CZ124897A3

CZ124897A3 - Oral cyclosporin preparation

Info

Publication number: CZ124897A3
Application number: CZ971248A
Authority: CZ
Inventors: Moo J Cho; Ralph E Levy; Philippe J Pouletty; H Robert Floc; Christian Marle
Original assignee: Sangstat Medical Corp; Univ North Carolina
Priority date: 1995-08-25
Filing date: 1996-07-31
Publication date: 1997-09-17
Also published as: KR100294935B1; IL120673A0; SK53697A3; NO971890L; BG62875B1; HUP9801052A3; CA2202887A1; PL319898A1; EP0789561A4; WO1997007787A1; DE69632125T2; NZ313899A; JPH10509462A; DE69632125D1; SI9620014A; HUP9801052A2; EP0789561A1; HK1001956A1; IS4460A; CN1164828A

Description

Oblast techniky

Vynález se týká orálních cyk1ospori nových prostředků

Dosavadní stav techniky

Navzdory snahám o zabránění odhojování štěpu vlivem nepřizpůsobení mezi hostitelskou a donorovou tkání ve většině transplantačních procesů, kdy je donorový orgán dárce zaveden do hostitele, je imunosupresivni terapie rozhodující pro zachování životnosti dárcovského orgánu v hostiteli. V transplantačních procesech bylo použito mnoha imunoterapeutických činidel, včetně azathiopri nu, methotrexatu, cyklofosfamidu , FK-506, rapamycinu a kortikosteroidů. Mezi činidla nacházející rostoucí uplatnění v imunosupresivní terapii patří cyklosporiny, vzhledem k přednostnímu účinku na reakce zprostředkované T-buňkam i.

Cyklosporiny jsou třídou cyklických polypeptidů, sestávajících z jedenácti aminokyselin, které jsou produkovány jako metabolit druhem houby Tylopocladium inflatum Gams. Zjistilo se, že cyklosporiny reversivně inhibují imunokompetentní lym⁷ focyty, zejména T-lymfocyty, v G_o nebo Gi fázi buněčného cyklu. Bylo pozorováno, že cyklosporiny reversivně inhibují produkci a uvolňování lymfokinu. Ačkoli je známa řada cyklosporinů, je nejrozšířenější cyklosporin A.

Existují zprávy o tom, že použití cyklosporinu A prodlužuje přežívání transplantátů, včetně pokožky, srdce, ledvin, pankreasu, kostní dřeně, tenkého střeva a plic. Ukázalo se, še v allogenických transplantacích potlačuje cyklosporin A humolární imunitu a do značné míry imunitní reakce zprostředkované buňkami, včetně: odhojování štěpu, prodloužené hypersensitivi2 ty, experimentální alergické encefalomyelitis, Freundovy adjuvant arthritis a nemoci systému štěpu - hostitel. Ačkoli s cyk losporinem A byly zaznamenány úspěchy, musí se s podáváním činidla po transplantací pokračovat, jelikož přednosti cyklosporinu jsou reversibilní a jakmile se podáváním cyklosporinu A přestane, dojde k odhojení tranplantátu.

Ačkoli byly vyvinuty prostředky cyklosporinu jak pro orální, tak pro intravenosní podání, dává se přednost orálnímu podávání, vzhledem ke snadnějšímu podávání a větší přijatelnosti pro pacienta. Kromě toho může intravenosní podávání cyklosporinu vést anafylaktickým reakcím, což je vedlejší účinek neznámý při orálním podávání. Orální cyklosporinové prostředky, které byly vyvinuty a jsou běžně na trhu, zahrnují jak měkké želatinové kapsle tak roztoky, jež se oba prodávají pod označením Sandimraune^R a Neoral™.

Při používání orálních cyklosporinových prostředků v imunosupresivní terapii musí si být jak uživatel, tak výrobce vědom mnoha rozporů. U orálních cyklosporinových prostředků může být biologická dostupnost cyklosporinu omezena vzhledem k nemísitelnosti cyklosporinu s vodou a vzhledem k jeho tendenci vysrážet se ve vodném prostředí. Kromě toho koncentrace cyklospor inu.přítomného v orálních prostředcích může být omezena vzhledem k hydrofobní povaze cyklosporinu. Kromě toho absorpce cyklosporinu v zažívacím traktu může být různá od jedné formulační šarže ke druhé, což vyžaduje stálé sledování úrovně cyklosporinu v krvi v průběhu léčení. Konečně balení a stálost při skladování jsou u orálních prostředků sporné. Například u měkkých želatinóvých kapslí s cyklosporinem musí být použito vzduchotěsného balení, což je nákladné vzhledem k objemu a vysoké ceně. Kromě toho mohou být cyklosporinové prostředek nestálé při nižších teplotách, neboť může docházet ke krystalízaci cyklosporinu.

Této problematiky se týká četná literatura:

Physician's Desk Reference str. 2071 až 2074 (1994) popisuje orální cyklosporinové prostředek prodávané pod obchodním názvem Sanďimmune^R.

Orální cyklosporinové prostředek jsou také popsány v letáčku balení Neoral™ (Sandoz Pharmaceutical Corporation, East Hanover, New Jersey, 07936 (1995).

Cyklosporiny a jejich deriváty popisují americké patentové spisy číslo 4 220641, 4 639434, 4 289851, 4 384996 a

047396, přičemž jde o intravenosní prostředky k podávání cyklosporinu.

Orální cyklosporinové prostředek popisují americké patentové spisy číslo 4 388307, 4 970076 a 4 990337.

Příprava kapslí pro orální podávání farmaceutických prostředků je popsána v amerických patentových spisech číslo 4.822618, 4 576284, 5 120710 a 4 894235.

Žádoucími orálními prostředky cyklosporinu by byly prostředky, které by řešily alespoň některé z uvedených rozporů. Ideálně by měl orální prostředek podporovat biologickou dostupnost, měl by obsahovat vysokou koncentraci cyklosporinu a měl by být vhodný k přípravě tvrdých kapslí.

Podstata vynálezu

Cyklosporinový prostředek spočívá podle vynálezu v tom, že obsahuje cyklosporin, alespoň jedno alkanolové rozpouštědlo se 2 až 3 atomy uhlíku a alespoň jednoh neiontové polyoxyalkylenové povrchově aktivní činidlo, přičemž je povrchově aktivní činidlo voleno ze souboru zahrnujícího polyoxyethylenové alkoholy a monoestery mastných kyselin, ethoxylovaných polyolů se 4 až 6 atomy uhlíku.

Vynález se tedy týká cyklospori nových prostředků a jejich použití v imunosupresivní terapii. Ve prostředcích podle vyná4 lezu. je cyklosporin obsažen, v) orálně ;při jatelném nosiči sestávajícím' zi alespoň’ jednohot . alkanolového rozpouštědla' se> 2. až 3 atomy .uhlíku v kombinaci s alespoň jedním neiontovým povrchově aktivním činidlem. Prostředek podle vynálezu může dále obsahovat jedno nebo několik pomocných rozpouštědelpřičemž'v·; úvahu přicházejí' testery a . diolyito mastných, kyselin.; Cyklosporinové prostředky podle vynálezu mohou být baleny v tvrdých kapslích. Začleněním polyóxyalkylenového povrchově aktivního činidla po Jzředění. stálé dispersej vek, vodném, prostředí Sse získa jí amorfní (biologicky dostupné, cyklosporinové; částice '.velikosti nanomilimetrň¹.- ot ' .· _L « í .

'.Vynález ·. bií že'doplňují následující . obrázky přičemž, na oseň xi;j s ou i'í u v ed e ny / jednotlivé b;prostředky₄ ípodle , číselní z tabulky .vipří kládové části'.;

>3,1 ' * <; i i * .1 ' j : f i ' V ,

Přehled obrázků: o\ - · r t ϊ * . t ’ ·.-».·'· * v Ί , ’ ? i- ’ ·»·. ? t , c;sLo „ »/j s f . n f ;» < ><·} :

* !- * i V ' .! I f t i 4 £ , ι £!><! ,

Z ;r.^r 3 ¹ C ’ i ί X ,

Na obr. K jsou vyznačeny vrcholné vkóncentracéi cyklosporinu (Cmax) dosažené¹ Jv krysách f po podání několika· orálních prostředkům pod le. vynálezu , př.i čemž, hodnota ICntax' je z názor ně na, -ja.ko/rě lativní’. hodnota porovnaná s, C/ax dOsaženým v ,pří páděni orálního prostředku Sandimmune^R* (SO);a» je vynesenai naroseny:.

-.-¼^ . >'i j·· _; ů-v. t<, lijou !»t·, s-i pr i ·*> i<* - r ' i»o !.««'.

NaLobr .1.2‘.’je .vyznačena doba’r .(Tmax )í kdy ;nastal vrchol· Cnaxi.pro každý prostředek!z,sobr.rl·,i přičemž Tmax je znázorněna jako relativní hodnota porovnaná s Tmax orální prostředek Sandimmune^R(SO) a Je* vynesena, na ose; y . u »' , r^rř*í · ·: * ί.'-,ί.'· i; . -.ον >. 'i ·.· /--rčtn ·.<'*·. nr ň.rtř-4Na, obr/.>,3 jeř relativní f plocha· pod' křivkou závislosti koncentrace·· víkrvit sa. časur (AUC )r pros každý· prostředek - z· obr;.. 1',). př i :čemž AUC fje: znázorněna jako're lat i vní {hodnota porovnaná srAUC i,pro orální, prostředek Sandimmúhe^R (SO)) a; je* vynesena na ose y.

·' t tr· j t ί 1 ř í v . 1 o λ r :

Na obr‘.;i4“je vrcholná koncentrace ( Cmax )í.dosažená ,ut lidí, kte4 lezu je cyklosporin obsažen v orálně přijatelném nosiči sestávajícím z alespoň jednoho alkanolovébo rozpouštědla se 2 až 3 atomy uhlíku v kombinaci s alespoň jedním neiontovým povrchově aktivním činidlem. Prostředek podle vynálezu může dále obsahovat jedno nebo několik pomocných rozpouštědel, přičemž v úvahu přicházejí estery a dioly mastných kyselin. Cyklosporinové prostředky podle vynálezu mohou být baleny v tvrdých kapslích. Začleněním polyoxyalkylenového povrchově aktivního činidla po zředění stálé disperse ve vodném prostředí se získají amorfní biologicky dostupné cyklosporinové částice velikosti nanomilimetrů.

Vynález blíže doplňují následující obrázky, přičemž na ose x jsou uvedeny jednotlivé prostředky podle čísel z tabulky v příkladové části.

Přehled obrázků

Na obr. 1 jsou vyznačeny vrcholné koncentrace cyklosporinu (C(#ax) dosažené v krysách po podání několika orálních prostředků podle vynálezu, přičemž hodnota Cmax je znázorněna jako relativní hodnota porovnaná s Cmax dosaženým v případě orálního prostředku Sandimmune^R (SO) a je vynesena na ose y.

Na obr. .2 je vyznačena doba (Tmax) kdy nastal vrchol Cmax pro každý prostředek z obr. 1, přičemž Tmax je znázorněna jako relativní hodnota porovnaná s Tmax orální prostředek Sandimmune^R(SO) a je vynesena na ose y.

Na obr. 3 je relativní plocha pod křivkou závislosti koncentrace v krvi a času (AUCj pro každý prostředek z obr. 1, přičemž AUC je znázorněna jako relativní hodnota porovnaná s AUC pro orální prostředek Sandimmune^R (SO) a je vynesena na ose y.

Na obr. 4 je vrcholná koncentrace (Cmax) dosažená u lidí, kte5 rým bylo podáno několik orálnímich prostředků podle vynálezu a roztok Sandimmune^R (SO), (na obr. vyznačeno Sand) a je vynesena na ose y.

Na obr. 5 je vyznačena doba (Tmax) ve které nastala Caax pro každou formulací z obr. 4. Hodnota AUC v ng.h/min je vynesena na ose y.

Na obr. 6 je plocha pod křivkou závislosti koncentrace v krvi a času (AUC) pro každý prostředek z obr.4_, _N.a. ose y.. je..vynese-., na hodnota Tmax.h.

Vynález se týká cyklosporinových prostředků, jež podporují biologickou dostupnost a mohou být ve tvaru kapslí, zejména tvrdých kapslí. V prostředcích podle vynálezu je cyklosporin obsažen v orálně přijatelném nosiči, sestávajícím z alespoň jednoho alkanolového rozpouštědla se 2 až 3 atomy uhlíku, v kombinaci s alespoň jedním neiontovým povrchově aktivním činidlem. Prostředek podle vynálezu může dále obsahovat jedno nebo několik přídavných rozpouštědel, přičemž v úvahu přicházejí estery a dioly mastných kyselin. Každá ze složek prostředků podle vynálezu je farmaceuticky přijatelná. Kromě toho, k zajištění vysoké biologické dostupnosti zajišťují prostředky podle vynálezu reprodukovatelnou absorpci cyklosporinu mezi jednotlivými šaržemi. Prostředek podle vynálezu nachází použití v imunosupresivní terapii.

V oboru je známa řada cyklosporinů, které vykazují imunosupresivní aktivitu a mohou se uvolňovat v orálních prostředcích podle vynálezu. Cyklosporiny, které mohou být podávány podle vynálezu, zahrnují cyklosporin A, cyklosporin B, cyklosporin C, cyklosporin D a cyklosporin G a jejich syntetické analogy (Merck index 2759, 1989). Orální prostředky podle vynálezu se obzvlášť hodí k uvolňování cyklosporinu A. Při uvolňování cyklosporinu A z prostředku podle vynálezu, je obsa6 ženo ve vztahu k objemu nosičové složky prostředku 50 až 150 mg/ml a obvykle 100 až 150 mg/ml.

Nosičová složka prostředku zahrnuje alkanolové rozpouštědlo, přičemž alkanolové rozpouštědlo sestává z alespoň jednoho alkanolu a obvykle z méně něž tří různých alkanolů, obvykleji ne více než ze dvou různých alkanolů, přičemž alkanoly mají 2 až 3 atomy uhlíku a 1 až 2 hydroxylové skupiny tak, že na 1,5 atomů uhlíku nepřipadá více než jedna hydroxylová skupina. Vhodnými alkanoly jsou ethanol a propylenglykol. Celkové množství alkanolového rozpouštědla v prostředcích je objemově přibližně. 1 X, obvykle alespoň 3 X a může být až 95 X, avšak zpravidla bývá 5 až 75 2, obvykle 5 až 60 X a obvykleji 10 až 60 2. Pokud je v prostředku obsažen ethanol jakožto alkanolové rozpouštědlo, může jeho množství bý objemově přibližně 5 až 20 X, obvykle přibližně 5 až 15 X, zatímco je-li obsažen propyleng.lykol jako alkanolové rozpouštědlo, může množství propylenglykolu být přibližně objemově 5 až 90 X, obvykle přibližně 5 až 85 X a obvykleji přibližně 10 až 50 X vztaženo na prostředek jeko celek.

V orálně přijatelném nosiči je také obsaženo alespoň jedno neiontové povrchově aktivní činidlo, obvykle maximálně dvě polyoxyalkylenová neiontová povrchově aktivní činidla. Vyvážený hydrofilní-lipofi lni poměr (HLB) polyoxyalkylenových neiontových povrchově aktivních činidel je přibližně 5 až 20, obvykle přibližně 8 až 16. S výhodou jsou polyoxyalkylenová neiontová povrchově aktivní činidla použitá v prostředcích podle vynálezu polyoxyethylenovými sloučeninami. Mezi polyoxyethylenové sloučeniny, přicházející v úvahu, patří ethoxylované alkoholy, například polyoxyethylenové alkoholy nebo ethoxylované mastné alkoholy, kde podíly alkoholu mají obecně 10 až 18 obvykle 10 až 14 atomů uhlíku, stejně jako jejich etherové a esterové substituenty a polyoxyethylenové deriváty parciálních esterů mastných kyselin, obvykle monoeterů, polyolů se 4 až 6 atomy uhlíku, obvykle se 6 atomy uhlíku, kde polyoly mohou být polyolanhydridy, například sorbitan. Podíl mastných kyselin povrchově aktivního činidla má typicky 10 až 18 atomů uhlíku. Počet ethylenoxidových skupin činí obvykle 2 až 25. Výhodnými v

pvrchově aktivními činidly je polyoxyethylen (4) lauryl ether (BRIJ 30^R) a polyoxyethylen (20) monosorbitan monooleát (TWEEN 80^R). Celkové množství neiontových povrchově aktivních činidel v prostředcích podle vynálezu je objemově 5 až 65 X, obvykle 5 až 60 %, vztaženo na objemu prostředku jako celku. Pokud je v prostředku obsažen TWEEN 80^R, bývá jeho obsah 5 až 60% , obvykleji 10 až 50 %, vztaženo na objemu prostředku jako celku. Pokud je v prostředku obsažen BRIJ 30^R, bývá jeho obsah 10 až 45 X, obvykleji 15 až 40 X, vztaženo na objemu prostředku jako celku.

Prostředky podle vynálezu mohou dále obsahovat jedno nebo několik přídavných rozpouštědel, obvykle maximálně 3 různá přídavná rozpouštědla obvykleji maximálně dvě přídavná rozpouštědla, přičemž vhodnými přídavnými rozpouštědly jsou estery a dioly mastných kyselin, kde přídavné rozpouštědlo může tvořit 100% ester mastné kyseliny, 100% diol nebo kombinace obou. Celkové množství přídavných rozpouštědel v prostředku může být objemově 20 až 80 %, obvykle 25 až 75 %, Pokud jsou obsažena oinicná rozpouštědla v prostředku, může být poměr pomocného rozpouštědla k rozpouštědlu 1:1 až 15:1, obvykle však bývá 1:1 až 13:1.

Estery mastných kyselin, které mohou být přídavnými rozpouštědly v prostředcích podle vynálezu, jsou.estery mastných kyselin, kde uhlovodíkový řetězec mastné kyseliny má 12 až 18 atomů uhlíku, obvykle 14 až 18 atomů uhlíku, přičemž esterem mastné kyseliny je monoester nižšího alkanolu. Vhodné estery mastných kyselin mají obvykle sudě číslovaný řetězec mastné kyseliny, kde uhlovodíkový řetězec může být nasycený nebo nenasycený, obvykle nemající více než dvě nenasycená místa.

I

Mastné kyseliny, přicházející v úvahu, jsou obvykle rostlinného nebo savčího původu a zahrnují například palmitát, stearát, palmitooleát, linoleát, linolenát a obzvláště myristát a oleát. Alkohol monoesterii mastných kyselin je nižší alkanol se 2 až 4 atomy uhlíku, obvykle se 2 až 3 atomy uhlíku, rozvětvený nebo nerozvětvený. Obzvlášť výhodnými estery mastných kyselin jsou isopropylmyri stát a ethyloleát. Pokud je isopropylmyristát obsažen, je jeho množství objemově 55 až 75 % a je-li obsažen ethyloleát, je jeho množství objemově 35 až 75 %, vztaženo na prostředek, jako celek.. .Obvykle je. ester., mastných .kysel in .obsažen v množství objemově až osminásobném se zřetelem na povrchově aktivní činidlo v prostředku, obvykle nepřesahuje objemově pětinásobek, množství povrchově aktivního činidla v prostředku .

V prostředcích podle vynálezu mohou být též obsaženy dioly a pak mohou být obsaženy dodatečně k přídavnému rozpouštědlu, tvořenému esterem mastné kyseliny, nebo místo něho. Dioly, připadající v úvahu jako přídavná rozpouštědla, jsou zpravidla tekutiny při fyziologických teplotách a zahrnují dioly s 8 až 28 atomy uhlíku, obvykle se 16 až 20 atomy uhlíku, kde diolem může být polyoxyalkylendiol, kde alkylen má 2 až 3 atomy uhlíku. Vhodné dioly, používané jako přídavná rozpouštědla, mohou mít 200 až 800 daltonů, obvykle 200 až 650 daltonů. Obzvláštní význam mají polyethy lenglykoly, zejména polyetylenglykol. 200 (PEG200), polyethyleglykol 400 (PEGeoo), polyethyleglykol 600 (PEGůoo), přičemž výhodný je polyethyleglykol 400 (PEGqoo). Pokud jsou v prostředcích obsažena přídavná rozpouštědla, je jejich objemové množství 5 až 60 obvykle 5 až 55 %, vztaženo na prostředek jako celek.

K vytváření nanočástic, žádoucích v prostředku, je celkový obsah nižšího alkanolu hmotnostně 25 až 60 %, obvykleji hmotnostně 30 až 50 %. Celkové množství alkylenoxysloučenin je přibližně hmotnostně 20 až 50 %, obvykleji hmotnostně přibliž9 ně 25 až 40 %. Je-li použito kombince po lyoxyalkylenových sloučenin, připadá na estery mastných kyselin přibližně 25 až 100 % polyoxyalkylenových sloučenin.

V prostředcích podle vynálezu mohou přídavná rozpouštědla sama o sobě dodávat prostředkům žádoucí fyzikální vlastnosti, jako je viskosita, stálost a podobně. Případně mohou prostředky obsahovat dodatečná Činidla, která dodávají prostředkům žádoucí fyzikální vlastnosti, jako jsou zahusfovadla, suspendační činidla, činidla podporující tuhnutí a podobně, kde taková činidla zahrnují akacii, karbomethylcelulózu, hydroxypropyIcelulózu, lecitin, methylcelulózu, polyethylenové glykoly s vysokou molekulovou hmotností, například polyethylenglykoly s molekulovou hmotností dosahující 1000 až 6000, obvykle 1000 až 5000 daltonů, povidon, alginát sodný, tragakant a podobá činidla. V prostředcích podle vynálezu může být také řada minoritních složek, které mají různé funkce, jako inhibitory enzymů, ochranné látky, antioxidanty, protimikrobiální činidla, stabilizátory a podobně. Celkové množství těchto zahušťovadel a jiných aditivů, pokud jsou v prostředcích přítomny, nepřesahuje normálně hmotnostně 5 %, obvykle 2 %, obvykleji 1 % prostředku. V prostředcích podle vynálezu mohou být také excipienty známé v oboru.

Prostředky podle vynálezu jsou stálé v širokém oboru teplot, což znamená, že není dotčena fyzikální integrita prostředku, například nenastává krystalizace cyklosporinové účinné látky. Do teplotního rozmezí, ve kterém jsou prostředky podle vynálezu stálé, jsou zahrnuty i nízké teploty, jako jsou teploty používané k uskladnění v chladu, kde takové nízké teploty jsou v rozsahu přibližně 0 až 15 *C, typičtěji 2 až 8 ’C.

Prostředky podle vynálezu se hodí k podávání ve formě kapslí například tvrdých nebo měkých kapslí. Způsoby výroby tvrdých kapslí, obsahujících tekuté prostředky, jsou popsány v americkém patentovém spise číslo 4 822618 a 4 576284. Obecně sestávají tvrdé kapsle,; použitelné v případě prostředků podle 'vynálezu, ze dvou^- dílů: -misky -a/>^: v íčka*.* Miska a ví-čko s k' sobě přiléhají, .. takže¹ vy tváře j í u zavřenou, dut i nu těsněíuzavřenou í - | 'víčkem'.. Miskas.a víčko mohou být zhotoveny z hydrof i 1 ni ho> poly^ .

meru,’.’ jako 'je škrobi nebo želatina .f Přiá výrobě.» tvrdých kapslí

I se tekutý prostředek vlije do' misky a pak se kapsle»uzavře+na' -sazením víčka¹ na misku. Utěsnění mezi¹ oběma díly i můžei být» zajištěno, čímž je zabráněno pronikání uzavřeného prostředku

Iz kapsle, pomocí* těsnícího»prostředku 51popsaného.vkpatentovém spise, číslo EP 1116744 . Aby, ^; se zabránilo narušení r v žaludku, mohou býti kapsle\i» obsahu jí cí ,pr ostředek ,r podle vynálezu povle' čeny,.c enterickým povlakem, který'i zabraňuje ' narušení kapsle { v kyselém*» prostředí žaludku.Í-V oboru je, známa?řada- eiiter ických [ povlaků.' Například’ je popisuje americký.' patentový 'spis číslo

5l 206219 . j. o. n ' 4 ’ v . - ·· λ o v .tr. ’^v.t ' S | » u i t · . < .·» · ‘ * j h í. v í . > ⁵ L v - ’· i ’ ’ . 's » ,. ií > * ' ’ 4 < Prostředky., pod 1 é; vynálezu , : obzvláštěi prostředky výtvářeí ’jící nanočástice',t se, mohou! připravovat! napřed rozpuštěním'cyk: losporinu.V nižšímialkanolu; kde může <býťí takéT začleněno malé množství- polyoxyalkylenové sloučeniny', obecně méně než přibližně hmotnostně^ 50 % »č inidlat.použ itéhó k' rozpuštění cyklósporinu. Může sei použít.zvýšené teploty/ například přibližně 60 až.9O ‘C.dPo rozpuštění‘cyklosporinu se'může- přidat 'hlavnP pódíl polyalkylenoxysloučeniny** a prostředek seí upraví' na žádané j poměry přidání ml přísl u š ných /složek;;^r Obecně' se trnů že* cyklosporin í .

i rozpustit v:, nižším alkanolň. j případně obsahujícím čás V/polyal-;

• ky le.noxyáloučeniny) ;pri hmotnostním poměru 1:1,5 -- 5, obvyklej i>rl: 2-4 . , r ·,; *’ ; *' j *· >iií v '' ·» ,;/ ’.· π - ni ’ tt i .

i i „ - λ r v id _f , ís a* · ^! L τ- . i »· * - .· ů5r- *-«j .

Prostředky podle vynálezu nacházejí použití v imunosupre• ‘ sivní’ terapii ,ίίϊ která:, jě indikována v? · řaděďoněmocnění ; včetně ¹ *. I * { idiopaitickéhounefrotickéhoasyndromu; 1 diabetes' závislé na linsuI línuitypuj Ir, cBehčetova^ syndromu',;l , Crohnóvě-nemoci-áplastičké i , í anemii⁵,. si lňéhó^ astma závi šlem- na¹' kor tikošteroidu, upsonas i s p | rheumatoidní.arthritis* a jiných nemocí, kde může imunitní' syš12 orgán zůstane živým v hostiteli po delší dobu, než by tomu bylo v případě bez použití imunosupresivní terapie ve spojení s transplantací. Prodloužení živostnosti tedy znamená zachování životnosti po nekonečně dlouhou dobu. Dárcovský orgán je považován za životný, pokud zachovává funkčnost v hostitelově prostředí.

Pro pohodlí uživatele mohou být poskytnuty soupravy s příslušným množstvím cyklosporinu, jedna nebo několik dávkových úrovní a přídavná rozpouštědla, jmenovitě u nižších alkanolů a polyalkylenoxy sloučenin, například alespoň jeden ethanol nebo propylenglykol a alespoň jeden polysorbát 80 a PEG400.

Vynález objasňují, nijak však neomezují, následující příklady praktického provedení.

Příklady provedení vynálezu

Připraví se několik prostředků podle vynálezu. Biologická dostupnost cyklosporinu v připravených prostředcích se pak sleduje u krys a u lidí.

I. Orální cyklosporinové prostředky

Připraví se orální prostředky s cyklosporinem A. V každém případě se přidá 100 mg CsA, indikované množství povrchově aktivního činidla a indikované množství ethanolu nebo propylengglykolu do baňky o objemu 1,0 ml a objemu 1,0 ml se dosáhne přidáním vhodného objemu esteru .a/nebo diolu mastné kyseliny.

Složení jednotlivých farmaceutických prostředků je v následující tabulce. Jednotlivé zkratky mají tento význam: PG = propylenglykol, EtOH = ethanol, Brij 30 = polyoxyethylen(4)laurylether, Tween 80 = polyoxyethylen(20)monosorbitanmonooleát, =isopropylmyristát, E0 = ethyloleát. Ve sloupci I je uvedeno číslo prostředku, ve sloupci II jeho složení.

40	PG Brij 30 EO	300 mg 300 mg q.s. lo 1,0 ml	(290 ml) (0,316 ml) ((O.?94 ml)(343 mg)
41	ElOH Brij 30 Tween 80 EO	0j05 ml 150 mg 100 mg q.s. to 1)0. ml	(5%) (0.158 ml) (0JD93 ml) ((Ó.649 ml) (565 mg)
42	PG Brij 30 Tween 80 EO	0.05 ml loO mg 100 mg q.s. to 1)0. ml	(5%) (0,158 ml) (0Ό93 ml) ((0,649 ml) (565 mg)
43	ElOH Twccn 80 PG	0.10 ml 400 mg q.s. to 1)0 ml	(10%) (0,371 ml) (0,529 ml)
44	ElOH Tween 80 PEG_4M	0,)10 ml 400 mg q.s. to 100 ml	(10%) (0,371 ml) ((0,529 ml)(60I mg)
45	ElOH Tween 80 PG PEG_4M	0.10 ml 300 mg approx.250mg approx.250mg	(0,278 ml) (0,243 ml) (0)220 ml)
46	ElOH Tween 80 PG	0,10 ml 100 mg q.s. ťo l_f0 ml	(10%) (0,093 ml) (0,807 ml)
48	ElOH Twccn 80 PG PEG₁₀₀	0.10 ml 2Ó0 mg approx.250mg approx.250mg	(0,186 ml) (0)243 ml) (0.,220 ml)
49	ElOH Tween 80 PG	0,10 ml 600 mg q.s. to 1 ml	(10%) (0,558 ml) (0,342 ml)
50	ElOH Twccn 80 PG	0,10 ml 300 mg q.s. to 1,0 ml	(10%) (0,278 ml) (0/522 ml)
51	EtOI-I Tween 80 PG	0.10 ml 200 mg q.s. to l₍0 ml	(10%) (0)1 S6 ml) (0,714 ml)
52	ElOH Tween 80 PG	0,05 ml 400 mg q.s. to 1,0 ml	(5%) (0.371 ml) (0*579 ml)

-
19	ElOH Tween 80 1Μ	0,1 ml 300 mg q.s. to 1.0 m!	(!0%) (0.278 ml) ((0,622 ml) (531 mg)
20	EtOH Brij 30 IM	0.05 ml 350 mg q.s. to 1.0 ml	(5%) (0,36S ml) ((0,582 ml)(49ó mg)
21	PG Biíj 30 1M	0.05 ml 350 mg q.s. to 1,0 ml	(5%) (0,368 ml) ((0,582 ml)(496mg)
22	EtOH Tween 80 EO	0,1 ml 300 mg q.s. to 1,0 ml	(10%) (0,278 ml) ((0,622 ml)(541 mg)
23	EtOH Brij 30 EO	0,05 mí 350 mg q.s. to 1,0 ml	(5%) (0,368 ml) ((0.582 ml) (5O6mg)
24	PG Brij 30 EO	0,05 ml 350 mg q.s. to 1,0 ml	(5%) (0,368 ml) (<0^582 ml) (506mg)
33	EtOH Brij 30 IM	0,1 ml 150 mg q.s, to 1,0 ml	(10%) (0.,158 ml) ((0,742 ml)(633 mg)
34	ElOH Brij 30 EO	0,1 m! 150 mg q.s. to 1,0 ml	(10%) (0 158 ml) ((0,742 ml)(646 mg)
35	EtOH Tween 80 PG	0.1 ml 500 mg q.s. to 1,0 ml	(10%) (0.463 ml) ((0,437 m!)(453 mg)
36	EtOH Tween S0 PG EO	0,1 ml 300 mg 100 mg q.s. to 1,0 ml	(10%) (0,278 ml) (0,097 ml) ((0.,525 ml)(465 mg)
37	EtOH Tween 80 PEG 400 EO	0..1 ml 300 mg 100 mg q.s. to 1,0 ml	(10%) (0,278 ml) (O.pss ml) ((0,534 ml)(464 mg)
38	ElOH Brij 30 PG EO	0.1 ml 3Ó0 mg 100 mg q.s. to 1,0 ml	(10%) (0,316 ml) (0,097 ml) ((0,487 ml)(424 mg)
39	EtOH Brij 30 PG EO	0.1 ml 300 mg 200 mg q.s. to 1,0 ml	(10%) (0,316 ml) (0.193 mi) ((Ó,391ml)(340mg)

II. Studie biologické dostupnosti prostředků 19 až 24 a 33 až 42 in vivo

Biologická dostupnost prostředků 19 až 24 a 33 až 42 byla studována takto: Jako měřítko biologické dostupnosti byly stanoveny následující parametry: (a) vrchol koncentrace cyklosporinu (Cmax) v krvi, (b) doba (T_max) k dosažení Cmax. a plocha pod křivkou (AUC) závislosti koncentrace v krvi a času. Vedle prostředků 19 až 24 a 44 až 42 byla pro porovnání sledována bilogická dostupnost cyklosporinu v orálním roztoku (SO Sandimmune^R za obdobných podmínek. U každého z uvedených prostředí’ byly krmeny krysy Sprague Dawley s přirozeným CsA o hmotnosti 250 až 350 g peletizovanou standardní potravou (Agway^R3000, Granville Milí, Greensboro, NC) a vodou podle libosti. Den před pokusem se zavedou krysám po mírné etherové anestesi kanyly ze silikonového kaučuku do pravé jugulární a pravé femorální žíly. Po noci se podá CsA.

Po podání se z jugulárních cév odebere 200 μΐ krve do 0,5 ml polypropylenových zkumavek mikrofuge obsahujících 0,3 mg lyofi 1 izované sodné soli ethylendiamintetraoctové kyseliny (EDTA) a míchají se bezprostředně 10 sekund. Doby odběru zvířat s orálními prostředky jsou 0, 0,5, 1, 2, 4, 8, 12, 24, 36, 48 a 72 hodin po podání.

CsA včetně několika jeho metabolitů se stanoví v úplné krvi imunotestem fluorescenční polarizací (FPI)(TDx, Abbot Lab.). Kvantitativně se přenese vzorek 150 μΐ úplné krve do 1,5 ml míkrofugové zkumavky. Buňky se lysují a rozpustí se 40 μΐ rozpouštědla obsahujícího povrchově aktivní činidlo. Pak se vysrážejí proteiny 300 μΐ acetonitrilu. Po odstředění se super na tant podrobí testu PPI v analyzátoru TDx postupem doporučeným Abbott Diagnostics. Jelikož test TDx byl původně vyvinut pro lidskou krev, byly některé postupy následovně upraveny. Připraví se řada standardních roztoků koncentrace CsA přidává16 ním známého množství CsA do krysí krve a zpracují se EDTA. Pokud se očekává, že koncentrace CsA ve vzorku bude větší než 1,0 Ng/ml, zředí se vzorek krve 10-násobně v O,1M fosfátovém pufru při hodnotě pH 7,0. Pro zředěné vzorky se vytvoří jiná kalibrační křivka za pomoci standardních roztoků obsahujících známá množství CsA, tvořených 10 % krysí krve a 90 % fosfátového pufru.

Pro neoddělené analysy se získají popisné řarmakokinetické parametry,. U každé krysy se stanoví vrcholná koncentrace (Cmax) a doba (Tmax) , kdy vrcholná koncentrace nastala zkoumáním hrubé křivky koncentrace/čas. Plocha pod křivkou (AUC) závislosti koncentrace v krvi a času od okamžiku 0 až po poslední údaj (AUCo-t) se vypočte lineárním obdélníkovým způsobem. Zbylá plocha pod koncem (AUCt- nekonečno) závislosti koncentrace v krvi a času se stanoví jako poměr poslední pozorované koncentrace (C*) ke konstantě prvního řádu, spojené s konečnou eliminační fází ( lambdaz) profilu koncentrace-čas. Míra kontaktní lambdaz se stanoví log-lineární regresí údajů koncentrace-Čas ve zdánlivém zakončení log-lineárné fáze profilu koncentrace čas (například konečných 3 až 5 posledních údajových bodů v závislosti na analysovaném profilu). Celková plocha AUC (AUCt-nekonecno) se vezme jako součet AUCo-t a AUCt-neko ηbcno.

Výsledky pro každý prostředek se porovnají s výsledkem získaným pro SO, což je znázorněno na obr. 1 až 3. Výsledky dokazují, že u většiny prostředků se dosahuje větší biologické dostupnosti u prostředků podle vynálezu ve srovnání s orálním prostředkem (SO) Sandimmune^R, jak to vyplývá z větších hodnot AUC prostředků podle vynálezu.

III. Lidská biologická dostupnost prostředků 35, 43 až 46 a 48 až 52 in vivo.

Jako zkušební subjekty bylo vybráno 48 zdravých mužů ve věku 19 až 55 let s odchylkou od ideální hmotnosti nepřesahující 20 %. Provede se jednodávková nahodilá dvojnásobně slepá trojcestná křížová studie. Rozdělí se 48 mužů nahodile po 8 na sest skupin. Každá skupina dostane jedinou 300 mg dávku cyklosporinu z uvedených prostředků nebo orálního roztoku {S0) Sandimmunu^R při třech rozdílných příležitostech, kdy každá příležitost je oddělena 7-denní vymývací periodou.

Muži se vyzvou, aby nepřijímali potravu 10 hodin před a 4 hodiny po podání dávky. Během studie je voda k disposici podle libosti s výjimkou 1 hodiny před dávkou a 2 hodiny po dávce. Před dávkou se odehere 15 ml vzorek krve. K podání se zkombinují 3 ml podíly prostředku (300 mg) s 200 ml čokoládového mléka a orálně se spolknou. V časech t= 0, 0,5, 1, 1,5, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 20 a 24 hodin se odeberou 10 ml vzorky krve. Také se odebere 15 ml vzorek krve po studii.

Koncentrace cyklosporinu A v úplných vzorcích krve se vyhodnotí TDx (Abott Diagnostics, N. Chicago, IL) podle výrobcových instrukcí.

Pro neoddělené analysy se získají popisné farmakokinetické parametry standardními metodami. Maximální koncentrace (Cmax) a doby (Tmax) jejího výskytu se získají z údajů závislosti koncentrace na čase. Plocha (AUC) pod křivkou koncentrace-čas se vypočte lineárním obdélníčkovým způsobem pro poslední koncentraci v krvi nad mezí citlivosti (25 mg/ml) a extrapolují se na nekonečno.

Pozorované hodnoty Cmax,Tmax a AUC pro každý prostředek se zprůměrují. Průměrné hodnoty pro každý prostředek jsou na obr. 4 až 6. Výsledky ukazují, že u každého zkoušeného prostředku se vyskytují koncentrace Cmax nejméně dvakrát rychleji než u orálního roztoku (S0) Sandimmune^R za stejných podmínek. Kromě toho jsou hodnoty AUC u zkušebních prostředků nejméně o 2000 ng.h/ml větší než u orálního roztoku (SO) Sandimmnne^Rza stejných podmínek. Na základě těchto výsledků poskytují prostředky 35, 43 až 46 a 48 až 52 větší biologickou dostupnost než orální roztok (SO) Sandimmune^R.

Připraví se prostředky k vytvoření amorfních nanočástic zředěním ve vodném mediu.

IV. Nanočásti cové prostředky

A. Přidá se 5 g cyklosporinu A do 5 ml ethanolu. Směs se míchá až do úplného rozpuštění cyklosporinu A. Do výsledného roztoku se přidá 25 g polysorbátu 80 a objem se doplní na 50 ml 1,2propylenglykolem. Směs se dostatečně promíchá pří teplotě místnosti k dosažení homogenního roztoku.

B. Přidá se 5 g cyklosporinu A do 5 ml ethanolu. Směs se míchá až do úplného rozpuštění cyklosporinu A. Do výsledného roztoku se přidá 15 g polysorbátu 80 a objem se doplní na 50 ml směsí 1,2-propylenglykolu a polyethyleglykolu 400. Směs se dostatečně promíchá při teplotě místnosti k dosažení homogenního roztoku .

C. 1 ml roztoku získaného v příkladu 1 se přidá do 50 ml vody skleněnou injekční stříkačkou a doporučí se k orálnímu podání koncentrovaných emulzí nebo mikroemulsí lidem. Po přidání roztoku následuje rychlé zředění a získá se bílá suspense jemných částic s modravých reflexem jako kolodiální suspense (Tyndalův efekt). Po pětihodinovém odstřeďování při 26000 g se sediment promyje vodou a pak se odstřeďuje 24 hodin při 26000 g. Promývací a odstřeďovací postup se opakuje dvakrát za stejných podmínek. Po vysušení se provede práškový rentgenový diagram. Pevná látka je výlučně amorfní.

Sediment se zkoumá řádkovacím elektronovým mikroskopem. Sediment sestává z amorfních kulových nanočástic o průměru 200 až 400 nm s přítomností určitých agregátů.

D. Přidá se 2 ml roztoku, získaného podle příkladu 1, do 100 ml vody a koloidní suspense se zkoumá 10 minut a 1 hodinu po zředění difrakčně/difusním laserovým granulometrem (Malvern SB.OD).

Po jedné hodině lze pozorovat dvě populace částic. Jednu představující hmotnostně 70 % cyklosporinu A se středním průměrem 300 nm a druhou představující hmotnostně 30 % cyklosporinu A se středním průměrem 20 μιη, pravděpodobně představující agregáty nanočástic.

E. Přidá se 1 ml roztoku, získaného podle příkladu 1, do 50 ml vody a koloidní suspense se 10 minut míchá.

Do suspense se pak přidá 200 ml umělé kyselé žaludeční šťávy a zahřeje se na 37 ‘C. Homogenní koloidní suspense se zkoumá difrakčně/difusním laserovým granulometrem (Malvern SB.OD). Suspense sestává výhradně z nanočástic se středním průměrem 600 nm.

F. Přidá se 1 ml roztoku, získaného podle příkladu 1, přímo do 200 ml umělé kyselé žaludeční šťávy.

Homogenní suspense se zahřeje na 37 ’C a zkoumá se rychle difrakčně/difusním laserovým granulometrem (Malvern SB.OD). Suspense sestává výhradně z nanočástic se středním průměrem 350 nm.

Z uvedených výsledků a pojednání vyplývá, že se poskytují nové cyklosporinové prostředky s vysokou biologickou dostupností. Prostředky podle vynálezu jsou schopné pojmout vysoké koncentrace cyklosporinu a jsou stálé při skladování v širokém oboru tepelot, včetně nízkých teplot používaných v chlazení. Prostředky podle vynálezu jsou vhodné k uvolňování ve formě kapslí, včetně tvrdých kapslí, zajišťujících snadné skladování a manipulaci. Prostředky také poskytují amorfní nanočástice, jejichž výsledkem je zlepšená biologická dostupnost cyklospořinu.

Ačkoli je vynález podrobně popsán a objesněn příklady praktického provedení, není však na tento popis a příklady omezen. Pracovníkům v oboru jsou obměny a modifikace v rámci vynálezu zřejmé.

Průmyslová využitelnost

Složení cyklosporinové směsi vhodné pro výrobu cyklosporinového farmaceutického prostředku výhodného pro podávání při transplantacích pro příznivé ovlivňování přihojování trans plan-tátů a pro snadnou biologickou dostupnost.

PATENTOVÉ

Claims

NÁROKY

1. Orální cyklosporinový prostředek, vyznačující se t í m, že obsahuje cyklosporin, alespoň jedno alkanolové rozpouštědlo se 2 až 3 atomy uhlíku a alespoň jedno neiontové polyoxya1ky1enové povrchově aktivní činidlo, přičemž je povrchově aktivní činidlo voleno ze souboru zahrnujícího polyoxyethylenové alkoholy a monoestery mastných kyselin ethoxylovaných polyolů se 4 až 6 atomy uhlíku.
2. Orální-cyklosporinový prostředek podle nároku 1, v yznačující se tím, že dále obsahuje alepoň jedno přídavné rozpouštědlo volené ze souboru zahrnujícího monoestery nižšího alkanolu a mastné kyseliny se 14 až 18 atomy uhlíku a dioly s 8 až 28 atomy uhlíku.
3. Orální cyklosporinový prostředek podle nároku 1, v yznačující se tím, že obsahuje objemově 5 až 75 % rozpouštědla, 5 až 65 % nejméně jednoho neiontového polyoxyalkylenového povrchově aktivního činidla a 20 až 80 % alespoň jednoho přídavného rozpouštědla, vztaženo vždy na objem prostředku jako celku.
4. Orální cyklosporinový prostředek, vyznačující se t í m , že obsahuje cyklosporin A, alespoň jedno alkanolové rozpouštědlo volené ze souboru zahrnujícího ethanol a propylenglykol, přičemž alkanolové rozpouštědlo tvoří 5 až 75 X objemu prostředku, alespoň jedno neiontové polyoxyethylenové povrchově aktivní činidlo, volené ze souboru zahrnujícího polyoxyethy lenalkoholy a monoestery ethoxylovaných sorbitanů a tvořího 5 až 65 % objemu prostředku a alespoň jedno přídavné rozpouštědlo, kterým je ester alkoholu se 2 až 4 atomy uhlíku a mastné kyseliny se 14 až 18 atomy uhlíku, přičemž přídavné rozpouštědlo tvoří 20 až 80 X objemu prostředku
5 .

Orální cyklosporinový prostředek podle nároku 4, v y22 znač ující se t í m, že neiontové povrchově aktivní činidlo je voleno ze souboru zahrnujícího polyoxyethylen(4)laurylether a polyoxyethy1en(20)monosorbitanmonooleát, ester mastné kyseliny je volen ze souboru zahrnujícího isopropylmyristát a ethyloleát a prostředek obsahuje dvě přídavná rozpouštědla, přičemž jedním přídavným rozpouštědlem je diol s 8 až 28 atomy uhlíku.
6. Orální cyklosporinový prostředek, vy značující s e - t -í m, ..že. obsahuje .50 až 150 mg/ml cyklosporinu A, objemově 5 až 75 % alkanolového rozpouštědla, kterým je ethanol nebo propylenglykol á objeniové '10 až- 50 % monoesteru· ethoxylovaného sorbitanu, přičemž se procenta vztahují na objem prostředku jako celku.
7. Orální cyklosporinový prostředek podle nároku 6, v yznač ující se tím, že obsahuje 5 až 20 % ethanolu, vztaženo na objem prostředku jako celku.
8. Orální cyklosporinový prostředek podle nároku 6, v yznačující se t í tn, že obsahuje 10 až 50 % propylenglykolu, vztaženo na objem prostředku jako celku.
9. Tvrdá kapsle cyklospori nového prostředku, vyznačující se tím, že obsahuje orální cyklosporinový prostředek podle nároku 1.
10. Vodná disperse nanočástic cyklosporinu, v y z n ačující se tím, že nejméně hmotnostně 50 X obsaženého cyklosporinu v dispersi má velikost částic menší než 1 pm přičemž cyklosporin je amorfní.
11. Vodná disperse podle nároku 10, vyznačující se t í. m, že obsahuje nepatrná množství nižšího alkanolu a alespoň jedno polyoxyethylenové povrchově aktivní či23 ničilo .
12. Vodná disperse podle nároku 11, vyznačující se t í ni , že nižším alkanolem je alespoň jeden alkohol ze souboru zahrnujícího ethanol a propylenglykol a polyoxyethylenovou sloučeninou je polysorbát 80.
13. Souprava, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jeden alkohol ze souboru zahrnujícího ethanol a polypropylenglykol a alespoň jednu polyoxyethy1enovou sloučeninu ze souboru zahrnujícího polysorbát 80 a PEG 400.
14. Způsob přípravy vodné disperse cyklospori nových částic podle nároku .10, vyznačující se tím, že se mísí alespoň jeden alkohol ze souboru zahrnujícího ethanol a polyethylenglykol s cyklosporinem za vytvoření roztoku, tento roztok se zkombinuje s polyoxyethy1enovým povrchově aktivním činidlem k vytvoření dalšího roztoku, který po zředění vodou tvoří amorfní nanocástice cyklosporinu.