CS226197B2

CS226197B2 - Live stock fodder

Info

Publication number: CS226197B2
Application number: CS82707A
Authority: CS
Inventors: Klaus Dr Bauer; Werner Prof Dr Frommer; Wilfried Dr Kaufmann; Karl G Metzger; Martin Dr Scherr; Delf Dr Schmidt
Original assignee: Bayer Ag
Priority date: 1975-03-08
Filing date: 1982-02-02
Publication date: 1984-03-19
Also published as: DK140643B; PL98718B1; LU74496A1; JPS5921598B2; IE43080L; GB1500847A; ES445791A1; SE437917B; FR2303555B1; BE839309A; AU1175876A; DK140643C; FR2303555A1; CA1054082A; AU497576B2; IL49158A; JPS51112596A; SE435730B; DE2510160A1; IE43080B1

Description

(54) Krmivo pro hospodářská zvířata

Vynález se týká krmivé pro hospodářská zvířata.

Předmětem vynálezu je krmivo pro hospodářská e jiná zvířata s příznivým účinkem na růst a zvýšeně využití krmivá u zvířat, vyznačující se tím, že obsahuje jako účinnou látku antibiotikum, které je neutrální látkou a při elektroforéze se nevzdaluje od počátku, sestává z uhlíku, vodíku a kyslíku, má specifickou otáčivost[a] j·⁰ = -6,6° v roztoku o koncentraci 1 hmotnostní % v metanolu, v ultrafialovém světle má maximum při vlnové délce 307 nm, je dobře rozpustné v chloroformu, acetonu, etylesteru·kyseliny octové, acetonitrilu, dimetylformamidu, dimetylsulfoxidu, metanolu a etanolu α málo rozpustné ve vodě, dietyleteru, petroleteru a cyklohexanu, obsahuje 4 metoxyskupiny a při hydrolýze kyselinou sírovou o koncentraci 10 hmotnostních % při 80 °C se odštěpují redukující cukry, s molekulovou hmotností přibližně 1 468 a sumárním vzorcem ^{8 8} účinností na růst zvířat a využití krmiv u zvířat.

Bylo zjištěno, že je možno získat toto nové antibiotikum tak, že se pěstuje- některý z kmenů Actionoplanes SE 73 ATCG 31058 nebo SE 73/B ATCG 31060 jednotlivě nebo společně v živném prostředí a antibiotikum se pak izoluje ze živného prostředí známým způsobem.

Nové antibiotikum má antimikrobiální účinnost a podporuje růst živočichů, což je možno využít zejména u domácích zvířat, u nichž dochází také к lepšímu využití krmivá.

Antibiotikum podle vynálezu má následující chemické a fyzikální vlastnosti.

1. Elementární analýze pro (1 468) vypočteno: 56,40 % C, 6,54 % H, 37,05 % O, 7,8«4OCH₃;

nalezeno: 5⁶,19*C^x), 6,54 % H, 37,25 % O, 7,9%⁴CCH₃;

^x^ po 4 dnech auSení ve vysokém vakuu při teplotě 100 °C.

Je nutno uvést, že při - tak'velké molekule je možná chybě při elementární enelýze i 0,8 % u - jednotlivého stanovení, takže toto stanovení nedovoluje bezprostředně vypočítat přesný sumární vzorec. - R. B. -Woodwaerl, Angew. Chem. -6,. atr. 50 až 51 (1957)J . Svrchu uvedený sumární vzorek může tedy obsahovat určitou chybu.

2. Bod tání

Látka - se rozkládá při teplotě 142 °C neúplně, od 177 °C velmi silně. Při rychlosti zahřívání 5 °C za minutu je možno pozorovat při teplotách 196 až 205 °C- tání.

3. Speeifická - otáčivost

Μ ^ρθ = -6,6° ⁽c = ^1,0 % v metanolu)

4· Stanovení molekulové hmoonooti

Mdekulová hmoonoot tyle stenovene v chlorf:oomiiovém roztoku antibiotika lsmolleericky při použití tlaku per·

570 (C = 2,10 %)

630 (C » 1,05 %.

5. Absorpční spektrum v žltгffilloéém světle

Spektrum antibiotika v žltrffilloéém-světle je uvedeno ne obr. 1, kde ne ose úseček je uvedena vlnová délka v nm, na ose pořadnic extinkce.

a 307 nm (C 0,0106 % v metanolu) 'чпах ’

E’*/crn 307 ^nm = 351 .

6. Abborpční spektrum v intrečeveeném světle

Absorpční spektrum antibiotika v infračevveném světle je znázorněno na obr. 2, kde na ose ^úseče^k je nanesena vlnová ^dél^ka v cm^-' a na ose ^pořa^dnic a^bsor^pce. ^Stanovení tylo ^ováděno v ^pelet^ách s KBr ^při násled^í^^ vlnovým. d^él^kác^h: (piři cm“'):

Frekvence	Intenzita	Frekvence		Intenzita
3 450	8	1 195		8
2 980	m	1 130		S
2 940	m	1 040		3
2 900	m	945		m
1 710	m	905		m
1 615	8	870	*	m
1 450	m	840		m

Pokračování tabulky

Frekvence

Intenzita

Frekvence

Intenzita

1 415	m	820	m
1 375	s	785	m
1 310	s	750	m
1 290	8	735	m
1 255	s	700	m
1 215	s

7. 'h jaderná resonance, jejíž spektrum je udáno v ppm a v Hz na obr· 3.

8. '³C jaderná resonance, znázorněnána obr. 4.

Při jaderné resonanci tohoto typu byly pozorovány signály, jejichž údaje jsou v násle dující tabulce uvedeny v ppm, v Hz e v relativních intenzitách:

Signál č.	Intenzita	Hz	ppm
1	66	4 206,3	166,925
2	33	3 657,6	145,149
3	42	3 514,1	139,456
4	35	3 436,1	136,357
5	37	3 389,4	134,506
6	41	3 344,7	132,730
7	42	3 286,0	130,402
8	174	3 233,4	1213,316
9	72	3 230,6	128,205
10	204	3 155,1	125,209
11	79	3 053,0	121,157
12	37	3 037,3	120,533
13	99	3 033,6	120,386
14	49	3 012,7	119,556
1 5	20	2 632,3	104,463
16	23	2 561,2	101,638
17	23	2 511,8	99,680
18,	22 ·	2 434,5	96,612
19	32	2 419,7	96,024
20	31	2 399,8	94,234
21	23	2 174,2	86,283
22	49	2 074,7	82,334
23	62	2 05'7,0	81,631
24	37	2 037,8	80,868
25	41	2 031 ,4	80,614
26	44	2 006,1	79,612 .
27	89	1 969,0	78,138
28	39	1 963,0	77,900
29	41	1 955,5	77,602

Pokračování tabulky

Signál č.	Intenzita	Hz	ppm
30	41	1 941,9	77,062
31	95	1 937,3	76,879
32	93	1 905,5	75,620
33	38	1 898,6	75,345
34	89	1 893,6	75,147
35	56	1 878,4	74,543
, 36	70	1 843,9	73,176
37	64	1 831,9	72,700
38	92	1 811,5	71,889
39	39	1 805,4	71,647
40	61	1 790,9	71,071
41	58	1 777,8	70,550
42	38	1 767,7	70,149
43 ’	41	1 763,5	69,982
44	59	1 745,0	69,251
45	34	1 731,6	68,719
46	62	1 562,4	62,004
47	44	1 558,0	61 ,830
48	32	1 536,4	60,972
49	34	1 488,2	59,061
50	21	508,7	20,190 '
51	• 21	506,6	20,106
52	70	450,9	17,893
53	45	404,4	16,050
54	61	0,0	0,000

9. Antibiotikum je dobře rozpustné v chloroformu, acetonu, etylesteru kyseliny octové, acetooiirilu, dimetylfomiamidu, dimeeylsulfoxidu a nižších alkoholech, například metanolu, etanolu, oproti tomu je ménš rozpustné ve vodš, dietylestoru, petroleteru a cyklohexanu.

10. AAnibiotkkum je možno převádět hydrolýzou v ' kyselém nebo alkalikkém prostředí na sloučeniny, které rovněž mají antibiotickou účinnost. Například působením kyseliny chlorovodíkové ve směsi metanolu a vody v objemovém poměru 1:1 při pH 4 a působením hydroxidu sodného ve směsi metanolu p vody v objemovém poměru 1:1 je možno při pH 11 získat již při teplotě 20 °C v průběhu ' několika hodin produkty, které mají ještě významnou účinnost in vitro proti gram-negativním a gram-pozztivním bakteriím, například Escrferichia coli.

11. Annibiotkkum je amorfní bezbarvá neutrálně reagující látka, která se při elektr^oforéze nevzdáTuje od začátku. Při silné hydrolýze v kyselém prostředí se odštěpí různé redukuuící cukry, například působením 10% roztoku kyseliny sírové při teplotě 80 °C. Z ' tohoto důvodu je možno při provádění tenkovrstevné chromattorafie na desce z kysličníku křemičitého vybarvi, t toto antibiotkuum ^akčními činidly, které reagují na cukry, např.

anisaldelydu a kyseliny sírové, tymolu a kyseliny sírové, váni linu a kyseliny chloristé nebo dimedonu a kyseliny fosforečné nebo kyselinou . moSyЪdennOooforrčnou, čímž dochází k chθraktrrisiCiéému zbarvení. Zbarveni, které může sloužit ,k identifikaci antibiotika je uvedeno v tabulce 1.

Tabulka 1

Číslo	Reakční činidlo*	Barva	Pozadí
1	10% H₂so₄	hnědá	bílé.
2	jod	hnědá	hnědožluté
3	kyselina molybdenofosforečná	moodozelená	nazelenalé
4	dusičnan otříbenSN—з	hnědá	světle hnědé
5	tymol-HgSO^	červenofialová	bezbarvé
6	dimedon-HjPO^	zelená (v UV světle ilutá)	bezbarvé
7	enCsaleiУySнH₂SO₄	zelená	bezbarvé
8	vanCles-HC10. 4	hnědá	bezbarvé

^χ) Reakční činidla byle vyrobené běžným způsobem. (E. Stáhl, Durmeehichtchrometographie,

2. vydánn, Springer Verltg Beelín, Heedelberg, New York . (1967)).

12. Tebulkt 2 uvádí hodnoty Rf pro antibioCkkum nt neutrálních silkkagelovýhi deskách (Merck, DearnmSadt, HSR) ' ve srovnání s volným erytoomycinem při pooUití . různých směsí rozpouUtědel. .

Tabulka 2

číslo	Roz^pPllrtёdlo . (objemové díly)	Rf antibiotika	Rf erytromycCnu
	ihlorofora + mmtenol
1	95 + 5		0,00	0,00
2	90 + 10		0,27	0,08
3	80 + 20		0,59	0,21
4	50 + 50		0,85	0,26
	jr \ ihlorofora: mmtand: amoniak
5	40 + 6 + 1		0,34	0,62
6	metanol		0,83	0,25
	butanol + ledová kyselina octová.+	voda
	60 + 20 +	20	0,55	0,39 ’

x' Bylo užito vodného . roztoku amoniaku o koncennraci 25 %· ^H-jtderná resonanie^, jej^íž s^pe^ktrum při ²²⁰ NHz je znázorntoo nt obr. 3 ' byla ^prováděné v roztoku antibiotika v deuterovaném chlorofomu při pouuití tetremetylailanr jako vnitřního standardu nt HRSS-appetrometru (fima Varian Assooietes, ' Paolo Alto, Katifornie USA).

?³C-jaderné resonancí . sp^trum, znázorn^é nt obr. 4 tylo ^prov^áděno v tomt^éi roztoku nt XlslOO spektrometru (15. - fima Varian) při 25,2 MHz.

Intenzity absorpčních pásů v infračerveném světle jsou označovány s., m a w. Pruh, označený д, má alespoň 2/3 intenzity nejsilnějšího pásu ve spektru, m-pruh má intenzitu v oblasti 1/3 až 2/3 uvedené hodnoty a w-pruh méně než 1/3 uvedené hodnoty. Uvedené označení se provádí podle propustnosti v procentech.

Je překvapující, že nové antibiotikum, získané z kmene Actinoplanes je možno izolovat ze živného prostředí s dobrým výtěžkem, přičemž antibiotikum má antimikrobiální, zejména antibakteriální účinek také proti gram-negativním mikroorganismům, aniž by měla svrchu uvedené nevýhody známých antibiotik. Mimoto nové antibiotikum podporuje i růst a využití krmiv u živočichů a znamená proto obohacení známého stavu techniky.

Při výrobě nového antibiotika je možno využít nové kmeny Actinoplanes SE 73 a SE 73/B.

Kmeny SE 73 a SE 73/B, kterých je možno využít při provádění způsobu podle vynálezu patří do třídy Schizomycet, řádu Actinomycetales, čeledi Actinoplanaceae rodu Actinoplanes. Kmen SE 73, byl izolován z půdy, kmen SE 73/B byl získán jako spontánní mutenta kmene SE 73.

Pěstování se provádí za aerobních podmínek běžným způsobem, jde tedy například o třepací kultury například v třepecích lahvích, provzduěněné kultury nebo submerzní kultury. S výhodou se postup provádí jako aerobní submerzní kultura v provzdušněných fermentorech, jak jsou například běžně užívány pro ostatní submerzní fermentace. Postup je možno provádět kontinuálně nebo diskontinuálně, s výhodou se provádí po jednotlivých vsázkách.

Kultivaci je možno provádět na všech živných prostředích, vhodných ke kultivaci mikroorganismů řádu Actinomycetales. Živné prostředí musí obsahovat alespoň jeden využitelný zdroj uhlíku a dusíku, a anorganické soli, přičemž tyto látky je možno dodat jako definované jednotlivé složky nebo také ve formě komplexních směsí, zejména biologických produktů různého původu.

Ze zdrojů uhlíku padají v úvahu všechny vhodné zdroje, například škroby, melasa, sušená syrovátka, dextrin, cukry jako sacharóza, maltóza, glukóza, laktóza, sorbit a glycerin. Ze zdrojů dusíku padají v úvahu všechny běžné organické i anorganické zdroje dusíku, například sojová mouka, mouka z bavlníkových semen, z čočky, burských oříšků, rozpustné a nerozpustné rostlinné bílkoviny, kukuřičný výluh, extrakt z kvasnic, pepton a extrakt z masa i amonné soli a dusičnany, například chlorid amonný, síran amonný, dusičnan sodný a draselný. Anorganické soli, které mají být obsaženy v Živném prostředí jsou zdrojem například následujících iontů:

Mg⁺⁺, Ne⁺, K⁺, Ca⁺⁺, NH4⁺, Cl, S04, P0₄ a NO-j jakož i ionty běžných stopových prvků, například ionty mědi, železa, manganu, molybdenu, zinku, kobaltu a niklu. V případě, že zdroje uhlíku a dusíku, popřípadě použitá voda neobsahují tyto soli a stopové prvky, je účelné doplnit živné prostředí těmito látkami. Jinak se může složení živného prostředí měnit v širokém rozmezí. Typ θ složení tohoto prostředí se mění v závislosti na tom, které jeho složky jsou zvláště příznivé к použití.

Může být výhodné ze začátku použít při pěstování kmenů Actionoplanes jen nízkých koncentrací složek živného prostředí a pak v průběhu prvních tří dnů kultivace tyto složky dále přidávat ve formě sterilních, poměrně koncentrovaných roztoků těchto složek frakcionovar^ým způsobem. Živné prostředí u rostoucích kultur má mít s výhodou pH 6 až 8, s výhodou 6,5 až 7,5.

Příliš rychlý pokles pH v kyselém prostředí je možnó zamezit přidáváním organické nebo anorganické zásady, s výhodou uhličitanu vápenatého. Tak jak je to běžné při fermenta cích, je možno pH řídit také automaticky tak, že se přidává sterilní roztok organické nebo anorganické kyseliny, například kyseliny sírové nebo sterilní roztok zásady, například hydroxidu sodného v různých časových odstupech do živného prostředí.

Je účelné zajistit, aby mikroorganismus byl dostatečně zásoben kyslíkem a byl také přiváděn do styku s Čerstvým živným prostředím. Z tohoto důvodu se běžným způsobem kultura míchá nebo protřepává.

Teplota živného prostředí při pěstování se pohybuje v rozmezí 20 až 40 °C, s výhodou v rozmezí 25 až 35 °C, nejvýhodnější teplotou je 28 °C. Doba pěstování se může měnit v Širokém rozmezí, přičemž tato doba závisí na složení živného prostředí a na teplotě pěstování. Nejoptimálnější podmínky může snadno stanovit každý odborník v mikrobiologii.

Bylo zjiStěno, Že množství antibiotika, které se hromadí v živném prostředí dosahuje svého maxima po 2 až 12 dnech, obvykle však po 5 až 8 dnech pěstování.

Jak Je to při mikrobiologických postupech obvyklé, je nutno zabránit infekci živného prostředí. К tomuto účelu se užívá běžných opatření, jako je sterilizace živného prostředí, nádob, v nichž se pěstování provádí a vzduchu, užívaného к provzdušňování. Ke sterilizaci příslušného zařízení je možno užít sterilizace v páře nebo za sucha.

Protože při kultivaci obvykle vzniká nežádoucí množství pěny, je možno užít běžných chemických prostředků, které snižují tvorbu této pěny, jako je například kapalný olej nebo oleje, emulze oleje ve vodě, parafiny, vyšší alkoholy Jako oktadekanol, silikonové oleje, polyoxyetylenové a polyoxypropylenové sloučeniny. Tvorbu pěny je možno snížit také použitím mechanických zařízení, které využívají například odstředivé síly.

Antibiotikum je možno z mycelia a/nebo živného prostředí izolovat běžnými fyzikálně chemickými metodami. Izolace se provádí například běžnou extrakcí, srážením a/nebo chromatograficky. Izolované antibiotikum je možno použitím svrchu uvedených způsobů také čistit. V mnoha případech však není nutné vysoké čištění, protože znečištěniny, přítomné v antibiotiku nijak neovlivňují jeho účinnost.

Při všech izolacích a čistících postupech Je nutno dbát toho, aby bylo udrženo pH 7,0 nebo vyšší, s výhodou 7,0 až 9,0. Ke zvýšení pH Je možno užít anorganické i organické zásady jako je amoniak, hydroxidy alkalických kovů a kovů alkalických zemin, uhličitany alkalických kovů a kovů alkalických zemin, mimoto kyselé uhličitany, jde tedy například o hydroxid draselný, hydroxid sodný, uhličitan sodný, kyselý uhličitan sodný, uhličitan vápenatý, trialkylaminy, například trietylamin, morfolin a pyridin.

Ke zjištění frakcí při izolačních a čistících postupech, v nichž se antibiotikum nachází v nejvyšší koncentraci nebo s největší Čistotou Je možno užít běžně fyzikálně chemické metody, například měření absorpce v ultrafialovém světle při 307 nm, hodnoty nebo zkoumání na antimikrobiální účinnost.

Zvláště výhodné je v daném případě zjištění antimikrobiální účinnosti proti Escherichia coli, například Escherichia coli ATCC 9, 6, 3 8 7 pomocí běžných zkouš< ne plotnách (P. Klein, Bakteriologische Grundlagen der chemotherapeutischen Laboratoř, r.nsprexis, Springer-Verlag, Gottingen (1957), str. 86 ff).

Izolaci a Čištění Je možno provádět například v případě, že se užije vodného živného prostředí následujícím způsobem.

К živnému prostředí včetně mycelia se přidá s vodou mísitelné organické rozpouštědlo a směs se důkladně promíchá, přičemž se na Jedné straně extrahuje účinná látka z mycelia a na druhé straně se docílí vyčeření živného prostředí.

Z rozpouštědel je možno užžt například slkylalkoholy o 1 až 4 atomech uhlíku, jako metanol, etanol, n- a isopropanol nebo terc.butanol, dále dimetylformamid, tetrahydrofuran, zejména aceton. Mnoožtví použitého rozpouštědla se může pohybovat v širokém rozmezí, s výhodou se užije přibližně téhož objemu, jako živného prostředí. Po .důkladném promísení se nerozpustný podíl, například mycelium в vysrážené bílkoviny oddělí filtrací, odstředěním, usazením apod.

Směs vody a organického rozpouštědla se pak s výhodou odpaří ve vakuu například na objem původně užitého živného prostředí.

Pak se popřípadě použitím svrchu uvedených zásad, s výhodou hydroxidu sodného upraví pH na hodnotu vyšší než 7,0, například na hodnotu 9,0, Takto získaný roztok bude dále označován jako roztok 1.

K roztoku 1 je možno izolovat antibioiiuum podle vynálezu běžnou extrakcí, srážením a/nebo chromaaograficky a popřípadě je čistit. ChroimBoggafie může být prováděna jako sloupcová chromaaogrefie nebo jako preparativní tenkovrstevná chromθBogrвBit. Z absorpčních prostředků je možno užít všech běžných anorganických i organických adsorpčních prostředků, které nemají kyselou povahu, jako je například kysličník hlinitý, silika^l, křemičitan hořečnatý, aktivní uhlí, celulóza, deriváty celulózy, umělé pryskyřice, jeko polyamidy, deriváty polyamidů apod·, například aceOylovaný polyamid nebo dextřanové gely.

Ze směsí rozpouštědel při preparativní OenkovrsOevná chrotmBoggaBii je možno užít nejrůznější rozpouutědla, v nichž je antibiotkuum podle vynálezu rozpustné, zvláště výhodná je směs chloroformu a metanolu, například v objemovém poměru 9:1. Jako rozpouštědla při sloupcové clromaaooreBfi je možno užít takové rozpouštědlo nebo směs rozpouutědel, v nichž je antibiotkuum podle vynálezu rozpustné, například tetrachloroeten, meeylenchhorid, s výhodou chloroform. ’

Výhodným postupem k izolaci antibiotika podle vynálezu je extrakce, popřípadě v kombinaci s chromθaogrθBfí a srážením. Při provádění extrakce je nutno dbát toho, aby po jejím provedení se antibioikuum . nacházelo bu3 ve vodné . nebo v organické fázi, takže je nutno volit extrakční činidlo tak, aby v něm bylo antibioikuum nerozpustné nebo velmi snadno rozpustné.

Extrakci je možno provádět například následujícím způsobem.

Roztok 1 se extrahuje s vodou nemísiteným organickým rozpouštědlem běžným způsobem, například protřepáváním, protprruddOTým dělením apod. Rozpouštědlem může být například ester, jako etylacetát nebo buuy].acee-táX» vyšší alkoholy, jako β^ΙθΏ^ο^, například n-arny-alkoholy,. s vodou nemísitelné ketony, jako meeylisobutllketln, chlorované nižší uhlovodíky, jako chloroform, meeylenchlorid'в tetrachl ometen. Výhodným rozpouštědlem je etylacetát в butyyacetát, zvláště etylacetát.

V případě, že se. při extrakci roztoku 1 užije tOyLace^<táO e/nebo buuylacetát, odloží se vodné fáze, . protože se anti-bioikuum podle . vynálezu nachází v organické fázi.

Organická fáze se pak od]^f^i^:í například na 1/10 ež 1/30 původního objemu. Pak se vysráží anttbiotiUum podle vynálezu přidáním organického rozpouutědla, v němž je antibiotkuum podle vynálezu těžce rozpustné, například .přidáním •Ι^ιΙ^Ο^^ nebo · nasycením uhlovodíků s přímým, rozvětveiým nebo cyklickým řetězcem, jako je p^trHeter, n-hexan nebo cyklohexen běžným způsobem.

Surové antibioikuum je možno Čistit až ·na vysokou čistotu dělením podle Creiga nebo popřípadě běžným chromвtogrtfiikým způsobem, jeko je·sloupcová preparativní

Ο^^νι^Ο^^ chromBatggaBfe, přičemž jako absorpční činidlo se užívá svrchu uvedených anorganických a organických činidel, která nemají kyselou povahu, jako je například kysličník hlinitý, silikagel, křemiSitan hořečnstý, aktivní uhlí, celulóza, deriváty celulózy, umělé pryskyřice jako polyamidy nebo deriváty polyamidů, například acetylovaný polyamid, dextranové gely, iontoměniče apod.

V případě, že se k extrakci roztoku 1 neužívá etylacetát nebo butylacetát, nýbrž jiné rozpustidlo, například tetrachlormetan, odloží se 'vodná fáze, protože se antibiotiuum podle vynálezu nachází v organické fázi. I v tomto případě se organický roztok odpaří s ·výhodou na 1/10 až 1/30 původního objemu a pak se 81111610^^^ vysráží přidáním vhodného organického rozponutědla, v němž je antibioiiuum podle vynálezu těžce rozpustné, například dietyleteru nebo nasycených uhlovodíků s příným rozvětveným nebo cyklikým · řetězcem jako je petroleter,·n-hexan nebo cyklohexan běžným způsobem.

Sraženina se rozpětí ve vodě a roztok se lyofili^zuje. Získaný surový produkt se popřípadě čistí například extrakcí etylacetáeem nebo butylacetátem, v nichž většinou nežádoucí balastní látky nejsou rozpustné, čištění je možno provádět také chromíatrraficky, jako sloupcovou chromíatorafií, preparativní tenkovrstevnou chromíatorafií při pouuití svrchu uvedených adsorpčních činidel nebo protprrudovým dělením.

Čištění je možno provádět také tak, že se surový produkt v roztoku v organickém rozpouštědle jako tetrachlormetanu, chloi^of^omu nebo íetylenchlortdu sráží pomocí organických rTzpouuitiědel, v nichž je antibiotikum těžce rozpustné, například přidáním dietyleteru, nasycených uhlovodíků s přímým, rozvětveným nebo cykliclým řetězcem, jako je petroleter, n-hexan nebo cyklohexan.

Ze svých roztoků se anttbiotiUuí získá běžným způsobem, například odpařením rozpouštědla a lyoí^ili^zací apod.

Nové kmeny Actinoplanes s laboratorním označením SE 73 a SE 73/B byly uloženy ve . veřejných sbírkách s následujícím označením:

a) SE 73

ATCC - č. 31 058 CBS - č. 432.74 FRJ - č. 2669	( 2. 8. 74) (12. 8. 74) ( 9. 8. 74)
b) SE 73/B
ATCC - č. 31 060	( 2. 8. 74)
CBS - č. 434.74	(12. 8. 74)
FRH - č. 2671	( 9. 8. 74)

ATCC ·= A^mei-can Type CuHture СоПeation, 12301 Parklawn Drive, Rookkiile, Maaryland 20 852, USA.

CBS = Centralbureau voor Мает, Niederlande.

FRJ = · Fermeetattot Reseerch Institute, Tokyo, Japan.

Anti^o^um je možno užít u zvířat jako prostředek k podpoře růstu a ke zlepšení v/uužtí potravin u zdravých i nemocných zvířat.

Účinnost antibiotika podle vynálezu je do značné míry nezávvslá na druhu a pohlaví zvířete. Zvláště cenné je attibiotikuí podle vynálezu při šlechtění a chovu mladých zvířat в zv!řBt na žír. Ze zvvřat, u nichž je možno pouužt úCttnru látku podle vynálezu ke zrychlení a zlepšení růstu a ke zvýšenému využití ' krmivá je možno užít například následuuící užitková a chovná zvířata.

Teplokrevná zvířata jako je skot, vepř, kůň, ovce, koze, kočke, pes, králík, kožešinová z^l^ířete, například norek a činčila, drůbež, jako slepice, husy, kachny, krocani, holubi, papoušci a kain&ři i studenokrevná zvvřata, jako ryby, například kapři a plazi, například hadi·

Mnnoitví antibiotika podle vynálezu,.které je možno aplikovat zvířatům při dosažení žádaného účinku se pohybuje v širokém rozmezí, Výhodné rozmezí je 5 ai 500, zejména 10 až 100 mg/kg váhy a den. Doba podávání se může pohybovat od několika hodin nebo dnů až do několika let,

Vhodná dávka a vhodná doba podávání účinné látky závisí zejména na druhu zvířete, jeho stáří, pohlaví, zdravotním stavu a účelu, pro který se zvíře chová a stanoví ji snadno odborník.

Účinná látka-podle vynálezu se podává zvířaůům běžným způsobem. Cesta podání závisí zejména' -na druhu zvířete, jeho chování a zdravotním stavu. Účinnou látku je možno jednou nebo vícekrát denně v pravidelných nebo nepravidelných intervalech perorálně nebo parenterálně. Pro účelnost se účinná látka většinou podává perorálně, a to zejména s potravou a/nebo pitnou vodou.

Nejednodušší je parorální podání spolu s krmivém a/nebo pitnou vodou, přičemž podle koncentrace se přidává účinná látka jen k části krmivá a/nebo vody nebo k celkovému moožtví.

Účinná látka.podle vynálezu se mísí v čisté formě, s výhodou v jemně rozptýlené formě s poživeteliými netoxickými nooiči, popřípadě je možno ji s těmito látkami mííst -také ve formě předběžné směsi nebo koncentráty a pak ji včlenil do krmivá a/nebo pitné vody.

Krmivo a/nebo pitná voda mohou obsahovat účinnou látku podle vynálezu například v konccenreci 5 ež 500, s výhodou 10- až 100 ppm. Optimální koncentrace účinné látky v krmivu a/nebo pitné vodě je zvláště závvslá ne одo0iSví, které v průběhu dne zvíře přijímá a je možno ji snadno stenovit.

Povaha krmivá a jeho celkové složení nemá žádný vliv na účinnou látku podle - vynálezu. K uvedenému účelu je možno užít všech běžných nebo zvláštních druhů krmiv, která s výhodou obsahují jednotlivé živiny v požadované rovnováze tak, aby dodávala energii i stavební látky, včetně vitamínů a anorganických látek.

Vhodné krmivo sestává například z látek rostMrniého původu jako je seno, řepa, obilí, obilné produkty, živočišného původu, jako je maso, tuk, kostní moočka, rybí produkty, z vitamínů, například vitamínu A, B-komplexu a . D-komppexu, bílkovin, aminookýsein, jako je DD-rnetioonLn a anorganických látek, jako je uhličitan vápenatý a chlorid sodný.

Kooncenráty obsahují účinnou látku podle vynálezu spolu s dalšími látkami jako jsou žitná mouka, kukuřičná mouka, mouka ze sojových bobů nebo uhličitan vápenatý, popřípadě s dalšími živnými a stavebními látkami jako jsou bílkoviny, anorganické soli a vitamíny. Tato krmivé je možno běžným způsobem.

Předběžné směsi a koncentráty mohou obsahovat účinnou látku podle vynálezu také ve formě, v níž je účinná látka na povrchu chráněna například netoxidými vosky nebo želatinou . před . vlivem vzduchu, světle a/nebo vlhkoosi.

Jako příklad složení krmné směsi pro kuřata je možno uvést krmivo s obsahem účinné látky následujícího složení:

pšenice200 g kukuřice334 g sojového šrotu 331.g hovězího loje 66g středního fosforečnanu vápenatého 15g uhličitanu vápenatého 11g jodované kuchyňské soli 4g směsi vitamínů a anorganických solí 7,5g účinné látky 2,5g krmivé . 1 kg

Směs vitamínů a minerálních látek sestává z následujících složek:

000 mezinárooních jednooek vvterninn'A, 000 inezinárooních jednooek vvtamínu V^, 10 mg vitamínu E, 1 mg vitamínu Kj, 3 mg Riboflavinu, 2 mg pyridoxinu, 20 mg vitamínu Β?, 5 mg pantotenátu vápenatého, 30 mg kyseliny nikotinové, 200 mg cholinchloridu, 200 mg MnSO^ x H₂O, 140 mg ZnSO, x 7HgO, 100 mg FeSO, x 7HgO 8 20 mg CuSO^ x 5H₂O.

Předběžná směs s obsahem účinné látky obsahuje tuto látku v žádaném rninossví, např. 100 mg ⁸ mimoto obsahuje 1 g DL-mmeioninu a tolik sojové mouky, aby vzniklo 2,5 g předběžné símě!.

Příkladem vhodného krmivá pro vepře s obsahem účinné látky podle vynálezu může být krmivo následujícího složen:!.

krmného obilného šrotu z 200 k kukuuice,

150 g ječného šrotu, 150 g ovesného a

130 g pšeničného šrotu 660g rybí moučky 80g sojového šrotu 66g tapiokové mouky 66g pivovarských kvasnic 33g srnmsi vitamínu a anorganických látek, stejného složení jako svrchu 50g moučky z lněných pokrutin 30g kukuřičné m^i^^ky 30g sojového oleje Юg melasy 10g předběžné smmsi s obsahem účinné látky svrchu uvedeného složení 2g krmivá 1 kg

Svrchu uvedené krmné směsi jsou zvláště vhodné k chovu kuiře^ a vepřů, přesto je možno je užít i k chovu jirých zvvřat.

Dobrá účinnost antibiotika podle vyínilezu jako prostředku k podpoře růstu zvířat může být prokázána v n^i^:Ledi^;^:íeích příkladech.

Příklad 1

Při krmných pokusech se účinná látka smísí s krmivém a krmivo se podává kuřatům ed libitum. Dávka antibiotika je 10 a 20 ppm. Pak se srovnají výsledky u negativních kontrol, kterým se podává krmivo bez antibiotika. Pokus trvá 14 dní.

Skupina	Váhový přírůstek (%)	Spotřeba krmivá (%)	Využití krmivá (%)
kontrola	100	100	100
pokusná skupina
10 ppm	102,8	102,8	100
20 ppm	103,5	102,3	98,5

Příklad 2

Výsledky pokusů se selaty o hmotnosti 6 ež 26 kg, 3 skupiny po 12 selatech

Látka ppm

Přírůstek v % Denní přírůstek v % Spotřeba krmivá na kg přírůstku

kontroly	-	100	100	100
Antibiotikum	12,5	105,6	108,9	96,2
	25	107,0	109,1	96,8
	50	108,3	111,0	97,8

Příklad 3

Výsledky podávání antibiotika kuřatům ve stáří 6 týdnů a více, bylo užito 4 skupin po 40 zvířatech

Látka ppm

Přírůstek v %

Spotřeba v % Využití krmivá v %

kontrola	-	100	100	100
Antibiotikum	25	105,3	99,9	94,9
	50	106,5	97,8	91 ,8
	100	103,9	98,5	94,8
	200	107,8	100,7	93,4

Claims

PŘEDMĚT V X K Z L E Z U .

Krmivo pro hospodářská a jiná zvířata s příznivým účinkem na růst a zvýšené využití krmivá u zviřat, vyznnčužící se tím, ie obsahuje jako účinnou látku antibiotikum, které je neukrální látkou a při elektroforéze se nevzdaluje od počátku, sestává z uhlíku, vodíku a kyslíky má specifickou ot^itvost ^[α^] = -6^,6° v rozteku o koncentraci 1 ^hmo°,. % v metanolu., v ultrffiilvvém světle má maximum při vlnové délce 307 nm, je dobře rozpustné v chloroformu, acetonu, etylesteru kyseliny octové, acetonni-rHu, dimetylfomamidu, dimeeylsulfoxidu, metanolu a etanolu a málo rozpustné ve vodě, dietyleteru, petroleteru a eyklohexanu, obsahuje 4 metoxy skupiny a při hydnlýze kyselinou sírovou o ko^enn-raci 10 hmoOntotníeh % při 80 °C se odštěpuj reduku jcí cukry, s molekulovou ^0^0^1 přibližně 1 468 a sumárním vzorcem θ^9^Η96θ34 ^{a s} účinnootí na růst zvířat a vyUžií krmiv u zvířat.