CN1936548A

CN1936548A - 亚硝酸盐快速测定试剂盒及其应用

Info

Publication number: CN1936548A
Application number: CN 200610016130
Authority: CN
Inventors: 王硕; 崔小军
Original assignee: Tianjin University of Science and Technology
Current assignee: Tianjin University of Science and Technology
Priority date: 2006-10-10
Filing date: 2006-10-10
Publication date: 2007-03-28
Anticipated expiration: 2026-10-10
Also published as: CN100487436C

Abstract

亚硝酸盐快速测定试剂盒及其应用，属于快速测定食品中亚硝酸盐含量试剂盒及使用方法。它针对目前亚硝酸盐残留严重、急需经济实用的检测用品的现状，解决了对亚硝酸盐检测需要仪器、费时费力，快速测定一般为定性测定，灵敏度低，所需时间长，不适合现场测定含量等问题。本发明由装有富集材料的反应柱、比色管、1－萘酚、对氨基苯磺酸盐酸溶液、亚铁氰化钾、乙酸锌溶液、硼砂饱和液和比色卡组成。其测定方法是制备样品处理液，经显色反应，与比色卡比对、经转换确定样品中亚硝酸盐含量、判定是否超标。本发明能够半定量测定食品中的亚硝酸盐，最低检出限为0.1mg/kg。其检测方法快速灵敏、操作简单、经济实用，易于普及和现场测定。

Description

亚硝酸盐快速测定试剂盒及其应用

技术领域

本发明属于一种快速测定检测亚硝酸盐试剂盒，特别涉及快速测定食品中亚硝酸盐含量的方法及其装置。

背景技术

亚硝酸盐主要指亚硝酸钠和亚硝酸钾，是一种白色不透明结晶的化工产品，形状极似食盐，亚硝酸盐是剧毒物质，成人摄入0.2-0.5克即可引起中毒，3克即可致死。亚硝酸盐同时还是一种致癌物质，据研究，食道癌与患者摄入的亚硝酸盐量呈正相关性，亚硝酸盐的致癌机理是：在胃酸等环境下亚硝酸盐与食物中的仲胺、叔胺和酰胺等反应生成强致癌物N-亚硝胺。亚硝胺还能够透过胎盘进入胎儿体内，对胎儿有致畸作用。6个月以内的婴儿对亚硝酸盐特别敏感，临床上患“高铁血红蛋白症”的婴儿即是食用亚硝酸盐或硝酸盐浓度高的食品引起的，症状为缺氧，出现紫绀，甚至死亡，因此欧盟规定亚硝酸盐严禁用于婴儿食品。

亚硝酸盐中毒发病急速，一般潜伏期1-3小时，中毒的主要特点是由于组织缺氧引起的紫绀现象，如口唇、舌尖、指尖青紫，重者眼结膜、面部及全身皮肤青紫。头晕、头疼、乏力、心跳加速嗜睡或烦躁、呼吸困难、恶心、呕吐、腹痛、腹泻、严重者昏迷、惊厥、大小便失禁，可因呼吸衰竭而死亡。

为此国家对食品中的亚硝酸盐残留制定了严格的限量标准，但由于高浓度的亚硝酸盐不仅可改善肉制品的感观色泽，还可大大缩短肉制品的加工时间，因此肉制品亚硝酸盐超标的现象较为普遍。甚至少数不法经营者以病死猪肉先经过双氧水浸泡漂白，然后再添加大量的亚硝酸盐，最后经过加工而达到正常肉制品的色泽效果；还有添加大量亚硝酸盐的腊肉只要经过一夜熏烤就可以达到正常熏烤十几天的色泽和硬度，而且“格外光鲜”。

鉴于以上原因，针对目前亚硝酸盐残留情况普遍性和严重性的问题，急需一种方便快捷，利于操作，价格低廉的检测用品，既有利于普通群众的现场测定，也可为质检机构作为基础判定使用。

目前，国内广泛使用对氨基苯磺酸盐酸溶液-盐酸萘乙二胺比色法测定食品中亚硝酸盐残留量，但测定过程中操作步骤复杂，同时需要仪器设备，不利于普及和现场测定。有的亚硝酸盐快速测定方法一般为定性测定，灵敏度低，有的检测时间长，总之，目前尚未有适合现场检测要求的检测食品中亚硝酸盐含量、且检测下限为0.1mg/Kg的快速测定试剂盒；所以研制一种快速的半定量检测方法是当务之急。

发明内容

发明的目的是为了解决上述现有技术存在的不足，提供一种无需仪器设备，即可快速检测食品中亚硝酸盐含量的方法和用具，其最低检出限为0.1mg/Kg，并且具有操作简单、快速灵敏，价格低廉，利于普及、适于现场测定等特点。

技术方案：

快速测定亚硝酸盐试剂盒，它是由反应柱、25mL比色管、4.0-5.0g/L1-萘酚500mL、9.0-11.0g/L对氨基苯磺酸盐酸溶液20mL、90-110g/L亚铁氰化钾溶液70mL，210-230g/L乙酸锌溶液70mL、硼砂饱和液150mL、标准比色卡组成的盒，其中反应柱由无色透明的柱体(1)、2个筛板(3)、富集材料(2)构成，富集材料采用强碱性阴离子交换树脂，富集材料的质量为每次测定所需量即1.5g-2.0g，标准比色卡为红色系列的色卡，该卡最低检出限为0.1mg/Kg。

需要说明的是：

试剂盒内装有5-10支反应柱，反应柱内富集材料(2)强碱性阴离子交换树脂质量推荐使用1.5g型号为D290；1-萘酚浓度为4.17g/L；对氨基苯磺酸盐酸溶液浓度为10g/L；100g/L亚铁氰化钾溶液；220g/L乙酸锌溶液。

标准比色卡的红色为由浅至深分为5个档次，在每个档次上分别标注样品处理液中亚硝酸盐的含量为0.1mg/Kg，0.2mg/Kg，0.3mg/Kg，0.5mg/kg和0.7mg/Kg；分别对应所测定的样品中亚硝酸盐实际浓度为10mg/Kg，20mg/Kg，30mg/Kg，50mg/Kg和70mg/Kg。

快速测定食品中的亚硝酸盐含量，测定方法是：采用树脂富集亚硝酸盐，然后制备样品处理液，经显色反应，与比色卡比对，确定样品处理液中亚硝酸盐的含量，然后转换为待测样品中亚硝酸盐含量，最后再与国标相应规定判定样品中亚硝酸盐含量是否超标，具体步骤如下：

(1)润湿反应柱

测定实际样品之前，首先用50mL4.0-5.0g/L1-萘酚溶液缓慢倒入装有型号D290的富集材料的反应柱中，使1-萘酚溶液能够完全浸湿富集材料；

(2)样品处理液的制备

测定肉制品时是将称取3.125g经绞碎混匀的样品置于50mL烧杯中，加12.5mL硼砂饱和液，搅拌均匀，加入5mL90-110g/L亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5mL210-230g/L乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质，加水至25mL刻度线，摇匀，用滤纸过滤，除去上层脂肪，取滤液2mL放入比色管中，同时加入1mL9.0-11.0g/L对氨基苯磺酸盐酸溶液，将混合好的溶液定容至25mL比色管的刻度线，即得样品处理液；

测定腌制类罐头或酱腌菜时是将称取3.125g经绞碎混匀的样品置于50mL烧杯中，加25mL硼砂饱和液，搅拌均匀，用滤纸过滤，取滤液2mL放入比色管中，同时向滤液加入1mL9.0-11.0g/L对氨基苯磺酸盐酸溶液，将混合好的溶液定容至25mL比色管刻度线，即得样品处理液；

(3)测定样品处理液的亚硝酸盐浓度

然后将所得样品处理液缓慢倒入已经用1-萘酚润湿的反应柱中，反应15min后，将反应柱中的颜色与标准比色卡上的颜色比对，选择颜色相近的标准比色卡值，即为待测样品处理液所含亚硝酸盐的浓度范围值；

(4)待测样品中亚硝酸盐含量的判定

·转换：将样品处理液的亚硝酸盐含量转换为食品中亚硝酸盐实际值，即根据样品处理液所含亚硝酸盐的浓度范围值为0.1mg/Kg，0.2mg/Kg，0.3mg/Kg，0.5mg/Kg或0.7mg/Kg；则对应所测定的样品中亚硝酸盐实际浓度为10mg/kg，20mg/Kg，30mg/Kg，50mg/Kg或70mg/Kg及其以上；

·比对：将待测样品中亚硝酸盐实际值与亚硝酸盐的限量标准进行比较，即根据国家亚硝酸盐的限量标准和本试剂盒测定值进行比对，其比对方法是：根据国标规定西式火腿罐头亚硝酸盐含量≤70mg/kg；其他腌制类罐头亚硝酸盐含量≤50mg/kg；红肠、肉肠、香肠、卤肉亚硝酸盐含量≤30mg/kg；酱腌菜亚硝酸盐含量≤20mg/kg，火腿、腊肠、香肚、广式腊肉亚硝酸盐含量≤10mg/kg的标准，如果西式火腿罐头样品处理液测定值大于等于0.7mg/Kg，则待测样品中亚硝酸盐实际浓度大于等于70mg/Kg，表明样品中亚硝酸盐浓度超标；如果腌制类罐头样品处理液测定值大于等于0.5mg/Kg，则待测样品中亚硝酸盐实际浓度大于等于50mg/Kg，表明样品中亚硝酸盐浓度超标；如果红肠、肉肠、香肠、卤肉样品处理液测定值大于等于0.3mg/Kg，则待测样品中亚硝酸盐实际浓度大于等于30mg/Kg，表明样品中亚硝酸盐浓度超标；如果酱腌菜样品处理液测定值大于等于0.2mg/Kg，则待测样品中亚硝酸盐实际浓度大于等于20mg/Kg，表明样品中亚硝酸盐浓度超标；如果火腿、腊肠、香肚、广式腊肉样品处理液测定值大于等于0.1mg/Kg，则待测样品中亚硝酸盐实际浓度大于等于10mg/Kg，表明样品中亚硝酸盐浓度超标。

其中推荐使用的是：试剂盒内装有5-10支反应柱，反应柱内富集材料(2)强碱性阴离子交换树脂型号为D290；富集材料质量为1.5g；1-萘酚浓度为4.17g/L；对氨基苯磺酸盐酸溶液浓度为10g/L；100g/L亚铁氰化钾溶液；220g/L乙酸锌溶液。

其中，样品处理液中的亚硝酸盐浓度值与实际样品中的亚硝酸盐的浓度值之间的转换公式为：

P_{0} * \frac{W * \frac{V_{0}}{V_{1}}}{V_{2}} = P_{1}

其中：P₀：国标规定亚硝酸盐的限量(mg/Kg)；

P₁：比色卡上的亚硝酸盐值(mg/Kg)；

W：称取的样品重量(g)；

V₀：滤液体积(mL)；

V₁：50mL烧杯中的溶液体积(mL)；

V₂：比色管中的定容体积(mL)。

例如红肠、肉肠、香肠、卤肉国标规定亚硝酸盐含量≤30mg/kg，则P₀为30mg/Kg，P₁为0.3mg/kg，W为样重3.125g，V₀代表滤液体积为2mL，V₁代表50mL烧杯中的溶液体积为25mL，V₂代表比色管中的定容体积为25mL。其它标准值与比色卡的数值依此类推。

有益效果：

本发明提供的亚硝酸盐快速测定试剂盒，针对目前亚硝酸盐残留情况的普遍性和严重性、急需一种价格低廉的检测用品的现状，改变了过去对亚硝酸盐的检测需要仪器、费时费力、不适合现场测定的问题，这种新的检测方法最低检出浓度为0.1mg/Kg，且具有快速灵敏、方便快捷，利于操作，价格低廉、利于普及、适于现场测定、能够半定量测定等特点。本发明试剂盒适用于食品中亚硝酸盐的快速测定，易于普及和现场测定，既有利于普通群众的现场测定，也可为质检机构作为基础判定使用。

附图说明

图1：本发明试剂盒中的标准比色卡(颜色为红色系列色卡)示意图；

图2：本发明试剂盒中反应柱结构示意图。

具体实施方式

实施例1：

亚硝酸盐快速测定试剂盒内装有5支反应柱，其中反应柱由无色透明的柱体(1)、2个筛板(3)、富集材料(2)构成。反应柱柱体(1)内装有强碱性阴离子交换树脂的富集材料(2)和2个筛板(3)、富集材料的质量为每次测定所需量，即每支反应器内装有1.5g强碱性阴离子交换树脂，其型号为D290，用作富集材料。试剂盒内还有10g/L对氨基苯磺酸盐酸溶液20mL、4.17g/L 1-萘酚500mL、150mL硼砂饱和液、100g/L亚铁氰化钾溶液70mL、220g/L乙酸锌溶液70mL、25mL比色管、标准比色卡1个，标准比色卡为红色系列的色卡，该卡最低检出限为0.1mg/Kg。如图1所示，标准比色卡的红色为由浅至深分为5个档次；并在每个档次上分别对应标注其所测定的样品处理液的亚硝酸盐浓度为0.1mg/Kg、0.2mg/Kg、0.3mg/Kg、0.5mg/Kg、0.7mg/Kg。

上述标准比色卡红色系列颜色的确定和亚硝酸盐含量值的标注方法是：取配置0.1mg/Kg亚硝酸盐的标准溶液3mL加入到50mL烧杯中，加入25mL硼砂饱和液，搅拌均匀，取液体2mL，同时向液体中加入1mL含10g/L对氨基苯磺酸盐酸溶液，将混合好的溶液定容至25mL比色管的刻度线，即得0.1mg/Kg亚硝酸盐标准溶液的处理液：再将该处理液缓慢倒入已经用1-萘酚润湿的反应柱中，反应15min后，将反应柱中的颜色标注为亚硝酸盐含量值(样品处理液中)为0.1mg/Kg。用同样方法分别配置0.2mg/Kg、0.3mg/Kg、0.5mg/Kg、0.7mg/Kg亚硝酸盐标准溶液进行测量，反应柱中呈现的红色逐渐加深，这些颜色即为标准比色卡的红色系列，并在标准比色卡上将颜色所对应的样品处理液中亚硝酸盐含量值标注为0.2mg/Kg、0.3mg/Kg、0.5mg/Kg、0.7mg/Kg；上述数值标志着对应测定的样品中，其亚硝酸盐实际浓度分别为10mg/Kg，20mg/Kg，30mg/Kg，50mg/Kg和70mg/Kg及其以上；

装有反应柱如图2所示。在图2中，1为反应柱柱体、2为富集材料，3为筛板。

测定应用实施例1：

使用实施例1的试剂盒，称取火腿罐头3.125g经绞碎混匀的样品置于50mL烧杯中，加12.5mL硼砂饱和液，搅拌均匀，加入5mL 100g/L亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5mL 220g/L乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质，加水至25mL刻度线，摇匀，用滤纸过滤，除去上层脂肪，取滤液2mL放入25mL比色管中，同时加入1mL10g/L对氨基苯磺酸盐酸溶液(配制方法是将10g对氨基苯磺酸溶于1L的浓度为1+6的盐酸溶液中)，将混合好的溶液定容至25mL比色管的刻度线，即制得样品处理液；然后将所得样品处理液缓慢倒入已经用4.17g/L 1-萘酚50mL润湿的反应柱中，反应15min后，将反应柱中的颜色与标准比色卡上的颜色比对，选择颜色相近的标准比色卡值，其颜色与标准比色卡上最深颜色相近，根据该颜色比色卡值为0.7mg/Kg，即为火腿罐头待测样品处理液所含亚硝酸盐的浓度范围值；再根据比色卡上亚硝酸盐浓度的数值与实际样品中亚硝酸盐浓度的数值进行转换，确定待测样品火腿罐头含有亚硝酸盐的浓度范围为70mg/Kg或及其以上，因此可以判定该样品超过国家亚硝酸盐限量标准。

实施例2：

亚硝酸盐快速测定试剂盒内装有反应柱10支，反应柱内装有2.0g强碱性阴离子交换树脂，其型号为D290，用作富集材料。试剂盒内还有10g/L对氨基苯磺酸盐酸溶液20mL、4.17g/L 1-萘酚500mL、150mL硼砂饱和液、100g/L亚铁氰化钾溶液70mL、220g/L乙酸锌溶液70mL、25mL比色管、标准比色卡1个，标准比色卡为红色系列的色卡，该卡最低检出限为0.1mg/Kg。如图1所示，标准比色卡的红色为由浅至深分为5个档次；并分别对应标注所测定的亚硝酸盐浓度为0.1mg/Kg、0.2mg/Kg、0.3mg/Kg、0.5mg/Kg、0.7mg/Kg。其它同实施例1。

测定应用实施例2：

使用实施例2的试剂盒，将被测样品酱腌菜3.125g粉碎后置于50mL烧杯中，加25mL硼砂饱和液，搅拌均匀，用滤纸过滤，取滤液2mL放入比色管中，同时向滤液加入1mL10g/L对氨基苯磺酸盐酸溶液，将混合好的溶液定容至25mL比色管的刻度线，然后将所得样品处理液缓慢倒入已经用4.17g/L 1-萘酚50mL润湿的反应柱中，反应15min后，即制得酱腌菜样品处理液；将反应柱中的颜色与标准比色卡上的颜色比对，根据该颜色的比色卡值为0.2mg/Kg以下，再将比色卡上亚硝酸盐浓度的数值与实际样品中亚硝酸盐浓度的数值进行转换，确定待测样品酱腌菜含有亚硝酸盐的浓度范围为20mg/Kg以下，因此可以判定该样品未超过国家亚硝酸盐限量标准(其它同测定应用实施例1)。

实施例3：

亚硝酸盐快速测定试剂盒内装有反应柱7支，反应柱内装有2.0g强碱性阴离子交换树脂，其型号为D290，用作富集材料。试剂盒内还有11g/L对氨基苯磺酸盐酸溶液20mL、5.0g/L 1-萘酚500mL、150mL硼砂饱和液、110g/L亚铁氰化钾溶液70mL、230g/L乙酸锌溶液70mL、25mL比色管、标准比色卡1个，标准比色卡为红色系列的色卡，该卡最低检出限为0.1mg/Kg。如图1所示，标准比色卡的红色为由浅至深分为5个档次；并分别对应标注所测定的亚硝酸盐浓度为0.1mg/Kg、0.2mg/Kg、0.3mg/Kg、0.5mg/Kg、0.7mg/Kg。其它同实施例1。

测定应用实施例3：

使用实施例1的试剂盒，称取香肠3.125g经绞碎混匀的样品置于50mL烧杯中，加12.5mL硼砂饱和液，搅拌均匀，加入5mL 110g/L亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5mL 230g/L乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质，加水至25mL刻度线，摇匀，用滤纸过滤，除去上层脂肪，取滤液2mL放入25mL比色管中，同时加入1mL 11g/L对氨基苯磺酸盐酸溶液(配制方法是将11g对氨基苯磺酸溶于1L的浓度为1+6的盐酸溶液中)，将混合好的溶液定容至25mL比色管的刻度线，即制得样品处理液；然后将所得样品处理液缓慢倒入已经用5.0g/L 1-萘酚50mL润湿的反应柱中，反应15min后，将反应柱中的颜色与标准比色卡上的颜色比对，选择颜色相近的标准比色卡值，其颜色与标准比色卡上最深颜色相近，根据该颜色比色卡值为0.3mg/Kg，即为香肠待测样品处理液所含亚硝酸盐的浓度范围值；再根据比色卡上亚硝酸盐浓度的数值与实际样品中亚硝酸盐浓度的数值进行转换，确定待测样品香肠含有亚硝酸盐的浓度范围为30mg/Kg或及其以上，因此可以判定该样品超过国家亚硝酸盐限量标准。

Claims

1.快速测定亚硝酸盐试剂盒，其特征在于它是由反应柱、25mL比色管、4.0-5.0g/L1-萘酚500mL、9.0-11.0g/L对氨基苯磺酸盐酸溶液20mL、90-110g/L亚铁氰化钾溶液70mL，210-230g/L乙酸锌溶液70mL、硼砂饱和液150mL、标准比色卡组成的盒，其中反应柱由无色透明的柱体(1)、2个筛板(3)、富集材料(2)构成，富集材料采用强碱性阴离子交换树脂，富集材料的质量为每次测定所需量即1.5g-2.0g，标准比色卡为红色系列的色卡，该卡最低检出限为0.1mg/Kg。

2.按照权利要求1所述的亚硝酸盐快速测定试剂盒，其特征在于试剂盒内装有5-10支反应柱，反应柱内富集材料(2)强碱性阴离子交换树脂型号为D290，富集材料质量为1.5g；1-萘酚浓度为4.17g/L；对氨基苯磺酸盐酸溶液浓度为10g/L；100g/L亚铁氰化钾溶液；220g/L乙酸锌溶液。

3.按照权利要求1所述的亚硝酸盐快速测定试剂盒，其特征在于标准比色卡的红色为由浅至深分为5个档次，在每个档次上分别标注样品处理液中亚硝酸盐的含量为0.1mg/Kg，0.2mg/Kg，0.3mg/Kg，0.5mg/Kg和0.7mg/Kg；它们分别对应待测样品中亚硝酸盐实际浓度为10mg/Kg，20mg/Kg，30mg/Kg，50mg/Kg和70mg/Kg。

4.权利要求1、2或3所述的亚硝酸盐快速测定试剂盒的应用，其特征用于快速测定样品中的亚硝酸盐含量，测定方法是：采用树脂富集亚硝酸盐，然后制备样品处理液，经显色反应，与比色卡比对，确定样品处理液中亚硝酸盐的含量，然后转换为待测样品中亚硝酸盐含量，最后再与国标相应规定判定样品中亚硝酸盐含量是否超标，具体步骤如下：

(1).润湿反应柱

测定实际样品之前，首先用50mL.4.0-5.0g/L1-萘酚溶液缓慢倒入装有型号D290的富集材料的反应柱中，使1-萘酚溶液能够完全浸湿富集材料；

(2).样品处理液的制备

(3).测定样品处理液的亚硝酸盐浓度

(4).待测样品中亚硝酸盐含量的判定

·转换：将样品处理液的亚硝酸盐含量转换为样品中亚硝酸盐实际值，即根据样品处理液所含亚硝酸盐的浓度范围值为0.1mg/Kg，0.2mg/Kg，0.3mg/Kg，0.5mg/Kg或0.7mg/Kg；则对应所测定的样品中亚硝酸盐实际浓度为10mg/Kg，20mg/Kg，30mg/Kg，50mg/Kg或70mg/Kg及其以上；

5.按照权利要求4所述的亚硝酸盐快速测定试剂盒的应用，其特征在于试剂盒内装有5-10支反应柱，反应柱内富集材料(2)强碱性阴离子交换树脂型号为D290；富集材料质量为1.5g；1-萘酚浓度为4.17g/L；对氨基苯磺酸盐酸溶液浓度为10g/L；100g/L亚铁氰化钾溶液；220g/L乙酸锌溶液。