CZ184194A3 - Aspartylprotease inhibitor and method of identifying thereof - Google Patents

Description

č'Z'zý.ýoi z'ftYýřtálejz:še' týká způsobu širihlbice Produkce ft-amyloidrtího peptidu (βΑΡ) v buňkách a' sloučenin Pro takovou inhibici- Obzvláště -Še.··.·; Vynález.·.'týká screeningu a identifikace inhibitorů, buněčných' próteas, zvláště Inhibitořu aspártylpřoteasv, které jsou schopně. 'inhibovatintracelulárr-ií produkci β-amyloidnlho PcPtírtu ίβΑΡ) a

I ' ; použiti takových inhibitorů buněčných proteas Pro inhibici Prov ':''^í'^Í'^;”ďukc(§^: β-arriyloidního peptidů (βΑΡ),

Alzheimerova nemoc (AO = ’ Alzheimer's Oisea.se) je. degerierativní mozkový porucha, charakterizovaná klinicky postupnou ztrá:'... tou Paměti ,· ^: vnímání·,· uvažování, úsudků.· a emocionální stability, což Postupně vede k prohlubování mentálního narušení a nakonec, k© smrti- Alzheimerova nemoc je běžnou Příčinou postupného mentálního selhávání (demence.) u starých lidi a pravděpodobně představuje čtvrtou hlavní příčinu smrti v© Spojených.státech amerických.. A}.~ zheirtierciva nemoc byla zjištěna u různých ras a etnických skupin na celém «-větě a představuje· největší současný a budoucí problém zdraví lidu. V samotných Spojených státech amerických v současné době t.rPi Alzhe-j.merovciu nemocí dva až tři miliony lidi.- Až do současné doby byla Aiz^oimerova nemo·.·, nelečJ telnuMozky lidí, kteří trpí Alzheimerovou nemocí vykazuji rteuronálrií Pni'u»-hv a rhanoakierv-tí.eká Poškozeni různé ozrr-<čovaná j .·» kožto amyloidogerrické destičky, vaskulární amyloidni. angiopathye ? a neúrofibri.láin.'í splete- v©l ky Počet takovýchto Poruch, z.viáý.t.é amyloid.ogenické destičky a. neurnf 1 brilární. splete, jsou. na mnoha místech lidského mozku důležité pro pamětov© y poznávací funkce nemocných Aj..zheimeruvou nemoci- Malý Počet těchto Poškozeni v omezeném anatomickém·’' rozptylu je v mozku většiny -starých lidí, kteří, nemá jí příznaky ” Izhc-imer yvy nemoci - Amyloidogenické destičky a ‘-'zokulární -amylcldní ung.i.nýe.·,' hy,.. také ,-h;,i ok i i zují η,;ο ··· ky lidí, majících Trisomy 21 (Downův syndrom) a vrozenou mozkovou z

hcmior vhagii s sf^afiA/loldósóu LyPu.. Outch.. tHC.HWÁ-O)·. „.V současné.. dob.ě k oi^r léčná d iagnosa Alzhei m>...-rovy nemoc j vyjedu je zpr a^vi< ll .a Pozorování shora uvedených poruch v mozkové tkáni lidi, kteří. na tuto rie®oc zemřeli. nebo'řidčeji v malých vzorcích biopsie mozkové-tkáně přx: IP'

'.Ul ochirurgickém zákroku Hlavni Proteinovou složkou ··amyloidní.ch destiček· a vasku'lárrií.' i oi.d i í./. ung ’i< ‘i-athy íai”%-ak:.l.«.·.·!· is 1,.ických : ·,.'ι Ή ι'ι 'liz· U“í fíl!”')' í < O

a. dttiál. skůru yíivffiřré s. μ ' i.n .-ty je ř I. b I.J ži- iý K? kilodaltonový (kO) Protein.s přibližně·39. až 43 aminokyselinami, označovaný jakožto ft-&myloidnl PePtld (βΑΡ). β-Amyloidní PoPtid je přibližné 39 až

4,3 aminokyselinový fragment s velkým membránovým glvkoproteinem. označovaným jako fi-amyloidni prekursérový protein (APRj .

β-Amyloidní peptid (BAP) je dále charakterizován poměrnou Pohyblivosti v SOS Polyakrylamidové gelove elelktroforese nebo ve vysokovýkonné, kapalinové chromatografií (BPlC). B-amyloidrrí peptiď muže být ve filáméntní Polymerni formě, která'vykážujě vázáni

k.nngo č	erveri? a khjof]„	avj.nového S		barviva a j.	ab.tečně zel	ené
lomové,	chá-r a k t er is tiky	amylojdu.	B	-amyloidrii i	1 PČPtid muže	'být
něž v	ne.filamentní f0	rmě (Prearn	y	loid ' nebo	ami;.!)- + ni	nebo
suznl“	ůsddv) v tkáni,,	ve které v	V	tváři nést ai	nov-j.telné d.	voj 1'
zaQarve	oi. kongo červen	i- Čáct leh	O	to proteinu	v 1 11 )-.'pus	t né
mě, zis	kuna z. mozkovy	,-,-h krevních		cév,· je pop	sána v amer	1.0 ké
tent0vé A O ; 'c,	m spise čislo 4 P se normálně ρ	666325. V U í'- ?.,»J v? Í7»		í|k;lri,'i V /---/,-1	rrýí ·I') 1 Jí ál i- '1' i	h r ů
sa v 00. ·,	v,set ne ii,di - A	''Ή se ί·.‘jdu	j	e ge 1' 1 em nu.	d .1./..)1.1.0 00 r umé)-1 k u
<;r |· 1 [	•h i- orriosí>ir»u 21 . 7.	na1ostí str	u	kt.uiy genu,	kóduj i cl. ho	APP
tožity ,	že β - a my.Loi dni	Peptid vy	n	i.ká jakožto	POP t č.t.i	f rap.
n, é '	se sičpí od APP	.; 1; j η í m neb	»')	několika <t	r ><·uc] γη?1 d. i?n	t i f i

di nýmj.. pr ot:oasami... Z.dá se, že toto žtěPeni probíhá inl.raceJ.ulárně.Přesný b:i, uch omletý mechanismus, kterým se B-amyloidni PePtidový fragment ětěPi od APP a následné se ukládá jakožto amyloidní. destičky e.xtraceJ.ulárně v mozkové tkáni a na stěných míšních a mozkových krevních oé.v, zkoumá.

žúvažné“· P'ozní.rť.'ky naznačuji; 'že’”P'os’tuP’ně ‘ukládáni ^v fďuzku i->'amy..i.i..!j. Gi ,j_ni„ ·„!',-/u.iu e.j o-., á 1.i,-Cnl u I uí’'U ί?.,ι i ,/ht .i, mr ~ r r. >'-v η:-Oi ; i míjýt· i· v j--m. iv,··'· .-·.··/mi:· Ί , >my rok·-,· rr-bn (C-s·-> - í. i letí.. (belkoe •euron str- .467, ..JS91 )...„Nejr.ioyéji-.se_!...2j.isti.lo, se í?»-amyloidní PePtid uvolňuje z růstu, neuroná lálriích buněk v kultuře a Je obsažen v mozkomíSní kapalině (CSF) jak. zdravých lidí, tak. lidi s Alzheimerovou nemoci (Seubert a kolNátuře 359, .str- 325 až 32? _? 1992) . ...·.. '......... ............

'Určitě vrozené mutace- ke kterým -dochází v APP 'genu, . mohou způsobovat AI ,·; he j .mei- ο'··υ nemoc a slávy související s Aizncimer ovou nemoci- Nanřlt 1.sd í?HA mutace bež informačního obsahu ná aminokyselině 717 7 70-amiriokyselinové isoformy APP se zjistily u napadeních členů nikoliv v§«k u nenapadených členů několika rodin s geneticky podmíněnou (rodovou) formou Alxheimerovy nemoci ((loate a-feol·,. Nátuře 349, str-704 až -706,. 1991; Chartier .Kariér» a kol-, Nátuře- 353, str- 844 až 646/ 1991; a Murell. a kol... , Science 254, str - 97 až 99, 1991).. Kromě toho dochází k.e dvojí mutaci, oznamované Jako Švédská varianta nebo .- švédská mutace, ve které Lyss95-Met596 mutovaná na' ·Aspsss-teusss v 695' 'aminokyselinové'· •isoformě, která je přítomna ve švédské rodině, podléhá rodovému tvaru -Alzbeimerovy nemoci (Mullan a kol-,Nátuře 6ene.t Ί, str- 345 až ?4?, 1997).

	Anályzy genetii	ké vazby d	o .!. o 111	·..·, .:· tyt	.O lnut;	ce, jakož taký.
	ur č i, 1, č· j.i.né mutace	1 APP cenu,	. jsou	my. ί.,.-1 i..,.(. át	‘ Π .Ί.. γ'Γ' Ί	'Ll“t<iu A”i 11? J.
	morový ncmncj υ re	tpade-nvch č	lenů	takovéh	··'..'·..· ..	Kromě toho se
	z jistilo , že mutace	naí:áminol'y	seiině	693 770	amino!	.vselinové iso-~
	/F ř i»· »ϊι&>·’ Í-* t r/ ť> κ i r · ] !* »<	i!..i r-h n ►· f i b ri Γ-	h η ι, (; J	ádánj. li-	•a my 1 rri	di rfh.-i ·? ,·.·;:· 1. i du -
	HCř-kA-u a :o>.;/.,· ·. ,	t ..i.γί'.ί. nu i'	Č1yc iu	na ο.ΐ'Ίί. i	ujky se.:	.lně ty Z $e zdá.
	«.i. Í..Í ^4 ' cit t, * *, 1 Iť‘t- j—1 1	který s,·· /	o d o b á	Alzheimoi	'ϋ'-ΐ	•moci v Případe:
'F <1 4'	!' t i--ť 1 VCί ί'..:ί : < <, f ; V “	o v šuk HC1	WÁ--0 u	.i 1 ný/: h	r lemucr	iý.yh ('Younkin a
	knj err,.:e 25.9,	str- 514 až	516,	1993) ..
V	B '.·;/> V P' C 1. v.·-* j. Č í i-J	pokrok , kt	eréhr.i	3C <J h	. O V )? Ϊ	»r„: ri i ,s p eni. met h <, -

nismu AIzheimero^vy nemoci a jiných nemocí, vztahujících se k. |3-a — myloidnímu pept.idu, zůstává Potřeba vyvinout Prostředky a -způsoby pro ošetřování těchto nemoci- Ošetřovací ZPůsoby by s'výhodou měly být., zí/loženv na droSách, které .jsou schopny .inhrtbovat vznikáni β-amyloidní.ho PePtidu- K identifikaci takových drog je žádoucí vyvinou'., .?' r i.: e! ύ. n v, i v. . .ρύ s-'by, b č er >.· Jsou r eo ϊ .Τι-,λ 1. ne .·'a .n c/on'.··· na· „lepšeni¹.o Poznán s. intr a<.o I,u l urnl· Produkce li—amy.,|.oi,drp».íio PePtidu a ά

;__._^_Aj. λ : ..... ' ' na·'· pochopení- 3ramýloidfiiho-.pept.ldové.ho ·. proteolytického -.·

..^...-štěpení -. včetně identifikace zodpovědnosti enzymu nebo enzymů · ízlLé Drogy, identifikované •'takovými, screeninqovými způsoby, se potom '--a........ -- -.......... .........'...

-'.-.- mohou použít k inhibici produkce, β-amyioidního peptidu ža použití 1:11 1 buněčných ž modelů' 'in vitro . savců ,· trpících Aj.zhéimer ovu nemocí · a· jinými němočem^:í‘ souv-išójící.mi '·<? |3-amyj| oidriím·' PePtide»-a 'živo-.-1-.-.:1, čiš ných; modle. J.ú pro studium produkce Jš-amyloidniho peptidů ·:> jejic zábrany Ai_rr.-.- v... r - Pťojukci-APP,-a.· β-amyloidiíího peptidů popsal. Sinha a Lieberburg, NeurodvríSerieration 1 > str. 1 ó 9 až 1/5, 1.99? a Marx, Science ς> . ·--2.59, str.. 457 až 4.58, 1993. Zdánlivou -lisosomální APP Produkční cestu 'k produkci β-amyloidniho peptidů popsal Estus a kolScience 255, str- 726 až 728, 1992 a 6olde a kol-, Science 255, str728 až 730, 1992. Uvolňovaní. rozpustného β-amyloidního peptidů do búněčnéhot ků ltivačr lího prost? edl .popsal Haas .a kol·, Nátuře. '.359, str. 322 až 325, 1992 a Shojia kol., Science 258, str. 126 až 129, 1992' a uvolňování do lidské a zvířecí CSF popsal Seubert·a kol., Nátuře 359, str- 325 až 327, 1992). Bylo doloženo» že transformace . linie lidských buněk-s mutaritem APP genu spojeným s rodovou A.lzhei měrovou nemocí způsobuje nadprodukci β-amyloi d v libo pePtidu (ti.tr ori a kol - , katům? 360, str- &72 až 674, 1 992' a Younkin a kol·, Science 259', str- 514· až 516, 1993). Přítomnost četných lysosomálriích. proteas, včetně· kathepsinu 0 v senilní .destičce, ' spojené s Al^-hej měrovou nemoci, popsal Calaidu a k«;,.l . , ProcNatl. · Acad- -32:1- USA. o? , str 3861 až 3865. 1990 a Proč- Nati.Acad- Sci- USA. 88, str- 10998 až 11002, 1991. Povahu aspartylproteas (označovaných rovněž aspartiché proteasy) -a inhibitoru < aspar t vlprotoae .:-··:·-·.. _;n l?im ? Nm tg , J . Cell· Bločkem 33 (1), str - 53 až 63, 1987), Rich Inhibitor s of AsPartic Proteases,

Proteináse bihibitors, . Barrett _a_ Sa.lvesen,__čydj_ EIsevier__Science

Pi.jb li sběr s BV..	Ametet	dum ..	1986, str- 179 až 217	a '-'an Noort. a
k.ol · , ‘ j - Bi ol	Ch.em	'264,	st,- . 14 159 až 14 164,	1992. Lokalizace
- kathopsinu 0.v	cndosomýlni	i h struPf.urUch s buňkou	Popsal. Oinient a
“kol~7 “Bi	C Ιί í? m . 763,	sTP7“ 69Óí až“‘690? Ί 992

.Podstata vynálezu ;·- Podstata způsobu inhibiee produkce {i-amyloidního peptidu

CáAP)-spoČíyá podle vynálezu v. tom, že se podává buňkám účinné množství inhibitoru aspartylproteasyVynález se týká rovněž způsobu inhibiee produkce 3-amyloidního peptidu <{1AP) podáváním účinného množství' inhibitoru aspártyIproteasy savcům, kteří takové ošetření potřebují.

Vynález se týká rovněž způsobu inhibiee ukládání amyloidní destičky podáváním účinného množství inhibitoru aspartyLproteasy savcům, kteří takové ošetření potřebníí.

Vynález se týká rovněž způsobu předcházení nebo ošetřování Alzheimerovy nemoci podáváním účinného množství inhibitoru aspartylproteasy savcům, kteří takoué ošetření potřebují, .;-.Vynález se týká rovněž způsobu předcházení nebo ošetřováni něžiocí ý souvisej íčích š á-amyloidním peptidem <(ϊΑΡ>, podáváním. ·ύčinného množství inhibitoru aspartylproteasy savcům, kteří takové ošetření potřebují.

Vynález se týká rovněž shora uvedených způsobů, přičemž je inhibitorem aspartylproteasy sloučenina obecného vzorce I

R?

(I) kde znamená i 1,2,3. nebo 4.

R¹ alkylovou skupinu s 1 až o atomy uhlíku, arylovou skupinu cyklohexylovou skupinu nebo skupinu -S-R^lx. kde znamená R^1x arylovou nebo cyklohexylovou skupinu,

V skupinu obecného vzorce

kde znamená

R^{1 w} a R^^w na sobě nezávisle atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 6 atoay uhlíku, ary la 1 kýlovou skupinu, s,-1 až. .4 atomy . uhl íku v_ alky l.óvem_’pódí lu,.:he.terócy.kialky-; lovou skupinu s 1 až. 4 atomy uhl íku v alky lovem'podílu, nenasycenou heterocyklal.kýlovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém podílu,· nebo

R^{1 u} a R^^u dohromady...s _atomem—dus-í.ku-.—na—který—-jsou—váz-ánye-vy— tvářejí heterocyklickou nebo nenasycenou neterocyk1ickou skupinu za podmínky, že atom dusíku nemůže být kvarternizován.

q 0. 1. 2, 3 nebo 4.

R^z atom vodíku, atom halogenu, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkylthioskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, nebo aminoskupinu, nebo c znamená skupinu obecného vzorce

kde znamená j 1 nebo 2 .

R^{a u} atom vodí ku, f o rmy1ovou nebo skupinu -<B)e-X-R°. B skupinu -CCA?- nebo skupinu, karbamoy1ovou skupinu kde znamená , *

-S<O)k-, ' -i k 0, 1 nebo 2, J e 0 nebo 1.

------------------χ_. skupinu-^CCHzÚíf-^y-XClía ym-O-CCHš-iív- ňebó

--ÍCIÍ2 )jji-NR^x-CCHs >n- . kde znamená π ť nebo 2, _ „ ... _jn.„a.,_n_^na_ subě„.nezávls Le .0-,.....i -nebo, 2, ----------R^x atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uh1íku.

R0 alky.l.ovou skupinu s. i-už θ- atomy. uhlíku, . .alkpxykerboqy“ levou skupinu u Ί už 4 atomy uhlíku v alky Ir? v éro podílu, Torfftylovou skupinu .·'alkanoylovou skupinu s 2 až 6 atomy uhlíku, amihóskupiriulptrifluormět.hylr.>vou skupinu; al“ kylaminoskuPinu s až. 4. atomy uhlíku, dialkylamirioskuPtnu-s I až -4 atomy uhlíku,, arylovou skupinu; heterr;··... vk l j. «.·»<.<..»»..« $kuP i.nu rtfebu nenasycenou heter oi..-ykiickou sku“

R² vždy ná sobě nezávisle aminokyselinový postranní četě·'·-·.. skupinu vzorce

-CHyCH;;, -CRi-C.H>CK₅, -CH ₂ (CH;) ₂CH:_t , -C'CH₃}·?, -CHySOyNH -CH2CN, ~ (CH2) ι- -X¹ -R^{2 s} . - (CHj) ff-C (0)NR2bR,zc _ř nebo - (CH 2.) t-S(θ) »r t¹ ~^w·(R-^d)-tetrazol~5~yl3 , kde znamená r , s a i '-'i? v na sobě. nezávisle 0, 1 0.-0, v.

-X¹ vazbu, dvouva2t-»ou-skupinu alkylovou s 1 až 4 atomy uhlíku, dvou vaznou skupinu alkenylovou s 2 až 4 ato my uhlíku, dvouvuznou skupinu, alkinylovou s 2 až 4 atr;>my uhlíku, skupinu -0((.))-0-, -ť-€(.0)--, -C(0)NR.2b -N.R2&-C (0.) -, ~NR2b~, -0(0)-, -0- nebo -S(0)i-~, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, ary!ovou skupinu, arylalkylovou skupinu s ¹ až 4 atomy uhi iku v alkyloyém podílu., hot trucy kličkou skupinu, hoterocyk j a '! kulovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku č-lkylovéra Podílu , nonasycenou hcteroovktipkou skupinu nebo nenasycenou h o t<;roc y k' t. :< j.1 y 1 o vo 1? «<k u 1- i. nu s ' až. -¹ atomy uhlíku v alkylovém podílu ,

Η··.-ο alo'1'i vodíku . nebo alkylovou skupinu s ' až 4 a tony ¹ · h i í k !„.! , p?c. aminoskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 6 a torny uhlíku, alky lovou skupinu s ¹ až b atomy, uhlíku,

- (CH;») _m-dialkylamirioskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku alkylovém podílu, arylovou skupinu, ai-ylíilkylnvou skuPinu s ¹ až 4 atomy uhlíku v alkylovém Podílu; hotoi-i?cvkli,oko<.i skupinu, heterocyklalky.l ovou skupinu ’* už 4 αΙοΝ'ν uhj.í.ku v alkylovém podílu, nena sycerioii hetor ocvk.iii.k, <1 skupinu nebo ner»asyi.-enou heterocyklaikylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku - z..-; <·—<v alky lóvěin⁷ podílu, '

R^2d atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, arylovou skupinu, nenasycenou heterocyklickou skupinu, nenasycenou heterocyklálkýlovou skupinu s 1 až 4 atomy,uhlíku y alkylovém podílu, nebo arylalkýlovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v aLkylovém

-:-:----pod-í-tu.,---:----------------------R skupinu vzorce ; R¹

0.

OH 0

A

/ ' kde znamená skupinu -CHá- nebo -C0 arylovou skupinu nebo nenasycenou heterocy kí i ckou s kup inu. hydroxyskupinu nebo aminoskup i nu. skupinu vzorce heterocyklickou skupinu.

R^3a to

R^3b skupinu vzorce ' 0 ii

N - C· i

R^s

2) -N — C— NR⁴R⁴

I

R⁴ nebo nebo 5.

3, 4. nebo 5

P

-R-4vždy ηϊι s’o’bě nezávisle atom vodíku, alkylovou skupinu s i až 6 atomy uhlíku, nebo hydroxya1kylovou skupinu s 1 až.4 atomy uhlíku v alkylovém podílu.

R⁵ a R⁶ vždy na sobě nezávisle atom vodíku, hydroxyskupinu, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, aminoskupinu. . alkylaminoskupinu s· 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém podílu, hydroxyaIkylovou skupinu s 1 az 4 atomy.uhlíku v alkylovém podílu, karboxyskupinu, alkoxykarbonylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alky1'ovém podílu, karbamoylovou skupinu, N-al ky Ikarbamoy lovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém podílu, arylovou skupinu, heterocyklickou skupinu nebo nenasycenou heterocykl ickou skupinu.

za podmínky, Že V případě,· kdy znamená

Cl) R skupinu vzorce-

pak znamená

V skupinu obecného vzorce

R^3u formylovou skupinu, karbamoylovou skupinu nebo skupinu

-<B)e-X-R°. kde znamená B skupinu -CCO)e 1, <2? R skupinu vzorce

pak znamená

V= skupinu obecného vzorce

pak znamená .7

2

1ι<ρ_λ· _: t, a· ,-.',, .. Rl arylovou skupinu, cyklohezyiovou skupinu nebo skupinu -S-P’^í: .^narrieriá · Ri * arylovou nebo cykjonexylovou skupinu,

2t^^^Ťieb^jejlc^:fármácňritičkýďvhodriá sul .· ^: / -’-'^r ·'· Vynález šě-'-týk.á rovněž shora uvedeních zPusnbu, přičem-ž ji

c.;;yi-;cc_t._·.·. .... i-

77·-·· Inhibitorem aspartylprot.e.ůsy sloučenina obecného vzorce Π

R(šly — (R3) f ~f)“!)'-(JH (1 I i kde J.ZOó .7iki2i:i.RZ<ijalkylovou. skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, formy lovou skupinu, alkanoylovou skupinu s 2 až 6 atomy uhjlku, ; f ' .1 až &,

R®- ' n<i. sobě. nezávisle aminokyselinový zbytek, statiriovou .skupinu nebo derivát statiriové skupiny, za podmínky, že

T.( li .alespoň .^sy?bol,.R⁸ . musí znamenat, slatinovou- skupiny nebo derivát statinové skupiny, (2) jestliže znamená f 2. až S, pak celkový počet slatinových skupin nebo derivátu slatinové skupiny ve výraze ~(R3)f- nemůže být vyssx než 3 nebo její far maceuticky vhodná sul. Způsob identifikace. Produkce .inhibitoru β-amylcidniho pe.p~ ti.du sPočríyá podle vynálezu v. tom, že se (1) podává inhibitor- aspartvlproteasy testovanému systému, (2) měří. se Produkce p-amyloi.dniho Peptidu v testová něm systému a (3) .porovnává se produkce ft-amyloidn:í.ho PePtidu v testovaném systému s produkci β-amyloldni.hu peptidu v kontrolním testovaném systému, do kterého se inhibitor aspartylproteasy nepodal7 Pů sob i d er it li i k ace Pr od.uk ce inhi .!:· j1 or u jí - a myj. o i d ni h o p,»p tidu spočívá podle vynálezu rovněž v tom, že se (1) měří produkce β-amyloidního peptidu v_ buněčné .zkou-íco. a..........._ (2) měří se Produkce β-amyloldni.ho peptidu v tělové kapali.ně zkušebního zvířete·- . .

Jednotlivá terminy, slo^va a'výrazy mají následující, významy,, skli Věcnost i se celné výrazy týkají stejných podílu .· Používáni určitého terminu v následujícím kontextu není Považováno za jakékoliv omezoni

Výrazem. {\-auiy Loi dní pepbid (βΑΡ?¹' se zde vždy míní přibližně 4,2 kD protein, který v mozku osob, postižených A 1zheimerovou nemocí, Ďównovým syndromem, HCHWA-D a některých normálních stárýnoucíčhýliďf· vytváří subjednostku amýlnidníhch fi 1 amentfl zahrnujících čunylqidní destičky (senilní desdtičky). a vaskulární amylojidní“ arigiopathy Camyloidní. úsady · v'“'malých mozkových a raeni nereálních krevních cévách?- Typické zkratky βΑΡ, používané pracovníky v oboru, zahrnuli například výrazy At’, ΑβΡ a β/Α4. Mohou být v rozpuštěné formě v extracelulární kapalině kultivovaných buněk a v tělesných kapalinách savců, například stárnoucích lidí a lidí, trpících Alzheimerovou nemocí a stavy souvisejícími β-amyloidním peptidemβ-Amyloidní pept.id (βΑΡ) zahrnuje sekvence, které jsou výsledkem mutace v oblasti βΑΡ normálního genu a které jsou v podstatě homologické se sekvencí 43-aminokyseliny. Sekvence 43-aminokyseliny pro βΑΡ jej

ASp	Ala	Glu	Phe	Arg	His	Asp	Ser	Gly	Tyr
ii Glu	val	His	His	Gin	Ly s	Leu	Val	Phe	Phe
21 Ala	Glu	Asp	Val	Gly	Ser	Asn	Lys	Gly	Ala
ii Ile	Ile	Gly	Leu	Met	1	Gly	Gly	Val	Val
ii Ile	Ala	Thr	' [SEQ ID NO:	1]

Výrazem “β-amyloidní prekursorový protein (APP) se zde vždy míní polypeptid, který se kóduje genem stejného jména lokalizovaným v případě lidí na dlouhém raménku chromosomu 21, který zahrnuje βΑΡ s karboxy lem na jedné třetiny své délky. APP je glykosytovariý jednomembráiiový protein ěxpresovariý mejrflznějšími buňkami v četných tkáních savcň. Jakožto příklady specifických isotypu APP, které isdu v lidském běle, se uváděli 6^l35-aminokyse L i nový polypeptid, který popsal' Kung a kol . , Nátuře, 325, si-Γ- 733 až •7 o c -ι η o ~7 ·,.ι ~ · -i »« - ·, - <- · rm ί r ., - +

Iíuj Kléry *·;».·? »?..<!’ U? c U J·?. t n?r <n&Jj?j r , *' i-^no ν·<ι?” blino vý Popl.ype.ptid, který popsal Ponte a kol-, Nátuře, 331, str,325 až 32.7 , I9o8 & Tanzi a kol. , Náturo, ->.> J , str - 528 <xž Sbú, 1988 a 770-amiriokyse]-j nový PoPlypeptid, který Popsal Kitaguchi a i^.fettň^.ature,·-.;.··?^!, str .- .530 až 532 ,. 1986. Jakožto příklady specif ických'· 'Var :J .aci .APP se _;· uvádějí · mutace, -které .$4 mohou 'Ušit jakpolohou tak fenotypom (Hurdy, Nátuře Genet - 1... str · 133 až 234,

- .9 ? '1

l. Zjistilo se, že intraeelulární produkce βΑΡ je výsledkem št&Perii APP· buněčnou Pr oteasou · Buněčná Protoasa se je’·'! jako ase partylproteasa , 'zvláště kathepsin u .. Kromě t,oho se zjistilo, In pepsátiff, ' známý .inhibitor kathepsinu O, má následující sekvenci í. v a - V a 1 - V a 1 ~ -> t a - A1 a -$ ta - O H kde· lva je isova.l. er ová kyselina a Sta je static, je homologický se šesti. karboxykoncovými. aminokyselinami βΑΡ:

39 40 41' 42 23

Gly-Val-Val-Ile-Alc-THr-OH [SEQ 10 NO:: 2]

Výhodné inhibitor v kathepsinu 0 zahrnuji sloučeniny. které n a !'· ři.k .1 ad.

kur box,	zakonče	ril GAP, s inkj	usl ales	Poři je	dnoho stati-
erivátu	slatinu	, S výhodou V	m 1 s t <3 si n	aloQic	kém aminoky-
neoo 4/	Kromě	toho jsou výt	odiiými j	1 ll ib .i, t	or v k.at.hop -
sucenina	, kt. er	i;.· mají Tarma^	oios1cké	vlast	nosti, k t er é
5<';h opno s	t slout	en.ln inhibovat	katteps	in 0 n	ob o vy 1 ν,-jr e~
-.i k o.< t. o i-’	ř i. >:i<.i d	r ar mai<o.) oQricí	·;· .i V, I	sínosí	i -··: CI -J
‘'i- u lni	absorPc	a , schoPi'losi	Projit	tunern	ou Γ'“··..·'rnb t- án ť.''j

r i er	ου 1	krev/mozek.
ýraz	;eiTi	stav souviseji
. .1 ., .	lí n	i nupm1 ά
a p	okr,	: r/i J..é ·...· ί. .η· i iu í. i
ýr a z	em	'' k or id i o i. orwva ně.

w jj-tujj.měrová né<iii:.·;. ·. i..¹ owfn.-o5v syndrom, prostředí'' zde vždy mini vodná ext.racelulárril kapalina, která obklopuje rostoucí bulíky in vitro a která obsahuje, kromě jiných složek , proteinV 3' pePtidv vylučované buňkami,.

Výr.	a zem ' tělesná )	. . — Ί ..· , ” · <;<»-ČJ .1. .U U3	zde vždy mii	ii kapal	lna	'.'•i ·? Γ
jako;?to h.	ostitele , která	mužr; obs;	ϊ h o v ,a t m ě ř i i e	.! ná mť i:..·Ž	štvi	Gap
f ragmeritťi	GAP, zviáit0 z;	shrnuje kt	O V , nitmi·: ι.ιΠΙΊ	u kapal	inu ,	moc

5

Pfer it oneá ί ni kapalinu - Výrazem '“krev s<; vidy mini. krev jako lek, jakož také plasma a seru»·

Výrazem “buněčná nebo celulární charaktér ištika zde vždy mfni složka, která je ve vztahu k Produkci βΑΡ 'a je? v kondicionořSstya’ném_: ^: kultivačním prostředí nebo . v tělesné kapalině- Typické celul'érní chárákteristiky zahrnují βΑΡ a βΑΡ fragmenty a jiné. pojl : I. JH: í 1 ' .

Pf

Výrazem *védská mutace” zde vždy »ínx mutace lidského· íér.nu kódujícího APP< která je důsledkem zděděné rodové formy Alzheimerovy nemoci . K mutaci dochází na . L v s 5 2 5^-Met 554 normálního Ap!··' pěnu, kj e d ·.¹¹..¹ h a z i k v .] merie na ásn 59 3™ teusíro - ijist’,’) .,!.·!· íe .1.)..-1ské buněčné linie, transfektované mutací, vykazují nadprodukci βΑΡ, sekreci. βΑΡ do kondicionované-ho kultivačního prostředí- Jiné rodové mutace APP genu.- kterých je možno využít ,k transfektováni buněčných-linií. k produkci.. βΑΡ, . jsou. v oboru známy (Hardy, Nátuře Sonet- 1, str- 233 ai 234, í99Z),

Výrazem “alkylová skupina s 1 až o atomy uhliku se zde vždy míní alkylová uhlovodíková skupina s Přímým nebo s roz^větvé~ i

nym řetězcem s 1 až S atomy uhlíku, jako je například, skupina methylová;' ethylová, Propylová, isopropylová, butvlov-á, sek.-bu™ tvlová , terč - ~bu tylová , ·- entylová - neopentylova a hexylo^vá skupina Výrazem dvouvaz.ná alkylová skupina s 1 až 4 atomy, uhliku zde vždy rn ro d v n u vazr -ύ a lky] nv.,] ul r! ον o >Τ ί,.··· o- v ά ek ij. ρ 0. na. s pru mym neb u s rozvětveným řetězcem s i až 4 atomy i. ihj.. ikujako je nap ιό., · klad skup ina methvěnlová. ethylenová, pr opy.lenová, 2-met.hylproPý“· lenová a butylenová skupina Vyrazí?» atom halogenu co zde vidy mini atom chloru ., 'tiuo” ru, bromu nebo jodu Výrazem ha]..ogen&lkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku se zde. vidy míní <a.l,kyJ.rv.-.j uhlovodíkový skupinu 3 ρř]mým nebo s o··.’ větveným řetězcem s T až 4 atomy uhliku s jedním, dvěma nebo tře.“' mj. vázanými atomy halogenu - Jako je. například skupina chlor methylová . 2- bró»ět hy] qvá , 1 - chrl nr isopropylová - 3 - fluor pr opvlová, 2., 3dibr ombu t vlová , :>· li.tor i sobu tv leva , „i čííi·' -.....butyle^vá a trií I methylová skupinauor ~ '•Výrazem nik ’yl i.hj oskuPi na s 1 až 6 % l;omv uhlíku se zde vždy

ΖΛ.; . '_ .· mini ''-laikyl.ová uhlovodíková skupina s přímým nebo s rozvětveným, řetězcem s .1 až 6 atomy uhlíku, -vázaná na zbytek molekuly· prostřednictvím atomu síry- Jako typické Příklady takové skupiny se u~ ^f-tkylthioskupina ftthylthiOskupiriáiýii:;prOpýlthióSkupíriáý· ' ?. soProPy li h j. o sk >j ρ ζ,η.ο a bu t y 11 H-j.oskup j. .r ·;,<.. Výkvět loni. 'v yr'azu a 1“ _i· y.1řhlogi-.ui:;;.r.', ;, ! yl ř :.-1,-..11.:......uhllKul—-Ipyk, ; · výrazu ^ualkylthioskupinu s· t až 4 atomy uhlíku..

.....n · Výrazem alkylaminoskupina s 1 až 4 atomy uhlíku se? zde vždy ''ritrl dJ.kyó.iva >jhlovi.).!.i'.k.ová skuPiiia Přímým nebe· o rozvěl.,ve~ riyii» ret fect* 4 atomy uhlíku» a ni na zb vtek molekul'·,,' prostřednictvím amippskupiny - Příkladně se uvádějí methylamj.noskupíria, ethylaminoskupina , propylaminoskupina, isopropylamino•skuPina, butylaminuskuPlriá a sek, --bijtyl.ámino?ikn.piua.

;·.··.. Výrazem dialkylaminoskupiria S 1 až 4 atomy uhlíku v alky lovem podílu se zde Vidy dvy. aíkylové u.hio’»'odiKové skupiny s přímým nebo s rozvětveným řetěze em s 1 až 4 atomy uh’J-íku, váza — i - ...v.. . . . . · né na zbytek mo..te.k.».t.I y Prostřednictvím jediné aminoskuptriy - Příkladně se uvádějí, dimethylaminoskupina , met hvl.ethyl.amj noskupina , methyl isopropylaminoskuPina, 'terč-butylisopropvlaminoskupina a di-tere--butvlaminoskupinaVýrazem alkanoylpvá' skupina s ? ni 6 atomy uhlíku” ·-:,· zde • vady mj.nl alkylová uhlovodíková skupina z přímým nebo s rozvětveným řetězcem z 1 al 5 atomy ..i...'řr vázaná na kai-bonv'lový> podlí•Jako typické Příklady takové skupiny se uvádějí skup lna ethanoylová, propanovlova, isopropanoylová, butanoylová, terč --butanoy..lová, pentanoylová, hexanoylová a d-me.thyl.pentanoylová skupina.

Výrazem 'N.-a j.ky.l.kar bamovlová skupinu s i - az 4 atomy -uhlíku v a].kýlovým podílu se zde vždy mini skupina s přímým nebo _________,_r.o.zvět.-Ver.i.ý.m._a.lk-ylo-v.ý.m—»T-etě,zeem-fř--1—a-ž—4-atomy-uhltk:ui—/ázaTTá liíi atom dusíku karbamoylovéhť;. podílu- Jako typické příklady takové skupiny se., uvádějí skupina N-methylkarbampylová, N-ethylkarbamoy .1, o v á , N ~p r op y 1 k a i- b o moy.]. <? v á , N - χ<·, o p i - ,-jp y j..k a ť b a moy o'·' áN ~b ut y.'l. z.

· k arbamoy 1. o vy u N.-.t.er -buty.1. kar ba^moy lová skupina·Výrazem heterocyklická Jv~h...ř se zdi-? vždy n útí nesut“ stituovaná nebo substituovat iá stabilní pět j.členná až sem-j.členné

1?

monocyk li _ck.á skupí na nebo sedmičlenná a 2 deset, i členná bicyklická heter ocvkli.cká skupina, která je nasycená a obsahuje atomy uhlíku a jeden až tři heteroatomy, volené ze souboru:zahrnujícího atom dusíku, kyslíku a síry, Přičemž heteroatomy kyslíku a síry mohou být popřípadě oxidovány a atom dusíku mQže. být popřípadě kvartérni~ov áii.. H ot οι -oo yk ) ί uká skupina muže bý í vázána pr ostřednict-vím

Jí·' Γ il··.'/?¹ AC* 31. J. V. c.íi κΐ í íč-k/·.; Γ**1.ίζ.Λ být. substituovaná jedním, dvěma nebo třemi substituenty nezávisle' vriJ o;·sými 2^f-‘ souboru zahrnu,iícíhrj utrpí h.y.! oPénu » hy/Jr oxyskuPinu »' ů

tr í tuormetriv novou skupinu, kýlovou skupinu ·> i áž b atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, karboxyskupinu',. alkoxykarbonylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku.v alkoxypodílu, k (, r 1* a.mo /j ri ve. .υ, i skijpinu u aminrrdnjp-j nu .

Výrazem nenasyť, nesubst 111 .i ovgri á nebo ná heterocyklická skupina .se zde ..vždy : míní substituovariá stabilní pětičlenná až semi-

-i	č .l..ei má	monocyk H cká	skupina	nebo sedmičlenná	už descličlenná bi-
4	cyk-li ká,	tl ,:j { OCVk	ic k á. sk u	plna která má.	jednu nebo několik
t ř	dvojných	v a z e b a k i e	rá obsahu	..ie atomy uhlíků a	jeden až tři h e t e —
)	i-nato my,	'•'C'-.' ze	souboru z	ah i nu j ic i h o a t o m	dusíku·, kyslíku a
	Siry, př	i.c emž h et er o	•atomy kys	líkij a síry mohou	být. PoPříPádě OXir
	dovány	a atom dusík	.υ muž·?, bý	i, popřípadě kvart	ernizovári · Heter o~
	cyk lir:ká	rierwsycerá	skupina	muže hyt vázána P	r ostřednict.vím k te-
	r eh ok o.!, i	v het.nrouío	•mu nebo	atomu uhlíku k	vyt.vořei o. ' j..j r tí
	struktur	y . hi-.1.0.1- ocy	ííjj.oká ·....·	uPů na i··- nesníst..	i tuovuná nebo mýrže
	být. sufos	tituovaná je	dním, d.vé	mu nebo třemi sub	st i tuenty nezávi sle
	vo.l eny ml	·.': Souboru	zahrr m j.(	t.sjho atom halose	nu, hydroxyskupinu,

! až: ž atomy υ·”>xyskuPtnu, alkov a J. k o x y p o tl 111„ enýc-h heterocy kpiperazinýtová, a 11. d i η v 1 o vyi„ p y i »n i d azn.l. 1 ny ,1 o^vá , j.midli iv 1 ijvj .. py11· Ί 11 u ořme i Jiy .1 jut ju s-kijpl nu . alkylovou skupinu s iíku, alkoxyskupinu s I až 4 atomy uhlíku, karbo xykarbonylovou skupinu s 1 až 3 .atomy uhlíku kar bamoy .Lovou <..) 11p-jp u j &mj rioskupinu Jakož to p ří.k Judy heter o cyk iických- a nenasyc Iických ... I: 11~; ι ·Ί·«·'. .u· - j !' skupinu Ρ ϊ Pr i· i.d. i i r.' ?'.·,'· , azePi nyj nv-á . PvrrnJ. v lová , píp orid ony lovu , pyrr r azolylová , pyr .-.ool.i.d lny.Lová , imiduzoly Ι,η'Λί , imidazoli dinvlováí, PyrldyJ.ovj Pvrazi nýtová, pyr t o

Γ 'i. CÍ <i Z 71, Γ i V .1 7 z/m J. V J O'·*<* - OX ř.Ci ϋ 17J. il j 1' i V .ί i?V <a , .1 ;·>/. X<:C£i7j í V.lO .i « J j O - <i zolidinylová , mor f olinylčvá , thiazo).ylová, tM ..azolld j..i-tylová, iso~ thiázolylóvá , chinuklí diny lová, isot.hiazolidinylová . indoly! ová , chinoiinylová i·?···· isochinolinylová; benzi.miďaxoly 1 ová thladiazolylová , benzopyr any lová , benzothiazolylová, furylová , tetrahydrofurylová, tetrahydropyranylová,. thieriylová , · benzot-hienylová , thiamor f o i. i ny i o ‘Aš , ί.·Ί i a mot f ol ..i. c tv J. cu i f o* i. d o v ά , i;, h j „a mor f v.».1. i i jy J. sul ono vý , roisochlriolinylová, 3-methylimi.dazoIylová, 3-methoxypyridylová , 4-chlorchi.rtoli.nvlová, 4-amínothi azolylová , 8-methylchiriolinylová , 6 ^—cb lorcM noxa J. Ιην J, o vý . ί — ei·, byj pvr ϊ Ινίη'/Λ . δ —^ι^Μ'ηο·'·..!> en™ 5 ml dezo — lylová, . 4-hydraXyturylová, 4-methyl'i.sochinolinyloyá» ó , 8-dibromchinoliriylová , 4 , 8-dimet'hylnaf tylová, ?-methyl- 1 , Z , 3·, 4-tetráhydr o i. soch i. no J.l.riv J.o vá , N —.m f-· t hy ,t.,cb i r m .1,.1, r i - ? —y .1. ová. a 2. - f cr c “b · j t oxykar — ooriVi” * > ·- > 4, 4 ~ tol.··'ahydv oic.jchino.li.i·’.^-7-ylová sr.upina.

Výrazem “arýl se zde vSdv míní' feiívlová nebo nafty lová skupina, která je nesubstituovaná nebo Je substituovaná jednou, dvřima nebvf třemi, skupinami, na sobě nezávisle voj:.e.nými.'ze 'souboru zahrnující Ho atom halogenu , hydroxyskupinu , trifluormethylovou skuPinu, aikyřovoti skupinu s i až 4 atomy uhj.íku. a.ikoxyskupi.nu „n“’ Přo.r o(j.né u.vadé fl ., 5.....aiíiiet ny li enyl ο'·'ά ,

ι. οι s ¹ až 4 atomy uh.i.„tku , karbo^vskupinu.. aJ.koxvka?· biji >v .lovou skupinu s 1 oi 4 atomy uhliku a.lko^vPodílu, k<<rbamoýlovqu skupinu... amj. — noskuPinu a morf oJ.inoaJ.koxvskuPlnu s až 4 atomy uhlíku v alko^-

y.\’ p f i <1ί i * !j . J .'^j i·:’ <^ι'^:ζ1 ri i V:' 3* ;>-\j ί uVp, skupina 4 ‘-nie ÍJni.f eny lová, ?~ethylnaf ty'j o'-'a ti -roh lor na f tylová, '3 -a mír ior ia f tyl ová a 4 - k «irboXy f er ry lová sk u o ina .

Iyr <:i'.vi·.,·.·>~ri .;.<ni.i„i ujkysi;íj..j.í n.j’-'y PostraniO. reteze;'. Stí jun 'edv ru.. · ť':”L oddělený atom nebo skupina wiTond no n-otom uhlíku a majyjcí ií· váoa;o.’'.,! k:,ai i í-jvi,'·,.¹ skUPS nu j amiηνϊ'.ίυΡiriu - i •'•. o OJ :

řetězce Jsou volen v ze dvaceti. Přírodně se. vyskytujících ami.nokyvou se.j.inVýrazem aminokyselinový zbytek se zde vidy míní zbytek přírodně se výskytu jí cl· aminokyseliny a. jejich odpovídající

PoziC-ní —i-somnr-y · —a— va-r-i-a-n-t-y-— ’ yPírekC· -•••poz-i-č-nl.·· isomei··/· -a- · v-ar ί. ar rty zahrnuji Prii: ladně J-ami .nu..¢-1.i .ρ υΆ’υ kyselinu Υ'··9·.!} , οι,ϊ ι ío-J i ρ ο^- k',·'::·'· i tir.i (bAad'·, β“ .a taní. 11 (bAJnj, /-am·.; riomdou.tnut.i kyselinu (Abu) , nnfíiáseiriútJ· ky«j<^J 1 nu (4Abu) , O~ami,t «okapruovou kvseiinu (Acp) , ?-amirií?he.ptanoovou kyselinu (Aha), 2-aminoi.sobutyio^vou kyselinu (Aj_b) , 3-aminoisomáiselnou kyselí nu (bAj.b) , Ζ-βηνΙηοΡίπιοΙοvou kyselinu. (Apm)j ' ?4-diáminoisoméšéInou kyselinu (Obú), desmosin (Des), 2, 2. '-diaminopimelovou kyselinu (Dpm) , Z, S-diaminopr opinriovňu.. kyselinu (Opr) , rk-ethylQlycin ••(Et.G.ly) , N.-ethylaspará.gi.n :(.10-,,0,. hyb ,-, íXyJ ysl i, (Hyj). o I j i J : y ,1 r f .·:·.· | ϊ ( /_:H\ú ') . -···,·'··.· p i' oj.i': , c „'p , Z.π y (; * i j‘< y:? η η ί'! i«^riyp) . ' l O', (Ti ij S 1.1 i '·. ι.··ι-;.ί .. .-s.l ·,) ;

soleucin (alle) , N-methylglycin (MeGly) , N-methy lisoleucirt (Melle)·. N-methyl lysin (Mni. .vs) - riorva].in (Nva) . nor]eucin (Min)., .nrnithlrj (Os-1'i) , cysnnaia.ni r. (CA) , gama-íyy b-..rcyglu tů«ls : . Č z,n._:. serin, α-naftylalanin (MA), β-naftylalanin (bNA), S-galaktosyicysteiri. gIveinamid, M- formylmethionin a i.yr'»..>sin“O-suifát ··'<··.·· ·-·;,; proteasa se vily η'ι·’ Projteolvtick v er··-..·“·.

který zeslabuje nebo Stepi peptidové v_i(zby v určitých Proteinevých substrátech. Výrazem lysnsomálni prote-isa -se vidy mini proteasv, které se charakteristicky vyskytuji v. buněčném iysosomu - Výrezeei aspartylprot-easa se vgdy mini skupina Proteo.Lyt.ických enzymů pepsinovcho rodu, které funguji zpravidla za kyselých podmínek. Výskyt aspartylproteas je čase -omezen na zvláštní. mleta v těle, jako jsou naPri.k’1 ad žaludek, 7 buněčné n · ··,·. I.party] Protcasy. jsou klasifikovány jakožto £(..15.4.23. 2 v j čni význam ^má Podle vynálezu k.y l.hypsin O, což je asPar ty (Pr vteasa, kte~

r' ď.	funguje	V buněčných ly sozobech.. !\.v,-ď.u <:	J. ... í . . .. ........1 : i ' t.M k-i.ť v3 ,<AI t. y.l.ťl
'1	e v ' e tne	kat-hepsinu (? popral iamg y Wnnc	(..i. Cell· bio·':. i'ii:.ni 33
('1)	, sir 53	až 63, 1937).

Vyi- ...f-r inhibitor proteauy :-,·.· zde '-.Cd·,· m lni sioučenina, nol ek v .1. r ·.·; b o ] 1 i.;.k a , k l ·..···-£! i nh.-i.bij j₍~> funkci pr '•t.eacv . th:; -v lál I <· inhibitory buněčné Proteasv podle vynálezu inhibuji funkci buněčné. proteasv, která je zahrnuta nebo je zodpovědná za iritr acoiu'“ lir ni zpracováni APP ria Ρ·ΑΡ . Podobně inhibitory aspar tviproteasy

Próteasami. kLevé ' c par l:vlřn..-tG<r;y, jsou primárné zudPo Př eéově tm I- el lo .-ron. n ι/V Γ u.·.' <\.Í Pt ýn.Kť'·· nl ít' I inhibuji funkci, asPar tylproleasy, která je zahrnuta nebij j.=. zodpovědná za iritracelulárhi'zpracováni APP rra GAP a inhibitory kat“ hupslo. L» i ťihibu j.l funkci. kat hep sinu V .. Pravděpodobni ce.l o l.-5ri'a ^n,i cr

- 20 by1proteasy mohou být voleny v souhlase s volbou způsobů podle vynálezu. Obecný přehled aspartyIproteas a kathepsinu D zvláště

- je v publikaci Rich, Inhibitors of Asparbic ProLeinases“ Protei; naše Inhibitors, Barrett. a Salvesen, vyd. Elsevier Science Publishers BV, Amsterdam, 19*36, str. 179 až 217 ě Výrazem “statinový derivát“ se zde vždy míní sloučenina obecného vzorce

R²

kde i a R¹ malí význam, uvedený u obecného vzorce I. Příkladně se uvádí· st.atin (Sta) shora uvedeného obecného vzorce, kde znamená i 1 a R¹ isopropylovou skupinu. -4-Amino-3-hydroxy-5-f eny lpentanoová skupíina CAHPPA) přichází v úvahu tehdy, kdy znamená i 1 a R¹ fenylovou skupinu. ...... .. ....

Jakožto výhodné inhibitory aspartyIproteasy se uvádějí inhibitory kathepsinu D. Výhodnými inhibitory kathepsinu D jsou sloučeniny obecného vzorce I a II.

Jakkoliv- všechny shora uvedené kombinace pro sloučeniny obecného vzorce T a II poskytují sloučeniny schopné inhibovat asparty1proteasy, například kathepsin D, je použití určitých sloučenin výhodné.

2e sloučenin obecného vzorce I je výhodnou sloučenina obecného vzorce I. kde znamená i 1 ,

R¹ skupinu vzorce -CH(CH3)2 nebo fenylovou skupinu.

V skupinu obecného vzorce

kde znamená

1 nebo 2 , .

R^3u atom vodíku nebo skupinu -B-X-R°, kde znamená β skupinu -CCO)- nebo -3(0)2-,

X skupinu -(CHaig- nebo -(CHs)m-0-(CHa)n- , kde znamená d

m-a n

0,

na sobě nezávisle 0, 1 nebo 2,

alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, arylo-

vou skupinu nebo nenasycenou het.erocy k 1 i ckou

skupinu.

R-) aminokyselinový postranní řetězec, skupinu vzorce -CH2CH3 , -ciísCHsnb , -CHz (CHz )2C’b - -CH2CN nebo -CHz-R^2a, kde znamená

R-’λ ary lovou skupinu, f? s ku ρ i n u v z ořee

.r„

kile znamená

Y fenylovou skupinu

R^4u aminoskupinu a skupinu vzorce -CfOlNHťterč.-buky l ) , za podmínky, že v případě, kdy znamená R skupinu

- '?'? -

zřiaméná 1 2 ...

-' nebo' její farmaceuticky vhodná sul.

-//// - r: Z.. vý hodných. s 1 oučen i n,. obecného- .vzorce I le předevš ío- výhod nou sloučenina obecného vzorce I. kde znamená

S skup inu -ECO ..·..·; / m L . .

R° skupinu met.hýlovou, fenylovou, vou, . ... . R² skupinu vzorce

-CH2CH3, -CH2CH3CH3. -CH₂-R^2a,

R^2a nafty 1 ovou skupinu a R skupinu vzorce pyr idy1ovou nebo c h i no1 i nylokde znamená

j

kde znamená

R^ ^u am i nos ku p i n u nebo jeli £ armacent i cky_ v hodná _sů 1 . _________________

Ne ~ivý hodnějším i. sloučeninami obecného vzorce· I jsou^:

CH3CCO)-bNA-Va1-Sta-Leu-bNA-NHs,

CH3CC0Í-NA-Nva-Sta-Nva-NA-NH2.

tdl3 CCO^Á-^á-Á^lFPA‘-dlvň-NA^NH27 * ........

CH3C<0)- ΝΑ-Vat-Sta-Abu-NA-Nlte a NA-Va1-Nva-AHPPA-Leu-NA-NHa.

— ···.' . - ._.. \.

Lr'·?-·-·-·.·'.: nebo-Jejich·; farmaceuticky vhodně soli.· ...

ix’:·;·· ·;·_: Jak shora uvedeno, kathepsinové 0 inhibitor v zahrnují slou^- y_;;y.-é _čeniny, které napodobuji karbuxyzakončerií βΑΡ za včlenfinl alespoň

-*®^1sí'--'-~-^,'J'₍2‘ďiřjoh‘o'' státxnu. nebo'derivátu statinu, s výhodou v místě arialo- ).-- i ·· gičkěro k’· - aminokyselinám 41 nebo 42 k.ai'bo'<y.Lo^vého zakoričerií βΑΡ.

' ' 'Výhodnými sloučeninami' obecného vzorce II jsou tudiS sloučeniny obecného v/ozrce 5 * ·. *O.·.·? 'Zjiíimrfiý z ·> neon ι- ιοί..’ i.: j ej .· o η ΐ ,v i.„»-r.r.·^—

t.:..:..-../ . .-.i / lOii ; _;.·2·._. těchto výhodných sloučenin.· jsou nejvýhodně jší mi sloučeniny obecného. vzorce. I

P7- olv-íů®') r-íki ) ' - ;P® Tíh OK kde znamená t < nebo J »

R® no sobe nezávis le ..ir· z.- _; zbytek íR®} i.l·;, -.:)-/.,0....1..0-1..0-..-0 d i.'-'·;-'siiíf.lnu, (PS) Ala ., z· Lat i v: nebo derivát st otim.i, za Podm-ii-jky, ze aiespoíi juděn ze symbolu (Ρ^:·ζ meizol slatin nebo derivát ytatinu, nebe a (R® z.n,?i ejich farmaceutickv vhodné solitěch t o '-'vhodných s. I. o u é v ^r i i. n i z h o . o é i' i z i nej vy.o.,oné j iz. n i.

oč -z· ny

C H 3C { O ) --Í:? I, y - V,.j i..--V ·ϋ -ii o - A j a — ϊ h 1- - (,>H a

O1 v - V e'I. - V a Ί - ?, r z - A Ί. e - T h 1 - - 0 H nebo jejzu..z'i tarmaceul. leky vhodné 1 .

Pt-.'!-‘i.i d./ivó oloupeni ny obecného v ?«J sou i Po<11 e '-'yná.Lozu se mohou Připravovat klasickým iierri.ť žoldovým způsobem postupné syntézy Peptidu v pevné táži- Podrobné vysvětleni jednot..!ivý₍..:h

:.1-.-1 jsou nziPřl.k.f aU pr i'c·»··zv.? ·.-·..·.'zn 1/-// .-m ;e ί '.o-j, chromat.o9r a^ie u ninhydí lnové zkoušky, podrobné PoPsul Stewart. 3 Younci, 1984, Solid f*hase Pept.ide Syn thesis , 4·- vydáni (Piercé C h ijiTi/i. i.-a 1 t ijmpar tv) Syntéza peptidu začíná kopulaci první chráněné aminokyseliny . z ňa pryskyřici například na p-methvlbenzhydrylamjnovrúj Pryskyř'!ci- Adice každé t“Boc-aminokyseliny'-šé Provádí Přidáním přibl iztně ( .η' Př ib.J. léně -ζ .--1-ví. yo .!.</niu,, s výhodou v - -v i-·-*· i -- <«.1..-.--iz'..u t,ι ·ιι..-.-- -~ mirif.iky:-.·.* .i i rzv k Pryskyřici ΛPravidlu st· POJ.<ivá pnu.

,y 1

		- ? 4 -
ekvivalentu, s	Výhodou	1,25 ekvivalentu při adici t—6oc~Sta·nebo
t-Boc-AHPPA.'	t-Boc-^ta	, t~Boe-AHPPA a jiné deriváty statinu. se
připravuji v |	podstatě	způsobem, který popsal. Hul a kol-, J. Med-
Chem., 30, str	- 1287 až	1295, 1987 a 8oger'a k.o3/-, JE Med- Chem.,
28/ str. 1779	, 1965.	Tento způsob je podrobně popsán v přxkla~
dech 36 oi -4 8 ..
'· 'ry-·-.-/:·	'/υ/ m	y //i-- používá ko zjilfční Přítomnosti, vol-

riých a”⁵l.l ιθί1·-ύΡΐη - !'''„i. (y d r ii.i'-'či t .1...1.: í,k i ič p ř^! jdá I iim jedné kapky 7056 fenolového roztoku v alkoholu, jako je například ethanol fEOH) ()p vzoi-kij směsi P^-tld/Prvskvf ice s následným při dáním J ''<) r ný kyj p >< \· ! .), di Γ íi J V. jí li (' í .iy ί i i i- ...i i. ob./i !'i | 1,/ ,/,,l i i.) , QlJO Z M >’. y ./.i, /1 j d j draselného), s následným přidáním jedné kapky riinhydrinového roz f'Oriečfié zkušební s<něs se zahři.váním udr dfibi! <i ί.',ι.ι fllj I (( t [. . Mi<j i Z rjr./bri /< ]’ if.a (’ O V />

zabarveni naznačuje přítomnost, volných ami.n0skupi.r1·, zatímco lehce žluté zabarveni naznačuje nepřítomnost volných aminoskupinMelo ·<.· nj.nhydrinová zkouška e._;- pi··ovádi tak, i.? :?· nejdříve Promyje sme s pop lid / pry s>k y j'- j c e d v a k t- a t rozt okem 5 % t rl eth v iami nu v met.h v i ench J..01. i d u, pak tří krát methy lei ichloridem 'a směs se :.ť) , 1'i-t tlaku·. Ir.·; ··; zisky suchá Pevni Prys^- tok «.ι (0,/oM v 1/1,0,-.1111.,)..0..1/ zuje 1'i.y teplotě ' ¹1 ' C d kyřice- '^e zk ulehni z k 1.1 m ?.

to i- c-vříe j. a Lk..y e se s Ή i cl ί 1 i ai 5 ma ε O, 1 mχ kyanidu dr-asel ného <.zpr 3ř'O^vaného Amber J./! tem 1/, od straněni amoniaku), Q.. 04 m]_;. ninhydrinu

ZPracovanéPo Mr — .) . Výs.i i--'/1 ρ./ roztek s·”. Z

/.ι O , Ob m1 f i'^:,f uj J u (také iv á r 1 ?i 1' · i .1 d r i u j o 11 a e P .I ote i OQ t po ('.lofou m b i j z,- 10 deseti, mi nu*. , Pak se ord'¹.! o 1 i, ve studené vodě a sfnlsl se. s Ί nij. 60!£ ethanolu. VýsJndriv roztok semiši ' a zfilt.ru je se přes vi-st,u sklenění vy my. Zkumavka se pro P i, á i';h|· ie 1 v,/l·:: í ,..1. 1, ./' m.!. O ..'/M Lotr ac-i.hy .1. ,~rm iniumch lor j..d u v methylen· chloridu a pak se ti Ltrátv spojí. Promyjí se a zředí se na 2,0

Přidáním b0% ethanoíového_ roztoku· ^bsorbance_se_i.idí?.čl.t...á_.!Zři—_57_0..

nm proti, samotně reagenoii- 8vět.l.é barva naznačuje vysoké procento kopulace- Ninhyrfrinovou zkoušku přizpůsobil Stewarti a Yaung (jak shora υvedono) á Kaiier a kol.'. Anal.- Biochem.., 34, str.' 595, ' 1970 . ~ ' ......... ....... ' nrtijhriu Př i P i ao v a i; >> sobě známými způsoby - k <. ik.< .1 d ·. ,ίι-ΙηιΊ. I ,.i v\?il>

Louřerun

V ^:...' b Ο )// )* ! !.·.· h í.l V 4 'i' ; i - 1

:.1-. ,·

J e j '1 <· r 1 p (·· r: k: 1,11 ··· <;. i.1 r y (;

a.J “ případech není jinak uvedeno, nemá volba rozpouštědla rozhodující význam, pokud ie takové rozpouštědlo inertní k reakčním složkám a reakční složky jsou v něm dostatečně rozpustné k dosažení žádané reakce. Především se sloučeniny obecného vzorce I

R¹ í

(CH?) \

(I)

R kde znamená >3w tí

-‘V

R i

a R¹ . R^Su, R² i a j malí shora, uvedený význam, připravují podle reakčního schéma I.

Reakční schéma I

R¹

R¹ .

(W“CH )

kde znamená

J ,. skupinu halogenidovou, methansulfonátovou, benzensulfonátovou, p—toluensúlfnnátovou, acetátovou nebo triiluoracetátovou skupinu a V, R^3w, R² j. i a R¹ mají shora uvedený význam.

Reakce í se může provádět, kopulaci slóúčéhiúý obecného vzorce Ia se sloučeninou obecného vzorce V-OH v přítomnosti kopulaČního činidla a v přítomnosti nebo v nepřítomnosti promotoru. Karboxy lové kyseliny jakožto reakční složky so zpravidla používá v množství přibližně ekvimolárním až v množství přibližně. 3 mol <3M) nadbytku se zřetelem na oxiranové reakční.činidlo, s výhodou v nadbytku 2M- Kopu lučního činidla se obvykle používá v množství přibližně ekvimolárním až v mírném nadbytku se zřetelem na karboxy lovou kyselinu jakožto reakční činidlo. Jakožto typická rozpouštědla, vhodná přej uvedenou reakci, se uvádějí dimethylformamid neSjo terrahydrof uran nebo systém dimethylformamid/terrahdrofuran. Reakce ie obecně v podstatě ukončena za 1 až 72 hodin za provádění při teplotě přibližně -13 C až teplotě zpětného toku reakční směsi. Reakce se s výhodou provádí .při teplotě přibližně □ až přibližně 30 C po dobu 24 aŽ 43 hodin. Výhodným promotorem při . reakci je hy.droxybénzotr .i azol hydrát. (HOBT. IfeO) , Jakožto typické ‘ příkládý křípu‘láčň'í čh“‘č ιΈΎ3οΓ“ se uvádějí karbodiimidy. jako například N.N -diethy1karbodi imid a dicyklohexyIkarbodiimnid (DCC); imidazoly. jako například karbonyldiimidazol-jakož také například

- hydroxybenzotriazolinesy lát, N-ethoxykarbony 1 - 2-ethoxy -1,2-dihydrochinol i n C EEDQ). benzotriazoí-1-yloxytris(d imethylam i no)fosfoniumhexafluorfosfát <BOP). o-benzotri aza- 1-y l-Ν . Ν , li ,N -tetraý -methyl uran i umhexaf luorf osf át CHBTIJ) a benzotriazoi-l-yl-oxytripyrrolidinofosfoniumhexafluorfosfát (PyBOP). Výhodným kopulačním sř?'.c i π i d lenrj é - běnzótř i azó1-4-y loxytr i s C d i met hy l am i no ) f osf on i umhexaf luorfosfát (BOP). Reakce I je blíže objasněna υ příkladu 1.

Jakmi te ie reakce T ukončena, mflže se produkt izolovat o sobe známými způsoby, například filtrací nebo odstraněním reakčního rozpouštědla extrakcí, odpařením nebo dekantací- Produkt se může dále popřípadě čistit o sobě známými způsoby, například krystalizaci, chromatografií na pevných nosičích, například na silikagelu nebr? na oxidu hlinitém.

Sloučeniny.obecného vzorce la, používané při reakci I. se mohou připravovat podle reakčního schéma Reakční schéma IA

1. ÍCHj) ;.:-2

2. 2 ekv..,

CH₃SO₃C1

R^: θ zásadou kata lyžovaná cyklizace (CHtIi ICH₂)í

0’ (I)

Reakce podle reakčního schéma Tň se provádí postupným prováu děním·.-. reakce-Iťaž· - ? -Jakmi i. e je reakce ukončena, může··-se mezi produkt- izolovat a/ri&bo čistit z a Použiti v oboru o sobě známého : způsobu- ·„·. Reakce·· podle reakčního schéma IA je. . blíže objasněna ytviPříprěvě: VXiř..Až· ·.’'-·'

Reakce Ί.Α, 1 se Provádí, smícháním 2,2..-dinietl'<yl“4,5-'dioxj..r.ai'r*^;·-· ,1,3-dióxoIariu Is nukleof líním reakčrtím · Činidlem·''.obecného' vzorce' k' — í 1/ K -j i ... i — / ;Kí'i«=·· ΧΐΊ£·ΐ^βϊΊ& Λ í^Hj’Χ ϊ- f ý {·»?’·<> 2..'Í.'U”I '2. llHi V ťQJií Γ’ΟΖ ::PóušběcQe_;:oboii., složek. .-LepSích výsledků . še může dosáhnout katalýzou solemi .mědi, například jodidem mědrc/m neb o bromidem mřdnčm.

činidlo se	ob c	iě po („lží	vá v množstv:	i !·· ř	.'· b I. X “
v Přibližně	2M	nadbytku	. se zřetelem	na	oxira-
O , S V ý ti 0d O ij	v	př±biižně	0,5íí nadbyti	<u. -	J a k.ož—
f··’; l.j řl n 'V l”> (.'!()	pr	Ό ty10 r'e	/4 K 1 · j . C:|Lj·	děj ?	: or'9a~

nická rozpouštědla, například diethylether nebo tetrahydrofuran. Reakce je v podstatě ukončena za 1 až 24 hodin, pokud se. provádí. Při. teplotě přibližně -40 *C až' Přibližně 10 C. Reakce se s výhodou Provádí, při teplotě přibližné -5 až přibližně 5 C po dobu 2 aS 6 hodinReakce IA.. 2 se Prová d.i smícháním sloučeniny, připravené

!- od J.e	reakce 3 A . I . 3 methan:	sul f ony .i	<;hJ or · d	ein ·	·’ .Inertním rcrspouč
tě·i J e	obou. složek bth.hensu.l.ti	.'nylch ίο	ι'.'ί.'Χ i·.'.'··;	/j!.j <·_·?/	,:i'.ié používá V množ
S t v ί	ř i b 1 i ž f tě e k v i m n 1 á i' n í m	::i Ž v p p i	:? i i z r \b	X l·! f	iádbyt P u metb.·ansui
101' í y ..i..	chl»jrid.u s vy 1 o 1 ,i I..H..I v pi	J.b 1.1 X i' 11/	jn . ;	b y i, r	·· u - č-j···-j·..·a , 11 .,: ρ i1, :i. t.
lad 3	V —iutid.in li'.·''·· i.. · .. : ' ·'· y	na	:'··· · n	1. .·.·:	! X V.' Ί . i X ! ΐ ·' t <ě Μ < i b .'!
i.sopr	opy let .hylamin se může pi	spří.padě	Přidá v	=. 1	P 0 d P 0 ř e r i i. r 1? a k c e
Výh od.	nýíuj. zásadami pro l.uti	o reakci	jsou	1.1- í c	? i h y.l .π i ny , :···· .:...<·:? 1

tuto .··· tr ieíhylomil·i · Jsko.il n. '.ypíck ··.« ro.oo ihO i é<č| ...i , '•hnii-ié p;

Cí, Se uvádějí áProt.j. čká orsanická roZpouStě d.i ,a , na při.k.. í.ad mcthy;1 . J.XJJί-,.li,ílC.i íi., O ú*.h l.O.tXOJt O HU.'ÍL '-..'.oJř c.í?_ . P.GcLxiXj-tc—u.*x.H4Gfar-iči—X2.rct—p r—i<— bjižné 15 minut, už Z4 hodiny, pokud sv provádí při teplotě přibližně 0 C až přibližně teplotě zpětného t.oku reakčro. směsi- Reakce se i s výhodou · PřoVádu při teplotě Přibližně Ί 5 až přibližné 30 C po dobu 15 minut až 4 hodiny.

R ,?tí k ,...!? ] κ . .:> se provádí. -jíiji ι,.-·,n nⁿ s i · ό·'··-ί n nv . připřevřnP i— ť.u.í . >0 roukco í A .. ,.' . s 0.-0.1.··.!<. vyni j »·, 1 r>!.«rj’n i !' h-^J!'' ' i'O,G ť, *,.ř pi '·'·'<) j ij i.ib, ,ij y<^5S4.i5tó/

-.1 '5 íp's'16žeí«srÁžidóvý>-’i'Ont -se·•rótfže získat pro· tuto reakci,~z oriorganio“ .· kých solíjako jsou například azidy alkalického kovu, napřiklad lithiúmázid nebo z organických solí, jako jo například tírtramet“ '^hýlguanlďihiurnázid. Azidu se' obecně' používá v množství. Přibližně ; ekyímolárnim až v přibližné 3M nadbytky azidu, s výhodou v přib··.···- ; ·; ·..· ' . ě, . . .

li.žně ZM nadbytku- Zlepšených . výtěžku sé může dosahovat Přidáním zásady, naPřlk' j .·/? 2, 6-3 u ·..-· d i t h,· . -ty s .· j.·:.. · > \ c· ; χ y .· >n<. ....,

..vhodná, pro tuto reakci, se uvádějí organická rozpouštědla, napřiDýklad-triamid hfcxamethylfosforeěné kyseliny (HMPA), dimethylformamid nebo N ,N 'dimethylproPylerimočovina (OMPíJ).. Reakce je Podstá~ tě ukončena za přit,·.ižně i -yž 44 hotlj nv - Pokud, se teplotě, přibližně 0 ’C až .přibližně teplotě zpětného toku reakční směsi- Reakce se s Přibližně i00 C po výhodou Provádí plti teplotě Přibližné é5 až dobu Přibližně 4 až- 1Z ^odinv•Reakce 1A.4 se. provádí, smícháním sloučeniny, připravené ϊε.

&

..i;

i ' T*

.. '

-es

k. i.'li o.I.ickom ť ι,,ΐζΡoo štéd l. -Jakožto typické kyPOdle reakce IA.3, se silnou kyselinou '·' a le, jako je napři klad methanol nebo ether, selirty, vhodné, pro tuto reakci, se uvádě. h v dr oh al og eni d o v o , nap ri k jo J eh | oiovo dl k o vá r _t ι·,ι b r o no v od i. k c. i vá kyselina a dále kyselina sírová. Výhodnými jsou kyseliny bydrohalogenidové, zvláště kyselina chlorovodíkový, Kyseliny se otscně používá vf· velkým nadbytků; například -v množství Přibližně 1 tM nadbytku až Přibl.ižriíl 20M nadbytku. Peakoe je v podstatě ukončenu za Přibližně 1 v? 24 hodiny, pnkud s« provádí při teplotě Přibližně θ * C až Přibližné 40 C. Reakr. e se ·?. vyj·,, ηι-ιυ provádí i-ři teplotě přibližně ZO až přibližně 30 “ C po dobu přibližně Z až 4 hodiny.

Reakce í A . .·) se Pr nv.j dl v Podsta té stejné, jijk? je p up r u ·ji Příkladně kyseliny

pro reakci 1A.2	i.J Použití	m e L h a r i s u i f c .> π y 1 o h	1 oi-idu	a sloučeniny,
Připravené Podle	hi ri'»* I A .	4 «; tou Výjimkou	> 1'»:?. ?·	;o .sloučeniny ,
připravené podle i	'pfik i1 A . 4	o b e c r i ě p o u ž i v ú	V Rif μΎ?*·	ítvi přibližné
ekvimolárním až v	přibližně	1M nadbytku se zř	etel.em	na methansui.-
f-onylchlor id .

Reakce IA.. b , vvívoi oni. n>i r er iiivéh o kruPu ;,·ι i.ky li ckv k.-;ii. ,j i \.· — zo vanou cyklizacx ·. provádí z výhodou ;._:.íri.i ehán,i.m sloučeniny. Př :i Pravené podle reek*'·,· i A.. 5 , y a.J.k.-.:x j.d.-ivým -i on l em v.· /hodném ni.··· pouštědle: Alkoxidový. iont. se získá například.2 alkoxidu amonného neb alkalických kovů. Výhodnými alkoxidcivýmí iontu pro tuto reakci jsou methoxid sodný a methoxid draselný. Jakožto typická rozpouštědla pro tuto reakci se uvádějí jakákoliv organická rozpouštědla, jako například methanol nebo tetrahydrofuran. Reakce je v podstatě ukončena za přibližně 1 až 12 hodin, pokud se provádí při teplotě přibližně 0 C až přibližně 40 C.Reakce se s výhodou provádí při teplotě přibližně 20 až přibližně 30 0 po dobu přibližně 1 až 2 hodiny.

Reakce CA.7, redukce azidosubstituentu na odpovídající amin, se s výhodou provádí katalytickou hydrogenací, s výhodou smícháním sloučeniny, připravené podle, reakce ΓΑ.6, s plynným vodíkem v přítomnosti kyseliny octové a v přítomnosti palladia na uhlí. Jakožto typická rozpouštědla pro tuto reakci se uvádějí jakákoliv organická rozpouštědla, jako například ethylacetát. Reakce je v podstatě ukončena za přibližně 1 až 24 hodin, pokud se provádí n e při teplotě přibližně 0 C až přibližně 40 C.Reakce se s výhodou ' β provádí při teplotě přibližně 20 až přibližně 30 C po dobu přibližně 2 až 5 hodin.

Nebo se redukce azidosubstituentu na odpovídající amin může provádět smícháním sloučeniny. připravené podle reakce IA,6, s trialkylfosfinem nebo s triarylfosfinem v přítomnosti vodné kyseliny octové. Jakožto typická rozpouštědla pro tuto reakci se uvádějí směsi organických rozpouštědel, jako například sysi.ém ethylacetát/acetonitril obsahující 10 % vody. Reakce je v podstatě ukončena za přibližně 1 až 12 hodin, pokud se provádí při teplotě

3· přibližně 0 C až přibližně 40 0.Reakce se s výhodou provádí při teplotě přibližně 20 až přibližně 30 0 po dobu přibližně 0,5 až hodiny. .

. — S1 oučen i-ny..-obecného -vzorce--!-, - kde znamená- · - · -.......-—------------------ - -

??

a R¹ , R^3w, R² . i a j mají shora uvedeny význam, se mohou připravovat- podle reakčního schéma TI^; ...

Reakční schéma II

kde znamená j skupinu ha 1onenidovou. methansulfonátovou. benzensulfonátovou. p-toluensulfonátovou. acetátovou nebo hrifluoraoetáLovou a W, R^3u, R'-, j, i, a R¹ mají shora uvedený význam.

Reakce· Π se muže provádět, kopulací sloučeniny obecného vzorce [a se sloučeninou obecného vzorce W-0I1 v přítomnosti kopulačniho činidla a v přítomnosti nebo v nepřítomnosti promotoru v podstatě způsobem podrobně popsaným v souvislosti s reakcí I. Reakce II je objasněna v příkladech 33 až 35.

Nebo se tyto dioly nohou připravovat podrobováním epoxidových sloučenin, připravených podle reakce f., působení vodných kyselin. Tyto dioly se také mohou izolovat jakožto vedlejší produkty epoxidových reakcí.

Sloučeniny obecného vzorce Ia

Λ*

používané při reakci II, se mohou připravovat redukcí azidových meziproduktů, připravených podle reakce IA.4, v podstatě způsobem podle reakce TA.7. Tento způsob objasňuje příprava 12,

Sloučeniny obecného vzorce V-Otí, kile znamená « skupinu obecného vzorce

a 3 znamená čísli? 2, se mohou připravovat nejprve kopulací dvou aminokyselin obecného vzorce HNs-CH< R·’ ) — C001I, kde má R² uvedený význam v souvislostí s výkladem symbolů sloučeniny obecného vzor— _ce_ _í. ·_ 2p.Ílso.beia_ pod.robně.._.pc>.p.sanýjn_v_..so.uy.i s.l.o.s.t.i „szceakc.í__I...______

Skupina, chránící aminosknpi nu, se pak odstraní o sobě známým způsobem: a získaná dipeptidová sloučenina se buď acyluje nebo se' kopuluje se sloučeninou za' získání sloučeniny obecného vzorce

OH

Di' l lhá k ιΊΡI.J .ί i ! ί.ί. Γ'i,-“.-.i 1't-- .-.I-’ íílilp| ιΊVí'.i>'! i· ! Ρ i u j .5 ; , í ’

Podrobně popsaným v souvisti s reakci l- Acyjace sr '>ů;?o provádět c_i.; vhodným ť/j... v...H:,-.1.1.rjc·Γ-ίΓr;.^,,Α.'.’·^,ί:.. , soky.-nnaten ne.-bi.’ '.. 'Vior * opmsípm’ , -y. výhodou v Přítomnosti Prostředki.i.., v.á-<>jji<-·í h<,t kysylirm, Jako jo na~ příklad terciární amin, s výhodou triethylamin. Acvlačni recky, •yhodeu. ethyj ether , cntoi·-of r.irin s inethyli-.:i ic.h.l.o ^— nincu ! en i, O .'· Pu. .·'··'.

v a r i č u r 11 u v o d. i. k v · rid» Sloučeniny ě-UH se í/d-i -.-..:-1.4:,1, p-,n··'· 1-1,

Γ'ΌίΛ'-Οί vhi )íl :|[P II > -., ij.. 1..(,. ; '. 4: i. / li.,;, Γ ; O k i; >...! ..i ...i..! : V S ::: ' i' .-..; ' >-.( í ! OU k r L.’· ;- ' '·,· — skupinou s trifosgenem' a Pak reak-cí získané sloučeniny se slouče n.-í. ex·“' ·<!'.nra uv> 'děný význam.

Nejdříve se smísí amiriukyse.3.ina se ch 1--jníínou karboxyskupinou s tii.fosgerieni v inertním rozpouštědle pro obě složky. Aminokyseliny se chráněnou r y r 0 o s v sk u ρ lnou se obecné Potj.s i v,ý > m,’ιόν st v ;i pí*i b 1 i íně ·'► ek vý m<, Cir i, n¹¹ a.t v Přibližně nadPytky s výhodou v i?v^: i b i j ,·’> ,i rS ns jt y i- l·. 11 ·...,.. .y i_-1. »-,!. cti ns c y<n.;n 'iS.yh.¹ , ''úPihil.!

·{·.!'?·.?? kyj,λιϊι Ϊ1' 1 nyc-r ík.l .«ti.l '·.r O.thy ! mj.j-> nebo di isnpr nf.?y !. et..hy J. aMj..n se nnjýe Popřípadě Přidávat Podpořeni rnyrne Jako’/·· ro i. vpi rdnú ru?^- nocna pr , ! yCr í l· r .i, eká j nsí,y pr ;i b i ! trk . · S ·. :.0r. „i.. , ' .· · : O.J ·.

ni <’ ..i- ρ r'i fc-i.;..· ne - y Pět neb O mru r ' ok on’.'.

- .'ý1 O- ,-!:·! ι Ρι'-.-ι'-,'ΛίΙ í i' 1'-p O; i ! i¹ Γ-Ί’! b. !,’í bili či O C .-r/ !' PC- ! 1 11, i .?'PÍé'i.’l’!úhn l„ í, ik >.! r es k : ri' f<i'iiěs,i, pn dobu p i i, b i ! r r !O 6 fi? I «·.'. h,.rd ί ny

Syk (,..(--¹ získaná s.i.ooÍOnina smíchy se s.l,ouě^rn' r inu c.ib, ocněho yy, η- i· ·,··.· p ^{:l w} h v i ne fcni m r nsPous ted .i e (,'biiu ?·>.! o.k>.;k - I eí-ii .<-h '''yyJed~ ý s 1 o<í k u so. dosahuje sa ...i, sJ..yyy solemi mědi s ei.P·’ ij-: ;.,?<! j .„idii,ό miJným nebo ch.ieri.dem rBědiiým . VýsJ edná (s.i nuceni ny se nbe< r-tě .pc.n.» — ý i Si íln II l ..'y·.. 1 vi pr íbi i.Sii i'-f k. V' i Kli - i I ' ! I t 1¹ i ·.!.'· P ř '! b i '1 i' li;.· ' bl n p i O V : .1 pi 'US ! ' ·(! i .-.-I , í SUÍ ^: -.1 .· Id ic i' Oy i í . .| Slinili i . i ; :i

I

X í\

Vi •v, £

í- ;. »*J S L.<,1 1.·.·/ u.i -i ií.'t?.| tet ?.-o ' ,i i?* » í - i tť··. i 5 Í4 .	i lU i.. -;:·/ ...·.,· - «.jíj .1Γ ι V , pokud £
3*7? P1' 1 J {-» J. 'V, Lip1J L»?· pr .» b * J .<1 I!.·'- i C- L	J.< Pi jJ'·’ J. .1 o. *í0 C „ γ
•. , -.·- yu../! I.' UO ' O· '	b'· 1S λ/ ρί:'i b‘j · ?ru,r· 2-0 »?
ř'O d·!.’1···'.,· p ! 'j.U Í. {' IÍ“. i J W.i lili .7.2 -	i 1 - f;
/ ’ · ·'? Γ -ό : ' '·/ ;·' P ! .1 p 2 ί ί\·' 1 : · 1	:\· ·.·-» ΓΠ i j . -- j ! Ί i , J ! i '· ”-. ! 1 í » T ií

stfťjrat ;-;;obé ;:pr ,á ib v mi v-c ijp, .,.by ., ttupr ':f.k.l. r.i hyd rol vsí. ?u -'esteru

. .se silnou kyselinou v iner tni m ruzpouí	/t čd. l.i? c»b ou sJ..Oz3?.k- - J <5 kožCo £ * B:
typická rozPouštcdle , ''vhofiné p. ·,·;, tuto	i’??i , 3‘k '·.’ Aid t··* ί”** ΐ -'du /tk* 1 1 *
té ur';-ot icř.;i k.í uu i- r' ibi i žně. i ίηχίΊυΙ si	;čj -i ;>od.i i typokud so kro-'
ric.c. pí- .i. i.ι.··P J../Lc Ρι' ί,b J i.yi ·,. , . ·.	k.yy·;·,.: ..·: 10 '-.,ι u c :/..:(:0-
.j/iún i. - ·'·’..;· C< Í; .1’·.: · O- '.·?; yi /'. O'.! C |' , 1 -,·Cl ;i	’r''J >. i,;P ý ρ r i O j.”í. ii‘ ni· bO .-ji >
ii' i o 1 j,2 r ιώ 5 Oty ·_· po dobu p i. χ,ίηό l '	X linut ui i h <-
/. k .. ,-· b nxyskupýriy i skané n 1 oi j čerri.r	•v se rnijžo chronici skupina c
) .- |·.' ·’;? Í.’J Λ ! ' 1 i. .·? k O k.Clt.á ! yí. Ί I 7 k t ) 1.1 í in ; |(.’Í ·., >	r ·. -.,;·!!ni <·υ s'fií ·: ii i i’Cíln zi-s-' i
· . ·.. , ·..: . - · .... - ' :.. ·. - Κ<.·.ΙΙ Ι1;.' IIJi.i-.'! I Jlíy í· πι|Γ Cí v '.'1’! C / >’ :·-.·.··ίι ·”ΐ'ι ií ;|'|yin	u ώ :/--/.1. r·-'-'-/I -.· -.1::.1.. .1 .J-..|-
Lož!.·.', k a 1.s j. v ..ca koř e1'1' '·' sikol'u ! íí -’«/ m	oi„t&ΐί··,·. jak·..· jsou cypr'.·,- ;
!<. 1 :/: ·/'!' !ί .·· ií? .!.. 3 titliil lO · ί··;??ί<:,Ί ; ·.!» Pť	cls í s ’ ň u$··:oni'j.1'cid .ru př i b-
lei.!··-- í rek ·-' 100'j. ny . Ρ ι -i:: .1 -.' cíi o·· s >··.'.·.	Pr : iuP i · '..- Pr :.:/..1 .; i;'-! U e
íj.k C. lepit..·!..·! sc li Γ--,.· o.· .·,; r -..„-η	- . i·''·-/.·’- '::·..· s - -.'i- i,.: Pr”·/'·'
Vid 'í Pr'”·, ί ι-'-Ρ ! ι ι ΐί /- i? /:.(-. ΓΗ’.·’' ·,· ' 1 t.i S'1 ! ι i.	·.··-<ι:-.·-·; ; Pn ti o'/ U pfill ilrú ·'

-·.' r..i' .'·'-? f i'1U i-.· 01.71' ie · l> .· ,M - ' -·-·.·:-!	I.cr -. -:ir·' ···-/ ·
r Ou i' c j. '·' ri ι..· η ně a u o s t il u o '·'·/: ?,.· -/.Ί i; io> - yst-.·· j. j	iCC C·!' -ý j !u!' r.ji.,1 i: <<i íj z. ,/;/!< tj -
.! ..i 1'· J ' 1 ” ! ··'.<!' Ό kJÍÍV J.‘1 .i, u 1 K ! < · .! 1 .'ί« i·'-.-.u	1 ·:-..’.:Ίι·.·: /: : · ,.' U i l i. 1 i
'! ! f μ :1 ; i Ji i -n - < y.o I; , 1 í-J	f'·1'· ‘-.ί:ij' .j í. 1 ' .:> ί 4/1
V Λ-..Ϊ ΐ. .‘Ί o <?. t.t·.·. ’ΐϊ'^ΙΙ· <jl :? !p -<.;) I 1\'ίϊ· P (.i n.'.'	v.;.
•šidili i.,-.'í“1 o t-O P Osob U .':·., -.-/111 i 1 it.it: Vni. t	!'/ú s r. ι/r í.inu!mu l-: ar Poxy-jku”'
Ρ.ΐΐ'ιΟυ ι' !ΐ·.?υ f Ίθ,.ί d. ι: X v'? r i ’oO« !*·.<:. 1 , :	- i-::/11 iy 1 i.i i í :i/'i ti u .//..li 1.-:0 V í.
1 ·«...·! ι ι ιθ 1 '.'.· r··'··.:-·-'! 1·'-·:.!; ·- ub- i.· :·· i ··:·.·- 'i . ' ' -	k ar bony id .1..ikiidu:.;. i./lu ue «..·-
byíCnO·- Pouč: i,'-'i v ;i/i misi o 1.’ Pribi tluk' i-kvi	.’'/O .1. .-/11-1.0 -..Ο·’ V pr.i b i. i i? i,í'í z M
1'!::! (]bvl· I· U :?’/ .PÍ5 Ο Ϊ, 0 i, ntVI i'!ú ;/ΠΊ í i :i i'V' ' η | í.| i! .1	1'. '-r /.0-.--1): -0 :/!-' Pt/rv/i/-0(:0.0-/1.1
i ,b ι ί ·ϊ :·' ! ' \ J · .,11.,.:11- r . i '< .. t i ·! Ht · .·,·» C; ·« f i j ·	Ϊ C/l J 1 ! ·'' Ρ 1 ?í » ’·'· ί 1 ’ , J . 1’ ul >· j í·:' I . i J i

acetonítri 1. Reakce je v podstatě ukončena za přibližně 15 minut o

až za 2 hodiny, pokud se provádí při teplotě přibližně 15 C až přibližně 30 C. Reakce se s výhodou provádí při teplotě přibližně 20 až přibližně 25 C po dobu přibližně 15 minut až 1 hodiny.

Pak se získaná sloučenina nechává reagovat se sloučeninou obecného. vzorce R^3u-H. kde má R^3w shora uvedený význam v inertním rozpouštědle obou složek v podstatě shora popsaným způsobem. Chránící skupina z karboxyskupíny se nakonec může odstranit rovněž shora popsanými způsoby.

Sloučeniny obecného vzorce I,' kde znamená R skupinu obecného vzorce

a tf, R¹ a Ji mají shora popsaný význam, se může připravovat podle reakčního schéma III.

Reákční schéma III

kde R. V, R¹ . i. R^3a. R^3b, A. Y a V¹ mají shora uvedený význam.

Reakce -III se, může provádět kopulací sloučeniny obecného vzorce V-OH se sloučeninou obecného vzorce lb. Tato kopulacní reakc se provádí v podstatě způsobem podrobně popsaným v souvislosti s reakcí I. Výhodným promotorem pro tuto reakci je hydroxybenzotr i azo 1 hydrá b. Výhodným kopá lačním činidlem je dicyklohexylkarbodiimid. Reakce ΙΙΪ je objasněna v příkladu 6.

Sloučeniny obecného vzorce T, kde znamená j číslo 2. se mohou připravovat tak, ze se nejdříve kopuluje sloučenina obecného vzorce Ib s áminokyse1 inou s chráněnou karboxyskupinou obecného vzorce

Rb-Nll-CIKR² >COOH kde zn’ánň?rta“R° skupí nu 'člíraiTí c“í karboxyskupinu a R² má shora uvedený význam. Tato reakce se provádí w podstatě způsobem, popsaným pro kopulaci v případě reakce I.

Ze získané sloučeniny se odstraňuje chránící skupina a sloučenina se pak nechává reagovat v inertním rozpouštědle obou složek. Lepších výsledků se dosahuje za katalýzy solemi mědi, například jodidem měďným nebo chloridem měďným- Výsledná sloučenina se obecně používá v množství přibližně ekvimolárním až v přibližné l!í nadbytku se zřetelem na sloučeninou obecného vzorce R^^w-H. Jakožto typická rozpouštědla, vhodná pro tuto reakci, se uvádějí organická rozpouštědla, například dimethy1formámid nebo acetonit-

Nebo se ze získané sloučeniny může chránící skupina odstranit. o sobě známými způsoby a. sloučenina se pak může acylovat vhodným acy 1 halogenidem, isokyanátem nebo chloríornátem sulfonylovaným vhodně substituovaným su 1 íony l.lia logenidem nebo se může kopulovat se vhodně substituovanou karboxyiovou kyselinou za získání sloučeniny obecného vzorce T. . - . .

Sloučeniny obecného vzorce T.b. kde znamená R skupinu obecného vzorce

kde jednotlivé symboly mátí shora uvedený význam. se může při pra39 vovat podle reakčního schéma IIIA.

Reákční schéma TIIA .*1

3·. si lna zásada --------->

/ (Veinrebuv amid)

&

í# .J, kde znamená

R^b skupinu chránící aminoskupinu a

R¹ , R^3a a Y mají shora uvedený význam.

Reakce IIIA se provádí postupným prováděním reakcí 1 až 6.

Jakmile je reakce ukončena, múze sé meziprodukt izolovat a/nebo popřípadě čistit o sobě známými způsoby.

Reakce IIIA.l se může provádět, aktivací, to je převáděním vhodně substituované ary 1karboxy1ové nebo nenasycené heterocyk 1 karboxy lové kyseliny na odpovídající acylchlorid nebo acyl bromid reakcí s thioriy leh lor idem, s thiony 1 bromidem, s chloridem fosforitým, s bromidem- fosforitým, s chloridem fosforečným nebo s bromidem fosforečným způsobem a za podmínek v oboru o sobe známých. Vhodné ary 1karboxylově, heterocyklkarboxy1ové nebo nenasycené heterocyklkarboxylově kyseliny jsou obchodně dostupné nebo se mohou připravovat·o sobe známými způsoby.

Při reakci IIIA.2 se acylchlorid nebo acy Ibromid, připravený .reakc-í—pedT-e—stupně¹ Τΐίί\“ΐ, nechává rnanovat s amoniakem nebo s primárním nebo se sekundárním aminem obecného vzorce

kile li⁴, R⁵ . R^ a p mají shora uvedený význam, v nepolárním aprot.ickém rozpouštědle nebo ve směsi rozpouštědel v přítomnosti nebo v nepřítomnosti prostředku, vážícího kyselinu za získání odpovídajícího amidu. Tato reakce se zpravidla provádí při teplotě při*>

bližně -20 až přibližně 25' C. Jakožto typická rozpouštědla pro tuto reakci se uvádějí ethery a chlorované uhlovodíky, především díethylether, chloroform a methylenchlorid- S výhodou se reakce přovádi” v přítomnosti prostředku, vážícího kyselinu, například v přítomnosti terciárního aminu, například triethylaminu.

Při reakci. IIIA.3 se amid, připravený reakcí podle stupně

-I.I.IA.,2-,—nee-hává-reagovat—*se *“si Tnou' žasaífríu v přítomnosti solubilizačního činidla za získání odpovídajícího aniontu. který se pak nechává reagovat ve stupni ΙΤΙΑ.4 s Veinrebovým amidem za získání ketonu. Reakce IIIA.3 se provádí v aprotickém rozpouštadle za o

teploty přibližně -78 až 0 C. Jakožto typická zásada pro provádění reakce IIIA.3 se uvádějí 1ithiumamidové zásady, alkyll ithiové zásady, s výhodou alky 11ithiové zásady s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém podílu a dialkyl1ithiové zásady s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém podílu. Jakožto typickásolubi1ižační činidla pro reakci IIIA.3 se uvádí tetramethyImethy1endiamin. Reakce IIIA.4 se provádí v aprotickém rozpouštadle za teploty přibližně' -80 až -40 C. Jakožto typická rozpouštědla pro reakci IIIA.3 a IIIA.4 se uvádějí ethery, především tetrahydrofuran. Podle reakce IIIA.4 se anion obecně používá v množství přibližně ekvimolárním až v přibližně 3M nadbytku s výhodou v přibližně 2řj nadbytku se zřetelem na Weinrebfiv amidPři reakci IIIA.5 se keton, připravený reakcí podle stupně IIIA.3, redukuje na odpovídající alkohol za použití vhodného redukčního činidla. Reakce IIIA-5 se provádí v protickém rozpouštědle za teploty přibližně -25 až 25 C. Jakožto typická redukční činidla pro provádění reakce IIIA.5 se uvádí natriumborhydrid, íthiumborhydrid, di isobuty lamoniumhydrid a natríiim-bisC2-methoxyethoxyíaluminiumhydrid. Výhodným redukčním činidlem pro tuto redukci je natriumborhydrid. Jakožto typická protická rozpouštědla pro reakci IIIA.5 se uvádějí alkoholy, především ethanol. Reakce IIIA.6 je standardní reakcí odstraňování chránící skupiny z aminoskupiny o sobě známými postupy za získání aminu obecného vzorce lb, kterého se pak používá pri shora uvedené reakci III. Amin ne může používat, pro reakci bez čištěni, s výhodou se však nejdříve čistí.

Sloučeniny obecného vzorce lb, kde znamená R skupinu obecného vzorce

se mohou při pravovát způsobem podle reakčního schéma IIIB.

Reakčni schéma TI18 ^H3\

H-.C

1· di(terč.—butyl)dikarbonát \ teplo

Η-.ΪΊ

C-3oc-N

H

redukce

5. deprotekce

H

6. acyLáce

7. deprotekce

kde jednotlivé symboly mají shora uvedený význam.

Reakce IIIB se provádí postupným prováděním reakcí 1 až 7.

Jakmile- je réa ke e'Ha končená? může ' se meziprodukt izolovat a/nebo popřípadě čistit o sobě známými způsoby.

Podle reakce IIIB.l se chrání vhodně substituovaný ary lamin nebo nenasycený heterocklamín za o sobě známých podmínek ke chránění aminoskupiny. Reakce IIIB.2-5 se provádí v podstatě způsobem, popsaným pro reakce IIIA.3-6 s tou výjimkou, že se při reakcích podle reakce ΙΙΪΒ zařazuje přídavná reakce odstraňování chránící skupiny, reakce IIIB.5, která je nutná k odstranění chránící skupiny, zavedené ve stupni IIIB.l. Používá se o sobe známých způsobů k odstraňování skupiny chránící aminoskupinu. Například t-Boc skupina.' objasněná ve stupni IIIB.l se může odstranit použitím silné kyseliny, například kyseliny trifluoroctové.

Podle reakce IIIB.6 se meziprodukt acyluje vhodným acylhalogenidem, isokyanátem nebo chlorformátem, s výhodou v přítomnosti prostředku, vázajícího kyselinu, jako jenapríklad terciární amin. s výhodou triethylamin. Acylační reakce se provádí při teplotě přibližně -20 až přibližně 25 C. Jakožto typická rozpouštědla pro tuto reakci se uvádějí ethery a chlorované uhlovodíky, s výhodou ethylether. chloroform a methylenchlorid.

Reakce IIIB7 je o sobě známou reakcí odstraňování chránící skupiny z aminoskupiny za získání aminu obecného vzorce Ib, kterého se pak používá v reakci III. Tento amin se nechává reagovat bez předchozího čistění, je však výhodné předem ho vyčistit.

Sloučeniny obecného vzorce Ib, kde znamená R skupinu obecného vzorce '

kde jednotlivé symboly mají shora uvedený význam, se mohou připravovat podle reakčního schéma IIICReakční schéma HIC

1. ' -ktivaee kyselinou vytrářea/ ' *“

2. a- dtazokarbonylu

J. H-G

4. redukce

teplo

kde R¹ . R³·³·, R^b.a Y¹ mají shora uvedený význam a kde znamená G atom halogenu.

Reakce ÍIIC se provádí postupným prováděním reakcí 1 až 7. Jakmile je reakce ukončena, múze se meziprodukt izolovat'a/nebo popřípadě čistit o sobě známými způsoby. Tato reakce je objasněna v přípravě 9.

Reakce IIIC.l se může provádět aktivací, to je převáděním karboxylové kyseliny se chráněnou aminoskupinou obecného vzorce

R^b-N v

řič odpovídající smý <.j· rý <.i nhyd r .<\< ?:či v oboru o sobů ;: i iá my ch podmínek, Napřikiat!'se kur boxy lovů kyso.linu se ohrčíruřnoi.i a» inoskuPínou nech á vá r 6<j g O v a t s s !.ky I, v. h.!. or f- Ί má 11,··'¹'¹ s í si ó atomy uhlíku v el — kýlovém Podílu, například s isobutylchlorformátem, s výhodou v přítomností pr ostředku vázajÍcího kyselinu·. Takovým pr ostřeďkem, ν»

V ÓÍ Ttoí J ·'?' 1 Vh	k vos 1 irtu ..	f · · i ♦ v' ··, , J*<! Ί» v' V’15 '·’ ’ »0 Lr' ! ·/:< 1 »< V 1 .;.i »'·>Γ Iv' > r	=·' ?·*'<] ev ší m 1.(-1.-
i·.!· I. 11V ..L <j *T* i. i' ϊ -	Γι . ,. ’,· „ r>.' k·' T I'· t“	>7 ΪΣ'· l‘r <3 .1 Lť.í pl' k.j'“' Li i ί Λ ρ ΓΧ» V.i C k“ <?iTi	- esPouštĚdíe
ΙΊč^í-1 l·’ j,s :· ,í_ťd d.	*? t.j * y .L. <> c	j/cd li. - til ;y sflXěSí'ry <j,i ii'iydr i d	.·; 3 Výhodou
používá v	dalším reed	í.čnim stupni 11 IC . 2. bez izolace	a. bez čištf;-

I i i ·

0.3,-	- ι í i e..;	77·: pro^	ádí avoustúpřiově - Ne.jp	‘ v'»’?. íti? i C-l7.iC O*;
hydr oxl. du	sodného,	Pokr y 1: ý	vrstvou etherového rozpouštědla, s vý-
hodou diet!	Ί y í bil	necháv	A	reagovat s nadbytkem N	-methy1-N-nit-
j- t i ···· *\í ·- 1' o j : o ;-·,·	<1 !Gl · r i	I . · ·. . .		'•••h.ýíí I'i ,'ii ,-c CHlíp !' '< :\rii 1 V i·-’,;'! i ;	r i’í i ’ ( j i· í —
nidla - Hydr	OXÍdu ·£	odněho s		s výhodou používá ve	f o r &iti v o dn éh o
roztoku př:	i. o i j zně	4.....ti f’í . J s	}:'	'ϊι'ί.,ί. t- -Ji: r i.t <1 *'· i·,'.·· Ρυό.ΐ:· ·'.	Lfí Ll ΟΓ11.>.·?!”;
vy:':>J i·;··· ΐ SL'	urganlx-k	s v’r st vy		VV.-j-j\ ] ýu-uj | ť/iíi , j (·.: »j j rd·.	:? z i k χ ad h vd.ro—
xid drese	..ný. kozt	1 íjk se p.;j	k	i' rí;; i b<yy,-‘i r iý.;j Cji )'/,;V 1; · '.··(· 3>‘5l	- ί·ο'· -o ihyd.r i.“
-1;··-, přl.pr.	snsnýn	o skel. H	i	C · , ;?··.{ Z.: ΐ< Γπ'ί,Ρ Ο'-'Ί Λ;	a,? 1i P-diazo-
k ar bony Ί ό'Λ	< ·.·. ! · .i	-. i - d’l		ΟΓίΓηοΙ h.yi au yn s výhod O	j Používá, bez
i.Zuisce a.	b OS. iš V.	•o· O. · ‘íeš	1 . »·:.	ce - se. zprav i. dl a Pro vád	, Prš. teplotě
přibližně	.'Z i	:i bl:;.Zbk		10 ý. a -.sort íHou pi:it íe	Ís'.-1'O -30 ' t.
i“' L i !	'uZ-o-i H	ÍC.;? se	ct	- d šus ok ar b oiď !. o vá z .Louč	;iii ise .. přípr a~
Vpf |.v ;·’ι··'·/θ·:: <;	i <í j i-	1 ýi ·-' ί ?··? i		!:,·„<: , r' ·. ς··* r ’ ί’Ί zj ,:j [·· i	3 b i:.-' ,L ! í i (tJ, i’1··'
b L; 1' ΐη,'Π i/Ί V'.- '·	H-(-	, ks,,, ,	j‘ 1	.Ί i'!l: ý.-ý ·.;.’ ./I ι'ιΙΪΙ b ,:j } i'j O ú· 1' i» 1	V a pro 11 ci' ým
r OZpr 'i.išt a d	i-e , na Pří	kb! ad	d	iůt.hy.i etheru za získání	n.—h a !. o g e n k s r —
bony kovo -£-·	Lou č en:.i, tav	.. JakeZt	ϋ	výhodná, k.yse.l.i.na pi-'ci	t..uto reakci se
1.1 ''J á > A 1 k V ΐ: <·.· ‘	i. ina 1.000,.	η' i ; ťi ,('i J »< t.	V	pí: li‘30 -k ...I (i	di-s rrí.d j l r„ i £ -
c h iork a r b cn	ryl ''V..· 3.!	i; U; r- ť-ríi.r l<5	-	Reakce co zpravidla Pr	ovádi Při teP“
lote při bl	i Zně — d 0	, · 0 “C.		Kyselina.se zpravidla p	OuŽlvá v,s for-
i‘íl ť'-' b <; .Z '/ť.,1 ('.I.	iq p-kynu	v malých		dávkách s.i dí? ukoričď!'l.	L,’·ί.!^: . f: · · í< ,ř íý.'
se muže mořil tnrovat	0 l'i ť i;.ifí>a I;	Γ}	grafit v tenký vrstvě (	Ti...O ·
p f-y...	.-,.,,.s·., -; i	! 1 C .. 4 ' - . -		i< a i-b ι- ί· iy {.··. i '--? pod.i.i douč	-::-1(1 ny . připr o. -
- :..--.1 Ρ”	. ·.- -'o- ·' !	-Z -1. iPt-H 1	)	1'......i,, .,(.,,, ι .ι i-.· ? s .ι, <.ι-.ΐ;·.	+ J 77' i ’ cd ιΊ i.·./ ť? I.! 1.'· ”·
ml nok ss ·	-.-•si . ·-	P a '-· í d a..< f	-	1 (7-1 h j, η hyc.l r C'Xyc 1 yučeri	ϊ ť ι v · f <? P r:‘ 1 k. | <ί (1.
se s ί1 ‘Učo	ru »<.<> Pr i	Pr <> v isn·;.!		r-0.4-3 i pt 'd i .o· -.-(1.1.1 Prtě 1 ! J	t d · mi‘j Z o ;;-.rn i --

chat s redukčním činidlem ve směsi rozpouštědel. Jakožto typická redukční činidla pro provádění reakce IIIC.4 se uvádí natriumborhydrid. 1 ithiumborhydrid, borhydrid zinečnatý, diisobutylamoniumhydrid a natrium-bis(2-methoxyethoxy)aluminiumhydrid- Výhodným redukčním činidlem pro tuto redukci ie natriumborhydrid. Jakožto typická rozpouštět!la pro reakci IIIC.4 se. uvádějí směsi protických a aprotických rozpouštědel, napři klad-s.v.s.tém_te.tr.ahy~ drofuran/voda. Reakce se zpravidla provádí při teplotě přibližně -10 až 10 ,C s výhodou pří teplotě 0 CPři reakci IIIC.5 se «-chlorhydroxysloučenina, připravená reakcí podle stupně TIIC.4, zpracovává silnou zásadou o sobě známým způsobem za získají odpovídajícího epoxidu. Například se «chlorhydroxysloučenina může nechávat reagovat se systémem hydroxid draselný/ethanol v alkoholickém rozpouštědle, například v ethanolu. Reakce se zpravidla provádí při teplotě přibližně 0 °C až při teplotě zpětného toku rozpouštědla, s výhodou při teplotě místnosti. _ _

Při reakci IIIC.6 se epoxid, připravený reakcí podle stupně IIIC.5, nechává reagovat s heterocyklickou sloučeninou obecného vzorce

H

kde jednotlivé symboly mají shora uvedený význam, v protickém o

rozpouštědle při teplotě přibližně 70 aš 100 C. Jakožto typická rozpouštědla pro tuto reakci se uvádějí alkoholy, především ethaQ _

------πο-l 7-S výhodou--se· reakce ^_p.rovád í^—při ^-ťep rotě^-přibri'žně'”!30' C .

Reakce IIIC.7 je o sobě známou reakcí odstraňování chránící skupiny z aminoskupiny za získání aminu obecného vzorce lb, kte_____ rého se pak používá v reakci____ITL... Tento.. am.in .se nechává-reagovat bez předchozího čistění, je však výhodné předem ho vyčistit,.

VeinrebQv amid. používaný jakožto reakční složka při reakci

ΙΤΙΑ.4 a 1IIB.3 se připravuje reakcí aminokyseliny s chráněnou aminoskupinou s N-methoxy-N-methylamínera υ přítomnosti promotoru, činidla, vázajícího kyselinu, a kopulačního činidla. Reakce se provádí v aprotickém rozpouštědle nebo ve směsi rozpouštědel při teplotě přibližně -25 až 25 C- Výhodným promotorem pro tuto reakci je hydroxybenzotriazolhydrát. Výhodným činidlem, vázajícím kyselinu, jsou terciární alkylaminy, především triethylamin, nebo N-methy Imortol in. Výhodným kopulačníra činidlem je ethyIdimethylamiriopropy 1 karbodi imidhydrochlorid. VeinrebGv amid, získaný touto reakcí, se s výhodou izoluje před použitím podle reakce IIIA.4 a IIIB.3.

Sloučeniny obecného vzorce lb, kde znamená R¹ skupinu -S-R^lx. kde R^lx znamená arylovou nebo cyklohexylevou skupinu, se připravují za použití Veinrebova amidu obecného vzorce

kde jednotlivé symboly mají shora ΙΙΙΒ.3. Tento VeinrebovGv amid se nechává reagovat serin, s chráněnou f inem a s d i ethy1azodi karboxy1 átem teplotě přibližně -80 až 0 C za tonu. Reakce se zpravidla provádí v uvedený význam reakcí Ijia.4 _Ά připravuje tak, že se nejdříve aminoskupinou. s trifenylfosv . a prot. i c kém rozpon štěd 1 e při získání odpovídajícího fi-laketheru, například v tetrahydWh rofuranu při kruh otevře, teplotě přibližně -80 čímž se získá sloučenina obecného vzorce

C. Pak se laktonový

kde jednotlivé symboly mají shora uvedený význam, reakcí laktonu se vhodně substituovaným t.h ioani oritem obecného vzorce -S-R¹ . kde R¹ má shora uvedený význam u obecného vzorce I, Thioaniontová sloučenina se s výhodou vytváří reakcí odovídajícího thiolu se silnou zásadou, například ._řs hydridem sodným nebo s hydridem draselným. Tato reakce se zpravidla provádí v aprotickém rozpouštědle při teplotě přibližně 0 až 40 C a v inertním prostředí, například v prostředí dusíku. Jakožto typické rozpouštědlo se pro tuto reakci uvádí ethery, například tetrahydrofuran. žádaný amid se pak vytvoří reakcí získané karboxylové kyseliny s N-methoxy-Nmethylaminem v přítomnosti promotoru, činidla, vázajícího kyselinu a kopulačního činidla v podstatě shora popsaným způsobem.

Sloučenina obecného vzorce Ib, kde znamená R skupinu obecného vzorce '

kde znamená

A skupinu -C- a

R^3a a Y¹ mají shora uvedený význam, se může připravit v oboru o sobě známým způsobem. . (Například zvláště R.Herranz a kol.·. J. □rg. Chem. 55, str- 2232 až 2254, 1990).

Heterocyklická reakčni činidla, používaná při způsobu podle reakce IIIC.6 obecného vzorce

kde mají jednotlivé symboly shora uvedený význam. se mohou připravovat o sobě známými způsoby. Například se heterocyklické reakcČní složky typicky připravují 2 odpovídajících aminokyselin se chráněnou aminoskupinou aktivaci kyseliny a následným zpracováním alky 1aminem. Taková reakce se zpravidla provádí v přítomnosti činidla, vázajícího kyselinu, například N-methyImorfolinu. Odstranění chránící skupiny z aminoskupiny o*sobě známým způsobem pak poskytuje heterocyklickou reakční složku používanou při reakci C.l3.· Zvláště se připravuje t 35-< 3R.< , 4nR* , 3aR*) ]-dekahydroisochinolin-3-N-terc.-butylkarboxamid za použití ¢25)-1,2,3.4tetráhydro-3-isochinolinkarboxylové kysxeliny následujícím způsobem:

1) chrání se aminoskupína Ct-Boc),

2) provádí se aktivace kyseliny reakcí s terč.-butylaminem,

3) provádí se katalytická hydrogenace,

4) odstraní se chránící skuina z aminoskupiny.

Sloučeniny obecného vzorce V-OH, používané při reakci III. se mohou připravovat o sobě známým způsobem, pokud nejsou- obchodně dostupné. Především se sloučenina obecného vzorce V-OH, kde znamená V skupinu obecného vzorce

kde vat jednotlivé symboly mají shora uvedený význam, může připravopodle shora uvedeného reakčního schéma IA.

Sloučenina obecného vzorce V-OH, kde znamená V skupinu obecného vzorce kde jednot 1 i vé

ymboly mají shora uvedený význam může přípravo50 vat podle shora uvedeného reakčního schéma IV.

Reakční schéma IV

kde q, R/ R^lw a R^2w malí shora uvedený význam a kde znamená

Εχ atom jodu nebo a 1koxykarbonylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v akoxypodílu.

V případě, že E* znamená atom jodu, provádí se reakce IV poadstupným sledem, reakcí 1 až 3. Jakmile je reakce ukončena, může se meziprodukt izolovat a/nebo čistit o sobě známým způsobem. Reakce IV je blíže Objasněna v přípravě 10.

V případě, že E* znamená alkoxykarbonylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v akoxypodílu, nechává se reagovat meziprodukt

—......-pod l e stupně--IV~1- prrmo^způsobem^podTe^ rěa^křje IV*. 3, 'přičemž reakce IV.2 není nutná.

Reakce IV.1 je o sobě známou kopulační reakcí, která se provádí v podstatě způsobem, podrobně popsaným v případě reakce

I- Reakce se provádí jednoduchým smícháním vhodně substituovaného aminového podílu obecného vzorce RR^NH, kde jednotlivé symboly mají shora uvedený význam, se sloučeninou obecného vzorce

HOOC.

R^:)₍ kde znamená E* atom jodu nebo alkoxykarbonylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v akoxypodíiu, a R^z a q mají shora uvedený význam. Reakce se provádí v nepolárním aprotickém rozpouštědle nebo ve směsi rozpouštědel v přítomnosti nebo v nepřítomnoti činidla vázajícího kyselinu za získání odpovídajícího amidu. Jakožto typická rozpouštět!la pro tuto reakci se uvádějí tetrahydrofuran a dimethy lf ormamid. Reakce se provádí při teplotě přibližně -30 až

1S přibližně 25 C. Aminu se obecně používá v ekvimolárních množstvích se zřetelem na karboxylovou kyselinu v přítomnosti ekvimolárního množství az mírného nadbytku kopulačního činidla.

Při reakci IV.2 se karbonyluje sloučenina, připravená způsobem podle, reakce IV.1, přičemž dochází k náhradě jodu jakožto substituentu alkoxykarbonylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku v akoxypodí1u,-s výhodou methoxykarbonylovou skupinou. Reakce se jednoduše provádí tak, že se smíchá jodovaný meziprodukt, katalyzátor v prostředí oxidu uhelnatého a alkoholické rozpouštědlo', s výhodou methanol, za získání alkylesteřu žádané sloučeniny. Reakce se provádí v přítomnosti činidla vázajícího kyselinu, s výhodou v přítomnosti dicyklohexylaminu. Reakce se provádí při teplotě přibližně 0 až přibližně 25 C. Výhodným katalyzátorem je bis<tri feny 1fosf inchlorid pa 1ladnatý.

Reakcí IV.3 je o sobě známá hydrolysa alkylesteřu na odpovídající karboxylovou kyselinu V-OH. které se pak používá podle reakce III.. Tato hydrolysa. se provádí smícháním alkylesteřu s hydroxidem lithným ve vhodném rozpouštědle a okyselením reakčního roztoku na hodnotu rdi 2 až 3. čímž se získá žádoucí karboxy- T?

lová kyselina obecného vzorce V-OH, ho vzorce kile znamená V skupinu obecné-

kde jednotlivé symboly mají shora uvedený význam. Jakožto typická rozpouštědla pro tuto reakci se uvádějí směsi etheru a vody.s vývýhodou systém tetrahydrofuran/voda. Reakce se provádí při teploo tě přibližně 0 až přibližně 35 C. Lithiumhydroxid jakožto reakční činidlo se používá obecně v ekv-imolárním množství až v přibližně 211 nadbytku se zřetelem na alkylester, s výhodou v ÍM nadbytku.

Pracovníkům v oboru je jasné, že může být žádoucí zavádět chemické chránící skupiny do reakčnich složek k předcházenísekundárních nežádoucích reakcí. Jakékoliv skupiny aminové, alkylaminové nebo karboxyskupiny, které mohou být, obsaženy v reakčních složkách, se mohou chránit o sobě známými chránícími skupinami , pro aminový podíl nebo karboxypodíl, které nesmí nepříznivě ovliňovat reakčni schopnost zbylé molekuly žádoucím způsobem. Jakožto výhodné skupiny pro chránění aminoskupiny se uvádějí t-Boc a Cbz. Jakožto výhodné skupiny pro chránění karboxyskupiny se uvádějí skupina benzydrylová, benzylová a allylová skupina- Různé chránící skupiny se pak mohou odstraňovat současně nebo postupně o sobě známými způsoby.

Jak. shora uvedeno, zahrnuje vynález všechny asymetrické íormy, jednotlivé isomery sloučenin podle vynálezu a jejich směsi. Takové isomery se mohou připravovat z odpovídajících prokursorú, jak shora popsáno, štěpením racemických směsí nebo dělením diástereomerů.. Štěpení se může provádět v přítomnosti štěpícího člnid‘l“a “ohromatograf i í“ nebo ‘“opakovanou krysta 1 i zac í nebo ~komb i neváním těchto zusobů, jak je v oboru obecně známo. Podrobně takové štěpení popsal Jacgues a kol., Enantiomers, Racemates, and

U, i i l ΐ I 'i <j: .-‘j ( ί,'.'Γι Í j ,·<, cj ..! i'i,' , .. 1 7 Ϊ;) :

o υ čeří i ny , Používané jako Počáteční výchozj. látky p »··<·;> Při,· l-ι υ'-'ΐ.,ι sloučeni i'i Podle, vynálezu, jsou o sobě· známé u Pokud ne jsou

ij PJ C’h odftLí	dost ι	.ipné .· mohou se snadno ř	Γ.! P ť' <ΐ Vfj V'^( í Q 3^1 b řf	Ζ'!Ι,'.ί.Γί>ν ,Π'.ί.
zPusobv,			· - -
7	·. ·:'	.-i-..·!;·:,'· U· ,	!'’ r-,-,Η A·,-·:
V7 fbí p?··	ΐ p ι· ,· ι>	í-f ! 1'U-t: -'j .-,1.1,-.crvi r, Cibéí	;;Γ'ίι·;^v.?i -r f !? ? s i:?.í	·.' j. í r· i i i j — ·
Γ0..·υ ί:>Γΐ«	< ·.“· L v	1 ίύΡ',.ί i 1 Idfiay tKt-ιΙ'ι CyS(	IV lUť-ŘL' ...... «Ά y -	• · .···.;! ·. i',
ΐ * <: ·.	' AP!'· <	3 v-i dl j . m-ís';í V ! υ:··ρ OUŠ lěd	! i'ý rj t i s .1L’.l J tj b j	i? je r>íť-
< ! · :· <	<'.i ;í. v ; ί. b \	.-I..,-·Lh,:·>ι·· iitťbi.i !ν.·.·ΐ'κΐui; 'V Př:	ί.P·/?.dA cť<11 cr’'ÍcJí	z kyše-
Λ j. : Λ-	''•kí.i.J 1'	tíOij r-:y př jřuUú	b i i' f ir ·..'::..i j ;	.z-íuuč-jí,: .
Svili ·;.Γ= ;	:’E->·-,·< '/í <	! Ί v ·.! ,· :ý Ž u. i -f Z i· r1Z t 11,;'. !	V J bii	odlny až
;! ·.:- ;.· i _ ; Η r	'•'.i :.· i» 2:	, ·;., 1. - i. ,. j /'.i | ! f. ~ j. .! t !'<?'. .·’	i' μ-f b <; j ι. · ί\? ι'ϊ·1 <? '.“-b ť·:	ΖΙ'ΐυΐ'ΓίνΓ','!..

ί;

Nítslodů jďcl. F'říPťa^vv a Při. klady vvnáJ.ez b ,1,,.17¾. ob jasnu jí. U j< ,· i i .-.'in ί. λ,. ί. j. ,-i př i p r uί· ρ r l,l< .i, a d u j ··.·.·. VíJ.-jk vr t.-i t e? ί j toLjko <ř'\ J as· iiriVZíí , nijak t:(i ’,<,',()< ηυΟ^ιΤ'ΐ;.:.ί'θν.·.!Γ...

ργ .ί p r í.fV.icb '.< P ř V k !. u d o'Ί se Po už i v,·.» z ki-.at.iyk ií 'li

V u<U-ř! udí l.iící ' . / ::.-1-(.., t,íii'.,·'. . ·<.·’··.·-<·/>·’ υ··.ου ·'···· k .j ·.. Ό-η Ό ΐ t '· U , ,-ί.οΡ-‘ i, ¹f.· ni .·.'.· ; ,-:0. ·· .. , ^: ··'.''·' Unii,·; ;.:v1 t'!'· i . Pi>;.;i ;jp <: 4< I i! .i, i':;il·.· .. ri , v i' ij i· ·ί’ i. ýlTi i . m fy iri _f !?:<: i. riT < ,jpor'-' ‘v/ť ?;j ?í-‘ r 3 .

Ρ, n '..! i I ,-i 'i i .·( j f,i -.<.·.. ‘.I< t i ,-i , ρ.'ι i O 'ií'? i'i Ϊ -i '''ί: I. t-.il lU !. V.·,’::'.i Pil' '·-’yO k i.i V y — I. 'i , j' , i' ; i· . i, _· ί < _ς i ΐ,· ι ' ! i i < i ji ''i ; i ·. 1' 10 ί I ’J / 1 ·'/ 1 ‘ i ' i¹ ’' ‘ ? ťl · ! Ji C !·' j : V · · C P’•i i ?t1 -ϊι.'ι ' 01 · 1' 1· j,r·.. •''PX

J V 1 rl A I Ί ! 1‘V!

·;·. C . A.b H nv.ij v9vri.jrři, : V I‘, ,'.ψ A 1' ι i; i i f' fJj.-j >' j ί'ΪΙ^ί

Ρ O O .A. I. Ά-.i ! J;,í í './Uk¹.¹ ί¹ . I '“i f .iř,'

I i ί'·¹ í tb , ¹ <b^ J *J b niij '5 . i p '1, > ' ij ·?

' l. Uj i ! * Í-; .1, l·;? i,, η ·,';7 j, 1' 1 .K\/ Γ i J I L.> | I - ί .

' b !·' · I. ' ·, ' i . i'll , ' i. V ?> i I ; C I, e,·}!,. , j, · i ’-?< U. ^J j '-> .! ¹ ’ t ; S U ' ^{1 :ř}’ V 1. ť P J i’.-·.···.. ··.. i | I. ; p j. . J,u - k,/.;,..· .1. <·'j ,-/ Ίρΐ aritu' Hertz (H„·. ) ..

k^l I i · ‘ i ί · Γ ! !

í ··;? - · ř i ,7 ' Ί } I b i·· j‘ ?· ·! ;.i 1

I } I i '< ; ’ '1 i

ΰ-1

QE-300 300 MHz. Ch	, ·Πι i. )·,	posuny ?h Vyjmdri.ití ’.·· delta	(t>	’> hod
t ύ c h Q ě á i. j n a m j. j. -j	f,i|i Z '' i?'	hy ! ·;·:, ijániú H in>!.. i v,-i κρ.·.·	k ·. i'	á M ':::· { !’ 0 ;
'? snímají tia spektr.	.i- ··'''··!. r o	Var ion-MAT 731 ze Použití	u!	'> I...4 k.J ...τ,-
dritových omiterti -	EIMS se	získají ny zařízeni CEC 21-	1 ío	sPol.eč-
ností C o r i so11date d.	E.leet.r odynam-j.cs Cor Poration - Spek	11 ' <J	MS ÍFAB)
•se získají ’ná spek	tr.-j-méhri	.1 VG Z.A.F'--?3.3 . b ;f 1' uěěr vnná	SPe!	.·: ·{· <7 -i .-,-j
zjišťuji i iu „řur.íze	i O	.· t. j i ín/.f' ř· i í..· ti ' .! · 5...!. ij v ’·:>		····». :.t *<t;·
provádí na silik.ag	olových	destičkách c. Merck. Teplo	ty	kání. ne-

j s o u k. o i i. g o v áti v

E.Clh.kladyP.h.QY.odertlY?ťd.lÁ.lob.u •'ί .. O. _> * L.’ j i Vb-’ Ί. : j *’J J-; -r ₍ (i !._t T ΓI I .'·; ·’. i \ ’·'·' .'· ’ ^: .' V Z ' 'i ¹ ď í. ’ l y j

Χ.·'?ϊΊ

Poet	nok 14,6 mj. (43,8	mmri í j tenv.'! maone.í-	:'i !j Vři 1“i ť tiilVj ,Ί i ) Vč? /*‘4. , 0 !lt i
				\
dl	U'i V J. ·. ; i	J . i . · p o. d·	o·Ρ..' V-I·:... ř......4o	‘... :'· ,· r ·;· ·{; ( 1 i1 _] í.
\ í	, 4 b in m i ,i j ) j > ..· <J i. < J i.,i i ti H r i é i	Ό Vt·.' i lli.]. Umet	kv 1 suJόxidu a hl ml.
ke	'.o ol' ydr	o τ ur a r su v pr us t.řo·	Ji d1 .i S ..i’·: u .	3P m.!. ιη’Ί Po di.?Pi.i P až
0	minut	j Prlei se roztok	3,71 9 -..··.	.} i , · : P , u-· dui, unnyd.,··<-.►.....
	j- t ?3 t	..
· ?	ip r opyj.i j en~c -marii· <	1 t Ω ! 1.! *'·'; j i < r»l j 'V. i··*’?'	.··dl ií ;/· 1 , ' 1 t!' 1 ; i · . í j lij . Γ’· ί·· .Ί !\ ·.'
ni		3^ Γ ’ -::t O''I;ΓΙ·..Α	L eP j i.u · i 0 a	! í1 * 1 >?i ’· 3 .? Γ'' í,t P ’ '* '1. ?··''
d o	bu :r··,.:	i hodin a T 5 minut.	, r -iCe';:- pi>ti:.b 'i	prdd-.ι nus vcony njUU.t;
ch	.tor idu	amonného- Z 1, skán ý	r o t o k se i n t e n z i	vině míchá. PO dobu l-ě-
ti	mi nut	u pak se převede	di» dělicí nálevky,	obsahující 3 : Ί -r.,-·.;
d i	let	, íb i····!J.J 'Λ. .	uiiO v r s t. v v ·,),· nddě	.]., i · ·.< ga.n .i..'.-k'á v(·-·.·.<l· vn
	odPérJ	i- u oh u s ·.·? s ί i i.	1 eněhι,i tič«ku . i Isk	any Produkt, su čistí
sl	oupcovou c’hr ometogr a t .i.l	(za Použití, jako	žto el.uěrlibo činidla.
	r. c>* . . . .1 A‘« ; -J ζ ' 1·	> in i| «1.1 V ίϊί| ; ! h V i. iť: h.	( η!'- j (í U j '' Γ <1 k i. » O	b '. a hu j .ι o:.ι žť'.id e ny Ρί í : -
ciuki.. se ·.:	spoji a odpař-i se 1	<. suchu za snížený	•ho tlaku, čímž se z i.--
b<	d 4,07	g ? . 3 -- J i rny l.byj - J	1 ti ) 5 i k ) - b i < i ( 'h ; “	Ι'ι··..'(}.ι· i )0-./- Z' i ι.-.1] i'.1 ,1 i/t by '
I :	3 ~ <1 i n>c	tnrme
1f-í	MMP (C	UC1 ·: : u 7 . i S ( lil	, !·.<' j ·; li,,,	• · '· h i - i Ji . i · . dn
(d	3 ι , ’<	' . ' 0 m , ) . i . ‘1 p	I. s. «··'.). MS·: m	i, , Jí]/ ·· !'1 ‘ i

B - Z. Z-O i methyl -4 (R) ,5(R)-bis(1 (R)-methansulfonyloxy2-f eny 1 ethyl- 1 , 3-dioxolari

Roztok 2,97 ml. (38,3 mmol) methansulfonylrhlorldu vp, 20 ml methylenchloridu se přidá do studeného (θ “C). roztoku .5,47 ml (39,3' mrňol) ‘ triethylaminu a 6,44 q (18,7 mmol) 2,2-di.met.hyj.~ 4(R) ,5(R)—bis(1 (R) - hydroxy 2 - τ e; ->v Let hy ,1 - l , L-ij. ..i „> .·Λ·,~ηυ , me.-r .i. pi- ούυ'·· l u Podle Přípravy 1A, ve 20 mi methylenchloridu. Reakční· směs se nechá ohřát na teplotu místnosti· Když je reakce ukončena-Podle chromatografie ^v tenké vrstvě, vlije se reakční směs do roztoku 50 ml 0,2.N. kyseliny chlorovodíkové a 150 ml diethyletheru Vznik lé vrstvy se oddělí a- organická vrstva se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhliCitanu sodného a odpaří se k suchu 2a sníženého tlaku- Získaný Produkt se Čistí sloupcovou chromat.ografií (za Použití jakožto elučního činidla systému -1 : 1 dlothyíether/he,xart). Frakce obsahující žádoucí 2,2-dimethyl—4(R) , 5 (R)-bis (1 (R) met-hansulfonyloxy^-fenylethyl-l ,3-dioxolan se spojí a odpaří se k suchu za sníženého tlaku- Výtěžek, je 3,7 g.

1H NMR (CDCls) o 7,30 (m,10); 4,88 (ín, 2); 4,25 (d, Z); 73,10- (m, 4); 2,32 (s, 6); 1,52 (s, 6);

MS: m/e 499 (M* + 1) '

C .. 2 , ?.-0imethyl-4 (R) , 5(R)-bis(1 (S)-azido~2-teriylethyl- 1,3-d.ioxnlan

Roztok, 0,7 84 g (16,0 mmol) lithiumuzidu , 4,0 g (14,6 mmol) 18-crown~6 a 1,7 ml (14,6 mmol) 2,6-Iutidinu se přidá do 3,6 g (7,2 mmol) 2, 2-d:i..met.hyl.-4 (R) , 5(R)-bis( 1 (R.) -metharisulf oriyloxy™ Zf enylethyl- 1 ,3-dioxo’J.anu, (meziproduktu Podle přípravy 16) v,.·. 25 ml N , N. -dimethyIpropylenmočoviny - Reakční směs se zahříváním udržuje na teplotě 95 až 100 “C a nechává se reagovat přibližně sedm hodin. Když je reakce ukončena podle stanovení chromatografií v tenké vrstvě, vlije se reakční směs do -200 ml. systému 1 : 1 0, IN kyseliny chlorovodíkové a 'diethylether u- Získané 'vrstvy se od-děll a organická vrstva se '-ysusl (širáhem Sodným) a r»d Pař i se k. suchu za sníženého tlaku, čímnž se získá 2,8 g oleje- iont.o olej se čistí sloupcovou chromatografií (za použití jakožto eluč~ níhrj činidla gradientu 5 až 10 % methylenchlcridu v toluenu) . Frakce, obsahující, žádaný produkt, še spoji a odpaří se k suchu za sníženého tlaku, čímž se získá 1,03 g 2,2-dimethyl-4(R),5(R)bis-1 (S)-azido-2-f enylethyl-1,3-dioxolanu1H NMR (COCI3) 5 7,30 (m,10); 4,12 (s, Z); 3,22 (t, 2); 3,05 (m, -4-)-;—1—5-5—<-s-—Éý-i-^:-—-^:0 . 1 , 6-0-j.f enyl-2. (S) , 5 (S) -di.azido-3 (R.) , 4 (R) -dihydroxyhexan

Oo roztoku 0,370 g (0,943 mmol) 2,2-dimet.hyl-4(R),5(R)-bis(1 (S) -azi.do-2-fenylethyl.-1,3-dioxolanu (meziproduktu podle přípravy 1C) v© 4 ml methanolu, -se'pomalu přidá' 1,26 ml 1 2M kyseliny chlorovodíkové v průběhu tři hodin. Když je reakce úkončeřia podle stanovení chromatografií.v tenké vrst-vě, zředí se reákční směs. 10 ml acetonitrilu a dvakrát se zkoncentruje- Získaný Produkt se rozpustí v ethylacetátu ' a Promyje · se -zpola nasyceným roztokem hydr pge-rtuh liči tanu sodného-' Získané vrstvy se oddělí a organickávrstva se odpaří k suchu za sníženéhotlaku, čímž se získá olej. Tento olej se čistí sloupcovou čhr'omatografií (za Použití, jakožto elučního činidla gradientu 0 až 20 X ethylacetátu v methylenchloridu)- Frakce, obsahující. Žádaný produkt, se spojí, odpaří se k suchu za sníženého tlaku a Přékrysstalují se z roztoku' diethyletheru a hexanu, Čímž se získá O;3O3 g 1 , 6--diferiyl.-2 (S) , 5 (S)~diaxldo-á (R) , 4 (R) ~di.hydro*yhexanu 1H NMR (COC'l₃) δ 7,25 (m,10); 3,60 (ni,4); 3,00 (m, 4); 2,55 (d, 2);'

M/e 353 (M⁺ + .1)

Analýza pro Cish^o^eO^ vypočteno: C. 61,35 H 5,7 2 N. 23,85 nalezeno': —C— δΊνΙ^-----H—5—72^----N—23T7'O^J-----'— ----------'

E . 1 , 6-0ifenyl-2 (S) , 5 (S) -diazi.do-3 (R).-m©thartsulf onylox.y-4 (R) hydroxyhexan __________________.......— . - -,

Roztok -13,5 ul (0,170 mmol) methansulfonylchloridu ve 300

M.l:'methylenchloridu se Pomalu přidává do studeného (0 *'C) roztoku mg (0 , '23 mmol 1 , 6-dif enyl-2. (5) , 5 (S) -diazido-3.(.R) , 4 (R) -dihydro- 57 xyhexanu (meziproduktu podle přípravy W) a 32 p.j_ (0,23 mmol) triethylamiriu v 0,6 ml methylenchloridu- Reakční smés se nechá ohřát na teplotu místnosti, nechá se reagovat po dobu 15 minut a vlije se do 50 ml směsi 3, : 2 diethyletheru a 0,1M kyseliny chlorovodíkový.. Získané vrstvy se oddělí, a organická vrstva se promyje zpola nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a odpaří se k suchu za sníženého tlaku, čímž se získá pěna· lato pěna se Čistí, sloupcovou chromatografií (za použití jakožto elučríího činidla systému 1 : 2' ethylacetát/methylenchlorid) - Frakce, obsahující žádaný produkt, se spoji a odpaří se k suchu :a sníženého tlaku, čímž se získá 100 tng směsi 60 : 40 žádaného 1 ,6-difertyl2 (S),5(S)-diazido-3(R)-methasulfonyloxy-4(R)~hydroxyh«xanu a výchozí látky ( 1 , 6-difenyl--2(S) , 5 (S) -díazido-3 (R) , 4 (R.) -dihyd.roxyhexartu),F. 1,6-0ifenyl-2(S),5(S)-diazido-3,4-cis~ePOXyhexan

Do studeného (0 ‘O) roztoku 60 mg (0,14 mmol) 1,6-difenyl.2 (S) , 5 (S) ~diazido-3 (R) -metharisulf onyloxy-4 (R) hydroxyhexanu (meziproduktu Podle přípravy 1E) v 1,5 tni systému 7 : 1 methanol/ tetrahydrofuran se přidá methanolický roztok 0.5M methoxidu sodného- Reakční' směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a nechá se reagovat po dobij jedné hodiny, Přidají se 3 ml. diethyl,etheru, obsahujícího 2 kapky· kyseliny octové. Získaný roztok se vlije do 65 m'l směsi 8 : 5 nasyceného hýdřogenuhličitanu sodného a diethyletheru Získané vrstvy se oddělí a organická vrstva se odpaří k. suchu za sníženého tlaku, čímž se získá olej- Tento olej se čistí sloupcovou chromatograf 1.1 (za použití jakožto elučního Činidla 20 % hexanu v methylenchloridu)- Frakce, obsahující žádaný produkt, se spojí a odpaří se k suchu za sníženého tlaku, čímž' se získá 31 mg 1 , 6-difenyl-2 (S) , 5 (S) -di.azido-3,4-cis-epoxyhexanu iH N.MR (COC'j.3) δ 7,30·. (m, 10) ; 3,57 (m,1); 3,45 (m, 1); 3,18 (m, ) ; 2,9 4 (rn , 4) ;

G . 1,6- Ditenv.l.- 2(3) ,5 (3) —diamonio -3,4-eis -ePoxyhexaridi hydr och..I..0tid

4j·

Oo suspenze 350 mg 5X palladia na uhlí v 10 ml systému 9 : 1 ethylacetát/kyselina octová se přidá 0,368 g (1,11 mmol) 1,6-d.ifenyl-2 (S) , 5 (S) -diázi.do-3,4-cis-ePoxyhexariu (meziproduktu podle přípravy 1F.) . 5mg.s 'se rychle míchá v přítomnosti Plynného· vodíku- Po dobu tří a půl' hodin.. Jakmile je reakce ukončena Podle stánov sr il“íh r t iiPtlň? g ϊΰΓΡχΤΓ^- “teňkze vi-t/ťvg“ žirodu. ee ethýl uoetátem a5¾ palladium na uhlí se' odstraní filtrací. Filtrát se pak nechá vychladnout přes noc, čímž se získá 0,-325 g 1,6-difenyl-2(S),5(S)diamonio-3,4-cis-epoxyhexand.i.šcetát - Oo roztoku“ 0,100 g (0,249 mmol) 1 , 6~dif enyl-2 (S) , 5 (S) -diamonio-3,4-cis>-epoxyhexandiacetátu ve 4 ml systému ,1 : 1 methylenchlorid/diethylether se Pomalu •přidává 0,498 ml 1N kyseliny chlorovodíkové v acetonitrilu za vytváření 0,090 g bílé pevné látky..

6,40 (brs-,6); 7,3 (m,-10); 3,40 (m, 4); 3,05

1H NMR (d&DMSO) (m, 4) ;

MS: rn/e 2 84 (M*

-201)

Příprava 2

A. p— i oluerisulf onát benzhydry'1-2 (£) -<»mmoriio-3 (3) -methyl,pentanoátu

	Oifényldiažomethah 'se přidává	do roztoku 15,03 g (49,54 mrnn'1 )
1..-1.	s 01 eu ci r 1 - p - tel. u er 1 s u 1 f on á tu v e.	45(1 ml systému 4 - 5	acetonit-
ril	/methanol až do setrval	| f} J ř /f ”	1 c c? rO.S 0 v 0 ',? <> b λ i v enx	(17,12 q.
8 3,	16 mmol dif enyldiazometh	érntl) Zc	i současného přidaní 2	ml ledové
kys	eliny octové. Získaný ro	Z tok s 1;	í míchá PO dobu přibil.	Z Γ i é 1 5 tti ;j. —
nu t	Při. teplotě místnosti a	fj- a	.- > ··· onn-ni; u J·;- ::.· on.či	eného t J..a~
ku	za získáni žluté Pevné	látky.	lato pevná látka se	čistí pře-
k ry	statováním z horkého ace	toru tr ;i	.lu, čímž se získá 21,	64 g žádá-
néh	0 p-tolue.nsuifonátu b-en	phydryj	-2(5)-ammonio-3(S)-me	thvl pe.nta-

noátu-^-

1H NMR. (C0₃00) δ 7,67 (d , J*9 H_z, 2); 7,37 (m,10); 7,20 (d, J = 9

Hz, 2) ; .6,98 (s , 1) ; - 4., 13 d, ' J=3 Hz, ' 1) ; 2,34 (_s, 3) ; 2,01 (rn, 1) ;

J.,J_7r t,.4.6,-(m^2-)-;-O,-80-410-,-6-)-=................ — -- —......- — ----B - Benzhydryl - 2. (S) -amino-3 (S) -methylpentanoát

0o roztoku 21,64 q (46,03 mmol) P-toluensulfonátu berizhydryl

2 (S) -ammonio-3 (S) -methylperitanoátu , meziproduktu podle přípravy 2A, se přidá 450 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitaiiu sodného za uvolňování, plynu- Když je reakce ukončena, oddělí, se vzniklé

vrstvy a organická vrstva ϊ	>e odpaří k	such u	za sníženého tlaku,
Č’jJTCÍ Si? /t .í ská Ί , 6 l C3 b říj izi- 4·..	''ydryl-2(5)	- Pii nn- J	1 ( S) - m e t h v 1. Ρ er 11. a no á
- u. - '< H NMK. (COCI3) ό ?, 19-7,45	f rn 1 f?) 7	·:· / ... - '· \ ) ·	) j - 3 4 7 (d , J - s
Hz, 1); 1,85 (rn, 1); 1,33-' 0,83 (t, J®8 Hz, 3),.	1,50 (m, 4)	; 0,92	(d, J=8 Hz, 3);

C. Benzhydryl?(S)-k.arbamoyl-3($)-methylpentanoót

Roztok 4,97 g (16,7 mmol) benzhydryl~2(S)-amino-3(S)-metl

Pei 1. anod tu - meziproduktu podle přípravy 2b, a 4, ml (33,7 mmol) triethylaminu se kanyluje do horkého (60 “C) roztoku 2,51 g (S,46 mmol) trifosgenu v 90 ml toluenu- Teplota $e nechá stoupnout na 1 u0 *C a roztok se nechá reagovat pros ‘noc- Reákční. směs se ochladl na teplotu “C za vytvoření sraženiny - Sraženina se odfiltruje á promyje se systémem 1 : 1 et.hylaeet .dt/hexan - Získaný roztek se odPsří k suchu sníženého tlaku, čímž se získá 5,45 g žádného benzhydrv ).· 2 (S) karbamoy 1 3 (S) - methy J. per itanoátu dostatečné čistoty (přibližně 9O2S Podle NMR) pro použití, v následující.

iW cl 1H NMR. (COClg) 6 7,23-7,47 (rn., 10); 6,98 (s, 1);.4,O5 (d, J-3 Hz, 1) : 2,05 (m, Ί ) ; 1.13 (guiritet, J~ SHz. 2) ; 1,00 (d, j=® Hz, 3) ; 0,83 (t, J“8 Hz, '3) .

. Benzhydryi-2 (b) -N— [ (chino.lZ~v.L^iT’«é’t.-hc«:<vkarbony!) amino—?» (5) methylpent/jrtoát

Do roztoku 0,506- g (3,16 mmol) 2-hyd.roxymethylehinol.inu a 0,315 g (3,18 mmol) chloridu mědného v bi-;zvodé.m dimethylformamidu se·· přidá 1,13 g _y..(3/5Q· mmo'1) be.nzhýdry'i-2 (S) -karbamoyl-3 (S) -methvlpentanoátu, meziproduktu pod.1 e. přípravy cC. Když 'je reakce v Podst atě ukončena pod .1 o stanovení, chi-nmutogr afii v -tenké -.3--3fvě, zředí se reakční směs ethyla«?«?tál..em a promyje o· .-jn >!.·.< riasy cenou 'solankou- Tiskané .vrstvy se oddělí, a organická vrstva se vysuSÍ (síranem sodným) a odpařX se k suchu za sníženého tlakučímž se získá hnědý olej. Tento olej se čistí sloupcovou chromátoSrafií'(za Použití'jakožto elóčnlho Činidla 6 2 hexanu v ethylacetátu), čímž ,se získá .1,2.3 g žádaného· benzhyd.ryl-2(S)-N“(.(chinol -2-yl.rnethoxy) karhoriyljamir,o-3 (S) methylpentonoátu 'K NMR (COCl-3) 6 6,15 (d> 1) ,05

-?-Ú—K7,45 (d, r;

(s, 2); 4,5 (m,

3).

/ , 30 (m, W) ; 6,92 (s, 1); 2,0 (m, 1); 1,2 (m,

í) , 5,'h.j (d, i), t , 4 0 2); 0,9 (d, 3); 0,82 (t.

E. Kyselina 2 (S) -N- [chiriolin-2-y Imethoxy) kár brjnyl] amirio-3 (S) methylpentanoovó· ' .

Benzhydi-yl-2 (5) ~N-[ (chinol-2-yImethoxy) k<u-boriyllamirio-'3 (.5)methylperitarioát, meziprodukt podle přípravy 2.D, se rozpustí ve 1'2 ml dioxariu obsahujícího -i rol koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Získaný roztok se ohřeje na teplotu 100'.£C.a roztok .se .nechá reagovat Po dobu přibližné 5 minut- Reakčni směs se óchiadí ria teplotu místnosti a míchá se tak dlouho, až. je reakce v podstatě ukončena podle stanovení chromatografií ^v tenké vrstvě·. Získaný roztok se odpaří k suchu a zbytek se rozpustí v nasyceném roztoku hýdi-ogenuhličitanu ' sodného - Roztok se promyje 100 ml diethylacetétu a okyselí se na hodnotu pK 4 1N kyselinou chlorovodíkovou Žádaný produkt · se extrahuje roztokem 10 £ išopropanolu v methylerichloridu, vysuší se síranem sodným a' zfiltruje se. filtrát se odpaří k suchu za sníženého tlaku, čímž se získá 0,567 g kyselínv 2 (S) -’N - [ chino lin- 2~ y imethoxy) karbony 1] amino~3 (S) - mythy lpěn tanotr

V·' .,

1H NMR (de-DMSO) 6 8,35 (d, 1); 7,92 (d, 2); 7,70 (m, 2); 7,53 (m, 2) ; ..5_,_22___(2)_;_3..,.9.2._(m.jL).;—-1-,-7-8 — (-ro--1-)-; — 1--4-Θ—(rnyΉ’)“;~1 '7?'(Α (m, 1 ) ; 0,90 (m, 6).

Příprava 3

A - N~ terč - -Eutyl~2-met hyl.benzamid

Do studériňéhť.s· . (O C)'..roztoku 139,2 g (0,9 mmol ) o-toluvlchloridu v 1 z. 00 mj ..methylenchloridu) se v prostředí dusíku porna61 lu přidávó 130 g (1,3 mmol) trietbylaminu a pak Po kapkách roztok obsahující'. 73,14 g (1,0 mmol) terč--butylaminu ve 200 tni methy lenchloridu)- Reakčni směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a nechá se reagovat Po dobu 2,5 hodin- Reakčni' směs se zředí 1800 ml vody- liskané vrstýy se oddělí a organická vrstva _S(=. promyje postupně 2N roztokem hydroxidu sodného. 1 ,0N kyselinou chlořovodikovou a solankou, vysuší se · (síranem sodným) a odpaří se. k suchu za sníženého tlaku, čímž se získá 167,6 g N-terc--but.yl-2rnethylbenzamidu ve formě. bile Pevně látky o teplotě lúnx 7 / až 7 o C ve výtěžku 97 % teorie-

1H NMR. (COCls) 5 1,41 ($	, 9H) ;	2,41 (s, 3H); 5,54 (br-s,	1H) ;
7,13-7,30 (m, 4H)
IR (CHCl3): 3430,	301 1	, 297 T,	29.3 2	, 1661,	1510, 1484,	145 2
1393, 1366, 1304,	1216,	876 cm*	1

MS (FD): m/e 191 (M*),	1,91 (100)
A n a 1 y za Ρ i - o C1 2 h 17 N 0 ·.
vypott eno- C, 7 5,35;	H, 8,76; N,	7,32
nalezeno - C, /5,10;	H , 9,11; N,	7 , 20

B . (S) -N. -terč - —Butyl“ 2 “ (3- (N-benzy ioxyk ar bony .1.) amino - 2 -o*o—4f eny 1 b uty 1) b eriza mi d

Oo roztoku 7,0 g (36,5 mmol) N~ terč--but yl - 2-rnethyl.henzamj. du, meziproduktu Podle přípravy 3-A, ve 200 ml teti-ahydroturanu se přidá 12,1 ml (80,3 mmol) Ν,,Ν,Ν'’ ,N'-tetramethylethylendiaminu (TMEDA) injekční stříkačkou·· Získaný roztok se ochladl, na teplotu -7 8 C a Přidá se po kapkách injekční stříkačkou 5 5,9 in.t sek.—bu— tyllithia za udržováni, teploty reakční směsi pod 30 C. Získaný roztok se míchá po dobu Přibližně jedné hodiny při teplotě 78 ’C a Pak se přidá kanutou roztok obsahující 5,00 g (14,6 mmol) (S)N -met hryzy - N-methyl-2- (N-f enylmethoxykarbonyl) amino ^- 3--f eny Iprop arr amidu v 50 ml bezvodého tetrahydrofuranu za udržování reakčni teploty pod -65 “C. Zikariá reakční směs se nechá ohřát na teplotu Pud —20 C, -přidá se 20 ml nasyceného roztoku chloridu amonného a zředí se 200 ml diethyletheru- lískané vrstvy se oddělí a organická vrstva se Promyje. postupně vodou . 0,2N. roztokem hydi-ogeri6 2 síranu sodného a solankou, vysuší se (síranem sodným), zfiltruje se a odpaří, se k. suchu za sníženého tlaku, čí.mž se zí ská bezbarvý olej. Olej se čistí bleskovou chromatografií (za použití jakožto elučríího činidla 25 % ethylacetátu v methylerichloridu) , Získá se 6,08 g ( 88' .¾ teor le). (S) - N-t,»r c - - butyl -2-(3- (N-benzyloxykarbo_r*» V-1-)-<x *’ ⁱa. i-ι o -u ·.<·. rir-sn ,.·. .ι --Ί ί .ί íj ί ~ ι, y i / ,.¹ i fitldu ve formo. íj i j...<. b <.i r e Pcnv -_ (íi]d -239,26 (c 0,12, MeOH) .

1H NMR (COC1₃) δ 1,38 (_s, 9H); 2,99 (dd, J=15; 6 Hz, 1H); 3,24 (dd, J-15, 6 Hz, 1H); 3,69 (dd, J=18, 6 Hz, ]H) ; 4,16 (dd, J^-18,

Hz, 1H); 4,72 (dd, J-15, 6 Hz, 1H) ; 5,00-5,09 (tn, 2H) ; 5,56 (d, J=6 Hz, 1H); 5,93 (br-s, 1H); 7,03-7,40 (m, 14H)

IR. (CKCI3): 3431, 3027, 3012, 2973, 1713, 1658, 151 1, 1454, 1383,

1366, 1307,	1231, 1046	0ΠΊ '
MS (FD): m/	e 472 (M*),	218 (100)
Analýza Pro	C 2 9 H 3 2 N > 0 4
VyPočt.eno :	C, 73,70;	H, 6,82; N, 5,93
nalezeno :	C , 7 3,41;	H, 6,98; N, 5,83
C. (2R-(2R	»ř,3S*)]-N-b	er c - - 6 u t y 1 - 2 - (3 - ( N
2-hydroxy-4	-f eny lb uty .1) benzamid .
Ob roz	toku 6,96 c	(.14,7 mmol) (5 ) - N
zy 1 oxy k.a r b 0	nyl)-aml πο-	2 -r.ix.o“ 4 ~ f eny.1 buty 1
Podle Přípr	υ v y 3 6 ) V o	200.' ..ml absolutní.h

dusíku přidá 2,7 8 g (73,5 mmol) bořhydridu sodného- Když je reakce. v podstatě ukončena podle stanovení chromatografií v tenké vrstvě, zředí se reakčni směs 200 ml ethylacetátu a po kapkách se přidá 20 ml nasyceného roztoku chloridu amonného- Získané vrstvy se oddělí a organická vrstva se promyje- postupně vodou, IN kysel.iriou •ch-lorovodike-vou·,--nasyceným--r-o-ztokem. hyd-mgei-iu-hJ..l.Č3.t anu -sod-

něho <	ϊ solankou, vysuš	i se (síranem	sodným)	, · zfiltruje se a udpa-
f’’X. ' Síří	k suchu, za sníže1	ného tlaku, Č;	í.mž se z	íská 6,4 g bezbarvého
oleje	Olej se čisti	bleskovou chn	omutosr a	fií (za použití jakožt'
clu črc	[ho č lni dl a. gradl	entu 2 až 1.0 !	¥* methyl	enohj.oridu v ethylace-
tátu	Získá se 5,12 g	(74 % teorie)	(2R-(2.	R. *· , 3 :> * ] - M -1 e r c. - b u t y ..l -

2— (3 — ( N - benzy lo xy k ar bor tyj,.) amino^- *- - hy dr oxy—4 — f er »y ibuty .1..) benzamí du

o.i jakožto hlavního driastěreomeru[a]_D +10,38 (c 0,10, M_e0H).

	'Ή WMR (CDCI3) δ 1,40 (S, 9H)	: 2,7 9	(dd,	J=12; 3 H;	1H); 2,30-
	. 2,98 (m, 2H) ; 3,04. (44, J=1 2 ,	3 Hz,	1H) ;	3,70-3,81	(m, 1H); 4,96-
	-5,08. (rn., 2H) : 5 , 1 0 (d , J = 9 H:	:·· 1H):	; 5 , S	S (d, J--6	Hz, 1H): 5.93
Λ	( s , 1H ) ; 7,1 3 - 7,4 2 (?n . 1 4 H)
	IR (CHCI3): 3431, 3028, 3012,	297 1 ,	1773	, 1643, 1515, 1454, 1367,
	1229, 1023 r;m-1
	MS (F0):m/e. 47 5 (M+), 47 5 (100)

Analysa pro C 2^^346(204 :

vypočteno:	€,·	73,39;	H ,	7 7 7. ·· > L ,	w;	5,99
nalezeno :	c,	73,12;	H,	7,48;	N,	5,62

0.'. [2R- (2R*, 3S*) 3 -N-terc - -Butyl“2-(3-amino-2-hydroxy—4-f enylbu tyl) berizarn-id.

Připraví se suspenze obsahující 41'ζΟ g <120 mmol) [2R-(2.R*3 S^x 3 -N~t erc - -buty1-2- (3 - (N -berizy loxy karbonyl) ami no- 2-hydroxy- 4 500 mg

f onyl.buL.yl) bon; ·	amidu	, f η o χ i p r o d u k t. ι..ι p o d J. o	Přípravy 30,
1OX palladia na	u h 1 í	ve 150 mi absolutní	ho ethanolu. S>us
P r o t ř e P á v á z a	tlak u	414 kPa v prostředí	vod íku v P arrově
ce - Filtraci se	odst	i' a ni 10X Pa 1. i ad .1 u m n a	uhlí a získaný
se odpaří o- k	such LI	zu sniženéhri tlaku,	číms se získá 31
daného [2R-C2R	*. O C C ) l.. L_«	) - N-teřc - —bu tyl2- (3 -	a m i i i o - 2 - h y d r o xy -
b ti. L y i.) b e. r i z. a m i, d u	V Ο-	for mo světle žluté	Pěny. Této pěny
Používá bez řič'	ι ění -

Výtěžek: 96 X teorie

CaJo +34,68 (c 1,0, MeOK).

1H NMR (COCI3) fi 1,46 (s„. 9H); 2,71 (dd, J = 13,7; 9,5 H_z , 1H) ; 2,84 (dd, J-13,3; 2,51 H_z, . 1H) ; 2,95-3,06 (m, 2H) ; 3,23-3,29 (rn, 1H); 3,34-3,90 (m, 1H); 7,19-7,37 (rn, 12H)

IR (CKCl-s): 3440, 3332', 3007,.2970, 2934, 1643, 1516, 1454, 1367,

1213 cm^-1

MS ‘ (F0)': m/e 341 '(M*), 341 000}

Příprava 4 [2'ft-( 2R*, 35*) j -N—terč. -6utyl-2-(3-(N-benzyloxykarbony]..)amino- 2hydroxy-4-fenylbutyl)-5 nriethylbenzamid

Příprava 4 probíhá v podstatě = stejně, jako jo popsáno pro Přípravu3A-C. Získaná .sloučenina, sě zbavuje chránící .skupiny způsobem, který jo Podrobně popsán v přípravě 3'0 · —4-,-84-g—(-8-2—X-t-eer-i-e)—b-ezbarvé—Pěny[ά]ο +10',31 (_c 0,58, MeOH).

1H NMR (COCls) fi 1,46	(s, SH); 2,32 (s, 3H); 2,76 <d, J-15 H.
1H); 2,85-2,95 (m, 2H) ;	3,04 (dd, J=15,5 Hz, 1H); 3,67-3,74 (τη
1H ) ; 7/,92.-4,05 (sn, 1H );	4,92-5,14 ’ (m, 3H) ; 5,86 (d, ,J=7 Hz, 1H)
5,91 (s, 1H); 7,03-7,40	(m, 13H)
IR (CHCls): 3431, 32.74,	302.7, 3012, 2970, 1713, 1643, 1514, 14.96
1454, 1567, -.1 224, 1039,	9W cm-/
MS (FD): m/o 48 9 (M*)·,	205 (100)
Analýza pro -Ca-oHseNoO^ :
vypočteno:. . C, 73,74;.	H, 7,43; .N, 5.,.73 ............' . ..·.._ · -· ...
nalezeno : C, 73,55;	H, 7,50; N, 5,96
Po odstranění chránící'	skupiny získáno 4,2 g (89 % teorie.) [2R-

( 2R*· , S*Ί -N.-f.arc - -buty 1-2- (3- (N-benzyloxykar bonyl) amino-·2.--Hyd roxy-4-f.anylbutyl)-S-methylbenzamidu ve· formě bezbarvé pěny.

PríPrava 5

A. PentafXuorfenylester kyseliny chirialdové

Oo susP enze. obsahující i 5 g (66,6 mmol) kyseliny china Ido'·»:?. a

20,8 3 (113 mmol·) pentafluorfenolu ve 200 ml tetrahydrofuranu se přidá 18,3 g (95,3 mmol) EDO. Získaná reakční. směs se intenzivně míchá při teplotě místnosti po dobu přibližně d.vou hodin, přičemž se vytváří gumovitá sraženina ria dně batiky. Roztok se od gumovitý hni o t y-s 1 řj e- -a ~žá dar f<í stou Č οπχηΖΓ se'' z“ gli mě vité ho pr čď ukt u e x. t r a h u je methylenchloridem. 'Získaný roztok, so zředí hexanem a promyje se Postupně 0,1N roztokem hydrogensíranu.-sodného. -IN·· roztokem uh4··'1(^Αΐά.ι111„_ί1ΐ1&?3ίΛΧθΐί^1^|ο.-.ά...3θ1<ια1ι:.ου.... :'Získané~vrstvy se-oddělí- a orga-----nicka vrstva se vysuší (síranem sodným) , zfiltruje se a odpaří, se k _suchu za sníženého tlaku, čímž se získá bledě růžová pevná látka. Tato pevná látka co rozpustí ve 30 ml diethylethoru a zře65 íJi se 400 ml 'horkého hexanu, ilskaný roztok se pomalu ochladl na teplotu místnosti, čímž se získá 21,6 g pentafluorfenylesteru kyseliny chinaldové ve formě bezbarvých jehlic ve výtěžku 73 % teorii 1H NKŘ (C.OCI3) 5 7,73 (t,J=7,5 7,86 , $(d , J - δ . ? Ή z . 1 H) ; 8,2 9-8,42. (m , 3 H) (t, >7,9 H_Z, 1H);

I.R. (CKC1₃}_: 3035, 2997 , 1763, 1522, 1285, 1068, 993,·S42 cm” 1

Analýza pro C16H&NO2F5:

vypočteno nalezeno ;

C, 56,65 ; Η, 1,7$; Ν, 4,13 C, 56,66; H, 1,77; ,N., 4,12 & . Kyselina (S)-2-N- (chinolin-2-yl.karbonyl)amino~3-kai·bamoylproPanoova

Připraví se roztok obsahující.17,9g (51,2 mmol) pentafluor~ fenylesteru kyseliny chirialdové. meziproduktu Podle Přípravy 5A, 6,99 g (46,6 mmol) L~asParaginmonohydrátu a 15,7 · g (186 mmol) hydrosenuhličltanu sodného ve 265 ml vody a 219 ml dioxanu Suspenze se intenzivně míchá přes noc při teplotě místnosti- Reakční směs se zkoncentruje za snížené-ho tlaku k odst 1 ••'ariění dioxariu a zbylá vodná vrstva se okyselí na hodnotu pH 3 2N hydrogensíranem sodným. Žádaný Produkt, se extrahuje z -vodné vrstvy 60 ml systému 3 - 1 c-hloroform/isopropanol Organická Vrstva se promyje solankou» vv$u§í se (síranem sodným), vflitruje se a odpaří, se k suchu za sníženého tlaku, čímž se získá bezbarvná Pevná látka. Pevná látka se promyje. 500 ml diethyletheru 'a 2500 ml horkých hexanů a‘ vysuíší se při teplotě 80 C za sníženého tlaku průběhu dři hodin, čímž se získlá 10,51 g (79 % teorie) kyseliny (S)-2-Nf(ch'.i.noli.n-2.~y ikar bony 1) amino-3-karbamov i.pr OPanoové [oId <16,54 (_r;. 1,01 ,-DMSO)..

iH NMR. (DMSO-Os): δ 2,63 (dd, J=16,0, 4,8 Hz, ΊΗ) ; 2,81 (dd, .1=16,0, 5,7 H-z, 1H); 4,74-4,81 (rn, 1H); 6,96 (_s, 1H); 7,70 (t, >7,5 H'z' 1H);'7,85 . Úl J=7 ,5 H_z, 1H); 8,05-8,15 (m,· 3H); 3,56 (d . >8,5 Hz, 1H) ; 9,12 (_s, 1H) .

IR -(KBr)·- .3385, 3367, -3216, -1 17 1,- 1662., 15 2 3; ' 1499; 1427. 730,

592 um^-1

MS (FD) m/e

286 (Mj , 288 ( 100)

Analýza pro C i <$ Hi3N. 304 :

C, 53.53; H, 4,56; N, 14,63' C, 58,60; H, 4,57; N., 14,56 vypočteno nalezeno :

Přípravy 6 až 3 se provedou v podstatě stejným způsobem jako ý'případě přípravy 5A a.6 -

Příprava 6 Kyselina ( S) - 2 -1 amoy1Propanoová
Příprava	7
Kyselina	(S)-2-i
panoová
Příprava	f!
Kyselina	(S)-2-
ová.
Příprava	9
A. [3S-(3	R*, 4aR
nyl)amino- 2'-h
isochinol	ln-3-k

Roztok C 1R- (1 R.·*' ,3S*, 1 S*· ; 4aS*·, 3_a*)) - 1 - [ U ' -Ň-benzyloxykar bony 1) amino 2 ' -f enyl) ethyl)oxiranu a děkanyl ι·Όί3θο6ΐηο).1η-3Ν- terč - butylkarboxamidu v absolutním ethanolu se udržuje zahříváním na 'teplotě 80 ^J C přes noc- Reakční směs odpaří se k suchu za sníženého tlaku, -čími? ne získá zbytek. Tento zbytek se Čistí bleskovou .chromatografií (za použití' jakožto elučního činidla gradientu 10 _až_50_3» etl2ylacetátii_y jnethyljarichlorídu) , čímž se získá 6,4 7 g (7 5 % teorie) (3S~ (3R*·, 4_aR*. 8aR.*·, 2 'S* , 3 ' S* , 3 ' fi«) ) -2- [3 '~N. (benzy 1oxyk.arboriyl)amliio-Z..'-hydroxy^_4 -fenyl] butyl“N (terč - -butyl) dekahy-

3 — k.	ř'boxamidu ve' fc	η mě !	bílé pěny -
“ΤΊ	729“(s,“SH); X	'25-2	, 05 (rn , ?H )	?, 2Ό-? , 3' 5~.....
'.,70	(m, 11H); 2,65-	3,10	(rn , 3 H) ; 3,2	1 (br.s. 1H)
	98 (br-s, 1H);	4,99	(br. s, 2.H);	5,16-5,18

(m, 1H); 5,80 (br.s, 1H); 7,05-7,38 (m, 1OH).

IR (COC1₃): 3600-3100 (br.), 3031, 2929, 17 14, 1673, 1512, 1455 1368 , 1232, 1 199, 1047 _Cm-1 MS (FO): m/e 536 (M⁺H) , 1068' (100)

B. [3S-(3R*, 4_aR*, 8aRW .2 S* . .3 R.*·) 1 -2-(3 ' -A mj .nn-2 ' -hyd.-ox y-4 · f crtyl 3 butyldekahydroisochinolin-3-N-terc- -butylkarboxamld [3S-(3R*, 4_aR< 8_aR*. 2'S*, 3 ' R*) ]-2-[3 '-Amine.-2 '-hydroxy-4 ' f enyl)butyldekahydroisochiriolin-3-N-terc - -Butyl.karboxamid se připravuje v 'podstatě způsobem podrobně Popsaným v připrav# 30 za použití 6,37 g (11,91 mmol) (3S~ (3R*, 4_aR* , 8aR* , 2.' S*, 3 'S*·, 3 ' R*) J 2 - [3 ' -ΙΊ. (berizyloxvkarboriyl) amino- -hydr oxy-4 ' - f enyl.) butyl-N (tei;c - ~ butyl)dekahydroisochinolin-3-karboxamidu, meziproduktu Podle přípravy 9A, a 1,2 g 10% palladia na uhlí ve 200 ml. absolutního ethanolu., Čímž se získá 5,09 g pevné látky, které še dáte používá bez čištění.iH NMR <COC1₃) δ 1,33 (o, 9K); 1,40-1', 95 (m, 10H) ; 2.,25--2,48 (m, 2.H) ; 2,59-2,75 (m, 3H) ; 2,80-3,40 (:n, 7H) ; 3,75-3,90 (m, 1H); 6,19 (br.s, 1K); 7,18-7,3 5 (m, ,5H) .

IR (COClg): 3600-3100 (br.),.2929, 2865, 1671, 1515, 1455,

1367 , 1 245 , 1047 _cnr 1

MS (FO): m/e 402 (M” , W0).

Př í.pravů 10

A. N- ( (1 ' -Ox.o-1 '-(3 - jod.~4 -methyl) fenyl) methyj. j --1 . 2 . 3,4--1 et t čilí y d r cii. so ch 1. no 1 i. r 1

Oo roztoku obsahujícího 5,00 g (19,1 mmol) 3-jod-4-m#thýlbenzoové . kysial/iny a 3,40 g (21,0 mmol) 1,1-kar bonyIdiimidazolu v 80 mj.. tetrahydrofuranu se v prostředí dusríku přidá 2,7 ml (21,0 mmol) 1,2,3,4 — t ctr ahydroi.sochinolinu in j ekčrií stříkačkou - Získaná reakční 'směs se nechá reagovat Po dobu. přibližně d.vou hodin. Reakční směs odpaří se k suchu za sníženého tlaku, čímž se získá zbytek. iř.?i'it, o zbytek 50 rozpustí ve '00 rn.l.. ethy i t áto , promyje Sir. postupně nasyceným rozletem hyc.lt-ogertuhličít.-.<nu sodného a solankou, vysuší se (síranem sodným), zfiltruje se u odpaří k suchu za sníženého tlaku, čímž se získá lehce žlutý olej- Tento olej se čistí bleskovou chromatografií (za použití jakožto eluč— ního činidla gradientu 14 až 20 % hexanu v ethylacetátu),. čímž se získá 6,92 g (.96 % teorie) N-[(1 '-ox'o-1'-(3-jod^_4-methyl)fe> nyl)met..hyl) -1 ,2,3,4- tetrahydroisochinolinu v,.. formě čirého oleje“-1-H-NMR.—ceocr3^“6—2“4-6^Cm—3Ή-)—2790-—<l5řTš7^H-)T~3T6‘5-(fFTsliH); 3,95 (br-s, 1H) ; 4,85 (br.s, 1H) ; 7,17-7,34 (m,· 6H) ; 7,90 (s, 1H)

I.R (COCI3): 3010, 162.4, 1586, 1547, 1497, 1370, 1200, 1253, 1 108,

1050 , 1035, 83 1 c«i- ¹

MS (FD): m/e‘377 (M+100)

Analýza pro 0 i 7H 1 t;NOJ:

vypočtené'- C, 54,13; H, 4,28; N., 3,71; J, 33,64' nalezeno ' 0, 53,89; H, 4,2.4; N, 3,61; J, 33,5 2.

B . N- [ 1 ' ~Όχο~ 1 ' 3‘‘.-metoxykarbariyl“4 -methyl) fenyl] methyl-1 , 2,3 ,.4 tetrahydroisochinolin - ....... ........ —......

6,35 g (16,8 mmol) N-[ (1 '-oxo^- 1 ' ~ ( j od4 -methyl) f enyl) methyl] -- 1,2,3,4-tetrahydroisochino duktu Podle Přípravy, 10A, 3,35 ml. (16,8 mmol.) dicyk 1,18 .g (1,68 mmol).bis(trifenylfosfin)chloridu palladnatého ve

J.inu - mezi pr οι. ohe,xvami..nu a

150 ml .bezvodého methanolu se 1.1 h e. 1 r 1 a t é h o. K d y ž intenzivně mícha v prostředí, oxidu ie- reakce, v podstatě ukončena podle stanovení chromatograf ií v tenký vrstvě, odpaří se si»ěs za sníženého tlaku k suchu za získání zbytku- Tento zbytek se. rozpustí ve 2/00 ml ethytacetátu a získané směs se zfiltruje přes celíte k odstranění nerozpustných organických solí- Získaný filtrát se'promyje postupně nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, vysuší se (síranem sodným), zfiltruje se a odpaří se k šuchu za sníženého tlaku. Získaný produkt se čistí bleskovou chromatografií (za použití jakožto elučríího činidla gradientu 14 až. 20 % ethylacetátu v hexanu) , Čímž se' získá -4,54 g. (.87 £ .teorie)

OXo 1 -- (-32‘--metexykar-b-ei'iy^:i--4-^,í“-met-hyÍ“)-fenyl-]-met.-hy);--1';'-2,3 -,-4-te.tra-hý— —· ·'·· droisochinolinu ve formě čirého oleje1H NMR. (C0C1.3) δ 2,64 (y, 3H) ; 2,90 (br.s, 2H) ; 3,89 (_s, 3H) ;

3,98 (br.s, 1H); 4,59 (br-s, 1H); 4,87 (br-s, 1H); 7,05-7,51 (m,

6Η); 8,03 (s, ΙΗ)

IR (C0Cl₃): 3010, 1626, 1584, 1497, 1436, 1306, 1268, 1236, 1210, 1149, 1109, 1085, _cmi rMS (FD): m/e 309 (Μ-100)

Analýz© pro C13H10NO3:

vypočteno: C, 73,77; · H, 6,19; N, 4,53 nalezeno : C, 73,95; H, 6; 43; N, 4,57

C.. N-(1 '-0:<o~ 1 ' -(3*'-karboxy-4 -methyl) fenyl]methyl-1 , 2,3,4-tetrahydroisoohinolli 1

Do roztoku obsahujícího 4,25- g (13,8 mmol) N- [ 1 '-oxo-1 (3 - metoxykarbony 1-4“-methyl) f enyl] methy3.-1 ,2,3,4-tetrahydroisochinoliňu, meziproduktu podle přípravy 108, v_e 200 tni systému 3 : 1 tetrahydrofuran/voda se přidá 661 mg (27,6 mmol) hydroxidu lithného- Reákční směs se nechává reagovat Po dobu přibližně 24

hodin,•zkoncentruje s	e za sníženého tlaku a	okyselí se oa hodnotu
pH 2. už 3 přidáním po	kapkách 1N kyseliny ch	lor0vodíkové, Čímž se
vysráží surový produkt. Získaná suspenze	se smíchá se 75 ml
ethylacetátu a získán	á vodná a organická vr	štva se oddělí - Wxíná
f á z e s e. e x tr a h u j e	d v a k i' á t e t h y 1. a c et á t em	a spojené organické
vrstvy se Promyjí sol	ankou, vysuší se (sira	nem sodným) , zfi.ltr u.-
Jdi .’.><·. a odpaří se k s	uchu za sníženého tlak	co čímž s© získá zby-
tek. Tento zbytek se	č i. s t 1 s '10 u p co v 0 u c hrom	a 10 g 1- a f i í (si 11 k a g e n,
za použití jakožto el	učni.h0 či,nid 1 a systérou	15 55 methanolu v met-
hvlenchloridu), čímž	se získá 4,05 g N-[V-r.	xo-1 ' — (3 “ —karboxy—4- “ —

methyl) f enyl) methyl -1 ,2,3,4-t.etr ahydřoisochinoliriu ve formě bílé Pěny1H NMR. (CDCI3). 5 2,68 (3, 3H); 2,92 (b,--s, 2H) ; 3,67 (br.s, 1H) ;

4,00 (br.s, 6H); 8,17 <;	1H); 4,62 3, 1H)	(br.s,	1H) ;	4,91 (br.s,	1H); 7,18-7,58 (m,
IR. (COCls):	3500-2500	(br.) ,	1699,	, 1584, 1498,	1445, 1371, 1301,
1237, 1202,	'1 167, 1060	, 981,	934 ,	838 cm-1

MS (FO): m/e 295 .(M*,10Q.) .

Analýza pro C 1 ehl 1 7NO3 :

vypočteno·: C, '73,20; H, 5,80; N, 4,74

Γ) ~ nalezeno

C,

5,14; H,

5,90; N, 4,44

Příprava 1 1

N- [ V -Oxrj-1'- (3-karboxy-4 -ethyl)fenyl] methyl-1,2,3,4-te.trahydřoišoch j ool l.n

J^^JJ^0xo=J^t31L^katbxjXyji4^ethylMeiw;i].rtietb.ylz_í.,2-,^,Az_t£žtr_ i' a hydr o i soch i no 11 o se připravuj <- v p odstát δ způsoben' popsaným v přípravě 10. Získá . se ^ve výtažku 1,35 g (88 X teorie.) ve formě bílé pěny.

1K WMR · (C0C1.3) 6-1,27 (t, J=7,5 Hz, 3H) ; 2,96 (br-s, 2H) ;

3,10 (q, J=7,4, 2H); 3,65 (br-S, 1H) ; 3,99 (br-s, 1H); 4,62 (br-s, 1H); 4,89 (br.s, 4H) 7,13-7,25 (m, 4H); 7,38 (d, J=7,9

Hz, 1H); 7,58 (d, J=7,21 Hz, 1K); 8,12 (d., J = l,6 Hz, 1H) .

IR <K8r): 3600-2300 (br-), 1700, 1625, 1497,-1443, 1300, 1237,

150, 1109, 1048, 933 _c.m^- i . . . .

MS (FD): m/e 309 (M- , 100) . __ ............. ...... _ '

Příprava 12.

1,6-0i.f eny 1.-2 (S) ; 5 (5) -diomoni.o-3 (R) ; 4 (R) -dihydroxyhexan

1,6-0ifenyl-2(S); 5(S)-diamonio-3(R); 4(R)-dihydroxyhexan. se připravuje v podstatě způsobem Podrobně popsaným, v přípravě. 10 za použití 285 mg (0,81 mmol) 1,6-difenyl-2(S),5(S)-diázido-S(R)4 (R) -dihydroxyhexanu, meziproduktu podle přípravy 10, a 143 my palladia na uhlí v 9 ml ethanolu obsahujícího 1 m.,1. koncentrované kyseliny chlorovodíkové- Získá se 175. mg (58 3> teorie) produktu ve formě bílé Pevné látky. 1H NMR. (C0₃00): 5 1,98 (d, J=2 Hz,. 2H) ; 2,79-3,07 (m, 4H) ;

3,60 (br., 2H); 3,99 (b_r.s, 1H); 7,20-7,37 (m, 10H) .

MS (FD): 301 (M*)„

Příklad 1

1,6-Dif eny 1-2 (S) ; 5 (S) -rdi. [N- [2 (S) -N (benzyloxykarbpnyl) amino-3-meth y 1 b u t a 11 oy I. ] a.m j η ρ ] - 3,4 - c j.s - ep o x y h e x a r 1 ._

Připraví, se roztok 2.15 mg (0,818 mm o] ) 2 (S)-N-(benzy loxykar^-bonvl)amiriO-3-methyl.buť.anoově kyseliny, 12 mg (0,08 2. mmol) hydro^- xybénzotriazolhydrátu, · 104 ul (0,816 mmol) N-methylmorfolinu a

1

2 mg (0,818 mmol) berrzotriazol-1 -yloxytris(dimethylamino)fosfo~ niumhexaf luorfosf átu ve 2 tni dimethylf ormamidu a míchá se při. teplotě místnosti Po dobu přibližně 10 minut - Současně se přidá θθ μ,Ι (0,40 mmol) _vN,H-dicyklohexylaminu do roztoku 71 mg (0,20 mmol ) 1,6~di.f eny 1.-2 (S) , 5 (S) -diamoriio-3,4-cis-ePoxyhcxandihydrochloridu, meziproduktu .podle přípravy 16, v 6 ml dimethylformamidu · za vzniku bílé sraženiny. tato pevná látka se odstraní odstředěním a filtrát se přidá do shora připraveného roztoku. lískaná reakční směs se ^koncentruje za sníženého tlaku na objem 2,0 ml a nechá se reagovat po dobu 4 8 hodin při teplotě místnosti. Reakční směs se pak zředí. 20 ml ethýlacetátu a získaný roztok se přidá, do 120 ml systému 2·: 1 ethylacetát/0,1W kyselina chlorovodíková.- Vrstvy se oddělí; organická vrstva se promyje směsí 1 : 1 nasycený roztok, hydrogenuhličitanu sodného/solanka, vysuší se (síranem sodným), zfiltruje se a odpaří se k sochu za sníženého tlaku, čímž získá 110 mg produktu- Tento produkt se čistí bleskovou chromatografií (za použití jakožto elučního cinicla 65 % toluenu, v ethýlacetátu), čímž se získá 52 mg 1 , 6-d.iferiyl - 2 (S) ; 5 (S) -di [N-[2(S) -N (benzyloxykarbonyl.) amino- 3-met hybu tunoví] amino)-3,4-cis-ePoxyhexanu-

1H NMR, (S0£ CDCl3,'?O2í	CO	:,00) :	δ 7	,35 (c, 10); 7=13 (rn, 10);
5,12 (s, 4); 4,20 (d,	2) ;	3,90	(d	, 1) ; 3,1 8 (m, 1 ) ; 2. 0 5 (rn ., 2) ;
0,90 (tri, 9); (j, 3).
MS rn/e 7 49 (M* + 1).
Analýza pro C44H52N4O7
vypočteno- 0, 70,57;	H :1	7,00;	N,	7,48
nalezeno : C, 70,31;	H ,	7,11;	N,	7,76
S101 j č er 1 i n y p 0 d 1. e	Př	íkladu	2	až 5 se připravuji v podstatě

způsobem, podrobně POPsariým v příkladu 1, za použiti hydroxybenzotr.iazolhydrátu, N-met.hylmrji;f olinu a benzotriazol-1 -vloxytris(di methy .1 amino) f osf oniumhexaf luorf osf átu

Příklad 2

1,6-Oifenyl-2(S); 5 (S)-di[N.~ [ 2 (S)-N '(benzyloxykarbonyl)aminobutano*7 c

yDami.no) -3,4-cis-epoxyhexari

1,6-Oifenyl-2 (S) ;5(S)-di[N-[2(S)-N(benzyloxykarbonyl)ami.nobutahóyl]amino3-3,4-cis-ePoxyhexan se připravuje za použiti 194 mg (0,818 mmol) 2(S)-N-(benzyloxykarbonyl)áminobutanoové kyseliny' a 1 , 6-diferiyl- 2 (S) , 5 (Š)-diamoni.o-3,4-cis-epoxyhexandihýdroe-h-1-er-a.-dbi-í—me^á-pr-ed-uk-iry.-^ped-l-e—p í^im-a-vy—i-tó-.. za-zi-skáni—2j—mg—žá daného Produktu.

1H NMR (80% COCl.3/20% CD₃0D): δ 7,35 (s, 10); 7,20 (m, 10); 5,15.(_s, 4); 4,25 (d, 2); 4,10 <n,, 1) ; 3,90 (d, 1); 3,15 (rn, 1); 2,80 (m, 5); 1,45 (m, 4); 0,3 (m, 5).

Přiklad 3 ' , 6-0-j.fenyl-2 (S); 5 (S) -di[N- (2 (S) -N (obinoiin^- 2-yimethoxy)karbo-. nyDamino] -3 , (S) -methylPentanoyDami.no) “3,4-cis-epoxyhexan , 6~Difenyl--2 (S) ; 5 (S) ~di(N- (2(25) -N (chinol.in-2-y lmethoxy) karbony 1)amino} -3 , ($) -methylpentanoyl] amir;io) -3 ,,4-;cls·- epox.yhexa.ri se připravuje za použiti 365 mg (1,15 mmol.) kyseliny 2(S)-N-(chinol.in-2-ylmethox.y) karbonyl) amino-3 (5) methylpentarioové, meziproduktu Podle přípravy 2E, a 100 mg (0,282 mmrřj.) 1,6~difenyl~2(S),5(5)diamonio-3,4-eis-ePoxyhexandihydrochloridu , mezipr oduktu · podle přípravy 16. 2iskaný produkt se čistí reversní fázovou chromatošraf ií HPI...C (za použití jako eluční ho činidla systému 45

7,70 ); 4,2C

1,5 (m, ilu/30 % methanolu/20 % vody obsahující 0,5 % octanu za získáni·90 mg žádaného produktu(CD₃00) : δ 3,25 (d, 2); 7,95 (d, 2); 7,35 (d, 2)

7,55 (m, 4); 7,10 (m, 10); 5,35 (m, 4); 4,2.5 (rn,

4,0 (rn, 2); 3,2.2 (rn, 1); 2,30 (m, 4); 1,8 (m, 2)

1) ; 1,3 (m, 1) ; 1,1 (m, 2) ; 0,8 (rn, 12) .

MS-rn/ě- 879- (M* + T) — - --------— -- - -----^------------------:---------Analýza Pro C52H5SN6O7: vypočteno: C, 71,05; H, 6,65; N, 9,56 nalezeno-..:... .__C ,._?J j., .„6,7Q.;. N, _9„,.7 5............

% a c e i o niti ' amonného), ni NMR (m, 2) (d, D

Přiklad 4

1,6-Oifenyl-2(S) ; 5 (S) -di [N- [ 2 (S) -N (methyl) -N (chlnolin~2~.ylme.thy)) aminokarbonyl]aminobutanoyl]amino]-3,4-cis-ePoxyhexan , 6-Oifenyl-2 (S) ; 5 (S) -di [N- [ 2(S)-N (methyl.) -N (chinolin-2-yl~ methy.1.) aminokarbonyl] aminobutanoy 1 ]ami,r»o]-3,4-cis-ePoxyhexan se připravu je za· použiti kyseliny 2 (S)-N-( (N (methyl) -N (chi.rialin-2- * ylme.tbyl)am;i.no]l<arbamóyl]amiňobutůrioo'v.tž a 63 mg ¢0,18 mmol) 1,5di.f enyl- 2. (S) , 5 (S) -ď.i.amonio-3,4-cis-ePox.yhexandihydr'ochloridu, meziproduktu podle přípravy 1G. Získaný produkt se Čistí reversní fázovou chromatografií HPt..C (za Použití jako elučního --činidla

systému 50 1,	a četo	ni.trili.j/20 % methan	olu/30	λ vody ob·--.	abující 0
octanu amonného)	, za získání 50 mg	žádanéh	o Produktu	-
1H NMR (CDs	00 ) : δ	8,25 (dd, 2); 7,95	(m, 2.)	; -7,85 (m,	2); 7,70
(m, 2); 7,55	(t, 2	); 7,40 (dd, 2);.7,	1 5 (rn ,	10); 4,80	(ABX, 4);
4,35 . ( m, 2.) ;	4,15	(m, 2) ; ’ 4,00 (m, 1 )	; 3,25	(m, 1); 3,	02 (s, 3)
2,97 (s, 3);	2.,80	(m, 4); 1,7 (rn, 4);	1,7 (m	, 4); 0,85	( m, 6)

MS m/e. 849 (M + +1) .

Příklad 5 ...

, 6-benyl.....2 (3) ; 5 (S) - (.1..1. [N-~ [ 2. (S) -N [ [ (methyl) --N (chinoli n- 2 y l.met hyl.) οκιϊιχι] kar bony! j amino-3 (S) --met hyl.!:- entano.y 1 ] amino ) -3,4 - ci.s-ePO“ xyhexarr , 6-Diteny 1.-2 (5) ; 5 (S) -di [N-( 2 (S) -N ( [ (methyl..) -N. (chinolin- 2~yl~ met.hyl) amino] karbony!]amino^- 3 (S) -•methylpent.onoyX]a.m.i rio) -3,4~cisepexyhe*an se připravuje za použití 232 mg (0,804' mmol) 2(S)~N((N(methyl)-N(chinolin-2-ylmethyl)amino]karbamoyl]amino~3(S)-methylpentanoové kyseliny a 72 mg (0,201 mmol) 1 , 6-difenyl.-2 (S) , 5($) -diamoriicr3,4-cls-epoxyhexandihydrochloridu , meziproduktu podle přípravy 10. Získaný produkt, se čistí reversní fázovou chrrjmatografií HP|.„C (za použití Jako elučního činidla systému 50 % .acetoriit.rilu/20 % met.hanolu/30 % vody obsahující 0,5 % octanu amonného) -

1H NMR.	(C0300): 6-8,25 (d.d,· 2); 7,95	(m, 2) ; 7,85 (d, 2) ; 7,70
(m, 2);	7,55 (t, 2); 7,40 (d, 2)	; 7,15	(rn, 10); 4,75 (ABX,	4) ;
4.3 8 (d	, 1 )'; 4,28 (t , i) : 4.20	(rn , 1)	; 4 .11 (m, 2 ) ; '3,2'5	(mj 1
3,02 (s	, 6)-, 2,75 (m, 4) ; 1,76 (	m , 2 ) ;	1,05-1,45 (m, 4); 0	,75

(rn, 12)

4

MS m/e 906 (M* + 2).

Příklad 6 [ IS- (1R*, 4R*. 5S*) ] -N-[ 1 - (2-Amino.-2-oXoe.thyl ).-?-oxo-3-azar4-fenylm et h y 1 - 5 - h y d t- o xy 6 - ( 2. - ( 1 -^1 er t ·.. - b u t y 1 á mi no -1 - o x o m et. h y 1) f c π y 1) h e <yl-l~2—c.h iriol iTiyřtkai-bo-xiami-d:-^;’Oo studeného (-10 ”C) roztoku, obsahujícího 500 mg (1,46 mmol) [2R-(2R*,3S*] -N-terc- -buty 1.-2- (3-ami.no-2-hydroxy-4-f enylbu tyl) bcnzaml.du, meziproduktu. Podle Přípravy 30, 443 mg (1,54 mmol) 2 (S) -M- (chiriolin-2-ylkar boriy.l.) amino-3-kař'bamoylpr opanoové kyseliny a 20S mg (1,54 mmol) hydroKybenzotriazolhydrátu v 10 ml bezvodého tetrahydrofurariu a 1,7 5 ml bezvodého dimethylformamidu se přidá 309 mg (1,50 mmol) dicykl.ohexylkarbodii.midu v prostředí dusíku. Reakčni směs se nechá reagovat, při teplotě -10 C po dobu přibližně dvacet minut, Pak po dobu. jedné hodiny při, teplotě 0 C a přes noc. Při teplotě místnosti - - Reakčni--smě.s -- se -oohladí na teplotu 0 C, a zfiltruje se k odstraněni vytvořené sraženinyFil.trát se ^koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá zbytek, který se rozpustí v 50 ml ethylacetátu, promyje se Postupně vodou, nasyceným roztokem· hydrogenuhličitanu sodného, 5X^kyselinou citrónovou a solankou · Vzniklé vrstvy se oddělí, organická vrstva se vysuší síranem sodným, zfilt.ruje se a zkonceritruje se za sníženého tlaku, čímž se získá. Pěna- Tato Pěna se čistí, radiální chromatografií <1,0 mm destička, jakožto elučního činidla Použito 0 až 10 X methanolu v methylenchloridu) za získání [ 1 S- ( 1R*, 4R^X— 5S+) -M- [ 1 - (2--amino-2-oxoethyl) - 2-ox.or3-aza-4-f eny Imethy 1-5-hydro xy-6-(2- (1-terč.-foutylamino-1-oxomethyl)fenyl)hexyl]- 2-chinollnylkarboxamidu ve výtěžku 487 mg (55 X teorie)-1-1T93-—(οΌΤΐΌ“Μτ?ΟΗ·)τ ---------—-----------¹H N.MR (COC1₃) 5 1,46 (s, 9H); 2,71 (dd, 15,6 H_z, 1H);

2,81-3,01 (m,	. 4H) ;	.3,07	(dd, 4=15,3	Hz,	,1H); 3-,75-3,.	78	(m ,	1H) ; '
4.2.8..-4-, 3ít( tn	AH.)_;.. <	t,_9.5_	..(.dd._J = 12.,..6..		,1b)í.,,5.,7 A. (br	--		; 6.,.19
(br.s. 1H);	6,3 2 .	(br - s	, 1H); 6,30	(t;,	J-6 Hz, 1H;	7	,01 (	t, J--6
Hz, 1H); 7,06	-7,38	(m,	6H); 7,64( t	J=	6 Hz, 1H); 7,	79	(t.,	J = 9 Hz
1H); 7,80 (d	, J=6	Hz,	1H); 8,17-8	,31	(m, 3H); 9,22		(d, J	= 9 Hz,

c υ

1631, 160), 156:

1H).

13C NMR (75,4 MHz, COCl₃) : δ 28,7 , 35,3 37,1, 37,2, 50,1 , 52,1,

53,5, 55,9, 74,S, 1 18,7, 126,0, 127,0, 127,6, 128,2, 1 29,3, .129,4, ,130,0, 130,2, 130,3, 130,9, 137,4, 137,5 , 138,2., .. 1 46,5 ,

148,8; 164,6, 170,4', 170,5.

IR (CHCI.3): 3428, 3411, 3359, 5012, 2975,

1499, 1454, 1395, 1367, 1231, 1047 cm“'¹.

MS (FD) : m/e 610 (M*) ; 221 (100).

Analýza pro 03 5H39N..5O5:

Vypočteno: C, 68,95; H, 6,45; N, 11,49 nalezeno : C, 63,76; H, 6,55; N, 11,49.

1518.,

Přiklad 7 .

[ 1S— ( 1R*, 4R* , 5S*) j -N- [ 1 ( 2-Amlrio-2-oxoethyl) -2-oxo-3-aza-4-f enyimethyl - 5 -liydroXy-6- ¢2-(1 —terč - -buty lamino^-1 -o* om ethyl.) -4-roethyl f enyi)hexyl) -2-chinolinylkarboxa.mid

C 1S-( 1R* , 4R*, 5$*) )-N-C 1 -(2-Amino-2-oxoethyl) -2-oxo^-3 ^-aza^-4 - feny 1 met hy ].- 5-hydroXy-6- ( 2 - ( 1.....terč -butylamino~ 1 -oxome thyl) - 4 -me t~ hyl. fenyl) hexyl) - 2.-ebinolinyl karboxamid se Připr a vu je v podstatě z P ů s o b em p o d r o b n ě ρ o P s aný m v p / χ k χ a d u 6 z a p o u ž i 11 C 2 R. - (?.. R »·, 3 S *·) ] N.-terč -butyl^-2- (3- (N-benzylóxykarbonyl) ami.no-2-hyd.r oxy-4- f enylbutyl~5“meth vib enzamidu a (5) -N - (chino lin - 2 -y J.k ar bony 1) amir 10—3 - k _ar· banioylpi- opanoové kyseliny a hydí-oxy ber izotriazo.(hydrátu a. dicyk to hexylkarbodiimidu- Tiskaný 'Produkt se čisti· bleskovou chromatografil (za použiti jakožto elučního činidla gradientu 2 až 3 Sí metanolu v methylenchloridu), čímž se získají 2 g surového produktu , který se dále čistí reversní fázovou chromatografií HPlC Výtěžek je 1,85 g (74 % teorie) [σ.)ο + 28,57 (c 0,10, MeOH).

1H NMR. (COCI3) δ 1,43 (_s, 9H>;'2,30.(s, 3H) ; 2,63-3,76 (m, 1H);

4,22-4,97 (rn,	1H) ; .	5,5 -1	(s, 1H); 5	,82-5,88 (br-	s, 1H>	; 6,09	(s
1H); 6,20 (	3, 1H)	; 6,84	-7,24 (m.	10H); 7,63 (t.	, >7,	5 Hz,	1H)
?,?S (t, >7	5 Hy,	1Hj ;	7.65 (d, J	^3- Hz, IK) ; 8	, 1 9 (i;	J-S , 4·	-Hz
1H); 8,28 (d	, >8,	4 Hz,	1H); (9,20'	(d, J-8,1 Hz,	1H) .
IR. (CHCI.3);	3410,	302.2,	3013, 1674,	1519, 1497,	1454,	1426, 1	367

1210, 1047, 910 cmi.

MS (FD): m/o 624 (M⁺); 234(100).

Analýza pro C36H41W5O5:

vypočteno:. C, .69,32; H, 6,63; N, .11,23 nalezeno. - ' C, 68,73; H,'6,76; K<, 11,07.

Příklad c.

A. [2R-(2R*,3S*,6S*)]-N-terc.~e'utyl-2-(2“hydroxy-3-f er.y Imethyl4 -aza -5-oxrj-6-N (benzyl oxykarbonyi) a mino^-7 -k ar bamoy ihep ty .1.) berizamid

Do studeného (0 C) roztoku, -obsahujícího 3,4 g (10 mmol) [ 2R. ( 2R*, 3S*] -N-ter c - - butyl “2~ (3-~umi.no-2-hydroxy “4-feny lbutyl) benz.ami.du, meziproduktu podle přípravy 3D,· 2,6 g -(10 mmol) 2.N(benzyloxykarboriyl)atnino-3-karbamoylProPanoové kyseliny a 1,09 ml (10 mmol) N-methylmorfolinu a 1,48 g (11 mmol) hydroxybenzotriazolhydrátu ' v© . 20 ml bezvodéhp. d±methylformaro.idu..se ..Přidá _'.2,4.5- (11 mmol.) dicyklohexylkarbodiimidu v prostředí dusíku- Reakčni směs se zfiltruje a žádaný Produkt se extrahuje z filtrátu ethylen c,et.át em.. Ethylacetát ový roztok se zředí směsí ethylacetátu a. vody- .Vrstvy se oddělí a organická vrstva se promyje postupně nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu-sodného, 52! kyselinou citrónovou , nasvioeným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou vysuSí se síranem horečnatým, zflitrují se a zkoncenirují se za sníženého tlaku, čímž se získá zbytek- Tento -zbytek se promyje filtr se 'vysuší ve vakuové sušičce [ 2R-(2R* , 35*, 65*) ) -W-terc - -butyl-2(2.-hydroxy-3-f enyl.methyi-4-az&-5-oxo-6-N (benzy ioxy karbony! ) amino7-kur-bamoylheptyl) -benzamidu směsí ethyletheru a vody a Získá 30 4,4 g (79 % teorie)

B, [ 2.R- ( 2R*, 3S*·, 6S*)·] ~M-terč · -8ut.yl-2-(2-hydroxy-3-fenylmethyl4 - aza - 5 - ox o - 6 - a mino - 7 - k a ř b a m oy 1 h ep i y 1.) b enz a m i d [ ?R - (2R*, 3S'*-, 6S*) ] -N-teřc- -Butyl'-2- (2-hydroxy-3- f eny.Imethyl-,4~ aza- 5 “oxo“ 6-- amino“7 -karbamoy'1 heptyl) benzomi.j se přípravu je v podstatě způsobem Podle přípravy 30-za použití [2R-(2R*,3S*,6S*)]-Nt.er c - -butyl - 2 - ( 2-hydřoxy ~3- f enyl met .byl- 4 - aza - 5- ijXo-6 -W ( benzyl oxy7 7 karbonyl)amino-7-karbamoylheptyl)benzamidu, produktu podle příkladu 8A, a Palladia na uhlí ve‘ výtěžku 31,1 g (96 % teorie) ve formě bledě žluté Pěny.

. : : . * . .

C'.. [1S-.<1R'*,4R*,'5S-'<9]~N-[1-(Z-Ami_r,o-2.~oxóetbyl)-2-oxo-3-aza-4f enylmethyl- 5-hydroxy—6- (2-'( 1 -ter č - -butylamino^- 1 -nxomethyl.) f eriyl)hexyl)-7-methyl c h i no 1 i n ~ 2 - y 1 - k a r b o x a ro i cl

Oo roztoku obsahujícího 135 mg (0,5 mmol) 2-karboxy-7-methylchi.noli.nu a 81 mg (0,5'mmol) 1,l-karbonyldiimidazolu'v 15 m'j. bezvodého methylenchloridu se přidá 227 mg (0,5 mmol) [2.R- (2R*3S*, 6S*) ] -N-terc...-butyl^-2- ( 2-hydroxy-3-f eny Imethy l-4-aza~5 -oxrj- 6 amino-7 ykarbamoylheptyl) benzamidu, pr oduktu Podle pří.kl adu 86 . Reakčni směs se nechává reagovat Přes noc- Když je reakce ukončena Podle stanovení chromatografií v tenké vrstvě, zředí se reakČní směs 100 ml methylenchloridu a 25 ml vody za získání emulzeTato emulze se,promyje postupně nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, 5% kyselinou citrónovou, nasyceným roztokem hyd” rogeru ih li čit ariu sodného, a solankou , vysuž»i se síranem hořečnatým a zkonceritru jí se za sníženého tlaku, čímž se získá zbytek. Tento a vysutí 1 1 5 mg ) - 2 - ox.o ••I..:·.?·.·.· t.zbytek se·suspenduje ^v diethyletheru, izoluje se filtrací si se νθ vakuové sušičce při teplotě místnosti- Získá s (3? % teorie) (1S-(1R*, 4R* , 5$*·) ] -Ν-[ 1 - (2-amino“2-oxoethvl 3-az.a- 4-f eriyl.methyl“5-h'ydroxy-6- (2.- (1 -terč - -butylami.no-·· 1 byl) fenyl) hexyl) -7 -methyIchinolin- 2-ylkar box amidu

MS(FAS):.623 (M’-1)..

iH NMR.	(COC'l3) δ 1,4 6	(s, 9H); 2,6-3.,1 (m, 10H); 3,69
n-í)	; 4,	2 2-4,3 2 (τη.	1 Η ) ;	4,28-4,35 (rn, 1H); 4,9 (m, 1H)
(tn,	1H)	; 5,9-6,05	(2br -	s, 2H) ; 6,89-6,3 (m, 14H); 9,3

5 (in, ,3-5,35' , 1H) .

Sloučeniny -podle -následujících přikladu 9 'a 10 se přípravu ji v podstatě způsobem podrobně popsaným v příkladu' 8C za použití (2R-(2R* , 3S* , 65*') ] -N-terc- -butyl~2~ (2-hydroxy-3-f enylmethyl-4-az«-5-oxo^- 6-ámino7-k/;iřbá'moýlhéptyl) benža^udu ,' pr oduktu Podle ' přikladu 86, a uvedeného Činidla se substituovanou karboxyskupinou

I

2,6-3,1 (ro, 8H); 3,70-3,78 (ro, 1H); 5,2 (br-s, 1H); 6,05 (br-s, (dd, 2K);

N , 11 , 23 N, 10,94.

Příklad 9 [ 1S- ( 1R.*, 4R*, 55*) ]-N-[1 - ( 2-Arni.no-2-oxoe.thyl) -2-oxo^_3-aza~4-f eriyl,me.thyl-5-hyd.roxy-6- ( 2- (1 -terč - -butylamin»;»-1 -o*omethyl) fenyl) bexy 1) - 8-methylchinolirt-2-yIkarboxamid [ 1S-( 1R.*_ř4R.* , 5S*j 3~N -[ 1 -'(2-Amir.o-2-oxóethyl) -2-_ox.o-3^aza-4-f- enyí-roe.fchyi-—5-hydroxy—6·—(-2---(-1—bere-—b ubyl-amii· ·»ο—-1—o-xom»?. fchy l-)-f-e— nyl) hexyl) - 8-methyl-chinolin-2-ylkarboxamid se připravuje za použití 2-krarboxy-8'-methylchinaXinu ve výtěžku .57,8 X teorieMS(FAB): M* 1 (62.3 + 1)

1H NMR. (COC’l.3) 6 1,46 (s, 9H) ;

1H); 4,28-4,32 (m, 1H); 4,9 (m,

2H); 6,8-7,78 (rn, 12.H; 8,2-8,3 Analýza Pro CggKdoN5()5: vypočteno: C, 69,32; H, 6,62;

nalezeno : C, 69,10; H, 6,81;

Příklad 10 [ 1S- ( 1R*, 4R.*, 55*) ] --N-[ 1 - ( 2.-Am±no-2~oxoethyI) -2.-oxo-3-aza~4-fenyl-, met.hyl-5-hydroxy-6- ( 2— ( 1 -ter o - -butylamíno- 1 -oxnmethyl) f enyl) hexyl) -4-methyIchinoliri-2-yl .karboxamid.

[1S-(1R*,4R*,5S*) 3-N-['l-(2.-Amino-2-oxoethyl)-2-oxo-3-aza4- f enyImethy].-5-hydroxy-6- (2-(1-ter c - -butylamino- 1 -oxomcthy1) f e~ nyl)hexyl.)-4--methylchinolin-2-ylkarboxamid se připravuj»?. za Použití 2“ka.rboxy-4-methyl.chinoliriu ve výtěžku 35 % teorieMS(FAB): 623 (M*1)

1H NMR (C0C1.3) δ 1,46 (s, 9H) ; 2,6-3,1 (m, 1QH); 3, /-3,78 (m,

1H); 4,23-4,35 (m, 1H) ; 4,9-4,95 (ni, 1H) ; 5,35-5,40 (br.s, 1H);

5,97-6,08	(2br-s, 3H);	6,82-8,2	(m, 14H); 9,18	-9,2.	(d,1H).
Analýza př	O b 3 6 H 4 0 M 5 0 5'
Vypočteno:	C, 69,32;	H, 6,62;	N, 11,23
Nalezeno	C, 69,06;	I H, 6,64;	N, 11,25.
5louče	niny podle n	άsledujíc	ích příkladů 11	a 15	se připravuji
v podstatě	způsobem	Podrobně	Popsaným v pří	kladu	6 za použiti

hydroxybenzotriazolhydrátu a dicykj.ohexy 1 karbodiimidu 79

Příklad 11.

11S- ( 1R*·, 4R*,5S*)3 -N- (1- (2-·Amino- 2-oxoethy 1) -2~r_>xo-3-aza^-4-fenylmethyl-5-hyďroxy-6-.^2- (1-terč- -butylamino-1 yoxomethyl) f ertyl·) hexyl) -2-(6,7,8,9-tetrahydronafty.l) karboxamid.

[1S- (IR* , 4R^X, 5S*) 3 -ř4-( 1-(2-Arnino-2-oxoethyl) -2~oxo-3-aza-4Tenylmethyl- 5-hydroxy- 6 — 2. — (1 — ter c- -butylamino-1 -oxomethyl) f enyl)hexyl)-2-(6,7,8,9-tetrahydronaftyl)karboxamid se. získá ve výtěžku 75 'mg (54 % teorie) ve formě bezbarvé pěny.

W NMR (COC1₃) 6 8,0 (d, 1H); 7,5-7.,03 (m, 12K); 6,51 (b r - s 6,22 (br.s, 1H) ; 5,57 (br.-.s, 1H) ; 4,84 (m,. 1H) ; 4,23 (m„ 1K)

3,75 (m, 1H); 3,12-2,5 (rn, WH); 1,81 (m, 4H) ; 1,43 (_s SH)_

H-i) ;

MS (FO): 62.9 (M*). Analýza pro C37K36N4O5 vypočteno nalezeno :

C, 70,79; H, 7,55;' N, 8,92 C, 70,63; H, 7,31; N, 3,21

Příklad 12 [ 15- (1R*, 4R*·, 5S*) ] -N- ( 1 - Isopropyl) ~2~oxo3-aza~4-feny Imethy ).-5-hydroxy-6-(2-(1 —terč--butylamino-1-oxomethyl)fenyl)Hexyl) 2 - c h i. n o x a. 11, n y 1, a c e t a m 1 d [ 1S-( IR* .„ 4R*·, 5S*·) )-11-(1 -Isopropyl) -2-oxo-3-aza-4-fenylfnethyl-·5-hy<ii-r,i>;y — 6 — (2- (1 —terč — butyl.amino~Ί -oxomethyl) f eny.1) hexyl) ~~cchinoxallnylacetamid se -získá ve výtěžku 51 mg (8 % teorie) ve f ormě na Z J.out.1 ě Pénv.

1H NMR (CDCls) 5 9,69(s, 1H); 8,31 (d, 1H) ; 8,28-7,0 (m, 13H); 6,78 (rn, 2H); 6,12 (m, 2.H) ; 4,43 (m, 2.H) ; 3,82 (rn, 1H); 1,5 (s

9K); 1,0 (dd, 6H).

MS (FO); 597 (M+i).

Příklad 13 ' (1S - (1R *, 4R *, 5 S *) 3 -N - (1 - T. sop r op y 1) - 2'“ o x o - -3 - a z a - 4 - f e n y 1 m e t h y 1 -- 5-hy<j 1 ι·;ιχv~6 — ( 2— ( 1— terc·. ^-bu-tyl-a-mirio^- 1—fyx.omethyí) -f enyl) he-xy„I..) — 2-naft.ylacetam-id (1 S- (1R*,4ft*.5$*) ] -N-( 1 - Isopropyl.) -2-ox«-3-aza.....4-feny)methyl1 .1

so

-5-hydroxy- 6 —(2 — <1-terč- - butylamino-1-oxomethyl)fenyl)hexyl)-2naftylacetamid se získá ve výtěžku 39,6 mg (11 % teorie) v© formě pěnyAH NMR (COCls) 6 8,22(s, 1H); 7,93-6,7. <m, 15H) 6,1 (d, 1H);

6,0 (s. 1H); .4,49 (t, 1H); 4,35 Í,'1K); 3,82 (m, 1H) 3,09-2,77

2-,-2—(-m-,—l-H-)-;—1-.-4-7—(-S-;-9H-)-;—0-,-9-S—(-tr~5H-)--MS (FD) : 594 (M<1).

Přiklad„14

CIS- ( 1R*·, 4R», 5S«) ) -N-(1-(2-Amino“ 2-oxoethyl) -2~oxo~3~aza~4-fenylmethyl- 5-hydroxy- 6-(2-(1- terč “butylamino-1 -oxomet..hy].)thien-3y 1.) h ex y 1) - 2 - ch 5. r»o 1 iny l.k.ar b o x am i. d

C1S- (1R*, 4R*, 5S*·) ] -N- (1 - (2-Amino-2-oxoethyl.) -2-oxo-3-aza-4fenylmethyl-5-hydroxy-6- (2- (1 -terč - -butylami.no-1 -oxomethyl) thien3-yl)hexyl)-2-chinoliriyl.karboxamid se získá-ve výtěžku 90 mg (50

Sí teorie.)	ve formě· bílé .pevné	látky.		— — -.....	. .. .....
W NMR (CDC13) δ 1,42 (s, SH)	; 2,7 5	(dd, J	=7 Hz, 1H) 2,95	-3,20
(m, 5H);	3,77 (m,1H); 4,27 (m,	1 H ) ; .4 ,	9 u (rn ,	1H); 5,38 (br-.s,	1H) ;
5,93 (br.	s, 1H) ; 6,41 (br-s,	1 H ) ; 6	,95 (m,	5H); 7,20 (n.	4H) ;
7,66 (t,	J---8 Hz, 1H); 7,81 (t,	J = 6HZ.,	• 1H ) ; 7	,90 (d, J=8· Hz,	1H) ;
8,20 (m,	2.H); 8,34 (d, J-8 Hz,	1 H ) ; 9	,25 (d,	’ j = 8 Hz,1H).
ÍR (KBr):	3302, 1 667, 1498., 142.7 cm“ i
MS (FAB) :	hmot, 616,2591 (M+H)
MS (FD):	m/e 615 (M+)

Analýza Pro vypočteno^; nalezeno :

C 3 3 H 3 7 N 4 0 5 S : C, 64,37; H, C, 64,60; H,

6,06; N, 11,37. 5,98; N, 11,42.

PřlKRad—-1-5-[1S-(1R*-,4R*,5S*·) ]-N-(1-(2-Hydroxy-2-oxoethyl)-2-oxo-3-aza4-fenylmethy1-5-hydroxy-6-(2- (1-t-butylamino- 1-oxomethyl)fenyl)he^1) t2zc-!?.io£il;i.o.yl.katbox.arťrj..d„_,.., . _ .... ....... „ ... ·....

[ 1S- ( IR* , 4R*. 5S*·) ]-N-< 1 - (2-Hydrox.y--2-oxoethyl) -2-,..xo~3-aza-4f eny lmethy 1- 5-hydroxy - 6 - ( 3 - (1 -1- b i .i t y la mi no- 1 - oxornet h yl) f er iy 1) hexyl) 2.-chino J. iny .l.kar box amid se získó za pou? i 1.1. [ 2R- (2R*, 3S* ·] — N 81 ter c - -butyl-2-(3-amino^- 2 -hydroxy-4-f eriy Ibuty 1) b erizamidu , mezi .p r o produktu podle přípravy 3D, a kyseliny (S)-2-N-(chinolirt-2-ylkarbonyl)amino-3-karboxypropanoová, meziproduktu podle přípr avy 8, ve výtěžku 40 mg (40 % teorieX ve frjrrně bezbarvý pevně látky 1H NMR '(DMSO-dé) : δ 1,36 (s, 9H) ; 2,58-3,05 (m, 6H) ; 3,84 (m, 1H); 4,79 (m, 1H) ; 5,88. (s, 1H); 6,92 (t, J = 8 H_z, 1H) ; 7,02. (t,

J=8 Hz, 2.H); 7,12-7,37	(rn,	6H);	7 7 7	(t, J=10	Hz,	2H);. 7,90 (i,
J=10 Hz, 2H); 7,98 (d,	J = 10	Hz,	2H);	3,07-8,23	(m,	4H); 8,60 (d,
J—10 Hz, 1H); 8,89(d, ·	J- 10	Hz,	1H) :	12,40 (s,	1H)
MS (FD): rn/e 613 (25),	612	(?5)	, 611	(100).
Analýza pro C35H38N4O6·
vypočteno: C, 68,84;	H, 6	,27;	N, 9,	, 17
nalezeno : C, 68,61;	H, 6	,44;	N, 9.	, 10.

Sloučeniny podle následujících příkladů 16 a 19 se připravují v podstatě způsobem podrobně Popsaným v příkladu 8C za Použití 1,1-karbonyIdiimidazoluPříklad 16 [1S-(1R*,4R*,5S*)]-N-(1 -(2-(N-2-Pyridylmethy!)amino)-2-oxoethyl] 2 —oxo “3—aza—4—f eny lmethy 1~ 5 — hydroxy—6 — ( 2. ·- (1 - Let o. - - b ul yLamino - 1αχornet.hy.1) f enyl) hexy 1) - 2 -chi.no.LinyJ.kar boxa mid [ 1S- ( 1R*,4R*, 5S*) ] ~N-(1-(2-(N-2-Pyridyl.rnethýl) amino) -2-oxoethyl] -2-oxo-3-azč<-4-fenylmethy 1-5-Hydroxy-6-(2- (1 - terč -butylamino- 1 -oxomethyl) fenyl) hexyl) - 2-chirioliriy lkarboxamid se připravuje za použití 0,2 g (0,33 mmol) [ 1S-( IR*, 4R* , 5S*·.)-N-( 1 - (2-h_ydroxy-2oxoethyl) -2-oxo-3-aza^_4-fenylmethyl-5-hydrox.y-6- (2- ( 1 “ter č-butylamino^-1 -oxomethyl) fenyl) hexyl) -2-chinolj.nyl. karboxamidu, produktu podle Přikladu 15, a 0,07 ml (0,66 mmol) 2-ami.nóme-thylpyri.dinu ve výtěžku 33 mg (14 % teorie)-

J	1H NMR (CDC.L3)	: 6 1,48	(s, ,9H) ;	2,77-3,	16 (m, 6H); 3,80	(br.s,
|!ζτ	1H); 4,33 (m,	1H); 4,59	(m , 2H) ;	5,02. (rn	., ’ 1H; 5,90 (br..	a , 1 H ) ;
-	6,23 (3, 1H);	6,90-7,09	ím, 4H)	7 , 1. 5- (m-,	1H·) ;·· 7 , 20-7-,4 2	( m , - 8 H ) ;
3	7,82 (t, -J = 8	Hz, 1H); 7	,91 (d,	,J=8 Hz,	1H); 8,16-8,40	(rn, 4H);
	9,35 (d, J=8Hz	1H).

2

MS (FD): m/e 701 (100), 700 (15), 481 (28), 220 (90).

Analýza pro C4 1H4 4N.6O5.2 , 2H2O:

vypočteno: C, 66,50; H, 6,56; N, 11,40 nalezeno- C; 66,35; H, 6,20; N, 11,00.

p-f^:-£).ýj7J7j T? ~“ [ 1S- ( 1R.*, 4R^x, 5S*) 3 -N- (1 - ( 2 - (N-2-1 midazolylmethy 1) atnj.no) - 2-oxoethyl) -2~oxo-3-aza-4“-fenylinethyl-5-hydroxy-6-(2- ( 1 -terč- -butylamino- 1 -oxomethy1) f enyl)hexy 1) -2-chinolinylkarboxamid [ 1S— (1R*, 4ft *, 5S* ) } -Ν- (1 - (2-(’N-2- Imidazolyl methyl) amine) -2-o~ xoe-thyl) 2-oxoS~aza4~fenylmet.hyl“5-hydroxy-6-¢2-(1 -terč - -butyl“ aiairto-1 -oxomethyl.) fenyl)hexyl) -2-chinolinylk.arboxamid se připravuje za použití 0,5 g (0,82. mmol) [ 1S-(1R* ,-4R.*, 5S^X)) - N-(1 - ( 2-hydroxy-?.- rjxoethyl) - 2-oxo-3-aza-4-fenylmethyl-5-hydroxy-6- (2- (1terc- -butylamino- 1 -oxometbyl) fenyl)héxyl) -2.-c.hinoliriylkarboxamidu, produktu podle přikladu 15, a 0,-2 8 g (1,64- mmol) i-mldazolme.t'— hylaml ndihydrochloridu roisto hydroxybenzotr iazolhydr á t u. a dicyklohexylkarbodiiroidu (místo 1 , 1 -karbonyIdiimidazolu) v množství

0,2	6 g	(46 S teor	ie) ve formě bezb	arvé-pevné látky.
iH	NMR.	(DMSO-ds)	6 1,33 (s,. 9H)	;-.?,69 (m, 5H) ; 2	,95 (dd, 0=30
Hz,	14,	2H); 3,62	(br-s, 1H); 3,68	(br-s, 1H); 4,22	(d,0= 10 Hz,
2H j	; 4,	80 (br.S,	1H> ; 6,8 2 (b;-.s.	lit); 6,67 ít, J = 8	Hz 1H); 7,05
(t,	J = 8	Hz, 2H);	7,15-7,25 (in, 4H)	; 7,30 (t, J = 7 H:	Z, 2H); 7,74
<t,	J----7	Hz, 1H);	7,35 (d, J=9 Hz,	1H); 7,93-8,14 (m,	6H); 8,45 (t,
J = 6	Hz,	1H); 8,58	(d, -J = 9 Hz, 1H);	8,96 (d,J=9 Hz, 1H).
MS	(FD)	: m / e 6 91	(80), 690 (100).
Ana	Ivza	pro C39H43N7O5:

vypočteno: 0, 67,91; H, 6,28; M, 14,21 nalezeno': C7'67767j ~H ,' 6',~507Ň , Ϊ3 7987^-'......

Přiklad 18 [ 1-S~(-1-R.·*-,4R-*--SS»-) }- N--( 1.....-(2 —(-N-2-Bezimi.dazolylmethyl) amino).....2-_oxoethyl] -2“oxo3-aza~4--f enylmethyl-5-hydroxy-6~ (2- (1 -terč- -butylaroi.no-1 -ox-omethyl) fény.].) he.xy.1) - Ž-chlnoli.nyikai·-boxamjd [1S- (1R*, 4ft·*·, 5.S*) 3 - W — (1 — ( 2- (N-2-Bezi midazolylmethy'1) aroinó) 33

2-ox.oethyl]-2-oxo~3-aza-4-f enylmet.hyl-5-hydroxy-6-(2-( 1 -terč- -butylami.no-1 -oxomethyl) fenyl.) hexy 1) -2.-chinoliriylkarboxamid se získá ve výtěžku 0,199 g (62 % teorie) ve formě žluté Pěny. 1H NMR. (OMSO-de) - δ 1,34 (s, 9H) ; ,2,63-3,30 (m, 5H) ;

3,60-3,65 (m, 1H); 3,88-3,91 (m, ΛΗ) ; 4,43 (d , >5,6 H_z , 2H) ; 4,84 (dd.

J=7,8 Ηχ, 1H);

5,87 (d

Hz

1H); 6,92-7,47 (m„ 14H) ;

3,03-8,20 (m, 60H) ; 3,57 (d, J = S,6 H_z, 1H) ; 8,65 (m, 1H); 9,00 (d, J=8,2 H_Z, 1H)..

MS (FD): m/e 743.(K*1), 740 (29), 739 (50), 354 (100).

Analýza pr.o C4 3H4 5N7O5.0,4H jO : vypočteno: C, 69,13;. H„ 6,18;. N„ 13,12 nalezeno : C, 63,34; H, 6,35; N, 13,50.

Příklad 19 (1S- (1R*·, 4R*, 5S*)]-N-(1 -(Z-Amino-2-oxoethyl] -2-©xo-3-aza-4-fenylmethy 1.-5-hydroxy-6- (2- (1 terč. -butylamino-1 -oxomethyl) fenyl) hex y 1) - 4 - r_.Fi 1 o r c h l n o .1 i. n - 2 - y 1 k a r b o x a m i. d [ 1 S-- ( 1 R*·, 4R* , 5S*·) ] -N - ( 1 - ( Z-Arnino-2-oxoethyl j -2-oxo-3 -aza- 4fenylmethyl- 5-hydroxy- 6- (2- (1 - terč. -butylaml.no·*· 1 “ oxomethyl) fe™ riyl)hex.yl) -4-chXorchinoll.n-2-ylkarboxamid se. připraví ve výtěžku 29,2 mg (9 teorie).

1H NMR. (COCI.3); δ 1,45 (z 4,3-4,4 (m, 1H); 4,9-5 ); 2,7-3,1 (m, 6H); 3,7-3,8 (nc 1H); 5,5 (m , 1H); 6,0 (rn, 1H) ; (m, 2H);

6,9-3,3 (m, 17H);.9,2 (d, 1H). MS (FO)c 644

Analýza pro C35H38N5O5.01.:

vypočteno: C,	65,26;	Η,	5,95; N,	10,37
nalezeno : 0.	65,55;	H,	6,04; Ν,	10,85.
.Sloučeniny	podle n.	ás.l.r	?dujicích	příkladů 20 až. 22 se při,pra

vují v podstatě způsobem podrobně popsaným v příkladu 6.

Příklad 20 · · · ..... - - ' ......

Cis-(1R*,4R«,5S*))-N-(1-<2“Methylpropyl}-2-oxo~3~aza-4-fenylmethy].-5-hydr oxy-6- (2- (1 - tor c - ~butylami.no-1 -oxomethyl.) f enyl)hexy‘1) 84

-ch χΐιοί it ί- 2-y lk.ar boxamid [ lS-( 1R*,4R* , 5S*) ) -N-( l-(2-MethyIpropyl]-2-oxrj-3-aza-4-fenylmethyl- 5-hydroxy-6-(2- ( 1 -terč - -but-ylamino-1 -oxomethyl) fenyl) hexýl)4-chinolin-'2-ylkar boxamid ~ se získá ve výtěžku 44 mg (61 % teoríé) 'Příklad 2.1 [ 1S- (1R*-, 4R*, 5S*) ] -N-( 1 - (Propyl) -2-oxo-3-aza-4-f e.nylmot.hyl-5-hydroxy- 6 - (2- (1 -terč- -butylami.no-1 -oxomethyl.) fenyl) hexyl) -4-chinoli n - 2 - y 1 k. a r b o x a m i d [ 1 s-(1R*, 4R*, 5S*) ) -N-< 1 -(Propyl) -2-oxo-3-az.a-4-fenylmet.hyl5-hydroxy- 6-(2- (1-terč--butylamino- 1-oxomethyl)fenyl)hexyl)-4chinólin-2-ylkarboxamid se získá ve výtěžku 42 'mg (22 % teorie)MS (FO): m/e 5 98 (M*-<) .

.Příklad 2 2 .............. . .........

[ 1 S- (1R*, 4R*, 5S*) ] -N-( 1 - (2-Amino-2~oxoethyl) ~2-_ox_o-3-aza-4-fenvíme thy 1~ 5-hydroxy- 6-(2-(1 - terč - -butylamino-1 -oxomethyl.) f eriyl) he xyl .) - 8- tri.f luoromethyIchinoliri- 2-yIkarboxemj.d

LIS-(1R*.4R*.5S*>3-N-(1-(2-Amino-2-oxoethyl)-2-oxo-3-aza-4~ fenylmethyl- 5-hydroxy- 6-(2-(1 -tore - -butylamirto-1 -oxomethyl) f e~ riyl) hexyl) -8 - tr ifluoromethylehinolin^-2-yIkarbpxamid se získá ve výtěžku 116 mg (34 % teorie)MS (FO): m/e 578 (Μ*1). ·

Příklad 23

A. (2.R- (2R*·, 3S*·, 6S*·) ] — N — terč. -But.yl-2-[2-hydroxy-3-feriylmethyl4 - aza-5 -oxo-6 - N (ter c · - b ut oxy kar bor tyl.) amino - 7 -methyl ] okt. y lb er izami d — -[-ZR.—(-2-R·*—3-S-*T6S-*-)-3’-N--ter'cz-B-utýl'-ⁱ-'2-['í’-hý'dřOx'ý'=.3'='f eÍ-iy iměťlTyT“

- a z a - 5 - o x.o - 6 - N (t er c - - b u t ox y k a r b o ny 1) a mi n o - 7 - m e t h y1) o k t y 1 b e nz a m i, d *

se připraví v podstatě způsobem podrobně popsaným v příkladu 6 za

P.QP.Žvití__1... 34___g__ _(6_,..1 8_;nim_ol) „(S).-2zN.- (ter_c.- ~b.ui oxy kar bonyl.) amino^3-._____ met.hy.lbi.it anoové kyseliny a 2,0 g (5,88 mmol) [ 2R- ('2R*·, 3S*) j-Nterc - - butyl- Z - (3-amino ^- 2 — hydr ox.y-4-f enylbutv.l.) benzamidu · meziproduktu Podle Přípravy 30, ve výtěžku 3,95 g bezbarvé pěny.

Polovina této pěny sě čistí sloupcovou chromatografií (za použití oxidu křemičitého a jakožto elučního činidla systému 3 3! methanolu ve chloroformu), čímž se získá 1,45 g produktu- Druhé polovina této _fpěny se nechává reagovat' bez dalšíhjo , čištění ve stupni 8.

Přikladu' 56.'

Ai ia ly za pro c 3 i h 4 5 N 36) s vypočteno:

nalezeno :

C, 69,12; K, 8,23; N, 7,80 C, 69,38-, H, 6,43; N, 7,96 , (2R-(2R*, 3S·*, 6S*) ] -N-terc- -Butyl“2-(2-hydroxy-3-feriylmethyl~ 4 - a ž a - 5 - o xo - 6 ~ a mir 10 - 7 r m © t. h y 1 ] o kt.y l.b e r iz a tni. d

Roztok 2,0 g -(maximálně 3,7 mmol) (2R-(2R*,3S*,6S*)]-N-terc-butyl-2- [2-hydroxy-3-fenylmethyl-4-aza-5-oxo“6“N(terč- -butoxykarboriyl)amino-7-methyl]oktylbenzamidu, produktu podle příkladu 2.3A, a 0,713 g (3,7 mmo‘1) toluensulf oriylhydroxidhydrátu (T0SOH.H2O) v 7 5 rnl absolutního ethanolu se zahřeje na teplotu 55 C. Když je reakce v podstatě ukončena Podle stanovení chromatografií. v tenké vrstvě, ochladí se reakčrií. směs na teplotu místnosti a zkoncentruje se za sníženého tlaku za získání zbytku- lento zbytek se rozdělí mezi 1.00 ml ethylacetátu a 50 .ml 10a roztoku hydroxidu amonného. Vzniklé vrstvy se oddělí, organická vrstva se Promyje. solankou, vysuší se síranem horečnatým, zfiltruje se a zkoncentruje se 2a sníženého tlaku, čímž se získá 1 , θ g bílé Pěny- Tato Pěna se Čisti bleskovou chromatograf ií (za použití, oxidu křemičitého a jakožto elučního činidla gradientu 2 až 5 % methanolu .ve chloroformu), čímž se získá 0,97 g [2R-(2R*, 3S*, 6S*·)]· N-terc - -'butyl-2- (2.-hy dr oXy-3-feny lmethy J.-4-aza-5 ~oxo~ 6-amino“ 7 · methyl]oktylbenzamiduAnalýza, pro C26H37M3Q3:

vypočteno: C, 71,04; H, 8,48; N, 9,56 nalezeno : C, 70,85; H,’ 9,59; N, 9,56.

C . [2R- (2R* , 3S*, 6S*·, 9S*·] -N-terc- -Butyl.-2 — (2-hydroxy-3-f enylmot— hy'l—4,7 -ďj.aza—5,8-dioxo-B—(1-methylethyl) -9-N (terč. -butoxy karb cíny!) amino- 10-naft-1-yl]decylbenzamid [2.R- (2R*, 3S*, 6S*·, 9S*] -N-terc· -Butyl-2- [ 2-hydroxy-3-f enylmet * hyl-4,7-diaza-5,8-dioxo-6- (1 -methylethyl) -9-N (terč - -butoxykar boriyl) amino“ 1 O-naft“ 1-yl] decylberizamid se připravuje v podstatě . způsobem Podrobně popsaným v .příkladu 6 použití 226 mg (0,717

..z'mmol). (S) -2-N- (terč -butoxykarbonýl) amino-3-naf t-1 -ylproPanooyé kyseliny a 300'mg (0,683 mmol) [2R-(2Ř*, 3S*, 6S*)]-N-fěrc--bufy 17^2- (2~hy'd'f'oXý‘^“3-fe:i-iýl;mí:thýT-’4--'az.a'“'5'“'oxo'“'6'-'amj.“no—^J7—•methyl-J-ok— . tylbenzamidu. produktu podle přikladu 236, přičemž se získá 490 mg' (98 % teorie) produktu ve formě bílé pěný;

'. ... . MS (FO): m/e 737, (M*, 100)

Analýza pro C44H56N4O6:

vypočteno: 0, 71,71; H, 7,66; N, 7,60 nalezeno : C, 71,82; H, 7,73; N, 7,55, !' ' ...

Příklad 24 [2R-(2R*,3S*, 6S*. 9R*) ] -N-terc- -Butyl-2-[2-hydroxy-3-fenyl.met.hyl-4,7 -diaza-5,8-=dioxo-6- ( 1 - methy lethy 1) -9-N. (-terč --butoxykarbo- riyl.) amino^-10-naf t-1 -yl] decylbenzami.d [2R-(2R*-,3S*, 6S*, SR.*) ) -N-terc- -Butyl-2-{ 2-hydroxy-3-f enylmethy 1-4,7 -diaz<ji-5,8-dio'<o-6~ (1 -methylethy 1) -9-N (terč - -butoxykar ·.· .boriyl)amirio-10-naft-1'-yl3deeylberizami.d · - se připravuje v podstatě způsobem podrobně popsaným v příkladu 6 za Použití. 22.6 mg (0,7 17 mmol) (R) -2-N-(terč- -butoxykarbonyl) amino-3-naf t- 1 -ylpr-opanoové kyseliny a 300 mg (0,683 mmol) (2R-(2R*, 3S*, 6S*)]-N-terc.-but y 1 - 2— ( 2 - h y d r o x y - 3 - f c r 1 y 1 m e t h y 1 - 4 - a z a - 5 - o xo - 6 - a m i r 1 o - 7 - m e t h y 1 ] o k tylberizamidu, produktu podle příkladu 238, přičemž se získá 4 90 mg (98 % teorie) produktu ve formě bílé pěnyMS (F0): m/e. 737 (M⁺, 100)

Analýza Pro C44H5&N4O6:

vypočtenoC, 71,71; H, 7766; N, 7,60'”' ^t * nalezeno : C, 71,41; H, 7,90; N, 7,68.

Příklad 25

A. [2R-(2R*,3S*,6S*)]-N-terc.“eutyl-2-[2-hydroxy-3-feny'l.methyl-.4aza-5-ox.o- 6 — N (b enzy loxy kar bony.1) a mino-7 - kar bamoyl] heptylbenzami d

C~ - 3;'’t.33žt?B~(2R*, 3S*, 6S*.) ] -N-terc · 'Buty 1-2- [ 2-hydroxy-3-f eny lmethy 1.· 4-a’za^- 5-oxrj-6-N(benzyl.oxykarbonyl)amino-7-karbamoyl]heptylbenza„x ý. .mid . se- připravuje- v podstatě způsobem podrobně popsaným v přikladu: 6. za použití 3,4 g (10 mmol) (S)-2-N-(berizylóxykarbonyl) aminpt '-3-kárbamóylpropáhoově kyseliny a 3,4 g (10 mmol) [2R-(2R*,3S^X)]’’. N-terč- -butyl^-2- (3-amino-2-hydroxy-4-feny'lbutyl) benzamidu , mezi--·· produktu podle přípravy 30), přičemž se však do reakční směsi

..Ζ / .... - přidává. 1-,09 ml (10.mmol) 'N-methylmorfoliriu, přičemž se získá 4,4 • g (76 Ϊ. teorie) produktu- _t .

•pi v

i·.

- [ 2R- (2R*, -3S*, 6S*) ] -N-terc- -Buty 1-2- [2-hydroxy-3-fenylmet.hyl— 4-aza-5-oxo-6-amlno-7-karbamoyl]heptylbenzamid > ( 2R-(2.R*, 3S*-, 6S*) j -N-terc- -Butyl“2-[2-hydroxy-3-feny’lmethyl-4-aza-5-oxo-6ⁱami^íno“7-karbamoyl] heptylbenzamid se připravuje v podstatě způsobem podrobně popsaným v přípravě 30 za použití 4 g (6,7 rnmol) [2R-(2R*, 3S*, 6S*) ] -N-terc- -buty 1-2- [ 2~hydroxy-3-fer»ylmethy 1-4-aza-5-axo-6^_N (benzyloxykarbony!) amino-7 -karbamoyl] h©ptylbenzamidu, produktu podle příkladu 25A, a 0,5 g 5X palla.dia na uhlí ve výtěžku 2,4 g (80 X^-teorie),

C. [2R-(2R.*·,' 3S*. 6S*, 9R*) ]-Ň-t.erc- -Butyl-2-[ 2-hydrox.y-3-fenylme.t.hyl-4,7- -diaza-5,8-iioxo“6-(2-amirio-2-oxoethyl) -9--N-(terč, -butoxykarbonyl)amino- tO-naft- 1- yl]decyllbenzamid se připravuje v podstatě, způsobem podrobně, popsaným v příkladu 6 za použití. 630 mg (2,0 mmol) (R) -2-N-(terč- -butoxykarbony!.) amino-3-r»af t~1 -ylpropanoové kyseliny a 908 mg (2,0 mmol) [2R-(2R*, 3S*, 6S*-)]-N-terc·butyl-2-(2-hydroxy-3-fenylmethy 1-4-aza—5-oxo-6-amino-7-karbamoyl] heptylberizamidu, produktu podle příkladu 258' ve výtěžku 9 20 mg (60 X teorie).

MS (F0); m/e 751 (Μ*, 100)

Analýza pro C aHssNsO? : . .

vypočteno: C, 63,69; H, 7,10; N, 9,31 nalezeno : . C, 68,66;' H, 7,22; N, 9,27.

Příklad 26 (2R- (2R*, 3S*, 6S*, 9S*) ] -N-terc -Butyl-2-[-2-hydroxy-3~fenyl.met.hy 1, . 4,7-diaza-5',8-dioxo-6-(2-amino-2-oxúethyl)-9-N-(terč--butoxykar- . bony!).amino-lO-naft-l-yl]decyllbenzamid [2R-(2R*,3S*,6S*,9S*)]-N-terc.-Butyl-2-[2-hydroxy-3-fenylmethy].-4,7-diaz.a-5,'8-dioxo-.6T(2-atnino-2-oxoet.hyl)- 9-N-(terč. -bu-.

toxykarbonyl) aniino- 10-naft- 1- yl) decyllbenzamid' se připravuje -v-pcdst^atě-zpúsobem-p-odrob-riě—popsaným-v-při-k-iradu—6—za—ροαζί±ϊ“6·3·Θ— mg (2,0 mmol) (S)-2-N-(tóro - -butoxykarboriyl) amino-3-naft-1 -ylproparioové kyseliny a 908 mg (2,0 mmol) [2R-(2R*·, 3S*, 6S^X) ] -N-terc - .buty1-2-(2-hydroxy-3-fenylmethyl-4-aza-5-oxo-6-amino-7-karbamoyl)-. heptylBenzamidu, produktu podle příkladu 25B, ve výtěžku 895 mg. (60 % teorie)MS (FD): m/e 751 (M*, 100)

Analýza pro C43H53N5Q7:

vypočteno: C, 68,69; H, 7,10; N, 9,31 nalezeno - C, 68,58; H, 7 , 11; N, 9,01.

Příklad 27

A. [2R-(2.R*·, 3S*·, 6S*·) ]-N-terc. -Butyl-2-(2-hydroxy-3-fenylmet.hyl-4aza-5-oxo-6-N (berizyloxy kar bonyl) amino-7 -imidazoi-4-yl] heptylbenzamj.d [2R- (2.R*·, 3S*,'6S*D -N-terc - -Butyl-2- [2-hydroxy-3-fenýlmet.h'yl4-azá^_5~oxo-6-N (benzyloxykarboriyl) amino- 7 -imidazoi^- 4-yl.] heptylbenzamid se připravuje v podstatě způsobem podrobně popsaným Příkladu 6 za použití 1,79 g (6,18 mmol) (S)-2-N-(benzyloxykarbonyl)amino-3—imida?:ol-4-yl.propanoové kyseliny a 2,0 g (5,88 mmol) [ 2R- (2R*, 3S*)) -N-terc - - butyl-2. - (3-amino-2-hydroxy-4-f enylbutyl) berizamidu, meziproduktu podle přípravy 30, přičemž se získá bílá pěná, které se používá bez· dalěího čištění.

Výtěžekl 374'6^—g (96’%^ť.ě tiř77ě) ” 7'

Analýza pro C35H41N5O5:

vypočteno: C, 58,72; H, 6,76; N,11,45

'...........nalezeno-: ...-C.,-6..5-,-6.O-;-tí.,.„.6_61;„.N..,„.10..,..9.4... .. .... ·

B. [2R-(2R*,3S*, 6S*) ]-N-t«:irc--Butyl-2- [2-hydroxy-3~fenyImethyl4 - a z a ~ 5 - 6x o - 6 - a mi, r t o - 7 -,i. m i d a z o 1 - 4 - y 1.) h e P ty lb enz a mj. d

C . [2R-(2R* , 35*,65*,95*) ] -N-terc- -Buty] -2-[2-hydroxy-3-fenylmet,hyl-4,7-diaza-5,8-dioxo-6-(imidazol-4-ylmethyl) -9-N (terč-.-butoxykarbonyl) amiřio-10-naft-1 -yl] decylbenzamld [ 2R- ( 2R*, 35*, 6S*, 95*) ] -N-terc. -Butyl-2- [2-hydroxy-3-f eny 1 methyl- 4,7-diaza-5 ,.8-dioxo-6- (imidazol-4-ylmethyl) -9-N (terč - -butoxykarbonyl)amino-1O-naft-1-yl]decylbenzamld se připravuje v podstatě způsobem podrobně popsaným v příkladu 6 za použití 330 mg (1 ,05 mmol) (5) -2-N- (terč. -butoxykarbonyl)amino-3-naft-1 -ylpropanoové kyseliny a 500 mg (1,05 mmol). [2R-(2R*,3S*, 6S*)]-Nterc- --butyl-2-(2-hydroxy-3- feny lmethy 1- 4-aza-5-oxo-6-amino-7-imidazol-4-yl]heptylbenzamidu, produktu Podle příkladu 27B, ve výtěžku 6.12 mg (76 % teorie).

MS (FO): m/e 774 (M· , 100)

Analýza pro C4 $H54M5O6 vypočteno: o, 63,74; H, 7,02; N., 10/84 nalezeno : 0, 69,55; H, 6,86; N, 10,57. >·

Sloučeniny podle následujících příkladů 28 až 30 se připravují v podstatě způsobem -podrobně popsaným v příkladu 6 .

4,7 -diaza-5,8-dloxo-6- (imidazol4ylmet,hyl) -9-N (ter c - -butoxykarbonyl) amino- 10-naft-1 -yl] dec.ylbenzamid

?.? ..-n-l . [2R-(2R¥;3Sř-'; ) ]j-Ň-£eýcy_TButyl-2^r-{2-hýdroxy-3-f enylméthýl-4,7-diaža-5, 8-dioXo~6-(imicfazól-4ýÍmethyl)-9--Ň(tere. -bútoxykarboriyl) amino.IOyria.ft-1 -ylj.decylbertzamid se? připravuje za použití?-.-330.; mg-ý-ΐ (-1 <05-mmol) ř <R) <2-14-(terč - -butoxykarboňyl) amir.io-3naff-1 -ylpropařioóvé kyseliny a 5ÓÓ?mg : (105'·mmol)' Č2Ř-(2R*, 3S*-gS^^—N^teTcí^butýjT^^íjZ-iiyďroxý-^-feriylrnethyi^-fiza-S-oxo-G-aTnj;“ n.o-7-imidazol-4-yl]heptylbenzamidu, produktu podle příkladu 27(3, vě 'výtěžku .'61 2 mg (7 6 X teorie).

MS (FD): m/e 774 (Μ*, ... 100) · ' ' . ,

Analýza Pro C45H54N6O&: .

vypočteno:' C, 69,74; H, 7,02; N, 10,84.......- nalezeno : C, 69,75;.H, 6,98;-N,'· 10,8.8.

Příklad 29 [3 'S-(3 'R*, 4 'S*)]-N-[1 -Oxo-1 '-(3“-[1 ' ' '-oxo-2 -aza3-' '-'-fenylmethyl-4 ' ' '-hydroxy-5·' '-'-(2' -•'•-N-terc =butylkarbamido) ~ fenyl] pentyl] -4 -ethyl) fenyl]methyl-1,2,3; 4-tetrahydo.i.zochinolin (3 'S-(3' R*, 4 'S*) ]-N-[1 '-Ox.rj-1 '-(3^U-[1 ' -oxo-2 ci cl 3 ' ' '-f eriylmethyl-4 ' ' ' -hydroxy-5 '-(2 '-N-terc- -butylkarbamido) fenyl]pentyl]-4“-ethyl)fenyl·]methyl-1,2·,3,4- .tetrahydolzochinolin· se připravuje, za -použití 300' mg (0,97 mmol) N-[ 1'-rjXo-1'-(3-karboxy-4 -ethyl) fenyl] methyl“ 1,2,3,4-tetrahydrolsochinolinu, meziproduktu Podle přípravy 11 a 341 mg (1,18 mmol) [2R- (2R*,3S*)]N-terc. -buty 1-2- (3-amino-2-hydroxy^_4-fenylbutyl)benzamidu , meziproduktu Podle přípravy 30, ve výtěžku 410 mg (67 % teorie) ve. formě bílé Pěny.

1H NMR (COCI3) δ 1,07 (t,J=7,6 Hz, 3K); 1,45 (s, 9H) ; 2,54 (q, J=7,5 Hz, 2H); 2,70-3,30 (m, 5H); 3,55 (br. 3, 1H); 3,91-3,95 “(ίίΓ~ΐΉΪ;''”4;'“4O-4';'6’5'^(m^2ň )Τ4':'63 W Isl ”1ΉjT'5 /97 (~1'HjT^_673T (br-d, J = 9,2 Hz, 1H); 6,90-7,60 (m, 16H).

IR (COCI3): 3009, 1645, 1514; 1455, . 1236, 1213. cm“ 1

MS.-(FD)-:—m/e--632—(-Mí-,-100)-,— —..........' - - ..'-·. . .

Příklad 30 [3S- (3R*, 4aR*, 8aR*, 2 'S*, 3 'R*).] -2- ( 2 ' -Hydroxy-3 ' -fenylmethy]-4 '

- 91 K'. ... Υ.

Ο,’ϊίΛυ ¹ ;aza-5 (-οχοζδ '.(3 .“.- [.1///., 2./'.', 3///; 4/-'.'-tetrahydroisochinolirtT-lylkarbóriyl] -6 '‘-methyl) fěnyl]périťýr-dekáhýdřóÍSÓchinrjliň-3-N-těré- butýlkarboxamid . ~· .

-[3S~(3R*, 4aR*,8ůR*,2'S+,3'R*))-2-[2/-Hydroxy-3'-fenylmethyl4 ' -aza-5 '-óxo-5 ' ¢3^-(1 ' , 2' ,3 ' ' , 4 ' ' tetrahydřoisóchinoliri1 '' '-ylkarbonyl]-6 “-methyl )f enyl] pentyl-dekahydrrjisrjchinolin-3-Nterc--butylkarbrjxamid se připravuje za Použití 366 mg (1,24 mmol)

N-[1' -oxo-1'-(3 -karboXy-4-methyl) f enyl] methyl-1,2,3,4-tetrahyd“. roisochinolinu. .. meziproduktu podle přípravy 10C, a 500 mg (1,24 mmol) [3S-(3ft*, 4_aR*,8_aR*. 2'S*. 3'R*)]- 2-[3'-aminq-2'-hydroxy4 '-f enyl ] buty lde.kahydroisochinolin-3-N-terc -buty lkar boxam-idu, meziproduktu podle přípravy 98, ve výtěžku 489 mg (58 % teorie) ve formě bílé Pěny[a]_D -69,1017 (c 1,013, M_e.OH) .

1H NMR (COC13) 6 1,13	(S, 9H);	1,20-2,10	(m,	14H); 2,20-2,35
(m, 4H); .2,50-3,05 (m,	7H); 3,37	-3	,60 (m,	2H) ;	3,80-4,10 (m, 2.H) ;
4,40-4,70 (m, 2H); 4,85	(br - s.	1H); 5,67	(br.	S, 1H); 6,72.
(br'd, 4---9,2 Hz, 1H); 6	,95-7,34	(m	, 12H).
IR (KBr): 3600-3150 (b	r-), 3009	»	1627, 1514,	1455, 1 247, 104'7 cro
MS (FO): m/e. 679 (M+) ,.	578(100).
Analýza Pro C42H54N4O4:
v ypoěteno: C, 7 4,30;	H, 8,02;	N,	8,25
nalezeno : C, 74,07;	H, 8,00;	N,	8,2.2.

Příklad 31

A. [2R- ( 2R*, 3S*, 6R*) ] -N-terc, -Buty 1-2.- [2-hydroxy-3-f eriylmet.hyl-4aza-5-oxo-6-N (terč - -butoxykarbonyl) amino-7-benzyloxykar bony 1] heptylbenzamíd [2R - (2R*, 3S*, 6R*·) ] -N-terc - -Butyl-2- [ 2-hydroXy-3-f enylmethyl4-aza“5-oxo-6-N(terč.-butoxykarbony1)anino^- 7-benzyloxykarbony 1 ] heptylberizamid se připravuje v podstatě, způsobem podrobně popsaným v příkladu 6 sa použití. 1.0 g (2,9 mmol) [2R- (2R*,3S*)]-Nt.erc.‘-butyl-2-(3-amino-2-hydroxy“4-f ěňylbutyl)benzathidú / mezipr oduktu podle Přípravy 30, a 0,95 g (2,9 mmol) (2R)-2-N-(terč--butoxykarbonyl) amino-4-oxo~4- benxyloxybutanoové kyseliny , přičemž # -cSsMogwáví·,.· rTtilílSZLÝk* Ά s r-í2Sí^-^§ ř ii .Zlí?···. *'

- T— ^^^skáv:1;2i 9--.g_r; (87-.X_?..teo'rie) produktu-.ve formě bílé-Pevné látky. ^ŤeRlotaktárií je- 67 až '7 2 °C. í Afíalyza pro; C37H47N3O7:

^y^Ročteno·;’.·.·.·.^ ,-.68-, .82;· Η,- 7,34; N, 6,51 ; riálezériO': 0, 69,16 ; Η , 7,50 ; N, 6,56)

B . [2R-(2R*,3S*,6R*) ] -N-terc.-Butyl-2-[2-hydroxy-3-fenylrnethyl4-aza-5—oxo-6-aTnino-7-benzyloxykarbonyl] heptylbenzamid <. Oo studeného (*C) roztoku 2,89 g (5,53 mmol) [2R-(2R*,3S*6R*).·]-N-térC--butyl-2-j)2-hydroxy- 3-fenylmethýl-4-áža- 5-<-jxo-6-N(terc'.-butoxykarbonyl)amirio-7- benzyloXykarbonyl]heptylbenzamldu, Produktu podle příkladu 31A, v methylenchloridu se přidá trifluoroctová kyselina- Získaná reakční směs se míchá po dobu Přibližně jedné hodiny a zkoncentruje se za sníženého tlaku za získání pěny- Tato pěna se suspenduje v toluenu a zkoncentruje se za sníženého tlaku, .čímž se získá .surový.[2R-(.2R*,3S*,6R^x)-]-N-terc.butyl-2- [ 2-hydroxy-3-f eriylmethyl-4-aza-5-oxo-6-amirto-7-benzy loxykarbony!]heptylbenzamid, kterého se dále používá bez čiětěníC . [2R-(2R*, 3S^X, 6R^X) ] -N— terč. -Butyl-2-[2-hydroxy-3-feriylmethyl4-.aza-5-oxo-6-Ň (methylsulf onyl) amino-7 -berrzyloxykar bonyl] heptylberizamid

0-o roztoku obsahujícího 0,75 g (0,97 mmol) (2R-(2R*·, 3S*6R*) ] -N-terc - -butyl-2- [2-h_ydroxy-3-fenylmethyl-4-aza-5-oxrj-6-amino-7-benzyloxykarbonyl]heptylbenzafnidu, produktu podle Příkladu 31B, a acetonitrilu v methylenchloridu se přidá 75,1 μ! (0,970) mmol) rnethansulf ony Ichloi idu v prostředí, dusíku- Když je reakce ukončena podle stanovení chromatograf ií v tenké vrstvě, odpaří, se reakční směs _k suctiu. za _ _s.nížeij.ého_ tlaku.,. ..čímž _..-se-získá--jakožto zbytek 0,33 g (54 % teor ie) [2.R- (2.R* , 3S*, 6R*) ) -N-terc. -butyl,-2[2-hydroxy-3-fenyImethyl-4-aza-S-oxo-6-N(methylsulfonyl)amino- 7'benzyloxýkarbonyl]heptylbenzamidu ve formě bílé Pevné látky.

H' NMR (COCÍ3) 5 1 , 45 (s ; 2,42 (dd, J=6 , 1 2 Hz, IK); 2,76 (_s,

3H); 2,63-3,10 (m, 5H) ; 3,80 (m, 1H); 4,13 (rn, 1H)_; 4,38 (m, 1H);

5,05 (_s, 2H); 5,60 (d, >8 Hz, 1H);-5,99 (d, >6 Hz, 1H); 6,10

Air£ ϊ- -.·_χ .

- .-<.ι.Λ>γ»·'.· ...“· 'a'J.3· I-;’^-·>· · .· ·- - · ;·. ·*; . r, íi-řiči⁷· '

.. ·.. .

í/í///í //-; '

1^^^^-^)/.,.7^06-7.,41 (m, 15H).

“^''''^^řWÍ:FDy^^:mZe^?623 (M*)-’

IŘ_^L (CHC1₃);. 3026, 1660, 1602, 1 5 17 _ctn- 1 .

— UV (EtOH)2O3_rim (E=44,849) , .-•Analýza pro C33H41N3O7S:

vypočteno: -C, 63/54; H, 6,62; N, 6,74

-nalezeno : C, 63,73; H, 6,56; N, 6,52.

0.: . (2R-(2R^X,3S*, 6R*) ]-N-terc-“Buty 1.-2-[2-hydroXy-3-f enylmethyl4-áza-5-oxo-6.-N (methylsulforiyl) amino-7. -karbonyl ]hep ty lbenzamid

0o roztoku 0,13 g (0,21 mmol) [2R-(2R*,3S*,6R*)]-N~terc--bu.tyl“2-[2-hydroxy-3-fenyImethy1-4-aza-5“oxo-6-N(methylsulfonyl)a~ mino-7-benzyloxykárbonyl] heptylbenzamidu, produktu podle přikladu 31C, v methanolu se přidá 0,2 g (3,2 mmol) mravenčenu amonného a 50 mg 5% palladia na uhlí. Reakčni směs se nechává reagovat při teplotě zpětného toku reakčni směsi po dobu přibližně dvou hodinKd.y2 je reakce ukončena podle stanovení chromatografií v tenké vrstvě, ochladí se, zředí se ethylacetátem a zfiltruje se- Oo roztoku se Přidá 50 ml vody, získané vrstvy se oddělí a organická vrstva se odpaří k suchu za sníženého tlaku, čímž se získá jakožto' zbytek 0, 10 9 (91 2 teorie) C2R-(2R*, 3S*·, 6R*)]-N-terc--butyl“ 2 - [ 2 - h y d r o xy - 3 - f er ty l.m e t h y 1 - 4 -a za - 5 - o xo -6-N(methy 1. s u 1. f o r 1 y 1.) a m i n o 7-karbonyljheptylbenzamidu ve formě bílé Pevné látky.

Přiklad 32 .

A. ( 2R- (2.R.*·, 3S*, 6S*j -N-terc- --Buty 1-2- [2-hydroxy-3-f enyl.met.hýl4 - a z a - 5 - o x o - 6 - a m i n o - 7 - k a r b o π y 1 ] h e P t y 1 b e r 1 z a m i d (2.R.- (2R*,3S*,6S*J -N-terc. -Butyl-2- [ 2 chydroxy-3-feny Imethy 14- aza-5- oxo-6- amirio-7- kar bonyl] hePtylbénzamid se připravuje v podstatě způsobem podrobně popsaným v přípravě 30 za použití 5% palladia na uhlí a 4 g (6,7 mmol) [2R-(2R*,3S*, 6S*) ]-N-t.erc.-butyl“ 2-(2-hydroxy- 3-fenyImethy1- 4-aza-5~oxo-6-N(benzyloxykarbonyl)· amine“7.-karbamoyljhepty'lbenzamidu , produktu., podle . přikladu. 25A, ve výtěžku 2,4 g (80 % teorie) ve. formě pevné látkyMS (FAB): m/e. 455 (M*i)·.

Β- [2R~(2R^X,3S*,6S*)]-N-terο.-Butyl-2-(2-hydroxy-3-fénýlmethýl

J . . 4-aza~ 5-OXO-6-N(naft-1-ylethylsulfonyl)amino-7-karbamoýl]HéPťyl-.

benzamid . ..... .···'.··.··.· .-tito·/- . ..

[2R-(2R^X., 3S*, 6S^r0 ]-N-teřc,-Butyl-2“[2-hýdřoXyr-3éfe_r)y^methýÍ4-aza- 5-OXQ-6-N (riaf t~1 -ylethylsulf onyDamino^-karbamoylIheptylbe.nzamid se připravuje v podstatě způsobem podrobně popsaným v přikladu 31C za Použití 118 mg (0,462 mmol) naft-1-ylethylsul fonylchloridu a 200 mg (0,44 rnmol) [2R-(2R*,3S*, 6S*]-N-terc. -bu~ , . tyl,-2- [2-hydroxy- 3-f enylrnethyl-4-aza-5-axo-6-amino-7-karbonyI]heptylberizamidu, produktu Podle příkladu . 32A, (v přítomnosti spíše N-methyImorfolinu než acetonitrilu), přičemž se získá 126 mg (42 X teorie) produktu ve formě bílé pěny.

MS (FD): m/e 673 (M⁺1)

Analýza pro C37H44N4O&S:

vypočteno: C, 66,05; H, 6,59; N, 8,33 nalezeno : C, 66,30; H, 6,72; N, 8,22.

Příklad 33 , 6-Difeny 1-2 (S) , 5 (S) -dl (N-(2. (S)-N ( benzy Ioxykarbonyl. )amino-3methylbutanoyl}aminů]-3,4-dihydroxyhexan

Do studeného (0 >C) roztoku ,(S)-2-N (benzyioxykarbonyl)amino-3-methylbutanopvé kyseliny, 2-chlor-4,6-dimethrjxy-l,3,5-triazenu a 36 μ.1. N-methyImorfolinu se přidá roztok, obsahující 0,142 mmol 1 , 6-dife.nyl-2 (S) ; 5 (S)-diamonio-3 (R) ; 4 (R) -dihydroxyhexanu, meziproduktu podle přípravy 12 a 36 ml N-methy“imorfolinu v methylenehloridu- Reakčni směs se míchá při teplotě místnosti a pak se nechává reagovat přibližně Po dobu Pěti hodin. Když je reakce -V—P-odstat ě—.-ukončena—p od.,l..e—stai:io-vení--chromatogr-a-f-;lí—v—t enkě—v-r«t= vě, vlije se reakčni směs do 7 5 ml systému 2 : 1 ethylace.tát/0,2.N kyselina chlorovodíková- Vzniklé vrstvy se oddělí a organická 'vrštvá se Promyje zpola 'nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vysuší se síranem sodným, zfiltruje se a zkoncentr u je. se za sníženého tlaku za získání pevné látky. Tato pevná látka se čistí bleskovou chromatografií (za použiti oxidu křemičitého a jakožto elučního činidla 30 % hexanu v ethylacetátu). Získá se 44 (mg (44 teorie) 1,6-difenyl-2 (S) , 5 (S)-di[N-[2 (S)-N (benzyloxykai—. boriyl)amirio-3'-rnethylbutanoyl]amino]-3,4-dihydroXyhexanu - i'H NMR (C0₃00) : δ 0,6 (d, J-δ H_z, 6H) ; 0; 75 ^: (d^;, ^: J=6 Hž, ( 6H j; 7 '/· ' Í,Š5 (m. 2H); 2,80 (m, 4H); 3,75.(m, 2Η) ; 4,05 .(m, 2H) ; 5,42 .

(d, J-8 Hz , 2H); 7,05 (ir, 1ÓH); 7,25 (m, 10H) . ' '

MS (FD): m/e 767 (M*).

Příklad 34

1.5- 0ifertyl^-2 (S) , 5 (S) -di [N-[2 (S) -N (chiriolin~2-ylmethoxykarbariýl·) amirio-3-methylbutanoyl]amino]-3,4-dihydroxyhexafi

1,6-0ifenyl-2(S) , 5 (S) -di[N-[2 (S) -N (chinrjlirt-2-ylmethoxykarbonyl) amino-3-methylbutanoyl3 amino] “3,4-dihydroxyhexan se připravuje v podstatě způsobem podrobně popsaným v příkladu 33 za použití 102 mg (0,273 mmol) t, 6-dif eriyl-Z(S) ; 5 (S) -diamonio-3 (R) ; 4(R)-dihydroxyhexanu, meziproduktu podle přípravy 12, 184 mg (0,608 mmol) (S)-2-N(chinolin-2-ylmethoxykarbonyl)amino~3-methylbutanoovč kyseliny, 107 mg (0,608 mmol) 2-c.hlot—4,6-dimethoxy-13.5- triazeriu a 69 pl (0,628 mmol) N-methylmorfolinu, přičemž se včak reakce provádí v methylenchloridu. 1 , 6-Difeny 1.-2 (S) , 5 (S) -di~ [N- [2 (S) -N (chinoÍin-2-ý3.methoxykar.bonyl) amirio~3-methyIbutanoy 13 a~ « 4» mi.no)-3,4-dihydroxyhexan se získá ve výtěžku 155 mg (65 % teorie) 1H NMR (CD3OD): 5 0,7 (m, 12H); 1,80 (m, 2H); 2,78 (m, 4H) ;

3,40 (rn, 2.H) ; 3,75 (d, J=6 Hz, 2H) ; 4,58 (m, 2.H); 5,32 (s, 4H) ; 7,10 (m, 10H); 7,55 (m, 4H); 7,75 (t, 3=6 H_z, 2H) ; 7,85 (d, J=6 Hz, 2H); 7,95 <d, J= 6Hz, 2H) ; 8,30 (d, J= 6 Hz, 2.H) .

MS (FD): m/e 868 (M⁺).

Analýza pro vypočteno; nalezeno :

c óoH seNcOg:

C, 69,11; H, C, 68,89; K,

6,49; N, 9,67 6,52; N, 9,70

Příklad 35 .

1,6-0if eriy 1-2 (S) , 5 (S)~di(N- [ 2' (S) -N (pyrid-2-ylmethoxykarbonyl) a~ mj.no-3 -methyl-butariovl.) amino) “3,4-dihydroxyhexan .

, 6 -0l.f eriyl-2 (S) , 5 (S) -d;i. (N- [ 2 (S) -N (pyrid-2-ylmethoxykarbonyl) 96

/.....amino- 3-methyl- butanoyl)amino]-3,4-dihydrox.yhexan se. připravuje Podrobně¹ popsaným' v.' '. příkladů.. 34dzácl použití ^šÍcč72i7ýmgú(0,195. mmol); '7 ,.6^-difenyl-2(S); 5(S)-diamrjriio“3(R) ; 4(R)^^^yídihýdřbxyfiexaňu·.·:.·;; meziproduktu' podlé’ ' přípravy. '1 2, ' 110 mg ' (0,436 ^^F7k:,inmóí)í o.(S)l- 2-N (pyrid--2-yImethčxy k&rbóriyl)^:ámino-3-methýl^butahoové k:’j2ýséi.i.'ňý,· i76'’'mg‘·' (0,433 'mmólj 2-chlor-4,6-ďiméthrjxy-í,35-ťriáže... a ·. nu a ·'. 50.iil ' (0,455 ' mmol)·'N-methylmorfolinu- Produkt se získá ve _ výtěžku-57,2 mg (38 % teorie) .............IH NMŘc (CD₃0D) : · 5·· 0,72 (t,j = 8 Hz,, 12Η) ;· .1:·,·84 (m,·' 2H) ; :2.81. .

(dj = 9 Hz4H) ; 3,4 1 (s, ' 2H) ;13,76 (d, ; J=9 H_z, '2H) ; 4,55 ;

(br-t, J = 9H_2i 2H) ; 5,17 (s-, 4H) ; 7,00-7,40 (m, 12H) ; · 7 ·, 45

.. (d, J=9 Hz, 2H) 7,84 (t, J=S Hz, 2H) ; 8,48^: (br - d, J=2Hz,' 2H).

IR (CHCI3): 3428, 3025, 2973, 1723, 1667, 1602, 1507 cm-1 . ·.-· p//._:/i MS (FD) : .770 (M*1). ,/..,

- Příklad 36

Acetyl-B-Tiaftylalanin-vaÍin-státi.n“leucin~í3“Haftylalaňinamid ' (CH₃C(0)-bNA-Val-Sta-Leu-bNA-NH₂)

A. Příprava pryskyřice a včlenění t-Boc-amíriokyseliny

Před přidáním t-Boc-aminokyseliny se neutralizuj© 0,45 g p-methylb'e.hzhýdrylamin.hydřochiřjridové'pryskyřice (obsahující. 0,33 mmol volných amínoškopin) .třikrát 10 ml 5% Ν, N-diisopropyléthylam-jj-iu v methylenchloridu (na každé promytí.) a pak se Promyje třikrát 10 ml methylenchloridu (na každé promytí). Oo promyté Pryskyřice se přidá se 5 ml roztoku, obsahujícího· 2,5 ekvivalentu tBoc-fr-naftylalaninu (t-Boc-bN.A) v methylenchloridu- Pak se do směsi pryskyřice a t-Boc-aminokyseliny přidá roztok, obsahující 2,5 ekvivalentů dicyklohexylkarbodiimidu (DCC) v 1 ml methylenchloridu. Získaná reakční směs se nechci reagovat při. teplotě místnosti po dobu jedné až tří hodin za občasného zamíchání. Kopulace t-Boc-aminokyseliny na pryskyřici se -zkou-ší ninhydřínovou zkouškou - _. ··.··.... · . B. Odstranění t-Boc chránící skupiny

Po kopulační reakci se pryskyřice podle příkladu 36A promy97 i je.;, třikrát,· vždy 10 m'1 methylenchloridu a smíchá se s 15 ml 50 %

y^líriý/tjrifluoroctoyé v.methylenchloridu - Získaná reakční směs s^e£pěehávái.’rea9ovat.....Po dobu přibližné jedné minuty a pak se sujpekďátantcr naď; Pryskyřicí odstraní a přidá- se dalších · 15 ml 50 X kýsěíirfy; trif lúoroctové,·v methylenchloridu Získaná' reakční směs se nechává reagovat Pá dobu Přibližně 30 minut a pak. se supérriatant nad pryskyřicí odstraní a pryskyřice se opět třikrát Promyje, yždyt-.1ÍOml, methy lenchloridu- K.· · monitorování reakce se Používá řtinhydririové zkoušky. - ·.··-:···· .

- -- -C.' Neutralizace . Č-Z'........,.-.·. 7: - :.

Než se. kopuluje další t-Boc-amiriokyseliňá, neutralizuje se

systém ; peptid/pryskyřice podle příkladu 36B 15 ml . N,N-diisopro-. ' <Pylethylaminu v- methylenchloridovém roztoku^ Po přibližně Jedné />·/·'. minutě se supernatant odstraní a^-přidá se dalších. 15 ml N,N-diisopropylethylamínu v methylerichloriďovém roztoku- Získaná směs se nechává reagovat po dobu přibližně pěti minut, supernatant se odstraní a systém peptid/pryskyřice se šest krát promyje methylen^- chloridem.

Ó.. Sekvenční kopulace za' .získání konečného produktu

Další t-Boc-amiriokyselinový roztok se přidává k pryskyřici v podstatě způsobem podrobně popsaným v příkladu 36A, 368 a. 36C. Tento postup se stále opakuje za použití vhodně chráněných t-Boc~ aminokyselin k zisknání žádoucí sloučeniny•Jediná změna je v průběhu kopulace t-Boc-statinu. Při přidání t-Boc-statiriu se Používá 1,25 ekvivalentu aminokyseliny a 1 »2.5 ekvivalentu dicyklohexylkarbodiimldu jakožto kondenzačního reakčniho činidla. KoPulačrií reakce pro t^-Boc~statin se nechává probíhat po dobu tří nebo vice hodin. Může se použít bud většího nadbytku t-Boc-statinu nebo delší kopulační doby.

E. Acylace

Do neutralizovaného systému, peptid/pryskyřice Podle příkladu 360 se přidá přibližně 5 ml acetarihydridu k pokrytí systému

^{a pa}k Λ -5X N,N-dixsopropylethýlaminu--v_?..met^ŽsĚ'ť?&ÍPrííÍM~X^í skaná; řěákčfííý 'směs sě nechává· reágov'att p(řibližněj—·' ^'ofdobu-15? minut - Reakce .-Je v podstatě ukončená· podle. ninhydrinoř; ý

'•O. .

• - V Světle žlutá- b ar va, získaná Při - ninhýdririóvě;' ’'¹

XAt-znaznačuje,t Že aminozakončení peptidu. je chráněno áčétyiovóů A skůzií;· ' .· ..i·,- . ·.· · ·..··../-?· - ·;· ·- ·. . - · ... -. ; .· .... ;;·;.;.·;Χ'.;.._? . ý_?

Plnou- -·.·.·'··.

F- Odštěpení, peptidu od pryskyřice J- X-:.. ...Peptid se odštěpuje ze systému peptid/pryskyřiče mícháním •F^^^VXřožtókú-kjOydílů (objem/objěm): fluorovodíkové kyseliny obsahují- c ' a.ě-cí'·.10) % ánisolu na jeden díl pryskyřice po dobu 45 minut při tePí— lotě;0X C.Když se. ; v podststě < veškerý fluorovodík odstraní za ^; _ sníženého tlaku, promyje se získaná směs bezvodým diethyletherem.

ý Volný- peptid·' ' se; extrahuje ze;S^!--zbytku” ledovou⁷ kyselinou 7^: octovou, ?t ) <.'

-. < 50% . kyselinou. Octovou a' pák védou-? Extrakty se. spojí, lyofilizují..'·’.· se^;a žádaná peptidová sloučenina se čistí reverzní fázovou chromatografií HPLC.

”’·..·’· Peptid vykazuje'následující ' áminokyšělínové složení: Vál’, 1,0(1); Leu 1,0(1); Sta přítomen; bNA 1,8(2); což odpovídá správným poměrům pro uvedenou sloučeninu- Peptid se také analyzuje MS(FAB), čímž se potvrzuje molekulová hmotnost (822) peptidu·

Podle příkladu 37 až 40 se postupujé v podstatě' stejně,.jako je popsáno v případě příkladu 36.

Příklad

Sloučenina

CH₃C(0)-NA-Nva- Sta- Nva~NA-NH₂ CH₃C(0)-NA-Nva-AKPPA-Nva-NA-NH₂ CH₃C(0)-N.A-Val- Sta- Ab_u-NA-NH₂

NA-Val-AHPPA-Leu-NA-NH₂

Sloučeniny, připravené způsobem podle příkladu' 36 až 40 se analyzují na aminokyselinové složení po hydrolyse a ke zjištění, molekulové hmotnosti, použitím MS (FAB) . Výsledky jsou, uvedeny v následující' -tabulce I,

T a b ι ,ι Ί. ka I

Aminokyselinové složení a molekulová hmotnost

	tmi nokyseliria	analysa	molekulová	hmotnost
Příklad Zbytek	teoret-	skut -	teoret-	MH-t-
37 - NA	2,00	2, 14	808	809
Nva	2,00	1,85
AHPPA	1,00	Pří t -
38 NA	2,00	2,08	842	843
Nva	2,00	1,92
Sta	1,00	Přít.
39 Val	1 ,00	1,01	7 94	795
Abu	1,00	0,98
' NA	2,00	2,01
1 Sta	1,00 ·	Pří. Ι-
40 Val	1 ,00	Ο,88	814	815
NA	2,00	. 1,94
Leu	1,00	1,12
AHPPA	1,00	Přít-
Přít- = přítomná (toto vysvětlení	Platí i pro	tabulku 11)
Podle přík .Ladu	d i aí 4 8 ee připraví v p	i.idst.a Li· sto	Jně. jak,
je Popsáno v píipudě	přikladu s-· .	za Pnuli ti	0 , 136 mm o I	N-8ec-0

benzy 1 — L~threoriin- 4 ~ ((.ixyřnethy 1) fenylacetamidomethy Love. < Pum) pryskyřice 5 mmol každé Příslušné t~Boc-aminokysei..i .ny a 1 mmol t~ Boc-statinu. Všechny kopulační reakce se provádějí přibližně po dobu jedné hodiny Při teplotě místnostiV případě sloučenin, připravovaných podle příkladu 42. 44, 46, 47 o 48 se po přidání t-Boc-glvcinu chránící skupina odstraní a provede se neutralizace způsobem, popsaným v podstatě v příkladu 36B a 36C, pryskyřice se dvakrát Promyje 1% kyselinou octovou v dimethylf ormamidu a smísí s roztokem 3 X acetonu v dimethy 1,formamidu, Oo získané směsi se Přidá 1N roztok natriumkyanoborhydridu v dimethylformamidu- Získaná reakční směs se nechává rea.<

.govat Po. .dobu ..přibližně jedné, hodiny Při teplotě místnosti. Když je reakce ukončena, obsaženy supernatant.se odstraní·a žádaný oli~ gopePtid se od pryskřicé odštěpí v Podstatě způsobem, podrobně po

100 psaným v příkladu 36Γ- Reakce se mou i toru je ninhydrinuvou zkouškou. Reakce je ukončena, když se pryskyřice načervenalá.

Příklad “44'

Sloučenina

GH3CCO)-Gly-Val-Vai-Sta-Ala-Thr-OH Ci;H3>2i:H -Gly-Val-Val-St.a-Ala-Thr-OH ly-Va 1 - Va l -Sta-Ala-Thr-OH niH^ÍTCH^Gly^StxHIle^AJlá^Tirř^ÚU-^L

Gly-Val-Sta-Ala-Thr-OH <CH3>2CH -Gly-Va1-Sta-Ala-Thr-OH <Clfe>2CH -Gly-Va 1 -Va l - Ile-Sta-Thr-OH

4S CCH3>2CH -Gly-Va1-Sta-Ile-Ala-Thr-OH

Sloučeniny, připravené způsobem podle příkladu 41 až 47, se analyzují na aminokyselinové složení po hydroly.se a ke zjištění molekulové hmotnosti použitím MSCFAB). Výsledky jsou uvedeny v následující tabulce IITabulka II ........

Aminokyselinové složení a molekulová hmotnost

	aminokyselina analysa	molekulová hmotnost
Příklad	Zbytek	teoret.	skut,.	teoret. MH+
41	.Gly	M	1 jO66	644.7 645
	Val	2,0	1,529
	Ala	VA	1.000 1
	Thr	A o	0,957 :
	Sta	. AO'	Přít -
42	Gly	1,0	Přít..	666,2 667'
	Val	2.0 /	1.84
	Ala	________IJ)_______ 1.0 !	1,15
	Thr	1.010 !	•
	Sta	b° · .	Pří t.
--“43-		AO“” “	i“óoo	' ' 602,6 '' 603
	Val	2.0 i	1,78
	Ala	1,0	A13
	Thr	AO	0.990 t
	Sta	AO	Přít .

i*

Η ť'i

- ΙΟΊ - ϊ

Tabu 1ka II C pokračování)

Aminokyselinové složení a molekulová hmotnost.

	aminokysel i na	analysá	molekulová	hmotnost
Př í k1ač	Zbytek	teore t.	skut,.	teoret.	MH+
' ' 44	Gly	1,0	Přít..	559,6	56D
	Ala	l;0	1,000
	Ile	1.0 í	0.825 1
	Thr	M	0*967
	Sta	1.0	Přít..
45	Gly	1,0	1.020 1	503.5 J	504
	•Val		l?050
	Ala	1.0	1,020
	Thr	M	0,,910
	Sta	1.0	Přít.
46	Gly	1.0 b°	PRES	567.8	568
	Val	1.06
	Ala	1.0	1.03 #
	Thr	1.0 i	0?92
	Sta	1.0 f	Př í t- ·
47	Gly	1.0	PRES	686,8 i	687
	Val	1,0 ·	1,609
	Ile	1,0	1,811
	Thr	1.0	1.000 t
	Sta	M	Přít.
48	Gly	M	Přít.	659	660
	Val	M	0,94
	Ile	1,0	1,21
	Ala	M	0.96 r
	Thr	1,0	0.90 t
	Sta	b°	Přít.

102

Nás j.e*d u j ící sloučeniny . se připraví v podstatě stejně, jako je shora popsáno- Epoxidy podle Příkladu 49 až 74 se připravuji způsobem podle příkladu 1- Sloučeniny podle příkladu 62 až 1-13, 140 _až 145, 149 až 152, 170 až 206, 210, 212 až 214, 218 až 239, 241 až 24 i, 249 až 258 a 275 se připraví způsobem, obecně popsaným v příkladu 6, 8a 25A, Sloučeniny Podle příkladu 124 až 139 a -1-4-6—se-—p ř-ip ra-v-u jí—zP ΰ sob em-pod-le—p ř í-k-l-adu—3-1“SioučeriÍT»y—P odi'e~ Příkladu 114 až 123, 147, 148, 153, 154, 158 až 163 a 240 až 241 se připravují obecně způsobem podle příkladu 31 avšak za použití acetylchloridu (nebo Jiného vhodného acy leh lor idu) místo metharisulfonylchloridu- Sloučeniny . podle příkladu 155 až 157, 164 až 169, 207 až 209', 211 a 215 až 217 se připravují způsobem podle Příkladu 16. Sloučeniny podle příkladu 244 až 248 a 274 se připravují. obecně způsobem podle., příkladu 28 a 29 za použití N~[ 1 'αχό- 1 ' - (3¹¹ - kar boxy-4 -methyl) f enyl]methyl-1 ,2,3,4- tetr ahydroisoehinolinu, meziproduktu PodPle Přípravy 100. Sloučeniny podle příkladu 259 až 2.62 se připravují, způsobem podle—Příkladu -33 až— 35. Sloučeniny podle příkladu 263 až 273 se připravují obecně z p ů s o b e m p o d 1 e p ř í. k 1 a d u 3 6 .

Tabulka lít

R·*

Ph

R^;

Příklad

1U) 3w

^1?

I * ks

1Ί

Cc

Cc·

Cc

Cc

Ph

Ί

R²

-CH<N

H

R*

H

N,

R-^w

Charaktertsti^y

MS: m/e 785 (M⁺+l)

O.

-CH(CH₃)₂

-CH?C (O) NH:

-CH₂CN

N-N

V

o.

Cl>°

.. O·· ^: *H NMR: 5 8,.05 (ra, 2); Tj12 (m, 2) ; 7,45 (ra, 2); 7,10 (», 10); 5,35 (s, 4); 4-15 (m, 2); 3,95 (m,

25; 3.10 (d, 1); 2,80 (ra, 5); 2,0 (ra, 2);

0,8 (ra, 12) výtěžek 7 mg (80-85%)

MS: m/e 743 (M++1)

MS: m/e 751 (M⁺+l( ^XH NMR: δ 7.50 (Ξ, 2); 7.10 (ra, 20); 6,68 (s, 2); 4.95 (s, 4) ; 4,0 5 (m, 4) ;

3.20 (m, 1); 2,60 (m, 8)

MS:. m/e 823 (M⁺ + l(

-ch₂ch₃

I ubu l ka 11. Γ < pokračován ť3

-CH2CH2C(O)NH2	MS: m/e	807	(M++1)
-CH2CH(CH3)2	MS: m/e	778	(M+)
-CH{CH3}CH2CH3	MS: m/e	777	(M++l)

' ' “S 8/42 ' ’ '

-CH(CíÍ3)2 (m, 2); 7_χ70 (jn, 2);

7,20 (m, 14); 4_y22 (m, 3'); 4,0 (q, 1); 3,85 (d, 1).; 3,6 (m, 4) ; 3,22 (m, 1) ;

2,.95 (m, 4); 2.82 ,(s, 6) ; 2.30 {m, 4) ;

1,95 (m, 2); 0_z8 (m, 12)

-CH(CH₃)₂ MS: m/e 888 (M⁺+2)

MS: m/e 694 (M⁺+2) ·/

105 -

Příklad	R3w	R2
64	OQjý 0	-ch2ch2ch3.
65	OQU7 0	-ch2ch2ch2ch3
1 66	0	-C(CH3). 3
67	n ?H3 o	-CH(CH3)CH2CH3
68	0	-ch2ch:ck2ch3
69	αχ 0	-CH(CH3)2
70	αχχ 0	-CH2CN
71	Γί fH3 A:V 0	-ch2ch3

-CH(CH₃)₂ (Thnrakt.er i st. ifcy

MS: m/e 878 (M⁺+2)'

MS:.m/e 906 (M⁺+2)

MS: m/e 780 ÍM++2)

MS: m/e 807 (M⁺+3)

MS: m/e 780 (M⁺e2)

MS: m/e 791 (M⁺+l)

MS: m/e 872 (M*+2)

MS: m/e 749 (M++1)

K₃C

O

MS: m/e 780 (M++2)

Přík lad fabulka ITL ( pokračování) _R?w

_a3w

R² _R3w

.0,

-CÍCHO 3

Cíiarakter i st i ky

MS: m/e 879 ίMX+.1X

Cr r3w

-CH(CH₃)CH₂CH₃ MS: m/e 777 (M++1)

_R3w

i k

CHi

I

N

R²

-ch₂ch₃

R¹

x:

_R3W

PCh.em

MS: m/+ 943 (M^T)

O-X o

-CH(CH₃)CH₂CH₃

x:

ΜΞ: m/e 904 ÍM⁺)

IV ch₃

I

R

-CrbCH,

„2T.

'V0 '

CH₃ o

-ch₂ch₃

|| 'MS: m/ř 350 (M^T*2)

Vábní ku V

Príkl *

i

r3w	R2
Ccv 0	-CH(CH3)2
ox 0	-ch2ch3
0X7	-ch2ch3

O echem

MS: m/e 778 (M⁺)

MS: m/e 806 (M⁺+2) lR NMR (CD3OD): δ

8,2	(m, 2) ; 7	,95
(ňi,	2); 7.,83	(m,	2) ;
7.72	(t, 2);~	•7,55
í t,	2); 7,40	(d,	2) ;
7,10	ím, 10);	4.7	0
(m.	4); 4.40	(ť,	1) ;
4,15	(m, 2);	3,98
(m,	1); 3.85	(m,	1) ;
3,38	(m, 1) ;	3.02
(s,	3); 2.97	(s,	3) ;
2,55	(m, 4);	1.80
(m,	4); 1.53	(m,	3) ;

0.97 (t, 5) f

Tabulka VI

Fh

Příklad ' 84

R^3w R² Charakteristiky

-ch2oh	MS(FD):	m/e	562	(M+);
			220	(100)
-CH(CH3)CH2CH3	MS(FD):	m/e	639	(M+)
-CH(CH3)CH2CH3	MS(FD):	m/e	652	(M+)
-CH2CH2C(O)NH2	MS(FD):	m/e	623	(M+)
-ch2cn	MS(FD):	m/e	621	(M+2)
-c?:2cn	MS(FD):	m/e	612	(M+2)
-ch2cn	MS(FD):	m/e	637	(M*3)

/-c tCCV‘^CH2a

MS(FD): m/e 697 (M+²)

Tabulka VI (pokračování) ‘'ί?

Prík la«l	R3w		t' h a r. λ k ter i s t i ky
90	Cu<v 0	0	MS(FD): m/e 630 (M+)
91	0		Analýza proC35H4N5O5: C, 63,72; H, V' 6,76; N; 11,45; C, 65,. 60; H, 6,61;' N, 10,.94.
92	v 0	oO	RS(FD): m/e'516 (M+)
92	F’V 0 '	0	Výtěžek 80 mg (53%) ; bílá pevná látka
94	F’V 0	^.xo	MS(FD): m/e 516 (M+)

Tabulka VTft

Příklad R² t lha ra k t. ο r i s t i ky

Analýza pro c31H4511305·;

. C. 69.12; H, 8,23;

N, 7,80; .

ⁿ'· C, 69,38;; H, 8,43;

N, 7,96.

MS(FD): m/e 669 (M⁺)

MS(FD): m/e 634 (M⁺)

Analýza pro C35H45N3O5S:

. · C, 67,32; H, 7 32;

_n..... N, 8/78-;— --- ⁽ —

C, 67,57; H, 7.20; N, 6,52. '

MS(FD): m/e 670 (M⁺)

Ana lýza pro C37H47N3O7
c,	63.82;	H, 7
N,	6.Š4;
n-· C,	68,65;	H, 7
N,	6.77 .

/

101	^saF	MS(FD):	m/e	637	(M+)
102		MS(FD);	m/e	621	ÍM*)		y
103	^sV;n N-N z - - 'H-.C'	MS(FD):	m/e	626	(M+)

Tabulka VID .A

Příklad

104

105

106

107

108

109

110

111

112

113

Výtěžek

MS(FD): m/e 538 ÍM⁺)

MS(FD): m/e 521 (M⁺)

MS (FD)': m/e 526 (M⁺)

Charakteristi ky

Analýza pro_c,_řH.₇h₃o₃

v. C, 71.04; H, 8.48;

N, 9,56;

n. c, 70.85; H, 8_f59;

N, 9 56.

MS: m/e 478 (M⁺)

MS(FD): m/e 569 (M⁺)

MS (FD): m/e 534 (M⁺)

Analýza pro _{c 30}h₃7N₃o₃S: _v C, 69.33; H, 7.13;

N, 8.08;

Π. C, 59.60; Η, /,43;

N, 8.07.

Analýza

P!	ro C33H3	aN4O3S:
c.	by . 45 ;	H, 6.71;
N,	9 ,32 ;
c,	69.59;	H, 6,58;
N,	9.61.

Q.75g (42%)

Tabulka VIC

Pří-k-l-aď

114

115

11S ’ 117

118

119

120

121

122

123

-ch₂ch₂sch₃ \ N

O

II ,S_N

MS(FD): m/e 611 (M+)

MS(FD): m/e 644 (M⁺)

MS(FD): m/e 575 (M⁺)

MS(FD) m/e 6~08’(M⁺) '

MS(FD): m/e 561 (M⁺)

MS(FD): m/e 594 (M⁺}

MS(FD): m/e 514 (M⁺)

ks

MS(FD): m/e 612 (M⁺)

Analysa pro C3SH40N4O5S: _v . C, 66.86; H, '6,41;

N, 3.91;

Π .____67_, 1_3_;__H,_6 .37 ;

N, 8,63.

Analysa pro ο₃ςΗ₄Ν₄Ο₆Ξ:

v.	C, N,	65,20; 8,69;	H,	6,25;
Π .	c,	65,49;	H,	6,26;
	N,	8,61.

115 Příklad

124

125

126

127

128

129

130

131

132

Tabulka VXD

R²

MS(FD): m/e 647 (M⁺)

MSÍFD): m/e 680 (M⁺)

MS (FD): m/e 611 (M⁺)

MS(FD): m/e 628 (M⁺>

MS(FD): m/e 644 (Μ*)

MS (FD): m/e 597 (M+)

MSÍFD): m/e 630 (M*)

t :ha rak te r i s 1.1 ky

MS(FD): m/e 649 (M7

MS(FD): m/e 615 (M⁺) fabulka VID ť pokračování)

Pří klad

133

134

135

136

137

138

139

R²

II

Charakteristiky

MS (FD): m/e 632 (M+)

Analýza pro C32^33^^30752:
v.	c,	57.48; H, 5,91;
N,	6,49; .
a.	c, N,	57,19;' H, 5.86; 6.23.

MS(FD): m/e 598 (M⁺)

Výtěžek 30 mg (36%);

bezbarvý oleí

Výtěžek 44 mg;

bílá pevná látka

MS (FD) : m/e 604 (M⁺)

MS(FĎ): m/e 620 (M⁺)

Tabulka VIT

- io

	Příklad	R3w	_RÍ	Charakter i s 11ky
v	140	ocv 0	0	MS(FD): m/e 701 (M+)
	141	0 * \-í<ř ·	X^OvjQ 0	MS(FD): m/e 680 (M+)
	142	0	-CH2SO2NH2	MS(FD): m/e 625 (M+)
& g * '3'	143	□O- 0	-ch2so2nh2	MS(FD): m/e 646 (M+)
	144	^V 0	0	Analýza pro C57H47N3O7: C, 63.82; H, v- ' 7.34; N, 6.51; n- C, 69.15; H, 7.50; N, 6.56.
·*	145	-H	0
	146	ch3 k3c-n^ / s oz/ o	0	MS(FD): m/e 653 (M+)

Tabu! kit VIT (pokračrivárí í)

Prík laiJ

147

148

149 ’ 150

151

152

0	MS (FD) : 0
0	^cjO MS (FD) : 0
H:tv 0	MS (FD) : 0
-^V 0	x^XO yý’-eaek
-H	^vC MS(?D):
^~V 0	-XCO

žek570 mg (80%;

O

117

Příklad H^3w

- O

154 -CH₂CO₂H

Charaktertst iky

MS (FAB): hmot. 588, 30.51

Výtěžek 0_;51g (55%)

MS(FD): m/e 588 (M⁺)

MS(FD): m/e 623 (M⁺)

MS(FD): m/e 587 (M⁺)

MS (FD) : m/e' 560 (M⁺)

MS-(FD) : m/e 5 61 (M⁺)

MS(FD): m/e 568 (M⁺)

MS(FD): m/e 530 (M⁺)

Analýza pro'C37H41N3O5:

C, 71.25; H, 6.62;

^v- N, 6,74; ' ⁿ' C, 71,32; H, 6 70;

N, 6,67. '

MS(FD): m/e 575 (M⁺)

Tabulka VITU

Ρτ-í-k-l ad-

-R.3.WJ7har.ak.te-r-i^;.t..lííy

164 165·	-ch2co2h	Výtěžek 0?10g (91%)
MSÍFD): m/e 660	(M+)
166		MS(FD): m/e 623	(M+)

167 'T o

S ςτ

MS (FD) :. m/e 674 (M⁺)

168

MS (FD) : m/e 59-6 (M⁺j

Výtěžek 240mg (71%)

169

O

- -119

Tabulka VITÍ

Ph

Příklad

170

171

172

3

174

175

176

Cha ca k ber i s t, i ky _r3w

O

IR (KBr): 3311, 1656, 1366,

3065, 2966, 1520, 1453, · 735, 701 cm'¹

MS(FD):	m/e	589 589	(M+) , (100)
MS (FD)	m/e	610	(M+) ,
	220	(1Q0-)
MS(FD):	m/e	599	(M+) ,
	599.	(100)
MS(FD) :	m/e	639	(M+) ,
		639	(100)
MS(FD):	m/e	609	(M+l)

MS(FD): m/e 612 (M⁺²)

Tabu 1ka

VIII < pukručtjuán ř)

Ph

Přiklad

177

178

179

180

181

182

183

184 r3w _ Charakteristiky

O

MS(FD) : m/e 599. (M⁺²)

MS(FD); m/e 616 (M⁺²)

MS(FAB): m/e 623 (M⁺¹)

MS (FAB) : m/e 623 (M⁺¹)

MS (FAB): m/e 558 ,ÍM⁺¹),

MS(FAB): m/e 559 (M⁺¹)

MS(FAB): m/e 609 (M⁺¹)

MS(FD): m/e 623 (M⁺¹)

CubuI ku VIII < pokračovánť>

Ph

Příklad ť

185 r3w Charakteristiky

186

187 á 188

1,

189

190 » ..

i

O

MS(FD): m/e 614 (M⁺²)

MS(FD): m/e 640 (M⁺¹í

MS(FD): m/e 644

MS (FAB) : m/e' 644

MS(FD): m/e 588 (M)

MS(FD): m/e 638 (M⁺¹)

MS(FD): m/e 646 (M⁺¹)

191

	Tabulka V[fí	< po kvač ován í >
		Ph '
	H í? R-/ ψ\Ν,
	1 H 0=\	OH IJ O=<
	NH;	N—4H X
Příklad	R3w	Charakteristi ky

192

193

MS(FD): m/e 686

MS(FD,: m/e 644

194

195

196

..MS.(FD)..:.m/.e 6.44

MS (FD) : m/e 638, 546

MS(FD); 640, 420, 220

197

MS(FD); m/e 666, 573, 445

198

-H , MS(FA3): m/e 455 (M⁺¹)

123

Příklad

199

200

201

202

r3w Charakteristiky

MS (FD): m/e 596 (M⁺)

MS(FD): m/e 646 (M+)

MS(FD): m/e 645 (M⁺¹) ·

MS(FD); m/e 645 (M⁺¹)

Ana I yza pro C37H42^N3°6^S:

v. C, 65,63; H, 5,43; N, 3,50;

C, 65,52; H, 6.45; N,

n. s.43.

203

Tabu l ka V Γ Γ [ < i»oki ačoumi i )

204

05

206

207

208

209

-Rl

-CH(CH₃)₂

N

-C h .a cake r 4-s-t-i-kyMS(FAB) : m/e 595 (M⁺) ;

128 (100)

MS(FD): m/e 633 (M⁺);

633 (100)

-CH₂CH₂CO₂H MS(FD): m/e 626 (15);

625 (35); 220 (8) jO <.MS(FD): m/e-7-17-(.Mt.l 24-)-.

MS(FD): m/e 688 (M⁺¹,100); 220 (22)

MS (FD) : m/e 702 (M,100)

-CH₂CH₂C(O)NH₂ MS(FD): m/e 624 (M^{+ 2} )

210

738 (100)

125 Tabulka ÍX

ΰ·-^: -τ,.«y ·;:···?··.

Příklad

212

R²

-CH₂CN

Cha rakter1sti ky

213

MS(FD): m/e 594 (M⁺²);

501, 372, 224 ¹H NMR : δ 1,48 {s, 9H); 2,783,12 (n, 6H>; 3,71 (m, 1H); 4,30 (m, 1H) ; 5,05 (m, 1H); 5,16 (s, 2H) 5,98 (s, 1K); 6,76-6,85 (ro, 2H); 92 (t, J=9 Hz', 2H) ; 7,177.43 (m, 11H); 7,70 (t, J=9 Hz, 1ΗΪ; 7,85 (t, J=9 Hz, 1H); 7,95 (d, J=9 Hz, 1H); 8,18 (d,

J=9 Hz, 1H) ; 8,27 '(d, J=9 Hz, 1H); 8,39 '(d, J=9 Hz, 1H); 9,00 (d, J=12 Hz, 1H).

214

0'

N OCHí

K

216

N-NHH

217

MS(FD):	m/e	702	(M+)
MS(FD):	m/e·	640	<M+1,38);
		610	(63),593 (58)
MS(FD):	m/e	625	(M+,100)
MS(FD):	. m/e	681	(M+1)

Tabu I ka X

R¹ Charakter i sb i ky

Příklad

218

219

220

21

222

	MS (FD): m/e	716	(M+,	100)
xr0H	MS(FD): m/e	626-	(M+,	100)
Ό	MS(FD): m/e	616	(100)	; 396
(15)	; 39	5 (33	); 3 94
	(8) ;	221	(18)	; 22 0
	............„...(1.0C	(.).;. 1	9.2 (.2	.01;-----
	191	(88)
ΛΧ>	MS (FD) : m/e	692 691	(M+) ; (100)
SO	MS(FD): m/e	642	(M+,	100) ;

Tabulka Kl

Ph

Příklad

223

224

225

226

NH ^CÍÍ3

-Λ

Charakterist iky

MS (FD) : m/e 624 (M⁺, 100)

MS(FD); m/e 660 (M+, 100)

MS (FD) : m/e 661 (M⁺, 100.)

MS(FD): m/e 624 (M⁺, 100)

MS(FD): m/e 610 (M⁺, 100)

227 rubulka Χϊ íjjf·ί<racuvíiuί5

Příklad

228

229

230

R^?

NH

Ά

NH

-Λ

A

A nh₂

Charakteristi ky

MS(FAB): hmot.600,2839 (M+H)

MS(FAB) hmot. 616.2591 (M+H)

MS(FD): m/e 650 (M⁺),

MS(FAB): 624; 607; 355)

231 . i zy tabulko X [ (pokračování) í

Příklad

232

233 •í&k.

Charakteristiky !r NMR: 5 1.45 (s, 9H),· 2,26 (s, 3H); 2.73-2,80 (m, 2H) ; 2,94-2.99

Cm, 2H); 3,13-3,23 (ro, 2H) ; 3,90-3.95 (ra, 1H); 4,29-4.40 (m, 1H) ; 4,89-4,97 (ni, 1H); 6,68 (s, 1H); 6.79 (s, 1H3 ;

6.85-7 15 (ro, 10H); 7.49-7,60 (ro, 3H); 7.72 (t, J=?'s Hz, 1H) 7,79 (d, J=8 Hz', 1H) ; 8.03-8.14 (m, 2H) ; 8,18 (d, J=3 Hz, 1H); 8'.35 (d, J=6,3 Hz, 1H).

MS(FAB): 636 (M⁺, 100)

TXImiVk.i Klí

Př í k lad

234

235

236

237

238

239

240

R^3w R¹ Charakteristiky

0	SW
-H	'txs
O-x-x-AtfX 0	a:
... 0	'X-
-H	xSO
0	X
0	'XO
0	'X

MS(FD):	m/e	637 636	(M+) , (100)
MS(FD):	m/e	537 536	(M+) , (100)
MS(FD):	m/e	671 670	(M+) , (100)
.MS..LFD).:.	. .mZe	587-	..(MŤ„._	100.).
MS (FD) :	m/e	487	(M+,	100)
MS(FD):	m/e	621	(M+,	100)
MS(FD):	m/e	579 578	(M+) , (100)
MS(FD):	m/e	529 528	(M+) , (100)

241

131

Tabulka XT Π

Příklad R¹

Charakter i st Lky

242

MS (FD): m/e 652 (M+, 100)

MS (FAB) : m/e 703. (M⁺) 602

243

Pfíkladí

244

245

246

247

Tabulka.XÍV

MS(FD)í m/e 618

MS(FD) :

MS(FD):

MS(FD) :

m/e 618 m/e 618 220 m/e 618

MS(FD) :

m/e 604 (M⁺, 100) (M⁺, 100)

ÍM+);

(100) (M⁺, 100) (M⁺, 100}

248

13? Tabulka XV

	R2	»	•-baraki- eristi ky
249	X)	s	Analýza pro. C39H51N5O7 v C, 66.74; H, 7.32; N, 9,§8; n- C, 65,59; H, 7 44; N, 9.76. 7 /
250	Ό	R	Výtěžek 100-mg (33%)
251	S	MS(FD): m/e 740 (M+_i)
252		R	MS(FD): m/e 741 (M+)
	NH'
253		Ξ	Aualvza pro . C33H49N5O7 C, 66.36; H, 7.18; υ- N, 10jl8; u. C, 65.63; H, 7;10; N, 10', 28.
254 .	-o	R	Analýza ?a>' C33H49N5O7 Cy 66.36; H, 7.18; ν· N, 10'. 18; u. C, 66Í20; H, 7,23; N, 10.31

•a·

• ✓Γ Tabulka XVI

Příklad	_RÍ	*	Charakter i s t i ky
255	-CH{CH3)2	s	MS(FD): m/e 636 (M+, 100)
256	-CH(CH3)2	R	MS(FD): m/e 636 (M+, 100)
257	-CH2C(O)NH2	S	MS (FD)·: m/e 652 (M+, 100)
258~	-CH2C(O)NH2	R	Analýza pro CH39H4gN4C>4 v C, 70.13; H, 6.81; N, 10.76; n. C, 70^38; H, 7,01;
—	- - - . - .......—		-......-<-1^75·.- ......

Tabulka XVlL

O

R'

Příklad

259.

260

261

262

O

MS': 795 (M+) ’

-CH₂CH(CH₃)2

Výtěžek 16.1 mg -CH₂CH₂CH3 - (10.6%)

Výtěžek 40 mg (4%)

-ch₂cn

Tabulka XVUf

Examole		3loučfnina	Ch«.« c.	jkt.wi-	isb
2S3	CHjCťO)-	NA-Val-Sta-Leu- NA-NH2 ·	MS(FA3)	: m/e	324
264	CH3C(O)-	NA-Val-Sta-Gly- NA-NH2	MSfFABJ	: m/e	763
265	CH3C(O)-	NA-Val-Sta-Ala- NA-NH2	MS(FABJ	: ra/e	78t
266 Ά'ί'	CH3C(O)-	NA-Val-Sta-Val- NA-NH2	MS(FAB)	: m/e
267	CH3C(O)-	NA-Val-Sta-Ile- NA-NH2	MSfFABJ	: m/e	823
263	CH3C(O)-	NA-Val-Sta-Nva- NA-NH2	MS(FABJ	: m/e	309
269	CH3C(O)-	NA-Val-Sta-Nle- NA-NH2	MSfFABJ	: m/-e	323
270		NA-Val-Sta-Nva- NA-NH2	MSfFABJ	: m/e	767
271		NA-Val-Sta-Nva- NA-OH	MSfFABJ	: m/e	768
' 272	CH3C(O)-	NA-Val-Sta-Nva- NA-OH	MSfFABJ	: m/e	810

273 CH3C (O)-bNA-Val-Sta-Leu-bNA-NH2 MS(FAB): m/e 823

- (37 Jak shora uvedeno, týká se. vynález zpuzobu identifikace produkce |3AP inhibitoru, přičemž se

1) podává inhibitor aspartylproteosy zkoušenému systému. .

2) měří se produkce |3AP ve zkoušeném systému a

3) porovnává se produkce · βΑΡ ve zkoušeném systému s pródukeí (3AP f v kontrolním systému, do kterého nebyl, zaveden takový inh-ibitor aspartylproteasy · , Postupuje se následovně: Především zkoušené sloučeniny, kteť ré inhibují příkladné aspartylproteasy, zvláště kathepsiri D, se identifikují jako inhibitory aspartylproteásy- Výrazem testovací systém se zde vždy míní systém určený k. měření inhibiční aktivity aspartylproteasy. Typickým zkušebním systémem pro takovou identifikaci Je neburiěčný vzorek, kde se změna proteasové-ho sub1 stratu monitoruje Po podání inhibitoru Proteasy. Změna Přoteaso•věho substrátu se Pak porovnává se změnou proteasového substrátu v kontrolním systému, do kterého nebyl, za veden žádný inhibitor aspartylproteasy Výtarem kontrolní testovací systém se míní testovací systém, který se provádí současně se zkouškou s tou výjimkou, že. do něj není zaveden žádný inhibitor aspartylproteasy.

i;o r-ebuniěčneho vzorky. se peuí.;.vo < identí íkec i. zkoušených sloučenin majících vhodnou inhlbioní k t i v i {·. 11 ze zřetelem na. acss:u· fc v Lpr o toasu v nebuněčhém vzorku.

Jakožto Přiklad nebuněčného vzorku, kterého se může' POuízt k,.-.

stanoveni in vitro inhibiční aktivity se zřetelem na aspartylpro•teasuí reaguje částečně vyčištěný kathePsin 0 lidského mozku se substrátem, například s tetradekapaptldem vepřové ledviny. Výsledná reakční směs se rozdělí na d«'a podíly a každý Podíl se in►i kubuje Po různou dobu.. Když je reakce ukončena, změna substrátu v každém Podílu se stanovu je reverzní fázovou chromatograf i.í inhibiční aktivita .proteasy se může vypočítat oa základě změny substrátu- Tuto zkoušku '.blíže objasňuje následující .

. .O.tu.hy necelulárrií vzorek. Pro stanoven i. in vitro inhibiční.

aktivity se zřetelem na aspartvlproteusu používá .mikrotirovou destičku, přičemž se vhodná asPartyIprot.easa, například kathepsin .·.··'····

I HPl.C .

mji-y fi . Pokus kontrolou- f'n každého důlku se t, vnáší (i,;. ka.£.jéhi„. důlku spolu s vnese vhodný fluorometrický substrát. Výsledná reakční směs se nechává reagovat Po předem stanovenou dobu, například po dobu 30' minut· Pak se enzymatické působeni ukonči, sbustrát nebo Jeho Produkt . se může Posuzovat, fluorometricky a Pak se proteasová irihibicnX aktivita .může vypočítat, na základě míry změny substrátu-~T-utí“zkoiTgk:ubd:íž(?“ibisÚašrtUjěHřráš^

Třetí · riecelulárnl vzorek pro .stanovení iri vit.ro inhibiční. aktivity se zřetelem na aspartylproteasu obecné Popsal Jupp R.A. a kol,, Biochem, J. 265, str. 871 až 878, 1990 a Rao a kol- JMed. Chem. 1999, (v tisku). Zkouška se provádí inkubací zkoušené sloučeniny se vhodnou aspartylproteasou například s katepsirtem D, v přítomnosti ehromogenního substrátu- Inhibiční konstanta, je hodnota, která se pak může stanovit kvantifikací konkurenční inhi.bi.ce hydrolysy ehromogenriího substrátu· Různé c.hromogenní 'substráty, vhodné 'pro zkoušení aktivity aspartylproteasy, popsal Dunn- a. kol Biochem- J --237--, stru-8-99 -až--906-,-- 1 9-86·.--Výhodný chromogenní substrát pro zkoušení aktivity kathepsinu 0 popsal Scarborough P;E. a kol-, Protein Science, 2, str- 264 až 276, 19 93.

Koncentrace substrátových roztoků a štěpných Produkt.ii se může · ‘.- ·ι·.·. Použití m ·Ό.ι :i · i '· .- hydr o i ysy Enzymové i · uky se mohou titrovat s těsně vázaným inhibitorem ke kvantifikaci aktivní koncentrace enzymu. Enzymové koncentrace jsou zpravidla v oboru 1 až 5M,. Zásobní roztoky zkoušené sloučeniny se připravují ,'/ koncentraci 1,0 až 5,0 mg/ml a pak se mohou 5U až. 100 pl Podíly takových zásobních roztoků dále ředit na koncentraci 5 až 300 ph pro následující stanovení~

Především se stanovu je procentová Inhibice Počáteční reakční rychlosti v přítomnosti 4mM zkoušené sloučeniny ce zřetelem na kontrolní reakci·' pro určení potence zkoušených sloučenin .·· Potom , se zkoušené sloučeniny .'posuzují 'v koncentračním rozpětí, naPříklad.“ S—a-ž -300—uvM—pro—stanovení- míry -účinnosti ' — · · --· - ...

Pnkles absorbance v oboru 284 až 234 nm se může mim iterovat Použitím.spektrofotometru.' Absorbance se zpravidla odečítá

I

1.39 >

'i <!

v různých bodech času. Počáteční rychlosti se pak vynášejí proti Počáteční koncentraci substrátu. Prametr kintiky, K_m, pro chromogenní substrát se může vypočítat z těchto hodnot- Stanovené hodnoty Kí se pak mohou určit za použití konstrukce Qixori (Dixori Μ. , Biochem J. 55, str. 170 až 171, 1953). _x *

Pokud Poměr celkové končentrasce aktivního enzymu k.e stanovené hodriétě K i je menší než 0,2, pak se může přesná hodnota vypočítat za použití programu v souhlaseu s nelineární křivkou podle rovnice - · ·'

- ·: v = V_max[S]/[S] + K_m<1 + £I]/KO kde znamená .

v počáteční rychlost, - ’ [S] počáteční koncentraci substrátu,

Cí] inhíbiční'koncentraci a

K_ra a Kí mají shora uvedený význam·.

Pokud je Poměr CE]t/Kí 0,2 až 10, může se přesná hodnota 'K ·» vypočítat způsobem, který popsal Henderson P.J.F., Biochem J., 127, str- 321 až 333, 1972. Tuto zkoušku blíže objasňuje následující Pokus 3•Je žádoucí selektovat tyto zkoušené sloučeniny, mající in~ hibičrií aktivitu se zřetelem na asp-artylproteasu, pro další zkoušení v buněčném prostředí za účelem zjištění, které inhibitory aspartylproteasy jsou nehvhodnější Pro použití jakožto inhibitory produkce βΑΡ. Počáteční Posuzování irihibiční aktivity asPartylproteas může být, založeno na relativním zařazení těchto zkoušených sloučenin, zpravidla je věak založeno na základně absolutního posouzení inhíbiční aktivity, zpravidla zahrnujícího měření inhíbiční koncentrace, to znamená koncentrace, potřebné k dosažení dohodnuté'úrovně inhibice aspartylproteasy, například 50%. Výrazem £Cso se míní koncentrace, potřebná k dosažení 50% inhibice.

Takové hodnoty IC50 se mohou měřit za Použití bud shora popsaného postupu stanovení nejdříve aktivity aspartylproteasy v nepřítomnosti možného inhibitoru aspartylproteasy ke stanovení kontrolní hodnoty- Účinnost aspartylproteasy se Pak měří v přítomnosti různých koncentrací každé zkoušené sloučeniny a krjricent140 race, která vede k j.nhiblei účinnosti aspartylproteasy o 50 % je hodnotou IC50- Všechny zkoušené sloučeniny, které vedou k hodnotě IC50 odpovídající stanovené prahové hodnotě nebo nižší než je tato prahová hodnota se mohou označovat jako vhodné inhibitory as Party'lproteasy a mohou se dále zkoušet způsoby podle vynálezu Tato prahová hodnota je dohodnutou hodnotou. obvykle je to však nižší koncentrace, zpravidla pod 10 pg/ml, výhodněji 5 pg/ml, často 1 pg/ml a někdy 250 ng/ml nebo ještě nižší hodnotaPo identifikaci inhibitorů aspartylproteasy se provádí další screening pro vybrání inhibitorů aspartylproteasy, které inhibují iritracelulární produkci βΑΡ. Inhibičrií aktivita produkce βΑΡ se zpravidla měří v celulárrií zkoušce rtabo na modelovém zvířeti nebo oběma způsoby.

Při buněčné zkoušce se s výhodou Používá buněčné řady, která, je transfektována na nadprodukci βΑΡ, jako je buněčná řada, transfektovaná švédskou nebo jinou mutací zodpovědnou za Alzheimerovu nemoc (AD) nebo za jiný stav, související s βΑΡ. Zpravidla se při těchto zkouškách měří produkce ve zkušebním systému, do kterého se zavedl inhibitor aspartylproteasy a ve zkušebním systému, do ktereho se nezavedl ž.ldriý inhibitor aspar tylproteasy k - posouzeni mír.y snížení Produkce se zřetelem na kont ro],ní systém. Podle těchto zkoušek se může Posuzovat míra produkce SAP nebo přítomnosti buněčných charakteristik, které jsou ve vztahu k produkci βΑΡ.. Inhibitory aspar ty. lproteasy, které inhibují nebo jinak ovlivňují iritracelulární Produkci βΑΡ, jsou typicky dále zkoušeny.

Používaný zkušební systém k měřeni inhibičrií aktivity Produkce βΑΡ je zpravidla buněčný vzorek nebo pokusné zvíře- S výhodou ^Jjjhxb;i^Tj3;aktivit.a.e.»íOíi.Lik.c.e&AP.zí.sk.á i5.ří.mý.m.rněšř.er;iím.p.v:odukceβΑΡ v buněčném vzorku způsobem, popsaným v současně podávané Přihlášce, vynálezu číslo 07/96597 2. Tuto zkoušku blíže objasňuje následující, pokus 4.

Například se savci buněčná řada, zpravidla lidská buněčná řada, nechává růst za podmínek, které vedou k. vylučování zjistitelného množství βΑΡ do kondlcioriovariého kultivačního prostředí,

141 zpravidla v množství přibližně 0,1 nc/m.L až 10 ng/ml. Při růstu buněk. 23 podmínek., které vedou k akumulaci βΑΡ v kondicioriovariém kultivačním prostředí, a vystavení kultivovaných buněk inhibitoru aoPartyIproteasy je možné měřit vliv inhibiční aktivity usporty’!proteasy na produkci βΑΡ. Inhibitor aspartylProteasý,.,,který snižuje Produkci βΑΡ, je užitečný pro terapeutické ošetřování Alzhe:i měrový nemoci nebo za jiného stavu, souvisej ící ho s βΑΡ.

typickými buněčnými řadami, používanými v buněčné zkoušce, jsou lidské a zvířecí buněčné řady, například buněčná řada lidské ledviny 293, buněčná, řada lidského rieuroglioma, lidské buňky HeLa, primární lidské eridotheliální buňky (například buňky HUVEC) primární fibroblasty nebo lymfrjblasty, Primární lidské smíšené mozkové buňky včetně neuronu, astrocyty α neroglia.^- vaječníkové buňky (CHO) čínského křečka. Výhodnými jsou buněčné řady, schopné exprese variant APP s riadprodukcí βΑΡ. Výrazem nadprodukce“ se zde. vždy míní. množství produkovaného βΑΡ, které je větší než množství, produkované každou nebo všemi normálními APP formami, například 695, 751 α 770 aminokyselinovými isoformami, shora popsanými. Zvláště jsou výhodné APP varianty, které mají. jednu nebo několik substituci Přímo o™ i.íri'eni;íc .í.ch míst štěpení βΑΡ. -V.,,ř f i; jy.il 111 buňky, vykazuji --0-1 Ařk · 1 1! ·i . : ívcdió'/ mutace. Produ ku ji přibižrě šestinásobek až oc^T0 i-t.-obek iSAt·' než buňky, vykazující expresí normálního AtP, β-Amyloidní peptid (βΑΡ) se může stanovovat v kondicionova~ ném kultivačním prostředíjakýmkoliv způsobem, který je dostatečně selektivní a citlivý pro identifikací v podstatě nedotčeného βΑΡ v Přítomnosti jiných fragmentů APP, ktere mohou být obsaženy, imunologické detekční techniky se může používat za Použití vázajinich substancí, spéci f ických pro βΑΡ, jako jsou například protilátky, fragmenty protilátek, rekombinantni protilátky, které mají Požadovanou speci-fieitu α citlivost pro βΑΡ. Protilátky, které jsou’nespecifické Pro posuzování oblasti βΑΡ, jsou schoPPné. odlišovat βΑΡ od jiných fragmentů- Používaným výrazem βΑΡ vázající oblast se zde vždy míní oblast βΑΡ., která je. centrovaná v místě mezi aminokyselinovými zbytky 1δ a 'i 7 (Lysí 6 a Leu i 7.) 142

Oj.ast kázající fiAP je cr i tem normální po-otezilyti ok,* zpracováni Ar'P.. Takové normální zpracování vede k. různým fragmentům APP, které jsou potenciálně imunologicky reaktivní snedotčenou βΑΡ molekulou - Protilátky proti, ' syn tetickému pep.tidu, sestávající z aminokyselinových zbytků 13-18 βΑΡ, mají podle zištění požadovanou specificitu-—Jako Ž-t o—h o d né—de tokání— teohn &ky—s e—u-vád-ě jí—p -řik-lad-n ě-© -I-S A— zkouška “Western blotting“ a radioimunozkouéka- Typická buněčná zkouška pro posuzování produkce βΑΡ, je popsána v odpovídající přihlášce vynálezu číslo 07/965971. Tato zkouška se týká měření fragmentu APP (jiného než fragmentu βΑΡ), který se produkuje a sekretuje do buněčné kultury jakožto výsledek, produkce βΑΡ. Sekretované fragmenty obsahují v podstatě nedotčenou aminokyselinovou koncovou sekvenci APP ukončující Pěti aminokyselinami karboxykonccivý zbytek (fnethionin v případě normální APP sekvence) , který při.léhá k βΑΡ oblasti a k neporušenému APP. Sekret ováné segmenty . mohou .zláště. sestávat, v podstatě ze. sekvencí.,. . které —končí v Met59& a Lyssss 695 aminokyselinové isoformy APP s odpovldajícícm číslováním jiných isoforem a s odpovídajícími aminokyselinami. pro mutanhové APP tni 'my , jako jsou naPř i.k]..a cl !_vs^« s-Mei. * gs až Asno 9 'i -Leu 5 9 6 .Pro švédskou mutaci·

Jakožto výhodou detekční techniku se uvádějí tranná noho sendvičová zkouška, používající Pr o spojeni specifickou Pr otilátku jakožto zajímanou Protilátku, která se váže na pevnou fázi a druhou značenou protilátku, která se váže 'na ePitoP jiný než který je vázán zajímanou Protilátkou- Druhá značená protilátka s výhodou rozpoznává aminozakončení βΑΡ a může růst. proti syntetickému peptidu obsahu jící mu v podstatě aminokyselinové .zbytky 1--16 βΑΡ.

———Nebo—se—produkcecikAř—mů'žé‘'m(jríi:t:ořci'vat“žrttvi,'iř7írtaž(jh“. ňaPVxl·“ lad na Pokusných myších, jak je popsáno v patentovém spise WO 91/19810. Zvířecí model, který vykazuje expresi, jiného APP , i.sptypu. a/nó\bt,„yattiantu.,...se.u:oXněž„niůže. J?oužít. p.r.a -scr.eeni.og inbibiter rů aspartyiproteasy- Zkoušení na zvířecím modelu se zpravidla Provádí vedle shora Popsané buněčné zkoušky. Vynález se Proto ta_λ r ž ke tyká způsobu i,·:! un t ;i. f i k ...r·.?,.- ί.|· -jh-· b i tor y Produkce jiAP , přičemž se (11 měří produkce βΑΡ v buněčné zkoušce a. (2) se měří produkce ( βΑΡ v tělesné kapalině zkoušeného zvířete- Produkce βΑΡ v tělesné 1 kapalině zkoušeného zvířete se může měřit posuzováním přítomnosti •í ti* βΑΡ nebo freagmentů SAP v tělesné kapalině, zkoušeného zvířete \

Před Podáním a Po podání inhibitoru aspartylproteasyVyriálěz se týká způsobů inhibice produkce β-amyloidu v buňkách, přičemž se Podává buňkám inhibitor aspartylproteasy, vybraný shora popsanými postupy- Například se inhibitor aspartylproteasy může vnášet do buněčné kultury k. zábraně produkce βΑΡ kulti“ vovanými buňkami. Nebo se inhibitor aspartylproteasy může podávat savcům, kteří takové ošetření potřebují, k inhibici Produkce β-amyloidu a následnému ukládání amyloidních destiček, majících souvislost s Alz.hei.merovou nemocí a s jinými nemocemi, souvisejícími, s βΑΡ.

Následující Pokusy vynález oPěť toliko objasňují a nijak jej neomezují- Tyto zkoušky se provádějí k doložení schopnosti sloučenin, Používaných Podle vynálezu, inhibovat aspartylproteasu, zvláště kathepsin Dkokus ¹ .'nb i,.b.í..oe i-ti.v, ty katkoPslnu. '·’ í nebui ?. c· · rd

I......idsky mpzkovv knt;heps.i.n 0 se čistí ze zmrazeného Posmrtného korte.xu v Podstatě způsobem, který Popsal Nixon a Morotta, 4. Neurochem- 43, str. 507 až 516, 1984. Připraví se kortexový materiál. a nanese se na sloupec OEAE-£oPhurose^fi Průtok, frakcí se dialyžuje Proti 50 mM Tris-HCl, hodnota pH /,5 u nanese se na konkanavaj;i.n A Seplnarose'’ a eiuuje se 50 mM Tris-HCl, hodnota pH 7,5, 0,5M methyl-•x.-D-mzxnnopyrarioSidem. tluováná aktivita kathepsinu 0 se dialyzuje proti- 25 mM Tris-HCl, hodnota ph 7,5 a uloží, se při teplotě .-·*0 C (Con Á soubor} až do PoužitíPro každou zkoušku se 50 ul. Con A souboru zředí na 170 ul ve 200 mM citrátu sodném, hod.nota . ph 4,5, _ 1.50 .prídy sodné“, ho a ínkubuje se po dobu 10 minut Při, tep Lotě '4 “C 5· 15 ul zásobního roztoku sloučeniny, zředěného v dimethylsul*oxidu - Oo každé

144 r !?a k ti ií směsi ;·,· přidá substrát, v>-?př',;.>v·/ Led^-j í..r:<.· v ý teti-adrkvxpapt ϊ. C H 3 C ( G ) - A s P ~ A r g - V a 1 - T y r - ί. 1 © ~ H i s -P r o - P h e - H i. s -1.„ e ι ,ι í.... e u ~ V a 1 - T y i - ~ S e r (Seq 10 NO:3 ], Bachem Biosciences. lne., Pbilladelphia PA, k dosaženi konečné koncentrace 44 p.M v celkovém objemu 300 μ.1. Vzorky se inkubují .Při teplotě 37 C po dobu 0, 10, 20 nebo 30 minut a pak se vaří Po dobu 5 minut k ukončení reakce. Vzorky se od-st řadují—v.—milon-jod-s-t-ředivce-po—dobu--lO-minut-z-a—počtu—otáček

40000/min Při teplotě 4 C. Po odstředění se vstřikrie vždy 200 μ.1 každé reakčni směsi na C18 RPl_C sloupec (Vydac, Hesperia, CA) * !

s Perkin Elmerovým ISS 100 autovzorkováčem a eluují se gradientem 0 až 50 % acetonitrilu v 0,1% trifluoroctové kyselině rychlostí 2 ml/miri- Pík. peptidového produktu se monitoruje při 220 nm Perkin l **. r

Elmerovýmm l„C 95 detektorem a integruje se softwarem Rainiri Oyriamax. ke kvantifikaci aktivitySloučeniny, připravené způsobem podle přikladu 41 až 48 a PePsatln se zkouši, se zřetelem na inbibiční aktivitu Pro katbepsiri 0 z a., podmínek .poku.su .1 .Výsledky _ jsou „uye.dfiiny._y_ tabulce A Jar. kožtó I.C50. která se stanovuje Porovnáním aktivity kathepsinu 0 v přítomnosti inhibitoru aspartylproteašy s aktivitou kathepsino 0 v kontrolním prostředí, <'0 k tor ého. není ·^:ι· ·ou řádný inhibitor aspsrtylprotcasv ·

T....bui·'·a pokusu 1

Aktivita kathepsinu 0 (nebuněčná)

Sloučenina Struktura

P e P s t a t i r 1 Γ v a - V a 1. - V a 1 - S t a -- A a - S t a

1 CH ₃C (Ό)-Gly-Val-Val-Sta-Ala-Ihr-OH (CH₃) ₂CH “Gly-Včvl.-Val-Sta-Ala-Thr-OH

Glv-Val-Val.....Sta-Aia-Th,·· -OH

-4-4------(-C-Hv)2'C'H^—“Cl;ySŤ,-a—ί.-3;ο^-Ά·1“ϊ—'Ehr—OH------4 5 G ly - V a 1 - S t a - A1 a -· T h 1- ~ 0 K (CH₃)₂CH -eiy-Val-Sta~Ala-Th_r~OH

47. . . ............ACH ₅)2CHj.'“GlycVilzVi:i ~ílě-Sta.Thr-O.H,

8 C C H 3') .2 C H - 01 y - V a 1 - S t a - ί 1 e - A la - T h r - 0 H c 5 0 i I|M ) 0, 1 4,0 3,0

53,0 _$,_-|.θθ_-0-> 250,0 > 250,0 > 25.0,0 > 250,0 ι 45 .,1 >) υ

»)<

Irihiblce aktivity kathepsiriu 0 (riebuněčná fItjorometrická. zkouška)

Pro měření aktivity reninu se. přizpíisopbuje fluorometrieká zkouška, kterou popsal Murakami a kol-, Artal. Biochem. 110, str. 2.32 až 239, 1SS1 - Kathepsir» · D lidských jater (Athens Research and technology, Atheris, 6A)..,sei zředí zkušebriím pufrem·, 200 mM uce~ tátem sodným, hodnota pH 4,5, 150 mM chloridem sodným· na 500 ri9/ml a pak se vnese 100 pl tohoto roztoku kathepsinu do každého důlku 96 důlkové destičky.s výjimkou kontrolních důlků,do kterých se vnese jen 100 μ.χ zkušebního pufru- Zásobní roztoky sloučeniny se připravují rozpuštěním inhibitoru aspartylproteasy v dimethylsulfoxidu pro každou zkoušenou koncentraci Pokusu a pak se přidá '5 μ! zásobního rotoku sloučeniny do každého shora připraveného důlků- Slepé kontrolní důlky a důlky s enzymem obsahují vždy 5 rt dim·?t.hyj.su.Lfoxidového nosiče, ínkijtijje se po dobu lť minut Při tePiotě 25 t pro vzájemné Působení enzymu a sloučeniny, Přidá se vždy 5 rl fluorometrického substrátu

Si if -Af	cj - P r o - P h e -H :i. s	-Leu-
i Syp ;	j N 0	• ·' : . Bar	Ι·ι.·.ΐι 3
	<hy.L	su 'i., v o vid.a.
			••-i··'! Ί
L1'· J -		jíl7. !...	1,' ·}'*·' J. ! ' L
pl j.·.·. 1 .	ť.ťVt	1 00 .1.1 o	d ů j. e
!- i-?u· 1· i	dGV	(El 3.4.1	1.2,
nota P	H 3	0..
	De	stÍčky se	Pak
Mii.!.J P	i.ire,	Bedťord,	MA)
1' IÍ v-1	ΐ'·μ·ι Vfi	U délkou	4 60
zk ouše	.» ι.) l .1	sloučeninou
'0 se	nec.h.	áv á aminopePt
hy ij m	urin	(. AMC ) ,	Z Pl-C
znova	analyzuji ve	fluor
t 'i..V|- i;U ·,	,ll Vij	sládků. t	o j e
pe.P ti.d	J3V .	se měnit	oru je

.i oso r ·· , Λ.ι-.·.1<- k τπ'ϊ c.'i uci n 3/ '¢., i|l<u!i ^; '·1! J ade'i ph í .· ^;;'·Λ .

o iriKnoaci ου

:../1 r.hep tnu 0 s excitační vlnovou délkou 360 nm a emis460 riíti k hodnocen 1 t I.uorescence, zPúsohovanť)

Po dvou hodináři' ;i.Okubace Při teplotě 3/ idasa uvoLilová t f .Luorofor , --^n.do-d—m>? ř, — v každém důlku Přidáním 20 ul/dúlek 2,5mM· l..eu^—pMA (Báchoro Biosrl^-

146 ences, i ne-. Philludelph ia PA) v 10* «limeLOvisutf oxidu- Aktivita anvi.iaopeptidasy se měří jakožto vzrůst- absorbance·při 405 ri«i v UV_max mikrodestičkovérn čítači . (Molecular . Devices. ., Mento Park,· CA). - ··

Sloučeniny, připřyvvené způsobem podle přikladu 9, 12, 13, až 23, 23A, 24, 30, 41 až 43 a 48, ge zkoušejí. v koncentraci .10 ug/ml na i.nhibični aktivitu pro kathePeiri 0 způsobem podle _______ ._P.oku.su. 2·, /Ak tivita ..ka.thep.sinu -0 —-je -za--těchto--podmínek--lineárnl- -a’ výsledky· -se vyjadřují jako .-procentová inhibice kontrolní aktivity v tabulce 2; Všechny výsledky jsou vždy středními hodnotami a uvádí s směrodatná odchylka alespoň čtyř testůí

Tabulka pokusu 2

Aktivita kathePsinu 0 při nebunččnč fluorrjmetrické zkoušce

Příklad 9 12	Inhibice 44.4 12.4	kathePsinu ± 1 ,· 9 £
±	5 7	%
13	9 1,4	±	0.,.4.
20	94,8	±	0,6	Sí
21	78,3	±	3,8	%
23	96,3	i	0,9	£
2 3 Λ	5 2.. 5	•4-	4 , 7	•V TJ
24	5 5,7	:.t	0,5	ts •’3
50 '	. 65,2		3,5	£
.4 1	98,3	±	0, 1	£
42	89,5	±	1 ,3	51
43	87,9	±	2,4	%
4 5	30,6		4,3	TV ?tl

8 · ..... ' ·'' 79,9 ± 2,7 S ••inhibice,‘aktivity kathePsinu 0' (nebunečná zkouška;

_....... _.._Z:k.ou.šk._<-jii-_:měř.ení -aktivity aspartylpr-oteasy-za použiti-·chromo. senního sub str á tu ..se používá... ké stanoveni .inhlblčnl konstanty k _η·

Pro zkoušenou sl oučeninu - Zmrazená lidská Placenta!ní tkáň se nechá roztát a homogenizuje se ve 10 mM Tris-HCl, hodnota pH 7,5 a

- 147 0,5% Brij 35 v ni; i., <; i či Waring. Homogoni:· át. se odstřeluje za poctu otáček 10000/min po dobu 30 minut., v rotoru Servali OSA. Hodnota pH se nastavuje ne 3,7 za použiti 5,7M kyseliny chlorovodíkové a Pak se přidá oct.an sndný do koncentrace O.IM. Získaná směs se -Inkubuje po dobu 30 minut při teplotě 0 “C za 'vytvoření sraženiny. Tato sraženina se odstraňuje odstředováním (po dobu 30 minut l ' * .

za počtu otáček 10000/min)- Kyselý supernatant se nanese na chromatografický sloupec (pepsatinylagarosa vyvážená 0, 1M octariem sodným* . hodnota ..pH- 3,5, 0,5% Brij 35 «· 0,'1M chlorid sodný) , promývá se až do návratu OO2SO na základní hodnotu a pak se eluuje 50 mM Tris-HCl, hodnota pH 8,6, 0,1% Brij 35 a 1M chlorid sodný.

Eluarit se dialyzuje proti systému 10 mM fosfátu sodného, hodnota pH 7,0, 0,1% Brij '35 a 0,1M chlorid sodný a pak se nanese na 1 ml OEAE-Sephacel slouPěc. vyvážený týmž Pufrem. KathoPsinu 0 se získá v přerušené frakcienzymová směs (12.5 ul Pudru (0,'fM mravnčarr sodný za hodnoty pH 3,7), 1 ul O,1M zkoušené sloučeniny, 4 ul dimethylsulfoxidu, enzym a voda do celkového objemu 230 pí) se míchají čí předehřívaj 1. se Po dobu čtyř minut před přidáním chromncjenního substrátu!-',·! ohřát i. se Přidá f.-nzymrjvá emás do 2 0 pí.. 52 5 ul. zXy.tíní z i .1 bx I. r á ~ !:o'-';?.ho rozinku. K on.r · o ;1 reakční smě··· ou př i pr ,·<νί Podobní bez přidání --01--.-- r.n .-.ťi i ny . krocen to'·'.-·.! i, nhi.hlc.e Pc-ča Letni ryi -hlosbi reakce v Přítomnosti u^;u·'··..· koncentrace zkoušeno sloučeniny (to je 4 u.M) se muče stanovit Pro zkoušenou sloučeninu monitorováním reakční směsi Paralelně s kontrolní reakcí.

Pokles absorbance v oboru 284 až 324 om se sleduje nu (7 spek trofotometru s řadou diod Hewlett .Pacard S4S2A, vybaveném Přnnačeoem a termostatem k. udržení teploty 37 C. Absorbunce se odečítá v 0.Ί -sekundových intervalech každé 2 nm nad štítovou oblastí- Každá kyveta se vzorkuje Pět krát: výsledná odečteni se zPumérují pro každý časový bod-· Pro každou kyvetu se odečtení opakuje 3 «časovým cyklem 17,2 sekundy po přibližně 1000 sekundPnčáteční rychlost se vypněte ze smyčky y příběhu lineární fáze reakce a pak. se vynese proti koncentraci substrátu na začátku reakce. Tyto hodnoty se dosadí do standardní Mtohnelis-Mento- MS rm^vy rovritce p o< .11 o Ha r Q i .1 <ti” 1'.. >?'' y aiíalysy , j.¹'·.,;. :-11-¹ 1.. t-l -a ^J y i-¹ < '>.. t '-íi íu hodnota Km pco substrát- Hodnota A se stanoví využitím Qixonovy konstrukce- a vypočte '..se .za Použití nelineární křivky ( [£] t/K-í 0,2) nebo Hendersenovým způsobem (0,2 < (EJt/K-í - 10) > jak. úhoru

-popsáno- .....

Sloučeniny podle příkladu .1 až 11» 14. až 19, 22 až 28 a 30

-až- 37 se —zkouší na-inhib.iční...ai<.tiyitu..kAthepsinu „_D Podle_P«?kusu __ 3. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 3A a 3B.

Tabulka pokusu 3A

Vzorek.	Ki (μ.Μ)
1	1,16000	±	0,26000
2	0,75000	±	0,14000
Ž4	6,20000
5	0,24000
S	1,80000	±'	0,26000
7 ...........	. 0,42000	±	0,06000
8	1,17000
9	0,82000
10	5,51000
!	2,30000	4- ·	0,20000
1 6	2, 20000	:i::	0,20000
1. ů.	0,90000		0,10000'
0,	0,07300
2.4	0,04200
2 5.	1,44000.	±·	0,26000
26	2,30000 .		0,41000
1*1 f-> ,T ,'j	0,02300	..p.	0,00300
34	0,01800
	....----- --..-0 .,-06600,--		- —- - .......-
'36'	------ - · .0,00039	di	0,00004
--37-· ----	..........- --0,00054 .	±	0,00.0.07
3 S	.- . .... .0,-00047 ’		,0,00,007 _
3 9	0,00053	H-	0,00009
4'0	0,00098		0,0.00 1 2

149

Tabulka	pokusu 3B
Vzorek	% inhibice	při 4 μ.Μ
3	40
1 1	3 2
14	22
15	49
16	36
19	48
27	40
28	·. . .... 6
30	28
31	43
32	12
Pokus 4
inhibice	Produkce (3AP (buněť	íná zkouši

Dvě řady buněk (řada buněk lidské ledviny 293 a řada vaječníkových, CHO, buněk čínského křečka) se stabilně trarifektují genem pro APP-751 obsahujícím podvojnou mutaci Lyse51-Meteš2 na Asioes 1-I..euó»2 (APP-751 číslování), obecně označovaným švédská mutace, způsobem, který popsal Citron a kol-, Nátuře 360, str- 672 až ó?4, 1992. Trantektované buněčné řady se označují jako 293 751 SWE a CHO 751 SWE a nanesou se na 96 důlkové destičky Corning za '2.5 x 104 nebo 1 x 10^ buněk na důlek do minimálního esenciálního Prostředí Oulbecco s W SS zárodečného hovězího sera· Inkubuje se přes noc při teplotě 37 C v inkubátoru vyváženém 10 X oxidu uhličitéhri. prostředí se odstraní a nahradí se 200 μ.Ί na důlek prostředím , obsáhujícím inhibitor asPartyIproteasy· Po dvou hodinách operace předběžného zpracování se prostředí opět odstraní a nahradí se čerstvým prostředím, obsahujícím inhibitor aspartylproteasy a buňky se irikubtijí Po dobu dalších dvou hodin.

Zásobní roztoky inhibitoru aspartylproteasy se připraví v di~ methylsulfoxidu, takže konečná koncentrace Při zpracování nepřesahuje 0,5 % dimethylsulfoxidu- Po zpracování se destičky odstřelují v jednotce. Beckmart 6PR za počtu otáček. 1200/min po dobu pěti

150 minut při teplotě místnosti za získání zlomku buněčné pelety z kondiciónovaného prostředí- 2 každého důlku se přenese 100 sil kondicionovariého prostředí na destičku ElISA, předem povlečenou protilátkou 266 proti βΑΡ-13-28 (Seubert a kol. , jak. shora uvedeno) a uloží se přes noc Při teplotě 4 C. ElISA zkouška za použi-tí—značené—proti lát k.y_j6£.6—(proti__JiAH=_1rJ.6.)__se_proy.ádí_příš-tí_den.

ke zmgřerrí množství produkovaného [iAP.

Cytotoxické působení sloučenin se měří upraveným způsobem, který popsal Hansen a kol., J. Immuri- Heth. 119, str. 203 až 210, 1989. Oo buněk, zbylých vetkáni kultivační destičky, se přidá 25 pl zásobního roztoku 3 , (4,5-dimethylthiazol“2-yl)-2,5-dif eriyltetrazoliumbromidu (MTT) (5 mg/ml) do konečné koncentrace 1 mg/ml. Buňky se inkubují po dobu jedné hodiny při teplotě 37 C a buněčná aktivita se ukončí přidáním stejného objemu MTT lysového pufru (20% [hmotnost/objem] dodecylsulfat sodný v 50% dimethylformamidu Při... hodnotě ,pH .4,7 ) . .Kompletní extrakce .se .dosáhne,.Přes. noc _P.ro.třepáváním při teplotě místnosti- 'Rozdíl 0Ds62nm a 00 550 _nm se měří mikrodestičkovým čítačem Molecular Devices UV_max jakožto indikátor životnosti, buněk.

Výsledky |3AP t.L ISA se vynesou ria standardní, křiv!·'.!,!, a vyjadřují se jakožto ng/ml pePtisu pAk. k riormu lu.cac Ϊ.. cy tntnxii':.lV.y se tyto výsledky SAP dělí výsledky Mil a vyjadřují se jako procent) výsledků pro koritrolu prostou drogySloučeniny připravené'podle příkladu 9, 12, 13, 20 až 23, 23A, 24, 30, 41 až 43, 45 .a 48, gg zkoušejí se zřetelem na inh-j.·biční aktivitu produkce |3AP v buňkách při koncentraci W u.g/ml za podmínek, pokusu 4. Výsledky pokusu 4 v tabulce 4 jsou vždy středními hodnotami a uvádí se směrodatná odchylka alespoň Šesti opakovaný c h—te s iů--¹----^:;-------~-----------^:---------'---~~

Jl

Ψ ti e

Tabulka Pokusu .4

I nh -j. b i. č ní „.Akt i Y i t.a... p rn dju.kn.e. A P y. b uňk á ch Příklad ..... Inhibice Produkce BAP

44,4 ± 7,7 %

12,4 ± 6,0 %

151

13	91,4	+	3,9 %
20	94,$	±	3,1%
21	78,3	±	1,5%
23	96,3	±	2,8 %
23A	32,5		3,3 %
24	92,7	±	1,4 %
30 .	69,2	±	2,2 %
41	-6,2	±	6,2 %
42 . .........	13,1	i	7,5 %
43 .	, - 16,2	±	8,5 se
45 ·'	3,3	±	1,1 %
48 z	.··. 1,6	±	19,6%

Sloučeniny Podle vynálezu se mohou Podávat pro profylaktické a/nebo terapeutické ošetřování nemoci, které souvisej! s ukládáním βΑΡ, jako je Alzheimerova nemoc, Dowriflv syndrom, a Pokročilé stárnutí mozku- Při terapeutickém použití se Sloučeniny podávají jedinci v dostatečném množství k zábraně dalšího ukládáni βΑΡ destiček- Specifická dávka sloučeniny, podávaná podle vynálezu k dosažení protytaktického a./nebo terapeutického účinku, závisí. vždy na''sku tečnoštech ošetřovaného případu. jako jsou například Podávaná sloučenina, cesta podám, ošetřovaný stav a ošetřovaný jedinec. Typická je denní dávka· účinné látky přibližně 0,01 mg/kg až přibližně 50 mg/kg tělesné hmotností- Výhodnou je dávka přibližně 0,05 mg/kg až přibližně.· 20 mg/kg a ideální je dávka Přibližně 0,10 mg/kg až přibližně 120 mg/kg tělesné hmotnostiPři profytaktickém ošetřování se podává sloučenina Podle vynálezu jedinci náchylnému r<a Alzheímerovu nemoc nebo na onemocnění sou vise jící s βΑΡ , který však touto rie®ocí ještě netrpí- Takový jedinec se může identifikovat genetickým screeningem a klinickou analysou, jak jé v lékařské literatuře popsáno (například 6oatee, Nátuře 349, str- 704 až 706, 1991). Sloučeniny jsou schopné inhibovat.· nebo předcházet vytvářeni βΑΡ.destiček v symptomaticky časném stadiu, s výhodou předcházet i počátečním stavům β-amylrjidriímu onemocnění..

152s-loučeniny se mohou podávat., nfenýin způsobem, jako je podání orální, rektální, transdermální, subkutanní» intravenosní, inti-a muskulární a intranasální- Sloučeniny podle vynálezu se s výhodou zpracovávají Před podáním na farmaceutické prostředky.

Takové farmaceutické prostředky obsahuji hmotnostně 0,1 až 99 % účinné látky, vztaženo na farmaceutický prostředek, jako celek.. Výrazem.· farmaceuticky,..vhodný se-zde vždy míní nosič, ředidlo nebo excipient, který je kompatibilní s ostatními, složkami farmaceutického Prostředku a nepůsobí nepříznivě na ošetřovaného jedince. .· ... ,

Například typický farmaceutický prostředek pro intramuskulárrií vstřikování obsahuje přibližně 1 yg až 1 mg sloučeniny podle vynálezu v 1 až 4 ml sterilní pufrované vody. Typický farmaceutický prostředk pro iritravenosní infuzi obsahuje 1 až 100-mg sloučeniny Podle vynálezu ve 100 až 500 ml sterilního Ringerova roztoku-.

fi

-.........Farmaceutické .fiícostředky podle vynálezu se. připavují o sobé známými způsoby za použití snadno dostupných složek. Pro výrobu farmaceutických prostředku se účinná látka obecného vzorce I

Podle vynálezu zpravidla se zapouzdřuje do nosiče, pírku nebo. jiného to být pevná, poloP misí nosiči nebo se ředí nosiči. nebo terý může mít formu kapsla, šátku. pabalu- Pokud nosič slouží jako ředidlo, může vná nebo kapalná’ ..Látka, která působí jako nosič, excipient nebo prost.ředí pro účinnou látku- Farmaceutické prostředky mohou proto mít formu tablet, pilulek, prášků, pastilek, sáčků, elixírů, suspenzí, emulzí, roztoků, sirupů, aerosolů (jakožto Pevné^- nebo kapalné prostředí), mastí, obsahujících například až' hmotnostně. 10 ·% účinné látky, měkkých a tvrdých želatinových kapslí, čípků, sterilních vstřikovatelných roztoků a sterilních balených - prášků. ------- -.....- ——............··—.......Často je žádoucí nebo nutné zavádět farmaceutický prostředek přímo-nebo nepřímo do - mozku - Přímý způsob.. zpravidla-,, zahrnuje umístění.· drogu uvolňuj ícího kate tru do. veritřikulárriíhp systému o.Setřovaného jedinčé k obejití bariery krev-mozek.. Nepřímý způsob, kterému se obecně dává přednost, zahrnuje formulaci sloučenin

153 k t-jtenciaci drogy konve!··:·:! hydrofilních drog na v lipidu rozpustnou drogu- Latenciace se obvykle dosahuje, blokováním skupin hydroxylových, karboxylových a primárních «minoskupin, obsažených v droze, k dodáni droze vyS'ií. rozpustnosti v -lipidu a k usnadněni transportu drogy pros barieru krev-mozek.. Nebo se uvolňováni hydrofilních drog může podpořit, Intraarteriální infusí 'hypertoňíckých roztoků, které mohou přechodně otevírat barieru k.rev-mozek.

V ............................................................- - --------------........ Průmyšídvávyužitelnost

Sloučeniny, schopné inhibovat produkci intracelulámího· (3~a^_ myloidu, jsou použitelné pro výrobu farmaceutického prostředku Pro předcházení a ošetřování Alzheimerovy’ „„nemoci a chorobných stavů, souvisejících s ukládáním • &-amyloidi.i. Takové sloučeniny se vyoírají dvoustupňovou zkouškou, Přičemž se nejdříve zjišťuje Případná Inhibiční aktiv·? ta Pro a spař tylproteasu in vitro y nebuněčném systému a Při zjištěné v buněčném systémuitě se sloučeniny zkoušejí

Claims (11)

1. PATENTOVÉ o

   ¢-.

   L__ _

   NÁROKY

   1. Inhibitor aspartylproteasy nebo jeho farmaceuticky vhodná sůl, použitelný pro inhibici produkce (S-amyloidního peptidu.
2. 2. Inhibitor aspartylproteasy nebo Jeho farmaceuticky vhodná sůl. použitelný pro inhibici produkce β-amyloidního peptidu podle nároku 1, přičemž inhibitorem aspartylproteasy je inhibitor, kathepsinu D.
3. 3. Inhibitor aspartylproteasy nebo jeho farmaceuticky vhodná sůl, použitelný pro inhibici produkce β-anyloidního peptidu. podle nároku 1 obecného vzorce I

   V'

   R (I)

   H kde znamená i 1, 2. 3, nebo
4. 4, alkylovou skupinu s 1 aš 6 atomy uhlíku, arylovou skupinu, cyklohexylovou skupinu nebo skupinu -3-R^lx, kde znamená R^lx arylovou nebo cyklohexylovou skupinu, skupinu obecného vzorce

   R¹ ií

   V kde znamená

   R¹'

   R^2tJ na sobě nezávisle atom vodíku, alkylovou skupinu s 'l aš 6 atomy uhlíku, arylalkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém podílu, heterocyklálkýlovou skupinu š 1 až'4 atomy uhlíku v alkylovém podílu. nenasycenou heterocyklaikylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém podílu, nebo

   R^lu a R^2w dohromady s atomem dusíku, na který jsou vázány.vy155 tvářejí heterocyklickou nebo nenasycenou heterocyklickou skupinu za podmínky, že atom dusíku nemfiše být kvarternizován, q 0, 1, 2. 3 nebo 4,

   R² atom vodíku, atom halogenu, alkylovou skupinu s 1 aš 6 atomy uhlíku, alkoxyskupinu.s 1 až 6 atomy uhlíku, alkylthioskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, nebo aminoskupinu, nebo

   V znamená skupinu obecného vzorce kde znamená j 1 nebo 2

   R^3w atom vodíku, formylovou skupinu, karbamoylovou skupinu nebo skupinu -<8>e-X-R°, kde znamená B skupinu -CCQ>- nebo -S<0)r-, k 0, 1 nebo 2, e Ω nebo 1,

   X skupinu -CCH2>^- . -CGH2 )_m-0-CCH2 >r>- nebo -CC1Í2 )m-NR^x-CCH2 >n- . kde znamená g 0, 1 nebo 2, m a n na sobě nezávisle 0, 1 nebo 2, ft '

   R^x atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 ato._r fy. my uhlíku,

   R° alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, aIkoxykarbonylovou skupinu s 1 aš 4 atomy uhlíku v alkylovém podílu, formylovou skupinu, alkanoylovou skupinu s 2 až 6 atomy uhlíku, aminosknpinu, trifluormethylovou skupinu, alky laminoskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, dialkylaminoskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, arylovou skupinu, heterocyklickou skupinu nebo nenasycenou heterocyklickou skuP i nu,

   156

   R² vždy na sobě nezávisle aminokyselinový postranní řetězec, skupinu vzorce '

   -CH2CH3, -CH₂CH₂CIb, -CH2 <CH₂ )₂CH₃ , -C<CH₃>₃, -CH₂S02NH₂, CHaCN. -CClfeJr-X¹-^®. -<CH₂ )_s-C<0)NR^2bR^2c , nebo -<CHs-3(0)κ(1-N<R^2d)-tetrazol-5-y1], kde znamená r, 3 a t vždy na sobě nezávisle 0, 1 nebo 2, _

   X¹ vazbu, dvouvaznou skupinu alkylovou s 1 až 4 atomy uhlíku, dvouvaznou skupinu alkenylovou s 2 až 4 atomy uhlíku, dvouvaznou skupinu alkinylovou s 2 až 4 atomy uhlíku, skupinu -CCCD-Q-, -O-CCO)-, -CCOiNR²¹²*-, V -NR^-CCO)-, -NR²*³-, -CCO>-; -0- nebo -SCO)r-,

   R²* alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, arylovou skupinu, arylalkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém podílu, heterocyklickou skupinu, heterocyklaikylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém podílu , nenasycenou heterocyklickou skupinu nebo nenasycenou heterocyklalkylovou skupinu s 1 aš 4 atomy uhlíku v alkylovém podílu,

   R^2b atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

   R^2c aminoskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, .-CCH₂ >m-dialky laminoskupinu s i .až 4 atomy uhlíku v alkylovém podílu, arylovou. skupinu, arylalkylovou skupinu s 1 až. 4 atomy uhlíku v alkylovém podílu, . heterocyk!ickou, skupinu, heterocyklaikylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém podílu, nenasycenou heterocyklickou skupinu nebo nenasycenou heterocyklalky lovou skupinu s 1 až '4' atomy uhl íku * v alkylov ém pod ί1u,

   R^2d atom vodíku, alkylovou skupinu 3 1 až 6 atomy uhlíku, arylovou skupinu, nenasycenou heterocyklickou skupinu, nenasycenou heterocyklalkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém podílu, nebo arylalkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém podílu.

   157 kde znamená

   A skupinu -Cffe.- nebo -C

   158 * arylovou skupinu nebo nenasycenou heterocyk1ickou skupinu, Y¹ ' heterocykl ickou skupinu, hydroxyskupinu nebo aminoskupinu.'

   R^3a skupinu vzorce

   R^3b skupinu vzorce

   1) —N-C—R^ť

   P 4 nebo 5,

   1 ...... 3, 4, nebo 5._ _,_ . _._ R⁴ vždy na sobě nezávisle atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, nebo hydroxyalkylovou skupinu s 1 až 4

   159 v;

   atomy uhlíku v alkylovém podílu,

   R⁶ _a R⁶ vždy na sobě nezávisle atom vodíku, hydroxyskupinu. alkylovou skupinu s 1 aš 6 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 aš 6 atomy uhlíku, aminoskupinu. alkylaminoskupinu s 1 aš 4 atomy uhlíku v alkylovém podílu, hydroxyalkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém podílu, karboxyskupinu, alkoxykarbonylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém podílu, karbamoylovou skupinu, N-alkylkarbamoylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém podílu, arylovou skupinu, heterocyklickou skupinu nebo nenasycenou heterocyklickou skupinu, za podmínky, že v případě, kdy znamená

   Cl) R skupinu vzorce ,

   R¹ pak znamená

   V skupinu obecného vzorce

   R^3w formylovou skupinu, karbamoylovou skupinu nebo skupinu -CB>e-X-R°, kde znamená B skupinu -CCG)C2) R skupinu vzorce .H

   N j _R4w

   160 pak znamená

   V skupinu obecného vzorce pak znamená . : a ¹

   R¹ arylovou skupinu, cyklohexylovou skupinu nebo skupinu -S-Ri*. C kde znamená R^lx ary lovou nebo cyklohexylovou skupinu, nebo 1_ehO—farmaceuticky—v-hotiná-sul—---------------²-------------4- Inhibitor aspartylproteasy nebo 3eho farmaceuticky vhodná sQl. použitelný pro --dle nároku 3 obecného vzorce I.

   kde znamená

   161 i 1,

   R¹ skupinu vzorce -CHCCH3>2 nebo fenylovou skupinu, V skupinu obecného vzorce 'íř- τ™ ý?⁴'

   Jí kde znamená j 1 nebo 2

   R^3w atom vodíku nebo skupinu -B-X-R°, kde znamená B skupinu -C<0)- nebo -SCO>2-, ,

   X skupinu -CCHaíg·- nebo -CCH2 )m-0-<CH2 )n^_ . kde znamená g o, m a π na sobě nezávisle 0, 1 nebo 2,

   R° alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, aryiovou skupinu nebo nenasycenou heterocyklickou skupinu,

   R² aminokyselinový postranní řetězec, skupinu vzorce -CH2CH3, -GH2CH2CH3. -CH2<CH₂>2CH3 . -ČfeCM ftetó -CH2-R²³, kde znamená

   R²³ arylovou skupinu, skupinu vzorce

   V

   R-

   R o

   3w nebo

   162

   O ] _R4w

   OH kde znamená

   Y fenylovou skupinu

   R⁴** aminoskupinu a

   R^3a skupinu vzorce -CCO1NHíter.c—buty-lX,-za podmínky, Se v případě, kdy znamená R skupinu

   R.

   6.

   znamená i 2 nebo jeho farmaceuticky vhodná sůl.
5. 5. Inhibitor aspartylproteasy nebo jehofarmaceuticky vhodná sů_l_. použitelný pro inhibici.„ produkce., β-amylo.i dní ho. peptidu__po--—.....

   dle nároku 3 obecného vzorce II,

   R⁷-61y-CR® )f-Thr-OH (II) kde znamená'

   R^z alkylovou skupinu s 1 až '
6. 6 atomy uhlíku, formylovou‘skupí nu; alkanoylovou skupinu s 2 až 6 atomy uhlíku, f . 1 az 6,

   R⁸ na sobě nezávisle aminokyselinový zbytek, štatinovou skupinu nebo derivát statinové skupiny, za podmínky, že

   Cl) v případě, kdy ΕΓ znamená 1, pak alespoň jeden symbol R⁸ musí znamenat štatinovou skupinu nebo derivát statinové skupiny,

   62-) —j es t,-n že^- zn am en á^—f“ 3—až^-6T celT«JvV“ stá Víno vy c lF~šku- pin nebo derivátů statinové skupiny ve výraze -CR^a)f- nemůže být vyšší než 2, nebo její farmaceuticky vho.dná_s.fi,L._^_.__---Inhibitor aspartylproteasy nebo jeho farmaceuticky vhodná

   163 sůl, použitelný pro prevenci nebo ošetřování Alzheimerovy nemoci.
7. 7. Inhibitor aspartyIproteasy nebo jeho farmaceuticky vhodná sůl, použitelný pro prevenci nebo ošetřování nemocí, souvisejících s β-amylotdním peptidem.
8. 8. Způsob identifikace inhibitoru produkce (ϊ-amy loidního peptidu vyznačuj ící’* se t í m , že se (1) zavádí inhibitor aspartyIproteasy do testovaného systému, <25 měří se produkce 3-amyloidního peptidu v testovaném systému a <3) porovnává se produkce (ϊ-amy loidního peptidu v testovaném systému s produkcí fl-amyloidního peptidu v kontrolním testovaném systému, do kterého se inhibitor aspartyIproteasy nezavedl.
9. 9. Způsob podle nároku 8, vyznač· ují cí se tím,, že se inhibitor aspartyIproteasy identifikuje měřením aktivity asparty1proteasy nebuněčnou zkouškou v přítomnosti nebo v nepřítomnosti zkoušené sloučeniny.
10. 10. Způsob podle nároku 8,vyznačuj ící se tím, se měří produkce (ϊ-amy loidního peptidu < 1 > vystavením inhibitoru proteasy buněčné zkoušce a <2) měřením buněčných charakteristik, souvisejících s produkcí.(iamyloidního peptidu.
11. 11. Způsob identifikace inhibitoru produkce (i-amyloidního peptidu, vyznačující se tím,

    Cl) se identifikuje inhibitor aspartyIproteasy, ¢2) se měří produkce (ϊ-amy loidního peptidu v buněčné zkoušce a <3) měří se produkce β-amyloidního peptidu v tělové kapalině zkušebního zvířete.