HU225041B1

HU225041B1 - Novel cryptophycins, their use and pharmaceutical compositions containing them

Info

Publication number: HU225041B1
Application number: HU9801880A
Authority: HU
Inventors: Russell A Barrow; Thomas H Corbett; Trimurtulu Golakoti; Thomas K Hemscheidt; Jian Liang; Richard E Moore; Marcus A Tius; Frederick A Valeriote
Original assignee: Univ Hawaii; Univ Wayne State
Priority date: 1995-03-07
Filing date: 1996-03-07
Publication date: 2006-05-29
Also published as: MD2196B2; NZ305571A; PL322507A1; MD970313A; HUP9801880A2; AU723652B2; AU5360396A; NO974105D0; NO974105L; JP4181632B2; EP0830136B1; CN1183726A; BG63289B1; BG101875A; AP737A; HK1009747A1; EP0830136A1; ES2230561T3; JPH11510476A; TJ347B

Description

HU 225 041 Β1

Rí és R₂ együttesen egy epoxid-, aziridin-, episzulfid-, szulfát- vagy mono(1-5 szénatomos alkil)-foszfátgyűrűt alkotnak, vagy

R-] és R₂ együttesen a C₁₈ és C₁₉ között egy kettős kötést alkotnak,

R₃ jelentése 1-5 szénatomos alkilcsoport,

R₄ és R₅ jelentése H, vagy

R₄ és R₅ jelentése együttesen kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ között,

R₆ jelentése benzil-, hidroxi-benzil-, 1-5 szénatomos alkoxi-benzil-, halogén-hidroxi-benzil-, dihalogénhidroxi-benzil-, halogén-(1-5 szénatomos alkoxi)benzil- vagy dihalogén-(1-5 szénatomos alkoxi)benzil-csoport,

R₇ és R₈ jelentése 1-5 szénatomos alkilcsoport,

Rg jelentése H vagy 1-5 szénatomos alkilcsoport,

R₁₀ jelentése H vagy 1-5 szénatomos alkilcsoport,

X jelentése Ο, NH vagy 1-5 szénatomos alkil-aminocsoport,

Y jelentése Ο, NH vagy 1-5 szénatomos alkil-aminocsoport.

A találmány új kriptoficinvegyületekre, ezeket tartalmazó gyógyszerkészítményekre és alkalmazásukra vonatkozik.

A daganatos betegségek, amelyeket a normál-sejtnövekedéstől eltérő sejtek proliferációja vált ki, a humán egyedeknél az egyik fő halálok. A kemoterápiával kapcsolatos klinikai tapasztalatok azt mutatják, hogy új és még hatásosabb szerek szükségesek ezen betegségek kezelésére. Ezek a tapasztalatok azt is mutatják, hogy azok a hatóanyagok, amelyek a sejtváz mikrocsatorna-rendszerét szétrombolják, hatásosak lehetnek a daganatos sejtek proliferációjának gátlásában.

Az eukarióta sejtek mikrocsatorna-rendszere a sejtváz fő komponense és az egyesülés és szétbomlás dinamikus egyensúlyában van; azaz a tubulin heterodimerjei polimerizálódnak, így alakítják ki a mikrocsatornákat, és a mikrocsatornák depolimerizálódnak az őket alkotó komponensekké. A mikrocsatornák kulcsszerepet játszanak a sejt felépítésének, metabolizmusának és osztódásának szabályozásában. A mikrocsatornák dinamikus állapota kritikus a normálműködés szempontjából. A sejtosztódással kapcsolatban a tubulin mikrocsatornákká polimerizálódik, és ez alakítja ki a mitózisos sejtorsót. A mikrocsatornák ezután depolimerizálódnak, amikor a mitózisos sejtorsó felhasználása megtörtént. Ennek megfelelően a szerek, amelyek megzavarják a mikrocsatornák polimerizációját vagy depolímerizációját, és ily módon gátolják a mitózist, a leghatásosabb kemoterápiás szerek a klinikai gyakorlatban.

Az ilyen antimitózisos szerek vagy mérgek három fő csoportba oszthatók a molekuláris hatásmechanizmusuk alapján. Az első csoportba tartoznak például a kolkicin és kolcemid, ezek gátolják a mikrocsatornák kialakulását azáltal, hogy megkötik a tubulint. A második csoportba tartoznak például a vinblasztin és vinkrisztin, ezek a tubulin parakristályos aggregátumainak kialakulását indukálják. A vinblasztin és vinkrisztin ismert rákellenes szerek, ezeknek a hatása, hogy szétrombolják a mitózisos sejtorsó mikrocsatornákat, alkalmassá teszi őket, hogy gátolják a sejtek túlzott proliferációját. A harmadik csoportba tartozik például a taxol, ez elősegíti a tubulin polimerizációját, és így stabilizálja a mikrocsatornaszerkezetet. Azonban az, hogy egy szer antimitózisos hatású, nem biztosítja, hogy a tumorsejtek ellen is hatásos, és különösen nem olyan tumorsejtek ellen, amelyek hatóanyag-rezisztens fenotípusokat mutatnak. A vinkaalkaloidok, így például a vinblasztin és vinkrisztin, hatásosak daganatos sejtek és tumorok ellen, de nem hatásosak bizonyos hatóanyag-rezisztens tumorokkal és sejtekkel szemben. Az egyik alapja, hogy a daganatos sejtek hatóanyag-rezisztensek (DR) vagy többszörösen hatóanyag-rezisztensek (MDR), az, hogy a P-glükoproteint túlexpresszálják. Azok a vegyületek, amelyek nem megfelelő szubsztrátumok a P-glükoproteinek szállítására, alkalmasak kell hogy legyenek az ilyen DR vagy MDR fenotípusok legyőzésére.

Ennek megfelelően a DR vagy MDR fenotípusok megléte számos tumorsejtnél és az antimikrocsatornaszerek daganatos sejtekkel szembeni klinikailag igazolt hatása szükségessé teszi antimikrocsatornaszerek kifejlesztését, amelyek citotoxikusak nem hatóanyag-rezisztens daganatos sejtekkel szemben, valamint citotoxikusak hatóanyag-rezisztens fenotípusú daganatos sejtekkel szemben. Azok közé a szerek közé, amelyek ígéretesnek tűnnek ilyen szempontból, tartozik a kriptoficinek családja.

A következő publikációkban különböző kriptoficinvegyületeket ismertetnek: USP 4 845 085 (1989), USP 4 946 835 (1990), Schwartz et al. J. Indust. Microbiol. 5 113 (1990), Kobayashi et al. Chem. Pharma. Bull. 42 2196 (1994), Kobayashi et al. ibid. 42 2394 (1994), Smith et al. Cancer Rés. 54 3779 (1994), Trimurtulu et al. J. AM. Chem. Soc. 116 4729 (1994).

Ezen vegyületek azonban eltérnek a találmány szerinti vegyületektől, mivel egyik irat sem utal olyan vegyületekre, amelyekben R₇ és R₈ mindegyike alkilcsoport.

A kriptoficinek előállítására továbbá jelenleg kevés totálszintézis ismert. A kriptoficinvegyületeket jelenleg a kék-zöld algából izolálják, vagy azok a természetben előforduló vegyületek félszintetikus változatai. A megfelelő totálszintézis hiánya nehézzé teszi a sztereospecifikus kriptoficinek előállítását, amelyekkel a hatás maximálható, és ami növeli a vegyületek stabilitását, így például a kutatások kimutatták, hogy azok a kriptoficinek, amelyek intakt makrociklusos gyűrűt tartalmaznak, sokkal hatásosabbak. Ennek megfelelően egy olyan totálszintézis, amellyel makrociklusos gyűrűt tartalmazó kriptoficinek állíthatók elő, amely vegyületek

HU 225 041 Β1 stabilabbak, mint a természetes eredetű kriptoficinek, igen kívánatos. A jelen találmány megoldja ezt a problémát.

A találmány tárgya tehát új (I) általános képletű kriptoficinvegyületekre vonatkozik, amely képletben Ar jelentése fenilcsoport, 1-5 szénatomos alkil-,

1-5 szénatomos alkoxicsoporttal vagy halogénatommal szubsztituált fenilcsoport, naftil-, furil-, indolil-, pirrolil-, piridil- vagy tienilcsoport,

R₁ jelentése halogénatom, SH-, amino-, mono(1-5 szénatomos alkil)-amino-, di(1—5 szénatomos alkil)-amino-, tri(1—5 szénatomos alkil)-ammónium-, 1-5 szénatomos alkil-tio-, di(1—5 szénatomos alkil)-szulfónium-, szulfát- vagy foszfátcsoport,

R₂ jelentése OH- vagy SH-csoport, vagy

Rt és R₂ együttesen egy epoxid-, aziridin-, episzulfid-, szulfát- vagy mono(1-5 szénatomos alkil)-foszfát-gyűrűt alkotnak, vagy

R₁ és R₂ együttesen a C₁₈ és C₁₉ között egy kettős kötést alkotnak,

R₃ jelentése 1-5 szénatomos alkilcsoport,

R₄ és R₅ jelentése H, vagy

R₄ és R₅ jelentése együttesen kettős kötés a C₁₃ és

C₁₄ között,

R₇ és R₈ jelentése 1-5 szénatomos alkilcsoport,

R_g jelentése H vagy 1-5 szénatomos alkilcsoport,

R₁₀ jelentése H vagy 1-5 szénatomos alkilcsoport,

X jelentése Ο, NH vagy 1-5 szénatomos alkil-amino-csoport,

Y jelentése Ο, NH vagy 1-5 szénatomos alkil-amino-csoport.

A következő leírás során és a vonatkozó rajzokban a vegyületeket esetenként „K”, esetenként „Kriptoficin vegyületként jelöljük, ezek mindegyike kriptoficinvegyületeket jelöl, az egyes vegyületeket az utánuk következő szám különbözteti meg.

A találmány oltalmi körébe tartozik továbbá a kriptoficinek alkalmazása gyógyszerkészítményekben, amelyek alkalmasak emlőssejtek proliferációjának gátlására, valamint daganatképződés kezelésére.

Az 1. ábrán bemutatjuk kiválasztott, találmány szerinti kriptoficinvegyületek általános szerkezetét és az A és D hidroxisavegységek, valamint a B és C aminosavegységek számozási rendszerét.

A 2A. és 2B. ábrán grafikusan bemutatjuk a kriptoficinvegyületek és a vinblasztin hatását a Jurkat-sejt-proliferációra és a sejtciklus előrehaladására. A Jurkat-sejteket azonos koncentrációjú kriptoficinvegyülettel (A, Kriftoficin 1) vagy vinblasztinvegyülettel (B) inkubáltuk 24 órán át. Mindegyik mintánál meghatároztuk az élő sejtek számát () és a mitózisos indexet (□) a kísérleti részben leírtak szerint. A megadott értékek átlagértéket jelentenek tstandard eltéréssel, az átlagot három párhuzamos minta alapján számoltuk.

A 3. ábrán grafikusan bemutatjuk a vinblasztin, a kriptoficinek és a taxol reverzibilis hatását a sejtnövekedésre. Az SKOV3 sejteket 0,1 nmol vinblasztinnal (□), 0,1 nmol kriptoficinnel (kriptoficin 1) () vagy 1 nmol taxollal (IS) kezeltük a 0 időben. Ezek a koncentrációk a sejtnövekedést 50%-os mértékben gátolták mindegyik vegyület esetén. 24 óra elteltével a sejteket mostuk, és hatóanyagmentes közegben a megadott ideig inkubáltuk. Meghatároztuk a sejtsűrűséget szulforodamin B (SRB) festéssel a kísérleti részben leírtak szerint, a megadott értékek átlagértékek ±standard eltéréssel, 560 nm-nél mért abszorpciót jelentenek három párhuzamos mintánál.

A 4. ábrán vinblasztin és kriptoficin kombinált hatását mutatjuk be a sejtproliferációra. SKOV3 sejteket vinblasztinnal (0-600 pM) és/vagy kriptoficinnel (kriptoficin 1) (1-100 pM) kezeltünk 48 órán át Ezután meghatároztuk a sejtek számát SRB festéssel a kísérleti részben leírtak szerint, és meghatároztuk az IC₅₀-értékeket (), valamint az additivitást (—) a vinblasztin- és kriptoficinvegyületek kombinációira. A megadott értékek két kísérlet három párhuzamos értékeinek átlagát jelentik.

Az 5. ábrán bemutatjuk a találmány szerinti kriptoficinek előállítási eljárásának vázlatát.

A 6. ábrán bemutatjuk az A hidroxisavegység előállításának vázlatát. Az ábrán alkalmazott jelölések jelentése a következő: a=propargil-klorid, Bu₄NHSO₄, 40% NaOH, 0 ’C, 86%; b=BuLi, THF, -90 °C-25 ’C, 71%, c=TBSCI, DMF, imidazol, 25 ’C, 96%; d=[(CH₃)₂CHCHCH₃]₂BH, THF,

-50 °C-25 ’C, H₂O₂, foszfátpuffer, 0 ’C, 76% (két lépés);

e=(CH₃O)₂P(O)CH₂CO₂CH₃, tetrametilguanidin, THF, -78 °C-25 ’C, 90%, f=O₃, piridin, CH₂CI₂, -78 °C, 83%, g=PhCH₂PPh₃CI, BuLi, THF,

-78 °C-25 ’C, 80%.

A 7. ábrán bemutatjuk az A hidroxisavegységet és B aminosavegységet tartalmazó kriptoficin-alegység előállítását. Az ábrán alkalmazott jelölések jelentése a következő: a=LiOH, aceton, 25 ’C, 95%, b=FDPP, DIEA, DMF, 25 ’C, 65%, c=CH₃CN, 50% aq HF (95/5), 25 ’C, 95%.

A 8. ábrán bemutatjuk a C aminosavegységet és D hidroxisavegységet tartalmazó kriptoficin-alegység előállítását. Az ábrán alkalmazott jelölések jelentése a következő: a=(Boc)₂O, Et₃N, CH₃OH, 25 °C, 93%, b=RuCI₃, NalO₄, CCI₄, CH₃CN, H₂O, 25 ’C,

HU 225 041 Β1

66%, c=DMAP, DCC, CH₂CI₂, 0 °C-25 °C, 75%, d=THF, morfolin, Pd(PPh₃)₄, 25 °C, 95%.

A 9. ábrán bemutatjuk egy kiválasztott találmány szerinti vegyület előállítását. Az ábrán alkalmazott jelölések jelentése a következő: a=DCC, DMAP, CH₂CI₂, 0 °C-25 °C, 84%, b=Zn, THF, CH₃CO₂H, ultrahangos kezelés, 25 °C, c=CF₃CO₂H, 25 °C, 91% (két lépés), d=FDPP, DIEA, DMF, 25 °C, 61%, e=m-CPBA, CH₂CI₂, 0 °C-25 °C, 48%, f=HCI, DME, H₂O, 25 °C, 95%.

A 10. ábrán egy másik találmány szerinti vegyület előállítását mutatjuk be. Az ábrán alkalmazott jelölések jelentése a következő: a=pmetoxi-benzil-trifenil-foszfónium-klorid és n-BuLi, THF, -78 °C-25 °C, 80%, b=LÍOH, aceton, 25 °C, 81%, c=FDPP, DIEA, I vegyület, DMF, 25 °C, 72%, d=CH₃CN, 49% vizes HF (7:3), 25 °C, 79%, e=DCC, DMAP, AC vegyület, CH₂CI₂, 25 °C, 90%, f=Zn, HOAc, ultrahang, 25 °C, g=TFA 25 °C, h=FDPP, DIEA, DMF, 25 °C, 61%.

A 11. ábrán bemutatjuk a D hidroxisavegységet tartalmazó kriptoficin-alegység előállítását. Az ábrán alkalmazott jelölések jelentése a következő: a=NH₃, CH₃OH, 50 °C, zárt cső átmérő 7, 66%, b=BH₃-THF, THF, 0 °C, reflux, 77%, c=(Boc)₂O, Et₃N, CH₃OH, 25 °C, 100%, d=RuCI₃, NalO₄, CCI₄, CH₃CN, H₂O, 25 °C, 74%, e=DMAP, DCC, CH₂CI₂, 0 “C-25 °C, 92%, f=THF, morfolin, Pd(PPh₃)₄, 25 °C, 100%.

A 12. ábrán egy harmadik kiválasztott, találmány szerinti vegyület előállítását mutatjuk be. Az ábrán alkalmazott jelölések jelentése a következő: a=LiOH, aceton, 25 °C, 87%, b=FDPP, DIEA, I vegyület, DMF, 25 °C, 70%, c=CH₃CN, 49% vizes HF (7:3), 25 °C, 92%, d=DCC, DMAP, A vegyület, CH₂CI₂, 25 °C, 86%, e=Zn, HOAc, ultrahangos kezelés, 25 °C, f=TFA, tiszta, 25 °C, g=FDPP, DIEA, DMF, 25 °C, 60%, h=mCPBA, CH₂CI₂, 25 °C.

A 13. ábrán egy negyedik kiválasztott, találmány szerinti vegyület előállítását mutatjuk be.

A 14. ábrán egy ötödik kiválasztott, találmány szerinti vegyület előállítását mutatjuk be. Az ábrán alkalmazott jelölések jelentése a következő: a=BOC-L-leucin-anhidrid, DMAP, THF, 0-25 °C, 96%, b=TFA tiszta, 25 °C, c=AL vegyület, DIEA, THF, 0-25 °C, 83% (2 lépés), d=Zn, HOAc, ultrahangos kezelés, 25 °C, e=TFA tiszta, 25 °C, f=FDPP, DIEA, DMF, 25 °C, 50% (3 lépés), g=DIEA, pivaloil-klorid, THF, -15-25 °C.

A találmány tehát új (I) általános képletű kriptoficinvegyületekre vonatkozik - a képletben Ar jelentése fenilcsoport, 1-5 szénatomos alkil-,

R₂ jelentése OH- vagy SH-csoport, vagy

R-ι és R₂ együttesen egy epoxid-, aziridin-, episzulfid-, szulfát- vagy mono(1-5 szénatomos alkil)-foszfát-gyűrűt alkotnak, vagy

R·, és R₂ együttesen a C₁₈ és C₁₉ között egy kettős kötést alkotnak,

R₃ jelentése 1-5 szénatomos alkilcsoport,

R₄ és R₅ jelentése H, vagy

R₇ és R₈ jelentése 1-5 szénatomos alkilcsoport,

R₉ jelentése H vagy 1-5 szénatomos alkilcsoport,

R₁₀ jelentése H vagy 1-5 szénatomos alkilcsoport,

X jelentése Ο, NH vagy 1-5 szénatomos alkil-amino-csoport,

Y jelentése Ο, NH vagy 1-5 szénatomos alkil-amino-csoport.

A következő leírás során hivatkozunk különböző kriptoficinvegyületekre, amelyek ismertek, a fenti oltalmi körön kívül esnek, ezek mindegyike referenciavegyületként szolgál. Ilyenek például az (Γ) általános képletű vegyületek, a képletben

R-ι jelentése H, OH, halogénatom, egy ketoncsoport

O-atomja, NH₂, SH, rövid szénláncú alkoxicsoport vagy rövid szénláncú alkilcsoport,

R₂ jelentése H, OH, egy ketoncsoport O-atomja, továbbá NH₂, SH, rövid szénláncú alkoxi- vagy rövid szénláncú alkilcsoport, vagy

R-i és R₂ együttesen egy epoxid-, aziridin- vagy episzulfidgyűrűt alkotnak, vagy egy kettős kötést alkotnak C_1o és C_n atomok között, vagy

R₁ és R₄ jelentése együttesen egy tetrahidrofurángyűrű, R₃ jelentése H vagy rövid szénláncú alkilcsoport,

R₄ jelentése OH, rövid szénláncú alkanoil-oxi- vagy rövid szénláncú a-hidroxi-alkanoil-oxi-csoport,

R₅ jelentése H vagy OH csoport,

R₆ jelentése H, vagy

R₅ és R₆ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₅ és C₆ atomok között,

R₇ jelentése benzil-, hidroxi-benzil-, metoxi-benzil-, halogén-hidroxi-benzil-, dihalogén-hidroxi-benzil-, halogén-metoxi-benzil- vagy dihalogén-metoxibenzil-csoport,

R₈ jelentése OH, rövid szénláncú β-aminosav, ahol a Cj a β-aminosav N-atomjához kapcsolódik, vagy egy észterezett rövid szénláncú β-aminosav, ahol Cf az észterezett rövid szénláncú β-aminosavcsoport N-atomjához kapcsolódik,

HU 225 041 Β1

R₄ és R₈ együttesen egy didepszipeptidcsoportot alkotnak, amely egy rövid szénláncú β-aminosavat tartalmaz a rövid szénláncú a-hidroxi-alkánsavhoz kapcsolva, és

R₅ és R₈ jelentése együttesen egy didepszipeptidcsoport, amely egy rövid szénláncú β-aminosavat tartalmaz a rövid szénláncú a-hidroxi-alkánsavhoz kapcsolva, a következő megkötésekkel:

R-ι jelentése H, rövid szénláncú alkilcsoport vagy rövid szénláncú alkoxicsoport csak akkor, ha R₂ jelentése OH vagy egy ketoncsoport O-atomja, NH₂ vagy SH csoport,

R₂ jelentése H, rövid szénláncú alkilcsoport vagy rövid szénláncú alkoxicsoport csak akkor, ha Rí jelentése OH, egy ketoncsoport O-atomja, NH₂ vagy SH csoport:

ha R₁ jelentése OH, R₂ jelentése OH, R₃ jelentése metilcsoport, R₅ és R₆ jelentése együttesen kettős kötés a C₅ és C₆ atomok között, R₄ és R₈ jelentése együttesen egy (X) képletnek megfelelő didepszipeptidcsoport - a képletben 0·, megfelel az R₄ jelentésének, N₈ megfelel R₈ jelentésének, R_g jelentése metil- és R₁₀ jelentése izobutilcsoport -, R₇ jelentése 3-klór-4-metoxibenzíl-csoporttól eltérő;

ha R! és R₂ jelentése együttesen egy epoxidgyűrű, R₃jelentése metilcsoport, R₅ és R₆ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₅ és C₆ atomok között, R₄ és R₈ jelentése együttesen egy (X) képletnek megfelelő didepszipeptidcsoport, ahol Rg jelentése metilcsoport és R_1ojelentése izobutilcsoport, R₇ jelentése 3-klór-4-metoxibenzil-csoporttól eltérő;

ha R₁ és R₂ jelentése együttesen egy epoxidgyűrű, R₃jelentése metilcsoport, R₅ és R₆ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₅ és C₆ atomok között, R₄ és R₈ jelentése együttesen egy (X) képletnek megfelelő didepszipeptidcsoport, ahol Rg jelentése metil- és R₁₀ jelentése izobutilcsoport, R₇ jelentése 3-klór-4-metoxibenzil-csoporttól eltérő;

ha R₁ és R₂ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₀ és C^ atomok között, R₃ jelentése metilcsoport, R₅és R₆ jelentése együttesen egy kettős kötés C₅ és C₆atomok között, R₄ és R₈ együttesen egy (X) képletnek megfelelő didepszipeptidcsoport, ahol R_g jelentése metilcsoport, és R_1o jelentése izobutilcsoport, R₇ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoporttól eltérő; és ha R-| és R₂jelentése együttesen egy epoxidcsoport, R₃ jelentése metilcsoport, R₅ és R₆ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₅ és C₆ atomok között, R₄ a leucinsav karboxiterminálisához kapcsolódik és R₈ vagy a 3-amino-2-metil-propionsav vagy a 3-amino-2-metil-propionsav-metil-észter nitrogénterminálisához kapcsolódik, R₇ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoporttól eltérő.

A találmány szerinti vegyületek közé tartoznak olyan kriptoficinvegyületek, amelyekben a C₂, C₈, C_g, C₁₀ és C_n atomokhoz kapcsolódó csoportok legalább egyike R-sztereokémiájú. Egy másik megvalósítási módnál a C₂, C₈, C_g, C₁₀ és C_n atomokhoz kapcsolódó csoportok közül legalább egy S-sztereokémiájú.

A találmány vonatkozik továbbá azon (I) általános képletnek megfelelő kriptoficinvegyületekre, amelyekben ha R₄ vagy R₅ jelentése az R₈ csoporttal együtt egy (X) képletnek megfelelő didepszipeptidcsoport - a képletben Ο_ή jelentése megfelel R₄ vagy R₅ jelentésének, és N₈ jelentése R₈ jelentésének, R_g jelentése H vagy rövid szénláncú alkilcsoport és R₁₀ jelentése rövid szénláncú alkilcsoport.

A fenti (I) általános képlettel kapcsolatban az egyes kifejezések jelentése, hacsak másképpen nem jelöljük, a következő.

A rövid szénláncú β-aminosav bármilyen β-aminosavat jelent, amely 3-8 szénatomot tartalmaz és egy lineáris vagy nem lineáris szénhidrogénlánc; így például lehet 3-amino-2-metil-propionsav.

Az észterezett rövid szénláncú β-aminosav bármilyen β-aminosavat jelent, amely 3-8 szénatomos, és ahol a karboxilcsoport hidrogénatomja metilcsoporttal szubsztituálva van, így például lehet 3-amino-2-metil-propionsav-metil-észter.

A rövid szénláncú alkanoil-oxi-csoport 1-7 szénatomos alkanoil-oxi-csoportot jelent, és lehet egyenes vagy elágazó láncú.

A rövid szénláncú a-hidroxi-alkanoil-oxi-csoport

2-7 szénatomos α-hidroxi-alkanoil-oxi-csoportot jelent, amely lehet egyenes vagy elágazó láncú, így például lehet 2-hidroxi-4-metil-valeriánsav.

A rövid szénláncú alkoxicsoport jelentése 1-5 szénatomos alkilcsoport, amely egy oxigénatomhoz kapcsolódik.

A rövid szénláncú alkilcsoport jelentése 1-5 szénatomos alkilcsoport, amely lehet egyenes vagy elágazó láncú, így például lehet metil-, etil-, propil-, izopropil-, butil-, izobutil-, terc-butil-, szek-butil-, metilezett butil-, pentil- vagy terc-pentil-csoport.

Az allilszubsztituált alkéncsoport jelentése bármilyen alkéncsoport, amely egy alkiles szénatomot és egy alkiles szubsztitúciót tartalmaz.

Az epoxidgyűrű jelentése egy háromtagú gyűrű, amely vázban két szénatomot és egy oxigénatomot tartalmaz.

Az aziridingyűrű jelentése háromtagú gyűrű, amely a vázban két szénatomot és egy nitrogénatomot tartalmaz.

Az episzulfidgyűrű jelentése háromtagú gyűrű, amely a vázban két szénatomot és egy kénatomot tartalmaz.

A szulfátgyűrű jelentése öttagú gyűrű, amely egy szén-szén-oxigén-kén-oxigén vázat tartalmaz két további oxigénatommal, amely a kénatomhoz kapcsolódik.

A monoalkil-foszfát-gyűrű jelentése öttagú gyűrű, amely egy szén-szén-oxigén-foszfor-oxigén vázat tartalmaz két további oxigénatommal, amelyek közül az egyik rövid szénláncú alkilcsoportot tartalmaz a foszforatomhoz kapcsolva.

A halogénatom lehet bármilyen, a periódusos rendszerben halogénként ismert atom. A halogénezés korlátozás nélkül lehet például hidrogén-halogenid addicionálása, magas hőmérsékleten való szubsztitúció, fotohalogénezés stb., ezek a módszerek a szakterületen jártas szakember számára ismertek [Eglof, G., Organic Chemistry: An Advanced Treatise, Gilmar és munka5

HU 225 041 Β1 társai, 31-46, John Wiley & Sons (1943), Kemp. és munkatársai, Organic Chemistry, Worth Publisher’s, Inc. (1980)].

A fenti kriptoficinvegyületek közé tartoznak olyan kriptoficinvegyületek:

- amelynek képletében Rt és R₂ jelentése együttesen egy epoxidcsoport, R₃ jelentése metilcsoport, R₅ és R₆ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₅ és C₆ csoportok között, R₇ jelentése 4metoxi-benzil-csoport, és R₄ és R₈ jelentése együttesen egy (X) képletű didepszipeptidcsoport csoport, ahol R₉ jelentése metilcsoport és R₁₀ jelentése izobutilcsoport. Ezt a vegyületet a (K2) képlettel írjuk le;

- amelynek képletében Rt és R₂ együttesen egy kettős kötés a Cto és Ctt szénatomok között, R₃jelentése metilcsoport, R₅ és R₆ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₅ és C₆ atomok között, R₇ jelentése 4-metoxi-benzil-csoport és R₄ és R₈együttesen egy (X) általános képletű didepszipeptidcsoportot jelent, ahol Rg jelentése metilcsoport és Rto jelentése izobutilcsoport. A vegyületet a (K4) képlettel írjuk le;

- amelynek képletében Rt és R₄ jelentése együttesen egy tetrahidrofurángyűrű, R₂ jelentése OH-csoport, R₃ jelentése metilcsoport, R₅ és R₆jelentése együttesen egy kettős kötés a C₅ és C₆atomok között, R₇ jelentése 3-klór-4-metoxibenzil-csoport és R₈ jelentése (2-metoxi-karbonil-propil)-amino-csoport. A vegyületet a (K6) képlettel írjuk le;

- amelynek képletében Rt és R₄ jelentése együttesen tetrahidrofurángyűrű, R₂ és R₈ jelentése OH-csoport, R₃ jelentése metilcsoport, R₅ és R₆jelentése együttesen egy kettős kötés a C₅ és C₆atomok között és R₇ jelentése 3-klór-4-metoxibenzil-csoport. Ezt a vegyületet a (K7) képlettel írjuk le;

- amelynek képletében Rt jelentése klóratom, R₂jelentése OH-csoport, R₃ jelentése metilcsoport, R₅ és R₆ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₅ és C₆ atomok között, R₇ jelentése 3klór-4-metoxi-benzil-csoport és R₄ és R₈ jelentése együttesen egy (X) képletű didepszipeptidcsoport, amelynek képletében R_g jelentése metilcsoport és Rto jelentése izobutilcsoport. Ezt a vegyületet a (K8) képlettel írjuk le;

- amelynek képletében Rt jelentése metoxicsoport, R₂ jelentése OH-csoport, R₃ jelentése metilcsoport, R₅ és R₆ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₅ és C₆ atomok között, R₇ jelentése

3-klór-4-metoxi-benzil-csoport és R₄ és R₈ jelentése együttesen egy (X) képletű didepszipeptidcsoport, amely képletben R₉ jelentése metilcsoport és R₁₀ jelentése izobutilcsoport. Ezt a vegyületet a (K9) képlettel írjuk le;

- amelynek képletében Rt jelentése metoxicsoport, R₂ és R₄ jelentése OH-csoport, R₃ jelentése metilcsoport, R₅ és R₆ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₅ és C₆ atomok között, R₇ jelentése 3-klór-metoxi-benzil-csoport, és R₈ jelentése (2-karboxi-propil)-amino-csoport. Ezt a vegyületet a (K10) képlettel írjuk le;

- amelynek képletében Rt és R₄ jelentése együttesen egy tetrahidrofurángyűrű, R₂ jelentése OHcsoport, R₃ jelentése metilcsoport, R₅ és R₆ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₅ és C₆atomok között, R₇ jelentése 3-klór-4-metoxibenzil-csoport és R₈ jelentése (2-karboxi-propil)-amino-csoport. A vegyületet a (K12) képlettel írjuk le;

- amelynek képletében Rt és R₂ jelentése együttesen egy kettős kötés a Cto és θ-ιι atomok között, R₃ jelentése metilcsoport, R₄ jelentése OH-csoport, R₅ és R_e jelentése együttesen egy kettős kötés a C₅ és C₆ atomok között, R₇ jelentése

3- klór-4-metoxi-benzil-csoport, és R₈ jelentése (2-karboxi-propil)-amino-csoport. A szerkezetet a (K14) képlettel írjuk le;

- amelynek képletében Rt és R₂ jelentése együttesen egy epoxidcsoport, R₃ jelentése metilcsoport, R₅ és Rg jelentése együttesen egy kettős kötés a C₅ és C₆ atomok között, R₇ jelentése 3-klór4- metoxi-benzil-csoport, és R₄ és R₅ jelentése együttesen az (X) képletű didepszipeptidcsoport, amelynek képletében R₉ jelentése metilcsoport és Rto jelentése izobutilcsoport. A vegyületet a (K16) képlettel írjuk le;

- amelynek képletében Rt és R₂ jelentése együttesen egy kettős kötés a C_1o és Ctt atomok között, R₃ jelentése metilcsoport, R₅ és R₆ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₅ és C₆ atomok között, R₇ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzilcsoport, és R₄ és R₈ jelentése együttesen egy (X) képletnek megfelelő didepszipeptidcsoport, ahol Rg jelentése metilcsoport, és Rto jelentése izobutilcsoport. A vegyületet a (K17) képlettel írjuk le;

- amelynek képletében Rt és R₂ jelentése együttesen egy kettős kötés a C_1o és Ctt atomok között, R₃ jelentése metilcsoport, R₅ és R₆ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₅ és C₆ atomok között, R₇ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport és R₄ és R₈ együttesen egy (X) képletű didepszipeptidcsoport, ahol R_g jelentése metil- és Rto jelentése szek-butil-csoport. A vegyületet a (K18) képlettel írjuk le;

- amelynek képletében Rt és R₂ jelentése együttesen egy kettős kötés a C_1o és Ctt atomok között, R₃ jelentése metilcsoport, R₅ és R₆ jelentése együttesen egy kettős kötés a Cto θ^δ θτι atomok között, R₃ jelentése metilcsoport, R₅ és R₆ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₅ és C₆ atomok között, R₇ jelentése 3-klór-4-metoxibenzil-csoport és R₄ és R₈ jelentése együttesen egy (X) képletű didepszipeptidcsoport, ahol Rg jelentése metilcsoport, és R₁₀ jelentése izopropilcsoport. A vegyületet a (K19) képlettel írjuk le;

- amelynek képletében Rt és R₂ jelentése együttesen egy epoxidcsoport, R₃ jelentése metilcsoport, R₅ és R₆ jelentése együttesen egy kettős kötés a

HU 225 041 Β1

C₅ és C₆ atomok között, R₇ jelentése 3-klór4-metoxi-benzil-csoport és R₄ és Rg jelentése együttesen egy (X) képletű didepszipeptidcsoport, ahol R₉ jelentése hidrogénatom és R_1o jelentése izobutilcsoport. A vegyületet a (K21) képlettel írjuk le;

amelynek képletében R₁ és R₂ jelentése együttesen egy epoxidcsoport, R₃ jelentése metilcsoport, R₅ és R₆ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₅ és C₆ atomok között, R₇ jelentése 3,5diklór-4-hidroxi-benzil-csoport és R₄ és R₈ jelentése együttesen egy (X) képletű didepszipeptidcsoport, ahol R_g jelentése metil- és R₁₀ jelentése izobutilcsoport. A vegyületet a (K23) képlettel írjuk le;

amelynek képletében R·, és R₂ jelentése együttesen egy epoxidcsoport, R₃ jelentése metilcsoport, R₅ és Rg jelentése együttesen egy kettős kötés a C₅ és C₆ atomok között, R₇ jelentése 4-metoxibenzil-csoport és R₄ és R₅ jelentése együttesen egy (X) képletű didepszipeptidcsoport, ahol R_g jelentése hidrogénatom és R₁₀ jelentése izobutilcsoport. A vegyületet a (K24) képlettel írjuk le; amelynek képletében Rt és R₂ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₀ és C^ atomok között, R₃ jelentése metilcsoport, R₄ jelentése hidroxicsoport, R₆ jelentése hidrogénatom, R₇ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport és R₅ és R₈ jelentése együttesen egy (X) képletű didepszipeptidcsoport, ahol R₉ jelentése metil- és R_1o jelentése izobutilcsoport. A vegyületet a (K26) képlettel írjuk le; amelynek képletében R₁ és R₂ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₀ és C₄₄ atomok között, R₃ jelentése hidrogénatom, R₅ és R₆ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₅ és C₆ atomok között, R₇ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzilcsoport és R₄ és R₈ jelentése együttesen egy (X) képletű didepszipeptidcsoport, ahol R₉ jelentése metil- és R₁₀ jelentése izobutilcsoport. A vegyületet a (K28) képlettel írjuk le;

amelynek képletében R₁ és R₂ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₀ és C^ atomok között, R₃ jelentése metilcsoport, R₅ és R₆ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₅ és C₆ atomok között, R₇ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzilcsoport és R₄ és R₈ jelentése együttesen egy (X) képletű didepszipeptidcsoport, ahol R₉ jelentése hidrogénatom, és R_1o jelentése izobutilcsoport. A vegyületet a (K29) képlettel írjuk le; amelynek képletében Rí és R₂ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₀ és C₄-| atomok között, R₃ jelentése metilcsoport, R₅ jelentése hidroxicsoport, R₆ jelentése hidrogénatom, R₇ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport és R₄ és R₈ jelentése együttesen egy (X) képletű didepszipeptidcsoport, ahol R₉ jelentése metilcsoport, és R₁₀ jelentése izobutilcsoport. A vegyületet a (K30) képlettel írjuk le;

amelynek képletében Rt és R₂ jelentése epoxidcsoport, R₃ jelentése metilcsoport, R₅ és R₆ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₅ és C₆atomok között, R₇ jelentése 3,5-diklór-4-metoxibenzil-csoport és R₄ és R₈ jelentése együttesen egy (X) képletű didepszipeptidcsoport, ahol R₉ jelentése metil- és R₁₀ jelentése izobutilcsoport. A vegyületet a (K31) képlettel írjuk le;

- amelynek képletében R₁ és R₂ jelentése együttesen epoxidcsoport, R₃ jelentése metilcsoport, R₅jelentése hidrogénatom, R₆ jelentése hidrogénatom, R₇ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport és R₄ és R₈ jelentése együttesen egy (X) képletű didepszipeptidcsoport, ahol R₉ jelentése metil- és R₁₀ jelentése izobutilcsoport. A vegyületet a (K35) képlettel írjuk le;

- amelynek képletében R₁ és R₂ jelentése együttesen egy epoxidcsoport, R₃ jelentése metilcsoport, R₅ és Rg jelentése együttesen egy kettős kötés a C₅ és C₆ atomok között, R₇ jelentése 3-klór-4metoxi-benzil-csoport és R₄ és R₈ jelentése együttesen egy (X) képletű didepszipeptidcsoport, ahol R₉ jelentése metil- és R_1o jelentése izobutilcsoport. A vegyületet a (K40) képlettel írjuk le;

- amelynek képletében Rt és R₂ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₀ és C^ atomok között, R₃ jelentése metilcsoport, R₅ és R₆ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₅ és C₆ atomok között, R₇ jelentése 3,5-diklór-4-hidroxi-benzilcsoport és R₄ és R₈ jelentése együttesen egy (X) képletű didepszipeptidcsoport, ahol R₉ jelentése metil- és R₁₀ jelentése izobutilcsoport. A vegyületet a (K45) képlettel írjuk le;

- amelynek képletében Rt és R₂ jelentése együttesen egy epoxidcsoport, R₃ jelentése metilcsoport, R₅ és R₆ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₅ és C₆ atomok között, R₇ jelentése 3-klór-4metoxi-benzil-csoport és R₄ és R₈ jelentése együttesen egy (X) képletű didepszipeptidcsoport, ahol R₉ jelentése metil- és R₁₀ jelentése propilcsoport. A vegyületet a (K49) képlettel írjuk le;

- amelynek képletében Rt és R₂ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₅₀ és Ctt atomok között, R₃ jelentése metilcsoport, R₅ és R₆ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₅ és C₆ atomok között, R₇ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport és R₄ és R₈ jelentése együttesen egy (X) képletű didepszipeptidcsoport, ahol R₉ jelentése metil- és R₁₀ jelentése propilcsoport. A vegyületet a (K50) képlettel írjuk le;

- amelynek képletében Rt és R₂ jelentése együttesen egy epoxidcsoport, R₃ jelentése metilcsoport, R₅ és Rg jelentése együttesen egy kettős kötés a C₅ és C₆ atomok között, R₇ jelentése 3-klór-4metoxi-benzil-csoport és R₄ és R₈ jelentése együttesen egy (X) képletű didepszipeptidcsoport, ahol R₉ jelentése metil- és R₁₀ jelentése szek-butil-csoport. A vegyületet a (K54) képlettel írjuk le.

A fenti vegyületek közül a K2, K4, K16-19, K21, K23, K24, K26, K28-31, K40, K43, K45k, K49, K50 és

HU 225 041 Β1

K54 vegyületek metabolitok, amelyeket a kék-zöld alga Nostoc sp. törzse (cyanobacteria) termel, és amelyeket a tenyészetből izolálunk. A K6 és K7 képletű vegyületek szintetikus termékek, amelyek akkor termelődnek, ha az elválasztási eljárásnál metanolt tartalmazó oldószert alkalmazunk. A K8, K9, K10-12, K14 és K35 képletű vegyületek ezen természetes úton nyert metabolitok származékai, amelyek kémiailag módosítva lettek a kísérleti részben leírtak szerint, vagy egy más módszerrel, amellyel a bemutatott vegyületeket vagy a nem bemutatott vegyületeket nyerjük, amely vegyületek a szakember számára hozzáférhetők.

A találmány oltalmi körébe tartozik a fenti kriptoficinvegyületek előállítása is a Nostoc sp. törzs tenyésztésével. A kék-zöld alga (cyanobacteria) Nostoc sp. törzsének morfológiai jellemzőit az US 4 946 835 számú szabadalmi leírás ismerteti, ezek rostosak, és vegetatív sejteket tartalmaznak. A hosszabb rostokban heterociszták is esetenként előfordulnak intercalaris (beágyazódott) helyzetben; akinetek nem figyelhetők meg. A reprodukció hormogoniával történik, a random trichome törés mellett. A Nostoc sp. azonosítása a következő irodalmi helyen található: J. Gén. Micro., 111:1-61 (1979).

A találmány vonatkozik továbbá arra, hogy a Nostoc sp. törzset tenyészteni lehet és új kriptoficinmetabolitokat, valamint az előzőekben ismertetett kriptoficinmetabolitokat lehet izolálni a tenyészetből. Nostoc sp. törzs lehet a GSV 224 jelű törzs, amelynek tenyészetéből az (I¹) általános képletnek megfelelő vegyületeket lehet izolálni - a képletben

Rt jelentése H, OH, halogénatom, egy ketoncsoport

O-atomja, NH₂, SH, rövid szénláncú alkoxiesoport vagy rövid szénláncú alkilcsoport,

Rt és R₂ együttesen egy epoxid-, aziridin- vagy episzulfidgyűrűt alkotnak, vagy egy kettős kötést alkotnak C_1o és Ctt atomok között, vagy

Rt és R₄ jelentése együttesen egy tetrahidrofurángyűrű,

R₃ jelentése H vagy rövid szénláncú alkilcsoport,

R₅ jelentése H vagy OH csoport,

R₆ jelentése H, vagy

R₈ jelentése OH, rövid szénláncú β-aminosav, ahol a Ct a β-aminosav N-atomjához kapcsolódik, vagy egy észterezett rövid szénláncú β-aminosav, ahol Ct az észterezett rövid szénláncú β-aminosavcsoport N-atomjához kapcsolódik,

R₄ és R₈ együttesen egy didepszipeptidcsoport csoportot alkotnak, amely egy rövid szénláncú β-aminosavat tartalmaz a rövid szénláncú a-hidroxi-alkánsavhoz kapcsolva, és

R₅ és R₈ jelentése együttesen egy didepszipeptidcsoport, amely egy rövid szénláncú β-amínosavat tartalmaz a rövid szénláncú a-hidroxi-alkánsavhoz kapcsolva, a következő megkötésekkel:

Rt jelentése H, rövid szénláncú alkilcsoport vagy rövid szénláncú alkoxiesoport csak akkor, ha R₂ jelentése OH, egy ketoncsoport O-atomja vagy NH₂ vagy SH csoport.

A találmány egy előnyös kiviteli formájánál a fenti módszerrel izolált kriptoficinmetabolit kémiai módosításával egy megkülönböztethető vegyületet nyerünk, amelynek szintén ez a szerkezete. A további vegyületek előállítására szolgáló kémiai módosító eljárások a szakember számára ismertek. További eljárásokat ismertetünk részletesen a későbbi kísérleti részben is.

A találmány szerinti új kriptoficinvegyületek mellett a találmány vonatkozik továbbá a fenti szerkezetek előállítására és alkalmazására, amely szerkezetek magukban foglalják a K1, K3, K5, K13 és K15 képleteknek megfelelő, korábban leírt kriptoficineket.

A találmány vonatkozik bármelyik Nostoc sp. törzsre, előnyösen a Nostoc sp. GSV 224 törzsre, amely kriptoficinvegyületeket termel. A GSV 224 jelű Nostoc sp. törzset 1993. október 7-én deponáltuk a mikroorganizmusok nemzetközi deponálására vonatkozó Budapesti Egyezménynek megfelelően az American Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852 USA helyen, az ATCC 55483 számon. Más egyéb Nostoc sp. törzsek, így például az MB 5357, amelyet korábban a Merck and Co. cég deponált ATCC 53789 szám alatt, szintén alkalmazhatók a találmány értelmében.

Mint ahogy az más organizmusoknál is van, a Nostoc sp. jellemzői változtathatók. így például a különböző törzsek rekombinánsai, variánsai vagy mutánsai nyerhetők különböző fizikai és kémiai mutagénekkel való kezeléssel, így például ultraviola sugárzás, röntgensugárzás, gamma-sugárzás vagy N-metil-N’-nitro-N-nitrozo-guanidin alkalmazásával. Mind a természetes, mind a nyert variánsok, mutánsok és rekombinánsok, amelyek megtartják a jellemzőjüket, hogy kriptoficinvegyületeket termelnek, a találmány oltalmi körébe tartoznak.

A találmány szerinti vegyületeket a Nostoc sp. törzs tenyésztésével állíthatjuk elő, elárasztásos (víz alatti) aerob körülmények között megfelelő tenyészközegben mindaddig, amíg lényegében antibiotikus aktivitás termelődik. Más egyéb tenyésztési technikák, így például felületi növesztés megszilárdult közegen szintén alkalmazható a vegyületek előállítására. Az adott törzs növesztéséhez használt tenyészközeg tartalmazhat bármilyen nitrogén- vagy szénforrást, továbbá szervetlen sót, amelyek a szakterületen jártas szakember számára ismertek. A szén- és nitrogénforrások megválasztásánál szempont a gazdaságosság, az optimális kihozatal, a termék izolálásának egyszerűsége. A tápként szolgáló szervetlen sók lehetnek a szokásos tenyészközegekben alkalmazott oldható sók, amelyek vas-,

HU 225 041 Β1 kálium-, nátrium-, magnézium-, kalcium-, ammónium-, klorid-, karbonát-, foszfát-, szulfát-, nitrát- stb. ionokat eredményeznek.

Tápnyomelemek, amelyek szükségesek a növesztéshez és fejlesztéshez, szintén szükségesek a tápközegben. Ezek a nyomelemek általában szennyezőként fordulnak elő más egyéb, a tápközegben jelen lévő alkotókban olyan mennyiségben, amely kielégíti az organizmus növekedéséhez szükséges követelményeket. Szükséges lehet azonban kis mennyiségben (például 0,2 ml/l) adagolni habzásgátló szert, így például polipropilénglikolt (móltömeg -2000) a nagyüzemi tenyésztésnél, ha habosodás problémája szóba kerül.

Nagyobb mennyiségű kriptoficinvegyületek előállításához víz alatti aerob tenyésztést kell alkalmazni tankban. Kis mennyiségek előállítására rázóedényes tenyésztést alkalmazunk. A metabolittermelés lassúsága miatt, amely a nagy tankokban az organizmusokkal való inokulációval általában kapcsolatos, előnyös, ha vegetetív inokulátumot alkalmazunk. A vegetetív inokulátumot úgy állítjuk elő, hogy egy kis térfogatú tápközeget a vegetatív trichome- vagy heterocisztatartalmú fragmenssel inokuláljuk friss, aktívan növekedő tenyészet előállítása érdekében. A vegetatív inokulátumot ezután egy nagy tankba visszük. A vegetatív inokulátum elkészítéséhez alkalmazott tápközeg lehet azonos a fermentáció során alkalmazott tápközeggel, de más tápközeget is alkalmazhatunk.

Az organizmusok tenyésztését 20 és 30 °C között beeső megvilágításnál végezhetjük, amelynek intenzitása 100-200 pmol foton m^_2s_¹ (fotoszintetikusán aktív besugárzás).

Mint ahogy az szükséges az aerob víz alatti tenyésztési eljárásnál, szén-dioxidot vezetünk be a tápközegbe a steril levegőáram mellett, amelyet a tápközegen keresztül buborékoltatunk. A hatásos kriptoficintermelődés érdekében a szén-dioxid mennyisége kb. 1 % (24 °C hőmérsékleten, 1 atmoszféra nyomáson).

A technika állása szerinti US 4 946 835 számú szabadalmi leírásban eljárást ismertetnek Nostoc sp. tenyésztésére.

A kriptoficinvegyületek képződését a tenyésztés alatt követhetjük, ha húslevesből mintát veszünk, és vizsgáljuk olyan organizmusokra, amelyek érzékenyek ezekre az antibiotikumokra. Az egyik ilyen alkalmas organizmus a Candida albicans.

Az elárasztásos aerob tenyésztés befejezése után a képződött kriptoficinvegyületeket a tápközegből és a tenyészetből a szakterületen ismert módon nyerjük ki. A kinyerést általában úgy végezzük, hogy először a tápközeget szűrjük az algás sejtek elválasztására, majd az így elválasztott sejteket fagyasztva szárítjuk. A fagyasztva szárított algát ezután alkalmas oldószerrel, így például etanollal, metanollal, izopropanollal vagy diklór-metánnal extraháljuk. A kriptoficinvegyületeket úgy választjuk el, hogy a kapott extraktumot, valamint a tápközeget gyorskromatográfiának vetjük alá fordított fázisú oszlopon. A kriptoficint fordított fázisú, nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával (HPLC) tisztítjuk.

Mint az a megadott szerkezeti képletekből kitűnik, a kriptoficinvegyületek tartalmaznak olyan csoportokat, amelyek alkalmasak kémiai módosításra. A képlet alá eső vegyületek közé tartozó kriptoficinek daganatellenes aktivitásúak. így például a bemutatott találmány szerinti vegyületek származékai magukban foglalnak olyan vegyületeket, amelyek az 1. ábra szerinti képletben az A egység C-7, C-8 szénatomján epoxid-oxigént vagy hidroxicsoportot vagy a B egységen leucinsavcsoportot tartalmaznak. Ezek az új és a korábbiakban leírt vegyületek származékai, amelyek a kívánt daganatellenes aktivitással rendelkeznek, szintén a találmány oltalmi körébe tartoznak. A kriptoficinvegyületek szerkezete és a daganatellenes aktivitásuk közötti összefüggést a későbbiekben a kísérleti részben bemutatjuk.

Míg bizonyos kriptoficinvegyületekről ismert, hogy a találmány szerinti algák által termelt metabolitok, más kriptoficinvegyületeket, például a K8-15 képletű vegyületek, olyan metabolitokból származtatjuk, amelyhez a szakterületen ismert technikákat alkalmazzuk, így például az US 4 868 208, 4 845 046 és 4 845 045 számú szabadalmi leírás szerint eljárásokat, de alkalmazhatunk más ismert módszereket is. A kísérleti részben ismertetünk találmány szerinti megoldást is ezen származékok előállítására.

A kriptoficinek hatásos daganatellenes és gombaellenes depszipeptidek, amelyek a Nostocaceae körébe tartozó kék-zöld algákból (cyanobacteria) származnak. A K1 képletnek megfelelő kriptoficint szárazföldi Nostoc sp. ATCC 53789-ből izolálták, és azt találták, hogy igen hatásos gombák, különösen a Cryptococcus törzsek ellen (R. E. Schwartz és munkatársai, J. Ind. Microbiol. 1990, 5:113-124). A K1 képletű kriptoficint a szárazföldi Nostoc sp. GSV 224-ből is izolálták 24 további kriptoficinanalóggal együtt, mint amelyek a kisebb alkotói az algának, és azt találták, hogy igen hatásosak szubkután transzplantált daganatokkal szemben egereknél (G. Trimurtulu és munkatársai, J. Am. Chem. Soc. 1994, 116:4729-4737; R. Barrow és munkatársai, J. AM. Chem. Soc. 1995, 117:2497-2490). Két másik, a Nostoc sp. GSV 224-ből származó analógot a K3 és K5 képleteknek megfelelő kriptoficineket, korábban mint a félszintetikus analógját a K1 képletű kriptoficinnek írták le (D. F. Sesin, US 4 845 085, 1989. július 4.; D. F. Sesin és munkatársai, US 4 868 208,1989. szeptember 19.). A kriptoficinek szignifikáns tumorszelektív citotoxicitást mutatnak a Corbett-vizsgálatnál, és hasonlóan citotoxikusak hatóanyagra szenzitív és hatóanyagra rezisztens tumorsejtekkel szemben is. Úgy tűnik, hogy a K1 képletű kriptoficin hatásmechanizmusa azonos a vinblasztinéval, de különbözik abban, hogy irreverzíbilisen gátolja a mikrocsatornák összeáilását (C. D. Smith és munkatársai, Cancer Rés. 1994, 54:3779-3784). Egy másik, a Nostoc sp. GSV 224-ből származó kriptoficint, a K24 képletű vegyületet tengeri szivacsból izolálták és arenastatinnak nevezték el (M. Kobayashi és munkatársai, Tetrahedron Lett. 1994, 35:7969-72; M. Kobayashi és munkatársai, Tennen Yuki Kagobutsu Toronkai Koen Yoshishu 1994, 36. 104-110).

HU 225 041 Β1

Huszonkét további kriptoficinvegyületet, ezeket a K2, K4, K6, K7, K16-19, K21, K23, K24, K26, K28-31, K40, K43, K45, K49, K50 és K54 képletekkel írjuk le, a 08/172 632 alapszámú, 1993. december 21-én benyújtott és 08/249 955 alapszámú, 1994. május 27-én benyújtott amerikai szabadalmi bejelentésekben és a PCT/US94/14740 alapszámú, 1994. december 21-én benyújtott nemzetközi bejelentésben ismertetik, ezek a vegyületek metabolitok, amelyeket a Nostoc sp. törzsből izoláltak, vagy ilyen metabolitokból szemiszintetizáltak. Ugyancsak ismertetik még ezekben a szabadalmi bejelentésekben a kiválasztott kriptoficinvegyületek jellemzését, amely szerint ezek antimikrocsatornaszerek, és klinikai aktivitásúak az egerekbe implantált tumorok széles spektrumával szemben, így a DR és MDR tumorokkal szemben.

A találmány oltalmi körébe tartoznak az (I) általános képletnek megfelelő új kriptoficinvegyületek, amelyek képletében

Ar jelentése fenilcsoport, 1-5 szénatomos alkil-,

Rt jelentése halogénatom, SH-, amino-, mono(1-5 szénatomos alkil)-amino-, di(1—5 szénatomos alkilj-amino-, tri(1—5 szénatomos alkilj-ammónium-, 1-5 szénatomos alkil-tio-, di(1—5 szénatomos alkil)-szulfónium-, szulfát- vagy foszfátcsoport,

R₂ jelentése OH- vagy SH-csoport, vagy

Rt és R₂ együttesen a C₁₈ és Ct9 között egy kettős kötést alkotnak,

R₃ jelentése 1-5 szénatomos alkilcsoport,

R₄ és R₅ jelentése H, vagy

R₇ és R₈ jelentése 1-5 szénatomos alkilcsoport,

R_g jelentése H vagy 1-5 szénatomos alkilcsoport,

Rt o jelentése H vagy 1-5 szénatomos alkilcsoport,

X jelentése Ο, NH vagy 1-5 szénatomos alkil-amino-csoport,

Y jelentése Ο, NH vagy 1-5 szénatomos alkil-amino-csoport.

Egy előnyös kiviteli formánál R₈ jelentése etil-, propil-, izopropil-, butil-, izobutil-, pentil- vagy izopentilcsoport. Egy másik előnyös kiviteli formánál R₇ jelentése etil-, propil-, izopropil-, butil-, izobutil-, pentil- vagy izopentilcsoport. Egy további előnyös kiviteli formánál R₇jelentése H, R₈ jelentése metilcsoport, R₃ jelentése metilcsoport, X és Y nem mindegyike O.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál R₃ jelentése etil-, propil-, izopropil-, butil-, izobutil-, pentil- vagy izopentilcsoport. Továbbá

R_g jelentése metil-, etil-, propil-, butil-, izobutil-, pentilvagy izopentilcsoport, továbbá R_1o jelentése metil-, etil-, propil-, butil-, izobutil-, pentil- vagy izopentilcsoport.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál a C₃, C₆, C₁₀, Ct6> C₁₇ és C₁₈ atomok közül legalább egy R-sztereokémiájú. Egy további előnyös formánál a C₃, C₆, Cto, C₁₈, C₁₇ és C₁₈ atomok közül legalább egy S-sztereokémiájú.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Árjelentése fenilcsoport, Rt és R₂ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₈ és Ct9 atomok között, R₃, R₇ és R₈ jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzilcsoport, Rg jelentése izobutilcsoport, Rto jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K51) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Árjelentése fenilcsoport, R₄ és R₂ jelentése együttesen egy R,R-epoxidgyűrű, R₃, R₇ és R₈jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, Rg jelentése izobutilcsoport, Rto jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K52) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Árjelentése fenilcsoport, Rt és R₂ jelentése együttesen egy S,S-epoxidgyűrű, R₃, R₇ és R₈jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R₉ jelentése izobutilcsoport, R₁₀ jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K53) képlettel írjuk le.

A továbbiakban a leírás során az (I) általános képletű vegyületek szubsztituenseinél hivatkozott jelentések, mint például S-klóratom, R-hidroxilcsoport, R,R-epoxid stb., minden esetben azt jelentik, hogy a megadott csoporthoz kapcsolódó szénatom a megjelölt R- vagy S- stb. konfigurációjú.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Ar jelentése fenilcsoport, Rt jelentése S-klóratom, R₂ jelentése R-hidroxilcsoport, R₃, R₇és R₈ jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, Rg jelentése izobutilcsoport, R_1o jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K55) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Árjelentése fenilcsoport, Rt és R₂ jelentése együttesen egy R,R-epoxidgyűrű, R₃, R₇ és R₈jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése hidrogénatom, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R_gjelentése izobutilcsoport, R₁₀ jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K57) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Ar jelentése fenilcsoport, Rt jelenté10

HU 225 041 Β1 se S-klóratom, R₂ jelentése R-hidroxilcsoport, R₃, R₇és Rg jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése hidrogénatom, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R₉ jelentése izobutilcsoport, R₁₀ jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K58) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Árjelentése fenilcsoport, R₁ és R₂ jelentése együttesen R,R-episzulfidgyürű, R₃, R₇ és R₈jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R_g jelentése izobutilcsoport, R₁₀ jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K61) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Ar jelentése p-metoxi-fenil-csoport, R., és R₂ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₈és C₁₉ atomok között, R₃ és R₇ jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxibenzil-csoport, R₉ jelentése izobutilcsoport, R₈ és R₁₀jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K81) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Ar jelentése metilcsoport, R₄ és R₂jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₈ és C₁₉ atomok között, R₃ és R₇ jelentése metilcsoport, R₄ és R₅jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzilcsoport, R₉ jelentése izobutilcsoport, R₈ és R₁₀ jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K82) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Ar jelentése metilcsoport, R₄ és R₂jelentése együttesen egy R,R-epoxidgyűrű, R₃ és R₇jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R₉ jelentése izobutilcsoport, R₈ és R₁₀ jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K90) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Ar jelentése metilcsoport, R-| és R₂jelentése együttesen egy S,S-epoxidgyűrű, R₃ és R₇jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R₉ jelentése izobutilcsoport, R₈ és R₁₀ jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K91) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Árjelentése fenilcsoport, R-] és R₂ jelentése együttesen egy R,R-aziridingyűrű, R₃, R₇ és R₈jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R₉ jelentése izobutilcsoport, R₁₀ jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K97) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Ar jelentése p-fluor-fenil-csoport, R₄és R₂ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₈ és C₁₉ atomok között, R₃ és R₇ jelentése metilcsoport, R₄és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxibenzil-csoport, R₉ jelentése izobutilcsoport, R₈ és R₁₀jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K110) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Ar jelentése p-tolil-csoport, R.| és R₂jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₈ és C₁₉ atomok között, R₃ és R₇ jelentése metilcsoport, R₄ és R₅jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R₉ jelentése izobutilcsoport, R₈ és R₁₀ jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K111) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Ar jelentése 2-tienilcsoport, R₄ és R₂jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₈ és C₁₉ atomok között, R₃ és R₇ jelentése metilcsoport, R₄ és R₅jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és Ci₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R₉ jelentése izobutilcsoport, R₈ és R₁₀ jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K112) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Ar jelentése p-fluor-fenil-csoport, R₄és R₂ jelentése együttesen egy R,R-epoxidgyűrű, R₃és R₇ jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R₉ jelentése izobutilcsoport, R₈ és R₁₀ jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K115) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Ar jelentése p-fluor-fenil-csoport, R₁és R₂ jelentése együttesen egy S,S-epoxidgyűrű, R₃és R₇ jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R₉ jelentése izobutilcsoport, R₈ és R₁₀ jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K116) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Ar jelentése p-tolil-csoport, R-ι és R₂jelentése együttesen egy R,R-epoxidgyűrű, R₃ és R₇jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R_g jelentése izobutilcsoport, R₈ és R₁₀ jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K117) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Ar jelentése p-tolil-csoport, R-| és R₂jelentése együttesen egy S,S-epoxidgyűrű, R₃ és R₇jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R₉ jelentése izobu11

HU 225 041 Β1 tilcsoport, R₈ és R₁₀ jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K118) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Ar jelentése 2-tienilcsoport, Rt és R₂jelentése együttesen egy R,R-epoxidgyűrű, R₃ és R₇jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R₉ jelentése izobutilcsoport, R₈ és R₁₀ jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K119) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Ar jelentése 2-tienilcsoport, Rt és R₂jelentése együttesen egy S,S-epoxidgyűrű, R₃ és R₇jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R_g jelentése izobutilcsoport, R₈ és R₁₀ jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K120) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Árjelentése fenilcsoport, Rt és R₂ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₈ és Ct9 atomok között, R₃ és R₇ jelentése metilcsoport, R₄ és R₅jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzilcsoport, R_g jelentése izobutilcsoport, R₈ és Rt _o jelentése hidrogénatom, X jelentése oxigénatom és Y jelentése nitrogénatom, amely egy hidrogénatomot hordoz. Ezt a vegyületet a (K121) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Árjelentése fenilcsoport, Rt és R₂ jelentése együttesen egy R,R-epoxidgyűrű, R₃ és R₇ jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R_g jelentése izobutilcsoport, R₈ és R₁₀ jelentése hidrogénatom, és X jelentése oxigénatom és Y jelentése nirtogénatom, amely egy hidrogénatomot hordoz. Ezt a vegyületet a (K122) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Árjelentése fenilcsoport, Rt és R₂ jelentése együttesen egy S,S-epoxidgyűrű, R₃ és R₇ jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R_g jelentése izobutilcsoport, R₈ és R_w jelentése hidrogénatom, X jelentése oxigénatom és Y jelentése nirtogénatom, amely egy hidrogénatomot hordoz. Ezt a vegyületet a (K123) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Ar jelentése p-klór-fenil-csoport, Rt és R₂ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₈ és C₁₉ atomok között, R₃ és R₇ jelentése metilcsoport, R₄és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxibenzil-csoport, R_g jelentése izobutilcsoport, R₈ és R₁₀jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K124) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Ar jelentése p-klór-fenil-csoport, Rt és R₂ jelentése együttesen R.R-epoxidgyűrű, R₃ és R₇jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R_g jelentése izobutilcsoport, R₈ és R₁₀ jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K125) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Ar jelentése p-klór-fenil-csoport, Rt és R₂ jelentése együttesen S,S-epoxidgyűrű, R₃ és R₇jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R_g jelentése izobutilcsoport, R₈ és R₁₀ jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K126) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Ar jelentése fenilcsoport, Rt jelentése S-klóratom, R₂ jelentése R-hidroxilcsoport, R₃ és R₇jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R_g jelentése izobutilcsoport, R₈ és R₁₀ jelentése hidrogénatom, X jelentése oxigénatom és Y jelentése nitrogénatom, amely egy hidrogénatomot hordoz. Ezt a vegyületet a (K127) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Ar jelentése p-tolil-csoport, Rt jelentése S-klóratom, R₂ jelentése R-hidroxilcsoport, R₃ és R₇ jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R_g jelentése izobutilcsoport, R₈ és Rto jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K128) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Ar jelentése p-tolil-csoport, Rt jelentése R-klóratom, R₂ jelentése S-hidroxilcsoport, R₃ és R₇ jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R_g jelentése izobutilcsoport, R₈ és R₁₀ jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K130) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Ar jelentése p-klór-fenil-csoport, Rt jelentése S-klóratom, R₂ jelentése R-hidroxilcsoport, R₃ és R₇ jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R_g jelentése izobutilcsoport, R₈ és R₁₀ jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K131) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Ar jelentése p-tolil-csoport, Rt jelentése S-klóratom, R₂ jelentése R-hidroxilcsoport, R₃ és R₇ jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆ je12

HU 225 041 Β1 lentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R₉ jelentése izobutilcsoport, R₈ és R₁₀ jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K132) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Ar jelentése p-klór-fenil-csoport, R-, jelentése R-klóratom, R₂ jelentése S-hidroxilcsoport, R₃ és R₇ jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₃₁ és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R₉ jelentése izobutilcsoport, R₈ és R₁₀ jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K133) képlettel írjuk le.

A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös kiviteli formájánál Ar jelentése p-klór-fenil-csoport, R·] jelentése R-klóratom, R₂ jelentése R-hidroxilcsoport, R₃ és R₇ jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R_g jelentése izobutilcsoport, R₈ és R₁₀ jelentése hidrogénatom, és X és Y jelentése oxigénatom. Ezt a vegyületet a (K134) képlettel írjuk le.

Az oltalmi körbe tartoznak a következő (I) általános képletnek megfelelő vegyületek, amelyek képletében R₁ jelentése hidrogén- vagy halogénatom,

R₂ jelentése hidrogénatom vagy egy ketoncsoport oxigénje, vagy OH-csoport, vagy Rt és R₂ együttesen egy epoxidgyűrűt alkotnak, vagy R₃ és R₂ együttesen egy episzulfidgyűrűt alkotnak,

R₃ jelentése H vagy rövid szénláncú alkilcsoport,

R₄ jelentése H vagy OH,

R₅ jelentése H vagy OH, vagy

R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés,

R₆ jelentése H vagy halogénatom, azzal a megkötéssel, hogy ha R-, és R₂ együttesen egy epoxidcsoportot alkotnak, R₄ és R₅ együttesen egy kettős kötést jelent és R₆ jelentése klóratom, R₃ jelentése metilcsoporttól eltérő.

A fenti vegyületek egy előnyös kiviteli formájánál R-i jelentése hidrogénatom, R₂ jelentése egy ketoncsoport oxigénatomja, R₃ jelentése S-metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés és R₆ jelentése klóratom. Ezt a vegyületet a (K20) képlettel írjuk le.

A fenti vegyületek egy előnyös kiviteli formájánál R! jelentése S-brómatom, R₂ jelentése R-hidroxicsoport, R₃ jelentése S-metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés és R₆ jelentése klóratom. Ezt a vegyületet a (K25) képlettel írjuk le.

A fenti vegyületek egy előnyös kiviteli formájánál Rj jelentése R-klórcsoport, R₂ jelentése R-hidroxicsoport, R₃ jelentése S-metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés és R₆ jelentése klóratom. Ezt a vegyületet a (K27) képlettel írjuk le.

A fenti vegyületek egy előnyös kiviteli formájánál R-| és R₂ jelentése együttesen egy R,R-epoxidgyűrű, R₃jelentése S-metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése hidrogénatom, és R₆ jelentése klóratom. Ezt a vegyületet a (K32) képlettel írjuk le.

A fenti vegyületek egy előnyös kiviteli formájánál R·, és R₄ és R₅ jelentése hidrogénatom, R₂ jelentése

S-hidroxicsoport, R₃ jelentése R-metilcsoport, és R₆ jelentése klóratom. Ezt a vegyületet a (K33) képlettel írjuk le.

A fenti vegyületek egy előnyös kiviteli formájánál Rí, R₂, R₄ és R₅ jelentése hidrogénatom, R₃ jelentése R-metilcsoport, és R₆ jelentése hidrogénatom. Ezt a vegyületet a (K34) képlettel írjuk le.

A fenti vegyületek egy előnyös kiviteli formájánál R₃jelentése R-brómatom, R₂ jelentése R-hidroxicsoport, R₃ jelentése R-metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés és R₆ jelentése klóratom. Ezt a vegyületet a (K37) képlettel írjuk le.

A fenti vegyületek egy előnyös kiviteli formájánál R-] és R₂ jelentése együttesen egy S,S-epoxidgyűrű, R₃jelentése S-metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés és R₆ jelentése klóratom. Ezt a vegyületet a (K38) képlettel írjuk le.

A fenti vegyületek egy előnyös kiviteli formájánál Rj és R₂ jelentése együttesen egy S,R-epoxidgyűrű, R₃jelentése S-metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés és R₆ jelentése klóratom. Ezt a vegyületet a (K39) képlettel írjuk le.

A fenti vegyületek egy előnyös kiviteli formájánál Rt és R₂ jelentése együttesen egy R,R-epoxidgyűrű, R₃jelentése S-metilcsoport, R₄ jelentése S-hidroxicsoport, R₅ jelentése R-hidroxicsoport és R₆ jelentése klóratom. Ezt a vegyületet a (K41) képlettel írjuk le.

A fenti vegyületek egy előnyös kiviteli formájánál R₁és R₂ jelentése együttesen egy R,R-epoxidgyűrű, R₃jelentése S-metilcsoport, R₄ jelentése R-hidroxicsoport, R₅ jelentése S-hidroxicsoport és R₆ jelentése klóratom. Ezt a vegyületet a (K42) képlettel írjuk le.

A fenti vegyületek egy előnyös kiviteli formájánál R-i jelentése hidrogénatom, R₂ jelentése S-hidroxicsoport, R₃ jelentése R-metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés és R₆ jelentése klóratom. Ezt a vegyületet a (K48) képlettel írjuk le.

A fenti vegyületek egy előnyös kiviteli formájánál R₃jelentése S-klóratom, R₂ jelentése R-hidroxicsoport, R₃jelentése S-metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése hidrogénatom és R₆ jelentése klóratom. Ezt a vegyületet a (K59) képlettel írjuk le.

A fenti vegyületek egy előnyös kiviteli formájánál R·, és R₂ jelentése együttesen egy S,S-episzulfidgyűrű, R₃jelentése S-metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés és R₆ jelentése klóratom. Ezt a vegyületet a (K60) képlettel írjuk le.

A fenti vegyületek egy előnyös kiviteli formájánál R₁jelentése S-klóratom, R₂ jelentése R-hidroxicsoport, R₃jelentése hidrogénatom, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés és Rg jelentése klóratom. Ezt a vegyületet a (K63) képlettel írjuk le.

A fenti vegyületek egy előnyös kiviteli formájánál R-, jelentése R-klóratom, R₂ jelentése R-hidroxicsoport, R₃jelentése S-metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése hidrogénatom és R₆ jelentése klóratom. Ezt a vegyületet a (K64) képlettel írjuk le.

A fenti vegyületek egy előnyös kiviteli formájánál R·, jelentése R-klóratom, R₂ jelentése S-hidroxicsoport, R₃jelentése S-metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együtte13

HU 225 041 Β1 sen egy kettős kötés és R₆ jelentése klóratom. Ezt a vegyületet a (K69) képlettel írjuk le.

A fenti vegyületek egy előnyös kiviteli formájánál Rt jelentése S-klóratom, R₂ jelentése S-hidroxicsoport, R₃jelentése S-metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés és R₆ jelentése klóratom. Ezt a vegyületet a (K70) képlettel írjuk le.

A fenti vegyületek egy előnyös kiviteli formájánál Rt jelentése R-brómatom, R₂ jelentése S-hidroxicsoport, R₃ jelentése S-metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés és R₆ jelentése klóratom. Ezt a vegyületet a (K71) képlettel írjuk le.

A fenti vegyületek egy előnyös kiviteli formájánál Rt jelentése S-brómatom, R₂ jelentése S-hidroxicsoport, R₃ jelentése S-metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés és R₆ jelentése klóratom. Ezt a vegyületet a (K72) képlettel írjuk le.

A fenti vegyületek egy előnyös kiviteli formájánál Rt jelentése S-klóratom, R₂ jelentése S-hidroxicsoport, R₃jelentése S-metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés és R₆ jelentése klóratom. Ezt a vegyületet a (K73) képlettel írjuk le.

A fenti vegyületek egy előnyös kiviteli formájánál Rt jelentése S-klóratom, R₂ jelentése R-hidroxicsoport, R₃jelentése S-metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés és R₆ jelentése klóratom. Ezt a vegyületet a (K74) képlettel írjuk le.

A fenti vegyületek egy előnyös kiviteli formájánál Rt jelentése S-fluoratom, R₂ jelentése R-hidroxicsoport, R₃ jelentése S-metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés és R₆ jelentése klóratom. Ezt a vegyületet a (K75) képlettel írjuk le.

A fenti vegyületek egy előnyös kiviteli formájánál Rt jelentése R-fluoratom, R₂ jelentése R-hidroxicsoport, R₃ jelentése S-metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés és R₆ jelentése klóratom. Ezt a vegyületet a (K76) képlettel írjuk le.

A találmány vonatkozik a fenti kriptoficinvegyületek, valamint az összes korábban ismert kriptoficin előállítási eljárására egy totálszintézissel.

A találmány vonatkozik továbbá az új kriptoficinmetabolitok, valamint a korábban ismert kriptoficinmetabolitok előállítási eljárására is.

A találmány szerinti eljárásnál a kriptoficinvegyületeket úgy állítjuk elő, hogy kiválasztunk egy allilszubsztituált E-alként; ezt az E-alkénvegyületet átrendezzük egy sztereospecifikus Wittig átrendezési reakcióval; a kapott vegyületet egy első δ-aminosavvá vagy δ-hidroxisavvá alakítjuk; az első savat egy második α-aminosavval kapcsoljuk, így egy első alegységet alakítunk ki; a harmadik β-aminosavat egy negyedik α-hidroxisavval vagy α-aminosavval kapcsoljuk, így kialakítjuk a második alegységet; az első alegységet a második alegységhez kapcsoljuk, így nyerjük a kriptoficint.

A találmány szerinti eljárás előnyös kiviteli módjával olyan (I) általános képletű vegyületeket állítunk elő, amelynek képletében

Ar jelentése fenilcsoport, 1-5 szénatomos alkil-,

Rt jelentése halogénatom, SH-, amino-, mono(1-5 szénatomos alkil)-amino-, di(1—5 szénatomos alkil)-amino-, tri(1—5 szénatomos alkil)-ammónium-, 1-5 szénatomos alkil-tio-, di(1—5 szénatomos alkil)-szulfónium-, szulfát- vagy foszfátcsoport,

R₂ jelentése OH- vagy SH-csoport, vagy

Rt és R₂ együttesen a C₁₈ és Οτθ között egy kettős kötést alkotnak,

R₃ jelentése 1-5 szénatomos alkilcsoport,

R₄ és R₅ jelentése H, vagy

R₄ és R₅ jelentése együttesen kettős kötés a C₁₃ és

C₁₄ között,

R₇ és R₈ jelentése 1-5 szénatomos alkilcsoport,

R₉ jelentése H vagy 1-5 szénatomos alkilcsoport,

R₁₀ jelentése H vagy 1-5 szénatomos alkilcsoport,

X jelentése Ο, NH vagy 1-5 szénatomos alkil-amino-csoport,

Y jelentése Ο, NH vagy 1-5 szénatomos alkil-amino-csoport.

Egy előnyös kiviteli módnál olyan kriptoficinvegyületeket állítunk elő, amelyek képletében Ar jelentése fenilcsoport, R₃ jelentése metilcsoport, R₆ jelentése halogén-metoxi-benzil-csoport, R₇ jelentése H, R₈ jelentése metilcsoport, R₉ jelentése izobutilcsoport, Rto jelentése Η, X jelentése O és Y jelentése O. A fenti szerkezetű kriptoficinvegyületeken túlmenően a találmány oltalmi körébe tartozik továbbá a korábban ismertetett és technika állása szerint ismert kriptoficinvegyületek előállítási eljárása is. A K1, K8 és K35 képletű kriptoficinvegyületeket totálszintézissel állítjuk elő. A totálszintézissel előállított, korábban ismertetett és technika állása szerinti kriptoficinvegyületeket az (I'”) általános képlettel írjuk le, a képletben

Rt jelentése halogénatom,

R₂ jelentése OH vagy

Rt és R₂ jelentése együttesen egy epoxidgyürű,

R₃ jelentése H és R₄ jelentése H vagy

R₃ és R₄ jelentése együttesen kettős kötés.

A találmány vonatkozik továbbá gyógyszerkészítményekre, amelyek alkalmasak hiperproliferatív emlőssejtek proliferációjának gátlására, és amely készítmények gyógyszerészetileg elfogadható hordozóanyaggal együtt (I) általános képletnek megfelelő kriptoficint tartalmaznak hatóanyagként - a képletben

Ar jelentése fenilcsoport, 1-5 szénatomos alkil-,

HU 225 041 Β1

R-ι jelentése halogénatom, SH-, amino-, mono(1-5 szénatomos alkilj-amino-, di(1—5 szénatomos alkilj-amino-, tri(1—5 szénatomos alkilj-ammónium-, 1-5 szénatomos alkil-tio-, di(1—5 szénatomos alkilj-szulfónium-, szulfát- vagy foszfátcsoport,

R₂ jelentése OH- vagy SH-csoport, vagy R₁ és R₂együttesen egy epoxid-, aziridin-, episzulfid-, szulfát- vagy mono(1-5 szénatomos alkil)-foszfát-gyűrűt alkotnak, vagy

R-ι és R₂ együttesen a C₁₈ és C₁₉ között egy kettős kötést alkotnak,

R₃ jelentése 1-5 szénatomos alkilcsoport,

R₄ és R₅ jelentése H, vagy

Rg jelentése benzil-, hidroxi-benzil-, 1-5 szénatomos alkoxi-benzil-, halogén-hidroxi-benzil-, dihalogénhidroxi-benzil-, halogén-(1-5 szénatomos alkoxi)benzil- vagy dihalogén-(1-5 szénatomos alkoxi)benzil-csoport,

R₇ és R₈ jelentése 1-5 szénatomos alkilcsoport,

R₉ jelentése H vagy 1-5 szénatomos alkilcsoport,

Rio jelentése H vagy 1-5 szénatomos alkilcsoport,

X jelentése Ο, NH vagy 1-5 szénatomos alkil-amino-csoport,

Y jelentése Ο, NH vagy 1-5 szénatomos alkil-amino-csoport.

Egy előnyös kiviteli formánál a találmány szerinti gyógyszerkészítmények még legalább egy további, daganatellenes szert is tartalmaznak.

A találmány szerinti kriptoficinvegyületek, valamint ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények felhasználhatók emlőssejtek proliferációjának gátlására, ennél a módszernél az emlőssejteket a kriptoficinvegyület hatásos mennyiségével érintkeztetjük, ez a vegyület az (I) általános képletnek megfelelő kriptoficinvegyület, amelynek képletében

Ar jelentése fenilcsoport, 1-5 szénatomos alkil-,

R₁ jelentése halogénatom, SH-, amino-, mono(1-5 szénatomos alkilj-amino-, di(1—5 szénatomos alkilj-amino-, tri(1—5 szénatomos alkilj-ammónium-, 1-5 szénatomos alkil-tio-, di(1—5 szénatomos alkilj-szulfónium-, szulfát- vagy foszfátcsoport,

R₂ jelentése OH- vagy SH-csoport, vagy

R-ι és R₂ együttesen a C₁₈ és C_ig között egy kettős kötést alkotnak,

R₃ jelentése 1-5 szénatomos alkilcsoport,

R₄ és R₅ jelentése H, vagy

R₄ és R₅ jelentése együttesen kettős kötés a C₁₃ és

C₁₄ között,

R₇ és R₈ jelentése 1-5 szénatomos alkilcsoport,

Rg jelentése H vagy 1-5 szénatomos alkilcsoport,

R₁₀ jelentése H vagy 1-5 szénatomos alkilcsoport,

X jelentése O, NH vagy 1-5 szénatomos alkil-amino-csoport,

Y jelentése O, NH vagy 1-5 szénatomos alkil-amino-csoport.

Egy előnyös találmány szerinti alkalmazásnál a sejteket még legalább egy további tumorellenes szerrel is érintkeztetjük. Egy előnyös kiviteli formánál az emlőssejt hiperproliferatív, egy még előnyösebb kiviteli formánál a hiperproliferatív sejt humán eredetű.

A találmány vonatkozik továbbá az (I) általános képletű kriptoficinvegyületek alkalmazására olyan hiperproliferatív emlőssejtek proliferációjának gátlásánál, amely sejtek többszörös hatóanyag-rezisztens fenotípust tartalmaznak, ennél az alkalmazásnál a találmány szerinti vegyületeket a sejttel érintkeztetjük, és a vegyületeket olyan mennyiségben alkalmazzuk, amely hatásos a mikrocsatornapolimerizáció és depolimerizációs rendszer dinamikus állapotának szétrombolására a sejtmitózis megfékezésére, és így a sejt proliferációjának gátlására, ennél (I) általános képletnek megfelelő kriptoficinvegyületeket alkalmazunk, amely képletben

Ar jelentése fenilcsoport, 1-5 szénatomos alkil-,

R₂ jelentése OH- vagy SH-csoport, vagy

R₃ jelentése 1-5 szénatomos alkilcsoport,

R₄ és R₅ jelentése H, vagy

R₄ és R₅ jelentése együttesen kettős kötés a C₁₃ és

C₁₄ között,

R₆ jelentése benzil-, hidroxi-benzil-, 1-5 szénatomos alkoxi-benzil-, halogén-hidroxi-benzil-, dihalogénhidroxi-benzil-, halogén-(1-5 szénatomos alkoxi)benzil- vagy dihalogén-(1-5 szénatomos alkoxijbenzil-csoport,

R₇ és R₈ jelentése 1-5 szénatomos alkilcsoport,

Rg jelentése H vagy 1-5 szénatomos alkilcsoport,

R₁₀ jelentése H vagy 1-5 szénatomos alkilcsoport,

X jelentése O, NH vagy 1-5 szénatomos alkil-amino-csoport,

Y jelentése O, NH vagy 1-5 szénatomos alkil-amino-csoport.

Egy előnyös találmány szerinti alkalmazásnál a sejteket még legalább egy további tumorellenes szerrel is

HU 225 041 Β1 érintkeztetjük, egy különösen előnyös kiviteli formánál emlőssejtként humán eredetű sejteket alkalmazunk.

Az alkalmazás egy előnyös kiviteli formájánál a betegnél még legalább egy további terápiát alkalmazunk a patológiás állapotok enyhítésére. A patológiai állapotot neoplazmák kialakulása jellemzi. Egy további kiviteli formánál a neoplazma valamely következő csoportba tartozik: melldaganat, kissejt tüdő, nemkissejt tüdő, vastagbél, leukémia, melanoma, hasnyálmirigy-adenocarcinoma, központi idegrendszer (CNS), petefészek, prosztata, lágyszövet vagy csontszarkóma, fej és nyak, gyomortraktus, amely magában foglalja a hasnyálmirigyet és a nyelőcsövet, gyomor, myeloma, hólyag, vese, neuroendokrin, amely magában foglalja a thyroid és nem-Hodgkin-féle betegséget és a Hodgkin-féle betegséget.

A kriptoficinvegyületek előállítására szolgáló eljárást az 5. ábrán látható reakcióvázlattal szemléltetjük. A kiindulási vegyület egy 3E-alkén (a), amely a C-2 helyzetben egy S-konfigurációjú XH csoporttal van szubsztituálva, ahol X jelentése oxigénatom vagy NH csoport. Az L-alanin és L-tejsav egy olcsó anyag az (a) kiindulási vegyületként. A szintézisnél a kulcsfontosságú lépés a sztereoszelektív [2,3] Wittig-átrendeződése (D. J.-S. Tsai és munkatársai, J. Org. Chem. 1984, 49:1842-1843; K. Mikami és munkatársai, Tetrahedron 1984, 25:2303-2308; N. Sayo és munkatársai, Chem. Lett. 1984, 259-262) egy (b) propargil-éternek, amikor is a (3R,4R)-3-(XH-szubsztituált)-4-alkil-hept-5(E)én-1-in-vegyületet (c) nyerjük, amelyben X jelentése oxigénatom vagy egy védett nitrogén (például terc-butil-dimetil-szilil-amino-csoporttal). A kapott (c) vegyületet ezután a δ-hidroxi- vagy aminosav A egységgé alakítjuk, ez a metil-(5S,6R)-5-(XP-szubsztituált)-6-alkil-8-aril-okta-2E,7E-dienoát (d), ahol P jelentése alkalmas védőcsoport, ezt a reakciót ismert módon végezzük.

Az egyik előállítási mód olyan kriptoficinekre, amelyek egy δ-hidroxi- vagy aminosav A egységet, egy α-aminosav B egységet, egy β-aminosav C egységet és egy α-hidroxi- vagy aminosav D egységet tartalmaznak az, amelynél a makrociklus kialakítására a kriptoficinmolekula két részét, például egy A-B prekurzort (e), amely β-hidroxi- vagy aminosav A egységet és az α-aminosav B egységet tartalmazza, és egy C-D prekurzort (f), amely a β-aminosav C egységet és az α-hidroxi- vagy aminosav D egységet tartalmazza, egyesítünk.

Az itt leírásra kerülő eljárásnál az A-B és C-D prekurzorokat két lépésben egyesítjük úgy, hogy (1) az A és D egységek végcsoportjait az A-B és C-D prekurzorokban összekapcsoljuk, így egy aciklusos C-D-A intermediert alakítunk ki, majd (2) a B és C egységek végcsoportjait összekapcsoljuk, így alakítjuk ki a ciklusos terméket.

A K51 képletű vegyület előállításánál, amit a kísérleti részben ismertetünk, egy észterkötést alakítunk ki az A-B molekularészben lévő A egység β-hidroxicsoportja és a C-D fragmens D egységének karboxilcsoportja között, így hozunk létre egy C-D-A-B intermediert, majd egy amidkötést alakítunk ki az A-B molekularész B egységének karboxilcsoportja és a C-D molekularész C egységének β-aminocsoportja között. A K51 képletű vegyület esetén a K vegyület az A-B rész prekurzora, a B vegyület a C-D rész prekurzora és az R vegyület az aciklusos C-D-A-B prekurzor. A K vegyület és a B vegyület védőcsoportot tartalmaz a B egység karbonsavcsoportján és a C egység a-aminocsoportján, hogy az A és D egységek közötti észterképződést meggátoljuk az 1. lépésben. Ezeket a védőcsoportokat a C-D-A-B intermedierről eltávolítjuk úgy, hogy az amidképződés bekövetkezzen a B és C egységek között a 2. lépésben.

A metil-(5S,6R)-5-t-butil-dimetil-szilil-oxi-6-metil-8-fenil-okta-2E,7E-dienoát (G) előállítását, amely a K51 képletű vegyület A egység prekurzora, a 6. ábrán lévő 2. vázlaton mutatjuk be. Az S-transz-3-pentén-2-ol (A) kiindulási vegyületet a racém vegyület enzimatikus rezolválásával állítjuk elő. Az A vegyület és a propargil-klorid közötti reakció bázis és fázistranszfer katalizátorjelenlétében a B propargil-étert 86%-os kihozatallal eredményezi. A B vegyületet butil-lítiummal kezeljük -90 °C hőmérsékleten, így nyerjük a C alkoholt 71%-os kihozatallal. A kívánt 3R,4R-anti-C vegyület az egyetlen termék, amely képződik a Wittig-átrendeződésnél. A C vegyület hidroxilcsoportjának védése után, amikor terc-butil-dimetil-szilil-étert nyerünk (vagy terc-butil-dimetil-szilil-éter), a hármas kötés hidroborálásával (H. C. Brown, Organic Synthesis Via Boranes, Wiley, 1975) a D aldehidet nyerjük 73%-os kihozatallal a C vegyületből. A következő lépés, hogy a D vegyületet az E transz-aJ5-telítetlen észtervegyületté alakítjuk a Horner-Emmons-reakcióval 90%-os kihozatallal. A D vegyület C6-C7 kettős kötésének szelektív ozonolízisével nyerjük az F aldehidet 43%-os kihozatallal. Végül Wittig-reakcióban az F vegyületet benzil-trifenil-foszfónium-kloriddal reagáltatjuk butil-lítium jelenlétében, így nyerjük a G vegyületet 80%-os kihozatallal. A G vegyületet az A vegyületből 26%-os kihozatallal nyerjük.

Az A egység G prekurzorát a B egységgel kapcsoljuk, így nyerjük az A-B prekurzort (K), ezt a reakciót mutatjuk be a 7. ábra szerinti 3. reakcióvázlaton. A G vegyületben a metil-észter-csoport hidrolízisét lítium-hidroxiddal végezzük acetonban, így nyerjük a H karbonsavat 95%-os kihozatallal. A H vegyületet az / triklór-etil-észterrel kapcsoljuk a J vegyület előállítására, ezt 65%-os kihozatallal végezzük úgy, hogy a H vegyület Ν,Ν-dimetil-formamidos oldatát (DMF) kis feleslegben pentafluor-fenil-difenil-foszfináttal (FDPP) és az / vegyület ekvimoláros mennyiségével kezeljük, majd ezt követően 3 ekvivalens mennyiségű diizopropil-etil-aminnal (DIEA) kezeljük 25 °C hőmérsékleten (S. Chen és munkatársai, Tetrahedron Lett. 1991, 32:6711-6714). A J vegyület fluor-deszililezésével nyerjük a K vegyületet 95%-os kihozatallal.

Az / védett aminosavat D-tirozinból állítjuk elő öt lépésben. Először a D-tirozint szulfuril-kloriddal klórozzuk jégecetben (R. Zyenke, Hoppe-Seyler’s Z. f. Physiol. Chemie 1926, 144:247-254). Ezután az N-(tercbutoxi-karbonil)-3-(3-klór-4-hidroxi-fenil)-D-alanint állít16

HU 225 041 Β1 juk elő 94%-os kihozatallal úgy, hogy az aminosav szuszpenzióját 50%-os vizes dioxánban di(terc-butil)-dikarbonáttal kezeljük trietil-amin jelenlétében. A kapott terméket dimetilezzük dimetil-szulfáttal kálium-karbonát jelenlétében acetonban a visszafolyatás hőmérsékletén, a vegyületet 84%-os kihozatallal nyerjük. A metil-észtert ezután elszappanosítjuk nátrium-hidroxiddal vizes dioxánban, így nyerjük 86%-os kihozatallal az N-(terc-butoxi-karbonil)-3-(3-klór-4-metoxi-fenil)D-alanint. Ezután a BOC-védett aminosavat triklór-etanollal, piridinnel és DCC-vel reagáltatjuk diklór-metánban, így nyerjük 65%-os kihozatallal az / triklór-etil-észtert. Ezt a vegyületet trifluor-ecetsavval kezelve kvantitatív kihozatallal nyerjük az / képletű vegyület trifluoracetátsóját.

A (2S)-2-[3’(terc-butoxi-karbonil)-amino-2’,2’-dimetil-propanoil-oxi]-4-metil-pentánsav (P) előállítását, amely a C-D prekurzor, a 8. ábra 4. reakcióvázlatán mutatjuk be. A reakciónál a P vegyület C egységének kiindulóvegyülete az L amino-alkohol. Az L vegyület aminocsoportját védjük di(terc-butil)-dikarbonáttal trietil-amin jelenlétében (93%), majd a primer alkoholt oxidáljuk ruténium-tetroxiddal (P. H. J. Carslen és munkatársai, J. Org. Chem. 1981,46:3936-3938), így nyerjük az M karbonsavat 66%-os kihozatallal. Az L-leucinsavat az N-allil-észterré alakítjuk 93%-os kihozatallal fázistranszfer körülmények között úgy, hogy a keveréket allil-bromiddal reagáltatjuk diklór-metánban és vizes nátrium-bikarbonátban, amely még tetra-n-butil-ammónium-kloridot is tartalmaz (S. Friedreich-Bochnitschek és munkatársai, J. Org. Chem. 1989, 54:751-756). Az M és N vegyületek közötti kapcsolási reakciót 4-dimetil-amino-piridin (DMAP) és diciklohexil-karbodiimid (DCC) alkalmazásával végezzük diklór-metánban, így nyerjük az O vegyületet 75%-os kihozatallal. Az 0 vegyület allil-észterének hasítását THF-ben végezzük, amely morfolint és katalitikus mennyiségű tetrakisz(trifenil-foszfin)-palládiumot tartalmaz, így nyerjük a P vegyületet 95%-os kihozatallal (P. D. Jeffrey és munkatársai, J. Org. Chem. 1982, 47:587-590).

Az A-B prekurzor (K) és C-D prekurzor (P) kapcsolását a 9. ábra 5. vázlata szerint végezzük. A K és P vegyületet DCC/DMAP-vel kezeljük diklór-metánban, így nyerjük a teljesen védett C-D-A-B intermediert (Q) 84%-os kihozatallal. A Q vegyületben a triklór-etil-észter-csoport reduktív hasítását aktivált cinkkel végezzük ecetsavban. A BOC-védőcsoportot ezután trifluor-ecetsavval távolítjuk el, így nyerjük az R vegyületet mint trifluor-ecetsavsót 91%-os kihozatallal a Q vegyületre számolva. Az R vegyület makrolaktamizálását FDPP-vel végezzük, így nyerjük a K51 vegyületet 61%-os kihozatallal (J. Dudash, Jr. és munkatársai, Synth. Commun. 1993, 23:349-356). Az összkihozatal S-transz-3-pentén-2-olra (A) számolva 7%.

A K51 vegyület a K52 vegyületnek a prekurzora, ez az R,R-epoxid, valamint a K53 vegyületé, ez az S,S-epoxid. Viszont, a K52 vegyület a K55 vegyület prekurzora, ez a 18R, 19S-klórhidrin, valamint a K57 vegyületé, ez a 13,14-dihidroanalóg. A K57 vegyület a K58 vegyület prekurzora. A K53 vegyület prekurzora a K61-nek (T. H. Chan és J. R. Finkerbine, J. Am. Chem. Soc. 1972, 94:2880-2882), valamint a K97 vegyületnek (Y. Ittah és munkatársai, J. Org. Chem. 1978, 43:4271—4273).

Az olyan kriptoficinvegyületek előállításához, amelyek Ar csoportként fenilcsoporttól eltérő csoportot tartalmaznak, az A egység (d) általános képletű prekurzorát úgy állítjuk elő, hogy egy F aldehidet (2. vázlat, TBS-védőcsoport) vagy egy S aldehidet (6. vázlat, TBPS-védőcsoport) Wittig-reakcióval egy megfelelő aril-trifenil-foszfónium-kloriddal reagáltatunk butil-lítium jelenlétében. A K81 vegyületet a d prekurzorból állítjuk elő (Ar=p-metoxi-fenil, R₃=Me), mint az a 6. és 7. vázlatokon látható (10. és 11. ábra).

Az Ar csoportot az új kriptoficinbe a szintézis egy későbbi lépésénél is bevezethetjük. Az első d prekurzort (Ar=R₃-Me) K82 vegyületté alakítjuk a megfelelő A-B (e) és C-D (f) prekurzorokkal való kapcsolással, mint az a 8. vázlatból kiderül (12. ábra). A K82 vegyület szelektív ozonolízisével vagy a K90 és K91 vegyületek perjódsavas oxidációjával nyerjük a K108 aldehidvegyületet. A K108 vegyület Wittig-reakciójával, amit a megfelelő aril-trifenil-foszfónium-kloriddal végzünk butil-lítium jelenlétében, nyerjük az új kriptoficint (9. vázlat, 13. ábra). Ezzel az eljárással állítjuk elő a K110 vegyületet (Ar=p-fluor-fenil), a K111 vegyületet (Ar=p-tolil), a K112 vegyületet (Ar=2-tienil) és a K124 vegyületet (Ar=p-klór-fenil). A K110 vegyület a prekurzora a K115 és K116 epoxidoknak. A K111 vegyület a prekurzora a K117 és K118 epoxidoknak és a K128, K130 és K131 klórhidrineknek. A K112 prekurzora a K119 és K120 epoxidoknak. A K124 prekurzora a K125 és K126 epoxidoknak és a K132, K133 és K134 klórhidrineknek.

Egy másik mód a kriptoficinek előállítására az, amikor a makrociklusos molekulát három prekurzorból, így például A-B prekurzorból (e), amely δ-hidroxi- vagy aminosav A egységet tartalmaz, a δ-hidroxi- vagy aminosav D egység prekurzorából és a β-aminosav C egység prekurzorából alakítjuk ki. Az itt leírásra kerülő módszernél a kriptoficint az A-B, C és D prekurzorokból állítjuk elő három lépésben úgy, hogy (1) az A és D egységek végcsoportjait összekapcsoljuk a D prekurzorral, így nyerjük az aciklusos D-A-B intermediert, (2) a D-A-B, valamint C prekurzorok D és C végcsoportjait összekapcsoljuk, így kialakítjuk az aciklusos C-D-A-B intermediert, és (3) összekapcsoljuk a B és C egységek végcsoportjait, így nyerjük a ciklusos terméket.

A K121 vegyület előállításánál, amelyet a kísérleti részben ismertetünk, egy észterkötést alakítunk ki az A-B molekularészben lévő A egység β-hidroxicsoportja és a D fragmensban lévő D egység karboxilcsoportja között, így nyerjük az aciklusos D-A-B intermediert. Amidcsoportot alakítunk ki ezután a C egység karboxilcsoportja és a D-A-B fragmens D egységének a-aminocsoportja között. Végül amidkötést alakítunk ki az A-B molekularész B egységének karboxilcsoportja és a C-D molekularész C egységének β-aminocsoportja között. A K vegyület az A-B rész perkurzora, a

HU 225 041 Β1

BOC-L-leucin-anhidrid a D egység prekurzora, és az AL vegyület a C egység prekurzora. Az AK vegyület a aciklusos C-D-A-B prekurzora a K121 vegyületnek (10. reakcióvázlat, 14. ábra). A K vegyület és a BOC-L-leucin-anhidrid védőcsoportot tartalmaz a B egység karbonsavcsoportján és a D egység a-aminosavcsoportján, hogy az észterkötés kialakulását megakadályozzuk az A és D egységek között az 1. lépésben. A védőcsoportot ezután eltávolítjuk a D egység δ-aminocsoportjáról a D-A-B intermedierben, így tesszük lehetővé az amid kialakulását a B egység aminocsoportja és a C egység karboxilcsoportja között a 2. lépésben. Ezeket a védőcsoportokat eltávolítjuk a C-D-A-B intermedierről, hogy kialakuljon a B és C egységek közötti amidképződés a 2. lépésben.

A találmány szerinti új kriptoficinvegyületekben az epoxidgyűrü nukleofilek által másképpen nyitható, mint a K1 képletű vegyület epoxidgyűrűje, vagy az ezen vegyietekben lévő klórhidrincsoportok más mértékben alakítják ki az epoxidgyűrűket, mint a K8 képletű vegyület klórhidrincsoportja, amelynek az átalakulása révén alakul ki a K1 képletű vegyület. A K1 vegyület epoxidgyűrűje vagy a K8 vegyület klórhidrincsoportja (maszkírozott epoxidgyűrű) igen fontos az optimális in vivő aktivitás szempontjából. Ha az epoxid oxigénjét eltávolítjuk (ilyen van a K3 vegyületben), vagy az epoxidgyűrűt diollá hidrolizáljuk (ilyen van a K15 vegyület esetén), az antitumoraktivitás nagymértékben visszaszorul. A K1 vegyület toxicitása nagyobb állatoknál, mint a K8 vegyületé. Ez a T/C (legtöbb esetben >0%), valamint a bruttó lóg pusztítási értékben (legtöbb esetben <2) tükröződik a K1 vegyületnél, összehasonlítva a K8 megfelelő értékeivel (ennél T/C érték 0% és a bruttó lóg pusztítási érték nagyobb, mint 2,8). A K25 vegyület, ez a megfelelő brómhidrinanalóg, esetén a T/C és a bruttó lóg pusztítási érték összemérhető a K1 vegyületével. Ez a meglepő különbség az in vivő aktivitásban azt jelzi, hogy a K25 brómhidrinvegyület gyorsabban alakul át a K1 vegyületté in vivő, mint a K8. Továbbá azt is jelzi, hogy a kevésbé toxikus K8 vegyület esetén több idő áll rendelkezésre a tumor helyén történő akkumulálódásra, mielőtt az az aktív K1 vegyületté alakul. A K1 vegyület epoxidcsoportja valószínűleg kovalens kötéssel kapcsolódik a célreceptorhoz a tumorsejtben. A találmány szerinti új kriptoficinek potenciálisan jobb in vivő aktivitást mutatnak, mint a K1 és K8 vegyületek azáltal, hogy az in vivő epoxidkialakulás sebessége a megfelelő klórhidrin prodrugból kedvezőbb, és kovalens kötéssel kapcsolódnak a célreceptorhoz a tumorsejtben.

A találmány szerinti vegyületek nagyobb stabilitást mutatnak hidrolízissel és szolvolízissel szemben, mint a K1 és K21 vegyületek. A K1 vegyületnél a C és D egységeket összekötő észterkötés relatíve érzékenyebb enyhe bázikus hidrolízisre, pH=11-nél hidroxisavvá hasad, a felezési idő 0,83 óra. A C-D észterkötés a K21 vegyületben, amely nem tartalmaz metilcsoportot a C egység C-2 helyzetén, nagyobb sebességgel hasad, a felezési ideje 0,25 óra. A C-D észterkötés szintén érzékeny szolvolízisre. Ha metanolt alkalmazunk az izolálásnál, jelentős mértékű metanolízis következik be a K1 és K21 vegyületeknél. A K21 vegyület sokkal érzékenyebb metanolízisre, mint a K1 vegyület. A K1 vegyület antitumorhatást mutat, míg a K21 vegyület inaktív, feltehetően azért, mert a K21 vegyület C-D észterkötése gyorsabban hidrolizálódik in vivő, mint a K1 vegyület C-D észterkötése. A C-D észterkötés hidrolízise magyarázza feltehetően részlegesen a K1 vegyület in vivő aktivitásának csökkenését a hatóanyag intraperitoneális és szubkután adagolása esetén. A C egység C-2 helyén két metilcsoportot tartalmazó kriptoficinek C-D észterkötése, mint amilyen a K52 vegyületnél van, pH=11-nél stabil.

A találmány szerinti vegyületek, valamint a korábban leírt kriptoficinvegyületek terápiásán alkalmazhatók daganatellenes szerként, és így felhasználhatók a daganatos betegségek kezelésénél. A találmány értelmében a „daganatos kifejezés abnormális növekedésű daganatra vonatkozik, amely növekedés a sejtek proliferációja következtében jön létre, amelyeknél a szokásos növekedési gátlás nincs meg. A „dagantellenes szer” kifejezés vonatkozik bármely vegyületre, készítményre és bármilyen típusú keverékre, amely gátolja, megszünteti, hátráltatja vagy megfordítja a sejt daganatos fenotípusát.

Jelenleg a rákos betegségek kezelésére kemoterápiát, sebészi műtéteket, sugárzásos terápiát, biológiaiválasz-módosítókkal való terápiát és immunoterápiát alkalmaznak. Mindegyik terápia specifikus indikációval rendelkezik, és ezek a szakterületen jártas szakember számára ismertek, és ezek közül bármelyik vagy mindegyik alkalmazható annak érdekében, hogy a daganatos sejt teljes pusztítását érjük el. A találmány értelmében egy vagy több kriptoficint alkalmazunk kemoterápiás szerként. Továbbá a találmány értelmében kombinált kemoterápia, amelynél a kriptoficineket más daganatellenes szerekkel együtt alkalmazzuk, szintén a találmány oltalmi körébe tartozik, és az ilyen kombinált terápiák általában hatásosabbak, mint ha csak egy daganatellenes szert alkalmazunk. A találmány vonatkozik továbbá gyógyszerkészítményekre, amelyek terápiásán hatásos mennyiségben tartalmaznak legalább egy új találmány szerinti kriptoficint, beleértve azok nem toxikus addíciós sóit is, és amely készítmények alkalmasak a fentiekben említett terápiás hatások kifejtésére. Az ilyen készítmények tartalmazhatnak fiziológiailag elfogadható folyadék-, gél- vagy szilárd hordozókat, hígítókat, adjuvánsokat és vivőanyagokat. Ilyen hordozókat, hígítókat, adjuvánsokat és vivőanyagokat ismertetnek például a következő irodalmi helyen: United States Pharmacopeia XXII. és National Formulary XVII, U. S. Pharmacopeia Convention, Inc., Rockville, MD (1989). Egyéb más kezelési módszereket ismertetnek például a következő irodalmi helyen: AHFS Drug Information, 1993., kiadó American Hospital Dormulary Sevice, 522-660.

A találmány vonatkozik továbbá olyan gyógyszerkészítményekre daganatos betegségek gyógyításához, amelyek legalább egy kriptoficinvegyületet és legalább egy másik daganatellenes szert tartalmaznak. A készít18

HU 225 041 Β1 menyekben felhasználható daganatellenes szerek lehetnek azok, amelyeket a következő irodalmi helyen ismertetnek: The Merck Index, 11. kiadás, Merck & Co., Inc., (1989) 16-17. Egy másik kiviteli formánál a daganatellenes szer lehet például egy antimetabolit, amely a korlátozás szándéka nélkül lehet például valamely következő anyag: metotrexát, 5-fluoruracil, 6-merkaptopurin, citozin-arabinozid, hidroxi-karbamid és 2-klór-dezoxiadenozin. Egy másik kiviteli formánál a találmány szerinti készítmény daganatellenes szerként tartalmazhat valamely alkilezőszert, amely a korlátozás szándéka nélkül például lehet a következő: ciklofoszfamid, melfalan, buzulfán, paraplatin, klórambucil és nitrogénmustár. Egy másik kiviteli formánál a daganatellenes szer lehet valamely növényi alkaloid, így például a korlátozás szándéka nélkül vinkrisztin, vinblasztin, taxol és etopozid. Egy további kiviteli formánál a daganatellenes szer lehet valamely antibiotikum, így például a korlátozás szándéka nélkül doxorubicín (adriamicin), daunorubicin, mitomicin c és bleomicin. Egy további kiviteli formánál a daganatellenes szer lehet valamely hormon, így például a korlátozás szándéka nélkül kaluszteron, diomosztavolon, propionát, epitiosztanol, mepitiosztán, tesztolakton, tamocifen, poliösztradiol-foszfát, megeszterol-acetát, flutamid, nilutamid, trilotán. Egy további kiviteli formánál a daganatellenes szer lehet valamilyen enzim, például a korlátozás szándéka nélkül L-aszparagináz vagy valamely amino-akridin-származék, például amszakrin. További alkalmazható daganatellenes szereket ismertetnek például a következő irodalmi helyen: Skeel Roland T., Antineoplastic Drugs and Biologic Response Modifier: Classification use and Toxicity of Clinically Useful Agents, Handbook of Cancer Chemotherapy (3. kiadás), Little Brown & Co. (1991).

A találmány szerinti kriptoficinvegyületeket és készítményeket emlősöknek adagolhatjuk állatgyógyászati célból, például háziállatoknak, valamint klinikai felhasználásnál humán egyedeknél, az adagolást más terápiás szerekhez hasonlóan végezzük. Általában a terápiás hatásos dózis függ az adagolás módjától, valamint az adott beteggel összefüggő egyéb faktortól. Általában a dózis 0,001-100 mg/kg, előnyösen 0,01-10 mg/kg testtömeg. A megadott dózisokon belüli mennyiségeket adagolhatjuk folyamatos infúzió formájában is egy hosszabb időn keresztül, általában 24 órát meghaladó időn keresztül, addig, amíg a kívánt terápiás hatást elérjük. Általában a hatóanyag dózisát, valamint az adagolás módját a hatóanyag relatív hatásosságától, toxicitásától, valamint a tumor növekedési jellemzőitől és a kriptoficin sejtciklusra való hatásától, továbbá a hatóanyag farmakokinetikájától, a beteg korától, nemétől, fizikai állapotától függően választjuk meg.

A kriptoficinvegyületeket akár önmagukban, akár más daganatellenes szerekkel együtt gyógyszerkészítményekké formulázhatjuk akár a bázis, akár a sóforma alkalmazásával. A gyógyszerészetileg elfogadható nem toxikus sók közé tartoznak a bázisos, addíciós sók (szabad karboxil- vagy más anionos csoportokkal alkotott sók), ezek előállításához szervetlen bázisokat, például nátrium-, kálium-, ammónium-, kalcium- vagy ferri-hidroxidokat, továbbá szerves bázisokat, így például izopropil-amint, dimetil-amint, 2-etil-amino-etanolt, hisztidint, prokaint stb. alkalmazunk. A sók lehetnek savaddíciós sók is, amelyeket bármilyen kationos csoporttal alakítunk ki, a sóképzéshez szervetlen savakat, például sósavat vagy foszforsavat, vagy szerves savakat, például ecetsavat, oxálsavat, borkősavat, mandulasavat stb. alkalmazunk. További vivőanyagok, amelyek alkalmazhatók, a szakember számára ismertek, ilyeneket írnak le például a következő irodalmi helyen: United States Pharmacopeia XXII és National Formulary XVII, U. S. Phramacopeia Convention, Inc., Rockville, MD(1989).

Az adott alkalmas hordozóanyag megválasztása a gyógyszerkészítményben függ az adagolás módjától, így például a daganatellenes készítményeket kialakíthatjuk orális adagolásra. Ezek a készítmények lehetnek folyékony oldatok vagy szuszpenziók, vagy lehetnek szilárd készítmények is. Az orális készítmények általában tartalmazzák a következő anyagokat adalékként: kötőanyagok, töltőanyagok, hordozóanyagok, konzerválószerek, stabilizálószerek, emulgeálószerek, pufferek és védőanyagok, így például gyógyszerészeti minőségű mannit, laktóz, keményítő, magnézium-sztearát, nátrium-szacharin, cellulóz, magnézium-karbonát stb. Ezek a készítmények lehetnek oldatok, szuszpenziók, tabletták, pirulák, kapszulák, nyújtott felszabadulású készítmények vagy poranyagok, amelyek általában 1-95% hatóanyagot, előnyösen 2-70% hatóanyagot tartalmaznak.

A találmány szerinti készítmények lehetnek injektálható készítmények, folyékony oldatok, szuszpenziók vagy emulziók formájában; lehetnek szilárd készítmények, amelyeket közvetlenül az injekció beadása előtt alakítunk oldattá, szuszpenzióvá. Az injekciók lehetnek szubkután, intravénás, intraperitoneális, intramuszkuláris, intratekális vagy intrapleurális adagolásúak. A hatóanyagot vagy a hatóanyagokat általában hígítóanyaggal vagy vivőanyaggal keverjük el, amelyek fiziológiailag elviselhetők és kompatíbilisak a hatóanyaggal. Hígítóként és vivőanyagként például vizet, sóoldatot, dextrózt, glicerint stb. vagy ezek kombinációját alkalmazzuk. Kívánt esetben a készítmények tartalmazhatnak kis mennyiségben kiegészítő anyagokat is, így például nedvesítő- vagy emulgeálószereket, stabilizálóvagy pH-pufferoló anyagokat.

Az alapképlettel megadott találmány szerinti vegyületek alkalmazhatók emlőssejtek proliferációjának gátlására, amikor is ezeket a sejteket az emlőssejtek proliferációját meggátolni képes mennyiségű kriptoficin vegyülettel érintkeztetjük. Egy előnyös kiviteli formánál hiperproliferatív emlőssejtek proliferációját gátoljuk. A találmány értelmében a „hiperproliferatív emlőssejtek” kifejezés olyan emlőssejtekre vonatkozik, amelyeknél nem áll fenn a növekedés karakterisztikus gátlása, így például a programozott sejthalál (apoptosis). Egy további előnyös alkalmazás a humán sejteknél való alkalmazás. Ennek az alkalmazásnak egy előnyös kiviteli formája, amikor a humán sejteket legalább egy kriptofi19

HU 225 041 Β1 cinvegyülettel és legalább egy további daganatellenes szerrel érintkeztetjük. Ennél az alkalmazásnál a daganatellenes szer lehet bármely fentiekben említett szer.

A találmány oltalmi körébe tartozik továbbá az az alkalmazás, amikor a megadott általános képletű kriptoficinvegyületeket hatóanyag-rezisztens fenotípusú hiperproliferatív sejtek proliferációjának gátlására alkalmazzuk, ilyenek például a többszörös hatóanyag-rezisztens fenotípusok, ennél az alkalmazásnál az említett sejteket a peroliferációt gátló hatásos mennyiségű kriptoficinvegyülettel érintkeztetjük. Az előnyös alkalmazásnál humán sejteket alkalmazunk emlőssejtként. A találmány oltalmi körébe tartozik az az alkalmazás is, amikor a kriptoficinvegyületeket és ezzel kombinációban legalább egy daganatellenes szert alkalmazunk a kezelésnél. Az alkalmas daganatellenes szer lehet valamely fentiekben említett anyag.

A találmány szerinti alkalmazással enyhíthetők a hiperproliferatív emlőssejtek által kiváltott patológiai állapotok, így például a neoplasia, ennél a gyógyszerkészítmény hatásos mennyiségét adagoljuk. A „patológiai állapot kifejezés vonatkozik bármely patológiás állapotra, amely az olyan emlőssejtek proliferációjából adódik, amely sejteknél a sejtnövekedés normálgátlása nem áll fenn. Az ilyen sejtproliferáció következménye lehet a korlátozás szándéka nélkül például valamely következő daganatos betegség: melldaganat, kissejt tüdő, nemkissejt tüdő, vastagbél, leukémia, melanoma, hasnyálmirigy-adenocarcinoma, központi idegrendszer (CNS), petefészek, prosztata, lágyszövet vagy csontszarkóma, fej és nyak, gyomortraktus, amely magában foglalja a hasnyálmirigyet és a nyelőcsövet, gyomor, myeloma, hólyag, vese, neuroendokrin, amely magában foglalja a thyroid és nem-Hodgkin-féle betegséget és a Hodgkin-féle betegséget. Az alkalmazás egy további kiviteli formájánál a daganatos sejt humán sejt. Ennél az alkalmazásnál egy másik kiviteli formánál a találmány szerinti kriptoficint más gyógyhatású anyagokkal, valamint más daganatellenes szerekkel együttesen is alkalmazhatjuk. Ilyen terápiákat és megfelelő anyagokat ismertetnek például a következő irodalmi helyen: Cancer Principles and Practice of Oncology, 4. kiadás, De Vita, V., Hellman, S. és Rosenberg., S., Lippincott Co. (1993).

A találmány leírása során bemutatjuk, hogy a kriptoficinvegyületek hatásosan rombolják a tenyésztett sejtek mikrocsatornás szerkezetét. Továbbá ellentétben a vinkaalkaloidákkal, a kriptoficinvegyületek kevésbé jó szubsztrátumnak tűnnek a hatóanyag-elszívó hatású P-glükoprotein számára. A K1 vegyület a fő citotoxin a kék-zöld alga (cyanobacteria) Nostoc sp. GSV 224 jelű törzsben, és kiváló aktivitást mutat egerekbe implantált tumorokkal szemben. Ezt a ciklusos didepszipeptidet korábban a Nostoc sp. ATCC 53789 számú törzsből mint gombaellenes szert izolálták, és a szerkezetét korábban meghatározták. Most megállapítottuk ennek a potenciálisan fontos hatóanyagnak a relatív és abszolút sztereokémiáját kémiai és spektroszkópiai módszerek kombinációjával. A GSV 224 törzsből 24 további kriptoficinvegyületet, így a K2-7, K16-19, K21, K23, K24,

K26, K28-31, K40, K43, K45, K49, K50 és K54 vegyületeket izoláltuk, és meghatároztuk a teljes szerkezetüket és citotoxicitásukat. Ezeknek számos származékát és bomlástermékeit írjuk le mind kémiailag, mind farmakológiailag.

A következő példákban a találmány szerinti megoldás néhány előnyös kiviteli formáját mutatjuk be a korlátozás szándéka nélkül.

Kísérleti rész

A következő részben a mennyiségeket grammban (g), milligrammban (mg), mikrogrammban (pg), nanogrammban (ng), pikogrammban (pg), mólban (mól) vagy millimólban (mmol) adjuk meg, a koncentrációkat térfogatszázalékban (tf%), mólban (mól), millimólban (mmol), mikromólban (pmol), nanomólban (nmol), pikomólban (pmol) vagy normálértékben adjuk meg, a térfogatokat literben (I), milliliterben (ml), mikroliterben (pl), továbbá a méreteket mm-ben adjuk meg, hacsak másképp nem jelöljük.

A következő példákban bemutatjuk a kriptoficinvegyületek izolálását és előállítását, valamint terápiás szerként való alkalmazását.

A vizsgálatoknál több mint 1000 kék-zöld alga (cyanobacteria) extraktumát és a Nostoc sp. GSV 224 lipofil extraktumát találtuk erősen citotoxikusnak [Patterson, G. M. L. és munkatársai, J. Phycol. 27:530-536 (1991)], ezek minimális gátló koncentrációja (MICs) 0,24 ng/ml a humán nasopharyngealis karcinóma sejtvonallal (KB) szemben és 6 ng/ml LoVo esetén, ez humán colarectal adenocarcinoma sejtvonal. Még fontosabb, hogy ez az extraktum szignifikáns tumorszelektív citotoxicitású a Corbett-vizsgálatnál (Corbett, T. H. és munkatársai, Cytotoxic Anticancer Drugs: Models and Concepts fór Drug Discovery and Development, 35-87, Kluwer Academic Publisher’s: Norwell. 1992; Valeriote, F. A. és munkatársai, Discovery and Development of Anticancer Agents, Kluwer Academic Publisher’s: Norwell, 1993). Biovizsgálattal követett fordított fázisú kromatográfiával algaextraktumból olyan frakciót nyertünk, amely túlnyomó részben K1 vegyület, amely egy hatásos fungicid, és amelyet korábban a Nostoc sp. ATCC 53789 törzsből izoláltak (Schwartz, R. E. és munkatársai, J. Ind. Microbiol. 5:113-124 (1990); Hirsch, C. F. és munkatársai, US 4 946 835, 1990. augusztus 7.), és azt találták, hogy igen hatásos a Cryptococcus törzsekkel szemben.

A K1 vegyület, amely a legnagyobb citotoxicitású a Nostoc sp. GSV 224 nyersextraktumában, és a tiszta vegyület esetén az IC₅₀-érték 3 pg/ml KB, illetve 5 pg/ml LoVo esetén. A Corbett-vizsgálatnál a K1 vegyület erősen tumorszelektív és azonos mértékben citotoxikus hatóanyag-érzékeny és hatóanyag-rezisztens tumorsejtekkel szemben. Az immunfluoreszcens vizsgálat kimutatta, hogy a K1 vegyület kölcsönhatásba lép a celluláris anyaggal, hasonlóképpen a vinblasztinhoz, de ez utóbbitól különbözik abban, hogy hosszabb a hatásideje, és nem képez parakristályos testeket. Az előzetes in vivő kísérleteknél a K1 vegyület igen ígéretes hatást mutat egerekbe implantált tumorokkal szemben.

HU 225 041 Β1

Kisebb mennyiségű, más egyéb kriptoficinvegyületek is jelen vannak a Nostoc sp. GSV 224 törzsben. Ezek közül 21-et izoláltunk elegendő mennyiségben ahhoz, hogy meghatározzuk a szerkezetüket és az antitumorhatásukat in vitro, a kinyerést az alga extrakciójával végeztük, ehhez 1:5=diklór-metán/acetonitril elegyet alkalmaztunk, és az extraktumból fordított fázisú HPLC-vel nyertük ki az anyagot. A K1 vegyület mellett még a frakcióból K2, K3, K4, K16, K17, K18, K19, K21, K23, K24, K26, K28, K29, K30, K31, K40, K43, K45, K49, K50 és K54 vegyületeket eluáltunk fordított fázisú flashkromatográfiával, az eluálószer 65:35=acetonitril/víz. A K2, K3, K4, K5 és K6 vegyületek voltak azok, amelyeket csak metanollal extraháltunk, és fordított fázisú kromatográfiával (metanol/víz) nyertük ki az algából. A K2, K3, K4, K5 és K6 vegyületeket 3:1=metanol/víz eleggyel eluáltuk, a K7 vegyületet egy korábbi, kevésbé citotoxikus frakció tartalmazza, ezt 1:3=metanol/víz eleggyel eluáltuk. Az aciklusos K5, K6 és K7 vegyületek úgy tűnnek, hogy az izolálási folyamat alatt a K1 vegyület bomlása révén keletkeznek.

A K3 és K5 vegyületek azonosak a fungicidhatású félszintetikus vegyületekkel, amelyeket a K1 vegyületből nyertek (Sesin, D. F. US 4 845 085, 1989. július 4.; Sesin, D. F. és Liesch. J. M., US 4 868 208, 1989. szeptember 19.). A K3 vegyületet a K1 vegyületből nyerjük cink-réz kombinációval vagy difoszfor-tetrajodiddal való kezeléssel (Sesin, D. F. US 4 845 085, 1989. július 4.). A K5 vegyületet a K1 vegyület metanolízisével lehet előállítani (Sesin, D. F. és Liesch. J. M., US 4 868 208, 1989. szeptember 19.).

1. példa

Szerkezetmeghatározás

Az új vegyületek, úgymint a K2, K3, K4, K16, K17, K18, K19, K21, K23, K24, K26, K28, K29, K30, K31, K40, K43, K45, K49, K50 és K54 vegyületek, valamint a korábban ismertetett vegyületek szerkezetét ismert módon a szakterületen ismert módszerekkel határoztuk meg. A tömegspektroszkópiai adatok egyeztek a mólösszetétellel. A proton- és karbon-NMR-adatokat COSY, HMQC, HMBC és NOESY spektrumokból nyertük, ezekkel állítottuk össze az említett depszipeptid típusú vegyületek szerkezetét. A különböző hidroxi- és aminosavegységek jelenlétét a vegyületekben gázkromatográfiával és tömegspektroszkópiával igazoltuk. A teljes szerkezetet, beleértve az abszolút sztereokémiát, a kémiai degradációs és speciális analitikai módszerek kombinációjával határoztuk meg, az adott kriptoficinvegyület megfelelő származékán.

2. példa

Szerkezetaktivitás-összefüggés (Structure-Activity

Relationships, SÁR)

A K1 vegyület szerkezeti jellemzőit, amelyek szükségesek az optimális aktivitáshoz, KB (humán nasopharyngealis karcinóma), LoVo (humán kolonkarcinóma) és SKOV3 (humán petekarcinóma) sejtvonalakkal szembeni citotoxicitás alapján értékeltük, a többi vegyületek esetében is ezt alkalmaztuk. A kapott IC₅₀-értékeket az 1. és 2. táblázatban foglaljuk össze. A citotoxicitások összehasonlításából kitűnik, hogy az intakt makrolidgyűrű, az epoxi- és metilcsoportok, a kettős kötés a 7,8-epoxi-5-hidroxi-6-metil-8-fenil-2-okténsav-egységben (lásd A egység az 1. ábrán), a klór és O-metil-csoportok a 3-(3-klór-4-metoxi-fenil)-alanin-egységben (B egység), a metilcsoport a 3-amino-2-metil-propionsav-egységben (C egység) és az izobutilcsoport a leucinsavegységben (D egység) szükséges a K1 vegyület esetén az optimális citotoxicitáshoz. A K8 vegyület hatásos citotoxicitása valószínűleg a klórhidrincsoportnak tudható be, amely egy maszkozott epoxidként viselkedik.

A legaktívabb vegyületeket vizsgáltuk szelektív citotoxicitásra is különböző sejttípusokkal szemben, úgymint egérleukémia (L1210 vagy P388), egér-szilárdtumor (kólón adenocarcinoma 38, pankreatikus ductal adenocarcinoma 03, mell adenocarcinoma M16/m17), humán szilárd tumor (kólón CX-1, HCT8, H116; tüdő H125, emlő MX-1, MCF-7) és kevésbé rosszindulatú fibroplaszt (LML) esetén a vizsgálatot Corbett-analízissei lemez diffúziós vizsgálattal végeztük, amely utóbbit a gombaellenes és baktériumellenes vizsgálatokhoz alkalmazott modell alapján végeztük. Az 1. táblázatban foglaljuk össze az eredményeket, ebből kitűnik, hogy a K1-5 és K8 vegyületek sem szilárdtumor-, sem leukémiaszelektívek, de közel azonosan aktívak tumorsejtvonalakkal szemben, beleértve a hatóanyag-rezisztenseket, így például az M17-et. Egyik vegyület sem mutatott inhibíciós zónát egyik szilárd tumor sejtvonal esetén sem, amelynek értéke 250 zónaegység, azaz

7,5 mm, nagyobb, mint a zónainhibíció a leukémia-sejtvonalra. A K1-7 és K8 vegyületek azonban jelentősen nagyobb zónainhibíciót mutattak (400 zónaegység) mindegyik tumorsejtvonal esetén, összehasonlítva a fibroblaszt LML esetén mutatott zónainhibícióval. Diagnosztikai vizsgálatoknál azt találtuk, hogy az LML inkább normálsejtként, mint tumorsejtként viselkedik a klinikailag hasznos citotoxikus anyagokkal szemben (lásd Corbett-vizsgálat az 5-fluoruracilra, etopozidra és taxolra az 1. táblázatban). Mivel a különböző citotoxicitás értéke nagyobb, mint 250 zónaegység, a K1-5 és K8 vegyületek tumorszelektívek. Ezeket a vegyületeket választottuk ki az in vivő vizsgálatokhoz.

A K1 vegyület hatásos az egerekbe implantált egérés humán tumorral szemben, beleértve a hatóanyag-rezisztenseket is (lásd 3. táblázat). Ez a vegyület kiváló aktivitású öt korai stádiumú egértumorral szemben, így például a következők esetén: kólón adenocarcinoma #38 és #51, taxolszenzitív és taxolrezisztens emlő #16/C/RP és pankreatikus ductal adenocarcinoma #03, valamint két korai stádiumú humán tumorral szemben, amelyeket az SCID egereknél vizsgáltunk, úgymint MX-1 mell és H125 adenosquamous tüdő, ezeknél a tumorterhelési T/C érték (átlagos tumorterhelés a kezelt állatoknál/átlagos tumorterhelés kezeletlen állatoknál) kisebb mint 10%.

Ha a T/C érték kisebb mint 42%, a vegyületeket hatásosnak tekintjük az NCI standardok szerint; ha a T/C érték kisebb mint 10%, a vegyületek kiváló aktivitásúak

HU 225 041 Β1 és potenciálisan klinikai aktivitásúak az NCI standardok szerint (Corbett, T. H. és munkatársai, Cytotoxic Anticancer Drugs: Models and Concepts fór Drug Discovery and Development, 35-87, Kluwer Academic Publisher’s: Norwell. 1992). A vizsgálatok közül kettő esetében volt a bruttó (tumorsejt) lóg pusztítást idő 2,0. A bruttó lóg pusztítást időt a következő összefüggés alapján számoljuk: T-C/3,2 Td, ahol T jelenti az átlagos időt napokban, amíg a kezelt tumor eléri a 750 mg-ot, C jelenti az átlagos időt napokban a kontrollcsoportnál, mire a tumor eléri a 750 mg-ot, és Td jelenti a tumor megduplázódásához szükséges időt. Ha a bruttó lóg pusztítást érték >2,8, 2-2,8, 1,3-1,9, 0,5-0,8 és <0,5 5-20 napos hatóanyag-kezelési időnél, ezeket ++++, +++, ++, + és - (inaktív) jelzéssel látjuk el. Ahhoz, hogy az egerekbe implantált 100-300 mg méretű tumorok részleges vagy teljes regresszióját érjük el, szükséges a +++-++++ aktivitás.

A K8 vegyület hatásos az egerekbe implantált tumorok széles spekrumával szemben (4. táblázat). Kiváló aktivitást mutat az eddig vizsgált összes tumorral szemben a tumorterhelési T/C érték <10%, de ami még fontosabb, a bruttó lóg pusztítást aktivitás értéke +++ és ++++ közötti.

Jó in vivő aktivitást mutatott a K35 vegyület is az egyik vizsgálatnál.

Az észlelt halálos toxicitás a K1 és K8 vegyületek vizsgálata során a leukopéniának tudható be, ez gyakori a klinikailag vizsgált tumorellenes szereknél.

3. példa

Tenyésztési körülmények

A Nostoc sp. GSV 224 törzset professzor C. P. Wolktól, MSU-DOE Plánt Research Laboratory, Michigan State University, szereztük be. A Nostoc sp. ATCC 53789 törzset az American Type Culture Collectiontől szereztük be. 1 literes lombik algatenyészetet alkalmaztunk az inokuláláshoz, a szervetlen tápanyagot autoklávozott 20 literes üvegedény tartalmazta, tápanyagként módostított BG-11 tápközeget alkalmaztunk [Patterson, G. M. L. és munkatársai, J. Phycol. 27:530-536 (1991)], ennek a pH-ját NaOH-dal pH=7 értékre állítottuk be. A tenyészetet folyamatosan megvilágítottuk 200 pmol foton m^-2s^-2 besugárzási intenzitással (fotoszintetikusán aktív besugárzás), a besugárzáshoz hideg-fehér fluoreszcens csöveket alkalmaztunk, a levegőztetés mértéke 5 l/perc, a levegőztetéshez 0,5% CO₂-tartalmú levegőt alkalmaztunk, ennek hőmérséklete 24±1 °C. A tenyészetet szűréssel gyűjtöttük be 21 nap elteltével. A kihozatal liofilízált Nostoc sp. GSV 224, illetve ATCC 53789 esetén átlagosan 0,6 I, illetve 0,3 g/l tenyészet.

4. példa

Izolálás

A) eljárás: 50 g liofilízált Nostoc sp. GSV 224-et 2 I 1:5=CH₂CI₂/CH₃CN eleggyel extraháltunk 48 órán át, majd az extraktumot vákuumban betöményítettük, így egy sötétzöld, szilárd anyagot nyertünk. A maradékot (1 g; KB MIC 0,24 ng/ml) egy ODS-bevonatú szilikagél oszlopra vittük (55 g, 7*5 cm) és flashkromatografáltuk, eluálószerként a következőket alkalmaztuk: 1:3=CH₃CN/H₂O (0,8 I), 1:1 CH₃CN/H₂O (0,8 I), 65:35 CH₃CN/H₂O (1 I), MeOH (0,8 I) és CH₂CI₂ (0,5 I). A frakciót, amelyet a 65:35=CH₃CN/H₂O eluálással nyertünk (420 mg KB MIC 14 pg/ml), reverz fázisú HPLC-vel kromatografáltuk (Econosil C18, 10 μ, 25 cmx21,5 mm, UV-detektálás 250 nm-nél, 65:35=CH₃CN/H₂O, áramlási sebesség 6 ml/perc), így nyertük a K1 vegyületet (t_R 49,3 min, 220 mg) és számos szennyezett frakciót. A frakciót, amelyet az Econosil C18 oszlopról t_R=28,8 percnél eluáltunk, tovább tisztítjuk normálfázisú HPLC-vel (Econosil szilika 5 pm-es töltet, 250x4,6 mm, 6:4=etil-acetát/hexán, 3 ml/perc), így nyertük a K16 vegyületet (3 mg). Az Econosil C18 oszlopról t_R=32,5 percnél eluált frakciót HPLC-nek vetettük alá Econosil szilikagél oszlopon, ehhez 55:45=etil-acetát/hexán elegyet alkalmaztunk, 3 ml/perc, így nyertük a K24 vegyületet (0,8 mg). Az Econosil C18 oszlopról t_R=35,5 percnél eluált vegyületet HPLC-vel kromatografáltuk kétszer Econosil szilikagél oszlopon, először 1:1=etil-acetát/hexán alkalmaztunk, sebesség 3 ml/perc, majd másodszor 4:6=etil-acetát/metilén-kloridot alkalmaztunk, sebesség

2,5 ml/perc, így nyertük a K23 vegyületet (1,2 mg) és a K43 vegyületet (0,1 mg). Az Econosil C18 oszlopról t_R=39,5 percnél eluált frakciót HPLC-nek vetettük alá Econosil szilikagél oszlopon, 1:1=etil-acetát/hexán, sebesség 3 ml/perc, így nyertük a K2 vegyületet (6 mg) és a K21 vegyületet (14 mg), valamint egy kriptoficinekből álló komplett keveréket, ezt t_R=32,5-nél eluáltuk. Ez utóbbi frakciót, amely 400 g száraz algából akkumulálódott, egymást követően kromatografáltuk egy félpreparatív oszlopon (partisii C18, 250*9,4 mm, 10 pm) 35:65 víz/acetonitril eleggyel és egy fordított fázisú analitikai oszlopon (Econosil 150*4,6 mm, 5 pm) 5:4:2 víz/acetonitril/metanol eleggyel, sebesség

1,3 ml/perc, így nyerjük a K50 vegyületet (t_R=34,8, 0,4 mg) és a K40 vegyületet (t_R=38,8 perc, 0,3 mg). Az Econosil C18 oszlopról a t_R=54,5 percnél eluált frakciót HPLC-nek vetettük alá Econosil szilikagél oszlopon 1:1=etil-acetát/hexán eleggyel, sebesség 3 ml/perc, így nyertük a K17 vegyületet (0,3 mg). Az Econosil C18 oszlopról t_R=54,5 percnél eluált frakció normálfázisú HPLC-tisztításával nyertük a K45 vegyületet (t_R=6,7 perc, 0,1 mg), a K26 vegyületet (t_R=8,9 perc, 0,5 mg) és a K54 vegyületet (t_R=19,8 perc, <0,1 mg), az eluálást 1:1=etil-acetát/hexán eleggyel végeztük. Az Econosil C18 oszlopról széles csúcsként eluált frakciót (t_R=58-70 perc) HPLC-nek vetettük alá Econosil szilikagél oszlopon 43:57=etil-acetát/hexán eleggyel

2,5 ml/perc sebességgel, így nyertük a K4 vegyületet (t_R=19,6 perc, 1,5 mg), a K31 vegyületet (t_R=9,4 perc, 0,8 mg), a K19 vegyületet (t_R=25,8 perc, 0,3 mg), a K49 vegyületet (t_R=28 perc, 0,1 mg), a K28 vegyületet (t_R=29 perc, 0,5 mg), és szennyezésként a K29 vegyületet (t_R=52,5 perc, 2 mg) és a K30 vegyületet (t_R=49 perc, 3 mg). A K29 és K30 vegyületeket ezután fordított fázisú HPLC-vel tisztítottuk (Econosil C18, 10 pm, 250*10 mm, 3:1=metanol/víz). Az Econosil

HU 225 041 Β1

C18 oszlopról t_R=78,9 percnél eluált frakciót HPLC-nek vetettük alá Econosil szilikagél oszlopon, így nyertük a K3 vegyületet (t_R=16,4 perc, 3 mg). Az Econosil C18 oszlopról 82,8 percnél eluált frakciót HPLC-nek vetettük alá Econosil szilikagél oszlopon 45:55=etilacetát/hexán eleggyel, sebesség 3 ml/perc, így nyertük a K18 vegyületet (t_R=19,2, 0,8 mg).

B) eljárás: 12,23 g liofilizált Nostoc sp. GSV 224-et kétszer 700 ml és 400 ml MeOH-dal extrahálunk 12, illetve 5 órán át. Az extraktumokat egyesítjük, vákuumban betöményítjük, így 1,84 g sötétzöld színű szilárd anyagot nyerünk, amelyet víz és CH₂O₂ között megosztunk. A lipofil részt (0,65 g; KB MIC 0,24 ng/ml) ODS-borítású szilikagél oszlopra visszük (55 g, 7*5 cm), flashkromatografáljuk 1:3 MeOH/H₂O eleggyel (0,8 I), 1:1 MeOH/H₂O eleggyel (0,8 I), 3:1 MeOH/H₂O eleggyel (0,8 I), MeOH (0,8 I) és CH₂CI₂-nal (0,5 I). Azt a frakciót, amelyet a 3:1 MeOH/H₂O eleggyel eluáltunk (22 mg; KB MIC 14 pg/ml), és amely lényegében az összes citotoxicitásaktivitást hordozza, fordított fázisú HPLC-nek vetjük alá (Econosil C18, 10 pm, 250*10 mm, UV-detektálás 250 nm-nél, átfolyási sebesség 3 ml/perc), az eluálást 1:5 MeOH/H₂O eleggyel végezzük, így nyerjük a K7 vegyületet (t_R=7,6 perc, 0,2 mg), a K5 vegyületet (t_R=15,4 perc, 2,3 mg), a K2 vegyületet (t_R=16 perc, 1 mg), a K1 vegyületet (t_R=19 perc, 12 mg), a K4 vegyületet (t_R=26,5 perc, 1,2 mg) és a K3 vegyületet (t_R=30,2 perc, 1,4 mg). A tenyészetek közül az egyik frakció (8,1 mg), amelyet a flashkromatográfiás oszlopról 1:3 MeOH/H₂O eleggyel eluáltunk, kisebb citotoxicitást (KB MIC 2 pg/ml) mutatott. A HPLC oszlopról a 2:3 MeOH/H₂O eleggyel való eluálással nyerjük a kriptoficin G vegyületet (K7 vegyület, t_R=6 perc, 2,4 mg).

5. példa

A K1 -7 vegyületek spektroszkópiai adatai

A nagybetűkkel jelölt adatok a spektroszkópiai adatokban az 1. ábra szerinti A-D egységekre vonatkoznak.

K1 vegyület [a]_D +33,8° (MeOH, c 1,83); UVX_max. (ε) 208 (42,400),

218 (33,700), 228 (23,800), 280 (2,210); CD [θ]₂₀₂ + 15,900, [θ]₂₀₆ +64,900, [θ]₂₁₄ +26,900, [θ]₂₂₄ +46,300, [θ]₂₃₇ +10,500, IR (CHCI₃) v_max 3425,

2963, 1751, 1719, 1677, 1502, 1259 cm'' EIMS m/z (rel. intenzitás) 654/656 (20/9), 412/414 (33/12), 280/282 (31/12), 227 (80), 195/197 (92/44), 91 (100); nagy felbontású EIMS m/z 654,2665 (a C₃₅H₄₃CIN₂O₈ képletű vegyüietre számítva, 4,3 mmu hiba), ¹H-NMR (CDCI₃): aminovagy hidroxisavegység δ (szénatomhelyzet, multiplicitás; J Hz) 7,8-epoxi-5-hidroxi-6-metil-8-fenil-2-okténsav (A) 5,74 (2, dt; 15,5 és 0,9), 6,68 (3, ddd; 15,5, 9,6 és 5,2), 2,45 (4, ddd; 14,2, 11,1 és

9,6), 2,55 (4, brdd; 14,2 és 5,2), 5,16 (5, ddd; 11,1,

4,9 és 1,9), 1,80 (6, m), 1,14 (6-Me, d; 7,1), 2,92 (7, dd; 7,5 és 2,0), 3,69 (8, d; 2,0), 7,25 (10/14, m), 7,34-7,39 (11/12/13, m); leucinsav (D) 4,83 (2, dd;

6,8 és 3,3), 1,70 (3, m), 1,36 (3, m), 1,70 (4, m),

0,86 (5, d; 6,6), 0,85 (4-Me, d; 6,6); 3-amino-2-metil-propionsav (C) 2,71 (2, m), 1,22 (2-Me, d; 7,1), 3,30 (3, ddd; 13,4, 5,8 és 3,8), 3,48 (3, ddd; 13,4,

6.3 és 5,8), 6,93 (3-NH, brt; 5,8); 3-klór-4-metoxi-fenil-alanin (B) 4,80 (2, ddd; 8,7, 7,3 és 5,4), 5,61 (2-NH, d; 8,7), 3,03 (3, dd; 14,4 és 7,3), 3,13 (3, dd;

14.4 és 5,4), 7,21 (5, d; 2,1), 3,87 (7-OCH₃, s),

6,83 (8, d; 8,5), 7,07 (9, dd; 8,5 és 2,1), ¹³C-NMR (CDCI₃): egység δ (szénatomhelyzet) A 165,3 (1),

125.3 (2), 141,0 (3), 36,7 (4), 76,2 (5), 40,6 (6),

13.5 (6-Me), 63,0 (7), 59,0 (8), 136,7 (9), 125,6 (10/14), 128,7 (11/13), 128,5 (12); D 170,7 (1), 71,3 (2), 39,4 (3), 24,5 (4), 22,9 (5), 21,3 (4-Me); C

175.6 (1), 38,2 (2), 14,1 (2-Me), 41,1 (3); B 110,9 (1), 53,6 (2), 35,0 (3), 129,7 (4), 131,0 (5), 122,4 (6), 154,0 (7), 56,1 (7-OCH₃), 112,2 (8), 128,4 (9). K2 vegyület [tx]_D +20,4° (MeOH, c 0,54); UVX_max (ε) 206 (43,800), 218 (37,500), 232 (22,900), 278 (2,410); CD [θ]₂₀₃+54,100, [θ]₂₁₂ +16,500, [θ]₂₂₅ +53,600, [θ]₂₃₆-14,000, IR (CHCI₃) v_max 3423, 3029, 2961, 1742, 1724, 1678, 1512, 1258 cm^-3, EIMS m/z (rel. intenzitás, kijelölés) 620 (11, M⁺), 431 (3), 378 (8), 377 (6), 311 (11), 246 (10), 244 (8), 227 (14), 195 (17), 161 (84, CH₃OC₆H₄-CH=CH=CO⁺), 121 (79, CH3OC6H4-CH2⁺), 91 (100); nagyfelbontású EIMS m/z 620,3094 (a C35H₄₄N₂O₈ képletű vegyüietre számítva, 0,3 mmu hiba); 161,0605 (a C₁₀H₉O₂képletű vegyüietre számítva, -0,2 mmu hiba); 121,0658 C₈H₉O, -0,4 mmu hiba), ¹H-NMR (CDCI₃): amino- vagy hidroxisavegység δ (szénatomhelyzet, multiplicitás; J Hz) 7, 8-epoxi-5-hidroxi-6-metil-8-fenil-2-oktánsav (A) 5,71 (2, dd; 15,4 és

1.3) , 6,70 (3, ddd; 15,4, 10,2 és 5,0), 2,45 (4, m),

2,55 (4, m), 5,18 (5, ddd; 11,3, 4,8 és 2,0), 1,79 (6, m), 1,14 (6-Me, d; 7,0), 2,92 (7, dd; 7,7 és 2,0), 3,68 (8, d; 2,0), 7,24 (10/14, m), 7,34-7,39 (11/12/13, m); leucinsav (D) 4,82 (2, dd; 10,1 és

3,7), 1,70 (3, m), 1,33 (3, m), 1,70 (4, m), 0,86 (5, d;

6.4) , 0,84 (4-Me, d; 6,4); 3-amino-2-metil-propionsav (C) 2,68 (2, m), 1,23 (2-Me, d; 7,3), 3,39 (3-H₂, m), 7,02 (3-NH, brt; 6,0); O-metil-tirozin (B) 4,79 (2, ddd; 8,1, 7,0 és 5,7), 5,55 (2-NH, d; 8,1), 3,07 (3, dd; 14,5 és 7,0), 3,13 (3, dd; 14,5 és 5,7), 7,10 (5/9, d; 8,6), 6,81 (6/8, d; 8,6), 3,78 (7-OCH₃, s), ¹³C-NMR (CDCI₃): egység δ (szénatomhelyzet) A 165,1 (1), 125,1 (2), 141,1 (3), 36,7 (4), 76,0 (5),

40,7 (6), 13,6 (6-Me), 63,0 (7), 59,0 (8), 136,7 (9),

125.6 (10/14), 128,7 (11/13), 128,5 (12); D 170,6 (1), 71,3 (2), 39,4 (3), 24,5 (4), 21,3 (5), 22,9 (4-Me); C 176,0 (1), 38,1 (2), 14,2 (2-Me), 40,7 (3); B 171,1 (1), 53,9 (2), 35,3 (3), 131,0 (4), 130,2 (5/9), 114,1 (6/8), 158,6 (7), 55,2 (7-OCH₃).

K3 vegyület [a]_D +20,3° (MeOH, c 1,13); UVÁ_max (ε) 206 (51,700), 218 (31,200), 230 (22,900), 246 (18,800), 280 (3,230); CD [θ]₂₀₅ +50,000, [θ]₂₁₂, -390, [θ]₂₁₈-47,200, [θ)₂₃₃ -100, [θ]₂₅₁, +33,400, [θ]₂₇₁ +4,310, IR (CHCI₃) v_max. 3417, 2926, 1742, 1721, 1676, 1499, 1336 cm, EIMS m/z (rel. intenzitás) 638/640

HU 225 041 Β1 (2/0,7, M⁺), 412/414 (63/19), 280/282 (15/5), 227 (100), 195 (63), 91 (98); nagyfelbontású EIMS m/z 638,2764 (a C35H43CIN2O7 képletű vegyületre számítva, -0,5 mmu hiba), 412,1516 (a Ο20Η27ΟΙΝΟ6 képletű vegyületre számítva, 1,1 mmu hiba), 227,1293 (a C15H17NO képletű vegyületre számítva, 1,0 mmu hiba), ¹H-NMR (CDCI3): amino- vagy hidroxisavegység δ (szénatomhelyzet, multiplicitás; J Hz) 5-hidroxi-6-metil-8-fenil-2,7-oktadiénsav (A)

5,77 (2, d; 15,5), 6,68 (3, ddd; 15,5, 9,5 és 5,3), 2,37 (4, m), 2,54 (4, m), 5,01 (5, ddd; 11,4, 6 és

1,5), 2,56 (6, m), 1,14 (6-Me, d; 7,0), 6,01 (7, dd;

15.8 és 8,8), 6,41 (8, d; 15,8), 7,28-7,34 (10/11/13/14, m), 7,23 (12, m); leucinsav (D) 4,84 (2, dd; 10,1 és 3,6), 1,62 (3, m), 1,36 (3, m), 1,62 (4, m), 0,17 (5, d; 6,5), 0,73 (4-Me, d; 6,3); 3-amino-2-metil-propionsav (C) 2,71 (2, m), 1,22 (2-Me, d; 7,3), 3,28 (3, dt; 13,5 és 7,0), 3,50 (3, ddd; 13,5,

4,9 és 4), 6,93 (3-NH, bit; 6,3); 3-klór-4-metoxi-fenil-alanin (B) 4,82 (2, m), 5,64 (2-NH, d; 8,8), 3,05 (3, dd; 14,5 és 7,0), 3,13 (3, dd; 14,5 és 5,5), 7,22 (5, d; 2,2), 3,87 (7-OCH₃, s), 6,84 (8, d; 8,5), 7,08 (9, dd; 8,5 és 2,2), ¹³C-NMR (CDCI₃): egység δ (szénatomhelyzet) A 165,4 (1), 125,2 (2), 141,4 (3),

36,5 (4), 77,1 (5), 42,3 (6), 17,3 (6-Me), 130,1 (7), 130,0 (8), 136,7 (9), 126,1 (10/14), 128,6 (11/13),

128.4 (12); D 170,1 (1), 71,6 (2), 39,5 (3), 24,5 (4),

21,2 (5), 22,7 (4-Me); C 175,6 (1), 38,3 (2), 14,0 (2-Me), 41,2 (3); B 170,9 (1), 53,5 (2), 35,1 (3),

129.8 (4), 131,0 (5), 122,4 (6), 154,0 (7), 56,1 (7-OCH₃), 112,2 (8), 127,6 (9).

K4 vegyület [a]_D +36,7° (MeOH, c 1,93); UVX_max (ε) 206 (41,800), 228 (25,000), 240 (21,200), 248 (22,500), 280 (3,000), 290 (1,230); CD [θ]₂₀₅ +63,900, [θ]₂₁₁+3,040, [θ]₂₁₈ -71,900, [θ]₂₂₉ -11,700, [θ]₂₃₄ -130, [θ]₂₅₂ +47,500, [θ]₂₇₀ +5,400, IR (CHCI₃) v_max. 3410, 2962, 2917, 1741, 1718, 1678, 1511, 1251 cm-¹, EIMS m/z (rel. intenzitás) 604 (2, M⁺), 378 (74), 246 (11), 227 (46), 161 (100), 91 (96); nagy felbontású EIMS m/z 604,3127 (a C35H44N2O7 képletű vegyületre számítva 2,2 mmu hiba), 378,1910 (a C20H28NO6 képletű vegyületre számítva, 0,7 mmu hiba), 227,1293 (a képletű vegyületre számítva C15H17NO, 1,7 mmu hiba), 161,0605 (a C10H9O2 képletű vegyületre számítva, 0,2 mmu hiba), ¹H-NMR (CDCI3): amino- vagy hidroxisavegység δ (szénatomhelyzet, multiplicitás; J Hz) 5-hidroxi-6-metil-8-fenil-2,7-oktadiénsav (A) 5,74 (2, dd; 15,3 és 1,2), 6,71 (3, ddd; 15,3,10,3 és 5,0), 2,37 (4, m), 2,53 (4, m), 5,03 (5, ddd; 11,2,

6.4 és 2,0), 2,55 (6, m), 1,13 (6-Me, d; 6,8), 6,01 (7, dd; 15,8 és 8,8), 6,40 (8, d; 15,8), 7,28-7,37 (10/11/13/14, m), 7,22 (12, m); leucinsav (D) 4,84 (2, dd; 10,1 és 3,6), 1,65 (3, m), 1,34 (3, m), 1,65 (4, m), 0,75 (5, d; 6,5), 0,72 (4-Me, d; 6,3); 3-amino-2-metil-propionsav (C) 2,69 (2, m), 1,22 (2-Me, d; 7,5), 3,39 (3-Hz, m), 7,03 (3-NH, brt; 6,0); O-metil-tirozin (B) 4,79 (2, m), 5,61 (2-NH, d; 7,8), 3,08 (3, dd; 14,5 és 7,0), 3,13 (3, dd; 14,5 és 5,3),

1,11 (5/9, d; 8,8), 6,81 (6/8, d; 8,8), 3,78 (7-OCH₃, s), ¹³C-NMR (CDCI₃): egység δ (szénatomhelyzet) A 165, 3(1), 125,1 (2), 141,5(3), 36,5(4), 77,1 (5),

42,3 (6), 17,3 (6-Me), 130,1 (7), 131,8 (8), 136,7 (9), 126,2 (10/14), 25 128,7 (11/13), 127,6 (12); D

170,8 (1), 71,6 (2), 39,5 (3), 24,5 (4), 21,2 (5), 22,7 (4-Me); C 175,9 (1), 38,2 (2), 14,2 (2-Me), 40,9 (3); B 171,2 (1), 53,8 (2), 35,3 (3), 131,0 (4), 130,2 (5/9), 114,1 (6/8), 158,6 (7), 55,2 (7-OCH₃).

K5 vegyület [a]_D +36,0° (MeOH, c 0,55); UVX_max (ε) 206 (45,600), 218 (37,700), 280 30 (3,790), 286 (3,480), 325 (2,080); CD [θ]₂₀₃, +7,71 0, [θ]₂₀₆ +29,000, [θ]₂₁₀+21,400, [θ]₂₂₂ +59,800, [θ]₂₃₄ +12,800, [θ]₂₄₁, +13,700, IR (CHCI₃) v_max 3426, 2958, 1728, 1672, 1502, 1259 cm-¹, EIMS m/z (rel. intenzitás) 686/688 (0,15/0,05), 655/657 (1/0,3), 654/656 (1,5/0,5), 311/313 (75/27), 195 (66), 155 (54), 121 (51), 91 (100); nagyfelbontású EIMS m/z686,2983 (a C36H47CIN2O9 képletű vegyületre számítva, -1,3 mmu hiba), ¹H-NMR (CDCI3): amino- vagy hidroxisavegység δ (szénatomhelyzet, multiplicitás; J Hz) 7,8-epoxi-5-hidroxi-6-metil-8-fenil-2-oktánsav (A) 5,87 (2, d; 15, 3), 6, 72 (3, dt; 15,3 és 6,8), 2,60 (4, m), 2,52 (4, ddd; 15,2, 7,8 és 6,8), 5,11 (5, ddd;

12,3, 7,8 és 7,1), 1,87 (6, m), 1,12 (6-Me, d; 7,1),

2.91 (7, dd; 7,3 és 2,1), 3,70 (8, d; 2,1), 7,24 (10/14, brd; 7,4), 7,29-7,36 (11/12/13, m); leucinsav (D) 4,09 (2, m), 2,86 (2-OH, brd, 6,1), 1,83 (3, m), 1,42 (3, m), 1,86 (4, m), 0,90 (5, d; 6,6), 0,87 (4-Me, d;

6,8); 3-amino-2-metil-propionsav (C) 3,64 (1-OCH₃, s), 2,60 (2, m), 1,07 (2-Me, d; 7,3), 3,27 (3, ddd; 13,5, 8,0 és 5,5), 3,39 (3, m), 6,32 (3-NH, t;

5.4) ; 3-klór-4-metoxi-fenil-alanin (B) 4,59 (2, dt; 6 és

7.5) , 6,30 (2-NH, d; 7,5), 2,95 (3, dd; 13,6 és 7,5), 3,0 (3, dd; 13,6 és 6,0), 7,2 (5, d; 2,1), 3,86 (7-OCH₃, s), 6,84 (8, d; 8,5), 7,05 (9, dd, 8,5; 2,1), ¹³C-NMR (CDCi₃): egység δ (szénatomhelyzet) A 164,8 (1), 126,5 (2), 139,2 (3), 34,4 (4), 75,5 (5),

39,2 (6), 12,9 (6-Me), 63,3 (7), 58,7 (8), 136,8 (9),

125,7 (10/14), 128,6 (11/13), 128,4 (12); D 175,1 (1), 69,2 (2), 43,2 (3), 24,3 (4), 21,2 (5), 23,2 (4-Me); C 175,4 (1), 51,9 (1-OMe), 39,1 (2), 14,7 (2-Me), 41,6 (3); B 170,6 (1), 54,6 (2), 37,4 (3),

129,5 (4), 131,0 (5), 122,4 (6), 154,1 (7), 56,1 (7-OMe), 112,2 (8),128,4 (9).

K6 vegyület [a]_D +17,1° (MeOH, c 1,1); UVX_max (ε) 206 (40,000), 218 (30,100), 228 (21,400), 282 (2,430); CD [θ]₂₀₃+37,700, [θ]₂₁₀ -5,430, [θ]₂₁₃ -1,260, [θ]₂₂₁, +24,100, [θ]₂₃₂ +8,480, [θ]₂₄₀ +13,400, [θ]₂₅₄ +790, IR (CHCI₃) v_max 3425, 3006, 2956, 1726, 1672, 1641, 1502, 1462, 1259 cm-¹, FABMS (tioglicerol) m/z (rel. intenzitás) 573/575 (13/6) [M-H=O]⁺, 217 (26), 91 (100), ¹H-NMR (CDCI₃); amino- vagy hidroxisavegység δ (szénatomhelyzet, multiplicitás; J Hz) 5,7,8-trihidroxi-6-metil-8-fenil-2-oktánsav (A)

5.92 (2, dt; 15,0 és 1,5), 6,94 (3, dt; 15 és 7,5), 2,51 (4, m), 2,64 (4, m), 3,97 (5, ddd; 9,3, 6,5 és 4,5), 2,03 (6, m), 1,10 (6-Me, d; 6,5), 3,70 (7, dd; 9,0 és

HU 225 041 Β1

7.5) , 4,64 (8, d; 7,5), 7,33-7,39 (10/11/13/14, m),

7,28 (12, tt; 6,5 és 2,0); 3-klór-4-metoxi-fenil-alanin (B) 4,60 (2, td; 8,0 és 6,0), 6,09 (2-NH, brd; 8,0), 2,96 (3, dd; 30 13,8 és 8,0), 3,02 (3, dd; 13,8 és 6,0), 7,22 (5, d; 2,0), 3,86 (7-OCH₃, s), 6,84 (8, d;

8.5) , 7,07 (9, dd; 8,5 és 2,0) 3-amíno-2-metil-propionsav (C) 3,63 (1-OCH₃, s), 2,58 (2, m), 1,07 (2-Me, d; 7,0), 3,24 (3, ddd; 13,8, 8 és 6,5), 3,41 (3, ddd; 13,8, 6,5 és 4,8), 6,21 (3-NH, brt; 6,5), ¹³C-NMR (CDCI₃): egység δ (szénatomhelyzet) A 165,2 (1), 125,6 (2), 141,3 (3), 36,9 (4), 82,5 (5),

46.3 (6), 14,3 (6-Me), 85,1 (7), 84,8 (8), 140,9 (9),

125.8 (10/14), 128,6 (11/13), 127,8 (12); B 170,6 (1), 54,5 (2), 37,3 (3), 129,6 (4), 131,0 (5), 122,5 (6), 154,1 (7), 56,1 (7-OCH₃), 112,2 (8), 128,5 (9) C 52,0 (1-OCH₃), 175,4 (1), 39,2 (2), 14,7 (2-Me), 41,6(3).

K7 vegyület [a]_D -51,9° (MeOH, c 0,89); υνλ_Γπ3Χ (ε) 206 (23,400), 220 (14,900), 282 (1,670); CD [θ]₂₀₂ +35,400, [θ]₂₀₆-1,730, [θ]₂₁₁ -19,200, [θ]₂₂₀ -15,800, [θ]₂₃₂+29,000, [θ]₂₆₃ +2,040, IR (CHCI₃) v_max. 3426, 2946, 1732, 1675, 1501, 1258 cm-¹, EIMS m/z (rel. intenzitás) 455/457 (1/0,3, [M-2H20J+), 105 (100), 77 (98); FABMS m/z (magic buliét mátrix) 496/498 [M-H20+Na]+, (tioglicerolmátrix) 474/476 [M-H201+H]’, ¹H-NMR (CD₃OD): amino- vagy hidroxisav A egység (szénatomhelyzet, multiplicitás; J Hz) 5,7,8-trihidroxi-6-metil-8-fenil-2-oktánsav (A) 6,06 (2, ddd; 15,5, 1,3 és 1,0), 6,80 (3, dt; 15,5 és

7.5) , 2,49 (4, m), 2,59 (4, m), 3,92 (5, ddd; 9,5,

6.3 és 4,7), 1,95 (6, m), 1,08 (6-Me, d; 6,7), 3,59 (7, dd; 9,0 és 7,8), 4,56 (8, d; 7,8), 7,37 (10/14, brd;

7.3) , 7,31 (11/13, brt; 7,3), 7,24 (12, n; 7,3 és 1,5); 3-klór-4-metoxi-fenil-alanin (B) 4,52 (2, dd; 6,9 és 5,0), 2,93 (3, dd; 13,8 és 6,9), 3,15 (3, dd; 13,8 és 5,0), 7,20 (5, d; 2,2), 3,78 (7-OCH₃, s), 6,88 (8, d;

8.4) , 1,08 (9, dd; 8,4 és 2,2), ¹³C-NMR (CD₃OD): egység δ (szénatomhelyzet) A 167,4 (1), 127,6 (2),

140.9 (3), 37,9 (4), 84,0 (5), 47,6 (6), 14,4 (6-Me), 86,0 (7), 85,8 (8), 142,9 (9), 127,1 (10/14), 129,3 (11/13), 128,5 (12); B 177,6 (1), 57,3 (2), 38,2 (3),

132,8 (4), 132,1 (5), 122,9 (6), 155,0 (7), 56,5 (7-OCH₃), 113,2 (8), 130,1 (9).

K16 vegyület [a]_D +41,3° (MeOH, c 5,2); UV/,_max (ε) 242 (4963), 280 (2430), 286 (2212); IR (neat) v_max. 3402, 3270, 2960, 1748, 1724, 1676, 1514, 1466, 1343, 1239, 1177 cm, EIMS m/z (rel. intenzitás) 640/642 (66/27), 398/400 (47/16), 265 (55), 227 (93), 181 (100); nagy felbontású EIMS m/z 640,25676 (a C₃₄H₄iCIN₂O₈ képletű vegyületre számítva, -1,6 mmu hiba), ¹H-NMR (CDCI₃): amino- vagy hidroxisavegység δ (szénatomhelyzet, multiplicitás; J Hz) 7,8-epoxi-5-hidroxi-6-metil-8-fenil-2-oktánsav (A) 5,74 (2, d; 16), 6,67 (3, ddd; 15,3, 9,7 és 5,5), 2,45 (4, dt; 14,3 és 10,4), 2,55 (4, brdd; 14,3 és

5,3), 5,15 (5, ddd; 11,2, 4,8 és 1,8), 1,8(6, m), 1,14 (6-Me, d; 7,0), 2,92 (7, dd; 7,5 és 2,0), 3,69 (8, d; 2,0), 7,24-7,26 (10/14, m), 7,33-7,39 (11/12/13,

m); 3-klór-4-hidroxi-fenil-alanin (B) 4,8 (2, m), 5,64 (2-NH, d; 8,8), 3,03 (3, dd; 14,5 és 7,0), 3,11 (3, dd;

14,4 és 5,6), 7,17 (5, d; 2,2), 5,61 (7-OH, s), 6,91 (8, d; 8,3), 7,0 (9, dd; 8,3 és 2,2); 3-amino-2-metil-propionsav (C) 2,71 (2, m), 1,22 (2-Me, d; 7,3),

3,28 (3, dt; 13,6 és 6,8), 3,49 (3, ddd; 13,6, 5 és

4.1) , 6,92 (3-NH, br t; 6,1); leucinsav (D) 4,83 (2, dd; 10,1 és 3,3), 1,36 (3, m), 1,67-1,75 (3, m), 1,67-1,75 (4, m), 0,85 (5, d; 7,5), 0,86 (4-Me, d;

6,8), ¹³C-NMR (CDCI₃): egység δ (szénatomhelyzet) A 165,3 (1), 125,3 (2), 141,0 (3), 36,7 (4), 76,2 (5), 40,6 (6), 13,5 (6-Me), 63,0 (7), 59,0 (8), 136,8 (9), 125,6 (10/14), 128,7 (11/13), 128,6 (12); B

170.9 (1), 53,6 (2), 35,1 (3), 129,9 (4), 129,6 (5), 120,0 (6), 150,4 (7), 116,4 (8), 129,2 (9); C 175,6 (1), 38,3 (2), 14,1 (2-Me), 41,1 (3); D 170,8 (1),

71,3 (2), 39,4 (3), 24,6 (4), 21,3 (5), 22,9 (4-Me). K17 vegyület [a]_D +27,8° (CHCI3, c 0,37); UVX_max (ε) 248 (14 740), 268 (8100), 278 (3400), 284 (2840); IR (neat) w 3412, 2958, 1750, 1723, 1668, 1504, 1463, 1290, 1177, 751 cm-¹; EIMS m/z (rel. intenzitás) 624/626 (10/3), 398/400 (95/35), 284 (100), 149 (95); nagy felbontású EIMS m/z 624,26161 (a C34H41CIN2O7 képletű vegyületre számítva -1,4 mmu hiba), ¹H-NMR (CDCI3): amino- vagy hidroxisavegység δ (szénatomhelyzet, multiplicitás; J Hz) 5-hidroxi-6-metil-8-fenil-2,7-oktadiénsav (A) 5,77 (2, d;

15,4), 6,67 (3, ddd; 15,4, 9,5 és 5,3), 2,37 (4, m), 4,99 (5, ddd; 11,2, 6,3 és 1,6), 2,54 (6, m), 1,14 (6-Me, d; 6,7), 6,01 (7, dd; 15,7 és 8,7), 6,41 (8, d; 15,9), 7,28-7,34 (10/11/13/14, m), 7,23 (12, m); 3-klór-4-hidroxi-fenil-alanin (B) 4,82 (2, m), 5,63 (2-NH, d; 8,7), 3,12 (3, dd; 14,7 és 5,6), 3,03 (3', dd; 14,7 és 7,1), 7,18 (5, d; 2,0), 5,47 (7-OH, br s),

6,91 (8, d; 8,3), 7,02 (9, dd; 8,3 és 2,0); 3-amino-2-metil-propionsav (C) 2,11 (2, m), 1,21 (2-Me, d’ 6,9), 3,25 (3, m), 3,52 (3’, m), 6,89 (3-NH, br t;

6.1) ; leucinsav (D) 4,84 (2, dd; 9,6 és 3,1), 1,62 (3, m), 1,36 (3’, m), 1,62 (4, m), 0,77 (5, d’ 6,5), 0,73 (4-Me, d; 6,5); ¹³C-NMR (CDCI₃): egység δ (szénatomhelyzet) A 165,4 (1), 125,3 (2), 141,3 (3), 36,5 (4) , 77,1 (5), 42,3 (6), 11,3 (6-Me), 130,0 (7), 129,9 (8), 136,7 (9), 126,2 (10/14), 128,6 (11/13), 127,6 (12); B 170,9 (1), 53,5 (2), 35,1 (3), 129,6 (4), 131,9 (5) , 126,2 (6), 150,3 (7), 116,3 (8), 127,6 (9); C

175.9 (1), 38,4 (2), 13,9 (2-Me), 41,3 (3); D 170,9 (1), 71,6 (2), 39,5 (3), 24,5 (4), 21,2 (5), 22,7 (4-Me).

K18 vegyület [a]_D +54,9° (MeOH, c 0,93); UV/._max (ε) 250 (20 518), 284 (3857); IR (neat) v_max 3411,3271,2966, 1746, 1728, 1668, 1505, 1463, 1258, 1178 cm; EIMS m/z (rel. intenzitás) 638/640 (4,5/1,1), 412/414 (59/19), 280 (17), 227 (100); nagy felbontású EIMS m/z 638,272934 (a C₃₅H₄₃CIN₂O₇ képletű vegyületre számítva, 2,9 mmu hiba), ¹H-NMR (CDCI₃): aminovagy hidroxisavegység δ (szénatomhelyzet, multiplicitás; J Hz) 5-hidroxi-6-metil-8-fenil-2,7-oktadiénsav (A) 5,76 (2, d; 15,5), 6,65 (3, ddd; 15,4, 9,2 és

HU 225 041 Β1

6.2) , 2,38-2,47 (4, m), 5,08 (5, ddd; 10,6, 4,9 és

2.2) , 2,58 (6, m), 1,15 (6-Me, d; 6,8), 6,07 (7, dd;

15.9 és 8,5), 6,43 (8, d; 15,9), 7,21-7,35 (10/11/12/13/14, m); 3-klór-4-metoxi-fenil-alanin (B)

4,83 (2, m), 3,05 (3, dd; 14,5 és 7,1), 5,65 (2-NH, d;

8.7) , 3,14 (3, dd; 14,4 és 5,5), 7,21 (5, d; 2,4), 3,86 (7-OCH₃, s), 6,83 (8, d; 8,3), 7,08 (9, dd; 8,3 és

2.2) ; 3-amino-2-metil-propionsav (C) 2,73 (2, m), 1,23 (2-Me, d; 7,2), 3,23 (3, dt; 13,5 és 6,8), 3,56 (3, ddd; 13,5, 5,7 és 4,0), 6,85 (3-NH, dd; 7,1 és

6.2) ; leucinsav (D) 4,8 (2, d; 4,6), 1,86-1,89 (3, m), 0,94 (3-Me, d; 7,0), 1,20-1,26 (4, m), 1,39-1,44 (4, m), 0, 77 (5, d; 7,4), ¹³C-NMR (CDCI₃): egység δ (szénatomhelyzet) A 165,5 (1), 125,2 (2), 141,5 (3),

36.4 (4), 77,7 (5), 41,9 (6), 17,1 (6-Me), 129,8 (7),

131.9 (8), 136,8 (9), 128,6 (10/14), 126,2 (11/13),

127.6 (12); B 170,0 (1), 53,5 (2), 35,1 (3), 129,9 (4),

131.1 (5), 122,4 (6), 153,9 (7), 56,1 (7-OCH₃),

112.2 (8), 128,5 (9); C 175,3 (1), 38,6 (2), 14,0 (2-Me), 41,4 (3); D 169,5 (1), 76,6 (2), 36,2 (3),

15.5 (3-Me), 24,2 20 (4), 14,0 (5).

K19 vegyület [<x]_D +62,6° (MeOH, c 0,67); UVX_max (ε) 204 (44 900), 230 (17 000), 248 (15 600), 280 (2500); IR (neat) v_max. 3413, 3272, 2966, 1745, 1726, 1672, 1504, 1258, 1199, 1178, 1066, 692 cm-¹; EIMS m/z (rel. intenzitás) 624/626 (3,0/1,4), 398/400 (58/21), 280/282 (15/5), 227 (100), 195/197 (57/22); nagy felbontású EIMS m/z 624,2585 (a C34H41CIN2O7 képletű vegyületre számítva, 1,8 mmu hiba), ¹H-NMR (CDCI3): amino- vagy hidroxisavegység δ (szénatomhelyzet, multiplicitás; J Hz) 5-hidroxi-6-metil-8-fenil-2,7-oktadiénsav (A) 5,16 (2, d;

15.2) , 6,64 (3, ddd; 15,4, 9,1 és 6,2), 2,38 (4, m), 2,47 (4, m), 5,04 (5, ddd; 7,1, 5,1 és 1,8), 2,57 (6, m), 1,15 (6-Me, d; 6,9), 6,05 (7, dd; 15,8 és 8,5), 6,43 (8, d; 15,8), 7,29-7,35 (10/11/13/14, m), 7,23 (12, m); 3-klór-4-metoxi-fenil-alanin (B) 4,84 (2, m), 5,67 (2-NH, d; 8,9), 3,04 (3, dd; 14,3 és 7,1), 3,14 (3, dd; 14,3 és 5,3), 7,22 (5, d; 2,0), 3,86 (7-OCH₃, s), 6,83 (8, d; 8,2), 7,08 (9, dd; 8,2 és 2,0); 3-amino-2-metil-propionsav (C) 2,75 (2, m), 1,23 (2-Me, d; 7,1), 3,19 (3, m), 3,59 (3, m), 6,80 (3-NH, brt;

6.7) ; 2-hidroxi-izovalerinsav (D) 4,73 (2, d; 4,2), 2,09 (3, m), 0,84 (4, d; 6,9), 0,95 (3-Me, d; 6,9), ¹³C-NMR (CDCI₃): egység δ (szénatomhelyzet) A 165,5 (1), 125,3 (2), 141,3 (3), 36,3 (4), 77,7 (5), 42,0 (6), 17,1 (6-Me), 129,9 (7), 131,9 (8), 136,8 (9), 126,1 (10/14), 128,6 (11/13), 127,6 (12); B 171,0 (1), 53,4 (2), 35,1 (3), 130,0 (4), 131,1 (5),

122,4 (6), 153,9 (7), 56,1 (7-OMe), 112,2 (8), 128,5 (9); C 175,1 (1), 38,7 (2), 13,9 (2-Me), 41,5 (3), D

169.6 (1), 76,9 (2), 29,8 (3), 19,0 (4), 16,7 (3-Me). K21 vegyület [<x]_D +40,2° (CHCI3, c 0,72); UVX_max (ε) 240 (6700), 280 (2400), 288 (2100); IR (neat) v_max 3403, 3279, 2957, 1731, 1673, 1503, 1464, 1409, 1372, 1258, 1174, 1065, 1023, 889 cm-¹; EIMS m/z (relatív intenzitás) 640/642 (10/4), 612 (5), 478 (15), 398 (40), 266 (33), 227 (76), 195 (95), 155 (100), 127 (90); nagy felbontású EIMS m/z 640,2550 (a képletű vegyületre számítva C₃₄H₄₁CIN₂O₈, 0,2 mmu hiba); ¹H-NMR (CDCI₃) amino- vagy hidroxisavegység δ (szénatomhelyzetek, multiplicitások; J Hz) 7,8-epoxi-5-hidroxi-6-metil-8-fenil-oktánsav (A)

5.73 (2, d; 15,4), 6,68 (3, ddd; 15,0, 9,9 és 4,9), 2,45 (4, m), 2,56 (4, m), 5,19 (5, ddd; 11,2, 5,1 és

1.5) , 1,80 (6, m), 1,14 (6-Me, d; 7,1), 2,92 (7, dd;

7.5 és 2,0), 3,68 (8, d; 1,8), 7,25 (10/14, m), 7,33-7,38 (11/12/13, m); 3-klór-4-metoxi-fenil-alanin (B) 4,74 (2, ddd; 8,2, 6,8 és 6,2), 5,68 (2-NH, d;

8.6) , 20 2,98 (3, dd; 14,3 és 7,7), 3,14 (3, dd;

14.3 és 5,6), 7,21 (5, d; 2,0), 3,86 (7-OMe, s), 6,83 (8, d; 8,4), 7,07 (9, dd; 8,4 és 2,0); 3-amino-propionsav (C) 2,56 (2, m), 3,51 (3, m), 3,45 (3, m),

6,90 (3-NH, br t; 5,8); leucinsav (D) 4,89 (2, dd; 10,0 és 3,3), 1,67 (3, m), 1,31 (3, m), 1,67 (4, m), 0,84 (5, d; 6,4), 0,83 (4-Me, d; 6,4); ¹³C-NMR (CDCI₃): egység δ (szénatomhelyzet) A 165,5 (1),

125.3 (2), 141,0 (3), 36,7 (4), 75,9 (5), 25 40,6 (6),

13.5 (6-Me), 63,0 (7), 59,0 (8), 136,7 (9), 125,6 (10/14), 128,7(11/13), 128,5 (12); B 170,7 (1), 53,9 (2), 35,0 (3), 129,8 (4), 130,9 (5), 122,4 (6), 153,9 (7), 56,1 (7-OMe), 112,2 (8), 128,3 (9); C 112,6 (1),

32.4 (2), 34,4 (3), D 170,5 (1), 71,2 (2), 39,5 (3),

24.4 (4), 22,8(5), 21,2 (4-Me).

K23 vegyület [a]_D +47° (MeOH, c 1,55); UV/._max (ε) 240 (4571), 282 (2174), 290 (2177); IR (neat) v_max 3284, 2960, 1747, 1724, 1653, 1540, 1490, 1339, 1272, 1174 cm^-1; EIMS m/z (rel. intenzitás) 674/675/678 (47/35/8), 432/434/436 (11/5/2), 299/301/303 (39/30/7), 227 (64), 215/217/219 (31/20/8), 141 (100); nagy felbontású EIMS m/z 674,21643 (a C34H4CI2N2O8 képletű vegyületre számolva, -0,3 mmu hiba); ¹H-NMR (CDCI3) amino- vagy hidroxisavegység δ (szénatomhelyzet, multiplicitás; J Hz) 7,8-epoxi-5-hidroxi-6-metil-8-fenil-2-oktánsav (A) 5,77 (2, d; 15,4), 6,65 (3, ddd; 15,4,

9.3 és 6,0), 2,47 (4, dt; 14,2 és 10,2), 2,55 (4, br dd; 14,2 és 5,6), 5,13 (5, ddd; 11,0, 4,6 és 1,6),

1.81 (6, m), 1,15 (6-Me, d; 6,9), 2,93 (7, dd; 7,6 és 2,0), 3,7 (8, d; 2,0), 7,22-7,26 (10/4, m); 7,32-7,39 (11/12/13, m); 3,5-diklór-4-hidroxi-fenil-alanin (B)

4.81 (2, m), 5,69 (2-NH, d; 8,6), 3,11 (3, dd;

14.5 és 5,6), 3,50 (3, dd; 14,3 és 7,0), 7,13 (5/9, s),

5,78 (7-OH, s); 3-amino-2-metil-propionsav (C)

2.73 (2, m), 1,22 (2-Me, d; 7,1), 3,19 (3, dt; 13,4 és

6,9), 3,58 (3, ddd; 13,6, 5,8 és 4,1), 6,82 (3-NH, br t; 5,9); leucinsav (D) 4,84 (2, dd; 9,9 és 3,2), 1,38 (3, m), 1,68-1,75 (3, m), 1,68-1,75 (4, m), 0,86 (4-Me, d; 6,7), 0,87 (5, d; 6,7), ¹³C-NMR (CDCI₃): egység δ (szénatomhelyzet) A 165,4 (1), 125,4 (2),

140.9 (3), 36,7 (4), 76,3 (5), 40,6 (6), 13,5 (6-Me), 63,0 (7), 58,9 (8), 136,7 (9), 125,6 (10/14), 128,7 (11/13), 128,6 (12); B 170,1 (1), 53,3 (2), 35,0 (3),

130.3 (4), 15 129,0 (5/9), 121,0 (6), 146,7 (7); C 175,3 (1), 38,4 (2), 13,9 (2-Me), 41,5 (3); D

170,8 (1), 71,3 (2), 39,4 (3), 24,6 (4), 21,3 (4-Me),

22.9 (5).

HU 225 041 Β1

K24 vegyület [a]_D +48,8° (CHCI₃, c 0,63); UVX_max (ε) 228 (19 006), 242 (8249), 274 (2351); IR (neat) v_max 3400, 3284, 2959, 1732, 1678, 1652, 1514, 1248, 1178 cm¹; EIMS m/z (rel. intenzitás, kijelölés) 606 (2, M⁺), 364 (7), 161 (55, CH₃O-C₆H₄-CH=CH=CO⁺), 121 (100, CH3O-CgH4-CH2⁺), 91 (68); nagy felbontású EIMS m/z 606,2954 (a C34H₄₂N₂O₈ képletű vegyületre számítva, -1,3 mmu hiba); ¹H-NMR (CDCI₃) amino- vagy hidroxisavegység δ (szénatomhelyzet, multiplicitás; J Hz) 7,8-epoxi-5-hidroxi-6-metil-8-fenil-2-oktánsav (A) 5,70 (2, dd; 15,2 és 1,3), 6,70 (3, ddd; 15,2, 10,3 és 4,7), 2,43 (4, dt; 14,3 és 25 10,9), 2,56 (4, m), 5,20 (5, ddd; 11,3, 5,1 és 2,0),

1,79 (6, m), 1,14 (6-Me, d; 7,0), 2,92 (7, dd; 7,5 és 2,0), 3,68 (8, d; 2,0), 7,23-7,38 (10/11/12/13/14, m); O-metil-tirozin (B) 4,73 (2, m), 5,58 (2-NH, d;

8,3), 3,03 (3, dd; 14,5 és 7,5), 3,14 (3, dd; 14,5 és

5.7) , 7,11 (5/9, d; 8,6), 6,81 (6/8, d; 8,6), 3,78 (7-OMe, s); 3-amino-propionsav (C) 2,55 (2-H₂, m), 3,42 (3, m), 3,53 (3, m), 6,97 (3-NH, br t; 5,7); leucinsav (D) 4,89 (2, dd; 9,9 és 3,5), 1,29 (3, m), 1,62-1,70 (3/4, m), 0,83 (5, d; 5,9), 0,84 (4-Me, d; 6,1); ¹³C-NMR (CDCI₃): egység δ (szénatomhelyzet) A 165,4 (1), 125,3(2), 141,0 (3), 36,7 (4), 75,9 (5), 40,6 (6), 13,4 (6-Me), 63,0 (7), 59,0 (8), 136,7 (9), 125,6 (10/14), 128,7 (11/13), 128,5 (12); B

170.7 vagy 170,6 (1), 54,1 (2), 35,2 (3), 128,5 (4),

130.2 (5/9), 114,1 (6/8), 158,6 (7), 55,2 (7-OMe); C

172.8 (1), 32,5 (2), 34,2 (3); D 170,6 vagy 170,7 (1),

71.2 (2), 39,5 (3), 24,4 (4), 21,3 (5), 22,8 (4-Me). K26 vegyület [ct]_D +28,2° (CHCI₃, C 1,31); UVX_max. (ε) 254 (14 615), 284 (2949); IR (neat) v_max. 3299, 2960, 1732,1644, 1504, 1258, 1209 cm^-1; EIMS m/z (rel. intenzitás) 656/658 (0,5/0,1, M⁺), 638/640 (1,7/1,0), 525/527 (3,7/1,8), 412/414 (10/4), 280/282 (12/11), 227 (20), 195 (48), 131 (68); nagyfelbontású EIMS m/z 656,2836 (a C35H45CIN2O8 képletű vegyületre számítva, 2,8 mmu hiba), 638,2712 (a C35H43CIN2O7 képletű vegyületre számítva, 4,7 mmu hiba); ¹H-NMR (CDCI3) amino- vagy hidroxisavegység δ (szénatomhelyzet, multiplicitás; J Hz) 3,5-dihidroxi-6-metil-8-fenil-7-oktánsav (A) 2,46 (2, dd; 14,8 és

7.8) , 2,58 (2, dd; 14,8 és 3,0), 5,46 (3, m), 1,86-1,90 (4-H₂, m), 3,61 (5, m), 2,37 (6, m), 1,14 (6-Me, d; 6,8), 6,06 (7, dd; 16 és 8,7), 6,47 (8, d; 16), 7,37 (10/14, br d; 7,9), 7,32 (11/13, br t; 7,6), 7,22-7,28 (12, m); 3-klór-4-metoxi-fenil-alanin (B)

4,73 (2, br dt; 6,415 és 8,1), 6,14 (2-NH, d; 8,6),

2,84 (3, dd; 14,4 és 8), 3,18 (3, dd; 14,4 és 6,3),

7,21 (5, d; 2,2); 3,85 (7-OMe, s), 6,82 (8, d; 8,6), 7,08 (9, dd; 8,6 és 2,2); 3-amino-2-metil-propionsav (C) 2,87 (2, m), 1,19 (2-Me, d; 7,0), 3,01 (3, ddd;

13,4, 10,6 és 4,9), 3,73 (3, ddd; 13,4, 8,2 és 4,7), 6,72 (3-NH, br dd; 7,3 és 5,2); leucinsav (D) 4,95 (2, dd; 9,7 és 4,2), 1,62-1,72 (3, m), 1,79-1,84 (3, m), 1,62-1,72 (4, m), 20 0,90 (4-Me, d; 6,4), 0,95 (5, d; 6,4), ¹³C-NMR (CDCI₃): egység δ (szénatomhelyzet) A 170,0 (1), 41,5 (2), 71,4 (3), 37,3 (4),

71,9 vagy 71,8 (5), 43,6 (6), 16,6 (6-Me), 130,8 (7),

132.5 (8), 136,8 (9), 126,2 (10/14), 128,6 (11/13),

127.6 (12); B 170,9 (1), 53,2 (2), 34,7 (3), 130,3 (4),

131.1 (5),122,2 (6),153,8(7), 56,1 (7-OMe), 112,2 (8), 128,5 (9); C 174,3 (1), 40,1 (2), 14,4 (2-Me),

42,5 (3); D 170,7 (1), 71,8 vagy 71,9 (2), 38,9 25 (3), 24,6 (4), 21,6 (4-Me), 22,9 (5).

K28 vegyület [a]_D +65,6° (MeOH, c 0,93); UV-(MeOH) X_max (ε) 204 (48 000), 230 (19 300), 248 (18100), 280 (3400); IR (neat) v_max 3413, 3210, 2958, 1745, 1726, 1665, 1504, 1258' 1197,1175, 1066,694 cm¹; EIMS m/z (rel. intenzitás) 624/626 (3,0/1,3), 412/414 30 (70/24), 280/282 (13/6), 213 (100), 195/197 (86/40); nagy felbontású EIMS m/z 624, 2626 (a C34H41CIN2O7 képletű vegyületre számítva, -2,4 mmu hiba); ¹H-NMR (CDCI3) amino- vagy hidroxisavegység δ (szénatomhelyzet, multiplicitás; J Hz) 5-hidroxi-8-fenil-2,7-oktadiénsav (A) 5,78 (2, d;

15,6), 6,71 (3, ddd; 15,6, 9,9 és 5,4), 2,40 (4, m), 2,53 (4, m), 5,17 (5, m), 2,53 (6-Hz, brt; 6,7), 6,07 (7, dt; 15,8 és 7,4), 6,44 (8, d; 15,8), 7,27-7,38 (10/11/13/14, m), 7,22 (12, m); 3-klór-4-metoxi-fenil-alanin (B) 4,82 (2, m), 5,72 (2-NH, d; 8,5), 3,04 (3, dd; 14,5 és 7,2), 3,14 (3, dd; 14,5 és 5,4), 7,22 (5, d; 2,0), 3,87 (7-OMe, s), 6,84 (8, d; 8,5), 7,08 (9, dd; 8,5 és 2,0); 3-amino-2-metil-propionsav (C) 2,72 (2, m), 1,21 (2-Me, d; 7,2), 3,29 (3, dt; 13,5 és 7,0), 3,49 (3, ddd; 13,5, 4,9 és 3,8), 6,97 (3-NH, br t; 5,6); leucinsav (D) 4,82 (2, m), 1,40 (3, m), 1,62 (3, m), 1,62 (4, m), 0,76 (4-Me, d; 6,3), 0,74 (5, d;

6,3); ¹³C-NMR (CDCI₃): egység δ (szénatomhelyzet) A 165,4 (1), 125,2 (2), 141,2 (3), 38,5 (4), 73,5 (5) , 38,6 (6), 124,1 (7), 133,8 (8), 136,7 10 (9),

126.1 (10/14), 128,6 (11/13), 127,6 (12); B 170,9 (1), 53,6 (2), 35,1 (3), 129,8 (4), 131,0 (5), 122,4 (6) , 154,0 (7), 56,1 (7-OMe), 112,3 (8), 128,4 (9); C

175.6 (1), 38,3 (2), 14,0 (2-Me), 41,2 (3), D 170,9 (1), 11,6 (2), 39,6 (3), 24,5 (4), 21,5 (4-Me), 22,6 (5).

K29 vegyület [a]_D +22,2° (CHCI₃, c 1,13); UVX_max (ε) 250 (17 000), 284 (3300); IR (neat) v_max 3415, 3272, 2960, 1744, 1734, 1674, 1504, 1259, 1197, 1174, 1067, 694 cm; EIMS m/z (rel. intenzitás) 624/626 (2,6/1,1), 398/400 (44/15), 227 (100), 195/197 (50/16), 155/157 (59/20), 131 (63), 91 (95); nagy felbontású EIMS m/z 624,2607 (a C₃₄H₄₁CIN₂O₇képletű vegyületre számítva, Δ-0,5 mmu hiba); ¹H-NMR (CDCI₃) amino- vagy hidroxisavegység δ (szénatomhelyzet, multiplicitás; J Hz) 5-hidroxi-6-metil-8-fenil-2,7-oktadiénsav (A) 5,75 (2, dd;

15,3 és 1,1), 6,69 (3, ddd; 15,3, 10,1 és 5,3), 2,36 (4, m), 2,54 (4, m), 5,03 (5, ddd; 11,0, 6,4 és 1,8),

2,56 (6, m), 1,14 (6-Me, d; 6,8), 6,01 (7, dd; 15,8 és

8,8), 6,41 (8, d; 15,8), 7,28-7,33 (10/11/13/14, m),

7,22 (12, m); 3-klór-4-metoxi-fenil-alanin (B) 4,76 (2, m), 5,67 (2-NH, d; 8,6), 3,0 (3, dd; 14,4 és

10,2), 3,14 (3, dd; 14,4 és 5,9), 7,22 (5, d; 2,2), 3,87 (7-OMe, s), 6,83 (8, d; 8,4), 7,08 (9, dd; 8,4 és 2,2);

HU 225 041 Β1

3-amino-propionsav (C) 2,55 (2—H₂, m), 3,44 (3, m), 3,55 (3, m), 6,89 (3-NH, brt; 5,7); leucinsav (D)

4,90 (2, dd; 9,9 és 3,5), 1,34 (3, ddd; 15,4, 10,3 és

3.5) , 1,63 (3, m), 1,63 (4, m), 0,76 (4-Me, d; 6,4), 0,72 (5, d; 6,4); ¹³C-NMR (CDCI₃): egység δ (szénatomhelyzet) A 165,6 (1), 125,2 (2), 141,5 (3), 36,4 (4) ,77,1 (5),42,3(6), 17,3 (6-Me), 130,1 (1), 131,8 (8), 136,7 (9), 126,2 (10/14), 128,6 (11/13), 127,6 (12); B 170,9(1), 53,8 (2), 34,9 (3), 129,9(4), 131,0 (5) , 122,4 (6), 153,9 (7), 56,1 (7-OMe), 112,2 (8), 128,4 (9); C 172,6 (1), 32,4 (2), 34,5 (3); D 170,4 (1), 71,5 (2), 39,7 (3), 24,4 (4), 21,2 (4-Me), 22,6 (5).

K30 vegyület [a]_D -12,3° (CHCI₃, c 1,53); UVX_max. (ε) 254 (17 200), 284(3600); IR(neat)v_max 3414, 3306, 2961,1738, 1729, 1660, 1504, 1258, 1205, 1183, 1066, 695 cm^-1; EIMS m/z (rel. intenzitás) 656/658 (1,0/0,3), 638/640 (3,0/1,0), 525/527 (3,8/1,3), 412/414 (10,5/3,6), 280/282 (10,3/3,8), 227 (29), 195/197 (48/17), 155/157 (74/21), 131 (100); nagy felbontású EIMS m/z 656,2852 (a C35H45CIN2O8 képletű vegyületre számítva, 1,3 mmu hiba); ¹H-NMR (CDCI3) amino- vagy hidroxisavegység δ (szénatomhelyzet, multiplicitás; J Hz) 3,5-dihidroxi-6-metil-8-fenil-7-oktánsav (A) 2,25 (2, dd; 16,0 és

9.6) , 2,64 (2, brd; 16,0), 3,89 (3, m), 2,51 (3-OH, d;

6,4), 1,77 (4, ddd; 14,3, 9,8 és 2,1), 1,88 (4, ddd; 14,3, 11,3 és 3,8), 4,88 (5, ddd; 11,3, 6,2 és 2,1), 2,53 (6, m), 1,10 (6-Me, d; 6,8), 5,99 (7, dd; 15,9 és 9,0), 6,40 (8, d; 15,9), 7,28-7,33 (10/11/13/14, m), 7,23 (12, m); 3-klór-4-metoxi-fenil-alanin (B) 4,60 (2, m), 6,61 (2-NH, d; 8,1), 3,09 (3, dd; 14,2 és

5.6) , 3,15 (3, dd; 14,2 és 7,3), 7,22 (5, d; 2,1), 3,86 (7-OMe, s), 6,83 (8, d; 8,3), 7, 07 (9, dd; 8,3 és 2,1); 3-amino-2-metil-propionsav (C) 2, 67 (2, m), 1, 21 (2-Me, d; 7,3), 3,26 (3, ddd; 13,6, 7,3 és 6,4), 3,63 (3, ddd; 13,6, 6,2 és 3,9), 6,75 (3-NH, br t;

6,3); leucinsav (D) 4,83 (2, dd; 9,6, 4,1), 1,42 (3, m), 1,64 (3, m), 1,64 (4, m), 0,79 (4-Me, d; 6,4), 0,76 (5, d; 6,4); ¹³C-NMR (CDCI₃): egység δ (szénatomhelyzet) A 171,6 20 (1), 42,4 (2), 66,0 (3), 41,3 (4) , 76,0 (5), 42,0 (6), 17,3 (6-Me), 130,0 (7), 131,9 (8), 136,1 (9), 126,1 (10/14), 128,6 (11/13), 127,6 (12); B 170,8 (1), 54,3 (2), 35,1 (3), 130,1 (4), 131,1 (5) , 122,2 (6), 153,8 (7), 56,1 (7-OMe), 112,1 (8),

128,7 (9); C 175,6 (1), 39,1 (2), 13,8 (2-Me), 41,5 (3), D 171,9 (1), 72,1 (2), 39,1 (3), 24,6 (4), 21,4 (4-Me), 22,7 (5).

K31 vegyület [a]_D +50,6° (MeOH, c 1,13); UVX_max (ε) 242 (3800), 284 (700); IR (neat) v_max 3412, 3272, 2961, 1745, 1725, 1678, 1537, 1481, 1270, 1196, 1176, 1000, 698 cm; EIMS m/z (rel. intenzitás) 688/690/692 (1,2/1,0/0,4), 446/448/450 (7,9/6,7/3,1), 314/316/318 (17/11/3), 91 (100); nagy felbontású EIMS m/z 688,2336 (a C₃₅H₄₂CI₂N₂O₈, -1,8 mmu hiba); ¹ H-NMR (CDCI₃) amino- vagy hidroxisavegység δ (szénatomhelyzet, multiplicitás; J Hz) 7,8-epoxi-5-hidroxi-6-metil-8-fenil-2-oktánsav (A) 5,78 (2, d; 15,5), 6,66 (3, ddd;

15.5, 9,4 és 6,0), 2,47 (4, ddd; 14,1, 10,8 és 9,4),

2,56 (4, m), 5,14 (5, ddd; 10,8, 4,7 és 1,7), 1,82 (6, m), 1,15 (6-Me, d; 7,1), 2,93 (7, dd; 7,5 és 1,9), 3,70 (8, d; 1,9), 1,24-7,26 (10/14, m), 7,34-7,39 (11/12/13, m); 3,5-diklór-4-metoxi-fenil-alanin (B)

4,83 (2, m), 5,68 (2-NH, d; 9,0), 3,0 (3, dd; 14,4 és

7,3), 3,14 (3, dd; 14,4 és 5,6), 7,16 (5/9, s), 3,87 (7-OMe, s); 3-amino-2-metil-propionsav (C) 2,74 (2, m), 1,22 (2-Me, d; 7,1), 3,20 (3, m), 3,58 (3, ddd;

13.5, 5,6 és 4,1), 6,82 (3-NH, br t; 5,6); leucinsav (D)

4,83 (2, m), 1,38 (3, m), 1,72 (3, m), 1,72 (4, m), 0,87 (4-Me, d; 6,8), 0,86 (5, d; 6,8); ¹³C-NMR (CDCI₃): egység δ (szénatomhelyzet) A 165,4 (1), 125,4 (2), 141,0 (3), 36,7 (4), 76,3 (5), 40,6 (6), 13,5 (6-Me), 63,0 (7), 58,9 (8), 136,7 (9), 125,6 (10/14), 128,7 (11/13), 128,6 (12), B 170,8 (1), 53,3 (2), 35,2 (3),

129.3 (4), 129,6 (5/9), 134,5 (6/8), 151,2 (7), 60,6 (7-OMe), C 175,3 (1), 38,3 (2), 13,9 (2-CH₃), 41,5 (3), D 170,6 (1), 71,3 (2), 39,4 (3), 24,6 (4), 22,9 (4-Me), 21,3(5).

K40 vegyület [a]_D +41,6° (CHCI₃, c 0,31), UVX_max (ε) 242 (4974), 266 (3911), 274 (3666), 286 (2359), 328 (511); IR (tiszta) v_max 3415, 2959, 1748, 1667, 1505, 1463, 1289, 1176 cm^-1; EIMS m/z (rel. intenzitás) 640/642 (5/2), 280/282 (7/3), 213 (13), 195/197 (51/17), 155 (29), 141 (32), 121 (28), 91 (100), 69 (47); nagy felbontású EIMS m/z 640,2570 (a C34H41CIN2O8 képletű vegyületre számítva, -1,8 mmu hiba);¹H-NMR (CDCI3) amino- vagy hidroxisavegység δ (szénatomhelyzetek, multiplicitások; J Hz) 7,8-epoxi-5-hidroxi-8-fenil-2-oktánsav (A) 5,77 (2, d; 15,1), 6,72 (3, ddd; 15,1, 9,7 és 4,9), 2,42 (4, m), 2,58 (4, m), 5,33 (5, m), 1,89 (6, ddd; 12,9, 8,1 és 5,0), 2,13 (6, ddd; 12,9, 9,3 és 5,0), 2,98 (7, ddd; 6,7, 4,5 és 1,9), 3,64 (8, d; 1,9), 7,31-7,39 (10/11/13/14, m), 7,22 (12, m); 3-klór-4-metoxi-fenil-alanin (B) 4,83 (2, m), 5,64 (2-NH, d; 8,6), 3,03 (3, dd; 14,3 és 7,5), 3,14 (3, dd;

14.3 és 5,4), 7,21 (5, d; 2,0), 3,87 (7-OMe, s), 6,84 (8, d; 25 8,3), 7,08 (9, dd; 8,3 és 2,0); 3-amino-2-metil-propionsav (C) 2,72 (2, m), 1,23 (2-Me, d; 7,3), 3,31 (3, dt; 13,8 és 6,9), 3,50 (3, ddd; 13,6,

5,7 és 3,9), 6,96 (3-NH, br t; 6,0); leucinsav (D)

4,85 (2, dd; 6,7, 3,4), 1,42 (3, m), 1,72 (3, m), 1,72 (4, m), 0, 86 (4-Me, d, 3,7), 0,87 (5, d, 3,7); ¹³C-NMR (CDCI₃): egység δ (szénatomhelyzet) A 165,3 (1), 125,2 (2), 140,9 (3), 39,0 (4), 72,0 (5),

37.3 (6), 59,0 (7), 58,7 (8), 140,9 (9), 30 125,6 (10/14), 128,7(11/13), 128,5(12); B 170,9(1), 53,6 (2), 35,1 (3), 129,8 (4), 131,0 (5), 122,5 (6), 157,0 (7), 56,1 (7-OMe), 112,3 (8), 128,4 (9); C 175,6 (1),

38.3 (2), 14,1 (2-Me), 41,1 (3); D 170,9 (1), 71,4 (2), 39,4 (3), 24,5 (4), 21,5 (4-Me), 22,8 (5).

K43 vegyület [<x]_D +20° (CHCI₃, c 0,2); UVX_max (ε) 250 (20 512), 282 (4083), 294 (1734); IR (neat) v_max 3400, 3272, 2927, 1727, 1660, 1516, 1455, 1242, 1175 cm-¹; EIMS m/z (rel. intenzitás) 533 (24), 484 (3), 445 (14), 398 (9), 364 (29), 227 (59), 149 (67), 91 (100);

HU 225 041 Β1 nagy felbontású EIMS m/z 590,3044 (a C^H^^Oy képletű vegyületre számítva, -5,2 mmu hiba); ¹H-NMR (CDCI₃) amino- vagy hidroxisavegység δ (szénatomhelyzet, multiplicitás; J Hz) 5-hidroxi-6-metil-8-fenil-2,7-oktadiénsav (A) 5,75 (2, d;

15,3), 6,69 (3, ddd; 15,3, 9,9 és 5,3), 2,37 (4, dt;

14.2 és 10,4), 2,52 (4, m), 5,01 (5, ddd; 11,2, 6,4 és

1,8), 2,55 (6, m), 1,13 (6-Me, d; 6,9), 6,01 (7, dd;

15.8 és 8,9), 6,41 (8, d; 15,8), 7,21-7,34 (10/11/12/13/14, m); 4-hidroxi-fenil-alanin (B) 4,80 (2, m), 5,64 (2-NH, d; 8,4), 3,06 (3, dd; 14,5 és 7,2),

3.13 (3, dd; 14,4 és 5,3), 7,06 (5/9, d; 8,4), 6,74 (6/8, d; 8,4); 3-amino-2-metil-propionsav (C) 2,69 (2, m),

1,22 (2-Me, d; 7,3), 3,33 (3, m), 3,44 (3, dt; 14,0 és

4.7) , 7,0 (3-NH, m); leucinsav (D) 4,84 (2, dd; 10,0 és 3,6), 1,60-1,67 (3, m), 1,35 (3, m), 1,60-1,67 (4,4 m), 0,76 (5, d; 6,4), 0,73 (4-Me, d;

6.7) ; ¹³C-NMR (CDCI₃): egység δ (szénatomhelyzet) A 125,2 (2), 141,5 (3), 36,5 (4), 77,5 (5), 42,3 (6) , 17,3 (6-Me), 130,1 (7), 131,8 (8), 136,8 (9),

126.2 (10/14), 128,6 (11/13), 127,6 (12); B 53,8 (2),

35.3 (3), 129,8 (4), 130,5 (5/9), 115,6 (6/8), 154,6 (7) ; C 38,3 (2), 14,1 (2-Me), 41,0 (3); D 71,6 (2),

39.6 (3), 24,5 (4), 21,2 (5), 22,9 (4-Me). A minták kis mérete miatt karbonil-szénatom-jelek nem voltak láthatók.

K45 vegyület [a]_D +72,0° (MeOH, c 0,12); UVX_max (ε) 250 (25 500), 284 (5300); IR (neat) v_max 3401, 3239, 2958, 1743, 1727, 1667, 1538, 1469, Í242, 1196, 1177, 694 cm; EIMS m/z (rel. intenzitás) 658/660/662 (2,1/1,4/0,3), 483 (7,6) 432/434/436 (9,5/6,4/1,8), 300/302/304 (8,0/5,5/1,2), 227 (100) 91 (87); nagy felbontású EIMS m/z 658,2207 (a C34H₄₀Cl2N₂O₇ képletű vegyületre számítva, 0,6 mmu hiba); ¹H-NMR (CDCI₃): amino- vagy hidroxisavegység δ (szénatomhelyzet, multiplicitás; J Hz) 5-hidroxi-6-metil-8-fenil-2,7-oktadiénsav (A) 5,80 (2, d; 14,7), 6,66 (3, ddd; 14,7,

8,5 és 5,5), 2,38 (4, m), 2,53 (4, m), 4,97 (5, br dd;

10.4 és 6,2), 2,57 (6, m), 1,14 (6-Me, d; 6,7), 6,01 (7, dd; 15,9 és 8,7), 6,42 (8, d; 15,9), 7,28-7,34 (10/11/13/14, m), 7,22 (12; m); 3,5-diklór-4-hidroxi-fenil-alanin (B) 4,82 (2, m), 5,73 (2-NH, br d; 8,7), 3,02 (3, dd; 14,3 és 6,2), 3,10 (3, dd; 14,3 és 5,2),

7.14 (5/9, s), 5,79 (7-OH, s); 3-amino-2-metil-propionsav (C) 2,73 (2, m), 1,21 (2-Me, d; 7,0), 3,17 (3, m), 3,60 (3, m), 6,81 (3-NH, br t; 6,7); leucinsav (D)

4,84 (2, dd; 10,0 és 3,2), 1,38 (3, ddd; 14,9, 10,2 és

3,2), 1,65 (3, m), 1,65 (4, m), 0,78 (4-Me, d; 6,5), 0,73 (5, d; 6,5); ¹³C-NMR (CDCI₃): egység δ (szénatomhelyzet) A 165,5 (1), 125,4 (2), 141,2 (3), 36,4 (4), 77,6 (5), 5 42,3 (6), 17,3 (6-Me), 130,0 (7), 131,9 (8) , 136,7 (9), 126,2 (10/14), 128,6 (11/13), 127,6 (12); B 171,0 (1), 53,2 (2), 35,0 (3), 130,4 (4), 129,1 (5/9), 121,0 (6/8), 146,7 (7); C 175,2 (1), 38,5 (2),

13.9 (2-Me), 41,6 (3), D 170,7 (1), 71,5 (2), 39,5 (3),

24.6 (4), 22,7 (4-Me), 21,2 (5).

K49 vegyület [a]_D +68,1° (MeOH, c 0,075); UV/._max (ε) 246 (25500), 284 (5200); IR (neat) v_max 3401,3282, 2962, 1744,

1728, 1668, 1540, 1505, 1464, 1258, 1198, 1177, 1066, 694 cm-¹ EIMS m/z (rel. intenzitás) 624/626 (0,8/0,3), 398/400 (43/14), 227 (78), 195/197 (58/26) 91 (100); nagy felbontású EIMS m/z 624,2650 (a C34H41CIN2O7 képletű vegyületre számítva, -4,8 mmu hiba); ¹H-NMR (CDCI3): aminovagy hidroxisavegység δ (szénatomhelyzet, multiplicitás; J Hz) 5-hidroxi-6-metil-8-fenil-2,7-oktadiénsav (A) 5,77 (2, d; 14,1), 6,67 (3, m), 2,38 (4, m); 2,50 (4, m), 5,01 (5, m), 2,56 (6, m), 1,13 (6-Me, d;

6,5), 6,03 (7, dd; 15,8 és 8,6), 6,42 (8, d; 15,8), 7,29-7,35 (10/11/13/14, m), 7,23 (12; m); 3-klór-4-metoxi-fenil-alanin (B) 4,82 (2, m), 5,64 (2-NH, m), 3,06 (3, m), 3,13 (3, m), 7,22 (5, m), 3,87 (7-OMe, s), 6,83 (8, m), 7,08 (9, m); 3-amino-2-metil-propionsav (C) 20 2,72 (2, m), 1,22 (2-Me, d; 6,7), 3,26 (3, m), 3,53 (3, m), 6,90 (3-NH, m); 2-hidroxi-valeriánsav (D) 4,81 (2, dd; 8,8 és

3,9), 1,63 (3, m), 1,68 (3, m), 1,33 (4-H₂, m), 0,74 (5, t; 7,3).

K50 vegyület [a]_D +32,0° (CHCI₃, c 0,44); UVX_max (ε) 242 (4933), 262 (3996), 274 (3719), 286 (2430), 332 (359); IR (neat) v_max. 3412, 3274, 2958, 1752, 1724, 1676, 1648, 1503, 1465, 1258, 1177, 1066, 753; EIMS m/z (rel. intenzitás) 640/642 (4/2), 398/400 (11/4), 280/282 (10/3), 227 (17), 195/197 (57/18), 157 (20), 141 (31), 91 (100); nagy felbontású EIMS m/z 640,2531 (a C₃₄H₄₁CIN₂O₈ képletű vegyületre számítva, 2,1 mmu hiba); ¹H-NMR (CDCI₃) aminovagy hidroxisavegység δ (szénatomhelyzetek, multiplicitások; J Hz) 7,8-epoxi-5-hidroxi-6-metil-8-fenil-oktánsav (A) 5,73 (2, d; 15,7), 6,67 (3, ddd; 15,7,

9.7 és 5,4), 2,45 (4, m), 2,55 (4, m), 5,13 (5, ddd;

11,2, 5,0 és 1,7), 1,78 (6, m), 1,15 (6-Me, d, 6,9),

2,91 (7, dd; 7,5 és 1,9), 3,68 (8, d; 1,7), 7,25 (10/14, m), 7,33-7,38 (11/12/13; m); 3-klór-4-metoxi-fenil-alanin (B) 4,80 (2, ddd; 8,3, 7,1 és 5,4), 5,61 (2-NH, d; 8,3), 3,03 (3, dd; 14,4 és 7,3), 3,13 (3, dd;

14.4 és 5,6), 7,21 (5, d; 1,9), 3,87 (7-OMe, s), 6,83 (8, d; 8,4), 7,07 (9, dd; 8,4 és 2,2); 3-amino-2-metil-propionsav (C) 2,71 (2, m), 1,22 (2-Me, d; 7,3),

3,29 (3, dt; 13,6 és 6,9), 3,49 (3, ddd; 13,6, 6,7 és 5,0), 6,92 (3-NH, brt; 6,7); 2-hidroxi-pentánsav (D) 4,75 (2, dd; 9,2 és 3,7), 1,55 (3, m), 1,65 (3, m), 1,33 (4-H₂, m), 0,84 (5, t; 7,3); ¹³C-NMR (CDCI₃): egység δ értékek (szénatomhelyzetek) A 165,3 (1),

125,3 (2), 141,0 (3), 36,9 (4), 76,3 (5), 40,8 (6),

13,6 (6-Me), 63,2 (7), 59,1 (8), 136,8 (9), 125,5 (10/14), 128,7(11/13), 128,5 (12); B 170,9 (1), 53,6 (2), 35,1 (3), 129,8 (4), 131,0 (5), 122,5 (6), 154,0 (7), 56,1 (7-OMe), 112,3 10 (8), 128,5 (9); C 175,6 (1), 38,4 (2), 14,1 (2-Me), 41,2 (3); D 170,4 (1),

72.4 (2), 32,7(3), 18,4(4), 13,5 (5).

6. példa

Kriptoficinszármazékok előállítása K8 vegyület

3.8 mg K1 vegyületet feloldunk 1,5 ml 2:1 1,2-dimetoxi-etán/víz elegyben, hozzáadunk 9 μ11 n sósavat, az

HU 225 041 Β1 oldatot szobahőmérsékleten 4 órán át keverjük, kálium-karbonáttal semlegesítjük, majd betöményítjük. A visszamaradó anyagot víz és CH₂CI₂ között megosztjuk, a CH₂CI₂ oldható anyagot fordított fázisú HPLC-vel tisztítjuk, így 3,3 mg tiszta K8 vegyületet nyerünk.

EIMS m/z (relatív intenzitás) 690/692/694 (0,8/0,5/0,2), nagy felbontású EIMS m/z 690,2533 (a C₃₅H₄₄CI₂N₂O₈ képletű vegyületre számítva, -5,8 mmu hiba), ¹H-NMR (CDCI₃): amino- vagy hidroxisavegység δ (szénatomhelyzet, multiplicitás; J Hz) 8-klór-5,7-dihidroxi-6-metil-8-fenil-2-okténsav (A) 5,79 (2, d; 15,4), 6,69 (3, ddd; 15,4, 9,7 és 5,6), 2,68 (4, ddt; 14,0, 5,5 és

1,8),2,38(4, m), 5,11 (5, ddd; 10,8, 8,6 és 1,8), 2,51 (6, m), 1,05 (6-Me, d; 7,0), 4,01 (7, dd; 9,6 és 1,9), 4,65 (8, d; 9,6), 7,36-7,41 (10/11/12/13/14, m); leucinsav (D)

4,92 (2, dd; 10,1 és 3,5), 1,76 (3/4, m), 1,45 (3, m), 0,94 (5, d; 6,6), 0,94 (4-Me, d; 6,4); 3-amino-2-metil-propionsav (C) 2,73 (2, m), 1,22 (2-Me, d; 7,2), 3,25 (3, ddd; 13,6, 6,8 és 6,1), 3,54 (3, ddd; 13,5, 6,1 és 3,4),

6,91 (3-NH, brt; 6,1); 3-klór-4-metoxi-fenil-alanin (B)

4,82 (2, ddd; 8,8, 7,2 és 5,6), 5,64 (2-NH, d; 8,8), 3,03 (3, dd; 15,4 és 7,2), 3,16 (3, dd; 15,4 és 5,6), 7,23 (5, d;

2,2), 3,88 (7-OCH₃ s), 6,85 (8; d; 8,5), 7,09 (9, dd;

8,5 és 2,2).

K9 vegyület ml K1 vegyületet feloldunk 1 ml vízmentes metanolban, hozzáadunk 10 μΙ metanolos sósavat (előállítása 1,25 g tionil-kloridból és 25 ml MeOH-ból), a kapott oldatot 4 órán át keverjük, majd az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a mintát 12 órán át vákuumban állni hagyjuk. Fordított fázisú HPLC-vel való tisztítás után 8 mg tiszta K9 vegyületet nyerünk.

¹H-NMR (CDCI₃): amino- vagy hidroxisavegység δ (szénatomhelyzet, multiplicitás; J Hz); 5,7-dihidroxi-8-metoxi-6-metil-8-fenil-2-okténsav (A) 5,76 (2, d; 15,5), 6,67 (3, ddd; 15,5, 9,5 és 5,6), 2,34 (4, ddd; 14,1, 11,1 és 9,5), 2,62 (4, dddd; 14,1, 5,6,

1,8 és 1,5), 5,09 (5, ddd; 11,1, 7,8 és 1,8), 2,24 (6, dqd; 7,8, 7,0 és 2,2), 1,03 (6-Me, d; 7,0), 3,71 (7, dd; 8,3 és 2,2), 4,03 (8, d; 8,3), 3,20 (8-OCH₃, s), 7,31-7,40 30 (10/11/12/13/14, m); leucinsav (D)

4,86 (2, dd; 9,8 és 3,5), 1,71 (3/4, m), 1,41 (3, m), 0,89 (5/4-Me, d; 6,4); 3-amino-2-metil-propionsav (C) 2,71 (2, ddq; 6,8, 3,9 és 7,2), 1,21 (2-Me, d;

7,2), 3,23 (3, ddd; 13,5, 6,8 és 6,0), 3,52 (3, ddd;

13,5, 6,0 és 3,9), 6,90 (3-NH, brt; 6,0); 3-klór-4-metoxi-fenil-alanin (B) 4,82 (2, ddd; 8,8, 7,4 és 5,7), 5,66 (2-NH, d; 8,8), 3,02 (3, dd; 14,4, 7,4), 3,15 (3, dd; 14,4 és 5,5), 7,23 (5, d; 2,2), 3,87 (7-OCH₃, s),

6,84 (8, d; 8,5), 7,08 (9, dd; 8,5 és 2,2).

K10 vegyület mg K9 vegyületet feloldunk 1 ml acetonban és 0,3 ml vízben, hozzáadunk 8 μΙ nátrium-hidroxidot, órán át keverjük, a pH értékét 1 n sósavval pH=7 értékre beállítjuk, majd az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítjuk. A visszamaradó anyagot fordított fázisú HPLC-vel tisztítjuk, 7:3=MeOH/H₂O eleggyel, így mg tiszta K10 vegyületet nyerünk.

¹H-NMR (CD₃OD): amino- vagy hidroxisavegység δ (szénatomhelyzet, multiplicitás; J Hz); 5,7-dihidroxi-8-metoxi-6-metil-8-fenil-2-okténsav (A) 5,99 (2, dt; 15,4 és 1,3), 6,82 (3, dt; 15,4 és 7,3), 2,30 (4, m), 2,50 (4, m), 3,66 (5, td; 7,8 és 3,5), 2,05 (6, d pentet; 1,8 és 7,0), 0,96 (6-Me, d; 7,0), 4,04 (7, dd;

8,8 és 2,0), 4,01 (8, d; 8,8), 3,12 (8-OCH₃, s), 7,26-7,36 (10/11/12/13/14, m); 3-amino-2-metil-propionsav (C) 2,50 (2, m), 1,02 (2-Me, d; 7,3), 3,16 (3, dd; 13,4 és 6,9), 3,82 (3, dd; 13,4 és 6,6); 3-klór-4-metoxi-fenil-alanin (B) 4,57 (2, dd; 8,5 és

6,5), 2,82 (3, dd; 13,9 és 8,6), 3,03 (3, dd; 13,9 és

6.5) , 7,25 (5, d; 2,2), 3,82 (7-OCH₃, s), 6,96 (8, d;

8.6) , 7,13 (9, dd; 8,6 és 2,2), ¹³C-NMR (CD₃OD): δ

179,5, 173,4, 168,2, 155,4, 143,7, 141,7, 131,9,

131,7, 129,8, 129,3 (2C), 129,2 (2C), 128,8, 126,2,

123,2, 113,4, 85,9, 74,5, 74,1, 56,8, 56,6, 56,3,

43,3, 41,2, 40,2, 38,8, 38,0, 15,5, 9,9.

K12 vegyület mg K1, K5 vagy K8 vegyületet feloldunk 1 ml 4;1 aceton/víz elegyben, hozzáadunk 15 μΙ 2 n nátrium-hidroxidot, szobahőmérsékleten 5 órán át keverjük, majd sósavval pH=7 értékig semlegesítjük és betöményítjük. A CH₂CI₂ oldható anyagot kisméretű szilikagél töltetű oszlopon átvezetjük CH₂CI₂-nal, majd 1;1=EtOAc/CH₂CI₂ eleggyel, végül EtOAc-tal. Az EtOAc-tal eluált frakció tartalmazza a tiszta K12 vegyületet.

¹H-NMR (CD₃OD); amino- vagy hidroxisavegység δ (szénatomhelyzet, multiplicitás; J Hz); 5,7,8trihidroxi-6-metil-8-fenil-2-okténsav (A) 6,07 (2, ddd; 15,5, 1,3 és 1,2), 6,40 (3, dt; 15,5 és 7,3), 2,49 (4, m), 2,60 (4, m), 3,92 (5, ddd; 9,3, 6,7 és 30 4,5),

1.94 (6, m), 1,07 (6-Me, d; 6,6), 3,61 (7, dd; 8,9 és

7.6) , 4,56 (8, d; 7,6), 7,36 (10/14, dd; 7,4 és 1,5),

7,32 (11/13, brt; 7,5), 7,25 (12, m); 3-amino-2-metil-propionsav (C) 2,54 (2, ddq; 7,0, 6,6 és 7,0), 1,02 (2-Me, d; 7,0), 3,14 (3, dd; 13,5 és 7,0), 3,42 (3, dd;

13,4 és 6,6); 3-klór-4-metoxi-fenil-alanin (B) 4,57 (2, dd; 8,4 és 6,7), 2,83 (3, dd; 13,8 és 8,4), 3,02 (3, dd; 13,8 és 6,6), 7,25 (5, d; 2,1), 3,82 (7-OCH₃, s),

6.95 (8, d; 8,5), 7,12 (9, dd; 8,5 és 2,1). A K12 vegyületet diazo-metánnal metilezve nyerjük a K6 vegyületet.

K14 vegyület mg K6 vegyületet feloldunk 1 ml 3:1 aceton/víz elegyben, hozzáadunk 5 μΙ 2 n NaOH-ot, 5 órán át keverjük, majd a pH-t 1 n sósavval pH=7 értékre beállítjuk, majd szárazra pároljuk. A visszamaradó anyagot fordított fázisú HPLC-vel tisztítjuk, így 2,4 mg K14 vegyületet nyerünk.

¹H-NMR (CD₃OD): amino- vagy hidroxisavegység δ (szénatomhelyzet, multiplicitás; J Hz); 5-hidroxi-6metil-8-fenil-2,7-oktadiénsav (A) 5,98 (2, d; 15,3), 6,78 (3, dt; 15,3 és 7,5), 2,35 (4, m), 3,64 (5, td;

7.2 és 4,8), 2,47 (6, m), 1,14 (6-Me, d; 6,9), 6,22 (7, dd; 15,9 és 8,1), 6,39 (8, d, 15,9), 7,24-7,36 (10/11/12/13/14, m); 3-amino-2-metil-propionsav (C) 2,35 (2, m), 1,02 (2-Me, d; 6,9), 3,18 (3, dd;

13.2 és 15 6,6), 3,36 (3, dd; 13,2 és 4,5);

3-klór-4-metoxi-fenil-alanin (B) 4,58 (2, dd; 8,7 és

6,3), 2,80 (3, dd; 13,8 és 9,0), 3,05 (3, dd; 13,8 és

HU 225 041 Β1

6.3) , 7,25 (5, d; 2,1), 3,82 (7-OCH₃, s), 6,95 (8, d;

8.4) , 7,13(9, dd; 8,4 és 2,1).

K35 vegyület

Katalitikus mennyiségű PtO₂-ot egy lombikban 0,5 ml CH₂CI₂-hoz adagolunk. A lombikból a levegőt leszívatjuk, H₂-t vezetünk be, és a keveréket szobahőmérsékleten 20 percen át keverjük. Ezután hozzáadunk minimális mennyiségű CH₂CI₂-ban oldott K1 vegyületet, és a keveréket szobahőmérsékleten 45 percen át keverjük, majd a katalizátort szűrjük celit/vatta anyagon, és az oldószert elpárologtatjuk. A visszamaradó anyagot fordított fázisú HPLC-vel C18 oszlopon tisztítjuk, így 6,5 mg K35 vegyületet nyerünk.

EIMS m/z (relatív intenzitás) 656/658 (25/10), 412/414 (25/12), 280/282 (20/10), 195/197 (78/25), 141 (58), 91 (100); nagy felbontású EIMS m/z 656,2864 (a C₃₅H₄₅CIN₂O₈ képletű vegyületre számítva

0,0 mmu hiba); ¹H-NMR (CDCI₃) amino- vagy hidroxisavegység δ értékek (szénatomhelyzetek, multiplicitások; J Hz) 2,3-dihidro-7,8-epoxi-5-hidroxi-6-metil-8-fenil-oktánsav (A) 2,32 (2, ddd; 14,5,

9,2, 5,8), 2,10 (2, ddd; 14,5, 9,2, 6,2), 1,5-1,8 (3/4 overlapping m), 5,07 (5, ddd; 12,5, 5,6, 2,0),

1,80 (6, m), 1,12 (6-Me, d; 7,0), 2,90 (7, dd; 7,4,

1,8), 3,67 (8, d; 1,8), 7,24 (10/14, m), 7,32-7,38 (11/12/13, m); 3-klór-4-metoxi-fenil-alanin (B) 4,71 (2, ddd; 8,7, 6,4, 6,3), 5,62 (2-NH, d; 8,7), 3,08 (2H-3, br d; 6,4), 7,19 (5, d; 2,0), 3,87 (7-OMe, s),

6,83 (8, d; 8,5), 7,07 (9, dd; 8,4, 2,0); 3-amino-2-metil-propionsav (C’) 2,72 (2, m), 1,18 (2-Me, d; 6,9), 3,12 (3, ddd; 11,4, 10,6, 5,6), 3,70 (3, ddd), 6,76 (3-NH, br t, 6,0); leucinsav (D) 4,83 (2, dd; 9,9, 3,8), 1,39 (3, m), 1,70 (3, m), 1,72 (4, m), 0,87 (4-Me, d; 5,3), 0,86 (5, d; 5,3); ^{7 * * * * * 13}C-NMR (CDCI₃): egység δ értékek (szénatomhelyzetek) A 172,4 (1),

36,2 (2), 32,0 (3), 21,1 (4), 76,6 (5), 40,2 (6), 13,6 (6-Me), 63,3 (7), 59,2 (8), 136,8 (9), 125,6 (10/14),

128,7 (11/13), 128,6 (12); B 170,7 (1), 53,7 (2),

35,5 (3), 130,0 (4), 131,1 (5), 122,2 (6), 153,8 (7),

56.1 (7-OMe), 112,1 (8), 128,5 (9); C 175,2 (1),

38.2 (2), 13,6 (2-Me), 42,1 10 (3); D 171,9 (1), 71,7 (2), 39,6 (3), 24,5 (4), 22,9 (4-Me), 21,4 (5).

7. példa

Kriptoficinvegyületek mikrocsatornás depolimerizációs aktivitásának vizsgálata

Anyagok

A vinblasztint, cytochalasin B-t, tetrametil-rodamin-izotiocianát (TRITC)-falloidint, szulforodamin B-t (SRB) és a β-tubulin elleni antitesteket, valamint a vimentint a Sigma Chemical Companytól szereztük be. Az alap Médium Eagle, Earl-féle sókat tartalmazó tápközeget (BMA) a Gibco cégtől, a magzati szarvasmarhaszérumot (FBS) a Hyclone Laboratoriestól szereztük be.

Sejtvonalak

A Jurkat T leukémia-sejtvonalakat és az A-10 patkányaorta-sejtvonalakat az American Type Culture Collection cégtől kaptuk és BME-ben tenyésztettük, amely 10% FBS-t és 50 pg/ml gentamicin-szulfátot tartalmaz. Humán petekarcinóma-sejteket (SKOV3) és szubvonalakat, amelyeket vinblasztinra való rezisztencia alapján választottunk ki (SKVLB1), ajándékként kaptuk dr. Victor Lingtől az Ontario Cancer Institute-tól. Mindegyik sejtvonalat BME-ben tartottuk, amely 10% FBS-t és 50 pg/ml gentamycin-szulfátot tartalmazott. A vinblasztint 1 pg/ml végső koncentrációban adagoltuk az SKVLB1 sejtekhez 24 órás passzálás után, hogy fenntartsuk a szelektálás! nyomást a P-glükoproteintúlexpresszáló sejtekre.

Sejtproliferáció és ciklusleállítási vizsgálat A sejtproliferációs vizsgálatot Skehan és munkatársai [Skehan, P. és munkatársai, J. Natl. Cancer Inst. 82:1107-1112 (1990)] módszere szerint végeztük. Jurkat-sejtek esetén a tenyészetet a Skehan által megadott hatóanyagokkal kezeltük, majd meghatároztuk az összsejtszámot a sejteknek hemacytométerben való számlálásával. A mitózisos sejtek százalékos mennyiségét 0,4% Giemsa/PBS-oldattal való festéssel határoztuk meg, majd három gyors mosást végeztünk PBS-sel. Kezelésenként legalább 100 sejtet értékeltünk a mitotikus jelenségre, és a mitotikus indexet számoltuk a mitotikus jelenséget mutató sejtek számának az összsejtek számához való viszonyításával.

Immunfluoreszcens vizsgálat

A-10 sejteket növesztettünk közel összefolyásig üveg fedőlemezen BME/10% FBS-ben. Az FBS-ben oldott vegyületeket a megadott végső koncentrációban a sejtekhez adagoltuk és további 24 órán át inkubáltuk. A mikrocsatornák és az intermedier szálak festésére a sejteket hideg metanollal rögzítettük és PBS-sel inkubáltuk, amely 10% borjúszérumot tartalmazott a nemspecifikus kötési helyek blokkolására. A sejteket ezután 34 °C-on 60 percig monoklonális anti-8-tubulinnal vagy monoklonális antivimentinnel inkubáltuk a gyártó cég által ajánlott hígításokban. A primer kötött antitesteket ezután vizualizáltuk fluoreszceinkonjugált nyúlantiegér IgG-vel való 45 perces inkubálással. A fedőlemezeket mikroszkóptárgylemezre építettük, és a fluoreszcens mintázatot vizsgáltuk és lefotografáltuk Zeiss Photomicroscope III berendezéssel, amely epifluoreszcens optikával volt felszerelve a fluoreszcein számára. A mikrorostok számlálásához a sejteket 3% paraformaldehiddel rögzítettük, permeabilizáltuk 0,2% Triton X-100 segítségével, és kémiailag redukáltuk nátrium-bór-hidriddel (1 mg/ml). Ezután PBS-tartalmú 100 nmol TRITC-falloidint adagoltunk, és a keveréket 45 percen át 37 °C-on inkubáltuk. A sejteket ezután gyorsan háromszor PBS-sel mostuk, mielőtt a fedőlemezeket felszereltük, és azonnal lefotografáltuk a fentiek szerint.

Kriptoficinek és vinblasztin hatása a Jurkat-sejtproliferációra és a sejtciklusra A 2A. és 2B. ábrán bemutatjuk a kriptoficinvegyületek és a vinblasztin hatásának dózis-válasz görbéit a sejtproliferációra és a mitózisos sejtek százalékos mennyiségét. A kezeletlen sejtek kevesebb mint 3%-a mutatott mitotikus jeleket. Mind a kriptoficinvegyületek, mind a vinblasztin dózisfüggő mértékben növelte a mitózisban a sejtek százalékos mennyiségét. A mitózisos index növekedése szorosan összefüggött a sejtprolife31

HU 225 041 Β1 ráció csökkenésével, azaz mind a kriptoficinvegyületek, mind a vinblasztin koncentrációja, amely kiváltotta, hogy a sejtek 50%-a a mitózisban akkumulálódjon, látszólagosan ugyanaz a koncentráció, amely gátolta a sejtek proliferációját 50%-ban. Az IC₅₀-értékek a kriptoficinvegyületekre, illetve a vinblasztinra ezen hatás kiváltására 0,2, illetve 8 nmol.

A cytochalasin B, vinblasztin és kriptoficinvegyületek hatása a sejtvázra

Aorta-simaizomsejteket (A-10) növesztettünk üveg fedőlemezen, és a következő vegyületekkel kezeltük: PBS, 2 pmol cytochalasin B, 100 nmol vinblasztin vagy 10 nmol valamely kriptoficinvegyület. 24 óra elteltével a mikrocsatornákat és a vimentin intermedier rostszálakat vizualizáltuk közvetlen immunfluoreszcenciával, és a mikrorostokat megfestettük TRITC-falloidinnel. Vizsgáltuk mindegyik hatóanyag morfológiai hatását. A kezeletlen sejtek kiterjedt mikrocsatornahálózatot mutattak kiegészítve a mag körüli mikrocsatornákat kialakító centrumokkal. A vimentin intermedier rostok szintén egyenletesen oszlottak szét a teljes citoplazmában, míg a mikrorostkötegek a sejt fő tengelye mentén koncentrálódtak. A cytochalasin B a mikrorostok teljes depolimerizációját váltotta ki együttesen parakristályos maradékok akkumulációjával. Ez a vegyület nem hatott sem a mikrocsatornák, sem az intermedier rostok szétosztására. Mind a vinblasztin, mind a kriptoficinvegyületek a mikrocsatornák jelentős csökkenését váltották ki. Egyik vegyület sem befolyásolta a mikrorostok szervezettségét, azonban a vimentin intermedier rostok összeomlottak, koncentrikus gyűrűt alakítottak ki a sejtmagok között akár a vinblasztin, akár a kriptoficinvegyületekkel történt kezelés hatására.

Kriptoficin és vinblasztin hatása a taxolstabilizált mikrocsatornákra

A-10 sejteket kezeltünk 3 órán át 0 vagy 10 pmol taxollal a PBS, 100 nmol vinblasztin vagy nmol kriptoficinvegyület adagolását megelőzően. 24 óra elteltével vizsgáltuk a mikrocsatornák rendszerét, a fentiek szerint immunfluoreszcenciával. A kontrollsejtekkel összehasonlítva a taxolkezelt sejtek esetén a mikrocsatornák kiterjedten kötegelődtek, különösen a sejt poláros részeiben. Mint korábban, a vinblasztin a nem előkezelt sejteknél a mikrocsatornák teljes depolarizációját váltotta ki. Azonban a taxollal való előkezelés megakadályozta a mikrocsatornák depolarizációját a vinblasztinos kezelés hatására. Hasonlóképpen, a taxollal való előkezelés teljesen stabilizálta a mikrocsatornákat a kriptoficinindukált depolimerizációval szemben.

Vinblasztin és kriptoficin által kiváltott mikrocsatornadepolimerizáció reverzibilitása

A-10 sejteket kezeltünk vagy 100 nmol vinblasztinnal vagy 100 nmol kriptoficinnel 24 órán át, ez a teljes mikrocsatorna depolimerizációját eredményezte. A sejteket ezután mostuk, és hatóanyagmentes közegben 1 órán át vagy 24 órán át inkubáltuk. A mikrocsatornák a vinblasztin eltávolítása után gyorsan repolimerizálódtak, és 1 óra után szignifikáns mennyiségű mikrocsatornát mutattunk ki, és komplett morfológia-visszaállást 24 óra elteltével. Ezzel szemben a mikrocsatornák nem jelentek meg újra a sejtekben a kriptoficinvegyületekkel való kezelés után sem 1, sem 24 órával a vegyületek eltávolítása után.

Kriptoficin-, vinblasztin- és taxolgátlás reverzibilitása a sejtproliferációra

SKOV-sejteket kezeltünk 24 órán át az előzőleg meghatározott IC₅₀-dózissal, vinblasztinnal, kriptoficinvegyületekkel vagy taxollal (az 5. táblázatban összefoglalt értékeket használtuk). Ezen idő alatt a sejtsűrűség 0,4-ről 0,5±0,05 abszorpciós egységre növekedett (3. ábra), ez a sejtszámok 25%-os növekedését jelenti mind a három kezelés esetén. A hatóanyagok eltávolítása után a vinblasztinnal kezelt sejtek gyors növekedését figyeltük meg úgy, hogy ezek száma 24 óra alatt kb. háromszorosára nőtt. Ezzel szemben a kriptoficinvegyületekkel vagy a taxollal kezelt sejtek nem változtak, a számuk a hatóanyag eltávolítása után 24 óra alatt 0,2-0,4-szeresükre nőtt. A kriptoficinekkel vagy taxollal kezelt sejtek proliferációs kapacitása ezt követően visszaállt, mivel a sejtek a következő 24 óra alatt megduplázódtak.

Vinblasztin és kriptoficin kombinációk hatása a sejtproliferá dóra

SKOV3 sejteket kezeltünk kriptoficin és vinblasztin kombinációkkal 48 órán át. Ezután meghatároztuk a túlélő sejtek százalékos mennyiségét, és kiszámoltuk mindegyik kombinációra az IC₅₀-értékeket. Ezen kombinált kezelések, valamint az egyes hatóanyagokkal való kezelés hatását izobologramként a 4. ábrán mutatjuk be. Az IC₅₀-értékek a kriptoficinvegyületeket és vinblasztint tartalmazó kombinációk esetében közel az additivitás vonalához találhatók, jelezve, hogy a két hatóanyag csupán additíve gátolja a sejtproliferációt.

Kriptoficinek, vinblasztin és taxol toxicitása

SKOV3 és SKVLB1 sejtekkel szemben

Az SKVLB1 sejtek rezisztensek a természetes daganatellenes szerekkel szemben a P-glükoprotein-túlexpresszálásuk következtében [Bradley, G. és munkatársai, Cancer Rés. 49:2790-2796 (1989)]. A taxol, vinblasztin és kriptoficinvegyületek gátlóhatását az SKOV3 és SKVLB1 sejtek növekedésére az 5. táblázatban foglaljuk össze. A taxol dózisfüggő mértékben gátolja mindkét sejtvonal proliferációját, és az SKOV3, illetve SKVLB1 sejtek IC₅₀-értéke 1, illetve 8000 nmol. A vinblasztin szintén gátolja mindkét sejtvonal növekedését, az IC₅₀-érték 0,35, illetve 4200 nmol, az SKOV3, illetve SKVLB1 sejtek esetén. A kriptoficin IC₅₀-értéke 7, illetve 600 pmol SKOV3, illetve SKVLB1 sejtek esetén. A kialakuló rezisztenciafaktorokat az SKVLB1 sejtek esetén a vegyületekkel szemben mint IC₅₀-értéket adjuk meg az SKVLB1 sejtre. Az SKOV3 sejtek IC₅₀-értékeit szintén az 5. táblázatban foglaljuk össze.

így kimutattuk, hogy a találmány szerinti új kriptoficinvegyületek, valamint a korábban ismertetett kriptoficinvegyületek hatásosan gátolják a sejtproliferációt, széttörik a mikrocsatornahálózatot, és gátolják a mitózist. A kriptoficinvegyületek széttörik a mikrocsatornaszerkezetet, és így a normál celluláris funkciókat, beleértve a mitózist.

Klasszikus antimikrocsatornaszerek, így például a kolchicin és a vinkaalkaloidák visszafogják a sejtosz32

HU 225 041 Β1 tódást mitózis esetén. Megfelelőnek tűnt az egyik ilyen szer hatását a sejtproliferációra összehasonlítani kriptoficinvegyülettel. Erre a célra a vinkaalkaloid vinblasztint választottuk ki, mint a klasszikus antimikrocsatornás szerek egyik képviselőjét. A vizsgálatnál összehasonlítottuk a kriptoficinvegyületek és a vinblasztin hatását a proliferációra és a sejtciklus előrehaladására Jurkat T-sejt leukémia-sejtvonal esetén. Mindegyik vegyület párhuzamosan dózisfüggő mértékben gátolta a sejtproliferációt és a sejtek akkumulációját mitózisban.

Mivel az antimitózisos hatást rendszerint a mikrocsatornák összetörése közvetíti a mitózisos sejtorsókban, a kriptoficinvegyületek hatását a sejtvázszerkezetre fluoreszcens mikroszkópiával jellemeztük. Akár a kriptoficínvegyületekkel, akár a vinblasztinnal kezelt sejtek immunfluoreszcens festése világosan kimutatta, hogy mindkét vegyület a mikrocsatornák teljes elvesztését okozza. Hasonló vizsgálatokat végeztünk az SKOV3 sejtekkel, és ez kimutatta, hogy a kriptoficinvegyületek antimikrocsatornahatása nem egyedülállóan áll fenn a simaizom-sejtvonalakra. Egyik hatóanyag sem befolyásolta a mikrorostkötegek eloszlásának mértékét, mint azt a cytochalasin B indukálta, jelezve, hogy a mikrocsatornák hiánya nem lehet egy nemspecifikus mechanizmusnak a következménye, például a proteázok aktiválásának vagy az energiatöltés elvesztésének. Mind a vinblasztin, mind a kriptoficinvegyületek elősegítik jelentős mértékben a vimentin intermedier rostok összeomlását úgy, hogy világos festésű gyűrűk alakultak ki a sejtmagok körül.

A vinblasztinnak a tenyészközegből való eltávolítása a mikrocsatornák gyors repolimerizálódását váltja ki. Ezzel szemben a kriptoficínvegyületekkel kezelt sejteknél megmarad a mikrocsatornák csökkent mennyisége legalább 24 órával a vegyületnek a tenyészetből való eltávolítását követően.

A találmányunk kimutatja, hogy a kriptoficinvegyületek meghiúsítják a P-glükoprotein-közvetített többszörös hatóanyag-rezisztenciát. A P-glükoprotein által való szállítás korlátozza a természetes eredetű rákellenes szereknek azt a képességét, hogy gátolják a tumorsejtek növekedését a szerzett vagy új hatóanyag-rezisztenciájuk révén [Endicott, J. A. és munkatársai, Ann. Rév. Biochem. 58:137-171 (1989); Moscow, J. A. és munkatársai, J. Natl. Cancer Inst. 80:14-20 (1988)]. A vinkaalkaloidák, bár igen hasznosak a kemoterápia kezdeti szakaszában, különösen jó szubsztrátumok a P-glükoprotein-szállításhoz, és így igen korlátozott mértékben alkalmasak P-glükoprotein-közvetített MDR tumorokkal szemben. Ily módon a szerek azonosítása, amelyekkel legyőzhető a többszörös hatóanyag-rezisztencia, hasznos és új rákellenes szerek kifejlesztéséhez vezethet. A találmány szerinti kriptoficinvegyületek ilyen szereknek tűnnek, mivel kevésbé alkalmas szubsztrátumok a P-glükoprotein-közvetített transzport számára. Ez a tény tükröződik az alacsony sejtellenállási faktor által, amely jellemző a kriptoficinvegyületekre, összehasonlítva a vinblasztinnal, taxollal és más egyéb természetes hatóanyaggal.

Kriptoficinek totálszintézise

Az újonnan szintetizált vegyületek, úgymint a K51, K52, K53, K56, K57, K58 és K61 szerkezetét egyszerű módon a szakterületen ismert módszerekkel igazoltuk. A tömegspektroszkópiai adatok egyeztek a molekula-összetétellel. A proton- és szén-NMR-adatok hasonlóak voltak a K1 és az egyéb rokon, természetben előforduló és szintetikus analógok adataival.

A következő példákban bemutatjuk a kriptoficinvegyületek totálszintézisét és ezek alkalmazását terápiás szerként.

8. példa

K51 vegyület előállítása

S-transz-3-Pentén-2-ol (A)

933 mg (11 mmol) racém transz-3-pentén-2-olt elkeverünk 4,14 g (15 mmol) trifluor-etil-lauráttal és 2 g sertés pankreáz lipázzal (PPL) 25 ml vízmentes dietil-éterben, és 80 órán át keverjük. A PPL-t ezután leszűrjük, éterrel háromszor átmossuk, az éteres szűrletet betöményítjük, a visszamaradó sűrű olajat rövid utas vákuumdesztillációnak vetjük alá. Az S-transz3-pentén-2-olt (A) folyékony nitrogénnel hűtött csapdában kondenzáljuk (383 mg).

¹H-NMR (CDCI₃) δ 5,57 (4-H; dq, -15,3/6,0), 5,47 (3-H; ddd, -15,3/6,4/1,2), 4,19 (2-H; 1:4:6:4:1 pentuplet, 6,4), 2,24 (OH; bs), 1,63 (5-H” d, 6,0), 1,19 (1-H₃; d, 6,4), ¹³C-NMR (CDCI₃) δ 135,5 (3), 125,5 (4), 68,7 (2), 23,3(5),17,5(1).

S-transz-2-(2-Propinil-oxi)-3-pentén (B)

628 mg (7,3 mmol) S-enantiomert (A) elkeverünk 138 mg (0,41 mmol) tetrabutil-ammónium-hidrogén-szulfáttal és 5 ml 40%-os vizes NaOH-dal, és erőteljes keverés közben hozzáadunk cseppenként 767 mg (10,3 mmol, 745 μΙ) propargil-kloridot. Az erőteljes keverést 1 éjszakán át végezzük, majd ezután a keveréket sósavval semlegesítjük 0 °C-on, és a propargil-étert pentánnal extraháljuk. Az extraktumot betöményítjük, a propargil-étert rövid szilikagél oszlopon tisztítjuk (2% dietil-éter/pentán), így 778 mg propargil-étert (B) nyerünk.

[a]_D -118,9° (c 2,0, CHCI₃); ¹H-NMR (CDCI₃) δ 5,70 (4-H; dq, 18,5/6,5), 5,31 (3-H; ddd, 18,5/7,2/1,4),

4,15 (1’-H; dd, -15,6/2,1), 4,01 (1’-H; dd,

-15,6/2,1), 4,01 (2-H; m), 2,38 (3’-H; t, 2,1), 1,73 (5-H; dd, 6,5/1,4), 1,25 (1H; d, 6,3).

(3R,4R)-4-Metil-hept-5(E)-én-1-in-3-ol (C)

Butil-lítium/hexán oldat aliquot részét (2,2 mólos,

5,1 ml 12,8 mmol) vákuumban betöményítjük, és a visszamaradó anyagot -90 °C-ra lehűtjük, majd hozzáadunk 450 mg (3,66 mmol) B propargil-étert 10 ml THF-ben lassan, majd hagyjuk a hőmérsékletet szobahőmérsékletre emelkedni 1 éjszaka alatt, és a keverékhez NH₄CI-oldatot adunk. Az anyagot ezután háromszor éterrel extraháljuk, a szárított extraktumokat betöményítjük, és a visszamaradó anyagot szilikagél oszlopon tisztítjuk (5% EtOAc/hexán), így 322 mg alkoholt nyerünk (C), kihozatal 71%.

[a]_D +32,9° (c 3,0, CHCI₃); IR (NaCI) v_max 3306, 2968,

1455, 1379, 1029, 975 cm-¹, ¹H-NMR (CDCI₃) δ

HU 225 041 Β1

5,61 (6-H; dq, 15,3/6,3), 5,38 (5-H; dd, 15,3/7,7),

4,13 (3-H; bs), 2,45 (1-H; d, 1,5), 2,38 (4-H; m),

2,20 (OH; bd, 3,3), 1,68 (7-H; d, 6,2), 1,09 (4-CH₃; d, 6,8), ¹³C-NMR (CDCI₃) δ 131,5 (5), 127,9 (6),

83.5 (2), 73,6 (1), 66,2 (3), 43,4 (4), 18,1 (7), 15,7 (4-Me).

(3R,4R)-3-terc-Butil-dimetil-szilil-oxi-4-metil-hept-5(E)-enal (D)

248 mg (2 mmol) alkoholt (C) elkeverünk 340 mg (5 mmol) imidazollal 3 ml vízmentes DMF-ben, és keverés közben hozzáadunk 452 mg (3 mmol) terc-butil-dimetil-szilil-kloridot. A kapott anyagot 1 éjszakán át keverjük, hozzáadunk 10 ml 10%-os NaOH-ot, a felesleges terc-butil-dimetil-szilil-klorid megbontására, majd a terméket éterrel extraháljuk, az extraktumokat egymást követően vízzel, 0,5 n sósavval, majd vízzel mossuk, szárítjuk és betöményítjük. A visszamaradó anyagot szilikagélen kromatografáljuk hexánnal, így 457 mg (3R,4R)-3-terc-butil-dimetil-szilil-oxi-4-metil-hept-5(E)-én-1 -int nyerünk, kihozatal 96%.

¹H-NMR (CDCI₃) δ 5,50 (6-H; dq, 15,3/6,1), 5,38 (5-H; dd, 15,3/7,5), 4,16 (3-H; dd, 5,7/1,7), 2,37 (1-H; d, 1,7), 2,35 (4-H; m), 1,68 (7-H; d, 6,1),

1,07 (4-Me; d, 6,8), 0,90 (CMe₃; s), 0,12 (SiMe; s),

0,09 (SiMe; s).

A fenti eljárással állítjuk elő a megfelelő TBDPSszármazékot [(3R,4R)-3-terc-butil-difenil-szililoxi-4-metil-hept-5(E)-én-1-in], a kihozatal 92%.

[aj_D +32,9° (c 3,0, CHCI₃), ¹H-NMR (CDCI₃) δ

7,72/7,38 (2Ph-H₅), 5,32 (6-H; m), 5,25 (5-H; dd,

16,2/7,3), 4,29 (3-H; dd, 5,2/2,0), 2,38 (4-H; m),

2,33 (1-H; d, 2,0), 1,64 (7-H; d, 5,3), 1,11 (4-Me; d, 6,9), 1,06 (CMe₃), ¹³C-NMR (CDCI₃) δ 136,1/135,9/133,6/129,7/129,6/127,5/127,3 (Ph),

132,4 (5), 126,1 (6), 83,3 (2), 73,5 (1), 68,0 (3),

43.6 (4), 26,9 (CMe₃), 19,4 (CMe₃), 18,0 (7), 14,7 (4-Me).

2-Metil-butént (1,15 ml 2 mólos oldat THF-ben,

2,3 mmol) adagolunk 1,1 ml BH₃/THF oldathoz (1 mólos 1,1 mmol) -25 °C hőmérsékleten, és a kapott anyagot jégfürdőn 2 órán át keverjük. A hőmérsékletet ezután lecsökkentjük -50 °C-ra, és hozzáadunk 238 mg (1 mmol) TBS-származékot 1 ml THF-ben oldva egy adagban. A hűtőfürdőt eltávolítjuk, a keveréket hagyjuk felmelegedni, és szobahőmérsékleten tartjuk 1 órán át. Ezután 0 °C-on hozzáadunk 4,8 ml 2,2 mólos KH₂PO₄/K₂HPO4 oldatot és 0,8 ml 30%-os H₂O₂-ot, majd 1 óra elteltével a THF-et elpárologtatjuk, és a visszamaradó anyagot éterrel extraháljuk. Az éteres extraktumot szárítjuk, betöményítjük, és a visszamaradó anyagot szilikagélen kromatografáljuk (1% EtOAc/hexán), így 194 mg D aldehidet nyerünk, kihozatal 76%.

¹H-NMR (CDCI₃) δ 9,78 (1-H; t, 2,3), 5,46 (6-H; dq,

15,3/6,1), 5,34 (5-H; dd, 20 15,3/7,5), 4,13 (3-H; m), 2,47 (2-H; m), 2,31 (4-H; m), 1,66 (7-H; br d, 6,1), 0,99 (4-Me; d, 6,8), 0,87 (CMe₃ s), 0,07 (SiMe; s), 0,04 (SiMe; s).

A fenti aldehid terc-butil-difenil-szilil-éter (TBDPS)származékát 43%-os kihozatallal állítjuk elő.

¹H-NMR (CDCI3) δ 9,52 (1-H; t, 2,4), 7,69/7,40 (2Ph-H5), 5,28 (6-H; m), 5,22 (5-H; dd, 16,2/6,2), 4,19 (3-H; m), 2,42 (2-H; m), 2,29 (4-H; m), 1,60 (7-H; d, 5,4), 1,01 (CMe3), 1,02 (4-Me; d, 6,9), ¹³C-NMR (CDCI3) δ 202,0 (1), 136,1/133,6/133,3/130,2/129,7/127,7/127,6 (Ph),

132,3 (5), 126,2 (6), 72,8 (3), 47,6 (2), 42,2 (4),

27,1 (CMe₃), 19,6 (CMe₃), 18,3 (7), 14,9 (4-Me). Metil-(5S,6R)-5-terc-butil-dimetil-sziHI-oxi-6-metil-(7-oxo)-nona-2E, 7E-dienoát (E)

0,74 g (2,9 mmol) D aldehidet és 632 mg (3,5 mmol) trimetil-foszfonoacetátot 5 ml THF-ben keverünk, lehűtjük -78 °C-ra, és hozzáadunk 435 pl (3,5 mmol) tetrametil-guanidint. 30 perc elteltével a hűtőfürdőt eltávolítjuk, a keveréket további 4 órán át keverjük, majd 1 n sósavval semlegesítjük, és a terméket éterrel extraháljuk. Az éteres extraktumokat szárítjuk, betöményítjük, a visszamaradó anyagot szilikagélen kromatografáljuk (5% EtOAc/hexán), így 0,814 g E vegyületet nyerünk, kihozatal 90%.

¹H-NMR (CDCI₃) δ 6,93 (3-H; dt, 15,6/7,8), 5,62 (2-H; dd, 15,6/1,2), 5,37 (8-H, m), 5,37 (7-H, m), 3,71 (OCH₃, s), 3,61 (5-H, m), 2,29 (4-H₂, m), 2,22 (6-5H, m), 1,66 (9-H₃; br d, 6,1), 0,99 (6-Me; d,

6,8), 0,88 (CMe₃; s), 0,03 (SiMe; s), 0,01 (SiMe; s). Az aldehid terc-butil-difenil-szilil-éter (TBDPS)-származékát 90%-os kihozatallal állítjuk elő.

¹H-NMR (CDCI₃) δ 7,68/7,38 (2Ph-H₅), 6,75 (3-H; dt, 15,6/7,4), 5,62 (2-H; d, 15,6), 5,34 (8-H, m), 5,29 (7-H, m), 3,70 (5-H, m), 3,68 (OCH₃, s),

2,28 (4-H₂, 10 m), 2,20 (6-H, m), 1,62 (9-H₃; d, 5,3), 1,08 (CAfe₃), 0,99 (6-Me; d, 6,9), ¹³C-NMR (CDCI₃) δ 166,7 (1), 146,4 (3), 136,0/134,2/133,8/129,62/129,56/127,5/127,4 (Ph),

132,5 (7), 125,8 (8), 122,6 (2), 76,2 (5), 51,3 (OCH₃), 41,7 (6), 36,8 (4), 27,0 (CMe₃),

19,4 (CMe₃), 18,1 (9), 14,7 (6-Me).

Metil-(5S,6S)-5-terc-butil-dimetil-szilil-oxi-6-metil-7-oxo-hept-2(E)-enoát (F)

328 mg (1 mmol) E metil-észtert és 97 μΙ piridint feloldunk 15 ml CH₂CI₂-ban, és -78 °C hőmérsékleten az oldaton ózont engedünk át, és az ozonolízis lefutását VRK analízissel követjük. Miután a metil-észter elfogyott, kb. 500 mg cinkport és 1 ml jégecetet adagolunk a keverékhez, a hőmérsékletet lassan 25 °C-ra emeljük, majd a keveréket szűrjük, a szűrletet egymást követően telített CuSO₄-oldattal, majd NaHCO₃-oldattal mossuk. Az oldószert elpárologtatjuk, a nyers aldehidet (240 mg, 83%) további tisztítás nélkül alkalmazzuk a következő lépésben.

¹H-NMR (CDCI₃) δ 9,96 (7-H; t, 2,3), 6,96 (3-H; dt, 15,7/7,6), 5,90 (2-H; dd, 15,7/0,7), 4,05 (5-H; m), 3,74 (OMe; s), 2,51 (6-H; m), 2,45 (4-H₂; m), 1,09 (6-Me; d, 6,9), 0,88 (CMe₃ s), 0,04 (SiMe; s), 0,03 (SiMe; s).

Metil-(5S,6R)-5-terc-butil-dimetil-szilil-oxi-6-metil-8-fenil-okta-2E, 7E-dienoát (G) mg (0,08 mmol) F aldehidet feloldunk 1,5 ml

THF-ben -78 °C-on, hozzáadunk 0,8 ml hideg (-78 °C), 268 mg (0,69 mmol, 6,9 ml) THF-ben oldva

HU 225 041 Β1 benzil-trifenil-foszfónium-kloridból és 280 μΙ 2,5 mólos hexános n-butil-lítiumból álló keveréket. 15 perc elteltével a hűtőfürdőt eltávolítjuk, és a keverést további 2 órán át folytatjuk. A keverékhez ezután telített ammónium-klorid-oldatot adunk, és a THF-et elpárologtatjuk. A koncentrátumot hexánnal kétszer extraháljuk, az extraktumokat egyesítjük, sóoldattal mossuk, szárítjuk és betöményítjük. A visszamaradó olajos anyagot, amely az E- és Z-izomerek keveréke, feloldjuk 1,5 ml benzolban, amely 0,02 mól tiofenolt, valamint 1,1’-azobisz(ciklohexán-karbonitrilt) (VAZO, 0,006 mól) tartalmaz, és a keveréket 5 órán át visszafolyatás közben melegítjük. Az anyagot ezután szobahőmérsékletre lehűtjük, hozzáadunk 15 ml hexánt, és a szerves oldatot egymást követően 10%-os nátrium-hidroxiddal, sóoldattal mossuk, majd MgSO₄ felett szárítjuk és betöményítjük. A visszamaradó anyagot szilikagélen kromatografáljuk (2% EtOAc/hexán), így 24 mg (80%) G vegyületet nyerünk.

[a]_D +68,2° (c 1,5, CHCI₃); EIMS m/z 374 (<1%; M⁺),

359 (1; M⁺-CH₃), 317 (10; M⁺-Bu), 275 (10), 243, (73), 143 (20), 115 (10), 97 (64), 89 (31), 73 (100);

HREIMS m/z 374,2232 (C₂₂H₃₄O₃Si, Δ+4,5 mmu),

359,2031 (C₂₁H₃₁O₃Si, Δ+1,1 mmu), 317,1579 (C₁₈H₂₅O₃Si, Δ-0,6 mmu); UV-(MeOH) X_max (ε)

206 (33 500), 252 (20 100) nm; IR v_max 10 2952,

2855, 1725, 1657, 1435; 1257, 1168, 1097, 970,

836, 775 cm, ¹H-NMR δ 7,2-7,4 (Ph-H₅; m), 6,96 (3-H; ddd, 15,6/7,8/7,5), 6,37 (8-H; d, 15,9), 6,16 (7-H; dd, 15,9/8,1), 5,84 (2-H; d, 15,6), 3,75 (5-H; ddd, 10,2/6,0/4,2), 3,72 (OMe; s), 2,44 (6-H; m), 2,36 (4-H₂; m), 1,10 (6-Me; d, 6,9), 0,91 (Si-CMe₃; s), 0,06 (Si-Me; s), 0,05 (SiMe; s); ¹³C-NMR δ

166.8 (1), 146,4 (3), 137,6 (Ph 1’), 131,9 (8), 130,4 (7), 128,5 (Ph 375'), 127,0 (Ph 4’), 126,0 (Ph 276’),

122.9 (2), 75,0 (5), 51,4 (OMe), 42,8 (6), 37,6 (4),

25.9 (Si-CMe₃), 18,1 (Si-CMe₃), 16,2 (6-Me), —4,4 (Si-Me), -4,5 (Si-Me).

Elemanalízis a következő képletű vegyületre:

C₂₂H₃₄O₃Si számított: C, 70,52; H, 9,17, mért: C, 70,72; H, 9,42.

(5S,6R)-5-t-Butil-dimetil-szilil-oxi-6-metil-8-fenil-okta-2E,7E-diénsav (H)

150 mg (0,43 mmol) G észtert feloldunk 7 ml acetonban, és hozzáadunk 5 ml 1 n vizes LiOH-ot. A kapott keveréket 25 °C-on 3 órán át keverjük, majd 20 ml Et₂O-dal hígítjuk, és kb. pH=4 értékig 1 n sósavval megsavanyítjuk. A szerves fázist elválasztjuk, 20-20 ml sóoldattal és vízzel mossuk, magnézium-szulfáton szárítjuk és betöményítjük. A visszamaradó olajos anyagot szilikagélen kromatografáljuk (40% EtOAc/hexán +0,5% AcOH), így nyerjük a tiszta H vegyületet halványsárga mozgékony olaj formájában, mennyisége 145 mg (95%).

[ot]_D +87,0° (c 1,4, CHCI₃); EIMS m/z; 343 (1; M⁺-OH),

303 (5), 275 (9), 257 (4), 229 (62), 213 (16), 171 (22), 143 (37), 131 (16), 115(23), 97(100),91 (44);

HREIMS m/z 343,2107 (C₂₁H₃₁O₂Si, Δ-1,3 mmu),

229,1220 (C₁₅H₁₇O₂, Δ+0,9 mmu); UVX_max (ε) 206 (24 500), 252 (15 600) nm; IR v_max 3300-2800 (br), 2956, 2856, 1697, 1651, 1419, 1256, 1097,

836, 693 cm-¹; ¹H-NMR δ 10,4 (CO₂H; bs,

W_1/2«100), 7,2-7,4 (Ph-H₅; m), 7,09 (3-H; 30 ddd,

15,6/7,6/7,6), 6,39 (8-H; d, 15,9), 6,16 (7-H; dd,

15,9/8,1), 5,85 (2-H; d, 15,6), 3,78 (5-H; ddd,

6,0/6,0/4,2), 2,46 (6-H; m), 2,40 (4-Hz; m), 1,12 (6-Me; d, 6,9), 0,92 (Si-CMe₃; s), 0,07 (SiMe₂; s);

¹³C-NMR δ 171,6 (1), 149,1 (3), 137,5 (Ph 1’),

131,8 (8), 130,5 (7), 128,5 (Ph 375’), 127,1 (Ph 4’),

126.1 (Ph 276’), 122,7 (2), 74,9 (5), 42,9 (6), 37,6 (4), 25,8 (Si-CMe₃), 18,1 (Si-CMe₃), 16,1 (6-Me),

-4,4 (Si-Me), -4,5 (Si-Me).

3-(3-Klór-4-metoxi-fenil)-D-alanín 2,2,2triklór-etil-észtere (I)

160 mg (0,35 mmol) D-klór-tirozin-BOC-származékot feloldunk 3 ml vízmentes trifluor-ecetsavban, hagyjuk szobahőmérsékleten 1 órán át állni, majd a felesleges reagenst csökkentett nyomáson eltávolítjuk, így nyerjük a kívánt / amint trifluor-ecetsavsója formájában, mennyisége 165 mg, 100%.

[<x]_D +1,7° (c 5,2, CHCI₃); IR v_max. 3400-2500 (br),

1760, 1680, 1500, 1200, 1130, 1010, 805,

710 cm-¹; ¹H-NMR δ 8,07 (NH₂; br m, W_1/2«45),

7,27 (5-H; s), 7,12 (9-H; d, 8,1), 6,88 (8-H; d, 8,1),

4,86/4,67 10 (CH₂CCI₃; AB q, -12,0), 4,41 (2-H; bs, W_1/z«20), 3,86 (OMe; s), 3,33 (3-H; dd, -14,4/3,6), 3,22 (3-H’; dd, -14,4/6,6); ¹³C-NMR δ

167,6 (1), 155,0 (7), 130,9 (5), 128,8 (9), 125,4 (4),

123.1 (6), 112,7 (8), 93,4 (CCI₃), 75,3 (CH₂CCI₃),

56.1 (OMe), 54,2 (2), 34,9 (3).

J vegyület mg (0,07 mmol) H vegyületet feloldunk 3 ml vízmentes DMF-ben, és keverés közben argonatmoszférában hozzáadunk egymást követően 32 mg (0,08 mmol) pentafluor-difenil-foszfinátot (FDPP), 35 mg (0,07 mmol) / trifluor-ecetsavsót és 27 mg («36 μΙ, 0,21 mmol, «3 ekvivalens) diizopropil-etil-amint (DIEA), majd a keverést 25 °C-on 1 órán át folytatjuk, majd a keveréket 20 ml Et₂O-dal extraháljuk. Az éteres extraktumot 10 ml 1 n sósavval mossuk, majd 10 ml telített NaHCO₃-oldattal, 20 ml sóoldattal, és 20 ml vízzel mossuk, MgSO₄ felett szárítjuk és betöményítjük. A kapott halványságra olajos anyagot szilikagélen kromatografáljuk (15% EtOAc/hexán), így nyerjük a J vegyületet színtelen olaj formájában (32 mg, 65%).

[a]_D +11,8° (c 1,2, CHCI₃); EIMS m/z; 644/646/648/650 (7/8/Θ/3; M+-BU), 570/572/574 (46/100/21),

536/538 (18/15), 394/396 (61/29), 275 (20),

155/157 (29/9); HREIMS m/z 644,0981 (C₂₉H₃₄CI₄NO₅Si; Δ-2,13 mmu); UVX_max (ε) 204 (54 900), 230 (23 200), 248 (19 200), 284 (3500) hm; IR v_max 3290, 2980, 2850, 1760, 1680, 1640, 1505, 1380, 1270, 1169, 990, 720 cm-¹; ¹H-NMR A egység δ 7,2-7,4 (Ph-H₅; m), 6,87 (3-H; ddd, 15,0/7,8/1,5), 6,37 (8-H; d, 16,2), 6,18 (7-H; dd, 16,2/8,1), 5,82 (2-H; d, 15,0), 3,75 (5-H; ddd, 9,9/6,0/4,8), 2,46 (6-H; m), 2,36 (4-H₂; m), 1,11 (6-Me; d, 6,9), 30 0,91 (Si-CMe₃; s), 0,07 (SiMe; s), 0,06 (SiMe; s); B egység b 7,19 (5-H; d, 2,1),

HU 225 041 Β1

7,04 (9-H; dd, 8,4/2,1), 6,85 (8-H; d, 8,4), 5,85 (NH; d, 7,8), 5,08 (2-H; ddd, 7,8/6,0/5,7), 4,81/4,14 (CH₂CCI₃; AB q, -11,7), 3,87 (OMe; s), 3,22 (3-H; dd, -14,1/5,7), 3,12 (3-H’; dd, -14,1/6,0), ¹³C-NMR A egység δ 165,1 (1), 143,0 (3), 137,6 (9), 132,0 (8), 130,4 (7), 128,5 (11/13), 127,0 (12), 126,0 (10/14), 124,7 (2), 75,0 (5), 42,6 (6), 37,6 (4),

25,9 (Si-CMe₃), 18,1 (Si-CMe₃), 16,5 (6-Me), -4,3 (Si-Me), -4,6 (Si-Me); B egység δ 170,1 (1), 154,3 (7), 131,1 (5), 128,5(4/9), 122,6 (6), 112,2 (8), 94,2 (CCI₃), 74,8 (CH₂CCI₃), 56,1 (OMe), 53,0 (2), 36,5 (3).

(1 ’R, 5S, 6R)-N-[ 1 ’-(Karbo-2’’,2”,2”-triklór-etoxi)2’-(3-klór-4-metoxi-fenil)-etil]-5-t-butil-dimetilszilil-oxi-6-metil-8-fenil-okta-2E, 7E-dién-amid (K) mg (0,07 mmol) J vegyületet feloldunk 4 ml

MeCN-ben, hozzáadunk 400 μΙ 50%-os vizes HF-oldatot, és a keveréket 1 órán át 25 °C-on keverjük. Ezután az anyagot 30 ml Et₂O-dal extraháljuk, majd az éteres extraktumot 30 ml telített NaHCO₃-oldattal, sóoldattal, majd vízzel mossuk, MgSO₄ felett szárítjuk, betöményítjük, így nyerjük a K alkoholt színtelen hab formájában (40 mg, 95% kihozatal).

[a]_D -6,1° (c 1,3, CHCI₃); EIMS m/z (rel. intenzitás)

587/589/591/593 (M⁺, <1%), 552/554/556 (1/2/0,5),

456/458/460/462 (1/2/1/0,2), 342/344/346 (7/8/4),

212/214 (15/5), 195/197 (6/2), 155/157 (99/34), 131 (100), 91 (77); HREIMS m/z 587,0721 15 (C₂₇H₂₉ ³⁵CI₄NO₅, Δ+7,9 mmu); UVX_max 204 (56 500), 230 (22 100), 248 (18 100), 284 (3600) nm; IR v_max 3400, 3300, 2980, 1780, 1680, 1640, 1505, 1270, 1180, 1090, 1000, 770 cm-¹, ¹H-NMR A egység δ 7,2-7,4 (Ph-H₅; m), 6,92 (3-H; ddd, 15,3/7,8/7,5), 6,46 (8-H; d, 15,9), 6,14 (7-H; dd, 15,9/8,4), 5,90 (2-H; d, 15,3), 3,65 (5-H; ddd 7,8/5,6/4,0), 2,39 (6-H/4-Hz; bm), 1,78 (OH; bs, W_1/2«40 Hz), 1,14 (6-Me; d, 6,9); B egység δ 7,18 (5-H; d, 1,8), 7,03 (9-H; dd, 8,4/1,8), 6,84 (8-H; d,

8,4), 5,97 (NH; d, 7,8), 5,06 (2-H; ddd, 7,8/6,0/5,7), 4,79/4,72 (CH₂CCI₃; AB q, -12,0), 3,86 (OMe; s),

3,20 (3-H; dd, 14,1/5,7), 3,10 (3-H’; dd, -14,1/6,0), ¹³C-NMR A egység δ 165,3 (1), 142,6 (3), 137,0 (9), 131,7 (8), 131,0 (7), 128,5 (11/13), 127,3 (12),

126,1 (10/14), 125,0 (2), 73,8 (5), 43,2 (6), 37,2 (4),

16,8 (6-Me); B egység δ 170,2 (1), 154,2 (7), 131,0 (5), 128,4 (9), 128,3 (4), 25 122,5 (6), 112,2 (8),

94,2 (CCI₃), 74,7 (CH₂CCI₃), 56,1 (OMe), 53,0 (2),

36,5 (3).

3-(terc-Butoxi-karbonil)-amino-2,2-dimetil-propánsav (M) g (29 mmol) 3-amino-2,2-dimetil-propán-1-olt (L) feloldunk 51 ml 10%-os trietil-amin/MeOH oldatban, hozzáadunk 6,7 g (31 mmol) di(terc-butil)-dikarbonátot, és a kapott keveréket 25 °C-on 1 órán át keverjük. Az oldószert ezután elpárologtatjuk, a maradékot 30 ml CH₂CI₂-ban oldjuk, a kapott oldatot kétszer 1 mól KHSO₄-oldattal (pH=2) és egyszer telített NaCI-oldattal mossuk, MgSO₄ felett szárítjuk, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, így 5,8 g (93%) 3-(terc-butoxi-karbonil)-amino-2,2-dimetil-propán-1-olt nyerünk fehér, szilárd anyag formájában, amelyet közvetlenül alkalmazunk további tisztítás nélkül a következő lépésnél (>95%-os tisztaság NMR-analízissel), olvadáspont: 70,5-71,5 °C.

IR v_max 3350, 1685, 1456 cm-¹, ¹H-NMR δ 4,87 (NH; brsj 3,72 (OH; br s) 3,19 (1-H2; d, 5,1), 2,95 (3-H2; d, 6,0), 1,44 (CMe3; s), 0,85 (2-Me2; s) ¹³C-NMR (CDCI3) δ 157,6 (BOC CO), 79,7 (CM3₃), 68,1 (1),

47,1 (3), 36,7 (2), 28,3 (CMe₃), 22,4 (2-Me₂).

5.3 g (25, 9 mmol) 3-(terc-butoxi-karbonil)-amino2,2-dimetil-propán-1-ol-alkoholt és 16,6 g (77,7 mmol) nátrium-perjodátot feloldunk 52 ml szén-tetrakloridban, 52 ml acetonitrilben és 78 ml vízben, hozzáadunk 122 mg ruténium-triklorid-hidrátot, és a kapott keveréket 25 °C-on 1 órán át keverjük. A keveréket ezután celiten szűrjük, és hozzáadunk 50 ml telített kálium-karbonát-oldatot. A vizes réteget elválasztjuk, 20 ml éterrel mossuk, sósavval pH=2 értékig megsavanyítjuk 0 °C-on és CH₂CI₂-nal extraháljuk (3*30 ml). Az extraktumokat egyesítjük, telített NaCI-oldattal mossuk és MgSO₄ felett szárítjuk. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a visszamaradó anyagot flash fordított fázisú kromatográfiával tisztítjuk (C18 szilikagél, ODS 120Á, 50-90% MeOH), majd kikristályosítjuk, így 3,7 g (66%) M vegyületet nyerünk fehér, szilárd anyag formájában, olvadáspont: 106-108 °C.

EIMS m/z (rel. intenzitás) 211 (0,1), 161 (11), 98 (25), 88 (71), 57 (100); HREIMS m/z 217,1292 (C₁₀H₁₉NO₄ Δ+2,2 mmu); IR v_max 3450, 2500, 1110, 1694, 1510 citt¹; ¹H-NMR a fő konformerre δ 5,03 (NH; br s), 3,26 (3 H₂; m), 1,45 (CMe₃; s),

1,24 (2-Me₂; s); ¹³C-NMR (CDCI₃) δ 183,2 (1),

156.3 (BOC CO), 79,6 (CMe₃), 49,5/47,9 (2/3), 28,4 (CMe₃), 22,9 (2-Me₂). AlliT(2S)-2-hidroxi-4-metil-pentanoát (N)

2,66 g (20 mmol) L-leucinsavat és 1,74 g (20 mmol) nátrium-hidrogén-karbonátot feloldunk 30 ml vízben 0 °C-on, hozzáadunk 30 ml CH₂CI₂-ban oldott 6,44 g (20 mmol) tetrabutil-ammónium-kloridot és 1,74 ml (20 mmol) allil-bromidot. A kapott keveréket erőteljesen keverjük 24 órán át, majd a CH₂CI₂-t elpárologtatjuk, hozzáadunk kb. 50 ml vizet, és a vizes fázist négyszer Et₂O-dal extraháljuk. Az éteres oldatot vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, majd betöményítjük. A visszamaradó anyagot rövid Si-oszlopon átengedjük, így

3,21 g N allil-észtert nyerünk, kihozatal 93%, színtelen olaj formájában.

[a]_D -8,4° (c 1,1, CHCI₃); IR v_max 3464, 2957, 1132,

1203, 1140, 1087 cm-¹; ¹H-NMR δ 5,92 (allil 2-H; m), 5,34 (allil 3-H₂; dd, 17,4/1,1), 5,28 (allil 3-H₂; dd, 10,5/1,1), 4,67 (allil 1-H₂; d, 5,7), 4,23 (2-H; br s), 2,64 (OH; br s), 1,89 (4-H; m), 1,57 (3-H₂; m), 0,96 (5-H₃; d, 6,5), 0,95 (4-Me; d, 6,7); ¹³C-NMR δ

175.3 (1), 131,4 (allil C-2), 118,6 (3), 68,9 (2), 65,7 (allil C-1), 43,2 (3), 24,1 (4), 23,0 (5), 21,3 (4-Me).

Allil-(2S)-2-[3’(terc-butoxi-karbonil)-amino-2’,2’-dimetil-propanoil-oxi]-4-metil-pentanoát (O)

0,8 g (3,7 mmol) M vegyületet, 0,76 g (4,4 mmol) N vegyületet és 92 mg DMAP-t feloldunk 10 ml vízmentes CH₂CI₂-ban 0 °C-on, és hozzáadunk 0,84 g

HU 225 041 Β1 (4,1 mmol) DCC-t CH₂CI₂-ban oldva. A kapott keveréket 25 °C-on 3 órán át keverjük, majd szűrjük, a szűrletet telített vizes nátrium-hidrogén-karbonáttal mossuk, Na₂SO₄ felett szárítjuk és vákuumban betöményítjük. A visszamaradó anyagot flashkromatográfiával tisztítjuk (szilikagél, 5% EtOAc/hexán), így 1 g (92%) tiszta O vegyületet nyerünk színtelen olaj formájában. R_f0,68 (17:83 EtOAc/hexán.

[a]_D -29, 4° (c 18,1, CHCI₃); EIMS m/z (rel. intenzitás)

371 (2, M⁺), 242 (13), 184 (12), 126 (20), 84 (100);

HREIMS m/z 371,2317 (C₁₉H₃₃NO₆ Δ-0,9 mmu);

IR (tiszta) v_max 3385, 2963, 1731, 1720,

1513 cm-¹; ¹H-NMR (300 MHz, CDCI₃) C egység δ

5,39 (NH; rejtett br s), 3,33 (3-H; dd, -13,5/7,4),

3,27 (3-H’; dd, -13,5/5,9), 2,78 (2-H, m), 1,44 (CMe₃; s), 1,23 (2-Me; s), 1,22 (2-Me; s); D egység δ 5,91 (allil 2-H; ddt, 16,6/10,3/6,0 Hz), 5,34 (allil 3-Hz; bd, 16,6), 5,27 (allil 3-H_E; bd, 10,3), 5,08 (2-H; dd, 9,6/3,6), 4,65 (allil 1-Hz; m), 1,6-1,9 (3-HZ/4-H; m), 0,94 (5-H₃; d, 6,3), 0,94 (4-Me; d,

7,3), ¹³C-NMR C egység δ 176,5 (1), 156,3 (BOC CO), 79,0 (CMe₃), 48,6 (3), 44,0 (2), 28,4 (CMe₃), 22,2/23,0 (2-Me₂); D egység δ 170,6 (1), 131,4 (allil C-2), 119,1 (allil C-3), 70,9 (2), 66,0 (allil C-1),

39.5 (3), 24,8 (4), 23,0 (5), 21,5 (4-Me).

(2S)-2-[3’(terc-Butoxi-karbonil)-amino-2’,2’-dimetil-propanoil-oxi]-4-metil-pentánsav (P)

180 mg (0,49 mmol) O-t és 60 mg (0,05 mmol) tetrakisz(trifenil-foszfin)-palládiumot tartalmazó vízmentes THF-oldathoz (10 ml) argonatmoszférában lassan hozzáadunk 40 μΙ (5,4 mmol) vízmentes morfolint 10 perc alatt. Az anyagot ezután 50 percig keverjük, majd hozzáadunk 40 ml vizet, és az oldatot 40 ml 1 n sósavval mossuk, majd kétszer 30-30 ml telített nátrium-hidrogén-karbonáttal extraháljuk. A vizes extraktumot 0,5 n sósavval megsavanyítjuk és 40 ml éterrel extraháljuk. Az éteres extraktumot kétszer 30-30 ml vízzel mossuk, MgSO₄ felett szárítjuk és vákuumban betöményítjük, így nyerjük a P vegyületet színtelen mozgékony olaj formájában, mennyisége 152 mg (95%).

[a]_D -22,2° (c 2,2, CHCI₃); EIMS m/z (rel. intenzitás)

331 (1, M⁺), 275 (1), 258 (4), 231 (9), 202 (36), 174 (13), 144 (31), 126 (16), 114 (14), 98 (54), 88 (50), (100); HREIMS m/z 331,2004 (C₁₆H₂₉NO₆,

Δ-1,0 mmu), ¹H-NMR (CDCI₃) C egység δ 5,41 (NH; dd, 5,7/5,4), 3,30 (3-Hz; m), 2,68 (2-H; m),

1,43 (CMe₃; brs), 1,22 (2-Me; s), 1,21 (2-Me; s); D egység δ 6,47 (1-OH; br s, W_1/2k35), 5,09 (2-H; dd, 9,3/2,7), 1,7-1,9 (3-H₂/4-H; m), 0,97 (5-H₃; d, 6,0), 0,94 (4-Me; d, 6,0), ¹³C-NMR (CDCI₃) C egység δ 176,5 (1), 156,5 (BOC CO), 79,3 (CMe₃),

48.6 (3), 44,0 (2), 28,3 5 (CMe₃), 23,0 (2-Me), 22,2 (2-Me); D egység δ 175,4 (1), 70,6 (2), 39,5 (3),

24,8 (4), 23,0 (5), 21,4 (4-Me).

Q vegyület mg (0,14 mmol) K alkoholt, 68 mg (0,21 mmol) P vegyületet és 4 mg DMAP-t feloldunk 4 ml vízmentes CH₂CI₂-ban, 0 °C-on argonatmoszférában keverjük, és hozzáadunk 44 mg (0,21 mmol) DCC-t 1 ml vízmentes

CH₂CI₂-ban oldva. A kapott keveréket 0 °C-on 30 percig keverjük, ez alatt az idő alatt fehér csapadék képződik, majd az anyagot hagyjuk szobahőmérsékletre felmelegedni, és további 4 órán át keverjük. A csapadékot szűrjük, a szűrletet 40 ml Et₂O-dal hígítjuk, és egymást követően híg sósavval (1 mól, 40 ml), telített NaHCO₃-oldattal (40 ml) és sóoldattal (40 ml) mossuk. Az éteres réteget MgSO₄ felett szárítjuk, vákuumban betöményítjük, és a kapott viaszos szilárd anyagot kromatografáljuk (szilikagél, EtOAc/hexán=1/3). így nyerjük a Q vegyületet színtelen viszkózus olaj formájában (103 mg, 84%).

[a]_D -3,1° (c 2,9, CHCI₃); EIMS m/z 800/802/804/806 (<1, M⁺-C₅H₈O₂), 415/417/419/421 (5/3/3/2),

342/344/346 (7/9/4), 286/288/290 (2/6/2), 207 (34),

178 (22), 155/157 (66/24), 131 (36), 91 (70), 70 (100); HREIMS m/z 800,2179 (C₃₈H₄₈N₂O₈ ³⁵CI₄

Δ-1,4 mmu); UV-(MeOH) /,_max (ε) 204 (51 200), 230 (18 500), 248 (17 200), 282 (2200) nm; IR (NaCI) v_max 3376, 2965, 1755, 1728, 1712, 1678, 1504, 1258, 1150, 1067, 732 cm-¹, ¹H-NMR (CDCI₃) δ A egység: 7,28-7,33 (10-H/14-H/11-H/13-H; m),

7,22 (12-H; m), 6,78 (3-H; ddd, 15,8/6,4/6,3), 6,40 (8-H; d, 15,8), 6,01 (7-H; dd, 15,8/8,7), 5,88 (2-H; d, 15,8), 5,06 (5-H; bm, W_1/2«20 Hz), 2,62 (6-H; m), 2,53 (4—H₂; bm, W_1/2«15 Hz), 1,12 (6-CH₃; d, 25 6,8); B egység 7,18 (5-H; d, 2,0), 7,05 (9-H; dd, 8,5/2,0), 6,83 (8-H; d, 8,5), 6,49 (NH; d, 7,9), 5,06 (2-H; bm, W_1/2«20 Hz), 4,79/4,70 (CH₂CCI₃; AB q, -11,7), 3,85 (OCH₃; s), 3,20 (3-H_b; dd, -14,1/5,8), 3,01 (3-H_b dd, -14,1/6,7); C egység 5,38 (NH; bt,

6,5), 3,27 (3-H; d, 6,5), 1,20 (2-CH₃; s), 1,15 (2-CH₃’; s); D egység 4,92 (2-H; dd, 10,0/3,8), 1,72 (4-H; bm, W_1/2«20 Hz), 1,67 (3-H_b; ddd, -14,1/10,0/5,0/), 1,56 (3-H_a ddd, 14,1/9,1/3,8), 1,43 (CO=CMe₃ s), 0,86 (4-CH₃ d, 6,4), 0,82 (5-H₃ d,

6,4), ¹³C-NMR (CDCI₃) δ A egység 165,4 (1), 139,3 (3), 136,9 (9), 131,7 (8), 130,1 (7), 128,6 (11/13),

127,5 (12), 126,2 (10/14), 125,4 (2), 76,5 (5), 41,1 (6) , 33,4 (4), 16,7 (6-Me); B egység 170,0 (1), 154,1 (7) , 131,2 (5), 128,8 (4), 128,5 (9), 122,3 (6), 112,1 (8) , 94,3 (CH₂CCI₃), 74,6 (CH₂CCI₃), 56,1 (7-OMe),

53,2 (2), 36,6 (3); C egység 176,9 (1), 156,4 (CO₂CMe₃), 79,1 (CO₂CMe₃), 48,7 (3), 44,0 (2),

22,8 (2-Me), 22,3 (2-Me'); D egység 170,7 (1), 71,4 (2), 39,5 (3), 28,4 (CO₂CMe₃), 24,8 (4), 23,0 (4-Me), 21,4 (5).

R aminosav

100 mg (0,11 mmol) Q aminosavhoz 400 mg aktivált Zn-port és 4 ml AcOH-ot adagolunk. A heterogén keveréket ultrahanggal 45 percen át kezeljük, majd további 90 percen át szobahőmérsékleten keverjük, majd celitágyra öntjük. A szerves anyagot a celitről CH₂CI₂-nal lemossuk, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, így nyerjük a karbonsavat színtelen amorf, szilárd anyag formájában.

Tisztítás nélkül a kapott nyerssavat 5 ml trifluorecetsavban oldjuk, és szobahőmérsékleten 1 órán át állni hagyjuk. Ezután a TFA-felesleget vákuumban eltávolítjuk, a visszamaradó amorf szilárd anyagot kroma37

HU 225 041 Β1 tografáljuk (Sep-Pak™, szilikagél, először CH₂CI₂, majd 10% MeOH/CH₂CI₂), így nyerjük a kívánt vegyület trifluor-ecetsav-ammóniumsóját. A vizes oldat ismételt liofilizálása után kapjuk a szabad R aminosavat színtelen amorf, szilárd anyag formájában (68 mg, 91% a két lépésből).

IR (NaCI) v_max 3300, 3200, 2965, 1693, 1606, 1504,

1441, 1259,' 1201, 1146, 1066, 727 cm¹, ¹H-NMR (CD₃OD) δ A egység: 7,33 (10-H/14-H; d, 7,4),

7,28 (11-H/13-H; t, 1,4), 7,18-7,23 (12-H; m),

6,69 (3-H; ddd, 15,6/7,7/7,0), 6,43 (8-H; d, 15,8),

6,04 (7-H; dd, 15,8/8,9), 6,00 (2-H; d, 15,6), 5,01 (5-H; ddd, 9,1/6,9/3,1), 2,64 (4-H_b; bm,

W_1/2«30 Hz), 2,60 (6-H; bm, W_1/2«20 Hz), 2,49 (4-H_a ddd, 15,8/9,1/7,7), 1,13 (6-Me; d, 6,7); B egység 7,18-7,23 (5-H; m), 7,11 (9-H; dd, 8,3/1,6), 6,92 (8-H; d, 8,3), 4,59 (2-H; bm, W_1/2«20 Hz), 3,81 (OCH₃; s), 3,14 (3-H_b; dd, -13,7/4,3), 2,96 (3-H₂ m, W_1/2«20 Hz); C egység 2,96 (3-H₂; bm, W_1/2~20 Hz), 1,31 (2-CH₃; s), 1,25 (2-CH₃’; s); D egység 4,90 (2-H; dd, 9,6/4,0), 1,66 (4-H; bm, W_1/2«=25 Hz), 1,59 (3-H_b; ddd, -14,4/9,6/4,8), 1,53 (3-H” ddd, 14,4/9,1/4,0), 0,81 (4-Me; d, 6,5), 0,74 (5-H₃; d, 6,5), ¹³C-NMR (CD₃OD) δ A egység 167,1 (1), 140,7(3), 138,4 (9), 133,0 (8), 131,7 (7), 129,6 (11/13), 128,5 (12),

127,3 (10/14), 127,1 (2), 78,4 (5), 43,1 (6), 35,7 (4),

17,4 (6-Me); B egység 179,8 (1), 155,2 (7), 30 132,3 (4), 132,1 (5), 130,1 (9), 123,0 (6), 113,4 (8), 56,6 (7-OMe), 56,6 (2), 37,8 (3), C egység

176,8 (1), 48,2 (3), 42,2 (2), 23,3 (2-Me), 23,3 (2-Me’); D egység 172,0 (1), 73,4 (2), 40,7 (3), 26,0 (4), 23,1 (4-Me), 21,8(5).

K51 vegyület mg (0,11 mmol) T aminosavat feloldunk 20 ml vízmentes DMF-ben, és szobahőmérsékleten argonatmoszférában hozzáadunk 44 mg (60 μΙ, 0,34 mmol, »3 ekvivalens) diizopropil-etil-amint (DIEA), majd 55 mg (0,14 mmol, «1,3 ekvivalens) pentafluor-difenil-foszfinátot (FDPP) 2 ml DMF-ben. A kapott keveréket 12 órán át keverjük, majd hozzáadunk 40 ml Et₂O-ot, és az éteres réteget egymást követően 40 ml 1 mólos sósavval, 40 ml sóoldattal és 40 ml H₂O-dal mossuk, majd MgSO₄ felett szárítjuk és csökkentett nyomáson betöményítjük. A visszamaradó viaszos, szilárd anyagot fordított fázisú kromatográfiával tisztítjuk (ODS, 10 μ, 30% H₂O/MeCN, 3 ml/perc), így nyerjük a K51 vegyületet színtelen, amorf, szilárd anyag formájában (45 mg, 61%).

[a]_D +26,4° (c 0,25, CHCI₃); EIMS m/z 652/654 (M⁺,

3/1), 632/634 (3/2), 426/428 (51/15), 227 (64),

195/197 (64/22), 155/157 (71/15), 131 (59), 91 (100); HREIMS m/z 652,2936 (C₃₆H₄₅N₂O₇ ³⁵CI,

Δ-2,1 mmu); UV-(MeOH) X_max (ε) 204 (52 000),

228 (20 400), 250 (13 400), 284 (2800) nm; IR (NaCI) v_max 3376, 3270, 2960, 1747, 1721, 1659,

1536, 1514, 1259, 1150, 1066, 1013, 980,

694 cm-¹, ¹H-NMR (CDCI₃) δ A egység 7,32 (10-H/14-H; dd, 8,0/1,5), 7,29 (11-H/13-H; t, 8,0),

7,24 (12-H; bm, W_1/2«15 Hz), 6,77 (3-H; ddd,

15,2/10,8/4,3), 6,40 (8-H; d, 15,8), 6,01 (7-H; dd, 15,8/8,8), 5,76 (2-H; dd, 15,2/1,1), 5,04 (5-H; ddd, 11,1/6,4/1,9), 2,54 (4-H_b/6-H; bm, W_1/2«15 Hz), 2,37 (4-H_a ddd, -14,3/11,1/10,8), 1,13 (6-Me; d,

6,8); B egység 7,20 (5-H; d, 2,0), 7,05 (9-H; dd, 8,4/2,0), 6,84 (8-H; d, 8,4), 5,61 (NH; d, 7,8), 4,74 (2-H; ddd, 20 7,8/7,6/5,4), 3,87 (OMe; s), 3,11 (3—H_b; dd, -14,2/5,4), 3,06 (3-H_a dd, -14,2/7,6); C egység 7,24 (NH; bm, W_1/2«15 Hz), 3,40 (3-H_b; dd, -13,5/8,5), 3,12 (3-H_a dd, -13,5/3,6), 1,22 (2-Me; s), 1,15 (2-Me¹, s); D egység 4,85 (2-H; dd, 10,2/3,6), 1,66 (3-H_b; ddd, 14,0/10,2/4,6), 1,61 (4-H; bm W_1/2«20,0 Hz), 1,33 (3-H_a ddd, -14,0/9,0/3,6), 0,74 (4-Me; d, 6,6), 0,72 (5-H₃; d,

6,6), ¹³C-NMR (CDCI₃) δ A egység 165,1 (1),

142,2 (3), 136,7 25 (9), 131,7 (8), 130,1 (7), 128,6 (11/13), 127,5 (12), 126,1 (10/14), 124,6 (2), 77,0 (5) , 42,2 (6), 36,5 (4), 17,3 (6-Me); B egység 170,3 (1), 154,1 (7), 130,9 (5), 129,5 (4), 128,3 (9), 122,5 (6) , 112,3 (8), 56,1 (7-OMe), 54,2 (2), 35,3 (3); C egység 178,0 (1), 46,5 (3), 42,7 (2), 22,8 (2-Me),

22,6 (2-Me’); D egység 170,6 (1), 71,5 (2), 39,5 (3), 24,5(4), 22,7 (4-Me), 21,2 (5).

9. példa

K52 és K53 vegyületek előállítása mg (0,12 mmol) K51 vegyületet feloldunk 7,5 ml vízmentes diklór-metánban, és 0 °C-on keverés közben argonatmoszférában hozzáadunk 1 ml diklór-metánban oldott m-klór-perbenzoesavat (mCPBA, 50 mg, 0,23 mmol «2 ekvivalens 80% aktív oxigénre számolva), majd 30 perc után a keveréket hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni, és további 12 órán át keverjük. Az oldószert ezután csökkentett nyomáson elpárologtatjuk, így nyerjük 1,8:1 arányban a K52 és K53 vegyületeket (NMR-analízis alapján) amorf, szilárd anyag formájában. A regioizomer epoxidok keverékét minimális mennyiségű acetonitrilben feloldjuk, és fordított fázisú kromatográfiával (YMC-ODS, 10 μ, 250 mm*22,5 mm, 30% H₂O/MeCN, 6 ml/perc) elválasztjuk, így 37 mg (48%) K52 vegyületet és 19 mg (25%) K53 vegyületet nyerünk.

A K52 vegyület spektroszkópiai adatai [<x]_D +19,9° (c 0,5, CHCI₃); EIMS m/z 668/670 (4/2,

M⁺), 445 (35), 244 (12), 227 (22), 195/197 (66/27), 184 (45), 155/157 (38/10), 91 (100); HREIMS m/z 668,2873 (C36H45N2O8³⁵CI, Δ-0,9 mmu), 445,2497 (C25H₃₅NO₆, Δ-3,3 mmu); UV-(MeOH) Z_max (ε) 204 (35 100), 218 (20 900) nm; IR (NaCI) v_max3415, 3270, 2960, 1748, 1721, 1650, 1536, 1504,' 1260, 1192, 1150, 1066, 1013, 800, 698 cm-¹, ¹H-NMR (CDCI₃) δ A egység 7,33-7,38 (11-H/12-H/13-H; bm, W_1/2«25 Hz), 1,24 (10-H/14-H; m, W_1/2«15 Hz), 6,76 (3-H; ddd, 15,1/10,8/4,3), 5,71 (2-H; dd, 15,1/1,7), 5,20 (5-H; ddd, 11,0/5,0/1,8), 20 3,68 (8-H; d, 1,9), 2,92 (7-H; dd, 7,5/1,9), 2,57 (4-H_b; ddd, -14,6/1,8/1,7), 2,45 (4-H_a ddd, -14,6/11,0/10,8), 1,78 (6-H; bm, W_1/2«15 Hz), 1,14 (6-Me; d, 6,9); B egység 7,18 (5-H; d, 2,2), 7,04 (9-H; dd, 8,4/2,2), 6,83 (8-H; d,

HU 225 041 Β1

8,4), 5,56 (NH; d, 7,9), 4,73 (2-H; ddd, 7,9/7,4/5,3),

3,81 (OMe; s), 3,09 (3-H_b; dd, -14,6/5,3), 3,05 (3-H_a dd, -14,6/7,4); C egység 7,20 (NH; dd,

8,6/3,2), 3,41 (3-H_b; dd, -13,4/8,6), 3,10 (3-H_a dd,

-13,4/3,2), 25 1,22 (2-Me; s); 1,15 (2-Me’; s); D egység 4,82 (2-H; dd, 10,2/3,5), 1,73 (3-H_b; bm, W_1/2~20 Hz), 1,66 (4-H; bm, W_1/2«20 Hz), 1,31 (3-H_a ddd, -13,8/9,1/3,5), 0,84 (4-Me; d, 6,6), 0,82 (5-H₃; d, 6,6); ^{10 * * 13}C-NMR (CDCI₃) δ A egység 164,9 (1), 141,8 (3), 136,7 (9), 128,7 (11/13), 128,3 (12),

125.6 (10/14), 124,7 (2), 75,9 (5), 63,0 (7), 59,0 (8),

40.7 (6), 36,9 (4), 13,5 (6-Me), B egység 170,3 (1),

154.1 (7), 130,9 (5), 129,5 (4), 128,5 30 (9), 122,6 (6), 112,4 (8), 56,1 (7-OMe), 54,3 (2), 35,3 (3), C egység 178,0 (1), 46,5 (3), 42,8 (2), 22,8 (2-Me),

22.8 (2-Me’), D egység 170,5 (1), 71,2 (2), 39,3 (3),

24.6 (4), 22,7 (4-Me), 21,2(5).

A K53 vegyület spektroszkópiai adatai [a]_D +20,8° (c 1,7, CHCI₃); EIMS m/z 668/670 (5/4,

M⁺), 445 (32), 244 (15), 227 (24), 195/197 (64/21),

184 (60), 155/157 (33/9), 91 (100); HREIMS m/z

668,2853 (C₃₆H₄₅N₂O₈ ³⁵CI, Δ1.1 mmu);

UV-(MeOH) X_max (ε) 204 (38 700), 218 (22 900) nm; IR (NaCI) v_max 3415, 3280, 2917, 2849, 1748, 1722, 1660, 1504, 1465, 1260, 1190, 1150, 1066, 755 cm-¹, ¹H-NMR (CDCI₃) δ A egység 7,29-7,36 (11-H/12-H/13-H, bm, W 1/2«20 Hz), 7,23 (10-H/14-H; dd, 8,3/1,7), 6,77 (3-H; ddd, 15,1/10,9/4,3), 5,81 (2-H; dd, 15,1/1,3), 5,17 (5-H; ddd, 11,2/4,9/1,8), 3,58 (8-H; d, 1,7), 2,90 (7-H; dd, 7,8/1,7), 2,67 (4-H_b; ddd, 14,7/11,2/10,9), 2,56 (4-H₂ dddd, 14,7/4,3/1,8/1,3), 1,67-1,78 (6-H; 10 bm, W_1/2«45), 1,03 (6-CH₃; d, 7,1); B egység

7,21 (5-H; d, 2,1), 7,07 (9-H; dd, 8,5/2,1), 6,84 (8-H; d, 8,4), 5,90 (2-NH; d, 7,9), 4,75 (2-H; ddd, 7,9/7,9/4,9), 3,85 (7-OCH₃; s), 3,14 (3-H_b; dd, 14,5/4,9), 3,03 (3-H₂ dd, 14,5/7,9); C egység 7,29-7,36 (3-NH; bm, W_1/2«25), 3,43 (3-H_b; dd, 13,7/8,8), 3,10 (3-H₂ dd, 13,7/3,4), 1,23 (2-CH₃; s), 1,17 (2-CH₃’; s); D egység 4,92 (2-H; dd, 10,3/3,2), 1,67-1,78 (3-H_b/4-H; bm, W_1/2»45), 1,48 (3-H₂ ddd, 13,9/8,8/3,2), 0,89 (4-CH₃; d, 6,6), 0,86 (5—H₃; d, 6,6), ¹³C-NMR (CDCI₃) δ A egység

165.1 (1), 142,0 (3), 137,0 (9), 128,5 (11/13), 128,5 (12), 125,3 (10/14), 124,6 (2), 76,7 (5), 63,2 (7),

56.2 (8), 40,8 (6), 36,7 (4), 13,4 (6-Me); B egység

170.4 (1), 154,0 (7), 130,8 (5), 129,7 (4), 128,2 (9),

122.5 (6), 112,3 (8), 56,1 (7-OMe), 54,4 (2), 35,3 (3); C egység 177,9 (1), 46,4 (3), 42,7 (2), 23,0 (2-Me), 22,7 (2-Me’); D egység 170,5 (1), 71,3 (2),

39.2 (3), 24,7 (4), 22,8 (4-Me), 21,3 (5).

10. példa

K55 vegyület előállítása mg (0,09 mmol) K52 vegyületet feloldunk 0,6 ml 2:1 arányú 1,2-dimetoxi-etán/víz elegyben, és hozzáadunk 2 μΙ 12 n sósavat. Az oldatot szobahőmérsékleten 20 órán át keverjük, majd kálium-karbonáttal semlegesítjük, 5 μ-os szűrőn átszűrjük, majd betöményítjük. Az acetonitrilben oldható anyagot fordított fázisú

HPLC-vel tisztítjuk (C18, 250*10 mm-es oszlop, 4/1=MeOH/H₂O), így 3 mg (48%) K55 vegyületet nyerünk.

[a]_D +42,5° (c 1,1, CHCI₃); EIMS m/z 704/706/708 (M⁺<1), 668/670 (1,5/0,5, M⁺-HCI), 445 (6), 226 (8), 195/197 (16/5), 184 (10), 155/157 (33/11), 135 (100), 91 (99), 77 (30); HREIMS m/z 668,2873 (M⁺-HCI, C36H45N2O8³⁵CI, Δ-0,8 mmu); UV-(MeOH) Xmax (ε) 204 (48 400), 218 (29 200), 284 (1600) nm; IR (NaCI) v_max. 3410, 3286, 2959, 1748, 1723, 1666, 1538, 1504, 1455, 1257, 1178, 1066, 753 cm-¹, ¹H-NMR (CDCI₃) δ A egység 7,35-7,42 (10-H/11—H/12—H/13—H/14—H; m), 6,78 (3-H; ddd, 15,1/10,6/4,5), 5,78 (2-H; dd, 15,1/1,7), 5,16 (5-H; ddd, 11,1/8,3/2,1), 4,65 (8-H; d, 9,7), 4,01 (7-H; bd, 9,7), 2,69 (4-H_b; dddd, -14,5/4,5/2,1/1,7), 2,50 (6-H; bm, W_1/2«15), 2,38 (4-H₂ ddd,

-14,5/11,1/10,6), 1,53 (7-OH, s), 1,04 (6-Me, d,

7,1); B egység 7,21 (5-H; d, 2,2), 7,07 (9-H; dd, 8,5/2,2), 6,85 (8-H; d, 8,5), 5,57 (2-NH; d, 7,8),

4,74 (2-H; ddd, 7,8/7,6/5,2), 3,88 (7-OCH₃; s), 3,13 (3—H_b; dd, 14,5/5,2), 3,05 (3-H₂ dd, 14,5/7,6); C egység 7,21 (3-NH; m), 3,38 (3-H_b; dd, 13,5/8,3), 3,17 (3-H_a dd, 13,5/4,1), 1,23 (2-CH₃; s), 1,17 (2-CH₃; s), D egység 4,93 (2-H; dd, 10,1/3,5), 1,78 (3-H_b; ddd, 13,5/10,1/5,0), 1,72 (4-H; bm, W 1/2-20), 1,43 (3-H_a ddd,

13,5/8,8/3,5), 0,92 10 (4-CH₃; d, 6,6), 0,92 (5-H₃, d, 6,4), ¹³C-NMR (CDCI₃) δ A egység 165,1 (C-1),

142,4 (C-3), 138,4 (C-9), 129,0 (C-11/13), 128,3 (C-12), 128,0 (C-10/14), 124,6 (C-2), 76,1 (C-5),

74,1 (C-7), 62,0 (C-8), 38,4 (C-6), 36,5 (C-4), 8,6 (6-Me); B egység 170,3 (C-1), 154,1 (C-7), 130,9 (C-5), 129,6 (C-4), 129,2 (C-9), 122,6 (C-6),

112.3 (C-8), 56,1 (7-OMe), 54,3 (C-2), 35,3 (C-3); C egység 177,8 (C-1), 46,5 (C-3), 42,8 (C-2), 22,9 (2-Me), 23,0 (C-2-Me’); D egység 170,3 (C-1),

71.3 (C-2), 39,7 (C-3), 24,8 (C—4), 22,7 (4-Me),

21,6 (C-5). A megfelelő dióit, a K56 vegyületet

2,8 mg (44%) kihozatallal nyerjük.

11. példa

K57 vegyület előállítása «1 mg PtO₂-ot bemérünk egy lombikba 0,5 ml

CH₂CI₂-hoz. A lombikból a levegőt eltávolítjuk, H₂-t vezetünk be, és a kapott keveréket szobahőmérsékleten 20 percen át keverjük. Ezután 10,2 mg (0,015 mmol) K52 vegyületet tartalmazó 0,3 mmol CH₂CI₂-t adagolunk a keverékhez, és a keverést szobahőmérsékleten további 30 percen át folytatjuk. A katalizátort ezután celit/pamut ágyon átszűrjük, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a visszamaradó anyagot fordított fázisú HPLC-vel tisztítjuk (ODS, 10 μ, 250*22,5 mm, MeCN/H₂O=3/1, 5 ml/perc), így 9,1 mg (89%) tiszta K57 vegyületet nyerünk.

[a]_D +3,4° (c=4,5, CHCI₃); EIMS m/z 670/672 (M⁺, 9/3), 441 (10), 246 (63), 229 (20), 195/197 (18/25), 184 (58), 155/157 (39/13), 128 (21), 91 (100), 77 (23); HREIMS m/z 670,3037 (C₃₆H₄₇N₂O₈ ³⁵CI,

Δ-1,6 mmu); UV-(MeOH) z,_max (ε) 204 (31 400),

HU 225 041 Β1

218 (12 000), 284 (1200) nm; ¹H-NMR (CDCI₃) δ

A egység: 7,30-7,37 30 (11/12/13-H, bm), 7,23 (10/14-H, bdd, 7,9, 1,9), 5,03 (5-H, ddd, 9,0, 5,6,

3.4) , 3,66 (8-H, d, 2,1), 2,89 (7-H, dd, 7,7, 2,1),

2,27 (2-H_b, ddd, 14,3, 8,7, 6,2), 2,04 (2-H_z ddd,

14,3, 8,8, 6,8), 1,64-1,75 (6-H/4-H₂, bm), 1,61 (3-H₂, bm, W,n-25), 1,11 (6-CH₃, d, 7,1), B egység: 7,19 (5-H, d, 2,1), 7,04 (9-H, dd, 8,3, 2,1), 6,83 (8-H, d, 8,3), 5,55 (2-NH, d, 8,3), 4,65 (2-H, ddd, 8,3, 7,3, 5,3), 3,87 (7-OCH₃, s), 3,16 (3-H_b, dd, 14,3, 7,3), 3,08 (3-H₂ dd, 14,3, 5,3), C egység: 6,91 (3-NH, dd, 6,4, 6,4), 3,41 (3-H_b, dd, 13,5,

6.4) , 3,30 (3-H₂ dd, 13,5, 6,4), 1,21 (2-CH₃, s),

1,13 (2-CH₃’, s), D egység: 4,80 (2-H, 5 dd, 9,8,

4.1) , 1,64-1,75 (3-H_b/4-H, bm), 1,34 (3-H₂ ddd,

15.4.10.1.4.1) , 0,86 (4-CH₃, d, 6,5), 0,84 (5-H₃, d,

6.5) ; ¹³C-NMR (CDCI₃) δ A egység: 172,6 (1),

136,9 (9), 128,7 (11/13), 128,5 (12), 125,6 (10/14),

76,8 (5), 63,4 (7), 59,2 (8), 40,2 (6), 36,2 (2), 32,2 (4), 21,4 (3), 13,6 (6-Me), B egység: 170,4 (1),

154,0 (7), 131,1 (5), 130,0 (4), 128,5 (9), 122,5 (6),

112,2 (8), 56,1 (7-OMe), 54,3 (2), 35,3 (3), C egység: 177,6 (1), 47,0 (3), 43,1 (2), 22,5 (2-Me’), 22,4 (2-Me), D egység 171,7 (1), 72,0 (2), 39,0 (3), 24,6 (4), 22,8 (4-Me), 21,8(5).

12. példa

K58 vegyület előállítása

5,5 mg (0,008 mmol) K57 vegyületet feloldunk 3 ml kloroformtól mentes etanolban, és kb. -60 °C hőmérsékleten hozzáadunk TMSCI-ot (Aldrich, =4,5 mg, =5,2 μΙ, =0,04 mmol). A keveréket 20 percen át keverjük, ekkor már VRK-val kiindulási anyag nem mutatható ki. Az illékony komponenst ezután csökkentett nyomáson eltávolítjuk, így egy amorf szilárd anyagot nyerünk, ezt acetonitrilben oldjuk és HPLC-vel tisztítjuk (ODS, 10 μ, 250*22,5 mm, MeCN/H₂O=3/1, 5 ml/perc), így nyerjük a tiszta K58 vegyületet (5,4 mg, 93%), mint fő terméket.

[a]_D +7,2° (c=2,1, CHCI₃); EIMS m/z 706/708/710 (M⁺,

27/23/8), 610/672 (M⁺-HCI, 14/13), 583 (54), 581 (53), 485 (23), 483 (21), 447 (34), 294 (21), 282 (39), 246 (57), 195/197 (87/21), 184 (73), 155/157 (45/10), 128 (30), 91 (95), 77 (30), 69 (100);

HREIMS m/z 706,2844 (C₃₆H₄₈N₂O₈ ³⁵CI,

Δ-5,6 mmu), m/z 670,3070 (M⁺-HCI, C₃₆H₄₇N₂O₈ ³⁵

Δ-4,9 mmu) UV-(MeOH) ?,_max (e) 204 (3 31 900),

218 (11 800), 284 (1800) nm; ¹H-NMR (CDCI₃) δ

A egység: 7,34-7,42 (10/11/12/13/14—H, bm), 5,01 (5-H, ddd, 9,6, 8,3, 2,5), 4,65 (8-H, d, 9,6), 4,00 (7-H, dd, 9,6, 1,9), 2,42 (6-H, ddq, 8,3, 1,9, 7,0),

2,29 (2-H_b, ddd, 14,3, 9,4, 4,5), 2,06 (2-H₂ ddd,

14,3, 8,3, 7,5), 1,62-1,82 (3-H₂/4-Hz, bm), 0,99 (6-CH₃, d, 7,0), B egység: 7,20 (5-H, d, 2,1), 7,06 (9-H, dd, 8,3, 2,1), 6,84 (8-H, d, 8,3), 5,62 (2-NH, d, 8,3), 4,61 (2-H, ddd, 8,3, 7,7, 5,4), 3,87 (7-OCH₃, s), 3,17 (3-H_b, dd, 14,3, 7,7), 3,11 (3-H₂ dd, 14,3,

5,4), C egység: 6,97 (3-NH, dd, 6,4, 6,2), 3,43 (3-H_b, dd, 13,4, 6,2), 3,31 (3-H₂ dd, 13,4, 6,4), 1,23 (2-CH₃, s), 1,16 (2-CH₃’, s), D egység: 4,93 (2-H, dd, 10,0,4,0), 1,86 (3-H_b, ddd, 14,0,10,0, 5,5), 1,58 (3-H₂ ddd, 14,0, 8,3, 4,0), 0,97 (4-CH₃, d, 6,8), 0,94 (5-H₃, d, 6,6); ¹³C-NMR (CDCI₃) δ A egység:

172.8 (1), 138,7 (9), 129,0 (12), 128,9 (11/13), 128,0 (10/14), 76,5 (5), 73,8 (7), 62,1 (8), 38,1 (6),

35.9 (2), 31,8 (4), 21,4 (3), 8,7 (6-Me), B egység: 170,6 (1), 153,9 (7), 131,0 (5), 130,2 (4), 5 128,5 (9), 122,4 (6), 112,2 (8), 56,1 (7-OMe),

54.4 (2), 35,0 (3), C egység: 177,2 (1), 47,0 (3),

43,2 (2), 22,5 (2-Me’), 22,4 (2-Me), D egység

171.8 (1), 72,0 (2), 39,4 (3), 24,9 (4), 22,9 (4-Me),

21.7 (5).

13. példa K61 vegyület mg (0,007 mmol) K53 vegyületet feloldunk

0,5 ml vízmentes benzolban, hozzáadunk 4 mg (0,014 mmol) trifenil-foszfin-szulfidot, majd 0,65 μΙ trifluor-ecetsavat 100 μΙ vízmentes benzolban oldva. Az oldatot szobahőmérsékleten 6 órán át keverjük, majd nátrium-hidrogén-karbonáttal semlegesítjük, szűrjük és betöményítjük. A visszamaradó anyagot víz és CH₂CI₂ között megosztjuk, a CH₂CI₂ oldható anyagot fordított fázisú HPLC-vel tisztítjuk (C18 oszlop, 4/1=MeCN/H₂O), így nyerjük a tiszta K61 vegyületet (1,9 mg, 37%).

[a]_D +28,4° (c=0,7, CHCI₃); EIMS m/z 684/686 (M⁺, nincs megfigyelve), 652/654 (M⁺-S, 5/4), 426/428 (90/29), 294 (10), 227 (100), 195/197 (57/20), 184 (20), 155/157 (34/9), 131 (45), 129 (44), 91 (76), 77 (27); HREIMS m/z 652,2973 (M⁺-S,

C₃₆H₄₅N₂O₇ ³⁵CI, Δ-5,8 mmu); UV-(MeOH) lmax. (ε) 204 (26 700), 218 20 (11 600), 284 (820) nm; IR (NaCI) vmax. 3410, 3271, 2958, 1749, 1724, 1670, 1503, 1463, 1258, 1176, 1066, 758 cm-¹, ¹H-NMR (CDCI3) δ A egység 7,29-7,34 (11/12/13-H; m),

7,25 (10/14-H, bd, 6,6), 6,73 (3-H, ddd, 15,2/10,6/4,5), 5,66 (2-H; dd, 15,2/1,7), 5,22 (5-H, ddd, 11,2/4,2/2,0), 3,68 (8-H, d, 5,1), 3,01 (7-H, dd, 8,4/5,1), 2,52 (4-H_b, dddd, 14,4/4,5/2,0/1,7),

2,41 (4-H₂ ddd, -14,4/11,2/10,6), 1,68-1,74 (6-H, m), 1,14 (6-Me, d, 6,9); B egység 7,18 (5-H, d,

2,2), 7,04 (9-H, dd, 8,4/2,2), 6,84 (8-H, d, 8,4), 5,45 (NH, d, 7,8), 4,75 (2-H, ddd, 7,8/7,3/5,4), 3,87 (OMe, s), 3,09 (3-H_b, dd, -14,5/5,4), 3,05 (3-H₂dd, -14,5/7,3); C egység 7,17 (NH, dd, 8,3, 3,9),

3,39 (3-H_b, dd, -13,5/8,3), 3,14 (3-H₂ dd, -13,5/3,9), 1,23 (2-Me, s), 1,16 (2-Me’, s); D egység 4,86 (2-H, dd, 10,2/3,4), 1,77 (3-H_b, ddd, -14,0/10,2/4,9), 1,68-1,74 (4-H, m), 1,42 (3-H₂ddd, -14,0/8,7/3,4), 0,92 (4-Me, d, 6,6), 0,88 (5-H₃, d, 6,4), ¹³C-NMR (CDCI₃) δ A egység 164,9 (1), 141,7 (3), 138,3 (9), 128,8 (11/13), 128,0 (12),

126.7 (10/14), 124,7 (2), 76,6 (5), 45,8 (7), 43,9 (8),

43.9 (6), 36,6 (4), 16,0 (6-Me), B egység 170,2 (1),

154,1 (7), 130,9 (5), 129,4 (4), 128,3 (9), 122,8 (6),

112.4 (8), 56,1 (7-OMe), 54,2 (2), 35,3 (3), C egység 177,9 (1), 46,5 (3), 42,7 (2), 22,9 (2-Me), 22,8 (2-Me’), D egység 170,4 (1), 71,3 (2), 39,4 (3), 24,7 (4), 22,7 (4-Me), 21,4 (5).

HU 225 041 Β1

14. példa

K81 vegyület előállítása

S vegyület

Az S vegyület az F vegyület terc-butil-difenil-szilil-éter-származéka (TBDMS).

T vegyület mmol p-metoxi-benzil-trifenil-foszfónium-kloridot feloldunk 10 ml THF-ben, és -78 °C-on hozzáadunk 400 pl butil-lítium-oldatot (1 mmol, 2,5 mól hexánban), a kapott keveréket 30 percen át keverjük, majd 2,64 ml aliquot részt 3 ml THF-ben oldott S aldehidhez adagoljuk (75 mg, 0,24 mmol) -78 °C-on. 30 perc elteltével a hűtést megszüntetjük, de a keverést még további 2 órán át folytatjuk, mialatt a hőmérséklet lassan 25 °C-ra emelkedik. A reakciót ezután telített ammónium-klorid-oldattal leállítjuk, és a THF-et elpárologtatjuk. A terméket hexánnal kétszer extraháljuk, a szerves extraktumokat egyesítjük, sóoldattal mossuk, majd betöményítjük. A visszamaradó anyagot flashkromatográfiával tisztítjuk (szilikagél, 3% EtOAc/hexán), így 63 mg T vegyületet és 40 mg T és Z-izomer keverékét nyerjük.

A T vegyület jellemzői: [aj_D +110,5° (CHCI₃, c 0,75); IR v_max 2956, 2857, 1724, 1608, 1511, 1428, 1250, 1173, Í111, 1037, 821, 703, 505 cm^-1; EIMS m/z (relatív intenzitás %) 497 (<1, M⁺-OMe), 471 (31, M⁺-Bu), 367 (56), 294 (31), 199 (75), 135 (100); nagy felbontású EIMS 497,24770 (a C32H37O3Si képletű vegyületre számítva Δ+3,5 mmu, M⁺-OMe), 471,19859 (a képletű vegyületre számítva C29H₃₁O₄Si, Δ+0,6 mmu, M⁺-Bu), ¹H-NMR δ 7,71/7,68 (SiPh₂, 2’-H, 6’-H/2”-H, 6”-H; d; 6,5), 7,45/7,43 (SiPh₂, 4’-H/4”-H; t; 7,4), 7,39/7,38 (SiPh₂, 3’-H, 5’-H/3”-H, 5”-H; dd; 7,4, 6,5), 7,24 (10-H, 14-H; d; 8,7), 6,85 (11-H, 13-H; d; 8,7), 6,79 (3-H; dt; 15,7, 7,5), 6,19 (8-H, d, 16,1), 6,00 (7-H, dd, 16,1, 8,1), 5,66 (2-H, dt,

15,7, 1,3), 3,82 (5-H, m), 3,81 (-OCH₃, s), 3,69 (CO=CH₃, S), 2,41 (6-H, m), 2,36 (4-H, m), 2,30 (4-H, m), 1,12 (6-CH₃, d, 7,0), 1,09 (CMe₃, S), ¹³C-NMR δ

166,7 (1), 158,8 (12), 146,0 (3), 136,0 (SiPh₂, 2’, 672”, 6”), 134,1/133,7 (SiPh₂, 171”), 130,4 (9), 130,0 (8), 129,7/129,6 (SiPh₂, 474), 129,5 (7), 127,6/127,5 (3’, 573”, 5), 127,1 (10/14), 122,8 (2), 113,9 (11/13), 76,4 (5), 55,2 (OCH₃), 51,3 (CO₂CH₃), 42,1 (6), 37,1 (4), 27,0 (CMe₃), 19,5 (CMe₃), 16,2 (6-CH₃).

További T vegyületet nyerünk a T és Z-izomer keverékből. 40 mg E- és Z-izomer keverékét feloldjuk ml (0,02 mól) tiofenolt és 0,006 mól ACN-t tartalmazó benzolban, majd a keveréket visszafolyatás közben órán át melegítjük. A feldolgozás és rövid Si-oszlopon való tisztítás után 37,2 mg T vegyületet nyerünk.

U vegyület mg (0,15 mmol) T vegyületet feloldunk 6 ml acetonban, hozzáadunk 4,4 ml 1 n LiOH/víz oldatot, és a kapott tiszta oldatot 1 éjszakán át keverjük. Az acetont ezután eltávolítjuk, a vizes oldatot 1 n sósavval megsavanyítjuk, a terméket EtOAc-tal háromszor extraháljuk, a szerves fázisokat egyesítjük, szárítjuk és betöményítjük. A visszamaradó anyagot szilikagélen tisztítjuk (20% EtOAc/hexán +0,5% AcOH), így 62,2 mg U vegyületet nyerünk (81%).

[a]_D +120,8° (CHCI₃, c 3,1); IR v_max 2960, 2858, 1695, 1650, 1511, 1427, 1250, 1111, 1036, 702 cm¹; ¹H-NMR δ 7,73/7,70 (SiPh₂, 2’-H, 6’-H/2”-H, 6-H, d, 7,0), 7,50 (SiPh₂, 4’-H/4”-H, m), 7,44 (SiPh₂, 3’-H, 5’-H/3-H,5”-H, m), 7,29 (10-H, 14-H, d, 8,6), 6,96 (3-H; dt; 15,6, 7,8), 6,89 (11-H, 13-H, d, 8,6), 6,22 (8-H, d, 16,0), 6,03 (7-15H, dd, 16,0, 7,9), 5,70 (2-H, d, 15,6), 3,88 (5-H, m), 3,83 (OCH₃, s), 2,43 (6-H, m), 2,40 (4-H, m), 1,17 (6-CH₃, d, 6,9), 1,14 (CMe₃, s); ¹³C-NMR, 171,7 (1), 158,8 (12), 148,8 (3), 135,0 (SiPh₂, 2’, 672”, 6”), 133,9/133,7 (SiPh₂, 171”), 130,3 (9), 130,0 (8),

129,7 (SiPh₂, 474”), 129,4 (7), 127,6 (SiPh₂, 3’, 573”, 5), 127,1 (10/14), 122,5 (2), 113,9 (11/13),

76,2 (5), 55,2 (OCH₃), 42,3 (6), 37,1 (4), 27,0 (CMe₃), 19,5 (CMe₃), 16,0 (6-CH₃).

V vegyület mg (0,12 mmol) U vegyületet, 57,2 mg (0,12 mmol) / vegyületet és 62 pl (0,36 mmol) diizopropil-etil-amint (DIEA) feloldunk 1,5 ml vízmentes DMF-ben. Az oldathoz ezután 55 mg (0,14 mmol) FDPP-t adagolunk 0,6 ml DMF-ben, és a kapott keveréket 2 órán át keverjük. Ezután az anyaghoz étert adunk, a szerves fázist egymást követően 1 n sósavval, telített nátrium-hidrogén-karbonáttal, majd sóoldattal mossuk, betöményítjük és kromatográfiával tisztítjuk (szilikagél, 8% EtOAc/hexán), így 74,2 mg V vegyületet nyerünk (72%).

[afo +53,8° (CHCI₃, c 1,6); IR v_max 3286, 2959, 1760, 1667, 1640, 1607, 1510, 1253, 1174, 1111, 1067, 1027, 703 cm^-1; EIMS m/z (relatív intenzitás %) 798/799/800/80 1 / 802/803/804/805 (31/14/44/17/23/10/6/3, M⁺-Bu), 766 (40),

694/695/696/697/698/699/700/701 (70/31/100/38/58/19/14/5), 662 (67), 622 (71), 544 (70), 518 (83); nagy felbontású EIMS 798,1443 (a C₄₀H₄₀CI₄NO₆Si képletű vegyületre számítva, Δ-6,4 mmu, M⁺-Bu’), ¹H-NMR δ A egység 7,69/7,65 (SiPh₂, 2’-H, 6’-H/2”-H, 6”-H; d; 6,5),

7,41 (SiPh₂, 4'-H/4-H, m), 7,35 (SiPh₂, 3’-H, 5’-H/3”-H, 5”-H, m), 7,24 (10-H, 14-H; d, 8,7), 6,85 (11-H, 13-H, d, 8,7), 6,65 (3-H, dt, 15,3, 7,5), 6,20 (8-H, d, 16,1), 6,03 (7-H, dd, 16,1, 8,0), 5,50 (2-H, d, 15,3), 3,81 5 (OCH₃, s), 3,77 (5-H, m),

2,39 (6-H, m), 2,34 (4-H, m), 2,29 (4-H', m), 1,11 (6-Me, d, 6,9), 1,06 (CMe₃, S); B egység 7,15 (5-H, d, 1,8), 7,00 (9-H, dd, 8,4, 1,8), 6,83 (8-H, d,

8.4) , 5,65 (NH, d, 7,7), 5,01 (2-H, ddd, 7,7, 6,0,

5.5) , 4,78/4,72 (CH₂CCI₃, ABq, 11,9), 3,86 (OMe, S), 3,15 (3-H; dd, 6,1, -14,5), 3,08 (3-H’, dd, 5,8, -14,5), ¹³C-NMR δ A egység 165,1 (1), 158,8 (12),

142,5 (3), 136,0 (SiPh₂, 2’, 672”, 6”), 134,2/133,6 (SiPh₂, 171”), 130,4 (9), 129,9 (8), 129,7/129,6 (SiPh₂, 474”), 129,5 (7), 127,6/127,5 (SiPh₂, 3’, 573”, 5), 127,1 (10/14), 124,6 (2), 113,9 (11/13),

76,4 (5), 55,2 (OMe), 42,1 (6), 37,2 (4), 27,0 (CMe₃), 19,5 (CMe₃), 16,6 (6-Me); B egység 170,0 (1), 154,2 (7), 131,0 (5), 128,4 (419), 122,5 (6),

112,1 (8), 94,2 (CCI₃), 74,7 (CH₂CCI₃), 56,1 (OMe),

52,9 (2) 36,4 (3).

HU 225 041 Β1

W vegyület

55.8 mg (0,065 mmol) V vegyületet feloldunk 5,7 ml acetonitrilben, hozzáadunk 2 ml 49%-os hidrogén-fluoridot 0 °C-on, majd a jégfürdőt eltávolítjuk 5 perc elteltével, és a keveréket erőteljesen 17 órán át keverjük. A terméket éterrel extraháljuk, az extraktumot egymást követően telített nátirum-hidrogén-karbonáttal, majd sóoldattal mossuk, az anyagot betöményítjük és normálfázisú kromatográfiával tisztítjuk (szilikagél, EtOAc/hexán). így 31,6 mg (79%) W vegyületet nyerünk.

[a]_D -3,7° (CHCI₃, c 1,3); IR v_max. 3286, 2961, 1756,

1668, 1634, 1607, 1510, 1251, 1175, 1066,

812 cm-¹, ¹H-NMR δ A egység 7,27 (10-H, 14-H, d, 8,5), 6,93 (3-H, dt, 15,4, 7,6), 6,83 (11-H, 13-H, d, 8,5), 6,34 (8-H, d, 15,9), 5,88 (7-H, dd 15,9,

8,2), 5,86 (2-H, d, 15,4), 3,81 (OMe, S), 3,80 (5-H, m), 2,40 (6-H, m), 2,36 (4-H, m), 1,13 (6-Me, d,

6,8); B egység 7,17 (5-H, d, 1,9), 7,05 (9-H, dd,

8,5, 1,9), 6,83 (8-H, d, 8,5), 5,90 (NH, d, 1,7), 5,03 (2-H, ddd, 7,8, 5,9, 5,6), 4,79/4,72 (CH₂CCI₃, ABq, -11,9), 3,86 (OCH₃, s), 3,20 (3-H, dd, 6,0, -14,3), 3,09 (3-H’, dd, 5,9, -14,3), ¹³C-NMR δ A egység

165,2 (1), 159,1 (12), 142,6 (3), 131,3 (9), 129,8 (7), 128,7 (8), 127,3 (10/14), 125,0 (2), 114,0 (11/13), 73,8 (5), 55,3 (OMe), 43,3 (6), 37,2 (4),

16.9 (6-Me) B egység 170,1 (1), 154,2 (7), 131,0 (5), 128,5 (49), 122,5 (6), 112,2 (8), 94,2 (CCI₃),

74,7 (CH₂CCI₃), 56,1 (OMe), 53,0 (2), 36,5 (3).

(2S,2'R)-2-[3'-(terc-Butoxi-karbonil)-amino-2'-metil-propanoil-oxi]-4-metil-pentánsav (AC) g (85 mmol) metil-(S)-(+)-3-hidroxi-2-metil-propanoátot (X) feloldunk 300 ml kb. 9 mólos ammónia/metanol elegyben, és 50 °C-on egy lezárt üveglombikban 168 órán át melegítjük, majd nitrogénnel a lombikból a felesleges ammóniát eltávolítjuk, majd vákuumban szárazra pároljuk. A visszamaradó anyagot éterrel elkeverjük, így 5,7 g (66%) (S)-3-hidroxi-2-metil-propánamidot nyerünk fehér, szilárd anyag formájában, olvadáspont: 85,5-87,5 °C.

[a]_D +28,7° (c 3,5, MeOH); EIMS m/z (rel. intenzitás) (19, M-Me), 85 (35), 73 (69); HREIMS m/z

88,0397 (C₃H₆NO₂, Δ+0,2 mmu); IR v_max 3384,

2960, 1671, 1473 cm-¹; ¹H-NMR5 5,83 10 (NH; br s), 5,42 (NH; br s), 3,73 (3-H₂; m), 2,55 (2-H; m), 1,19 (2-Me; d, 7,2); ¹³C-NMR δ 180,7 (1), 65,4 (3), 44,0 (2), 14,5 (2-Me).

Elemanalízis a C₄H₉NO₂ összegképletű vegyületre: számított: C, 46,59; H, 8,79, mért: C, 46,45; H, 8,83.

2,1 g (20 mmol) (S)-3-hidroxi-2-metil-propánamidot 20 ml vízmentes THF-ben szuszpendálunk, lassan hozzáadunk 61 mmol (61 ml) 1 mólos borán-THF komplexet és lehűtjük 0 °C-ra. A keveréket ezután 6 órán át visszafolyatás közben melegítjük, majd 0 °C-ra hűtjük, óvatosan 10 ml koncentrált sósavval megbontjuk és vákuumban betöményítjük. A koncentrátumot 20 g NaOH-dal telítjük, négyszer 15-15 ml CHCI₃-dal extraháljuk, az extraktumokat egyesítjük, MgSO₄ felett szárítjuk, majd szűrjük, az oldószert vákuumban desztillációval eltávolítjuk, így 1,4 g (77%) (R)-3-amino-2-metil-propán-1-olt (Y) nyerünk színtelen olaj formájában, forráspont: 110-112 °C (40 Hgmm). [αβ° +8,9° (c 22,6, MeOH); IR v_max, 3358, 1873, 1598,

1466 cm-¹; ¹H-NMR δ 5,18 (NHz; br s), 3,8 (1-H₂; m), 2,95 (3-H; m), 2,68 (3-H; m), 1,81 (2-H; m), 0,82 (2-Me; d, 7,2); ¹³C-NMR δ 66,9 (1), 46,4 (3),

37,1 (2), 14,4 (2-Me).

g (22 mmol) Y amino-alkoholt feloldunk 39 ml 10%-os trietil-amin/MeOH elegyben, és hozzáadunk

5,4 g (25 mmol) di(terc-butil)-dikarbonátot, és a kapott keveréket 25 °C-on 30 percen át keverjük. Az oldószert ezután eltávolítjuk, a visszamaradó anyagot CH₂CI₂ban oldjuk, az oldatot kétszer 1 mólos KHSO₄-oldattal (pH=2) és egyszer telített NaCI-oldattal mossuk és MgSO₄ felett szárítjuk. Az oldószert ezután vákuumban eltávolítjuk, így 4,3 mg (100%) (R)-3-(terc-butoxi-karbonil)-amino-2-metil-propán-1-olt nyerünk viszkózus olaj formájában, ezt további tisztítás nélkül közvetlenül használjuk a következő lépésnél (>95% tisztaság NMR-analízissel).

IR v_max. 3356, 1976, 1686, 1523, 1456 cm-¹; ¹H-NMR δ 4,82 (NH; br s), 3,54 (1-H; dd, -11,4/4,2), 3,31 (1-H/3-H; m), 3,25 (3-H; dd, -14,1/6,6), 1,77 (2-H; m), 1,44 (CMe₃; s), 0,87 (2-Me; d, 6,9).

2,2 g (12 mmol) (R)-3-(terc-butoxi-karbonil)amino-2-metil-propán-1-ol-alkoholt és 7,5 g (35 mmol) nátrium-perjodátot feloldunk 25 ml szén-tetrakloridban, 25 ml acetonitrilben és 38 ml vízben, és hozzáadunk 51 mg (0,25 mmol) ruténium-triklorid-hidrátot, és a kapott keveréket 25 °C-on 1 órán át keverjük. A keveréket ezután 100 ml CH₂CI₂-nal hígítjuk, majd celiten szűrjük, a szűrletet meglúgosítjuk (pH=9) 2 mólos K₂CO₃oldattal, és a vizes fázist éterrel mossuk. A vizes fázist 1 mólos KHSO₄-oldattal megsavanyítjuk (pH=2) 0 °C-on, és háromszor 20-20 ml CH₂CI₂-nal extraháljuk. Az extraktumokat egyesítjük, telített NaCI-oldattal mossuk és MgSO₄ felett szárítjuk. Az oldószert ezután vákuumban eltávolítjuk, így 2 g (85%) (R)-3-(terc-butoxi-karbonil)-amino-2-metil-propánsavat (Z) ragadós szilárd anyag formájában. A tiszta Z vegyületet éterből való kristályosítással nyerjük (1,75 g, 74%), olvadáspont: 69,5-70,5 °C.

[a]_D -18,4° (c 2, MeOH); EIMS m/z (rel. intenzitás) 147 (60; M⁺-Me2C=CH2), 130 (12), 74 (29), 57 (100); HREIMS m/z 147,0517 (C5H9NO4, Δ+1,4 mmu); IR vmax 3322-2400, 2797, 1711, 1654, 1413 cm-¹; ¹H-NMR fő konformer δ 5,00 (NH; br s), 3,32 (3-H; m), 3,24 (3-H’; m), 2,71 (2-H; m), 1,44 (CMe3; s), 1,20 (2-Me; d); ¹³C-NMR a fő/kevés konformerre (2:1 arány) δ 180,7/179,5 (1), 156,0/157,7 (BOC CO), 79,5/81,0 (CMe₃), 42,7/44,0 (3), 39,9/40,2 (2), 28,3/28,3 (CMe₃), 14,6/14,6 (2-Me),

Elemanalízis a C₉H₁₇NO₄ összegképletű vegyületre: számított: C 53,18 H 8,43, mért: C 53,04 H 8,62.

2,66 g (20 mmol) L-leucinsavat és 1,74 g (20 mmol) nátrium-hidrogén-karbonátot feloldunk 30 ml vízben 0 °C-on, hozzáadunk 30 ml CH₂CI₂-ban oldott 6,44 g (20 mmol) tetrabutil-ammónium-kloridot és 1,74 ml

HU 225 041 Β1 (20 mmol) allil-bromidot. A keveréket 24 órán át erőteljesen keverjük, majd a CH₂CI₂-t elpárologtatjuk, hozzáadunk kb. 50 ml vizet, és a vizes fázist négyszer Et₂O-dal extraháljuk. Az éteres oldatot vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, majd betöményítjük, a visszamaradó anyagot rövid Si-oszlopon átengedjük, így

3,21 g (2S)-2-hidroxi-4-metil-pentanoátot (AA) nyerünk (93%) színtelen olaj formájában.

[<x]_D -8,4° (c 1,1, CHCI₃); IR v_max. 3464, 2957, 1732,

1203, 1140, 1087 cm-¹; ¹H-NMR δ 5,92 (allil 2-H; m), 5,34 (allil 3-H_z; dd, 17,4/1,1), 5,28 (allil 3-H_E; dd, 10,5/1,1), 4,67 (allil 1-H_Z; d, 5,7), 4,23 (2-H; br s), 2,64 (OH; br s), 1,89 (4-H; m), 1,57 (3-H₂; m), 0,96 (5-H₃; d, 6,5), 0,95 (4-Me; d, 6,7); ¹³C-NMR δ

175,3 (1), 131,4 (allil C-2), 118,6(3), 68,9 (2), 65,7 (allil C-1), 43,2 (3), 24,1 (4), 23,0 (5), 21,3 (4-Me).

1,74 g (8,55 mmol) Z vegyületet, 1,34 g (8 mmol)

AA vegyületet és 64 mg DMAP-t feloldunk 12 ml vízmentes CH₂CI₂-ban, és 0 °C-on cseppenként hozzáadunk 8 ml CH₂CI₂-ban oldott 2,47 g (12 mmol) DCC-t. A tiszta oldatot 0 °C-on 30 percen át, majd 23 °C-on 3 órán át keverjük. A fehér csapadékot szűrjük, az oldószert elpárologtatjuk, a visszamaradó anyagot Et₂O-ban oldjuk, az éteres oldatot egymást követően hideg 0,5 n sósavval, nátrium-hidrogén-karbonáttal és sóoldattal mossuk, az éteres fázist Na₂SO₄ felett szárítjuk, betöményítjük, és a kapott terméket flashkromatográfiávai tisztítjuk szilikagélen, így 2,62 g (92%) tiszta, allil-(2S,2'R)-2-[3'(terc-butoxi-karbonil)-amino-2’metil-propanoil-oxij-4-metil-pentanoátot (AB) nyerünk színtelen olaj formájában.

[a]_D -51,3° (c 3,41, CHCI₃); EIMS m/z (rel. intenzitás)

301 (5,2), 284 (4,0), 258 (1,5), 228 (43,5), 170 (41,8),

130 (74,5), 112 (100); HREIMS m/z 301,1532 (C₁₄H₂₃NO₆, Δ-0,7 mmu, M-Me₂C=CH₂), 284,1496 (C^₄H₂₂NO5, Δ+0,2 mmu); IR v_max 3395, 2962,

1747, 1715, 1515, 1251, 1175, 1083 cm-¹, ¹H-NMR

C egység δ 5,17 (NH; br s), 3,42 (3-H; m), 3,22 (3-H; m), 2,78 (2-H, m), 1,43 (CMe₃; br s), 1,21 (2-Me; d, 7,1); D egység δ 5,90 (allil 2-H; m), 5,33 (allil 3-H_z; d, 16,3), 5,27 (allil 3-H_E; d, 10,3), 5,09 (2-H; dd, 9,7/3,7), 4,63 (allil 1-H_Z; m), 1,80 (3-H₂; m), 1,64 (4-H; m), 0,96 (5-H₃; d, 6,5), 0,94 (4-Me; d,

7,3), ¹³C-NMR C egység δ 174,7 (1), 156,0 (BOC CO), 79,2 (CMe₃), 43,1 (3), 40,3 (2), 28,3 (CMe₃),

14,5 (2-Me); D egység δ 170,4 (1), 131,4 (allil C-2), 119,0 (allil C-3), 70,9 (2), 65,9 (allil C-1), 39,6 (3), 24,7(4), 23,0 (5), 21,5 (4-Me).

2,82 mg (0,8 mmol) A6-t és 91 mg (0,08 mmol) tetrakisz(trifenil-foszfin)-palládiumot tartalmazó 10 ml vízmentes THF-oldathoz lassan 688 pl (8 mmol) vízmentes morfolint adagolunk, majd 40 percig keverjük, az oldószert elpárologtatjuk, és hozzáadunk 100 ml CH₂CI₂-t. A kapott oldatot egymást követően 2 n sósavval, majd vízzel mossuk, a szerves fázist szűrjük, a szűrletet kétszer telített nátrium-hidrogén-karbonáttal extraháljuk, majd CH₂CI₂-nal visszamossuk, a vizes fázist először pH=3 értékig hideg KHSO₄-oldattal 0 °C-on megsavanyítjuk, majd háromszor éterrel extraháljuk. Az éteres extraktumot szárítjuk, betöményítjük, így

250 mg (100%) (2S,2’R)-2-[3’(terc-butoxi-karbonil)-amino-2’-metil-propanoil-oxi]-4-metil-pentánsavat (AC) nyerünk viaszos szilárd anyag formájában.

[a]_D -47,9° (c 4,7, CHCI₃); EIMS m/z (rel. intenzitás)

261 (12), 244 (18), 217 (28), 198 (17), 30 188 (100), 160 (61); HREIMS m/z 261,1221 (C^H^NOg, Δ-0,8 mmu, M-Me₂C=CH₂),

244,1221 (C^H^NOs, Δ-3,6 mmu); IR v_max 3376,

2960, 1738, 1518, 1174, 786 cm*¹, ¹H-NMR (CDCI₃+D₂O) C egység δ 3,49 (H-3; dd, -13,8/3,5),

3,12 (3-H; dd, -13,8/8,7), 2,68 (2-H; m), 1,43 (CMe₃; brs), 1,21 (2-Me; d, 7,1); D egység δ 5,12 (2-H; dd, 9,6/3,5), 1,901,68 (3H/4-H; m), 0,97 (5-H; d, 6,1), 0,94 (4-Me; d, 6,0), ¹³C-NMR C egység δ 174,6 vagy 174,8 (1), 156,1 (BOC CO), 79,5 (CMe₃), 43,0 (3), 40,4 (2), 28,3 (CMe₃), 14,5 (2-Me); D egység δ 174,6 vagy 174,8 (1), 70,5 (2),

39,5 (3), 24,7 (4), 23,0 (5), 21,4 (4-Me).

AD vegyület

34,8 mg (0,056 mmol) W alkoholt, 2,8 mg (0,085 mmol) AC vegyületet és 1,74 mg DMAP-t feloldunk 283 pl diklór-metánban, majd hozzáadunk 666 pl diklór-metánt, amely 17,5 mg (0,085 mmol) DCC-t tartalmaz. A keveréket 1 éjszakán át keverjük, majd az oldószert nitrogénáramban betöményítjük, étert adagolunk hozzá, és a fehér csapadékot szűrjük. A szűrletet egymást követően 0,5 n sósavval, telített nátrium-hidrogén-karbonáttal és sóoldattal mossuk, betöményítjük és szilikagélen tisztítjuk (25% EtOAc/hexán), így 46 mg (90%) AD vegyületet nyerünk.

[a]_D -11,8° (CHCI₃, c 2,0); IR v_max 3369, 2961, 1737,

1511, 1252, 1174, 1066, 813, 756 cm-¹, ¹H-NMR (500 MHz) δ A egység 7,25 (10-H/14-H, dt, 8,5,

2,1), 6,84 (11-H/13-H, dt, 15 8,5, 2,1), 6,76 (3-H, ddd, 15,5, 6,5, 6,4), 6,34 (8-H, d, 15,6), 5,88 (2-H, bd, 15,5), 5,86 (7-H, dd 15,6, 8,7), 5,04 (5, m), 3,80 (OMe, s), 2,56 (6-H, m), 2,52 (4-H, m), 1,10 (6-Me, d, 6,8); B egység 7,19 (5-H, d, 2,1), 7,05 (9-H, dd, 8,5, 2,1), 6,83 (8-H, d, 8,5), 6,55 (NH, bd,

7.3) , 5,04 (2-H, m), 4,78/4,10 (CH₂CCI₃, ABq,

-11,8), 3,85 (OCH₃, s), 3,19 (3-H, dd, 6,3, -13,8),

3,08 (3-H’, dd, 6,8, -13,8); C egység 5,14 (NH, bt,

6.3) , 3,32 (3-H, m), 3,20 (3-H’, m), 2,73 (2-H, m),

1,42 (CMe₃, s), 1,18 (2-Me, d, 7,0); D egység 4,93 (2-H, dd, 10,0, 3,7), 1,67 (3-H/4-H, m), 1,55 (3-H’, m), 0,86 (5-H, d, 6,5), 0,83 (4-Me-H, d, 6,5), ¹³C-NMR δ A egység 165,4 (1), 159,1 (12), 139,3 (3), 131,1 (9), 129,7 (7), 128,5 (8), 127,3 (10/14),

125,4 (2), 114,0 (11/13), 76,5 (5), 55,3 (OMe), 41,1 (6), 33,4 (4), 16,7 (6-Me); B egység 170,5 (1),

154,1 (7), 131,2 (5), 128,9 (4), 128,5 25 (9), 122,4 (6), 112,1 (8), 94,3 (CC1₃), 74,6 (CH₂CCI₃), 56,1 (OMe), 53,2 (2), 36,6 (3); C egység 175,2 (1), 156,0 (BOCCO), 79,3 (CMe₃), 43,1 (3), 40,4 (2), 28,3 (CMe₃), 14,4 (2-Me); D egység 170,1 (1), 71,4 (2),

39,5 (3), 24,7 (4), 22,9 (5), 21,4 (4-Me).

K81 vegyület mg (0,05 mmol) AD vegyületet elkeverünk 178 mg aktivált Zn-porral és 1,3 ml HOAc-tal. A kapott keveréket 45 percig ultrahanggal kezeljük, majd továb43

HU 225 041 Β1 bi 90 percen át keverjük. Ezután hozzáadunk 30 ml diklór-metánt, a szilárd anyagot szűrjük, a szűrletet vákuumban betöményítjük, a visszamaradó anyagot 1 ml TFA-ban oldjuk, és az oldatot 1 órán át keverjük. A TFA-t ezután vákuumban elpárologtatjuk, vizet adunk a visszamaradó anyaghoz, liofilizálással nyerjük a szabad aminosavat. Az aminosavat feloldjuk 4,6 ml DMF-ben, hozzáadunk 26 μΙ DlEA-t és 30 mg (0,075 mmol) FDPP-t 2,2 ml DMF-ben. A kapott anyagot 6 órán át keverjük, majd az oldószert elpárologtatjuk, EtOAc-ot adunk hozzá, az oldatot 0,5 n sósavval, majd sóoldattal mossuk. Az oldószert ezután elpárologtatjuk, a visszamaradó anyagot kromatografáljuk (Si, éter), így 20,5 mg (61%) K81 vegyületet nyerünk. [a]_D +34,9° (CHCI₃, c 0,45); IR v_max 3409, 3270, 2958,

1746, 1725, 1672, 1511, 1251, 1175, 1066, 1025,

972, 816 cm-¹, ¹H-NMR (500 MHz) δ A egység

7,26 (10-H/14-H; dt, 8,6, 2,5), 6,84 (11-H/13-H, dt, 8,6, 2,5), 6,68 (3-H, ddd, 15,4, 9,9, 5,6), 6,35 (8-H, d, 15,9), 5,86 (7-H, dd, 15,9, 8,8), 5,77 (2-H, dd, 15,4, 0,9), 4,99 (5-H, ddd, 11,2, 6,0, 1,7), 3,80 (OCH₃, s), 2,53 (4-H/6-H, m), 2,37 (4-H', ddd,

11,2, 9,9, -14,6), 1,12 (6-Me, d, 6,9); B egység

7,22 (5-H, d, 2,2), 7,08 (9-H, dd, 8,4, 2,4), 6,84 (8-H, d, 8,4), 5,64 (NH, d, 8,6), 4,81 (2-H, m), 3,86 (OMe, S), 3,13 (3-H; dd, 5,6, -14,5), 3,05 (3-H’, dd, 7,1, -14,5); C egység, 6,93 (NH, bdd, 5,8, 5,6), 3,50 (3-H, ddd, 5,2, 3,9, -13,5), 3,28 (3-H’, ddd, 6,9, 6,7, 13,5), 2,71 (2-H, m), 1,22 (2-Me; d, 7,3); D egység 4,84 (2-H, dd, 10,1, 3,4), 1,67 (3-H/4-H; m), 1,38 (3-H’, m), 0,78 (5-H, d, 6,5), 0,75 (4-Me-H, d, 6,5), ¹³C-NMR (125 MHz) δ A egység

165.4 (1), 159,2 (12), 141,4 (3), 131,1 (9), 129,6 (7), 128,4 (8), 127,3 (10/14), 125,2 (2), 114,1 (11/13), 77,5 (5), 55,3 (OMe), 42,2 (6), 36,4 (4),

17.4 (6-20 Me); B egység 171,0 (1), 154,0 (7),

131.2 (5), 129,9 (4), 128,4 (9), 122,5 (6), 112,1 (8),

56.2 (OMe), 53,5 (2), 35,1 (3); C egység 175,6 (1),

41.2 (3), 38,3 (2), 14,0 (2-Me); D egység 170,9 (1),

71,6 (2), 39,5 (3), 24,5 (4), 22,7 (5), 21,3 (4-Me).

15. példa

K82 vegyület előállítása

AE vegyület

Az AE vegyület az E vegyület terc-butil-difenil-szilil-éter-származéka (TBDMS).

AF vegyület

150 mg AE vegyületet hidrolizálunk, így 125 mg AF vegyületet nyerünk 87%-os kihozatallal, a hidrolízist a T vegyület U vegyületté való hidrolízisénél leírtak szerint végezzük.

¹H-NMR δ 7,69/7,64 (SiPh₂, 2’-H, 6'-H/2”-H, 6”-H, d,

6,3), 7,41 (SiPh₂, 4'-H/4”-H, m), 7,39 (SiPh₂,

3”-H, 4-Me-H/3”-H, 5”-H, m), 6,86 (3-H; dt; 15,5,

7,5), 5,62 (2-H, d, 15,5), 5,30 (7-H/8-H, m), 3,72 (5-H, m), 2,28 (4-H, m), 2,20 (6-H, m), 1,52 (9-H, bd, 7,7), 1,08 (CMe₃, s), 1,00 (6-CH₃, d, 6,7).

AG vegyület mg AG vegyületet állítunk elő 76 mg (0,18 mmol) AF vegyületből 70%-os kihozatallal a V vegyület U vegyületből való előállításánál leírtak szerint.

¹H-NMR δ A egység 7,67 (SiPh₂, 2’-H, 6’-H/2”-H, 6”-H; m), 7,46-7,31 (SiPh₂, 3’-H, 4’-H, 4-Me-H/3”-H, 4”-H, 5”-H, m), 6,62 (3-H, dt, 15,4,

7,6), 5,51/5,48 (2-H, d, 15,4), 5,33 (7/8, m), 3,70 (5-H, m), 2,22 (4-H/6-H, m), 1,61 (9, bd, 7,4), 1,06 (CMe₃, S), 0,98 (6-Me, d, 6,8); B egység 7,16 (5-H, d, 1,7), 7,00 (9-H, dd, 8,5, 1,7), 6,83/6,82 (8-H, d, 8,5), 5,68/5,66 (NH, d, 7,3), 5,03 (2-H, m), 4,78/4,73 (CH₂CCI₃, ABq, -11,9), 3,87 (OMe, S), 3,16 (3-H; m), 3,09 (3-H’, m), ¹³C-NMR δ A egység 165,1 (1), 143,0/142,9 (3), 136,0 (SiPh₂, 2’, 672”, 6”), 134,3/133,7 (SiPh₂, 171”), 132,5 (7),

129,6 (8), 129,6 (SiPh₂, 474), 127,5 (SiPh₂, 3’, 4-Mel₃”, 5”), 125,7/125,4 (2), 76,3 (5), 41,6 (6), 36,9/36,8 (4), 27,0 (CMe₃), 19,5 (CMe₃), 18,1 (9), 16,4/16,3 (6-Me); B egység 170,0 (1), 154,2 (7), 131,0 (5), 128,4 (4/9), 122,5 (6), 112,1 (8), 94,2 (CCI₃), 74,7 (CH₂CCI₃), 56,1 (OMe), 52,9 (2) 36,4 (3).

AH vegyület

53,4 mg AH vegyületet állítunk elő 84 mg (0,11 mmol) AG vegyületből 92%-os kihozatallal a W vegyület V vegyületből való előállításánál leírtak szerint.

¹H-NMR δ A egység 6,83 (3-H, dt, 15,4, 7,5), 5,80 (2-H, d, 15,4), 5,51 (8-H, m), 5,33 (7-H, dd, 15,2,

8,3), 3,50 (5-H, m), 2,42 (4-H, m), 2,30 (4-H’, m),

2,28 (6, m), 1,68 (9, d, 7,3), 0,99 (6-Me, d, 6,7); B egység 7,20 (5-H, d, 1,8), 7,03 (9-H, dd, 8,4, 1,8), 6,80 (8-H, d, 8,4), 6,10 (NH, bd, 7,0), 5,07 (2-H, m), 4,80/4,70 (CH₂CCI₃, ABq, -11,5), 3,88 (OCH₃, s), 3,20 (3-H, dd, 5,5, -14,3), 3,10 (3-H’, dd, 7,2, -14,3), ¹³C-NMR δ A egység 25 165,4 (1), 142,8 (3), 132,2 (7), 121,7 (8), 125,7 (2), 73,6 (5), 42,8 (6), 36,9 (4), 18,1 (9), 16,8 (6-Me); B egység 170,2 (1), 154,2 (7), 131,0 (5), 128,5 (4/9), 122,5 (6),

112,2 (8), 94,2 (CCI₃), 74,7 (CH₂CCI₃), 56,1 (OMe),

53,1 (2), 36,5 (3).

K82 vegyület

36,8 mg (86%) Al vegyületet állítunk elő 27,4 mg (0,052 mmol) AH vegyületből az AD vegyületnél leírtak szerint.

mg (0,083 mmol) Al vegyületet ciklizálunk, így

28,5 mg K82 vegyületet nyerünk, a ciklizálást az AD vegyület K81 vegyületté való ciklizálása szerint végezzük.

[a]_D +19,9° (CHCI₃, c 2,0), ¹H-NMR (500 MHz) δ A egység 6,65 (3-H, ddd, 15,4, 9,5, 5,6), 5,76 (2-H, d, 15,4), 5,48 (8-H, dq, 15,3, 6,5), 5,27 (7-H, ddd,

15.3, 8,4, 1,5), 4,89 (5-H, ddd, 10,7, 5,6, 1,5), 2,38 (4-H, m), 2,33 (4-H/6-H, m), 1,66 (9-H, dd, 6,4,

1,5), 1,00 (6-Me, d, 6,9); B egység 7,22 (5-H, d, 2,0), 7,08 (9-H, dd, 8,4, 2,0), 6,83 (8-H, d, 5 8,4),

5,74 (NH, m), 4,81 (2-H, ddd, 8,5, 7,3, 5,6), 3,87 (OMe, S), 3,13 (3-H; dd, 5,6, 14,4), 3,04 (3-H’, dd,

7.3, -14,4); C egység, 6,93 (NH, bdd, 6,7, 4,7), 3,52 (3-H, ddd, 4,7, 3,9, -13,5), 3,27 (3-H’, ddd, 6,8, 6,7, -13,5), 2,72 (2-H, dqd, 7,1, 6,8, 3,9), 1,20

HU 225 041 Β1 (2-Me; d, 7,1); D egység 4,88 (2-H, dd, 9,6, 3,4),

1,75 (3-H/4-H; m), 1,47 (3-H', m), 0,94 (5-H, d,

6.2) , 0,91 (4-Me-H, d, 6,4), ¹³C-NMR (125 MHz) δ

A egység 165,5 (1), 10 141,7 (3), 131,4 (7), 127,1 (8), 125,2 (2), 77,7 (5), 41,5 (6), 36,2 (4), 17,9 (9),

17.2 (6-Me); B egység 171,0 (1), 153,9 (7), 131,1 (5), 129,9 (4), 128,4 (9), 122,4 (6), 112,2 (8), 56,1 (OMe), 53,5 (2), 35,1 (3); C egység 175,5 (1), 41,3 (3), 38,2 (2), 14,0 (2-Me); D egység 170,9 (1), 71,5 (2) , 39,6 (3), 24,6 (4), 23,0 (5), 21,5 (4-Me).

16. példa

K90 és K91 vegyületek előállítása

Általános eljárás sztirol típusú kriptoficinek epoxidálására

Kb. 100 mg/ml koncentrációjú kriptoficin/diklór-metán oldathoz 3 ekvivalens m-klór-perbenzoesavat adagolunk diklór-metánban oldva (kb. 10 mg/ml). Az oldatot szobahőmérsékleten addig keverjük, amíg a kiindulási anyag elfogy. Az oldatot ezután rövid szilikagél oszlopon átengedjük CH₂CI₂-nal, majd 1:4=CH₂CI₂:Et₂O eleggyel mossuk, így nyerjük a két epoxid keverékét. Az epoxidokat HPLC-vel választjuk szét (C18, 7:3=MeCN:H₂O).

A fentiek szerint eljárva 5 mg K82 vegyületet

2,2 mg K90 vegyületté és 1,2 mg K91 vegyületté alakítunk.

K90 vegyület spektroszkópiai adatai ¹H-NMR (500 MHz) δ A egység 6,67 (3-H, ddd, 15,4,

9.5, 5,8), 5,79 (2-H, d, 15,4), 5,09 (5-H, ddd, 10,4,

4.5, 2,6), 2,84 (8-H, qd, 5,2, 2,2), 2,57 (7-H, dd,

7.6, 2,2), 2,46 (4-H, m), 1,82 (6-H, m), 1,32 (9-H, d, 5,2), 1,03 (6-Me, d, 6,9); B egység 7,22 (5-H, d,

2.2) , 7,08 (9-H, dd, 8,4, 2,2), 6,84 (8-H, d, 8,4),

5.74 (NH, d, 8,6), 4,81 (2-H, ddd, 8,3, 7,4, 5,7),

3,87 (OMe, S), 3,14 (3-H; dd, 5,4, -14,5), 3,03 (3-H', dd, 7,3, 14,5); C egység, 6,95 (NH, bdd, 6,7,

4,8), 3,52 (3-H, ddd, 4,8, 3,7, -13,4), 3,29 (3-H’, ddd, 6,7, 6,5, -13,4), 2,74 (2-H, dqd, 7,3, 6,5, 3,7),

1,24 (2-Me; d, 7,3); D egység 4,90 (2-H, dd, 9,9,

3,7), 1,75 (3-H, m), 1,60 (4-H; m), 1,49 (3-H’, ddd,

8.7, 3,7, -13,7), 0,95 (5-H, d, 6,5), 0,91 (4-Me-H, d, 6,7), ¹³C-NMR (125 MHz) δ A egység 165,4 (1),

141,1 (3), 125,3 (2), 76,3 (5), 60,0 (7), 56,8 (8),

40.2 (6), 36,5 (4), 17,5 (9), 13,3 (6-Me); B egység

171,0 (1), 154,0 (7), 131,1 (5), 129,9 (4), 128,4 (9),

122,5 (6), 112,3 (8), 5 56,1 (OMe), 53,6 (2), 35,1 (3) ; C egység 175,5 (1), 41,2 (3), 38,3 (2), 14,1 (2-Me); D egység 170,7 (1), 71,4 (2), 39,6 (3), 24,7 (4) , 23,0(5), 21,5 (4-Me).

K91 vegyület spektroszkópiai adatai ¹H-NMR δ A egység 6,68 (3-H, ddd, 15,4, 9,8, 5,4),

5,78 (2-H, d, 15,4), 5,09 (5-H, ddd, 11,1, 3,7, 2,0),

2.75 (8-H, m), 2,62 (7-H, dd, 9,5, 2,1), 2,48 (4-H, m), 1,78 (6-H, m), 1,32 (9-H, d, 5,2), 0,99 (6-Me, d, 7,1); B egység 7,23 (5-H, d, 1,9), 7,09 (9-H, dd,

8,4, 1,9), 6,85 (8-H, d, 8,4), 5,68 (NH, d, 8,4), 4,82 (2-H, m), 3,88 (OMe, S), 3,15 (3-H; dd, 5,4, -14,4), 3,04 (3-H’, dd, 7,2, -14,4); C egység, 6,95 (NH, bdd, 6,0, 4,6), 3,53 (3-H, ddd, 5,0, 4,0, -13,4), 3,29 (3-H’, ddd, 6,9, 6,7, -13,4), 2,75 (2-H, m), 1,23 (2-Me; d, 6,7); D egység 4,92 (2-H, dd, 9,8, 3,4),

1,77 (3-H, m), 1,58 (4-H; m), 0,96 (5-H, d, 7,3),

0,92 (4-Me-H, d, 6,7).

17. példa

K97 vegyület előállítása mg (0,013 mmol) K53 ciklusos depszipeptidet feloldunk 1 ml dimetil-szulfoxidban, hozzáadunk 40 mg nátrium-azidot és 4 μΙ koncentrált kénsavat. A kapott keveréket 75-85 °C-on 2 napon át keverjük, majd szobahőmérsékletre lehűtjük, 15 ml Et₂O-dal hígítjuk, a szerves fázist kétszer 20-20 ml sóoldattal és 20 ml vízzel mossuk, az éteres extraktumot MgSO₄ felett szárítjuk, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, így színtelen, amorf, szilárd anyagot nyerünk, amely túlnyomórészt K86 azido-alkohol. A kapott anyagot fordított fázisú kromatográfiával tisztítjuk (ODS, 10 μ, 250x10 mm, 25% H₂O/MeCN, 3 ml/perc), így nyerjük a K86 azido-alkoholt amorf, színtelen, szilárd anyag formájában (7,4 mg, 77%).

K86 vegyület spektroszkópiai adatai [a]_D -22,0° (c=3,0, CHCI₃); MS (El) m/z 482/484 (legnagyobb értékű talált ion, M⁺-229, 8/3), 625/621 (14/5), 259 (7), 195/197 (100/34), 184 (14), 155/157 (82/70), 91 (23), 77 (22); HRMS, obsd m/z

482,1791, C₂₃H₃₁N₂O₇ ³⁵CI (Δ 2,9 mmu); MS (FAB) m/z (magic buliét mátrix) 712/714 (M⁺+H, 79/36), 686/688 (31/12), 232 (74), 184 (100), ¹H-NMR (CDCI₃) δ A egység: 7,37-7,42 (10/11/12/13/14-H, bm, W_1/2«20), 6,77 (3-H, ddd, 15,2, 10,6,4,4), 5,77 (2-H, dd, 15,2, 1,3), 5,45 (5-H, ddd, 11,0, 4,2, 2,0),

4,55 (8-H, d, 5,7), 3,75 (7-H, dd, 7,3, 5,7), 2,55 (4-H_b, dddd, 14,5, 4,4, 2,0, 1,3), 2,43 (4-H” ddd,

14.5, 11,0, 10,6), 2,34 (7-OH, s), 1,80 (6-H, ddq,

7.3, 4,2, 7,0), 0,99 (6-Me, d, 7,0), B egység, 7,20 (5-H, d, 2,2), 7,06 (9-H, dd, 8,4, 2,2), 6,84 (8-H, d,

8.4) , 5,76 (NH, d, 7,7), 4,74 (2-H, ddd, 7,7, 7,5,

5.5) , 3,87 (OCH₃, s), 3,10 (3-H_b, dd, 14,5, 5,5),

3,06 (3-H_a dd, 14,5, 7,5), C egység: 7,22 (NH, dd,

8.4, 3,7), 3,40 (3—H_b, dd, 13,6, 8,4), 3,14 (3-H_a dd,

13.6, 3,7), 1,23 (2-CH₃, s), 1,16 (2-CH₃, s), D egység: 4,85 (2-H, dd, 9,5, 5,1), 1,71 (3-H_b, ddd, 13,6,

9.5, 5,9), 1,59 (4-H, bm, W_1/2«25), 1,50 (3-H_a ddd,

13,6, 7,9, 5,1), 0,89 (4-CH₃, d, 6,6), 0,85 (5-H₃, d,

6.6) ; ¹³C-NMR (CDCI₃) δ A egység: 165,3 (1),

143,0 (3), 135,1 (9), 129,1 (12), 128,9 (11/13),

128,6 (10/14), 124,3 (2), 75,1 (7), 74,6 (5), 67,8 (8),

39,3 (6), 34,7 (4), 11,9 (6-Me), B egység: 170,5 (1),

154,1 (7), 130,9 (5), 129,7 (4), 128,3 (9), 122,5 (6),

112,4 (8), 56,1 (7-OMe), 54,3 (2), 35,3 (3), C egység: 177,8 (1), 46,5 (3), 42,8 (2), 22,9 (2-Me), 22,7 (2-Me’), D egység: 170,2 (1), 71,4 (2), 39,4 (3), 24,7(4), 22,6 (4-Me), 21,8(5).

K97 vegyület

5,5 mg (0,008 mmol) K86 ciklusos depszipeptidet feloldunk 0,5 ml 3/1=Et₂O/CH₂CI₂ elegyben, hozzáadunk 0,5 ml mennyiségű éteres trifenil-foszfint (3 mg, 0,011 mmol), majd a kapott keveréket szobahőmérsékleten 3 napon át keverjük. Ezután az oldószert vá45

HU 225 041 Β1 kuumban eltávolítjuk, a visszamaradó anyagot feloldjuk CH₂CI₂-ban és HPLC-vel tisztítjuk (CN oszlop, 10 μ, 250x10 mm, 80% EtOAc/CH₂CI₂, 3 ml/perc), így nyerjük a tiszta K97 vegyületet amorf, színtelen, szilárd anyag formájában (4,2 mg, 82%).

UV-(MeOH) X_max (ε) 202 (24 400), 218 (9400), 284 (2200) nm; MS (El) m/z 667/669 (M⁺, 11/3), 639/641 (41/16), 442 (21), 226 (17), 195 (43), 196 (32), 197 (100), 198 (71), 199 (11), 182/184 (25/16), 155/157 (63/22), 146 (30), 91 (40), 77 (29); HRMS, obsd m/z 661, 3061, C36H46N3O7^{18 * * * * * * * * * * * * * * * * 35}CI (Δ-3,6 mmu), ¹H-NMR (CDCI3) δ A egység 7,35 (11-H/13-H; m, W_1/2«15 Hz), 7,28 (12-H, m), 7,16 (10-H/14-H; m, W_1/2«15 Hz), 6,74 (3-H; ddd, 15,2/9,0/6,1), 5,69 (2-H; d, 15,2), 5,21 (5-H; ddd, 9,2/4,3/4,2), 2,79 (8-H, bs), 30 2,51 (4-H₂, m), 2,11 (7-H, bd, 6,5), 1,48 (6-H, m), 1,13 (6-Me, d, 6,9); B egység: 7,18 (5-H, d, 2,1), 7,04 (9-H, dd, 8,4, 2,1),

6,83 (8-H, d, 8,4), 5,53 (NH, m), 4,73 (2-H, ddd,

7.6, 5,6, 5,4), 3,87 (OMe, s), 3,09 (3-H_b, dd, 14,7,

5,4), 3,04 (3-H_b dd, 14,7, 7,6), C egység: 7,20 (NH, m), 3,40 (3—H_a, dd, 13,5, 8,6), 3,11 (3-H_a, dd, 13,5,

3,3), 1,22 (2-Me, s), 1,15 (2-Me, s), D egység: 4,84 (2-H, dd, 10,1,3,7), 1,71 (3-H_b, m), 1,67 (4-H, bm, W_1/2~25), 1,35 (3-H_a m), 0,86 (4-Me, d, 6,7), 0,84 (5-H₃, d, 6,5); ¹³C-NMR (CDCI₃) δ A egység: 165,0 (1), 142,1 (3), 139,2 (9), 128,8 (11/13), 127,5 (12), 125,4 5 (10/14), 124,6 (2), 76,6 (5), 42,5 (6),

42,1 (7), 40,5 (8), 36,6 (4), 14,8 (6-Me), B egység

170,2 (1), 154,1 (7), 130,9 (5), 129,5 (4), 128,2 (9),

122,6 (6), 112,4 (8), 56,1 (7-OMe), 54,3 (2), 35,3 (3), C egység: 177,9 (1), 46,5 (3), 42,7 (2), 22,8 (2-Me/2-Me’)> D egység: 170,5 (1), 71,3 (2), 39,5 (3), 24,6 (4), 22,7 (4-Me), 21,3 (5).

18. példa

K110-112 és K124 vegyületek előállítása

K108 vegyület

K90 és K91 vegyületek keverékét (27 mg,

0,045 mmol) feloldjuk 0,8 ml tetrahidrofuránban, hozzáadunk 400 μΙ vizes perjódsavat (32 mg, 0,14 mmol), és a kapott tiszta oldatot szobahőmérsékleten 5 órán át keverjük. Ezután vizet adunk hozzá, a vizes fázist etil-acetáttal kétszer extraháljuk, a szerves fázist vízzel mossuk, szárítjuk és betöményítjük. A visszamaradó anyagot fordított fázisú kromatográfiával tisztítjuk (ODS oszlop, 1:2=MeCN:H₂O), így 90%-os kihozatallal nyerjük a K108 vegyületet.

¹H-NMR (500 MHz) δ A egység 9,64 (7-H, d, 1,9),

6,67 (3-H, ddd, 15,3, 10,0, 5,4), 5,81 (2-H, dd,

15,3, 0,9), 5,32 (5-H, ddd, 11,0, 6,6, 2,1), 2,65 20 (6-H, qdd, 7,2, 6,9, 1,9), 2,53 (4-H, m), 2,44 (4-H',

m), 1,17 (6-Me, d, 7,2); B egység 7,21 (5-H, d,

2,2), 7,08 (9-H, dd, 8,4, 2,2), 6,84 (8-H, d, 8,4),

5,91 (NH, d, 8,4), 4,80 (2-H, m), 3,86 (OMe, S),

3,16 (3-H; dd, 5,4, -14,6), 3,00 (3-H’, dd, 7,8,

-14,6); C egység 7,05 (NH, bdd, 6,9, 5,0), 3,47 (3-H, ddd, 4,6, 4,2, -13,5), 3,32 (3-H’, ddd, 6,9,

6.6, 13,5), 2,73 (2-H, m), 1,23 (2-Me; d, 7,2); D egység 4,83 (2-H, dd, 9,5, 3,6), 1,75 (3-H, 25 m),

1,70 (4-H; m), 1,40 (3-H’, ddd, 9,5, 3,9, -14,0),

0,93 (5-H, d, 6,6), 0,88 (4-Me-H, d, 6,6), ¹³C-NMR (125 MHz) δ A egység 200,6 (7), 165,4 (1) , 140,5 (3), 125,6 (2), 73,7 (5), 50,1 (6), 36,1 (4),

10,8 (6-Me); B egység 171,1 (1), 154,0 (7), 131,0 (5), 129,9 (4), 128,3 (9), 122,4 (6), 112,3 (8), 56,1 (OMe), 53,8 (2), 35,0 (3); C egység 175,6 (1), 41,0 (3), 38,1 (2), 14,1 (2-Me); D egység 170,4 (1), 71,3 (2) , 39,3 (3), 24,6 (4), 22,9 (5), 21,4 (4-Me).

A K108 vegyületet előállíthatjuk a K82 vegyület szelektív ozonolízisével is, az E vegyület ozonolízissel F vegyületté való alakításánál leírtak szerint.

Általános eljárás a Wittig-reakciókhoz

0,4 ml (2,5 mól hexánban, 1 mmol) butil-lítiumot adagolunk 10 ml THF-hez, amely 1 mmol ariltrifenil-foszfónium-kloridot tartalmaz -78 °C-on. A keveréket 15 percen át -78 °C-on keverjük, majd jégfürdőre helyezzük 1 órára. 3 ekvivalens mennyiségű fenti keveréket adagolunk ezután -78 °C-on kb. 30 mg/ml töménységű K108 vegyületet tartalmazó THF-oldathoz. Az oldatot 20 percig keverjük, majd a jégfürdőt eltávolítjuk. Ha a hőmérséklet 25 °C-ra emelkedett, a keverékhez ammónium-klorid vizes oldatot adagolunk, a keveréket kétszer etil-acetáttal extraháljuk, a szerves extraktumot vízzel mossuk, szárítjuk és betöményítjük. A visszamaradó anyagot ODS oszlopon tisztítjuk (65:35=MeCN:H₂O), így nyerjük az E- és Z-izomerek keverékét (8-13% Z-izomer, függően az arilcsoporttól, NMR-analízissel meghatározva). A kívánt E-izomert éterből kristályosítjuk ki.

K110 vegyület

A Wittig-reakcióval 5,1 mg p-fluor-fenil-analógot nyerünk (kb. 8% Z-izomer-tartalom) 7,3 mg K108 vegyületből (kb. 1 mg reagálatlan aldehidet nyerünk vissza). Éterből való átkristályosítás után 4 mg tiszta K110 vegyületet nyerünk.

[a]_D +42,4° (MeOH, c 2,1), ¹H-NMR δ A egység 7,29 (10-H/14-H; dd, 8,6, 5,6), 6,99 (11-H/13-H, dt,

8,6, 8,5), 6,68 (3-H, ddd, 15,3, 9,7, 5,6), 6,38 (8-H, d, 15,8), 5,83 (1-H, dd, 15,8, 8,8), 5,78 (2-H, d,

15,3), 5,00 (5-H, ddd, 10,8, 7,3, 1,3), 2,53 (4-H/6-H, m), 2,36 (4-H’, m), 1,13 (6-CH₃, d, 6,8); B egység 7,21 (5-H, d, 1,8), 7,07 (9-H, dd, 8,4,

1,8), 6,84 (8-H, d, 8,4), 5,68 (NH, d, 8,5), 4,82 (2-H, m), 3,87 (OMe, s), 3,14 (3-H; dd, 5,6, -14,4), 3,04 (3-H’, dd, 7,2, -14,4); C egység, 6,95 (NH, bdd, 6,8, 5,9), 3,50 (3-H, td, 4,4, -13,5), 3,28 (3-H’, ddd, 6,8, 6,7, -13,5), 2,72 (2-H, m), 1,23 (2-Me; d,

1,2); D egység 4,82 (2-H, m), 1,65 (3-H/4-H; m), 1,35 (3-H’, ddd, 4,5, 3,8, 25 10,9), 0,18 (5-H, d,

6,4), 0,74 (4-Me-H, d, 6,4), ¹³C-NMR (75 MHz) δ A egység 165,4 (1), 162,3 (12, d, ¹J_C__F 245,8 Hz),

141,4 (3), 132,9 (9), 130,6 (7), 129,9 (8), 127,6 (10/14, d, ³Jc_f 8,0 Hz), 125,2 (2), 115,5 (11/13, d, ²Jc__f 21,5 Hz), 71,4 (5), 42,2 (6), 36,4 (4), 17,3 (6-Me); B egység 170,9 (1), 153,9 (7), 131,0 (5),

129,9 (4), 128,4 (9), 122,4 (6), 112,2 (8), 56,1 (OMe), 53,6 (2), 35,1 (3); C egység 175,6 (1), 41,1 (3) , 38,3 (2), 14,0 30 (2-Me); D egység 170,9 (1),

71,5 (2), 39,5 (3), 24,5 (4), 22,7 (5), 21,2 (4-Me).

HU 225 041 Β1

K111 vegyület

A Wittig-reakcióval 43 mg p-tolil-analógot állítunk elő (kb. 9% Z-izomer-tartalommal) 55 mg K108 vegyületből. Éterből való kristályosítás után 30 mg tiszta K111 vegyületet nyerünk.

[a]_D +44,3° (CHCI₃, c 0,6); EIMS m/z (relatív intenzitás

%) 652 (2,9, M⁺), 497 (3,6), 412 (23,8), 242 (20),

145 (46), 105 (75); nagy felbontású EIMS

652,29094 (a C3₆H₄₅CIN₂O7 képletű vegyületre számítva Δ-0,6 mmu, M⁺), ¹H-NMR δ A egység

7.21 (10-H/14-H; d, 8,0), 7,11 (11-H/13-H, d, 8,0),

6,68 (3-H, ddd, 15,2, 9,6, 5,4), 6,37 (8-H, d, 15,8),

5,95 (7-H, dd, 15,8, 8,6), 5,76 (2-H, d, 15,2), 4,99 (5-H, dd, 10,4, 6,2), 2,51 (4-H/6-H, m), 2,38 (4-H’, m), 2,32 (12-Me, s), 1,13 (6-CH3, d, 6,8); B egység

7.22 (5-H, d, 2,1), 7,08 (9-H, dd, 8,4, 2,1), 6,83 (8-H, d, 8,4), 5,80 (NH, d, 8,4), 4,81 (2-H, m), 3,86 (OMe, s), 3,14 (3-H; dd, 5,6, -14,4), 3,03 (3-H’, dd,

7,3, -14,4); C egység 6,98 (NH, bdd, 6,0, 5,7), 3,49 (3-H, td, 4,6, -13,4), 3,29 (3-H’, ddd, 6,7, 6,6,

-13,4), 2,70 (2-H, m), 1,22 (2-Me; d, 7,2); D egység 4,81 (2-H, m), 1,65 (3-H/4-H; m), 1,37 (3-H’, m), 0,78 (5-H, d, 5,8), 0,73 (4-Me-H, d, 6,4), ¹³C-NMR (75 MHz) δ A egység 165,5 (1), 141,5 (3), 137,4 (12), 133,9 (9), 131,7 (7), 129,3 (10/14), 129,0 (8), 126,0 (11/13) 125,1 (2), 77,4 (5), 42,2 (6), 36,4 (4), 21,1 (12-Me), 17,3 (6-Me); B egység 171,0 (1), 153,9 (7), 131,0 (5), 129,9 (4), 128,4 (9),

122,4 (6), 112,2 (8), 56,1 (OMe), 53,6 (2), 35,1 (3); C egység 175,6 (1), 41,1 (3), 38,3 (2), 14,1 (2-Me); D egység 170,9 (1), 71,6 (2), 39,5 (3), 24,5 (4), 22,7 (5),21,2 (4-Me).

K112 vegyület

A Wittig-reakcióval 35 mg 2-tienilanalógot állítunk elő (kb. 13% Z-izomer-tartalommal) 51 mg K108 vegyületből. Éterből való kristályosítás után 25 mg tiszta K112 vegyületet nyerünk.

¹H-NMR (500 MHz) δ A egység 7,12 (12-H; d, 4,9),

6,94 (11-H, dd, 4,9, 3,4), 6,90 (10-H, d, 3,4), 6,68 (3-H, ddd, 15,2, 9,5, 5,3), 6,54 (8-H, d, 25 15,7),

5,83 (7-H, dd, 15,7, 8,7), 5,78 (2-H, d, 15,2), 4,96 (5-H, dd, 9,5, 6,5), 2,51 (4-H/6-H, m), 2,35 (4-H’, m), 1,13 (6-CH₃, d, 6,8); B egység 7,21 (5-H, d,

1,6), 7,07 (9-H, dd, 8,4, 1,6), 6,84 (8-H, d, 8,4),

5,74 (NH, d, 7,1), 4,82 (2-H, m), 3,87 (OMe, s),

3,13 (3-H; dd, 5,5, -14,4), 3,04 (3-H’, dd,

7,1, -14,4); C egység, 6,97 (NH, bt, 5,8), 3,50 (3-H, ddd, 4,4, 4,3, -13,4), 3,28 (3-H’, ddd, 6,8,

6,6, -13,4), 2,71 (2-H, m), 1,22 (2-Me; d, 7,2); D egység 4,82 (2-H, m), 1,67 (3-H/4-H; m), 1,39 (3-H’, m), 0,80 (5-H, d, 6,4), 0,77 (4-Me-H, d,

6,4).

K124 vegyület

A Wittig-reakcióval 131 mg p-klór-fenil-analógot állítunk elő (kb. 10% Z-izomer-tartalommal) 153 mg K108 vegyületből. Éterből való kristályosítás után 107 mg tiszta K124 vegyületet nyerünk.

[a]_D +29,2° (CHCI₃, c 0,5); nagy felbontású EIMS m/z

672,23691 (a C₃₅H₄₂CI₂N₂O₇ képletű vegyületre számítva, Δ 0,0 mmu), ¹H-NMR (500 MHz) δ

A egység 7,26 (10-H/11-H/13-H/14-H, s), 6,68 (3-H, ddd, 15,2, 9,6, 5,4), 6,36 (8-H, d, 15,8), 5,98 (7-H, dd, 15,8, 8,8), 5,77 (2-H, d, 15,2), 5,00 (5-H, bdd, 9,4, 6,3), 2,54 (4-H/6-H, m), 2,38 (4-H’, m), 1,13 (6-CH₃, d, 6,8); B egység 7,22 (5-H, d, 1,7), 7,07 (9-H, dd, 8,4, 1,7), 6,84 (8-H, d, 8,4), 5,73 (NH, bd, 7,8), 4,82 (2-H, m), 3,86 (OMe, s), 3,13 (3-H; dd, 5,5, -14,4), 3,04 (3-H’, dd, 7,2, -14,4); C egység, 6,97 (NH, bt, 5,8), 3,49 (3-H, td, 4,2, -13,4), 3,29 (3-H’, ddd, 6,7, 6,6, -13,4), 2,11 (2-H, m), 1,22 (2-Me; d, 7,2); D egység 4,81 (2-H, m), 1,65 (3-H/4-H; m), 1,35 (3-H’, m), 0,77 (5-H, d, 7,1), 0,75 (4-Me-H, d, 7,1), ¹³C-NMR (75 MHz) δ A egység 165,4 (1), 141,3 (3) , 135,2 (12), 133,2 (9), 130,9 (7), 130,6 (8),

128,7 (11/13), 127,3 (10/14), 125,2 (2), 77,3 (5),

42,2 15 (6), 36,5 (4), 17,3 (6-Me); B egység 170,9 (1), 153,9 (7), 131,0 (5), 129,8 (4), 128,4 (9), 122,4 (6), 112,2 (8), 56,1 (OMe), 53,6 (2), 35,1 (3); C egység 175,6 (1), 41,1 (3), 38,3 (2), 14,1 (2-Me); D egység 170,8 (1), 71,5 (2), 39,6 (3), 24,5 (4),

22,8 (5), 21,3 (4-Me).

19. példa

K115-120, K125 és K126 vegyületek előállítása

K115 és K116 vegyületek

A sztirol típusú kriptoficinek epoxidálására leírtak szerint eljárva 3,5 mg K110 vegyületből 2 mg K115 és 1 mg K116 vegyületet állítunk elő.

K115 vegyület spektroszkópiai adatai [a]_D +29,1° (MeOH, c 0,8); EIMS m/z (relatív intenzitás

%) 672 (1,9, M⁺), 412 (5,8), 245 (17), 195 (52), 155 (31), 141 (23), 135 (15), 109 (100); nagyfelbontású

EIMS 668,2853 (a C₃₅H₄₂CIFN₂O₈ képletű vegyületre számítva, Δ+3,4 mmu, M⁺), ¹H-NMR (500 MHz) δ A egység 7,22 (10-H/14-H; ddt, 8,7,

5,2, 2,0), 7,01 (11-H/13-H, ddt, 8,7, 8,5, 2,0), 6,68 (3-H, ddd, 15,2, 9,7, 5,2), 5,74 (2-H, dd, 15,2, 0,8),

5,15 (5-H, ddd, 11,2, 5,0, 1,8), 3,67 (8-30H, d, 2,0), 2,88 (7-H, dd, 7,4, 2,0), 2,54 (4-H, dtd, 5,2,

1,8, -14,4), 2,44 (4-H’, ddd, 11,2, 9,7, -14,4), 1,79 (6-H, m), 1,13 (6-CH₃, d, 6,8); B egység 7,21 (5-H, d, 2,0), 7,06 (9-H, dd, 8,3, 2,0), 6,83 (8-H, d,

8.3) , 5,63 (NH, d, 8,4), 4,80 (2-H, ddd, 8,4, 7,2,

5.4) , 3,87 (OMe, s), 3,14 (3-H; dd, 5,4, -14,4), 3,03 (3-H’, dd, 7,2, -14,4); C egység 6,94 (NH, bdd, 6,7,

5,0), 3,48 (3-H, ddd, 5,0, 3,7, -13,4), 3,30 (3-H’, ddd, 6,8, 6,7, -13,4), 2,72 (2-H, m), 1,22 (2-Me; d,

7.4) ; D egység 4,83 (2-H, dd, 9,9, 3,6), 1,70 (3-H/4-H; m), 1,35 (3-H’, m), 0,87 (5-H, d, 6,5),

0,85 (4-Me-H, d, 6,5), ¹³C-NMR (125 MHz) δ egység 5 A 165,3 (1), 162,9 (12, d, ¹JC_F 245,4 Hz), 141,0 (3), 132,5 (9), 127,3 (10/14, d, ³JC__F 8,3 Hz),

125,3 (2), 115,7 (11/13, d, ²J_C__F 21,9 Hz), 76,1 (5), 63,0 (7), 58,3 (8), 40,5 (6), 36,7 (4), 13,4 (6-Me); B egység 170,9 (1), 154,0 (7), 131,0 (5), 129,7 (4), 128,4(9), 122,5(6), 112,3(8), 56,1 (OMe), 53,6 (2), 35,0 (3); C egység 175,6(1),41,1 (3),38,2 (2), 14,1 (2-Me); D egység 170,7 (1), 71,3 (2), 39,4 (3), 24,5 (4) , 22,9 (5),21,3 (4-Me).

HU 225 041 Β1

K117 és K118 vegyületek

A sztirol típusú kriptoficinek epoxidálására leírtak szerint eljárva 6,3 mg K111 vegyületből 3,5 mg K117 és 1 mg K118 vegyületet állítunk elő.

K117 vegyület spektroszkópiai adatai [a]_D +25,5° (MeOH, c 1,8); EIMS m/z (relatív intenzitás

%) 668 (4,8, M⁺), 412 (6,2), 280 (11), 173 (9,4), 145 (15), 135 (34), 105 (100); nagy felbontású EIMS m/z 668,28532 (a C₃₆H45CIN₂O₈ képletű vegyületre számítva, Δ+1,1 mmu, M⁺), ¹H-NMR (500 MHz) δ A egység 7,17/7,13 (10-H/11-H/13-H/14-H, A₂B₂ q, 8,0), 6,67 (3-H, ddd, 15,4, 9,8, 5,6), 5,73 (2-H, dd, 15,4, 0,9), 5,14 (5-H, ddd, 11,2, 4,9, 2,0), 3,65 (8-H, d, 2,0), 2,91 (1-H, dd, 207,6, 2,0), 2,54 (4-H, bdd, 5,6, -14,3), 2,44 (4-H’, ddd, 10,7, 9,8, -14,3), 2,35 (12-Me, s), 1,77 (6-H, m), 1,14 (6-CH₃, d, 6,9); B egység 7,21 (5-H, d, 2,2), 7,07 (9-H, dd, 8,5, 2,2), 6,83 (8-H, d, 8,5), 5,65 (NH, d,

8.5) , 4,80 (2-H, ddd, 8,3, 7,4, 5,6), 3,87 (OMe, s),

3.13 (3-H; dd, 5,6, -14,5), 3,02 (3-H', dd, 7,4,

-14,5); C egység 6,93 (NH, bd, 6,8, 5,1), 3,48 (3-H, ddd, 5,1, 3,8, -13,2), 3,29 (3-H’, ddd, 6,9, 6,8, -13,2), 2,71 (2-H, m), 25 1,22 (2-Me; d, 7,1); D egység 4,82 (2-H, dd, 9,8, 3,6), 1,70 (3-H/4-H; m), 1,33 (3-H’, m), 0,85 (5-H, d, 6,5), 0,84 (4-Me-H, d,

6.5) , ¹³C-NMR (125 MHz) δ A egység 165,3 (1),

141,0 (3), 138,4 (12), 133,7 (9), 129,4 (10/14),

125,6 (11/13), 125,3 (2), 76,2 (5), 62,9 (7), 59,0 (8),

40,7 (6), 36,7 (4), 21,1 (12-Me), 13,6 (6-Me); B egység 170,9 (1), 154,0 (7), 131,0 (5), 129,8 (4), 128,4(9), 122,4(6), 112,3(8), 56,1 (OMe), 53,6 (2),

35,1 (3); C egység 175,5 (1),41,1 (3), 38,3 (2), 14,1 (2-Me); D egység 170,7 (1), 71,3 (2), 39,4 (3), 24,5 (4), 22,8 (5), 21,2 (4-Me).

K118 vegyület spektroszkópiai adatai Az ¹H-NMR-spektrum hasonló a K38 vegyületéhez, kivéve, hogy a fenilprotonok 7,30-7,38 multiplettjei helyén 4H multiplett van a 7,14-nál és 3H szingulett a 2,35-nál a p-tolil-protonokra.

K119 és K120 vegyületek

A sztirol típusú kriptoficinek epoxidálására leírtak szerint eljárva 8 mg K112 vegyületből 1,2 mg K119 és 0,5 mg K120 vegyületet állítunk elő.

K119 vegyület spektroszkópiai adatai ¹H-NMR (500 MHz) δ A egység 7,28 (12-H, d, 5,2),

7,11 (10-H, d, 3,3), 7,00 (11-H, dd, 5,2, 3,3), 6,68 (3-H, ddd, 15,1,9,9, 5,2), 5,76 (2-H, dd, 15,1,1,3),

5,15 (5-H, ddd, 11,2, 5,5, 1,8), 3,94 (8-H, d, 2,0),

3,10 (7-H, dd, 7,5, 2,0), 2,56 (4-H, bdd, 5,2, 14,3),

2,44 (4-H’, ddd, 11,2, 9,9, -14,3), 1,76 (6-H, m),

1.13 (6-CH₃, d, 6,8); B egység 7,21 (5-H, d, 2,3),

7,07 (9-H, dd, 8,4, 2,3), 6,83 (8-H, d, 8,4), 5,63 (NH, d, 8,4), 4,80 (2-H, ddd, 8,5, 7,4, 5,7), 3,87 (OMe, s), 3,13 (3-H; dd, 5,7, -14,5), 3,03 (3-H’, dd,

7.4, -14,5); C egység 6,95 (NH, bd, 6,5, 5,3), 3,48 (3-H, ddd, 5,3, 3,6, -13,5), 3,31 (3-H’, ddd, 6,8,

6.5, -13,5), 2,72 (2-H, m), 1,23 (2-Me; d, 7,3); D egység 4,85 (2-H, dd, 10,3, 3,5), 1,70 (3-H/4-H; m), 1,33 (3-H’, m), 0,86 (5-H, d, 6,3), 0,85 (4-Me-H, d, 6,3).

K125 és K126 vegyületek

A sztirol típusú kriptoficinek epoxidálására leírtak szerint eljárva 47 mg K124 vegyületből 26 mg K125 és 12 mg K126 vegyületet állítunk elő.

K125 vegyület spektroszkópiai adatai [a]_D +35,6° (CHCI₃, c=0,9); nagy felbontású EIMS m/z

688,2301 (a C₃₅H₄₂CI₂N₂O₈ képletű vegyületre számítva, Δ+1,7 mmu), ¹H-NMR (500 MHz) δ A egység 7,33 (11-H/13-H, dt, 8,5, 2,0), 7,18 (10-H/14-H, dt, 8,5, 2,0), 6,67 (3-H, ddd, 15,1,9,9,

5,2), 5,73 (2-H, dd, 15,1, 0,9), 5,15 (5-H, ddd, 11,0, 4,7, 1,5), 3,66 (8-H, d, 1,9), 2,87 (7-H, dd, 7,4,1,9), 2,53 (4-H, m), 2,42 (4-H’, ddd, 10,6,10,5, -14,4), 1,78 (6-H, m), 1,12 (6-CH₃, d, 7,0); B egység 7,20 (5-H, d, 2,1), 7,06 (9-H, dd, 8,3, 2,1), 6,83 (8-H, d, 8,3), 5,72 (NH, d, 30 8,1), 4,79 (2-H, ddd,

8,3, 1,9, 5,4), 3,86 (OMe, s), 3,12 (3-H; dd, 5,4, -14,5), 3,02 (3-H’, dd, 7,4, -14,5); C egység 6,97 (NH, bdd, 6,3, 5,5), 3,46 (3-H, ddd, 4,4, 4,1, -13,7),

3.22 (3-H’, ddd, 7,0, 6,3, -13,7), 2,70 (2-H, m),

1.22 (2-Me; d, 7,2); D egység 4,82 (2-H, dd, 9,9,

3,4), 1,70 (3-H/4-H; m), 1,33 (3-H’, m), 0,87 (5-H, d, 6,5), 0,84 (4-Me-H, d, 6,5), ¹³C-NMR (125 MHz) δ A egység 165,3 (1), 141,0 (3), 135,3 (12), 134,4 (9), 128,9 (11/13), 126,9 (10/14), 125,3 (2) , 76,0 (5), 63,1 (7), 58,2 (8), 40,4 (6), 36,7 (4),

13,4 (6-Me); B egység 170,9 (1), 154,0 (7), 131,0 (5), 129,8 (4), 128,3 (9), 122,4 (6), 112,3 (8), 5 56,1 (OMe), 53,7 (2), 35,0 (3); C egység 175,6 (1), 41,0 (3) , 38,2 (2), 14,1 (2-Me); D egység 170,7 (1), 71,2 (2), 39,4 (3), 24,5 (4), 22,9 (5), 21,3 (4-Me).

K126 vegyület spektroszkópiai adatai ¹H-NMR (300 MHz) A egység δ 7,26 (11-H/13-H, d,

8,1), 7,17 (10-H/14-H, d, 8,1), 6,70 (3-H, ddd,

15,1,9,4, 5,3), 5,81 (2-H, d, 15,1), 5,14 (5-H, bdd,

10,0, 4,5), 3,57 (8-H, bs), 2,85 (7-H, bd, 7,6), 2,66 (4-H, m), 2,59 (4-H, m), 1,77 (6-H, m), 1,04 (6-CH₃, d, 7,0); B egység 7,23 (5-H, bs), 7,08 (9-H, bd, 8,4), 6,83 (8-H, d, 8,4), 5,82 (NH, d, 6,8),

4,81 (2-H, ddd, 7,2, 6,8, 5,4), 3,86 (OMe, s), 3,14 (3-H; dd, 5,4, -14,1), 3,03 (3-H, dd, 7,4, -14,1); C egység 7,03 (NH, bt, 5,7), 3,47 (3-H, ddd, 4,0, 3,7, -13,1), 3,34 (3-H’, ddd, 6,8, 6,4, -13,1), 2,72 (2-H, m), 1,24 (2-Me; d, 7,0); D egység 4,90 (2-H, dd, 10,0, 2,5), 1,74 (3-H/4-H; m), 1,45 (3-H’, m), 0,91 (5-H, d, 6,5), 0,86 (4-Me-H, d, 6,5), ¹³C-NMR (125 MHz) δ A egység 165,4 (1), 141,3 (3), 135,6 (12), 134,1 (9), 128,8 (11/13), 126,8 (10/14), 125,2 (2) , 76,8 (5), 63,3 (1), 55,6 (8), 40,8 (6), 36,7 (4),

13,4 (6-Me); B egység 170,9 (1), 153,9 (7), 131,0 (5), 129,8 (4), 128,4 (9), 122,3 (6), 112,2 (8), 56,1 (OMe), 53,7 (2), 35,0 (3); C egység 175,7 (1), 41,0 (3) , 38,2 (2), 14,1 (2-Me); D egység 170,8 (1), 71,4 (2), 39,3 (3), 24,6 (4), 23,1 (5), 21,3 (4-Me).

20. példa

K121-123 és K127 vegyületek előállítása

AJ vegyület

1,24 g (5 mmol) BOC-L-leucin-monohidrátot feloldunk 30 ml vízmentes CH₂CI₂-ban, hozzáadunk 0,53 g

HU 225 041 Β1 (2,75 mmol) szilárd 1-(3-dimetil-amino-propil)-3etil-karbodiimid-hidroklorid EDC-t nitrogénatmoszférában keverés közben 0 °C-on. A keverést 0 °C-on

1,5 órán át végezzük, majd a keveréket 5 °C alatt betöményítjük, a visszamaradó anyagot 35 ml hideg EtOAc-tal hígítjuk, és egymást követően kétszer 10-10 ml jéghideg 5%-os vizes KHSO₄-oldattal, 5%-os vizes NaHCO₃-oldattal és sóoldattal mossuk. A szerves fázist elválasztjuk, MgSO₄ felett szárítjuk, 5 °C-on szárítjuk és 5 °C alatt betöményítjük. A visszamaradó olajos anyagot 5 ml jéghideg THF-fel hígítjuk, és 5 ml jéghideg vízmentes THF-ben oldott 295 mg (0,5 mmol) K vegyülethez adagoljuk. A keverékhez néhány kristály DMAP-t adunk, keverjük és hagyjuk 1 éjszaka alatt 25 °C-ra melegedni. Ezután hozzáadunk 5%-os vizes NaHCO₃-oldatot, és a kapott kétfázisú keveréket erőteljesen 25 °C-on 2 órán át keverjük. Ezután 40 ml EtOAc-ot adagolunk, a vizes fázist kétszer 20-20 ml EtOAc-tal extraháljuk, a szerves fázisokat egyesítjük, vízzel és sóoldattal mossuk, Na₂SO₄ felett szárítjuk, szűrjük és betöményítjük. A visszamaradó anyagot szilikagélen szűrjük (20% EtOAc/hexán), így nyerjük az AJ vegyületet színtelen olaj formájában (385 mg, 96%).

[a]_D 13,6° (c=0,63, CHCI₃); EIMS m/z (rel. intenzitás) 805/803/801 (M⁺, 1%), 568/570/572/574 (9/10/6/2), 523/525/527 (5/6/1), 418/420/422/424 (15/15/6/2), 341/343/345/347 (58/70/35/9), 307/309/311 (29/22/10), 224/227/228/229 (10/100/31/14), 208/210/211/212 (20/83/45/54); HREIMS m/z 800,2218 (C₃₅H₄₈ ³⁵C14N2O8, Δ-5,3 mmu); ¹H-NMR (CDCI3) A egység δ 7,21-7,35 (Ph-H₅; m), 6,77 (3-H; ddd, 6,7/6,7/15,3), 6,4 (8-H; d,

15.8) , 6,05 (7-H; dd, 8,7/15,8), 5,9 (2-H; d, 15,3), 5,0 (5-H; m), 2,6 (6-H; m), 2,55 (4-H₂; m), 1,17 (6-Me; d, 6,7); B egység δ 7,22 (5-H; s), 7,05 (9-H; d, 8,1), 6,84 (8-H; d, 8,1), 6,55 (NH; d, 7,8), 5,0 (2-H; ddd, 5,5/7,1/7,8), 4,68^1,8 (CH₂CCI₃; ABq,

11.9) , 3,86 (OMe; s), 3,2 (3-H; dd, 5,5/14,0), 3,06 (3-H’; dd, 7,1/14,0); D egység δ 4,8 (NH; d), 4,2 (2-H; m), 1,65 (4-H; m), 1,55 (3-H; m), 1,4 (CMe₃); s), 1,37 (3-H’; m), 0,85 (4-Me; d, 6,5), 0,8 (5-H; d,

6,5); ¹³C-NMR A egység δ 165,4 (1), 139,3 (3), 137,0 (9), 131,5 (8), 130,5 (7), 128,5 (11/13), 127,3 (12), 126,2 (10/12), 125,8 (2), 76,2 (5), 40,8 (6),

33,4 4), 16,8 (6-Me); B egység δ 170,0 (1), 154,2 (7), 131,0 (5), 129,0 (9), 122,5 (6), 112,2 (8), 94,4 (CCI₃), 74,7 (CH₂CCI₃), 56,1 (OMe), 53,3 (2), 36,5 (3), D egység δ 173,2 (1), 155,7 (BOC CO), 80,0 (CMe₃), 52,4 (2), 41,2 (3), 28,3 (CMe₃), 24,8 (4),

22,8 (4-Me), 21,6 (5).

AK vegyület

115 mg (0,134 mmol) AJ vegyületet feloldunk 3 ml

TFA-ban, és 25 °C-on 1 órán át állni hagyjuk. Az oldószert ezután elpárologtatjuk, a visszamaradó anyagot ismételten CH₂CI₂-nal elkeverjük, majd toluolból elpárologtatjuk, így egy amorf szilárd anyagot nyerünk. Ezt 5 ml vízmentes THF-ben feloldjuk, és elegendő mennyiségű dietil-izopropil-amint adagolunk, hogy a pH-t 8-9 közötti értékre beállítsuk, ezt aliquot résznek vizes pH papírra való cseppentésével ellenőrizzük. Az oldatot 0 °C-ra lehűtjük keverés közben, és hozzáadunk 3 ml THF-ben oldott AL vegyületet. Az AL vegyület előállításához 55 mg (0,27 mmol) Z vegyületet feloldunk 3 ml THF-ben, és hozzáadunk 0,046 ml (0,27 mmol) dietil-izopropil-amint. A keveréket ezután lehűtjük -15 °C-ra, hozzáadunk 0,033 ml (0,27 mmol) pivaloil-kloridot cseppenként, és az oldatot -15 °C-on 10 percig, majd 0 °C-on 20 percig keverjük. A kapott szuszpenziót ezután THF-ben oldott AJ vegyület oldatához adagoljuk. A kapott keveréket 0 °C-on keverjük, majd hagyjuk 25 °C-ra melegedni 1 éjszaka alatt. 12 óra elteltével 25 °C-on 5%-os vizes NaHCO₃-oldatot adunk hozzá, a keveréket erőteljesen 25 °C-on

1,5 órán át keverjük, majd hozzáadunk 40 ml EtOAc-ot, és a fázisokat elválasztjuk. A vizes fázist további kétszer 10-10 ml EtOAc-tal extraháljuk, a szerves extrakciókat egyesítjük, 20 ml 5%-os vizes NaHCO₃-oldattal, 20 ml 5%-os vizes KHSO₄-oldattal, sóoldattal mossuk, majd Na₂SO₄ felett szárítjuk és betöményítjük. A visszamaradó olajos anyagot szilikagélen kromatografáljuk (35% EtOAc/Hexán), így 98 mg, 83% AK vegyületet nyerünk színtelen hab formájában.

[aln -8,3° (c 0,88, CHCI₃); ¹ H-NMR (CDCI₃) A egység δ 7,28-7,35 (Ph-H m), 7,22 (H-12; m), 6,75 (H-3; ddd, 6,4/6,4/15,4), 6,4 (H-8; d, 15,9), 6,04 (H-7; dd, 8,6/15,9), 5,95 (H-2; d, 15,4), 5,0 (H-5; m), 2,6 (H-4; m), 1,1 (6-Me; d, 6,8); B egység δ 7,22 (H-5, d, 1,5), 7,15 (NH; d, 7,6), 7,05 (H-9; dd, 1,5/8,2),

6,85 (H-8; d, 8,2), 5,0 (H-2; m), 4,8-15 4,68 (CH₂CCI₃; ABq, 12), 3,86 (OMe; s), 3,2 (H-3; m),

3.1 (H-3’; dd, 7,2/14,1); C egység δ 5,0 (NH; m),

3.2 (H₂-3; m), 2,55 (H-2; m), 1,1 (2-Me; d, 7,1); D egység δ 6,12 (NH; m), 4,4 (H-2; m), 1,65 (H-4; m),

1,55 (H-3; m), 1,4 (H-3'; m), 0,86 (4-Me; d, 6,8), 0,81 (5-H; d, 6,8); ¹³C-NMR (CDCI₃) A egység δ

165,8 (1), 138,9 (3), 131,5 (8), 130,4 (7), 128,6 (11/13), 127,4 (12), 126,2 (10/14), 125,8 (2), 76,3 (5), 33,6 (4), 16,6 (6-Me); B egység δ 20 170,2 (1),

154.1 (7), 136,9 (4), 131,2 (5), 128,6 (9), 122,3 (6),

112.2 (8), 94,4 (CCI₃), 74,5 (CH₂CCI₃), 56,1 (OMe),

53,4 (2), 36,6 (3); C egység δ 175,4 (1), 156,3 (BOC CO), 79,5 (OCMe₃), 43,6 (3), 41,3 (2), 15,1 (2-Me); D egység δ 172,6 (1), 51,3 (2), 40,5 (3),

24,5(4) 22,7 (4-Me), 21,5(5).

K121 vegyület mg (0,082 mmol) AK vegyületet feloldunk 3,5 ml AcOH-ban, hozzáadunk 400 mg aktivált cinkport, és a kapott szuszpenziót ultrahanggal 45 percig kezeljük. Ezután a keveréket 25 °C-on még 1,5 órán át keverjük, majd 5 ml CH₂CI₂-nal hígítjuk és celiten szűrjük. A szilárd anyagot további 10 ml CH₂CI₂-nal mossuk, a szűrletet betöményítjük, a visszamaradó anyagot további tisztítás nélkül 3 ml TFA-ban oldjuk, 25 °C-on 1 órán át tartjuk, majd az oldószert vákuumban elpárologtatjuk. A visszamaradó anyagot ismételten CH₂CI₂-ból, majd toluolból betöményítjük addig, amíg színtelen, szilárd anyagot nyerünk. Ezt feloldjuk 3 ml DMF-ben, hozzáadunk 43 mg (0,108 mmol) FDPP-t, majd annyi dietil-izopropil-amint, hogy a pH értékét nedves szűrőpa49

HU 225 041 Β1 pírra való cseppentéssel ellenőrizve 8-9 közötti értékre beállítsuk. Az anyagot ezután 25 °C-on 16 órán át keverjük, majd 40 ml éterrel hígítjuk, kétszer 1-1 ml 5%-os vizes KHSO₄-oldattal, 15 ml 5%-os vizes NaHCO₃-oldattal, majd sóoldattal mossuk, Na₂SO₄ felett szárítjuk, betöményítjük, és a visszamaradó anyagot fordított fázisú HPLC-vel szilikagélen tisztítjuk (Econosil^R, C18, 22x250 mm, CH₃CN/víz=65/35, 6 ml/perc). A t_R=48 percnél lejövő frakciót összegyűjtjük, betöményítjük, így egy amorf szilárd anyagot nyerünk (26 mg, 50%).

[a]_D +46,5° (c 0,81, CHCI°); EIMS m/z 637/639 (M⁺, 1%), 449/451 (2/1), 420 (5), 411/413 (7/5), 227/228 (9/7), 195 (10), 184 (15), 167/168/169 (40/86/29), 155/157 (100/26), 91 (85), 69 (86); HREIMS m/z 637,2864 (C35H44³⁵CIN3O₆

Δ+5,5 mmu); ¹H-NMR A egység δ 7,21-7,35 (Ph-H₅; m), 6,75 (H-3; ddd, 4,2/10,8/16), 6,4 (H-8; d, 16), 6,04 (H-7; dd, 8,8/16), 5,75 (H-2; d, 16), 5,1 (H-5; m), 2,55 (H-4; m; H-6; m), 2,35 (H-4’; m); B egység δ 7,18 (H-5; d, 2), 7,05 (H-9; dd, 2,0/8,3), 6,85 (H-8; d, 8,3), 5,7 (NH; d, 7,2),

4.7 (H-2; ddd, 4,9/7,2/7,7), 3,86 (OMe; s), 3,1 (H-3; dd, 4,9/14,4), 3,0 (H-3’; dd, 7,7/14,4); C egység δ 7,25 (NH; m), 3,5 (H-3; m), 3,4 (H-3’; m),

2,55 (H-2; m), 1,2 (2-Me; d, 7,2); D egység δ 5,8 (NH; d, 7,2), 4,4 (H₂; m), 1,55 (H-4; m), 1,38 (H₂-3; dd, 7,2/7,7), 0,76 (4-Me; d, 6,6), 0,74 (H-5; d, 6,6); ¹³C-NMR (CDCI₃) A egység δ 165,1 (1),

141,9 (3), 136,8 (9), 131,7 (8), 130,2 (7), 128,5 (11/13), 127,3 (14), 126,1 (10/12), 125,1 (2), 16,5 (5), 42,3 (6), 36,3 (4), 17,2 (6-Me); B egység δ 171,0 (1), 154,1 (7), 130,8 (5), 129,6 (4), 128,4 (9), (122,5 (6), 112,4 (8), 56,2 (OMe), 54,4 (2), 35,4 (3); C egység δ 175,8 (1), 41,0 (3), 38,6 (2), 14,8 (2-Me); D egység δ 173,2 (1), 51,1 (2), 40,9 (3),

24.7 (4),23,4 (4-Me), 21,5 (5).

K122 és K123 vegyületek mg (0,032 mmol) K121 vegyületet feloldunk

1,3 ml vízmentes CH₂CI₂-ban, lehűtjük 0 °C-ra, hozzáadunk egy adagban 17 mg (0,1 mmol, 99%) mCPBA-t, majd 0,7 ml vízmentes toluolt, és a kapott keveréket 25 °C-on 72 órán át keverjük. Az oldószert ezután vákuumban eltávolítjuk, a visszamaradó szilárd anyagot fordított fázisú HPLC-vel tisztítjuk (EconosilR C18, 22x250 mm, CH₃CN/víz=65/35, 6 ml/perc). t_R=37,5 percnél eluáljuk a K122 vegyületet (9 mg, 44%) és t_R=40 percnél a 123 vegyületet (5 mg, 23%).

K122 vegyület [a]_D +35,0 (c 1, CHCI₃); EIMS m/z 653/655 (1,6/0,7, M⁺), 411/413 (20/5), 280/282 (39/19), 252/254 (13/8), 223/225/227 (19/10/23), 211/213 (18/6), 195/197 (51/13), 184/186 (49/11), 176/168/169 (20/16/21), 155/156/157 (95/59/42), 139/141/143 (60/40/24), 135/135 (30/11), 129/131 (40/29), 91 (100); HREIMS m/z 653,2906 (C35H44³⁵CIN3O₇Δ-3,8 mmu); ¹H-NMR (d₆-aceton) A egység δ 6,65 (H-3; ddd, 38/11,0/15,0), 5,9 (H-2; dd, 1,9/15,0),

5,25 (H-5; ddd, 1,9/4,9/11,5), 3,82 (H-8; d, 2,0),

3,0 (H-7; dd, 2,0/7,7), 2,65 (H-4; dddd, 2,0/2,0/3,8/14,5), 2,4 (H-4’; ddd, 11,0/11,5/14,5),

1,85 (H₆; dqd, 4,9/7,4/7,7), 1,1 (6-Me; d, 6,9); B egység δ 7,45 (NH; d, 7,9), 7,22 (H-9; dd, 2,0/8,4), 7,0 (H-8; d, 8,4), 4,45 (H-2; ddd, 3,6/7,9/11,2),

3,84 (OMe; s), 3,2 (H-3; dd, 3,6/14,5), 2,75 (H-3’; dd, 11,2/14,5); C egység δ 7,8 (NH; d, 8,8), 3,65 (H-3; ddd, 3,3/8,8/13,2), 3,1 (H-3’; ddd, 2,1/2,1/13,2), 2,55 (H-2; m); D egység δ 7,35 (NH; d, 8,1), 4,25 (H-2; ddd, 4,8/8,1/10,8), 1,65 (H-4; m), 1,45 (H-3; ddd, 5,1/10,8/13,7), 1,35 (H-3’; 4,8/9,0/13,7), 0,8 (4-Mel H-5; d, 6,5); ¹³C-NMR A egység δ 165,9 (1), 140,8(3), 15 138,6 (9), 129,4 (11/13), 129,2 (12), 126,7 (2), 126,6 (10/14), 76,0 (5), 63,9 (7), 59,3 (8), 41,2 (6), 37,7 (4), 13,9 (6-Me); B egység δ 171,9 (1), 154,6 (7), 132,5 (4),

131.4 (5), 129,0 (9), 122,4 (6), 113,3 (8), 56,9 (2),

65.4 (OMe), 36,4 (3); C egység δ 177,2 (1),

41,3 (3), 38,9 (2), 15,7 (2-Me); D egység δ 174,2 (1), 51,7 (2), 40,6 (3), 25,3 (4), 23,1 (4-Me), 21,5 (5).

K123 vegyület [a]_D +25,2° (c 0,58, CHCI₃); ¹H-NMR (CDCI₃) A egység δ 7,21-7,35 (Ph-H₅; m), 6,75 (H-3; ddd, 4,1/10,9/14,1), 5,85 (H-2; dd, 1,4/15,2), 5,25 (H-5; m), 3,6 (H-8; d, 2,0), 2,9 (H-7; dd, 2,0/7,8), 2,7 (H-4; m), 2,55 (H-4’; m), 1,75 (H-6; m), 1,05 (6-Me; d, 7,1), B egység δ 7,18 (H-5; d, 2,0), 7,05 (H-9; dd, 2,0, 8,5), 6,85 (H-8; d, 8,5), 5,95 (NH; d,

7,7), 4,7 (H-2; ddd, 4,9/7,7/8,1), 3,86 (OMe; s),

3,15 (H-3; dd, 4,9/14,5), 3,05 (H-3’; dd, 8,1/14,5); C egység δ 7,25 (NH; m), 3,55 (H-3; ddd, 4,6/8,7/13,3), 3,15 (H-3’; ddd, 3,0/3,1/13,3), 2,55 (H-2; m), 1,2 (2-Me; d, 7,3); D egység δ 6,0 (NH; d,

8,2), 4,45 (H-2; m), 1,6 (H-4; m), 1,55 (H₂-3; m), 0,88 (4-Me; d, 7,1), 0,87 (5-H; d, 7,1).

K127 vegyület mg (0,075 mmol) K122 vegyületet feloldunk 2 ml

CHCI₃-ban, lehűtjük nitrogénatmoszférában -40 °C-ra, hozzáadunk cseppenként 0,02 ml (0,157 mmol) trimetil-szilil-kloridot, és a kapott keveréket -40 °C-on 1 órán át keverjük. Az oldószert ezután elpárologtatjuk, a visszamaradó anyagot szilikagélen szűrjük, 15% EtOH/dietil-éter eleggyel, így 4 mg (77%) K127 vegyületet nyerünk.

[a]_D +28,6° (c 1,16, CHCI₃); EIMS m/z 653 (0,5; M+-HCI); 411 (2); 182/184 (22/26); 153/155 (68/40); 135 (31); 107/108/109 (55/22/31); 91/92 (100/30); 79/81 (45/35); HREIMS m/z 653, 2841 (C₃₅H₄₄ ³⁵CIN3O7 Δ2,6 mmu); ¹H-NMR (CHCI3) A egység δ 7,3-7,4 (Ph-H_s; m), 6,75 (H-3; ddd, 4,2/10,9/15,0), 5,8 (H-2; dd, 1,5/15,0), 5,2 (H-5; ddd, 1,9/9,9/9,9), 4,65 (H-8; d, 9,6), 4,0 (H-7; br,

9,6), 2,65 (H-4; m), 2,48 (H-6; m), 2,35 (H-4’; ddd, 10,9/11,2/14,5), 1,02 (6-Me; d, 7,0); B egység δ 7,18 (H-5; d, 2,2), 7,05 (H-9; dd, 2,2/8,6), 6,85 (H-8; d, 8,6), 6,05 (NH; d, 7,7), 4,65 (H-2; ddd, 4,7/7,7/8,6), 3,86 (OMe; s), 3,15 (H-3; dd, 4,7/14,6), 2,9 (H-3’; dd, 8,6/14,6); C egység δ 7,25 (NH; brdd, 4,1/5,7), 3,4 (H₂-3; m), 2,55 (H-2; m),

HU 225 041 Β1

1.15 (2-Me; d, 7,5); D egység δ 6,2 (NH; d, 8,2),

4,45 (H-2; m), 1,65 (H-4; m), 1,55 (H2-3; m), 0,93 (4-Me; d, 6,8), 0,92 (5-Me; d, 6,8); ¹³C-NMR (CDCIa) A egység δ 165,4 (1), 142,4 (3), 138,8 (9),

128.8 (11/13), 128,2 (12), 128,0 (10/14), 124,0 (2),

75,6 (5), 73,9 (7), 62,1 (8), 38,6 (6), 36,4 (4), 8,5 (6-Me); B egység δ 171,1 (1), 154,0 (7), 130,8 (5),

129.8 (4), 128,2 (9), 122,4 (6), 112,4 (8), 56,1 (OMe), 15 54,5 (2), 35,4 (3); C egység δ 175,8 (1),

41.1 (3), 38,8 (2), 14,8 (2-Me); D egység δ 173,2 (1), 51,1 (2), 40,9 (3), 25,0 (4), 22,8 (5), 21,8 (4-Me).

21. példa

K128és K130-134 vegyületek előállítása

K128, K130 és K131 vegyületek

5,7 mg K117/118=2/1 keveréket feloldunk 0,5 ml

CHCI₃-ban, hozzáadunk 5 μΙ trimetil-szilil-kloridot, és -60 °C-on 3 órán át tartjuk. A kapott keveréket fordított fázisú HPLC-vel K128, K130 és K131 vegyületekre választjuk szét. A normálfázisú HPLC-vel való tisztítás után 2,1 mg tiszta K128 vegyületet nyerünk.

K128 vegyület spektroszkópiai adatai [a]_D +51,4° (CHCI₃, c 0,4); IR v_max 3408, 3281, 2958,

1747, 1731, 1668, 1538, 1505, 1258, 1179, 1067, 910, 733 cm^-1; EIMS m/z (relatív intenzitás %) 668 (0,3, M⁺HCI), 500 (1,2), 445 (4,2), 407 (6), 318 (12), 214 (17), 240 (33), 199 (29), 155 (31), 141 (23), 135 (15), 109 (100); nagy felbontású EIMS 668,2851 (a C₃₆H45CIN₂O₈ képletű vegyületre számítva, Δ+1,3 mmu, M⁺-HCI), ¹H-NMR (500 MHz) δ A egység A 7,27 (10-H/14-H, d, 8,0), 7,18 (11-H/13-H, d, 8,0), 6,69 (3-H, ddd, 15,2, 9,6, 5,4), 5,79 (2-H, dd, 15,2, 0,8), 5,10 (5-H, ddd, 11,0, 8,4,

1.7) , 4,63 (8-H, d, 9,6), 3,99 (7-H, bd, 9,6), 2,67 (4-H, bdd, 5,4, 14,2), 2,49 (6-H, dqd, 7,6, 7,6, 1,7), 2,36 (4-H’, td, 10,7, -14,2), 2,35 (12-Me, s), 1,04 (6-CH₃, d, 7,1); B egység 7,23 (5-H, d, 2,1), 7,09 (9-H, dd, 8,5, 2,1), 6,84 (8-H, d, 8,5), 5,83 (NH, d, 8,6), 4,80 (2-H, ddd, 8,2, 7,5, 5,7), 3,87 (OMe, s),

3.16 (3-H; dd, 5,6, 14,4), 3,00 (3-H’, dd, 7,5, -14,4); C egység 6,94 (NH, bt, 5,8), 3,53 (3-H, ddd,

5,4, 4,1, 5 13,5), 3,24 (3-H’, ddd, 6,9, 6,6, -13,5),

2,74 (2-H, m), 1,22 (2-Me; d, 7,3); D egység 4,92 (2-H, dd, 9,9, 3,2), 1,75 (3-H/4-H; m), 1,47 (3-H’, m), 0,94 (5-H, d, 6,4), 0,92 (4-MeH, d, 6,4), ¹³C-NMR (125 MHz) δ A egység 165,6 (1), 141,6 (3), 139,2 (12), 135,3 (9), 129,7 (10/14), 127,9 (11/13), 125,2 (2), 76,4 (5), 74,0 (7), 62,0 (8), 38,4 (6), 36,3 (4), 21,1 (12-Me), 8,6 (6-Me); B egység

171.1 (1), 153,9 (7), 131,0 (5), 130,0 (4), 128,4 (9),

122,4 (6), 112,2 (8), 56,1 (OMe), 53,6 (2), 35,0 (3); C egység 175,3 (1), 41,3 (3), 38,3 (2), 14,0 (2-Me); D egység 170,6 (1), 11,3 (2), 39,7 (3), 24,7 (4), 23,1 (5), 21,5 (4-Me).

K130 vegyület spektroszkópiai adatai ¹H-NMR (300 MHz) δ A egység 7,27 (10-H/14-H, d,

7.8) , 7,16 (11-H/13-H, d, 7,8), 6,69 (3-H, ddd, 15,1, 9,6, 5,2), 5,75 (2-H, d, 15,1), 5,40 (5-H, ddd,

10,6, 3,0, 1,8), 15 5,05 (8-H, d, 5,9), 3,74 (1-H, ddd, 10,5, 5,4, 5,2), 2,59 (4-H, m), 2,55 (6-H, m), 2,37 (4-H’, m), 2,33 (12-Me, s), 1,06 (6-CH₃ d,

6,9); B egység 7,21 (5-H, bs), 7,07 (9-H, bd, 8,4), 6,83 (8-H, d, 8,4), 5,77 (NH, d, 6,6), 4,80 (2-H, m), 3,87 (OMe, s), 3,12 (3-H; dd, 5,6, -14,4), 3,02 (3-H', dd, 7,2, -14,4); C egység 7,00 (NH, bt, 6,5), 3,47 (3-H, ddd, 4,3, 4,0, -13,3), 3,24 (3-H’, ddd,

6.7, 6,6, -13,3), 2,72 (2-H, m), 1,23 (2-Me; d, 7,3); D egység 4,80 (2-H, m), 1,70 (3-H/4-H; m), 1,42 (3-H’, ddd, 7,9, 4,7, -13,0), 0,91 (5-H, d, 6,4), 0,86 (4-Me-H, d, 6,4), ¹³C-NMR (125 MHz) A egység

165.5 (1), 142,1 (3), 138,8 (12), 135,2 (9), 129,5 (10/14), 127,5 (11/13), 124,8 (2), 77,8 (5), 74,2 (7),

67,2 (8), 39,4 (6), 34,6 (4), 21,1 (12-Me), 12,3 (6-Me); B egység 171,0 (1), 153,9 (7), 131,0 (5),

129.5 (4), 128,4 (9), 112,2 (8), 56,1 (OMe), 53,6 (2), 35,0 (3)’ C egység 175,6 (1), 41,1 25 (3), 38,3 (2),

14,1 (2-Me); D egység 170,3 (1), 71,5 (2), 39,5 (3),

24,6 (4),22,1 (5), 21,6 (4-Me).

K131 vegyület spektroszkópiai adatai ¹H-NMR (300 MHz) δ A egység 7,18 (10-H/11-H/13-H/14-H, s), 6,64 (3-H, ddd, 15,2,

9.8, 5,4), 5,70 (2-H, d, 15,2), 5,06 (5-H, bt, 9,1),

4,86 (8-H, d, 9,7), 4,06 (7-H, bd, 9,7), 2,54 (4-H, bdd, 5,2, -14,2), 2,37 (12-Me, s), 2,13 (4-H’, m),

1,85 (6-H, m), 0,97 (6-CH₃ d, 6,6); B egység 7,21 (5-H, d, 2,1), 7,07 (9-H, dd, 8,4, 2,1), 6,83 (8-H, d,

8.4) , 5,66 (NH, d, 10,0), 4,79 (2-H, bq, 7,7), 3,87 (OMe, s), 3,14 (3-H; dd, 5,6, 14,4), 3,02 (3-H’, dd,

7,2, -14,4); C egység 6,93 (NH, bt, 6,2), 3,51 (3-H, ddd, 5,0, 4,2, 13,5), 3,27 (3-H’, ddd, 6,7, 6,4, -13,5), 2,73 (2-H, m), 1,23 (2-Me; d, 7,3); D egység 4,86 (2-H, dd, 9,7, 3,4), 1,75 (3-H/4-H; m),

1,46 (3-H’, m), 0,94 (5-H, d, 6,0), 0,93 (4-MeH, d,

6.4) .

K132, K133 és K134 vegyületek

K124 vegyület és a Z-izomer keverékét (134 mg,

0,199 mmol) feloldjuk 6 ml diklór-metánban, és 103 mg (0,598 mmol) m-klór-perbenzoesavval reagáltatjuk szobahőmérsékleten 36 órán át. Ezután hozzáadunk 10 ml foszfátpuffert (pH=8) a klór-benzoesav eltávolítására, amely a reakció során képződik. 30 perc elteltével a vizes fázist 50 μΙ dimetil-szulfiddal helyettesítjük, és 10 ml friss foszfátpuffert adagolunk. A keverést további 30 percen át folytatjuk, majd a szerves fázist elválasztjuk, az oldószert elpárologtatjuk, és a visszamaradó anyagot vákuumban 12 órán át szárítjuk. A nyerstermék túlnyomórészt K125 és K126 vegyület, ezt feloldjuk 5 ml CHCI₃-ban, és 50 μΙ trimetil-szilil-kloriddal kezeljük -60 °C-on 3 órán át. Az oldószert ezután eltávolítjuk, a visszamaradó anyagot fordított fázisú HPLC-vel tisztítjuk (Econosil ODS, szilikagél, 250 mm*22 mm, 35% H₂O/CH₃CN, 6 ml/perc), így nyerjük a K134 vegyületet (t_R=52,5 perc, 9 mg, 6%), a részlegesen tiszta K133 vegyületet (t_R=61 perc, 32 mg, 22%) és a tiszta K132 vegyületet (t_R=67,5 perc, 72 mg). További tisztítást végzünk normálfázisú HPLC-vel (Econosil szilikagél, 250*10 mg, 56% EtOAc/hexán, 3 ml/perc), így nyerjük a tiszta K132 vegyületet (65 mg, 45%).

HU 225 041 Β1

K132 vegyület spektroszkópiai adatai [a]_D +60,1° (CHCI₃, c=1,1); EIMS m/z (relatív intenzitás

%) 688 (1,6, M⁺HCI), 412 (10), 261 (11), 195 (57),

184 (28), 165 (28), 155 (92), 135 (85); nagy felbontású EIMS m/z 688,23563 (a C₃₅H42Cl2N₂O₈ képletű vegyületre számítva, Δ-3,8 mmu, M⁺-HCI), ¹H-NMR (500 MHz) δ A egység 7,33 (10—H/11—H/13—H/14—H, s), 6,67 (3-H, ddd, 15,2,

9,9, 5,1), 5,79 (2-H, dd, 15,2, 1,1), 5,10 (5-H, ddd, 11,1, 8,1, 1,5), 4,63 (8-H, d, 9,5), 3,98 (1-H, bd,

9.3) , 2,62 (4-H, bdd, 5,1, -14,2), 2,47 (6-H, dqd,

7,4, 7,4, 1,5), 2,40 (4-H’, td, 10,8, -14,2), 2,35 (12-Me, s), 1,02 (6-CH₃, d, 7,0); B egység 7,21 (5-H, d, 2,1), 7,06 (9-H, dd, 8,4, 2,1), 6,82 (8-H, d,

8.4) , 6,04 (NH, d, 8,5), 4,74 (2-H, td, 8,0, 5,4), 3,85 (OMe, s), 3,13 (3-H; dd, 5,3, -14,4), 2,95 (3-H’, dd,

7,8, -14,4); C egység 7,00 (NH, bt, 30 5,9), 3,48 (3-H, ddd, 5,0, 3,9, -13,4), 3,23 (3-H’, ddd, 6,6,

6,3, -13,4), 2,71 (2-H, m), 1,21 (2-Me; d, 7,2); D egység 4,91 (2-H, dd, 9,7, 3,4), 1,75 (3-H/4-H; m), 1,45 (3-H’, m), 0,92 (5-H, d, 6,6), 0,91 (4-Me-H, d, 6,6), ¹³C-NMR (125 MHz) δ A egység 165,7 (1),

141.6 (3), 137,3 (12), 134,8 (9), 129,4 (11/13),

129,0 (10/14), 125,2 (2), 76,4 (5), 74,0 (1), 61,4 (8),

38,4 (6), 36,2 (4), 8,7 (6-Me); B egység 171,1 (1),

153,9 (7), 131,0 (5), 130,1 (4), 128,4 (9), 122,3 (6),

112.2 (8), 56,1 (OMe), 53,8 (2), 34,9 (3); C egység

175.3 (1), 41,0 (3), 38,1 (2), 14,1 (2-Me); D egység

170.6 (1), 71,3 (2), 39,7 (3), 24,7 (4), 23,1 (5), 21,5 (4-Me).

K134 vegyület spektroszkópiai adatai

Az ¹H-NMR-spektrum hasonló a K27 vegyületéhez, kivéve, hogy a 7,31-nál (10/14) és 7,36-7,40 (11/12/13) lévő két fenilproton multiplett helyén két dublett van, a 7,26 (10/14) és 7,36 (11/13) értéknél a p-klór-fenil-protonokra.

22. példa

Szerkezetaktivitás-összefüggés (SÁR) és in vivő értékelés

Vizsgáltuk a Κ1, K3 és K8 vegyületek, valamint az új kriptoficinek citotoxicitását humán tumor KB sejtvonal és LoVo-val szemben, a kapott adatokat a 6. táblázatban foglaljuk össze. A K51 és K3 vegyületek összemérhető citotoxicitást mutattak (IC₅₀ 3,5-5,8 nmol). A K52 vegyület azonban kevésbé citotoxikus (IC₅₀-értéke 43-70 pmol), mint a K1 vegyület (IC₅₀ 9-29 pmol), és a K55 vegyület kevésbé citotoxikus (33-47 pmol), mint a K8 vegyület (IC₅₀ 9-19 pmol). A K177, K122, K125, K127, K128 és K132 vegyületek citotoxicitása (IC₅₀) összemérhető a Κ1, K8, K52 és K55 vegyietekével, azonban az adatok nem jelentenek további túl sokat mondó összehasonlítást.

A K52 vegyület hatásos in vivő, de durván háromszoros dózis szükséges, mint a K1 vegyületből. A K52 vegyület in vivő aktivitását öt szilárd egéreredetű tumorral és három humán eredetű szilárd tumorral szemben a 7. táblázatban foglaljuk össze. A K55 vegyület in vivő hatásos, de ugyancsak háromszoros dózis szükséges belőle, mint a K8 vegyületből. A K55 vegyület in vivő aktivitását hat egéreredetű szilárd tumorral és négy humán eredetű szilárd tumorral szemben a

8. táblázatban foglaljuk össze. Az in vivő adatok korrelációban vannak az in vitro adatokkal.

A K117, K125, K128 és K132 vegyületek in vivő aktívak egéreredetü pankreatikus adenocarcinomával szemben (Panc 03). A K117 és K128 vegyületek hatásosabbak, azaz kisebb dózis szükséges, mint a K1 és K8 vegyületek esetén, míg a K125 és K132 vegyület kevésbé hatásos, azaz nagyobb dózis szükséges ezekből, mint a K1 és K8 vegyületekből. Az adatokat a

9. táblázatban foglaljuk össze.

A 42%-nál kisebb T/C értékek esetén tekintjük a vegyületeket hatásosnak az NCI-szabványok szerint; a 10%-nál kisebb T/C értékek esetén a vegyület kiváló aktivitású és potenciális klinikai aktivitású az NCI-szabványok szerint. A bruttó lóg pusztulás értékeket T-C/3,2 Td összefüggés alapján határozzuk meg, ahol T jelentése az átlagos idő napokban, amíg a kezelt csoportnál a tumor a 750 mg értéket eléri, C jelentése az átlagos idő napokban, amíg a kontrollcsoportnál a tumor a 750 mg értéket eléri, és Td jelentése a kétszeres tumortérfogat eléréséhez szükséges idő (T. H. Corbett és munkatársai, Cytotoxic Anticancer Drugs, Models and Concepts fór Drug Discovery and Development, 35-87; Kluwer: Norwell, 1992). Ha a bruttó lóg pusztulás érték >2,8, 2-2,8, 1,3-1,9, 0,7-1,2, illetve <0,7, az 5-20 napos kezelési idő alatt azt ++++, +++, ++, + és - (inaktív) jelöléssel jelöljük. A +++-++++ aktivitási intervallumot klinikai aktivitásnak jelezzük, ez szükséges a 100-300 mg tömegű egerekbe transzplantált szilárd tumorok részleges vagy teljes visszafejlesztéséhez. A K52 vegyület esetén a T/C érték 0-14% egértumorok és 4,1-16 humán tumorok esetén, míg a bruttó lóg pusztulás érték 1,1-2 egértumorok és 0-3,2 humán tumorok esetén. A K1 vegyület esetén a T/C érték 0-27%, és a lóg pusztulás érték <1-2 közötti érték. A K55 vegyület esetén a T/C érték 0-4,4% és a lóg pusztulás érték 2,1 ->0,4 minden vizsgálatnál, kivéve egyet, a Colon 26 kísérletet, amelynél a bruttó lóg pusztulás érték 1,2. A K8 vegyület esetén a T/C érték leginkább 0% és a lóg pusztulás érték >2,8, mint ahogy az a 10. táblázatból kitűnik. A K117 és K125 vegyieteknél a T/C érték és az átlagos lóg pusztulási érték összehasonlítható más epoxid típusú kriptoficinek, úgymint a K1 és K52 vegyületek megfelelő értékeivel, míg a K128 és K132 vegyületeknél a T/C és bruttó lóg pusztulás értékek összemérhetők más kloroficin típusú kriptoficinekével, így a K8 és K55 vegyületek értékeivel.

Minden publikáció és szabadalmi leírás, amelyet említünk a leírásban, de egyedileg és konkrétan nem hivatkozunk rájuk, olyannak tekintendők, mintha konkrét hivatkozással utalnánk rájuk.

Bár a talámány szerinti megoldást részletesen bizonyos konkrét példákon keresztül mutattuk be, nyilvánvaló a szakember számára, hogy ezek csak a jobb érthetőséget célozzák, és ezekkel kapcsolatos bizonyos változtatások és módosítások nyilvánvalóan szintén a találmány oltalmi körébe tartoznak.

HU 225 041 Β1

1. táblázat

Citotoxicitási adatok kriptoficinekre és félszintetikus analógokra, Corbett/Valeriote vizsgálati adatok az 5-fluoruracil, etopozid (VP-16) és taxol vegyületekkel az összehasonlítás céljára

Citotoxicitás típusa (differenciák a zónaegységekben)
Vegyületek száma	pg/lemez	Corbett- vizsgálat³	pg/lemez	Valeriote- vizsgálat^b	KB IC₅₀ng/ml	LoVo IC₅₀ng/ml
1	12,5	E/T(>400)^c		N	0,005	0,003
2	25	E/T(>400)^c		N	0,007	0,0002
3	25	E/T(>400)^c		N	0,3	0,5
4	20	E/T(>400)^c		N	1,3	0,5
5	2,9	E/T(>600)^c		N	0,02	0,02
6	250	I			>100	>100
7					>750	>480
8	30	E/T(>500)°	30	N	0,0002	0,01
9					15	nincs meghatározva
10					>100	>100
12					>100	>100
14					1,8	3
5-FU	2,5	M/T(>400)^d		2,5	LL (>400)
VP-16	5	L(350), T(530)^d		5	LL (260)
Taxol	0,2	M/HIT(>400)^d

^aL=leukémia szelektív (például Z_L1210-Z_C38 és Z_L1210-Z_H8>250zu)

M=egér-szilárdtumor szelektív (például Z₃₈-Z_L121o>250zu)

H=humán szilárd szelektív (például Z_H3-Z_L121Q>250zu)

E=azonos citotoxicitás leukémia és szilárdtumor-sejtvonallal szemben (inhibícrós zóna >250 zu)

T=tumor szelektív (például Z_L1210-Z_LML,Z_c38-Z_LML és Z_H8-Z_LML>250zu) l=inaktív (inhibíciós zóna <250) ^bN=nem szelektív tumorral (leukémia) és normálsejtvonallal (CFU-GM) szemben

LL=limfocitikus leukémia szelektív (Z_L1210-Z_CFU._GM>250zu)

ML=akut myelogenous leukémia ^c szelektív hatóanyag-szenzitív és hatóanyag-rezisztens sejtvonalakkal szemben (Z_C36-Z_LML, Z_M17-Z_LML és Z_H18-Z_LML) ^d szelektív csak hatóanyag-szenzitív sejtvonalakkal szemben.

2. táblázat

In vitro citotoxicitási adatok kriptoficinekre

Kriptoficinvegyület száma	KBIC₅₀ ng/ml	LoVo IC₅₀ ng/ml	SKOV3 IC₅₀ ng/ml
1	0,0025	0,001	0,026
2	0,023	0,021	0,18
3	1,8	0,6	2,8
4	6	2,5	21
5	12	2	7,4
8	0,01	0,0022	0,15
12	18	3
15			12
16	0,08	0,02	0,64
17	4,7	5,9	11
18	15	4,5	23

HU 225 041 Β1

2. táblázat (folytatás)

Kriptoficinvegyület száma	KBIC₅q ng/ml	LoVo IC₅₀ ng/ml	SKOV3 IC₅₀ ng/ml
19	9,8	5,9	41
21	0,01	0,0003	0,029
23	0,89	0,4	1,7
24	0,12	0,095	0,3
26	19	9,8	95
28	1,5	0,75	6,1
29	1	0,49	3,4
30	11	8	21
31	0,53	0,062	1,9
35	0,055	0,01	0,092
40	9,0	1,0	1,7
43	0,72	0,8	1,1
45	2,3	2,4	1,6
49	1,4	1,9	1,1
50	0,17	0,17	0,2
54	0,80	2,2	2,2

3. táblázat

K1 vegyület in vivő aktivitása

Kis. #	Se. tumor	Iv. injekció #	Összdózis mg/kg	%-os testtömegveszteség Nadír	T/C	Lóg pusztulás	Kezelés
1560	Colon 38	8	10,3	Gain	6%	1,5	0/5
1694	Panc 03	8	16,0	Gain	0%	2,0	0/5
1636	Colon 51	7	28,1	-11%	7%	1,3	0/5
1720	Mami 16/C	5	13,2	-1%	5%	1,4	0/5
1733	Mám 16/Taxol	5	16,5	0%	2%	1,8	0/4
1833	M17/0(Adr. Sens.)	5	5,4	-10%	23%	<1	0/5
1749	Panc 02	5	11,0	-5%	20%	1,1	0/5
1596	Humán Sm Cell. L. DMS273 SCID	6	7,3	0%	27%	<1	0/5
1806	MX-1 Humán Breast	8	12	-3%	3%	2,0	0/5
1823	H125 Humán Adenosq-lung	8	14,4	-15% 1/5 halálozás	9%	1,1	0/5
1841	LNCaP Humán Prostate	6	6,5	-6%	26%	<1	015

4. táblázat

Kriptoficinanalógok in vivő aktivitása

Kis. #	Szer	Se. tumor	Iv. injekció #	Összdózis mg/kg	%-os testtömegveszteség Nadír	T/C	Lóg pusztulás	Kezelés s
1813	K-2	P03	10	37	-2%	44%	<1	0/5
1843	K-3	P03	4	28/5	-9%	54%	<1	0/5
1769	K-5	C38	15	45	-2%	>100%	nincs	0/5
1825	K-8	P03	11	106	-6%	4%	4,6	0/5

HU 225 041 Β1

4. táblázat (folytatás)

Kis. #	Szer	Se. tumor	Iv. injekció #	Összdózis mg/kg	%-os testtömegveszteség Nadír	T/C	Lóg pusztulás	Kezelés s
1885	K-8	Mám 16/C	7	21,3	-4,5%	6%	2,5	0/5
1887 B	K-8	C38	6	30	-2%	0%	2,8	1/5
1900	K-8	Colon 51	9	67,5	-1%	7%	1,8	0/5
1843	K-15	P03	5	18	-7%	83%	nincs	0/5
1878	K-16	P03	9	82	-1%	89%	nincs	0/5
1813	K-21	P03	9	27	-11% (I/5 halálozás)	61%	nincs	0/5
1843	K-35	P03	7	23	-2%	11%	1,3	0/5

5. táblázat

Antimitotikus szerek citotoxicitása SKOV3 és SKVLB1 sejtekkel szemben

A sejteket különböző koncentrációkban kezeltük a megadott vegyületekkel 48 órán át. Meghatároztuk az eljárási részben korábban leírt módszer szerint a sejtek számát és az IC₅₀-értékeket mindegyik vegyületre. A megadott értékek átlagérték +SEM értéket jelentenek három kísérletre vonatkozóan.

Sejtvonal
Vegyület	SKOV3	SKVLB1	Rezisztenciafaktor
	IC₅₀ (nmol)
Vinblasztin	0,35±0,25	4200±1700	12,000
Taxol	1±0,4	8000±2000	8,000
Kriptoficinek	0,007±0,002	0,60±0,19	86

6. táblázat

In vitro citotoxicitási adatok kriptoficinekre

Kriptoficin száma	KB IC₅₀ nmol	LoVo IC₅₀ nmol
1	0,0092	0,0104
3	3,1-4,6	1,9-5,8
8	0,019	0,0091
51	3,5	5,2
52	0,043	0,070
53	4,2	5,5
55	0,033	0,047
57	0,06	0,21
58	0,048	0,20
61	21	15
81	5,5	5,7
82	310	45
90	0,34	030
91	30	34
97	3,6	5,7
110	4,6	5,3
111	4,8	3,2

HU 225 041 Β1

6. táblázat (folytatás)

Kriptoficin száma	KB IC₅₀ nmol	LoVo IC₅₀ nmol
112	5,4	6,2
115	0,039	0,048
117	0,036	001
118	23	1,2
119	4,4	6,1
120	4,6	6,4
122	0,021	6,9
¹²⁵	0,05	0,006
127	0,176	0,075
128	0,023	2,5
132	0,082	0,037

7. táblázat

K52 vegyület in vivő aktivitási adatainak összefoglalása

Kísérlet #	Se. tumor	Összdó- zis mg/kg	# injekció	%-os testtö- meg- vesztés	T/C %	Parciális reg- resszió	Komplett regresszió	Logio tumor- sejt- pusztu- lás	Tumor- mentes kezelés	Tumor- mentes- ség napja	Aktivitás
Humán tumorok
2069*	H116 oszlop (Upstaged)	30	4	-6,3%	4,1	2/5	0/5	2,4	0/5	84	+++
2072*	LNCaP Prostate (Upstaged)	48	8	-4,8%	6,9	5/5	1/5	3,2	0/5	66	++++
2075*	G1b/Panc	48	9	-2,3%	16	-	-	nincs	0/5	68	-
2087*	H125 Lung	Injekció folyamatban
Egértumorok
2063	Mám 17/Adr	24	12	-4,7%	10	-	-	1,6	0/5	18	++
2065	Colon 26/AO	64	10	-14,0%	14	-	-	1,1	0/5	24	+
2068*	Colon 38 (Upstaged)	55	8	-22%	0	1/5	1/5	1,6	0/5	95	++
2080*	Mám 16/C	30	3	-1,6%	5	-	-	1,2	1/5	59	++
2082	Mám 16/C/Adr	36	4	0%	2	-	-	2	0/5	22	+++
2088*	Panc 02	Injekció folyamatban

‘folyamatban

8. táblázat

K55 vegyület in vivő aktivitásának összefoglalása

Kísérlet #	Se. tumor	Összdó- zis mg/kg	# injekció	%-os testtö- meg- vesztés	T/C %	Parciális reg- resszió	Komplett regresszió	^L°g io tumorsejtpusztulás	Tumor- mentes kezelés	Tumor- mentes- ség napja	Aktivitás
Humán tumor
2066**	TSU Prostate (Upstaged)	298,5	10	-8,1%	0	5/5	5/5	4,0	2/5	d94	++++

HU 225 041 Β1

8. táblázat (folytatás)

Kísérlet #	Se. tumor	Összdó- zis mg/kg	# injekció	%-os testtö- meg- vesztés	T/C %	Parciális reg- resszió	Komplett regresszió	Log-io tumor- sejt- pusztu- lás	Tumor- mentes kezelés	Tumor- mentes- ség napja	Aktivitás
2069“	H116 Colon (Upstaged)	315* 157,5	7 7	-10,4% -7,6%	0 8	4/5 4/5	3/5 0/5	6,3 3,6	2/5 0/5	d84 d84	++++ ++++
2072“ τ	LNCaP Prostate (Upstaged)	300 200	12 5	-3,1% -7,7%	0 0	5/5 4/5	5/5 3/5	5,9 6,0	3/5 0/5	d77 d77	++++ ++++
2075“	G1b Panc	320	8	0,0%	4,4	-	-	>2,0	1/5	d68	+++
2087	H125 Lung
Egértumor
2064“	MaM 16/C	144	10	-7,5%	0	-	-	3,9	0/5	d92	++++
2065	Colon 26	260	10	-2%	0	-	-	1,2	0/5	d24	+
2068	Colon 38 (Upstaged)	237	8	-13%	0	5/5	4/5	4,7	0/5	d95	++++
2070“ 4- ;	Panc 03 τ	402 270 180	6 6 4	-6,0% -5,0% -0,8%	0 0 0	-	-	>4,5 >4,5 >4,5	5/5 4/5 4/5	d84 d84 d84	++++ ++++
2071	Mám 17/Adr	180	6	—4,7%	0	-	-	2,1	0/5	d 18	+++
2082	MaM 16/C/Adr	180	6	-4,7%	0			2,4	0/5	d22	+++
2088	Panc 02

9. táblázat

Kriptoficinanalógok értékelése korai stádiumú Panc 03 esetén BDF-| hím egereknél

Ketrec	Szer	Iv. inj. száma	Teljes dózis mg/kg	Pusztulások száma	%-os testtömeg veszteség/növekedés (nap)	Átlagos tumorméret a 14. napon (intervallum)	T/C %	Tumormentesség 14. napon
1	RxO	-	-	-	+6,8% (12)	830 (393-1458)	-	0/5
2	K#117	1	7,0	3/4	-20% (12)	0 (egy egér)	0%	1/4
3	T	6	13,5	1/4	-8,2 (13)	75 (0-256)	9%	1/4
4	T	6	6,75	0/3	-2,4 (8)	247 (80—415)	30%	0/3
5	K#125	7	42	0/4	0% (10)	0 (0-63)	0%	3/4
6	I	7	21	0/4	-1,6% (10)	101 (0-126)	12%	1/4
7	T	7	10,5	0/4	0% (8)	295 (264-467)	35%	0/4
8	K#128	3	57	1/4	-15,2% (10)	0 (mind nulla)	0%	3/4
9	T	4	32,5	0/4	-5,7% (6)	0 (mind nulla)	0%	4/4
10	4	4	16,25	0/4	0% (12)	0 (mind nulla)	0%	4/4
11	K#132	6	180	0/4	-5,7% (10)	0 (mind nulla)	0%	4/4
12	T	6	90	0/4	-3,3% (8)	0 (mind nulla)	0%	4/4
13	T	6	45	0/4	1,7% (10)	304 (108-505)	37%	0/4

A tumorok implantálása a 0. napon; hatóanyag-kezelés a 3. napon indul.

A 14. napon az összes egér jó állapotú, és testtömegük növekedett. Nem volt szükséges több kezelés.

HU 225 041 Β1

10. táblázat

K8 vegyület in vivő aktivitása

Kis. #	Se. tumor	Iv. inj. #	(mg/kg) TD	%-os testtömegvesztés	T/C/96	Átlagos lóg pusztulás	Gyógyulás
18268	Panc 03	11	106	-6	4	4,6	0/5
1917	Pan 03	12	60	-1	0	2,8	0/5
1885A	Mám 16/C	7	21,3	—4,5	6	2,5	0/5
1887B	Colon 38	6	30	+2	0	3,0	0/5
1954	Colon 38	11	132	-9	0	>4,5	5/5
4	4	11	88	-6	0	>4,5	4/5
1965	Colon 26	10	100	-5,4	0	2,3	0/5
2007	Ovary-115	6 6	90 60	-3,5	0 0	>2 >2	2/5 (d20) 1/5 (d20)
1994	Mám 17/Adr	9 9	53,1 36,9	-0,9 1,8	0 0	3,2 2,6	0/6 0/5
1990	Mám 16/C/Adr	7	56	-6	0	2,5	0/5
2001	Panc 02	9	126	-3,5	0	>2	1/5 (d25)
1931		9	67,5	-6	18	1,8	0/5
1974	IV. P388 Leuk	7	91	-11%	50% ILS	2,3	0/5
1924	Colon 51	9	67,5	-6	7	2,2	0/5
1946	MX-1 Humán	11	50	+5,9	0	>4,5	3/5
4-	Breast	11	34,2	-4,5	0	4,5	1/5
1952	H125 Humán	8	96	+3,8	0	1,8	0/5
4	Adeno. Sq. Lung	8	57,6	+9,8	0	1,6	0/5
1983	TSU Humán	7	94,5	-3,4	0	>4	5/5
	Prostate	7	66,5	3,3	0	3,5	0/5
1978	PC-3 Humán	8	96	+3,1	7,3	1,6	0/6
	Prostate	8	67,2	+3,6	14,7	0,9	0/5
1980	Adv. Stage	8	108	-6,7	5/5 PR’s	3,8	0/5
	Humán H116	8	76	-6,7	4/5 PR’s	3,5	0/5
	Colon	8	53	-3,3	1/5 PR’s	2,9	0/5
1979	Adv. Stage	6	81	-3,2	5/5 CR’s	9,1*	4/5
	LNCaP Humán	6	57	-3,4	5/5 CR’s	7,1*	4/5
	Prostate	6	40,2	-3,2	5/5 CR’s	8,0*	2/5

‘Korlátozott tumor-visszanövekedések száma, amelynek alapján a lóg pusztulás értékeket számoltuk.

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. (I) általános képletnek megfelelő kriptoficinvegyületek, amelyek képletében Ar jelentése fenilcsoport, 1-5 szénatomos alkil-,

1-5 szénatomos alkoxicsoporttal vagy halogénatommal szubsztituált fenilcsoport, naftil-, furil-, indolil-, pirrolil-, piridil- vagy tienilcsoport,

Rt jelentése halogénatom, SH-, amino-, mono(1-5 szénatomos alkil)-amino-, di(1—5 szénatomos alkil)-amino-, tri(1—5 szénatomos alkilj-ammónium-, 1-5 szénatomos alkil-tio-, di(1—5 szénatomos alkil)-szulfónium-, szulfát- vagy foszfátcsoport,

R₂ jelentése OH- vagy SH-csoport, vagy 55 Rt és R₂ együttesen egy epoxid-, aziridin-, episzulfid-, szulfát- vagy mono(1-5 szénatomos alkil)-foszfát-gyűrűt alkotnak, vagy

Rt és R₂ együttesen a C₁₈ és között egy kettős kötést alkotnak,

60 R₃ jelentése 1-5 szénatomos alkilcsoport,

HU 225 041 Β1

R4 és R₅ jelentése H, vagy

R₄ és R₅ jelentése együttesen kettős kötés a C₁₃ és

C₁₄ között,

R₆ jelentése benzil-, hidroxi-benzil-, 1-5 szénatomos alkoxi-benzil-, halogén-hidroxi-benzil-, dihalogénhidroxi-benzil-, halogén-(1-5 szénatomos alkoxi)benzil- vagy dihalogén-(1-5 szénatomos alkoxi)benzil-csoport,

R₇ és R₈ jelentése 1-5 szénatomos alkilcsoport,

Rg jelentése H vagy 1-5 szénatomos alkilcsoport,

R₁₀ jelentése H vagy 1-5 szénatomos alkilcsoport,

X jelentése O, NH vagy 1-5 szénatomos alkil-amino-csoport,

Y jelentése O, NH vagy 1-5 szénatomos alkil-amino-csoport.
2. Az 1. igénypont szerinti kriptoficinvegyület, amelynek képletében Ar jelentése fenil-, tolil- vagy tienilcsoport.
3. Az 1. igénypont szerinti kriptoficinvegyület, amelynek képletében R₈ jelentése etil-, propil-, izopropil-, buti!-, izobutil-, pentil- vagy izopentilcsoport.
4. Az 1. igénypont szerinti kriptoficinvegyület, amelynek képletében R₇ jelentése etil-, propil-, izopropil-, butil-, izobutil-, pentil- vagy izopentilcsoport.
5. Az 1. igénypont szerinti kriptoficinvegyület, amelynek képletében R₇ jelentése metil-, R₈ jelentése metilcsoport, X és Y jelentése egyaránt O-tól eltérő.
6. Az 1. igénypont szerinti kriptoficinvegyület, amelynek képletében R₃ jelentése etil-, propil-, izopropil-, butil-, izobutil-, pentil- vagy izopentilcsoport.
7. Az 1. igénypont szerinti kriptoficinvegyület, amelynek képletében R_g jelentése metil-, etil-, propil-, butil-, izobutil-, pentil- vagy izopentilcsoport.
8. Az 1. igénypont szerinti kriptoficinvegyület, amelynek képletében R₁₀ jelentése metil-, etil-, propil-, butil-, izobutil-, pentil- vagy izopentilcsoport.
9. Az 1. igénypont szerinti kriptoficinvegyület, amelynek képletében a C₃, C₆, C₁₀, Ο_η6, C₁₇ és C₁₈ atomok közül legalább az egyik R-sztereokémiájú.
10. Az 1. igénypont szerinti kriptoficinvegyület, amelynek képletében a C₃, C₆, C₁₀, C₁₆, C₁₇ és C₁₈ atomok közül legalább az egyik S-sztereokémiájú.
11. A 2. igénypont szerinti kriptoficinvegyület, amelynek képletében R₃ és R₇ jelentése metilcsoport, Rg jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R₈ jelentése metilcsoport, R_g jelentése izobutilcsoport, R₁₀ jelentése hidrogénatom és X és Y jelentése oxigénatom vagy nitrogénatom.
12. A 11. igénypont szerinti kriptoficinvegyület, amelynek képletében Rt jelentése halogénatom és R₂jelentése hidroxilcsoport.
13. A 11. igénypont szerinti kriptoficinvegyület, amelynek képletében Rt és R₂ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₈ és C₁₉ atomok között.
14. A 11. igénypont szerinti kriptoficinvegyület, amelynek képletében Rt és R₂ jelentése együttesen egy epoxidgyűrű.
15. A 11. igénypont szerinti kriptoficinvegyület, ahol az epoxidgyűrű R,R-epoxid- vagy S,S-epoxidgyűrű.
16. A 11. igénypont szerinti kriptoficinvegyület, amelynek képletében Rt és R₂ jelentése együttesen egy episzulfidgyűrű.
17. A 11. igénypont szerinti kriptoficinvegyület, amelynek képletében R₄ és R₅ jelentése hidrogénatom.
18. A 11. igénypont szerinti kriptoficinvegyület, amelynek képletében R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötést alkotnak C₁₃ és C₁₄ között.
19. Az 1. igénypont szerinti kriptoficinvegyület, amelynek képletében Ar jelentése fenilcsoport, Rt és R₂ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₈ és C₁₉között, R₃, R₇ és R₈ jelentése metilcsoport, R₄ és R₅jelentése együttesen kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R₉jelentése izobutilcsoport, R₁₀ jelentése hidrogénatom és X és Y jelentése oxigénatom.
20. Az 1. igénypont szerinti kriptoficinvegyület, amelynek képletében Ar jelentése fenilcsoport, Rt és R₂ jelentése együttesen egy R,R-epoxidgyűrű, R₃, R₇és R₈ jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R₉ jelentése izobutilcsoport, R₁₀ jelentése hidrogénatom és X és Y jelentése oxigénatom.
21. Az 1. igénypont szerinti kriptoficinvegyület, amelynek képletében Ar jelentése fenilcsoport, Rt és R₂ jelentése együttesen egy S,S-epoxidgyűrű, R₃, R₇és R₈ jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R₉ jelentése izobutilcsoport, R₁₀ jelentése hidrogénatom és X és Y jelentése oxigénatom.
22. Az 1. igénypont szerinti kriptoficinvegyület, amelynek képletében Ar jelentése fenilcsoport, Rt jelentése klóratom, amely S-konfigurációjú szénatomhoz kapcsolódik, R₂ jelentése hidroxilcsoport, amely R-konfigurációjú szénatomhoz kapcsolódik, R₃, R₇ és R₈ jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ atomok között, Rg jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R₉ jelentése izobutilcsoport, Rto jelentése hidrogénatom és X és Y jelentése oxigénatom.
23. Az 1. igénypont szerinti kriptoficinvegyület, amelynek képletében Ar jelentése fenilcsoport, Rt és R₂ jelentése együttesen egy R,R-epoxidgyűrű, R₃, R₇és R₈ jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése hidrogénatom, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R₉ jelentése izobutilcsoport, Rto jelentése hidrogénatom és X és Y jelentése oxigénatom.
24. Az 1. igénypont szerinti kriptoficinvegyület, amelynek képletében Ar jelentése fenilcsoport, Rt jelentése klóratom, amely S-konfigurációjú szénatomhoz kapcsolódik, R₂ jelentése hidroxilcsoport, amely R-konfigurációjú szénatomhoz kapcsolódik, R₃, R₇ és R₈ jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése hidrogénatom, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R₉ jelentése izobutilcsoport, R₁₀ jelentése hidrogénatom és X és Y jelentése oxigénatom.

HU 225 041 Β1
25. Az 1. igénypont szerinti kriptoficinvegyület, amelynek képletében Ar jelentése fenilcsoport, R₁ és R₂ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄atomok között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R₉ jelentése izobutilcsoport, R₁₀ jelentése hidrogénatom és X és Y jelentése oxigénatom.
26. Az 1. igénypont szerinti kriptoficinvegyület, amelynek képletében Ar jelentése fenilcsoport, R₁ és R₂ jelentése együttesen egy R,R-aziridingyűrű, R₃, R₇és R₈ jelentése metilcsoport, R₄ és R₅ jelentése együttesen egy kettős kötés a C₁₃ és C₁₄ között, R₆ jelentése 3-klór-4-metoxi-benzil-csoport, R_g jelentése izobutilcsoport, R₁₀ jelentése hidrogénatom és X és Y jelentése oxigénatom.
27. Gyógyszerkészítmény hiperproliferatív emlőssejtek proliferációjának gátlására, amely hatóanyagként az 1. igénypont szerinti valamely kriptoficinvegyületet tartalmazza.
28. A 27. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, amely tartalmaz még legalább egy további daganatellenes szert.
29. Az 1. igénypont szerinti kriptoficinvegyület emlőssejtekkel történő érintkeztetésével emlőssejtek proliferációjának kezelésénél való alkalmazásra.
30. A 29. igénypont szerinti vegyület, amely legalább egy további, a daganatellenes szerrel együttesen van érintkeztetve az emlőssejtekkel.
31. A 29. igénypont szerinti vegyület, amelynél az emlőssejt hiperproliferatív.
32. A 31. igénypont szerinti vegyület, amelynél a hiperproliferatív sejt humán sejt.
33. A 31. igénypont szerinti kriptoficinvegyületek többszörös hatóanyag-rezisztens fenotípusú hiperproliferatív emlőssejtek proliferációjának kezelésénél történő alkalmazásra, amelynél a kriptoficinvegyület mennyisége a mikrocsatornapolimerizáció és -depolimerizáció dinamikus állapotának megbontásával a sejtmitózis megakadályozásához hatásos mennyiség.
34. A 33. igénypont szerinti vegyület, legalább egy további daganatellenes szerrel együtt történő alkalmazásra.
35. A 33. igénypont szerinti vegyület humán sejteknél történő alkalmazásra.
36. Az 1. igénypont szerinti kriptoficinvegyületek alkalmazása hiperproliferatív emlőssejtek által kiváltott patológiai elváltozások kezelésére alkalmas gyógyszerkészítmények előállítására.
37. A 36. igénypont szerinti alkalmazás, amelynél az emlőssejtek humán sejtek.
38. A 36. igénypont szerinti alkalmazás, amelynél a patológiai állapotot daganatképződés jellemzi.
39. A 38. igénypont szerinti alkalmazás a következő daganatok és daganatos betegségek esetén: melldaganat, kissejt tüdő, nemkissejt tüdő, vastagbél, leukémia, melanoma, hasnyálmirigy, adenocarcinoma, központi idegrendszer (CNS), petefészek, prosztata, lágyszövet vagy csontszarkóma, fej és nyak, gyomortraktus, amely magában foglalja a hasnyálmirigyet és a nyelőcsövet, gyomor, myeloma, hólyag, vese, neuroendokrin, amely magában foglalja a thyroid és nemHodgkin betegséget.