CZ293489B6

CZ293489B6 - @Q@Hydroxy@�@en@Ź@bishomocholekalciferolové deriváty a jejich použitíŹ meziprodukty a farmaceutické směsi

Info

Publication number: CZ293489B6
Application number: CZ19981572A
Authority: CZ
Inventors: Iacobolliájeromeáanthony; Uskokovicámilanáradoje
Original assignee: F@Áhoffmann@Laárocheáag
Priority date: 1995-11-22
Filing date: 1996-11-13
Publication date: 2004-05-12
Also published as: NO982304D0; TW403735B; DK0874814T3; US6030963A; JP3917184B2; CA2237897C; CN1202885A; ATE241599T1; DE69628458D1; NZ322035A; CN1076347C; HUP9903715A2; IL124290A; KR19990071535A; EA199800468A1; JP2007126458A; MY116582A; AU705942B2; PL326837A1; ZA969625B

Abstract

@Q@Hydroxy@�@en@Ź@bishomocholekalciferolové deriváty obecného vzorce IŹ kde A je dvojná vazba mezi atomy uhlíku s E@ nebo Z@stereochemickou konfiguracíŹ nebo trojná vazba mezi atomy uhlíkuŹ Et je ethylŹ R je hydroxy a R@sup@�@n@ je vodík nebo @CH@sub@n@Ź nebo R je vodík nebo fluor a R@sup@�@n@ je @CH@sub@n@ Tyto deriváty indukují nebo stimulují diferenciaci HL@ buněkŹ a proto jsou užitečné pro léčení neoplatických chorobŹ jako je leukemie@ Použití těchto derivátů ve farmaciiŹ meziprodukty pro jejich přípravu a farmaceutických směsí na bázi těchto derivátůŕ

Description

25-Hydroxy-16-en-26,27-bishomocholekalciferoIové deriváty a jejich použití, meziprodukty a farmaceutické směsi

Oblast techniky

Vynález se týká určitých 25-hydroxy-16-en-26,27-bishomocholekalciferolových derivátů, které jsou popsány dále. Tyto látky indukují nebo stimulují diferenciaci HL-60 buněk, a proto jsou užitečné pro léčení neoplastických chorob, jako je leukemie. Vynález se dále týká použití těchto derivátů ve farmacii, meziproduktů pro jejich přípravu a farmaceutických směsí na bázi těchto derivátů.

Dosavadní stav techniky

Derivátů vitaminu D3 se v širokém rozsahu používá pro léčení četných poruch závislých na vitaminu D. Tyto choroby zahrnují například hyperproliferativní chorobu kůže, jako je psoriasis, neoplastické choroby, jako je leukemie, poruchy mazových žláz, jako je akné a seborrhoická dermatitis, osteoporóza a hyperparathyroidismus doprovázejí ledvinové selhání.

Je známo, že hlavní nevýhodou řady známých derivátů vitaminu D3 je skutečnost, že se jedná o sloučeniny, které jsou často špatně tolerovány a kromě toho jsou často vysoce toxické. Obecně se jen velmi obtížně předvídá, které z derivátů vitaminu D3 budou dobře tolerovány a budou vykazovat terapeutickou průchodnost.

V publikaci Cancer Letters sv. 92(1), 77-82 (1995) je diskutován antiproliferativní účinek derivátů vitaminu D3, m.j. 16,23-di-nenasyceného cholekalciferolu. V této práci je také zmíněn vyšší účinek l,25-dihydroxy-16-en-23-inového derivátu (RP 23-7553) ve srovnání s 1,25— dihydroxyderivátem vitaminu D3 a jsou zde navrženy další studie použití těchto sloučenin pro léčení rakoviny prsu.

V publikaci Steroids 1991, 56, 142 se uvádí, že indukční účinek 26,27-dialkylanalogů 1,25— dihydroxyvitaminu D3 na diferenciaci není přímo korelován se strukturními změnami těchto derivátů. Sloučeniny diskutované v této publikaci se strukturně odlišují od sloučenin nárokovaných v předložené přihlášce tím, že neobsahují dvojné vazby v kruhu Dav poloze 23.

V publikaci Blood, 1991 78(1), 75 je diskutována účinnost derivátů vitaminu D3 a uvádí se zde, že účinnost hexafluorovaného l,25-dihydroxy-16-en-23-inového derivátu vitaminu D3 je podstatně vyšší než účinnost 1,25-dihydroxy-vitaminu D3. Jde zde diskutován vliv strukturních modifikací, m.j. zkrácení postranního řetězce, nikoliv však vliv přídavných atomů uhlíku v postranním řetězci:

V publikaci Cancer Research 1990, 50(21), 6857 se uvádí, že deriváty vitaminu D3, totiž 1,25— (OH)₂-16-en-23-in-D3 a deuterovaný l,25-(OH)2-16-en-23-in-D3 jsou účinnější při inhibici klonální proliferace HL-60 buněk a indukci diferenciace HL-60 promyelocytů než rodičovská sloučenina l,25-(OH)2-vitamin D3. Derivát l(F),25(OH)-16-en-23-in-D3 má přibližně stejnou účinnost, zatímco derivát, v němž hydroxyskupina není substituována, nýbrž chybí, totiž 25(OH)-16-en-23-in-D3, je neúčinný.

V publikaci Vitamin D: Mol. Cell. Chin. Endocrinol. 1988, 1988, 433—434 (Chemical Abstract sv. 110, 9, 69512 (1989) je popsána vazebná specificita a biologická účinnost pěti různých 25hydroxyderivátů vitaminu D3 a bylo zjištěno, že tyto deriváty jsou přibližně 2,5x méně účinné.

V patentu US 5 087 619 jsou popsány 16,23-di-nenasycené cholekalciferoly, které jsou užitečné pro léčení hyperproliferativních chorob kůže, neoplastických chorob jako je leukemie a chorob

-1 CZ 293489 B6 mazných žláz. Tyto známé sloučeniny se strukturně odlišují od sloučenin nárokovaných v předložené přihlášce, které jsou homologované v polohách 26 a 27.

Sloučeniny popsané v namítaných dokumentech se sice do určité míry podobají sloučeninám podle vynálezu, ale nepředuveřejňují je a ani je nečiní zřejmými.

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu jsou 25-hydroxy-16-en-26,27-bishomocholekalciferolové deriváty obecného vzorce I

HO

kde A představuje strukturu nebo

Et je ethyl, R je hydroxy a R¹ je vodík nebo =CH2, nebo R je vodík nebo fluor a R¹ je =CH2.

Sloučeniny obecného vzorce I jsou homologované 16,23-dinenasycené cholekalciferoly, které indukují nebo stimulují diferenciaci HL-60 buněk, a proto jsou užitečné pro léčení neoplastických chorob, jako je leukemie.

Následuje vysvětlení některých pojmů, kterých se používá v popisu.

Jak je zde použito, výraz „nižší alkyl“ označuje alkylovou skupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem, obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, například methyl, ethyl, propyl, izopropyl, butyl, tercbutyl a podobně.

Výraz „ar nižší alkyl“ znamená p-tolyl, benzyl, fenylethyl, fenylpropyl a podobně.

Výraz „aryl“ znamená skupinu odvozenou od aromatického uhlovodíku, která může být nesubstituovaná nebo substituovaná jedním nebo více nižšími alkylovými skupinami. Příkladně „aryl“ znamená fenyl a //-methylfenyl.

Vynález se dále týká kompozice zahrnující sloučeninu vzorce I nebo směs dvou nebo více sloučenin vzorce I, stejně jako použití těchto sloučenin pro výrobu léčiv pro stimulaci diferenciace HL-60 buněk a pro léčení neoplastických chorob jako je leukemie. Vynález se také týká

-2CZ 293489 B6 sloučenin vzorce I jako prostředků pro léčení výše uvedených chorobných stavů. Vynález se také týká způsobu přípravy sloučenin vzorce I a meziproduktů, které se v něm vyskytují.

Výhodné jsou sloučeniny vzorce I, kde R je hydroxy a R¹ je =CH₂, zejména sloučenin A, B a C, 5 příslušně:

1,25-dihydroxy-l 6-en-23-in-26,27-bishomocholekalciferol,

1.25- dihydroxy-l 6,23Z-dien-26,27-bishomocholekalciferol,

1.25- dihydroxy-16,23E-dien-26,27-bishomocholekalciferol.

ío Sloučeniny vzorce I, kde A je -C=C- se připraví jak je zde popsáno se zvláštním odkazem na vzorcové schéma I a dále uvedené příklady.

-3CZ 293489 B6

Vzorcové schéma I

-4CZ 293489 B6 kde

R¹ má výše popsaný význam, B je -OCC(Et)₂-,

Y je -OSi(R⁴,R⁵,R⁶), Et je ethyl, R⁴ a R⁶ jsou nižší alkyly a R⁵ je nižší alkyl, aryl nebo arnižší alkyl.

Ve výše uvedeném vzorcovém schématu I se sloučenina vzorce II převede na sloučeninu vzorce III zpracováním s oxidačním prostředkem jako je 2,2'-bipyridiniumchlorchromat nebo pyridiniumdichromat při teplotě místnosti v aprotickém rozpouštědle jako je suchý tetrahydrofuran nebo výhodněji suchý methylenchlorid. Sloučenina vzorce III se zpracuje konvenčními prostředky jako je extrakce následovaná chromatografií.

Sloučenina vzorce III se převede na sloučeninu vzorce IV reakcí s například (trialkylsilyl)imidazolem jako je l-(trimethylsilyl)imidazol v aprotickém organickém rozpouštědle jako je suchý tetrahydrofuran nebo výhodněji suchý methylenchlorid. Sloučenina vzorce IV se zpracuje konvenčními prostředky jako je extrakce následovaná chromatografií.

Sloučenina vzorce IV se převede na sloučeninu vzorce Va. Vb nebo Vc reakcí s odpovídající sloučeninou vzorce VI

(VI), kde Ph je fenyl, R⁷ je vodík, fluor nebo Y, a Y a R¹ mají výše uvedený význam.

Reakce se provádí při -60 °C až -90 °C, výhodně -78 °C v polárním, aprotickém, organickém rozpouštědle jako je suchý ether nebo výhodněji suchý tetrahydrofuran v přítomnosti silné báze jako je alkyllithium, jako je butyllithium. Sloučenina vzorce Va, Vb nebo Vc se zpracuje konvenčními prostředky jako je extrakce následovaná chromatografií.

Sloučeniny vzorce VI jsou známy nebo mohou být připraveny známými postupy.

Chrániči skupiny sloučeniny vzorce Va, Vb nebo Vc se odstraňují reakcí se solí fluoru jako je tetrabutylamoniumfluorid v polárním, organickém rozpouštědle jako je suchý ether nebo výhodněji suchý tetrahydrofuran, čímž se získá odpovídající sloučenina vzorce Ia, Ib nebo Ic.

Meziprodukt vzorce II jak je výše popsán, se připraví jak je dále popsáno se zvláštním odkazem na vzorcové schéma II a následující příklady.

-5CZ 293489 B6

Vzorcové schéma II

kde Y a B mají výše uvedený význam.

Ve výše uvedeném vzorcovém schématu II se sloučenina vzorce VII převede na sloučeninu vzorce VIII reakcí s 3-pentanonem. Tato reakce se provádí při -60 °C až -90 °C, výhodně -78 °C v polárním aprotickém organickém rozpouštědle jako je suchý ether nebo výhodněji suchý tetrahydrofuran v přítomnosti silné báze jako je alkyllithium, jako butyllithium.

Sloučenina vzorce VIII se zpracuje konvenčními prostředky jako je extrakce následovaná chromatografií.

Sloučenina vzorce VII je známa z patentu US 5 087 619 a patentu US 5 145 846, které jsou oba začleněny odkazem.

Sloučenina vzorce VIII se převede na sloučeninu vzorce II reakcí se solí fluoru jako je tetrabutylamoniumfluorid v polárním organickém rozpouštědle jako je suchý ether nebo výhodněji tetrahydrofuran. Sloučenina vzorce II se zpracuje konvenčními prostředky jako je extrakce následovaná chromatografií.

Sloučeniny vzorce I, kde A je dvojná vazba mezi uhlíky s E konfigurací se připraví jak je zde dále popsáno se zvláštním odkazem na vzorcové schéma III a následující příklady.

-6CZ 293489 B6

Vzorcové schéma III

kde Y, B a R¹ mají výše uvedený význam.

Ve výše uvedeném vzorcovém schématu III se sloučenina vzorce II parciálně redukuje, čímž se získá sloučenina vzorce IX reakcí s redukčním prostředkem jako je lithiumaluminiumhydrid, výhodně v přítomnosti alkoxidu alkalického kovu jako je methoxid sodný v aprotickém organickém rozpouštědle jako je suchý ether nebo výhodněji suchý tetrahydrofuran při refluxní teplotě (asi 80 °C pro tetrahydrofuran) po dobu asi 24 hodin a ochladí se na asi 0 °C. Sloučenina vzorce IX se zpracuje konvenčními prostředky jako je extrakce následovaná chromatografií.

Výsledná sloučenina vzorce IX se oxiduje na sloučeninu vzorce X zpracováním s oxidačním prostředkem jako je 2,2'-bipyridiniumchlorchromat nebo pyridiniumdichromat při teplotě místnosti v aprotickém rozpouštědle jako je suchý tetrahydrofuran nebo výhodněji suchý methylenchlorid. Sloučenina vzorce X se zpracuje konvenčními prostředky jako je extrakce následovaná chromatografií.

Sloučenina vzorce X se převede na sloučeninu vzorce XI reakcí s, například, (trialkylsilyl)imidazolem jako je l-(trimethylsilyl)imidazol v aprotickém organickém rozpouštědle jako je suchý tetrahydrofuran nebo výhodněji suchý methylenchlorid. Sloučenina vzorce XI se zpracuje konvenčními prostředky jako je extrakce následovaná chromatografií.

Sloučenina vzorce XI se převede na sloučeninu vzorce Xlla, XRb nebo XIIc reakcí s odpovídající sloučeninou vzorce VI. Reakce se provádí při -60 °C až -90 °C výhodně -78 °C v polárním aprotickém organickém rozpouštědle jako je suchý ether nebo výhodněji suchý tetrahydrofuran v přítomnosti silné báze jako je alkyllithium, jako je butyllithium.

Sloučeniny vzorce Xlla, Xllb nebo XIIc se zpracují konvenčními prostředky jako je extrakce následovaná chromatografií.

Chránící skupiny sloučenin vzorce Xlla, Xllb nebo XIIc se odstraní reakcí se solí fluoru jako je tetrabutylamoniumfluorid v organickém rozpouštědle jako je suchý ether nebo výhodněji tetrahydrofuran, čímž se získá odpovídající sloučenina vzorce Id, Ie nebo If.

Sloučeniny vzorce I, kde A je dvojná vazba mezi uhlíky s Z konfigurací se připraví jak je dále popsáno se zvláštním odkazem na vzorcové schéma IV a následující příklady.

-8CZ 293489 B6

Vzorcové schéma IV

-9CZ 293489 B6 kde Y, B a R¹ mají výše uvedený význam a D je skupina -CH=CHC(Et)2- s Z konfigurací, a Et je ethyl.

Ve výše uvedeném vzorcovém schématu IV se sloučenina vzorce II hydrogenuje na sloučeninu vzorce XIII reakcí s vodíkem a Lindlarovým katalyzátorem v organickém rozpouštědle jako je kombinace ethylacetátu, hexanu a ethanolu v přítomnosti chinolinu. Sloučenina vzorce XIII se zpracuje konvenčními prostředky jako je extrakce následovaná chromatografií.

Výsledná sloučenina vzorce XIII se oxiduje na sloučeninu vzorce XIV zpracováním s oxidačním prostředkem jako je 2,2'-bipyridiniumchlorchromát nebo pyridiniumdichromát při teplotě místnosti vaprotickém rozpouštědle jako je suchý tetrahydrofuran nebo výhodněji suchý methylenchlorid. Sloučenina vzorce XTV se zpracuje konvenčními prostředky jako je extrakce následovaná chromatografií.

Sloučenina vzorce XIV se převede na sloučeninu vzorce XV reakcí s například (trialkylsilyl)imidazolem jako je l-(trimethylsilyl)imidazol v aprotickém organickém rozpouštědle jako je suchý tetrahydrofuran nebo výhodněji suchý methylenchlorid. Sloučenina vzorce XV se zpracuje konvenčními prostředky jako je extrakce následovaná chromatografií.

Sloučenina vzorce XV se převede na sloučeninu vzorce XVla, XVIb nebo XVÍc reakcí s odpovídající sloučeninou vzorce VI. Reakce se provádí při -60 ’C až -90 °C, výhodně -78 °C v polárním aprotickém organickém rozpouštědle jako je suchý ether nebo výhodněji suchý tetrahydrofuran v přítomnosti silné báze jako je alkyllithium jako je butyllithium. Sloučeniny vzorce XVla, XVIb nebo XVlc se zpracují konvenčními prostředky jako je extrakce následovaná chromatografií.

Chránící skupiny sloučeniny vzorce XVIIa, XVIIb, XVIIc se odstraní reakcí se solí fluoru jako je tetrabutylamoniumfluorid v organickém rozpouštědle jako je suchý ether nebo výhodněji tetrahydrofuran, čímž se získá odpovídající sloučenina vzorce Ig, Ih nebo li.

Sloučeniny vzorce I jak jsou výše popsány mohou být podávány orálně pro léčení neoplastických chorob jako je leukemie u teplokrevných živočichů, kteří potřebují takovéto léčení. Konkrétněji, sloučeniny vzorce I jak jsou výše popsány, mohou být podávány orálně dospělým lidem v dávkách, které jsou v rozmezí 0,05 až 50 mikrogramů na den pro léčení neoplastických chorob jako je leukemie.

Užitečný účinek sloučenin vzorce I jako prostředků pro léčení neoplastických chorob může být demonstrován následujícími zkušebními postupy.

Diferenciace HL-60 buněk

Indukce diferenciace HL-60 buněk byla zkoušena měřením jejich oxidačního tržného potenciálu pomocí redukce nitrobluetetrazolia. (NBT)

HL-60 buňky byly udržovány vRPMI 1640 médiu doplněném 10 % fetálního telecího séra (FCS), 2 mM L-glutaminu, 1 mM pyruvátu sodného, 1 % neesenciálních aminokyselin, 50 j/ml penicilinu a 50 mikrog/ml streptomycinu. HL-60 buňky (30 tisíc buněk v 90 mikrolitrech doplněného RPMI média) byly naočkovány do plochých mikrolitrových prohlubní hned po naočkování 10 mikrolitrů testovaných sloučenin uvedených dále v tab. 1 zředěných v doplněném RPMI médiu bylo přidáno do důlků, čímž se získaly konečné koncentrace mezi 10”¹¹ až 10^-6 M (vycházeje ze zásobních roztoků 10‘²M v ethanolu, uskladněných při -20 °C a chráněných před světlem). Po 3 dnech bylo médium odstraněno z důlků vícekanálkovou pipetou a nahraženo

-10CZ 293489 B6 lOOmikrol. NBT roztoku (1 mg/ml) ve fosfátem pufrovaném solném roztoku s 200 nM forbomyristatacetatu).

Po další hodinové inkubaci při 37 °C byl NBT roztok odstraněn a přidáno 100 mikrolitrů 10% dodecylsulfátu sodného v 0,01 N HCI. Množství redukovaného NBT bylo kvantifikováno fotometricky při 540 nm za použití automatického plotnového čítače. Byl vypočten průměr ze 3 důlků. SEM byly mezi 5 až 10 %. Hodnoty byly vyjádřeny jako procento maximální diferenciace dosažené s 100-1000 nM kalcitriolem (sloučenina X při stejném experimentu. Koncentrace (nM) vedoucí k 50 % této maximální hodnoty je určena graficky a uvedena dále v tabulce jako ED50.

Sloučenina	ED50 (nM)	HTD mikrog/kg
X	6,0	0,5
A	2,5	4,0
B	6,2	2,5
C	3,8	2,0

Z výše uvedených výsledků je zřejmé, že sloučeniny vzorce I indikují diferenciaci HL-60 buněk a tím zastavují růst těchto nádorových buněk. Tím jsou sloučeniny vzorce I užitečné při léčení neoplastických chorob jako je leukemie.

Test kalciové tolerance

Vážné změny u kalciové homeostázy silně ovlivňují hmotnostní vývoj u myší.

Myši (25 až 30 g tělesné hmotnosti) obdržely denně subkutánní podání testované sloučeniny po dobu 4 po sobě jdoucích dní. Tělesná hmotnost byla registrována právě před a na konci 5denní léčebné periody. „Nejvyšší tolerovaná dávka“ (HTD) je dávka, která má za následek nulový hmotnostní přírůstek během této léčebné periody. Výsledky jsou shrnuty ve výše uvedené tabulce.

Z výše uvedených výsledků je zřejmé, že sloučeniny vzorce I jsou lépe tolerovány než 1,25dihydroxycholekalciferol.

Orální dávkovači formy obsahující sloučeniny vzorce I tohoto vynálezu mohou být začleněny v tobolkách, tabletách a podobně s farmaceuticky akceptovatelnými nosiči. Ilustrativní z farmaceuticky akceptovatelných nosných materiálů, které mohou být začleněny do tobolek a podobně jsou následující: pojivo jako je pryskyřičný tragant, klovatina, kukuřičný škrob nebo želatina, excipient jako je fosforečnan dvojvápenatý, desintegrační prostředek jako je kukuřičný škrob, bramborový škrob, algenová kyselina a podobně, lubrikant jako je stearan hořečnatý, sladidlo jako je sacharóza, laktóza nebo sacharin, ochucovací prostředek jako je silice z máty pepmé, olej z libavky položené nebo višně. Různé jiné materiály mohou být přítomné jako povlaky nebo jinak modifikovat fyzikální formu nebo dávkovači jednotku. Například tablety mohou být povlečeny šelakem, cukrem nebo oběma.

Sirup nebo tinktura mohou obsahovat aktivní sloučeninu, sacharózu jako sladidlo, methyl a propylparabeny jako konzervační prostředek a ochucení jako je višňové nebo pomerančové ochucení.

Příklady provedení vynálezu

Následující příklady provedení jsou opatřeny pro další popis vynálezu a nejsou určeny k jeho jakémukoli omezení.

-11 CZ 293489 B6

Příklad 1 [l(R*),3aR(3aa,4p,7aP)]-3a,4,5,6,7,7a-Hexahydro-l-(l-methyl-5-ethyl-5-hydroxy-3heptynyl)-7a-methyl-4-[(trimethylsilyl)oxy]-3//-inden

Do roztoku 1,02 g (3,51 mmol) [3a5-[l(/?),3ap,7p,7aa]-3a,4,5,6,7,7a-hexahydro-3-[l-methyl3-butinyl]-3a-methyl-7-[(trimethylsilyl)oxy]-177-indenu v 10 ml bezvodého tetrahydrofuranu při -78 °C bylo pomalu přidáno 2,5 ml (3,861 mmol), 1,6M n-butyllithia v hexanu. Po míchání při -78 °C po dobu 1 hodiny bylo přidáno 2,5 ml 3-pentanonu a míchání pokračovalo po dalších 15 minut. Reakční směs byla zředěna vodou a extrahována 4 x 50 ml hexanu. Sloučené extrakty byly promyty vodou a solankou, vysušeny nad síranem sodným a odpařeny do sucha. Surový produkt byl vyčištěn mžikovou chromatografií, čímž se získalo 273 mg regenerovaného výchozího materiálu a 1 g (75 %) nadepsané sloučeniny. ’Η-NMR (CDC1₃): δ 0,06 (s, 9H, 3CH₃), 1,02 (t, 6H, J = 7,5 Hz, 2CH₃), 1,02 (s, 3H, CH₃), 1,10 (d, 3H, J = 6 Hz, CH₃), 1,62 (m, 4H, 2CH₂), 2,08 - 2,57 (m, 4H, CH, CH₂, CH z CH₂), 4,08 (brs, 1H, CH), 5,32 (brs, 1H, CH).

Příklad 2 [ 1 (R*),3 aR*(3 aa,4 β, 7aP) J—3 a,4,5,6,7,7a-Hexahydro-1 -(1 -methy l-5-ethyl-5-hydroxy-3heptynyl)-7a-methyl-3^-inden-4-ol

Do míchaného roztoku 1,178 g (3,12 mmol) [1 (/?’),3a7?*(3aa,4p,7ap)]-3a,4,5,6,7,7a-hexahydro1—[ 1 -methyl-5-ethyl-5-hydroxy-3-heptynyl)-7a-methyl-4-[(trimethylsilyl)oxy'J-3/ř-indenu v 15 ml bezvodého tetrahydrofuranu bylo přidáno 6 ml (6mmol) 1M tetrabutylamoniumfluoridu. Reakční směs byla míchána při teplotě místnosti přes noc v argonové atmosféře. Pak byla zředěna 150 ml směsi voda-solanka 1:1 a extrahována důkladně ethylacetátem. Sloučené extrakty byly promyty 2 x 30 ml vody, vysušeny nad síranem sodným a odpařeny do sucha. Surový produkt byl vyčištěn mžikovou chromatografií, čímž se získalo 900 mg (94,5 %) nadepsané sloučeniny jako bílé krystalické tuhé látky.

[a]₂₅ ^D -20,5° (c 0,2, EtOH); ’Η-NMR (CDC1₃): δ 1,01 (t, 6H, J= 7,3 Hz, 2CH₃), 1,07 (s, 3H, CH₃), 1,10 (d, 3H, J = 6 Hz, CH₃), 1,40 (dt, 1H, J™ = 3,5 a 12,5 Hz, J_geni = 12,5 Hz, CH z CH₂), 1,63 (m, 4H, 2 CH₂), 1,98 (ddd, 1H, J_V1C = 3,5 a 5,5 Hz, J_gem = 15 Hz, CH z CH₂), 2,20 - 2,45 (m, 4H, CH₂, 2CH zCH₂), 4,19 (brs, 1H, CH), 5,39 (s, 1H, CH). Analýza vyp. pro C₂₀H₃₂O₂: C 78,90, H 10,59. Nalez.: C 78,92, H 10,30.

Příklad 3 [l(7?’),3a7?’(3aa,7ap)]-3,3a, 5,6,7,7a-Hexahydro-l-(l-methyl-5-ethyl-5-hydroxy-3heptynyl)-7a-methyl-4-4/ř-inden-4-on

Do míchaného roztoku 253 mg (0,83 mmol) [l(7?‘),3a/?‘)3aa,4p,7aP)]-3a,4,5,6,7,7a-hexahydrol-(l-methyl-5-ethyl-5-hydroxy-3-heptynyl)-7a-methyl-37/-inden-4-olu v 15 ml bezvodého methylenchloridu při teplotě místnosti v argonové atmosféře byl přidán 1 g (2,65 mmol) pyridiniumdichromatu. Reakční směs byla míchána po dobu 2 hodin, bylo přidáno 0,5 g 0,3 nm (3A) molekulárních sít a míchání pokračovalo po dobu 1 hodiny. Po přídavku 25 ml etheru a míchání po dobu 15 minut byla provedena filtrace skrz celitovou vložku. Vložka byla promyta 3 x 50 ml ethylacetátu. Sloučené filtráty byly promyty 2N hydrogenuhličitanem draselným, vodou a solankou, vysušeny nad síranem sodným a odpařeny do sucha. Surový produkt byl vyčištěn mžikovou chromatografií, čímž se získalo 157 mg (62 %) nadepsané sloučeniny.

-12CZ 293489 B6

Příklad 4 [1(7? ),3al? (3aa,7ap)]-3,3a,5,6,7,7a-Hexahydro-l-(l-methyl-5-ethyl-5-[(trimethylsilyl)oxy]3-heptynyl)-7a-methyl-4/f-inden-4-on

Do roztoku 223 mg (0,737 mmol) [1(1?*),3a7?*-(3aa,7aP)]-3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-l-(lmethyl-5-ethyl-5-hydroxy-3-heptynyl)-7a-methyl-4/Z-inden-4-onu v 10 ml bezvodého methylenchloridu bylo přidáno 0,67 ml (4,42 mmol) l-(trimethylsilyl)imidazolu. Reakční směs byla míchána při teplotě místnosti v argonové atmosféře přes noc. Reakční směs byla zchlazena vodou a extrahována hexanem. Hexanové extrakty byly promyty vodou a solankou, vysušeny nad síranem sodným a odpařeny do sucha. Surový produkt byl vyčištěn mžikovou chromatografií hexan-ethylacetátem 10:1, čímž se získalo 272 mg (98 %) nadepsané sloučeniny. ’Η-NMR (CDC1₃): δ 0,15 (s, 9H, 3CH₃), 0,83 (s, 3H, CH₃), 0,91 (t, 6H, J = 7,5 Hz, 2CH₃), 1,16 (m, 3H, CH₃), 1,57 (q, 4H, J = 7,5, 2CH₂), 2,85 (dd, 1H, = 7 Hz, J_gem = 10 Hz, CH z CH₂), 5,37 (brs,

1H, CH).

Příklad 5

1,25-Dihydroxy-l 6-en-23-in-26,27-bishomocholekalciferol

Do míchaného roztoku 694 mg (1,19 mmol) [3S-(lZ,3a,5|3-[2-[3,5-bis[[l,l-dimethylethyl)dimethylsilyl]oxy]-2-methylencyklohexyliden]ethyl]difenylfosfinoxidu v 10 ml bezvodého tetrahydrofuranu při -78 °C bylo přidáno 0,75 ml (1,2 mmol) 1,6 M n-butyllithia v hexanu. Reakční směs ihned zčervenala a barva vytrvala během přídavku 270 mg (0,72 mmol) [ 1 (7?’),3al?*-3aa,7ap)]-3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-l-( l-methyl-5-ethyl-5-[(trimethylsilyl)oxy]3-heptynyl)-7a-methyl-4a-inden-4-onu v 8 ml bezvodého tetrahydrofuranu. Reakční směs byla míchána při -78 °C po dobu 90 minut a pak zchlazena solankou a extrahována ethylacetátem. Sloučené extrakty byly promyty vodou a solankou, vysušeny nad síranem sodným a odpařeny do sucha. Surový meziprodukt byl vyčištěn mžikovou chromatografií směsí hexan-ethylacetátem 40:1, čímž se získalo 498 mg trisilylovaného meziproduktu.

Do roztoku trisilylovaného meziproduktu (498 mg) v 10 mg bezvodého tetrahydrofuranu bylo přidáno 5,04 ml (5,04 mmol) 1M tetrabutylamoniumfluoridu. Reakční směs byla míchána při teplotě místnosti pod argonem po dobu 48 hodin a pak zředěna vodou a extrahována ethylacetátem. Sloučené extrakty byly promyty vodou a solankou, vysušeny nad síranem sodným a odpařeny do sucha. Surový produkt byl vyčištěn mžikovou chromatografií hexan-ethylacetátem 1:3 a preparativní HPLC s hexan-ethylacetátem 1:4, čímž se získalo 267 mg (84,5 %) nadepsané sloučeniny.

[a]_D ²⁵ + 6° (c 0,2, EtOH); UV Ámax:263/3nm (ε 19 100); 1H-NMR (CDC1₃): δ 0,72 (s, 3H, CH₃), 1,01 (t, 6H, J = 6,8 Hz, 2 CH₃), 1,14 (d, 3H, J = 6,2 Hz, CH₃), 1,62 (m, 4H, 2CH₂), 1,92 (ddd, 1H, Jvic = 3,5 a 8,5 Hz, J_gem = 12,5 Hz, CH zCH₂), 2,61 (br dd, 1H, J™ = 3,5 Hz, J_gem = 12,5 Hz, CH z CH₂), 2,82 (dd, 1H, J™ = 4 Hz, J_gem = 12 Hz, CH z CH₂), 4,24 (brm, 1H, CH), 4,45 (brm, 1H, CH), 5,02, 5,34 (2s, 2H, CH₂), 5,38 (s, 1H, CH), 6,11, 6,38 (AB; 2H, J=ll,4Hz,CH CH).

Příklad 6 [ 1 (J?‘),3al?*(3aa,4p,7aP)]-3a,5,6,7,7a-Hexahydro-l-( l-methyl-5-ethyl-5-hydroxy-3Eheptynyl)-7a-methyl-317-inden-4-ol

-13CZ 293489 B6

Do míchané suspenze 190 mg (5 mmol) lithiumaluminiumhydridu v 15 ml bezvodého tetrahydrofuranu ochlazeného v ledové lázni bylo nejdříve pečlivě přidáno 270 mg (5 mmol) tuhého methoxidu sodného, načež následoval přídavek 252 mg (0,852 mmol) [l(7?*),3a7?*(3aa,4p,7aP)]-3a,5,6,7,7a-hexahydro-l-(l-methyl-5-ethyl-5-hydroxy-3-heptynyl)-7a5 methyl-3//-inden-4-olu a reakční směs byla zahřívána při refluxu po dobu 24 hodin. Po ochlazení v ledové lázni byla reakční směs zchlazena pečlivým přídavkem 1 ml vody, načež následoval přídavek 1 ml 2N NaOH. Po přídavku 20 ml etheru byla směs míchána po dobu 0,5 h, bylo přidáno 2,2 MgSO₄ a mícháno další 0,5 h.

Směs pak byla zfiltrována, promyta etherem a sloučené etherové filtráty byly odpařeny do sucha. Surový produkt byl vyčištěn mžikovou chromatografií a preparativní HPLC hexan-ethylacetátem 2:1, čímž se získalo 133 mg (53 %) nadepsané sloučeniny.

’Η-NMR (CDC1₃): δ 0,84 (t, 6H, J = 7,5 Hz, 2CH₃), 0,99 (d, 3H, J = 6 Hz, CH₃), 1,03 (s, 3H, 15 CH₃), 1,51 (q, 4H, J= 7,5 Hz, 2CH₂), 4,17 (brs, 1H, CH), 5,32 (brs, 1H, CH), 5,38 (d, 1H,

Jtrans = 16,5 Hz, CH), 5,52 (dt, 1H, Jvic = 6,5 Hz, = 16,5 Hz, CH).

Příklad 7 [1(7?*),3aR*(3aa,7aP)]-3,3a,5,6,7,7a-Hexahydro-l-(l-methyl-5-ethyl-5-hydroxy-3Eheptenyl)-7a-methyl-477-inden-4-on

Do míchaných 133 mg (0,434 mmol) [l(7?*,3a7?*,3aa,7aP)]-3a,4,5,6,7,7a-hexahydro-l-(l25 methyl-5-ethyl-5-hydroxy-3£-heptenyl)-7a-methyl-37ř-inden-4-olu ve 4 ml bezvodého methylenchloridu bylo přidáno 950 mg (2,527 mmol) pyridiniumdichromatu při teplotě místnosti v argonové atmosféře. Reakční směs byla míchána po dobu 5 hodin, pak bylo přidáno 25 ml etheru a mícháno po dobu 15 minut, zfiltrováno přes celitovou vložku a vložka byla promyta 3 x 40 ml ethylacetátu. Sloučené filtráty byly odpařeny do sucha. Surový produkt byl vyčištěn 30 mžikovou chromatografií hexan-ethylacetátem 5:2, čímž se získalo 111 mg (84 %) nadepsané sloučenin.

Příklad 8 [1(7?*), 3α7?’(33α,7αβ)]-3,3a, 5,6,7,7a-Hexahydro-l-(l-methyl-5-ethyl-5-[(trimethylsilyl)oxy37?-heptenyl)-7a-methyl-4/7-inden-4-on

Do roztoku 111 mg (0,365 mmol) [1(7?*),3aR*{3a(j.,la^)}-3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-l-(l-methyl40 5-ethyl-5-hydroxy-3£-heptenyl)-7a-methyl-4J/-inden-4-onu ve 4 ml bezvodého methylenchloridu bylo přidáno 0,375 ml (2,56 mmol) l-(trimethylsilyl)imidazolu. Reakční směs byla míchána v argonové atmosféře po dobu 23 hodin. Pak byla zchlazena přídavkem 10 ml vody, míchána po dobu 15 minut, bylo přidáno 20 ml solanky a provedena extrakce 3 x 90 ml ethylacetátu. Organické vrstvy byly promyty 5 x směsí voda-solanka 1:1, vysušeny nad síranem 45 sodným a odpařeny do sucha. Surový produkt byl vyčištěn mžikovou chromatografií hexanethylacetátem 10:1, čímž se získalo 131 mg (95 %) nadepsané sloučeniny.

Příklad 9

1,25-Dihydroxy-l 6,23£-dien-26,27-bishomocholekalciferol

Do míchaného roztoku 405 mg (0,695 mmol) [3S—(1Ζ,3α,5β)]—[2—[3,5—bis[[l,l—dimethylethyl(dimethylsilyl]oxy]-2-methylencyklohexyliden]ethyl]difenylfosfinoxidu v 5 ml bezvodého tetra

- 14CZ 293489 B6 hydrofuranu při -78 °C bylo přidáno 0,434 ml (0,694 mmol) 1,6M n-butyllithia v hexanu po kapkách v argonové atmosféře.

Po 5 minutách míchání do takto získaného červeného roztoku byl přidán po kapkách během lOminutového periody roztok 131 mg (0,348 mmol) [l(7?*),3a7?*(3aa,7ap)]-3,3a,5,6,7,7ahexahydro-l-(l-methyl-5-ethyl-5-[(trimethylsilyl)oxy]-3£-heptenyl)-7a-methyM//-inden4-onu ve 4 ml bezvodého tetrahydrofuranu. Reakční směs pak byla míchána při -78 °C po dobu 2 hodin. Byla zchlazena přídavkem 10 ml 2N roztoku Rochellovy soli a zahřáta na teplot místnosti, pak extrahována 3 x 90 ml ethylacetátu. Sloučené extrakty byly promyty třikrát solankou, vysušeny nad síranem sodným a odpařeny do sucha. Zbytek byl vyčištěn mžikovou chromatografií hexanethylacetátem 30:1, čímž se získalo 220 mg trisilylovaného meziproduktu.

Do roztoku trisilylovaného meziproduktu (220 mg) ve 3 ml bezvodého tetrahydrofuranu bylo přidáno 3,2 ml (3,2 mmol) 1M tetrabutylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu a tato reakční směs byla míchána při teplotě místnosti v argonové atmosféře po dobu 19 hodin. Pak bylo přidáno 5 ml vody, mícháno po dobu 15 minut, zředěno 20 ml solanky a extrahováno 3 x 90 ml ethylacetátu.

Sloučené extrakty byly promyt}· vodou se solankou 1:1, vysušeny nad síranem sodným a odpařeny do sucha. Surový produkt byl vyčištěn mžikovou chromatografií a preparativní HPLC hexanem s ethylacetátem 1:5, čímž se získalo 126 mg (82 %) krystalické nadepsané sloučeniny o teplotě tání 133 až 135 °C (ze směsi 4:6 tetrahydrofuran-methylformat).

[a]_D ²⁵ + 26° (c 0,2, EtOH); UV Xmax (EtOH); 263 nm (ε 18,200); ’Η-NMR (CDC1₃): δ 0,69 (s, 3H, CH₃), 0,85 (t, 6H, J = 7,5 Hz, 2CH₃), 1,02 (d, 3H, J = 6,7 Hz, CH₃), 1,52 (m, 4H, 2CH₂), 1,68 (m, 1H, CH z CH₂), 1,91 (ddd, 1H, = 3,5 a 8,5 Hz, J_gem = 12,5 Hz, CH z CH₂), 2,60 (dd, 1H,

Jvi_C = 3,5 Hz, J_gem = 12,5 Hz, CH z CH₂), 2,82 (m, 1H, CH z CH₂), 4,24 (m, 1H, CH), 4,45 (m, 1H, CH), 5,02, 5,34 (2s, 2H, CH₂), 5,32 (brs, 1H, CH), 5,38 (d, 1H, = 15,5 Hz, CH), 5,52 (dt, 1H, Jvfc = 7 Hz, Jtrans = 15,5 Hz, CH), 6,11, 6,38 (AB, 2H, J = 11,5 Hz, CH CH);

Analýza: vypočteno pro C^H^Ch: C 79,04, H 10,06.

Nalezeno: C 78,78, H 19,21

Příklad 10 [l(7?*),3a7?*-(3aa,4p,7ap)]-3a,4,5,6,7,7a-Hexahydro-l-(l-methyl-5-ethyl-5-hydroxy-3Zheptenyl)-7a-methyl-377-inden-4-ol

Směs 215 mg (0,71 mmol) [l(7?*),3a7?*-(3aa,4p,7ap)]-3a,4,5,6,7,7a-hexahydro-l-(l-methyl-5ethyl-5-hydroxy-3-heptenyl)-7a-methyl-3-inden-4-olu, 5 ml ethylacetátu, 12,5 ml hexanu, 0,35 ml absolutního ethanolu, 0,0175 ml chinolinu a 35 mg Lindlarova katalyzátoru byla hydrogenována při teplotě místnosti anormálním tlaku po dobu 1,5 hodin. Reakční směs byla zfiltrována přes celitovou vložku a vložka byla promyta ethylacetátem. Sloučené filtráty byly promyty IN HC1, vodou, 2N hydrogenuhličitanem draselným, vodou a solankou, vysušeny nad síranem sodným a odpařeny do sucha. Surový produkt byl vyčištěn preparativní HPLC (YMC kolona), čímž se získalo 200 mg (92,5 %) nadepsané sloučeniny.

’Η-NMR (CDCIj): δ 0,90 (t, 6H, J = 7,5 Hz, 2CH₃, 1,01 (d, 3H, J = 6,5 Hz, CH₃), 1,05 (s, 3H, CH₃), 1,57 (q, 4H, J= 7,5 Hz, 2CH₂), 4,17 (brs, 1H, CH), 5,22 (br dt, 1H, = 1,5 Hz,

Jcis = 12 Hz, CH), 5,38 (dt, 1H, J™ = 12 Hz, CH).

- 15CZ 293489 B6

Příklad 11 [l(7?*),3a7?’-(3aa,7aP)]-3,3a,5,6,7,7a-Hexahydro-l-(l-methyl-5-ethyl-5-hydroxy-3Z5 heptenyl)-7a-methyl-4//-inden-4-on

Do míchaného roztoku 200 mg (0,652 mmol) [l(7?’),3a7?’-(3aa,4p,7aP)]-3a,4,5,6,7,7ahexahydro-1 -(1 -methy 1-5-ethy l-5-hydroxy-3Z-hepteny l)-7a-methyl-3/7-inden-4-olu v ml bezvodého methylenchloridu bylo přidáno 0,1286 g (3,301 mmol) pyridiniumdichromatu 10 při teplotě místnosti v argonové atmosféře. Reakční směs byla míchána po dobu 6 hodin. Bylo přidáno 25 ml etheru a bylo mícháno po dobu 15 minut, zfiltrováno přes celitovou vložku a vložka byla promyta 3 x 25 ml ethylacetátu. Sloučené filtráty byly odpařeny do sucha. Surový produkt byl vyčištěn mžikovou chromatografií hexan-ethylacetátem 3:1, čímž se získalo 182 mg (91,5 %) nadepsané sloučeniny.

‘H-NMR (CDClj): 0,81 (s, 3H, CH₃), 0,88 (t, 6H, J = 7,5 Hz, 2CH₃), 1,06 (d, 3H, J = 6,5 Hz, CH₃), 1,56 (q, 4H, J = 7,5 Hz, 2CH₂), 2,84 (dd, 1H, J_v,_c = 6,5 Hz, J_gem = 10 Hz, CH z CH₂), 5,22 (d, 1H, J_cis = 12 Hz, CH), 5,33 (s, 1H, CH), 5,35 (dt, 1H, J™ = 6,5 Hz, J_cis = 12 Hz, CH).

Příklad 12 [1(7?’), 3a7?’-(3aa,7ap)]-3,3a, 5,6,7,7a-Hexahydro-l-(l-methyl-5-ethyl-5-[(trimethylsilyl)oxy3Z-heptenyl)-7a-methyl-477-inden-4-on

Do roztoku 182 mg (0,597 mmol) [l(7?’),3a7?‘-(3aa,7aP)]-3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-l-(lmethyl-5-ethyl-5-hydroxy-3Z-heptenyl)-7a-methyl-4a-inden-4-onu v 10 ml bezvodého methylenchloridu bylo přidáno 0,542 ml (3,58 mmol) l-(trimethylsilyl)imidazolu. Reakční směs byla míchána při teplotě místnosti přes noc. Reakční směs pak byla zředěna hexanem, promyta 30 vodou a solankou, vysušena nad síranem sodným a odpařena do sucha. Surový produkt byl vyčištěn mžikovou chromatografií hexan-ethylacetátem 10:1, čímž se získalo 218 mg (97 %) nadepsané sloučeniny.

’Η-NMR (CDC1₃): δ 0,12 (s, 9H, 3CH₃), 0,80 (s, 3H, CH₃), 0,86 (t, 6H, J = 7,5 Hz, 2CH₃), 1,05 35 (d, 3H, J = 6,5 Hz, CH₃), 1,55 (q, 4H, J = 7,5 Hz, 2CH₂), 2,84 (dd, 1H, J_V1C = 6,5 Hz, J_gem = 10 Hz,

CH zCH₂), 5,08 (br dt, 1H, J™ = 1,5 Hz, J_cjs = 11,5 Hz, CH), 5,25 (dt, 1H, J* = 6,5 Hz, J_cis = 11,5 Hz, CH), 5,31 (brs, 1H, CH).

Příklad 13

1,25-Dihydroxy-l 6,23Z-dien-26,27-bishomocholekalciferol

Do míchaného roztoku 578 mg (0,992 mmol) [35-(lZ,3a,5P)]-[2-[3,5-bis[[(l,l-dimethylethyl)45 dimethylsilyl]oxy]-2-methylencyklohexyliden]ethyl]difenylfosfinoxidu v 8 ml bezvodého tetrahydrofuranu při -78 °C bylo přidáno 0,62 ml (0,992 mmol) 1,6M n-butyllithia v hexanu po kapkách v argonové atmosféře. Reakční směs zčervenala a tato barva vytrvala během přídavku 218 mg (0,578 mmol) [l(7?’),3a7?‘(3aa,7aP)]-3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-l-(l-methyl-5-ethylSKtrimethylsilyOoxy-SZ-heptenyl^a-methyMTf-inden-A-onu v 8 ml bezvodého tetrahydro50 furanu. Reakční směs byla míchána při -78 °C po dobu 2 hodin, pak zchlazena vodou a extrahována důkladně ethylacetátem. Sloučené extrakty byly promyty vodou a solankou, vysušeny nad síranem sodným a odpařeny do sucha. Surový meziprodukt byl vyčištěn mžikovou chromatografií s hexan-ethylacetátem 20:1, čímž se získalo 328 mg trisilylovaného meziproduktu.

-16CZ 293489 B6

Do roztoku trisilylovaného meziproduktu (328 mg) v 10 ml bezvodého tetrahydrofuranu byly přidány 4 ml (4 mmol) 1M tetrabutylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu a reakční směs byla míchána při teplotě místnosti přes noc. Pak byla zředěna vodou a extrahována ethylacetátem. Sloučené extrakty byly promyty vodou a solankou, vysušeny nad síranem sodným a odpařeny do sucha. Surový produkt byl vyčištěn preparativní HPLC (YMC kolona), hexan-ethylacetátem 1:4, čímž se získalo 191 mg (75 %) nadepsané sloučeniny jako bílá pěna.

[a]_D ²⁵ +20,5° (c 0,2, EtOH); UVX (EtOH): 262-263 nm (ε = 14450);¹ H-NMR (CDC1₃); δ 0,7 (s, 3H, CHj), 0,9 (t, 6H, J = 7,3 Hz, 2 CH₃), 1,05 (d, 3H, J = 6,8 Hz, CH₃), 1,57 (m, 4H, 2CH₂), 1,91 (ddd, 1H, Jvic = 3,5 a 8,5 Hz, J_gem = 12,5 Hz, CH zCH₂). 2,48 (m, 2H, CH₂), 2,61 (br d, 1H, Jgem= 12,5 Hz, CH zCH₂), 2,82 (brm, 1H, CH zCH₂), 4,24 (br m, 1 H, CH), 4,45 (brm, 1H, CH), 5,02, 5,34 (2s, 2H, CH₂), 5,23 (d, 1H, J_cis = 12,3 Hz, CH), 5,35 (s, 1H, CH), 5,37 (dt, 1H, J™ = 7 Hz, J_cis = 12,3 Hz, CH), 6,11, 6,38 (AB, 2H, J = 11,3 Hz, CH CH).

Příklad a

Orální dávkovači forma měkká želatinová tobolka

	mg na tobolku
Sloučenina C	0,0005 - 0,050
butylovaný hydroxytoluen (BHT)	0,016
butylovaný hydroxyanisol (BHA)	0,016
Myglyol®-812 do	160

Příklad b

Orální dávkovači forma měkká želatinová tobolka

	mg na tobolku
Sloučenina C	0,0005 - 0,050
a-tokoferol	0,016
Myglyol® -812 do	160

1. Suspenduje se BHT a BHA (příklad a) nebo a -tokoferol (příklad b) vMyglyolu® -812. Zahřeje se na asi 50 °C a míchá se až do rozpuštění.

2. Rozpustí se sloučenina C v roztoku ze stupně 1.

3. Naplní se roztok ze stupně 2 do měkkého želatinového víčka.

Všechny stupně se provádějí pod atmosférou dusíku a chráněné před světlem.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. 25-Hydroxy-16-en-26,27-bishomocholekalciferolové deriváty vzorce I io kde A představuje strukturu

Et je ethyl, R je hydroxy a R¹ je vodík nebo =CH2 nebo R je vodík nebo fluor a R¹ je =CH2.
2. Derivát podle nároku 1, vzorce I, kde A je dvojná vazba mezi uhlíky sE konfigurací, zejména kde R je hydroxy, speciálně kde R¹ je =CH₂, výhodně l,25-dihydroxy-16,23£-dien26,27-bishomocholekalciferol.

20
3. Derivát podle nároku 1, vzorce I, kde A je dvojná vazba mezi uhlíky s Z konfigurací, zejména kde R je hydroxy, speciálně kde R¹ je =CH₂, výhodně l,25-dihydroxy-16,23Z-dien26,27-bishomocholekalciferol.
4. Derivát podle nároku 1, vzorce I, kde A je trojná vazba mezi uhlíky, zejména kde R je 25 hydroxy, speciálně kde R¹ je =CH₂, výhodně l,25-dihydroxy-16-en-23-in-26,27-bishomocholekalciferol.
5. Derivát podle nároku 1, kterým je la-fluor-25-hydroxy-16,23E-dien-26,27-bishomocholekalciferol.

-18CZ 293489 B
6
7. Farmaceutická směs, zejména pro léčení neoplastických chorob jako je leukemie, vyznačená tím, že obsahuje účinné množství alespoň jednoho derivátu vzorce I podle nároků 1,2, 3,4 nebo 5, a inertní nosič.
8. Deriváty podle nároků 1, 2, 3, 4 nebo 5 pro použití jako stimulačních prostředků HL-60 buněčné diferenciace, zejména pro léčení neoplastických chorob jako je leukemie.
9. Použití derivátů podle nároků 1, 2, 3, 4 nebo 5 pro výrobu léčiva pro léčení neoplastických chorob jako je leukemie.