CZ248297A3

CZ248297A3 - Použití benzothiofenu pro přípravu terapeutického prostředku

Info

Publication number: CZ248297A3
Application number: CZ972482A
Authority: CZ
Inventors: Brian W. Grinnell
Original assignee: Eli Lilly And Company
Priority date: 1995-02-09
Filing date: 1996-02-09
Publication date: 1998-06-17
Also published as: UA43391C2; CN1173821A; NO973635D0; CA2212339A1; US5496851A; AU5299696A; HUP9801323A3; NZ305072A; JPH10513475A; RU2179021C2; US5484808A; CZ286448B6; AU693021B2; MY132251A; NO973635L; IL117079A0; IL117079A; EP0726071A2; CN1072931C; KR19980702079A

Description

(57) Anotace:

Je popsáno použití sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R¹ a R³ znamenají nezávisle na sobě atom vodíku, methyl nebo skupinu vzorce a/ nebo b/, kde Ar znamená popřípadě substituovaný fenyl, R² je vybrán ze souboru sestávajícího z pyrrolidinoskupiny, hexamethyleniminoskupiny a plperidinoskupiny, nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo solvátu, pro přípravu terapeutického prostředku pro inhibicí adheze buňka.buftka nebo inhibicí zánětu a přerušení procesu normální koagulace.

o

H

-C-(Cj-C₆alltyl)

R*

ÍI) (») <b>

» · » · · *

Použití benzothiofenu pro přípravu terapeutického prostředku

Oblast techniky

Tento vynález se týká sloučeniny vhodné pro přípravu terapeutického prostředku pro inhibici adheze buňka-buňka nebo inhibici zánětu a přerušení procesu normální koagulace.

Dosavadní stav techniky

Buněčná výstelka cév tvoří hlavní orgán, který funguje jako regulátor koagulace krve, zánětu a při výměně tekutin a mediátorů mezi intravaskulární oddělením a tkání parenchymu. Jako taková, vlastní funkce výstelky je kritická pro překonání homeostázy. Porucha činnosti výstelky vyplývající ze změn v expresi důležitých povrchových molekul může způsobit koagulační vady, místní a systémové záněty buněčné výstelky cév a zvýšení progrese a protržení aterosklerotických plaků. Tyto účinky mohou mít dále výsledek ve stavech zahrnujících infarkt myokardu, trombózu hlubokých žil, diseminovanou intravaskulární trombózu a mrtvici.

ůrčité proteiny povrchových buněk se mění v odpověď na vaskulární poranění nebo podráždění a mohou se používat jako markéry (značkovače) dysfunkční výstelky. Rozhodující skupina takových proteinů vytváří adhezi buňka-buňka zprostředkovanou receptory/ligandy včetně integrinů, selektinů (například ELÁM) a členů superrrodiny imunoglobulinů, jako je ICAM a VCAM. Tyto molekuly se zvětšují v odpověď na změny stimulů včetně cytokinů, a kromě toho, protože jsou důležité markéry poruchy činnosti výstelky, hrají rozhodující úlohu v trombotických, zánétlivých a ateřogenních procesech ve stěnách » · · I ·· w«

Μ· 9 9 » buněčné výstelky. Jiné aktivity, jako povrchové antikoagulační odezvy, jsou také poškozovány ve stádiu poruchy činnosti výstelky. Sloučenina, která by mohla blokovat dysfunkci výstelky, jak se stanoví měřením její schopnosti inhibovat adhezi buňka-buňka nebo expresi prokoagulantových aktivit, by byla vhodná pro ošetřování stavů, jako je sepse, poranění zahrnující poškození hlavní tkáně a trauma, příznak odezvy na systémový zánět, syndrom sepse, septický šok a příznak mnohonásobné poruchy činnosti orgánu včetně DIC, stejně jako protržení aterosklerotické plaky a s tím spojených následků. Protože adheze buňka-buňka je základní proces široké biologické důležitosti, schopnost specificky modulovat adhezní proteiny má význam pro řadu klinických aplikací mimo tkáň buněčné výstelky včetně svého použití jako protizánětlivý prostředek.

Podstata vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu je použití sloučeniny obecného vzorce I

ve kterém

R a R^J znamenají nezávisle na sobe atom vodíku, methyl nebo

fe* fe··· • fe fefe • · « fe • fefefe • fefefe · • · · • fe fefe skupinu vzorce o O li ll

-C-ÍCj^-Cgalkyl) nebo -C-Ar, kde Ar znamená popřípadě substituovaný fenyl,

R² je vybrán ze souboru sestávajícího z pyrrolidinoskupiny, hexamethyleniminoskupiny a piperidinoskupiny, nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo solvátu, pro přípravu terapeutického prostředku pro inhibici adheze buňka-buňka nebo inhibici zánětu a přerušení procesu normální koagulace.

Tento vynález se vztahuje ke zjištění, že vybraná skupina 2-fenyl-3-aroylbenzothiofenů (benzothiofenů), tedy sloučenin obecného vzorce I, je vhodná pro inhibici adheze buňka-buňka a zejména pro inhibici vaskulární adheze buňka-buňka. Sloučeniny jsou tedy vhodné pro inhibici porucha činnosti buněčné výstelky cév.

Způsoby použití poskytované tímto vynálezem se provádějí podáváním člověku, který potřebuje takové ošetření, dávky sloučeniny obecného vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo solvátu, která je účinná k inhibici adheze buňka-buňka nebo jejich účinků nebo k inhibici zánětu a přerušení procesu normální koagulace.

Výraz inhibice nebo inhibovat zahrnuje své obecně přijatelné významy, mezi které se zahrnuje prohibice,

- 3a »·♦· »« « « · prevence, omezení a zpomalení, zastavení a obrácení progrese. Jako takový tento způsob zahrnuje jak lékařské terapeutické, tak také profylaktické podávání, co je vhodné.

t · φ *

Raloxifen jako sloučenina podle tohoto vynálezu, která je ve formě soli, hydrochloridu sloučeniny obecného vzorce I, ve kterem R a R znamenají atom vodíku a R představuje 1-piperidylovou skupinu, je jaderná regulátorová molekula. Ukazuje se, že ralofixen se váže k receptoru estrogenu a původně byl navržen jako molekula, jejíž funkce a farmakologický účinek spočívají v antiestrogenním účinku, to znamená, že blokují schopnost estrogenu aktivovat tkáň dělohy a rakoviny prsu závislé na estrogenu. Ve skutečnosti raloxifen neblokuje účinek estrogenu v některých buňkách, avšak v jiných typech buněk raloxifen aktivuje stejné geny, jako činí estrogen a projevuje stejné farmakologické účinky, například vyvolává osteoporózu nebo hyperlipidémii. Výsledkem je, že raloxifen se uvádí jako antiestrogen se smíšenými agonisticko antagonistickými vlastnostmi. Jedinečný profil, který projevuje raloxifen a kterým se liší od estrogenu, se nyní předpokládá v důsledku zvláštní aktivace a/nebo suprese různých funkcí genů receptorovým komplexem raloxifen estrogen, jako opak k aktivaci a/nebo supresi genů receptorovým komplexem estrogen - estrogen. Proto třebaže raloxifen a estrogen využívají a ucházejí se o stejný receptor, farmakologický výsledek regulace genu v obou případech se v podstatě nedá předpovědět a je pro každý z nich specifický.

Obecně se předmětná sloučenina zpracovává s obvyklými vehikuli, ředidly nebo nosnými látkami a lisuje do tablet, nebo zpracovává na elixíry nebo roztoky pro běžné orální podání nebo pro podání intramuskulární nebo intravenózní cestou. Sloučeniny se mohou podávat transdermálně a mohou se zpracovávat na dávkové formy s vytrvalým uvolňováním a podobně.

Φ · ·· t 9.

• * φ · · · » Φ φφφ

Sloučeniny používané způsoby podle tohoto vynálezu se mohou připravovat zavedenými způsoby, jako jsou podrobně popsány v US patentech č. 4 133 814, 4 418 068 a 4 380 635, z nichž všechny se zahrnují do dosavadního stavu techniky. Obecně způsob vychází z benzo[b]thiofenu, který obsahuje 6-hydroxyskupinu a 2-(4-hydroxyfenylovou) skupinu. Výchozí sloučenina se chrání, acyluje a zbaví chránící skupiny za vzniku sloučenin obecného vzorce I. Příklady přípravy takových sloučenin jsou uvedeny v US patentech zmíněných výše.

Výraz popřípadě substituovaný fenyl zahrnuje fenyl nebo fenylovou skupinu substituovanou jednou nebo dvakrát alkylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, hydroxyskupinou, nitroskupinou, atomem chloru, atomem fluoru nebo tri(chlor nebo fluor)methylovou skupinou.

Sloučeniny používané při způsobech podle tohoto vynálezu tvoří farmaceuticky přijatelné soli s kyselinami a bázemi, ve kterých jsou obsaženy široce rozmanité organické nebo anorganické kyseliny a báze, včetně fyziologicky přijatelných solí, které jsou často používány ve farmaceutické chemii. Takové soli jsou také součástí tohoto vynálezu. Mezi obvyklé anorganické kyseliny, používané pro přípravu takových solí, se zahrnuje kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina jodovodíková, kyselina dusičná, kyselina sírová, kyselina fosforečná, kyselina fosforičitá a podobné. Mohou se také používat soli odvozené od organických kyselin, jako jsou alifatické monokarboxylové a dikarboxylové kyseliny, alkanové kyseliny substituované fenylem, hydroxyalkanové a hydroxyalkandiové kyseliny, aromatické kyseliny a alifatické a aromatické sulfonové ·· · ··β • · Ρ « * aě kyseliny. Mezi takové farmaceuticky přijatelné soli se tak zahrnuje acetát, fenylacetát, trifluoracetát, akrylát, askorbát, benzoát, chlorbenzoát, dinitrobenzoát, hydroxybenzoát, methoxybenzoát, methylbenzoát, o-acetoxybenzoát, naftalen-2-benzoát, bromid, isobutyrát, fenylbutyrát, β-hydroxybutyrát, butin-1,4-dioát, hexin-1,4-dioát, kaprát, kaprylát, chlorid, cinnamát, citrát, formiát, fumarát, glykolát, heptanoát, hippurát, laktát, malát, maleát, hydroxymaleát, malonát, mandlát, mesylát, nikotinát, isonikotinát, nitrát, oxalát, ftalát, teraftalát, fosfát, monohydrogenfosfát, dihydrogenfosfát, metafosfát, pyrofosfát, propiolát, propionát, fenylpropionát, salicylát, sebakát, sukcinát, suberát, sulfát, hydrogensulfát, pyrosulfát, sulfit, hydrogensulfit, sulfonát, benzensulfonát, p-bromfenylsulfonát, chlorbenzensulfonát, ethansulfonát, 2-hydroxyethansulfonát, methansulfonát, naftalen-l-sulfonát, naftalen-2-sulfonát, p-toluensulfonát, xylensulfonát, tartarát a podobně. Výhodnou soli je hydrochlorid.

Farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinou se obvykle připravují reakcí sloučeniny obecného vzorce I s ekvimolárním množstvím nebo s přebytkem kyseliny. Reakční složky se obvykle nechají reagovat ve společném rozpouštědle, jako je diethylether nebo benzen. Sůl se běžně vysráží z roztoku přibližně za 1 hodinu až 10 dnů a může se izolovat filtrací nebo se rozpouštědlo může odstranit stripováním obvyklými způsoby.

Mezi báze běžně používané pro tvorbu solí se zahrnuje hydroxid amonný a hydroxidy a uhličitany alkalických kovů a alkalických zemin, stejně jako alifatické a primární, sekundární a terciární aminy, jakož i alifatické diaminy.

Mezi báze obzvláště vhodné pro přípravu adičních solí se zahrnuje hydroxid amonný, uhličitan draselný, methylamin, diethylamin, ethylendiamin a cyklohexylamin.

Farmaceuticky přijatelné soli obecné mají zvýšené charakteristiky rozpustnosti v porovnání se Sloučeninou, od kterých jsou odvozeny, a tak je často možné, aby byly zpracovány na kapaliny nebo emulze.

Farmaceutické prostředky se mohou připravovat způsoby, které jsou známy v oboru. Například sloučeniny se mohou zpracovat s obvyklými vehikuli, ředidly nebo nosnými látkami, a formovat do tablet, kapslí, suspenzí, prášků a podobně. Příklady vehikuli, ředidel a nosných látek, které jsou vhodné pro takové prostředky, zahrnují plniva a nastavovadla, jako je škrob, cukry, mannitol, a deriváty kyseliny orthokřemičité, pojivá, jako je karboxymethylcelulóza a jiné celulozové deriváty, algináty, želatina a polyvinylpyrrolidon, zvlhčovači přípravky, jako je glycerol, látky napomáhající rozpadu, jako je uhličitan vápenatý a hydrogenuhličitan sodný, látky napomáhající retardovanému rozpouštění, jako je parafin, látky urychlující resorpci, jako jsou kvartérní amoniové sloučeniny, povrchově aktivní látky, jako je cetylalkohol a monostearát glycerolu, nosné látky působící absorpčně, jako je kaolin a bentonit, a mazadla, jako je mastek, stearát vápenatý, stearát horečnatý a tuhé polyethylenglykoly.

Sloučeniny se mohou také zpracovávat na elixíry nebo roztoky pro obvyklé orální podání nebo na roztoky vhodné pro parenterální podání, například intramuskulární, subkutánní nebo intravenózní cestou. Kromě toho se sloučeniny dobře hodí pro zpracování na dávkové formy s trvalým uvolňováním účinné látky a podobně. Prostředky se mohou také sestavovat • 9 tak, že uvolňují aktivní složku pouze nebo výhodně ve zvláštní části intestinálního traktu, podle možnosti v určitém časovém období. Povlaky, obaly a ochranné základní hmoty se mohou připravovat například z polymerních substancí nebo vosků.

Zvláštní dávka sloučeniny obecného vzorce I, vyžadovaná pro inhibici adheze buňka-buňka nebo jejich účinků nebo jakékoli jiné použití zde popsané a podle tohoto vynálezu bude záviset na obtížnosti stavu, cestě podání a souvisejících okolnostech, o kterých bude rozhodovat ošetřující lékař. Obecně přijatelné a účinné denní dávky budou od přibližně 0,1 do zhruba 1000 mg za den, a běžněji od přibližně 50 do zhruba 200 mg za den. Takové dávky se budou podávat subjektu, která je potřebuje, jednou až přibližně třikrát každý den, nebo pokud je zapotřebí častěji, k účinné inhibici adheze buňka-buňka nebo jejich účinků, nebo jakéhokoli jiného použití zde popsaného.

Běžné je výhodné podávat sloučeninu obecného vzorce I ve formě adiční soli s kyselinou, jak je obvyklé při podávání farmaceutických prostředků obsahujících bázickou skupinu, jakou je piperidinový kruh. Je také výhodné, pokud se taková sloučenina podává orální cestou. Pro takové účely jsou dostupné orální dávkové formy uvedené dále.

Příklady provedení vynálezu

Prostředky

V dále popsaných prostředcích výraz aktivní složka znamená sloučeninu obecného vzorce I.

- 9 -	* «4 » ·· ·· · .· · · ·: · : : : : o...... - « · · · .·····« ’*·
Prostředek i: Želatinové kapsle
Tvrdé želatinové kapsle se	připravují za použití
těchto složek:
Složka	Množství (mg/kapsle)
aktivní složka	0,1 - 1000
škrob, NF	0 - 650
škrob, prášek schopný tečení	0 - 650
kapalný silikon, 3,50 cm².s^-1	0-15

Složky se smíchají, protlučou sítem s rozměrem částice 0,314 mm (No. 45 mesh U.S. sieve) a plní do tvrdých želatinových kapslí.

Dále se uvádějí příklady zvláštních prostředků ve formě kapsle, které byly připraveny s raloxifenem.

Prostředek 2: Raloxifenová kapsle

Složka	Množství (mg/kapsle)
raloxifen	1
škrob, NF	112
škrob, prášek schopný tečení	2 25,3
kapalný silikon, 3,50 cm².s^-1	1,7

Prostředek 3: Raloxifenová kapsle fe· * » * fe ν' * • fe « fe • · tfe fc

Složka «* · * « · · • ··* • »' « ♦ fe * * fe

Množství (mg/kapsle)

raloxifen	5
škrob, NF	108
škrob, prášek schopný tečení	225,3
7 —1 kapalný silikon, 3,50 cm .s	1,7

Prostředek 4: Raloxifenová kapsle
Složka	Množství (mg/kapsle)
raloxifen	10
škrob, NF	103
škrob, prášek schopný tečení	225,3
kapalný silikon, 3,50 crr^.s“¹	1,7

Prostředek 5: Raloxifenová kapsle
Složka	Množství (mg/kapsle)
raloxifen	50
škrob, NF	150
škrob, prášek schopný tečení	397
kapalný silikon, 3,50 cm².s^_1	3,0

Zvláštní prostředky popsané výše se nohou změnit a poskytnou dostatečné odchylky ve shodě s tímto vynálezem.

Prostředky ve formě tablet se mohou připravit za použití složek uvedených dále.

• · · ·· ···» • fc ·' b · » fe · * fc fe·* fefe

«*· fc · fc fc

Prostředek 6: Tablety

Složka

Množství (mg/tableta) aktivní složka celulóza, mikrokrystalická oxid křemičitý, sublimovaný kyselina stearová

0,1 - 1000 0 - 650 0 - 650 0-15

Složky se smíchají a slisují do formy tablet.

Dále uvedeným postupem se podle jiného provedení mohou připravit tablety, z nichž každá obsahuje 0,1,aš 1000 mg aktivní složky.

Prostředek 7: Tablety

Složka

Množství (mg/tableta) aktivní složka škrob celulóza, mikrokrystalická » ’ polyvinylpyrrolidon (jako 10% roztok ve vodě) natriumkarboxymethylcelulóza stearát hořečnatý mastek

0,1 - 1000 45 ³⁵

4,5

0,5

Aktivní složka, škrob a celulóza se protlučou sítem s rozměrem částice 0,314 mm (No. 45 mesh U.S. sieve) ···· · · • · *

44< ·

9 ·* ·· 4 ♦ ·

• ' 4

4. * #44 ·♦·· * 4 • ·· ♦

• ·· a důkladně promíchají. S výsledným práškem se smíchá roztok polyvinylpyrrolidonu a vzniklá hmota se potom protluče sítem s rozměrem částice 1,168 mm (No. 14 mesh U.S. sieve). Granule takto připravené se vysuší za teploty 50 až 60 °C a protlučou sítem s rozměrem částice 0,912 mm (No. 18 mesh U.S. sieve).

Ke granulím se potom přidá natriumkarboxymethylcelulóza, stearát horečnatý a mastek, které se protloukly sítem s rozměrem částice 0,246 mm (No. 60 mesh U.S. sieve), a po vzájemném smíchání se hmota lisuje na tabletovacím stroji za vzniku tablet.

Suspenze, které vždy obsahují 0,1 až 1000 mg léčiva na dávku objemu 5 ml, se připraví takto:

Prostředek 8: Suspenze

Složka Množství (mg/5 ml) aktivní složka natriumkarboxymethylcelulóza sirup roztok kyseliny benzoové ochucovadlo barvivo vyčištěná voda

0,1 - 1000 mg 50 mg

1,25 mg 0,10 ml podle potřeby podle potřeby do 5 ml

Aktivní složka se protluče sítem se rozměrem částice 0,314 mm (No. 45 mesh U.S. sieve) a smíchá s natriumkarboxymethylcelulózou a sirupem za vzniku hladké pasty. Roztok kyseliny benzoové, ochucovadla a barviva se zředí určitým množstvím vody a potom přidá k pastě za míchání. Ke směsi se poté přidá dostatečný objem vody, aby se dosáhlo požadovaného ···· ♦ · · · t * · • «·« ♦ • · • •«I 99 •

tf « · « • · ·, * • * 9 9 9 9

91 i **·* ·' » objemu.

Testy

Testy adheze buněk in vitro

Buňky výstelky umbilikální cévy člověka (HUVEC) nebo aortální výstelky člověka (HAE) se dostanou od společnosti Clonetics (San Diego) a nechají růst v prostředí EBM, které dodává společnost Clonetics. Buňky se umístí na plotnu s 96 jamkami při hustotě umožňující dosažení splývajících monovrstev po inkubaci za teploty 37 °C přes noc. Do jamek se přidá testované sloučenina a vše se inkubuje v prostředí prostém sera po dobu 8 až 20 hodin. Monovrstvy se potom inkubují s 2 ng/ml interleukinu l. (IL-1) nebo s 20 ng faktoru tumorové nekrózy (TNF) nebo v nepřítomnosti těchto látek po dobu 4 až 24 hodin před testem vázání v celkovém objemu 75 až 100 μΐ v přítomnosti testované sloučeniny. Po inkubaci se buňky U937 značené tritiem přidají v 50μ1 objemech při 1 až 3 x 10⁶ buňkách na jamku. Buňky U937 jsou značeny tritiem při přidaní H-thymidinu do konečne koncentrace s aktivitou 37 kBq na mililitr. Vše se potom inkubuje po dobu 18 až 20 hodin. Buňky se promyjí PBS před použitím, k odstranění přebytku značící sloučeniny. Po inkubaci buněk značených U937 s buňkami výstelky v trvání 20 minut se jamky odsají a čtyřikrát promyjí PBS obsahujícím vápník. Monovrstva a adherentní U937 buňky se solubilizují přidáním 0,25% SDS v 0,1-N roztoku hydroxidu sodného po dobu 5 minut za míchání. Úroveň vázání se stanoví scintilačním čítáním solubilizovaných buněk.

Test antikoagulační aktivity

Splývající kultury buněk výstelky člověka ošetřené interleukinem 1 (IL-l) (2 ng/ml) nebo neošetřené touto látkou v plotně s 96 jamkami se jednou promyjí HBSS, k odstranění sérových proteinů, a inkubují s prostředím prostým sera (DMEM/F-12 prostředí, 20 mM HEPES, hodnota pH 7,5, 50 mg/ml gentamicinu, 1 mg/ml lidského transfeřrinu a 1 mg/ml hovězího inzulínu), které obsahuje 40 nM rekombinantního lidského proteinu C a 10 nM lidského trombinu. Buňky se inkubují za teploty 37 °C a během různé doby se odstraní prostředí a poté se přidá stejný objem roztoku 20 mM Tris-HCl, hodnota pH 7,5, 150 mM chloridu sodného, 1 mg/ml BSA a 10 jednotek na ml hirudinu. Vzorky se inkubují v pufru obsahujícím hirudin po dobu 5 minut, k inhibici aktivity trombinu. Množství tvořícího se aktivovaného proteinu c se stanoví přidáním chromatografického substrátu (S-2366) na konečnou koncentraci 0,75 mM a měřením změny absorbance v jednotkách za minutu při vlnové délce 405 nm na odčítacím zařízení pro mikrotitrační plotny ThermoMax kinetic micro-titer plate reader (Molecular Devices). Při všech experimentech se vzorky proteinu C/trombinového roztoku inkubují v jamkách bez buněk, ke stanovení základních hladin aktivace proteinu C katalyzované trombinem. Množství vytvořeného aktivovaného proteinu C se vyjadřuje jako absorbance (mOD) za minutu na mikrogram buněčného proteinu.

Výsledky

Buňky výstelky umbilikální cévy člověka (HUVEC) se zpracují se sloučeninou obecného vzorce A, kde R¹ a R³znamenají atom vodíku a R představuje pyrrolidinoskupinu, k indukci exprese adhezní molekuly faktorem tumorové nekrózy. Jak je uvedeno v tabulce 1, přítomnost 100 nM sloučeniny obecného vzorce A má za výsledek přibližné 40% snížení

Φ «

• ·· « · > · » * • · * * • « ♦

H 9 • « ··« ·· ι · ·« · hladiny adheze buňka-buňka při tomto testu. Když se buňky předem zpracují pouze s 10 mM sloučeniny obecného vzorce A během přibližné 20 hodin před indukcí faktorem tumorové nekrózy, pozoruje se přibližně 65% snížení adheze (tabulka 2). Jak buňky výstelky umbilikální cévy člověka, tak buňky aortální výstelky člověka (HAEC) byly zpracovány s interleukinem l, jiným zánětlivým mediátorem, k indukci exprese adhezní molekuly v přítomnosti 10 nM sloučeniny obecného vzorce A. Jak je uvedeno v tabulce 3, sloučenina obecného vzorce A účinně inhibuje adhezi indukovanou interleukinem 1 u obou buněčných linií. Tak sloučenina obecného vzorce A může blokovat indukci exprese adhezní molekuly zprostředkované dvěma nezávislými prostředky, jak v buňkách cévy, tak buňkách tepny.

Jako další důkaz schopnosti této sloučeniny upravit funkční vlastnosti výstelky se měřila schopnost buněk výstelky aktivovat lidský protein C, jehož přirozenou regulační funkcí je regulovat směrem dolů stav poruch činnosti výstelky. Jak je uvedeno v tabulce 4, ošetření buněk pomocí interleukinu 1 signifikantně snižuje schopnost výstelky podpořit tvorbu proteinu C. Avšak po následujícím zpracování buněk se sloučeninou obecného vzorce A se v podstatě vyloučí potlačení této funkce způsobené interleukinem 1. Výše uvedené hodnoty ukazují, že sloučeniňa obecného vzorce A chrání buňky před aktivací způsobenou zánětlivými a prokoagulantovými činnostmi.

«·* *

Tabulka 1

Účinek sloučeniny obecného vzorce A na adhezi bunék U937 k buňkám výstelky umbilikální cévy člověka (HUVEC) aktivované faktorem tumorové nekrózy

Stav

Procento vazebné aktivity^a

Neošetřené kontrolní stanovení Ošetření TNF TNF a sloučenina obecného vzorce A (100 nM) ± 7,5 100 ± 9,5 + 17 ^d Vazebná hladina se vyjadřuje jako procento z počtu , buněk U937 vázaných k výstelce před a po indukci faktorem tumorové nekrózy

Tabulka 2

Účinek na adhezi buněk U937 k buňkám výstelky umbilikální cévy člověka (HUVEC) aktivovaným faktorem tumorové nekrózy, dosažený předchozím zpracováním se sloučeninou obecného vzorce A

Stav Procento vazebné aktívity^a

Neošetřené kontrolní stanovení 0 ± 20

Ošetření TNF 100 ± 16

TNF a sloučenina obecného vzorce A (100 nM) 34+8

Vazebná hladina se vyjadřuje jako procento z počtu buněk U937 vázaných k výstelce před a po indukci faktorem tumorové nekrózy

Tabulka 3

Účinek na adhezi buněk U937 k buňkám aortální výstelky člověka (HAEC) a buňkám výstelky umbilikální cévy člověka (HUVEC) aktivovaným interleukiňem 1, dosažený předchozím zpracováním se sloučeninou obecného vzorce A

Stav	Procento vazebné aktivity'
HUVEC	HAEC
Ošetření IL-1	100 ± 14	100 ± 8
IL-1 a sloučenina obecného,
vzorce A (10 nM)	18 ± 13'	54 ± 7

* Vazebná hladina se vyjadřuje jako procento z počtu buněk U937 vázaných k výstelce před a po indukci interleukinem 1

Tabulka 4

Účinek sloučeniny obecného vzorce A na trombihem katalyzova nou aktivaci lidského proteinu C na buňkách výstelky zpraco váných s interleukinem 1 ' (i- 18 V·’ • · ♦ ·· * • · ♦ ·: · W:·:

• · fai · «···«·* ·

Stav

Hladina produkovaného proteinu C (mOD/min/^g)

8,8	+	1,4
3,7	+	0,4
7,6	+	0,6

Neošetřené kontrolní stanovení

Ošetření IL-1

IL-1 a sloučenina obecného

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY ve kterém li , .

R a R znamenají nezávisle na sobe atom vodíku, methyl nebo skupinu vzorce

0 0

II II

-C-(Cj-Cgalkyl) nebo -C-Ar, kde Ar znamená popřípadě substituovaný fenyl, o

R je vybrán ze souboru sestávajícího z pyrrolidinoskupiny, hexamethyleniminoskupiny a piperidinoskupiny, nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo solvátu, pro přípravu terapeutického prostředku pro inhibici adheze buňka-buňka nebo inhibici zánětu a přerušení procesu normální koagulace.

·· ···· * * · ·· flfl ♦ fl ·· • 9 · · fl A ·· • fl flflfl » « • flflfl flfl fl·
2. Použití sloučeniny obecného vzorce I ve kterém

Ί 3

R a R znamenají nezávisle na sobě atom vodíku, methyl nebo skupinu vzorce

O o it rt

-C-tCJ-Cgalkyl) nebo -C-Ar, kde Ar znamená popřípadě substituovaný fenyl,

R je vybrán ze souboru sestávajícího z pyrrolidinoskupiny, hexamethyleniminoskupiny a piperidinoskupiny, nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo solvátu, pro přípravu terapeutického prostředku pro inhibici adheze buňka-buňka.
3. Použití sloučeniny podle nároku i, která je ve formě své hydrochloridová soli, k přípravě terapeutického prostředku pro inhibici adheze buňka-buňka.

• fe ·· * « · · • · ·· fefefe · · • · « *· ·« • · · ·* · ·· · fe « • fe· fe ♦

fe ·«
4. Použití sloučeniny podle nároku 1, pro přípravu terapeutického prostředku pro inhibici adheze buňka-buňka, nebo její hydrochloridová sůl.
5. Použití sloučeniny obecného vzorce i ve kterém

1 Ί

R a R znamenají nezávisle na sobě atom vodíku, methyl nebo skupinu vzorce *φ Φ··· ·· ·· •« * «· «» • · · • · · · · » • φ <

♦ ♦ φφ ο ο tl II

-C-(C-^-Cgalkyl) nebo -C-Ar, kde Ar znamená popřípadě substituovaný fenyl,

R² je vybrán ze souboru sestávajícího z pyrrolidinoskupiny, hexamethyleniminoskupiny a piperidinoskupiny, nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo solvátu, pro přípravu terapeutického prostředku pro inhibici zánětu a přerušení procesu normální koagulace u pacienta s chorobami buněčné výstelky cév.
6. Použití sloučeniny podle nároku 5, která je ve formě své hydrochloridové soli, k přípravě terapeutického prostředku pro inhibici zánětu a přerušení procesu normální koagulace.
7. Použití sloučeniny podle nároku 5, k přípravě terapeutického prostředku pro inhibici zánětu a přerušení procesu normální koagulace, kde že sloučeninou je sloučenina vzorce