6,10 (d, / = 6,5 Hz, IH), 6,0 (d, J= 1,5 Hz, IH), 5,91 (d, J= 1,5 Hz, IH), 5,86 (bs, IH), 5,31 (d,/=6,9 Hz, IH), 4,11-4,06 (m, 3H), 3,85 -3,81 (m, IH), 3,75 (s, 3H), 3,59 - 3,53 (m, 2H), 3,38 (d, /= 7,5 Hz, IH), 3,27 - 3,22 (m, IH), 3,0 (dd, /7 = 7,8 Hz, J2 = 17,4 Hz, IH), 2,79 (dd, /= 15,3 Hz, IH), 2,63 (d, /= 17,7 Hz, IH), 2,31 (s,
3H), 2,0 (s, 3H), 1,80 (dd, /, = 12,0 Hz, J2 = 15,9 Hz, IH), 1,59 (q, / = 7,2 Hz, 2H), 0,89 (t, /= 7,2 Hz, 3H), 0,76 (d,/= 6,6 Hz, 3H).
ESI-MS m/z počítáno pro C33H43N5O8: 716,6. Zjištěno (M+H)+: 717,2
Příklad 57
OMe
K roztoku 43 (19 mg, 0,0364 mmol) v CH2C12 (0,3 ml) byl při teplotě 0 °C přidán cinnamoylchlorid (6,06 mg, 0,0364 mmol) a pyridin (2,95 μΐ, 0,0364 mmol). Reakční směs byla míchána 1 h a poté byl roztok naředěn CH2C12 (10 ml) a promyt O,1M HCl (5 ml). Organická vrstva byla vysušena přes síran sodný a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifíkován pomocí sloupcové chromatografie (SiO2, AtOAc:MeOH 20:1) za vzniku sloučeniny 63 (20,1 mg, 85 %) ve formě bité pevné látky.
Rf: 0,65 (EtOAcrMeOH 5:1).
'H NMR (300 MHz, CDCb): δ 7,39 - 7,29 (m, 5H), 6,42 (s, IH), 6,01 (d, / = 1,5 Hz, IH), 5,92 (d, / = 1,5 Hz, IH), 5,73 (bs, IH), 5,24 (t, /= 6,8 Hz, IH), 4,12 - 4,08 (m, 3H), 3,66 - 3,64 (m,
2H), 3,58 (bs, 3H), 3,36 (d,/= 8,7 Hz, IH), 3,29 (d, /-12,0 Hz, IH), 2,98 (dd, /, = 8,1 Hz, J2 = 18 Hz, IH), 2,33 (s, 6H), 2,29 (s, 3H), 2,01 (s, 3H), l,84(dd,/z = 12,0 Hz,/2 = 15,9 Hz, IH). ESI-MS m/z počítáno pro C37H38N4O7: 650,72. Zjištěno (M+H)+: 651,2
-82CZ 303536 B6
K roztoku 43 (20 mg, 0,0338 mmol) v CH2C12 (0,3 ml) byl při teplotě 0 °C přidán 3-chlorpropionylchlorid (3,22 ml, 0,0338 mmol) a pyridin (2,73 μί, 0,0338 mmol). Reakční směs byla míchána 1 h a poté byl roztok naředěn CH2C12 (10 ml) a promyt 0,lM HC1 (5 ml). Organická vrstva byla vysušena přes síran sodný a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifíkován pomocí sloupcové chromatografie (SiO2, AtOAc:MeOH 20 : 1) za vzniku sloučeniny ío 64 (20,5 mg, 89 %) ve formě bílé pevné látky.
Rf: 0,32 (EtOAc:Hexan 5:1).
’H NMR (300 MHz, CDC13): δ 6,48 (s, 3H), 6,28 (m, IH), 5,99 (d, J= 1,2 Hz, IH), 5,91 (d, 7- 1,2 Hz, IH), 5,86 (bs, IH), 5,31 (m, IH), 4,08 - 4,07 (m, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,72 - 3,53 (m,
5H), 3,39 (d, 7= 8,1 Hz, IH), 3,24 (d,7= 12,0 Hz, IH), 3,00 (dd,7, = 8,1 Hz,72= 18,0 Hz, IH),
2,79 (d, 7= 13,5 Hz, IH), 2,50 (t, 7 = 6,3 Hz, 2H), 2,32 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,0 (s,3H), 1,79 (dd,7,= 12,3 Hz, J2= 14,8 Hz, IH), 0,81 (d,7=6,3 Hz, 3H).
K roztoku 43 (19 mg, 0,0364 mmol) v CH2C12 (0,3 ml) byl při teplotě 0 °C přidán butyrylchlorid 25 (3,78 μί, 0,0364 mmol) a pyridin (2,95 μί, 0,0364 mmol). Reakční směs byla míchána 1 h a poté byl roztok naředěn CH2C12 (10 ml) a promyt 0,lM HC1 (5 ml). Organická vrstva byla vysušena přes síran sodný a rozpouštědlo bylo odstraněno podtlakem. Zbytek byl purifíkován pomocí sloupcové chromatografie (SÍO2, AtOAc:MeOH 20 : 1) za vzniku sloučeniny 64 (19 mg, 87 %) ve formě bílé pevné látky.
-83CZ 303536 B6
Rf: 0,60 (EtOAc:MeOH 5:1).
*H NMR (300 MHz, CDC13): δ 6,50 (s, 1H), 5,98 (d, J= 1,5 Hz, 1H), 5,91 (d,7 = 1,5 Hz, 1H), 5,75 (s,lH), 5,01 (t, 7= 6,4 Hz, 1H), 4,10 - 4,09 (m, 1H), 4,06 (d, 7= 2,1 Hz, 1H), 4,03 - 4,02 (m, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,67 - 3,60 (m, 1H), 3,42 -3,35 (m, 2H), 3,29 (d, 7= 12,0 Hz, 1H), 3,02 (dd, 7, = 7,8 Hz, J2 = 17,7 Hz, 1H), 2,79 (d, 7, = 14,1 Hz, 1H), 2,56 (d, 7= 18,3 Hz, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 1,78 (dd, 7, = 12,0 Hz, J2 = 15,9 Hz, 1H), 1,63 (s, 3H), 1,53 1,46 (m, 2H), 1,28 - 1,16 (m, 2H), 0,68 (t, 7= 7,2 Hz, 3H).
ESI-MS m/z počítáno pro ίΑΗ^Ν,ιΟγ'. 590,67. Zjištěno (M+H)+: 591,2 io
Příklad 60
K roztoku 50 (31,7 mg, 0,044 mmol) v CH3CN/H2O (1,5 ml/0,5 ml) byl přidán AgNO3 (225 mg, 1,32 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě 23 °C 17 h. Poté byl přidán solný roztok (10 ml) a vodou saturovaný roztok NaHCO3 (10 ml) a reakční směs byla míchána 15 min, zfiltrována přes vrstvu celitu a promyta CH2CI2 (20 ml). Roztok byl zcentrifugován a organická fáze byla vysušena a zakoncentrována in vacuo. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO2, AtOAc:MeOH 5 : 1) za vzniku sloučeniny 66 (16 mg, 51 %) ve formě bílé pevné látky.
Rf: 0,26 (EtOAc:MeOH 5:1).
'H NMR (300 MHz, CDC13): δ 7,66 - 7,42 (m, 4H), 7,20 (bs, 1H), 6,44 (s, 1H), 5,97 (b. 7- 1,2 Hz, 1H), 5,90 (d, 7 = 1,2 Hz, 1H), 5,76 (bs, 1H), 5,28 (bs, lH),4,54(bs, 1H),4,43 (bs, 1H), 4,00 (bs, 1H), 3,68-3,57 (m, 4H), 3,47 (d,7=3,3 Hz, 1H),3,4O (d, 7 = 11,7 Hz, 1H), 3,17 (d, 7= 6,9 Hz, 1H), 2,92 (dd, 7/= 8,1 Hz,72 = 17,7 Hz, 1H), 2,74 (d, 7= 17,1 Hz, 1H), 2,48 (d, 7= 18,6 Hz, 1H), 2,32 (s, 6H), 2,28 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), l,7ó(dd,7, = 12,0 Hz,72= 16,2 Hz, 1H).
ESI-MS m/z počítáno pro C37H38F3N3O8: 709. Zjištěno (M+H)+: 692,3
-84CZ 303536 B6
Me O fc3)
AgNOa.CHsCN/HzO
24h.23*Č
Me O (67)
K roztoku 53 (57 mg, 0,0828 mmol) v CH3CN/H2O (1,5 ml/0,5 ml) byl přidán AgNO3 (650 mg, 3,81 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě 23 °C 24 h. Poté byl přidán solný roztok (10 ml) a vodou saturovaný roztok NaHCO3 (10 ml) a reakční směs byla míchána 15 min, zfiltrována přes vrstvu celitu a promyta CH2C12 (20 ml). Roztok byl zcentrifugován a organická fáze byla vysušena a zakoncentrována in vacuo. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO2, AtOAc:MeOH 5 : 1) za vzniku sloučeniny 67 (28 mg, 50 %) ve formě bílé pevné látky.
Rf: 0,28 (EtOAc:MeOH 10:1).
'H NMR (300 MHz, CDC13): δ 6,47 (s, IH), 5,97 (s, IH), 5,88 (s, IH), 5,35 (bs, IH), 4,51 (bs, IH), 4,41 (bs, IH), 4,12-4,05 (m, IH), 4,00 (d, J= 2,7 Hz, IH), 3,77 (s, 3H), 3,64 (bs, IH), 3,46 (d, J= 3,3 Hz, IH), 3,34 (d, J= 11,4 Hz, IH), 3,18 (d, /= 7,5 Hz, IH), 2,95 (dd, J, = 8,4
Hz, Λ - 18,3 Hz, IH), 2,70 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 2,48 (d, J = 17,7 Hz, IH), 2,28 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,26 (s,3H), 1,98 (s, 3H), 1,68 (dd,J/= 12 Hz, Λ = 15,6 Hz, IH), 0,86 (d,.7=6,3 Hz,3H).
ESI-MS m/z počítáno pro C32H37F3N4O9: 678,66. Zjištěno (M+H)+: 661,2
K roztoku 48 (32 mg, 0,0529 mmol) v CH3CN/H2O (1,5 ml/0,5 ml) byl přidán AgNO3 (270 mg, 1,58 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě 23 °C 24 h. Poté byl přidán solný roztok (10 ml) a vodou saturovaný roztok NaHCO3 (10 ml) a reakční směs byla míchána 15 min, zfiltrována přes vrstvu celitu a promyta CH2C12 (20 ml). Roztok byl zcentrifugován a organická fáze byla vysušena a zakoncentrována in vacuo. Zbytek byt purifikován pomocí sloupcové chromatografíe (SiO2, AtOAciMeOH 5 : 1) za vzniku sloučeniny 68 (18 mg, 56 %) ve formě bílé pevné látky.
-85CZ 303536 B6
Rf: 0,40 (EtOAc:MeOH 5:1).
'H NMR (300 MHz, CDC13): δ 6,50 (s, 1H), 5,95 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 5,88 (d, 7 = 1,2 Hz, 1H), 5,23 (d, 7= 6,9 Hz, 1H), 4,45 (d, 7= 3,3 Hz, 1H), 4,38 (s, 1H), 4,01 (d, 7= 2,4 Hz, 1H), 3,78 (m, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,41 - 3,37 (m, 1H), 3,17 - 3,15 (m, 1H), 2,96 (dd, 7, = 7,8 Hz, J2 = 18,0 Hz,
1H), 2,70 (d, 7= 15,3 Hz, 1H), 2,40 (d, 7= 18,0 Hz, lh), 2,30 (s, 6H), 2,27 (s, 3H), 1,76 - 1,6 (m, 1H), 1,35 - 1,25 (m, 2H), 0,89 - 0,82 (m, 1H), 0,69 (d, 7= 6,6 Hz, 3H), 0,58 (d, 7= 6,6 Hz, 3H)
K roztoku 51 (27 mg, 0,04 mmol) v CH3CN/H2O (1,5 ml/0,5 ml) byl přidán AgNO3 (204 mg,
1,19 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě 23 °C 24 h. Poté byl přidán solný roztok (10 ml) a vodou saturovaný roztok NaHCO3 (10 ml) a reakční směs byla míchána 15 min, zfiltrována přes vrstvu celitu a promyta CH2CI2 (20 ml). Roztok byl zcentrifugován a organická fáze byla vysušena a zakoncentrována in vacuo. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatografie (SiO2, AtOAc:MeOH 5 : 1) za vzniku sloučeniny 69 (10 mg, 38 %) ve formě bílé pevné látky.
Rf: 0,38 (EtOAc:MeOH 5:1).
*H NMR (300 MHz, CDC13): δ 6,48 (s, 1H), 6,16 (bs, 1H), 5,98 (d,7= 1,5 Hz, 1H), 5,89 (d,7 = 1,5 Hz, 1H), 5,33 (t,7= 6,0 Hz, 1H), 4,50 (m, 1H), 4,40 (m, 1H), 4,11 -4,09 (m, 1H), 4,00 (d,
7= 2,6 Hz, IH), 3,78 (s, 3H), 3,41 - 3,32 (m, 3H), 3,18 (d, J= 8,4 Hz, IH), 2,94 (dd, 7/ = 8,4 Hz,
J2= 18,3 Hz, IH), 2,70 (d,7= 14,4 Hz, 1H),4,45 (d,7= 18,3 Hz, IH), 2,31 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 2,00 - 1,86 (m, 3H), 1,73 (m, 1H), 0,87 (d,7- 6,3 Hz, 6H).
-86CZ 303536 B6
Příklad 64
K. roztoku 63 (15 mg, 0,023 mmol) v CH3CN/H2O (1,5 ml/0,5 ml) byl přidán AgNO3 (118 mg, 0,691 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě 23 °C 24 h. Poté byl přidán solný roztok (10 ml) a vodou saturovaný roztok NaHCO3 (10 ml) a reakční směs byla míchána 15 min, zfiltrována přes vrstvu celitu a promyta CH2C12 (20 ml). Roztok byl zcentrifugován a organická fáze byla vysušena a zakoncentrována in vacuo. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chromatoio grafie (SiO2, AtOAe:MeOH 5 : 1) za vzniku sloučeniny 70 (20,1 mg, 85 %) ve formě bílé pevné látky.
Rf: 0,43 (EtOAc:MeOH 5:1).
[H NMR (300 MHz, CDC13): δ 7,38 - 7,28 (m, 5H), 6,48 (s, IH), 5,98 (d, J= 1,5 Hz, IH), 5,91 15 (d, J= 1,5 Hz, IH), 5,75 (bs, IH), 5,38 (brd, IH), 5,30 (bs, IH), 4,53 (m, IH), 4,42 (m, IH), 4,02 (d, J= 2,7 Hz, IH), 3,78 - 3,65 (m, 5H), 3,46 - 3,40 (m, 2H), 3,17 (d, J= 7,8 Hz, IH), 2,94 (dd, J, = 7,8 Hz, J2 = 17,7 Hz, 1H), 2,73 (d, J = 16,8 Hz, 1H), 2,45 (d, J = 18,0 Hz, 1H), 2,31 (s, 6H), 2,28 (s, 3H), 1,97 (s, 3H), 1,77 (dd,/, = 12,0 Hz,Λ = 15,3 Hz, IH).
K roztoku 65 (25 mg, 0,042 mmol) vCH3CN/H2O (1,5 ml/0,5 ml) byl přidán AgNO3 (215,56 mg, 1,269 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě 23 °C 24 h. Poté byl přidán solný roztok (10 ml) a vodou saturovaný roztok NaHCO3 (10 ml) a reakční směs byla míchána 15 min, zfiltrována přes vrstvu celitu a promyta CH2C12 (20 ml). Roztok byl zcentrifugován a organická fáze byla vysušena a zakoncentrována in vacuo. Zbytek byl purifikován pomocí sloupcové chro30 matografie (SiO2, AtOAc:MeOH 5 : 2) za vzniku sloučeniny 71 (16 mg, 65 %) ve formě bílé pevné látky.
-87CZ 303536 B6
Rf: 0,05 (EtOAc:MeOH 5 : 2), ]H NMR (300 MHz, CDClj: δ 6,50 (s, IH), 5,95 (d,J=l,5 Hz, IH), 5,78 (s, lH),5,19(bs, IH), 4,45 (d, 7=3,3 Hz, IH), 4,37 (bs, IH), 4,11 (brd, 7= 4,8 Hz, 1H),4,O1 (d,7=2,l Hz, IH), 3,76 (s, IH), 3,71 -3,69 (m, IH), 3,49-3,35 (m, IH), 3,24 (d, 7= 13,5 Hz, 1H),3,15 (d,7=9,3 Hz,
IH), 2,95 (dd, J} = 8,1 Hz, J2 = \Ί,Ί Hz, IH), 2,70 (d, J= 15,6 Hz, IH), 2,40 (d, 7= 18,0 Hz, IH), 2,31 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 1,96 (s, 3H), 1,75 - 1,66 (m, IH), 1,52 - 1,17 (m, 2H), 0,66 (t, 7=7,2 Hz, 3H).
Zkvašovací procesy
Příklad A
Kultivační médium ZMP3 obsahující 1% glukózu, 0,25% hovězí vývar, 0,5% bekto-pepton,
0,25% NaCl a 0,8% CaCO3 bylo naočkováno 0,1% zmraženou vegetativní kulturou mikroorganismu Pseudomonas fluorescens, kmen A2-2. Bakteriální kultura byla inkubována na rotační třepačce (250 ot/min) při teplotě 27 °C. Po 30h inkubaci byla kultura přenesena do fermentoru, kde za stálého třepání probíhala další inkubace v produkčním médiu obsahujícím 2% dextrosu, 4% manitol, 2% sušené pivovarnické kvasnice (vitalevor R Biolux, Belgie), 1% (NHJ2SO4,
0,04% K2HPO4, 0,8% KCl, 0,001% FeCl3,0,l% L-Tyr, 0,8% CaCO3, 0,05% PPG-200, 0,2% protipěnivého silikonu (ASSAF-100, RHODIA UK). Sterilizace proběhla při teplotě 122 °C 30 min. Zaočkovaný objem byl 2 % (v/v). Teplota byla 27 °C (0 až 16 h) a 24 °C od 16 h až do konečného zpracování (41 h). Kultura rostla v kyslíkové atmosféře 25%. pH bylo udržováno na hodnotě 6,0 pomocí kyseliny sírové od 28h inkubace až do konečného zpracování. Přetlak byl 50 kPa (0,5 bar). Od 16h kultivace byl do kultivačního média přidán 1% manitol nebo sorbol (na 2 dny) a 2% manitol nebo sorbol na 3 dny v období fermentačního procesu.
Po 41 nebo 64 hodinách se extrahuje fermentační médium pro získání safracinu B, nebo po přidání KCN do kultivačního média je možné z vyčeřeného média získat kyanosafracin B.
Příklad B
Získání kyanosafracínu B z hrubého extraktu
Vy čeření nebo filtrace fermentačního média při pH 6 odstraní pevné části. Vy čeřené kultivační médium bylo nastaveno na pH 9,5 pomocí naředěného hydroxidu sodného a dvakrát extrahováno pomocí 2 : 1 (v/v) ethylacetátu, methylenchloridu nebo butylacetátu. Extrakce probíhala za stálého třepání 20 min, teplota směsi byla udržována v rozmezí 8 až 10 °C. Obě fáze byly centrifugací odděleny a organická fáze byla vysušena pomocí bezvodého síranu sodného. Jiným způsobem separace je zamražení a poté filtrace pro odstranění krystalů ledu. Organická fáze (ethylacetátová vrstva) byla odpařována do té doby, až byl získán olejovitý hrubý extrakt.
Příklad C
Vy čeření nebo filtrace fermentačního média při pH 6 odstraní pevné části. Vy čeřené kultivační médium bylo nastaveno na pH 3,9 pomocí koncentrované kyseliny octové. Do vyčeřeného extraktu byl přidán KCN v koncentraci 0,5 g na litr média a reakční směs byla za stálého míchání inkubována při teplotě 20 °C 1 h. Poté byla teplota snížena na 15 °C a pH bylo pomocí naředěného hydroxidu sodného nastaveno na hodnotu 9,5. Reakční směs byla extrahována pomocí 2:1,5 (v/v) ethylacetátu. Extrakce probíhala za stálého třepání 20 min, teplota směsi byla udržována v rozmezí 8 až 10 °C. Centrifugací byly odděleny obě fáze. Organická fáze byla vysušena pomocí bezvodého síranu sodného. Organická fáze (ethylacetátová vrstva) byla odpařována tak dlou55 ho, až byl získán olejovitý hrubý extrakt. Tento extrakt byl purifikován pomocí sloupcové chro-88CZ 303536 B6 matografie (SiO2, gradient 20 : 1 přes 1 : 1 až po 5 : 1 ethyl acetát: methanol) za kvantitativního vzniku sloučeniny 2 ve formě světle žluté pevné látky.
Rf: 0,55 (ethylacetát:methanol 5 : 1); tR = 19,9 min [HPLC, Delta Pack C4, 5μπι, 300 A, 5 150x3 mm, λ=215 nm, flow = 0,7 ml/min, temp = 50 °C, grád.: CH3CN-aq. NaOAc (10mM)
85%-70% (20')];
lH NMR (300 MHz, CDC13): δ 6,54 (dd, J, = 4,4 Hz, J2 = 8,4 Hz, 1H), 6,44 (s, IH), 4,12 (d, J = 2,4 Hz, IH), 4,04 (d, J = 2,4 Hz, IH), 4,00 (s, 3H), 3,87 (bs, IH), 3,65 (ddd, 7/ = 1,5 Hz, J2 = 8,7 Hz, J3 = 9,9 Hz, IH), 3,35 (br. D. ./= 8,4 Hz, IH), 3,15 - 2,96 (m, 4H), 2,92 (q, J = 7,2
Hz, IH), 2,47 (d, J= 18,3 Hz, IH), 2,29 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), 1,83 (s, 3H), 1,64 (ddd, J} = 2,7 Hz. 11,1 Hz,Λ = 14,1 Hz, IH), 0,79 (d, 7= 7,2 Hz, 3H);
13C NMR (75 MHz, CDCh): δ 186,0 (q), 175,9 (q), 156,2 (q), 146,8 (q), 142,8 (q), 140,7 (q), 136,6 (q), 130,5 (q), 128,8 (q), 127,0 (q), 120,5 (s), 117,4 (q), 116,5 (q), 60,8 (t), 60,4 (s), 58,7 (t), 56,2 (s), 55,7 (s), 54,8 (s), 54,8 (s), 54,4 (s), 50,0 (s), 41,6 (t), 39,8 (d), 25,2 (d), 24,4 (d), 21,2 (t), 15,5 (t), 8,4 (t).
ESI-MS m/z počítáno pro C29H35N5O6: 549,6. Zjištěno (M+H)+: 572,3
Příklad D
Médium (50 1) složené z 2% dextrosy, 4% mannitolu, 2% sušených pivovarnických kvasnic, 1% síranu amonného, 0,04% hydrogenfosforečnanu draselného, 0,8% chloridu draselného, 0,001% chloridu železitého, 0,1% L-tyrosinu, 0,8% uhličitanu vápenatého, 0,05% polypropylenglykolu
2000 a 0,2% protipěnivé sloučeniny ASSAF 1000 bylo nalito do fermentační nádoby o objemu
1 a po sterilizaci naočkováno 2% kulturou kmene A2-2 (FERM BP-14). Kultivace za přístupu vzduchu probíhala při teplotě od 27 do 24 °C po dobu 64 h (provzdušňování 75 1 za minutu a třepání 350 až 500 otáček za minutu). pH bylo kontrolováno pomocí automatického přidávání ředěné kyseliny sírové od 27. hodiny kultivace až po finální zpracování. Od 16. hodiny kultivace byl přidán 2% manitol. Po odcentrifugování buněk bylo získáno médium (45 1) a pomocí ředěného hydroxidu sodného bylo pH nastaveno na 9,5. Poté bylo dvakrát extrahováno 25 litry ethylacetátu. Extrakce probíhala za stálého třepání při teplotě 8 °C 20 min. Centrifugací byly odděleny obě fáze. Organické fáze byly zamraženy na teplotu -20 °C a zfiltrovány pro odstranění krystalků ledu a odpařovány až do okamžiku, kdy bylo získáno 40 g olejově tmavého hrubého extraktu. Po zavedení kyanidové skupiny a purifikaci bylo získáno 3,0 g kyanosafracinu B.
Příklad E
Médium (50 1) složené z 2% dextrosy, 4% manitolu, 2% sušených pivovarnických kvasnic, 1% síranu amonného, 0,02% hydrogenfosforečnanu draselného, 0,2% chloridu draselného, 0,001% chloridu železitého, 0,1% L-tyrosinu, 0,8% uhličitanu vápenatého, 0,05% polypropylenglykolu 2000 a 0,2% protipěnivé sloučeniny ASSAF 1000 bylo nalito do fermentační nádoby o objemu 75 1 a po sterilizaci naočkováno 2% kulturou kmene A2-2 (FERM BP-14). Kultivace za přístupu vzduchu probíhala při teplotě od 27 do 24 °C po dobu 41 h (provzdušňování 75 1 za minutu a třepání 350 až 500 otáček za minutu). pH bylo kontrolováno pomocí automatického přidávání ředěné kyseliny sírové od 28. hodiny kultivace až po finální zpracování. Od 16. hodiny kultivace byl přidán 1% manitol. Po odcentrifugování buněk bylo získáno médium (45 I) a pomocí 200 ml koncentrované kyseliny octové bylo pH nastaveno na 3,9. Bylo přidáno 25 g 97% KCN a po 1 h třepání bylo pH média pomocí 1500 ml 10% roztoku hydroxidu sodného nastaveno na hodnotu 9,5. Poté bylo médium extrahováno 35 litry ethylacetátu. Extrakce probíhala za stálého třepání při teplotě 8 °C 20 min. Centrifugací byly odděleny obě fáze. Organické fáze byly vysušena pomocí bezvodého síranu sodného a odpařována do okamžiku, kdy bylo získáno 60 g olejově tmavého hrubého extraktu.
-89CZ 303536 B6
Po chromatografické separaci bylo získáno 4,9 g kyanosafracinu B.
Citovaná literatura
European Patent 309,477.
US patent 5,721,362.
Sakai, r., Jares-Erijman, E.A., Manzanares, L, Elipe, M.V.S., and Rinehart, K.L.J. Am. Chem. Soc. (1996) 118, 9017-9023
Martinez, E. J., Owa, T., Schreiber, S. L. and Corey, E. J. Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 1999, 96, io 3496-3501.
Japanese Kokai JP-A2 59/225189.
Japanese Kokai JP-A2 60/084288.
Arai, T.: Kubo, A. In The Alkaloids, Chemistry and Pharmacology; Brossi, A. Ed.; Academie: New York, 1983, Vol 21; pp 56-110.
Remers, W. A.: In The Chemistry of Antitumor Antibiotics; Vol. 2; Wiley: New York. 1988, pp 93-118.
Gulavita N. K.: Scheuer, P. J.: Desilva, E. D. Abnst. Indo-United States Symp. on Bioactive Compounds from Marině Organisms, Goa, India, Feb. 23-27, 1989, p. 28.
Arai, T; Takahashi, K.; Kubo, A. J. Antibiot, 1977, 30, 1015-1018.
Arai. T.; Takahashi, K.; Nakahara, S.; Kubo, A. Experientia 1980, 36, 1025-1028.
MÍ kam ί, Y.; Takahashi, K; Yazawa, K.; Hour-Young, C.; Arai, T.; Saito, N.; Kubo, A. J. Antibiot. 1988, 41, 734-740,
Arai, T.; Takahashi, K.; Ishiguro, K.; Yazawa, K. J. Antibiot. 1980,33, 951-960.
Yazawa, K.; Takahashi, K.; Mikami, Y.; Arai, T.; Saito, N.; Kubo, A. J. Antibiot. 1986, 39,
1639-1650.
Arai, T.; Yazawa, K.; Takahashi, K.; Maeda, A.; Mikami, Y. Antimicrob. Agent Chemother. 1985, 28, 5-11.
Takahashi, K.; Yazawa, K.; Kishi, K.; Mikami, Y.; Arai, T.; Kubo, A. J. Antibiot. 1982, 35, 196— 201.
Yazawa, K.; Asaoka, T.; Takahashi, K.; Mikami, Y.; Arai, T. J. Antibiot. 1982, 35, 915-917. Frinkce, J. M.; Faulkner, D. J. J. Am. Chem. Soc. 1982, 104, 265-269.
He, H.-Y.; Faulkner, D. J.7. Org. Chem. 1989, 54, 5822-5824.
Kubo, A.; Saito, N.; Kitahara, Y.; Takahashi, K.; Tazawa, K.; Arai, T. Chem. Pharm. Bull. 1987, 35, 440-442,
Trowitzsch-Kienast, W.; Irschik, H.; Reichenback, H.; Wray, V.; Hófle, G. Liebigs Ann. Chem. 1988, 475—481.
Ikeda, Y.; Idemoto, H.; Hirayama, F.; Yamamoto, K.; Iwao, K.; A sáno, T.; Munakata, T. J. Antibiot. 1983,36, 1279-1283.
Asaoka, T.; Yazawa, K.; Mikami, Y. Arai, T.; Takahashi, K. J. Antibiot. 1982, 35, 1708-1710.
Lown, J. W.; Hanstock, C. C.; Joshua, A. V.; Arai, T; Takahashi, K. J. Antibiot. 1983, 36, 1184— 1194.
Munakata et al. United States Patent 4, 400, 752, 1984.
Y. Ikeda etal. The Journal of Antibiotics. VOL XXXVI, N° 10, 1284, 1983.
R. Cooper, S. Unger. The Journal of Antibiotics. VOL XXXVIII, N°l, 1985.
Corey et al. United States Patent 5, 721,362. 1998.
Corey et al. J. Am. Chem. Soc. vol 118 pp 9202-92034, 1996.
Proč. Nati. Acad. Sci. USA. Vol. 96, pp 3496-3501, 1999.
Claims (12)
Hide Dependent
translated from
Claims (12)
Hide Dependent
translated from
- 5 1. Způsob přípravy sloučeniny vzorce XVIIb:(XVIIb), ve kterém:R1 je aminomethylenová skupina, chráněná aminomethylenová skupina, a acylem derivatizovaná aminomethylenová skupina, hydroxymethylenová skupina, chráněná hydroxymethylenová skupina nebo acylem derivatizovaná hydroxymethylenová skupina a15 R4je-H; neboR1 a R4 dohromady tvoří skupinu vzorce IV, V, VI nebo VII;R5je -H, -OH;25 R7 je -OCH3 a R8 je -OH nebo R7 a R8 dohromady tvoří skupinu -O-CH2-O-;R14a a R14b jsou obě-H nebo jedno je -H a druhé je -OH, -OCH3 nebo -OCH2CH3 neboR14a a R,4b dohromady tvoří keto skupinu;Rl5je-H, —OH;R21je-H, -OH nebo-CN;35 nebo jejích derivátů, kde OH skupina substituentu R5 sloučeniny vzorce XVIIb je derivatizovaná acylem, a/nebo -NH2 skupina sloučeniny vzorce Vije derivatizovaná acylem, vyznačující se tím, že 21 -kyano sloučenina vzorce XVI:-91 CZ 303536 B6 (XVI), ve kterém:R1 je amidomethylenová skupina nebo acyloxymethylenová skupina;R5 * * a R8 jsou nezávisle vybrány z -H, -OH nebo -OCOCH2OH a kruh A je benzenový kruh, nebo R5 a R8 jsou obě ketoskupiny a kruh A je p-benzochinonový kruh;R12je-CH3;Ri4a a Rub jsou _H nebo jecjno je -H a druhé je -OH, -OCH3 nebo -OCH2CH3 nebo 15 R14a a Rl4b dohromady tvoří ketoskupinu; aR15 a R18 jsou nezávisle vybrány z -H nebo -OH a kruh E je benzenový kruh, nebo R15 a R18 jsou obě ketoskupiny a kruh E je /7-benzochinonový kruh;20 za předpokladu, že alespoň jeden z kruhů A nebo E je y?-benzochinonový kruh;reaguje způsobem zahrnujícím podle potřeby kroky:a) přeměnu chinonového systému kruhu E na fenolový systém;b) přeměnu chinonového systému kruhu A na fenolový systém;25 c) přeměnu fenolového systému kruhu A na methylendioxyfenolový kruh;d) v případě, že R1 a R4 společně tvoří skupinu vzorce IV, V, VI nebo VII tak tvorbu přemostěného spiro kruhového systému vzorce IV, V, VI nebo VII přes pozici 1- a pozici 4- v kruhu B;e) acylaci; af) přeměnu 21-kyano substituentu na substituent -H nebo -OH;čímž se získá požadovaná sloučenina vzorce XVIIb.
- 2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že krok a) převedení chinonového systému kruhu E na fenolový systém se provede redukcí za použití vodíku s katalyzátorem palla35 diem na uhlí.
- 3. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že krok b) převedení chinonového systému kruhu A na fenolový systém se provede redukcí za použití vodíku s katalyzátorem palladiem na uhlí.
- 4. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že sestává přinejmenším z kroků b),c) , d), e) a ť).
- 5. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že R1 a R445 dohromady tvoří skupinu vzorce IV, V, VI nebo VII a krok d) vytvoření přemostěného spiro kruhového systému přes pozici 1- a pozici 4- v kruhu B se provede substitucí v pozici 1-92CZ 303536 B6 s přemosťujícím činidlem tvořícím exendo chinonový methid v pozici 4- a reakcí methidu se substituentem 1-tak, že vznikne přemostěný spiro kruhový systém.
- 6. Způsob podle nároku 5, vyznačující se tím, že se jako přemosťující činidlo pou5 žije sloučenina vzorce XIXProt3 (XIX), kde Fu představuje chráněnou funkční skupinu, Prot3 je chránící skupina a tečkovaná čára předlo stavuje případnou dvojnou vazbu.
- 7. Způsob podle nároku 6, vyznačující se tím, žeFuje skupina -NHProt4a nebo -OProt4b, kde Prot4a je amino chránící skupina a Prot4b je hydroxy chránící skupina.is
- 8. Způsob podle nároku 7, vyznačující se tím, že se jako přemosťující činidlo použije lnt-29 nebo int 37 následujících vzorců:20 kde Troc je 2,2,2-trichlorethoxykarbonylová skupina a MOM je methoxy methy lová skupina.
- 9. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 5 až 8, vyznačující se tím, že tvorba methidu zahrnuje zavedení hydroxylové skupiny v pozici 10- na spojení kruhů A a B, čímž se získá částečná struktura vzorce XX:(XX), ve kterém R je vybrána pro vytvoření požadované skupiny vzorce IV, V, VI nebo VII.30 10. Způsob podle nároku 9, vyznačující se tím, že se zavede hydroxylová skupina v pozici 10~ na spojení kruhů A a B za vzniku částečné struktury vzorce XXÍ:-93CZ 303536 B6 cArve kterém skupina R odpovídá definici uvedené v nároku 9.5 11. Způsob podle nároku 9 nebo 10, vyznačující se tím, že skupina R ie -CHFuCFf-SProt', ve které Fu je chráněná funkční skupina jako je -NHProt4a nebo OProC a Prot3 je thiolová chránící skupina.12. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 11, vyznačující se tím, že se použije io 21-kyano sloučenina vzorce XVI získaná zavedením 21—kyano skupiny do saframycinu A, saframyc inu B, saframycinu C, saframycinu G, saframycinu H, saframycinu S, saframycinu Y3, saframycinu Ydb saframycinu Adb saframycinu Yd2, saframycinu AH2, saframycinu AH2Ac, saframycinu AHb saframycinu AH,Ac, saframycinu AR3, renieramycinu A, renieramycinu B, renieramycinu C, renieramycinu D, renieramycinu E, renieramycinu F, xestomycinu, saframy15 cínu D, saframycinu F, saframycinu Mx-1, saframycinu Mx-2, safracínu A nebo safracinu B neboje saframycin R.13. Způsob podle nároku 12, vyznačující se tím, že se jako 21-kyano sloučenina vzorce XVI použije kyanosafracin B, sloučenina 2, vzorce:(sloučenina 2).14. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 13, vyznačující se tím, že R5 ve sloučenině vzorce XVIIb je alkanoyloxyl z 1 až 5 atomů uhlíku.15. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 14, vyznačující se tím, že R5 ve sloučenině vzorce XVIIb je acetyloxyl.16. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 15, vyznačující se tím, že R14a a R14b 30 ve sloučenině vzorce XVIIb je vodík.17. Způsob podle kteréhokoliv z nároků lažló, vyznačující se tím, že R15 ve sloučenině vzorce XVIIb je vodík.-94CZ 303536 B618. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 17, vyznačující se tím, že R2' ve sloučenině vzorce XVIIb je -OH nebo -CN.5 19. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 18, vyznačující se tím, že R a R ve sloučenině vzorce XVIIb dohromady tvoří skupinu -O-CH2-O-.20. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 19, vyznačující se tím, že R1 a R4 ve sloučenině vzorce XVIIb dohromady tvoří skupinu vzorce IV, V, VI nebo VII:21. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, 12 až 19, vyznačující se tím, žeR1 ve sloučenině XVIIb je případně chráněná nebo acy lem derivatizovaná aminomethylenová sku15 pina, případně chráněná nebo acylem derivatizovaná hydroxy methy lenová skupina a R4 je -H.22. Způsob podle nároku 21, vyznačující se tím, že R1 ve sloučenině vzorce XVIIb je skupina -CH2-NH2 nebo -CH2-NH-aa, ve které aa je acyl amino kyselinová skupina,20 23. Způsob podle nároku 22, vyznačující se tím, že sloučenina vzorce XVIIb je Ν'acyl derivát skupiny R1, když -CH2NH2 nebo -CH2-NH-aa.24. Způsob podle nároku 23, vyznačující se tím, že R1 ve sloučenině vzorce XVIIb je Λ'-acyl derivát, ve kterém acylová skupina má vzorec -CO-R3, ve kterém Ra je alkyl, alkoxyl,25 alkenyl, aralalkyl, arylalkenyl, amino kyselinový acyl nebo heterocyklyl s tím, že každý je případně substituovaný halogenem, kyanoskupinou, nitroskupinou, karboxyalkýlem, alkoxylem, ary lem, aryloxylem, heterocyklylem, heterocyklyloxylem, alkylem, aminem nebo substituovaným aminem; nebo acylová skupinaje aa.30 25. Způsob podle nároků 22, 23 nebo 24, vyznačující se tím, že je přítomná jedna nebo více aa skupin, a kterou je alanyl, arginyl, aspartyl, asparagyl, cystyl, glutamyl, glutaminyl, glycyl, histidyl, hydroxyprolyl, isoleucyl, leucyl, lysyl, methionyl, fenylalanyl, prolyl, seryl, threonyl, thyronyl, tryptofyl, ty rosy 1 nebo valyl.35 26. Způsob podle kteréhokoliv z nároků laž25, vyznačující se tím, že v kterékoliv reakci je jedna nebo více substituovaných skupin chráněných chránící skupinou,27. Způsob přípravy sloučeniny vzorce XXIIb:-95CZ 303536 B6 ve kterém5 R1 je -CH2NH2 nebo -CH2OH nebo chráněná nebo derivatizovaná verze takové skupiny a R4je-H; neboR1 a R4 dohromady tvoří skupinu vzorce IV, V, VI nebo VII:R5 je -OH nebo chráněná nebo derivatizovaná verze takové skupiny;15 R12 je -H, -CH3 nebo-CH2CH3;R14a a Rl4b jsou obě -H nebo jedna je -H a druhá je -OH nebo chráněná nebo derivatizovaná verze takové skupiny, -OCH3 nebo -OCH2CH3 nebo20 R14a a Rl4b dohromady tvoří ketoskupinu;R15 je -H, -OH nebo chráněná nebo derivatizovaná verze takové skupiny;R18 je -OH nebo chráněná nebo derivatizovaná verze takové skupiny; aR21 je-H, -OH nebo-CN;vyznačující se tím, že 21-kyano sloučenina vzorce XVI:-96CZ 303536 B6 ve kterém:R1 je amidomethylenová skupina nebo acyloxymethylenová skupina;5 R5 a Rs jsou nezávisle vybrány z -H, -OH nebo -OCOCH2OH a kruh A je benzenový kruh, neboR5 a R8 jsou obě ketoskupiny a kruh A je/?-benzochinonový kruh;Ri2 je -H, -CH3 nebo -CH2CH3;R14a a R14b jsou obě -H nebo jedno je-H a druhé je -OH, -OCH3 nebo -OCH2CH3 nebo R,4a a Rl4b dohromady tvoří ketoskupinu; a15 R,s a R18 jsou nezávisle vybrány z -H nebo -OH a kruh E je benzenový kruh, nebo R15 a R18 jsou obě ketoskupiny a kruh E je p-benzochinonový kruh;za předpokladu, že alespoň jeden z kruhů A nebo E je /?-benzochinonový kruh; reaguje způsobem zahrnujícím podle potřeby kroky:20 a) přeměnu chinonového systému kruhu E na fenolový systém;b) přeměnu chinonového systému kruhu A na fenolový systém;c) přeměnu fenolového systému kruhu A na methylendioxyfenolový kruh;d) tvorbu přemostěného spiro kruhového systému vzorce IV, V, VI nebo VII přes pozici 1- a pozici 4- v kruhu B;25 e) derivatizaci; af) přeměnu 21-kyano substituentu na substituent -H nebo -OH; čímž se získá požadovaná sloučenina vzorce XXIIb.28. Způsob podle nároku 27, vyznačující se tím, že ve sloučenině vzorce XXIIb, R5 30 je OH, R14“ a Rl4bjsou H a R18 je OH.29. Způsob podle nároku 27, vyznačující se tím, že sloučeninou vzorce XXIIb je ekteinascidin 743 nebo ekteinascidin 770:30. Způsob podle nároku 27, vyznačující se tím, že sloučeninou vzorce XXIIb je ecteinascidin 743 vzorce-97CZ 303536 B631. Způsob podle nároku 27, v y z n a č u j í c í se t í m, že produkt má vzorec XXIII:ve kterémRl je amidomethy lenová skupina, chráněná aminomethylenová skupina, derivatizovaná amino10 methylenová skupina, hydroxymethylenová skupina, chráněná hydroxymethylenová skupina nebo derivatizovaná hydroxymethylenová skupina;R5 je acetyloxy nebo jiná acylová skupina mající až 4 atomy uhlíku;15 Rl2je-CH3aR21 je hydroxy nebo kyanoskupina.32. Způsob podle nároku 31, vy z n a č uj í c í se t í m , že R1 je skupina-CH2NH-CO-Ra, 20 ve které Ra má lineární řetězec délky méně než 20 atomů.33. Způsob podle nároku 32, vyznačující se tím, že Ra má lineární řetězec délky méně než 15 atomů.25 34. Způsob podle nároku 33, vyznačující se tím, že Ra má lineární řetězec délky méně než 10 atomů.35. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 27 nebo některého z nároků 29 až 34, vyznačující se tím, že R5jeacetyloxylováskupina.-98CZ 303536 B636. Způsob podle nároku 31, vyznačující se tím, že sloučenina vzorce XXIII je ftalascidin vzorce III:37. Způsob podle nároků 22, 23 nebo 24, vyznačující se tím, že aa je alanyl.38. Způsob podle nároku 37, vyznačující se tím, že alanylová skupina je chráněna butoxykarbonylovou skupinou.39. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 38, vyznačující se tím, že se sloučenina vzorce přemění na sloučeninu vzorce20 kde R1 a R18 odpovídají definici v nároku 1 nebo 27.40. Způsob podle nároku 39, vyznačující se tím, že R18 je MOM chráněná OH skupina.25 41. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 40, vyznačující se tím, že se sloučenina vzorce-99QZ 303536 B6 kde R1 a R18 odpovídají definici v nároku 1 nebo 27.42. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 41, vyznačující se tím, že zahrnuje io reakci, ve které se sloučenina se skupinou R1, kterou je aminomethylen, převede na sloučeninu se skupinou R1, kterou je hydroxymethylenová skupina.43. Sloučenina vzorce XVI ve kterém R1 je případně chráněná nebo acy lem derivatizovaná aminomethy lenová skupina, kde chránící skupina pro aminomethylenovou skupinu je vybrána z alkylu, alkenylu, alkylsilylalkoxyalkylu, alkoxyalkylu, kyanoalkylu, heterocykly lu, alkoxyarylalkylu, cykloalkylu, nitroarylu,20 arylalkylu a hydroxyarylalkylu;acylová skupina pro acylem derivatizovanou aminomethylenovou skupinu je vybrána z aroylu, arylaroylu, halogenaroylu a nitroaroylu; nebo acylová skupina pro acylem derivatizovanou aminomethylenovou skupinu je vybraná zacetylu, trifluoracetylu, 2,2,2-trichlorethoxykarbonylu, isovalerylu, trans-3-(trifluormethyl)cinamoyI,25 heptafluorbutyrylu, dekanoylu, trans-cinamoylu, butyrylu, 3-chlorpropyonylu, cinamoylu, 4methylcínamoylu, hydrocinamoylu nebo trans-hexenoylu, alanylu, arginylu, aspartylu, asparagylu, cystylu, glutamylu, glutaminylu, glycylu, histidylu, hydroxyprolylu, isoleucylu, leucylu, lysylu, methionylu, fenylalanylu, prolylu, serylu, threonylu, thyronylu, tryptofylu, tyrosylu a valylu; a30 R18 je etherem chráněná OH skupina, kde chránící ether je vybraný z alkyl etheru, alkoxyalkyl etheru, arytoxyalkyl etheru, a Ikoxyalky loxy alkyl etheru, alkylsilylalkoxyalkyl etheru, alkylthioalkyl etheru, arylthioalkyl etheru, azidoalkyl etheru, kyanoalkyl etheru, chloralkyl etheru, hetero- 100CZ 303536 B6 cyklyl etheru, cykloalky laiky 1 etheru, alkenyl etheru, cykloalkyl etheru, alkylarylalky 1 etheru, alkoxy arylalkyl etheru, nitroarylalkyl etheru, halogenary laiky 1 etheru, alkylaminokarbonylarylalkyl etheru, alkylsulfinylaiylalkyl etheru a alkylsilyl etheru;kde alkyl skupina má 1 až 12 atomů uhlíku;5 alkoxy skupina má 1 až 12 atomů uhlíku;alkenyl skupina má 2 až 12 atomů uhlíku;aryl skupina je vybrána z fenylu, bifenylu a naftylu; a heterocyklická skupina má 4 až 8 atomů v kruhu, s jedním nebo více heteroatomy vybranými z dusíku, kyslíku a síry.o44. Sloučenina podle nároku 43, kterou je sloučenina vzorce:15 kde Boc je t-butoxykarbonylová skupina.45. Sloučenina vzorce ve kterém R* je případně chráněná nebo acylem derivatizovaná aminomethylenová skupina, kde chránící skupina pro aminomethylenovou skupinu je vybrána z alkylu, alkenylu, alkyl sily loxyalkylu, alkoxyalkylu, kyanoalkylu, heterocyklylu, alkoxyarylalkylu, cykloalkylu, nitroarylu, arylalkylu a hydroxyarylalkylu;25 acylová skupina pro acylem derivatizovanou aminomethylenovou skupinu je vybrána zaroylu, arylaroylu, halogenaroylu a nitroaroylu; nebo acylová skupina pro acylem derivatizovanou aminomethylenovou skupinu je vybrána z acetylu, trifluoracetylu, 2,2,2-trichlorethoxykarbonylu, isovalerylu, trans~3 jtriťluormethyl)cinamoyl, heptafluorbutyrylu, dekanoylu, trans-cinamoylu, butyrylu, 3-chlorpropyonylu, cinamoylu, 430 methylcinamoylu, hydrocinamoylu, nebo trans-hexenoylu, alanylu, arginylu, aspartylu, asparagylu, cystylu, glutamylu, glutaminylu, glycylu, histidylu, hydroxyprolylu, isoleucylu, teucylu, lysylu, methionylu, fenylalanylu, prolylu, seiylu, threonylu, thyronylu, tryptofylu, tyrosylu a valylu; a- 101 CZ 303536 B6R18 je etherem nebo esterem chráněná OH skupina, kde ether je vybraný z alkyl etheru, alkoxyalkyl etheru, aryloxyalkyl etheru, alkoxyalkyloxyalkyl etheru, alkylsilylalkoxyalkyl etheru, alkylthioalkyl etheru, arylthioalkyl etheru, azidoalkyl etheru, kyanoalkyl etheru, chloralkyl etheru, heterocyklyl etheru, cykloalkylalkyl etheru, alkenyl etheru, cykloalkyl etheru, alkylarylalkyl5 etheru, alkoxyarylalkyl etheru, nitroarylalkyl etheru, halogenary laiky 1 etheru, alky lam inokarbonylarylalkyl etheru, alkyl sulfinylarytal kyl etheru a alkylsilyl etheru;chránící ester je vybraný z arylalkylkarbonátu, alkylsulfinylarylalkylkarbonátu, alkylkarbonátu, ary lhalogenalkyl karbonátu, arylalkenyl karbonátu, arylkarbanátu, alkylfosfinylu, alkylfosfinthioylu a arylalkylsulfonátu;
- 10 kde alkyl skupina mál až 12 atomů uhlíku; alkoxy skupina mál až 12 atomů uhlíku; alkenyl skupina má 2 až 12 atomů uhlíku; aryl skupina je vybrána z fenylu, bifenylu a naftylu; a heterocyklická skupina má 4 až 8 atomů v kruhu, s jedním nebo více heteroatomy vybranými
- 15 z dusíku, kyslíku a síry.46. Sloučenina podle nároku 45, kterou je sloučenina vzorce:kde Boc je t-butoxykarbonylová skupina.47. Sloučenina obecného vzorce:ve kterém Rl je chráněná nebo acylem derivatizovaná aminomethylenová skupina, kde chránící skupina pro aminomethylenovou skupinu je vybrána z alkylu, alkenylu, alkylsilylalkoxyalkylu, aikoxyalkylu, kyanoalkylu, alkoxyarylalkylu, cykloalkylu, nitroarylu, arylalkylu nebo hydroxy30 arylalkylu;acylová skupina pro acylem derivatizovanou aminomethylenovou skupinu je vybrána z aroylu, arylaroylu, halogenaroylu a nitroaroylu; nebo acylová skupina pro acylem derivatizovanou aminomethylenovou skupinu je vybrána z acetylu, trifluoracetylu, 2,2,2-trichlorethoxykarbonylu, isovalerylu, trans-3-(trifluormethyl)cinamoyl,- 102CZ 303536 B6 heptafluorbutyrylu, dekanoylu, trans-cinamoylu, butyrylu, 3-chlorpropyonylu, cinamoylu, 4methylcinamoylu, hydrocinamoylu, nebo trans-hexenoylu, alanylu, arginylu, aspartylu, asparagylu, cystylu, glutamylu, glutaminylu, glycylu, histidylu, hydroxyprolylu, isoleucylu, leucylu, lysylu, methionylu, fenylalanylu, prolylu, serylu, threonylu, thyronylu, tryptofylu, tyrosytu a5 valylu; aR18 je etherem nebo esterem chráněná OH skupina, kde ether je vybraný z alkyl etheru, alkoxy alkyl etheru, aryloxyalkyl etheru, alkoxyalkyloxyalkyl etheru, alkylsilylalkoxyalkyl etheru, alkylthioalkyl etheru, arylthioalkyl etheru, azidoalkyl etheru, kyanoalkyl etheru, chloralkyl etheru, heterocyklyl etheru, cykloalkylalkyl etheru, alkenyl etheru, cykloalkyl etheru, alkoxy ary laiky 1 io etheru, nitroary laiky 1 etheru, ha logenaryl alkyl etheru, alky lamin okarbonyl ary lalkyl etheru, alkylsulfinylarylalkyl etheru a alkylsilyl etheru;chránící ester je vybraný z aryl alky Ikarbonátu, alky lsulfinylary laiky Ikarbonátu, alkylkarbonátu, arylhalogenalkylkarbonátu, ary lalkeny Ikarbonátu, arylkarbamátu, alkylfosfinylu, alkylfosfínthioylu a ary laiky lsulfonátu;15 kde alkyl skupina má 1 až 12 atomů uhlíku; alkoxy skupina má 1 až 12 atomů uhlíku; alkenyl skupina má 2 až 12 atomů uhlíku; aryl skupina je vybrána z fenylu, bifenylu a nafty lu; a heterocyklická skupina má 4 až 8 atomů v kruhu, s jedním nebo více heteroatomy vybranými
- 20 z dusíku, kyslíku a síry.48. Sloučenina podle nároku 47, kterou je sloučenina vzorce:kde Boc je t-butoxykarbonylová skupina.Konec dokumentu