CZ278197A3 - Kryptofycinové sloučeniny, způsob jejich výroby a farmaceutické prostředky na jejich bázi - Google Patents

Kryptofycinové sloučeniny, způsob jejich výroby a farmaceutické prostředky na jejich bázi Download PDF

Info

Publication number
CZ278197A3
CZ278197A3 CZ972781A CZ278197A CZ278197A3 CZ 278197 A3 CZ278197 A3 CZ 278197A3 CZ 972781 A CZ972781 A CZ 972781A CZ 278197 A CZ278197 A CZ 278197A CZ 278197 A3 CZ278197 A3 CZ 278197A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
cryptophycin
taken together
together form
methyl
hydrogen
Prior art date
Application number
CZ972781A
Other languages
English (en)
Inventor
Richard E. Moore
Marcus A. Tius
Russell A. Barrow
Jian Liang
Thomas H. Corbett
Frederick A. Valeriote
Thomas K. Hemscheidt
Trimurtulu Golakoti
Original Assignee
University Of Hawaii
Wayne State University 4031 F/Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US08/400,057 external-priority patent/US6013626A/en
Priority claimed from US08/482,141 external-priority patent/US5952298A/en
Application filed by University Of Hawaii, Wayne State University 4031 F/Ab filed Critical University Of Hawaii
Publication of CZ278197A3 publication Critical patent/CZ278197A3/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D273/00—Heterocyclic compounds containing rings having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D261/00 - C07D271/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Epoxy Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Description

Kryptofycinové sloučeniny, zp tické prostředky na jejich bá
Oblast techniky
Vynález se týká kryptofycinových sloučenin, způsobu jejich výroby a farmaceutických prostředků na jejich bázi.
Dosavadní stav techniky
Neoplastické choroby charakterizované proliferací buněk, které nepodléhají normálnímu řízení buněčného růstu, jsou u lidí hlavní příčinou smrti. Klinická zkušenost s chemoterapií ukázala, že pro léčení těchto chorob jsou nutná nová a účinnější léčiva. Tyto Zkušenosti také ukázaly, že léčiva, která narušují mikrotubulární systém cytoskeletu mohou být účinnými inhibitory proliferace neoplastických buněk.
Mikrotubulární systém eukaryontních buněk je hlavní složkou cytoskeletu a nachází se v dynamickém stavu skládání a rozkládání, tj. heterodimery tubulinu polymerují za vzniku mikrotubulů, a mikrotubuly se depolymerují na své stavební prvky. Mikrotubuly hrají klíčovou roli v regulaci stavby, metabolismu a dělení buněk. Dynamický stav mikrotubulů je má rozhodující význam pro jejich normální funkci. Při buněčném dělení tubulin polymeruje na mikrotubuly, které vytvářejí mitotické dělicí vřeténko. Když mitotická dělicí vřeténka splní svoji funkci, mikrotubuly se poté depolymerují. Z toho vyplývá, že činidla, která narušují polymeraci nebo depolymeraci mikrotubulů, a tím inhibují mitosu, zahrnují některá nejúčinnější chemoterapeutická činidla používaná v klinické praxi.
Taková antimitotická činidla nebo jedy je možno na základě jejich molekulárního mechanismu účinnosti rozdělit do tří skupin. První skupinu tvoří činidla, jako kolchicin a kolcemid, která inhibují vznik mikrotubulů sekvestrováním tubulinu. Druhou skupinu tvoří činidla, jako vinblastin a vinkristin, která vyvolávají vznik parakrystalických agregátů tubulinu. Vinblastin a vinkristin jsou dobře známými protirakovinnými léčivy: jejich působení, které vyvolává narušení mikrotubulů mitotického vřeténka, přednostně inhibuje hyperproliferativní buňky. Třetí skupinu tvoří činidla, jako taxol, která jsou promotory polymerace tubulinu, a tedy stabilizují mikrotubulární struktury.
Pouhá antimitotická účinnost však nezaručuje účinnost proti nádorovým buňkám, zejména v tom případě, že se jedná o nádorové buňky, které vykazují fenotyp resistence na léčiva. Alkaloidy brčálu Vinca, jako vinblastin a vinkristin, jsou účinné proti neoplastickým buňkám a nádorům, ale jejich účinek na některé tumory a buňky resistentní na léčiva je nedostatečný. U neoplastických buněk je jedním ze základů resistence vůči léčivu (drug resistance, DR) nebo resistence vůči několika léčivům (multiple-drug resistance, MDR) nadexprese P-glykoproteinu. Sloučeniny, které jsou špatnými substráty pro transport P-glykoproteinu, by měly být užitečné pro ošálení DR nebo MDR fenotypů.
Přítomnost DR nebo MDR fenotypů v mnohých nádorových buňkách a klinicky prokázaný způsob působení antimikrotubulárních činidel proti neoplastickým buňkám vyvolávají potřebu vyvinout antimikrotubulární činidla s cytotoxicitou vůči neoplastickým buňkám neresistentním vůči léčivům, jakož i vůči neoplastickým buňkám s fenotypem resistentce vůči léčivům. V tomto ohledu jsou slibnými sloučeniny, které zahrnují třídu sloučenin známých jako krytofyciny.
Co se týče způsobů výroby krytofycinů, nejsou v současné době známy žádné postupy totální syntézy. Kryptofycinové sloučeniny se v současné době vyrábějí isolací z modrozelené řasy nebo polosyntetickými obměnami těchto sloučenin vznikajících v přírodě. Absence plně syntetického způsobu výroby nezbytně vyvolává nesnáze při výrobě stereospecifických kryptofycinů, které mohou maximalizovat účinnost a zvyšovat stabilitu sloučenin. Průzkumy například ukázaly, že kryptofyciny s intaktním makrocyklickým kruhem jsou účinnější. Je tedy žádoucí vyvinout plně syntetický způsob výroby, při němž by bylo možno vyrobit kryptofyciny s makrocyklickým kruhem, které jsou stabilnější než deriváty přírodních kryptofycinů. Uvedený problém řeší tento vynález.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu jsou nové kryptofycinové sloučeniny obecného vzorce
kde
Ar představuje methylskupinu, fenylskupinu nebo kterou koliv jednoduchou nesubstituovanou nebo substituovanou aromatickou nebo heteroaromatickou skupinu;
• ·
představuje atom halogenu, merkaptoskupinu, aminoskupinu, monoalkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, trialkylamoniumskupinu, alkylthioskupinu, dialkylsulfoniumskupinu, sulfátovou nebo fosfátovou skupinu;
r2 představuje hydroxyskupinu nebo merkaptoskupinu;
nebo
R^ a R2 brány dohromady tvoří epoxidový, aziridinový, episulfidový, sulfátový nebo monoalkylfosfátový kruh; nebo a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C18 a C19;
R3 představuje nižší alkylskupinu;
R4 a R5 představují atomy vodíku; nebo r4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14;
R6 představuje benzylskupinu, hydroxybenzylskupinu, alkoxybenzylskupinu, halogenhydroxybenzylskupinu, dihalogenhydroxybenzylskupinu, halogenalkoxybenzylskupinu nebo dihalogenalkoxybenzylskupinu;
R?, Rg, R9 a R10 představuje každý nezávisle atom vodíku nebo nižší alkylskupinu; a
X a Y představuje každý nezávisle atom kyslíku, iminoskupinu nebo alkylaminoskupinu.
Předmětem vynálezu jsou dále také způsoby totální syntézy kryptofycinů a použití kryptofycinů ve farmacii za účelem inhibice proliferace savčích buněk a léčení novotvarů.
Přehled obr, na výkresech
Na obr. 1 je znázorněna obecná struktura zvolených kryptofycinových sloučenin podle vynálezu. Je zde také uveden systém číslování hydroxykyselinových jednotek A a D a aminokyselinových jednotek B a C ve vybraných provedeních vynálezu.
Na obr. 2A je graficky znázorněn účinek kryptofycinové sloučeniny na proliferaci a postup buněčného cyklu u Jurkatových buněk. Na obr. 2B je graficky znázorněn účinek vinblastinu na proliferaci a postup buněčného cyklu u Jurkatových buněk. Jurkatovy buňky se inkubují s uvedenými koncentracemi kryptofycinové sloučeniny (A) nebo vinblastinu (B) po dobu 24 hodin. U každého vzorku se způsobem popsaným v dále uvedené experimentální části stanoví počet životaschopných buněk (plné čtverečky) a mitotický index (prázdné čtverečky). Uvedené hodnoty představují střední hodnoty ± směrodatná odchylka (sd) pro tři replikace vzorku při jednom ze tří podobných experimentů.
Na obr. 3 je graficky znázorněna reversibilita účinků vinblastinu, kryptofycinů a taxolu na buněčný růst. Buňky SKOVIII byly ošetřeny Ο,ΙηΜ vinblastinem (prázdné čtverečky), Ο,ΙηΜ kryptofyciny (plné čtverečky) nebo lnM taxolem (přeškrtnuté čtverečky) v době 0. Za použití těchto koncentrací sloučenin došlo k inhibici buněčného růstu o 50 %. Po 24 hodinách byly buňky promyty a stanovenou dobu inkubovány v médiu neobsahujícím léčivo. Densita buněk byla stanovena barvením sulforhodaminem B (SRB) způsobem popsaným
v experimentální části a je vyjádřena jako střední hodnota ± směrodatná odchylka absorbance při 560 nm pro tři replikace vzorku při jednom ze tří experimentů.
Na obr. 4 jsou uvedeny isobologramy kombinačních účinků vinblastinu a kryptofycinů na proliferaci buněk.
Buňky SKOVIII byly ošetřovány vinblastinem (0 až 600pM) a/nebo kryptofyciny (1 až ΙΟΟρΜ) po dobu 48 hodin. Potom byl pomocí barvení SRB popsaného v experimentální části stanoven počet buněk. Dále byly stanoveny hodnoty IC50 a čára aditivity (---) pro kombinace vinblastinu a kryptofycinových sloučenin. Uvedené hodnoty představují střední hodnoty ze dvou experimentů, z nichž každý byl prováděn se třemi replikacemi .
Na obr. 5 je znázorněno schéma syntézy kryptofycinů podle tohoto vynálezu.
Na obr. 6 je znázorněno schéma výroby hydroxykyselínové jednotky A.
Na obr. 7 je znázorněno schéma výroby podjednotky kryptofycinů zahrnující hydroxykyšelínovou jednotku A a aminokyselinovou jednotku B.
Na obr. 8 je znázorněno schéma výroby podjednotky kryptofycinů zahrnující aminokyselinovou jednotku C a hydroxykyselinovou jednotku D.
Na obr. 9 je znázorněno první schéma syntézy zvolených kryptofycinů podle tohoto vynálezu.
Na obr. 10 je znázorněno druhé schéma syntézy zvole ných kryptofycinů podle tohoto vynálezu.
• · • to • to
Na obr. 11 je znázorněno schéma syntézy podjednotky kryptofycinu zahrnující hydroxykyselinu D.
Na obr. 12 je znázorněno třetí schéma syntézy zvolených kryptofycinů podle tohoto vynálezu.
Na obr. 13 je znázorněno čtvrté schéma syntézy zvole ných kryptofycinů podle tohoto vynálezu.
Na obr. 14 je znázorněno páté schéma syntézy zvolených kryptofycinů podle tohoto vynálezu.
Následuje podrobnější popis tohoto vynálezu.
Předmětem vynálezu jsou kryptofycinové sloučeniny obecného vzorce
Ar představuje methylskupinu, fenylskupinu nebo kteroukoliv jednoduchou nesubstituovanou nebo substituovanou aromatickou nebo heteroaromatickou skupinu;
představuje atom halogenu, merkaptoskupinu, aminoskupinu, monoalkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, trialkylamoniumskupinu, alkylthioskupinu, dialkylsulfoniumskupinu, sulfátovou nebo fosfátovou skupinu;
• · · ·· ···· · · ·· • · ·· · * · ···· • · · ·· ·· · ···· · • · · · · · ··· ·· ··· ·· · ·· ··
R2 představuje hydroxyskupinu nebo merkaptoskupinu;
nebo
Rj a R2 brány dohromady tvoří epoxidový, aziridinový, episulfidový, sulfátový nebo monoalkylfosfátový kruh; nebo
Rj a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy Clg a C19;
R3 představuje nižší alkylskupinu;
R4 a R5 představují atomy vodíku; nebo
R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14;
představuje benzylskupinu, hydroxybenzylskupinu, alkoxybenzylskupinu, halogenhydroxybenzylskupinu, dihalogenhydroxybenzylskupinu, halogenalkoxybenzylskupinu nebo dihalogenalkoxybenzylskupinu;
Ry, Rg, Rg a Rlo představuje každý nezávisle atom vodíku nebo nižší alkylskupinu; a
X a Y představuje každý nezávisle atom kyslíku, iminoskupinu nebo alkylaminoskupinu.
Podle jednoho aspektu jsou předmětem vynálezu krytofycinové sloučeniny obecného vzorce
Ri Ra
Ř2 Ř4 • · · ·· · ·· · ·· · · • · · · ·· · · · · · • · · ··· · · · · • · · · · · · · · · · * · • · · ··· · · · — θ _ ·· ··· ·· · ·· ·· kde
R1 představuje atom vodíku, hydroxyskupinu, atom halogenu, kyslíkový atom ketoskupiny, aminoskupinu, merkaptoskupinu, nižší alkoxyskupinu nebo nižší alkylskupinu;
R2 představuje atom vodíku, hydroxyskupinu, kyslíkový atom ketoskupiny, aminoskupinu, merkaptoskupinu, nižší alkoxyskupinu nebo nižší alkylskupinu; nebo
R1 a R2 brány dohromady tvoří epoxidový, aziridinový nebo episulfidový kruh nebo dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C1Q a C^; nebo
R1 a R4 brány dohromady tvoří tetrahydrofuranový kruh;
R3 představuje atom vodíku nebo nižší alkylskupinu;
R4 představuje hydroxyskupinu, nižší alkanoyloxyskupinu nebo nižší a-hydroxyalkanoyloxyskupinu;
R5 představuje atom vodíku nebo hydroxyskupinu;
R6 představuje atom vodíku; nebo
R5 a R6 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C5 a C6;
R7 představuje benzylskupinu, hydroxybenzylskupinu, methoxybenzylskupinu, halogenhydroxybenzylskupinu, dihalogenhydroxybenzylskupinu, halogenmethoxybenzylskupinu nebo dihalogenmethoxybenzylskupinu;
·· ·
• · · · • · · ♦ • · · · · • · · ·· · ·
R8 představuje hydroxyskupinu, nižší β-aminokyselinový zbytek, kde dusíkový atom β-aminokyseliny je vázán k uhlíkovému atomu Clr nebo esterifikovaný nižší β-aminokyselinový zbytek, kde dusíkový atom esterifikované β-aminokyseliny je vázán k uhlíkovému atomu Cj?
R4 a Rg brány dohromady tvoří didepsipeptidovou skupinu, která obsahuje nižší β-aminokyselinový zbytek vázaný ke zbytku nižší α-hydroxyalkanové kyseliny; a
Rg a Rg brány dohromady tvoří didepsipeptidovou skupinu, která se skládá z nižšího β-aminokyselinového zbytku vázaného ke zbytku nižší a-hydroxyalkanové kyseliny;
přičemž představuje atom vodíku, nižší alkylskupinu nebo nižší alkoxyskupinu pouze v tom případě, že R2 představuje hydroxyskupinu, kyslíkový atom ketoskupiny, aminoskupinu nebo merkaptoskupinu;
R2 představuje atom vodíku, nižší alkylskupinu nebo nižší alkoxyskupinu pouze v tom případě, že R-^ představuje hydroxyskupinu, kyslíkový atom ketoskupiny, aminoskupinu nebo merkaptoskupinu;
když R·^ představuje hydroxyskupinu, R2 představuje hydroxyskupinu, Rg představuje methylskupinu, Rg a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy Cg a Cg, R4 a Rg brány dohromady tvoří didepsipeptidovou skupinu vzorce X • · · · · · ··· · · ·· • · · · ·· · · · · · • · · · · · · · ·· · · · ··· · · · ···
- 11 - ·· ··· ·· · ·· ♦·
kde atom kyslíku Oj odpovídá R4, atom dusíku Ng odpovídá Rg, R9 představuje methylskupinu a R10 představuje isobutylskupinu, potom R-y nepředstavuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu;
když Rj a R2 brány dohromady tvoří epoxidový kruh, R3 představuje methylskupinu, R5 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C5 a Cg, R4 a Rg brány dohromady tvoří didepsipeptidovou skupinu vzorce X, R9 před stavuje methylskupinu a R10 představuje isobutylskupinu, potom Ry nepředstavuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu;
když Rj a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C1Q a C11# R3 představuje methylskupinu, R5 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C5 a Cg, R4 a R8 brány dohromady tvoří didepsipeptidovou skupinu vzorce X, R9 představuje methylskupinu a R10 představuje isobutylskupinu, potom R7 nepředstavuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu; a když Rj a R2 brány dohromady tvoří epoxidovou skupinu, R3 představuje methylskupinu, R5 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C5 a Cg, R4 je vázán k terminální karboxyskupině 2-hydroxy-4-methylpentanové kyseliny a Rg ke vázán k terminálnímu dusíku 3-amino2-methylpropionové kyseliny nebo methylesteru 3-amino-212
· ··· · • · · • · · • 44
4 methylpropionové kyseliny, potom R7 nepředstavuje 3-chlor4-methoxybenzylskupinu.
Předmětem vynálezu jsou dále krytofycinové sloučeniny, v nichž alespoň jedna ze skupin vázaných k uhlíkovému atomu C2, Cg, Cg, Cjq a Cjj vykazuje R-stereochemii. Podle dalšího provedení jsou předmětem vynálezu sloučeniny, v nichž alespoň jedna ze skupin vázaných k uhlíkovému atomu c2' c8' C9' C10 a C11 vykazuje S-stereochemii.
Předmětem vynálezu jsou dále kryprofycinové sloučeniny výše uvedeného obecného vzorce, kde R4 nebo R5 brán dohromady s Rg tvoří didepsipeptidovou skupinu vzorce X
kde atom kyslíku Oj odpovídá R4 nebo R5, atom dusíku Νθ odpovídá Rg, Rg představuje atom vodíku nebo nižší alkylskupinu a Rlo představuje atom vodíku nebo nižší alkylskupinu.
Pokud ze souvislostí jasně nevyplývá opak, mají dále uvedené pojmy následující významy:
Pod pojmem nižší β-aminokyselina se rozumí kterákoliv β-aminokyselina se třemi až osmi atomy uhlíku s lineárním nebo nelineárním uhlovodíkovým řetězcem, například 3-amino-2-methylpropionová kyselina.
9 9 9 9 9 9 9 9 · · 9 9 • · · · · 9 · 9 9 9 9 • 9 9 99 99 9 9999 9
999 999 999
999 99 9 99 99
Pod pojmem esterifikovaná nižší β-aminokyselina se rozumí kterákoliv β-aminokyselina se třemi až osmi atomy uhlíku, v níž je vodíkový atom karboxyskupiny substituován methylskupinou, například methylester 3-amino-2-methylpropionové kyseliny.
Pod pojmem nižší alkanoyloxyskupina se rozumí kterákoliv alkanoyloxyskupina s jedním až sedmi atomy uhlíku s lineárním nebo nelineárním uhlovodíkovým řetězcem.
Pod pojmem nižší α-hydroxyalkanoyloxyskupina se rozumí kterákoliv α-hydroxyalkanoyloxyskupina se dvěma až sedmi atomy uhlíku s lineárním nebo nelineárním uhlovodíkovým řetězcem, například 2-hydroxy-4-methylvalerová kyselina.
Pod pojmem nižší alkoxyskupina se rozumí kterákoliv alkylskupina s jedním až pěti atomy uhlíku vázaná k atomu kyslíku.
Pod pojmem nižší alkylskupina se rozumí alkylskupina s jedním až pěti atomy uhlíku s lineárním nebo nelineárním uhlovodíkovým řetězcem, například methylskupina, ethylskupina, propylskupina, isopropylskupina, butylskupina isobutylskupina, terč.butylskupina, sek.butylskupina, methy lované butylskupiny, pentylskupina a terč.pentylskupina.
Pod pojmem allylicky substituovaný alken se rozumí alken, který obsahuje alkylovou substituci.
Pod pojmem epoxidový kruh se rozumí tříčlenný kruh, jehož hlavní řetězec sestává ze dvou uhlíkových a jednoho kyslíkového atomu.
·· 9 • · ·· • · · • · · • · · ·· *«· ·* ···· ·· ·· • · · · · · • · · · ·· • · · ··· · # * · · · · ·· · ·· ·»
Pod pojmem aziridinový kruh” se rozumí tříčlenný kruh, jehož hlavní řetězec sestává ze dvou uhlíkových a jednoho dusíkového atomu.
Pod pojmem episulfidový kruh” se rozumí tříčlenný kruh, jehož hlavní řetězec sestává ze dvou uhlíkových a jednoho atomu síry.
Pod pojmem sulfátový kruh” se rozumí pětičlenný kruh, jehož hlavní řetězec tvoří struktura uhlík-uhlíkkyslík-síra-kyslík, který dále obsahuje dva atomy kyslíku vázané k atomu síry.
Pod pojmem monoalkylfosfátový kruh se rozumí pětičlenný kruh, jehož hlavní řetězec tvoří struktura uhlíkuhlík-kyslík-fosfor-kyslík, který dále obsahuje dva atomy kyslíku vázané k atomu fosforu, z nichž jeden nese nižší alkylskupinu.
Pod pojmem jednoduchá nesubstituovaná aromatická skupina se rozumějí obvyklé aromatické kruhy obsahující 4n+2 π-elektronů v monocyklickém konjugovaném systému (jako je například furyl, pyrrolyl, thienyl nebo pyridyl) nebo bicyklickém konjugovaném systému (jako je například indolyl nebo naftyl).
Pod pojmem jednoduchá substituovaná aromatická skupina se rozumí fenylová skupina substituovaná jednou skupinou (například nižší alkylskupinou nebo halogenem).
Pod pojmem heteroaromatická skupina se rozumějí aromatické kruhy, které obsahují alespoň jeden neuhlíkový substituent, jako je kyslík, dusík nebo síra.
Pod pojmem halogen se rozumějí členy skupiny periodické tabulky, které jsou historicky označovány názvem halogeny. Jako neomezující příklady způsobů halogenace je možno uvést adici halogenovodíků, substituci při vysoké teplotě, fotohalogenaci atd. Všechny tyto způsoby jsou dobře známy odborníkům v tomto oboru [Eglof, G., Organic Chemistry: An Advanced Treatise, Gilmar et al. (ed), str.
až 46, John Wiley & Sons (1943) a Kepm et al., Organic Chemistry, Worth Publishers, lne. (1980)].
Podle jednoho provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rj a R2 brány dohromady tvoří epoxidový kruh, R3 představuje methylskupinu, R5 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C5 a Cg, R7 představuje 4-methoxybenzylskupinu a R4 a Rg brány dohromady tvoří didepsipeptidovou skupinu vzorce X, kde Rg představuje methylskupinu a R10 představuje isobutylskupinu. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 2, odpovídá následujícímu vzorci
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rj a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C10 a C1;L, R3 představuje methylskupinu, R5 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C5 a Cg, R7 představuje 4-methoxybenzylskupinu a R4 a Rg brány dohromady tvoří
didepsipeptidovou skupinu vzorce X, kde Rg představuje methylskupinu a R10 představuje isobutylskupinu. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 4, odpovídá následujícímu vzorci
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rg a R4 brány dohromady tvoří tetrahydrofuranový kruh, R2 představuje hydroxyskupinu, R3 představuje methylskupinu, R5 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C5 a Cg, R7 představuje
3-chlor-4-methoxybenzylskupinu a Rg představuje (2-methoxykarbonylpropyl)aminoskupinu. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 6, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 6
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rg a R4 brány dohromady tvoří tetrahydrofuranový kruh, R2 a Rg představují hydroxyskupiny, R3 představuje methylskupinu, R5 a Rg brány dohromady tvoří ·· · AA AAA A AA ·· • AAA ·· A ···· • A A AAA AAAA • A A AA AA A AAAA A
AAA AAA AAA «•A AAA AA A AA AA dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C5 a Cg a R7 představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu. Struktura této sloučeniny, Kryptofycinů 7, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 7
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde R^ představuje chlor, R2 představuje hydroxyskupinu, R3 představuje methylskupinu,
R5 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C5 a Cg, R? představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu a R4 a Rg brány dohromady tvoří didepsipeptidovou skupinu vzorce X, kde Rg představuje methylskupinu a R10 představuje isobutylskupinu. Struktura této sloučeniny, Kryptofycinů 8, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 8
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rj představuje methoxyskupinu, R2 představuje hydroxyskupinu, R3 představuje methyl18
skupinu, Rg a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy Cg a Cg, R? představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu a R4 a Rg brány dohromady tvoří didepsipeptidovou skupinu vzorce X, kde Rg představuje methylskupinu a R10 představuje isobutylskupinu. Struktura této sloučeniny, kryptofycinů 9, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 9
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde R3 představuje methoxyskupinu, R2 a R4 představují hydroxyskupiny, R3 představuje methylskupinu, Rg a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy Cg a Cg, R? představuje 3-chlor-4methoxybenzylskupinu a Rg představuje (2-karboxypropyl)aminoskupinu. Struktura této sloučeniny, kryptofycinů 10, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 10
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rj a R4 brány dohromady tvoří
- 19 ► · · 1 » · · · ·« · · 4 • · 4 ·· ·· tetrahydrofuranový kruh, R2 představuje hydroxyskupinu, R3 představuje methylskupinu, R5 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C5 a Cg, R7 představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu a Rg představuje (2-karboxypropyl Jaminoskupinu. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 12, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 12
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde R^ a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C1Q a C13, Rg představuje methylskupinu, R4 představuje hydroxyskupinu, Rg a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy c5 a c6' r7 Představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu a Rg představuje (2-karboxypropyl)aminoskupinu. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 14, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 14
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rj a R2 brány dohromady tvoří epoxidový kruh, Rg představuje methylskupinu, R5 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C5 a Cg, R7 představuje 3-chlor-4-hydroxybenzylskupinu a R4 a Rg brány dohromady tvoří didepsipeptidovou skupinu vzorce X, kde Rg představuje methylskupinu a R10 představuje isobutylskupinu. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 16, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 16
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde R1 a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C10 a CX1, R3 představuje methylskupinu, R5 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C5 a Cg, R7 představuje 3-chlor-4-hydroxybenzylskupinu a R4 a Rg brány dohromady tvoří didepsipeptidovou skupinu vzorce X, kde Rg představuje methylskupinu a Rlo představuje isobutylskupinu. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 17, odpovídá následujícímu vzorci
··
Kryptofycin 17
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rj a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C10 a C1X, R3 představuje methylskupinu, Rg a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C5 a Cg, R7 představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu a R4 a Rg brány dohromady tvoří didepsipeptidovou skupinu vzorce X, kde Rg představuje methylskupinu a R10 představuje sek.butylskupinu. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 18, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 18
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C10 a C1X, R3 představuje methylskupinu, R5 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C5 a Cg, R7 představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu a R4 a Rg brány dohromady tvoří didepsipeptidovou skupinu vzorce X, kde Rg představuje methylskupinu a Rlo představuje isopropylskupinu. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 19, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 19
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rj a R2 brány dohromady tvoří epoxidový kruh, R3 představuje methylskupinu, R5 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C5 a Cg, R7 představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu a R4 a Rg brány dohromady tvoří didepsipeptidovou skupinu vzorce X, kde Rg představuje atom vodíku a R10 představuje isobutylskupinu. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 21, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 21
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde R-^ a R2 brány dohromady tvoří epoxidový kruh, R3 představuje methylskupinu, R5 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C5 a Cg, Ry představuje 3,5-dichlor-4-hydroxybenzylskupinu a R4 a Rg brány dohromady tvoří didepsipeptidovou skupinu • · ·· · · • · · · · » · · · · · ·· ··· ·· ♦ ·· ·· ·· · « · • · · ·· ·· vzorce X, kde Rg představuje methylskupinu a R10 představuje isobuty1skupinu. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 23, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 23
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rj a R2 brány dohromady tvoří epoxidový kruh, R3 představuje methylskupinu, R5 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C5 a Cg, R7 představuje 4-methoxybenzylskupinu a R4 a Rg brány dohromady tvoří didepsipeptidovou skupinu vzorce X, kde Rg představuje atom vodíku a Rlo představuje isobutylskupinu. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 24, odpovídá následu jícímu vzorci
Kryptofycin 24
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde R^ a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C10 a Cxl, R3 představu44
4· 44
4 4 4 4 4 4
4 4 4 4 44
4* 4 444 · ·
4 4 4 4 4 ♦ ·· ·* je methylskupinu, R4 představuje hydroxyskupinu, Rg představuje atom vodíku, R? představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu a R5 a R8 brány dohromady tvoří didepsipeptidovou skupinu vzorce X, kde Rg představuje methylskupinu a R10 představuje isobutylskupinu. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 26, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 26
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rj a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C1Q a C·^, R3 představuje atom vodíku, R5 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C5 a Cg, R7 představuje 3-chlor-4methoxybenzylskupinu a R4 a Rg brány dohromady tvoří didepsipeptidovou skupinu vzorce X, kde Rg představuje methylskupinu a R10 představuje isobutylskupinu. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 28, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 28
• · • • • • · • ·· ···· • 9 • · • · 9 9 9 9
• • • • 4 9 9 • 999 9 9
• • • • • · 9 9 9
• · • ·· ·· • 99 99
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rj a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C^q a C-^, Rg představuje methylskupinu, R5 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C5 a Cg, R7 představuje 3-chlor-4methoxybenzylskupinu a R4 a Rg brány dohromady tvoří didepsipeptidovou skupinu vzorce X, kde Rg představuje atom vodíku a R10 představuje isobutylskupinu. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 29, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 29
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde R-^ a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C10 a C1X, R3 představuje methylskupinu, R5 představuje hydroxyskupinu, Rg představuje atom vodíku, R7 představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu a R4 a Rg brány dohromady tvoří didepsipeptidovou skupinu vzorce X, kde Rg představuje methylskupinu a R10 představuje isobutylskupinu. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 30, odpovídá následujícímu vzorci ·· • · • to • · • · ·· toto • ·· • · · to • ·· ··· to· *· ···· ·· ·· • · · · · • * · · · * · ··· to to • · · · • ·· ··
Kryptofycin 30
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde R3 a R2 brány dohromady tvoří epoxidový kruh, R3 představuje methylskupinu, R5 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C5 a Cg, R7 představuje 3,5-dichlor-4-methoxybenzylskupinu a R4 a Rg brány dohromady tvoří didepsipeptidovou skupinu vzorce X, kde Rg představuje methylskupinu a R^o představuje isobutylskupinu. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 31, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 31
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rj a R2 brány dohromady tvoří epoxidový kruh, R3 představuje methylskupinu, R5 představuje atom vodíku, Rg představuje atom vodíku, R? představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu a R4 a Rg brány dohromady tvoří didepsipeptidovou skupinu vzorce X, kde Rg představuje
9·· • · ·
9 9
9 ·
- 27 - ·· ··· •9 9999 · · • · ·
9 9
9 9 ·· ·
99
9 9 · · ·· ··· · ·
9 9
9· 99 methylskupinu a Rg0 představuje isobutylskupinu. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 35, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 35
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rg a R2 brány dohromady tvoří epoxidový kruh, R3 představuje atom vodíku, R5 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy c5 a Cg, R7 představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu a R4 a Rg brány dohromady tvoří didepsipeptidovou skupinu vzorce X, kde Rg představuje methylskupinu a Rg0 představuje isobutylskupinu. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 40, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 40
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rg a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy CgQ a Cgg, R3 předsta28
4
4
4
4 4
4
4 4· 4
4 4 4
4 ·4
444 4 4
4 4 vuje methylskupinu, R5 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C5 a Cg, R? představuje 3,5-dichlor-4-hydroxybenzylskupinu a R4 a Rfi brány dohromady tvoří didepsipeptidovou skupinu vzorce X, kde Rg představuje methylskupinu a R10 představuje isobutylskupinu. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 45, odpovídá následujícímu vzorci
ΌΗ
Kryptofycin 45
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rj a R2 brány dohromady tvoří epoxidový kruh, R3 představuje methylskupinu, Rg a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C5 a Cg, R7 představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu a R4 a Rg brány dohromady tvoří didepsipeptidovou skupinu vzorce X, kde Rg představuje methylskupinu a Rlo představuje propylskupinu. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 49, odpovídá následujícímu vzorci a
Kryptofycin 49 • · • 9 9 • 9 • · ·· · · • · · · · • · · · · · • · · · · ·· ··· ·· • 9
9 9 9 9
9 9 99
9 9999 9
9 9 9
99 99
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rj a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C10 a C1;L, R3 představuje methylskupinu, R5 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C5 a Cg, R? představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu a R4 a Rg brány dohromady tvoří didepsipeptidovou skupinu vzorce X, kde Rg představuje methylskupinu a R10 představuje propylskupinu. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 50, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 50
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rj a R2 brány dohromady tvoří epoxidový kruh, R3 představuje methylskupinu, R5 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C5 a Cg, R? představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu a R4 a Rg brány dohromady tvoří didepsipeptidovou skupinu vzorce X, kde Rg představuje methylskupinu a R10 představuje sek.butylskupinu. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 54, odpovídá následujícímu vzorci • ·· ·
Kryptofycin 54
Výše uvedené sloučeniny, kryptofyciny 2, 4, 16 až 19, 21, 23, 24, 26, 28 až 31, 40, 43, 45, 49, 50 a 54 jsou metabolity produkované kmenem modrozelené řasy (cyanobacteria) Nostoc sp. Tato řasa byla kultivována a ze vzniklé kultury byly výše uvedené sloučeniny izolovány. Kryptofyciny 6 a 7 se získají v tom případě, když se při izolaci používá roztoků obsahujících methanol. Kryptofyciny 8, 9, 10 až 12, 14 a 35 jsou deriváty těchto přirozeně produkovaných metabolitů, které byly získány chemickou modifikací za použití způsobů popsaných v experimentální části tohoto popisu, způsobů, které jsou jejich obdobou, nebo se jedná o sloučeniny, které nejsou uvedeny v příkladové části, ale jsou dostupné odborníkům v tomto oboru.
Předmětem vynálezu jsou také způsoby výroby výše uvedených kryptofycinových sloučenin kultivací kmene Nostoc sp. Morfologické vlastnosti modrozelené řasy (cyanobacteria) Nostoc sp. jsou uvedeny v US patentu č. 4 946 835 a podle tohoto odkazu se jedná o vláknité řasy skládající se z vegetativních buněk. V dlouhých vláknech jsou občas pozorovatelné heterocysty v interkalárních polohách. Akinety pozorovány nejsou. Reprodukce probíhá hormogonií, kromě náhodného přerušení trichomu. Základ pro identifikaci kmene Nostoc sp. je možno nalézt v J. Gen. Micro. 111: 1 až 61 (1979).
• · · · « • · a ·· ··
Do rozsahu vynálezu spadá také kultivace kmene Nostoc sp. a izolace nových kryptofycinových metabolitů, jakož i dříve popsaných kryptofycinových metabolitů z této kultury. V přednostním provedení tohoto vynálezu se kultivuje kmen Nostoc sp. označený zkratkou GSV224 a ze vzniklé kultury se izolují sloučeniny obecného vzorce
kde
R^ představuje atom vodíku, hydroxyskupinu, atom halogenu, kyslíkový atom ketoskupiny, aminoskupinu, merkaptoskupinu, nižší alkoxyskupinu nebo nižší alkylskupinu;
R2 představuje atom vodíku, hydroxyskupinu, kyslíkový atom ketoskupiny, aminoskupinu, merkaptoskupinu, nižší alkoxyskupinu nebo nižší alkylskupinu; nebo a R2 brány dohromady tvoří epoxidový, aziridinový nebo episulfidový kruh nebo dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C10 a C1;L; nebo a R4 brány dohromady tvoří tetrahydrofuranový kruh;
Rg představuje atom vodíku nebo nižší alkylskupinu;
R4 představuje hydroxyskupinu, nižší alkanoyloxyskupinu nebo nižší a-hydroxyalkanoyloxyskupinu;
R5 představuje atom vodíku nebo hydroxyskupinu;
• · · ·
Rz ·· ·»··
- 32 4· ·· • · « • · · • 4 · 4 4
4 4 ·· představuje atom vodíku; nebo
Rg a R6 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C5 a Cg;
představuje benzylskupinu, hydroxybenzylskupinu, methoxybenzylskupinu, halogenhydroxybenzylskupinu, dihalogenhydroxybenzylskupinu, halogenmethoxybenzylskupinu nebo dihalogenmethoxybenzylskupinu;
představuje hydroxyskupinu, nižší β-aminokyselinový zbytek, jehož dusíkový atom je vázán k uhlíkovému atomu Cj, nebo esterifikovaný nižší β-aminokyselinový zbytek, jehož dusíkový atom je vázán k uhlíkovému atomu C3;
R4 a R8 brány dohromady tvoří didepsipeptidovou skupinu, která se skládá z nižšího β-aminokyselinového zbytku vázaného k ke zbytku nižší a-hydroxyalkanové kyseliny; nebo
R5 a Rg brány dohromady tvoří didepsipeptidovou skupinu, která se skládá z nižšího β-aminokyselinového zbytku vázaného ke zbytku nižší a-hydroxyalkanové kyseliny;
přičemž
R^ představuje atom vodíku, nižší alkylskupinu nebo nižší alkoxyskupinu pouze v tom případě, že R2 představuje hydroxyskupinu, kyslíkový atom ketoskupiny, aminoskupinu nebo merkaptoskupinu.
··· ··· ·· ·· ·· · φ φ · · φ φφφφ · φ φ φ φφφ · φ · • Φ 4ΦΦ ·· · ·· ··
V přednostním provedení vynálezu se chemickou modifikací kryptofycinového metabolitu izolovaného výše uvedeným postupem získá jiná sloučenina, která rovněž má tuto struktu ru. Postupy chemické modifikace kryptofycinových sloučenin, kterými se vyrábějí další sloučeniny podle vynálezu, jsou odborníkům v tomto oboru dostupné. Kromě toho jsou další postupy podrobněji popsány v příkladech provedení vynálezu.
Kromě nových kryptofycinových sloučenin podle vynálezu zahrnujících kryptofyciny 1, 3, 5, 13 a 15, jsou předmětem vynálezu také nové způsoby jejich výroby a jejich použití. Struktura těchto sloučenin odpovídá následujícím vzorcům:
Kryptofycin 1
Kryptofycin 3 • ®
Kryptofycin 5
Kryptofycin 13
Kryptofycin 15
Vynález je zaměřen na jakýkoliv kmen Nostoc sp., přednostně na kmen Nostoc sp. GSV 224 pro produkci kryptofycinových sloučenin. Kmen Nostoc sp. GSV 224 byl uložen 7. října 1993 v souladu s Budapešťskou dohodou o mezinárodním ukládání mikroorganismů pro účely patentového řízení u Patent Culture Depository of the American Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, ··· · • · ·· «
USA pod přírůstkovým číslem ATCC 55483. Předpokládá se, že při provádění postupu podle vynálezu lze použít i jiných kmenů Nostoc sp., konkrétně kmene MB 5357 dříve uloženého firmou Merck and Co. pod přírůstkovým číslem ATCC 53789.
Jak je tomu i u jiných organismů, podléhají vlastnosti Nostoc sp. změnám. Rekombinanty, varianty nebo mutanty daných kmenů se lze získat například působením různých známých fyzikálních a chemických mutagenů, jako je ultrafialové záření, rentgenové záření, gamma-záření a N-methyl-N'-nitroN-nitrosoguanidin. Všechny přírodní a indukované varianty, mutanty a rekombinanty daných kmenů, které si zachovávají vlastnost produkce kryptofycinových sloučenin spadají do rozsahu tohoto vynálezu.
Kryptofycínové sloučeniny podle vynálezu je možno připravovat tak, že se kmen Nostoc sp. kultivuje za submerzních aerobních podmínek ve vhodném kultivačním médiu, dokud se nedosáhne podstatné antibiotické účinnosti. Pro výrobu těchto sloučenin je rovněž možno použít jiných kultivačních technik, jako je růst na povrchu ztuženého média. Jak je odborníkům v tomto oboru známo, kultivační médium použité pro růst daného kmene může zahrnovat jeden nebo více zdrojů dusíku a uhlíku a anorganické soli. Při volbě zdrojů uhlíku a dusíku se berou v potaz hlediska hospodárnosti výroby, optimálního výtěžku a snadnosti izolace produktu. Mnohé živné anorganické soli, které se přidávají do kultivačního média, jsou obvyklé rozpustné soli schopné poskytnout příslušné ionty železa, draslíku, sodíku, hořčíku, vápníku a ionty amoniové, chloridové, karbonátové, fosfátové, sulfátové, nitrátové apod.
Kultivační médium by mělo rovněž obsahovat esenciální stopové prvky, které jsou nezbytné pro růst a vývoj organismů. Tyto stopové prvky se obvykle vyskytují jako ·· ···· ·· • · · · · 9 9 • · · · 9 · 9 nečistoty v jiných složkách média v dostatečných množstvích, která vyhovují růstovým požadavkům organismů. Přináší-li při kultivaci ve velkém měřítku problémy pěnění, může být žádoucí přidávat k médiu malá množství (tj. 0,2 ml/litr) protipěnového činidla, jako je polypropylenglykol (o molekulové hmotnosti asi 2000).
Při výrobě velkých množství kryptofycinových sloučenin se může používat submerzní aerobní kultivace v nádržích (tancích). Malá množství je možno získat kultivací v třepané nádobě. Vzhledem k tomu, že při inokulaci rozměrných nádrží organismy dochází obvykle k časovému zpoždění produkce metabolitu, používá se přednostně vegetativního inokula. Vegetativní inokulum se připraví tak, že se malý objem kultivačního média inokuluje fragmenty formy organismu obsahující vegetativní trichom nebo heterocystu, čímž se získá čerstvá aktivně rostoucí kultura organismu. Vegetativní inokulum se poté převede do větší nádrže. Médium použité pro vegetativní inokulum může být stejné jako médium použité pro kultivaci nebo fermentaci ve větším měřítku, je však možno použít i média jiného.
Organismy mohou růst při teplotách od asi 20 do asi 30°C při intenzitě dopadajícího světla od asi 100 do asi 200 μιηοΐ fotonů.m”2.s1 (fotosyntenticky účinné záření).
Jak je to obvyklé u aerobních submeržních kultivačních postupů tohoto typu, zavádí se do kultury plynný oxid uhličitý tak, že se přidává k proudu sterilního vzduchu, kterým se probublává kultivační médium. Pro dosažení efektivní produkce kryptofycinových sloučenin činí koncentrace oxidu uhličitého asi 1 % (při 24°C za tlaku 0,1 MPa).
Způsoby kultivace Nostoc sp. jsou popsány v dosavadním stavu techniky, konkrétně v US patentu č. 4 946 835.
• · • · • ·
Tato citace je zde uvedena náhradou za přenesení celého obsahu uvedené publikace do tohoto textu.
Produkce kryptofycinových sloučenin může být sledována během kultivace zkoušením vzorků živné půdy proti organismům, o nichž je známé, že jsou sensitivní vůči těmto antibiotikům. Jedním z užitečných zkušebních organismů je Candida albicans.
Po produkčním stupni za podmínek submerzní aerobní kultivace se kryptofycinové sloučeniny podle vynálezu mohou izolovat z kultury a kultivačního média postupy známými odborníkům v tomto oboru. Izolace se obecně provádí tak, že se nejprve přefiltruje kultivační médium, aby se oddělily buňky řasy, které se poté lyofilizují. Lyofilizovanou řasu je možno extrahovat vhodnými rozpouštědly, jako je ethanol, methanol, isopropylalkohol nebo dichlormethan. Kryptofyciny je možno oddělovat tak, že se takto získaný extrakt, jakož i kultivační médium, podrobí rychlé chromatografií na sloupci s obrácenými fázemi. Kryptofyciny je možno purifikovat vysoceúčinnou kapalinovou chromatografií s obrácenými fázemi (HPLC).
Jak je zřejmé z jejich struktury, kryptofycinové sloučeniny obsahují skupiny, které jsou schopné chemické modifikace. Do rozsahu sloučenin podle vynálezu spadají kryptofyciny, které vykazují antineoplastickou účinnost. Tak například deriváty, které jsou uvedeny pro ilustraci vynálezu, zahrnují sloučeniny které obsahují epoxidový kyslík nebo hydroxyskupiny na atomech uhlíku C-7 a C-8 jednotky A nebo skupinu 2-hydroxy-4-methylpentanové kyseliny jednotky B na obr. 1. Takové deriváty nových a dříve popsaných sloučenin, které vykazují požadovanou antineoplastickou účinnost, spadají do rozsahu tohoto vynálezu. Vzájemná souvislost mezi strukturou kryptofycinových sloučenin a neoplastickou účin: i • · · · · · • · * • ♦ ·
·· ·· » · · <
» · ·· « · · · 4 • · 4 • · · · ností uvedeny v příkladech provedení vynálezu uvedených dále.
Zatímco o určitých kryptofycinových sloučeninách je známo, že jsou metabolity produkované řasou podle vynálezu, jiné kryptofycinové sloučeniny, například ryptofyciny 8 až 15, je možno připravit z metabolitů za použití zveřejněných postupů známých odborníkům v tomto oboru. Tyto syntetické postupy jsou například popsány v US patentech č. 4 868 208,
845 086 a 4 845 085, které jsou zde uvedeny náhradou za přenesení jejich celého obsahu do tohoto popisu. Je však možno použít i jiných postupů známých odborníkům v tomto oboru. Kromě toho jsou postupy přípravy derivátů podle vynálezu uvedeny v příkladech provedení.
Kryptofyciny jsou silné protinádorové a antifungální depsipeptidy z modrozelené řasy (cyanobacteria) náležící do Nostocaceae. První kryptofycin, kryptofycin 1, byl izolován ze suchozemské řasy Nostoc sp. ATCC 53789 a bylo zjištěno, že je velmi účinný proti houbám, zvláště kmene Cryptococcus (R. E. Schwartz et al., J. Ind. Microbiol. 1990, 5: 113 až 124). Kryptofycin 1 byl rovněž izolován ze suchozemské řasy Nostoc sp. GSV 224, spolu s 24 dalšími kryptofycinovými analogy, jako vedlejšími složkami řasy, a bylo zjištěno, že je velmi účinný proti subkutánně transplantovaným tumorům u myši (G. Trimurtulu et al., J. Am. Chem. Soc. 1994, 116:
4729 až 4737; R. Barrow et al., J. Am. Chem. Soc. 1995, 117: 2479 až 2490). Dříve byly popsány dva analogy z Nostoc GSV 224, kryptofycin 3 a 5, jako polosyntetické analogy kryptofycinů 1 (D. F. Sešin, US patent č. 4 845 085, vydaný 4. července 1989; D. F. Sešin et al., US patent č. 4 868 208 vydaný 19. září 1989). Kryptofyciny při Corbettově zkoušce vykazují významnou selektivní cytotoxicitu vůči tumorům a jsou stejně cytotoxické jak vůči nádorovým buňkám sensitivním, tak i resistentním na léčiva. Bylo zjištěno, že kryptofycin ···· • *
vykazuje stejný typ účinnosti jako vinblastin, ale liší se od něj v nevratnosti inhibice mikrotubulárního uskupení (C.
D. Smith et al., Cancer Res., 1994, 54: 3779 až 3784). Jeden z kryptofycinů z Nostoc sp. GSV 224, kryptofycin 24, byl izolován z mořské houby a byl pojmenován jako arenastatin A (M. Kobayashi et al., Tetrahedron Lett. 1994, 35: 7969 až 7972; M. Tobayashi et al., Tennen Yuki Kagobutsu Toronkai Koen Yoshishu 1994, 36., 104 až 110).
Dvacet dva dalších kryptofycinových sloučenin, které jsou zde označovány jako kryptofyciny 2, 4, 6, 7, 16 až 19, 21, 23, 24, 26, 28 až 31, 40, 43, 45, 49, 50 a 54, je popsáno v US patentové přihlášce č. 08/172 632 podané 21. prosince 1993 a 08/249 955 podané 27. května 1994 a v mezinárodní patentové přihlášce PCT/US94/14740 podané 21. prosince 1994, jako sloučeniny které jsou bud metabolity izolovanými z kmene Nostoc sp. nebo jsou polosyntetickými deriváty těchto metabolitů. V těchto patentových přihláškách je také uvedena charakterizace zvolených kryptofycinových sloučenin jako antimikrotubulárních činidel s klinickou účinností vůči širokému spektru nádorů implantovaných myším, včetně nádorů resistentních vůči léčivu (DR) nebo několika léčivům (MDR).
Předmětem vynálezu jsou nové kryptofycinové sloučeniny obecného vzorce
• · · · ···· ·· · ···· • « · 9 · · ···♦ • · · ·· · · · ···· · **· · b * · * ·
- 40 - ·’ “· ·· ’ ·· ·* /
kde
Ar představuje methylskupinu, fenylskupinu nebo kterou koliv jednoduchou nesubstituovanou nebo substituovanou aromatickou nebo heteroaromatickou skupinu;
Ri představuje atom halogenu, merkaptoskupinu, aminoskupinu, monoalkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, trialkylamoniumskupinu, alkylthioskupinu, dialkylsulfoniumskupinu, sulfátovou nebo fosfátovou skupinu;
R2 představuje hydroxyskupinu nebo merkaptoskupinu; nebo
Rj 3 R2 brány dohromady tvoří epoxidový, aziridinový, episulfidový, sulfátový nebo monoalkylfosfátový kruh; nebo
R^ 3 R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C1Q a Cig;
R3 představuje nižší alkylskupinu;
R4 a R5 představují atomy vodíku; nebo
R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14;
R6 představuje benzylskupinu, hydroxybenzylskupinu, alkoxybenzylskupinu, halogenhydroxybenzylskupinu, dihalogenhydroxybenzylskupinu, halogenalkoxybenzylskupinu nebo dihalogenalkoxybenzylskupinu;
• · · ·
- 41 ·· ··
R7, Rg, Rg a R10 představuje každý nezávisle atom vodíku nebo nižší alkylskupinu; a
X a Y představuje každý nezávisle atom kyslíku, iminoskupinu nebo alkylaminoskupinu.
Podle přednostního provedení těchto kryptofycinových sloučenin jsou předmětem vynálezu kryptofycinové sloučeniny výše uvedeného obecného vzorce, kde Rg představuje ethylskupinu, propylskupinu, isopropylskupinu, butylskupinu, isobutylskupinu, pentylskupinu nebo isopentylskupinu.
V jiném přednostním provedení R7 představuje ethylskupinu, propylskupinu, isopropylskupinu, butylskupinu, isobutylskupinu, pentylskupinu nebo isopentylskupinu; a ještě v dalším přednostním provedení R? představuje atom vodíku, Rg představuje methylskupinu, Rg představuje methylskupinu; a X a Y nepředstavují oba atom kyslíku.
Dále jsou předmětem vynálezu přednostně tyto krypto fycinové sloučeniny, kde Rg představuje ethylskupinu, propyl skupinu, isopropylskupinu, butylskupinu, isobutylskupinu, pentylskupinu nebo isopentylskupinu. Podle jiného přednostní ho provedení jsou předmětem vynálezu tyto kryptofycinové sloučeniny, kde Rg představuje methylskupinu, ethylskupinu, propylskupinu, butylskupinu, isobutylskupinu, pentylskupinu nebo isopentylskupinu. V ještě dalším přednostním provedení spadají do rozsahu vynálezu výše uvedené kryptofyciny, kde R10 představuje methylskupinu, ethylskupinu, propylskupinu, butylskupinu, isobutylskupinu, pentylskupinu nebo isopentylskupinu.
Předmětem vynálezu jsou dále krytofycinové sloučeniny, v nichž alespoň jedna ze skupin vázaných k uhlíkovému atomu Cg, C6, Clo, Clg, C17 a Clg vykazuje R-stereochemii. Podle dalšího provedení jsou předmětem vynálezu sloučeniny,
• ® v nichž alespoň jedna ze skupin vázaných k uhlíkovému atomu C3, Cg, C1Q, C16, C17 a Cjg vykazuje S-stereochemii.
Podle jednoho provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje fenylskupinu, R-L a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C18 a C19, R3, R? a Rg představují methylskupiny, R4 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy c13 a c14' r6 Představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, R10 představuje atom vodíku a X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 51, odpovídá následujícímu vzorci
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje fenylskupinu, R1 a R2 bránY dohromady tvoří R,R-epoxidový kruh, R3, R? a Rg představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, R10 představuje atom vodíku a X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 52, odpovídá následujícímu vzorci ·« * ·· ··>· ·· ·· • · · · ·· · ♦ ♦ · · * « · · · · ♦ · · · · · · • · · « · · · · · «· «·· ·· · »· ··
Kryptofycin 52
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje fenylskupinu, Rj a R2 brány dohromady tvoří S,S-epoxidový kruh, R3, R7 a Rg představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a c14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, R10 představuje atom vodíku a X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 53, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 53
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje fenylskupinu,
Φ· ΦΦ ř φ φ « φφφ • φ φ · « • Φ • φ « φ představuje S-chlor, R2 představuje R-hydroxyskupinu, Rg, R7 a Rg představují methylskupiny, R4 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy c13 a C14, R6 představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, R10 představuje atom vodíku a X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinů 55, odpovídá následujícímu vzorci
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje fenylskupinu, R^ a R2 brány dohromady tvoří R,R-epoxidový kruh, R3, R7 a Rg představují methylskupiny, R4 a Rg představují atomy vodíku, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, R10 představuje atom vodíku a X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinů 57, odpovídá následujícímu vzorci ·· · ·* ···· ·· ·· • · ·· « · · 9 9 9 9
9 · 9 · 9 9 9 99
9 9 9 9 9 9 9 99 9 9 9 . _ · · 9 9 9 9 9 9 — 45 — «* ··· ·· * ♦· ··
Kryptofycin 57
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje fenylskupinu, R-L představuje S-chlor, R2 představuje R-hydroxyskupinu,
R3, R? a Rg představují methylskupiny, R4 a R5 představují atomy vodíku, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, R10 představuje atom vodíku a X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 58, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 58
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje fenylskupinu, R^ a R2 brány dohromady tvoří R,R-episulfidový kruh, R3, R7 a Rg představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady ·
• 9 9 9 9
4 9 ·
9 9 9 9
9 9 9
9 9 9 9 ····
9 ·
9 9
9
99
9 9 9
9 99
9 9 9 • 4 4 «9 tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, R10 představuje atom vodíku a X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 61, odpovídá následujícímu vzorci
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje p-methoxyfenylskupinu, Rj a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy Clg a C19, R3 a R? představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 81, odpovídá následujícímu vzorci
4444 • 4 • 4 4 ·
4
4
4 • 4 4
4 4 4 • 4 4
4· 4
44
4 4 4
4 44
4444 4
4 4
44
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje methylskupinu, Rx a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy Clg a Clg, R3 a R? představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy c13 a c14' r6 přestavuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu,
Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 82, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 82
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje methylskupinu, Rj a R2 brány dohromady tvoří R,R-epoxidový kruh, R3 a R? ·· ····
- 48 44 »4 ► * 4 » 4 44 ·· 4 4 4 4
44 představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor~4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku a X a Y před stavují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 90, odpovídá následujícímu vzorci
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje methylskupinu, a R2 brány dohromady tvoří S,S-epoxidový kruh, R3 a R7 představují methylskupiny, R4 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 91, odpovídá následujícímu vzorci rY
Kryptofycin 91 • 9 • 9 • · ·
9 9 · 9 • · ·
9 9 9
9 9
999 99
99
9 9 9 9
9 9 99 ♦ 9 9999 9
9 9 9
9 9 99
9999
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje fenylskupinu, Rg a R2 brány dohromady tvoří R,R-aziridinový kruh, R3, R7 a Rg představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy Cg3 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, R10 představuje atom vodíku a X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 97, odpovídá následujícímu vzorci
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje p-fluorfenylskupinu, Rg a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy Cg8 a Cg9, R3 a R7 představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy Cg3 a Cg4, Rg představuje 3-chlor-4methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a Rg0 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 110, odpovídá následujícímu vzorci ·* · ······ ·· ·· • 9 · · · · « ···· • · ··*·· · ··· · * *«· «·· ···
- ·· ··· ·· · ·♦ ··
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje p-tolylskupinu, Rx a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy Clg a C19, R3 a R7 představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 111, odpovídá následujícímu vzorci
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje 2-thienyl• 4
4 4
444
44
4 4 4
4 44
4 4 4
4 4
44 skupinu, R-l a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C18 a Clg, R3 a R? představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 112, odpovídá následujícímu vzorci
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje p-fluorfenylskupinu, R^ a R2 brány dohromady tvoří R,R-epoxidový kruh, R3 a R? představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy c13 a C14, R6 představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 115, odpovídá následujícímu vzorci »99 « I • · I • 9 99
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje p-fluorfenylskupinu, Rj a R2 brány dohromady tvoří S,S-epoxidový kruh, R3 a R7 představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 116, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 116
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje p-tolyl53 ·· · ·· ···· ·· ·· • » · · · · · ··«· • · · ·· ·· · · ·« · · • · · « · · · · · ·· ··· ·· · ·· ·· skupinu, RT a R2 brány dohromady tvoří R,R-epoxidový kruh, Rg a R7 představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy c13 a c14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 117, odpovídá následujícímu vzorci
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje p-tolylskupinu, Rj a R2 brány dohromady tvoří S,S-epoxidový kruh, R3 a R7 představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 118, odpovídá následujícímu vzorci ·· ·· ···· ·· ·· • · · · · 4 · • · e · · ·» • · · · · 4 · · · • · · · · · ·· · «· ··
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje 2-thienylskupinu, R3 a R2 brány dohromady tvoří R,R-epoxidový kruh, R3 a Ry představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, R8 a R10 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 119, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 119
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje 2-thienyl
99 • • • 99 ·· • 9999 • · 99 • · 9· 9
• • • • · 9 · • 999 •
• • • • • · • 9
99 • 99 99 • 99 99
skupinu, a R2 brány dohromady tvoří S ,S-epoxidový kruh, R3 a Ry představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy c13 a c14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 120, odpovídá následujícímu vzorci
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje fenylskupinu, Rj a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy Clg a Clg, R3 a R? představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, R6 představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku, X představuje atom kyslíku a Y představuje atom dusíku nesoucí jediný atom vodíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 121, odpovídá následujícímu vzorci
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje fenylskupinu, R-l a R2 brány dohromady tvoří R,R-epoxidový kruh, R3 a R? představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku, X představuje atom kyslíku a Y představuje atom dusíku nesoucí jediný atom vodíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinů 122, odpovídá následujícímu vzorci
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje fenyl• · skupinu, Rj a R2 brány dohromady tvoří S,S-epoxidový kruh, R3 a R? představují methyl skupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku, X představuje atom kyslíku a Y představuje atom dusíku nesoucí jediný atom vodíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinů 123, odpovídá následujícímu vzorci
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje p-chlorfenylskupinu, Rj a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy Cig a Cig, R3 a R? představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, R6 představuje 3-chlor-4methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a Rlo představují atomy vodíku, X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinů 124, odpovídá následujícímu vzorci
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje p-chlorfenylskupinu, Rj a R2 brány dohromady tvoří R,R-epoxidový kruh, R3 a R? představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a Rlo představují atomy vodíku, X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 125, odpovídá následujícímu vzorci
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje p-chlorfenyl• · • ·
- 59 • · · · · · · • · · » · · · • ·· · · · ♦ · · • · · · · · ·· · ·· ·· skupinu, Rj a R2 brány dohromady tvoří S,S-epoxidový kruh, R3 a R7 představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku, X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinů 126, odpovídá následujícímu vzorci
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje fenylskupinu, R^ představuje S-chlor, R2 představuje R-hydroxyskupinu,
Rg a R7 představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14,
R6 představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku,
X představuje atom kyslíku a Y představuje atom dusíku nesoucí jediný atom vodíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinů 127, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 127
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje p-tolylskupinu, Rj představuje S-chlor, R2 představuje R-hydroxyskupinu, R3 a R7 představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 128, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 128
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje p-tolylsku• · • · · ·
4
pinu, Rj představuje R-chlor, R2 představuje S-hydroxyskupinu, Rg a R7 představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy c13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 130, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 130
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje p-tolylskupinu, R3 představuje R-chlor, R2 představuje R-hydroxyskupinu, R3 a R? představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 131, odpovídá následujícímu vzorci • · · · · «9 9 9999 9
999 999 999
999 99 9 99 99
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje p-chlorfenylskupinu, R^ představuje S-chlor, R2 představuje R-hydroxyskupinu, R3 a R? představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 132, odpovídá následujícímu vzorci
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje p-chlor·· · · · ···· · · · · · ··· ·· · · · · · • · · · · ·· · ···· · ··· · · · · · · ·· ··· ·· * ·· ·· fenylskupinu, R·^ představuje R-chlor, R2 představuje
S-hydroxyskupinu, R3 a R7 představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, R8 a R10 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 133, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 133
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Ar představuje p-chlorfenylskupinu, R-^ představuje R-chlor, R2 představuje R-hydroxyskupinu, R3 a R? představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 134, odpovídá následujícímu vzorci • 9 9 99 9999 99 ·· • 999 99 9 9999 * 9 99 99 9 9999 9 999 999 999
- 64 - ·· ··· ·· · ·· ··
Dále jsou uvedeny další kryptofycinové sloučeniny, které jsou substituovány způsobem, který odpovídá následujícímu strukturnímu vzorci.
kde
R^ představuje atom vodíku nebo halogenu;
R2 představuje atom vodíku, kyslíkový atom ketoskupiny nebo hydroxyskupinu; nebo
R^ a R2 brány dohromady tvoří epoxidový kruh; nebo R-j_ a R2 brány dohromady tvoří episulfidový kruh;
R3 představuje atom vodíku nebo nižší alkylskupinu;
R4 představuje atom vodíku nebo hydroxyskupinu;
• φ φ ΦΦ φφφφ ΦΦ ΦΦ φφφφ ΦΦ φ φφφφ φφφ φφφ φφφφ φ φ φ ΦΦ φ φ φ φφφφ φ φφφ φφφ φφφ
ΦΦ φφφ ΦΦ φ ΦΦ ΦΦ
R5 představuje atom vodíku nebo hydroxyskupinu; nebo
R4 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu;
R6 představuje atom vodíku nebo halogenu;
přičemž, když Rx a R2 brány dohromady tvoří epoxidovou skupinu, R4 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu a Rg představuje atom chloru, potom R3 nepředstavuje methylskupinu .
Podle jednoho provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde R3 představuje atom vodíku,
R2 představuje kyslíkový atom ketoskupiny, R3 představuje S-methylskupinu, R4 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu a Rg představuje atom chloru. Struktura této sloučeniny, kryptofycinů 20, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 20
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rj představuje S-brom, R2 představuje R-hydroxyskupinu, R3 představuje S-methylskupinu, R4 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu a Rg představuje atom chloru. Struktura této sloučeniny, kryptofycinů 25, odpovídá následujícímu vzorci ·· · ·· φ φφ φ • · φφ φ φ · φ φ φ φ φ φ φ φ • · · φ φ φ φφ ·ΦΦ φφ φ φφ φφ • · φ ·· · · φ φ φ φ φφ φφ
Kryptofycin 25
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde R-^ představuje R-chlor, R2 představuje R-hydroxyskupinu, R3 představuje S-methylskupinu, R4 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu a Rg představuje atom chloru. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 27, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 27
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde R·^ a R2 brány dohromady představují R,R-epoxidový kruh, R3 představuje S-methylskupinu, R4 a Rg představují atomy vodíku a Rg představuje atom chloru. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 32, odpovídá následujícímu vzorci • to · toto toto·· • · · · · · · ·· ····· · ··· · · e ·· ··· ·· to
·· toto • · · • to · · · • · · ·· ··
Kryptofycin 32
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rj, R4 a R5 představují atomy vodíku, R2 představuje S-hydroxyskupinu, R3 představuje R-methylskupinu a Rg představuje atom chloru. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 33, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 33
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde R^, R2, R4 a Rg představují atomy vodíku, R3 představuje R-methylskupinu a Rg představuje atom vodíku. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 34, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 34 tt ·· * · · · ·· • · · · • · · ·· · • ···· · • · · ·· ··
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde představuje R-brom, R2 představuje R-hydroxyskupinu, R3 představuje S-methylskupinu a R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu a Rg představuje chlor. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 37, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 37
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde R^ a R2 dohromady tvoří S,Sepoxidový kruh, R3 představuje S-methylskupinu a R4 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu a Rg představuje chlor. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 38, odpovídá následujícímu vzorci
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde R3 a R2 dohromady tvoří S,Repoxidový kruh, R3 představuje S-methylskupinu a R4 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu a Rg představuje chlor.
·· 4 · · 4 · · · 4 4 4 · • •44 4 4 4 4··· • 4 4 44 44 4 4 4 · 4 4
444 444 444
444 44 4 44 44
Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 39, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 39
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rj a R2 dohromady tvoří R,Repoxidový kruh, R3 představuje S-methylskupinu a R4 představuje S-hydroxyskupinu, Rg představuje R-hydroxyskupinu a Rg představuje chlor. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 41, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 41
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde a R2 dohromady tvoří R,Repoxidový kruh, R3 představuje S-methylskupinu a R4 představuje R-hydroxyskupinu, Rg představuje S-hydroxyskupinu a Rg představuje chlor. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 42, odpovídá následujícímu vzorci • · * · · ·«· · · ♦ ·· • · · · ·· · · · · · • · · · · · · · ··· · · ··· ··· ··· — 70 — ·· ··· ·· · ·· ··
Kryptofycin 42
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rj představuje atom vodíku, R2 představuje S-hydroxyskupinu, R3 představuje R-methylskupinu a R4 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu a Rg představuje chlor. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 48, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 48
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rj představuje S-chlor, R2 představuje R-hydroxyskupinu, R3 představuje S-methylskupinu a R4 a Rg představují atomy vodíku a Rg představuje chlor. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 59, odpovídá následujícímu vzorci
• • 9 • • 9 9 99 • 9 99 9 9 9 9 9 9 9 9 99 9
• • 9 9 9 9 9 9 999 9 9
• • 9 • 9 · 9 9 9
• · 9 9 9 9 9 • 9 9 9 9
Kryptofycin 59
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rg a R2 dohromady tvoří S,Sepisulfidový kruh, R3 představuje S-methylskupinu a R4 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu a Rg představuje chlor. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 60, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 60
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rg představuje S-chlor, R2 představuje R-hydroxyskupinu, R3 představuje atom vodíku a R4 a R5 brány dohromady představuje dvojnou vazbu a Rg představuje chlor. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 63, odpovídá následujícímu vzorci ··
A A AA · · • A A A A
A A A A A · A A A · · • A AAA ·· ·· AAAA ·· AA A A A A A
A A · AA
A A ··· A A A AAA
A A A AA
Kryptofycin 63
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rx představuje R-chlor, R2 představuje R-hydroxyskupinu, R3 představuje S-methylskupinu a R4 a R5 představují atomy vodíku a Rg představuje chlor. Struktura této sloučeniny, kryptofycinů 64, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 64
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rj představuje R-chlor, R2 představuje S-hydroxyskupinu, R3 představuje S-methylskupinu a R4 a R5 brány dohromady představuje dvojnou vazbu a R6 představuje chlor. Struktura této sloučeniny, kryptofycinů 69, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 69
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rj představuje S-chlor, R2 představuje S-hydroxyskupinu, R3 představuje S-methylskupinu a R4 a R5 brány dohromady představuje dvojnou vazbu a R6 představuje chlor. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 70, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 70
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rj představuje R-brom, R2 představuje S-hydroxyskupinu, R3 představuje S-methylskupinu a R4 a Rg brány dohromady představuje dvojnou vazbu a Rg představuje chlor. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 71, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 71
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde RT představuje S-brom, R2 představuje S-hydroxyskupinu, R3 představuje S-methylskupinu a R4 a R5 brány dohromady představuje dvojnou vazbu a Rg představuje chlor. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 72, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 72
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rj představuje S-chlor, R2 představuje S-hydroxyskupinu, R3 představuje S-methylskupinu a R4 a R5 brány dohromady představuje dvojnou vazbu a Rg představuje chlor. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 73, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 73
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde Rj představuje S-chlor, R2 představuje R-hydroxyskupinu, R3 představuje S-methylskupinu a R4 a R5 brány dohromady představuje dvojnou vazbu a Rg představuje vodík. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 74, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 74
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde představuje S-fluor, R2 představuje R-hydroxyskupinu, R3 představuje S-methylskupinu a R4 a Rg brány dohromady představuje dvojnou vazbu a Rg představuje chlor. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 75, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 75
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu kryptofycinová sloučenina, kde R-|_ představuje R-fluor, R2 představuje R-hydroxyskupinu, R3 představuje S-methylskupinu a R4 a Rg brány dohromady představuje dvojnou vazbu a Rg představuje chlor. Struktura této sloučeniny, kryptofycinu 76, odpovídá následujícímu vzorci
Kryptofycin 76
Předmětem vynálezu jsou také způsoby výroby výše uvedených kryptofycinových sloučenin, jakož i dosud známých kryptofycinových sloučenin, za použití postupů totální syntézy.
Předmětem vynálezu jsou také způsoby výroby nových kryptofycinových metabolitů, jakož i dosud známých kryptofycinových metabolitů, za použití způsobů podle vynálezu.
9999
9
- 77 ··
Předmětem vynálezu je také způsob výroby kryptofycinu, který zahrnuje výběr allylicky substituovaného E-alkenu; přesmyk allylicky substituovaného E-alkenu za použití stereospecifického Wittigova přesmyku; převedení této sloučeniny na první δ-aminokyselinu nebo δ-hydroxykyselinu; kopulaci první kyseliny s druhou a-aminokyselinou za vzniku první podjednotky; kopulaci třetí β-aminokyseliny se čtvrtou α-hydroxykyselinou nebo a-aminokyselinou za vzniku druhé pod- jednotky; a kopulaci první podjednotky s druhou podjednotkou za vzniku kryptofycinu.
Podle přednostního provedení je předmětem vynálezu způsob výroby kryptofycinu, při němž se získá kryptofycinový produkt obecného vzorce
Ar představuje methylskupinu, fenylskupinu nebo kterou koliv jednoduchou nesubstituovanou nebo substituovanou aromatickou nebo heteroaromatickou skupinu;
Rj představuje atom halogenu, merkaptoskupinu, aminoskupinu, monoalkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, trialkylamoniumskupinu, alkylthioskupinu, dialkylsulfoniumskupinu, sulfátovou nebo fosfátovou skupinu;
• ·
- 78 • · ·· • 9 9 9 9 9
9 ·
R2 představuje hydroxyskupinu nebo merkaptoskupinu;
nebo
Rj a R2 brány dohromady tvoří epoxidový, aziridinový, episulfidový, sulfátový nebo monoalkylfosfátový kruh; nebo
Rj a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy Clg a Cig;
R3 představuje nižší alkylskupinu;
R4 a R5 představují atomy vodíku; nebo
R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14;
Rg představuje benzylskupinu, hydroxybenzylskupinu, alkoxybenzylskupinu, halogenhydroxybenzylskupinu, dihalogenhydroxybenzylskupinu, halogenalkoxybenzylskupinu nebo dihalogenalkoxybenzylskupinu;
R7, Rg, Rg a R10 představuje každý nezávisle atom vodíku nebo nižší alkylskupinu; a
X a Y představuje každý nezávisle atom kyslíku, iminoskupinu nebo alkylaminoskupinu.
Přednost se dává způsobu podle vynálezu, při němž se získá kryptofycin, kde Ar představuje fenylskupinu; R3 představuje methylskupinu; Rg představuje halogenmethoxybenzylskupinu; R7 představuje atom vodíku; Rg představuje methylskupinu; Rg představuje isobutylskupinu; R10 představuje atom vodíku; X představuje atom kyslíku a Y představuje atom kyslíku.
Kromě způsobů výroby těchto kryptofycinů podle vynálezu výše uvedeného obecného vzorce jsou předmětem vynálezu způsoby výroby dříve popsaných kryptofycinů a kryptofycinů známých z dosavadního stavu techniky. Kryptofyciny 1, 8 a 35 lze vyrobit plně synteticky. Jako příklad dříve popsaných kryptofycinů známých z dosavadního stavu techniky, které lze vyrobit plně synteticky, je možno uvést sloučeniny obecného vzorce
Rj představuje atom halogenu; a
R2 představuje hydroxyskupinu; nebo
R^ a R2 brány dohromady tvoří epoxidový kruh;
R3 představuje atom vodíku; a
R4 představuje atom vodíku; nebo
R3 a R4 brány dohromady představují dvojnou vazbu.
Předmětem vynálezu je také farmaceutický prostředek pro inhibici proliferace hyperproliferativní savčí buňky, jehož podstata spočívá v tom, že zahrnuje účinné množství kryptofycinové sloučenin obecného vzorce • · · · « · • *
- 80 ··
kde
Ar představuje methylskupinu, fenylskupinu nebo kterou koliv jednoduchou nesubstituovanou nebo substituovanou aromatickou nebo heteroaromatickou skupinu;
Rj představuje atom halogenu, merkaptoskupinu, aminoskupinu, monoalkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, trialkylamoniumskupinu, alkylthioskupinu, dialkylsulfoniumskupinu, sulfátovou nebo fosfátovou skupinu;
R2 představuje hydroxyskupinu nebo merkaptoskupinu;
nebo
Rj a R2 brány dohromady tvoří epoxidový, aziridinový, episulfidový, sulfátový nebo monoalkylfosfátový kruh; nebo
R^ a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C18 a Cig;
R3 představuje nižší alkylskupinu;
R4 a R5 představují atomy vodíku; nebo • 9 9999
• 4 · · 9 9 »44 999·
9· · ···· • 9 9 ··
R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a c14;
R6 představuje benzylskupinu, hydroxybenzylskupinu, alkoxybenzylskupinu, halogenhydroxybenzylskupinu, dihalogenhydroxybenzylskupinu, halogenalkoxybenzylskupinu nebo dihalogenalkoxybenzylskupinu;
R7, Rg, Rg a Rlo představuje každý nezávisle atom vodíku nebo nižší alkylskupinu; a
X a Y představuje každý nezávisle atom kyslíku, iminoskupinu nebo alkylaminoskupinu;
a farmaceuticky vhodný nosič.
Podle přednostního provedení farmaceutický prostředek podle vynálezu zahrnuje alespoň jedno další antineoplastické činidlo.
Předmětem vynálezu je také způsob inhibice proliferace savčí buňky, při němž se savčí buňka uvede do styku s kryptofycinovou sloučeninou vzorce
kde •4 4444
44
4 4 4
4 44
4 4 ·
4 4
Ar představuje methylskupinu, fenylskupinu nebo kterou koliv jednoduchou nesubstituovanou nebo substituovanou aromatickou nebo heteroaromatickou skupinu;
představuje atom halogenu, merkaptoskupinu, aminoskupinu, monoalkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, trialkylamoniumskupinu, alkylthioskupinu, dialkylsulfoniumskupinu, sulfátovou nebo fosfátovou skupinu;
R2 představuje hydroxyskupinu nebo merkaptoskupinu;
nebo
R-^ a R2 brány dohromady tvoří epoxidový, aziridinový, episulfidový, sulfátový nebo monoalkylfosfátový kruh; nebo
Rj a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C18 a Cig;
Rg představuje nižší alkylskupinu;
R4 a R5 představují atomy vodíku; nebo
R4 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14;
Rg představuje benzylskupinu, hydroxybenzylskupinu, alkoxybenzylskupinu, halogenhydroxybenzylskupinu, dihalogenhydroxybenzylskupinu, halogenalkoxybenzylskupinu nebo dihalogenalkoxybenzylskupinu;
Ry, r8, Rg a R10 představuje každý nezávisle atom vodíku nebo nižší alkylskupinu; a «4··
• 4
444
4
4 • 4 • 4
44
9 4 4
4 44
4· 4 4 4
4 4
44
X a Υ představuje každý nezávisle atom kyslíku, iminoskupinu nebo alkylaminoskupinu v množství postačujícím pro inhibici proliferace buňky.
V přednostním provedení se při tomto postupu savčí buňka rovněž uvádí do styku s alespoň jedním dalším neoplastickým činidlem. Takovou savčí buňkou je přednostně buňka hyperproliferativní. Podle dalšího přednostního provedení je hyperproliferativní buňkou buňka lidská.
Předmětem vynálezu je také způsob inhibice proliferace hyperproliferativní savčí buňky, která má fenotyp resistentní vůči více léčivům, při němž se buňka uvádí do styku s kryptofycinovou sloučeninou obecného vzorce
Ar představuje methylskupinu, fenylskupinu nebo kterou koliv jednoduchou nesubstituovanou nebo substituovanou aromatickou nebo heteroaromatickou skupinu;
Rj představuje atom halogenu, merkaptoskupinu, aminoskupinu, monoalkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, trialkylamoniumskupinu, alkylthioskupinu, dialkylsulfoniumskupinu, sulfátovou nebo fosfátovou skupinu;
9 9 9 9 9
- 84 ~
9999 » 9 9 9 » 9 99
9 9 9
9 9
99
R2 představuje hydroxyskupinu nebo merkaptoskupinu;
nebo
Rj a R2 brány dohromady tvoří epoxidový, aziridinový, episulfidový, sulfátový nebo monoalkylfosfátový kruh; nebo
Rj a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C18 a C19;
R3 představuje nižší alkylskupinu;
R4 a R5 představují atomy vodíku; nebo
R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14;
Rg představuje benzylskupinu, hydroxybenzylskupinu, alkoxybenzylskupinu, halogenhydroxybenzylskupinu, dihalogenhydroxybenzylskupinu, halogenalkoxybenzylskupinu nebo dihalogenalkoxybenzylskupinu;
R7, R8, Rg a Rjq představuje každý nezávisle atom vodíku nebo nižší alkylskupinu; a
X a Y představuje každý nezávisle atom kyslíku, iminoskupinu nebo alkylaminoskupinu v množství účinném pro narušení dynamického stavu polymerace a depolymerace mikrotubulů za účelem zastavení buněčné mitosy, čímž se inhibuje proliferace buňky.
V přednostním provedení se při tomto postupu savčí buňka rovněž uvádí do styku s alespoň jedním dalším neoplastickým činidlem. Takovou savčí buňkou je přednostně ·· 999· • · • · • · «· • · • · • · · • » • »« ·· ·· • · « · • · ·· ··· · * » · · ·· ·· buňka hyperproliferativní. Podle dalšího přednostního provedení je hyperproliferativní buňkou buňka lidská.
Předmětem vynálezu je také způsob zmírňování patologických stavů vyvolaných hyperproliferujícími savčími buňkami, při němž se savci za účelem inhibice proliferace buněk podá účinné množství farmaceutického prostředku podle vynálezu popsaného výše. Savčí buňkou je přednostně buňka lidská.
V přednostním provedení se na savce aplikuje alespoň jedna další léčba směřující ke zmírnění patologického stavu. Patologický stav je přednostně charakterizován vznikem novotvarů. Novotvary jsou přednostně zvoleny ze souboru zahrnujícího novotvary prsu, malobuněčné plic, ne-raalobuněčné plic, kolorektální, leukémie, melanomy, pankreatický adenokarcinom, novotvary centrálního nervového systému (CNS), vaječníků, prostaty, sarkomy měkkých tkání nebo kostí, novotvary hlavy a krku, novotvary zažívacího traktu, včetně slinivky, jícnu a žaludku, myelomy, novotvary močového měchýře, ledvin a neuroendokrinní novotvary, včetně thyroidních, nehodgkinských a Hodgkinovy choroby.
Způsob výroby kryptofycinových sloučenin je souhrnně zobrazen ve schématu 1 na obr. 5. Výchozí látkou je 3E-alken vzorce a substituovaný na uhlíkovém atomu C-2 skupinou obecného vzorce XH v S-konfiguraci, kde X představuje atom kyslíku nebo iminoskupinu. Jako poměrně levný zdroj výchozí látky vzorce a slouží L-alanin nebo kyselina L-mléčná. Klíčovým stupněm syntézy je stereoselektivní [2,3] Wittigův přesmyk (D. J-S. Tsai et al., J. Org. Chem., 1984, 49: 1842 až 1843; K. Mikami et al., Tetrahedron 1984, 25: 2303 až 2308; N. Sayo et al., Chem. Lett. 1984,
259 až 262) propargyletheru vzorce b za vzniku (3R,4R)-3(XH-substituovaného)-4-alkylhept-5(E)-en-l-inu vzorce c, kde X • 9 • · • 9 9 9
9 9
9 9 9
9 9
999 99 ·· 9999
99
9 9 9
9 99
9 9 9
9 9
99 představuje atom kyslíku nebo chráněný dusík (například terc.butyldimethylsilylaminoskupinu). Sloučeninu vzorce c je poté možno převést na δ-hydroxy- nebo aminokyselinovou jednotku A (která je prekursorem kryptofycinu), methyl(5S,6R)-5-(XP-substituovaný)-6-alkyl-8-arylokta-2E,7Edienoát vzorce d, kde P představuje vhodnou chránící skupinu, za použití postupů známých odborníkům v tomto oboru.
Jedna strategie při syntéze kryptofycinu, který se skládá z δ-hydroxy- nebo aminokyselinové jednotky A, a-aminokyselinové jednotky B, β-aminokyselinové jednotky C a α-hydroxy- nebo aminokyselinové jednotky D, spočívá v sestavení makrocyklu ze dvou prekursorů, které představují zbytky kryptofycinové molekuly, například A-B prekursoru vzorce e, který obsahuje δ-hydroxy- nebo aminokyselinovou jednotku A a α-aminokyselinovou jednotku B a C-D prekursoru vzorce f, který obsahuje β-aminokyselinovou jednotku C a α-hydroxy- nebo aminokyselinovou jednotku D.
Při postupu, který je zde popsán, se kryptofycin sestaví z prekursorů A-B a C-D ve dvou stupních tak, že se (1) spojí konce jednotek A a D v prekursorech A-B a C-D za vzniku acyklického meziproduktu C-D-A-B a (2) se spojí konce jednotek B a C za vzniku cyklického produktu.
Při syntéze kryptofycinu 51, která je popsána v příkladech provedení, vzniká mezi δ-hydroxyskupinou jednotky A ve zbytku A-B a skupinou karboxylové kyseliny jednotky D v C-D zbytku esterová vazba, čímž se získá acyklický C-D-A-B meziprodukt. Poté se vytváří amidová vazba mezi skupinou karboxylové kyseliny jednotky B v A-B zbytku a β-aminoskupinou jednotky C v C-D zbytku. Sloučenina vzorce K je prekursorem zbytku A-B, sloučenina vzorce P je prekursorem zbytku C-D a sloučenina vzorce R je acyklickým C-D-A-B • · ·· ·· ····
4 4
4 4
4 4
4 4
4
44
4 4 4 • 4 «4
444 4 4
4 4 ·4 prekursorem kryptofycinu 51. Sloučeniny vzorce K a P obsahují chránící skupiny na skupině karboxylové kyseliny jednotky B a β-aminoskupině jednotky C, aby se ve stupni 1 omezila kopulace za vzniku esterové vazby mezi jednotkami A a D. Tyto chránící skupiny se z meziproduktu C-D-A-B odstraní, takže ve stupni 2 může doj ít ke vzniku amidové vazby mezi jednotkami B a C.
Syntéza methyl-(5S,6R)-5-terc.butyldimethylsilyloxy-6-methyl-8-fenylokta-2E,7E-dienoátu vzorce G, prekursoru jednotky A kryptofycinu 51, je souhrnně ilustrována ve schématu 2 (obr. 6). Výchozí (S)-trans-3-penten-2-ol vzorce A se připraví enzymatickým rozštěpením racemické sloučeniny. Reakcí sloučeniny vzorce A s propargylchloridem a bází za podmínek fázového přenosu se získá propargylether vzorce B v 86 % výtěžku. Reakcí sloučeniny vzorce B s butyllithiem při -90°C se získá alkohol vzorce C v 71% výtěžku. Požadovaná 3R,4R-anti-sloučenina vzorce C je jediným produktem vzniklým při Wittigově přesmyku. Po chránění hydroxyskupiny ve sloučenině vzorce C v podobě terc.butyldimethylsilyletheru (nebo terc.butyldimethylsilyletheru), a hydroboraci trojné vazby (H. C. Brown, Organic Synthesis Via Boranes, Wiley, 1975) se získá aldehyd vzorce D v 73% výtěžku (vztaženo na sloučeninu vzorce C). Sloučenina vzorce D se převede na trans-α,β-nenasycený ester vzorce E HornerEmmonsovou reakcí (výtěžek 90 %). Selektivní ozonolýzou dvojné vazby mezi uhlíkovými atomy C6-C7 ve sloučenině E se získá aldehyd vzorce F v 83% výtěžku. Sloučenina vzorce F se na závěr podrobí Wittigově reakci s benzyltrifenylfosfoniumchloridem za přítomnosti butyllithia, čímž se získá sloučenina vzorce G v 80% výtěžku. Výtěžek sloučeniny vzorce G vztažený ke sloučenině vzorce A je 26 %.
Kopulace prekursoru jednotky A vzorce G s D-3(3-chlor-4-methoxyfenyl)alaninovou jednotkou B za účelem φφ φφφ
φ φ
φφφφ φφ φ φ φ φ • · φφ φφ φ φ φ φ φ φ φ φ φφ výroby Α-Β prekursoru vzorce Κ je souhrnně znázorněna ve schématu 3 na obr. 7. Hydrolýzou methylesterové skupiny ve sloučenině vzorce G za použití hydroxidu lithného v acetonu se získá karboxylová kyselina vzorce H v 95% výtěžku. Kopulace této kyseliny vzorce H s trichlorethylesterem vzorce I za vzniku sloučeniny vzorce J (výtěžek 65 %) se provádí tak, že se roztok sloučeniny vzorce H v Ν,Ν-dimethylformamidu (DMF) nechá reagovat s malým přebytkem pentafluorfenyldifenylfosfinátu (FDPP), ekvimolárním množstvím trifluoracetátové soli vzorce I a poté 3 ekvivalenty diisopropylethylaminu (DIEA) při 25°C (S. Chen et al., Tetrahedron Lett. 1991, 32: 6711 až 6714). Následnou fluordesilylací sloučeniny vzorce J se získá sloučenina vzorce K v 95% výtěžku. .
Chráněná aminokyselina vzorce I se vyrobí z D-tyrosinu pětistupňovým postupem. V prvním stupni se D-tyrosin chloruje sulfurylchloridem v ledové kyselině octové (R. Zeynek, Hoppe-Seyler's Z. F. Physiol. Chemie 1926, 144: 247 až 254). Následně se reakcí suspenze aminokyseliny v 50% vodném dioxanu s diterc.dibutyldikarbonátem za přítomnosti triethylaminu získá N-(terc.butoxykarbonyl)-3-(3-chlor-4-hydroxyfenyl)-D-alanin v 94% výtěžku. Tento produkt se dimethyluje působením dimethylsulfátu za přítomnosti uhličitanu draselného v refluxujícím acetonu za vzniku methylesteru (výtěžek 84 %). Tento methylester se reakcí s hydroxidem sodným ve vodném dioxanu zmýdelní, čímž se získá N-(terč.butoxykarbonyl)-3-(3-chlor4-methoxyfenyl)-D-alanin v 86% výtěžku. Tato BOC-chráněná aminokyselina se vystaví působení trichlorethanolu, pyridinu a DCC v dichlormethanu, čímž se získá trichlorethylester sloučeniny vzorce I v 65% výtěžku. Reakcí této látky s trifluoroctovou kyselinou se získá trifluoracetátová sůl sloučeniny vzorce vzorce I v kvantitativním výtěžku.
*· · · · ·
• to ·· ·· · · · · · to· · · · · to • ·· · ··« · · « to · · · · • to · to· to·
Syntéza (2S)-2-[3'-(terč.butoxykarbonyl)amino2 ' , 2' -dimethylpropanoyloxy]-4-methylpentanové kyseliny vzorce P, C-D prekursoru, je souhrnně zobrazena ve schématu 4 na obr. 8. Výchozí látkou pro část jednotky C sloučeniny vzorce P je aminoalkohol vzorce L. Aminoskupina ve sloučenině vzorce L se chrání tak, že se sloučenina vzorce L nechá reagovat s diterc.butyldikarbonátem za přítomnosti triethylaminu, přičemž se získá chráněný produkt v 93% výtěžku. Získaný primární alkohol se oxiduje reakcí s oxidem rutheničitým (P. H. J. Carlsen et al., J. Org. Chem. 1981, 46;
3936 až 3938), čímž se získá karboxylová kyselina vzorce M v 66% výtěžku. L-2-Hydroxy-4-methylpentanová kyselina se nechá reagovat se směsí allylbromidu v dichlormethanu a vodného hydrogenuhličitanu sodného obsahujícího tetra-nbutylamoniumchlorid (S. Friedrich-Bochnitschek et al., J. Org. Chem. 1989, 54:751 až 756), čímž převede na allylester vzorce N (výtěžek 93 %). Kopulační reace sloučeniny vzorce M a sloučeniny vzorce N se provádí za použití 4-dimethylaminopyridinu (DMAP) a dicyklohexylkarbodiimidu (DCC) v dichlormethanu, čímž se získá sloučenina vzorce O v 75% výtěžku. Skupina allylesteru ve sloučenině vzorce O se rozštěpí v tetrahydrofuranu s obsahujícím morfolin zá přítomnosti tetrakis(trifenylfosfin)palladia, jako katalyzátoru. Získá se sloučenina vzorce P v 95% výtěžku (P. D. Jeffrey et al., J. Org. Chem. 1982, 47: 587 až 590).
Kopulační reakce A-B prekursoru vzorce K a C-D prekursoru vzorce P je znázorněna ve schématu 5 na obr. 9. Reakcí sloučeniny vzorce K a sloučeniny vzorce P za použití dicyklohexylkarbodiimidu a 4-dimethylaminopyridinu v dichlormethanu se získá plně chráněný C-D-A-B meziprodukt vzorce Q v 84% výtěžku. Reduktivní štěpení trichlorethylesterové skupiny ve sloučenině vzorce Q se provádí za použití aktivovaného zinkového prachu v kyselině octové.
Poté se reakcí s trifluoroctovou kyselinou odstraní chránící ·· • · * • ♦ • · • · ·· · ·· ···· ·· ·· • · · « • · ·· ··· · <
»· ·· skupina BOC, čímž se získá sloučenina vzorce R ve formě trifluoracetátové soli (celkový výtěžek 91 % vztaženo ke sloučenině vzorce Q). Makrolaktamizací sloučeniny vzorce R za použití FDPP se získá kryptofycin 51 v 61% výtěžku (J. Dudash Jr. et al., Synth. Commun. 1993, 23: 349 až 356). Celkový výtěžek kryptofycinu vztažený na S-trans-3-penten2-ol vzorce A je 7 %.
Kryptofycin 51 slouží jako prekursor kryptofycinu 52 (R,R-epoxidu) a kryptofycinu 53 (S,S-epoxidu). Kryptofycin 52 dále slouží jako prekursor kryptofycinu 55 (18R,19Schlorhydrinu) a kryptofycinu 57 (13,14-dihydroanalogu). Kryptofycin 57 slouží jako prekursor kryptofycinu 58. Kryptofycin 53 slouží jako prekursor kryptofycinu 61 při postupu popsaném v T.H. Chán a J. R. Finkenbine, J. Am.
Chem. Soc. 1972, 94: 2880 až 2882 a kryptofycinu 97 při postupu popsaném v Y. Ittah et al., J. Org. Chem. 1978, 43: 4271 až 4273.
Při syntéze kryptofycinů, které obsahují skupinu Ar odlišnou od fenylskupiny, je prekursory jednotky A obecného vzorce d (schéma 1, R3 = Me) možno připravit Wittigovou reakcí aldehydu vzorce F (Schéma 2, chránící skupina TBS) nebo vzorce S (schéma 6, chránící skupina TBPS) s vhodným aryltrifenylfosfoniumchloridem za přítomnosti butyllithia. Kryptofycin 81 se vyrobí z prekursoru vzorce d (Ar = p-methoxyfenyl, R3 = methyl) způsobem znázorněným ve schématu 6 a 7 na obr. 10 a 11.
Skupinu Ar je také možno do nového kryptofycinu zavádět v pozdějším stupni syntézy. První prekursor vzorce d (Ar = R3 = Me) se převede na kryptofycin 82 kopulací vhodného A-B prekursoru vzorce e a C-D prekursoru vzorce f, jak je to znázorněno ve schématu 8 na obr. 12. Selektivní ozonolýzou kryptofycinu 82 nebo oxidací odpovídajících
·· · · • 9 9 • · · · • 9 9
999 99 •9 9999 ·· • 9 9 ·
9··
999 9 9
9 9
99 epoxidů, kryptofycinů 90 a 91, kyselinou jodistou se získá aldehyd, kryptofycin 108. Wittigovou reakcí krypto- fycinu 108 s vhodným aryltrifenylfosfoniumchloridem za přítomnosti butyllithia se získá nový kryptofycin (schéma 9, obr. 13).
Za použití tohoto postupu se připraví kryptofycin 110 (Ar = p-fluorfenyl), kryptofycin 111 (Ar = p-tolyl), kryptofycin 112 (Ar = 2-thienyl) a kryptofycin 124 (Ar = p-chlorfenyl). Kryptofycin 110 slouží jako prekursor epoxidů, kryptofycinů 115 a 116. Kryptofycin 111 slouží jako prekursor epoxidů, krypto- fycinů 117 a 118 a chlorhydrinů, kryptofycinů 128, 130 a 131. Kryptofycin 112 slouží jako prekursor epoxidů, kryptofycinů 119 až 120. Kryptofycin 124 slouží jako prekursor epoxidů, kryptofycinů 125 a 126 a chlorhydrinů, kryptofycinů 132, 133 a 134.
Další strategie při syntéze kryptofycinů spočívá v tom, že se sestaví makrocyklus ze tří prekursorů, například A-B prekursoru vzorce e, který obsahuje δ-hydroxy- nebo aminokyselinovou jednotku A, prekursoru obsahujícího δ-hydroxy- nebo aminokyselinovou jednotku D a prekursoru obsahujícího β-aminokyselinovou jednotku C. Při tomto postupu se kryptofycin sestaví z A-B, C a D prekursorů ve třech stupních; v prvním stupni se spojí konce jednotek A a D v A-B a D prekursorech za vzniku acylického D-A-B meziproduktu, ve druhém stupni se spojí konce jednotek D a C v D-A-B a C prekursorech za vzniku acyklického C-D-A-B meziproduktu a ve třetím stupni se spojí konce jednotek B a C za vzniku cyklického produktu.
Při syntéze kryptofycinu 121 popsané v příkladech provedení, vzniká mezi δ-hydroxyskupinou jednotky A v A-B zbytku a skupinou karboxylové kyseliny v D fragmentu esterová vazba za vzniku acyklického D-A-B meziproduktu.
Poté se vytváří amidová vazba mezi skupinou karboxylové kyseliny jednotky C a α-aminoskupinou jednotky D v D-A-B • ·
• · · · · · · • * · · · ·· • · * · · · · · · • · 1 · · · fragmentu. Nakonče se vytvořá amidová vazba mezi skupinou karboxylové kyseliny jednotky B v A-B zbytku a β-aminoskupinou jednotky C v C-D zbytku. Prekursorem A-B zbytku je sloučenina vzorce K, prekursorem jednotky D je anhydrid BOC-L-leucinu a prekursorem jednotky C je sloučenina vzorce AL. Sloučenina vzorce AK je acyklickým C-D-A-B prekursorem kryptofycinu 121 (schéma 10 na obr. 14). Sloučenina vzorce K a anhydrid BOC-L-leucinu obsahují chránící skupiny na skupině karboxylové kyseliny jednotky B a a-aminoskupině jednotky D, čímž se ve stupni 1 omezí kopulace za vzniku esterové vazby mezi jednotkami A a D. Z δ-aminoskupiny jednotky D v D-A-B meziproduktu se odstraní chránící skupina, takže mezi aminoskupinou jednotky B a karboxylovou kyselinou C může ve stupni 2 vzniknout amidová vazba. Po odstranění chránících skupin z C-D-A-B meziproduktu může ve stupni 2 vzniknout amidová vazba mezi jednotkami B a C.
Nové kryptofycinové sloučeniny podle vynálezu obsahují epoxidové kruhy, které se otevírají nukleofilními činidly odlišnou rychlostí, než epoxidový kruh v kryptofycinu 1; nebo obsahují chlorhydrinové funkční skupiny, které tvoří epoxidové kruhy jinou rychlostí, než kterou se chlorhydrinová funkční skupina kryptofycinu 8 převádí na epoxidový kruh kryptofycinu 1. Epoxidový kruh kryptofycinu 1 nebo chlorhydrinová funkční skupina (maskovaný epoxidový kruh) kryptofycinu 8 jsou základem pro optimální účinnost in vivo. Pokud je eliminován epoxidový kyslík (jak je tomu v kryprofycinu 3) nebo pokud je epoxidový kruh hydrolyzován na diol (jak je tomu u kryptofycinu 15), protinádorová účinnost je výrazně snížena. Kryptofycin 1 vykazuje nezanedbatelné toxické účinky na živočichy, na rozdíl od kryptofycinu 8. To se odráží v hodnotách T/C (většinou >0%) a hodnotách hrubého logaritmického usmrcení národových buněk (většinou <2,0) stanovených pro kryptofycin 1, na rozdíl od hodnot pro kryptofycin 8 (většina hodnot T/C • · · · · · • ·
- 93 O % a hodnot hrubého logaritmického usmrcení národových buněk >2,8). Kryptofycin 25, odpovídající bromhydrinový analog, vykazuje hodnoty T/C a hrubého logaritmického usmrcení národových buněk srovnatelné s kryptofycinem 1. Tento nápadný rozdíl v in vivo účinnosti svědčí o tom, že bromhydrinový kryptofycin 25 in vivo se převádí na kryptofycin 1 rychleji než kryptofycin 8. Z toho dále vyplývá, že méně toxický kryptofycin 8 má před svou transformací na účinnou sloučeninu, kryptofycin 1, pravděpodobně více času akumulovat se v místě tumoru. Epoxidová skupina kryptofycinu 1 se pravděpodobně kovalentně váže ke svému cílovému receptoru v nádorové buňce. Nové kryptofyciny podle vynálezu by potenciálně mohly mít lepší účinnost in vivo než kryptofycin 1 a kryptofycin 8, protože in vivo vykazují příznivnější rychlost tvorby epoxidové z odpovídajícího chlorhydrinového proléčiva a kovalentní vazby k cílovému receptoru v národové buňce.
Sloučeniny podle vynálezu jsou stabilnější vůči hydrolýze a solvolýze než kryptofyciny 1 a 21. Esterová vazba spojující jednotky C a D v kryptofycinu 1 je poměrně citlivá k mírně bázické hydrolýze; při pH 11 se štěpí za vzniku hydroxykyseliny s poločasem 0,83 hodiny. Esterová vazba C-D v kryptofycinu 21, v němž na uhlíkovém atomu C-2 jednotky C není methylskupina, se otevírá rychleji, s poločasem 0,25 hodiny. Esterová vazba C-D je rovněž citlivá vůči solvolýze. Když se při izolačním postupu použije methanolu, dojde k výrazné methanolýze kryptofycinů l a 21. Kryptofycin 21 je mnohem susceptibilnější vůči methanolýze než kryptofycin 1. Kryptofycin 1 vykazuje protinádorovou účinnost, zatímco kryptofycin 21 je neúčinný, což je pravděpodobně způsobeno tím, že C-D esterová vazba v kryptofycinu 21 se in vivo hydrolyzuje rychleji než C-D esterová vazba v kryptofycinu 1. Hydrolýzou C-D esterové vazby je rovněž možno částečně vysvětlit snížení in vivo účinnosti kryptofycinu * · · · · · • · ····· · ··· ··· ··· ·· ··· ·· · ·· ·· při intraperitoneálním a subkutánníxn podávání léčiva. C-D esterová vazba kryptofycinů se dvěma methylskupinami na uhlíkovém atomu C-2 jednotky C, jak je tomu u kryptofycinu 52, je při pH 11 stabilní.
Sloučeniny podle vynálezu a dříve popsané kryptofycinové sloučeniny je možno používat při léčení jako antineoplastická činidla, tedy při způsobem léčby neoplastických chorob. Pojem neoplastický, jak se ho používá v tomto textu, se vztahuje k novotvarům, které vykazují abnormální růst, k němuž dochází tím, že proliferace buněk nepodléhá obvyklým růstovým omezením. Pod pojmem antineoplastická činidla se v tomto textu rozumí kterákoliv sloučenina, přípravek, přísada, fyzikální nebo chemická směs, která inhibuje, eliminuje, retarduje nebo revertuje neoplastický fenotyp buňky.
Při léčbě rakoviny se v současné době používá chemoterapie, chirurgické léčby, radiační terapie, léčby modifikátory biologické odpovědi a imunoterapie. Každý z těchto způsobů léčby má specifické indikace, které jsou známé odborníkům v tomto oboru. Při pokusu dosáhnout úplného zničení neoplastických buněk je možno použít jednoho nebo všech těchto postupů. Chemoterapie, při níž se používá jednoho nebo více kryptofycinů je předmětem vynálezu. Kromě toho je předmětem vynálezu také kombinační chemoterapie, chemoterapie, při níž se používá kryptofycinů v kombinaci s jinými antineoplastickými činidly, protože kombinační terapie je obecně účinnější než terapie, při níž se používá jediného antineoplastického činidla. Podle dalšího aspektu je tedy předmětem vynálezu farmaceutický prostředek, který obsahuje terapeuticky účinné množství alespoň jedné nové kryptofycinové sloučeniny podle vynálezu nebo jejích netoxických adičních solí, které slouží k zajištění výše uvedených kladných terapeutických účinků. Takové prostředky
A A A A A A A A A ·· ·· • · A A A A A · · · · • A A AAA A A AA · · · · · A · · · · · · • ·· AAA AAA
AA AAA AA ♦ AA AA je také možno připravovat za použití fyziologicky snášenlivých kapalných, gelových nebo pevných nosičů, ředidel, adjuvantů a excipientů. Takové nosiče, ředidla, adjuvanty a excipienty je možno nalézt v United States Pharmacopeia sv. XXII a National Formulary sv. XVII, U.S. Pharmacopeia Convention, lne., Rockville, MD, USA (1989). Další způsoby léčení jsou uvedeny v publikaci AHFS Drug Information 1993, ed. American Hospital Formulary Service, str. 522 až 660. Tyto citace jsou zde uváděny náhradou za přenesení celého obsahu uvedených publikací do tohoto popisu.
Předmětem vynálezu je dále farmaceutický prostředek pro léčbu neoplastických chorob, který obsahuje alespoň jednu kryptofycinovou sloučeninu a alespoň jedno další antineoplastické činidlo. Antineoplastické sloučeniny, jichž je možno použít v kombinaci s kryptofycinem, jsou uvedeny v The Merck Index, 11. vydání, Merck & Co., Inc. (1989) str. Ther 16 až 17. Tato citace je zde uváděna náhradou za přenesení celého obsahu uvedené publikace do tohoto popisu. Podle dalšího provedení vynálezu mohou být antineoplastickými činidly antimetabolity. Jako neomezující příklady takových činidel je možno uvést methotrexate, 5-fluoruracil,
6-merkaptopurin, cytosin arabinosid, hydroxymočovinu a 2-chlordeoxyadenosin. Podle dalšího provedení vynálezu jsou dalšími antineoplastickými činidly alkylační činidla. Jako neomezující příklady těchto činidel je možno uvést cyklofosfamid, melfalan, busulfan, paraplatin, chlorambucil a dusíkatý yperit. Podle dalšího provedení vynálezu je dalším antineoplatickým činidlem rostlinný alkaloid. Jako neomezující příklady rostlinných alkaloidů je možno uvést vinkristin, vinblastin, taxol a etoposid. Podle dalšího provedení vynálezu je dalším neoplastickým činidlem antibiotikum. Jako neomezující příklady takových antibiotik je možno uvést doxorubicin (adriamycin), daunorubicin, mitomycin c a bleomycin. Podle dalšího provedení vynálezu je
dalším neoplastickým činidlem hormon. Jako neomezující příklady takových hormonů je možno uvést kalusteron, diomostavolon, propionát, epitiostanol, mepitiostan, testolakton, tamoxifen, polyestradiolfosfát, megesterolacetát, flutamid, nilutamid a trilotan. Podle dalšího provedení vynálezu je dalším neoplastickým činid- lem enzym. Jako neomezující příklady takových enzymů je možno uvést L-asparaginasu a aminoakridinové deriváty, jako je například amsakrin. Další neoplastická činidla je možno nalézt v Skeel, Roland T., Antineoplastic Drugs and Biologie Response Modifier: Classification, Use and Toxicity of Clinically Useful Agents, Handbook of Cancer Chemotherapy, 3. vydání, Little Brown & Co., 1991. Tato citace je zde uváděna náhradou za přenesení celého obsahu uvedené publikace do tohoto popisu.
Kryptofycinové sloučeniny a farmaceutické prostředky podle vynálezu je ve veterinárním lékařství možno podávat domestikovaným zvířatům a při klinickém použití lidem podobným způsobem jako jiná terapeutická činidla. Obecně bude dávka potřebná pro požadovaný terapeutický účinek kolísat v závislosti na typu použití a způsobu podávání, jakož i na konkrétních požadavcích individuálních hostitelů. Obvyklé dávky budou ležet v rozmezí od asi 0,001 do 1000 mg/kg, obvykleji od 0,01 do 10 mg/kg tělesné hmotnosti hostitele. V těchto dávkách je alternativně možno tato terapeutická činidla podávat konstantní infusí během prodlouženého období, obvykle delším než 24 hodin, dokud se nedosáhne požadovaných kladných léčebných účinků. Skutečná dávka léčiva, jakož i způsob podávání, musí být zvoleny na základě relativní účinnosti, relativní toxicity, růstových charakteristik nádoru a účinku kryptofycinů na buněčný cyklus, farmakokinetiky léčiva, věku, pohlaví, fyzického stavu a předchozí léčby pacienta.
Kryptofycinové sloučeniny, samotné nebo spolu s dalšími neoplastickými činidly, se mohou zpracovávat na farmaceutické prostředky v přírodní formě nebo ve formě soli. Jako příklady farmaceuticky vhodných netoxických solí je možno uvést adiční soli s bázemi (vznikající s volnými karboxylovými nebo jinými aniontovými skupinami), které je možno připravit za použití anorganických bází, jako například hydroxidu sodného, draselného, amonného, vápenatého nebo železitého, nebo organických bází, jako isopropylaminu, trimethylaminu, 2-ethylaminoethanolu, histidinu, prokainu apod. Takovými solemi mohou také být adiční soli s kyselinami (vznikající s volnými kationtovými skupinami). Takové soli kryptofycinové sloučeniny tvoří s anorganickými kyselinami, jako například kyselinou chlorovodíkovou nebo fosforečnou, nebo organickými kyselinami, jako kyselinou octovou, štavelovou, vinnou, mandlovou apod. Další excipienty, kterých se používá v prostředcích podle vynálezu jsou odborníkům v tomto oboru známé, a je možno je nalézt v United States Pharmacopeia sv. XXII a National Formulary sv. XVII, U.S. Pharmacopeia Convention, lne., Rockville, MD, USA (1989). Tato citace je zde uváděna náhradou za přenesení celého obsahu uvedené publikace do tohoto popisu.
Volba konkrétních nosičů vhodných pro daný terapeutický prostředek závisí na přednostním způsobu podávání. Antineoplastické prostředky mohou být například zpracovávány na prostředky pro orální podávání. Takové prostředky se obvykle připravují ve formě kapalného roztoku nebo suspenzí nebo v pevné formě. Orální prostředky obvykle zahrnují běžně používané přísady, jako pojivá, plniva, nosiče, konzervační prostředky, stabilizační činidla, emulgátory, pufry a excipienty, jako je například mannitol, laktosa, škrob, stearan hořečnatý, sodná sůl sacharinu, celulosa, uhličitan hořečnatý apod. ve farmaceutické kvalitě. Tyto prostředky mohou mít podobu roztoků, suspensí, tablet, pilulek, kapslí, prostřed98
ků s prodlouženým uvolňováním nebo prášků, které obvykle obsahují 1 až 95 %, přednostně 2 až 70 % účinné složky.
Prostředky podle vynálezu se rovněž mohou připravovat jako injektovatělně kapalné roztoky, suspenze nebo emulze. Také je možno je připravovat v pevných formách vhodných pro přípravu roztoků nebo suspenzí před injekčním podáním. Tyto injektovatelné formy mohou být podávány subkutánně, intravenosně, intraperitoneálně, intramuskulárně, intracekálně nebo intrapleurálně. Účinné složky nebo přísady se často mísí s ředidly nebo excipienty, které jsou fyziologicky snášenlivé a kompatibilní s účinnou složkou nebo složkami. Jako vhodná ředidla a excipienty je možno uvést například vodu, solný roztok, dextrosu, glycerol apod. a jejich kombinace. Kromě toho, je-li to žádoucí, mohou prostředky obsahovat menší množství pomocných prostředků, jako jsou smáčedla, emulgátory, stabilizátory pH nebo pufry.
Předmětem vynálezu jsou dále způsoby použití výše definových kryptofycinových sloučenin pro inhibici proliferace savčích buněk, při nichž se buňky uvádějí do styku s kryptofycinovou sloučeninou v množství postačujícím pro inhibici proliferace savčích buněk. Podle přednostního provedení vynálezu jsou savčími buňkami buňky hyperproliferativní. Pro účely tohoto popisu se pod pojmem hyperproliferativní savčí buňky rozumí savčí buňky, které nepodléhají charakteristickým omezením růstu, například programové smrti buněk (apoptose). Podle dalšího provedení vynálezu jsou takovými savčími buňkami buňky lidské. Předmětem vynálezu je dále způsob, při němž se savčí buňka uvádí do styku s alespoň jednou kryptofycinovou sloučeninou a alespoň jedním dalším antineoplastickým činidlem. Typy antineoplastických činidel, která přicházejí v úvahu, jsou uvedeny výše.
Předmětem vynálezu je dále způsob použití výše popsaných kryptofycinových sloučenin pro inhibici proliferace hyperproliferativních buněk s fenotypem resistentním vůči léčivu, včetně fenotypů resistentních vůči více léčivům, při němž se uvedená buňka uvádí do styku s kryptofycinovou sloučeninou v množství dostatečném pro inhibici proliferace hyperproliferativních savčích buněk. Savčími buňkami jsou přednostně buňky lidské. Předmětem vynálezu je dále způsob, při němž se savčí buňka uvádí do styku s alespň jednou kryptofycinovou sloučeninou a alespoň jedním dalším antineoplastickým činidlem. Typy antineoplastických činidel, která přicházejí v úvahu, jsou uvedeny výše.
Předmětem vynálezu je dále způsob zmírňování patologických stavů vyvolaných hyperproliferujícími savčími buňkami, například novotvaru, při němž se savci podává výše popsaný farmaceutický prostředek v množství účinném pro inhibici proliferace hyperproliferujících buněk. Pod pojmem patologický stav se v tomto textu rozumí choroba vyvolaná proliferací savčích buněk, které nepodléhají normálním omezením buněčného růstu. Tato proliferace buněk může způsobovat vznik novotvarů. Jako neomezující příklady takových novotvarů je možno uvést novotvary prsu, malobuněčné plic, ne-malobuněčné plic, kolorektální, leukémii, melanomy, novotvary centrálního nervového systému (CNS), vaječníků, prostaty, sarkomy měkkých tkání nebo kostí, novotvary hlavy a krku, novotvary zažívacího traktu, včetně slinivky, jícnu a žaludku, myelomy, novotvary močového měchýře, ledvin a neuroendokrinní novotvary, včetně thyroidních novotvarů a lymfomů, nehodgkinské novotvary a Hodgkinovu chorobu.
Podle dalšího provedení vynálezu je neoplastickou buňkou buňka lidská. Předmětem vynálezu je také způsob zmírňování patologických stavů za použití kryptofycinu v kombinaci s jinými terapiemi, jakož i jinými antineoplastickými činidly. Takové terapie a jejich vhodnou indikaci pro různé ·99·
- 100 • ·
• 4 »· ► · · 4 > · · · ♦ ♦ ·· novotvary je možno nalézt v Cancer Principles and Practice of Oncology, 4. vydání, ed. DeVita, V., Hellman, S. a Rosenberg S., Lippincott Co., 1993. Tato citace je zde uváděna náhradou za přenesení celého obsahu uvedené publikace do tohoto popisu.
V tomto popisu je ilustrováno, že kryptofycinové sloučeniny jsou schopné narušovat mikrotubulární strukturu v kultivovaných buňkách. Kromě toho, na rozdíl od alkaloidů Vinca, se kryptofycinové sloučeniny zdají být chudým substrátem pro P-glykoproteinovou pumpu odvádějící léčivo. Kryptofycin 1 je hlavním cytotoxinem v modrozelené řase (cyanobacteria) Nostoc sp. kmene GSV 224 a vykazuje výbornou účinnost proti tumorům transplantovaným myši. Tento cyklický didepsipeptid byl dříve izolován z Nostoc sp. ATCC přírůstkové číslo 53789 jako antifungální činidlo a byla určena jeho hrubá struktura. Nyní byla za použití kombinace chemických a spektrometrických postupů stanovena relativní a absolutní stereochemie tohoto potenciálně důležitého léčiva. Z GSV 224 bylo také izolováno dvacet čtyři dalších kryptofycinových sloučenin, kryptofycin 2 až 7, 16 až 19,
21, 23, 24, 26, 28 až 31, 40, 43, 45, 49, 50 a 54 a byla stanovena jejich celková struktura a cytotoxicita. Několik derivátů a produktů degradace je popsáno jak chemicky, tak farmakologicky.
Vynález je blíže objasněn v následujících příkladech provedení. Tyto příklady, které jsou zaměřeny na přednostní provedení a přednostní aspekty tohoto vynálezu, mají výhradně ilustrativní charakter a rozsah vynálezu v žádném ohledu neomezují.
·· ····
101
9 9
9 99
9 9
9 9
9 9
9 99 9 ·· 9
9 9
9 9
9 9
9
9 9 9
9 9
9 99 • 9 9 9 9 9
99
Příklady provedení vynálezu
V následujících příkladech provedení jsou množstevní údaje uváděny v gramech (g), miligramech (mg), mikrogramech (úg), nanogramech (ng), pikogramech (pg), molech (mol) nebo milimolech (mmol); všechny koncentrace jsou uváděny jako procenta objemová (%) nebo jako koncentrace molární (M), milimolární (mM), mikromolární (μΜ), nanomolární (nM), pikomolární (pM) nebo normální (N); objemy jsou uváděny v litrech (1), mililitrech (ml) nebo mikrolitrech (μΐ), a délkové údaje jsou uváděny v milimetrech (mm), pokud není uvedeno jinak.
V následujících příkladech je demonstrována izolace a syntéza kryptofycinových sloučenin, jakož i jejich použití jako terapautických činidel podle vynálezu.
Při screeningu extraktů z více než 1000 modrozelených řas (cyanobacteria) na protinádorovou účinnost, bylo zjištěno, že lipofilní extrakt z Nostoc sp. GSV 224 je silně cytotoxický [Patterson, G. M. L et al., J. Phycol. 27: 530 až 536 (1991)] a vykazuje minimální inhibiční koncentrace (MIC) 0,24 ng/ml proti KB, buněčné linii lidského karcinomu nosohltanu a 6 ng/ml proti LoVo, buněčné linii lidského kolorektálního adenokarcinomu. Ještě významnější bylo zjištění, že tento extrakt vykazuje významnou selektivní cytotoxicitu vůči tumorům při Corbettově zkoušce [Corbett,
T. H. et al., Cytotoxic Anticancer Drugs: Models and Concepts for Drug Discovery and Development, str. 35 až 87, Kluwer Academie Publishers: Norvell, 1992; Valeriote, F. A. et al., Discovery and Development of Anticancer Agents, Kluwer Academie Publishers: Norwell, 1993, v tisku]. Chromatografií s obrácenými fázemi (monitorovanou bioesejem) extraktu z řasy byla získána frakce, která byla tvořena převážně kryptofycinem 1, účinným fungicidem, který byl
- 102
•9 9999
9 9 9
9 9 9 9
9 9 99
9 9999 9
9 9 9
9 9 9 9 dříve izolován z Nostoc sp. ATCC 53789 výzkumníky firmy Merck [Schwartz, R. E. et al., J. Ind. Microbiol. 5: 113 až 124 (1990) a Hirsch, C. F. et al., US patent 4 946 835 vydaný 7. srpna 1990], a bylo zjištěno, že je velmi účinný proti kmenům Cryptococcus.
Kryptofycin 1 je nejvíce zodpovědný za cytotoxickou účinnost surového extraktu z řasy Nostoc sp. GSV 224 a čistá sloučenina vykazuje proti KB hodnotu IC50 3 pg/ml a proti LoVo IC5Q 5 pg/ml. Při Corbettově zkoušce bylo zjištěno, že kryptofycin 1 vykazuje silnou selektivitu vůči tumorům a je stejně cytotoxický i vůči nádorovým buňkám resistentním vůči léčivu i více léčivům. Imunofluorescenční zkoušky ukázaly, že kryptofycin 1 interaguje s buněčným cílem podobně jako vinblastin, ale na rozdíl od něj má delší dobu účinnosti a netvoří parakrystalická tělesa. Při předběžných experimentech in vivo kryptofycin 1 vykazoval velmi slibnou účinnost proti tumorům implantovaným myším.
V Nostoc sp. GSV 224 byla přítomna menší množství několika dalších kryptofycinových sloučenin. Dvacet jedna z nich mohlo být izolováno v množství dostatečném pro stanovení jejich struktury a vyhodnocení protinádorové účinnosti in vitro. Při izolaci byla řasa extrahována směsí dichlormethanu a acetonitrilu v poměru 1:5a extrakt byl podroben vysokotlaké kapalinové chromatografii s obrácenými fázemi.
Ve frakcích eluovaných ze sloupce pro mžikovou chromatograf ii s obrácenými fázemi za použití směsi acetonitrilu a vody v poměru 65 :35, jako elučního činidla, byly přítomny kryptofyciny 2, 3, 4, 16, 17, 18, 19, 21, 23, 24, 26, 28,
29, 30, 31, 40, 43, 45, 49, 50 a 54 doprovázející kryptofycin 1. Pokud byla řasa extrahována methanolem a chromatograf ie s obrácenými fázemi byla prováděna za použití směsi methanolu a vody, jako elučního činidla, byly nalezeny pouze ryptofyciny 2, 3, 4, 5, 6a7. Kryptofyciny 2, 3, 4, 5 a 6 ·· ····
·· ·· • · · · · · · • ♦ · · * ·· • · · · · ···· · « · · · · · • ·· · ·· ·· byly eluovány směsí methanolu a vody v poměru 3 : 1 a kryptofycin 7 byl nalezen v časnější, méně cytotoxické frakci eluované směsí methanolu a vody v poměru 1:3. Zdá se, že acyklické kryptofyciny 5, 6 a 7 jsou produkty vznikajícími rozkladem kryptofycinu 1 během izolačního postupu.
Kryptofyciny 3 a 5 se jeví jako identické s fungicidními polosyntetickými sloučeninami, které byly z kryptofycinu 1 připraveny výzkumníky firmy Merck [Sešin, D. F., US patent 4 845 085 vydaný 4. července 1989; Sešin, D. F. a Liesch, J. M., US patent 4 868 208 vydaný 19. září 1989]. Kryptofycin 3 byl připraven reakcí kryptofycinu 1 se slitinou ziku a mědi nebo jodidem difosforičitým [Sešin, D. F.,
US patent 4 845 085 vydaný 4. července 1989]. Kryptofycin 5 byl vyroben methanolýzou kryptofycinu 1 [Sešin, D. F. a Liesch, J. M., US patent 4 868 208 vydaný 19 září 1989].
Příklad 1
Stanovení struktury
Stanovení struktur nových sloučenin, kryptofycinů 2, 4, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14, 16, 17, 18, 19, 21, 23,
24, 26, 28, 29, 30, 31, 40, 43, 45, 49, 50 a 54, jakož i známých kryptofycinů, bylo provedeno přímými postupy dobře známými odborníkům v tomto oboru. Údaje hmotnostní spektrometrie jsou v souladu s molekulárním složením. Data protonové a uhlíkové nukleární magnetické resonance získaná z COSY, HMQC, HMBC a NOESY spektra umožnila sestavení všech celkových struktur těchto sloučenin depsipeptidového typu. Přítomnost různých hydroxy- a aminokyselinových jednotek v každé sloučenině byla potvrzena plynovou chromátografickou hmotnostní spektrální analýzou. Celková struktura, včetně absolutní stereochemie, byla stanovena za použití kombinací • 9
9999
- 104 • · · 9 9 9
9 9 9
9 9
9
9 9 9
9 99
999 9 9
9 9 • 9 99 chemických degradativních a speciálních analytických technik na příslušných derivátech kryptofycinových sloučenin.
Příklad 2
Vzájemný vztah struktury a účinnosti
Všechny zde uvedené sloučeniny byly zkoušeny na cytotoxicitu proti KB (lidský karcinom nosohltanu), LoVo (lidský karcinom tlustého střeva) a SKOV3 (lidský karcinom vaječníků), aby se stanovily strukturní rysy kryptofycinu 1 nutné pro dosažení optimální účinnosti. Hodnoty IC5Q jsou uvedeny v tabulkách 1 a 2. Porovnání cytotoxicit ukázalo, že pro dosažení optimální cytotoxicity je nutná přítomnost intaktního makrolidového kruhu, epoxy- a methylskupiny a dvojná vazba v jednotce 7,8-epoxy-5-hydroxy-6-methyl-8fenyl-2-oktenové kyseliny (viz jednotka A na obr. 1), chloru a O-methylskupiny ve 3-(3-chlor-4-methoxyfenyl)alaninové jednotce (jednotka B), methylskupiny v jednotce 3-amino-2methylpropinové kyseliny (jednotka C) a isobutylskupiny v jednotce 2-hydroxy-4-methylpentanové kyseliny (jednotka D) kryptofycinu 1. Silná cytotoxica kryptofycinu 8, je nejpravděpodobněji důsledkem přítomnosti chlorhydrinové funkční skupiny, která funguje jako maskovaný epoxid.
Nejúčinnější sloučeniny byly také zkoušeny na selektivní cytotoxicitu proti čtyřem různým typům buněk, a to buňkám myší leukémie (L1210 nebo P388), tuhých nádorů u myší (adenokarcinom tlustého střeva 38, adenokarcinom vývodů slinivky 03, adenokarcinom mléčné žlázy M16/M17), tuhého lidského nádoru (tlustého střeva CX-1, HCT8, H116; plic H125; mléčné žlázy MX-1, MCF-7) a málozhoubného fibroblastu (LML) za použití Corbettovy zkoušky [Corbett, T. H. et al., Cytotoxic Anticancer Drugs: Models and Concepts for Drug Discovery and Development, str. 35 až 87, Kluwer
9 9 9
105
·999 9
9 9
9 9 9
9 99
Academie Publishers: Norvell, 1992], zkoušce s difusí na kotouči připravené jak se jí obvykle používá při zkoušení antifungální a antibakteriální účinnosti. Výsledky uvedené v tabulce 1 ukázaly, že kryptofyciny 1 až 5 a 8 nejsou selektivní vůči tuhým národům ani vůči leukémii, ale že jsou vůči nádorovým buněčným liniím spíše stejně účinné, včetně buněčných linií resistentních vůči léčivům, jako je M17. Žádná ze sloučenin nevykázala zónu inhibice pro kteroukoliv buněčnou linii tuhých nádorů (vždy 250 zonálních jednotek, t j. 7,5 mm), větší než zónu inhibice pro leukemickou buněčnou linii. Kryptofyciny 1 až 5 a 8 však toho vykázaly výrazně větší zóny inhibice (400 zonálních jednotek) pro všechny nádorové buněčné linie ve srovnání se zónou inhibice pro fibroblastovému LML. Diagnosticky bylo zjištěno, že LML se vůči klinicky užitečným cytotoxickým činidlům (viz údaje z Corbettovy zkoušky pro 5-fluoruracil, etoposid a taxol v tabulce 1) chová spíše podobně jako normální buňka, než jako buňka nádorová. Jelikož různé cytotoxicity byly větší než 250 zonálních jednotek, jsou kryptofyciny 1 až 5 a 8 selektivní vůči nádorům. Tyto sloučeniny byly tedy shledány jako vhodné pro zkoušení in vivo.
Kryptofycin 1 je účinný proti širokému spektru myších a lidských nádorů implantovaných myším, včetně nádorů resistentních vůči léčivům (viz tabulka 3). Tato sloučenina vykazuje vynikající účinnost proti pěti raným stádiím myších nádorů, tj . adenokarcinomům #38 a #51, taxol-sensitivnímu a taxol-resistentnímu nádoru prsu #16/C/RP a adenokarcinomu vývodu slinivky #03, a dvěma raným stádiím lidských nádorů zkoušených na myších SCID, tj. nádoru prsu MX-1 a adenoskvamosnímu nádoru plic H125, přičemž vykazuje nádorovou zátěž T/C (střední nádorová zátěž u ošetřených zvířat/střední nádorová zátěž u neošetřených zvířat) než 10 %.
• 9 · 9 · 9
9999 99 9 9999
999 999 99 99
9 9 9 9 9 · 999 9 9
- - 999 999 999 ~ 106 — ·9 999 99 9 99 99
Hodnoty T/C, které jsou nižší než 42 %, jsou charakteristické podle standardů NCI pro účinnost. Hodnoty T/C, které jsou nižší než 10 %, odpovídají podle standardů NCI vynikající účinnosti a potenciální klinické účinnosti [Corbett, T. H. et al., Cytotoxic Anticancer Drugs: Models and Concepts for Drug Discovery and Development, str. 35 až 87, Kluwer Academie Publishers: Norvell, 1992]. Při dvou z pokusů byly zjištěny hodnoty hrubého logaritmického usmrcení národových buněk (gros tumor cell log kill) 2,0. Veličina hrubé logaritmické usmrcení je definována výrazem T-C/3,2 Td, kde T je střední doba (dny), za kterou nádory v ošetřené skupině dosáhnou hmotnosti 750 mg, C je střední doba (dny), za kterou nádory v kontrolní skupině dosáhnou hmotnosti 750 mg a Td je doba, na kterou se zvojnásobí objem nádoru. Hodnoty hrubého logaritmického usmrcení národových buněk větší než 2,8; 2,0 až 2,8; 1,3 až 1,9; 0,5 až 0,8 a menší než 0,5 při době podávání léčiva 5 až 20 dnů jsou klasifikovány stupni ++++, +++, ++, + a - (inaktivní). Pro dosažení částečné nebo úplné regrese 100 až 300mg hmotnosti většiny transplantovaných tuhých nádorů u myší je zapotřebí stupně aktivity +++ až ++++, který je charakteristický pro klinickou účinnost.
Kryptofycin 8 je rovněž účinný proti širokému spektru nádorů implantovaným myším (tabulka 4). Tato sloučenina je výborně účinná proti všem dosud zkoušeným nádorům, přičemž vykazuje hodnoty nádorové zátěže T/C nižší než 10 %, ale důležitější je, že hrubé logaritmického usmrcení vykazuje stupeň +++ až ++++ a že v některých případech došlo k vyléčení.
Při jednom pokusu, který byl dosud uskutečněn, byla také zjištěna dobrá in vivo účinnost u kryptofycinu 35.
• · ·· ···· · · · · · · · ··' ··· · · ·· • · ·*··· ······ i η·7 — ··· ♦·· · · ·
XU Z “ ·♦ ·»· ·· * *· ··
Lethální toxicita pozorovaná během zkoušení kryptofycinu 1 a 8 je atributem leukopenie, která je obvyklá u všech klinický používaných protinádorových léčiv.
Příklad 3
Kultivační podmínky
Nostoc sp. GSV 224 byla získána od Prof. C. P.
Wolka, MSU-DOE Plant Research Laboratory, Michigan State University, USA. Nostoc sp. ATCC 53789 pochází ze sbírky American Type Culture Collection. Pro zaočkování 201itrového skleněného demižonu sterilizovaného v autoklávu obsahujícího anorganické médium označené názvem modifikované médium BG-11 [Patterson, G. M. L et al., J. Phycol.
27: 530 až 536 (1991)], jehož pH bylo nastaveno hydroxidem sodným na 7,0, bylo použito kultury řasy z jednolitrové nádoby. Kultury byly kontinuálně ozařovány při intenzitě dopadajícího světla 200 μπιοί fotonů.m“2.s-1 (fotosynteticky aktivní záření) za použití bloků zářivek se studeným bílým světlem a provzdušňovány směsí 0,5 % oxidu uhličitého ve vzduchu při průtoku 5 litrů/min. Kultivace byla prováděna při teplotě 24±1°C. Po 21 dnech byla kultura sklizena filtrací. Výtěžek lyofilizovaného kmene Nostoc sp.
GSV 224 byl 0,61 g/litr kultury a výtěžek kmene ATCC 53789 byl 0,3 g/litr kultury.
Příklad 4
Izolace
Postup A
Lyofilizovaná Nostoc sp. GSV224 (50 g) se extrahuje 2 litry směsi dichlormethanu a acetonitrilu v poměru 1 • · · ·
- 108 .( ·· · • · ·« • · · • · · • · · ·· ··· ·· • * · · 4 • · 4 ·· »· : 5 po dobu 48 hodin. Extrakt se zkoncentruje za sníženého tlaku. Tmavozelený pevný zbytek (1 g; KB MIC 0,24 ng/ml) se nanese na sloupec silikagelu s částicemi potaženými ODS (55 g, 7 x 5 cm) a podrobí mžikové chromatografii za použití směsi acetonitrilu a vody v poměru 1 : 3 (0,8 litru), směsi acetonitrilu a vody v poměru 1 : 1 (0,8 litru), směsi acetonitrilu a vody v poměru 65 : 35 (1,0 litru), methanolu (0,8 litru) a dichlormethanu (0,5 litru), jako elučního činidla. Frakce, která byla eluována směsí acetonitrilu a vody v poměru 65 : 35 (420 mg, KB MIC 14 pg/ml) se podrobí vysokotlaké kapalinové chromatografii s obrácenými fázemi (Econosil C18, 10 μπι, 25 cm x 21,5 mm, UV detekce při 250 nm, směs acetonitrilu a vody v poměru 65 : 35, průtoková rychlost 6 ml/min), čímž se získá kryptofycin l (tR = 49,3 min, 220 mg) a řada nečistých frakcí. Frakce eluovaná ze sloupce Econosil C18 při tR 28,8 min se dále přečistí vysokotlakou kapalinovou chromatografií s normálními fázemi (patrona Econosil silikagel 5 μπι, 250 x 4,6 mm, ethylacetát/hexan v poměru 6 : 4, 3 ml/min), čímž se získá kryptofycin 16 (3,0 mg). Frakce eluovaná ze sloupce Econosil C18 při tR 32,5 min se podrobí vysokotlaké kapalinové chromatograf ii na sloupci silikagelu Econosil, přičemž eluce se provádí směsí ethylácetátu a hexanu v poměru 55 : 45 rychlostí 3 ml/min, čímž se získá kryptofycin 24 (0,8 mg). Frakce eluované ze sloupce Econosil C18 při tR = 35,5 min se dvakrát podrobí vysokotlaké kapalinové chromatorafii na sloupci silikagelu Econosil, přičemž eluce se provádí nejprve směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 1 : 1 rychlostí 3 ml/min a poté za použití směsi ethylacetátu a methylenchloridu v poměru 4 : 6 rychlostí 2,5 ml/min. Získá se kryptofycin 23 (1,2 mg,) a kryptofycin 43 (0,1 mg). Frakce eluovaná ze sloupce Econosil C18 při tR 39,5 minuty se podrobí vysokotlaké kapalinové chromatografii na sloupci silikagelu Econosil, přičemž eluce se provádí směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 1 : 1 rychlostí 3 ml/min. Získá se
Α· Α· • · · · · · · A A A AAAA
AA AA A AAAA A AAA AAA
A AA A AA AA kryptofycin 2 (6 mg) a kryptofycin 21 (14 mg) a komplexní směs kryptofycinů eluovaná při tR 32,5 minuty. Tato poslední frakce, shromážděná ze 400 g suché řasy, se postupně podrobí semipreparativní chromatografii na sloupci (partisil C18,
250 x 9,4 mm, 10 gm) za použití směsi vody a acetonitrilu v poměru 35 : 65 a analytické chromatograf i i s reversními fázemi (Econosil, 150 x 4,6 mm, 5 μπι), přičemž eluce se provádí směsí vody, acetonitrilu a methanolu v poměru 5:4:1 rychlostí 1,3 ml/min. Získá se kryptofycin 50 (tR 34,8, 0,4 mg) a kryptorycin 40 (tR 38,8 min, 0,3 mg). Frakce eluovaná ze sloupce Econosil C18 při tR 44,5 minuty se podrobí vysokotlaké kapalinové chromatografii na sloupci silikagelu Econosil, přičemž eluce se provádí směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 1 : 1 rychlostí 3 ml/min, čímž se získá kryptofycin 17 (0,3 mg). Purifikací (HPCL s normálními fázemi) frakce eluované ze sloupce Econosil C18 při fcR 54,5 min, jakožto vedlejší produkt doprovázející kryptofycin 1 se získá kryptofycin 45 (tR 6,7 min, 0,1 mg), kryptofycin 26 (tR 8,9 min, 0,5 mg) a kryptofycin 54 (tR
19.8 min, <0,1 mg) při eluci směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 1:1. Frakce eluovaná ze sloupce Econosil C18, jako široký pík (tR 58 až 70 min) se podrobí HPLC na sloupci silikagelu Econosil, přičemž eluce se provádí směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 43 : 57 rychlostí 2,5 ml/min, čímž se získá kryptofycin 4 (tR 19,6 min, 1,5 mg), kryptofycin 31 ( tR 9,4 min, 0,8 mg), kryptofycin 19 (tR
25.8 min, 0,3 mg), kryptofycin 49 (tR 28 min, 0,1 mg), kryptofycin 28 ( ťR 29,0 min, 0,5 mg) a nečistý kryptofycin 29 (tR 52,5 min, 2,0 mg) a 30 (tR 49 min, 3,0 mg). Čisté kryptofyciny 29 a 30 se získají po vysokotlaké kapalinové chromatograf i i s reversními fázemi (Econosil C18, 10 μπι,
250 x 10 mm) za použití směsi methanolu a vody v poměru 3:1, jako elučního činidla. Frakce eluovaná ze sloupce Econosil C18 při tR 78,9 minuty se podrobí vysokotlaké kapalinové chromatografii na sloupci silikagelu Econosil, ·· ····
- 110 • · ·· • · · • · · • · · ·· ···
·· ·· • · · · · • · · ·· • · ··· · · • · · · • ·· ·ί čímž se získá kryptofycin (tR 16,4 min, 3,0 mg). Frakce eluovaná ze sloupce Econosil C18 při tR 82,8 min se podrobí vysokotlaké kapalinové chromatografii na sloupci silikagelu Econosil, přičemž eluce se provádí směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 45 : 55 rychlostí 3 ml/min, čímž se získá kryptofycin 18 ( ťR 19,2 min, 0,8 mg).
Postup B
Lyofilizovaná Nostoc sp. GSV 224 (12,23 g) se extra huje 12 hodin 700ml a poté 5 hodin 400ml dávkou methanolu. Extrakty se spojí a zkoncentrují za sníženého tlaku na tmavozelený pevný zbytek (1,84 g). Tento zbytek se rozdělí mezi vodu a dichlormethan. Lipofilní frakce (0,65 g; KB MIC 0,24 ng/ml) se nanese na sloupec silikagelu s částicemi potaženými ODS (55 g, 7x5 cm) a podrobí mžikové chromátografii za použití směsi methanolu a vody v poměru 1 : 3 (0,8 litru), methanolu a vody v poměru 1 : 1 (0,8 litru), methanolu a vody v poměru 3 : 1 (0,8 litru), methanolu (0,8 litru) a dichlormethanu (0,5 litru), jako elučního činidla. Frakce eluovaná směsí methanolu a vody v poměru 3 : 1 (22 mg, KB MIC 14 pg/ml), která je zodpovědná v podstatě za veškerou cytotoxickou účinnost, se podrobí vysokotlaké kapalinové chromatografii s obrácenými fázemi (Econosil C18, 10 μπι, 250 x 10 mm, UV detekce při 250 nm, rychlost eluce 3 ml/min) za použití směsi methanolu a vody v poměru 1:5, jako elučního činidla. Získají se kryptofyciny 7 (tR 7,6 min, 0,2 mg), 5 (tR 15,4 min, 2,3 mg), 2 (tR 16,0 min, 1,0 mg), 1 (tR 19,0 min, 12,0 mg), 4 (tR 26,5 min, 1,2 mg) a 3 (tR 30,2 min, 1,4 mg). Frakce (8,1 mg) eluovaná ze sloupce pro mžikovou chromatografii za použití směsi methanolu a vody v poměru 1:3, jako elučního činidla, vykazovala u jedné z kultur mírnější cytotoxicitu (KB MIC 2 μg/ml). Po přečištění vysokotlakou kapalinovou chromatografii za • · ···· ·· · ···· • · · ♦·· ···· • · · ·· · · · ···· · použití směsi methanolu a vody v poměru 2:3, jako elučního činidla, se získá kryptofycin G (7, tR 6,0 min, 2,4 mg).
Příklad 5
Spektrální údaje o kryptofycinech 1 až 7
Symboly A, B, C a D označují příslušné jednotky znázorněné na obr. 1.
Kryptofycin 1 [a]D +33,8° (MeOH, c = 1,83);
UV lambdamax(e) 208 (42 400), 218 (33 700), 228 (23 800),
280 (23 210); CD [θ]202 +14 9θθ' [0]2Ο6 +64 90θ' [θ^214 +26 900, [θ]224 +46 30θ' [θ^237 +1θ 5θθ·
IR (CHC13) Vmax 3425, 2963, 1751, 1719, 1677, 1502, 1259
-1 cm .
EIMS m/z (rel. intenzita) 654/656 (20/9), 412/414 (33/12), 280/282 (31/12), 227(80), 195/197 (92/44), 91(100);
EIMS s vysokým rozlišením m/z 654,2665 (vypočteno pro C35H43C1N2°8' 4,3mmu chyba).
1H NMR (CDC13): amino- nebo hydroxykyselinová jednotka δ (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz) 7,8-epoxy-5-hydroxy6-methyl“8-fenyl-2-oktenová kyselina (A) 5,74 (2, dt, 15,5 a 0,9), 6,68 (3, ddd, 15,5, 9,6 a 5,2), 2,45 (4, ddd, 14,2,
11,1 a 9,6), 2,55 (4, brdd, 14,2 a 5,2), 5,16 (5, ddd,
11,1, 4,9 a 1,9), 1,80 (6, m), 1,14 (6-Me, d, 7,1), 2,92 (7, dd, 7,5 a 2,0), 3,69 (8, d, 2,0), 7,25 (10/14, m) , 7,34 - 7,39 (11/12/13, m)i 2-hydroxy-4-methylpentanová kyselina (D), 4,83 (2, dd, 6,8 a 3,3), 1,70 (3, m), 1,36 (3, m),
1,70 (4, m), 0,86 (5, d, 6,6), 0,85 (4Me, d, 6,6), 3-amino2-methylpropionová kyselina (C) 2,71 (2, m), 1,22 (2-Me, d,
7,1), 3,30 (3, ddd, 13,4, 5,8 a 3,8), 3,48 (3, ddd, 13,4,
6,3 a 5,8), 6,93 (3-NH, brt, 5,8); 3-chlor-4-methoxyfenyl• · • · · · · · • · • ·
- 112 ·· • · · · · · · • · · · · · · • ·· · ·· · · · • · · · · · • · · · · · · alanin (B) 4,80 (2, ddd, 8,7, 7,3 a 5,4), 5,61 (2-NH, d, 8,7), 3,03 (3, dd, 14,4 a 7,3), 3,13 (3, dd, 14,4 a 5,4), 7,21 (5, d, 2,1), 3,87 (7-OCH3, s), 6,83 (8, d, 8,5), 7,07 (9, dd, 8,5 a 2,1). 13C NMR (CDC13): jednotka δ (poloha uhlíku) A 165,3 (1), 125,3 (2), 141,0 (3), 36,7 (4), 76,2 (5), 40,6 (6), 13,5 (6-Me), 63,0 (7), 59,0 (8), 136,7 (9),
125,6 (10/14), 128,7 (11/13), 128,5 (12); D 170,7 (1), 71,3 (2), 39,4 (3), 24,5 (4), 22,9 (5), 21,3 (4-Me); C 175,6 (1) , 38,2 (2), 14,1 (2-Me), 41,1 (3); B 170,9 (1), 53,6 (2) , 35,0 (3), 129,7 (4), 131,0 (5), 122,4 (6), 154,0 (7),
56,1 (7-OCH3), 112,2 (8), 128,4 (9)
Kryptofycin 2 [a]D +20,4° (MeOH, c = 0,54);
UV lambdamax(e) 206 (43 800), 218 (37 500), 232 (22 900), 278 (2 410); CD [θ]203 +54 10θ' [Θ1212 +16 5θ0' [θ1225 +53
600, [θ]236 ”14 °00·
IR (CHC13) vmax 3423, 3029, 2961, 1742, 1724, 1678, 1512, 1258 cm—1
EIMS m/z (rel. intenzita/přiřazení) 620 (11,M+), 431 (3), 378 (8), 377 (6), 311 (11), 246 (10), 244 (8), 227 (14), 195 (17), 161 (84, CH3O-CgH4-CH=CH=CO+), 121 (79, CH3O-CgH4-CH2 +), 91 (100);
EIMS s vysokým rozlišením m/z 620,3094 (vypočteno pro C35H44N2°8' °»3mmu chyba); 161,0605 (vypočteno pro Ci0h9o2, -0,2mmu chyba), 121,0658 (vypočteno pro CgHgO, -0,4mmu chyba).
'H NMR (CDC13): amino- nebo hydroxykyselinová jednotka δ (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz) 7,8-epoxy-5-hydroxy6-methyl-8-fenyl-2-oktenová kyselina (A) 5,71 (2, dd, 15,4 a 1,3), 6,70 (3, ddd, 15,4, 10,2 a 5,0), 2,45 (4, m), 2,55 (4, m), 5,18(5, ddd, 11,3, 4,8 a 2,0), 1,79 (6, m), 1,14 (6-Me, d, ,0), 2,92 (7, dd, 7,7 a 2,0), 3,68(8, d, 2,0), 7,24 (10/14, m), 7,34 - 7,39 (11/12/13, m); 2-hydroxy-4• · · · • ·
- 113 methylpentanová kyselina (D) 4,82 (2, dd, 10,1 a 3,7), 1,70 (3, m), 1,33 (3, m), 1,70 (4, m) , 0,86 (5, d, 6,4), 0,84 (4-Me, d, 6,4); 3-amino-2-methylpropionová kyselina (C)
2,68 (2, m), 1,23 (2-Me, d, 7,3), 3,39 (3-H2, m), 7,02 (3-NH, brt, 6,0); O-methyltyrosin (B) 4,79 (2, ddd, 8,1,
7,0 a 5,7), 5,55 (2-NZ, d, 8,1), 3,07 (3, dd, 14,5 a 7,0), 3,13 (3, dd, 14,5 a 5,7), 7,10 (5/9, d, 8,6), 6,81 (6/8, d, 8,6), 3,78 (7-OCH3, s). 13C NMR (CDCl3): jednotka δ (poloha Uhlíku) A 165,1 (1), 125,1 (2), 141,1 (3), 36,7 (4), 76,0 (5), 40,7 (6), 13,6 (6-Me), 63,0 (7), 59,0 (8), 136,7 (9),
125,6 (10/14), 128,7 (11/13), 128,5 (12); D 170,6 (1), 71,3 (2), 39,4 (3), 24,5 (4), 21,3 (5), 22,9 (4-Me); C 176,0 (1) , 38,1 (2), 14,2 (2-Me), 40,7 (3); B 171,1 (l), 53,9 (2) , 35,3 (3), 131,0 (4), 130,2 (5/9), 114,1 (6/8), 158,6 (7), 55,2 (7-0CH3)
Kryptofycin 3 [a]D +20,3° (MeOH, c = 1,13);
UV lambdamax(e) 206 (51 700),
218 (31 200), 230 (22 900), 246 (18 800), 280 (3 230);
CD [®l205 + 50 °00' t®bl2 ”390' t®hl8 ”47 200' ^233 -100, [Θ]251 +33,400, [θ]2?1 +4 310
IR (CHC13) vmax 34,17, 2926, 1742, 1721, 1676, 1499, 1336 cm-1.
EIMS m/z (rel. intenzita) 638/640 (2/0,7, M+), 412/414 (63/19), 280/282 (15/5), 227 (100), 195 (63), 91 (98); EIMS s vysokým rozlišením m/z 638,2764 (vypočteno pro C35H43CIN2O7, -0,5mmu chyba), 412,1516 (vypočteno pro c20H27clNO6' 1,Ironu chyba), 227,1293 (vypočteno pro C15H17NO, l,0mmu chyba).
XH NMR (CDC13): amino- nebo hydroxykyselinová jednotka δ (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz) 5-hydroxy-6-methyl8-fenyl-2,7-oktadienová kyselina (A) 5,77 (2, d, 15,5), 6,68 (3, ddd, 15,5, 9,5 a 5,3), 2,37 (4, ), 2,54 (4, m), • · · · · · • ·
- 114
5,01 (5, ddd, 11,4, 6 a 1,5), 2,56 (6, m) , 1,14 (6-Me, d,
7,0), 6,01 (7, dd, 15,8 a 8,8), 6,41 (8, d, 15,8), 7,28
-7,34 (10/11/13/14, m), 7,23 (12, to); 2-hydroxy-4-methylpentanová kyselina (D) 4,84 (2, dd, 10,1 a 3,6), 1,62 (3, m), 1,36 (3, m), 1,62 (4, m) , 0,77 (5, d, 6,5), 0,74 (4-Me, d, 6,3), 3-amino-2-methylpropionová kyselina (C) 2,71 (2, m), 1,22 (2-Me, d, 7,3), 3,28 (3, dt, 13,5 a 7,0), 3,50(3, ddd, 13,5, 4,9 a 4), 6,93 (3-NH, brt, 6,3); 3-chlor-4methoxyfenylalanin (B) 4,82 (2, m), 5,64 (2-NH, d, 8,8), 3,05 (3, dd, 14,5 a 7,0), 3,13 (3, dd, 14,5 a 5,5), 7,22 (5, d, 2,2), 3,87 (7-OCH3, s), 6,84 (8, d, 8,5), 7,08 (9, dd, 8,5 a 2,2) 13C NMR (CDCl3): jednotka δ (poloha uhlíku)
A 165,4 (1), 125,2 (2), 141,4 (3), 36,5 (4), 77,1 (5), 42,3 (6), 17,3 (6-Me), 130,1 (7), 130,0 (8), 136,7 (9), 126,1 (10/14), 128,6 (11/13), 128,4 (12); D 170,1 (l), 71,6 (2), 39,5 (3), 24,5 (4), 21,2 (5), 22,7 (4-Me); C 175,6 (l),
38,3 (2), 14,0 (2-Me), 41,2 (3); B 170,9 (1), 53,5 (2),
35,1 (3), 129,8 (4) 131,0 (5), 122,4 (6), 154,0 (7), 56,1 (7-OCH3), 112,2 (8), 127,6 (9).
Kryptofycin 4 [a]D +36,7° (MeOH, c = 1,93);
UV lambdamax(e) 206 (41 800), 228 (25 000), 240 (21 200), 248 (22 500), 280 (3 000), 290 (1 230);
CD £θ]205 + 63 9θθ' [θ]211 +3 °40' [θ]218 _71 9θθ' [θ]229 -11 700, [θ]234 “130, [θ]252 +47 5θθ' [θ]270 +5 4θ°·
IR (CHC13) Vmax 3410, 2962, 2917, 1741, 1718, 1678, 1511, 1251 cm-1.
EIMS m/z (rel. intenzita) 604 (2, M+), 378 (74), 246 (11), 227 (46), 161 (100), 91 (96);
EIMS s vysokým rozlišením m/z 604,3127 (vypočteno pro C35H44N2°7' 2,2mmu chyba), 378,1910 (vypočteno pro c20H28NO6' °»7mmu chyba), 227,1293 (vypočteno pro c15h17no,
- 115 • to • to · to · · • · ► toto 4 » to · · ·· · · i • to 4 • · «· l,7mmu chyba), 161,0605 (vypočteno pro C10HgO2, -0,2mmu chyba) ^H NMR (CDC13): amino- nebo hydroxykyselinová jednotka δ (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz) 5-hydroxy-6-methyl8-fenyl-2,7-oktadienová kyselina (A) 5,74 (2, dd, 15,3 a
1,2), 6,71 (3, ddd, 15,3, 10,3 a 5,0), 2,37 (4, m) , 2,53 (4, m), 5,03 (5, ddd, 11,2, 6,4 a 2,0), 2,55 (6, m) , 1,13 (6-Me, d, 6,8), 6,01 (7, dd, 15,8 a 8,8), 6,40 (8, d, 15,8), 7,28 7,37 (10/11/13/14, m), 7,22 (12, m); 2-hydroxy-4-methylpentanová kyselina (D) 4,84 (2, dd, 10,1 a 3,6), 1,65 (3, m), 1,34 (3, m), 1,65 (4, m) , 0,75 (5, d, 6,5), 0,72 (4-Me, d, 6,3); 3-amino-2-methylpropionová kyselina (C) 2,69 (2, m), 1,22 (2-Me, d, 7,5), 3,39 (3-H2, m), 7,03 (3-NH, brt, 6,0); O-methyltyrosin (B) 4,79 (2, m), 5,61 (2-NH, d, 7,8), 3,08 (3, dd, 14,5 a 7,0), 3,13 (3, dd, 14,5 a 5,3), 7,11 (5/9, d, 8,8), 6,81 (6/8, d, 8,8), 3,78 (7-OCH3, s). 13C NMR (CDC13): jednotka δ (poloha uhlíku) A 165,3 (1), 125,1 (2),
141.5 (3), 36,5 (4), 77,1 (R), 42,3 (6), 17,3 (6-Me), 130,1 (7), 131,8 (8), 136,7 (9), 126,2 (10/14), 128,7 (11/13),
127.6 (12); D 170,8 (1), 71,6 (2), 39,5 (3), 24,5 (4), 21,2 (5), 22,7 (4-Me); C 175,9 (1), 38,2 (2), 14,2 (2-Me), 40,9 (3); B 171,2 (1), 53,8 (2), 35,3 (3), 131,0 (4), 130,2 (5/9), 114,1 (6/8), 158,6 (7), 55,2 (7-OCH3).
Kryptofycin 5 [a]D +36,0° (c = 0,55);
UV lambdamax(e) 206 (45 600), 218 (37 700), 280 (3 790), 286 (3 480), 325 (2 080)
CD t®b03 +7 710' [θ]206 +29 θθθ' ^θ^210 +21 4θθ' [θ]222 +59 800, [θ]234 +12 θθθ/ [θ1241 +13 70θ·
IR (CHC13) Vmax 3426, 2958, 1728, 1672, 1502, 1259 cm-1.
EIMS m/z (rel. intenzita) 686/688 (0,1510.05), 655/657 (1/0,3), 654/656 (1,5/0,5), 311/313 (75/27), 195 (66), 155 (54), 121 (51), 91 (100);
• · · · · · • · ···· ·· · ···· ··· · · · · · · · • · · · · ·· · ··♦· ·
EIMS s vysokým rozlišením m/z 686,2983 (vypočteno pro C36H47C1LN2O9' _1ř3mmu chyba).
’-Η NMR (CDC13): amino- nebo hydroxykyselinová jednotka δ (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz) 7,8-epoxy-5-hydroxy6-methyl-8-fenyl-2-oktenová kyselina (A) 5,87 (2, d, 15,3), 6,72 (3, dt, 15,3 a 6,8), 2,60 (4, m) , 2,52 (4, ddd, 15,2,
7,8 a 6,8), 5,11 (5, ddd, 12,3, 7,8 a 7,1), 1,87 (6, m) , l, 12 (6-Me, d, 7,1), 2,91 (7, dd, 7,3 a 2,1), 3,70 (8, d,
2,1), 7,24 (10/14, brd, 7,4), 7,29 - 7,36 (11/12/13, m) , 2-hydroxy-4-methylpentanová kyselina (D) 4,09 (2, m), 2,86 (2-OH, brd, 6,1), 1,83 (3, m), 1,42 (3, m), 1,86 (4, m), 0,90 (5, d, 6,6), 0,87 (4-Me, d, 6,8); 3-amino-2-methylpropionová kyselina (C) 3,64 (1-OCH3, s), 2,60 (2, m) , 1,07 (2-Me, d, 7,3), 3,27 (3, ddd, 13,5, 8,0 a 5,5), 3,39 (3, m, ), 6,32 (3-NH, t, 5,4); 3-chlor-4-methoxyfenylalanin (B) 4,59 (2, dt, 6 a 7,5), 6,30 (2-NH, d, 7,5), 2,95 (3, dd,
13,6 a 7,5), 3,0 (3, dd, 13,6 a 6,0), 7,2 (5, d, 2,1), 3,86 (7-OCH3, s), 6,84 8, d, 8,5), 7,05 (9, dd, 8,5, 2,1). 13C NMR (CDC13): jednotka S (poloha uhlíku) A 164,8 (1), 126,5 (2), 139,2 (3), 34,4 (4), 75,5 (5), 39,2 (6), 12,9 (6-Me),
63,3 (7), 58,7 (8), 136,8 (9), 125,7 (10/14), 128,6 (11/13), 128,4 (12); D 175,1 (l), 69,2 (2), 43,2 (3), 24,3 (4), 21,2 (5), 23,2 (4-Me); C 175,4 (1), 51,9 (1-OMe), 39,1 (2) , 14,7 (2-Me), 41,6 (3); B 170,6 (1), 54,6 (2), 37,4 (3) , 129,5 (4), 131,0 (5), 122,4 (6), 154,1 (7), 56,1 (7-OMe), 112,2 (8), 128,4 (9)
Kryptofycin 6 [a]D +17,1° (MeOH, c = 1,1);
UV lambdamax(e) 206 (40 000), 218 (30 100), 228 (21 400), 282 (2 430);
CD [θ]203 +37 7θθ' ίθ^ΙΟ 5 43θ' ίθ]213 -1 26θ' [θ]221 +24
100, [θ]232 +8 4θθ, [®h40 +13 4θθ' [θ]254 +790.
- 117 ·· ···· ·· ·· ··
IR (CHC13) Vmax 3425, 3006, 2956, 1726, 1672, 1641,1502, 1462, 1259 cm1
FABMS (thioglycerol) m/z (rel. intenzita) 573/575 (13/6) [M-H2O]+, 217 (26), 91 (100).
·*·Η NMR (CDC13): amino- nebo hydroxykyselinová jednotka S (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz) 5,7,8-trihydroxy-6methyl-8-fenyl-2-oktenová kyselina (A) 5,92 (2, dt, 15,0 a 1,5), 6,94 (3, dt, 15 a 7,5), 2,51 (4, m) , 2,64 (4, m) , 3,97 (5, ddd, 9,3, 6,5 a 4,5), 2,03 (6, m) , 1,10 (6-Me, d, 6,5), 3,70 (7, dd, 9,0 a 7,5), 4,64 (8, d, 7,5), 7,33 - 7,39 (10/11/13/14, m), 7,28 (12, tt, 6,5 a 2,0); 3-chlor-4-methoxyfenylalanin (B) 4,60 (2, td, 8,0 a 6,0), 6,09 (2-NH, brd, 8,0), 2,96 (3, dd, 13,8 a 8,0), 3,02 (3, dd, 13,8 a 6,0), 7,22 (5, d, 2,0 (3,86 (7-OCH3, s), 6,84 (8, d, 8,5), 7,07 (9, dd, 8,5 a 2,0) 3-amino-2-methylpropionová kyselina (C) 3,63 (1-OCH3, s), 2,58 (2, m), 1,07 (2-Me, d, 7,0), 3,24 (3, ddd, 13,8, 8 a 6,5), 3,41 (3, ddd, 13,8, 6,5 a 4,8), 6,21 (3-NH, brt, 6,5) 13C NMR (CDCl3): jednotka & (poloha uhlíku) A 165,2 (1), 125,6 (2), 141,3 (3), 36,9 (4), 82,5 (5), 46,3 (6), 14,3 (6-Me), 85,1 (7),
84,8 (8), 140,9 (í), 125,8 (10/14), 128,6 (11/13), 127,8 (12); (B) 170,6 (1), 54,5 (2), 37,3 (3), 129,6 (4), 131,0 (5), 122,5 (6), 154,1 (7), 56,1 (7-OCH3), 112,2 (8), 128,5 (9), C 52,0 (1-OCH3), 175,4 (1), 39,2 (2), 14,7 (2-Me),
41,6 (3)
Kryptofycin 7 [a]D -51,9° (MeOH, c = 0,89);
UV lambdamax(e) 206 (23 400), 220(14 900), 282 (1 670);
CD t®b02 +35 4θ0' [θ]206 _1 73θ' [θ]211 19 2θθ' [θ]220 “15 800, [θ]232 +29 θθθ' t®^263 +2 040
IR (CHC13) vmax 3426, 2946, 1732, 1675, 1501, 1258 cm“1 EIMS m/z (rel. intenzita) 455/457 (1/0,3, [M-2H2O]+), 105 (100), 77 (98) • · · · · ·
FABMS m/z (matrice magie bullet) 496/498 [M-H2O+Na]+, (thioglycerolová matrice) 474/476 [M-H201+H]+.
*·Η NMR (CD3OD): amino- nebo hydroxykyselinová jednotka δ (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz) 5,7,8-trihydroxy-6methyl-8-fenyl-2-oktenová kyselina (A) 6,06 (2, ddd, 15,5,
1.3 a 1,0),6,80 (3, dt, 15,5 a 7,5), 2,49 (4, m), 2,59 (4, m), 3,92 (5, ddd, 9,5, 6,3 a 4,7), 1,95 (6, m), 1,08(6-Me, d, 6,7), 3,59(7, dd, 9,0 a 7,8), 4,56 (8, d, 7,8), 7,37 (10/14, brd, 7,3), 7,31 (11/13, brt, 7,3), 7,24 (12, tt,
7.3 a 1,5); 3-chlor-4-methoxyfenylalanin (B) 4,52 (2, dd,
6.9 a 5,0), 2,93 (3, dd, 13,8 a 6,9), 3,15 (3, dd, 13,8 a 5,0), 7,20 (5, d, 2,2), 3,78 (7-OCH3, S), 6,88 (8, d, 8,4), 7,08 (9, dd, 8,4 a 2,2) 13C NMR (CD3OD): jednotka δ (poloha uhlíku) A 167,4 (1), 127,6 (2), 140,9 (3), 37,9 (4), 84,0 (5), 47,6 (6), 144,4 (6-Me), 86,0 (7), 85,8 (8),
142.9 (9), 127,1 (10/14), 129,3 (11/13), 128,5 (12);
B 177,6 (1), 57,3 (2), 38,2 (3), 132,8 (4), 132,1 (5),
122.9 (6), 155,0 (7), 56,5 (7-OCH3), 113,2 (8), 130,1 (9).
Kryptofycin 16 [a]D +41,3° (MeOH, c = 5,2);
UV lambdamax(e) 242 (4963), 280 (2430), 286 (2212);
IR (in substancia) vmax 3402, 3270, 2960, 1748, 1724, 1676, 1514, 1466, 1343, 1239, 1177 cm“1;
EIMS m/z (rel. intenzita) 640/642 (66/27), 398/400 (47/16), 265 (55), 227 (93), 181 (100);
EIMS s vysokým rozlišením m/z 640,25676 (vypočteno pro C34H41C1N2°8' “ifSmmu chyba).
1H NMR (CDC13): amino- nebo hydroxykyselinová jednotka δ (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz) 7,8-epoxy-5-hydroxy6-methyl-8-fenyl-2-oktenová kyselina (A) 5,74 (2, d, 16),
6,67 (3, ddd, 15,3, 9,7 a 5,5), 2,45 (4, dt, 14,3 a 10,4), 2,55 (4, brdd, 14,3 a 5,3), 5,15 (5, ddd, 11,2, 4,8 a 1,8),
1,8 (6, m), 1,14 (6-Me, d, 7,0), 2,92 (7, dd, 7,5 a 2,0), ·· ··· · • ·
- 119 ··
4
4
4 4
4 4
4
4444 4
4 4
44
3,69 (8, d, 2,0), 7,24 - 7,26 (10/14, m) , 7,33 - 7,39 (11/12/13, m); 3-chlor-4-hydroxyfenylalanin (B) 4,8 (2, m),
5,64 (2-NH, d, 8,8), 3,03 (3, dd, 14,5 a 7,0), 3,11 (3, dd,
14,4 a 5,6), 7,17 (5, d, 2,2), 5,61 (7-OH, s), 6,91 (8, d,
8,3), 7,0 (9, dd, 8,3 a 2,2); 3-amino-2-methylpropionová kyselina (C) 2,71 (2, m), 1,22 (2-Me, d, 7,3), 3,28 (3, dt,
13.6 a 6,8), 3,49 (3, ddd, 13,6, 5 a 4,1), 6,92 (3-NH, brt,
6,1); 2-hydroxy-4-methylpentanová kyselina (D) 4,83 (2, dd,
10,1 a 3,3), 1,36 (3, m) , 1,67 - 1,75 (3, m) , 1,67 - 1,75 (4, m), 0,85 (5, d, 7,5), 0,86 (4-Me, d, 6,8). 13C NMR (CDC13): jednotka δ (poloha uhlíku) A 165,3 (1), 125,3 (2), 141,0 (3), 36,7 (4), 76,2 (5), 40,6 (6), 13,5 (6-Me), 63,0 (7), 59,0 (8), 136,8 (9), 125,6 (10/14), 128,7 (11/13),
128.6 (12); B 170,9 (l), 53,6 (2), 35,1 (3), 129,9 (4),
129.6 (5), 120,0 (6), 150,4 (7), 116,4 (8), 129,2 (9);
C 175,6 (1), 38,3 (2), 14,1 (2-Me), 41,1 (3); D 170,8 (1),
71,3 (2), 39,4 (3), 24,6 (4), 21,3 (5), 22,9 (4-Me).
Kryptofycin 17 [a]D +27,8° (CHC13, C = 0,37);
UV lambdamax(e) 248 (14 740), 268 (8100), 278 (3400), 284 (2840);
IR (in substancia) vmax 3412, 2958, 1750, 1723, 1668, 1504, 1463, 1290, 1177, 751 cm1;
EIMS m/z (rel. intenzita) 624/626 (10/3), 398/400 (95/35), 284 (100), 149 (95);
EIMS s vysokým rozlišením m/z 624,26161 (vypočteno pro C34H41C1N2°7' ~l/4mmu chyba).
1H NMR (CDC13): amino- nebo hydroxykyselinová jednotka δ (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz) 5-hydroxy-6-methyl8-fenyl-2,7-oktadienová kyselina (A) 5,77 (2, d, 15,4),
6,67 (3, ddd, 15,4, 9,5 a 5,3), 2,37 (4, m), 4,99 (5, ddd, 11,2, 6,3 a 1,6), 2,54 (6, m), 1,14 (6-Me, d, 6,7), 6,01 (7, dd, 15,7 a 8,7), 6,41 (8, d, 15,9), 7,28 - 7,34 • · ·· ····
- 120 ·· *· • · · · • · ·« • · · ·· ·· (10/11/13/14, m), 7,23 (12, m); 3-chlor-4-hydroxyfenylalanin (B) 4,82 (2, m) , 5,63 (2-NH, d, 8,7), 3,12 (3, dd, 14,7 a 5,6), 3,03 (3', dd, 14,7 a 7,1), 7,18 (5, d, 2,0), 5,47 (7-OH, brs), 6,91 (8, d, 8,3), 7,02 (9, dd, 8,3 a 2,0); 3-amino-2-methylpropionová kyselina (C) 2,71 (2, m),
1,21 (2-Me, ď 6,9), 3,25 (3, m), 3,52 (3', m), 6,89 (3-NH, brt, 6,1); 2-hydroxy-4-methylpentanová kyselina (D) 4,84 (2, dd, 9,6 a 3,1), 1,62 (3, m), 1,36 (3', m), 1,62 (4, m) , 0,77 (5, ď 6,5), 0,73 (4-Me, d, 6,5) 13C NMR (CDC13): jednotka δ (poloha uhlíku) A 165,4 (1), 125,3 (2), 141,3 (3), 36,5 (4), 77,1 (5), 42,3 (6), 17,3 (6-Me), 130,0 (7),
129,9 (8), 136,7 (9), 126,2 (10/14), 128,6 (11/13), 127,6 (12); B 170,9 (1), 53,5 (2), 35,1 (3), 129,6 (4), 131,9 (5), 126,2 (6), 150,3 (7), 116,3 (8), 127,6 (9); C 175,9 (1) , 38,4 (2), 13,9 (2-Me), 41,3 (3); D 170,9 (1), 71,6 (2) , 39,5 (3), 24,5 (4), 21,2 (5), 22,7 (4-Me)
Kryptofycin 18 [a]D +54,9° (MeOH, c = 0,93);
UV lambdamax(e) 250 (20 518), 284 (3857);
IR (in substancia) vmax 3411, 3271, 2966, 1746, 1728, 1668, 1505, 1463, 1258, 1178 cm-1
EIMS m/z (rel. intenzita) 638/640 (5,4/1,1), 412/414 (59/19), 280 (17), 227 (100);
EIMS s vysokým rozlišením m/z 638,272934 (vypočteno pro C35H43CIN2O7, 2,9mmu chyba).
^H NMR (CDC13): amíno- nebo hydroxykyselinová jednotka δ (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz) 5-hydroxy-6-methyl8-fenyl-2,7-oktadienová kyselina (A) 5,76 (2, d, 15,5),
6,65 (3, ddd, 15,4, 9,2 a 6,2), 2,38 -2,47 (4, m), 5,08 (5, ddd, 10,6, 4,9 a 2,2), 2,58(6, m), 1,15 (6-Me, d,6,8), 6,07 (7, dd, 15,9 a 8,5), 6,43 (8, d, 15,9), 7,21 - 7,35 (10/11/12/13/14, m); 3-chlor-4-methoxyfenylalanin (B) 4,83 (2, m), 3,05 (3, dd, 14,5 a 7,1), 5,65 (2-NH, d, 8,7), 3,14 ·· ··· · • ·
- 121 • · · ·· · • · • · · · ·· · · · • · · ·· ·· (3, dd, 14,4 a 5,5), 7,21 (5, d, 2,4), 3,86 (7-OCH3, s),
6,83 (8, d, 8,3), 7,08 (9, dd, 8,3 a 2,2); 3-amino-2methylpropionová kyselina (C) 2,73 (2, m), 1,23 (2-Me, d,
7,2), 3,23 (3, dt, 13,5 a 6,8), 3,56 (3, ddd, 13,5, 5,7 a 4,0), 6,85 (3-NH, dd, 7,1 a 6,2); 2-hydroxy-4-methylpentanová kyselina (D) 4,8 (2, d, 4,6), 1,86 - 1,89 (3, m), 0,94 (3-Me, d, 7,0), 1,20 - 1,26 (4, m), 1,39 - 1,44 (4, m) , 0,77 (5, d, 7,4). 13C NMR (CDCl3): jednotka δ (poloha uhlíku) A 165,5 (1), 125,2 (2), 141,5 (3), 36,4 (4), 77,7 (5), 41,9 (6), 17,1 (6-Me), 129,8 (7), 131,9 (8), 136,8 (9), 128,6 (10/14), 126,2 (11/13), 127,6 (12); B 170,0 (1),
53,5 (2), 35,1 (3), 129,9 (4), 131,1 (5), 122,4 (6), 153,9 (7), 56,1 (7-OCH3), 112,2 (8), 128,5 (9); C 175,3 (1), 38,6 (2) , 14,0 (2-Me), 41,4 (3); D 169,5 (1), 76,6 (2), 36,2 (3) , 15,5 (3-Me), 24,2 (4), 14,0 (5).
Kryptofycin 19 [a]D +62,6° (MeOH, c = 0,67);
UV lambdamax(e) 204 (44 900), 230 (17 000), 248 (15 600),
280 (2500);
IR (in substancia) vmax 3413, 3272, 2966, 1745, 1726, 1672, 1504, 1258, 1199, 1178, 1066, 692 cm1;
EIMS m/z (rel. intenzita) 624/626 (3,0/1,4), 398/400 (58/21), 280/282 (15/5), 227 (100), 195/197 (57/22);
EIMS s vysokým rozlišením m/z 624,2585 (vypočteno pro C34H41C1N2°7' lz8mmu chyba).
1H NMR (CDC13): amino- nebo hydroxykyselinová jednotka δ (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz) 5-hydroxy-6-methyl8-fenyl-2,7-oktadienová kyselina (A) 5,76 (2, d, 15,2),
6,64 (3, ddd, 15,4, 9,1 a 6,2), 2,38 (4, m), 2,47 (4, m), 5,04 (5, ddd, 7,1, 5,1 a 1,8), 2,57 (6, m), 1,15 (6-Me, d,
6,9), 6,05 (7, dd, 15,8 a 8,5), 6,43 (8, d, 15,8), 7,29 - 7,35 (10/11/13/14, m), 7,23 (12, m); 3-chlor-4-methoxyfenylalanin (B) 4,84 (2, m), 5,67 (2-NH, d, 8,9), 3,04 • ·
9999
9 9 9
9 9 9
9 9 9
9 9 *
9 9
99 (3, dd, 14,3 a 7,1), 3,14 (3, dd, 14,3 a 5,3), 7,22 (5, d, 2,0), 3,86 (7-OCH3, s), 6,83 (8, d, 8,2), 7,08 (9, dd, 8,2 a 2,0); 3-amino-2-methylpropionová kyselina (C) 2,75 (2, m), 1,23 (2-Me, d, 7,1), 3,19 (3, m), 3,59 (3, m) , 6,80 (3-NH, brt, 6,7); 2-hydroxyisovalerová kyselina (D) 4,73 (2, d,
4,2), 2,09 (3, m), 0,84 (4, d, 6,9 ), 0,95 (3-Me, d, 6,9). 13C NMR (CDC13): jednotka δ (poloha uhlíku) A 165,5 (1),
125,3 (2), 141,3 (3), 36,3 (4), 77,7 (5), 42,0 (6), 17,1 (6-Me), 129,9 (7), 131,9 (8), 136,8 (9), 126,1 (10/14),
128,6 (11/13), 127,6 (12); B 171,0 (1), 53,4 (2), 35,1 (3), 130 (4), 131,1 (5), 122,4 (6), 153,9 (7), 56,1 (7-OMe),
112,2 (8), 128,5 (9); C 17,1 (1), 38,7 (2), 13,9 (2-Me),
41,5 (3); D 169,6 (1), 76,9 (2), 29,8 (3), 19,0 (4), 16,7 (3-Me).
Kryptofycin 21 [<X]D +40,2° (CHC13, C = 0,72);
UV lambdamax(e) 240 (6700), 280 (2400), 288 (2100);
IR (in substancia) vmax 3403, 3279, 2957, 1731, 1673, 1503, 1464, 1409, 1372, 1258, 1174, 1065, 1023, 889 cm'1?
EIMS m/z (rel. intenzita) 640/642 (10/4), 612 (5), 478 (15), 398 (40), 266 (33), 227 (76), 195 (95), 155 (100), 127 (90); EIMS s vysokým rozlišením m/z 640,2550 (vypočteno pro C34H41C1N2°8' °/2nunu chyba);
3H NMR (CDC13): amino- nebo hydroxykyselinová jednotka δ (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz) 7,8-epoxy-5-hydroxy6-methyl-8-fenyloktanová kyselina (A) 5,73 (2, d, 15,4),
6,68 (3, ddd, 15,0, 9,9 a 4,9), 2,45 (4, m), 2,56 (4, m) , 5,19 (5, ddd, 11,2, 5,1 a 1,5), 1,80 (6, m), 1,14 (6-Me, d, 7,1), 2,92 (7, dd, 7,5 a 2,0), 3,68 (8, d, 1,8), 7,25 (10/14, m), 7,33 - 7,38 (11/12/13, m); 3-chlor-4-methoxyfenylalanin (B) 4,74 (2, ddd, 8,2, 6,8 a 6,2), 5,68 (2-NH, d, 8,6),2,98 (3, dd, 14,3 a 7,7), 3,14 (3, dd, 14,3 a 5,6),
7,21 (5, d, 2,0), 3,86 (7-OMe, s), 6,83 (8, d, 8,4), 7,07 • 9
- 123 ·· · • · ·· • · · • · · • 9 ·
999
9 ·
·
9 ····
99 · · 9 · 99
9 · ·
9 9
99 (9, dd, 8,4 a 2,0); 3-aminopropionová kyselina (C) 2,56 (2, m), 3,51 (3, m), 3,45 (3, m) , 6,90 (3-NH, brt, 58); 2-hydroxy-4-methylpentanová kyselina (D) 4,89 (2, dd, 10,0 a 3,3), 1,67 (3, m), 1,31 (3, m) , 1,67 (4, m) , 0,84 (5, d,
6,4), 0,83 (4-Me, d, 6,4); 13C NMR (CDC13): jednotka δ (poloha uhlíku) A 165,5 (1), 125,3 (2), 141,0 (3), 36,7 (4), 75,9 (R), 40,6 (6), 13,5 (6-Me), 63,0 (7), 59,0 (8),
136,7 (9), 125,6 (10/14), 128,7 (11/13), 128,5 (12);
B 170,7 (1), 53,9 (2), 35,0 (3), 129,8 (4), 130,9 (5),
122,4 (6), 153,9 (7), 56,1 (7-OMe), 112,2 (8), 128,3 (9);
C 172,6 (1), 32,4 (2), 34,4 (3); D 170,5 (1), 71,2 (2),
39,5 (3), 24,4 (4), 22,8 (5), 21,2 (4-Me).
Kryptofycin 23 [a]D +47° (MeOH, c = 1,55);
UV lambdamax(e) 240 (4571), 282 (2174), 290 (2177);
IR (in substancia) vmax 3284, 2960, 1747, 1724, 1653, 1540, 1490, 1339, 1272, 1174 cm”1
EIMS ffi/z (rel. intenzita) 674/675/678 (47/35/8), 432/434/436 (11/5/2), 299/301/303 (39/30/7), 277 (64), 215/217/219 (31/30/8), 141 (100);
EIMS s vysokým rozlišením m/z 674,21643 (vypočteno pro C34H4C12N2°8' 0/3mmu chyba);
'•H NMR (CDC13); amino- nebo hydroxykyselinová jednotka δ (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz) 8-epoxy-5-hydroxy6-methyl-8-fenyl-2-oktenová kyselina (A) 5,77 (2, d, 15,4),
6,65 (3, ddd, 15,4, 9,3 a 6,0), 2,47 (4, dt, 14,2 a 10,2), 2,55 (4, brdd, 14,2 a 5,6), 5,13 (5, ddd, 11,0, 4,6 a 1,6), 1,81 (6, m), 1,15 (6-Me, d, 6,9), 2,93 (7, dd, 7,6 a 2,0),
3,7 (8, d, 2,0), 7,22 - 7,26 (10/14, m), 7,32 - 7,39 (11/12/13, m); 3,5-dichlor-4-hydroxyfenylalanin (B) 4,81 (2, m), 5,69 (2-NH, d, 8,6), 3,11 (3, dd, 14,5 a 5,6), 3,50 (3, dd, 14,3 a 7,0), 7,13 (5/9, s), 5,78 (7-OH, s); 3-amino-2-methylpropionová kyselina (C) 2,73 (2, m), 1,22 • ·
- 124 φ· · ·· ···· · · • · ·· ·· · ···· 4·· ♦♦· ···· »· · ·· ·· Ο · · · · · ·· · · · ··· • β · C · ·· l 44 44 (2-Me, d, 7,1), 3,19 (3, dt, 13,4 a 6,9), 3,58 (3, ddd,
13,6, 5,8 a 4,1), 6,82 (3-NH, brt, 5,9); 2-hydroxy-4methylpentanová kyselina (D) 4,84 (2, dd, 9,9 a 3,2),
1,38(3, m), 1,68 - 1,75(3, m) , 1,68 -1,75 (4, m) , 0,86 (4-Me, d, 6,7), 0,87 (5, d, 6,7) 13C NMR (CDC13): jednotka δ (poloha uhlíku) A 165,4 (1), 125,4 (2), 140,9 (3), 36,7 (4), 76,3 (5), 40,6 (6), 13,5 (6-Me), 63,0 (7), 58,9 (8),
136,7 (9), 125,6 (10/14), 128,7 (11/13), 128,6 (12);
B 170,7 (1), 53,3 (2), 35,0 (3), 130,3 (4), 129,0 (5/9), 121,0 (6/8), 146,7 (7); C 175,3 (1), 38,4 (2), 13,9 (2-Me),
41.5 (3); D 170,8 (1), 71,3 (2), 39,4 (3), 24,6 (4), 21,3 (4-Me), 22,9 (5).
Kryptofycin 24 [a]D +48,8° (CHC13, c = 0,63);
UV lambdamax(e) 228 (19 006), 242 (8249), 274 (2351);
IR (in substancia) vmax 3400, 3284, 2959, 1732, 168, 1652, 1514, 1248, 1178 cm“1;
EIMS m/z (rel. intenzita, přiřazení) 606 (2, M+), 364 (7), 161 (55, CH3O-C6H4-CH=CH-CO+), 121 (100, CH3O-CgH4-CH2 +) , 91 (68);
EIMS s vysokým rozlišením m/z 606,2954 (vypočteno pro C34H42N2°8' chyba);
NMR (CDC13); amino- nebo hydroxykyselinová jednotka δ (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz) 7,8-epoxy-5-hydroxy6-methyl-8-fenyl-2-oktenová kyselina (A) 5,70 (2, dd, 15,2 a 1,3), 6,70 (3, ddd, 15,2, 10,3 a 4,7), 2,43 (4, dt, 14,3 a 10,9), 2,56 (4, m), 5,20 (5, ddd, 11,3, 5,1 a 2,0), 1,79 (6, m), 1,14 (6-Me, d, 7,0), 2,912 (7, dd, 7,5 a 2,0), 3,68 (8, d, 2,0), 7,23 - 7,38 (10/11/12/13/14, m); O-methyltyrosin (B) 4,73 (2, m) , 5,58 (2-NH, d, 8,3), 3,03 (3, dd,
14.5 a 7,5), 3,14 (3, dd, 14,5 a 5,7), 7,11 (5/9, d, 8,6), 6,81 (6/8, d, 8,6), 3,78 (7-OMe, s); 3-aminopropionová kyselina (C) 2,55 (2-H2, m), 3,42 (3, m), 3,53 (3, m), 6,97 • ·
- 125 (3-NH, brt, 5,7); 2-hydroxy-4-methylpentanová kyselina (D) 4,89 (2, dd, 9,9 a 3,5), 1,29 (3, m) , 1,62 - 1,70 (3/4, m) , 0,83 (5, d, 5,9), 0,á4 (4-Me, d, 6,1) 13C NMR (CDC13): jednotka 8 (poloha uhlíku) A 165,4 (1), 125,3 (2), 141,0 (3) , 36,7 (4), 75,9 (5), 40,6 (6), 13,4 (6-Me), 63,0 (7), 59,0 (8), 136,7 (9), 125,6 (10/14), 128,7 (11/13), 128,5 (12); B 170,7 nebo 170,6 (1), 54,1 (2), 35,2 (3), 128,5 (4) , 130,2 (5/9), 114,1 (6/8), 158,6 (7), 55,2 (7-OMe);
C 172,8 (1), 32,5 (2), 34,2 (3); D 170,6 nebo 170,7 (1),
71,2 (2), 239,5 (3), 24,4 (4), 21,3 (5), 22,8 (4-Me).
Kryptofycin 26 [a]D +28,2° (CHClg, C = 1,31);
UV lambdamax(e) 254 (14 615), 284 (2949);
IR (in substancia) Vmax 3299, 2960, 1732, 1644, 1504, 1258, 1209 cm”1;
EIMS m/z (rel. intenzita) 656/658 (0,5/0,l,M+), 638/640 (1,7/1,0), 525/527 (3,7/1,8), 412/414 (10/4), 280/282 (12/11), 227 (20), 195 (48), 131 (68);
EIMS s vysokým rozlišením m/z 656,2836 (vypočteno pro C35H45C1N2°8' 2,8mmu chyba), 638,2712 (vypočteno pro c35H43clN2°7' 4,7mmu chyba);
1H NMR (CDC13): amino- nebo hydroxykyselinová jednotka δ (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz) 3,5-dihydroxy-6methyl-8-fenyl-7-oktenová kyselina (A) 2,46 (2, dd, 14,8 a 7,8), 2,58 (2, dd, 14,8 a 3,0), 5,46 (3, m), 1,86 -1,90 (4-H2, m), 3,61 (5, m), 2,37 (6, m), 1,14 (6-Me, d, 6,8), 6,06 (7, dd, 16 a 8,7), 6,47 (8, d, 16), 7,37 (1014, brd,
7,9), 7,32 (11/13, brt, 7,6), 7,22 - 7,2a8 (12, m); 3-chlor-4-methoxyfenylalanin (B) 4,73 (2, brdt, 6,4 a 8,1), 6,14 (2-NH, d, 8,6), 2,84 (3, dd, 14,4 a 8), 3,18 (3, dd,
14,4 a 6,3), 7,21 (5, d, 2,2), 3,85 (7-OMe, s), 6,82 (8, d, 8,6), 7,08 (9, dd, 8,6 a 2,2); 3-amino-2-methylpropionová kyselina (C) 2,87 (2, m), 1,19 (2-Me, d, 7,0), 3,01 (3, ddd,
9999
9 9
O 9 99 9 9 • · · · ·
9 9 9 9 9
- 126 - ·· ··· ·· 1
99
9 9
9 9
9 9 9
9 9
99
13,4, 10,6 a 4,9), 3,73 (3, ddd, 13,4, 8,2 a 4,7), 6,72 (3-NH, brdd, 7,3 a 5,2); 2-hydroxy-4-methylpentanová kyselina (D) 4,95 (2, dd, 9,7 a 4,2), 1,62 - 1,72 (3, m), 1,79 - 1,84 (3, m) , 1,62 - 1,72 (4, m) , 0,90 (4-Me, d,
6.4) , 0,95 (5, d, 6,4). 13C NMR (CDC13); jednotka δ (poloha uhlíku) A 170,0 (1), 41,5 (2), 71,4 (3), 37,3 (4), 71,9 nebo
71.8 (5), 43,6 (6), 16,6 (6-Me), 130,8 (7), 132,5 (8),
136.8 (9), 126,2 (10/14), 128,6 (11/13), 127,6 (12);
B 170,9 (1), 53,2 (2), 34,7 (3), 130,3 (4), 131,1 (5),
122,2 (6), 153,8 (7), 56,1 (7-OMe), 112,2 (8), 128,5 (9);
C 174,3 (1), 40,1 (2), 14,4 (2-Me), 42,5 (3); D 170,7 (1),
71.8 nebo 71,9 (2),38,9 (3), 24,6 (4), 21,6 (4-Me), 22,9 (5).
Kryptofycin 28 [a]D +65,6“ (MeOH, c = 0,93);
UV lambdamax(e) 204 (48 000), 230 (19 300), 248 (18 700), 2780 (3400);
IR (in substancia) Vmax 3413, 3270, 2958, 1745, 1726, 1665, 1504, 1258, 1197, 1175, 1066, 694 cm-1;
EIMS m/z (rel. intenzita) 624/626 (3,0/1,3), 412/414 (70/24), 280/282 (13/6), 213 (100), 195/197 (86/40);
EIMS s vysokým rozlišením m/z 624,2626 (vypočteno pro c34h41c1n2°7' ”2,4mmu chyba);
XH NMR (CDC13): amino- nebo hydroxykyselinová jednotka δ (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz) 5-hydroxy-8-fenyl2,7-oktadienová kyselina (A) 5,78 (2, d, 15,6), 6,71 (s, ddd, 15,6, 9,9 a 5,4), 2,40(4, m), 2,53 (4, m), 5,17 (5, m), 2,53 (6-H2, brt, 6,7), 6,07 (7, dt, 15,8 a 7,4), 6,44 (8, d, 15,8), 7,27 - 7,38(10/11/13/14, m), 7,22 (12, m); 3-chlor-4-methoxyfenylalanin (B) 4,82 (2, m), 5,72 (2-NH, d,
8.5) , 3,04 (3, dd, 14,5 a 7,2), 3,14 (3, dd, 14,5 a 5,4),
7,22 (5, d, 2,0), 3,87 (7-OMe, s), 6,84 (8, d, 8,5), 7,08 (9, dd, 8,5 a 2,0); 3-amino-2-methylpropionová kyselina (C) • · • · · · • · «·· · · · · · · · • · · ·· · · · · · · · · ··· · · ft · · ·
127 - ·· ··· ·· » *· ··
2,72 (2, m), 1,21 (2-Me, d, 7,2), 3,29 (3, dt, 13,5 a 7,0), 3,49 (3, ddd, 13,5, 4,9 ía 3,8), 6,97 (3-NH, brt, 5,6);
2- hydroxy-4-methylpentanová kyselina (D) 4,82 (2, m), 1,40 (3, m) , 1,62 (3, m), 1,62 (4, m) , 0,76 (4-Me, d, 6,3), 0,74 (5, d, 6,3); *3C NMR (CDCl3): jednotka 8 (poloha uhlíku)
A 165,4 (1), 125,2 (2), 141,2 (3), 38,5 (4), 73,5 (5), 38,6 (6), 124,1 (7), 133,8 (8), 136,7 (9), 126,1 (10/14), 128,6 (11/13), 127,6 (12); B 170,9 (1), 53,6 (2), 35,1 (3), 129,8 (4), 131,0 (5), 122,4 (6), 154,0 (7), 56,1 (7-OMe), 112,3 (8), 128,4 (9); C 175,6 (1), 38,3 (2), 14,0 (2-Me), 41,2 (3), D 170,9 (1), 71,6 (2), 39,6 (3), 24,5 (4), 21,5 (4-Me), 22,6 (5).
Kryptofycin 29 [a]D +22,2° (CHC13, C = 1,13);
UV lambdamax(e) 250 (17 000), 284 (3300);
IR (in substancia) Vmax 3415, 3272, 2960, 1744, 1734, 1674, 1504, 1259, 1197, 1174, 1067, 694 cm1;
EIMS m/z (rel. intenzita) 624/626 (2,6/1,1), 398/400 (44/15), 227 (100), 195/197 (50/16), 155/157 (59/20), 131 (63), 91 (95);
EIMS s vysokým rozlišením m/z 624,2607 (vypočteno pro c34H41clN2°7' delta = -0/5mmu chyba);
NMR (CDC13): amino- nebo hydroxykyselinová jednotka δ (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz) 5-hydroxy-6-methyl8-fenyl-2,7-oktadienová kyselina (A) 5,75 (2, dd, 15,3 a 1,1), 6,69 (3, ddd, 15,3, 10,1 a 5,3), 2,36 (4, m), 2,54 (4, m), 5,03 (6, ddd, 11,0, 6,4 a 1,8), 2,56 (6, m), 1,14 (6-Me, d, 6,8), 6,01 (7, dd, 15,8 a 8,8), 6,41 (8, d,
15,8), 7,28 -7,33 (10/11/13/14, m), 7,22 (12, m);
3- chlor-4-methoxyfenylalanin (B) 4,76 (2, m), 5,67 (2-NH, d,
8,6), 3,0 (3, dd, 14,4 a 10,2), 3,14 (3, dd, 14,4 a 5,9),
7,22 (5, d, 2,2), 3,87 (7-OMe, s), 6,83 (8, d, 8,4), 7,08 (9, dd, 8,4 a 2,2); 3-aminopropionová kyselina (C) 2,55
- 128 (2-H2, m), 3,44 (3, m), 3,55 (3, m) , 6,89 (3-NH, brt, 5,7); 2-hydroxy-4-methylpěntanová kyselina (D) 4,90 (2, dd, 9,9 a 3,5), 1,34 (3, ddd, 15,4, 10,3 a 3,5), 1,63 (3, m) , 1,63 (4, m), 0,76 (4-Me, d, 6,4), 0,72 (5, d, 6,4); 13C NMR (CDC13): jednotka δ (poloha uhlíku) A 165,6 (1), 125,2 (2),
141.5 (3), 36,4 (4), 77,1 (5), 42,3 (6), 17,3 (6-Me), 130,1 (7), 131,8 (8), 136,7 (9), 126,2 (10/14), 128,6 (11/13),
127.6 (12); B 170,9 (1), 53,8 (2), 34,9 (3), 129,9 (4), 131,0 (5), 122,4 (6), 153,9 (7), 56,1 (7-OMe), 112,2 (8),
128,4 (9); C 172,6 (1), 32,4 (2), 34,5 (3); D 170,4 (1),
71,5 (2), 39,7 (3), 24,4 (4), 21,2 (4-Me), 22,6 (5).
Kryptofycin 30 (a]D -12,3 (CHC13, C = 1,53);
UV lambdamax(e) 254 (17 200), 284 (3600);
IR (in substancia) Vmax 3414, 3306, 2961, 1738, 1729, 1660, 1504, 1258, 1205, 1183, 1066, 695 cm1;
EIMS m/z (rel. intenzita) 656/658 (1,0/0,3), 638/640 (3,0/1,0), 525/527 (3,8/1,3), 412/414 (10,5/3,6), 280/282 (10,3/3,8), 227 (29), 195/197 (48/17), 155(157 (74/21), 131 (100);
EIMS s vysokým rozlišením m/z 656,2852 (vypočteno pro C35H45C1N2°8' chyba);
1H NMR (CDC13): amino- nebo hydroxykyselinová jednotka δ (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz) 3,5-dihydroxy-6methyl-8-fenyl-7-oktenová kyselina (A) 2,25 (2, dd, 16,0 a 9,6), 2,64 (2, brd, 16,0), 3,89 (3, m), 2,51 (3-OH, d,
6,4), 1,77 (4, ddd, 14,3, 9,8 a 2,1), 1,88 (4, ddd, 14,3, 11,3 a 3,8), 4,88 (5, ddd, 11,3, 6,2 a 2,1), 2,53 (6, m), 1,10 (6-Me, d, 6,8), 5,99 (7, dd, 15,9 a 9,0), 6,40 (8, d,
15,9), 7,28 - 7,33 (10/11/13/14, m), 7,23 (12, m); 3-chlor-4-methoxyfenylalanin (B) 4,60 (2, m), 6,61 (2-NH, d, 8,1), 3,09 (3, dd, 14,2 a 5,6), 3,15 (3, dd, 14,2 a 7,3),
7,22 (5, d, 2,1), 3,86 (7-OMe, s), 6,83 (8, d, 8,3), 7,07 • · ·· ···· • ·
- 129 ···· ·· · · · 9 · >9 9 99 » 9999 • 99« 9 9
9 9
99 (9, dd, 8,3 a 2,1); 3-amino-2-methylpropionová kyselina (C)
2,67 (2, m) , 1,21 (2-Me, d, 7,3), 3,26 (3, ddd, 13,6, 7,3 a 6,4), 3,63 (3, ddd, 13,6, 6,2 a 3,9), 6,75(3-NH, brt, 6,3); 2-hydroxy-4-methylpentanová kyselina (D) 4,83 (2, dd, 9,6, 4,1), 1,42 (3, m) , 1,64 (3, m) , 1,64 (4, m) , 0,79 (4-Me, d, 6,4), 0,76 (5, d, 6,4); 13C NMR (CDC13): jednotka δ (poloha uhlíku) A 171,6 (1), 42,4 (2), 66,0 (3), 41,3 (4), 76,0 (5), 42,0 (6), 17,3 (6-Me), 130,0 (7), 131,9 (8),
136,7 (9), 126,1 (10/14), 128,6 (11/13), 127,6 (12);
B 170,8 (1), 54,3 (2), 35,1 (3), 130,1 (4), 131,1 (5),
122,2 (6), 153,8 (7), 56,1 (7-OMe), 112,1 (8), 128,7 (9);
C 175,6 (1), 39,7 (2), 13,8 (2-Me), 41,5 (3); D 171,9 (1),
72,1 (2), 39,1 (3), 24,6 (4), 21,4 (4-Me), 22,7 (5).
Kryptofycin 31 [a]D +56,6° (MeOH, c = 1,13);
UV lambdamax(e) 242 (3800), 284 (700);
IR (in substancia) vmax 3412, 3272, 2961, 1745, 1725, 1678, 1537, 1481, 1270, 1196, 1176, 1000, 698 cm-1;
EIMS m/z (rel. intenzita) 688/690/692 (1,2/1,0/0,4), 446/448/450 (7,9/6,7/3,1), 314/316/318 (17/11/3), 91 (100); EIMS s vysokým rozlišením m/z 688,2336 (vypočteno pro C35H42C12N2°8' chyba);
NMR (CDC13): amino- nebo hydroxykyselinová jednotka δ (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz) 7,8-epoxy-5-hydroxy6-methyl-8-fenyl-2-oktenová kyselina (A) 5,78 (2, d, 15,5),
6,66 (3, ddd, 15,5, 9,4 a 6,0), 2,47 (4, ddd, 14,1, 10,8 a 9,4), 2,56 (4, m), 5,14 (5, ddd, 10,8, 4,7 a 1,7), 1,82 (6, m), 1,15 (6-Me, d, 7,1), 2,93 (7, dd, 7,5 a 1,9), 3,70 (8, d, 1,9 ), 7,24 - 7,26 (10/14, m), 7,34 - 7,39 (11/12/13, m); 2,5-dichlor-4-methoxyfenylalanin (B) 4,83 (2, m), 5,65 (2-NH, d, 9,0), 3,0 (3, dd, 14,4 a 7,3), 3,14 (3, dd, 14,4 a 5,6),7,16 (5/9, s),3,87 (7-0me, s); 3-amino-2-methylpropionová kyselina (C) 2,74 (2, m), 1,22
130 • · « ·· · · · · ·· ·· • · *· · · · · · · · • · · · · · · · · · · · 9 »·· · · · · · · ·· ··· ·· 9 ·* · · (2-Me, d, 7,1), 3,20 (3, m) , 3,58 (3, ddd, 13,5, 5,6 a 4,1), 6,82 (3-NH, brt, 5,6); 2-hydroxy-4-methylpentanová kyselina (D) 4,83 (2, m), 1,38 (3, m), 1,72 (3, m), 1,72 (4, m), 0,87 (4-Me, d, 6,8), 0,86 (5, d, 6,8); 13C NMR (CDC13): jednotka δ (poloha uhlíku) A 165,4 (1), 125,4 (2), 141,0 (3), 36,7 (4), 76,3 (5), 40,6 (6), 13,5 (6-Me), 63,0 (7), 58,9 (8), 136,7 (9), 125,6 (10/14), 128,7 (11/13),
128.6 (12); B 170,8 (1), 53,3 (2), 35,2 (3), 129,3 (4),
129.6 (5/9), 134,5 (6/8), 151,2 (7), 60,6 (7-OMe); C 175,3 (1) , 38,3 (2), 13,9 (2-CH3), 41,5 (3); D 170,6 (1), 71,3 (2) , 39,4 (3), 24,6 (4), 22,9 (4-Me), 21,3 (5).
Kryptofycin 40 [a]D +41,6° (CHC13, c = 0,31);
UV lambdamax(e) 242 (4974), 266 (3911), 274 (3666), 286 (2359), 328 (511);
IR (in substancia) v,max 3415, 2959, 1748, 1723, 1667, 1505, 1463, 1289, 1176 cm1;
EIMS m/z (rel. intenzita) 640/642 (5/2), 280/282 (7/3), 213 (13), 195/197 (51/17), 155 (29), 141 (32), 121 (28), 91 (100, 69 (47);
EIMS s vysokým rozlišením m/z 640,2570 (vypočteno pro C34H41C1N2°8' chyba);
Lh NMR (CDC13): amino- nebo hydroxykyselinová jednotka δ (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz) 7,8-epoxy-5-hydroxy8-fenyl-2-oktenová kyselina (A) 5,77 (2, d, 15,1), 6,72 (3, ddd, 15,1, 9,7 a 4,9), 2,42 (4, m), 2,58 (4, m), 5,33 (5, m), 1,89 (6, ddd, 12,9, 8,1 a 5,0), 2,13 (6, ddd, 12,9, 9,3 a 5,0), 2,98 (7, ddd, 6,7, 4,5 a 1,9), 3,64 (8, d, 1,9), 7,31 - 7,39 (10/11/13/24, m), 7,22 (12, m); 3-chlor-4methoxyfenylalanin (B) 4,83 (2, m), 5,64 (2-NH, d, 8,6), 3,03 (3, dd, 14,3 a 7,5), 3,14 (3, dd, 14,3 a 5,4), 7,21 (5, d, 2,0), 3,87 (7-OMe, s), 6,84 (8, d, 8,3)), 7,08 (9, dd, 8,3 a 2,0); 3-amino-2-methylpropionová kyselina (C) ·· ··· ·
- 131
2,72 (2, m), 1,23 (2-Me, d, 7,3), 3,31 (3, dt, 13,8 a 6,9), 3,50 (3, ddd, 13,6, 5,7 a 3,9), 6,96 (3-NH, brt, 6,0); 2-hydroxy-4-methylpentanová kyselina (D) 4,85 (2, dd, 6,7,
3,4), 1,42 (3, m), 1,72 (3, m) , 1,72 (4, m) , 0,86 (4-Me, d,
3,7), 0,87 (5, d, 3,7); 13C NMR (CDC13): jednotka δ (poloha uhlíku) A 165,3 (1), 125,2 (2), 140,9 (3), 39,0 (4), 72,0 (5), 37,3 (6), 59,0 (7), 58,7 (8), 140,9 (9), 125,6 (10/14), 128,7 (11/13), 128,5 (12); B 170,9 (1), 53,6 (2),
35,1 (3), 129,8 (4), 131,0 (5), 122,5 (6), 157,0 (7), 56,1 (7-OMe), 111,2 (8), 128,4 (9); C 175, 6 (1), 38,3 (2), 14,1 (2-Me), 41,1 (3); D 170,9 (1), 71,4 (2), 39,4 (3), 24,5 (4), 21,5 (4-Me), 22,8 (5).
Kryptofycin 43 [a]D +20° (CHC13, c = 0,2);
UV lambdamax(e) 250 (20 512), 282 (4083), 294 (1734);
IR (in substancia) vmax 3400, 3272, 2927, 1727, 1660, 1516, 1455, 1242, 1175 cm“1;
EIMS rn/z (rel. intenzita) 533 (24), 484 (3), 445 (14), 398 (9), 365 (29, 227 (59), 149 (67, 91 (100);
EIMS s vysokým rozlišením m/z 590,3044 (vypočteno pro C34H41N2°7' “5/2mmu chyba);
1H NMR (CDC13): amino- nebo hydroxykyselinová jednotka δ (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz) 5-hydroxy-6-methyl8-fenyl-2,7-oktadienová kyselina (A) 5,75 (2, d, 15,3),
6,6A9 (3, ddd, 15,3, 9,9 a 5,3), 2,37 (4, dt, 14,2 a 10,4), 2,52 (4, m), 5,01 (5, ddd, 11,2, 6,4 a 1,8 ), 2,55 (6, m), 1,13 (6-Me, d, 6,9), 6,01 (7, dd, 15,8 a 8,9), 6,41 (8, d,
15,8 ), 7,21 - 7,34 (10/11/12/13/14, m); 4-methoxyfenylalanin (B) 4,80 (2, m), 5,64 (2-NH, d, 8,4), 3,06 (3, dd,
14,5 a 7,2), 3,13 (3, dd, 14,4 a 5,3), 7,06 (5/9, d, 8,4), 6,74 (6/8, d, 8,4); 3-amino-2-methylpropionová kyselina (C) 2,69 (2, m), 1,22 (2-Me, d, 7,3), 3,33 (3, m), 3,44 (3, dt, 14,0 a 4,7), 7,0 (3-NH, m); 2-hydroxy-4-methylpentanová
132 ·· · ·· ···· ·· ·· • · ·· ·· · · · · · ··· · · r · · · · • · · · ♦ · · · ··· · · »·· · « · · · · ·· ··· ·· · ♦♦ «· kyselina (D) 4,84 (2, dd, 10,0 a 3,6), 1,60 - 1,67 (3, m) , 1,35 (3, m) 1,60 - 1,67 (4, m) , 0,76 (5, d, 6,4),0,73 (4-Me, d,6,7); 13C NMR (CDC13); jednotka δ (poloha uhlíku) A 125,2 (2), 141,5 (3), 36,5 (4), 77,5 (5), 42,3 (6), 17,3 (6-Me), 130,1 (7), 131,8 (8), 136,8 (9), 126,2 (10/14),
128,6 (11/13), 127,6 (12); B 53,8 (2), 35,3 (3), 129,8 (4),
130,5 (5/9), 115,6 (6/8), 154,6 (7); C 38,3 (2), 14,1 (2-Me), 41,0 (3); D 71,6 (2), 39,6 (3), 24,5 (4), 21,2 (5),
22,9 (4-Me). Kvůli malé velikosti vzorku signály karbonylového uhlíku nebylo možno pozorovat.
Kryptofycin 45 [a]D +72,0° (MeOH, c = 0,12);
UV lambdamax(e) 250 (25 500), 284 (5300);
IR (in substancia) vraax 3407, 3239, 2958, 1743, 1727, 1667, 1538, 1469, 1242, 1196, 1177, 694 cm1;
EIMS m/z (rel. intenzita) 658/660/662 (2,1/1,4/0,3), 483 (7,6), 432/434/436 (9,5/6,4/1,8), 300/302/304 (8,0/5,5/1,2), 227 (100), 91 (87);
EIMS s vysokým rozlišením m/z 658,2207 (vypočteno pro c34H40cl2N2°7' °'5mmu chyba);
NMR (CDC13); amino- nebo hydroxykyselinová jednotka δ (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz) 5-hydroxy-6-methyl8-fenyl-2,7-oktadienová kyselina (A) 5,80 (2, d, 14,7),
6,66 (3, ddd, 14,7, 8,5 a 5,5), 2,38 (4, m), 2,53 (4, m), 4,97 (5, brdd, 10,4 a 6,2), 2,57 (6, m), 1,14 (6-Me, d,
6,7), 6,01 (7, dd, 15,9 a 8,7), 6,42 (8, d, 15,9), 7,28 -7,34 (10/11/13/14, m), 7,22 (12, m); 3,5-dichlor-4hydroxyfenylalanin (B) 4,82 (2, m), 5,73 (2-NH, brd, 8,7), 3,02 (3, dd, 14,3 a 6,2), 3,10 (3, dd, 14,3 a 5,2), 7,14 (5/9, s), 5,79 (7-OH, s); 3-amino-2-methylpropionová kyselina (C) 2,73 (2, m), 1,21 (2-Me, d, 7,0), 3,17 (3, m), 3,60 (3, m), 6,81 (3-NH, brt, 6,7); 2-hydroxy-4-methylpentanová kyselina (D) 4,84 (2, dd, 10,0 a 3,2), 1,38 (3, ·· ····
- 133
φ · · · • φ φ φ ·· · · · φ φ · ·· ·· ddd, 14,9, 10,2 a 3,2), 1,65 (3, m) , 1,65 (4, m) , 0,78 (4-Me, d, 6,5), 0,7 (5, d, 6,5); 13C NMR (CDC13); jednotka δ (poloha uhlíku) A 165,5 (1), 125,4 (2), 141,2 (3), 36,4 (4), 77,6 (5), 42,3 (6), 17,3 (6-Me), 130,0 (7), 131,9 (8),
136,7 (9), 126,2 (10/14), 128,6 (11/13), 127,6 (12);
B 171,0 (1), 53,2 (2), 35,0 (3), 130,4 (4), 129,1 (5/9), 121,0 (6/8), 146,7 (7); C 175,2 (1), 38,5 (2), 13,9 (2-Me),
41,6 (3); D 170,7 (l), 71,5 (2), 39,5 (3), 24,6 (4), 22,7 (4-Me), 21,2 (5).
Kryptofycin 49 [a]D +68,1° (MeOH, c = 0,075);
UV lambdamax(e) 246 (25 500), 284 (5200);
IR (in substancia) vmax 3401, 3282, 2962, 1744, 1728, 1668, 1540, 1505, 1464, 1258, 1198, 1177, 1066, 694 cm“1;
EIMS m/z (rel. intenzita) 624/626 (0,8/0,3), 398/400 (43/14), 227 (78), 195/197 (58/26), 91 (100);
EIMS s vysokým rozlišením m/z 624,2650 (vypočteno pro C34H41C1N2°7' ”4,8mmu chyba);
1H NMR (CDC13): amino- nebo hydroxykyselinová jednotka δ (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz) 5-hydroxy-6-methyl8-fenyl-2,7-oktadienová kyselina (A) 5,77 (2, d, 14,1),
6,6A7 (3, m), 2,38 (4, m),2,50 (4, m), 5,01 (5, m), 2,56 (6, rn), 1,13 (6-Me, d, 6,5), 6,03 (7, dd, 15,8 a 8,6), 6,42 (8, d, 15,8), 7,29 - 7,35 (10/11/13/14, m), 7,23 (12, m); 3-chlor-4-methoxyfenylalanin (B) 4,82 (2, m), 5,64 (2-NH, m), 3,06 (3, m), 3,13 (3, m), 7,22 (5, m), 3,87 (7-OMe, s), 6,83 (8, m), 7,08 (9, m); 3-amino-2-methylpropionová kyselina (C) 2,72 (2, m), 1,22 (2-Me, d, 6,7), 3,26 (3, m), 3,53 (3, m), 6,90 (3-NH, m); 2-hydroxyvalerová kyselina (D) 4,81 (2, dd, 8,8 a 3,9), 1,63 (3, m), 1,68 (3, m), 1,33 (4-H2, m), 0,74 (5, t, 7,3).
• * ·· ····
- 134 ··« · • · ·· I
Kryptofycin 50 [a]D +32,0° (CHC13, c = 0,44);
UV lambdamax(e) 242 (4933), 262 (3996), 274 (3719), 286 (2430), 332 (359);
IR (in substancia) Vmax 3412, 3274, 2958, 1752, 1724, 1676, 1648, 1503, 1465, 1258, 1177, 1066, 753;
EIMS m/z (rel. intenzita) 640/642 (4/2), 398/400 (11/4), 280/282 (10/3), 227 (17), 195/197 (57/18), 157 (20), 141 (31), 91 (100);
EIMS s vysokým rozlišením m/z 640,2531 (vypočteno pro C34H41C‘LN2°8/ 2,lmmu chyba);
1H NMR (CDC13): amino- nebo hydroxykyselinová jednotka δ (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz) 7,8-epoxy-5-hydroxy6-methyl-8-fenyloktanová kyselina (A) 5,73 (2, d, 15,7),
6,67 (3, ddd, 15,7, 9,7 a 5,4), 2,45 (4, m), 2,55 (4, m), 5,13 (5, ddd, 11,2, 5,0 a 1,7), 1,78 (6, m), 1,15 (6-Me, d, 6,9), 2,91 (7, dd, 7,5 a 1,9), 3,68 (8, d, 1,7), 7,25 (10/14, m), 7,33 - 7,38 (11/12/13, m); 3-chlor-4-methoxyfenylalanin (B) 4,80 (2, ddd, 8,3, 7,1 a 5,4), 5,61 (2-NH, d, 8,3), 3,03 (3, dd, 14,4 a 7,3), 3,13 (3, dd, 14,4 a 5,6), 7,21 (5, d, 1,9), 3,87 (7-OMe, s), 6,83 (8, d,
8,4), 7,07 (9, dd, 8,4 a 2,2); 3-amino-2-methylpropionová kyselina (C) 2,71 (2, m), 1,22 (2-Me, d, 7,3), 3,29 (3, dt,
13,6 a 6,9), 3,49 (3, ddd, 13,6, 6,7 a 5,0), 6,92 (3-NH, brt, 6,7); 2-hydroxypentanová kyselina (D) 4,75 (2, dd, 9,2 a 3,7), 1,55 (3, rn), 1,65 (3, m), 1,33 (4-H2, m), 0,84 (5, t, 7,3); 13C NMR (CDC13): jednotka δ (poloha uhlíku)
A 165,3 (1), 125,3 (2), 141,0 (3), 36,9 (4), 76,3 (5), 40,8 (6), 13,6 (6-Me), 63,2 (7), 59,1 (8), 136,8 (9), 125,5 (10/14), 128,7 (11/13), 128,5 (12); B 170,9 (1), 53,6 (2),
35,2 (3), 129,8 (4), 131,0 (5), 122,5 (6), 154,0 (7), 56,1 (7-OMe), 112,3 (8), 128,5 (9); C 175,6 (1), 38,4 (2), 14,1 (2-Me), 41,2 (3); D 170,4 (1), 72,4 (2), 32,7 (3), 18,4 (4), 13,5 (5).
·· ····
- 135 • · · · ♦ · · * * · ♦ · • · · · · • · · ·♦ ··
Kryptofycin 54
EIMS m/z (rel. intenzita) 654/656 (17/10), 493 (5), 411/413 (12/4), 280 (16), 227 (25), 195/197 (45/25), 141 (30), 91 (100) ;
EIMS s vysokým rozlišením m/z 654,2686 (vypočteno pro C35H43C1N2°8' 2,2mmu chyba);
NMR (CDC13): amino- nebo hydroxykyselinová jednotka S (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz) (A) 5,73 (2, d, 15,4), 6,66 (3, ddd, 15,4, 9,7, 5,7), 2,46 (4, m), 2,53 (4, m) ,
5,16 (5, ddd, 11,0, 4,2, 1,7), 1,79 (6, m), 1,14 (6-Me, d,
6,8), 2,89 (7, dd, 7,4, 1,8), 3,69(8, d, 1,9), 7,25 (10/14, m), 7,30 - 7,38(11/12/13, m); B 4,81 (2, m), 5,63 (2-NH, d, 8,6), 3,03 (3, dd, 14,5, 7,3), 3,13 (3, dd, 14,5, 5,5), 7,21 (5, d, 2,2), 3,87 (7-OMe, s),6,83 (8, d, 8,4), 7,07 (9, dd,
8,4, 2,2); (C) 2,73 (2, m), 1,22 (2-Me, d 7,3), 3,26 (3, ddd, 13,4, 6,8, 6,8), 3,51 (3, ddd, 13,4, 6,8, 5,3), 6,88 (3-NH, brt, 6,8); (D) 4,73 (2, d, 4,2), 1,78 - 1,82 (3, m) , 0,92 (3-Me, d, 6,8) , 1,36 - 1,41 (4, m), 1,18 -1,20 (4, m) , 0,80 (5, t, 7,5); 13C NMR (CDCl3): jednotka S (poloha uhlíku) A 165,3 (1), 125,4 (2), 141,0 (3), 36,6 (4), 76,3 (5),40,6 (6), 13,2 (6-Me), 63,1 (7), 58,7 (8), 136,7 (9), 135,4 (10/14), 128,6 (11/13), 128,5 (12); B 170,9 (1), 53,5 (2),35,0 (3), 129,8 (4), 131,0 (5), 125,2 (6), 153,9 (7),
56,1 (7-OMe), 112,2 (8), 128,4 (9); C 175,4 (1), 38,5 (2), 14,0 (2-Me), 41,3 (3); D 169,4 (1), 76,5 (2), 36,1 (3),
15,6 (3-Me), 24,0 (4), 11,2 (5).
Příklad 6 Syntéza kryptofycinových derivátů
Kryptofycin 8
K roztoku 3,8 mg kryptofycinů 1 v 1,5 ml směsi 1,2-dimethoxyethanu a vody v poměru 2 : 1 se přidá 9 μΐ 1M ·· ····
- 136 -·· • 99 • · • · * * • 9
99
9 9 9 9
9 9 99
9 999· · • · · · 9 ·♦ .·♦ kyseliny chlorovodíkové. Vzniklý roztok se 4 hodiny míchá při teplotě místnosti, neutralizuje uhličitanem draselným a odpaří. Zbytek se rozdělí mezi vodu a dichlormethan. Látka rozpustná v dichlormethanu se přečistí vysokotlakou kapalinovou chromatografií s obrácenými fázemi, čímž se získá 3,3 mg čistého kryptofycinu 8.
EIMS m/z (rel. intenzita) 690/692/694 (0,8/0,5/0,2).
EIMS s vysokým rozlišením m/z 690,2533 (vypočteno pro C35H44C3’2N2°8' “5»8minu chyba).
I-H NMR (CDC13): amino- nebo hydroxykyselinová jednotka & (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz)
8-chlor-5,7-dihydroxy- 6-methyl-8-fenyl-2-oktenová kyselina (A) 5,79 (2, d, 15,4), 6,69 (3, ddd, 15,4, 9,7 a 5,6), 2,68 (4, ddt, 14,0, 5,5 a 1,8), 2,38(4, m), 5,11 (5, ddd, 10,8,
8.6 a 1,8), 2,51 (6, m), 1,05 (6-Me, d, 7,0), 4,01 (7, dd,
9.6 a 1,9), 4,65 (8, d, 9,6), 7,36 - 7,41 (10/11/12/13/14, m); 2-hydroxy-4-methylpentanová kyselina (D) 4,92 (2, dd,
10,1 a 3,5), 1,76 (3/4, m) , 1,45 (3, m), 0,94 (5, d, 6,6), 0,94 (4-Me, d, 6,4); 3-amino-2-methylpropionová kyselina (C) 2,73 (2, m), 1,22 (2-Me, d, 7,2), 3,25 (3, ddd, 13,6, 6,8 a 6,1), 3,54 (3, ddd, 13,5, 6,1 a 3,4), 6,91 (3-NH, brt, 6,1); 3-chlor-4-methoxyfenylalanin (B)) 4,82 (2, ddd, 8,8,
7,2 a 5,6), 5,64 (2-NH, d, 8,8), 3,03 (3, dd, 15,4 a 7,2), 3,16 (3, dd, 15,4 a 5,6), 7,23 (5, d, 2,2), 3,88 (7-OCH3, s), 6,86 (8, d, 8,5), 7,09 (9, dd, 8,5 a 2,2)
Kryptofycin 9
K roztoku 10 mg kryptofycinu 1 v 1 ml suchého methanolu se přidá 10 μΐ methanolického chlorovodíku (který se získá reakcí 1,25 g thionylchloridu s 25 ml methanolu). Reakční směs se 4 hodiny míchá, načež se z ní za sníženého tlaku odstraní rozpouštědlo. Vzorek se nechá stát 12 hodin pod vakuem. Vysokotlakou kapalinovou chromatografií s reversními fázemi se získá 8 mg čistého kryptofycinu 9.
- 137 • · • · • · • · to · • to • · · to ·· ···· ·· to • · to • to ·· • to · • ·· · ·· ·· • ·· i • · ·· ··· · 4 • · 4 •'H NMR (CDC13): amino- nebo hydroxykyselinová jednotka δ (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz): 5,7-dihydroxy-8methoxy-6-methyl-8-fenyl-2-oktenová kyselina (A) 5,76 (2, d,
15.5) , 6,67 (3, ddd, 15,5, 9,5 a 5,6), 2,34 (4, ddd, 14,1,
11,1 a 9,5), 2,62 (4, dddd, 14,1, 5,6, 1,8 a 1,5), 5,09 (5, ddd, 11,1, 7,8 a 1,8), 2,24 (6, dqd, 7,8,7,0 a 2,2), 1,03 (6-Me, d, 7,0), 3,71 (7, dd, 8,3 a 2,2), 4,03 (8, d, 8,3), 3,20 (8-OCH3, s), 7,31 - 7,40 (10/11/12/13/14, m);
2- hydroxy-4-methylpentanová kyselina (D) 4,86 (2, dd, 9,8 a
3.5) , 1,71 (3/4, m), 1,41 (3, m), 0,89 (5/4-Me, d, 6,4); .3-amino-2-methylpropionová kyselina (C) 2,71 (2, ddq, 6,8,
3,9 a 7,2), 1,21 (2-Me, d, 7,2), 3,23 (3, ddd, 13,5, 6,8 a 6,0), 3,52 (3, ddd, 13,5, 6,0 a 3,9), 6,90 (3-NH, brt, 6,0);
3- chlor-4-methoxyfenylalanin (B) 4,82 (2, ddd, 8,8, 7,4 a 5,7), 5,66 (2-NH, d, 8,8), 3,02 (3, dd, 14,4, 7,4), 3,15 (3, dd, 14,4 a 5,5), 7,23 (5, d, 2,2), 3,87 (7-OCH3, s), 6,84 (8, d, 8,5), 7,08 (9, dd, 8,5 a 2,2).
Kryptofycin 10
K míchanému roztoku 7 mg kryptofycinu 9 v 1 ml acetonu a 0,3 ml vody se přidá 8 μΐ 2M hydroxidu sodného. Vzniklý roztok se 4 hodiny míchá, poté 1M kyselinou chlorovodíkovou neutralizuje na pH 7 a za sníženého tlaku se z něj odstraní rozpouštědlo. Zbytek se podrobí vysokotlaké kapalinové chromátografii s reversními fázemi za použití směsi methanolu a vody v poměru 7:3, jako elučního činidla.
Získá se čistý kryptofycin 10 (5 mg).
1H NMR (CD3OD): amino- nebo hydroxykyselinová jednotka δ (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz): 5,7-dihydroxy-8methoxy-6-methyl-8-fenyl-2-oktenová kyselina (A) 5,99 (2, dt, 15,4 a 1,3), 6,82 (3, dt, 15,4 a 7,3), 2,30 (4, m), 2,50 (4, m), 3,66 (5, td, 7,8 a 3,5), 2,05 (6, d pentet, 1,8 a 7,0), 0,96 (6-Me, d, 7,0), 4,04 (7, dd, 8,8 a 2,0), 4,01 (8, d, 8,8), 3,12 (8-OCH3, s), 7,26 - 7,36 (10/11/12/13/14, m);
·· · ·· ···· ·· ·· • · ·· · · · ···· • · · ··· · · ·· • · · · · · · · ··· · · ___ ··· ··· ···
- 138 - ·· ··· ·· · ·· ··
3-amino-2-methylpropionová kyselina (C) 2,50 (2, m), 1,02 (2-Me, d, 7,3), 3,16 (3, dd, 13,4 a 6,9), 3,82 (3, dd, 13,4 a 6,6); 3-chlor-4-methoxyfenylalanin (B) 4,57 (2, dd, 8,5 a
6,5), 2,82 (3, dd, 13,9 a 8,6), 3,03 (3, dd, 13,9 a 6,5), 7,25 (5, d, 2,2), 3,82 (7-OCH3, s), 6,96 (8, d, 8,6), 7,13 (9, dd, 8,6 a 2,2). 13C NMR (CD3OD): δ 179,5, 173,4, 168,2,
155,4, 143,7, 141,7, 131,9, 131,7, 129,8, 129,3 (2c), 129,2 (2C), 128,8, 126,2, 123,2, 113,4, 85,9, 74,5, 74,1, 56,8, 56,6, 56,3, 43,3, 41,2 40,2, 38,8, 38,0, 15,5, 9,9.
Kryptofycin 12
K roztoku 5 mg kryptofycinu 1, 5 nebo 8 v 1 ml směsi acetonu a vody v poměru 4 : 1 se přidá 15 μΐ 2M hydroxidu sodného. Reakční směs se 5 hodin míchá při teplotě místnosti, 1M kyselinou chlorovodíkovou neutralizuje na pH 7 a odpaří. Látka rozpustná v dichlormethanu se nechá projít malou patronou s oxidem křemičitým za použití dichlormethanu, směsi ethylacetátu a dichlormethanu v poměru 1 : 1 a ethylacetátu, jako elučních činidel. Frakce eluovaná ethylacetátem obsahuje čistý kryptofycin 12.
^H NMR (CD3OD): amino- nebo hydroxykyselinová jednotka δ (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz): 5,7,8-trihydroxy6-methyl-8-fenyl-2-oktenová kyselina (A) 6,07 (2, ddd, 15,5,
1,3 a 1,2), 6,40 (3, dt, 15,5 a 7,3), 2,49 (4, m), 2,60 (4, m), 3,92 (5, ddd, 9,3, 6,7 a 4,5), 1,94 (6, m), 1,07 (6-Me, d, 6,6), 3,61 (7, dd, 8,9 a 7,6), 4,56 (8, d, 7,6), 7,36 (10/14, dd, 7,4 a 1,5), 7,32 (11/13, brt, 7,5), 7,25 (12, m); 3-amino-2-methylpropionová kyselina (C) 2,54 (2, ddq, 7,0, 6,6 a 7,0), 1,02 (2-Me, d, 7,0), 3,14 (3, dd, 13,5 a 7,0), 3,42 (3, dd, 13,4 a 6,6); 3-chlor-4-methoxyfenylalanin (B) 4,57 (2, dd, 8,4 a 6,7), 2,83 (3, dd, 13,8 a 8,4), 3,02 (3, dd, 13,8 a 6,6), 7,25 (5, d, 2,1), 3,82 (7-OCH3, s), 6,95 (8, d, 8,5),7,12 (9, dd, 8,5 a 2,1). Methylací kryptofycinu 12 diazomethanem se získá kryptofycin 6.
139
• · • · • • · ·· • • · · · • · • · • · • · •
• · • · ·· • • ··· • · • ·· • · • · • • ··· • ·· • • • ·
Kryptofycin 14
K roztoku 3 mg kryptofycinu 6 v 1 ml směsi acetonu a vody v poměru 3 ; 1 se přidá 5 μΐ 2N hydroxidu sodného. Reakční směs se 5 hodin míchá, neutralizuje 1M kyselinou chlorovodíkovou na pH 7 a poté odpaří do sucha. Zbytek se podrobí vysokotlaké kapalinové chromatografii s reversními fázemi, čímž se získá 2,4 mg kryptofycinu 14.
•^H NMR (CD3OD): amino- nebo hydroxykyselinová jednotka δ (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz): 5-hydroxy-6-methyl8-fenyl-2,7-oktadienová kyselina (A) 5,98 (2, d, 15,3), 6,78 (3, dt, 15,3 a 7,5), 2,35 (4, m), 3,64 (5, td, 7,2 a 4,8), 2,47 (6, m), 1,14 (6-Me, d, 6,9), 6,22 (7, dd, 15,9 a 8,1), 6,39 (8, d, 15,9), 7,24 - 7,36 (10/11/12/13/14, m); 3-amÍno2- methylpropionová kyselina (C) 2,35 (2, m), 1,02 (2-Me, d,
6,9), 3,18 (3, dd, 13,2 a 6,6), 3,36 (3, dd, 13,2 a 4,5);
3- chlor-4-methoxyfenylalanin (B) 4,58 (2, dd, 8,7 a 6,3), 2,80 (3, dd, 13,8 a 9,0), 3,05 (3, dd, 13,8 a 6,3), 7,25 (5, d, 2,1), 3,82 (7-OCH3, s), 6,95 (8, d, 8,4), 7,13 (9, dd,
8,4 a 2,1).
Kryptofycin 35
Do nádoby obsahující 0,5 ml dichlormethanu se přidá katalytické množství oxidu platičitého. Vzduch se z nádoby odčerpá a nahradí plynným vodíkem. Reakční směs se míchá 20 minut při teplotě mísntosti a přidá se k ní roztok 10 mg kryptofycinu 1 v minimálním objemu dichlormethanu. Reakční směs se 45 minut míchá při teplotě místnosti. Katalyzátor se odstraní filtrací přes vrstvu celitu na vatě a z filtrátu se odstraní rozpouštědlo. Zbytek se podrobí vysokotlaké kapalinové chromatografii s reversními fázemi na sloupci C18, čímž se získá 6,5 mg kryptofycinu 35.
EIMS m/z (rel. intenzita) 656/658 (25/10), 412/414 (25/12), 280/282 (20/10), 195/197 (78/25), 141 (58), 91 (100);
140
• · • · • • · • AA»· • · A A A A A A A
• A • · • A • • • · · • · • • · • · A A » A AAA A A A A A A ♦
EIMS s vysokým rozlišením m/z 656,2864 (vypočteno pro C35H45C1N2°8' O/Ommu chyba);
1H NMR (CDC13): amino- nebo hydroxykyselinová jednotka 8 (poloha uhlíku, multiplicita, J v Hz) 2,3-dihydro-7,8epoxy-5-hydroxy-6-methyl-8-fenyloktanová kyselina (A) 2,32 (2, ddd, 14,5, 9,2, 5,8), 2,10 (2, ddd, 14,5, 9,2, 6,2),
1,5 -1,8 (3/4 překrytý m), 5,07 (5, ddd, 12,5, 5,6, 2,0), 1,80 (6, m), 1,12 (6-Me, d, 7,0), 2,90 (7, dd, 7,4, 1,8), 3,67 (8, d, 1,8), 7,24 (10/14, m), 7,32 - 7,38 (11/12/13, m); 3-chlor-4-methoxyfenylalanin (B) 4,71 (2, ddd, 8,7,
6.4, 6,3), 5,62 (2-NH, d, 8,7), 3,08 (2H-3, brd, 6,4), 7,19 (5, d, 2,0), 3,87 (7-OMe, s), 6,83 (8, d, 8,5), 7,07 (9, dd,
8.4, 2,0); 3-amino-2-methylpropionová kyselina (C) 2,72 (2, m), l,18(2-Me, d, 6,9), 3,12 (3, ddd, 11,4, 10,6, 5,6),
3.70 (3, dddd), 6,7 6(3-NH, brt, 6,0); 2-hydroxy-4-methylpentanová kyselina (D) 4,83 (2, dd, 9,9, 3,8), 1,39 (3, m),
1.70 (3, m), 1,72 (4, m), 0,87 (4-Me, d, 5,3), 0,86 (5, d, 5,3); 13C NMR (CDC13): jednotka δ (poloha uhlíku) A 172,4 (1), 36,2 (2), 32,0 (3), 21,1 (4), 76,6 (5), 40,2 (6), 13,6 (6-Me), 63,3 (7), 59,2 (8), 136,8 (9), 125,6 (10/14), 128,7 (11/13), 128,6 (12); B 170,7 (1), 53,7 (2), 35,5 (3), 130,0 (4), 131,1 (5), 122,2 (6), 153,8 (7), 56,1 (7-OMe), 112,1 (8), 128,5 (9),; C 175,2 (1), 38,2 (2(, 13,6 (2-Me), 42,1 (3); D 171,9 (1), 71,7 (2), 39,6 (3), 24,5 (4), 22,9 (4-Me), 21,4 (5).
Příklad 7
Analýza depolymerační účinnosti kryptofycinů na mikrotubuly
Použité materiály
Vinblastin, cytochalasin B, tetramethylrhodamin isothiokyanát (TRITC)-faloidin, sulforhodamin B (SRB) a protilátky proti β-tubulinu a vimentinu byly získány od • · *· ···· • ·
- 141 - ·· • · • · · · • · · • · · · firmy Sigma Chemical Company. Základní Eaglovo médium obsahující Earlovy sóly (BME) pochází od firmy Gibco a fetální telecí sérum (FBS) od firmy Hyclone Laboratories.
Buněčné linie
Buněčná linie leukemických Jurkatových T buněk a buňky hladkého svalu krysí aorty A-10 získané ze sbírky American Type Culture Collection byly kultivovány v BME obsahujícím 10% FBS a 50 μg/ml gentamycinsulfátu. Buňky karcinomu lidských vaječníků (SKOV3) a podlinie, která byla selektována na resistenci vůči vinblastinu (SKVLB1) je velkorysým darem Dr. Victora Linga z Ontario Cancer Institute. Obě buněčné linie byly udržovány v BME obsahujícím 10% FBS a 50 μg/ml gentamycinsulfátu. 24 hodin po pasážování byl k buňkám SKVLB1 přidán vinblastin do konečné koncentrace 1 μg/ml, aby se udržel selekční tlak na buňky nadexprimující P-glykoprotein.
Zkouška proliferace buněk a přerušení cyklu
Zkouška proliferace buněk se provádí způsobem popsaným Skehan, P. et al., J. Nati. Cancer Inst. 82: 1107 až 1112 (1990). V případě Jurkatových buněk se kultury ošetří uvedenými léčivy, jak je to popsáno v Skehan et al., viz výše uvedená citace a celkový počet buněk se stanoví jejich spočítáním v hemacytometru. Procentní podíl buněk v mitóze se stanoví barvením 0,4% Giemsa v PBS a následným trojnásobným rychlým promytím PBS. Na jedno ošetření se hodnotí alespoň 1000 buněk z hlediska přítomnosti mitotických obrazců a vypočítá se mitotický index, jako poměr počtu buněk s mitotickými obrazci a celkového počtu buněk.
·» ····
- 142 ·· • · ·· · · • · · · · • · · · · · • · · · · ·· ·»· ·♦ «« ·· • · · · · • · · »· • t ··· * * • 9 9 9 • ·· ··
Imunofluorescenční esej
Buňky A-10 se v BME/10% FBS nechají růst na krycím sklíčku do téměř konfluentního nárůstu a přidají se k nim sloučeniny v PBS až do uvedené konečné koncentrace. Buňky se inkubují dalších 24 hodin. Za účelem barvení mikrotubulů a intermediárních filamentů se buňky fixují v chladném methanolu a inkubují s PBS obsahujícím 10% telecí sérum, aby se blokovala nespecifická vazebná místa. Poté se buňky inkubují 60 minut při 37°C s monoklonálním anti-p-tubulinem nebo monoklonálním anti-vimentinem při zředěních doporučených výrobci. Vazba primárních protilátek se následně vizualizuje 45minutovou inkubací s fluorescein-konjugovaným králičím antimyším IgG. Krycí sklíčka se upevní na mikroskopická podložní sklíčka a fluorescenční obrazce se zkoumají a fotografují za použití fotomikroskopu Zeiss 111 vybaveného epifluorescenční optikou pro fluorescein. Za účelem barvení mikrofilamentů se buňky fixují ve 3% paraformaldehydu, permeabilizují 0,2% Triton X-100 a za použití tetrahydroboritanu sodného (1 mg/ml) chemicky redukují. K buňkám se přidá se lOOnM TRITC-faloidin v PBS a vzniklá směs se nechá inkubovat 45 minut při 37°C, načež se buňky třikrát rychle promyjí PBS, umístí na krycí sklíčka a ihned fotografují výše popsaným způsobem.
Účinky kryptofycinů a vinblastinu na proliferaci a buněčný cyklus Jurkatových buněk
Křivka závislosti odpovědi na dávce, která vyjadřuje účinky kryptofycinových sloučenin na proliferaci buněk a procentický podíl buněk v mitose je uvedena na obr. 2A a křivka vyjadřující stejný vztah pro vinblastin je uvedena na obr. 2B. Z neošetřených buněk vykazují mitotické obrazce méně než 3 %. Jak kryptofycinové sloučeniny, tak vinblastin vyvolávají v závislosti na dávce zvýšení procentického ·· ····
- 143 ·· ·
• · • · • · · • · • ·· ·· ·· • · · · · • · · ·· • * ···· · • · · · • ·· ·· podílu buněk nacházejících se v mitose. Zvýšení mitotického indexu těsně koreluje se snížením buněčné proliferace, tzn. že koncentrace jak kryptofycinových sloučenin, tak i vinblastinu, které vyvolají 50% akumulaci buněk nacházejících se v mitose je ve skutečnosti stejné jako koncentrace, která z 50% inhibuje buněčnou proliferaci. Hodnota IC50 tohoto účinku je pro kryptofycinové sloučeniny 0,2nM a pro vinblastin 8nM.
Účinky cytochalasinu B, vinblastinu a kryptofycinů na cytoskelet
Buňky hladkého svalu aorty (A-10) se nechají růst na krycích sklíčkách a ošetří PBS, 2μΜ cytochalasinem B, lOOnM vinblastinem a lOnM kryptofycinovými sloučeninami. Po 24 hodinách se mikrotubuly a vimentinová střední filamenta vizualizují nepřímou imunofluorescencí a mikrofilamenta se obarví pomocí TRITC-faloidinu. Zkoumají se morfologické účinky každého léčiva. Neošetřené buňky vykazují rozsáhlé mikrotubulární sítě spolu s perinukleárními centry uspořádání mikrotubulů. Vimentinová střední filamenta jsou rovnoměrně distribuována po celé cytoplasmě, zatímco svazky mikrofilament jsou soustředěny podél hlavní osy buňky. Cytochalasin B vyvolává úplnou depolymeraci mikrofilament doprovázenou akumulací parakrystalických zbytků. Tato sloučenina nemá vliv na distribuci mikrotubulů ani středních filament. Jak vinblastin, tak kryptofycinová sloučenina zapříčiňují výrazný úbytek mikrotubulů. Žádná z těchto sloučenin neovlivňuje organizaci mikrofilament; vimentinová střední filamenta se však hroutí za vzniku soustředných kruhů okolo jádra buňky ošetřené bučí vinblastinem nebo kryptofycinovou sloučeninou.
• ·
- . . .·· · · · — 144 — ·· ··· ·· ·
Účinky kryptofycinu a vinblastinu na mikrotubuly stabilizované taxolem
Na buňky A-10 se 3 hodiny působí 0 nebo ΙΟμΜ taxolem, načež se k nim přidá PBS, lOOnM vinblastin nebo lOnM kryptofycinová sloučenina. Po 24 hodinách ze pomocí imunofluorescence popsané výše zkoumá organizace mikrotubulů. Ve srovnání s kontrolními buňkami jsou mikrotubuly v buňkách ošetřených taxolem výrazně nahromaděny, zejména v polárních oblastech buňky. Jak bylo uvedeno výše, vinblastin vyvolává úplnou depolymeraci mikrotubulů v předem neošetřených buňkách. Předchozí ošetření taxolem však zabraňuje depolymeraci mikrotubulů v odpovědi na vinblastin. Podobně předchozí ošetření taxolem úplně stabilizuje mikrotubuly vůči kryptofycinem indukované depolymeraci.
Reversibilita depolymerace mikrotubulů vyvolané vinblastinem a kryptofycinem
Na buňky A-10 se 24 hodin působí bud lOOnM vinblastinem nebo lOnM krytofycinem, čímž se docílí úplné depolymerace mikrotubulů. Poté se buňky promyjí a inkubují 1 nebo 24 hodin v médiu, které neobsahuje léčivo. Po odstranění vinblastinu dochází k rychlé repolymeraci, což se po jedné hodině projevuje ve významných hladinách mikrotubulů a v úplném obnovení morfologie po 24 hodinách. Oproti tomu, v buňkách ošetřených kryptofycinovými sloučeninami se mikrotubuly znovu neobjevují ani po jedné, ani po 24 hodinách po odstranění této sloučeniny.
Reversibilita kryptofycinem, vinblastinem a taxolem inhibované buněčné proliferace
Na buňky SK0V3 se 24 hodin působí předem stanovenými IC50 dávkami vinblastinu, kryptofycinu nebo taxolu (viz • · · · · ·
- 145
• ·
A A A • · · • · t ·· A ♦ A A · • · · · ·· · · A
CA A A hodnoty stanovené při zkouškách, které jsou souhrnně uvedeny v tabulce 5). Během této doby densita buněk vzroste z 0,4 na 0,5 ± 0,05 jednotek absorbance (Obr. 3), což indikuje 25% zvýšení počtu buněk při všech třech ošetřeních. Výsledkem ostranění léčiva je rychlý růst buněk ošetřovaných vinblastinem, který je takový, že počet buněk se zvýší asi trojnásobně během 24 hodin. Ve srovnání s tím, je růst buněk ošetřených kryptofycinovými sloučeninami nebo taxolem zpomalen, jejich počet se zvyšuje pouze o 0,2 až 0,4-násobek během 24 hodin po odstranění léčiva. Proliferační kapacita buněk ošetřených kryptofyciny nebo taxolem se posléze obnoví, jelikož počet buněk se během následujících 24 hodin zdvojnásobí.
Účinky kombinací vinblastinu a kryptofycinů na buněčnou proliferaci
Buňky SKOV3 se 48 hodin ošetřují kombinacemi kryptofycinů a vinblastinu. Poté se stanoví procentní podíly přeživších buněk a pro každou kombinaci se vypočítá hodnota IC50· Účinky ošetření kombinacemi, jakož i jednotlivými léčivy jsou zobrazeny na isobologramu (Obr. 4). Hodnoty IC50 kombinace kryptofycinové sloučeniny a vinblastinu lemují velmi těsně přímku aditivity, což ukazuje, že tato dvě léčiva indukují pouze aditivní inhibice buněčné proliferace.
Toxicita kryptofycinů, vinblastinu a taxolu vůči buňkám SK0V3 a SKVLB1
Buňky SKLVB1 jsou vzhledem ke své nadexpresi P-glykoproteinu resistentní vůči protirakovinným léčivům přírodního původu [Bradley, G. et al., Cancer Res. 49: 2790 až 2796 (1989)]. Schopnost taxolu, vinblastinu a kryptofycinových sloučenin inhibovat růst buněk SKOV3 a SKVLB1 je souhrnně uvedena v tabulce 5. Taxol v závislosti na dávce • · vyvolává inhibici proliferace obou buněčných linií; jeho IC50 je u buněk SKOV3 lnM a u SKLVB1 8000nM. Vinblastin také inhibuje růst obou těchto buněčných linií; jeho IC50 je u buněk SK0V3 0z35nM a u buněk SKLVB1 4200nM. Kryptofyciny vykazují IC5Q 7nM u buněk SK0V3 a 600pM u buněk SKLVB1. Výsledné faktory resistence buněk SKVLB1, jakož i SK0V3, se vypočítají jako hodnoty IC50 a jsou uvedeny v tabulce 5.
Bylo tedy demonstrováno, že účinek nových kryptofycinových sloučenin podle vynálezu, jakož i dříve popsaných kryptofycinových sloučenin, které jsou účinnými inhibitory buněčné proliferace, spočívá v rozrušení mikrotubulární sítě a inhibici mitózy. Kryptofycinové sloučeniny rozrušují mikrotubulární uspořádání a tím i normální funkce buňky, včetně mitózy.
Klasická antimikrotubulární činidla, jako kolchicin a alkaloid brčálu Vinca, zabraňují mitotickému dělení buňky. Zdá se tedy jako vhodné porovnat účinek některého z těchto činidel na buněčnou proliferaci s účinkem kryptofycinových sloučenin. Pro tyto účely byl jako reprezentant klasických antimikrotubulárních činidel zvolen alkaloid brčálu Vinca, vinblastin. Byl tedy porovnáván účinek kryptofycinových sloučenin a vinblastinu na proliferaci a progresi buněčného cyklu leukemické buněčné linie Jurkatových T-buněk. Oba druhy těchto sloučenin vyvolávaly paralelně inhibici buněčné proliferace a akumulaci buněk v mitóze v závislosti na dávce.
Jelikož antimitotické účinky jsou obvykle zprostředkovány rozrušením mikrotubulů v mitotických vřeténcích, byly účinky kryptofycinových sloučenin na struktury cytoskeletu charakterizovány fluorescenční mikroskopií. Imunofluorescenční barvení buněk ošetřených bud kryptofycinovou sloučeninou nebo vinblastinem jasně demonstrují, že obě
147
sloučeniny vyvolávají úplnou ztrátu mikrotubulů. Podobné studie s buňkami SKOV3 demonstrují, že antimikrotubulární účinky kryptofycinových sloučenin nejsou jedinečné vůči linii buněk hladkého svalstva. Žádné léčivo neovlivňovalo úroveň nebo distribuci svazků mikrofilament, které se snadno ovlivní cytochalasinem B. To dokládá, že ztráta mikrotubulů nemusí být vyvolána nespecifickým mechanismem, tj. aktivací proteas nebo ztrátou energetického náboje. Jak vinblastin, tak i kryptofycinové sloučeniny také podporovaly značné zhroucení vimentinových středních filament, takže se okolo buněčných jader vytvořily světlé vybarvené kroužky.
Po odstranění vinblastinu z kultivačního média dochází k rychlé repolymeraci mikrotubulů. Oproti tomu buňky ošetřené kryptofycinovými sloučeninami zůstávají prosté mikrotubulů po dobu alespoň 24 hodin po odstranění sloučeniny z kultur.
Tento vynález také dokládá, že kryptofycinové sloučeniny přelstí P-glykoproteinem zprostředkovanou resistenci vůči několika léčivům. Transport P-glykoproteinem omezuje schopnost přírodních protirakovinných léčiv inhibovat růst nádorových buněk se získanou nebo de novo resistencí vůči léčivům [Endicott, J. A. et al., Ann. Rev. Biochem. 58: 137 až 171 (1989); Beck, W. T., Biochem. Pharm. 36: 2879 až 2887 (1987) a Moscow, J. A. et al., J. Nati. Cancer Inst.
80: 14 až 20 (1988)]. Přestože jsou alkaloidy brčálu Vinca velmi užitečné při počáteční chemoterapeutické léčbě, jsou extrémně dobrými substráty pro transport P-glykoproteinem, čímž je velmi omezena jejich použitelnost proti P-glykoproteinem mediované MDR nádorů. Identifikace činidel, která mají překonat resistenci vůči několika léčivům, by měla vést k vývoji užitečných a nových protirakovinných činidel. Kryptofycinové sloučeniny podle vynálezu takovými činidly jsou, jelikož jsou špatnými substráty pro transport • · · • ·· ··· · ·
148 zprostředkovaný P-glykoproteinem. Tento fakt se odráží v nízkém faktoru resistence u kryptofycinových sloučenin na rozdíl od vinblastinu, taxolu a jiných léčiv přírodního původu.
Úplná syntéza kryptofycinů
Struktury nově syntetizovaných sloučenin, viz kryptofyciny 51, 52, 53, 55, 56, 57, 58 a 61, byly potvrzeny přímo za použití postupů dobře známých odborníkům v tomto oboru. Hmotností spektrální data jsou v souladu s molekulárním složením. Údaje H NMR a C NMR jsou velmi podobné údajům kryptofycinu 1 a příbuzných v přírodě se vyskytujících a polosyntetických analogů. Symboly A, B,
C a D v charakteristikách sloučenin označují odpovídající j ednotky.
Následující příklady demonstrují totální syntézu kryptofycinových sloučenin, jakož i jejich použití jako terapeutických činidel podle vynálezu.
Příklad 8
Syntéza kryptofycinu 51
S-trans-3-penten-2-ol (A)
Směs racemického trans-3-penten-2-olu (933 mg, 11 mmol), trifluorethyllaurátu (4,14 g, 15 mmol) a lipasy slinivky vepře (PPL, 2,0 g) ve 25 ml bezvodého diethyletheru se 80 hodin míchá. Poté se PPL odfiltruje a promyje třikrát etherem. Etherový filtrát se odpaří a lepivý olejovitý zbytek se podrobí přímé vakuové destilaci. S-trans-3-penten-2-ol (A) zkondenzuje v předloze chlazené kapalným dusíkem (383 mg).
9 9 9 • · • 9
99 9 9
- 149 ·· 99 1H NMR (CDC13): δ 5,57 (4-H, dq, -15,3/6,0), 5,74 (3-H, ddd, -15,3/6,4/1,2), 4,19 (2-H, 1:4:6:4:1 pentuplet, 6,4), 2,24 (OH, bs), 1,63 (5-H3, d, 6,0), 1,19 (1-H3, d, 6,4) 13C NMR (CDC13): δ 135,5 (3), 125,5 (4), 68,7 (2), 23,3 (5),
17,5 (1)
S-trans-2-(2-Propinoxy)-3-penten (B)
K intenzivně míchané směsi S-enantiomeru A (628 mg, 7,3 mmol), tetrabutylamoniumhydrogensulfátu (138 mg, 0,41 mmol) a 40% hydroxidu sodného ve vodě (5 ml) se při 0°C přikape propargylchlorid (767 mg, 10,3 mmol, 745 μΐ). V intenzivním míchání se pokračuje přes noc. Výsledná směs se poté při 0’C neutralizuje kyselinou chlorovodíkovou a propartylether se extrahuje pentanem. Extrakt se odpaří a propargylether se přečistí na krátkém sloupci silikagelu za použití 2% diethyletheru v pentanu, jako elučního činidla. Získá se 778 mg propargyl etheru B, [a]D -118,9° (c 2,0, CHC13); 3Η NMR (CDC13): δ 5,70 (4-H, dq, 18,5/6,5), 5,31 (3-H, ddd, 18,5/7,2/1,4), 4,15 (l'-H, dd, -15,6/2,1), 4,01 (l'-H, dd, -15,6/2,1), 4,01 (2-H, m), 2,38 (3’-H, t, 2,1), 1,73 (5-H, dd, 6,5/1,4), 1,25 (1H, d, 6,3) (3R,4R)-4-Methylhept-5(E)-en-l-in-3-ol (C)
Alikvot butyllithia v hexanu (2,5M, 5,1 ml, 12,8 mmol) se odpaří za sníženého tlaku a zbytek se ochladí na -90 °C a pomalu se k němu přidá roztok propargyletheru B (454 mg, 3,66 mmol) v 10 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se přes noc nechá zahřát na teplotu místnosti, rozloží roztokem chloridu amonného a extrahuje třikrát etherem. Extrakty se vysuší a odpaří. Zbytek se přečistí na sloupci silikagelu za použití 5% ethylacetátu v hexanu, jako elučního činidla. Získá se 322 mg alkoholu C (výtěžek 71 %), [a]D = 32,9° (c 3,0, CHC13); IR (Naci) Vmax 3306, 2968, 1455, 1379, 1029, • · · · · ·
- 150 ·· · • · · ·» * ·· ··
975 cm“1. 1H NMR (CDCl3): a 5,61 (6-H, dq, 15,3/6,3),5,38 (5-H, dd, 15,3/7,7), 4,13 (3-H, brs), 2,45 (1-H, d, 1,5),
2,38 (4-H, m), 2,20 (OH, bd, 3,3), 1,68 (7-H, d, 6,2), 1,09 (4-CH3, d, 6,8). 13C NMR (CDC13): δ 131,5 (5), 127,9 (6),
83,5 (2), 73,6 (l), 66,2 (3), 43,4 (4), 18,1 (7), 15,7 (4-Me) (3S,4R)-3-terc.Butyldimethylsilyloxy-4-methylhept-5E-enal (D)
K míchanému roztoku alkoholu C (248 mg, 2 mmol) a imidazolu (340 mg, 5 mmol) ve 3 ml suchého dimethylformamidu se přidá terc.butyldimethylsilylchlorid (452 mg, 3 mmol). Vzniklá směs se přes noc míchá a přidá se k ní 10 ml 10% hydroxidu sodného, aby se rozložil přebytečný terc.butyldimethylsilylchlorid. Produkt se extrahuje etherem. Extrakt se promyje postupně vodou, 0,5M kyselinou chlorovodíkovou a vodou, vysuší a odpaří. Zbytek se přečistí chromatografii na silikagelu za použití hexanu, jako elučního činidla. Získá se 457 mg (3R,4R-3-terc.butyldimethylsilyloxy-4-methylhept5(E)-en-l-inu (výtěžek 96 %). 1H NMR (CDC13): δ 5,50 (6-H, dq, 15,3/6,1), 5,38 (5-H, dd, 15,3/7,5), 4,16 (3-H, dd, 5,7/1,7), 2,37 (1-H, d, 1,7), 2,35 (4-H, m), 1,68 (7-H, d, 6,1), 1,07 (4-Me, d, 6,8), 0,90 (CMe3, s), 0,12 (SiMe, s), 0,09 (SiMe, s).
Za použití stejného postupu se získá odpovídající TBDPS derivát, (3R,4R)-3-terc.butyldifenylsilyloxy-4methylhept-5(E)-en-l-in, ve výtěžku 92 %, [a]D = +32,9° (c 3,0, CHClj). ‘H NMR (CDC13) 6 7,72/7,38 (2Ph-Hs), 5,32 (6-H; m), 5,25 (5-H; dd, 16,2/7,3), 4,29 (3-H; dd, 5,2/2,0), 2.38 (4-H; m), 2,33 (1-H; d, 2,0), 1,64 (7-H; d,
5,3), 1,11 (4-Me; d, 6,9), 1,06 (CMe,). l3C NMR (CDC13) Ó 136,1/ 135,9 /133,6 /129,7/129,6/127,5/127,3 (Ph), 132,4 (5), 126,1 (6), 83,3 (2), 73,5 (1), 68,0 (3), 43,6 (4), 26,9 (CMe,), 19,4 (CMe3), 18,0 (7), 14,7 (4-Me).
·« «
• *
151 ·· ·
2-Methylbuten (1,15 ml 2M roztoku v tetrahydrofuranu, 2,3 mmol) se při -25°C přidá k 1,1 ml boran-tetrahydrofuranového komplexu (1M, 1,1 mmol). Výsledná směs se míchá 2 hodiny za chlazení v ledové lázni. Směs se ochladí na -50°C a v jediné dávce se k ní přidá roztok TBS derivátu (238 mg, 1 mmol) v 1 ml tetrahydrofuranu. Chladicí lázeň se odstaví a reakční směs se nechá zahřát na teplotu místnosti a při této teplotě udržuje další jednu hodinu. Poté se ke směsi při 0°C přidá 2,2M roztok KH2PO4/K2HPO4 (4,8 ml) a 30% peroxid vodíku (0,8 ml). Po jedné hodině se z reakční směsi odpaří tetrahydrofuran a zbytek se extrahuje etherem. Etherový extrakt se odpaří a zbytek se chromatografuje na silikagelu za použití 1% ethylacetátu v hexanu, jako elučního činidla. Získá se 194 mg aldehydu D (výtěžek 76 %). XH NMR (CDC13): δ 9,78 (1-H, t, 2,3), 5,46 (6-H, dq, 15,3/6,1), 5,34 (5-H, dd, 15,3/7,5), 4,13 (3-H, m) , 2,47 (2-H, m), 2,31 (4-H, m), 1,66 (7-H, br d, 6,1), 0,99 (4-Me, d, 6,8), 0,87 (CMe3, s), 0,07 (SiMe, s), 0,04 (SiMe, s).
terc.Butyldifenylsilyletherový (TBDPS) derivát aldehydu se získá v 83% výtěžku.
^H NMR (CDC13): δ 9,52 (1-H, t, 2,4), 7,69/7,40 (2Ph-H5), 5,28 (6-H, m), 5,22 (5-H, dd, 16,2/6,2), 4,19 (3-H, m), 2,42 (2-H, m), 2,29 (4-H, m), 1,60 (7-H, d, 5,4), 1,07 (CMe3), 1,02 (4-Me, d, 6,9) 13C NMR (CDC13): δ 202,0 (1), 136,1/ 133,6/133,3/130,2/129,7/127,7/127,6 (Ph), 132,3 (5), 126,2 (6), 72,8 (3), 47,6 (2), 42,2 (4), 27,1 (CMe3), 19,6 (CMe3), 18,3 (7), 14,99 (4-Me)
Methyl- (5S, 6R) -5-terc. butyldimethylsilyloxy-6-methyl-7-oxonona-2(E)-7E-dienoát (E)
K míchanému roztoku aldehydu D (0,74 g, 2,9 mmol) a trimethylfosfonoacetátu (632 mg, 3,5 mmol) v 5 ml tetrahydrofuranu ochlazenému na -78°C se přidá tetramethylguani®· ····
- 152 »® · · · • · · k · · · din (435 μΐ, 3,5 mmol). Po 30 minutách se chladicí lázeň odstaví. Reakční směs se míchá další 4 hodiny a neutralizuje 1M kyselinou chlorovodíkovou. Produkt se extrahuje etherem. Etherový extrakt se odpaří a zbytek se chromátografuje na silikagelu za použití 5% ethylacetátu v hexanu, jako elučního činidla. Získá se 0,814 g sloučeniny E (výtěžek 90 %).
XH NMR (CDC13): δ 6,93 (3-H, dt, 15,6/7,8), 5,62 (2-H, dd, 15,6/1,2), 5,37 (8-H, m), 5,37 (7-H, m), 3,71 (OCH3, s),
3,61 (5-H, m), 2,29 (4-H2, m), 2,22 (6-H, m), 1,66 (9-H3, brd, 6,1), 0,99 (6-Me, d, 6,8), 0,88 (CMe3, s), 0,03 (SiMe, s), 0,01 (SiMe, s).
terc.Butyldifenylsilyletherový (TBDPS) derivát aldehydu se získá v 90% výtěžku.
XH NMR (CDC13): δ 7,68/7,38 (2Ph-H5), 6,75 (3-H, dt, 15,6/7,4), 5,62 (2-H, d, 15,6), 5,34 (8-H, m), 5,29 (7-H, m), 3,70(5-H, m), 3,68 (OCH3, s), 2,28 (4-H2, m), 2,20 (6-H, m), 1,62 (9-H3, d, 5,3), l,08(CMe3), 0,99 (6-Me, d, 6,9) 13C NMR (CDC13): δ 166,7 (1), 146,4 (3),
136,0/134,2/133,8/129,62/129,56/127,5/127,4 (Ph), 132,5 (7),
125,8 (8), 122,6 (2), 76,2 (5), 51,3 (OCH3), 41,7 (6), 36,8 (4), 27,0 (CMe3), 19,4 (CMe3), 18,1 (9), 14,7 (6-Me)
Methyl- (5S, 6R) -5-terc. butyldimethylsilyloxy-6-methyl-7-oxohept-2(E)-enoát (F)
Roztokem methylesteru E (328 mg, 1,0 mmol) a 97 μΐ pyridinu v 15 ml dichlormethanu se při -78°C vede ozon. Průběh ozonolýzy se monitoruje chromatografií na tenké vrstvě. Po spotřebování methylesteru se k výsledné směsi přidá asi 500 mg zinkového prachu a 1 ml ledové kyseliny octové. Teplota reakční směsi se pomalu zvýší na 25°C a reakční směs se přefiltruje. Filtrát se promyje postupně nasyceným roztokem síranu mědného a hydrogenuhličitanu ·· *···
- 153 sodného a odpaří se z něj rozpouštědlo. Surového aldehydu F (249 mg, 83 %) se použije v následujícím stupni bez dalšího přečištění.
1H NMR (CDC13): δ 9,96 (7-H, t, 2,3), 6,96 (3-H, dt, 15,7/7,6), 5,90 (2-H, dd, 15,7/0,7), 4,05 (5-H, m), 3,74 (OMe, s), 2,51 (6-H, m), 2,45 (4-H2, m), 1,09 (6-Me, d,
6,9), 0,88 (CMe3, s), 0,04 (SiMe, s)
Methyl-(5S,6R)-5-terc.butyldimethylsilyloxy-6-methyl-8fenylokta-2E,7E-dienoát (G)
K míchanému roztoku aldlehydu F (25,0 mg, 0,08 mmol) v 1,5 ml tetrahydrofuranu se při -78°C přidá 0,80 ml chladné (-78°C) směsi benzyltrifenylfosfoniumchloridu (268 mg, 0,69 mmol, v 6,9 ml tetrahydrofuranu) a n-butyllithium (280 μΐ 2,5M roztoku v hexanu). Po 15 minutách se chladicí lázeň odstaví a v míchání se pokračuje 2 hodiny. Reakční směs se rozloží nasyceným roztokem chloridu amonného a tetrahydrofuran se odpaří. Zbytek se extrahuje dvakrát hexanem a spojené extrakty se promyjí vodným roztokem chloridu sodného, vysuší a odpaří. Olejovitý zbytek, směs E a Z isomerů v poměru 5 ί 1, se rozpustí v 1,5 ml benzenu s obsahem thiofenolu (0,02M) a 1,1'-azobis(cyklohexankarbonitrilu) (VÁZO, 0,006M). Výsledná směs se 5 hodin zahřívá ke zpětnému toku, ochladí na teplotu místnosti a přidá se k ní hexan (15 ml). Organický roztok se promyje postupně 10% hydroxidem sodným a vodným roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Zbytek se podrobí chromatografii na silikagelu za použití 2% ethylacetátu v hexanu, jako elučního činidla. Získá se 24 mg (80 %) sloučeniny G, [a]D +68,2° (c 1,5, CHC13); EIMS miz 374 (<1%; M+), 359 (1; M+-CH3), 317 (10; M^Ou), 275 (10), 243, (73), 143 (20), 115 (10), 97 (64), 89 (31), 73 (100); HREIMS miz 374,2232 (C^HmOjSí, Δ +4,5tnmu), 359,2031 (C2)H31O3Si, A+l,lmmu), 317,1579 (C.gHjASi, A-0,6mmu); UV (MeOH) λ m (e) 206 (33500), 252 (20100) nm; IR ·· ···· ·· « · · · · ·
- 154 - *· ··· ** *
2952. 2855, 1725, 1657, 1435, 1257, 1168, 1097, 970, 836, 775 cm1; lH NMR δ 7,27,4 (Ph-H5; m), 6,96 (3-H; ddd, 15,6/7,8/7,5), 6,37 (8-H; d, 15,9), 6,16 (7-H; dd, 15,9/8.1), 5,84 (2-H; d, 15,6), 3,75 (5-H; ddd, 10,2/6,0/4,2), 3,72 (OMe; s), 2,44 (6-H; m), 2,36 (4-H2; m), 1,10 (6-Me; d, 6,9), 0,91 (Si-CMe3; s), 0,06 (Si-Me; s), 0,05 (SiMe; s); ,3C NMR & 166,8 (1), 146,4 (3), 137,6 (Ph 1’), 131,9 (8), 130,4 (7), 128,5 (Ph 375’), 127,0 (Ph 4’), 126,0 (Ph 276’), 122,9 (2), 75,0 (5), 51,4 (OMe), 42,8 (6), 37,6 (4), 25,9 (Si-CMe,), 18,1 (Si-CMe,), 16,2 (6-Me), -4,4 (Si-Me), -4,5 (Si-Me).
Analýza pro C22H34O3SÍ: vypočteno: C 70,52, H 9,17 nalezeno: C 70,72, H 9,42 (5S,6R)-5-terc.Butyldimethylsilyloxy-6-methyl-8-fenylokta2E,7E-dienová kyselina (H)
K roztoku esteru G (159 mg, 0,43 mmol) v 7 ml acetonu se přidá 5 ml 1M vodného hydroxidu lithného. Výsledná směs se míchá 3 hodiny při 25°C a zředí 20 ml diethyletheru. Vzniklá směs se 1M kyselinou chlorovodíkovou okyselí na pH asi 4. Organická vrstva se oddělí a promyje vždy 20 ml vodného roztoku chloridu sodného a vody, vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Olejovitý zbytek se chromatografuje na silikagelu za použití 40% ethylacetátu v hexanu s obsahem 0,5 % kyseliny octové. Získá se čistá kyselina H ve formě žlutého řídkého oleje (145 mg, výtěžek 95 %). (a]D +87,0 (c 1,4, CHClj); EIMS m/z; 343 (1; M+-0H), 303 (5), 275 (9), 257 (4), 229 (62), 213 (16), 171 (22), 143 (37), 131 (16), 115 (23), 97 (100), 91 (44); HREIMS m/z 343,2107 (C21H31O2Si, ů-l,3mmu), 229,1220 (Cl5H17O2, A+0,9mmu); UV (¢) 206 (24500), 252 (15600) nm; IR 3300-2800 (br), 2956, 2856, 1697, 1651, 1419, 1256, 1097,
836, 693 cm1; Ή NMR 6 10,4 (CO2H; bs, W1/2«100), 7,2-7,4 (Ph-Hs; m), 7,09 (3-H; ddd, 15,6/7,6/7,6), 6,39 (8-H; d, 15,9), 6,16 (7-H; dd, 15,9/8,1), 5,85 (2-H; d, 15,6),
- 155
AA AAAA • A • * • · • A
AA ·· A A • AA
3,78 (5-H; ddd, 6,0/6,0/4,2), 2,46 (6-H; m), 2,40 (4-H2; m), 1,12 (6-Me; d, 6,9), 0,92 (Si-CMej; s), 0,07 (SiMe,; s); 13C NMR δ 171,6 (1), 149,1 (3), 137,5 (Ph 1’), 131,8 (8),
130,5 (7), 128,5 (Ph 375’), 127,1 (Ph 4’), 126,1 (Ph 276’), 122,7 (2), 74,9 (5), 42,9 (6), 37,6 (4), 25,8 (Si-CMej. 18,1 (Si-CMe3), 16,1 (6-Me), -4,4 (Si-Me), -4,5 (Si-Me).
2,2,2-Trichlorethylester 3-(3-chlor-4-methoxyfenyl)-Dalaninu (I)
Vzorek BOC derivátu D-chlortyrosinu (160 mg,
0,35 mmol) se rozpustí ve 3 ml neředěné trifluoroctové kyseliny. Vzniklý roztok se nechá 1 hodinu stát při teplotě místnosti, načež se z něj za sníženého tlaku odstraní přebytek reakčního činidla. Tak se regeneruje požadovaný amin I ve formě trifluoracetátové soli (165 mg, 100% výtěžek), [a]D +1,7 (c 5,2, CHC13); IR vmax
3400-2500 (br), 1760, 1680, 1500, 1200, 1130, 1070, 805, 710 cm1; !H NMR δ 8,07 (NH2; br m, W,n«45), 7,27 (5-H; s), 7,12 (9-H; d, 8,1), 6,88 (8-H; d, 8.1), 4,86/4,67 (CH2CC13; AB q, -12,0), 4,41 (2-H; bs, Ww»20), 3,86 (OMe; s), 3,33 (3-H; dd, -14,4/3,6), 3,22 (3-H’; dd, -14,4/6,6); I3C NMR Ó 167,6 (1), 155,0 (7), 130,9 (5), 128,8 (9), 125,4 (4), 123,1 (6), 112,7 (8), 93,4 (CC13), 75,3 (CH2CC13), 56,1 (OMe), 54,2 (2),
34,9 (3).
Sloučenina J
K míchanému roztoku sloučeniny H (25 mg, 0,07 mmol) ve 3 ml bezvodého dimethylformamidu se pod atmosférou argonu postupně přidá pentafluordifenylfosfinát (FDPP, 32 mg, 0,08 mmol), trifluoacetátová sůl sloučeniny I (35 mg, 0,07 mmol) a diisopropylethylamin (DIEA, 27 mg, asi 36 μΐ, 0,21 mmol, asi 3 ekvivalenty). V míchání při 25°C se pokračuje další jednu hodinu, načež se reakční směs extrahuje 20 ml diethyletheru. Etherový extrakt se promyje 10 ml 1M kyseliny chlorovodíkové, 10 ml nasyceného hydrogenuhličitanu sodného, 20 ml vodného chloridu sodného a 20 ml vody, vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Světle žlutý olejovitý zbytek se podrobí ·« ···· chromatografii na silikagelu za použití 15% ethylacetátu v hexanu, jako elučního činidla. Získá se sloučenina J ve formě bezbarvého oleje (32 mg, výtěžek 65 %). [a]D +11,8° (c 1,2, CHC13); EIMS m/z: 644/646/648/650 (7/8/6/3; M+-ťBu) , 570/572/574 (46/100/21), 536/538 (18/15), 394/396 (67/29), 275 (20), 155/157 (29/9); HREIMS m!z 644,0981 (C^HMChNOjSi, A-2,13mmu); UV (e) 204 (54900), 230 (23200), 248 (19200), 284 (3500) nm; IR 3290, 2980, 2850, 1760, 1680, 1640,
1505, 1380, 1270, 1169, 990, 720 cm1; *H NMR A δ 7,2-7,4 (Ph-Hs; m), 6,87 (3H; ddd, 15,0/7,8/7,5), 6,37 (8-H; d, 16,2), 6,18 (7-H; dd, 16,2/8,1), 5,82 (2-H; d,
15,0), 3,75 (5-H; ddd, 9,9/6,0/4,8), 2,46 (6-H; m), 2,36 (4-H2; m), 1,11 (6-Me; d, 6,9), 0,91 (SiCMe3; s), 0,07 (SiMe; s), 0,06 (SiMe; s); B δ 7,19 (5-H; d, 2,1), 7,04 (9-H; dd, 8,4/2,1), 6,85 (8-H; d, 8,4), 5,85 (NH; d, 7,8), 5,08 (2-H; ddd, 7,8/6,0/5,7), 4,81/4,74 (CH2CC13; AB q, -11,7), 3,87 (OMe; s), 3,22 (3-H; dd, -14,1/5,7), 3,12 (3H’; dd, -14,1/6,0). 13C NMR A δ 165,1 (1), 143,0 (3), 137,6 (9), 132,0 (8), 130,4 (7), 128,5 (11/13), 127,0 (12), 126,0 (10/14), 124,7 (2), 75,0 (5), 42,6 (6), 37,6 (4),
25,9 (Si-CMe,). 18,1 (Si-CMe3), 16,5 (6-Me), -4,3 (Si-Me), -4,6 (Si-Me); B δ 170,1 (1), 154,3 (7), 131,1 (5), 128,5 (4/9), 122,6 (6), 112,2 (8), 94,2 (CC13), 74,8 (CH2CC13), 56,1 (OMe), 53,0 (2), 36,5 (3).
(1 ’R,5S,6R)-N-1' -(karbo-2 ,2”,2”-trichlorethoxy)-2 '-(3-chlor4-methoxyfenyl) ethyl-5-terc. butyldimethylsilyloxy-6-methyl8-fenylokta-2E,7E-dienamid (K)
K roztoku sloučeniny J (50 mg, 0,07 mmol) ve 4 ml acetonitrilu se přidá 400 μΣ 50% vodného roztoku fluorovodíku. Výsledná směs se 1 hodinu míchá při 25°C a extrahuje 30 ml diethyletheru. Etherový extrakt se promyje vždy 30 ml nasyceného hydrogenuhličitanu sodného, vodného chloridu sodného a vody, vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Získá se alkohol K jako bezbarvá pěna (40 mg, 95% výtěžek): [a]D -6,1° (c 1,3, CHC13); EIMS (rel.intenzita) 587/589/591/593 (M+,<1%)
Μ ···· • ·
- 157 - ............
552/554/556 (1/2/0.5), 456/458/460/462 (1/2/1/0,2), 342/344/346 (7/8/4), 212/214 (15/5), 195/197 (6/2), 155/157 (99/34), 131 (100), 91 (77); HREIMS m/z 587,0721 (C^VC^NO,, Á+7,9nunu); UV 204 (56500), 230 (22100), 248 (18100), 284 (3600) nm; IR ^3400, 3300, 2980, 1780, 1680, 1640, 1505, 1270, 1180, 1090, 1000, 770 cm*. *H NMR A δ 7,2-7,4 (Ph-H5; m), 6,92 (3-H; ddd, 15,3/7,8/7,5), 6,46 (8H; d, 15,9), 6,14 (7-H; dd, 15,9/8,4), 5,90 (2-H; d, 15,3), 3,65 (5-H; ddd 7,8/5,6/4,0), 2,39 (6-H/4-H2; bm), 1,78 (OH; bs, W,n«40 Hz), 1,14 (6-Me; d, 6.9); B δ 7,18 (5H; d, 1,8), 7,03 (9-H; dd, 8,4/1,8), 6,84 (8-H; d, 8,4), 5,97 (NH; d, 7,8), 5,06 (2-H; ddd, 7,8/6,0/5,7), 4,79/4,72 (CH2CC13; AB q, -12,0), 3,86 (OMe; s), 3,20 (3-H; dd, 14,1/5,7), 3,10 (3-H*; dd, -14,1/6,0). nC NMR A δ 165,3 (1), 142,6 (3), 137,0 (9),
131,7 (8), 131,0 (7), 128,5 (11/13), 127,3 (12), 126,1 (10/14), 125,0 (2), 73,8 (5), 43,2 (6), 37,2 (4>,. 16,8 (6-Me); B δ 170,2 (1), 154,2 (7), 131,0 (5), 128,4 (9), 128,3 (4),
122,5 (6), 112,2 (8), 94,2 (CC13), 74,7 (CH2CC13), 56,1 (OMe), 53,0 (2), 36,5 (3).
3-(terč.Butoxykarbonyl)amino-2,2-dimethylpropanová kyselina (M)
K roztoku 3-amino-2,2-dimethylpropan-l-olu (L) (3,0 g, 29 mmol) v 51 ml 10% roztoku triethylaminu v methanolu se přidá diterc.butyldikarbonát (6,7 g, 31 mmol).
Reakční směs se míchá 1 hodinu při 25C a odstraní se z ní rozpouštědlo. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (30 ml) a dichlormethanový roztok se promyje dvakrát 1M hydrogensíranem draselným (pH 2) a jednou nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší síranem horečnatým a za sníženého tlaku se z něj odstraní rozpouštědlo. Získá se 5,8 g (výtěžek 93 %) 3-(terč.butoxykarbonyl)amino-2,2-dimethylpropan-l-olu ve formě bílé pevné látky, které se použije přímo v následujícím stupni bez dalšího přečištění (>95% čistota podle analýzy NMR) teplota tání: 70,5 až 71,5°C; IR vmax 3350,
1685, 1456 cm“1; 1H NMR: δ 4,87 (NH, brs), 3,72 (OH, brs), 3,19 (1-H2, d, 5,1), 2,95 (3-H2, d, 6,0), 1,44 (CMe3, s),
0,85 (2-Me2, s), 13C NMR (CDCl3): δ 157,6 (BOC CO), 79,7 (CMe3), 68,1 (1), 47,1 (3), 36,7 (2), 28,3 (CMe3), 22,4 (2-Me2)
- 158
9999 • 9 99
9 9 • 99
999 9 9
9 9
99
Κ roztoku alkoholu, 3-(terc.butoxykarbonyl)amino2,2-dimethylpropan-l-olu (5,3 g, 25,9 mmol) a jodistanu sodného (16,6 g, 77,7 mmol) v tetrachlormethanu (52 ml), acetonitrilu (52 ml) a vodě (78 ml) se přidá hydrát chloridu ruthenitého (122 mg). Výsledná směs se míchá 1 hodinu při 25°C, přefiltruje přes celit a přidá se k ní nasycený roztok uhličitanu draselného ve vodě (50 ml). Vodná vrstva se oddělí, promyje etherem (20 ml), okyselí při 0°C kyselinou chlorovodíkovou na pH 2 a extrahuje dichlormethanem (30 ml x 3). Spojené extrakty se promyjí nasyceným roztokem chloridu sodného a vysuší síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se nejprve podrobí mžikové chromatografii s obrácenými fázemi na silikagelu Cl8 (ODS 120, 12 nm) za použití 50 až 90% methanolu, jako elučního činidla a poté překrystaluje z etheru. Získá se
3,7 g (66% výtěžek) sloučeniny M ve formě bílé pevné látky o teplotě tání 106 až 108“C; EIMS m/z (rel. intenzita) 217 (0,1), 161 (11), 98 (25), 88 (71), 57 (100); HREIMS m/z 217,1292 (C1QH19NO4, delta +2,2 mmu); IR vmax 3450-2500, 1710, 1694, 1510 cm-1; •’-Η NMR hlavního konformeru: S 5,03 (NH, brs), 3,26 (3-H2, m), 1,45 (CMe3, s), 1,24 (2-Me2, s); 13C NMR (CDC13): S 183,2 (1), 156,3 (BOCCO), 79,6 (CMe3), 49,5/47,9 (2/3), 28,4 (CMe3), 22,9 (2-Me2)
Allyl(2S)-2-hydroxy-4-methylpentanoát (N)
K roztoku 2,66 g L-2-hydroxy-4-methylpentanové kyseliny (20 mmol) a 1,74 g hydrogenuhličitanu sodného (20 mmol) ve 30 ml vody se při 0°C přidá 30 ml dichlormethanového roztoku 6,44 g tetrabutylamoniumchloridu (20 mmol) a 1,74 ml allylbromidu (20 mmol). Reakční směs se 24 hodin intenzivně míchá, načež se z ní odpaří dichlormethan. Ke zbytku se přidá asi 50 ml vody a vodná vrstva se extrahuje čtyřikrát diethyletherem. Etherový roztok se vysuší bezvodým síranem sodným a poté odpaří. Zbytek se nechá projít krátkým ·· ···· sloupcem silikagelu. Získá se 3,21 g allylesteru N (výtěžek 93,0) ve formě bezbarvého oleje, [a]D -8,4° (c 1,1, CHClj); IR 3464, 2957, 1732, 1203, 1140, 1087 cm1; *H NMR δ 5,92 (allyl 2-H; m), 5,34 (allyl 3-Hz; dd, 17,4/1,1), 5,28 (allyl 3-H£; dd, 10,5/1,1), 4,67 (allyl 1-H2; d, 5,7), 4,23 (2-H; br s), 2,64 (OH; br s), 1,89 (4-H; m), 1,57 (3-H2; m), 0,96 (5-H3; d, 6,5), 0,95 (4-Me; d, 6,7); 13C NMR 6 175,3 (1), 131,4 (allyl C-2), 118,6 (3), 68,9 (2), 65,7 (allyl C-l), 43,2 (3), 24,1 (4), 23,0 (5), 21,3 (4-Me).
Allyl-(2S)-2-[3’-(terč.Butoxykarbonyl)amino-2’,2'-dimethylpropanoyloxy]-4-methylpentanoát (O)
K roztoku 0,8 g sloučeniny M (3,7 mmol), 0,76 g sloučeniny N (4,4 mmol) a 92 mg DMAP v 10 ml suchého dichlormethanu se při 0°C přidá 0,84 g DCC (4,1 mmol) v dichlormethanu. Reakční směs se míchá 3 hodiny při 25°C a přefiltruje. Filtrát se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanů sodného, vysuší síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku. Zbytek se podrobí mžikové chromatografii na silikagelu za použití 5% ethylacetátu v hexanu, jako elučního činidla. Získá se 1,0 g (výtěžek 92 %) čisté sloučeniny O ve formě bezbarvého oleje, Rf 0,68 (17:83 EtOAc/ hexan), [a]D -29,4°(c 18,1, CHC13); EIMS m/z (rel.intenzita) 371 (2,M+), 242 (13), 184 (12), 126 (20) 84 (100); HREIMS m/z 371,2317 (C19H33NO6, delta -0,9mmu); IR (in substancia) vmax 3385' 2963, 1731, 1720, 1513 cm1, 1H NMR (300 MHz CDC13): C δ 5,39 (NH, zastřený brs), 3,33 (3-H, dd,-13,5/7,4) 3,27 (3-H’; dd. -13,5/5,9). 2,78 (2-H, m), 1,44 (CM^; s). 1,23 (2-Me; s). 1,22 (2-Me; s); D δ 5,91 (allyl 2-H. ddt, 16,6/10,3/6,0 Hz), 5,34 (allyl 3-Hz; bd, 16,6), 5,27 (allyl 3-H£; bd, 10,3), 5,08 (2-H; dd, 9,6/3,6), 4,65 (allyl 1-H2; m), 1,6-1,9 (3-H2/4-H; m), 0,94 (5-H3; d, 6,3), 0,94 (4-Me; d, 7,3). »C NMR C δ 176,5 (1), 156,3 (BOC £0), 79,0 (CMe3), 48,6 (3), 44,0 (2), 28,4 (CMe,), 22,2/23,0 (2-Me2); D δ 170,6 (1), 131,4 (allyl C-2), 119,1 (allyl C-3), 70,9 (2), 66,0 (allyl C-l), 39,5 (3), 24,8 (4), 23,0 (5), 21,5 (4-Me).
160
A · AA
A A A A A A A A
A A AA
A AAA A A
A A A
AA AA (2S) - 2- [ 3 ' - (terč.Butoxykarbonyl)amino-2’,2'-dimethylpropanoyloxy]-4-methylpentanová kyselina (P)
K 10 ml roztoku 180 mg (0,49 mmol) sloučeniny 0 a 60 mg (0,05 mmol) tetrakis(trifenylfosfin)palladia v suchém tetrahydrofuranu (pod atmosférou argonu) se pomalu během 10 minut přidá 470 μΐ (5,4 mmol) suchého morfolinu. Vzniklá směs se 50 minut míchá, načež se k ní přidá 40 ml etheru. Výsledný roztok se promyje 1M kyselinou chlorovodíkovou (40 ml) a extrahuje nasyceným hydrogenuhličitanem sodným (2 x 30 ml). Vodný extrakt se okyselí 0,5M kyselinou chlorovodíkovou a extrahuje etherem (40 ml). Etherový extrakt se promyje vodou (2 x 30 ml), vysuší síranem horečnatým a odpaří za sníženého tlaku. Získá se sloučenina P ve formě bezbarvého řídkého oleje (152 mg, 95 %); [a]D -22,2° (c 2,2, CHC13); EIMS m/z (relativní intenzita) 331 (1, M+), 275 (1), 258 (4), 231 (9), 202 (36), 174 (13), 144 (31), 126 (16), 114 (14), 98 (54), 88 (50), 84 9100); HREIMS m/z 331,2004 (C16H29NO6, delta -l,0mmu). -’-Η NMR (CDClj) C δ 5,41 (NH; dd, 5,7/5,4), 3,30 (3-H2; m), 2,68 (2-H; m), 1,43 (CMe3; br s), 1,22 (2-Me; s), 1,21 (2-Me; s); D ó 6,47 (1-OH; br s, Ww«35), 5,09 (2-H; dd, 9,3/2,7), 1,7-1,9 (3-H/4-H; m), 0,97 (5-H3; d, 6,0), 0,94 (4-Me; d, 6,0). 13C NMR (CDC13) C Ó 176,5 (1), 156,5 (BOC CO), 79,3 (CMe3), 48,6 (3), 44,0 (2), 28,3 (CMeJ. 23,0 (2-Me), 22,2 (2-Me); D δ 175,4 (1), 70,6 (2), 39,5 (3), 24,8 (4), 23,0 (5), 21,4 (4-Me).
Sloučenina Q
K roztoku alkoholu K (80 mg, 0,14 mmol), kyseliny P (68 mg, 0,21 mmol) a DMAP (4 mg) v suchém dichlormethanu (4 ml) se za míchání při 0°C pod atmosférou argonu přidá DCC (44 mg, 0,21 mmol) v suchém dichlormethanu (1 ml). Výsledná směs se míchá při 0°C po dobu 30 minut, během níž se vyloučí bílá sraženina. Poté se směs nechá zahřát na teplotu místnosti a míchá další 4 hodiny. Sraženina se odfiltruje, • Φ ·* φ · · » · ·· • ΦΦΦ ·
161 φ*
ΦΦ filtrát se zředí diethyletherem (40 ml) a diethyletherová směs se promyje postupně zředěnou kyselinou chlorovodíkovou (1M, 40 ml), nasyceným hydrogenuhličitaném sodným (40 ml) a vodným chloridem sodným (40 ml). Etherová vrstva se vysuší síranem hořečnatým a odpaří za sníženého tlaku. Získaná voskovitá pevná látka se podrobí chromatografii na silikagelu za použití směsi ethylacetátu a hexanu v poměru 1:3, jako elučního činidla. Získá se čistá sloučenina Q ve formě bezbarvého viskosního oleje (103 mg, 84 %), [a]D -3,1° (c 2,9, CHClj); EIMS miz (< 1, M+-C5H8O2), 415/417/419/421 (5/3/3/2),
342/344/346 (7/9/4), 286/288/290 (2/6/2), 207 (34), 178 (22), 155/157 (66/24), 131 (36), 91 (70), 70 (100); HREIMS m/z 800,2179 (C3eH48N2Og 35Cl4, A-l,4mmu); UV (MeOH) λ„„ (e) 204 (51200), 230 (18500), 248 (17200), 282 (2200) nm; IR (NaCl) 3376, 2965, 1755, 1728, 1712, 1678, 1504, 1258, 1150, 1067, 732 cm1. Ή NMR (CDC13) Ó
A: 7,28-7,33 (10-H/14-H/11-H/13-H; m), 7,22 (12-H; m), 6,78 (3-H; ddd, 15,8/6,4/6,3), 6,40 (8-H; d, 15,8), 6,01 (7-H; dd, 15>8/8,7), 5,88 (2-H; d, 15,8), 5,06 (5-H; bm, Ww«20 Hz), 2,62 (6-H; m), 2,53 (4-H2; bm, W,««15 Hz), 1,12 (6-CH3; d,
6.8) ; B 7,18 (5-H; d, 2,0), 7,05 (9-H; dd, 8,5/2,0), 6,83 (8-H; d, 8,5), 6,49 (NH; d,
7.9) , 5,06 (2-H; bm, W1/2«20 Hz), 4,79/4,70 (CH2CC13; AB q, -11,7), 3,85 (OCH3; s), 3,20 (3-H„; dd, -14,1/5,8), 3,07 (3-H,; dd, -14,1/6,7); C 5,38 (NH; bt, 6,5), 3,27 (3-H2; d, 6.5), 1,20 (2-CH3; s), 1,15 (2-CH3’; s); D 4,92 (2-H; dd, 10,0/3,8), 1,72 (4-H; bm, W1/2«20 Hz), 1,67 (3-H„; ddd, -14,1/10,0/5,0/), 1,56 (3-H,; ddd, 14,1/9,1/3,8), 1,43 (CC^CMej; s), 0,86 (4-CH3; d, 6,4), 0,82 (5-H3; d, 6,4). ,3C NMR (CDClj) δ A 165,4 (1), 139,3 (3), 136,9 (9), 131,7 (8), 130,1 (7), 128,6 (11/13),
127,5 (12), 126,2 (10/14), 125,4 (2), 76,5 (5), 41,1 (6), 33,4 (4), 16,7 (6-Me); B 170,0 (1), 154,1 (7), 131,2 (5). 128,8 (4), 128,5 (9), 122,3 (6), 112,1 (8), 94,3 (CHaCClj), 74,6 (£H2CC13), 56,1 (7-OMe), 53,2 (2), 36,6 (3); C 176,9 (1), 156,4 (CO2CMe3), 79,1 (COjCMej), 48,7 (3), 44,0 (2), 22,8 (2-Me), 22,3 (2-Me’); D
170,7 (1), 71,4 (2), 39,5 (3), 28,4 (CO,CMe,). 24,8 (4), 23,0 (4-Me), 21,4 (5).
·· ····
- 162 ·* • · • · · » · · · • 9 · ·· · ·« ·· • 9 9 9
9 99
9999 9
9 9
99
Aminokyselina R
K aminokyselině Q (100 mg, 0,11 mmol) se přidá aktivovaný zinkový prach (400 mg, v přebytku) a kyselina octová (4 ml). Heterogenní směs se na 45 minut podrobí sonikaci, dalších 90 minut míchá při teplotě místnosti a poté nalije na vrstvu celitu. Organická látka se z vrstvy celitu vymyje dichlormethanem a ze vzniklého roztoku se za sníženého tlaku odstraní rozpouštědlo. Získá se karboxylová kyselina ve formě bezbarvé amorfní pevné látky.
Surový produkt se bez dalšího přečištění rozpustí v trifluoroctové kyselině (TFA, 5 ml) a nechá stát 1 hodinu při teplotě místnosti. Poté se z něj za sníženého tlaku odstraní přebytek trifluoroctové kyseliny. Výsledná amorfní pevná látka se poté podrobí chromátografickému přečištění na Sep-Pak(R\ silikagelu, za použití dichlormethanu a poté 10% methanolu v dichlormethanu, jako elučního činidla. Získá se trifluoracetát amoniové soli požadované sloučeniny. Opakovanou lyofilizací získaného vodného roztoku soli se získá požadovaná volná aminokyselina R ve formě bezbarvé amorfní pevné látky (68 mg, výtěžek 91 % ze dvou stupňů); IR (NaCl) vmax 3300,
3200, 2965, 1693, 1606, 1504, 1441, 1259, 1201, 1146, 1066, 727 cm1. ‘H NMR (CD3OD) δ A: 7t33 (10-H/14-H; d, 7,4), 7,28 (11-H/13-H; t, 7,4), 7,18-7,23 (12-H; m), 6,69 (3-H; ddd, 15,6/7,7/7,0), 6,43 (8-H; d, 15,8), 6,04 (7-H; dd, 15,8/8,9), 6,00 (2-H; d, 15,6), 5,01 (5-H; ddd, 9,1/6,9/3,1), 2,64 (4-Hb; bm, Wl/2 = 30 Hz), 2,60 (6-H; bm, W(/I«20 Hz), 2,49 (4-H,; ddd, 15,8/9,1/7,7), 1,13 (6-Me; d, 6,7); B 7,18-7,23 (5-H; m), 7,11 (9-H; dd, 8,3/1,6), 6,92 (8-H; d, 8,3), 4,59 (2-H; bm, W,n«20 Hz),
3,81 (OCHtf.-s), 3,14 (3-Hb; dd, -13,7/4,3), 2,96 (3-H,; m, W1/2«20 Hz); C 2,96 (3H2; bm, W,n«20 Hz), 1,31 (2-CH3; s), 1,25 (2-CH3’; s); D 4,90 (2-H; dd, 9,6/4,0), 1,66 (4-H; bm, W,n«25 Hz), 1,59 (3-Hb; ddd, -14,4/9,6/4,8), 1,53 (3-H,; ddd, 14,4/9,1/4,0). 0,81 (4-Me; d, 6,5), 0,74 (5-H3; d, 6,5). nC NMR (CD3OD) δ A ·· ···· ··
- 163
• · · ·· ·· • · • * · • · · ♦ • · · ·· · ·· • · · · • · ·· • ···· · • · · ·· ··
167,7 (1), 140,7 (3), 138,4 (9), 133,0 (8), 131,7 (7), 129,6 (11/13), 128,5 (12), 127,3 (10/14), 127,1 (2), 78,4 (5), 43,1 (6), 35,7 (4), 17,4 (6-Me); Β 179,8 (1), 155,2 (7),
132,3 (4), 132,1 (5), 130,1 (9), 123,0 (6), 113,4 (8), 56,6 (7-OMe), 56,6 (2), 37,8 (3),
C 176,8 (1), 48,2 (3), 42,2 (2), 23,3 (2-Me), 23,3 (2-Me’); D 172,0 (1), 73,4 (2), 40,7 (3), 26,0 (4), 23,1 (4-Me), 21,8 (5).
Kryptofycin 51
K míchanému roztoku aminokyseliny T (75 mg, 0,11 mmol) v bezvodém dimethylformamidu (20 ml) se při teplotě místnosti pod atmosférou argonu přidá diisopropylethylamin (DIEA, 44 mg, 60 μΐ, 0,34 mmol, asi 3 ekvivalenty) a poté pentafluordifenylfosfinát (FDPP, 55 mg, 0,14 mmol, asi 1,3 ekvivalentu) v dimethylformamidu (2 ml). Reakční směs se 12 hodin míchá a přidá se k ní diethylether (40 ml). Etherová vrstva se promyje postupně kyselinou chlorovodíkovou (1M, ml), vodným roztokem chloridu sodného (40 ml) a vodou (40 ml), vysuší síranem hořečnatým a odpaří za sníženého tlaku. Voskovitý pevný zbytek se dále přečistí chromatografií s obrácenými fázemi (ODS, 10 μιη), přičemž eluce se provádí směsí 30% voda/acetonitril rychlostí 3 ml.min-1. Získá se kryptofycin 51 ve formě bezbarvé amorfní pevné látky (45 mg, 61 %) , [a]D +26,4° (c 0,25, CHC13); EIMS m/z 652/654 (M+, 3/1), 632/634 (3/2), 426/428 (51/15), 227 (64), 195/197 (64/22), 155/157 (71/15), 131 (59), (100); HREIMS m/z 652.2936 (C36H„N2O7 35C1, A-2,lmmu); UV (MeOH) (€) 204 (52000), 228 (20400), 250 (13400), 284 (2800) nm; IR (NaCl) 3376, 3270, 2960,
1747, 1721, 1659, 1536, 1514, 1259, 1150, 1066, 1013, 980, 694 cm1. ‘H NMR (CDClj) 0 A 7,32 (10-H/14-H; dd, 8,0/1,5), 7,29 (11-H/13-H; t, 8,0), 7,24 (12-H; bm, W1/2»15 Hz), 6,77 (3-H; ddd, 15,2/10,8/4,3), 6,40 (8-H; d, 15,8), 6,01 (7-H; dd, 15,8/8,8), 5,76 (2-H; dd, 15,2/1,1), 5,04 (5-H; ddd, 11,1/6,4/1,9), 2,54 (4-Hb/6-H; bm, WI/2« 15 Hz), 2,37 (4-H,; ddd, -14,3/11,1/10,8 ), 1,13 (6-Me; d, 6,8); B 7,2Q (5-H; d, 2,0), 7,05 (9-H; dd, 8,4/2,0), 6,84 (8-H; d, 8,4), 5,61 (NH; d, 7,8), 4,74 (2-H; ddd, 7,8/7,6/5,4), 3,87 (OMe; s), 3,11 (3-Hb; dd, -14,2/5,4), 3,06 (3-Ha; dd, -14,2/7,6);
C7,24 (NH; bm, Wl/2 = 15 Hz), 3,40 (3-Hb; dd, -13,5/8,5), 3,12 (3-H,; dd, -13,5/3,6),
1,22 (2-Me; s), 1,15 (2-Me’, s); D 4,85 (2-H; dd, 10,2/3,6), 1,66 (3-Hb; ddd, 14,0/10,2/4,6), 1,61 (4-H; bm W1/2«20,0 Hz), 1,33 (3-H,; ddd, -14,0/9,0/3,6), 0,74 (4- 164 ·· • >
• · • · • · ·· ·· ···· • · • · · • · · · • · · ·· * ·· ·· • · · • · ·· • ··· · • · ·· »*
Me; d, 6,6), Qř72 (5-H3; d, 6,6). ,3C NMR (CDC13) δ A 165,1 (1), 142,2 (3), 136,7 (9), 131,7 (8), 130,1 (7), 128,6 (11/13), 127,5 (12), 126,1 (10/14), 124,6 (2), 77,0 (5), 42,2 (6), 36,5 (4), 17,3 (6-Me); B 170,3 (1), 154,1 (7), 130,9 (5), 129,5 (4), 128,3 (9), 122,5 (6), 112,3 (8), 56,1 (7-OMe), 54,2 (2), 35,3 (3); C 178,0 (1), 46,5 (3),
42,7 (2), 22,8 (2-Me), 22,6 (2-Me’); D 170,6 (1), 71,5 (2), 39,5 (3), 24,5 (4), 22,7 (4-Me), 21,2 (5).
Příklad. 9
Syntéza kryptofycinu 52 a kryptofycinu 53
K míchanému roztoku kryptofycinu 51 (75 mg, 0,12 mmol) v bezvodém dichlormethanu (7,5 ml) se při 0°C pod atmosférou argonu přidá roztok m-chlorperoxobenzoové kyseliny (mCPBA, 50 mg, 0,23 mmol, asi 2 ekvivalenty, vztaženo na 80% aktivní kyslík) v dichlormethanu (1 ml). Po 30 minutách se reakční směs nechá zahřát na teplotu místnosti a míchá dalších 12 hodin, načež se z ní za sníženého tlaku odstraní rozpouštědlo, získá se směs kryptofycinu 52 a 53 v poměru 1,8 : 1 (podle analýzy NMR) ve formě amorfní pevné látky. Směs regioisomerických epoxidů se rozpustí v minimálním množství acetonitrilu a vzniklý roztok se podrobí chromatografii s obrácenými fázemi (YMC-ODS, 10 μιη, 250 mm x 22,5 mm, 30% H2O/MeCN, 6 ml.min-1), čímž se oddělí kryptofycin 52 (37 mg, 48 %) a kryptofycin 53 (19 mg, 25 %).
Spektrální údaje kryptofycinu 52 [a]D + 19,9° (c 0.5, CHC13); EIMS m/z 668/670 (4/2, M+), 445 (35), 244 (12), 227 (22), 195/197 (66/27), 184 (45), 155/157 (38/10), 91 (100); HREIMS m/z 668.2873 (C^HuN/VCl, Á-0.9mmu), 445,2497 (CjjHmNO6, Á-3,3mmu); UV (MeOH) (e) 204 (35100), 218 (20900) nm; IR (NaCl) Vtm 3415, 3270, 2960, 1748, 1721, 1650, 1536, 1504, 1260, 1192, 1150, 1066, 1013, 800, 698 cm'1. Ή NMR (CDC13) δ A 7,33-7,38 (11-H/12-H/13-H; bm, W^-25 Hz), 7,24 (10-H/14-H; m, W1/2«15 Hz), • · ·· ··· · • ·
- 165
I • to • · · «· • to • to to to to • · · ·· to·
6,76 (3-H; ddd, 15,1/10,8/4,3), 5,71 (2-H; dd, 15,1/1,7), 5,20 (5-H; ddd, 11,0/5,0/1^8), 3,68 (8-H; d, 1,9), 2,92 (7-H; dd, 7,5/1,9), 2,57 (4-H„; ddd, -14,6/1,8/1,7), 2,45 (4-H,; ddd, -14,6/11,0/10,8), 1,78 (6-H; bm, W1/2= 15 Hz), 1; 14 (6-Me; d, 6.9); B 7,18 (5-H; d, 2,2), 7,04 (9-H; dd, 8,4/2,2), 6,83 (8-H; d, 8,4), 5,56 (NH; d, 7,9), 4,73 (2-H; ddd, 7,9/7,4/5,3), 3,87 (OMe; s), 3,09 (3-Hb; dd, -14,6/5,3), 3,05 (3-H,; dd, -14,6/7,4);
C7,20 (NH; dd, 8,6/3,2), 3,41 (3-H„; dd, -13,4/8,6), 3,10 (3-H,; dd, -13,4/3,2), 1,22 (2-Me; s), 1,15 (2-Me*; s); D 4,82 (2-H; dd, 10,2/3,5), 1,73 (3-Hb; bm, W1/2«20 Hz), 1,66 (4-H; bm, Win«20 Hz), 1,31 (3-H,; ddd, -13,8/9,1/3,5), 0,84 (4Me; d, 6,6), 0,82 (5-H3; d, 6,6); ,3C NMR (CDC13) 6 A 164,9 (1), 141,8 (3), 136,7 (9), 128,7 (11/13), 128,3 (12), 125,6 (10/14), 124,7 (2), 75,9 (5), 63,0 (7), 59,0 (8),
40.7 (6), 36,9 (4), 13,5 (6-Me), B 170,3 (1), 154,1 (7), 130,9 (5), 129,5 (4), 128,5 (9), 122,6 (6), 112,4 (8), 56,1 (7-OMe), 54,3 (2), 35,3 (3), unit C 178,0 (1), 46,5 (3),
42.8 (2), 22,8 (2-Me), 22,8 (2-Me’), D 170,5 (1), 71,2 (2), 39,3 (3), 24,6 (4), 22,7 (4-Me), 21A2 (5).
Spektrální údaje kryptofycinu 53 [a]D +20,8° (c 1,7, CHC13); EIMS m/z 668/670 (5/4, M+), 445 (32), 244 (15), 227 (24), 195/197 (64/21), 184 (60), 155/157 (33/9), 91 (100); HREIMS m/z 668,2853 (C36H4jN2Og35Cl, ůl,lmmu); UV (MeOH) (e) 204 (38700), 218 (22900) nm; IR (NaCl) 3415, 3280, 2917, 2849, 1748, 1722, 1660, 1504, 1465, 1260, 1190, 1150, 1066, 755 cm1. *H NMR (CDC13) δ A 7,29-7,36 (11-H/12-H/13-H, bm, W1/2 = 20 Hz), 7,23 (10-H/14-H; dd, 8,3/1,7), 6,77 (3-H; ddd, 15,1/10,9/4,3), 5,81 (2-H; dd, 15,1/1,3), 5,17 (5-H; ddd, 11,2/4,9/1,8), 3,58 (8-H; d, 1,7), 2,90 (7-H; dd, 7,8/1,7), 2,67 (4-Hb; ddd, 14,7/11,2/10,9), 2,56 (4-H,; dddd, 14,7/4,3/1,8/1,3), 1,67-1,78 (6-H; bm, Wj/2« 45), 1,03 (6-CH3; d, 7,1); B 7,21 (5-H; d, 2,1), 7,07 (9-H; dd, 8,5/2,1), 6,84 (8-H; d, 8,4), 5,90 (2-NH; d, 7,9), 4,75 (2-H; ddd, 7,9/7,9/4,9), 3,85 (7-OCH3; s), 3,14 (3-Hb; dd, 14,5/4,9), 3,03 (3-H,; dd, 14,5/7,9); C 7,29-7,36 (3-NH; bm, Ww-25), 3,43 (3-Hb; dd, 13,7/8,8), 3,10 (3-H,; dd, 13,7/3,4), 1,23 (2-CH3; s), 1,17 (2-CH3’; s); D 4,92 (2-H; dd, 10,3/3,2), 1,67-1,78 (3-Hb/4-H; bm, Win=45), 1,48 (3-H,; ddd, 13,9/8,8/3,2), 0,89 (4-CH3; d, 6,6), 0,86 (5-H3; d, 6,6). ,3C NMR (CDC13) • · · · · »
- 166
• · · · • · · 9 « · · 9 • · 9
9 δ A 165,1 (1), 142,0 (3), 137,0 (9), 128,5 (11/13), 128,5 (12), 125,3 (10/14), 124,6 (2) , 76,7 (5), 63,2 (7), 56,2 (8), 40,8 (6), 36,7 (4), 13,4 (6-Me); Β 170,4 (1), 154,0 (7), 130,8 (5), 129,7 (4), 128,2 (9), 122,5 (6), 112,3 (8), 56,1 (7-OMe), 54,4 (2), 35,3 (3) ; C 177,9 (1), 46,4 (3), 42,7 (2), 23,0 (2-Me), 22,7 (2-Me’); D 170,5 (1),
71,3 (2), 39,2 (3), 24,7 (4), 22,8 (4-Me), 21,3 (5).
Příklad 10
Syntéza kryptofycinu 55
K roztoku kryptofycinu 52 (6 mg, 0,009 mmol) v 0,6 ml směsi 1,2-dimethoxyethanu a vody (2 : 1) se přidají 2 μΐ 12M kyseliny chlorovodíkové. Výsledný roztok se 20 hodin míchá při teplotě místnosti, neutralizuje uhličitanem draselným, přefiltruje přes filtr o velikosti pórů 5 μιη a filtrát se odpaří. Acetonitrilová vrstva se přečistí vysokotlakou kapalinovou chromatografií s obrácenými fázemi na sloupci C18 (250 x 10 mm) za použití směsi methanolu a vody (4 : 1), jako elučního činidla. Získá se 3,0 mg kryptofycinu 55 (48 %). [a]D +42,5° (c 1,1, CHClg); EIMS m/z 704/706/708 (M+<1), 668/670 (1,5/0,5, M+-HC1), 445 (6), 226 (8), 195/197 (16/5), 184 (10), 155/157 (33/11), 135 (100), 91 (99), 77 (30); HREIMS m/z 668,2873 (M+-HC1, C36H45N2O8 35C1, Δ0,8mmu); UV (MeOH) (e) 204 (48400), 218 (29200), 284 (1600) nm; IR (NaCl)
3410, 3286, 2959, 1748, 1723, 1666, 1538, 1504, 1455, 1257, 1178, 1066, 753 cm1.
*H NMR (CDClj) 6 A 7,35-7,42 (10-H/11-H/12-H/13-H/14-H; m), 6,78 (3-H; ddd, 15,1/10,6/4,5), 5,78 (2-H; dd, 15,1/1,7), 5,16 (5-H; ddd, 11,1/8,3/2,1), 4,65 (8-H; d, 9,7), 4,01 (7-H; bd, 9,7), 2,69 (4-Hb; dddd, -14,5/4,5/2,1/1,7), 2,50 (6-H; bm,
WI/2«15), 2,38 (4-H,; ddd, -14,5/11,1/10,6), 1,53 (7-OH, s), 1,04 (6-Me, d, 7,1);
B 7,21 (5-H; d, 2,2), 7,07 (9-H; dd, 8,5/2,2). 6,85 (8-H; d, 8,5), 5,57 (2-NH; d, 7,8), 4,74 (2-H; ddd, 7,8/7,6/5,2), 3,88 (7-OCH3; s), 3,13 (3-Hb; dd, 14,5/5,2), 3,05 (3-H,; dd, 14,5/7,6); C 7,21 (3-NH; m), 3,38 (3-Hb; dd, 13,5/8,3), 3,17 (3-H,; dd,
13,5/4,1), 1,23 (2-CH3; s), 1,17 (2-CH/; s), D 4,93 (2-H; dd, 10,1/3,5), 1,78 (3Hb; ddd, 13,5/10,1/5,0), 1,72 (4-H; bm, Ww»20), 1,43 (3-H.; ddd, 13,5/8,8/3,.5), 0,92 (4-CH3; d, 6,6), 0,92 (5-H3, d, 6,4). 13C NMR (CDC13) Ó A 165,1 (C-l), 142,4 (C167 ·· · ······ ·· ·· • AAA A A A · · · · • A · A A A AAAA • A A A O AA A AAAA A «ΑΑ A A A AAA
AA AAA «A · AA AA
3), 138,4 (C-9), 129,0 (C-ll/13), 128,3 (C-12), 128,0 (C-10/14), 124,6 (C-2), 76,1 (C5), 74,1 (C-7), 62,0 (C-8), 38,4 (C-6), 36,5 (C-4), 8,6 (6-Me); B 170,3 (C-l), 154,1 (C-7), 130,9 (C-5), 129,6 (C-4), 129,2 (C-9), 122,6 (C-6), 112,3 (C-8), 56,1 (7-OMe),
54,3 (C-2), 35,3 (C-3); C 177,8 (C-l), 46,5 (C-3), 42,8 (C-2), 22,9 (2-Me), 23,0 (C-2-Me’); D 170,3 (C-l), 71,3 (C-2), 39,7 (C-3), 24,8 (C-4), 22.,7 (4-Me), 21,6 (C-5).
Získá se rovněž odpovídající diol, kryptofycin 56, (2,8 mg, výtěžek 44 %).
Příklad 11
Syntéza kryptofycinů 57
Do nádoby obsahující 0,5 ml dichlormethanu se přidá malé množství (asi 1 mg) oxidu platičitého. Vzduch z nádoby se odčerpá a nahradí vodíkem. Reakční směs se míchá 20 minut při teplotě místnosti, načež se k ní přidá roztok obsahující 10,2 mg kryptofycinů 52 (0,015 mmol) v dichlormethanu (0,3 ml). Vzniklá směs se míchá dalších 30 minut při teplotě místnosti a poté se z ní filtrací přes vrstvu celitu na vatě odstraní katalyzátor a za sníženého tlaku se odstraní rozpouštědlo. Zbytek se podrobí vysokotlaké kapalinové chromatografii s obrácenými fázemi (ODS, 10 μιη, 250 x 22,5 mm), přičemž eluce se provádí směsí acetonitrilu a vody v poměru 3:1 rychlostí 5 ml.min“1. Získá se čistý kryptofycin 57 (9,1 mg, 89 %). [a]D +3,4 (c 4,5, CHC13); EIMS m/z 670/672 M+,
9/3), 447 (10), 246 (63), 229 (20), 195/197 (78/25), 184 (58), 155/157 (39/13), 128 (21), 91 (100), 77 (23); HREIMS m/z 670.3037 (C^NjO,35^, A-l,6mmu); UV (MeOH) (e) 204 (31400), 218 (12000), 284 (1200) nm; ‘H NMR (CDC13) δ A: 7,30-7,37 (11/12/13-H, bm), 7,23 (10/14-H, bdd, 7,9, 1,9), 5,03 (5-H, ddd, 9,0, 5,6, 3,4), 3,66 (8-H, d, 2,1), 2,89 (7-H, dd, 7,7, 2,1), 2,27 (2-H„, ddd, 14,3, 8,7, 6,2), 2,04 (2-H„ ddd, 14,3, 8,8, 6,8), 1,64-1,.75 (6-H/4-H2, bm), 1,61 (3-H2, bm, W1/2=25), 1,11 (6-CH3, • · · · · · • ·
- 168 .
d, 7,1), Β: 7,19 (5-H, d, 2,1), 7,04 (9-H, dd, 8,3, 2,1), 6,83 (8-H, d, 8.3), 5,55 (2 NH, d, 8,3). 4,65 (2-H, ddd, 8,3, 7,3, 5,3), 3,87 (7-OCH3, s), 3,16 (3-Hb, dd, 14,3,
7.3) , 3,08 (3-H„ dd, 14,3, 5,3), C: 6,91 (3-NH, dd, 6,4, 6,4), 3,41 (3-H„, dd, 13,5
6.4) , 3,30 (3-H„, dd, 13,5, 6,4), 1,21 (2-CH3, s), 1,13 (2-CH/, s), D: 4,80 (2-H, dd, 9,8, 4,1), 1,64-1,75 (3-Hb/4-H, bm), 1,34 (3-H,, ddd, 15,4, 10,1, 4,1), 0.86 (4-CH3 d, 6,5), 0,84 (5-Hj, d, 6,5); 13C NMR (CDC13) ó A.· 172,6 (1), 136,9 (9), 128,7 (11/13), 128,5 (12), 125,6 (10/14), 76,8 (5), 63,4 (7), 59,2 (8), 40,2 (6), 36,2 (2), 32,2 (4), 21,4 (3), 13,6 (6-Me), B: 170,4 (1), 154,0 (7), 131,1 (5), 130,0 (4), 128,5 (9),
122,5 (6), 112,2 (8), 56,1 (7-OMe), 54,3 (2), 35,3 (3), C: 177,6 (1), 47,0 (3), 43,1 (2), 22,5 (2-Me’), 22,4 (2-Me), D: 171,7 (1), 72,0 (2), 39,0 (3), 24,6 (4), 22,8 (4Me), 21,8 (5).
Příklad 12
Syntéza kryptofycinu 58
K míchanému roztoku kryptofycinu 57 (5,5 mg, 0,008 mmol) ve 3 ml chloroformu, který neobsahuje ethanol, se při asi -60°C přidá TMSC1 (tak, jak byl získán od firmy Aldrich, asi 4,5 mg, asi 5,2 μΐ, asi 0,04 mmol). Reakční směs se míchá 20 minut, kdy chromatografie na tenké vrstvě ukáže, že v ní není přítomna žádná výchozí látka. Těkavé složky se odstraní za sníženého tlaku. Amorfní pevný zbytek se vyjme do acetonitrilu a acetonitrilový roztok se podrobí vysokotlaké kapalinové chromatografii (ODS, 10 μιη, 250 x 22,5 mm), přičemž eluce se provádí směsí acetonitrilu a vody v poměru 3 : 1 rychlostí 5 ml.min-1. Jako hlavní produkt se získá čistý kryptofycin 58 (5,4 mg, 93 %). [a]D +7,2 (¢=2,1, CHC13); EIMS m/z 706/708/710 (M+, 27/23/8), 670/672 (M+-HC1, 14/13), 583 (54), 581 (53), 485 (23), 483 (21), 447 (34), 294 (21), 282 (39), 246 (57), 195/197 (87/27), 184 (73), 155/157 (45/10), 128 (30), 91 (95), 77 (30), 69 (100); HREIMS m/z 706.2844 (C36H4gN2Og3SCl2, A-5,6mmu), m/z 670,3070 (M+-HC1, C36H47N2Og35Cl, Δ4,9mmu); U\T(MeOH) (e) 204 (331900), 218 (11800), 284 (1800) nm; lH NMR (CDClj) Ó A: 7,34-7,42 (10/11/12/13/14-H, bm), 5,01 (5-H, ddd, 9,6, 8,3, 2,5), 4,65 (8-H, d, 9,6), 4,00 (7-H, dd, 9,6, 1,9), 2,42 (6-H, ddq, 8,3, 1,9, 7,0), 2,29 (2-Hb, » · ·· · • ·
- 169 ·-· ϊ ·· ·· » · · « ► ♦ ·· • · · · 4 • · 4 • · *» ddd, 14,3, 9,4, 4,5), 2,06 (2-H„ ddd, 14,3, 8,3, 7,5), 1,62-1,82 (3-H2/4-H2, bm), 0,99 (6-CHj, d, 7,0), B: 7,20 (5-H, d, 2,1), 7,06 (9-H, dd, 8,3, 2,1), 6,84 (8-H, d, 8,3), 5,62 (2-NH, d, 8,3), 4,61 (2-H, ddd, 8,3, 7,7, 5,4), 3,87 (7-OCH3, s), 3,17 (3-Hb, dd,
14.3, 7,7), 3,11 (3-H„ dd, 14,3, 5,4), C: 6,97 (3-NH, dd, 6,4, 6,2), 3,43 (3-Hb, dd,
13.4, 6,2), 3,31 (3-H„ dd, 13,4, 6,4), 1,23 (2-CH3, s), 1,16 (2-CH/, s), D: 4,93 (2H, dd, 10,0, 4,0), 1,86 (3-Hb, ddd, 14,0, 10,0, 5,5), 1,58 (3-H„ ddd, 14,0, 8,3, 4,0), 0,97 (4-CH3, d, 6,8), 0,94 (5-H3, d. 6,6); l3C NMR (CDC13) Ó A: 172,8 (1), 138,.7 (9), 129,0 (12), 128,9 (11/13), 128,0 (10/14), 76,5 (5), 73,8 (7), 62,1 (8), 38,1 (6), 35,9 (2) , 31,8 (4), 21,4 (3), 8,7 (6-Me), ' B: 170,6 (1), 153,9 (7), 131,0 (5), 130,2 (4),
128,5 (9), 122,4 (6), 112,2 (8), 56,1 (7-OMe), 54,4 (2), 35,0 (3), C: 177,2 (1), 47,0 (3) , 43,2 (2), 22,5 (2-Me’), 22,4 (2-Me), D: 171,8 (1), 72,0 (2), 39,4 (3), 24,9 (4),
22,9 (4-Me), 21,7 (5).
Příklad 13
Syntéza kryptofycinů 61
K roztoku kryptofycinů 53 (5 mg, 0,007 mmol) v 0,5 ml suchého benzenu se přidá trifenylfosfinsulfid (4 mg, 0,014 mmol) a poté 0,65 μΐ trifluoroctové kyseliny ve formě roztoku v suchém benzenu (100 μΐ). Výsledný roztok se míchá 6 hodin při teplotě místnosti, neutralizuje hydrogenuhličitanem sodným, přefiltruje a odpaří. Zbytek se rozdělí mezi vodu a dichlormethan. Dichlormethanová vrstva se přečistí vysokotlakou kapalinovou chromatografii s obrácenými fázemi na sloupci C18 za použití směsi acetonitrilu a vody v poměru 4:1, jako elučního činidla. Získá se čistý kryptofycin 61 (1,9 mg, 37 %). [a]p +28,4 (c = 0,7,
CHC13); EIMS m/z 684/686 (M+, nezjištěno), 652/654 (M+-S, 5/4), 426/428 (90/29), 294 (10), 227 (100), 195/197 (57/20), 184 (20), 155/157 (34/9), 131 (45), 129 (44), 91 (76), 77 (27); HREIMS m/z 652.2973 (M+-S, C36H4JN2O7 35C1, Á-5,8mmu); UV (MeOH) (e) 204 (26700), 218 (11600), 284 (820) nm; IR (NaCl) v*» 3410, 3271, 2958, 1749, 1724, 1670, 1503, 1463, • Φ φφφφ
- 170 φφ
1258, 1176, 1066, 758 cm1. Ή NMR (CDC13) Ó A 7,29-7,34 (11/12/13-H; m), 7,25 (10/14-H, bd, 6,6), 6,73 (3-H, ddd, 15,2/10,6/4,5), 5,66 (2-H; dd, 15,2/1,7), 5,22 (5-H, ddd, 11,2/4,2/2,0), 3,68 (8-H, d, 5,1), 3,01 (7-H, dd, 8,4/5,1), 2,52 (4-¾. dddd, 14,4/4,5/2,0/1,7), 2,41 (4-H„ ddd, -14,4/11,2/10,6), 1,68-1,74 (6-H, m), 1,14 (6-Me, d, 6.9); B 7,18 (5-H, d, 2,2), 7,04 (9-H, dd, 8,4/2,2), 6,84 (8-H, d, 8,4), 5,45 (NH, d, 7,8), 4,75 (2-H, ddd, 7,8/7,3/5,4), 3,87 (OMe, s), 3,09 (3-Hb, dd, -14,5/5,4), 3,05 (3H. , dd, -14,5/7,3); C 7,17 (NH, dd, 8,3, 3,9), 3,39 (3-Hb, dd, -13,5/8,3), 3,14 (3Η., dd, -13,5/3,9), 1,23 (2-Me, s), 1,16 (2-Me’, s); D 4,86 (2-H, dd, 10,2/3,4),
I, 77 (3-Hb, ddd, -14,0/10,2/4,9), 1,68-1,74 (4-H, m). 1,42 (3-Ha, ddd, -14,0/8,7/3,4), 0,92 (4-Me, d, 6,6), 0,88 (5-H3, d, 6,4). 13C NMR (CDC13) δ A 164,9 (1), 141,7 (3) , 138,3 (9), 128,8 (11/13), 128,0 (12), 126,7 (10/14), 124,7 (2), 76,6 (5), 45,8 (7),
43,9 (8), 43,9 (6), 36,6 (4), 16,0 (6-Me), B 170,2 (1), 154,1 (7), 130,9 (5), 129,4 (4) , 128,3 (9), 122,8 (6), 112,4 (8), 56,1 (7-OMe), 54,2 (2), 35,3 (3), C 177,9 (1),
46,5 (3), 42,7 (2), 22,9 (2-Me), 22,8 (2-Me’), D 170,4 (1), 71,3 (2), 39,4 (3), 24,7 (4), 22,7 (4-Me), 21,4 (5).
Příklad 14
Syntéza kryptofycinu 81
Sloučenina S
Sloučenina S je terc.butyldifenylsilyletherový (TBDMS) derivát sloučeniny F.
Sloučenina T
K 10 ml tetrahydrofuranového roztoku p-methoxybenzyltrifenylfosfoniumchloridu (1 mmol) se při -78°C přidá 400 μΐ roztoku butyllithia (1 mmol, 2,5M v hexanu). Reakční směs se míchá 30 minut. 2,64ml alikvot této směsi se při -78 “C přidá ke 3 ml tetrahydrofuranového roztoku aldehydu • · ··· ·
- 171 • · · · · · · • · · · · · · • ·· · 999 9 ·
9 9 9 9 9
9* 9 99 99
S (75,0 mg, 0,24 mmol). Po 30 minutách se chlazení přeruší, ale v míchání se pokračuje další 2 hodiny, kdy teplota směsi pomalu stoupne na 25 °C. Reakční směs se rozloží nasyceným roztokem chloridu amonného a odpaří se z ní tetrahydrofuran. Produkty se extrahují dvakrát hexanem. Spojené organické vrstvy se promyjí vodným roztokem chloridu sodného, vysuší a zkoncentrují. Zbytek se podrobí mžikové chromatografii na sloupci silikagelu za použití 3% ethylacetátu v hexanu, jako elučního činidla. Získá se 63 mg sloučeniny T a 40 mg směsi sloučeniny T a Z isomeru.
Sloučenina T má tyto vlastnosti:
[a]D +110,5° (CHC13, C 0,75); IRvmax 2956, 2857, 1724,
1608, 1511, 1428, 1250, 1173, 1111, 1037, 821, 703, 505 'cm-1; EIMS m/z (relativní intenzita v procentech) 497 (<l,M+-0Me), 471 (31,Μ+-Β^), 367 (56), 294 (31), 199 (75), 135 (100); EIMS s vysokým rozlišením 497,24770 (vypočteno pro C32H37O3Si, delta = +3,5 mmu, M+-0Me), 471,19859 (vypočteno pro C29H31O4Si, delta = 0,6 mmu, M+-Bu^).
NMR δ 7,71/7,68 (SiPh2, 2’-H, 6’-H/2”-H, 6”-H; d; 6,5), 7,45/7,43 (SiPh2, 4’-H/4”-H; t; 7,4), 7,39/7,38 (SiPh2, 3’-H, 5’-H/3-H, 5-H; dd; 7,4, 6,5), 7,24 (10-H, 14-H; d; 8,7), 6,85 (11-H, 13-H; d; 8,7), 6,79 (3-H; dt; 15,7, 7,5), 6,19 (8-H, d, 16,1), 6,00 (7H, dd, 16,1, 8,1), 5,66 (2-H, dt, 15,7, 1,3), 3,82 (5-H, m), 3,81 (-OCH3, S), 3,69 (CO2CH3, S), 2,41 (6-H, m), 2,36 (4-H, m), 2,30 (4-H, m), 1,12 (6-CH3, d, 7,0), 1,09 (CMe3, S). ,3C NMR δ 166,7 (1), 158,8 (12), 146,0 (3), 136,0 (SiPh2, 2’, 672”, 6”), 134,1/133,7 (SiPh2, 171”), 130,4 (9), 130,0 (8), 129,7/129,6 (SiPh2, 474”), 129,5 (7), 127,6/127,5 (3’, 57 3”, 5”), 127,1 (10, 14), 122,8 (2), 113,9 (11, 13), 76,4 (5), 55,2 (OCH3), 51,3 (CO2CH3), 42,1 (6), 37,1 (4), 27r0 (CMe,). 19,5 (CMe3), 16,2 (6-CH3).
Další sloučenina T se získá ze směsi sloučeniny T a Z-isomeru. 40 mg směsi E a Z isomerů se rozpustí ve 4 ml benzenového roztoku obsahujícího thiofenol (0,02M) a ACN (0,006M). Vzniklá směs se 5 hodin zahřívá ke zpětnému toku.
172
Po jejím zpracování a přečištění na krátkém sloupci silikagelu se získá 37,2 mg sloučeniny T.
Sloučenina U
K 6 ml acetonového roztoku sloučeniny T (76 mg,
0,15 mmol) se přidá 4,4 ml 1M hydroxidu lithného ve vodě. Vzniklý čirý roztok se míchá přes noc, načež se z něj odpaří aceton a vodný roztok se okyselí 1M kyselinou chlorovodíkovou. Produkt se extrahuje třikrát ethylacetátem. Organické vrstvy se vysuší a zkoncentruji. Zbytek se přečistí na sloupci silikagelu za použití směsi 20% ethylacetátu v hexanu s 0,5% kyselinou octovou. Získá se 62,2 mg kyseliny U (81 %). [a]D +120,8° (CHC13, c 3.1); IR 2960, 2858, 1695, 1650, 1511, 1427, 1250, 1111, 1036, 702 cm'1; Ή NMR ó 7,73/7,70 (SiPh2, 2’-H, 6’-H/2-H, 6-H, d, 7,0), 7,50 (SiPh2, 4’-H/4”-H, m), 7,44 (SiPh2, 3’-H, 5’-H/ 3”-H, 5”-H, m), 7,29 (10-H, 14-H, d, 8,6), 6,96 (3-H; dt; 15,6, 7,8), 6,89 (11-H, 13-H, d, 8,6), 6,22 (8-H, d, 16,0), 6,03 (7H, dd, 16,0, 7,9), 5,70(2-H, d, 15,6), 3,88 (5-H, m), 3,83 (OCH3, S), 2,43 (6-H, m), 2,40 (4-H, m), 1,17 (6-CH3, d, 6,9), 1,14 (CMe3, s); ,3C NMR, 171,7 (1), 158,8 (12),
148,8 (3), 135,0 (SiPh2, 2’, 672”, 6”), 133,9/133,7 (SiPh2, 171”), 130,3 (9), 130,0 (8), 129,7 (SiPh2, 474”), 129,4 (7), 127,6 (SiPh2, 3’. 573”, 5”), 127,1 (10, 14), 122,5 (2), 113,9 (11, 13), 76,2 (5), 55,2 (OCH3), 42,3 (6), 37,1 (4), 27,0 (CMfe), 19,5 (CMe3), 16,0 (6-CH3).
Sloučenina V
Sloučenina U (59 mg, 0,12 mmol), trifluoracetátová sůl sloučeniny I (57,2 mg, 0,12 mmol) a diisopropylethylamin (DIEA, 62 μΐ, 0,36 mmol) se rozpustí v 1,5 ml suchého dimethylformamidu. Ke vzniklému roztoku se přidá FDPP (55 mg, 0,14 mmol) v 0,6 ml dimethylformamidu. Reakční směs se 2 hodiny míchá, načež se k ní přidá ether. Organická vrstva se promyje postupně 1M kyselinou chlorovodíkovou,
173 nasyceným hydrogenuhličitaném sodným a vodným roztokem chloridu sodného a zkoncentruje. Zbytek se přečistí chromátografií na sloupci silikagelu za použití 8% ethylacetátu v hexanu, jako elučního činidla. Získá se 74,2 mg sloučeniny V (72 %); [a]D +53,8° (CHC13, c 1,6); IRvmax 3286, 2959, 1760, 1667, 1640, 1607, 1510, 1253, 1174, 1111, 1067, 1027, 703 cm-1; EIMS m/z (relativní intenzita (%) 798/799/800/801/802/803/804/805 (31/14/44/17/23/10/6/3, M+-Buť), 766 (40), 694/695/696/697/698/699/700/701 (70/31/100/38/58/19/14/5), 662 (67), 622 (71), 544 (70),
518 (83); EIMS s vysokým rozlišením 798,1443 (vypočteno pro C40H40Cl4NO6Si' delta -6/4mmu, M+-Buť). 1H NMR A 7,69/7,65 (SiPh2, 2’-H, 6’-H/2-H, 6-H; d; 6,5), 7,41 (SiPh2, 4’-H/4”-H, m), 7,35 (SiPh2, 3’-H, 5’-H/3”-H, 5-H, m), 7,24 (10-H, 14-H; d, 8,7), 6,85 (11-H, 13-H, d, 8,7), 6,65 (3-H, dt, 15,3, 7,5), 6,20 (8-H, d, 16,1), 6,03 (7-H, dd, 16,1, 8,0), 5,50(2-H, d, 15,3), 3,81 (OCH3i S), 3,77 (5-H, m), 2,39 (6-H, m), 2,34 (4-H, m), 2,29 (4-H’, m), 1,11 (6-Me, d, 6.9), 1,06 (CMe3, S); ' B 7,15 (5-H, d, 1,8), 7,00 (9-H, dd, 8,4, 1,8), 6,83 (8-H, d, 8,4), 5,65 (NH, d, 7,7), 5,01 (2-H, ddd, 7,7, 6,0, 5,5), 4,78/4,72 (CH2CC13, ABq, 11,9), 3,86 (OMe, S), 3,15 (3-H; dd, 6,1, -14,5), 3,08 (3-H’, dd, 5,8, -14,5). nC NMR ó A 165,1 (1), 158,8 (12), 142,5 (3), 136,0 (SiPh2, 2’, 672”, 6”), 134,2/133,6 (SiPh2, 171”), 130,4 (9), 129,9 (8), 129,7/129,6 (SiPh2, 474”), 129,5 (7), 127,6/127,5 (SiPh2, 3’, 573”, 5”), 127,1 (10, 14), 124,6 (2), 113,9 (11, 13), 76,4 (5), 55,2 (OMe), 42,1 (6), 37,2 (4), 27,0 (CMe?). 19,5 (CMe3), 16,6 (6-Me); B 170,0 (1), 154,2 (7), 131,0 (5), 128,4 (4/9), 122,5 (6), 112,1 (8), 94,2 (CC13), 74,7 (CH2CC13), 56,1 (OMe),
52,9 (2) 36,4 (3).
Sloučenina W
K roztoku sloučeniny V (55,8 mg, 0,065 mmol) v 5,7 ml acetonitrilu se při 0’C přidá 2,0 ml 49% kyseliny fluorovodíkové. Po 5 minutách se ledová lázeň odstaví a reakční směs se 17 hodin intenzivně míchá. Produkt se extrahuje etherem. Extrakt se promyje postupně nasyceným • · • · • · • · • ·
- 174 - ·* • o ·· • · · · • · ·♦ >♦ · · · • · · « · 9 · hydrogenuhličitaném sodným a vodným roztokem chloridu sodného a zkoncentruje. Zbytek se podrobí chromatografií s normálními fázemi na silikagelu za použití 25% ethylacetátu v hexanu, jako elučního činidla. Získá se 31,6 mg sloučeniny W (79 %); [a]D -3,7° (CHC13, c 1,3); IR
3286, 2961, 1756, 1668, 1634, 1607, 1510, 1251, 1175, 1066, 812 cm1. »H NMR δ A 7,27 (10-H, 14-H, d, 8,5), 6,93 (3-H, dt, 15,4, 7,6), 6,83 (11-H, 13-H, d, 8,5),
6,34 (8-H, d, 15,9), 5,88 (7-H, dd 15,9, 8,2), 5,86 (2-H, d, 15,4), 3,81 (OMe, S), 3,80 (5-H, m), 2,40 (6-H, m), 2,36 (4-H, m), 1,13 (6-Me, d, 6.8); Β ΊΑΊ (5-H, d, 1,9), 7,05 (9-H, dd, 8,5, 1,9), 6,83 (8-H, d, 8,5), 5,90 (NH, d, 7,7), 5,03 (2-H, ddd, 7,8,
5,9, 5,6), 4,79/4,72 (CH2CC13, ABq, -11,9), 3,86 (OCH3, S), 3,20 (3-H, dd, 6,0, -14,3), 3,09 (3-H’, dd, 5,9, -14,3). 13C NMR δ A 165,2 (1), 159,1 (12), 142,6 (3), 131,3 (9), 129,8 (7), 128,7 (8), 127,3 (10, 14), 125,0 (2), 114,0 (11, 13), 73,8 (5), 55,3 (OMe), 43,3 (6), 37,2 (4), 16,9 (6-Me) B 170,1 (1), 154,2 (7), 131,0 (5), 128,5 (4/9), 122,5 (6), 112,2 (8), 94,2 (CC13), 74,7 (CH2CC13), 56,1 (OMe), 53,0 (2), 36,5 (3).
(2S, 2 'R)-2-[3 '-(terc.Butoxykarbonyl)amino-2'-methylpropanoyloxy]-4-methylpentanová kyselina (AC)
Roztok methyl - (S) - (+) -3-hydroxy-2-methylpropanoátu (X) (10 g, 85 mmol) v 300 ml přibližně 9M amoniaku v methanolu se v uzavřené skleněné baňce 168 hodin zahřívá na 50eC. Reakční směs se promyje dusíkem, čímž se odstraní přebytek amoniaku, a poté za sníženého tlaku odpaří do sucha. Zbytek se trituruje s etherem. Získá se (S)-3hydroxy-2-methylpropanamid (5,7 g, výtěžek 66 %) ve formě bílé pevné látky o teplotě tání 85,5 až 87,5°C; [a]D +28,7° (c = 3,5, MeOH); EIMS m/z (rel. intenzita) 88 (19, M-Me),
8,5 (35), 73 (69); HREIMS m/z 88,0397 (C3H6NO2, delta +0,2 mmu); IR Vmax 3384, 2960, 1671, 1473 cm-1; l-H NMR: δ 5,83 (NH, brs), 5,42 (NH, brs), 3,73 (3-H2, m), 2,55 (2-H, m), 1,19 (2-Me, d, 7,2); 13C NMR: δ 180,7 (1), 65,4 (3), 44,0 (2), 14,5 (2-Me).
·· ·9·»
- 175
C 46,59, H 8,79 C 46,45, H 8,83
Analýza pro C4HgNO2: vypočteno:
nalezeno:
Suspenze (S)-3-hydroxy-2-methylpropanamidu (2,1 g, 20 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (20 ml) se pomalu přidá k 1M boran-tetrahydrofuranovému komplexu (61 mmol, 61 ml) chlazenému na 0'C. Reakční směs se 6 hodin zahřívá ke zpětnému roku, ochladí na 0°C, opatrně rozloží koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou (10 ml) a zkoncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se nasytí hydroxidem sodným (20 g) a extrahuje chloroformem (15 ml x 4). Spojené extrakty se vysuší síranem hořečnatým, přefiltrují a z filtrátu se odstraní rozpouštědlo. Zbytek se podrobí vakuové destilaci. Získá se 1,4 g (výtěžek 77 %) (R)-3-amino-2-methylpropan1-olu (Y) ve formě bezbarvého oleje o teplotě varu 110 až 112°C za tlaku 5,3 kPa; [a]D +8,9° (c 22,6, MeOH); IR vmax 3358, 1873, 1598, 1466 cm1; XH NMR: δ 5,18 (NH2, brs), 3,8 (1-H2, m), 2,95 (3-H, m), 2,68 (3-H, m), 1,81 (2-H, m), 0,82 (2-Me, d, 7,2); 13C NMR: δ 66,9 (1), 46,4 (3), 37,1 (2),
14,4 (2-Me).
K roztoku aminoalkoholu Y (2,0 g, 22 mmol) ve 39 ml 10% roztoku triethylaminu v methanolu se přidá diterc.butyldikarbonát (5,4 g, 25 mmol). Reakční směs se 30 minut míchá při 25°C, načež se z ní odstraní rozpouštědlo. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu a dichlormethanový roztok se promyje dvakrát 1M hydrogensíranem draselným (pH 2) a jednou nasyceným roztokem chloridu sodného a vysuší síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odapří za sníženého tlaku. Získá se 4,3 g (výtěžek 100 %) (R)-3-(terč.butoxykarbonyl)amino-2methylpropan-l-olu (o čistotě nad 95 % podle analýzy NMR) ve formě viskosního oleje, kterého se použije bez dalšího čištění v následujícím stupni;
IR vmax 3356· 1976, 1686, 1523, 1456 cm1; 1H NMR: δ 4,82 (NH, brs), 3,54 (1-H, dd, -11,4/4,2), 3,31 (1-H/3-H, m),
176
A A A A A AA A A A AAAA A A A A • A A A A
A A A A A A « · AAA A
A A A A A A A A
• A AAA AA • A A A A
3,25 (3-H, dd, -14,1/6,6), 1,77 (2-H, m) , 1,44 (CMe3, s), 0,87 (2-Me, d, 6,9).
K roztoku alkoholu, (R)-3-(terč.butoxykarbonyl)amino-2-methylpropan-l-olu (2,2 g, 12 mmol) a jodistanu sodného (7,5 g, 35 mmol) v tetrachlormethanu (25 ml), acetonitrilu (25 ml) a vodě (38 ml) se přidá hydrát chloridu ruthenitého (51 mg, 0,25 mmol). Výsledná směs se míchá 1 hodinu při 25°C, zředí dichlormethanem (100 ml) a přefiltruje přes celit. Filtrát se 2M roztokem uhličitanu draselného zalkalizuje na pH 9. Vodná vrstva se promyje etherem. Vodná vrstva se při 0°C okyselí 1M hydrogensíranem draselným na pH = 2 a extrahuje dichlormethanem (20 ml x 3). Spojené extrakty se promyjí nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým a za sníženého tlaku se z nich odstraní rozpouštědlo. Získají se 2 g (výtěžek 85 %) (R)-3-(terč.butoxykarbonyl)amino-2-methylpropanové kyseliny (Z) ve formě lepivé pevné látky. Čistá sloučenina Z (1,75 g, výtěžek 74 %) má po překrystalování z etheru teplotu tání 69,5 až 70,5°C, [α]θ -18,4° (c 2,
MeOH); EIMS m/z (rel. intenzita) 147 (60, M+-Me2C=CH2), 130 (12), 74 (29), 57 (100); HREIMS m/z 147,0517 (C5HgNO4, delta +1,4 mmu); IR Vmax 3322-2400, 2797, 1711, 1654, 1413 cm1;
1H NMR hlavního konforraeru: & 5,00 (NH, brs), 3,32 (3-H, m), 3,24 (3-H', m), 2,71 (2-H, m), 1,44 (CMe3, s), 1,20 (2-Me, d); 13C NMR hlavního/vedlejšího konformeru (v poměru 2 :
1): δ 170,7/179,5 (l), 156,0/157,7 (BOC CO), 79,5/81,0 (CMe3), 42,7/44,0 (3), 39,9/40,2 (2), 28,3/28,3 (CMe3), 14,6/14,6 (2-Me).
Analýza pro CgH17NO4: vypočteno: C 53,18, H 8,43 nalezeno: C 53,04, H 8,62
K roztoku 2,66 g 2-hydroxy-4-methylpentanové kyseliny (20 mmol) a 1,74 g hydrogenuhličitanu sodného (20 mmol) ve 30 ml vody se při 0°C přidá 30 ml dichlormethano·«·· *· 99
9 9 9 9
9 9 99 · 999 9 9
9 ·
9 9 9 9 vého roztoku 6,44 g tetrabutylamoniumchloridu (20 mmol) a 1,74 ml allylbromidu (20 mmol). Reakční směs se 24 hodin intenzivně míchá, načež se z ní odpaří dichlormethan. Ke zbytku se přidá asi 50 ml vody. Vodná vrstva se extrahuje čtyřikrát diethyletherem. Etherový roztok se vysuší bezvodým síranem sodným a poté odpaří. Zbytek se nechá projít krátkým sloupcem silikagelu. Získá se 3,21 g allyl-(2S)-2-hydroxy4-methylpentanoátu (AA) (výtěžek 93 %) ve formě bezbarvého oleje. [α]θ -8,4° (c 1,1, CHC13); IR vfflax 3464, 2957, 1732, 1203, 1140, 1087 cm-'; Ή NMR δ 5,92 (allyl 2-H; m), 5,34 (allyl 3-Hz; dd, 17,4/1,1), 5,28 (allyl 3-H£; dd, 10,5/1,1), 4.67 (allyl 1-H2; d, 5,7), 4,23 (2-H; br s), 2,64 (OH; br s), 1,89 (4-H; m), 1,57 (3-H2; m), 0,96 (5-H3; d, 6,5), 0,95 (4-Me; d, 6,7); 13C NMR δ 175,3 (1), 131,4 (allyl C-2), 118,6 (3), 68,9 (2), 65,7 (allyl C-l), 43,2 (3), 24,1 (4), 23,0 (5), 21,3 (4-Me).
K roztoku 1,74 g sloučeniny Z (8,55 mmol), 1,34 g sloučeniny AA (8,0 mmol) a 64 mg DMAP ve 12 ml suchého dichlormethanu se při 0°C přikape 8 ml roztoku dicyklohexylkarbodiimidu (2,47 g, 12 mmol) v dichlormethanu.
Vzniklý čirý roztok se 30 minut míchá při 0°C a poté 3 hodiny při 23°C. Ze směsi se filtrací oddělí bílá sraženina a z filtrátu se odpaří rozpouštědlo. Zbytek se rozpustí v diethyletheru. Etherový roztok se promyje postupně chladnou 0,5M kyselinou chlorovodíkovou, hydrogenuhličitanem sodným a chloridem sodným, vysuší síranem sodným a odpaří. Produkt se přečistí mžikovou chromatografií na silikagelu. Získá se 2,62 g (výtěžek 92 %) čistého allyl(2S,2’R)-2-[3'-(terč.butoxykarbonyl)amino-2'-methylpropanoyloxy]-4-methylpentanoátu (AB) ve formě bezbarvého oleje, [a]D -51,3° (c 3,41, CHC13); EIMS (rel.intenzita)
301 (5,2), 284 (4,0), 258 (1,5), 228 (43,5), 170 (41,8), 130 *· ··· ♦
- 178
• * • · * • « « • · · ·· · »· *· • t · · t t r* ··· < * • · · « · · * (74,5), 112 (100); HREIMS m/z 301,1532 (C14H23NO6, A-0,7mmu, M-Me2C=CH2), 284,1496 (ChH22NO5, A+0,2mmu); IR 3395, 2962, 1747, 1715, 1515, 1251, 1175, 1083 cm'1. Ή NMR C 5 5,17 (NH; br s), 3,42 (3-H; m), 3,22(3-H’; m), 2,78 (2-H, m), 1,43 (CMe3; br s), 1,21 (2-Me; d, 7,1); D 5 5,90 (allyl 2-H; m), 5,33 (allyl 3H2; d, 16,3), 5,27 (allyl 3-Hř; d, 10,3), 5,09 (2-H; dd, 9,7/3,7), 4,63 (allyl 1-H2; m), 1,80 (3-H2; m), 1,64 (4-H; m), 0,96 (5-H3; d, 6,5), 0,94 (4-Me; d, 7,3). nC NMR C5 174,7 (1), 156,0 (BOC CO), 79,2 (CMe,), 43,1 (3), 40,3 (2), 28,3 (CMeJ, 14,5 (2Me); D δ 170,4 (1), 131,4 (allyl C-2), 119,0 (allyl C-3), 70,9 (2), 65,9 (allyl C-l), 39,6 (3), 24,7 (4), 23,0 (5), 21,5 (4-Me).
K 10 ml roztoku 282 mg (0,8 mmol) sloučeniny AB a 91 mg (0,08 mmol) tetrakis(trifenylfosfin)palladia v suchém tetrahydrofuranu se pomalu přidá 688 μΐ (8 mmol) suchého morfolinu. Reakční směs se 40 minut míchá, odpaří se z ní rozpouštědlo a ke zbytku se přidá dichlormethan (100 ml). Dichlormethanový roztok se promyje postupně 2M kyselinou chlorovodíkovou a vodou. Organická vrstva se přefiltruje a filtrát se extrahuje dvakrát nasyceným hydrogenuhličitaném sodným. Po promytí dichlormethanem se vodná vrstva nejprve při 0°C okyselí chladným hydrogensÍránem draselným a poté extrahuje třikrát etherem. Etherový extrakt se vysuší a odpaří. Získá se 250 mg (2S,2'R)-2-[3'-(terc.butoxykarbonyl)amino-2'- methylpropanoyloxy]-4-methylpentanové kyseliny (AC) (výtěžek 100 %) ve formě voskovité pevné látky, [a]D -47,9° (c 4,7, CHC13); EIMS m/z (rel. intenzita) 261 (12), 244 (18), 217 (28), 198 (17), 188 (100), 160 (61); HREIMS m/z 261,1221 (cnHi9NO6/ delta -0,8 mmu, M-Me2C=CH2), 244,1221 (Ci;lH18NO5, delta -3,6 mmu); IR vmax 3376, 2960, 1738, 1518, 1174, 786 cm-1. 1H NMR (CDC13 + D2O) C 8 3,49 (H-3, dd, -13,8/3,5), 3,12 (3-H, dd, -13,8/8,7), 2,68 (2-H, m), 1,43 (CMe3, brs), 1,21 (2-Me, d, 7,1); D 8 5,12 (2-H,
- 179
·· Φ··· • · • · · • φ φ φ · · φφ φ φφ φφ φ * · · φ φ φφ φφ φ φ φ • φ · φφ φφ dd, 9,6/3,5), 1,90 - 1,68 (3Η/4-Η, m), 0,97 (5-Η, d, 6,1), 0,94 (4-Me, d, 6,0). 13C NMR: C 8 174,6 nebo 174,8 (1),
156.1 (BOCCO), 79,5 (CMe3), 43,0 (3), 40,4 (2), 28,3 (CMe3), 14,5 (2-Me); D 8 174,6 nebo 174,8 (1), 70,5 (2),
39,5 (3), 24,7 (4), 23,0 (5), 21,4 (4-Me).
Sloučenina AD
Alkohol W (34,8 mg, 0,056 mmol), sloučenina AC (26,8 mg, 0,085 mmol) a DMAP (1,74 mg) se rozpustí v 283 μΐ dichlormethanu. Ke vzniklé směsi se přidá 666 μΐ dichlormethanového roztoku dicyklohexylkarbodiimidu (17,5 mg,
0,085 mmol). Reakční směs se přes noc míchá a v proudu dusíku se z ní odpaří rozpouštědlo. Ke zbytku se přidá ether a vyloučená bílá sraženina se odfiltruje. Filtrát se promyje postupně 0,5M kyselinou chlorovodíkovou, nasyceným hydrogenuhličitaném sodným a vodným roztokem chloridu sodného a zkoncentruje. Zbytek se chromátografuje na silikagelu za použití 25 % ethylacetátu v hexanu, jako elučního činidla, čímž se získá 46 mg sloučeniny AD (90 %); [a]D -11,8’ (CHClj, c 2.0); IR ^3369, 2961, 1737, 1511, 1252, 1174, 1066, 813, 756 cm·’. Ή NMR (500MHz) δ A 7,25 (10-H/14-H, dt, 8,5, 2,1), 6,84 (11-H/13-H, dt, 8,5, 2,1), 6,76 (3-H, ddd, 15,5, 6,5, 6,4), 6,34 (8-H, d, 15,6), 5,88 (2-H, bd, 15,5), 5,86 (7-H, dd 15,6, 8,7), 5,04 (5, m), 3,80 (OMe, s), 2,56 (6-H, m), 2,52 (4-H, m), 1,10 (6-Me, d, 6,8); B 7,19 (5-H, d, 2,1), 7,05 (9-H, dd, 8,5, 2,1), 6,83 (8-H, d, 8,5), 6,55 (NH, bd, 7,3), 5,04 (2-H, m), 4,78/4,70 (CH2CC13, ABq, -11,8), 3,85 (OCH3 S), 3,19 (3-H, dd, 6,3, -13,8), 3,08 (3-H’, dd, 6,8, -13,8); C 5,14 (NH, bt, 6,3), 3,32 (3-H, m), 3,20 (3-H’, m), 2,73 (2-H, m), 1,42 (CMe3, s), 1,18 (2-Me, d, 7,0);
D 4,93 (2-H, dd, 10,0, 3,7), 1,67 (3-H/4-H, m), 1,55 (3-H’, m), 0,86 (5-H, d, 6,5), 0,83 (4-Me-H, d, 6,5). nC NMR 5 A 165,4 (1), 159,1 (12), 139,3 (3), 131,1 (9),
129,7 (7), 128,5 (8), 127,3 (10, 14), 125,4 (2), 114,0 (11, 13), 76,5 (5), 55,3 (OMe),
41.1 (6). 33,4 (4), 16,7 (6-Me); B 170,5 (1), 154,1 (7), 131,2 (5), 128,9 (4), 128,5 (9), 122,4 (6)f 112,1 (8), 94,3 (CC13), 74,6 (CH2CC13), 56,1 (OMe), 53,2 (2), 36,6 (3);
C 175,2 (1), 156,0 (BOCCO), 79,3 (CMe3), 43,1 (3), 40,4 (2), 28,3 (CMe,), 14,4 (2-Me); D 170,1 (1), 71,4 (2), 39,5 (3), 24,7 (4), 22,9 (5), 21,4 (4-Me).
- 180 ·· · ·· ···· ·» »· ·»·« »· · ···» ··· ··♦ «·»♦ ····*«« · ···« ♦ **« ··· . .
*« ··· ·· * *· ··
Kryptofycin 81
Sloučenina AD (46 mg, 0,05 mmol) se smísí s aktivovaným zinkovým prachem (178 mg, v přebytku) v 1,3 ml kyseliny octové. Reakční směs se na 45 minut podrobí ultrasonikaci, míchá dalších 90 minut a přidá se k ní asi 30 ml dichlormethanu. Pevná látka se odfiltruje a filtrát se odpaří za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v 1,1 ml trifluoroctové kyseliny. Výsledný roztok se 1 hodinu míchá a poté se z něj za sníženého tlaku odpaří kyselina trifluoroctová. Ke zbytku se přidá voda. Lyofilizací se získá volná aminokyselina. Tato aminokyselina se rozpustí v 4,6 ml dimethylformamidu. K dimethylformamidovému roztoku se postupně přidá 26 μΐ DIEA a FDPP (30 mg, 0,075 mmol, ve 2,2 ml dimethylformamidu). Vzniklá směs se 6 hodin míchá, načež se z ní odpaří rozpouštědlo. Ke zbytku se přidá ethylacetát. Ethylacetátový roztok se promyje nejprve 0,5M kyselinou chlorovodíkovou a poté vodným chloridem sodným, načež se z něj odpaří rozpouštědlo. Zbytek se přečistí chromatografii na silikagelu za použití etheru, jako elučního činidla.
Získá se 20,5 mg kryptofycinu 81 (61 %); [a]D +34,9° (CHC13, c 0,45); IR 3409, 3270, 2958, 1746, 1725, 1672, 1511, 1251, 1175, 1066, 1025, 972, 816 cm1. Ή NMR (500 MHz) ó A 7,26 (10-H/14-H; dt, 8,6, 2,5), 6,84(11H/13-H, dt, 8,6, 2,5), 6,68 (3-H, ddd, 15,4, 9,9, 5,6), 6,35 (8-H, d, 15,9), 5,86 (7-H, dd, 15,9, 8,8), 5,77(2-H, dd, 15,4, 0,9), 4,99 (5-H, ddd, 11,2, 6,0, 1,7), 3,80 (OCH3, S), 2,53 (4-H/6-H, m), 2,37 (4-H’, ddd, 11,2, 9,9,-14,6), 1,12 (6-Me, d, 6,9); B 7,22 (5-H, d, 2,2), 7,08 (9-H, dd, 8,4, 2,4), 6,84 (8-H, d, 8,4), 5,64 (NH, d, 8,6), 4,81 (2-H, m), 3,86 (OMe, S), 3,13 (3-H; dd, 5,6, -14,5), 3,05 (3-H’, dd, 7,1, -14,5); C 6,93 (NH, bdd, 5,8, 5,6), 3,50 (3-H, ddd, 5,2, 3,9, -13,5), 3,28 (3-H’, ddd, 6,9, 6,7, 13,5), 2,71 (2-H, m), 1,.22 (2-Me; d, 7,3); D 4,84 (2-H, dd, 10,1, 3,4), 1,67 (3-H/ 4-H; m), 1,38 (3-H’, m), 0,78 (5-H, d, 6,5), 0,75 (4-Me-H, d, 6,5). 13C NMR (125 MHz) & A 165,4 (1), 159,2 (12), 141,4 (3), 131,1 (9), 129,6 (7), 128,4 (8), 127,3 (10, 14), 125,2 (2), 114,1 (11, 13), 77,5 (5), 55,3 (OMe), 42,2 (6), 36,4 (4), 17,4 (6Me); B 171,0 (1), 154,0 (7), 131,2 (5), 129,9 (4), 128,4 (9), 122,5 (6), 112,1 (8),
56,2 (OMe), 53,5 (2), 35,1 (3); C 175,6 (1), 41,2 (3), 38,3 (2), 14,0 (2-Me); D
170,9 (1), 71,6 (2), 39,5 (3), 24,5 (4), 22,7 (5), 21,3 (4-Me).
181
• · • ·· ···♦ ·♦ • ·
• • • • • · •
• • • • · • • ♦ »· · ♦
• • • ··· • • · ·· · • ♦ ♦ ♦ • 9
Příklad 15
Syntéza kryptofycinu 82
Sloučenina AE
Sloučenina AE je terč.butyldifenylsilyletherový (TBDMS) derivát sloučeniny E.
Sloučenina AF
Způsobem popsaným výše pro hydrolýzu sloučeniny T na sloučeninu U se sloučenina AE (150 mg) hydrolyzuje na sloučeninu AF (125 mg, výtěžek 87 %). 1H NMR: δ 7,69/7,64 (SÍPh2, 2'-H, 6’-H/2-H, 6-H, d, 6,3), 7,41 (SÍPh2, 4 '-H/ 4-H, m), 7,39 (SlPh2, 3'-H, 4-Me-H/3-H, 5-H, m), 6,86 (3-H, dt, 15,5, 7,5), 5,62 (2-H, d, 15,5), 5,30 (7-H/8-H, m), 3,72 (5-H, m), 2,28 (4-H, m), 2,20 (6-H, m), 1,52 (9-H, bd, 7,7), 1,08 (CMe3, s), 1,00 (6-CH3, d, 6,7).
Sloučenina AG
Za použití způsobu popsaného výše pro přípravu sloučeniny V ze sloučeniny U se ze sloučeniny AF (76 mg,
0,18 mmol) získá sloučenina AG (96 mg) ve výtěžku 70 %. ^H NMR δ : A 7,67 (SiPh2, 2’-H, 6’-H/2-H, 6-H; m), 7,46-7,31 (SiPh2, 3’-H, 4*-H, 4-Me-H/3”-H, 4-H, 5”-H, m), 6,62 (3-H, dt, 15,4, 7,6), 5,51/5,48 (2-H, d, 15,4),
5,33 (7/8, m), 3,70 (5-H, m), 2,22 (4-H/6-H, m), 1,61 (9, bd, 7,4), 1,06 (CMe3, S),
0,98 (6-Me, d, 6,8); B 7,16 (5-H, d, 1,7), 7,00 (9-H, dd, 8,5, 1,7), 6,83/6,82 (8-H, d, 8,5), 5,68/5,66 (NH, d, 7,3), 5,03 (2-H, m), 4,78/4,73 (CH2CC13, AJBq, -11,9), 3,87 (OMe, S), 3,16 (3-H; m), 3,09 (3-H’, m). nC NMR δ A 165,1 (1), 143,0/142,9 (3), 136,0 (SiPh2, 2’, 672”, 6”), 134,3/133,7 (SiPh2, 171”), 132,5 (7), 129,6 (8), 129,6 (SiPh2, 474”), 127,5 (SiPh2, 3’, 4-Me/3”, 5”), 125,7/125,4 (2), 76,3 (5), 41,6 (6), 36,9/36,8 (4), 27,0 (CMe,), 19,5 (CMe3), 18,1 (9), 16,4/16,3 (6-Me); B 170,0 (1),
154,2 (7), 131,0 (5), 128,4 (4/9), 122,5 (6), 112,1 (8), 94,2 (CC13), 74,7 (CH2CC13),
56,1 (OMe), 52,9 (2) 36,4 (3).
182
99 • 99 99 99
• • 99 • 9 9 9 9 9 9
99
• • • 9 · ♦ • 9 99 9 9 9
• • • • • 9 9 9 9
99 999 • 9 9 99 • 9
Sloučenina AH
Za použití způsobu popsaného výše pro přípravu sloučeniny W ze sloučeniny V se ze sloučeniny AG (84 mg,
0,11 mmol) získá sloučenina AH (53,4 mg) ve výtěžku 92 %. ^H NMR δ A 6,83 (3-H, dt, 15,.4, 7,5), 5,80 (2-H, d, 15,4), 5,51 (8-H, m), 5,33 (7-H, dd, 15,.2, 8,3), 3,50 (5-H, m), 2,42 (4-H, m), 2,30 (4-H’, m), 2,28 (6, m), 1,68 (9, d,
7.3), 0,99 (6-Me, d, 6,7); B 7,20 (5-H, d, 1,8), 7,03 (9-H, dd, 8,4, 1,8), 6,80 (8-H, d, 8,4), 6,10 (NH, bd, 7,0), 5,07 (2-H, m), 4,80/4,70 (CH2CC13, ABq, -11,5), 3,88 (OCHj, S), 3,20 (3-H, dd, 5,5, -14,3), 3,10 (3-H’, dd, 7,2, -14,3). nC NMR δ A
165,4 (1), 142,8 (3), 132,2 (7), 127,7 (8), 125,7 (2), 73,6 (5), 42,8 (6), 36,9 (4), 18,1 (9), 16,8 (6-Me); B 170,2 (1), 154,2 (7), 131,0 (5), 128,5 (4/9), 122,5 (6), 112,.2 (8), 94,2 (CC13), 74,7 (CH2CC13), 56,1 (OMe), 53,1 (2), 36,5 (3).
Kryptofycin 82
Za použití postupu popsaného výše pro přípravu sloučeniny AD se z 27,4 mg (0,052 mmol) sloučeniny AH vyrobí sloučenina AI (36,8 mg, výtěžek 86 %).
Postupen popsaným výše pro cyklizaci sloučeniny AD na kryptofycin 81 se cyklizuje sloučenina AI (68 mg,
0,083 mmol) za vzniku kryptofycinu 82 (28,5 mg); [α]θ + 19,9° (CHC13) c 2,0). Ή NMR (500 MHz) & A 6,65 (3-H, ddd, 15,4, 9,5, 5,6), 5,76 (2-H, d, 15,4), 5,48 (8-H, dq, 15?3, 6,5), 5,27 (7-H, ddd, 15,3, 8,4, 1,5), 4,89 (5H, ddd, 10,7, 5,6, 1,5), 2,38 (4-H, m), 2,33 (4-H76-H, m), 1,66 (9-H, dd, 6,4, 1,5),
I, 00 (6-Me, d, 6.9); · B 7,22 (5-H, d, 2,0), 7,08 (9-H, dd, 8,4, 2,0), 6,83 (8-H, d,
8.4) , 5,74 (NH, m), 4,81 (2-H, ddd, 8,5, 7,3, 5,6), 3,87 (OMe, S), 3,13 (3-H; dd, 5,6, 14.4) , 3,04 (3-H’, dd, 7,3, -14,4); C, 6,93 (NH, bdd, 6,7, 4,7), 3,52 (3-H, ddd,
4,7, 3,9, -13,5), 3,27 (3-H’, ddd, 6,8, 6,7, -13,5), 2,72 (2-H, dqd, 7,1, 6,8, 3,9), 1,20 (2-Me; d, 7.1); D 4,88 (2-H, dd, 9,6, 3,4), 1,75 (3-H/ 4-H; m), 1,47 (3-H’, m),
0,94 (5-H, d, 6,2), 0,91 (4-Me-H, d, 6,4). nC NMR (125 MHz) δ A 165,5 (1),
141,7 (3), 131,4 (7), 127,1 (8), 125,2 (2), 77,7 (5), 41,5 (6), 36,2 (4), 17,9 (9), 17,2 (6Me); B 171,0 (1), 153,9 (7), 131,1 (5), 129,9 (4), 128,4 (9), 122,4 (6), 112,2 (8),
56,1 (OMe), 53,5 (2), 35,1 (3); C 175,5 (1), 41,3 (3), 38,2 (2), 14,0 (2-Me); D
170,9 (1), 71,5 (2), 39,6 (3), 24,6 (4), 23,0 (5), 21,5 (4-Me).
183
999
9
V
9 9 9
9 99
Příklad 16
Syntéza kyptofycinu 90 a kryptofycinu 91 Obecný postup epoxidace kryptofycinů styrenového typu
K roztoku kryptofycinu (asi 10 mg/ml) v dichlormethanu se přidají tři ekvivalenty m-chlorperoxobenzoové kyseliny v dichlormethanu (asi 10 mg/ml). Reakční roztok se míchá při teplotě místnosti až do spotřebování všech výchozích látek, nechá projít krátkým sloupcem silikagelu za použití dichlormethanu a poté směsi dichlormethanu a diethyletheru v poměru 1:4, jako elučního činidla. Získá se směs dvou epoxidů, která se rozdělí vysokotlakou kapalinovou chromatografií na C-18 za použití směsi acetonitrilu a vody v poměru 7:3.
Za použití tohoto postupu se kryptofycin 82 (5 mg) převede na kryptofycin 90 (2,2 mg) a kryptofycin 91 (1,2 mg).
Údaje ze spektrální analýzy kryptofycinu 90
Ή NMR (500 MHz) 6 A 6,67 (3-H, ddd, 15,4, 9,5, 5,8), 5,79 (2-H, d,
0,95 (5-H, d, 6,5), 0,91 (4-Me-H, d, 6,7). 13C NMR (125 MHz) δ A 165,4 (1),
141.1 (3), 125,3 (2), 76,3 (5), 60,0 (7), 56,8 (8), 40,2 (6), 36,5 (4), 17,5 (9), 13,3 (6Me); B 171,0 (1), 154,0 (7), 131,1 (5), 129,9 (4), 128,4 (9), 122,5 (6), 112,3 (8),
56.1 (OMe), 53,6 (2), 35,1 (3); C 175,5 (1), 41,2 (3). 38,3 (2), 14,1 (2-Me); D
170,7 (1), 71,4 (2), 39,6 (3), 24,7 (4), 23,0 (5), 21,5 (4-Me)
- 184 • A • A • A • A • A ··
AAAA
A A A A
A A AA
AAAA A
A A ·
A A A A
Údaje ze spektrální analýzy kryptofycinů 91
Ή NMR δ A 6,68 (3-H, ddd, 15,4, 9,8, 5,4), 5,78 (2-H, d, 15,4), 5,09 (5-H, ddd, 11,1, 3,7, 2,0), 2,75 (8-H, m), 2,62 (7-H, dd, 9,5, 2,1), 2,48 (4-H, m), 1,78 (6-H, m), 1,32 (9-H, d, 5,2), 0,99 (6-Me, d, 7,1); B 7,23 (5-H, d, 1,9), 7,09 (9-H, dd,
8,4, 1,9), 6,85 (8-H, d, 8,4), 5,68 (NH, d, 8,4), 4,82 (2-H, m), 3,88 (OMe, S), 3,15 (3H; dd, 5,4, -14,4), 3,04 (3-H’, dd, 7,2, -14,4); C, 6,95 (NH, bdd, 6,0, 4,6), 3,53(3H, ddd, 5,0, 4,0, -13,4), 3,29 (3-H*, ddd, 6,9, 6,7, -13,4), 2,75 (2-H, m), 1,23 (2-Me; d, 6,7); D 4,92 (2-H, dd, 9,8, 3,4), 1,77 (3-H, m), 1,58 (4-H; m), 0,96 (5-H, d, 7,3), 0,92 (4-Me-H, d, 6,7).
Příklad 17
Syntéza kryptofycinů 97
K roztokou cyklického depsipeptidu, kryptofycinů 53, (9 mg, 0,013 mmol) v dimethylsulfoxidu (1 ml) se přidá azid sodný (40 mg) a koncentrovaná kyselina sírová (4 μΐ). Reakční směs se 2 dny míchá při 75 až 85°C, poté ochladí na teplotu místnosti a zředí diethyletherem (15 ml). Organická vrstva se promyje vodným chloridem sodným (2 x 20 ml) a vodou (20 ml). Etherový extrakt se vysuší síranem hořečnatým a za sníženého tlaku se z něj odstraní rozpouštědlo. Získá se amorfní bezbarvá pevná látka, v níž převládá azidoalkohol, kryptofycin 86. Tato látka se přečistí chromatografií s obrácenými fázemi (ODS, 10 μπι, 250 x 10 mm), přičemž eluce se provádí 25% vodou a acetonitrilu rychlostí 3 ml.min”1. Získá se čistý azidoalkohol, kryptofycin 86, ve formě amorfní bezbarvé pevné látky (7,4 mg, 77 %).
Údaje ze spektrální analýzy kryptofycinů 86 [<x]D -22,0 (c = 3,0, CHC13), MS (El) m/z 482/484 (nejvyšší zjištěný ion, M+ -299, 8/3), 625/627 (14/5), 259 (7),
ΦΦ · ·
- 185 - ··
195/197 (100/34), 184 (14), 155/157 (82/70), 91 (23), 77 (22); HRMS m/z 482,1791, C23H31N2O7 35Cl (delta 2,9 mmu); MS (FAB) m/z (matrice magie bullet) 712/714 (M+ + H, 79/36), 686/688 (31/12), 232 (7E), 184 (100). 1H NMR (CDClj) δ ' A: 7,37-7,42 (10/11/12/13/14-H, bm, W,n«20). 6,77 (3-H, ddd, 15,2, 10,6, 4,4), 5,77 (2-H, dd, 15,2, 1,3), 5,45 (5-H, ddd, 11,0, 4,2, 2,0), 4,55 (8-H, d,
5.7) , 3,75 (7-H, dd, 7,3, 5,7), 2,55 (4-H„, dddd, 14,5, 4,4, 2,0, 1,3), 2,43 (4-H., ddd, 14,5. 11,0, 10,6), 2,34 (7-OH, s), 1,80 (6-H, ddq, 7,3, 4,2, 7,0), 0,99 (6-Me, d, 7,0),
B: 7,20 (5-H, d, 2,2), 7,06 (9-H, dd, 8,4, 2,2), 6,84 (8-H, d, 8,4), 5,76 (NH, d,
7.7) , 4,74 (2-H, ddd, 7,7, 7,5, 5,5), 3,87 (OCH3, s), 3,10 (3-H„, dd, 14,5, 5,5), 3,06 (3H., dd, 14,5, 7,5), C: 7,22 (NH, dd, 8,4, 3,7), 3,40 (3-Hb, dd, 13,6, 8,4), 3,14 (3H. , dd, 13,6, 3,7), 1,23 (2-CH3, s), 1,16 (2-CH/, s), D: 4,85 (2-H, dd, 9,5, 5,1),
I, 71 (3-Hb, ddd, 13,6, 9,5, 5,9), 1,59 (4-H, bm, Win«25), 1,50 (3-H., ddd, 13,6, 7,9,
5,1), 0,89 (4-CH3, d, 6,6), 0,85 (5-H3, d, 6,6); ,3C NMR (CDC13) δ A: 165,3 (1), 143,0 (3), 135,1 (9), 129,1 (12), 128,9 (11/13), 128,6 (10/14), 124,3 (2), 75,1 (7), 74,6 (5), 67,8 (8), 39,3 (6), 34,7 (4), 11,9 (6-Me), B: 170,5 (1), 154,1 (7), 130,9 (5), 129r7 (4), 128,3 (9), 122,5 (6), 112,4 (8), 56,1 (7-OMe), 54,3 (2), 35,3 (3), C:
177,8 (1), 46,5 (3), 42,8 (2), 22,9 (2-Me), 22,7 (2-Me’), D: 170,2 (1), 71,4 (2),
39,4 (3), 24,7 (4), 22,6 (4-Me), 21,8 (5).
Kryptofycin 97
K roztoku cyklického depsipeptidu, kryptofycinů 86 (5,5 mg, 0,008 mmol), ve směsi diethyletheru a dichlormethanu v poměru 3 : 1 (0,5 ml) se přidá diethyletherový roztok (0,5 ml) trifenylfosfinu (3 mg, 0,011 mmol). Reakční směs se tři dny míchá při teplotě místnosti, načež se z ní za sníženého tlaku odstraní rozpouštědlo. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu a přečistí vysokotlakou kapalinovou chromatograf i i na sloupci CN (10 μιη, 250 x 10 mm), přičemž eluce se provádí 80% ethylacetátem v dichlormethanu rychlostí 3 ml.min”1. Získá se čistý kryptofycin 97 ve formě amorfní bezbarvé pevné látky (4,2 mg, 82 %).
186 •9 · 9« »9·9 99 9« ·9 99 9 9999 • 9 9 99 9 9999 • 9 99999 9 *999 9
999 999 999
9·9 99 9 99 *9
UV (MeOH) (e) 202 (24400), 218 (9400), 284 (2200) nm; MS (El) m/z 667/669 (M+, 11/3), 639/641 (41/16), 442 (21), 226 (17), 195 (43), 196 (32), 197 (100), 198 (71), 199 (11), 182/184 (25/16), 155/157 (63/22), 146 (30), 91 (40), 77 (29); HRMS, obsd zn/z 667,3061, C36H46N3O735C1 (A-3f6mmu). Ή NMR (CDC13) <5 A 7,35 (11H/13-H; m, W1/2«15 Hz), 7,28 (12-H, m), 7,16 (10-H/14-H; m, Ww«15 Hz), 6,74 (3H; ddd, 15,2/9,0/6,1), 5,69 (2-H; d, 15,2), 5,21 (5-H; ddd, 9,2/4,3/4,2), 2,79 (8-H, bs), 2,51 (4-Hj, m), 2,11 (7-H, bd, 6,5), 1,48 (6-H, m), 1,13 (6-Me, d, 6,9); B: 7,18 (5H, d, 2,1), 7,04 (9-H, dd, 8,4, 2,1), 6,83 (8-H, d, 8,4), 5,53 (NH, m), 4,73 (2-H, ddd, 7,6, 5,6, 5,4), 3,87 (OMe, s), 3,09 (3-Hb, dd, 14,7, 5,4), 3,04 (3-H„ dd, 14,7, 7,6), • C: 7,20 (NH, m), 3,40 (3-Hb, dd, 13,5, 8,6), 3,11 (3-H„ dd, 13,5, 3,3), 1,22 (2Me, s), 1,15 (2-Me\ s), D: 4,84 (2-H, dd, 10,1, 3,7), 1,71 (3-Hb, m), 1,67 (4-H, bm, W1/2 = 25), 1,35 (3-H„ m), 0,86 (4-Me, d, 6,7), 0,84 (5-H3, d, 6,5); 13C NMR (CDClj) ó A: 165,0 (1), 142,1 (3), 139,2 (9), 128,8 (11/13), 127,5 (12), 125,4 (10/14), 124,6 (2), 76,6 (5), 42,5 (6), 42,1 (7), 40,5 (8), 36,6 (4), 14,8 (6-Me), B:
170,2 (1), 154,1 (7), 130,9 (5), 129,5 (4), 128,2 (9), 122,6 (6), 112,4 (8), 56,1 (7OMe), 54,3 (2), 35,3 (3), C: 177,9 (1), 46,5 (3), 42,7 (2), 22,8 (2-Me/2-Me’),
D: 170,5 (1), 71,3 (2), 39,5 (3), 24,6 (4), 22,7 (4-Me), 21,3 (5).
Příklad 18
Syntéza kryptofycinů 110 až 112 a 124 Kryptofycin 108
Ke směsi kryptofycinu 90 a kryptofycinu 91 (27 mg, 0,045 mmol) v 0,8 ml tetrahydrofuranu se přidá 400 μΐ vodného roztoku kyseliny jodisté (32 mg, 0,14 mmol). Vzniklý čirý roztok se 5 hodin míchá při teplotě místnosti a přidá se k němu voda. Vodná vrstva se extrahuje dvakrát ethylacetátem. Organická vrstva se promyje vodou, vysuší a zkoncentruje. Zbytek se přečistí chromatografii s obrácenými fázemi na sloupci ODS za použití směsi acetonitrilu a vody (1:1), jako elučního činidla. Získá se kryptofycin 108 v 90% výtěžku. NMR (500 MHz) S A 9,64 (7-H, d, 1,9), 6,67 (3-H, φφ
- 187 « φ • · φ · • · • · φφ φφφφ • · • · • φ φ • φ · φφ φ φφ φφ φ φφφ φ φφφ φ φ φ φ φ φφ φφ ddd, 15,3, 10,0, 5,4), 5,81 (2-H, dd, 15,3, 0,9), 5,32 (5-H, ddd, 11,0, 6,6, 2,1), 2,65 (6-H, qdd, 7,2, 6,9, 1,9), 2,53 (4-H, m), 2,44 (4-H’, m), 1,17 (6-Me, d, 7,2); Β
7,21 (5-H, d, 2,2), 7,08 (9-H, dd, 8,4, 2,2), 6,84 (8-H, d, 8,4), 5,91 (NH, d, 8,4), 4,80 (2-H, m), 3,86 (OMe, S), 3,16 (3-H; dd, 5,4, -14,6), 3,00 (3-H’, dd, 7,8, -14z6); C 7,05 (NH, bdd, 6,9, 5,0), 3,47(3-H, ddd, 4,6, 4,2, -13,5), 3,32 (3-H’, ddd, 6,9, 6,6, 13,5), 2,73 (2-H, m), 1,23 (2-Me; d, 7,2); D 4,83 (2-H, dd, 9,5, 3,6), 1,75 (3-H, m), 1,70 (4-H; m), 1,40 (3-H’, ddd, 9,5, 3,9, -14,0), 0,93 (5-H, d, 6,6), 0,88 (4-Me-H, d, 6,6). ,3C NMR (125 MHz) δ A 200,6 (7), 165,4 (1), 140,5 (3), 125,6 (2), 73,7 (5), 50,1 (6), 36,1 (4), 10,8 (6-Me); B 171,1 (1), 154,0 (7), 131,0 (5), 129,9 (4),
128,3 (9), 122,4 (6), 112,3 (8), 56,1 (OMe), 53,8 (2), 35,0 (3); C 175,6 (1), 41,0 (3), 38,1 (2), 14,1 (2-Me); D 170,4 (1), 71,3 (2), 39,3 (3), 24,6 (4), 22,9 (5), 21,4 (4-Me).
Kryptofycin 108 je také možno vyrobit selektivní ozonolýzou kryptofycinu 82 za použití postupu popsaného výše pro ozonolýzu sloučeniny E na sloučeninu F.
Obecný postup při Wittigově reakci
Butyllithium (0,4 ml, 2,5M v hexanu, 1 mmol) se při -78°C přidá k 10 ml roztoku aryltrifenylfosfoniumchloridu (1 mmol) v tetrahydrofuranu. Reakční směs se míchá 15 minut při -78°C a poté na jednu hodinu umístí do ledové lázně. Tři ekvivalenty této směsi se při -78°C přidají k tetrahydrofuranovému roztoku kryptofycinu 108 (asi 30 mg/ml). Reakční roztok se 20 minut míchá, načež se odstaví chladicí lázeň. Když teplota vzroste na 25°C, reakční směs se rozloží nasyceným vodným roztokem chloridu amonného. Vzniklá směs se extrahuje dvakrát ethylacetátem. Organický extrakt se promyje vodou, vysuší a zkoncentruje. Zbytek se přečistí mžikovou chromatografií na ODS za použití směsi acetonitrilu a vody v poměru 65 : 35, jako elučního činidla. Získá se směs E a Z isomerů (obsah Z isomeru je v závislosti na povaze arylskupiny 8 až 13 % podle analýzy NMR). Požadovaný E isomer vykrystaluje z etheru.
- 188 «· · • · ·· • · · • · · • · · ·· »·· ·· ···· • · · • · · • · · · • · · ·» · ·· ·· • * · · • · · · • ···· · • · « ·· ··
Kryptofycin 110
Wittigovou reakcí se ze 7,3 mg kryptofycinu 108 získá 5,1 mg p-fluorfenylového analogu (obsahuje asi 8 % Z isomeru), přičemž se regeneruje přibližně 1 mg nezreagovaného aldehydu). Po překrystalování z etheru se vyrobí 4,0 mg čistého kryptofycinu 110. [a]D +42,4° (MeOH, C 2,1). ΧΗ NMR δ A 7,29 (10-H/14-H, dd, 8,6,
5,6), 6,99(11-H/13-H, dt, 8,6, 8,5), 6,68 (3-H, ddd, 15,3, 9,7, 5,6), 6,38 (8-H, d,
15,8), 5,83 (7-H, dd, 15,8, 8,8), 5,78 (2-H, d, 15,3), 5,00 (5-H, ddd, 10,8, 7,3, 1,3), 2,53 (4-H/6-H, m), 2,36 (4-H’, m), 1,13 (6-CH3, d, 6,8); B 7,21 (5-H, d, 1,8), 7,07 (9-H, dd, 8,4, 1,8), 6,84 (8-H, d, 8,4), 5,68 (NH, d, 8,5), 4,82 (2-H, m), 3,87 (OMe, s), 3,14 (3-H; dd, 5,6, -14,4), 3,04 (3-H’, dd, 7,2, -14,4); C, 6,95 (NH, bdd, 6,8,
5.9) , 3,50 (3-H, td, 4,4, -13,5), 3,28 (3-H’, ddd, 6,8, 6,7, -13,5), 2,72 (2-H, m), 1,23 (2-Me; d. 7,2); ' D 4,82 (2-H, m), 1,65 (3-H/4-H; m), 1,35 (3-H’, ddd, 4,5, 3,8, 10.9) , 0,78 (5-H, d, 6,4), 0,74 (4-Me-H, d, 6,4). nC NMR (75 MHz) Ó A 165,4 (1), 162,3 (12, d, 'JC.F 245,8 Hz), 141,4 (3), 132,9 (9), 130,6 (7), 129,9 (8), 127,6 (10/14, d, JJC.F 8,0 Hz), 125,2 (2), 115,5 (11/13, d, 2JC.F 21,5 Hz), 77,4 (5), 42,2 (6),
36,4 (4), 17,3 (6-Me); B 170,9 (1), 153,9 (7), 131,0 (5), 129,9 (4), 128,4 (9), 122,4 (6), 112,2 (8), 56,1 (OMe), 53,6 (2), 35,1 (3); C 175,6 (1), 41,1 (3), 38,3 (2), 14,0 (2-Me); D 170,9 (1), 71,5 (2), 39,5 (3), 24,5 (4), 22,7 (5), 21,2 (4-Me).
Kryptofycin 111
Wittigovou reakcí se z 55 mg kryptofycinu 108 získá 43 mg p-tolylového analogu (obsahuje asi 9 % Z isomeru) . Po překrystalování z etheru se vyrobí 34 mg čistého kryptofycinu 111. [a]D +44,3° (CHC13, c 0,6); EIMS m/z (rel.intenzita %) 652 (2,9, M+), 497 (3,6), 412 (23,8), 242 (20), 145 (46), 105 (75); HREIMS 652,29094 (vypočteno pro C36H45C1N2O7, delta -0,6 mmu, M+). NMR δ A
189 ·· • · • · • · • · • to ·· ··· to· ···· • · · • · · ·· toto to · · ·· · ·· ·· • · · · • · ·· • ···· · • · · to· ·<
7.21 (10-H/14-H; d, 8,0), 7,11 (11-H/13-H, d, 8,0), 6,68 (3-H, ddd, 15,2, 9,6, 5,4), 6,37 (8-H, d, 15,8), 5,95 (7-H, dd, 15,8, 8,6), 5,76 (2-H, d, 15,2), 4,99 (5-H, dd, 10,4,
6,2), 2,51 (4-H/6-H, m), 2,38 (4-H’, m), 2,32 (12-Me, s), 1,13 (6-CH3, d, 6,8); B
7.22 (5-H, d, 2,1), 7/)8 (9-H, dd, 8,4, 2,1), 6,83 (8-H, d, 8,4), 5,80 (NH, d, 8,4), 4,81 (2-H, m), 3,86 (OMe, s), 3,14 (3-H; dd, 5,6, -14,4), 3,03 (3-H’, dd, 7,3, -14,4); C 6,98 (NH, bdd, 6,0, 5,7), 3,49 (3-H, td, 4,6, -13,4), 3,29 (3-H’, ddd, 6,7, 6,6, -13,4), 2,70 (2-H, m), 1,22 (2-Me; d, 7,2); D 4,81 (2-H, m), 1,65 (3-H/4-H; m), 1,37 (3H’, m), 0,78 (5-H, d, 5,8), 0,73 (4-Me-H, d, 6,4). nC NMR (75 MHz) δ A 165,5 (1), 141,5 (3), 137,4 (12), 133,9 (9), 131,7 (7), 129,3 (10/14), 129,0 (8), 126,0 (11/13),
125.1 (2), 77,4 (5), 42,2 (6), 36,4 (4), 21,1 (12-Me), 17,3 (6-Me); B 171,0 (1),
153,9 (7). 131,0 (5), 129,9 (4), 128,4 (9), 122,4 (6), 112,2 (8), 56,1 (OMe), 53,6 (2),
35.1 (3); C 175,6 (1), 41,1 (3), 38,3 (2), 14,1 (2-Me); D 170,9 (1), 71,6 (2),
39,5 (3), 24,5 (4), 22,7 (5), 21,2 (4-Me).
Kryptofycin 112
Wittigovou reakcí se z 51 mg kryptofycinu 108 získá 35 mg 2-thienylového analogu (obsahuje asi 13 % Z isomeru). Po překrystalování z etheru se vyrobí 25 mg čistého kryptofycinu 112. ΤΗ NMR (500 MHz) δ A 7,12 (12-H, d, 4,9), 6,94 (11-H, dd, 4,9, 3,4), 6,90 (10-H, d, 3,.4), 6,68 (3-H, ddd, 15,2, 9,5, 5,3), 6,54 (8-H, d,
15,7), 5,83 (7-H, dd, 15,7, 8,7), 5,78 (2-H, d, 15,2), 4,96 (5-H, dd, 9,5, 6,5), 2,51 (4H/6-H, m). 2,35 (4-H’, m), 1,13 (6-CH3, d, 6,8); B 7,21 (5-H, d, 1,6), 7,07 (9-H, dd, 8,4, 1,6), 6,84 (8-H, d, 8,4), 5,74 (NH, d, 7,1), 4,82 (2-H, m), 3,87 (OMe, s), 3,13 (3-H; dd, 5,5, -14,4), 3,04 (3-H’, dd, 7,1, -14,4); C, 6,97 (NH, bt, 5,8), 3,50 (3-H, ddd, 4,4, 4,3, -13,4), 3,28 (3-H’, ddd, 6,8, 6,6, -13,4), 2,71 (2-H, m), lf22 (2-Me, d,
7,2); D 4,82 (2-H, m), 1,67 (3-H/4-H; m), 1,39 (3-H’, m), 0,80 (5-H, d, 6,4), 0,77 (4-Me-H, d, 6,4).
- 190··• · · · <
• · 4 ·» ··
Kryptofycin 124
Wittigovou reakcí se ze 153 mg kryptofycinů vzorce 108 získá 131 mg p-chlorfenylového analogu (obsahuje přibližně 10 % Z isomeru). Po překrystalování z etheru se vyrobí 107 mg čistého kryptofycinů 124. [a]D +29,2° (CHC13, c 0,5);. EIMS s vysokým rozlišením m/z 672,23691 (vypočteno pro C35H42C12N2°7' delta 0,0 urnu). NMR (500 MHz) & A 7,26 (10-H/11-H/13-H/14-H, s), 6,68 (3-H, ddd, 15,2, 9,6, 5,4), 6,36 (8H, d, 15,8), 5,98 (7-H, dd, 15,8, 8,8), 5,77 (2-H, d, 15,2), 5,00 (5-H, bdd, 9,4, 6,3), 2,54 (4-H/6-H, m), 2,38 (4-H’, m), 1,13 (6-CH3, d, 6,8); B 7,22 (5-H, d, 1,7), 7,07 (9-H, dd, 8,4, 1,7), 6,84 (8-H, d, 8,4), 5,73 (NH, bd, 7,8), 4,82 (2-H, m), 3,86 (OMe, s), 3,13 (3-H; dd, 5,5, -14,4), 3,04 (3-H’, dd, 7,2, -14,4); C, 6,97 (NH, bt, 5,8), 3,49 (3-H, td, 4,2, -13,4), 3,29 (3-H’, ddd, 6,7, 6,6, -13,4), 2,71 (2-H, m), 1,22 (2-Me; d, 7,2); D 4,81 (2-H, m), 1,65 (3-H/4-H; m), 1,35 (3-H’, m), 0,77 (5-H, d, 7,1), 0,75 (4-Me-H, d, 7,1). l3C NMR (75 MHz) δ A 165,4 (1), 141,3 (3), 135,2 (12), 133,2 (9), 130,9 (7), 130,6 (8), 128,7 (11/13), 127,3 (10/14), 125,2 (2), 77,3 (5), 42,2 (6), 36,5 (4), 17,3 (6-Me); B 170,9 (1), 153,9 (7), 131,0 (5), 129,8 (4), 128,4 (9),
122,4 (6), 112,2 (8), 56,1 (OMe), 53,6 (2), 35,1 (3); C 175,6 (1), 41,1 (3), 38,3 (2), 14,1 (2-Me); D 170,8 (1), 71,5 (2), 39,6 (3), 24,5 (4), 22,8 (5), 21,3 (4-Me).
Příklad 19
Syntéza kryptofycinů 115 až 120, 125 a 126 Kryptofyciny 115 a 116
Obecným postupem popsaným výše pro epoxidaci kryptofycinů styrenového typu se kryptofycin 110 (3,5 mg) převede na 2,0 mg kryptofycinů 115 a 1 mg kryptofycinů 116.
Údaje ze spektrální analýzy kryptofycinů 115 [a]D +29,1° (MeOH, c 0,8); EIMS m/z (relativní intenzita, %), 672 (1,9, M+), 412 (5,8), 245 (17), 195 (52),
- 191
155 (31), 141 (23), 135 (15), 109 (100); EIMS S vysokým rozlišením 668,2853 (vypočteno pro 035Η4201ΓΝ208, delta +3,4 mmu, M+). XH NMR (500 MHz) δ A 7,22 (10-H/14-H, ddt,
8,7, 5,2, 2,0), 7,01 (11-H/13-H, ddt, 8,7, 8,5, 2,0), 6,68 (3-H, ddd, 15,2, 9,7, 5,2), 5,74 (2-H, dd, 15,2, 0,8), 5,15 (5-H, ddd, 11,2, 5,0, 1,8), 3,67 (8-H, d, 2,0, 2,88 (7-H, dd, 7,4, 2,0), 2,54 (4-H, dtd, 5,2, 1,8, -14,4), 2,44 (4-H'# ddd, 11,2, 9,7, -14,4), 1,79 (6-H, m), 1,13 (6-CH3, d,
6,8); B 7,21 (5-H, d, 2,0), 7,06 (9-H, dd, 8,3, 2,0), 6,83 (8-H, d, 8,3), 5,63 (NH, d, 8,4), 4,80 (2-H, ddd, 8,4, 7,2),
5,4). 3,87 (OMe, s), 3,14 (3-H; dd, 5,4, -14,4), 3,03 (3-H’, dd, 7,2, -14,4); C 6,94 (NH, bdd, 6,7, 5,0), 3,48 (3-H, ddd, 5,0, 3,7, -13,4), 3,30 (3-H', ddd, 6,8, 6,7, -13,4), 2,72 (2-H, m), 1,22 (2-Me; d, 7,4); D 4,83 (2-H, dd, 9,9, 3,6), 1,70 (3-H/4-H; m), 1,35 (3-H’, m), 0,87 (5-H, d, 6,5), 0,85 (4-Me-H, d, 6,5). 13C NMR (125 MHz) Ó A 165,3 (1), 162,9 (12, d, >JC.F 245,4 Hz), 141,0 (3), 132,5 (9), 127,3 (10/14, d, 3JC.F
8,3 Hz), 125,3 (2), 115,7 (11/13, d, 2JC.F 21,9 Hz), 76,1(5), 63,0 (7), 58,3 (8), 40,5 (6), 36,7 (4), 13,4 (6-Me); B 170,9 (1), 154,0 (7), 131,0 (5), 129,7 (4), 128,4 (9), 122,5 (6), 112,3 (8), 56,1 (OMe), 53,6 (2), 35,0 (3); C 175,6 (1), 41,1 (3), 38,2 (2), 14,1 (2-Me); D 170,7 (1), 71,3 (2), 39,4 (3), 24,5 (4), 22,9 (5), 21,3 (4-Me).
Kryptofyciny 117 a 118
Obecným postupem popsaným výše pro epoxidaci kryptofycinů styrenového typu se kryptofycin 111 (6,2 mg) převede na 3,5 mg kryptofycinu 117 a 1 mg kryptofycinu 118.
Údaje ze spektrální analýzy kryptofycinu 117 [a]D +25,5° (MeOH, c 1,8); EIMS m/z (rel.intenzita, %), 668 (4,8, M+), 412 (6,2), 280 (11), 173 (9,4), 145 (15), 135 (34), 105 (100); EIMS s vysokým rozlišením 668,28532 (vypočteno pro C36H45c1FN2°8' delta +1'1 mmu, M+)· 1h Ν’® (50θ MHz) S A • ·
- 192
7,17/7,13 (10-H/l 1-H/13-H/14-H, A2B2 q, 8.0), 6,67 (3-H, ddd, 15,4, 9,8, 5,6), 5,73 (2H, dd, 15,4, 0,9), 5,14 (5-H, ddd, 11,2, 4,9, 2,0), 3,65 (8-H, d, 2,0), 2,91 (7-H, dd, 7,6, 2,0), 2,54 (4-H, bdd, 5,6, -14,3), 2,44 (4-H’, ddd, 10,7, 9,8, -14,3), 2,35 (12-Me,
s), 1,77 (6-H, m), 1,14 (6-CH3, d, 6,9); B 7,21 (5-H, d, 2,2), 7,07 (9-H, dd, 8,5,
2,2), 6,83 (8-H, d, 8,5), 5,65 (NH, d, 8,5), 4,80 (2-H, ddd, 8,3, 7,4, 5,6), 3,87 (OMe, s), 3,13 (3-H; dd, 5,6, -14,5), 3,02 (3-H', dd, 7,4, -14,5); C 6,93 (NH, bd, 6,8,
5,1), 3,48 (3-H, ddd, 5,1, 3,8, -13,2), 3,29 (3-H’, ddd, 6,9, 6,8, -13,2), 2,71 (2-H, m),
1,22 (2-Me; d, 7,1); D 4,82 (2-H, dd, 9,8, 3,6), 1,70 (3-H/4-H; m), 1,33 (3-H’, m), 0,85 (5-H, d, 6,5), 0,84 (4-Me-H, d, 6,5). 13C NMR (125 MHz) δ A 165,3 (1), 141,0 (3), 138,4 (12), 133,7 (9), 129,4 (10/14), 125,.6 (11/13), 125,3 (2), 76,2(5), 62,9 (7), 59,0 (8), 40,7 (6), 36,7 (4), 21,1 (12-Me), 13,6 (6-Me);, B 170,9 (1), 154,0 (7), 131,0 (5), 129,8 (4), 128,4 (9), 122,4 (6), 112,3 (8), 56,1 (OMe), 53,6 (2), 35,1 (3);
C 175,5 (1), 41,1 (3), 38,3 (2), 14,1 (2-Me); D 170,7 (1), 71,3 (2), 39,4 (3),
24,5 (4), 22,8 (5), 21,2 (4-Me).
Údaje ze spektrální analýzy kryptofycinu 118
NMR spektrum kryptofycinu 118 je podobné jako u kryptofycinu 38 s tou výjimkou, že multiplety při 7,30 až 7,38 pro protony fenylového zbytku jsou nahrazeny 4H multipletem při 7,14 a 3H singletem při 2,35 pro protony p-tolylového zbytku.
Kryptofyciny 119 a 120
Obecným postupem popsaným výše pro epoxidaci kryptofycinu styrenového typu se kryptofycin 112 (8 mg) převede na 1,2 mg kryptofycinu 119 a 0,5 mg kryptofycinu 120.
Údaje ze spektrální analýzy kryptofycinu 119 ‘H NMR (500 MHz) Ó A 7,28 (12-H, d, 5.2), 7,11 (10-H, d, 3,3), 7,00 (11H, dd, 5,2, 3,3), 6,68 (3-H, ddd, 15,1, 9,9, 5,2), 5,76 (2-H, dd, 15,1, 1,3), 5,15 (5-H, ddd, 11,2, 5,5, 1,8), 3,94 (8-H, d, 2,0), 3,1(1 (7-H, dd, 7,5, 2,0), 2,56 (4-H, bdd, 5,2, ·· ·· ► 9 9 ' » · ··
9 9 9
- 193.··
14,3), 2,44 (4-H’, ddd, 11,2, 9,9, -14,3), 1,76 (6-H, m), 1,13 (6-CH3, d, 6,8);
7,21 (5-H, d, 2,3), 7,07 (9-H, dd, 8,4, 2,3), 6,83 (8-H, d, 8,4), 5,63 (NH, d, 8,4),
B
4,80 (2-H, ddd, 8,5, 7,4, 5,7), 3,87 (OMe, s), 3,13 (3-H; dd, 5,7, -14,5), 3,03 (3-H’, dd, 7,4, -14,5); C 6,95 (NH, bd, 6,5, 5,3), 3,48 (3-H, ddd, 5,3, 3,6, -13,5), 3,31 (3-H’ ddd, 6,8, 6,5, -13,5), 2,72 (2-H, m), 1,23 (2-Me; d, 7,3); D 4,85 (2-H, dd, 10,3,
3,5), 1,70 (3-H/4-H; m), 1,33 (3-H’, m), 0,86 (5-H, d, 6,3),
0,85 (4-Me-H, d, 6,3).
Kryptofyciny 125 a 126
Obecným postupem popsaným výše pro epoxidaci kryptofycinu styrenového typu se kryptofycin 124 (47 mg) převede na 26 mg kryptofycinu 125 a 12 mg kryptofycinu 126.
Údaje ze spektrální analýzy kryptofycinu 125 [a]D +35,6° (CHClg, c 0,9); EIMS s vysokým rozlišením m/z 688,2301 (vypočteno pro C35H42 cl2N2°8' de-lta +1,7 mmu). XH NMR (500 MHz) δ A 7,35 (11-H/13-H, dt, 8,5
2,0), 7,18(10-H//14-H, dt, 8,5, 2,0), 6,67 (3-H, ddd, 15,1, 9,9, 5,2), 5,73 (2-H, dd, 15,1, 0,9), 5,15 (5-H, ddd, 11,0, 4,7, 1,5), 3,66 (8-H, d, 1,9), 2,87 (7-H, dd, 7,4, 1,9), 2,53 (4-H, m), 2,42 (4-H’, ddd, 10,6, 10,5, -14,4), 1,78 (6-H, m), 1,12 (6-CH3, d, 7,0);
B 7,20 (5-H, d, 2,1), 7,06 (9-H, dd, 8,3, 2,1), 6,83 (8-H, d, 8,3), 5,72 (NH, d,
8,1), 4,79 (2-H, ddd, 8,3, 7,9, 5,4), 3,86 (OMe, s), 3,12 (3-H; dd, 5,4, -14,5), 3,02 (3H’, dd, 7,4, -14,5); C 6,91 (NH, bdd, 6,3, 5,5), 3,46 (3-H, ddd, 4,4, 4,1, -13,7),
3,22 (3-H’, ddd, 7,0, 6,3, -13,7), 2,70 (2-H, m), 1,22 (2-Me; d, 7,2); D 4,82 (2-H, dd, 9,9, 3,4), 1,70 (3-H/4-H; m), 1,33 (3-H’, m), 0,87 (5-H, d, 6,5), 0,84 (4-Me-H, d,
6,5). 13C NMR (125 MHz) 6 A 165,3 (1), 141,0 (3), 135,3 (12), 134,4 (9), 128,9 (11/13), 126,9 (10/14), 125,3 (2), 76,0 (5), 63,1 (7), 58,2 (8), 40,4 (6), 36,7 (4), 13,4 (6-Me); B 170,9 (1), 154,0 (7), 131,0 (5), 129,8 (4), 128,3 (9), 122,4 (6), 112,3 (8),
56,1 (OMe), 53,7 (2), 35,0 (3); C 175,6 (1), 41,0 (3), 38,2 (2), 14,1 (2-Me); D 170,7 (1), 71,2 (2), 39,4 (3), 24,5 (4), 22,9 (5), 21,3 (4-Me).
• · • ·
- 194 -:
• · ·· · · · • · · ·· ··
Údaje ze spektrální analýzy kryptofycinu 126 *H NMR (300 MHz) A δ 7,26 (11-H/13-H, d, 8,1), 7,17 (10-H//14-H, d,
8,1), 6,70 (3-H, ddd, 15,1, 9,4, 5,3), 5,81 (2-H, d, 15,1), 5,14 (5-H, bdd, 10,0, 4,5), 3,57 (8-H, bs), 2,85 (7-H, bd, 7,6), 2,66 (4-H, m), 2,59 (4-H’, m), 1,77 (6-H, m), 1,04 (6-CH3, d, 7,0); B 7,23 (5-H, bs), 7,08 (9-H, bd, 8,4), 6,83 (8-H, d, 8,4), 5,82 (NH, d, 6,8), 4,81 (2-H, ddd, 7,2, 6,8, 5,4), 3,86 (OMe, s), 3,14 (3-H; dd, 5,4, -14,1), 3,03 (3-H’, dd, 7,4, -14,1); C 7,03 (NH, bt, 5,7), 3,47 (3-H, ddd, 4,0, 3,7, -13,1), 3,34 (3-H’, ddd, 6,8, 6,4, -13,1), 2,72 (2-H, m), 1,24 (2-Me; d, 7,0); D 4,90 (2-H, dd, 10,0, 2,5), 1,74 (3-H/4-H; m), 1,45 (3-H’, m), 0,91 (5-H, d, 6,5), 0,86 (4-Me-H, d,
6,5). ,3C NMR (125 MHz) δ A 165,4 (1), 141,3 (3), 135,6 (12), 134,1 (9), 128,8 (11/13), 126,8 (10/14), 125,2 (2), 76,8 (5), 63,3 (7), 55,6 (8), 40,8 (6), 36,7 (4), 13,4 (6-Me); B 170,9 (1), 153,9 (7), 131,0 (5), 129,8 (4), 128,4 (9), 122,3 (6), 112,2 (8),
56,1 (OMe), 53,7 (2), 35,0 (3); C 175,7 (1), 41,0 (3), 38,2 (2), 14,1 (2-Me); D
170,8 (1), 71,4 (2), 39,3 (3), 24,6 (4), 23,1 (5), 21,3 (4-Me).
Syntéza kryptofycinů 121 až 123 a 127
Sloučenina AJ
K roztoku monohydrátu BOC-L-leucinu (1,245 g, 5 mmol) ve 30 ml bezvodého dichlormethanu se pod atmosférou dusíku za míchání při 0°C přidá pevný hydrochlorid l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (EDC) (0,53 g, 2,75 mmol). Reakční směs se 1,5 hodiny míchá při 0°C a zkoncentruje při teplotě nižší než 5°C. Zbytek se zředí 35 ml chladného ethylacetátu a vzniklý roztok se postupně promyje dvěma dávkami (vždy 10 ml) ledově chladného 5% vodného roztoku hydrogensíranu draselného, ledově chladného 5% vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a ledově chladného vodného roztoku chloridu sodného. Organická fáze se oddělí, vysuší síranem hořečnatým při 5°C a odpaří při teplotě nižší než 5°C. Olejovitý zbytek se zředí ledově chladným tetrahydrofuranem (5 ml) a přidá k roztoku • · · · · ·
- 195..• · · · 1 « · « ·· ·· sloučeniny K (295 mg, 0,5 mmol) v ledově chladném bezvodém tetrahydrofuranu (5 ml). Směs se míchá a nechá zahřát na 25°C (přes noc) a potom se k ní přidá několik krystalů DMAP.
K výsledné směsi se přidá 5% vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (5 ml). Dvoufázová směs se 2 hodiny intenzivně míchá při 25°C a přidá se k ní ethylacetát (40 ml). Vodná fáze se extrahuje dalším ethylacetátem (2 x 20 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou a vodným chloridem sodným, vysuší síranem sodným, přefiltrují a filtrát se odpaří.
Zbytek se za použití 25% ethylacetátu v hexanech přefiltruje přes vrstvu silikagelu. Získá se sloučenina AJ ve formě bezbarvého oleje (385 mg, výtěžek 96 %); [a]D 13,6° (c 0,63, CHC13); EIMS m/z (rel.intenzita) 805/803/801 (M+,1%), 568/570/572/574 (9/10/6/2), 523/525/527 (5/6/1), 418/420/422/424 (15/15/6/2), 341/343/345/347 (58/70/35/9), 307/309/311 (29/22/10), 224/227/228/229 (10/100/31/14), 208/210/211/2* 12 (20/83/45/54); HREIMS miz 800,2218 (C3JH4g 35Cl4N2Og, Á-5z3mmu); Ή NMR (CDC13) A δ 7,21-7,35 (Ph-H5; m), 6,77 (3-H; ddd, 6,7/6,7/15,3), 6,4 (8H; d, 15,8), 6,05 (7-H; dd, 8,7/15,8), 5,9 (2-H; d, 15,3), 5,0 (5-H; m), 2,6 (6-H; m), 2,55 (4-H2; m), l,17(6-Me; d, 6,7); B δ 7,22 (5-H; s), 7,05 (9-H: d, 8,1), 6,84 (8H; d, 8,1), 6,55 (NH; d, 7,8), 5,0 (2-H; ddd, 5,5/7,1/7,8), 4,68-4,8 (CH2CCI3; ABq, 11,9), 3,86 (OMe; s), 3,2 (3-H; dd, 5,5/14,0), 3,06 (3-H’: dd, 7,1/14,0); ; D δ 4,8 (NH; d), 4,2 (2-H; m), 1,65 (4-H; m), 1,55 (3-H; m), 1,4 (CMeů; s), 1,37 (3-H’; m), 0,85 (4-Me; d, 6,5), 0,8 (5-H; d, 6,5); ,3C NMR A δ 165,4(1), 139,3 (3), 137,0 (9),
131,5 (8), 130,5 (7), 128,5 (11/13), 127,3 (12), 126,2 (10/12), 125,8 (2), 76,2 (5), 40,8 (6), 33,4 4), 16,8 (6-Me); B δ 170,0 (1), 154,2 (7), 131,0 (5), 129,0 (9), 122,5 (6), 112,2 (8), 94,4 (CC13), 74,7 (CH2CC13), 56,1 (OMe), 53,3 (2), 36,5 (3), D δ 173,2 (1), 155,7 (BOC-CO), 80,0 (CMe3), 52,4 (2), 41,2 (3), 28,3 (CM&), 24,8 (4), 22,8 (4-Me), 21,6 (5).
Sloučenina AK
Sloučenina AJ (115 mg, 0,134 mmol) se rozpustí v trifluoroctové kyselině (3 ml), 1 hodinu nechá stát při 25°C, načež se z ní odstraní rozpouštědlo. Zbytek se
- 196..- .
opakovaně odpaří s dichlormethanem a poté toluenem. Získaná amorfní pevná látka se rozpustí v bezvodém tetrahydrofuranu (5 ml) a k tetrahydrofuranovému roztoku se přidá diethylisopropylamin v množství dostatečném pro nastavení pH roztoku na 8 až 9 (roztok se nakape na vlhký pH papírek). Reakční roztok se za míchání ochladí na 0°C a přidá se k němu roztok sloučeniny AL v tetrahydrofuranu (3 ml). Za účelem přípravy sloučeniny AL se sloučenina Z (55 mg, 0,27 mmol) rozpustí v tetrahydrofuranu (3 ml) a k výslednému roztoku se přidá diethylisopropylamin (0,046 ml, 0,27 mmol). Vzniklá směs se ochladí na -15°C a přikape se k ní pivaloylchlorid (0,033 ml, 0,27 mmol). Reakční roztok se míchá 10 minut při -15“C a 20 minut při 0°C. Výsledná suspenze se přidá k roztoku sloučeniny AJ v tetrahydrofuranu. Vzniklá směs se míchá při 0’C a přes noc nechá zahřát na 25°C. Po 12 hodinách při 25°C se k ní přidá 5% vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného. Získaná směs se 1,5 hodiny intenzivně míchá při 25°C a přidá se k ní ethylacetát (40 ml). Oddělí se fáze; vodná fáze se extrahuje dalším ethylacetátem (2 x 10 ml). Spojené organické extrakty se promyjí 5% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (20 ml), 5% vodným roztokem hydrogensíranu draselného (20 ml) a vodným roztokem chloridu sodného, vysuší síranem sodným a odpaří. Olejovitý zbytek se chromatografuje na silikagelu za použití 35% ethylacetátu v hexanech, jako elučního činidla. Získá se sloučenina AK ve formě bezbarvé pěny (98 mg, výtěžek 83 %); [ct]D -8,3 (c 0,88, CHCl3); 3H NMR (CDClj) A δ 7,28-7,35 (Ph-H4; m), 7,22(H-12;m), 6,75 (H-3; ddd, 6,4/6,4/15,4), 6,4(H-8; d, 15,9), 6,04 (H-7; dd, 8,6/15,9), 5,95 (H-2; d, 15,4), 5,0 (H-5; m), 2,6 (H-4; m), 1,1 (6-Me; d, 6,8); B δ 7,22 (H-5, d,
1,5), 7,15 (NH; d, 7,6), 7,05 (H-9; dd, 1,5/8,2), 6,85 (H-8; d, 8,2), 5,0 (H-2; m), 4,84,68 (C&CClj; ABq, 12), 3,86 (OMe; s), 3,2 (H-3; m), 3,1 (H-3’; dd, 7,2/14,1); C δ 5,0 (NH; m), 3,2 (H2-3; m), 2,55 (H-2; m), 1,1 (2-Me; d, 7,1); D δ 6,12 (NH; m), 4,4 (H-2; m), 1,65 (H-4; m), 1,55 (H-3; m), 1,4 (H-3’; m), 0,86 (4-Me; d, 6,8), 0,81 (5-H; d, 6,8); nC NMR (CDC13) A δ 165,8(1), 138,9(3), 131,5(8), 130,4(7), 128,6(11/13), 127,4(12), 126,2(10/14), 125,8 (2), 76,3(5), 33,6(4), 16,6(6-Me); B δ
- 19·/·99 9999 99 99
9 9 9 9 9 9
9 9 9 9 99 • ·· · ·· · · · • · · · · · «· · 99 99
170,2(1), 154,1(7), 136,9(4),131,2(5), 128,6(9), 122,3(6), 112,2(8), 94,4(CC13), 74,5(CH2CC13), 56,l(OMe), 53,4(2), 36,6(3); C δ 175,4(1), 156,3(BOC-CO), 79,5(OCMe3), 43,6(3), 41,3(2), 15,l(2-Me); D δ 172,6(1), 51,3(2), 40,5(3), 24,5(4), 22,7(4-Me), 21,5(5).
Kryptofycin 121
Sloučenina AK (73 mg, 0,082 mmol) se rozpustí v kyselině octové (3,5 ml). Ke vzniklému roztoku se přidá aktivovaný zinkový prach (400 mg). Výsledná suspenze se podrobí 45minutové sonikaci, míchá další 1,5 hodiny při 25°C, zředí dichlormethanem (5 ml) a přefiltruje přes celit. Oddělená pevná látka se promyje dalším dichlormethanem (10 ml) a filtrát se odpaří. Zbytek se bez dalšího přečištění rozpustí v trif luoroctové kyselině (3 ml). Vzniklý roztok se udržuje 1 hodinu při 25 °C, načež se z něj za sníženého tlaku odstraní rozpouštědlo. Zbytek se opakovaně odpařuje s dichlor methanem a poté s toluenem, dokud se nezíská bezbarvá pevná látka. Tato látka se rozpustí v suchém dimethylformamidu (3 ml). K dimethylformamidovému roztoku se přidá FDPP (43 mg, 0,108 mmol) a poté diethylisopropylamin v množství dostatečném pro nastavení pH roztoku na 8 až 9, když se alikvot nakape na vlhký pH papírek. Reakční směs se poté míchá 16 hodin při 25’C a zředí etherem (40 ml). Zředěná směs se promyje 5% vodným roztokem hydrogensíranu draselného (2x1 ml), 5% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (15 ml) a vodným roztokem chloridu sodného, vysuší síranem sodným a odpaří. Zbytek se přečistí vysokotlakou kapalinovou chromatografií s reversními fázemi na silikagelu C-l8 (Econosil(R) C-18, 22 x 250 mm), přičemž eluce se provádí směsí acetonitrilu a vody v poměru 65 : 35 rychlostí 6 ml/min. Frakce eluovaná při tR 48 minut se shromáždí a odpaří. Získá se amorfní pevná látka (26 mg, výtěžek 50 %): [a]D +46,5° (c 0,81, CHC13); EIMS m/z 637/639 (M+, 1%), ·· AAAA
- 198··449/451 (2/1), 420 (5), 411/413 (7/5), 227/228 (9/7), 195 (10), 184 (15), 167/168/169 (40/86/29), 155/157 (100/26), 91 (85), 69 (86); HREIMS m/z 637,2864 (C3J Hw 35C1 N3 O6, Δ + 5,5mmu); Ή NMR A δ 7,21- 7,35 (Ph-Hs; m), 6,75 (H-3; ddd, 4,2/10,8/16), 6,4 (H-8; d, 16), 6,04 (H-7; dd, 8.8/16), 5,75 (H-2; d, 16), 5,1 ((H-5; m), 2,55 (H-4; m; H-6; m), 2,35 (H-4’; m); B δ 7,18 (H-5; d, 2), 7,05 (H-9; dd, 2,0/8,3), 6,85 (H-8; d, 8,3), 5,7 (NH; d, 7,2), 4,7 (H-2; ddd, 4,9/7,2/7,7), 3,86 (OMe; s), 3,1 (H-3; dd, 4,9/14,4), 3,0 (H-3’; dd,7,7/ 14,4); C δ 7,25 (NH; m), 3,5 (H-3; m), 3,4 (H-3’; m), 2,55 (H-2; m), 1,2 (2-Me; d, 7,2); D δ 5,8 (NH; d, 7,2), 4,4 (H 2; m), 1,55 (H-4; m), 1,38 (Hr3; dd, 7,2/7,7), 0,76 (4-Me; d, 6,6), 0,74 (H-5; d, 6,6): 13 C NMR (CDC13) A δ 165,1 (1), 141,9 (3), 136,8 (9), 131,7 (8), 130,2 (7), 128,5 (11/13), 127,3 (14), 126,1 (10/12), 125,1 (2), 76,5 (5), 42,3 (6), 36,3 (4), 17,2 (6-Me);
‘ β δ 171,0 (1), 154,1 (7), 130,8(5), 129,6 (4), 128,4 (9), (122,5(6), 112,4 (8), 56,2 (OMe), 54,4 (2), 35,4 (3); C δ 175,8 (1), 41,0 (3), 38,6 (2), 14,8 (2-Me); > D δ 173,2 (1). 51,1 (2), 40,9 (3), 24,7 (4), 23,4 (4-Me), 21,5 (5)
Kryptofyciny 122 a 123
K míchanému roztoku (0°C) kryptofycinů 121 (20 mg, 0,032 mmol) v bezvodém dichlormethanu (1,3 ml) se v jedné dávce přidá 99% mCPBA (17 mg, 0,1 mmol) a poté bezvodý toluen (0,7 ml). Výsledná směs se míchá 72 hodin při 25°C, načež se z ní za sníženého tlaku odpaří rozpouštědlo. Pevný zbytek se přečistí vysokotlakou kapalinovou chromatografií s reversními fázemi na silikagelu C-18 (Econosil^R^ C-18, 22 x 250 mm), přičemž eluce se provádí směsí acetonitrilu a vody v poměru 65 : 35 rychlostí 6 ml/min. Ve frakci o tR 37,5 min se eluuje kryptofycin 122 (9 mg,
%) a ve frakci o tR 40 min se eluuje kryptofycin 123 (5 mg, 23 %).
Kryptofycin 122 [a] p +35^0 (c 1, CHC13); EIMS m/z 653/655 (1.6/0.7, M+), 411/413 (20/5), 280/282 (39/19), 252/254 (13/8), 223/225/227 (19/10/23), 211/213 (18/6), 195/197 (51/13), 184/186 (49/11), 176/168/169(20/16/21), 155/156/157 (95/59/42), 139/141/143
- 19Í
• · ·· · · · • · · · • ·· ·· ···« ·· ·· • · · * · (60/40/24), 135/135 (30/11), 129/131(40/29), 91(100); HREIMS m/z 653,2906 (C35 H^ 3ÍC1 N3 O7, ů-348mmu); Ή NMR (d6-aceton.) A δ 6,65 (H-3; ddd, 38/11,0/15,0),
5,9 (H-2; dd, 1,9/15,0), 5,25 (H-5; ddd, 1,9/4,9/11,5), 3,82 (H-8; d, 2,0), 3,0 (H-7; dd, 2,0/7,7), 2,65 (H-4; dddd, 2,0/2,0/3,8/14,5), 2,4 (H-4’; ddd, 11,0/11,5/ 14,5), 1,85 (H6; dqd, 4,9/7,4/7,7), 1,1 (6-Me; d, 6.9); β δ 7,45 (NH; d, 7,9), 7,22 (H-9; dd, 2,0/8,4), 7,0 (H-8; d, 8,4), 4,45 (H-2; ddd, 3,6/7,9/11,2), 3,84 (OMe; s), 3,2 (H-3; dd, 3,6/14,5), 2,75 (H-3’; dd, 11,2/14,5); 7,8 (NH; d, 8,8), 3,65 (H-3; ddd,
3,3/8,8/13,2), 3,1 (H-3’; ddd, 2,1/2,1/13,2),.2,55 (H-2; m); D 6 7,35 (NH; d, 8,1), 4,25 (H-2; ddd, 4,8/8,1/10,8), 1,65 (H-4; m), 1,45 (H-3; ddd, 5,1/10,8/13,7), 1,35 (H3’; 4,8/9,0/13,7), 0,8 (4-Me/ H-5; d, 6,5); l3C NMR A δ 165,9(1), 140,8(3), 138,6(9), 129,4(11/13), 129,2(12), 126,7(2), 126,6(10/14), 76,0(5), 63,9(7), 59,3(8), 41,2(6), 37,7(4), 13,9(6-Me); Β δ 171,9(1), 154,6(7), 132,5(4), 131,4(5), 129,0(9), 122,4(6), 113,3(8), 56,9(2), 65,4(OMe), 36,4(3); C δ 177,2(1), 41,3(3), 38,9(2), 15,7(2-Me); D δ 174,2(1), 51,7(2), 40,6(3), 25,3(4), 23,1 (4-Me), 21,5(5). Kryptofycin 123 [a]D +25,2° (c 0,58, CHC13); Ή NMR (CDC13) A δ 7,21- 7,35 ((Ph-Hs; m), 6,75 (H-3; ddd, 4,1/10,9/14,1), 5,85 (H-2; dd, 1,4/15,2), 5,25 (H-5; m), 3,6 (H-8; d, 2,0), 2,9 (H-7; dd, 2,0/7,8), 2,7 (H-4; m), 2,55 (H-4’; m), 1,75 (H-6; m), 1,05 (6-Me; d, 7,1), B 6 7,18(H-5;d,2,0), 7,05 (H-9; dd, 2,0, 8,5), 6,85 (H-8; d, 8,5), 5,95 (NH; d, 7,7), 4,7 (H-2;ddd, 4,9/7,7/8,1), 3,86 (OMe;s), 3,15 (H-3; dd, 4,9/14,5), 3,05 (H-3’; dd, 8,1/14,5); C δ 7,25 (NH; m), 3,55 (H-3; ddd, 4,6/8,7/13,3), 3,15 (H-3’; ddd, 3,0/3,1/13,3), 2.,55 (H-2; m), 1,2 (2-Me; d, 7,3); D δ 6,0 (NH; d, 8,2), 4,45 (H-2; m), 1,6 ( H-4; m), 1,55 (H2-3; m), 0,88 (4-Me; d, 7,1), 0,87 (5-H; d, 7,1);
Kryptofycin 127
Kryptofycin 122 (5 mg, 0,0075 mmol) se rozpustí v chloroformu (2 ml). Chloroformový roztok se pod atmosférou dusíku ochladí na -40 °C a přikape se k němu trimethylsilylchlorid (0,02 ml, 0,157 mmol). Vzniklá směs se 1 hodinu míchá při -40°C, načež se z ní odpaří rozpouštědlo. Zbytek se přefiltruje přes vrstvu silikagelu za použití 15% • φ • · • φ • φ
- 20σ.η φφ φφφφ φ φ φ • φ φ φ φ φ φ φ φ φ φφ φ φφ φφ φ φ φ φ φφ φφ φ φ φ φ φ φ φφ φφ ethanolu v diethyletheru. Získá se kryptofycin 127 (4 mg, výtěžek 77 %): [a]D +28,6 (c 1,16, CHCL3); EIMS m/z 653 (0,5; M+-HC1); 411(2); 182/184 (22/26); 153/155 (68/40); 135(31);
107/108/109(55/22/31); 91/92(100/30); 79/81(45/35); HREIMS m/z 653, 2841 (CjjH^^CINjO·,, Δ 2,6mmu); 1 H NMR (CHC13), A Ó 7,3-7,4 (Ph-H5; m), 6,75 (H-3; ddd, 4,2/10,9/15,0), 5,8 (H-2; dd, 1,5/15,0), 5,2 (H-5; ddd, 1,9/9,9/9,9), 4,65 (H-8; d,
9,6), 4,0 (H-7; brd, 9,6), 2,65 (H-4; m), 2,48 (H-6; m), 2,35 (H-4’; ddd,
10,9/11,2/14,5), 1,02 (6-Me; d, 7,0); Β δ 7,18 (H-5; d, 2,2), 7,05 (H-9; dd, 2,2/8,6), 6,85 (H-8; d, 8,6), 6,05 (NH; d, 7,7), 4,65 (H-2; ddd, 4,7/7,7/8,6), 3,86 (OMe; s), 3,15 (H-3; dd, 4,7/14,6), 2,9 (H-3*; dd, 8,6/14,6); C δ 7,25 (NH; brdd, 4,1/5,7), 3,4 (H2-3; m), 2,55 (H-2; m), 1,15 (2-Me; d, 7,5); D δ 6,2 (NH; d, 8,2), 4,45(H-2; m), 1,65 (H-4; m), l,55(H2-3; m), 0,93 (4-Me; d, 6,8), 0,92 (5-Me; d, 6,8); ,3C NMR (CDC13) A δ 165,4(1), 142,4(3), 138,8(9), 128,8(11/13), 128,2(12), 128,0 (10/14), 124,0 (2), 75,6(5), 73,9(7), 62,1(8), 38,6(6), 36,4 (4), 8,5(6-Me); f Β δ 171,1(1), 154,0(7), 130,8(5), 129,8(4), 128,2(9), 122,4 (6), 112,4 (8), 56,1 (OMe), 54,5(2), 35,4(3); Có 175,8(1), 41,1(3), 38,8(2), 14,8(2-Me); D δ 173,2(1), 51,1(2), 40,9(3), 25,0(4), 22,8(5), 21,8(4-Me).
Příklad 21
Syntéza kryptofycinů 128 a 130 až 134
Kryptofyciny 128, 130 a 131
Surová směs kryptofycinů 117 a 118 v poměru 2 : 1 (5,7 mg) se rozpustí v chloroformu (0,5 ml). Vzniklý roztok se 3 hodiny při -60 “C nechá reagovat s trimethylsilylchloridem (5 μΐ). Výsledná směs chlorhydrinů se vysokotlakou kapalinovou chromatografii s obrácenými fázemi rozdělí na kryptofycin 128, kryptofycin 130 a kryptofycin 131. Následným přečištěním vysokotlakou kapalinovou chromatografií s normálními fázemi se získá čistý kryptofycin 128 (2,1 mg).
• · · • · ·· • · ·
2Ol··- ··· ·· ···· • · · • · · • · · · • · · ·· · ·· ·· • · · · • · ·· • ··· · · • · · ♦ · ··
Údaje ze spektrální analýzy kryptofycinu 128 [a]D +51,4° (CHC13, c 0,4); IR 3408, 3281, 2958, 1747,
1731, 1668, 1538, 1505, 1258, 1179, 1067, 910, 733 cm*1;
EIMS (relativní intenzita, %) 668 (0,3, M+-HC1), 500 (1,2), 445 (4,2), 407 (6), 318 (12), 274 (17), 240 (33), 199 (29), 155 (31), 141 (23), 135 (15), 109 (100); EIMS s vysokým rozlišením 668,2851 (vypočteno pro C36H45C1N2°8·
A+l,3mmu, M+-HC1). *H NMR (500 MHz) 6 Λ A 7,27 (10-H/14-H, d, 8,0), 7,18 (11-H/13-H, d, 8,0), 6,69 (3-H, ddd, 15,2, 9,6, 5,4), 5,79 (2-H, dd, 15,2, 0,8), 5,10 (5 H, ddd, 11,0, 8,4, 1,7), 4,63 (8-H, d, 9,6), 3,99 (7-H, bd, 9,6), 2,67 (4-H, bdd, 5,4, 14,2), 2,49 (6-H, dqd, 7,6, 7,6, 1,7), 2,36 (4-H’, td, 10.7, -14,2), 2,35 (12-Me, s), 1,04 (6-CH3, d, 7,1); B 7,23 (5-H, d, 2,1), 7,09 (9-H, dd, 8,5, 2,1), 6,84 (8-H, d, 8,5), 5,83 (NH, d, 8,6), 4,80 (2-H, ddd, 8,2, 7,5, 5,7), 3,87 (OMe, s), 3,16 (3-H; dd, 5,6, 14.4) , 3,00 (3-H’, dd, 7,5, -14,4); C 6,94 (NH, bt, 5,8), 3,53 (3-H, ddd, 5,4, 4,1, 13.5) , 3,24 (3-H’, ddd, 6,9, 6,6, -13,5), 2,74 (2-H, m), 1,22 (2-Me; d, 7,3); D 4,92 (2-H, dd, 9,9, 3,2), 1,75 (3-H/4-H; m), 1,47(3-H’, m), 0,94 (5-H, d, 6,4), 0,92 (4-MeH, d, 6,4). ,3C NMR (125 MHz) δ A 165,6 (1), 141,6 (3), 139,2 (12), 135,3 (9), 129,7 (10/14), 127,9 (11/13), 125,2 (2), 76,4 (5), 74,0 (7), 62,0 (8), 38,4 (6), 36,3 (4), 21,1 (12-Me), 8,6 (6-Me); B 171,1 (1), 153,9 (7), 131,0 (5), 130,0 (4), 128,4 (9), 122,4 (6), 112,2 (8), 56,1 (OMe), 53,6 (2), 35,0 (3); C 175,3 (1), 41,3 (3), 38,3 (2), 14,0 (2-Me); - D 170,6 (1), 71,3 (2), 39,7 (3), 24,7 (4), 23,1 (5), 21,5 (4-Me). Údaje ze spektrální analýzy kryptofycinu 130
Ή NMR (300 MHz) δ A 7,27 (10-H/14-H, d, 7,8), 7,16 (11-H/13-H, d, 7,8), 6,69 (3-H, ddd, 15,1, 9,6, 5,2), 5,75 (2-H, d, 15,1), 5,40 (5-H, ddd, 10,6, 3,0, 1,8), 5,05 (8-H, d, 5,9), 3,74 (7-H, ddd, 10,5, 5,4, 5,2), 2,59 (4-H, m), 2,55 (6-H, m), 2,37 (4-H’, m), 2,33 (12-Me, s), 1,06 (6-CH3, d, 6,9); B 7,21 (5-H, bs), 7,07 (9-H, bd,
8,4), 6,83 (8-H, d, 8,4), 5,77 (NH, d, 6,6), 4,80 (2-H, m), 3,87 (OMe, s), 3,12 (3-H; dd, 5,6, -14,4), 3,02 (3-H’, dd, 7,2, -14,4); C 7,00 (NH, bt, 6,5), 3,47 (3-H, ddd, 4,3, 4,0, -13,3), 3,24 (3-H’, ddd, 6,7, 6,6, -13,3), 2,72 (2-H, m), 1,23 (2-Me; d, 7,3);
D 4,80 (2-H, m), 1,70 (3-H/4-H; m), 1,42(3-H’, ddd, 7,9, 4,7, -13,0), 0,91 (5-H, d, 6,4), 0,86 (4-Me-H, d, 6,4). ,3C NMR (125 MHz) A 165,5 (1), 142,1 (3), 138,8
9999
9 · • · 9 • · ·
9 9
9
9 9 9
9 99
999 9 9
9 9 • 9 99 (12), 135,2 (9), 129,5 (10/14), 127,5 (11/13), 124,8 (2), 77,8 (5), 74,2 (7), 67,2 (8), 39|4 (6), 34,6 (4), 21,1 (12-Me), 12,3 (6-Me); B 171,0 (1), 153,9 (7), 131,0 (5),
129,5 (4), 128,4 (9), 112,2 (8), 56,1 (OMe), 53,6 (2), 35,0 (3)’ C 175,6 (1), 41,1 (3), 38,3 (2), 14,1 (2-Me); D 170,3 (1), 71,5 (2), 39,5 (3), 24,6 (4), 22,7 (5), 21,6 (4-Me).
Údaje ze spektrální analýzy kryptofycinu 131 *H NMR (300 MHz) δ A 7,18 (10-H/11-H/13-H/14-H, s), 6,64 (3-H, ddd,
15,2, 9,8, 5,4), 5,70 (2-H, d, 15,2), 5,06 (5-H, bt, 9,1), 4,86 (8-H, d, 9,7), 4,06 (7-H, bd, 9,7), 2,54 (4-H, bdd, 5,2, -14,2), 2,37 (12-Me, s), 2,13 (4-H’, m), 1,85 (6-H, m), 0,97 (6-CH3, d, 6,6); B 7,21 (5-H, d, 2,1), 7,07 (9-H, dd, 8,4, 2,1), 6,83 (8-H, d,
8.4) , 5,66 (NH, d, 10,0), 4,79 (2-H, bq, 7,7), 3,87 (OMe, s), 3,14 (3-H; dd, 5,6, 14.4) , 3,02 (3-H’t dd, 7,2, -14,4); , C 6,93 (NH, bt, 6,2), 3,51 (3-H, ddd, 5,0, 4,2, 13.5) , 3,27 (3-H’, ddd, 6,7, 6,4, -13,5), 2,73 (2-H, m), 1,23 (2-Me; d, 7,3); D 4,86 (2-H, dd, 9,7, 3,4), 1,75 (3-H/4-H; m), 1,46(3-H’, m), 0,94 (5-H, d, 6,0), 0,93 (4-MeH, d, 6,.4).
Kryptofyciny 132, 133 a 134
Směs kryptofycinu 124 a Z isomeru (134 mg,
0,199 mmol) se rozpustí v dichlormethanu (6 ml). Dichlormethanový roztok se 36 hodin při teplotě místnosti nechá reagovat s m-chlorperoxobenzoovou kyselinou (103 mg,
0,598 mmol). Ke vzniklé směsi se přidá fosfátový pufr (10 ml, pH 8), aby se odstranila chlorbenzoová kyselina vzniklá během reakce. Po 30 minutách se vodná vrstva nahradí dimethylsulfidem (50 μΐ) a čerstvou dávkou fosfátového pufru (10 ml). Reakční směs se míchá dalších 30 minut. Organická vrstva se oddělí a odpaří se z ní rozpouštědlo. Zbytek se suší 12 hodin za vakua. Surová směs převážně kryptofycinů 125 a 126 se rozpustí v chloroformu (5 ml) a 3 hodiny při -60eC se na ní působí trimethylsilylchloridem (50 μΐ). Z reakční směsi se odpaří rozpouštědlo a zbytek se přečistí vysokotlakou kapalinovou chromatografii
• · • • • • · • · • • · · · • · • · • · ·· •
• • • · • · • ·♦· •
t. • ·· · • ·· « · • • ♦ · • ··
s obrácenými fázemi (silikagel Econosil ODS, 250 mm x 22 mm), přičemž eluce se provádí směsí vody a acetonitrilu v poměru 35 : 65 rychlostí 6 ml/min. Získá se kryptofycin 134 (tR 52,5 min, 9 mg, 6 %), ne zcela čistý kryptofycin 133 (tR 61 min, 32 mg, 22 %) a surový kryptofycin 132 (tR
67,5 min, 72 mg). Dalším přečištěním vysokotlakou kapalinovou chromatografií s normálními fázemi (silikagel Econosil, 250 mm x 10 mm, 56% ethylacetát v hexanu, 3 ml/min) se získá čistý kryptofycin 132 (65 mg, 45 %).
Údaje ze spektrální analýzy kryptofycinu 132 [a]D +60,1° (CHC13, c 1,1); EIMS m/z (relativní intenzita, %) 688 (1,6, M+-HC1), 412 (10), 261 (11), 195 (57), 184 (28), 165 (28), 155 (92), 135 (85); EIMS S vysokým rozlišením m/z 688,23563 (vypočteno pro CggH^Cl^^Og, delta -3,8 mmu, M+-HC1). 1H NMR (500 MHz) δ A 7,33 (10-H/11-H/13-H/14-H, s), 6,67 (3-H, ddd, 15,2, 9,9,
NMR (500 MHz) δ A 7,33 (10-H/11-H/13-H/14-H, s), 6,67 (3-H, ddd, 15,2, 9,9,
5,1), 5,79 (2-H, dd, 15,2, 1,1), 5,10 (5-H, ddd, 11,1, 8,1, 1,5), 4,63 (8-H, d, 9,5), 3,98 (7-H, bd, 9,3), 2,62 (4-H, bdd, 5,1, -14,2), 2,47 (6-H, dqd, 7,4, 7,4, 1,5), 2,40 (4-H’, td, 10,8, -14,2), 2,35 (12-Me, s), 1,02 (6-CH3, d, 7,0); B 7,21 (5-H, d, 2,1), 7,06 (9-H, dd, 8,4, 2,1), 6,82 (8-H, d, 8,4), 6,04 (NH, d, 8,5), 4,74 (2-H, td. 8,0, 5,4), 3,85 (OMe, s), 3,13 (3-H; dd, 5,3, -14,4), 2,95 (3-H’, dd, 7,8, -14,4); C 7,00 (NH, bt, 5,9), 3,48 (3-H, ddd, 5,0, 3,9, -13,4), 3,23 (3-H’, ddd, 6,6, 6,3, -13,4), 2,71 (2-H, m), 1,21 (2-Me; d, 7,2); D 4,91 (2-H, dd, 9,7, 3,4), 1,75 (3-H/4-H; m), 1,45(3-H’, m), 0,92 (5-H, d, 6,6), 0,91 (4-Me-H, d, 6,6). 13C NMR (125 MHz) δ A 165,7 (1), 141,6 (3), 137,3 (12), 134,8 (9), 129,4 (11/13), 129,0 (10/14), 125,2 (2), 76,4 (5), 74,0 (7), 61,4 (8), 38,4 (6), 36,2 (4), 8,7 (6-Me); B 171,1 (1), 153,9 (7), 131,0 (5),
130,1 (4), 128,4 (9), 122,3 (6), 112,2 (8), 56,1 (OMe), 53,8 (2), 34,9 (3); C 175,3 (1), 41,0 (3), 38,1 (2), 14,1 (2-Me); D 170,6 (1), 71,3 (2), 39,7 (3), 24,7 (4), 23,1 (5), 21,5 (4-Me).
φ φφφ φφ φφφφφ φ φφ φφφ φφφ • φφφ φφ φ φφ φφ
- 204
Údaje ze spektrální analýzy kryptofycinu 134 XH NMR spektrum titulního kryptofycinu je podobné jako u kryptofycinu 27 s tou výjimkou, že dva multíplety při 7,31 (10/14) a 7,36 - 7,40 (11/12/13) pro protony fenylového zbytku jsou nahrazeny dvěma dublety při 7,26 (10/14) a 7,36 (11/13) pro protony p-chlorfenylového zbytku.
Příklad 22
Vztah struktury a účinnosti a zkoušky in vivo
Cytotoxicity kryptofycinů 1, 3 a 8 a nových kryptofycinů vůči buněčným liniím lidských nádorů KB a LoVo jsou ilustrovány v tabulce 6. Kryptofycin 51 a kryptofycin 3 vykazují srovnatelné cytotoxicity (hodnoty IC50 v rozmezí
3,5 až 5,8nM). Kryptofycin 52 (IC50 43 až 70pM) je však o něco méně cytotoxický než kryptofycin 1 (IC50 9 až 29pM) a kryptofycin 55 (IC50 33 až 47pM) o něco méně cytotoxický ve srovnání s kryptofycinem 8 (IC50 9 až 19pM). Cytotoxicita v hodnotách IC50 kryptofycinů 117, 122, 125, 127, 128 a 132 je srovnatelná s cytotoxitou kryptofycinů 1, 8, 52 a 55; v současné době však není počet údajů takový, aby umožnil smysluplné porovnání.
Kryptofycin 52 je účinný in vivo, ale je nutno použít zhruba trojnásobnou dávku ve srovnání s kryptofycinem 1. Účinnost kryptofycinu 52 in vivo proti pěti tuhým nádorům myšího původu a třem lidským tuhým nádorům je uvedena v tabulce 7. Podobně je in vivo účinný Kryptofycin 55, ale je rovněž nutno použít trojná- sobku celkové dávky ve srovnání s kryptofycinem 8. Účinnost kryptofycinu 55 in vivo proti šesti tuhým nádorům myšího původu a čtyřem lidským tuhým nádorům je uvedena v tabulce 8. Zdá se, že údaje zjištěné « · · · · · · - 20$.-· .:. *..· :
při hodnocení účinnosti in vivo jsou v korelaci s údaji o účinnosti in vitro.
Kryptofyciny 117, 125, 128 a 132 jsou in vivo účinné proti adenokarcinomu slinivky myšího původu (Pane 03). Kryptofyciny 117 a 128 se zdají být účinnějšími: u kryptofycinů 117 je možno použít nižší celkové dávky než u kryptofycinů 1 a u kryptofycinů 128 je možno použít nižší dávky než u kryptofycinů 8. Oproti tomu jsou kryptofyciny 125 a 132 méně účinné: vyžadují vyšší celkové dávky ve srovnání s odpovídajícím kryptofycinem 1 nebo 8. Konkrétní údaje jsou uvedeny v tabulce 9.
Hodnoty T/C, které jsou nižší než 42 %, jsou charakteristické podle standardů NCI pro účinnost. Hodnoty T/C, které jsou nižší než 10 %, odpovídají podle standardů NCI vynikající účinnosti a potenciální klinické účinnosti. Veličina hrubé logaritmické usmrcení je definována výrazem T-C/3,2 Td, kde T je střední doba (dny), za kterou nádory v ošetřené skupině dosáhnou hmotnosti 750 mg, C je střední doba (dny), za kterou nádory v kontrolní skupině dosáhnou hmotnosti 750 mg a Td je doba, za kterou se zvojnásobí objem nádoru (T. H. Corbett et al., Cytotoxic Anticancer Drugs: Models and Concepts for Drug Discovery and Development, str. 35 až 87; Kluwer: Norwell, 1992). Hodnoty hrubého logaritmického usmrcení národových buněk větší než 2,8; 2,0 až 2,8; 1,3 až 1,9; 0,7 až 1,2 a menší než 0,7 při době podávání léčiva 5 až 20 dnů jsou klasifikovány stupni ++++, +++, ++, + a - (inaktivní). Pro dosažení částečné nebo úplné regrese 100 až 300mg hmotnosti většiny transplantovaných tuhých nádorů u myší je zapotřebí stupně aktivity +++ až ++++, který je charakteristický pro klinickou účinnost. Kryptofycin 52 vykazuje hodnoty T/C v rozmezí od 0 do 14% u myších nádorů a 4,1 až 16% u lidských nádorů a hodnoty hrubého logaritmického usmrcení v rozmezí od 1,1 do 2 ·· ····
- 206'• · »· • » · ·
9 99 ··» 9 9
9 · u myších nádorů a 0 až 3,2 u lidských nádorů. Kryptofycin 1 vykazuje hodnoty T/c v rozmezí od 0 do 27% a hodnoty hrubého logaritmického usmrcení od <1 až 2. Kryptofycin 55 vykazuje hodnoty T/C vyšší než 0 až 4,4 % a hodnoty hrubého logaritmického usmrcení od 2,1 až >4,6 (vyléčení), a to při všech zkouškách, s výjimkou jedné (tlustého střeva 26, hodnota hrubého logaritmického usmrcení 1,2). Kryptofycin 8 vykazuje hodnoty T/C většinou 0 % a hodnoty logaritmického usmrcení nad 2,8 (několik případů vyléčení), jak je to zřejmé z tabulky 10. Kryptofyciny 117 a 118 mají srovnatelné hodnoty T/C a hodnoty hrubého logaritmického usmrcení s příslušnými hodnotami jiných kryptofycinů epoxidového typu (jako je kryptofycin 1 a kryptofycin 52), zatímco kryptofyciny 128 a 132 mají srovnatelné hodnoty T/C a hodnoty hrubého logaritmického usmrcení s příslušnými hodnotami jiných kryptofycinů chlorofycinového typu (kryptofyciny 8 a 55).
Všechny publikace a patentové přihlášky zmiňované v tomto popisu jsou zde citovány náhradou za přenesení jejich celého obsahu do tohoto popisu, ať již je to u nich specificky uvedeno, nebo ne.
Vynález byl podrobně popsán výše pouze pro účely ilustrace a dosažení lepší srozumitelnosti. Odborníkům v tomto oboru je však zřejmé, že na základě uvedených údajů je možno vynález různým způsobem modifikovat, aniž by to znamenalo odchýlení od duchu vynálezu. Pro rozsah vynálezu jsou rozhodující připojené patentové nároky.
- 207*.r* • · • · • · · • · ·· <· ·· • · · · · • · · ·· • · ···· · • · · · • ·♦ ··
Tabulka 1
Údaje o cytotoxitě kryptofycinů a polosyntetických analogů (Údaje z Corbettovy/Valeriotovy zkoušky pro 5-fluoruracil, etoposid (VP-16) a taxol jsou uvedeny pro srovnání.)
Typ cytotoxicity [rozdíl v zonálních jednotkách (zu)]
Sloučenina jjg/disk Corbettova pg/disk zkouška3 Valeríotova zkouška^ KB IC50 ng/ml LoVo ICjq ng/ml
1 12,5 E/T(>400)c N 0,005 0,003
2 25 E/T(>400)c N 0,007 0,0002
3 25 E/T(>400)c N 0,3 0,5
4 20 E/T(>400)c N 1,3 0,5
5 2,9 E/T(>600)° N 0,02 0,02
6 250 I >100 >100
7 >750 >480
8 30 E/T(>500)c 30 N 0,0002 0,01
9 15 Nestanoveno
10 >100 >100
12 >100 >100
14 1,8 3
5-FU 2,5 M/T(>400)d 2,5 LL(>400)
VP-16 5 L(350),T(530)d 5 LL(260)
taxol 0,2 M/H/T(>400)d
aL = selektivní vůči leukémii (např. ZL121O~ZC38 a ZL1210“ZH8 - 250 zu^ M = selektivní vůči tuhému nádoru myši (napr. ^C38ZIj1210 — 250 zu)
H = selektivní vůči tuhému nádoru člověka (napr. ^H8”*zL1210 — 250 zu) • · · · · · • · • ·
- 208 Ε = stejná cytotoxicita vůči leukemické buněčné linii a linii buněk tuhého nádoru (inhibiční zóny >250 zu)
T = selektivní vůči nádoru (např zli210”ZLML' ZC38“ZLML a ZH8ZLML - 250 zu^ = neúčinný (inhibiční zóny <250)
N = neselektivní vůči nádorovým (leukémie) a normálním (CFU-GM) buněčným liniím LL = selektivní vůči lymfocytové leukémii (ZL1210“ZCFU-GM - 250 zu^
ML = selektivní vůči akutní myelogenní leukémii (AML) lZAML-ZCFU-GM - 250 zu^ c = selektivní vůči buněčným liniím citlivým na léčiva a liniím resistentním vůči léčivům (zc38”zLML' ZM17 ~ ZLML a ZH8 ZLMtP d = selektivní pouze vůči buněčným liniím citlivým na léčiva • · · · to ·
• · · • · ·· • to · - 209 - : i : · • · · · · • · ···· toto • · · · to to • to to ·· • · · · ···· • · · ·· • to to ··
Tabu 1 k a 2
Údaje o cytotoxicitě kryptofycinů in vitro
Kryptofycin KB IC50 (ng/ml) LoVo IC50 (ng/ml) SKOV3 IC50 (ng/ml)
1 0,0025 0,001 0,026
2 0,023 0,021 0,18
3 1,8 0,6 2,8
4 6 2,5 21
5 12 2 7,4
8 0,01 0,0022 0,15
12 18 3
15 12
16 0,08 0,02 0,64
17 4,7 3,9 11
18 15 4,5 23
19 9,8 5,9 41
21 0,01 0,0003 0,029
23 0,89 0,4 1,7
24 0,12 0,095 0,3
26 19 9,8 95
28 1,3 0,75 6,1
29 1 0,49 3,4
30 11 8 21
31 0,53 0,062 1,9
35 0,055 0,01 0,092
40 9,0 1,0 1,7
43 0,72 0,8 1,1
45 2,3 2,4 1,6
49 1,4 1,9 1,1
50 0,17 0,17 0,2
54 0,80 2,2 2,2
• · · ·
- 210
Tabulka 3
Účinnost kryptofycinu 1 in vivo
P. č. SC Nádor Počet i.v. Celková Ztráta těl.hmot. (nadir) (*) T/C Log. usmrcení Vyléčení
injekcí dávka (mg/kg)
1560 tlustého střeva 38 8 10,3 přírůstek 6 1,5 0/5
1694 slinivky 03 8 16,0 přírůstek 0 2,0 0/5
1636 tlustého střeva 51 7 28,1 11 7 1,3 0/5
1720 mléčné žlázy 16/C 5 13,2 1 5 1,4 0/5
1733 mléčné žlázy 16/taxol 5 16,5 0 2 1,8 0/4
1833 M17/0 (adr. sens.) 5 5,4 10 23 <1 0/5
1749 slinivky 02 5 11,0 5 20 1,1 0/5
1596 malobuněčný plic u člověka DMS273 SCID 6 7,3 0 27 <1 0/5
1806 MX-1 prsu u člověka 8 12 3 3 2,0 0/5
1823 H125 adeno- skvamosní plic 8 14,4 15 9 1,1 0/5
1841 u člověka LNCaP prostaty u člověka 6 6,5 1/5 smrt 6 26 <1 0/5
• · ·
- 211
Tabulka 4
Účinnost kryptofycinových analogů in vivo
P. č. Činidlo SC Nádor Počet i.v. injekcí Celková dávka (mg/kg) Ztráta těl.taot. (nadir) (*) T/C Log. usmrcení Vyléčení
1813 Kryptofycin 2 P03 10 37 2 44 * <1 0/5
1843 Kryptofycin 3 P03 4 28/5 9 54 » <1 0/5
.1769 Kryptofycin 5 C38 15 45 2 > 10 0 $ žádné 0/5
1825 Kryptofycin 8 P03 11 106 6 4 í 4,6 0/5
1885 Kryptofycin 8 Mam 16/C 7 21,3 4,5 6 S 2,5 0/5
1887B Kryptofycin 8 C38 6 30 2 0 i 2,8 1/5
1900 Kryptofycin 8 C51 9 67,5 1 7 i 1,8 0/5
1843 Kryptofycin 15 P03 5 18 7 83 * žádné 0/5
1878 Kryptofycin 16 P03 9 82 1 89 t žádné 0/5
1813 Kryptofycin 21 P03 9 27 11 (1/5 smrt) 61 » žádné 0/5
1843 Kryptofycin 35 P03 7 23 2 11 » 1,3 0/5
9 ·
- 212 - : :
9 • · · · · · · · · · • · 9 9 9 9 9
9 9 9 9 9 9 ·9 · 9 · 9 · 9
9 9 9 9 9
9 99 99 ./
Tabulka 5
Cytotoxicity antimitotických činidel vůči buňkám SK0V3 a SKVLB1
Na buňky se 48 hodin působí různými koncentracemi dále uvedených sloučenin. Počet buněk se stanoví způsobem popsaným výše a pro každou sloučeninu se vypočte IC5Q. Hodnoty uvedené v tabulce představují střední hodnotu ± směrodatná odchylka ze tří zkoušek.
Sloučenina Buněčná linie
SKOV3 SKVLB1 Faktor resistence
IC50 (nM)
Vinblastin 0,35 + 0,25 4200 ± 1700 12 000
Taxol 1 + 0/4 8000 + 2000 8 000
Kryptofyciny 0,007 í 0,002 o, 60 ± 0,19 86
- 213
../
Tabulka 6
Cytotoxicita kryptofycinů in vitro
Kryptofycin KB IC50 (nM)
LoVo IC50 (nM)
1 0,0092 0,0104
3 3,1-4,6 1,9-5,8
8 0,019 0,0091
51 3,5 5,2
52 0,043 0,070
53 4,2 5,5
55 0,033 0,047
57 0,064 0,27
58 0,048 0,20
61 21 15
81 5,5 5,7
82 310 45
90 0,34 0,30
91 30 34
97 3,6 5,7
110 4,6 5,3
111 4,8 3,2
112 5,4 6,2
115 0,039 0,048
117 0,036 0,031
118 2,3 1,2
119 4,4 6,1
120 4,6 6,4
122 0,021 6,9
125 0,05 0,006
127 0,176 0,075
128 0,023 2,5
132 0,082 0,037
• ·· · • · · · · • · · · · · · • · · · · · • · ····· » — ΟΊΑ— ·· · ··· — ·« ··· ·» «
Tabulka 7
Účinnost kryptofycinu 52 in vivo (souhrn)
P. SC Nádor Celková Počet Ztráta T/C m Částečná Úplná regrese regrese Log^ usmrcení nádor. buněk Vyléčení (bez nádoru) Den bez nádoru Účinnost
č. dávka injekcí těl.hmot.
(mg/kg) (nadír)
Lidské nádory
2069* B116 30 4 6,3 4,1 2/5 0/5 2,4 0/5 84 +++
tlustého
střeva
2072* LNCaP 48 8 4,8 6,9 5/5 1/5 3,2 0/5 66 ++++
prostaty
2075* Glb/Panc 48 9 2,3 16 — — žádné 0/5 68 —
2087* H125 plic injekční podávání probíhá
Myší nádory
2063 Mam 24 12 4,7 10 ... 1,6 0/5 18 ++
17/Adr
2065 26/A 64 10 14,0 14 — — 1,1 0/5 24 +
tlustého
střeva
2068* 38 55 8 22 0 1/5 1/5 1,6 0/5 95 ++
tlustého
střeva
2080* Mam 16/C 30 3 1,6 5 — — 1,2 1/5 59 ++
2082 Mam 36 4 0 2 — — 2 0/5 22 +++
16/C/Adr.
2088* Pane 02 injekční podávání probíhá
*pokračuj e
- 215 ·· ···· · · ·· • * · · · · · • * · * · · · • ·· · ···· · • · · · · · ·· ·· ··
Tabulka 8
Účinnost kryptofycinu 52 in vivo (souhrn)
P. SC Nádor v c. Celková dávka (mg/kg) Počet injekcí Ztráta těl.hmot. (nadir) 0) T/C P) Částečná regrese Úplná regrese Log10 usmrceni nádor. buněk Vyléčení (bez nádoru) Den bez Účinnost nádoru
Lidské nádory
2066* TSU prostaty 298,5 10 8,1 0 5/5 5/5 4,0 2/5 d 94 ++++
2O69**H116 315* 7 10,4 0 4/5 3/5 6,3 2/5 d 84 ++++
tlustého 157,5 7 7,6 8 4/5 0/5 3,6 0/5 d 84 ++++
střeva
2072**LNCaP 300 12 3,1 0 5/5 5/5 5,9 3/5 d 77 ++++
prostaty 200 5 7,7 0 4/5 3/5 6,0 0/5 d 77 ++++
2075**Glb/Panc 320 8 0,0 4,4 — — >2 1/5 d 68 +++
2087 H125 plic injekční podávání probíhá
Myší nádory
2064**Mam 16/C 144 10 7,5 0 — — 3,9 0/5 d 92 ++++
2065 26 260 10 2 0 — — 1,2 0/5 d 24 +
tlustého
střeva
2068 38 237 8 13 0 5/5 4/5 4,7 0/5 d 95 ++++
tlustého
střeva
2070**Panc 03 402 6 6,0 0 — — >4,5 5/5 d 84 ++++
270 6 5,0 0 — — >4,5 4/5 d 84 ++++
180 4 0,8 0 — — >4,5 4/5 d 84 ++++
2071**Ham 17/adr. 180 6 4,7 0 — — 2,1 0/5 d 18 +++
2082 Haml6/C/adr.l80 6 1,7 0 — — 2,4 0/5 d 22 +++
2088 Pane 02 injekční podávání probíhá
* 1/5 smrt následkem léčiva * je pokus pokračuje
- 216 φφ φφφ· «φ φφ
Tabulka 9
Účinnost kryptofycinových analogů proti časnému stádiu Pane 03 myších samců BDF^
Klec Činidlo č. Počet i.v. injekcí Celková dávka (mg/kg) Smrt násled- kem léčiva Změna těl.hmot. (%)/(den) Střední velikost nádoru v den 14/ (rozmezí) T/C Bez nádoru (i) den 14
1 bez Rx — — — +6,8/(12) 830 (393-1458) — 0/5
2 Kryptofycin 117 1 7,0 3/4 -20,0/(12) 0 (jedna myš) 0 1/4
3 6 13,5 1/4 -8,2/(13) 75 (0-256) 9 1/4
4 6 6,75 0/3 -2,4/ (8) 247 (80-415) 30 0/3
5 Kryptofycin 125 7 42 0/4 0/ (10) 0 (0-63) 0 3/4
6 7 21 0/4 -1,6/(10) 101 (0-126) 12 1/4
7 7 10,5 0/4 0/ (8) 295 (264-467) 35 0/4
8 Kryptofycin 128 3 57 1/4 -15,2/(10) 0 (vždy nula) 0 3/4
9 4 32,5 0/4 -5,7/ (6) 0 (vždy nula) 0 4/4
10 4 16,25 0/4 0/ (12) 0 (vždy nula, 0 4/4
11 Kryptofycin 132 6 180 0/4 -5,7/(10) 0 (vždy nula) 0 4/4
12 6 90 0/4 -3,3/ (8) 0 (vždy nula) 0 4/4
13 6 45 0/4 1,7/(10) 304 (108-505) 37 0/4
Nádory byly implantovány v den 0; ošetření léčivem bylo zahájeno v den 3. Od 14 dne vypadají všechny myši v dobrém stavu a jejich hmotnost se zvyšuje. Nemělo by dojít k dalším úmrtím následkem léčiva.
- 217 • t *« ► · · » · ·« ·« « · • 9
9· 9·
Tabulka 10
Účinnost kryptofycinu 8 in vivo
P. SC Nádor Počet i.v. Celková Změna T/C Hrubé Vyléčení
č. injekcí dávka těl.hmot, P) log.
(mg/kg) (nadir) usmrcení
(M
1825B slinivky 03 11 106 -6 4 4,6 0/5
1917 slinivky 03 12 60 -1 0 2,8 0/5
1885A mléčné
žlázy 16/C 7 21,3 -4,5 6 2,5 0/5
1887B t tlustého
střeva 38 6 30 +2 0 3,0 0/5
1954 tlustého
střeva 38 11 132 -8 0 >4,5 5/5
11 88 -6 0 >4,5 4/5
1965 tlustého
střeva 26 10 100 -5,4 0 2,3 0/5
2007 vaječníků 6 80 -3,5 0 >2 2/5
115 (d 20)
8 80 0 >2 1/5
(d 20)
1994 mléčné
žlázy 17/adr 9 53,1 -0,9 0 3,2 0/5
9 36,9 -1,8 0 2,6 0/5
1990 mléčné
žlázy 16/C/ad r 7 55 -6 0 2,5 0/5
2001 pankreatu 02 9 125 -3,5 0 >2 1/5
(d 25)
1931 9 67,5 -6 18 1,8 0/5
- 218 ·· · ·· ··· · « · · · ··· · · • · · ·· ·· tabulka 10 - pokračování
P. č. SC Nádor Počet i.v. injekcí Celková dávka (mg/kg) « Změna těl.hmot. (nadir) (») T/C W Hrubé log. usmrcení Vyléčení
1974 leukémie IV P388 7 91 -11 50 2,3 0/5
1924 tlustého střeva 51 9 67,5 -6 ILS 7 2,2 0/5
1946 MX-1 prsu 11 50 -5,9 0 >4,5 3/5
u člověka 11 34,2 -4,5 0 4,5 1/5
1952 adenoskvam. 8 96 +3,8 0 1,8 0/5
lidských 8 57,5 +9,8 0 1,6 0/5
1983 plic H125 lidské pro- 7 94,5 -3,4 0 >4 5/5
státy TSU 7 66,5 -3,3 0 3,5 0/5
1978 lidské pro- 8 96 +3,1 7,3 1,6 0/5
státy PC-3 8 67,2 +3,6 14,7 0,9 0/5
1980 tlustého 8 108 -6,7 5/5* * 3,8 0/5
střeva u člověka H116 8 75 -6,7 4/5* 3,5 0/5
v pokročilém stádiu 8 53 -3,3 1/5* 2,9 0/5
1979 lidské pro- 6 81 -3,2 5/5** 9,1*** 4/5
státy LNCaP 6 57 -3,4 5/5** 7,1*** 4/5
v pokročilém 6 40,2 -3,2 5/5** 8,0*** 2/5
stádiu
* částečná regrese
JU uplna regrese * omezený počet nového nárůstu nádorů pro výpočet

Claims (61)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY kde (I)
    Ar
    Rpředstavuje methylskupinu, fenylskupinu nebo kteroukoliv jednoduchou nesubstituovanou nebo substituovanou aromatickou nebo heteroaromatickou skupinu;
    představuje atom halogenu, merkaptoskupinu, aminoskupinu, monoalkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, trialkylamoniumskupinu, alkylthioskupinu, dialkylsulfoniumskupinu, sulfátovou nebo fosfátovou skupinu;
    představuje hydroxyskupinu nebo merkaptoskupinu; nebo
    Rj a R2 brány dohromady tvoří epoxidový, aziridinový, episulfidový, sulfátový nebo monoalkylfosfátový kruh; nebo
    Rx a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C18 a C19;
    představuje nižší alkylskupinu;
    •9 9999
    - 220 « 9 99 99
    9 9 9 9 9
    9 9 9 9 9 9
    9 9 9 9 9
    99 999 99
    99 99
    9 9 9 9
    9 9 99
    99 9 9 9
    9 9 9
    99 99 ,ι
    R4 a R5 představují atomy vodíku; nebo
    R4 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14;
    Rg představuje benzylskupinu, hydroxybenzylskupinu, alkoxybenzylskupinu, halogenhydroxybenzylskupinu, dihalogenhydroxybenzylskupinu, halogenalkoxybenzylskupinu nebo dihalogenalkoxybenzylskupinu;
    R7, R8, Rg a R10 představuje každý nezávisle atom vodíku nebo nižší alkylskupinu; a
    X a Y představuje každý nezávisle atom kyslíku, iminoskupinu nebo alkylaminoskupinu.
  2. 2. Kryptofycinová sloučeniny podle nároku l obecného vzorce I, kde R8 představuje ethylskupinu, propylskupinu, isopropylskupinu, butylskupinu, isobutylskupinu, pentylskupinu nebo isopentylskupinu.
  3. 3. Kryptofycinové sloučeniny podle nároku 1 obecného vzorce I, kde R? představuje ethylskupinu, propylskupinu, isopropylskupinu, butylskupinu, isobutylskupinu, pentylskupinu nebo isopentylskupinu.
  4. 4. Kryptofycinové sloučeniny podle nároku l obecného vzorce I, kde R7 představuje atom vodíku, R8 představuje methylskupinu, R3 představuje methylskupinu; a X a Y nepředstavují oba atom kyslíku.
  5. 5. Kryptofycinové sloučeniny podle nároku 1 obecného vzorce I, kde R3 představuje ethylskupinu, propylskupinu, isopropylskupinu, butylskupinu, isobutylskupinu, pentylskupinu nebo isopentylskupinu.
    • · • · · φ
    - 221
    Φ φ • φ • φ • φ ΦΦ φφφ φ φ · φφφ φφφ φφφ
    ΦΦ φ
    ΦΦ ΦΦ φ φ · · φ φφφ • ΦΦΦ · » · φ ·· ··
  6. 6. Kryptofycinové sloučeniny podle nároku 1 obecného vzorce I, kde Rg představuje methylskupinu, ethylskupinu, propylskupinu, butylskupinu, isobutylskupinu, pentylskupinu nebo isopentylskupinu.
  7. 7. Kryptofycinové sloučeniny podle nároku 1 obecného vzorce I, kde R10 představuje methylskupinu, ethylskupinu, propylskupinu, butylskupinu, isobutylskupinu, pentylskupinu nebo isopentylskupinu.
  8. 8. Kryptofycinové sloučeniny podle nároku 1 obecného vzorce I, kde alespoň jedna ze skupin vázaných k uhlíkovému atomu C3, Cg, C10, Clg, C17 a Clg vykazuje R-stereochemii.
  9. 9. Kryptofycinové sloučeniny podle nároku 1 obecného vzorce I, kde alespoň jedna ze skupin vázaných k uhlíkovému atomu C3, Cg, C10, Clg, C17 a Clg vykazuje S-stereochemii.
  10. 10. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce I, kde Ar představuje fenylskupinu, R3 a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy c18 a C19' R3' r7 a r8 Představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy c13 a c14' r6 Představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu,
    Rg představuje isobutylskupinu, R10 představuje atom vodíku a X a Y představují atomy kyslíku.
  11. 11. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce I, kde Ar představuje fenylskupinu, R·^ a R2 brány dohromady tvoří R,R-epoxidový kruh, R3, R7 a Rg představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a Cj4, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje
    9 · · • 9
    - 222
    9 9 99
    9 · 9 • · ·
    9 9 9 • 9 999 »9
    99 99
    9 9 9 9 • 9 9 9
    99 9 9 9
    9 9 9
    99 99 isobutylskupinu, R10 představuje atom vodíku a X a Y představují atomy kyslíku.
  12. 12. Kryptofycinová sloučenina podle nároku l obecného vzorce I, kde Ar představuje fenylskupinu, Rj a R2 brány dohromady tvoří S,S-epoxidový kruh, R3, R? a Rg představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, R10 představuje atom vodíku a X a Y představují atomy kyslíku.
  13. 13. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce I, kde Ar představuje fenylskupinu, Rj představuje S-chlor, R2 představuje R-hydroxyskupinu, R3, R? a Rg představují methylskupiny, R4 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, R10 představuje atom vodíku a X a Y představují atomy kyslíku.
  14. 14. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce I, kde Ar představuje fenylskupinu, Rj a R2 brány dohromady tvoří R,R-epoxidový kruh, R3, R? a Rg představují methylskupiny, R4 a R5 představují atomy vodíku Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, R10 představuje atom vodíku a X a Y představují atomy kyslíku.
  15. 15. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce I, kde Ar představuje fenylskupinu, Rj představuje S-chlor, R2 představuje R-hydroxyskupinu, R3, R7 a Rg představují methylskupiny, R4 a R5 představují atomy vodíku, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg • 9
    - 223 • · · ·
    9 9 99
    99 9 9 9
    9 9 9
    99 99 představuje isobutylskupinu, Rg0 představuje atom vodíku a X a Y představují atomy kyslíku.
  16. 16. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce I, kde Ar představuje fenylskupinu, Rg a R2 brány dohromady tvoří R,R-episulfidový kruh, R3, R7 a Rg představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy Cg3 a Cg4, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rgg představuje atom vodíku a X a Y představují atomy kyslíku.
  17. 17. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce I, kde Ar představuje p-methoxy fenyl skupinu, Rg a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy Cgg a Cgg, R3 a R? představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy Cg3 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu,
    R9 představuje isobutylskupinu, Rg a Rg0 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku.
  18. 18. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce I, kde Ar představuje methylskupinu, Rg a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy Cgg a Cgg, R3 a R? představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy Cg3 a Cg4, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a Rg0 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku.
  19. 19. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce I, kde Ar představuje methylskupinu, Rg a R2 brány dohromady tvoří R,R-epoxidový kruh, R3 a R7 představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy Cg3 a C14, Rg představuje
    224 • 4 ft ·· · · · · · · ·· ···· · · · · · · · • · ····· * ··· · · • · · · · · ··« «· ··· ·· · ·· ··
    3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku.
  20. 20. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce I, kde Ar představuje methylskupinu, R·^ a R2 brány dohromady tvoří S,S-epoxidový kruh, R3 a R7 představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje
    3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku.
  21. 21. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce I, kde Ar představuje fenylskupinu, R-^ a R2 brány dohromady tvoří R,R-aziridinový kruh, R3, R7 a Rg představují methylskupiny, R4 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, R10 představuje atom vodíku a X a Y představují atomy kyslíku.
  22. 22. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce I, kde Ar představuje p-fluorfenylskupinu, Rj a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy Clg a Clg, R3 a R? představují methylskupiny, R4 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy c13 a c14' r6 Představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu,
    Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku.
  23. 23. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce I, kde Ar představuje p-tolylskupinu, Rj a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy c18 a c19' r3 a r7 Představují methylskupiny, R4 a Rg brány
    - 225
    AA · ·· • · · • ·
    A AA
    A AA A A
    A AAAA
    A AAAA
    A A AAA A · A AAA
    A AAAA dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy c13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, R8 a Rlo představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku.
  24. 24. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obec něho vzorce I, kde Ar představuje 2-thienylskupinu, Rj a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy Clg a Cig, R3 a R? představují methylskupiny, R4 a R brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy c13 a c14' r6 Představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku.
  25. 25. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obec ného vzorce I, kde Ar představuje p-fluorfenylskupinu, Rj^ a R2 brány dohromady tvoří R,R-epoxidový kruh, R3 a R? představují methylskupiny, R4 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku.
  26. 26. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obec ného vzorce I, kde Ar představuje p-fluorfenylskupinu, Rj a R2 brány dohromady tvoří s,S-epoxidový kruh, R3 a R? představují methylskupiny, R4 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku.
  27. 27. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obec ného vzorce I, kde Ar představuje p-tolylskupinu, R^ a R2 brány dohromady tvoří R,R-epoxidový kruh, R3 a R7 předsta226
    ·· • Φ • ·· ·· • ···· • · ·· • · ·· • • • • « · • e • ·· · • • • • • • • · • • • ·· ··· ·· • ·· ··
    vují methylskupiny, R4 a Rg brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy Cg3 a Cg4, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a Rlo představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku.
  28. 28. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obec něho vzorce I, kde Ar představuje p-tolylskupinu, Rg a R2 brány dohromady tvoří S,S-epoxidový kruh, R3 a R7 představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a Cg4, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a Rg0 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku.
  29. 29. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obec něho vzorce I, kde Ar představuje 2-thienylskupinu, Rg a R brány dohromady tvoří R,R-epoxidový kruh, R3 a R7 představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy Cg3 a Cg4, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a Rg0 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku.
  30. 30. Kryptofycinová sloučenina podle nároku l obec něho vzorce I, kde Ar představuje 2-thienylskupinu, Rg a R brány dohromady tvoří S,S-epoxidový kruh, R3 a R7 představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy Cg3 a Cg4, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a Rg0 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku.
  31. 31. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obec ného vzorce I, kde Ar představuje fenylskupinu, Rg a R2
    - 227 • · · · · :
    brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy c18 a c19' r3 a r7 Představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku, X představuje atom kyslíku a Y představuje atom dusíku nesoucí jediný atom vodíku.
  32. 32. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce I, kde Ar představuje fenylskupinu, R·^ a R2 brány dohromady tvoří R,R-epoxidový kruh, R3 a R7 představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a Rlo představují atomy vodíku, X představuje atom kyslíku a Y představuje atom dusíku nesoucí jediný atom vodíku.
  33. 33. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce I, kde Ar představuje fenylskupinu, Rj a R2 brány dohromady tvoří S,S-epoxidový kruh, R3 a R7 představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku, X představuje atom kyslíku a Y představuje atom dusíku nesoucí jediný atom vodíku.
  34. 34. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce I, kde Ar představuje p-chlorfenylskupinu, Rj a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy Clg a Clg, R3 a R? představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy c13 a C141 r6 představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu,
    228
    Rg představuje isobutylskupinu, R8 a R10 představují atomy vodíku, X a Y představují atomy kyslíku.
  35. 35. Kryptofycinová sloučenina podle nároku l obec něho vzorce I, kde Ar představuje p-chlorfenylskupinu, Ra R2 brány dohromady tvoří R,R-epoxidový kruh, R3 a R7 představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, R8 a R10 představují atomy vodíku, X a Y představují atomy kyslíku.
  36. 36. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obec něho vzorce I, kde Ar představuje p-chlorfenylskupinu, R^ a R2 brány dohromady tvoří S,S-epoxidový kruh, R3 a R? představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, R8 a R10 představují atomy vodíku, X a Y představují atomy kyslíku.
  37. 37. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obec ného vzorce I, kde Ar představuje fenylskupinu, R-^ představuje S-chlor, R2 představuje R-hydroxyskupinu, R3 a R? představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku,
    X představuje atom kyslíku a Y představuje atom dusíku nesoucí jediný atom vodíku.
  38. 38. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obec ného vzorce I, kde Ar představuje p-tolylskupinu, R^ představuje S-chlor, R2 představuje R-hydroxyskupinu, R3 a R7 představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří
    229 dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku.
  39. 39. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obec něho vzorce I, kde Ar představuje p-tolylskupinu, Rj představuje R-chlor, R2 představuje S-hydroxyskupinu, R3 a R7 představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku.
  40. 40. Kryptofycinová sloučenina podle nároku l obec něho vzorce I, kde Ar představuje p-tolylskupinu, Rj představuje R-chlor, R2 představuje R-hydroxyskupinu, R3 a R7 představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a Rlo představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku.
  41. 41. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obec něho vzorce I, kde Ar představuje p-chlorfenylskupinu, Rx představuje S-chlor, R2 představuje R-hydroxyskupinu, R3 a R7 představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku.
  42. 42. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obec něho vzorce I, kde Ar představuje p-chlorfenylskupinu, Rpředstavuje R-chlor, R2 představuje S-hydroxyskupinu, R3
    230 a R7 představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku.
  43. 43. Kryptofycinová sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce I, kde Ar představuje p-chlorfenylskupinu, Rj představuje R-chlor, R2 představuje R-hydroxyskupinu, R3 a R? představují methylskupiny, R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14, Rg představuje 3-chlor-4-methoxybenzylskupinu, Rg představuje isobutylskupinu, Rg a R10 představují atomy vodíku a X a Y představují atomy kyslíku.
  44. 44. Způsob výroby kryptofycinových sloučenin, vyznačující se tím, že zahrnuje výběr allylicky substituovaného E-alkenu; přesmyk allylicky substituovaného E-alkenu za použití stereospecifického Wittigova přesmyku; převedení této sloučeniny na první δ-aminokyselinu nebo δ-hydroxykyselinu; kopulaci první kyseliny s druhou α-aminokyselinou za vzniku první podjednotky; kopulaci třetí β-aminokyseliny se čtvrtou α-hydroxykyselinou nebo a-aminokyselinou za vzniku druhé pod- jednotky; a kopulaci první podjednotky s druhou podjednotkou za vzniku kryptofycinu.
  45. 45. Způsob podle nároku 44, vyznačující se t i m , že se vyrábějí kryptofycinové sloučeniny obecného vzorce I c · 9 · · · kde
    - 231 • · 9 · • · · ·· 9 (I)
    Ar
    R·.
    R.
    představuje methylskupinu, fenylskupinu nebo kterou koliv jednoduchou nesubstituovanou nebo substituovanou aromatickou nebo heteroaromatickou skupinu;
    představuje atom halogenu, merkaptoskupinu, aminoskupinu, monoalkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, trialkylamoniumskupinu, alkylthioskupinu, dialkylsulfoniumskupinu, sulfátovou nebo fosfátovou skupinu;
    představuje hydroxyskupinu nebo merkaptoskupinu; nebo
    R^ a R2 brány dohromady tvoří epoxidový, aziridinový, episulfidový, sulfátový nebo monoalkylfosfátový kruh; nebo
    Rj a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C18 a Cig;
    R? představuje nižší alkylskupinu;
    232
    R4 a Rg představují atomy vodíku; nebo
    R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14;
    Rg představuje benzylskupinu, hydroxybenzylskupinu, alkoxybenzylskupinu, halogenhydroxybenzylskupinu, dihalogenhydroxybenzylskupinu, halogenalkoxybenzylskupinu nebo dihalogenalkoxybenzylskupinu;
    R7, Rg, Rg a R10 představuje každý nezávisle atom vodíku nebo nižší alkylskupinu; a
    X a Y představuje každý nezávisle atom kyslíku, iminoskupinu nebo alkylaminoskupinu.
  46. 46. Způsob podle nároku 45, vyznačující se t i m , že Ar představuje fenylskupinu; R3 představuje methylskupinu; Rg představuje halogenmethoxybenzylskupinu;
    R7 představuje atom vodíku; Rg představuje methylskupinu;
    Rg představuje isobutylskupinu; R10 představuje atom vodíku; X představuje atom kyslíku a Y představuje atom kyslíku.
  47. 47. Způsob podle nároku 44, vyznačující se t i m , že se vyrábějí kryptofycinové sloučeniny obecného vzorce
    O
    233 kde
    Rj představuje atom halogenu; a
    R2 představuje hydroxyskupinu; nebo
    R-^ a R2 brány dohromady tvoří epoxidový kruh;
    R3 představuje atom vodíku; a
    R4 představuje atom vodíku; nebo
    Rg a R4 brány dohromady představují dvojnou vazbu.
  48. 48. Farmaceutický prostředek, který je užitečný pro inhibici proliferace hyperproliferativní savčí buňky, vyznačující se tím, že zahrnuje účinné množství kryptofycinové sloučeniny obecného vzorce I
    Ar představuje methylskupinu, fenylskupinu nebo kterou koliv jednoduchou nesubstituovanou nebo substituovanou aromatickou nebo heteroaromatickou skupinu;
    R^ představuje atom halogenu, merkaptoskupinu, aminoskupinu, monoalkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, trialkylamoniumskupinu, alkylthioskupinu, dialkylsulfoniumskupinu, sulfátovou nebo fosfátovou skupinu;
    • · · · · <
    - 234 - »· • * !
    • a to
    R2 představuje hydroxyskupinu nebo merkaptoskupinu;
    nebo
    Rj a R2 brány dohromady tvoři epoxidový, aziridinový, episulfidový, sulfátový nebo monoalkylfosfátový kruh; nebo
    R^ a R2 brány dohromady tvoři dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy Clg a Clg;
    R3 představuje nižší alkylskupinu;
    R4 a R5 představují atomy vodíku; nebo
    R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14;
    Rg představuje benzylskupinu, hydroxybenzylskupinu, alkoxybenzylskupinu, halogenhydroxybenzylskupinu, dihalogenhydroxybenzylskupinu, halogenalkoxybenzylskupinu nebo dihalogenalkoxybenzylskupinu;
    R7, Rg, Rg a R10 představuje každý nezávisle atom vodíku nebo nižší alkylskupinu; a
    X a Y představuje každý nezávisle atom kyslíku, iminoskupinu nebo alkylaminoskupinu;
    a farmaceuticky vhodný nosič.
  49. 49. Farmaceutický prostředek podle nároku 48, vyznačující se tím, že dále zahrnuje alespoň jedno další antineoplastické činidlo.
    - 235
    • » • • • • · • ·· «·« · • · • » • · • 9 • • « • « · • · 9 ·· · ·. « • • • • « • • • ♦· « *· ·· » • · 9 ·
  50. 50. Kryptofycinové sloučeniny obecného vzorce I
    Ar představuje methylskupinu, fenylskupinu nebo kterou koliv jednoduchou nesubstituovanou nebo substituovanou aromatickou nebo heteroaromatickou skupinu;
    představuje atom halogenu, merkaptoskupinu, aminoskupinu, monoalkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, trialkylamoniumskupinu, alkylthioskupinu, dialkylsulfoniumskupinu, sulfátovou nebo fosfátovou skupinu;
    R2 představuje hydroxyskupinu nebo merkaptoskupinu;
    nebo
    Rj a R2 brány dohromady tvoří epoxidový, aziridinový, episulfidový, sulfátový nebo monoalkylfosfátový kruh; nebo
    Rj a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C18 a Cig;
    R3 představuje nižší alkylskupinu;
    R4 a R5 představují atomy vodíku; nebo
    9 9 9 9 9 9 9
    9 9 9 9 9 9 9
    9 99 9 9999 9
    9 9 9 9 9 9
    9 9999
    R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a C14;
    R6 představuje benzylskupinu, hydroxybenzylskupinu, alkoxybenzylskupinu, halogenhydroxybenzylskupinu, dihalogenhydroxybenzylskupinu, halogenalkoxybenzylskupinu nebo dihalogenalkoxybenzylskupinu;
    Ry, Rg, Rg a Rjq představuje každý nezávisle atom vodíku nebo nižší alkylskupinu; a
    X a Y představuje každý nezávisle atom kyslíku, iminoskupinu nebo alkylaminoskupinu;
    pro inhibici proliferace savčích buněk.
  51. 51. Kryptofycinové sloučeniny podle nároku 50 spolu s alespoň jedním dalším antineoplastickým činidlem pro inhibici proliferace savčích buněk..
  52. 52. Kryptofycinové sloučeniny podle nároku 50, kde savčí buňky jsou hyperproliferativní.
  53. 53. Kryptofycinové sloučeniny podle nároku 52, kde hyperproliferativní buňky jsou lidské.
  54. 54. Kryptofycinové sloučeniny obecného vzorce I φφ φ φφ φφφφ φφ φφ φφφφ φφ φ φφφφ φφφ φφφ φφφφ φ φ φφφφφ φφφφφ φ _ _ „ φ φ φ φφφ φφφ — 237 — ♦· ·· ·· ·· kde
    Ar představuje methylskupinu, fenylskupinu nebo kterou koliv jednoduchou nesubstituovanou nebo substituovanou aromatickou nebo heteroaromatickou skupinu; R1 představuje atom halogenu, merkaptoskupinu, aminoskupinu, monoalkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, trialkylamoniumskupinu, alkylthioskupinu, dialkylsulfoniumskupinu, sulfátovou nebo fosfátovou skupinu; R2 představuje hydroxyskupinu nebo merkaptoskupinu; nebo R^ a R2 brány dohromady tvoří epoxidový, aziridinový, episulfidový, sulfátový nebo monoalkylfosfátový kruh; nebo R1 a R2 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy Clg a C19; R3 představuje nižší alkylskupinu; R4 a R5 představují atomy vodíku; nebo R4 a R5 brány dohromady tvoří dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy C13 a c14; R6 představuje benzylskupinu, hydroxybenzylskupinu, alkoxybenzylskupinu, halogenhydroxybenzylskupinu, dihalogenhydroxybenzylskupinu, halogenalkoxybenzylskupinu nebo dihalogenalkoxybenzylskupinu;
    99 9 99 9999 99 99
    99 99 99 9 99«·
    238
    99 99999 9 999 9 9
    999 · 9 9 999
    99 999 9» 9 «999
    Ry, Rg, Rg a R10 představuje každý nezávisle atom vodíku nebo nižší alkylskupinu; a
    X a Y představuje každý nezávisle atom kyslíku, iminoskupinu nebo alkylaminoskupinu;
    pro narušení dynamického stavu polymerace a depolymerace mikrotubulů za účelem zastavení buněčné mitosy, a tedy inhibici proliferace hyperproliferativních savčích buněk vykazujících fenotyp resistence vůči několika léčivům.
  55. 55. Kryptofycinové sloučeniny podle nároku 54 spolu s alespoň jedním dalším antineoplastickým činidlem pro narušení dynamického stavu polymerace a depolymerace mikrotubulů za účelem zastavení buněčné mitosy, a tedy pro inhibici proliferace hyperproliferativních savčích buněk vykazujících fenotyp resistence vůči několika léčivům..
  56. 56. Kryptofycinové sloučeniny podle nároku 54, kde savčí buňky jsou lidské.
  57. 57. Farmaceutický prostředek podle nároku 48 pro zmírňování patologických stavů vyvolaných hyperproliferujícími savčími buňkami.
  58. 58. Farmaceutický prostředek podle nároku 57, kde savčí buňky jsou lidské.
  59. 59. Farmaceutický prostředek podle nároku 57 pro kombinační léčbu s alespoň jednou přídavnou léčbou zaměřenou na zmírnění patologického stavu.
  60. 60. Farmaceutický prostředek podle nároku 57, kde patologický stav je charakterizován tvorbou novotvarů.
    • ·
    239 ··· · « · « « » ·
  61. 61. Farmaceutický prostředek podle nároku 60, kde novotvary jsou zvoleny ze souboru zahrnujícího novotvary prsu, malobuněčné plic, ne-malobuněčné plic, kolorektální, leukémie, melanomy, pankreatický adenokarcinom, novotvary centrálního nervového systému (CNS), vaječníků, prostaty, sarkomy měkkých tkání nebo kostí, novotvary hlavy a krku, novotvary zažívacího traktu, včetně slinivky, jícnu a žaludku, myelomy, novotvary močového měchýře, ledvin a neuro endokrinní novotvary, včetně thyroidních, nehodgkinských a Hodgkinovy choroby.
CZ972781A 1995-03-07 1996-03-07 Kryptofycinové sloučeniny, způsob jejich výroby a farmaceutické prostředky na jejich bázi CZ278197A3 (cs)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/400,057 US6013626A (en) 1993-12-21 1995-03-07 Cryptophycins from synthesis
US08/482,141 US5952298A (en) 1993-12-21 1995-06-07 Cryptophycins

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ278197A3 true CZ278197A3 (cs) 1998-12-16

Family

ID=27016884

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ972781A CZ278197A3 (cs) 1995-03-07 1996-03-07 Kryptofycinové sloučeniny, způsob jejich výroby a farmaceutické prostředky na jejich bázi

Country Status (23)

Country Link
EP (1) EP0830136B1 (cs)
JP (1) JP4181632B2 (cs)
CN (1) CN1165337C (cs)
AP (1) AP737A (cs)
AT (1) ATE279935T1 (cs)
AU (1) AU723652B2 (cs)
BG (1) BG63289B1 (cs)
CZ (1) CZ278197A3 (cs)
DE (1) DE69633667T2 (cs)
ES (1) ES2230561T3 (cs)
FI (1) FI973591A0 (cs)
GE (1) GEP20002206B (cs)
HK (1) HK1009747A1 (cs)
HU (1) HU225041B1 (cs)
MD (1) MD2196B2 (cs)
NO (1) NO326685B1 (cs)
NZ (1) NZ305571A (cs)
OA (1) OA10614A (cs)
PL (1) PL185949B1 (cs)
RO (1) RO118931B1 (cs)
SK (1) SK119997A3 (cs)
TJ (1) TJ347B (cs)
WO (1) WO1996040184A1 (cs)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2000501067A (ja) * 1995-08-30 2000-02-02 イーライ・リリー・アンド・カンパニー 医薬化合物
AU722492B2 (en) * 1996-08-30 2000-08-03 University Of Hawaii Pharmaceutical compounds
US6680311B1 (en) 1996-08-30 2004-01-20 Eli Lilly And Company Cryptophycin compounds
JP2001500484A (ja) * 1996-08-30 2001-01-16 イーライ・リリー・アンド・カンパニー 医薬化合物の製造法
WO1998009988A1 (en) * 1996-09-06 1998-03-12 Eli Lilly And Company Process to prepare pharmaceutical compounds
WO1998009601A2 (en) * 1996-09-06 1998-03-12 Eli Lilly And Company Process to prepare pharmaceutical compounds
CA2263764A1 (en) * 1996-09-06 1998-03-12 Michael John Martinelli Process and novel intermediates
JP2001513775A (ja) * 1997-02-26 2001-09-04 イーライ・リリー・アンド・カンパニー トリペプチドおよびテトラペプチド医薬化合物
EA002547B1 (ru) * 1997-02-26 2002-06-27 Эли Лилли Энд Компани Способ селективного эпоксидирования для получения лекарственных соединений
EP0870510A3 (en) * 1997-04-11 1999-09-15 Eli Lilly And Company Synergistic combination comprising cryptophycin derivatives and microtubule synergizing agents
EP0870506A1 (en) * 1997-04-11 1998-10-14 Eli Lilly And Company Compositions comprising a cryptophycin compound in combination with a synchronizing or activating agent for treating cancer
EP0870501A1 (en) * 1997-04-11 1998-10-14 Eli Lilly And Company Use of specific cryptophycin derivatives for the manufacture of a medicament in the treatment of fungal infections
US6103913A (en) * 1998-10-16 2000-08-15 Eli Lilly And Company Process for preparing enollactone derivatives
IL142565A0 (en) * 1998-10-16 2002-03-10 Lilly Co Eli Stereoselective process for producing antineoplastic agents
US6376230B1 (en) 1998-10-16 2002-04-23 Eli Lilly And Company Stereoselective process for producing intermediates of cryptophycins
AU1930100A (en) * 1998-12-07 2000-06-26 Eli Lilly And Company Crotylboration process to produce cryptophycin compounds
US6372936B1 (en) * 1999-06-09 2002-04-16 Eli Lilly And Company Optical resolution of aminoisobobutyric acid
FR2947269B1 (fr) 2009-06-29 2013-01-18 Sanofi Aventis Nouveaux composes anticancereux

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4868208A (en) * 1988-07-15 1989-09-19 Merck & Co., Inc. Antifungal agent and method
US4946835A (en) * 1988-07-15 1990-08-07 Merck & Co., Inc. Antifungal fermentation product and method
US4845086A (en) * 1988-08-09 1989-07-04 Merck & Co., Inc. Antifungal agent
US4845085A (en) * 1988-08-09 1989-07-04 Merck & Co., Inc. Antifungal agent
DE69427706T2 (de) * 1993-12-21 2001-10-25 Univ Hawaii Honolulu Cryptophycine

Also Published As

Publication number Publication date
NO974105L (no) 1997-11-05
MD970313A (en) 1999-06-30
WO1996040184A1 (en) 1996-12-19
AU5360396A (en) 1996-12-30
AP737A (en) 1999-03-15
AU723652B2 (en) 2000-08-31
HUP9801880A3 (en) 1999-08-30
BG101875A (en) 1998-10-30
AP9701069A0 (en) 1997-10-30
PL185949B1 (pl) 2003-09-30
HUP9801880A2 (hu) 1998-11-30
DE69633667D1 (en) 2004-11-25
EP0830136A1 (en) 1998-03-25
CN1183726A (zh) 1998-06-03
NO974105D0 (no) 1997-09-05
FI973591A0 (fi) 1997-09-03
RO118931B1 (ro) 2004-01-30
JP4181632B2 (ja) 2008-11-19
MD2196B2 (ro) 2003-06-30
EP0830136B1 (en) 2004-10-20
BG63289B1 (bg) 2001-09-28
DE69633667T2 (de) 2006-03-02
PL322507A1 (en) 1998-02-02
TJ347B (en) 2002-10-06
ES2230561T3 (es) 2005-05-01
HK1009747A1 (en) 1999-06-11
NZ305571A (en) 1999-02-25
ATE279935T1 (de) 2004-11-15
GEP20002206B (en) 2000-08-25
EP0830136A4 (en) 2001-01-24
CN1165337C (zh) 2004-09-08
SK119997A3 (en) 1998-12-02
OA10614A (en) 2001-03-15
JPH11510476A (ja) 1999-09-14
NO326685B1 (no) 2009-01-26
HU225041B1 (en) 2006-05-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6013626A (en) Cryptophycins from synthesis
CZ278197A3 (cs) Kryptofycinové sloučeniny, způsob jejich výroby a farmaceutické prostředky na jejich bázi
KR100408909B1 (ko) 신규펩티드유도체
KR100459527B1 (ko) 합성된신규한크립토파이신
JP2008273981A (ja) 癌の処置におけるマイグラスタチンアナログ
WO1996039829A9 (en) New cryptophycins
CA2230540A1 (en) Pharmaceutical compounds
WO1998008506A1 (en) Pharmaceutical compounds
EP0792875B1 (en) Cryptophycin derivatives and their use as anti-microtubule agents
EP0923564A1 (en) Pharmaceutical compounds
HU205932B (en) Process for producing triacetate derivative of bu-3420t antibioticum and pharmaceutical compositions containing them
US20020128185A1 (en) Pharmaceutical compounds
JP2000502351A (ja) 医薬化合物
RU2195458C2 (ru) Криптофициновое соединение, фармацевтическая композиция, способ ингибирования пролиферации клеток и способ смягчения патологического состояния
CA2214565C (en) New cryptophycins from synthesis
AU716025B2 (en) New cryptophycins
FR2796949A1 (fr) Derives de streptogramines, leur preparation et les compositions qui les contiennent
KR100505779B1 (ko) 제약 화합물
MXPA98001604A (en) Farmaceuti compounds
FR2796950A1 (fr) Derives de streptogramines, leur preparation et les compositions qui les contiennent

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic