CZ291538B6

CZ291538B6 - Antiarytmické a kardioprotektivní substituované indenoylguanidiny, způsob jejich přípravy a farmaceutické prostředky, které je obsahují

Info

Publication number: CZ291538B6
Application number: CZ19961096A
Authority: CZ
Inventors: Nirogi Venkata Satya Ramakrishna; Tulsidas Sitaran More; Anagha Suhas Kulkarni; Bansi Lal; Roa Venkata Satya Veerabhadra Vadlamudi; Anil Vasantrao Ghate; Ravindra Dattatraya Gupte; Wolfgang Dr. Scholz; Hans Jochen Dr. Lang
Original assignee: Hoechst Aktiengesellschaft
Priority date: 1995-04-18
Filing date: 1996-04-16
Publication date: 2003-03-12
Also published as: NZ286380A; ATE183498T1; SK48396A3; NO961521L; SK282011B6; AU5067696A; JPH08291131A; ES2135811T3; NO961521D0; IL117927A0; SI0738712T1; AU706055B2; CA2174406A1; TR199600316A1; DK0738712T3; ZA963046B; MX9601424A; PL182566B1; DE69603771T2; CN1140164A

Abstract

Indenoylguanidiny obecn ho vzorce I, ve kter m je R.sup.1.n. vod k, alkylov skupina s 1 a 6 uhl kov²mi atomy, O-alkylov skupina s 1 a 4 uhl kov atomy; R.sup.2.n. vod k, alkylov skupina s 1 a 6 uhl kov²mi atomy; R.sup.3.n. vod k, alkylov skupina s 1 a 6 uhl kov²mi atomy, chlor; R.sup.4.n. vod k, alkylov skupina s 1 a 6 uhl kov²mi atomy, halogen, skupina C.sub.5.n.H.sub.10.n.NSO.sub.2.n.; R.sup.5.n. vod k, alkylov skupina s 1 a 6 uhl kov²mi atomy, halogen; R.sup.6.n. vod k, alkylov skupina s 1 a 6 uhl kov²mi atomy, halogen; X je kysl k; R.sup.7.n., R.sup.8.n., R.sup.9.n. a R.sup.10.n. jsou jednotliv nebo spole n vod k, alkylov skupina s 1 a 6 uhl kov²mi atomy, cykloalkylov skupina se 3 a 6 uhl kov²mi atomy, fenylov skupina nebo R.sup.8.n. a R.sup.9.n. spole n mohou b²t st 5-, 6- nebo 7 lenn ho heterocyklick ho kruhu obsahuj c ho 1 a 3 heteroatomy zvolen ze skupiny zahrnuj c dus k, kysl k a s ru; A je bu nep° tomno nebo znamen organickou nebo miner ln kyselinu; pop° pad ve form optick²ch izomer , racem t nebo jejich sm si, zp sob jejich p° pravy, spo vaj c v tom, e se nech reagovat slou enina obecn ho vzorce VI s guanidinem obecn ho vzorce VII, ve kter²ch R.sup.1.n., R.sup.2.n., R.sup.3.n., R.sup.4.n., R.sup.5.n., R.sup.6.n., R.sup.7.n., R.sup.8.n., R.sup.9.n. a R.sup.10.n. maj v²znam uveden² v²Üe a Y je odÜt piteln skupina vybran ze skupiny zahrnuj c skupinu -O-alkyl s 1 a 4 atomy uhl ku, halogen nebo imidazolyl, a pop° pad se produkt p°evede na farmaceuticky p°ijatelnou s l, a farmaceutick prost°edky, kter je obsahuj . Slou eniny obecn ho vzorce I jsou pou iteln pro l en srde n ch arytmi , d le jako kardiopr

Description

Antiarytmické a kardioprotektivní substituované indenoylguanidiny, způsob jejich přípravy a farmaceutické prostředky, které je obsahují

Oblast techniky

Vynález se týká indenoylguanidinů, způsobu jejich přípravy, jejich použití jako léčiv, jejich použití jako diagnostických činidel a léčiv, která tyto sloučeniny obsahují.

Dosavadní stav techniky

Sloučeninami podle vynálezu jsou substituované acylguanidiny. Nejreprezentativnější z těchto acylguanidinů je pyrazinový derivát, který se používá při terapii jako diuretikum chránící draslík.

V literatuře je popsáno množství ostatních sloučenin typu amiloridu, jako je například dimethylamilorid nebo ethylisopropylamilorid.

Jsou popsány studie ukazující antiarytmické vlastnosti amiloridu [Circulation 79, 1 257-1 273 (1989)]. Avšak širokému použití jako antiarytmického činidla je na překážku to, že jeho účinek je pouze mírný a je provázen antihypertenzním a saluretickým účinkem a tyto vedlejší účinky jsou nežádoucí při léčení poruch srdečního rytmu.

Indikace antiarytmických vlastností amiloridu lze také získat při pokusech na izolovaném zvířecím srdci [Eur. Heart J. 9 {supplement 1}: 167 (1988) (book of anstracts)]. Tak například bylo zjištěno na krysím srdci, že je možno amiloridem zcela potlačit uměle vyvolanou ventrikulámí fibrilaci. Výše zmíněný derivát amiloridu ethylisopropylamilorid byl na tomto modelu účinnější než amilorid. Benzoylguanidiny mající antiarytmické vlastnosti jsou popsány ve zveřejněné evropské přihlášce č. 416 499.

US patent 3 780 027 popisuje acylguanidiny, které jsou podstatně odlišné od sloučenin obecného vzorce I podle vynálezu, a to v tom, že jsou to trisubstituované benzoylguanidiny, které jsou odvozeny ve své substituční struktuře od komerčně dostupných diuretik, jako je bumetanid a furosemid, a mají aminoskupinu v poloze 2 nebo 3 vzhledem ke karbonylguanidinové skupině, přičemž tato aminoskupina je důležitá pro sledování salidiuretického účinku. U těchto sloučenin je popsán silný salidiuretický účinek.

Circulation 79, 1 257-1 263 popisuje antiarytmické vlastnosti amiloridu - molekuly obsahující acylguanidinovou část. US patenty 3 780 027, 3 734 904 a 4 544 670 popisují také acylguanidiny. Týkají se acylguanidinů, které mají heterocyklický zbytek (Circulation) nebo fenylový zbytek (US patenty) připojené k acylguanidinové části.

EP 639 573 popisuje indoly, avšak nic nenaznačuje cestu k novým indenoylovým sloučeninám, které neobsahují atom dusíku v aromatickém systému a jsou speciálně substituované.

V předloženém vynálezu je heterocyklický nebo aromatický zbytek oddělen od acylguanidinové části ethylenickou vazbou v geometrii trans ve formě pětičlenného karbocyklického kruhu. Bylo zjištěno, že tyto sloučeniny mají velmi dobré antiarytmické vlastnosti.

- 1 CZ 291538 B6

Podstata vynálezu

Podstatou vy nálezu jsou indenoylguanidiny obecného vzorce I

ve kterém

R¹ znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů, O-alkylovou skupin obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy;

R² znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů;

R³ znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů, atom chloru;

R⁴ znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující l až 6 uhlíkových atomů, atom halogenu, skupinu vzorce C₅Hi₀HSO₂;

R⁵ znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů, atom halogenu;

R⁶ znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů, atom halogenu;

X znamená atom kyslíku;

R⁷, R⁸, R⁹ a R¹⁰ znamenají jednotlivě nebo společně atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů, cykloalkylovou skupinu obsahující 3 až 6 uhlíkových atomů, fenylovou skupinu nebo

R⁸ a R⁹ spolu dohromady mohou být 5-, 6- nebo 7členného heterocyklického kruhu obsahujícího 1 až 3 heteroatomy zvolené ze skupiny zahrnující atomy dusíku, atomy kyslíku a atomy síry;

A je buď nepřítomno, nebo znamená organickou nebo minerální kyselinu.

Jako příklady kyselin lze uvést kyselinu chlorovodíkovou, kyselinu bromovodíkovou, kyselinu sírovou, kyselinu dusičnou, kyselinu fosforečnou, kyselinu methansulfonovou, kyselinu benzensulfonovou, kyselinu toluensulfonovou, kyselinu octovou, kyselinu mléčnou, kyselinu salicylovou, kyselinu benzoovou, kyselinu nikotinovou, kyselinu ftalovou, kyselinu stearovou, kyselinu olejovou a kyselinu oxalovou.

V popisu mají následující termíny, pokud není uvedeno jinak, následující významy:

-2CZ 291538 B6 „Alkyl“ znamená nasycený alifatický uhlovodík, který může mít přímý nebo rozvětvený řetězec.

Výhodný alkylové skupiny nemají více než 12 atomů a mohou to být methyl, ethyl a strukturní izomery propylu, butylu, pentylu, hexylu, heptylu, oktylu, nonylu, decylu, undecylu a dodecylu.

„Nižší alkyl“ znamená alkylovou skupinu uvedenou výše, která má 1 až 6 atomů uhlíku. Jako příklady nižších alkylových skupin lze uvést methyl, ethyl, n—propyl, isopropyl, butyl, sek.butyl, terc.butyl, n-pentyl, isopentyl a neopentyl.

„Cykloalkyl“ znamená alifatickou monocyklickou nasycenou karbocyklickou skupinu. Výhodné skupiny mají asi 3 až 6 atomů atomů uhlíku a jako příklady lze uvést cyklopropyl, cyklopentyl a cyklohexyl.

„Heterocyklický kruh“ nebo „heterocyklus“ znamená 3, 5-, 6- nebo 7členný kruh mající 1 až 3 heteroatomy, kterými mohou být dusík, kyslík nebo síra, jako příklady lze uvést kruh pyrrolový, pyrrolidinový, pyridonový, heptamethyleniminový, pyrazolový, pyridinový, pyrimidinový, pyrazolový, imidazolový, isoxazolový, furanový, thiofenový, oxazolový, thiazolový, piperidinový, morfolinový, oxazolidinový, thiazolidinový, pyrazolidinový, imidazolidinový, piperazinový, thiamorfolinový, azepinový a ethyleniminový.

Výraz „halogen“ zahrnuje všechny čtyři halogeny, jmenovitě fluor, chlor, brom a jod. Halogenalkyly, helogenfenyl a helogenem substituované pyridylové skupiny mají více než jeden halogenový substituent, který může být stejný nebo rozdílný, jako je trifluomethyl, l-chlor-2bromethyl, chlorfenyl a 4-chlorpyridyl.

„Alkoxyskupina“ znamená alkyloxyskupiny a včetně hydroxyalkylových skupin. Výhodnými nižšími alkoxyskupinami jsou methoxyskupina, ethoxyskupina, n-propoxyskupina a isopropoxyskupina, isobutoxyskupina, n-butoxyskupina a terc.butoxyskupina.

Netoxickými organickými nebo minerálními kyselinami A tvořícími adiční sole jsou například kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina sírová, kyselina dusičná, kyselina fosforečná, kyselina methansulfonová, kyselina benzensulfonová, kyselina octová, kyselina nikotinová, kyselina salicylová, kyselina benzoová, kyselina nikotinová, kyselina fialová, kyselina stearová, kyselina olejová a kyselina oxalová.

Předkládaný vynález se týká také sloučenin obecného vzorce II

(II) , ve kterém mají symboly A, X, R¹, R², R³, R⁴, R⁵ a R⁶ významy uvedené výše.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou obsahovat asymetrická centra, vynález se týká jak sloučenin S-konfigurace, tak sloučenin R-konfigurace. Sloučeniny mohou existovat jako optické izomery, jako racemáty nebo jejich směsi.

Reprezentativní příklady sloučenin podle vynálezu jsou shrnuty v tabulkách 1 a 2 a odpovídají obecnému vzorci II

-3CZ 291538 B6 (II).

Sloučeniny obecného vzorce II, kdejsou:

R¹ a R³ H,

XjeO a dále:

Tabulka 1

Slouč. č.	ír	R⁵	R⁶	A	t.t. °C
1	H	H	H	HCI	250 až 251
2	H	H	H	CH3SO3FI	226 až 227
3	F	H	H	HCI	230 až 231
4	F	H	H	CH3SO3H	243 až 244
5	Cl	H	H	CH3SO3H	210až212
6	Br	H	H	CH3SO3H	230 až 231
7	I	H	H	CH3SO3H	215až216
8	C₅H₁₀NSO₂	H	H	CH3SO3H	220 až 221
9	H	Cl	H	CH3SO3H	198 až 199
10	H	H	Cl	CH3SO3H	180 až 181
11	H	H	Br	CH3SO3H	225 až 226
12	H	H	I	CH3SO3H	235 až 236

Sloučeniny obecného vzorce II, kdejsou

R', R² a R³ H

XjeO a dále:

Tabulka 2

slouč. č.	R⁴	R⁵	R^b	A	t.t. °C
13	H	H	H	CH3SO3H	164 až 165
14	H	H	h₃	CH3SO3H	198 až 200

-4CZ 291538 B6

Sloučeniny obecného vzorce II, kdeXjeOa AjeCH₃SO₃H a dále:

Tabulka 3

slouč. č.	R¹	R²	R’	r⁴~	R’	R⁶	t.t. °C
15	H	ch₃	H	H	Br	H	125 až 126
16	H	ch₃	H	H	F	H	235 až 236
17	H	ch₃	H	H	H	ch₃	215 až 216
18	H	ch₃	H	ch₃	H	H	225 až 226
19	H	ch₃	H	H	ch₃	H	215 až216
20	H	ch₃	H	ch₃	H	ch₃	210 až 211
21	H	ch₃	H	H	I	H	175 až 176
22	H	H	H	ch₃	H	H	220 až 221
23	H	H	ch₃	H	H	H	225 až 226
24	H	H	ch₃	H	H	ch₃	230 až 231
25	H	H	H	ch₃	H	ch₃	215 až 216
26	H	H	H	H	ch₃	H	215až216
27	H	ch₃	Cl	Cl	H	H	148 až 149
28	H	ch₃	ch₃	H	H	ch₃	195 až 196
29	ch₃	ch₃	H	H	H	II	195 až 196
30	och₃	ch₃	H	H	H	H	188 až 190

Tyto sloučeniny mají značnou výhodu oproti běžně dostupným antiarytmickým farmaceutickým prostředkům a jsou použitelné jako kardioprotektivní sloučeniny pro léčení infarktu a také pro léčení angíny pectoris.

Je překvapující, že sloučeniny podle vynálezu nemají žádné nežádoucí nebo nepříznivé salidiuretické vlastnosti, ale mají velmi dobré antiarytmické vlastnosti, takže je lze použít pro léčení poruch zdraví, jako jsou symptomy deficience kyslíku. Následkem svých farmakologických vlastností se sloučeniny podle vynálezu výborně hodí jako antiarytmická léčiva mající kardioprotektivní složku pro profylaxi infarktu a léčení infarktu a pro léčení angíny pectoris, kde také preventivně inkubují nebo značně redukují patofyziologické procesy při vzniku ischemicky indukovaného poškození, zejména začátek ischemicky indukovaných srdečních arytmií. Vzhledem ke svým protektivním účinkům vůči patologickými hypoxickému a ischemickému stavu sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu, jakožto výsledek inhibice mechanismu celulámí Na7FT výměny, lze použít jako léčiva pro léčení všech akutních nebo chronických poškození způsobených ischemií nebo nemocí vznikajících takto primárně nebo sekundárně. To se týká jejich použití jako léčiv při chirurgických zákrocích, například při transplantacích orgánů, kdy lze tyto sloučeniny použít jak pro ochranu orgánů u dárce před a během jejich odstraňování, pro ochranu odstraněných orgánů, například během zacházení s nimi nebo při jejich skladování v lázni s fyziologickou tekutinou a také během přenosu do organismu příjemce. Sloučeniny jsou také cennými léčivy, která mají protektivní účinek při provádění angioplastických chirurgických zákroků, například na srdci a také na periferních cévách. V souhlasu s jejich protektivním účinkem vůči ischemicky indukovanému poškození jsou tyto sloučeniny také vhodné jako léčiva pro léčení ischemií nervového systému, zvláště centrální nervové soustavy, kde se hodí například

-5f pro lečem apoplexie nebo mozkového edemu. Sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu jsou kromě toho vhodné pro léčení forem šoku, jako je například alergický, kardiogenní, hypovolemický a bakteriální šok.

Sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu se dále vyznačují silným inhibičním účinkem na proliferaci buněk, například na proliferaci fibroplastových buněk a na proliferaci buněk hladkých vaskulámích svalů. Sloučeniny obecného vzorce 1 lze proto použít jako cenná léčiva pro léčení chorob, u nichž je proliferace buněk primární nebo sekundární příčinou a lze je proto použít jako antiatherosklerotická činidla a jako činidla oddalující diabetické komplikace, rakovinu, fibrotické choroby, jako je fibróza plic, hepatická fibróza nebo renální fibróza, a hypertrofii a hyperplasii orgánů, zejména hyperplasii prostaty a hypertrofii prostaty.

Sloučeniny podle vynálezu jsou účinnými inhibitory buněčného antiportu sodík/proton (Na⁺/H* výměna), který je u mnoha chorob (idiopatická hypertenze, ateroskleróza, diabetes apod.) Také vyšší v těchto buňkách, které jsou přístupné pro měření, jako například v erythrocytech, destičkách nebo v leukocytech. Sloučeniny podle vynálezu jsou proto vhodné jako vynikající a jednoduché prostředky, například při jejich použití jako diagnostik pro stanovení a rozlišení určitých forem hypertenze, ale také ateroskleózy, diabetů, proliferačních chorob apod. Sloučeniny obecného vzorce I jsou dále vhodné pro preventivní léčbu, pro prevenci původu vysokého krevního tlaku, například idiopatické hypertenze.

Vynález se také týká způsobu přípravy sloučenin obecného vzorce I. Příprava sloučenin podle vynálezu je ilustrována, avšak ne omezena, přípravou typickou sloučenin podle vynálezu.

Syntéza sloučenin obecného vzorce I, kde R² je jiné než atom vodíku, se provádí přes meziprodukt obecného vzorce III

(Hily který lze připravit známými způsoby. Jedním z těchto způsobů je vytvoření aniontu na aktivované methylenové skupině pomocí NaH/THF a následnou alkylaci za použití substituovaných benzylbromidů. Sloučeniny obecného vzorce III se převedou na 3-substituované inden-2-karboxylové kyseliny obecného vzorce IV působením koncentrované kyseliny sírové při teplotě místnosti po dobu 10 až 12 hodin a následným zpracováním vodou.

Syntéza sloučenin obecného vzorce I, kde R² je atom vodíku, se provádí přes meziprodukt obecného vzorce V

(V) y který lze připravit známými způsoby. Jedním z těchto způsobů je vytvoření aniontu na aktivované methylenové skupině vedle karbonylové skupiny za použití butyllithia a následnou acylací za použití ethylchlorformiátu. Alternativně lze tentýž produkt připravit za použití způsobu enaminové acylace karbonylových sloučenin. Sloučeniny obecného vzorce V se převedou na inden-2-karboxylové sloučeniny obecného vzorce IV

(IV) redukcí karbonylové skupiny borohydridem sodným a následnou dehydratací katalyzovanou kyselinou (p-toluensulfonovou kyselinou) v bezvodém benzenu.

Významy substituentů R¹, R², R³, R⁴, R⁵ a R⁶ v obecných vzorcích III, IV a v obecném vzorci VI

(VI) jsou stejné, jak bylo výše definováno pro obecný vzorec I. V obecném vzorci V mají R¹, R³, R⁴, R⁵ a R⁶ stejné významy jako byly uvedeny u obecného vzorce I.

Vynález se také týká způsobu přípravy sloučenin obecného vzorce I, který spočívá v tom, že se nechají reagovat sloučeniny obecného vzorce VI svolným guanidinem nebo se sloučeninou obecného vzorce VII

NHR?

110 (VII) ve kterém R⁷, R⁸, R⁹ a R¹⁰ mají významy uvedené výše u obecného vzorce I a Y je odštěpitelná skupina, která může být snadno nahrazena nukleofilem.

Aktivované deriváty kyselin obecného vzorce VI, kde Y je alkoxyskupina, s výhodou methoxyskupina, aktivovaná fenoxyskupina, fenylthioskupina, methylthioskupina, 2-pyridylthioskupina nebo dusíkatý heterocyklus, jako je imidazolyl, lze připravit z chloridu kyseliny (obecný vzorec VI, kde Y je Cl), který lze připravit z kyseliny obecného vzorce IV působením thionylchloridu. Lze použít další způsoby aktivování esterů, které jsou známy z chemie peptidů pro aktivování kyseliny pro kopulační reakci. Imidazoly obecného vzorce VI, kde Y je imodazolid, lze také připravit ze sloučeniny obecného vzorce IV působením 1,1-karbonyldiimidazolu [C. Staab, Angew. Chem. Int. Eng. End. 351 / 367 (1962)]. Ze sloučeniny obecného vzorce VI (Y=CI) lze reakcí se sloučeninou obecného vzorce VII za podmínek Schotten-Baumanovy reakce také

-7CZ 291538 B6 připravit sloučeninu obecného vzorce I. Ostatní smíšené anhydridy odpovídající obecnému vzorci VI lze připravit například reakcí s CICOOEt, tosylchloridem a triethylfosforylchloridem v přítomnosti triethylaminu nebo jiné báze v inertním rozpouštědle. Aktivaci COOH skupiny ve sloučeninách obecného vzorce IV lze také provádět pomocí DCC. Ostatní způsoby přípravy aktivovaných derivátů karboxylových kyselin typu obecného vzorce VI jsou uvedeny s odkazem na zdroj literatury vJ. March, Advanced Organic Chemistry. 3. vydání (John Wiley & Son,

1985), str. 350. Kopulační reakci sloučenin obecného vzorce VI a VII lze provádět různými způsoby v protických nebo aprotických polárních rozpouštědlech, avšak inertní organická rozpouštědla jsou výhodná. V této souvislosti se zjistilo, že pro reakci sloučeniny obecného vzorce VI (Y=OMe) s guanidinem jsou vhodnými rozpouštědly methanol, THF, DMF, Nmethylpyrrolidon, HMPA apod., přičemž reakce se provádí při teplotě mezi teplotou místnosti a teplotou varu těchto rozpouštědel. Reakce sloučenin obecného vzorce VI se solí volného guanidinu se s výhodou provádí v aprotických inertních rozpouštědlech, jako je THF, dimethoxyethan, DMF nebo dioxan. V případě, že se pro aktivaci karboxyskupiny sloučenina obecného vzorce IV nechá reagovat přímo s karbonyldiimidazolem, použijí se aprotická polární rozpouštědla, jako je DMF, dimethoxyethan, načež se přidá sloučenina obecného vzorce VII. Sloučeniny obecného vzorce I lze převést na farmakologický přijatelné soli s kyselinami, přičemž tyto sole byly již popsány výše.

Účinné sloučeniny podle předloženého vynálezu lze podávat orálně, parenterálně, intravenózné, rektálně nebo inhalací, přičemž výhodné podání závisí na specifickém klinickém požadavku pro dané onemocnění. Sloučeniny obecného vzorce I lze také použít samostatně nebo spolu s farmaceutickými pomocnými látkami, přičemž sloučeniny lze použít jak ve vertikální tak v humánní medicíně. Které pomocné látky jsou vhodné pro požadované farmaceutické přípravky je pracovníkům v oboru známé, kromě rozpouštědel lze také použít gelotvomá činidla, Čípkové základy, pomocné látky pro tablety a statní nosiče účinných látek, antioxidanty, dispergační činidla, emulgátory, protipěnicí činidla, ochucovací příchutě, ochranné prostředky, látky usnadňující rozpouštění nebo barviva.

Pro orální použití se účinné sloučeniny známými způsoby smísí s pomocnými látkami vhodnými pro tyto účely, jako jsou vehikula, stabilizátory nebo inertní ředidla a upraví se do forem vhodných pro podávání, jako jsou tablety, povlečené tablety, tvrdé želatinové kapsle, vodné, alkoholické nebo olejové roztoky. Jako inertní nosiče lze například použít arabskou gumu, oxid hořečnatý, uhličitan hořečnatý, fosforečnan draselný, laktosu, glukosu nebo škrob, zejména kukuřičný škrob. V tomto případě lze připravovat jak suché, tak vlhké granule. Vhodnými olejovými nosiči nebo rozpouštědly jsou například rostlinné nebo živočišné oleje, jako je slunečnicový olej nebo rybí tuk.

Pro podkožní nebo intravenózní podávání se účinné látky s látkami běžnými pro tyto účely, jako činidly usnadňujícími rozpouštění, emulgátory a ostatními pomocnými látkami, uvedenou do roztoku, suspenze nebo emulze. Jako možná rozpouštědla lze například uvést vodu, fyziologický solný roztok nebo alkoholy, například ethanol, propanol, glyceroi a navíc také roztoky cukrů, jako jsou roztoky glukosy nebo manitolu, nebo alternativně směs různých rozpouštědel.

Farmaceutické přípravky vhodné pro podávání ve formě aerosolů nebo sprajů jsou například roztoky, suspenze nebo emulze účinných sloučenin obecného vzorce I ve farmaceuticky přijatelném rozpouštědle, jako je zejména ethanol nebo voda, nebo směs takových rozpouštědel. Je-li zapotřebí, přípravky mohou také obsahovat další farmaceutické pomocné látky, jako jsou povrchově aktivní látky, emulgátory a stabilizátory a také hnací plyn. Takový přípravek obvykle obsahuje účinnou látku v koncentraci asi 0,1 až 10, zejména asi 0,3 až 3 % hmotnostní.

Dávka účinné sloučeniny obecného vzorce I, která má být podána, a četnost jejího podávání závisí na účinnosti a době působení použité sloučeniny a navíc také na povaze a prudkosti choroby, která má být léčena, pohlaví, věku, hmotnosti a individuální citlivosti léčeného savce.

-8CZ 291538 B6

V průměru je denní dávka sloučeniny obecného vzorce I u pacienta s hmotností asi 75 kg alespoň 0,001 mg. s výhodou 0,01 mg až maximálně 10 mg, s výhodou maximálně 1,0 mg na 1 kg hmotnosti. Při akutním vzplanutí choroby, například bezprostředně po utrpěném srdečním infarktu, může být zapotřebí podávat vyšší dávky a též mnohem častější dávky, například až do 4 jednotlivých dávek denně. Zejména při intravenózním použití, například u pacienta na jednotce intenzivní péče, může být nutno použít až do 100 mg denně.

Příklady provedení vynálezu

Je popsána příprava reprezentativních sloučenin, a to 3-methylinden-2-olyguanidin-monohydrochloridu (sloučenina č. 1 ve vzorci I z tabulky 1) a soli inden-2-olyguanidinu a methansulfonové kyseliny (sloučenina č. 13 ve vzorci I z tabulky 1), další sloučeniny lze také připravit za použití těchto nebo jiných postupů.

Příklad 1

A. Syntéza sloučeniny č. 1 z tabulky 1

a. Syntéza sloučenin obecného vzorce III

NaH (13,8 g, 0,6 mol) se promyje dvakrát hexenem (2 x 50ml) a suspenduje se v 250 ml čerstvě destilovaného THF. Dále se opatrně po kapkách přidá ethylacetoacetát (75 ml, nadbytek), přičemž se baňka chladí na -10 °C. Po skončení přidávání se reakční směs míchá při -10 °C po dobu 2 hodin a potom při teplotě místnosti po dobu 30 minut. Potom se k roztoku při teplotě místnosti přidá po kapkách benzylbromid (51,0 g, 0,3 mol) v THF. Reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Reakce se ukončí další den nalitím do ledové vody, pH se nastaví na neutrální a extrahuje se etherem a ethylacetátem. Spojené etherové a ethylacetátové extrakty se propláchnou roztokem chloridu sodného a vysuší se síranem sodným. Odstranění rozpouštědla se provede opatrně vakuovou destilací a získá se ethylbenzylacetoacetát, teploty varu 276 °C.

IČ: (in substantia), cm’¹: 2 900-3 050, 1 670-1 760 (široký), 1 655.

NMR(CDCI₃): δ: 1,25 (t, 3H), CH₂CH₃), 2,25 (s, 3H, COCH₃), 3,20 (d, 2H, benzylický CH₂), 3,8 (t, IH, COCHCO), 4,20 (q, 2H, OCH₂CH₃), 7,15-7,35 (m, 5H, Ar-H).

b. Syntéza sloučenin obecného vzorce IV

Ke směsi kyseliny sírové (98 %, 360 g) a vody (15 g) ochlazené na -2 °C se během 45 minut za intenzivního míchání přidá ethylbenzylacetoacetát (37 g). Roztok, který je nyní tmavě červenohnědý, se míchá při 4 °C po dobu 2 hodin a potom přes noc při teplotě 15 až 20 °C, načež se naleje do ledové vody (2,0 1). Směs se zahřeje na 50 až 60 °C, aby se vysrážel kal, a potom se přefiltruje a zpracuje. 3-methylinden-2-karboxylová kyselina se čistí chromatografícky na koloně a po rekrystalizaci má teplotu tání 200 °C.

IČ: (KBr), cm’¹: 2900-3100 (široký), 1640-1680, 1600.

NMR: (CDC1₃): δ: 2,45 (s, 3H, CH₃), 3,55 (s, 2H), CH₂), 7,20-7,40 (m, 4H, Ar-H).

Analýza: C % H % vypočteno pro ChH|o0₂: 76,99 5,79 nalezeno: 76,43 5,86

-9CZ 291538 B6

c. Syntéza sloučenin obecného vzorce I

1,0 g 3-methylinden-2-karboxylové kyseliny a 5 ml thionylchloridu se spolu zahřívají pod zpětným chladičem po dobu 4 hodin. Opatrným odstraněním rozpouštědla destilací za sníženého tlaku se získá 3-methylinden-2-oylchlorid. Tento chlorid kyseliny se rozpustí v THF a potom se přidá po kapkách ke směsi guanidinu a hydroxidu sodného při teplotě místnosti během 10 minut, načež se míchá 1 hodinu. Po skončení reakce se zpracovaný produkt čistí chromatograficky na koloně.

3-methylinden-2-oylguanidin-monohydrochlorid se získá rozpouštěním volné báze v methanolu, potom přidáváním etherické HC1 až do pH 2,0 a mícháním. Sůl se vysráží ochlazením v lázni s ledem. Získá se bílý krystalický’ prášek, teploty tání 250 až 251 °C.

IČ: (KBr): cm’¹: 3100-3350 (široký), 1690, 1655.

NMR: (CDC1₃): δ: 2,45 (s, 3H), CH₃), 4,0 (s, 2H, CH₂), 7,4-7,7 (m, 4H, Ar-H), 8,4 (široký s, 2H, vyměnitelný s D₂O)

Analýza: C % H % vypočteno pro Ci₂H₁₆O₂N₃Cl: 53,42 5,90 nalezeno: 53,12 5,42

N % Cl %

15,57 13,16

15,94 13,68

Příklad 2

B. Syntéza sloučeniny č. 13 z tabulky 2

d. Syntéza sloučenin obecného vzorce V

V tříhrdlé baňce opatřené přívodem dusíku, šeptem a pojistnou trubicí se rozpustí 1-indanon (1,5 g, 11,36 mmol) v bezvodém THF. Baňka se chladí na -20 °C po dobu 10 minut. Potom se přes septum pomocí injekční stříkačky přikape butyllithium (11,37 ml, 12,48 mmol). Reakční směs se nechá stát při -20 °C po dobu 45 minut a potom se pomocí injekční stříkačky přikape ethylchlorformiát (1,08 ml, 10 mmol). Reakční směs se míchá při -20 °C po dobu 30 minut a během asi 1 hodiny se pomalu nechá ohřát na teplotu místnosti. Reakční směs se zpracuje odpařením THF a produkt se chromatografuje, čímž se získá 2-karbethoxy-l-indanon.

NMR: (CDCI₃): δ: 1,25 (t, 3H, OCH₂CH₃), 3,45 (d, 2H, benzylický CH₂), 3,65 (t, 1H, COCHCO), 4,2 (q, 2H, OCH₂CH₃), 7,4-7,5 (m, 4H, Ar-H).

e. Syntéza sloučenin obecného vzorce IV

2-karbethoxy-l-indenon se rozpustí v bezvodém methanolu při teplotě místnosti, přidá se borohydrid sodný ve třech dávkách, přičemž se reakční směs stále míchá. Reakční směs se potom míchá dalších 30 minut, načež se pevná látka odfiltruje a filtrát se odpaří k suchu. Zbytek se rozpustí v bezvodém benzenu, ke kterému se přidá katalytické množství kyseliny p-toluensulfonové a reakční směs se míchá po dobu 1 hodiny. Kyselina p-toluensulfonová se odfiltruje a filtrát se zahustí, čímž se získá ethyl-inden-2-karboxylát. Tento ethyl-inden-2-karboxylát se rozpustí v methanolu a přidá se 1,0 ekvivalentu vodného roztoku hydroxidu sodného a reakční směs se míchá přes noc. Další den se reakce ukončí odpařením methanolu, zbytek se zředí vodou, upraví se na neutrální pH a sraženina inden-2-karboxylové kyseliny se odfiltruje.

NMR: (CDC1₃): δ: 3,75 (s, 2H, benzylický CH₂), 7,4-7,7 (m, 4H, Ar-H), 7,95 (s, 1H, olefmický H).

-10CZ 291538 B6

f. Syntéza sloučenin obecného vzorce I

Pro syntézu sloučeniny č. 13 z tabulky 2 z kyseliny inden-2-karboxylové se provede stejný postup, jaký je popsán výše v odstavcích A-c v příkladu 1.

Sůl inden-2-oylguanidinu s methansulfonovou kyselinou se získá rozpuštěním volné báze v ethylacetátu při teplotě místnosti, načež se přidá methansulfonové kyseliny (1 ekv.). Sůl se vysráží ochlazením v lázni s ledem.

Žlutý krystalický prášek, teploty tání 164 až 165 °C.

NMR: (CDClj): 8: 3,75 (s, 2H, benzylický CH₂), 7,4-7,7 (m, 4H, Ar-H), 8,05 (s, 1H, olefinický H), 8,35 a 11,09 (široký s, NH a NH₂, vyměnitelný s D₂O).

Farmakologické způsoby vyhodnocení antiarytmického a kardioprotektivního účinku

Inhibice výměny sodík-proton v králičích erythrocytech

Albíni králíci kmen Novy'· Zéland se po šest týdnů krmí 2% cholesterolovou dietou, načež se jim odebere krev pro stanovení účinnosti výměny Na7H⁺ v erythroxytech. Bylo popsáno, že hypercholesterolemie zvyšuje účinnost výměny v králičích erythrocytech (Scholz aj., 1990, Arterioskleróze -Neue Aspekte aus Zellbiologie und Molekulargenetik, Epidemiologie und Klinik, Assman G. aj., Eds, Braunschweig, Wiesbaden, Vieweg, 296-302). U ušní žíly se odeberou vzorky krve a stanoví se hematokrit. Asi 200 ^μ1 krve se inhibuje při 37 °C po dobu 1 hodiny s hyperosmolámím sacharózovy m pufrem obsahujícím 0,1 mM ouabainu v přítomnosti a bez přítomnosti testovaného vzorku. Po inkubační periodě se reakce zastaví přidáním 5 ml ledově studeného roztoku MgCl₂ obsahujícího 0,1 mM ouabainu. Eiythrocyty se promyjí třikrát 5 ml roztoku MgCl₂. Hemolyzují se přidáním 4 ml destilované vody a obsah sodíku v hemolyzátu se stanoví plamennou fotometrií. Účinnost testované sloučeniny se stanoví její schopností snižovat obsah sodíku v erythrocytech a vyjádří se jako IC50, což je koncentrace nutná pro snížení obsahu sodíku v erythrocytech na 50 %.

Tabulka 4

sloučenina číslo	ICjofM)
2	0,09
10	0,018

Reperfuzí indukované arytmie na izolovaném krysím srdci

Samci krys Charles Foster obojího pohlaví (250 až 300 g) se usmrtí úderem a vykrvácením. Srdce se rychle vyjme a promyje se Langendorffovou metodou. Do promývacího prostředí se přidají různé koncentrace testované sloučeniny. Po 20timinutovém ustavení rovnováhy se podváže levá přední sestupná (LAD) koronární tepna. Po 15 minutách se podvázání odstraní a 30 minut se nechá probíhat reperfuze. Během ní se monituruje EKG. Doba trvání ventrikulámí fibrilace (VFD) je hlavním parametrem určení. Antiarytmický účinek se zkoumá jako koncentrace testované sloučeniny, která způsobuje 50% snížení VFD.

-11 CZ 291538 B6

Tabulka 5

sloučenina číslo	IC₅₀ pro VFD
2	0,025 ^μΜ
10	0,017 ^μΜ

Ischemií idukované arytmie u anestetizovaných krys

Samci krys Charles Foster (220 až 260 g) se anestetizují pentobarbitonem sodným. Zvířata mají umělé dýchání. Krevní tlak se zaznamenává krční tepnou. Pro obnažení srdce se provede thorakotonie. Nalezne se levá přední sestupná (LAD) koronární tepna. Testovaná sloučenina se podává buď orálně 10 minut před anestesií (40 minut před podvázáním LAD tepny), nebo ío intravenózně (5 minut před podvázáním LAD tepny). Zaznamenávají se arytmie vzniklé během minutové periody podvázání a analyzují se podle Lambethovy Konvence (Walker M.J.A., aj., 1988, Cardiovascular Research, 22, 447-455). Antiarytmický účinek testované sloučeniny se vyjádří jako dávka inhibice závislá na trvání ventrikulámí tachykardie (VT) a ventrikulámí fibrilace (VF).

Tabulka 6 orální aplikace:

slouč. č.	dávka mg/kg	VT % inhibice	VF % inhibice
2	1	26 ±0	68 ± 19
		(n= 11)	(n=10)
	3	31 ± 21	93 ±5
		(n=13)	(n = 13)
	10	73 ±8	100 ±0
10	0,1	32 ± 12 (n = 7)	NP’
	0,3	69 ± 11	84 ± 11
		(n = 6)	(n = 8)
	1,0	67 ± 11	100 ±0
		(n = 8)	(n = 8)

*NP = žádná ochrana intravenózní aplikace

slouč. č.	dávka mg/kg	VT % inhibice	VF % inhibice
2	0,1	51+ 17	100 ±0
		(n = 9)	(n = 9)
	0,3	90 ±3	100 ±0
		(n= 12)	(n-12)
	1,0	98 ± 1	100 ±0
		(n=12)	(n= 12)
10	0,1	20 ±24	100 ±0
		(n = 8)	(n = 8)
	0,3	81 ±8	100 ±0
		(n = 8)	(n = 9)
	1,0	97 ± 1	100 ±0
		(n-8)	(n = 8)

-12CZ 291538 B6

Infarkt myokardu u anestetizované krysy

Krysy se připraví jako v předchozích pokusech. Sloučeniny se podávají intravenózně 5 minut před podvázáním. Pokus spočívá v jedné hodině podvázání a v jedné hodině reperfuze. Infarkt myokardu se posuzuje technikou dvojího barviva za použití Evansovy modři a 2,3,5—trifenyltetrazolia, čímž se určí oblast rizika a popřípadě oblast infarktu. Rozsah infarktu se vyjádří jako procento oblasti rizika. (Simpson aj., 1987, Circulation Research, 60, 666-673).

Tabulka 7

sloučenina číslo	ochrana před infarktem
2	17%(n = 8)
10	68 % (n = 8)

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Indenoylguanidin obecného vzorce I

Claims

1. Indenoylguanidin obecného vzorce I ve kterém

R¹ znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů, O-alkylovou skupinu obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy;

R⁴ znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů, atom halogenu, skupinu vzorce CsHjoNSC^;

X znamená atom kyslíku;

-13 CZ 291538 B6

R⁷, R^s, R⁹ a R¹⁰ znamenají jednotlivě nebo společně atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující

1 až 6 uhlíkových atomů, cykloalkylovou skupinu obsahující 3 až 6 uhlíkových atomů, fenylovou skupinu nebo

R⁸ a R⁹ spolu dohromady mohou být částí 5-, 6- nebo 7členného heterocyklického kruhu obsahujícího 1 až 3 heteroatomy zvolené ze skupiny zahrnující atomy dusíku, atomy kyslíku a atomy síry;

A je buď nepřítomno nebo znamená organickou nebo minerální kyselinu;

popřípadě ve formě optických izomerů, racemátů nebo jejich směsi.

2. Způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačující se t í m , že se

a) nechá reagovat sloučenina obecného vzorce VI (VI), kde R¹, R², R³, R⁴, R⁵ a R⁶ mají význam uvedený v nároku 1 a Y je odštěpitelná skupina vybraná ze skupiny zahrnující skupinu -O-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, atom halogenu nebo imidazolyl, s guanidinem obecného vzorce VII

NHR7 (VII) ve kterém

R⁷, R⁸, R⁹ a R¹⁰ mají význam uvedený v nároku 1, a popřípadě se produkt převede na farmaceuticky přijatelnou sůl.

3. Použití sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 pro přípravu léčiva pro léčení srdečních arytmií.

4. Použití sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 pro přípravu léčiva pro léčení nebo profylaxi srdečního infarktu.

5. Použití sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 pro přípravu léčiva pro léčení nebo profylaxi angíny pectoris.

6. Použití sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 pro přípravu léčiva pro léčení nebo profylaxi ischemických stavů srdce.

- 14CZ 291538 B6

7. Použití sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 pro přípravu léčiva pro léčení nebo profylaxi ischemických stavů periferního a centrálního nervového systému a apoplexie.

8. Použití sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 pro přípravu léčiva pro léčení nebo profylaxi ischemických stavů periferních orgánů a končetin.

9. Použití sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 pro přípravu léčiva pro léčení šokových stavů.

10. Použití sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 pro přípravu léčiva pro použití při chirurgických operacích a při transplantacích orgánů.

11. Použití sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 pro přípravu prostředku pro ochranu a skladování transplantátů pro chirurgické zákroky.

12. Použití sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 pro přípravu léčiva pro léčení chorob, u nichž je proliferace buněk primární nebo sekundární příčinou.

13. Použití sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 pro přípravu prostředku pro inhibici Na”/H' výměny a pro diagnózu hypertenze a proliferačních chorob.

14. Léčivo, vyznačující se tím, že obsahuje účinné množství sloučeniny obecného vzorce í podle nároku 1.